/
Автор: Сюрин В.Н. Самуйленко А.Я. Соловьёв Б.В. Фимона Н.В.
Теги: медицинские науки ветеринария биология мир животных животные фауна вирусология вирусы
Год: 2001
Текст
СЮРИНВ.Н., САМУЙЛЕНКО А.Я.
СОЛОВЬЁВ Б.В., ФОМИНА Н.В.
* * —
Г
ВИРУСНЫЕ БОЛЕЗНИ
ЖИВОТНЫХ
СЮРИН В.Н., САМУЙЛЕНКО А.Я.
СОЛОВЬЁВ Б.В., ФОМИНА Н.В.
ВИРУСНЫЕ БОЛЕЗНИ
ЖИВОТНЫХ
WnJv
КЛАССИФИКАЦИЯ ВИГ
Семейство Family Род Genus Представите)
Reoviridae Orthoreovirus Orb.ivirus Coltivirus Rotavirus Реовирусы 1,2 и 3 человека, об< Вирусы КЛО (Блютанг), АЧЛ, I Колгивирусы КРС, свиней, чел Ротавирус обезьян SA11.KPC,
Birnaviridae Avibirnavirus Вирус инфекеционной 6j
Togavridae Alphavirus Rubivirus Арбовирусы группы А (27 чл), i Вирус краснухи
Flaviviridae Flavivirus Pestivirus Вирус желтой лихорадки, Яши ВД-БС, КЧС, Пограничной бол
Coronaviridae Coronavirus Torovirus Вирусы ИБК, ТГС, инфекциош Тсровирусы человека, лошадей
Порядок Mononegavirales Paramixoviridae Подсемейство Paramixovirinae Paramixovirus Morbilivirus Подсемейство Pneumovirinae Pneumovirus Парамиксовирусы шиц (9 типо Вирус кори, ЧКРС, чумы мелки Респираторно-синцитиальный т
Rabdoviridae Vesiculovirus Lyssavirus Ephemerovirus Вирус везикулярного стоматита Вирус бешенства (всего 32 тц>е Вирус эфемерной лихорадки KI
Orthomixoviridae Вируса гриппа А, В, С Тоготоподобные Вирус гриппа типа А имеет 9 ш
Bunyaviridae Bunyavirus Nairovirus Hantivirus Вирусы Буньямвера, 162 Вирус болезни Найроби ( Вирусы грызунов
Arenaviridae Arenavirus Вирус лимфоцитарного х
RctrOViridaC Retro В млекопитающих Опухоль молочной железы мь Retro С млекопитающих 3 подрода: -лейкоза мышей; сг Retro D Обезьян Retro С птиц Лейкоза, саркомы шиц Spumavirus Пенящие вирусы человека, ot Лейкоза КРС и Т-кл. лейкоза человека Лейкоз КРС я Т-клеточный ле LentivirUS ИммунодеФипит человека 1т
Caliciviridae Calicivirus Вирус везикулярной экзантемы
Picornaviridae Enterovirus Полиомиелита 1, 2 иЗ типа Hepatovirus Гепатит А человека Cardiovirus Энцефаломиокардита, энц Rinovirus Риновирусы КРС 2 с/т Aphtovirus Вирус ящура О, А, С, SA'
Astroviridae Astro virus Человека 6 с/т, КРС 3 с/т,
Arteri virus Arterivirus Вирусы артериита лошад!
УСОВ ЖИВОТНЫХ: РНК-СОДЕРЖАЩИЕ ВИРУСЫ
и
1ьян, КРС, собак, шиц, летучих мышей
ГБО, энцефалоз лошадей
века, клещей, Колорадской клещ.лих.
виней, овец, коз, лошадей, собак, кошек, шиц, оленей и др.
калькой болезни птиц (ИББ)
индбис, Западного, Восточного, Венесуэльского энцефаломиелитов лошадей, леса Семлики, Г era, Чукунгунья
жого, Клещевого энцефалитов, Омской геморрагической лихорадки, менингоэнцефалита индеек
ши овец.
перитонит кошек, гемагглютинирующий вирус энцефаломиелита свиней, корона человека, КРС, собак, индеек
КРС, свиней, овец, коз, кроликов, мышей
), вирус парагриппа (4 типа)
жвачных, ЧП. ЧГ(гюленей).
рус человека, респирагрно-синцитиальный вирус КРС
Индиана
лавителя)
пионов по NA и 14 подтипов по НА
[редставителя 18 антигенных групп
3 представителя)
риоменингита
гей
кома, лейкоз кошек, свиней и морских свинок; ретикулоэндотелиоз птиц; рептилий.
зьян, синцитиальный вирус КРС и кошек
коз человека
! типа, левпивирусы овец и коз (Висна-Меди, ленти-лошадей (ИНАН), ленти-кошек (ИДК), ленти-КРС (ИД КРС).
>иней. сан-мигуель морских львов, калицивирус собак, кошек
КОКСАКИ, ECHO, энцефаломиелит мышей Тейлора, ECSO 1-11 с/т, КРС, 1-7 с/т, обезьян 1-13 с/т.
]>аломиелига мышей,
1-3,Азия -1___________________________________________________________________________________
эвец, свиней, кошек, лошадей, птиц
LPPCC
ББК 48.73.
С98
УДК 619: 616.988
Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьёв Б.В., Фомина Н.В.
С 98 Вирусные болезни животных. - Москва, ВНИТИБП, 928 с, ил.
В монографии описаны вирусные болезни сельскохозяйственных, пушных, домашних н
некоторых лабораторных животных. Приведены сведения о клиническом и патологоанато-
мическом проявлении болезней, основные характеристики возбудителей, эпизоотологиче-
ские особенности инфекций, указаны методы диагностики, специфической профилактики, а
также меры борьбы с вирусными болезнями животных.
Рассчитана на широкий круг специалистов, интересующихся проблемами вирусных бо-
лезней животных и человека, ветеринарных специалистов, научных работников, преподава-
телей, аспирантов и студентов сельскохозяйственных, ветеринарных и медицинских инсти-
тутов, а также лиц, любящих животных.
380502000-114
С----------------1-98 ББК 48.73
035 (01)- 98 с 98
ВАСИЛИЙ НИКОЛАЕВИЧ СЮРИН
АНАТОЛИЙ ЯКОВЛЕВИЧ САМУЙЛЕНКО
БОРИС ВАСИЛЬЕВИЧ СОЛОВЬЁВ
НАТАЛЬЯ ВАСИЛЬЕВНА ФОМИНА
ВИРУСНЫЕ БОЛЕЗНИ ЖИВОТНЫХ
© Сюрин В.Н.
© Самуйленко А. Я.
© Соловьёв Б.В.
© Фомина Н.В.
ПРЕДИСЛОВИЕ
Книга, которая у Вас в руках, написана нами с учетом интересов специа-
листов разной категории. Работая над ней, мы старались сделать её инте-
ресной и полезной для исследователей, работающих в области вирусологии
в сельскохозяйственных вузах, практических специалистов-эпизоотологов,
обеспечивющих проведение мероприятий по диагностике, профилактике и
ликвидации вирусных инфекций, для научных сотрудников НИВИ, НИВС,
специалистов - диагностов и, наконец, она видимо должна заинтересовать
аспирантов и студентов, изучающих диагностику и специфическую профи-
лактику, меры борьбы и ликвидации вирусных инфекций, методы лечения
вирусных болезней животных. Мы надеемся, что данная монография будет с
интересом читаться и практическими специалистами хозяйств, лабораторий,
отделов (департаментов) ветеринарии областей, краев, республик.
В данной монографии авторы руководствовались порядком изложения
статей по отдельным вирусным болезням в строгом соответствии с послед-
ней принятой международной классификацией и номенклатурой вирусов
без учета их эпизоотологического значения и экономического ущерба, по-
скольку такие данные по отдельным болезням с годами кумулятивно нерав-
номерно нарастали и на сегодняшний день уже не укладываются в схему их
эпизоотологической классификации.
Рисунки (цветные и черно-белые) «привязаны» к тексту статей сквозной
нумерацией, но по техническим возможностям размещены двумя блоками в
средине и конце книги.
Разумеется, вышеупомянутый круг читателей определится, если разно-
сторонняя информация данной монографии побудит их по-иному смотреть
на природу возбудителя, его особенности, эволюцию инфекции, диагности-
ку и специфическую профилактику с учетом трех времен: «вчера, сегодня и
завтра». Все, что сделано в области общей и частной вирусологии «сегодня»
несомненно будет развито, уточнено и дополнено и увлекательные пер-
спективы развития вирусологии в грядущий период «завтра» мы стремились
осветить в послесловии к данной монографии.
При создании этой книги мы стремились учесть все замечания ученых и
практических специалистов к предыдущим книгам по ветеринарной вирусо-
логии, изданным до 1991 г («Частная ветеринарная вирусология», 1979;
«Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных», 1986;
«Лабораторная диагностика вирусных болезней животных», 1991; «Вирусы
животных», 1991; «Ветеринарная вирусология», 1991). Авторы с глубокой
благодарностью примут замечания и пожелания по настоящей монографии
и учтут их при последующей работе по переизданию этой книги.
Авторы
3
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
ЧАСТЬ I. ЗАБОЛЕВАНИЯ, ВЫЗЫВАЕМЫЕ
РНК-СОДЕРЖАЩИМИ ВИРУСАМИ
Глава I. РЕОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА REOVIRIDAE
Семейство Reoviridae (от англ, respiratore enteric orphan) - большая группа вирусов, по-
ражающая позвоночных, насекомых и растения.
Вирионы реовирусов представляют собой икосаэдрические частицы диаметром 60-80 нм
и состоят из сердцевины и двойного капсида - наружного и внутреннего (Рис. 1, 2). В состав
сердцевины входят белок и РНК. В вирионах реовирусов содержится 78-86% белка и 14-
22% РНК. Мол.м. вирионов около 120 МД, плавучая плотность в CsCl 1,36-1,39 г/см3.
Геном реовирусов состоит из 10-12 уникальных фрагментов 2-спи-ральной линейной
РНК с мол.м. 0,2-3,0 МД, кодирует один белок. Общая мол.м. вирионной РНК 12-20 МД.
Природа связи фрагментов неясна, вероятно, они соединены друг с другом с помощью бел-
ковых молекул. В вирионах реовирусов обнаружено 6-10 полипептидов с мол.м. 15-155 кД.
Некоторые белки гликозилированы. Липиды в составе этих вирусов не выявлены. С сердце-
виной вирионов ассоциирована транскриптазная активность этого семейства. Реовирусы
размножаются в цитоплазме клетки с образованием характерных цитоплазматических
включений, содержащих РНК и вирусные белки. Формирование вирионов тесно связано с
микротрубочками. Генетическая рекомбинация между различными реовирусами в пределах
рода происходит очень эффективно. В основе механизма рекомбинации лежит перераспре-
деление (реассортация) фрагментов РНК (1а).
Наибольшее значение в инфекционной патологии животных имеют представители рода
Reovirus и Orbivirus, молекулярная биология которых подробно описана в недавних работах
(2). Они вызывают заболевание у телят, поросят, ягнят, цыплят и индюшат. Параротавиру-
сы изучены недостаточно, т.к. они не размножаются в культуре клеток. Только ротавирус
свиней группы С удалось серийно пассировать в первичной культуре клеток почек поросят и
перевиваемой культуре клеток МА-104 (Рис.5). Ротавирусы других групп называют атипи-
ческими или параротавирусами. Ротавирусы группы А обнаружены у многих видов млеко-
питающих и птиц; группы В - у человека, КРС, свиней, овец, крыс; группы С - у человека,
КРС, свиней; групп D, F и G - у птиц; группы Е - у свиней. По наличию типоспецифических
АГ-детерминант в белках VP7 (гликопротеин) и VP4 (протеазочувствительный белок) рота-
вирусы группы А подразделяют на 14 G серотипов и 12 Р серотипов. Ниже приводятся со-
временные представления о классификации, структурной организации, составу и молеку-
лярным механизмам репликации этих вирусов (2,4, 5,18,19).
Семейство Reoviridae состоит из 9 родов: 1) Orthoreovirus; 2) Orbivorus; 3) Coltivirus;
4) Rotavirus; 5) Aquareovirus; 6) Cypovirus; 7) Phytoreovirus; 8) Fijivirus и 9) Oryzavirus.
1. Род Orthoreovirus (от греч. orthos - правильный) включает реовирусы типов 1, 2 и 3
(прототипный вирус). Естественные хозяева этого рода вирусов - люди, обезьяны, КРС, со-
баки, птицы и летучие мыши. Диаметр вирионов составляет 76 нм, сердцевины - 52 нм. От
сердцевины отходят 12 полых выступов (шипов), которые достигают наружной поверхности
вириона. Через эти выступы выходят синтезированные транскрипты. Мол.м. вирионов 130
МД, коэффициент седиментации их 730S. Они устойчивы к воздействию эфира н стабильны
при pH 3-9. В вирионах и сердцевинах содержится соответственно 14 и 44% РНК, доля гуа-
нина (Г) и цитозина (Ц) составляет 44%. Кроме 2-спиральной РНК в вирионах обнаружено
4
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
около 3000 1-спиральных олигонуклеотидов длиной от 2 до 20 нуклеотидов. Геном состоит
из 10 фрагментов 2-спиральной РНК с мол.м.0,5-2,7 МД, общая мол.м. РНК 14-15 МД; в
вирионах обнаружено 9 полипептидов с мол.м.38-155 кД, 3 из которых входят в состав на-
ружного капсида. Минорный полипептид наружного капсида - типоспецифический АГ.
2. Род Orbivirus (от лат.огЫв - кольцо) включает вирусы блутанга (24 серотипа), афри-
канской чумы лошадей, эпизоотической геморрагической болезни оленей, энцефалоза ло-
шадей, Кемерово, Чангинола, Коррипарта, Юбенанджи, Пальям, Валлал, Варрего (2 серо-
типа) (2). Типичный представитель рода - вирус блутанга серотипа 1 (синего языка, ката-
ральной лихорадки овец). Вирионы орбивирусов имеют диаметр 65-80 нм. Наружный кап-
сид рыхлый, без четко различимых структур и легко удаляется при центрифугировании в
CsCl. Внутренний капсид состоит из 32 капсомеров кольцевидной формы. На поверхности
сердцевин нет выступов. Мол.м. вирионов 80 МД, коэффициент седиментации 550S. Виру-
сы инактивируются при pH 3,0; при воздействии растворителей липидов инфекционность их
снижается в 10 раз.
В вирионах содержится 20% РНК, доля Г+Ц составляет 42-44%. Геном состоит из 10
фрагментов 2-спиральной РНК с мол.м. 0,5-2,8 МД; общая мол.м. РНК 15 МД. В вирионах
обнаружено 7 полипептидов с мол.м. 35-150 кД, 2 из которых (Р2 и Р5) входят в состав на-
ружного капсида. Полипептиды наружного капсида содержат типоспецифические АГ детер-
минанты и индуцируют синтез ВНА. Естественными хозяевами орбивирусов являются лю-
ди, обезьяны, лошади, КРС, олени, овцы, кролики, мышата-сосуны, насекомые и клещи.
Вирусы передаются от одного хозяина к другому кровососущими членистоногими.
3. Род Coltivirus (от англ. Colorado tick fever) включает вирус колорадской клещевой
лихорадки (прототипный вирус) и вирусы, выявленные в Индонезии и Китае у КРС, свиней,
человека, москитов и клещей. Вирионы колтивирусов имеют диаметр 80 нм. Выступов иа
поверхности сердцевин не обнаружено. Представители рода теряют инфекционность при pH
3,0. Геном состоит из 12 фрагментов 2-спиральной РНК с мол.м. 0,24-2,5 МД; общая
мол.м. РНК 18 МД.
4. Род Rotavirus (от лат. rota - колесо) играет важную роль среди инфекционных аген-
тов, вызывающих острые гастроэнтериты у молодых животных различных видов. Типич-
ный представитель рода - ротавирус человека (SA 11 - прототипный вирус). В состав рода
включены также ротавирусы обезьян, КРС, свиней, лошадей, овец, коз, оленей, собак, кро-
ликов, кошек, морских свинок, мышей и птиц.
Все ротавирусы по наличию группоспецифического ГА, выявляемого различными мето-
дами (ИФ, ИФА, ИЭМ), подразделяют на 7 групп: А, В, С, D, Е, F, G. Ротавирусы каждой
группы независимо от их происхождения имеют общий групповой АГ, обусловленный бел-
ком внутреннего капсида VP6. Ротавирусы групп А, В и С обнаружены у человека и живот-
ных, а групп D, Е и F - только у животных. Большинство ротавирусов человека и животных
относят к группе А (типичные ротавирусы). Ротавирусы других групп называют атипичны-
ми, или параротавирусами. Вирионы ротавирусов представляют собой сферические частицы
диаметром 65-75 нм, состоящие из сердцевины, внутреннего и наружного капсида. Сердце-
вина имеет гексагональную форму и состоит из 3-х белков (VP1, VP2, VP3) и РНК, диаметр
ее 40-45 нм, внутренний капсйд имеет икосаэдрическую форму и построен из 260 морфоло-
гических единиц, каждая из которых представлена 3-мя молекулами белка VP6. Диаметр
внутреннего капсида составляет 15-20 нм. Наружный капсид состоит из коротких капсоме-
ров, прикрепленных непосредственно к концам капсомеров внутреннего капсида. Он по-
строен из 780 молекул белка VP7. Диаметр наружного капсида составляет 5-10 нм. На по-
верхности наружного капсида обнаружено 60 шипов длиной 4,5-6,0 нм и шириной около 3,5
нм, представляющих собой димеры белка VP4.
5
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
5. Род Aquareovirus (от лат. aqua - вода) включает вирусы американского леща
(прототипный вирус), сомов, кеты. Возможный представитель рода - реовирусы линя, го-
лавля, кижуча, моллюсков. Диаметр вирионов 75 нм, сердцевины 50 нм, плавучая плот-
ность вирионов в CsCl 1,36 г/см3. Геном состоит из 11 фрагментов 2-спиральиой РНК с
мол.м. 7 МД. В составе вирионов обнаружено 7 белков с мол.м. 34-136 кД.
6. Род Cypovirus (от англ, cytoplasmic polihedrosis) включает вирусы цитоплазматиче-
ского полиэдроза тутового шелкопряда Bombyxmori (прототипный вирус) и многих насеко-
мых отрядов двукрылых (Diptera), чешуекрылых (Lepidoptera), перепончатокрылых (Нуте-
noptera). Диаметр вирионов 50-65 нм, мол.м. 50 МД, коэффициент седиментации 370-440 S.
Вирионы устойчивы к действию эфира и стабильны при pH 3,0. Геном состоит из 10 фраг-
ментов 2-спиральной РНК с мол.м. 0,3-2,7 МД. В вирионах обнаружено 3-5 полипептидов с
мол.м. 30-151 кД. Вирусы размножаются в насекомых с образованием крупных белковых
включений (полиэдров), содержащих вирионы.
Роды 7. Phytoreovirus, 8. Fijivirus и 9. Oryzavirus включают реовирусы растений.
Посредством ИФА у ротавирусов выявлены подгруппоспецифические АГ, которые свя-
заны с белком внутреннего капсида VP6 и белком сердцевины VP2. По наличию подгруп-
поспецифических АГ- детерминант ротавирусы подразделяют на 4 подгруппы. Большинство
ротавирусов животных входит в состав первой подгруппы. Типоспецифические АГ ротави-
русов ассоциированы с белками наружного капсида VP4 и VP7. По наличию типоспецифи-
ческих детерминант в белке VP7 ротавирусы подразделяют на 11 серотипов: G-серотипы
(табл.1.1). У животных и у птиц обнаружено 7 серотипов ротавирусов (3, 4, 5, 6, 7, 10 и li-
ft): у свиней - 4 (3, 4, 5, 11-й), у КРС - 2 (6, 10-й), у лошадей - 2 (3, 5-й) и по одному у жи-
Таблица 1.1. Классификация ротавирусов группы А иа основании
типоспецифических детерминант наружного капсидного белка CVP7 (2)
Серотип Источник Штамм
G1 Человек Wa,Ku,RV4,K8,M22,M37,D,S12,Mont,W179,W,Fh
G2 Человек DS1, S2,RV5,RV6,HN 144,HN126,KUN, 1076,1171
G3 Человек Ito,YO,P,M,Nemoto,AUl ,RV3,W178,PCP5,MZ58,
MO,AK35,ST8,McN, 14,15
Обезьяна SA-11,RRV
Свинья СКЦ8бЬВК13бфе/76
Собака K9,CU1 ,A79-10.LSU79C-36
Кролик Alabama,Cll,R2
Мышь EB,EW
Кошка Taka,CAT2,CAT3,CAT22,CAT97
Лошадь H2,F114
G4 Человек Hochi,Hosakawa,VA70,57M,STl,ST3
Свинья Gotfried, SB 1 A,SB2,BEN 144,B470
G5 Свинья OSU,K,TER41 ,EE,CN86,CC86,A5 80
Лошадь Hl
G6 КРС NCDV,UK,C486,RF,WC3,B641
G7 Цыпленок Ch2
G8 Индейка Tyl
Человек 69M,B37,B3 8,PAI 71 ,HAL3809,HAL5241 ,HAL6271
HAL8590,HALl 166,HAL1272
G9 Человек W161,F45,AU32
G10 КРС B233
G11 Свинья YM
6
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
вотных остальных видов. Третий серотип ротавирусов выявлен у 7-и видов животных. Наи-
большее число серотипов (6) идентифицировано у человека. По наличию типоспецифиче-
ских АГ-детерминант на белке VP4 (протеазочувствительном), ротавирусы подразделяют на
Р-серотипы. Для типирования ротавирусов, наряду с серологическими реакциями, исполь-
зуют также гибридизационный анализ.
Отличительная черта структуры ротавирусов - наличие 132 каналов, пронизывающих
наружный и внутренний капсиды и соединяющих наружную поверхность вириона с сердце-
виной. Эти каналы обеспечивают проникновение метаболитов, необходимых для транс-
крипции РНК, и выход вновь синтезированных молекул РНК из сердцевины. В препаратах
ротавирусов встречают 2-капсидные и 1-капсидные частицы, а также частицы, лишенные
сердцевины (“пустые” вирионы). Диаметр 2-капсидных частиц 70-75 нм, 1-капсидных 60-70
нм. Под электронным микроскопом вирионы ротавирусов напоминают колесо с широкой
ступицей (сердцевина), короткими спицами (внутренний капсид) и четко очерченным обо-
дом (наружный капсид). Поэтому они получили такое название - ротавирусы (от лат. rota -
колесо).
Структурные белки. В вирионах ротавирусов обнаружено 6 белков, 3 из которых
(VP1-VP3) входят в состав сердцевины, причем белок VP2 составляет 15 % массы всех бел-
ков (табл.1.2). Белок VP6 - основной компонент внутреннего капсида, на его долю прихо-
дится примерно половина массы вирионных белков. Наружный капсид состоит из 2-х бел-
ков (VP4 и VP7), один из которых - VP7 - гликозилирован. Белки наружного капсида - очень
важные компоненты вириона. Они ответственны за прикрепление вирионов к поверхности
клетки, обусловливают ГА и индуцируют синтез ВНА. Под воздействием трипсина белок
VP4 расщепляется на 2 белка (VP5 и VP8), в результате чего повышается инфекционная ак-
тивность вируса.
Таблица 1.2, Характеристика структурных белков ротавирусов
Обозначение белка Молекулярная масса, кД Содержание в вирионе, % от массы всех белков Локализация
VP1 125 2 Сердцевина
VP2 102 15 Сердцевина
VP3 98 0,5 Сердцевина
VP4 87 1,5 Наружный капсид
VP6 45 51 Внутренний капсид
VP7 37 30 Наружный капсид
В вирионах ротавирусов обнаружена РНК-зависимая РНК-полимераза (транскриптаза),
которая связана с сердцевиной вирионов. Транскриптаза проявляет активность после удале-
ния белков наружного капсида. Вероятно, белки сердцевины VP1 и VP3 обладают транс-
криптазной активностью. Для проявления акгивости вирион-ассоциированной транскрипта-
зы in vitro необходимо присутствие в системе всех 4-х рибонуклеозилтрифосфатов и ионов
Mg2+. Продуктом полимеразной реакции являются 1-спиральные молекулы РНК, которые
чувствительны к действию РНК-азы и полностью гибридизируются с вирионной РНК. Кро-
ме транскриптазы в составе вирионов обнаружены поли(А)-полимераза, гуанилилтрансфе-
раза, метилтрансфераза и нуклеотидфосфогидролаза.
Структура генома. Геном ротавирусов состоит из 11 уникальных фрагментов 2-
спиральной РНК с мол.м. от 0,2 до 2,2 МД. Суммарная мол.м. всех фрагментов РНК рота-
вирусов 11-14 МД. Фрагменты РНК присутствуют в вирионах в эквимолярных количествах.
Природа связи фрагментов РНК не ясна. Фрагменты РНК могут быть разделены при элек-
трофорезе в полиакриламидном геле или агарозе. В соответствии с электрофоретической
подвижностью фрагменты РНК подразделяют на 4 класса: 1 класс включает фрагменты 1-4;
7
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
2 класс - фрагменты 5 и 6; 3 класс - фрагменты 7-9; и 4 класс - фрагменты 10-11. Электро-
форетическая подвижность фрагментов РНК внутри классов ротавирусов не одинакова не
только у животных разных видов, но и одного вида. Подвижность 10 и 11-го фрагментов
РНК у различных ротавирусов сильно варьирует. В связи с этим различают “длинные” и
“короткие” электрофоретипы РНК ротавирусов, соответствующие большей и меньшей элек-
трофоретической подвижности этих фрагментов.
Степень родства между геномами разных ротавирусов определяют гибридизацией син-
тезированных in vitro 1-спиральных фрагментов РНК с соответствующими 2-спиральными
фрагментами геномной РНК гомологичного н гетерологичного вирусов. Частичная гомоло-
гия обнаружена между геномами ротавирусов телят и обезьян.
В последнее время выяснены кодирующие функции каждого фрагмента вирионной РНК
ротавируса обезьян SA-11 и определена его полная первичная структура генома (табл. I. 3).
Таблица 1.3. Характеристика фрагментов геномной РНК н
кодируемых ими бежов ротавирусов обезьян S А-11
Номер фрагме нта Фрагмент генома Продукт трансляции Локализация
длина число некодирующих фраг- нуклеотидов мента 5’-конец 3’-конец П.Н. Обозна- Число Мол. чение амино- м. кислот кД
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 3302 2690 2591 2362 1611 1356 1104 1059 1062 751 667 18 16 49 9 30 23 25 46 48 41 21 17 28 35 22 93 139 131 59 33 182 49 VP1 VP2 VP3 VP4 NS53 VP6 NS34 NS35 VP7(Gp) NS28(GP) NS26 1088 881 835 776 495 397 312 317 326 175 198 125 102 98 86 58 44 36 36 37 20 21 Сердцевина « « Нар. Капе Нестр.бел. Вн. Капсид Нестр.белок « Нар. Капсид Нестр.белок «
Обозначения: Gp- гликопротеин; кД - килодальтон; VP - структурный вирусный белок; NS - неструктурный белок (число показывает мол,м, в кД); п.н. - пар нуклеотидов
Для установления кодирующей функции генома ротавирусов фрагменты РНК разделяют
электрофорезом в полиакриламидном геле, денатурируют при высокой температуре, транс-
лируют in vitro и идентифицируют продукты трансляции. Трансляции подвергают также
РНК, синтезированные in vitro с помощью вирион-ассоциированной РНК-полимеразы.
Геном ротавируса обезьян SA-11 состоит из 18 555 пар нуклеотидов. Длина фрагментов
генома варьирует от 667 (11-й фрагмент) до 3302 (первый фрагмент) пар нуклеотидов. На
концевых участках всех фрагментов содержатся нетранслируемые консервативные последо-
вательности, которые необходимы для инициации транскрипции, репликации и трансляции
вирусных генов. Нетранслируемые участки составляют лишь 6,3 % длины генома.
Свойства и функции белков ротавирусов
Белки сердцевины и внутреннего капсида. Белок VP1 кодируется 1-м фрагментом гено-
ма у всех изученных ротавирусов и входит в состав сердцевины. В сыворотке крови естест-
венно и экспериментально инфицированных животных АТ к белку VP1 не выявляются.
Сравнение аминокислотной последовательности белка VP1 у ротавирусов обезьян, КРС и
человека выявило высокую степень гомологии (89-96 %). Незначительное количество этого
белка, содержащееся в вирионе, (около 2 % массы всех белков) свидетельствует о том, что
8
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
он скорее является частью энзиматического комплекса, чем выполняет структурную роль.
Вероятно, белок VP1 - компонент вирион ассоциированной транскриптазы.
Белок VP2 кодируется 2-м фрагментом генома и в качестве основного белка (15 % мас-
сы всех белков) входит в состав сердцевины. Он связывается с 1- и 2-спиральной РНК рота-
вирусов и содержит 2 обогащенных лейцином участка. У ротавирусов обезьян, КРС и чело-
века установлена высокая степень гомологии (91-92 %) этого белка. По-видимому, белок
VP2 связывает фрагменты генома друг с другом и играет важную роль в сборке вирионов.
Белок VP3 кодируется 3-м фрагментом генома и служит минорным компонентом серд-
цевины (0,5 % массы всех белков). Идентификация этого белка затруднялась из-за его низ-
кого содержания в вирионах и зараженных клетках. Белок VP3, вероятно, - компонент РНК-
полимеразы и совместно с белком VP1 принимает участие в репликации вирусной РНК.
Белок VP6 кодируется 6-м фрагментом генома и является единственным белком внут-
реннего капсида. Он составляет 51 % массы всех вирионных белков. В изолированном со-
стоянии и в составе вирусных частиц представляет собой тример. Обладает кислыми свой-
ствами и полимеризуется с образованием трубчатых структур при низком значении pH.
Участвует в транскриптазной активности 1-капсидных частиц. Удаление его из этих частиц
сопровождается потерей транскриптазной активности. Добавление белка приводит к восста-
новлению активности, однако непосредственно он не вовлекается в транскрипцию. Вероят-
но, белок VP6 обусловливает конформационные изменения сердцевины, необходимые для
функционирования полимеразного комплекса. Белок VP6 содержит группоспецифические и
подгруппоспецифические детерминанты. С помощью монАТ установлено наличие 5-и не
перекрывающихся детерминант. Роль его в индукции протективного иммунитета не ясна.
Белки наружного капсида. Белок VP4 кодируется 4-м фрагментом генома и представля-
ет негликозилированный минорный компонент наружного капсида (1,5% массы всех бел-
ков). Он ответствен за ГА-активность и синтез ВНА. В присутствии трипсина белок VP4
расщепляется на 2 белка с мол.м. 60 кД (VP5) и 28 кД (VP8). В результате расщепления
белка повышается инфекционная активность вируса. Процесс протеолитической активности
ротавирусов при нарезании белка наружного капсида аналогичен процессу расщепления по-
верхностных белков у пара- и ортомиксовирусов. Белок VP4 функционирует на ранних эта-
пах взаимодействия вируса с клеткой. Расщепление его активизирует проникновение вируса
через плазматическую мембрану, но не влияет на его взаимосвязь с клеткой. Этот белок ин-
дуцирует у животных протективный иммунитет. Белок VP4 ротавирусов животных состоит
из 776 аминокислот и расщепляется трипсином в 2-х сайтах (аргинин 241 и аргинин 247),
причем расщепление во 2-м сайте происходит чаще с помощью монАТ. В белке VP8 обна-
ружены серотипоспецифические, а в белке VP5 - эпитопы, перекрестно реагирующие в PH.
Белок VP7 кодируется девятым фрагментом у ротавируса обезьян SA-11 (8-м фрагмен-
том у ротавируса КРС) и является гликозилированным основным компонентом наружного
капсида (30% массы всех белков). Он состоит из 326 аминокислот и содержит 2 тандемных
гидрофобных участка на N-конце и один сайт гликозилирования в положении 69-71, У не-
которых штаммов ротавирусов КРС и человека этот белок имеет 2 сайта гликозилирования.
Первые 50 аминокислот этого белка представляют собой сигнальную последовательность,
которая отщепляется и не входит в состав вириона. Белок VP7 - основной протективный АГ,
вызывающий образование ВНА, ответственен за прикрепление вируса к клеткам. АТ к это-
му белку блокируют адсорбцию вируса на клетках. Вероятно, участок белка VP7, обуслов-
ливающий адсорбцию вируса, находится на карбоксильном конце белка (аминокислоты 275-
295). В VP7 выявлены серотипспецифические и перекрестно реагирующие эпитопы нейтра-
лизации. Конформация белка VP7 определяется дисульфидными связями и необходима для
сохранения нейтрализующих эпитопов. Гипериммунная сыворотка к очищенному денатури-
рованному белку VP7 не обладает нейтрализующей активностью. Нейтрализующие монАТ
не реагируют с денетурированным белком VP7. Гликозилирование белка VP7 не является
9
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
необходимым условием для адсорбции и проявления инфекционной активности вируса, од-
нако углеводные остатки играют важную роль в стабилизации вирусной частицы и экспони-
ровании антигенных детерминант в этом белке.
Неструктурные белки. Белок NS53 кодируется пятым фрагментом генома и обнаружи-
вается в инфицированных ротавирусами клетках на ранних стадиях инфекции. Синтез бел-
ка, вероятно, контролируется, так как в инфицированных клетках он образуется в меньших
количествах, чем в бесклеточной белоксинтезирующей системе. Однако о механизме регу-
ляции синтеза этого белка в клетках ничего не известно. Белок NS53 обладает основными
свойствами и содержит 2 участка связывания с Zn в положении 54-66 и 314-327. Белки, свя-
зывающие Zn, обычно взаимодействуют с нуклеиновой кислотой. Возможно, белок NS53
участвует в репликации вирусной РНК. Белок NS35 кодируется фрагментами 7-9 генома в
зависимости от штамма ротавируса (UK - 7-м, SA-11 - 8-м, RRV - 9-м фрагментом) и обла-
дает основными свойствами. Иммуноцитохимическими методами выявлена связь этого бел-
ка с виропластами в инфицированных клетках. Полагают, что он принимает участие в реп-
ликации вирусной РНК или в упаковке 1-спиральных РНК в субвирусные частицы.
У ротавируса обезьян SA-11 белок NS34 кодируется фрагментом 7 и обладает кислыми
свойствами, обнаруживается в комплексах, изолированных из инфицированных клеток и
содержащих репликазную активность, возможно - компонент вирусной репликазы.
Белок NS28 кодируется 10-м фрагментом генома и является гликопротеином. На N-
конце этого белка имеется неотщепляемая сигнальная последовательность, в которой лока-
лизованы 2 сайта гликозилирования. Белок NS28 N-концом встроен в мембраны эндоплаз-
матического ретикулюма, а его С-конец находится в цитоплазме. Цитоплазматический
фрагмент белка принимает участие в морфогенезе вирусных частиц и служит рецептором
для Г капсидных частиц, обеспечивая их почкование в просвет эндоплазматического рети-
кулюма. Гликозилирование его необходимо для удаления временной (транзитной) оболочки
из почкующихся частиц. Добавление туникамицина (ингибитора гликозилирования) приво-
дит к накоплению оболочечных частиц в клетках.
Белок NS26 кодируется 11-м фрагментом генома, обогащен серином и треонином и яв-
ляется фосфопротенном. Он связан с виропластами в инфицированных клетках и, вероятно,
участвует в репликации вирусной РНК.
Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время различают не менее 4-х
серотипов ротавируса человека (16). Известно о существовании не менее 3-х серотипов ро-
тавирусов группы А свиней (3). Кроме того известны ротавирусы свиней, относящиеся к се-
рогруппам В, С и Е (15). Серогрупповая серотиповая вариантность имеет место у ротавиру-
сов КРС и других животных. В перекрестной PH тесное АГ-родство выявлено между рота-
вирусами обезьян и свиней, а также между ними и ротавирусами КРС. Гомология первич-
ной структуры VP7 различных серотипов достигала 71-85 % (11а, 14). Различная степень
АГ-родства по VP4 обнаружена между ротавирусами, выделенными от свиней, человека,
обезьян и собак (20).
Шт.АН-1, выделенный от человека, характеризовался высокой гомологией с ротавиру-
сом, выделенным от кошек (FRV-1) (17). От КРС при диарее выделен ротавирус, геномная
РНК которого была аналогичной ротавирусу птиц (10). Ротавирусы человека и свиней имели
высокую степень гомологии нуклеотидных последовательностей и могли иметь общего
предка (18). В другие АГ-группы также входят ротавирусы, поражающие различных хозяев.
Вирусы, имеющие одного хозяина, могут настолько сильно различаться между собой, что
представляют разные группы. Штаммы ротавирусов, относящиеся к одному серотипу, но
выделенные от животных разных видов, часто имеют более тесную связь, чем штаммы раз-
личных серотипов, выделенные от животных одного вида (3).
10
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
В группу В входят ротавирусы человека, КРС, в группу С - человека и свиней, группа Е
и F - свиней, группу D - птиц (8). Геномный 4-й сегмент ротавируса обезьян происходит от
ротавируса КРС. Ротавирусы обезьян, свиней и кроликов в экспериментальных условиях
легко инфицировали телят (11). Ротавирус человека вызывал летальную инфекцию у ново-
рожденных поросят при оральном заражении (19). Существуют ротавирусы, обладающие
двойной субгрупповой специфичностью. Такая уникальная способность обнаружена, напри-
мер, у ротавируса лошадей (шт. F1-14), который взаимодействовал с АГ 1-й и 2-й субгрупп
(13). Известен штамм ротавируса свиней с двойной серотипоспецифичностью (G3 и G5)
(16). Природа АГ-полиморфизма у ротавирусов пока не выяснена. Приведенные данные
свидетельствуют о возможности пересечения ротавирусами видовых барьеров и их мигра-
ции между различными классами и видами млекопитающих в естественных условиях (10).
В последнее время у КРС, свиней и человека были обнаружены атипичные ротавирусы,
не имеющие группоспецифического АГ, несмотря на типичную для ротавирусов морфоло-
гию. Они были названы параротавирусами. Атипичные штаммы были обнаружены в 5%
случаев при ротавирусных инфекциях у свиней ив 1% - при ротавирусных диареях у КРС.
При изучении с помощью ЭФ в ПААГ выявлены различия в профиле геномов этих штам-
мов и типичных ротавирусов (17а). В 1988 г. в Японии был выделен новый вирус Shenzam.
Он вызывал спорадические случаи врожденных аномалий и гидроэнцефалит у телят. У КРС
при внутривенном введении его обнаруживается только лейкопения. В эритроцитарной
фракции крови вирус определяется в течение нескольких недель. Помимо эритроцитов ви-
рус выявляли также во фракции тромбоцитов и никогда не обнаруживали в лейкоцитарной
фракции. При интрацеребральном заражении у телят развивалась летальная инфекция с тя-
желыми неврологическими поражениями. Этот вирус выделяли из мозжечка, лимфоузлов.
Вирус Shenzam относится к роду Orbivirus, подгруппе Poliam (12). Двунитчатая геном-
ная РНК шт.К-47 вируса Shenzam состоит из 10 фрагментов с мол.м. от 2,35-106 до 9,32-Ю6.
Тотальный размер его генома равен 11,75 МД. Среди 10-и структурных вирионных белков
его масса варьирует от 23 до 130 кД; три (95, 86 и 23 кД) являются мажорными. Вирус
Shenzam хорошо репродуцируется в клетках ВНК-21 (титр 107 ТЦД^о/мл). На его основе раз-
работана инактивированная вакцина, предотвращающая лейкопению и внремию (116,12).
Полагают, что этот вирус, возможно, является этиологическим агентом конгенитальных
деформаций у КРС, относится к серогруппе Polyam рода Orbivirus, сем. Reoviridae и пред-
ставляет собой новый серотип.
Параротавирусы свиней, в отличие от ротавирусов, вызывают образование синцитиев из
энтероцитов в тонком кишечнике. Отмечена АГ вариабельность среди параротавирусов
свиней (7). Несмотря на выраженную АГ специфичность, ряд ротавирусов индуцирует ВНА
к гетерологичным ротавирусам.
Вирулентность. Для идентификации генов, ответственных за вирулентность, живот-
ных заражают одновременно 2-мя штаммами ротавирусов, обладающими различной виру-
лентностью. В результате смешанной инфекции происходят обмен фрагментами генома
(пересортировка генов) и образование реассортантов. При исследовании реассортантов, со-
держащих различные комбинации фрагментов, установлено, что 4-й фрагмент генома рота-
вирусов ответствен за вирулентность. Продукт этого гена (белок наружного капсида VP4)
обусловливает проникновение вируса в клетку. МонАТ к этому белку блокируют проникно-
вение вируса через клеточную мембрану.
Вирулентность ротавирусов, вероятно, также связана с 9-м фрагментом генома, коди-
рующим белок наружного капсида VP7. Этот белок определяет взаимосвязь между вирусом
и клеткой. МоиАТ к белку VP7 ингибируют адсорбцию вируса на клеточной поверхности.
Референс-штаммы ротавирусов животных - штаммы: бычий NCDV, свиной OSU,
обезьяний СА-11, человеческий шт. NA. В перекрестной PH выявлено АГ различие штам-
11
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
мов ротавируса (BRVOO7, BRV-14, HN-7, BRV6555) КРС от референтного бычьего штамма
ротавируса NCDV. Изолят RO 1845 ротавируса человека, выделенный в Израиле, оказался
первым изолятом, обладающим ГА активностью (17).
Молекулярно-биологические подходы к созданию вакцин. Поверхностные белки рота-
вирусов VP4 и VP7 - иммуногены, индуцирующие синтез ВНА. Поэтому для конструирова-
ния субъединичных вакцин можно использовать пустые капсиды, изолированные белки на-
ружного капсида и синтетические пептиды, соответствующие АГ детерминантам белков
VP4 и VP7. В связи с множественностью серотипов ротавирусов представляет интерес полу-
чение вакцинных штаммов-реассортантов, которые содержат фрагменты генома, кодирую-
щие белки VP4 и VP7 из различных серотипов. При этом реассортанты ротавирусов инду-
цируют у животных иммунный ответ к обоим родительским штаммам ротавируса. Перспек-
тивен также метод получения генно-инженерных вакцин, ос-нованный на выделении фраг-
ментов 4 и 9 генома, получении ДНК-копий и экспрессии их в прокариотических или эука-
риотических клетках при использовании соответствующих генно-инженерных конструкций.
Синтезированные белки VP4 и VP7 вызывают образование ВНА у экспериментальных жи-
вотных и предохраняют их от заражения ротавирусом.
Особенности репродукции
Адсорбция и проникновение вируса в клетку. Ротавирусы, обработанные трипсином, не-
посредственно проникают через клеточную мембрану, причем проникновение сопровожда-
ется “раздеванием” (удаление внешнего капсида) вириона. В цитоплазме клеток через 5 мин
после заражения обнаруживают субвирусные частицы, лишенные наружного капсида. Акти-
вация ротавирусов трипсином связана с расщеплением белка наружного капсида VP4 на 2
белка: VP5 и VP8. ВНА блокируют проникновение вируса через плазматическую мембрану.
Не обработанные трипсином ротавирусы проникают в клетку в результате рецепторного эн-
доцитоза и через 20 мин их обнаруживают в лизосомах. Однако они не подвергаются
“раздеванию” и не происходит продуктивной инфекции.
Транскрипция. Геном ротавирусов транскрибируется в составе субвирусных частиц в
цитоплазме с помощью вирионной РНК-зависимой РНК-полимеразы. При этом транскрип-
ции подвергаются лишь минус-нити 2-спиральных фрагментов РНК. Синтезированные
плюс-РНК представляют собой полноразмерные копии всех 11 фрагментов РНК и не под-
вергаются аутогибридизации. Они не содержат поли (А)-последовательности и функциони-
руют как информационные РНК (и РНК), направляя синтез вирусных белков в бесклеточной
белоксинтезирующей системе.
Синтез и РНК ротавирусов в инфицированных клетках подвергается качественному и
количественному контролю. Качественный контроль обнаружен только при подавлении син-
теза белка в инфицированных клетках. В этих условиях транскрибируются лишь 4 фрагмен-
та РНК. Количественная регуляция выражается в том, что и РНК одних фрагментов синте-
зируются в гораздо большем количестве, чем и РНК других фрагментов. Синтез иРНК со-
храняется на высоком уровне в течение 9-12 ч после заражения. В системе in vitro вирусные
сердцевины не обладают транскриптазной активностью, однако добавление в смесь белка
VP6 восстанавливает эту активность. Вероятно, активация РНК-транскриптазного комплек-
са связана с конформационным изменением сердцевины.
Трансляция. В клетках синтезируются 6 структурных и 5 неструктурных вирусспеци-
фических белков. Структурный белок VP7 и неструктурный белок NS28 гликозилированы и
синтезируются на рибосомах, связанных с мембранами эндоплазматического ретикулума.
Два структурных белка (VP4 и VP7) подвергаются посттрансляционному процессингу.
Вновь синтезированные белки обнаруживают в клетках через 4 ч после заражения.
Репликация РНК. 1-спиральные плюс-РНК, синтезированные на 2-спиральной роди-
тельской РНК, служат матрицами для синтеза минус-РНК. Синтез 2-спиральных РНК осу-
12
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
ществляется во вновь образующихся субвирусных частицах (репликазные частицы), кото-
рые в процессе репликации РНК претерпевают структурные изменения.
Формирование и выделение вирионов. Вирионы ротавирусов формируются по принци-
пу самосборки. В результате процессов самосборки в виропластах образуются сердцевины и
1-капсидные вирусные частицы. Вероятно, белок VP2 связывает фрагменты генома и играет
важную роль в сборке сердцевины. Неструктурные вирусные белки, по-видимому, также
участвуют в этом процессе.
Созревание ротавирусов происходит почкованием 1-капсидных частиц через мембраны
эндоплазматического ретикулума в вакуоли с покрытием их псевдооболочкой. В просвете
вакуоли псевдооболочка утрачивается, формируется наружный капсид и появляются зрелые
вирионы. Неструктурный белок-гликопротеин NS28, встроенный в мембраны эндоплазма-
тического ретикулума, играет существенную роль в созревании вирионов. Он, вероятно,
обеспечивает связь белка наружного капсида VP7 с 1-капсидными частицами при сборке
вирионов. При подавлении гликозилирования туникамицином псевдооболочка с поверхно-
сти вирусных частиц не удаляется и 2-капсидные вирионы не обнаруживаются. Формирова-
ние наружного капсида существенно зависит от концентрации ионов Са2+. При отсутствии
их в культуральной среде почкования не происходит и зрелые вирионы в зараженных клет-
ках не выявляются. Вирионы ротавирусов выходят из клеток после их лизиса (2).
Инфекционность ротавирусов. Наличие внешнего капсидного слоя необходимо для
проявления инфекционное™ ротавирусов и транскриптазной активности. В популяции ви-
рионов ротавируса телят “гладкие” (с двойным капсидным слоем) и “шероховатые
(лишенные наружного капсидного слоя) в градиенте CsCl имеют плотность 1,36 и 1,38 г/см3
соответственно, причем, первые в расчете на вирион обладают в 1000 раз более высокой
инфекционностью, чем вторые. Для концентрации ротавирусов используют фреон, который
удаляет покрывающие вирус компоненты хозяина и способствует сорбции на фильтрах, что
обеспечивает выделяемость его от больных до 90%. Данный метод позволяет накопить кон-
центрированный вирус для биохимических исследований. Наблюдалось различие в патоген-
ности 2-х ротавирусов свиней, различающихся ростовыми характеристиками. Так, вариант
4F ротавируса свиней, который репродуцировался более медленно и образовывал мелкие
бляшки in vitro, имел более быстро мигрирующий ген и оказался патогенным для свиней,
тогда как вариант 4S был не патогенен (9).
Культивирование. Предложен способ получения ротавирусных АГ в клеточных куль-
турах с последующей очисткой и концентрированием их. С целью повышения выхода АГ в
среду за 24 ч до заражения клеточной культуры добавляют гидрокортизон в количестве
0,03-0,07 мг/мл. Очистку и концентрирование осуществляют адсорбцией ротавирусного АГ
на сорбенте при pH 4,0-5,0 с последующей элюцией при pH 8,2 (1).
Диагностика и идентификация ротавирусных инфекций. Разработан новый метод
индикации ротавирусного АГ с использованием Staphylococus aurens Cowan-1 (6). Для вы-
явления генетического различия и сходства между ротавирусами млекопитающих предло-
жен метод РНК-РНК-блот-гибридизации с применением в качестве зондов меченых Р32
полных наборов 11 геномных РНК из нескольких штаммов. В большинстве случаев степень
сходства нуклеотидных последовательностей оказалась выше в случае пар штаммов ротави-
русов, выделенных от одного и того же хозяина. Однако из этого правила наблюдались и
исключения. В частности, выделенный от человека шт.АИ-1 характеризовался высокой го-
мологией с кошачьим nrr.FRV-1 (17). Для идентификации вариантов РВ предложено ис-
пользовать метод точечной ДНК-РНК-блот-гибридизации без радиоактивной метки. В каче-
стве зондов для гибридизации используют меченные биотином 40-члениые синтетические
олигодезоксирибонуклеотиды, комплементарные к участку гена VP7 ротавируса. Чувстви-
тельность этого метода оказалась более высокой, чем метода ЭФ в ПААГ и ИФА (4, 5).
13
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Гирин В.Н. и др. Авт. свид.4678836/13 опубл.23.12.91.бюл.47. 1а.Макаров В.В. Вопро-
сы вирусол.,1988 :141. 2. Орлянкин Б.Г. С-х биология, 1991, 2 :131. З.Сергеев В.А. Вир.
вакцины, Киев,1993, Урожай. 4.Сюрин В.Н. и др. Диаг. вирус, бол. жив., М, 1991, Агро-
промиздат. б.Филдс и др., Вирусология, 1992. ба.Фомина Н.В. и др. Вирусы жив.,
MBA,1991 :388. б.ЧубоваН.В. и др. Клин. лаб. диагн.,1992, 11-12 :64. 7.Askaa J. et.al., Arch
Virol, 1984, 80, 4 :291. 8.Bellinzoni R. et.al. J Clin Microb, 1990, 3 :633. 9.Bridger J. et.al., J
Gen Virol, 1992, 73, 11 :30I1. lO.Brissow et.al., J Clin Microb, 1992, 30 :67. ll.Castrucci G.
et.al., Comp Imm Microb Infect Dis. 1988, 2 :71. lla.Charpilienne A. etal. Ann Inst Posteur
Viro, 1986, 137 :71. llb.Goto Y. et.al., Vet Microbiol, 1986, 11 :177. 12.Harasawa R. et.al. Jap.
J. Vet. Sci. 1988, 50, 3, 777. 13. Hoshino V. et.al. Virology 1987, 157 :488. 14.Huismans H.
et.al., Andersteport J Vet Res, 1981, 48 :51. 15. Juan C.S. et.al., Res Vet Sci, 1986, 41 :270.
16.Nagesha H.S. et.al., Clin Microb, 1988, 26 :171. 17.Nakagoni O. et. al., Arch Virol, 1991,
120 :43. 17a.Powltry Intern, 1989, 28 :62. 18.Qian Y. et.al., Arch Virol, 1991, 118 :269.
19.Snodgrass D.R. et.al., J Clin Microb, 1991, 29 :2688. 2O.Weiss M et.al., Ach Tierheilk, 1987,
129, 139.
РЕОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
У телят реовирусная инфекция проявляется пневмоэнтеритами в первые 3 мес жизни. У
взрослых животных протекает латентно. Реовирусная инфекция КРС известна с 1959 г.
Впервые её зарегистрировали в США, в штате Мериленд, затем в Бельгии, ФРГ и в других
странах. При обследовании скота в штате Мериленд (США) почти каждый телёнок к годо-
валому возрасту был инфицирован по крайней мере одним из серотипов бычьего реовируса.
Из фекалий животных Розен (1964) выделил 50 штаммов-изолятов данного вируса. Случаи
заболевания КРС были зарегистрированы осенью или зимой. Заболевали животные с гомо-
логичными АТ материнского происхождения.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Для реовирусной ин-
фекции характерно латентное носительство. Клинически она проявляется очень редко
(слабая диарея, ринит, потеря аппетита, кашель, лихорадка у телят и снижение удоя у мо-
лочных коров). В Германии доказано участие реовирусов в поражении респираторного трак-
та телят. Неоспоримо доказано, что реовирусная инфекция играет определённую роль в па-
тологии плода и новорождённого При исследовании в РТГА 155 сывороток от клинически
здоровых телят и парных сывороток от 62 взрослых животных из 24 хозяйств с диагнозом
грипп было установлено, что с реовирусом КРС 1-го типа реагировало 70%, с реовирусом 2-
го типа - 16 и 3-го типа 5% исследованных сывороток.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые реовирус выделен в 1959 г. в штате Мериленд (США) при естественном забо-
левании телят месячного возраста (шт. CLS-1 3-го серотипа). Реовирусы 1, 2 и 3-го типов
выделяли, в основном, от клинически здоровых животных на культурах почечных клеток
обезьян и человека. По-ввдимому, вирусы 1-го и 2-го типов могут быть причиной респира-
торных заболеваний. Штаммы, выделенные при диарее новорождённых телят, и при искус-
ственном инфицировании, вызвали аналогичную болезнь.
Антигенная вариабельность и родство. В 1971 г. в Японии во время вспышек ОРЗ и
диареи у КРС из испражнений и носового секрета выделены реовирусы 2-х новых сероти-
пов: BN-77 и C-121R. В тестах нейтрализации РТГА они отличались друг от друга и от из-
вестных реовирусов 1, 2 и 3-го типов.
14
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Реовирусы всех 3-х
типов могут быть выделены из фекалий естествен но или экспериментально заражённых те-
лят, из носовых, конъюнктивных соскобов, лёгких и лимфоузлов. Вирусемия, вирусоноси-
тельство и вирусовыделение у естественно инфицированного КРС не изучены.
Экспериментальная инфекция. У КРС можно вызвать заболевание при интраназаль-
ном заражении каждым из 3-х серотипов реовируса человека. При заражении телят реови-
русом 1-го типа реизолировать его не удалось. Вирус 2-го типа удавалось реизолировать с
60-го по 10-й день, а вирус 3-го типа - с 1-го по 5-й день. Экспериментально заражённые те-
лята передавали инфекцию здоровым животным при контакте. В неокрашенном монослое
клеток почек эмбрионов КРС, заражённым реовирусом 3-го типа, до 6-го дня ЦПД не обна-
руживали. Затем клетки становились маленькими, округлялись и отслаивались от стекла.
Поражалось приблизительно 25-50% клеток. Некоторые дегенерированные клетки содержа-
ли цитоплазматические вакуоли, эозинофильные включения и пикиотические ядра.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Детально не изучены. Видимо инфекция пе-
редаётся при контакте больных животных со здоровыми.
ДИАГНОСТИКА
Основана на выделении вируса из лёгких, носового истечения и кишечного содержимого
в культуре клеток с последующей идентификацией в РСК, РП и РТГА. Серологически диаг-
ноз ставят на основании исследования сывороток животных в РСК с АГ, приготовленном из
культурального реовируса любого серотипа. РТГА ставят со специально приготовленными
типоспецифическими антисыворотками. Можно использовать PH и РСК, но оба эти теста по
специфичности уступают РТГА. Тест микронейтрализации более чувствителен, чем РТГА.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен, специфическая профилактика не разработана. Известно лишь,
что пассивная серопрофилактика не защищает КРС от заражения в естественных условиях.
Во Франции приготовлена трёхвалентная депо-вакцина против ПГ-3, адено- и рео 1 ин-
фекции КРС. Применение такой вакцины на новорождённых телятах во многих случаях
приводило к уменьшению случаев пневмоэнтеритов. В 1969 г. Чифки и Бенге предложили
трёхвалентную инактивированную р-пропиолактоновую вакцину против ПГ-3, адено-3 и ре-
овирусов для 2-кратной иммунизации 6-7-нед телят. После вакцинации у животных обнару-
живали 4-8-кратное нарастание антиГА к вирусу ПГ-3, адено-3 и 8-кратное увеличение тит-
ра АТ к реовирусу (1).
РЕОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ОВЕЦ
Реовирусы играют определённую роль в этиологии респираторных и кишечных заболе-
ваний ягнят. В Венгрии наблюдалось массовое заболевание ягнят, протекающее с пораже-
нием органов дыхания и ЖКТ, вызванное реовирусами. Погибало до 13% больных живот-
ных. При вскрытии трупов обнаруживали катаральную пневмонию, катар верхних дыха-
тельных путей, конъюнктивит и катар кишечника. Сыворотки овец-реконвалесцентов ней-
трализовали 100 ТЦД50/МЛ вируса в титрах 1:16-1:64. Мак Ферран и др. (1973) выделили из
фекалий здоровых ягнят реовирусы 3-го типа.
В экспериментальных условиях удалось заразить 2-4-нед ягнят при инокуляции вируса-
реовируса типа 1 (Н/11) в носовую полость и трахею. После 4-6-дн инкубационного периода
отмечены повышение температуры тела на 0,6-0,9°С, слезотечение, катаральный ринит, чи-
хание, одышка, понос. У ягнят, убитых через 7 да после заражения, находили энтериты, ка-
тар верхних дыхательных путей и диффузную интерстициальную пневмонию. При вскры-
15
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
тии погибших ягнят обнаружены энтерит и множественная очаговая катаральная пневмо-
ния.
РЕОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ЛОШАДЕЙ
Тейн и Хэртл (1976) выделили реовирус 1-го типа из верхних дыхательных путей лоша-
ди. По данным авторов, до 50% сывороток обследованных лошадей имели специфические
АТ к реовирусам всех типов. Экспериментально заражённые лошади имели специфические
АТ к реовирусам всех типов, болезнь протекала относительно легко. Эти данные свидетель-
ствуют о том, что реовирусы могут быть потенциальными возбудителями респираторных
болезней лошадей.
РЕОВИРУСНАЯ ИНФЕКЕЦИЯ СОБАК
Впервые данные реовирусы были изолировали Лоу и Веннер в 1963 г. от собак с клини-
ческими признаками поражения органов дыхания. Вирус вызывал у собак интерстициаль-
ную пневмонию.
РЕОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ КОШЕК
Реовирус (ECHO-10) выделен в США от кошек, больных панлейкопенией, и в Венгрии
от кошек с симптомами поражения органов дыхания.
Клинические признаки и патологоанатомнческие изменения. Заболевание кошек
могут вызвать 7 известных в настоящее время вирусов: парвовирус, вирус герпеса, калици-
вирусы, реовирусы, лейкозосаркоматозные вирусы (онкорнавирусы), коронавирусы, синци-
тиальный вирус - названный Echinovirus (выделен от внешне здоровых кошек). Клинически
болезнь проявляется конъюнктивитом, слезотечением и светобоязнью. В дальнейшем слезо-
течение сменяется слизистым выделением из глаз. У некоторых развиваются риниты, у
всех - угнетение и депрессия.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Реовирус 3-го типа впервые выделили от кошек в 1968 г. Скотт, Кан и Гиллеспи в 1970г
(США). Морфология и химический состав его идентичны реовирусам человека и других
млекопитающих.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Реовирусы всех типов, выделен-
ные от кошек, устойчивы при нагревании, к эфиру, хлороформу и широки колебания pH.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. Реовирусы кошек вызывают образование ВН и анти-ГА АТ.
Антигенная вариабельность и родство не изучены. От кошек выделен вирус 1, 2 и 3-го серо-
типов. В естественных условиях поражаются кошки, чаще молодые. Очень восприимчивы
котята. Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство и вирусовыделение не изучены.
Вирус выделяли из смывов, взятых из носоглотки, конъюнктивы с 3-го по 21-й день после
заражения.
Экспериментальная инфекция. Кошки, заражённые экспериментально per os и внут-
ривенно, как правило, заболевают. Наблюдающиеся симптомы сходны с таковыми при ес-
тественной инфекции, однако при экспериментальном заражении обычно не обнаруживают
лейкопению и лихорадку.
Культивирование. Реовирусы хорошо размножаются в культуре клеток телят, обезьян,
свиней, кошек, собак, морских свинок, кроликов и человека, вызывая ЦПД. Они также хо-
рошо культивируются в перевиваемых клетках L.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Котята очень легко заражаются при передаче
инфекции воздушно-капельным путём.
16
Глава!. FamilyReoviridae Реовирусныеинфекции
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании выделения вируса и его идентификации в PH и РТГА. Се-
родиагностику проводят так же, как при реоинфекции человека и КРС. Реовирусная инфек-
ция у кошек протекает остро, возможны серьёзные расстройства зрения. Лихорадка, лейко-
пения или лейкоцитоз, а также анарексия не наблюдаются. В отличие от большинства дру-
гих респираторных инфекций кошек при реовирусной инфекции ринита, как правило, не
отмечают. Поскольку, вирус размножается не только в органах дыхания, но и в органах пи-
щеварения, возможно осложнение энтеритами бактериальной природы.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен, специфическая профилактика не разработана.
РЕОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ КУР
(ТЕНОСИНОВИТ КУР)
Tenosinovitis, Viral Arthritis of chickens
Теносиновит кур (тендосиновит) или вирусный артрит, “слабость ног”, синовит, артрит
(ТСК) - контагиозное заболевание, характеризующееся хромотой, связанной с воспалением
сухожилий и суставов конечностей, высокой ранней смертностью, плохим ростом, снижени-
ем яйценоскости и выводимости цыплят. При хроническом течении болезнь сопровождается
разрывом сухожилий голени и эрозией суставных хрящей. Заболеваемость - 5-20%. В 80-е
гг. болезнь получила название вирусный ТСК, симптомы которого - хромота, малая под-
вижность, плохая усвояемость корма, потеря кожной пигментации (8, 9). Заболевание впер-
вые зарегистрировано в США. В настоящее время встречается повсеместно. Более часто ре-
гистрируется среди кур мясного направления. Могут болеть и индюшата (2,3,4).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Один из представи-
телей реовирусов птиц - возбудитель ТСК, который поражает примерно 3-5% кур. У боль-
ных птиц наблюдают снижение яйценоскости (на 15-20%), слабость, хромоту, цианоз, обез-
воживание организма, образование деформированных яиц, перитониты, асептическое про-
лиферативное воспаление сухожилий конечностей, тендовагиниты, артриты, гепатит и мио-
кардит. Реовирусы могут вызывать микроскопические поражения кишечника, печени, под-
желудочной железы, вызывать атрофию фабрициевой сумки и интерферировать при разви-
тии иммунного ответа с другими вирусами.
У разных возрастных групп птиц симптомы болезни различны: у 5-8-нед цыплят внача-
ле появляются отёки сухожильных влагалищ и кровоизлияния в них, в полости суставов на-
капливается выпот. Болезнь протекает хронически. Ведущий клинический признак - разрыв
сухожилий конечностей - чаще регистрируют у взрослой птицы в области голени. Это при-
водит к кровотечению, а затем и некрозу концов сухожилий. Патогенез разрывов до на-
стоящего времени не определен. При ТСК может поражаться ЖКТ и яичники, отмечаются
желточные перитониты и атрофия яичников. Во внутренних органах обнаруживают ката-
ральный энтерит, увеличение почек, гиперемию поджелудочной железы, дряблось сердеч-
ной мышцы. В оболочке сухожилий формируются лимфоидные фолликулы. В сердечной
мышце отмечают пролиферацию ретикулоэндотелиальных клеток. В седалищных нервах -
диссиминированные увеличенные очажки, с опуханием оболочки миелина, атрофию и
фрагментацию осевого цилиндра. В крови - лимфоцитоз и лимфоцитопению (13,14,15).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Реовирусы выделены как возбудители вирусного артрита у птиц в 1957 г., изолированы из
содержимого кишечника бройлеров. В PH выделенные вирусы имели АГ-различия. Так,
нзолят 615 в отличие от вакцинного шт.Б-ПЗЗ, оказался инфекционным и вызывал патоло-
гические поражения у птиц, отличные от вирусных артритов, индуцирующихся другими
изолятами реовирусов (18).
2 Зак. № 171
17
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Морфология и химический состав. Диаметр вириона 75 нм, морфологически вирусы
сходны с реовирусом 3-го типа. Плавучая плотность их в хлористом цезии 1,37 г/см3. Вирус
содержит 2-нитевую РНК и олигонуклеотиды, богатые аденозином. Капсид имеет 8 специ-
фических полипептидов, из них только один с мол.м. 36 кД находится внутри капсида или в
наружной мембране вириона. Вирионы с наружной оболочкой обладают транскриптазной и
метилазной активностью. Описан серотип птичьего реовируса Фехи-Кроули. Вирионы име-
ют 2-слойную оболочку, диаметр их 65-70 нм (20). Полипептиды птичьих реовирусов, по-
добно реовирусам млекопитающих, могут быть разделены на 3 класса по размеру: большие
(X), средние (ц) и малые (ст). В инфекционных вирионах обнаружены полипептиды с мол.м.
145,130 и 115 кД соответственно. Все 3 полипептида находятся на поверхности вириона.
Установлено, что мРНК реовируса - копии полной длины геномных матриц; инициирующих
кодон АУГ. На 3’-конце плюс-цепи всех фрагментов обнаружена идентичная последова-
тельность 7 нуклеотидов: ААУЦАУЦ (17).
Антигенная активность. У 15-25% инфицированной птицы обнаруживают ПА, пере-
даваемые потомству трансовариально. Уровень материнских АТ определяет восприимчи-
вость 1-сут цыплят к ТСК при оральном и контактном заражении. Материнские АТ у цып-
лят сохраняются до 3 нед, обеспечивая невосприимчивость к пероральному инфицированию
вирусом. ВНА у 14-30-дн цыплят после заражения их в лапу шт.58-132 появлялись на 4-6-й
день в разведении 1:80 и на 12-й день достигали титра 1:640-1:2560. Инактивированный ви-
рус вызывал более интенсивное нарастание АТ, но обладал незначительным протективным
действием (21,22).
Антигенная вариабельность и родство. Различают несколько серотипов реовирусов
птиц (в США - 4, в Японии - 5 вариантов). В Японии известны 2 штамма реовируса птиц -
IR-R и вирус нефрита птиц - IR-R. Высказано предположение о существовании не менее 11
серотипов этого вируса. Прототипный hit.TS-142. Установлена связь между патогенностью
реовируса птиц и его серотипом. Реовирусы, выделенные от кур, имеют групповой АГ, вы-
являемый в ИФ, РСК и РДП. Реовирусы птиц не связаны с таковыми млекопитающих. Ан-
тисыворотки против реовируса 3-го типа нейтрализуют птичий реовирус S=1133. При нали-
чии серологического родства между шт. Кроули (CR) и ИМ-1-203 первый оказался менее
авидным к нейтрализующему действию сыворотки, чем второй. По некоторым данным рео-
вирусы, выделенные от индеек и кур не отличались а в АГ-отношении (4). Реовирус 3-го ти-
па выделен от цыплят, больных ТСК (в США шт. ИМ-1-203, в Италии шт. 140 и 653).
Локализация вируса. Вирус локализуется, в основном, в сухожилиях разгибателей и
сгибателей фаланг. Установлена трансовариальная передача вируса.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на КЭ 5-7-дн возраста, у которых
появляются кровоизлияния, у 15-дн эмбрионов развиваются некротические фокусы в печени
и селезёнке. У 1-дн цыплят, инфицированных per os и подкожно вирусом инфекционного
ТСК, развиваются патогистологические изменения в сухожилиях пальцевых сгибателей.
Вирус инокулируют в подушечки лапок цыплят. Высокая смертность их от поражения пече-
ни, селезёнки и почек отмечена при введении им шт.ИМ-1-203, меньшая смертность - при
инокуляции шт. 140 (10, 11, 16, 19). При контактном заражении у цыплят образуются АТ.
При заражении цыплят американским шт. ИМ-1-203 и итальянскими шт. 140 и 653 вируса
ТСК воспалительные изменения синовиальных оболочек появлялись через 22-48 ч и дости-
гали максимума между 3-5-м дн, далее процесс стабилизировался. Через 7 дн экссудат су-
хожильных влагалищ превращался нз серозного в серозно-гнойный. Наибольший падёж вы-
звал американский шт. ИМ-1-203. У заражённых 15-дн цыплят поражаются синовиальные
оболочки и периартикулярные ткани, через 35-42 дн появляются эрозии на суставном хря-
ще. Постоянно поражается миокард. С 10-го дня начинается атрофия фабрициевой сумки. У
павших цыплят макроскопически обнаруживали некротические или воспалительно-
18
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
некротические фокусы в печени, селезёнке и почках. Степень поражения стопы при экспе-
риментальном заражении (болезненность, опухание на протяжение не менее 14 да) зависит
от штамма (21, 22). В экспериментальных условиях заболевание можно вызвать путем ин-
траназального и окулярного метода заражения, однако наилучший эффект достигается при
заражении 2-нед цыплят в подошву лап. При этом подошва лап цыплят н сухожильные вла-
галища, расположенные над голеностопным суставом и ниже, вначале отекают вследствие
гиперплазии и инфильтрации клеток, в дальнейшем рыхлая соединительная ткань оболочек
сухожилий заменяется волокнистой тканью, которая может проникать в сухожилия, вслед-
ствие чего они имеют тенденцию к разрыву. Поражения суставов у петухов влечет сниже-
ние половой активности и уменьшение оплодотворяемости яиц.
Культивирование. Культивирование американского и итальянского штаммов удаётся
на КЭ. По одним данным реовирус ТСК хорошо размножается в культуре клеток почек цы-
плят, но не в культуре фибробластов КЭ, по другим, птичий реовирус S-1133 хорошо растёт
в культуре клеток куриных фибробластов. Он хорошо культивируется и в первичной культу-
ре клеток почки цыплят с формированием больших синцитиев и эозинофильных цитоплаз-
матических телец-включений (20).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Реовирусы чрезвычайно контагиозны для
цыплят раннего возраста. Возбудитель длительное время циркулирует среда птиц неблаго-
получного хозяйства. Заболевание протекает в виде энзоотических вспышек, особенно среда
вновь завозимого поголовья. Источник инфекции - больные и переболевшие птицы. Наи-
большее количество возбудителя находится в помете. Заражение осуществляется алимен-
тарным путем. Куры-несушки начинают нести контаминированные яйца уже через 19 да по-
сле заражения. Из неоплодотворенных яиц вирус удается выделить даже через 61 да. Боль-
шую опасность в распространении возбудителя представляют отходы инкубации. Воспри-
имчивость птиц к вирусу зависит от возраста, условий кормления, ухода, содержания и ви-
рулентности возбудителя. Наиболее чувствительны суточные цыплята. С возрастом устой-
чивость цыплят к вирусу увеличивается. Отмечается длительное вирусоносительство, вирус
удавалось выделить от птиц через 289 сут после заражения.
ДИАГНОСТИКА
Основана на клинических признаках, патологических изменениях и данных лаборатор-
ных исследований (PH, РДП). Реовирус легко выделяется из респираторного и пищевари-
тельного трактов птицы с признаками тендовагинитов. Идентификацию вируса проводят в
РДП с заведомо позитивными сыворотками. В связи с тем, что чувствительность РДП невы-
сокая, а PH требует длительного выращивания клеточных культур, оба теста не могут быть
широко использованы для оценки иммуногенных свойств вакцины и быстрого обнаружения
АТ к реовирусу птиц в пробах сыворотки крови. Предложен непрямой ИФА для определе-
ния АТ в одном разведении сыворотки. Наиболее чувствительной и специфичной реакция
оказывается при покрытии плашек разведенном в 0,014 М ФБР pH 7,5.АГ-ом в течение но-
чи при 4°С Установлена корреляция между титрами АТ в ИФА и PH (5,6,10,23).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Для специфической профилактики ТСК применяют как живые, так и инактивированные
вакцины. Иммунизируют, главным образом, кур-несушек. Цель создания напряженного им-
мунитета в родительском стаде - снижение трансовариальной передачи возбудителя и полу-
чение достаточного уровня пассивного иммунитета у цыплят с 1-го дня жизни. Сообщения
об эффективности вакцинации неоднозначны, поскольку неизвестно вирус какого серотипа
играет наибольшую роль в возникновении заболевания и каково значение гетерологичного
иммунитета в защите. Инактивированную вакцину готовят из вирулентного шт. S-1133, жи-
вую из этого же штамма, прошедшего около 200 пассажей в КЭ (25). Шт. UMI-203 после 19
2*
19
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
дополнительных пассажей в культуре клеток КЭ сохранил вирулентность для 1-дн цыплят и
утратил её для 6-дн, сообщая последним устойчивость к заражению патогенным вирусом.
Аттенуированный шт.ЦП-203, в отличие от аттенуированного шт. S-1133, в культуре мак-
рофагов не размножался и не вызывал иммунологической супрессии в отношении других
вакцинных препаратов.
Потомство иммунизированной птицы в суточном возрасте резистентно к пероральному
заражению различными штаммами вируса ТСК, но очень чувствительно к подкожному за-
ражению. Для вакцинации применяют живую вакцину на основе шт. S-1133, предложенную
Ван дер Хинде (7, 12, 24). Иммунизация кур-несушек только живой вакциной из аттенуиро-
ванного шт. S-1133 оказалась недостаточно эффективной. Она примерно в 2 раза снижала
заболеваемость цыплят по сравнению с контрольными цыплятами от непривитых кур. Од-
нако, выживаемость вируса в суставах зараженных цыплят обеих групп практически не от-
личалась (13). Инактивированная вакцина используется первый раз в возрасте 8-12 нед и
повторно в 18-22 нед. Её готовят на основе штаммов-изолятов из кишечного тракта: СО,
1733 и 2408. Дополнительная вакцинация может быть проведена в 40-нед возрасте, если
титр АТ в ИФА снижается до 1:1000. Вакцины создают клеточно-опосредованный иммуни-
тет (9). Иммуногенность вакцины оценивают по устойчивости к контрольному заражению 1-
дн цыплят от вакцинированных кур-несушек. Установлена прямая зависимость между крат-
ностью и схемой прививок кур-несушек инактивированными и живыми вакцинами, уровнем
материнских АТ, передаваемых цыплятам, и их устойчивостью к клиническому проявлению
болезни после контрольного заражения вирулентным штаммом. Однократное введение ку-
рам живой вакцины с последующим 2-кратным введением инактивировоанной обеспечива-
ло более высокую степень защиты потомства, чем 2-кратное введение живой вакцины, а за-
тем однократное - инактивированной. Эффективность вакцинации кур против гетерологич-
ных штаммов реовируса достигалась также с помощью живой вакцины, приготовленной нз
шт. S-1133 (25). При достаточном уровне пассивного иммунитета возможна защита от гете-
рологичного штамма вируса.
Реовирус, вероятно, проникает в организм цыплят уже в первые часы жизни. Однако
симптомы чаще всего наблюдаются в 35-50-дн возрасте. В связи с эти борьба с данным за-
болеванием основывается на улучшении ветеринарно-санитарной подготовки помещений к
посадке птицы и микроклимата в них.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Абдильазис В. и др., Компл. мер. по борьбе с бол. птиц,1990, :64. 2.Сергеев В.А. Вир.
вакцины, Киев,Урожай,1993. З.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., М., Колос,1979.
4.Сюрин В.Н. и др., Вет. вирусол., М, Агропромиздат, 1992. б.Трефилов Б.Б. и др., Тез.
докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :272. 6.Conrat G.O. Geflugelwirt, 1991, 31, 2 :
43. 7.Fonseca С. Rev Avicult, 1988, 32, 4 :311. 8.Giambrone J.J. Poultry Dis, 1985, 44, 517 :96.
9.Giambrone J.J. Poultry Dis, 1990, 49, 9 :15. lO.Islom M.R. et.al., Avian Pathol., 988, 17, 2
:411. ll.Haffer K. Avian Dis, 1984, 28, 3, :669. 12.Heider G. etal., M Vet Med, 1985, 40, 9
:311. 13.Jones P.D. etal. J Virol, 1986, 60 :614. 14.Jones P.D. et.al. Res Vet Sci, 1985, 39, 1 :39.
15.Jones P.D. et.al., Avian Pathol, 1985, 14, 1, 75. 16.Montgomery R.D. et.al., Avian Dis, 1985,
29, 2 :552. 17.McCrea M. J Gen Virol, 1981, 55, 2 :393. 18.Rekik M.R. et.al., Avian Pathol.,
1991, 20, 4 :607. 19.Robertson M.D. et.al. Austr Vet J, 1984, 61, 10 :319. 2O.Saifuddin M. et.al.,
N Z Vet J, 1989, 37, 1 :12. 21.Takase K. et.al., J Vet Med Sci, 1992, 54, 1 :23. 22.Takase K.
etal., J Vet Med Sci, 1992, 54, 2, :383. 23.Timms L.M., Res Vet Sci, 1985, 38, 1 :69. 24.Vander
Heide L., Ostern Geflugelwirt, 1985, 24, 10 :293. 25.Wood G.W. et.al., Comp Pathol, 1986, 96, 2
:125.
20
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
СИНДРОМ плохого
УСВОЕНИЯ КОРМОВ
Болезнь характеризуется появлением у цыплят плохого оперения, отставанием в росте,
остеопорозом и слабостью ног. Оно описано под различными названиями: синдром бледной
птицы, болезни геликоптера, болезнь ломких костей, инфекционный провентрикулит, син-
дром плохого всасывания. Наносит большой урон вследствие перерасхода корма, отстава-
ния в росте и гибели птицы. Реовирусы также выделены от птиц, имеющих при признаках
хронической респираторной болезни, склеивания клоаки, моноцитоза молодок, синдрома
отставания в росте бройлеров, сопровождающихся гепатитами, гидроперикардитами, асци-
том, нефрозом, атрофией фабрициевой сумки.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Заболевают цыплята
обычно в первые дни жизни. Сначала появляется помет со слизью желтоватого цвета. На-
чиная с 5-7 дн цыплята отличаются в развитии. Наблюдается плохое оперение птицы, нали-
чие так называемых “вертолётных цыплят” из-за того, что разрозненные перья выступают
наподобие роторных лопастей вертолета. Количество таких птиц незначительно, но их на-
личие указывает на нарушения в усвоении корма. Вследствие этого у цыплят в возрасте 20
дн и старше голова и конечности становятся бледного цвета. К 30-35 дн развивается остео-
петроз. Кости конечностей становятся мягкими и поэтому могут возникать спонтанные пе-
реломы. Эпифизарная часть головки большёберцовой кости увеличена, что видно при раз-
резе кожи и мышц. При наличии рахита обнаруживают увеличение реберных бугорков. В
более старшем возрасте находят остеомиелит, иногда некроз головки бедренной кости. Сли-
зистая железистого желудка и кишечника отечна и гиперемировала. Содержимое кишечника
пенистое, жидкое, коричневого цвета. Заболевают обычно от 5 до 20% цыплят, наибольший
пик отхода приходится на 10-15-й день.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Возбудитель заболевания РНК-содержащий вирус, предположительно отнесённый к се-
мейству Reoviridae. Вирионы диаметром 68-72 нм, икосаэдральной формы с двойным кап-
сидом. Вирус устойчив к воздействию температуры 56°С в течение 6 ч и обработке хлоро-
формом, не обладает Г A-активностью. Исходя из того, что вакцина против тендосиновита,
приготовленная из штамма реовируса птиц -1133, не профилактирует развитие синдрома
плохой усвояемости корма, полагают, что реовирусы, вызывающие указанные заболевания,
относятся к разным серогруппам реовирусов птиц. Клетки фабрициевой сумки - первичная
зона размножения при естественном заражении.
Известны шт.СО8 и 81-5, вызывающие синдром нарушения ассимиляции корма, тогда
как шт. 176 вызывает тендосиновит. Выявлено различие в их патогенности: шт. СО8 вызы-
вал тендосиновит и перикардит. При инокуляции в лапу, но был практически апатогенен
при введении per os или подкожно. Шт. 81-5 и шт. 176 высокопатогенны при подкожной
инъекции, вызывая некрозы печени, атрофию бурсы, её воспалительные изменения и гипер-
плазию селезенки. Он также вызывал перикардит и миокардит.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Заражение происходит обычно в первые 3 дн жизни. Экспериментальное заражение в
более позднем возрасте может вызвать общие симптомы болезни и костные аномалии. В
стаде птиц болезнь распространяется очень быстро. Через инкубационные яйца возбуди-
тель, по-видимому, ие передается.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основе клинических и патологоанатомических признаков, результатов
вирусологического, гистологического исследований проксимальной части большеберцовой
кости. При исследовании крови отмечают недостаток каротиноидов и избыток щелочной
21
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
фосфатазы. Необходимо дифференцировать рахит, вызываемый элементарной недостаточ-
ностью кальция, фосфора и витамина Дз. Выделение вируса проводят в КЭ и культуре кле-
ток. При инокуляции вируссодержащего материала гибель КЭ наступает через 24-144 ч.
При вскрытии их находят утолщение и некроз ХАО, обширные кровоизлияния на теле эм-
бриона и некрозы в печени. Для выделения вируса также используют культуру клеток почки
КЭ. ЦПД вирусов проявляется образованием синцития через 24-48 ч после 2-3-х слепых
пассажей. В культуре клеток почки КЭ реовирусы выделяются легче, чем при использова-
нии для этих целей КЭ.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Не разработаны. Назначение витаминов, микроэлементов и антибиотиков не эффектив-
но. Положительные результаты удаётся получить в результате улучшения ветеринарно-
санитарной обработки птичников и дезинфекцией воздуха помещений в присутствии птицы.
Иммунизация цыплят с помощью вакцин из штаммов РЕО птиц пока положительных ре-
зультатов не дала.
ИНФЕКЦИОННЫЙ ЭНТЕРИТ ИНДЕЕК
Инфекционный энтерит индеек (геморрагический энтерит) - острое, контагиозная бо-
лезнь индеек всех возрастов.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У индеек вирус вы-
зывает посинение гребня, депрессию и диарею. Картина болезни во многом сходна с НБ и
гриппом птиц (типа А1). Инкубационный период продолжается 48-72 ч. У маленьких ин-
дюшат болезнь характеризуется внезапной депрессией, снижением температуры тела, ано-
рексией и обезвоживанием организма. Индюшата постоянно щебечут и ищут тепло. Помёт
разжиженный, пенистый. Больные птицы неохотно принимают корм и воду. У индюшат с
диареей темнеет кожа головы, быстро снижается привесы. Зоб пустой, из клюва - гнилост-
ный запах; помёт зеленовато-коричневого цвета со слизью. При прогрессировании болезни
в помёте птиц появляются ураты.
Яйценоскость у взрослых больных индеек снижается . Смертность варьирует в зависи-
мости от возраста птиц н внешних факторов. В экспериментальных условиях погибает 50-
100% индюшат, в полевых - 5-50%. Болезнь обычно протекает 10-14 дн. Выздоравливает
птица очень медленно. Патологоанатомические поражения у индюшат, в основном, локали-
зуются в кишечнике. Содержимое его водянистое, пронизано газами. Мышцы обезвожены, в
состоянии дегенерации. У взрослых индеек на поверхности слизистой оболочки кишечника
иногда находят небольшие точечные кровоизлияния. Гистологические изменения, в основ-
ном, характерны для катарального энтерита. Гематологические исследования больных инде-
ек обнаруживают лейкоцитоз при относительно высоком уровне моноцитов, около 20% (у
контрольных индеек - их около 8,9%). Необходимое условие для возникновения болезни -
неповрежденная фабрициева сумка (4).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА
Вирус впервые описали Тамлин в 1957 г.
Морфология и химический состав. Вирионы плеоморфны, размером от 60 до 250 нм
(средний диаметр 110 нм). У разрушенных вирионов внутренний компонент хрупок и обыч-
но распадается на мелкие субъединицы. Плавучая плотность в CsCl 1,24 г/см3.
Устойчивость. Изучена недостаточно. Известно лишь, что вирус чувствителен к хло-
роформу, выдерживает центрифугирование в градиенте плотности сахарозы в течение 18 ч
без снижения инфекционное™, нечувствителен к тилазину и к антибиогакам.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. Вирус индуцирует образование ВНА.
22
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Антигенная вариабельность и родство не изучены. Все изоляты вируса, вызывающе-
го инфекционный энтерит индеек, в АГ-отношенин, идентичны. Обнаружено АГ-сходство
между реовирусамн, изолированными от цыплят, вирусами Fahey-Crowley, птичьим виру-
сом, вызывающим артриты, и реовирусом индеек ВС-3. Не выявлено АГ-родства между ре-
овирусами типа 1, 2 и 3 человека и реовирусамн птиц.
Гемагглютинирующие свойства не установлены.
Экспериментальная инфекция. При пероральном введении шт. Минесота у 1-дн.
возраста появлялись анарексия, депрессия, снижение температуры и массы. В клетках ки-
шечника изменялись микроворсиики и митохондрии, нарушалось муцинообразование.
Культивирование. Вирус культивируется в эмбрионах индеек, органной культуре ки-
шечника 27-дн индюшат. Вирус не размножается в аналогичной органной культуре КЭ,
культуре клеток почки эмбриона индеек, но хорошо репродуцируется в культуре клеток поч-
ки цыплёнка (вызывает ЦПД). Обнаружение неполных вирусных частиц обусловливает
трудности изоляции его в культуре клеток. Зрелые вирионы отпочковываются в цитоплазму
эпителиальных клеток заражённых птиц и эмбрионов.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник возбудителя болезни - больная пти-
ца. Перезаражение происходит через питьевую воду и корм, загрязнённые инфицированным
помётом.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании анализа симптомов болезни и эпизоотологических данных.
Начиная с 24 ч после заражения и в течение 28 дн инфицированных индюшат методом ИФ
обнаруживают вирус в срезах кишечника.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен, специфическая профилактика не разработана. Несмотря на низ-
кие уровни ВНА, иммунитет к экспериментальному заражению у переболевших птиц про-
должается более 22 нед.
ДРУГИЕ РЕОВИРУСЫ ПТИЦ
В 1969 г. Дешмук и Померой выделили из клоаки клинически здоровых кур несколько
реовирусов. В 1972 г. во Франции Гудри изолировал от уток вирус К (вирус Барбари). Бо-
лезнь широко распространена во Франции, причиняет большой экономический ущерб спе-
циализированным утководческим хозяйствам.
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Больные утки отказы-
ваются от корма, у них отмечают сильную жажду и локомоторные расстройства. Смерть на-
ступает внезапно. У экспериментально заражённых утят находят характерные изменения
перикарда, перигепатиты, точечные некрозы в печени, фибринозные отложения на ней и аэ-
росаккулиты. Гистологически выявлены обширные повреждения миокарда, множественные
зоны отёков, под эндокардом очаги некроза.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав вируса не изучены. Известно лишь, что вирионы
имеют форму икосаэдра, диаметр их 70-80 нм, сердцевина плотная, окружена диффузной
белковой оболочкой. Вирус К точно не классифицирован, авторы отнесли его к реовирусам,
однако не исключена его принадлежность к пикорнавирусам.
Устойчивость к физическим воздействиям. Вирус не чувствителен к бромдезоксиу-
ридину и хлороформу, слабо чувствителен к эфиру и сапонину, терморезистентен.
Антигенные свойства. После параэнтерального, подкожного и внутримышечного вве-
дения у птиц-реконвалесцентов образуются ПА.
Гемагглютинирующие свойства не выявлены.
23
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Культивирование. Вирус удаётся размножать на КЭ, которые погибают после 7-8 по-
следовательных пассажей. Он локализуется, в основном в ХАО. В культуре фибробластов
КЭ вирус вызывает слабо выраженное ЦПД.
В США обнаружено широкое распространение реовирусной инфекции среди гусей. Од-
нако пока не установлено число серотипов, вызывающих поражение этого вида птиц. От гу-
сей выделено 2 вируса: 1-ый размером более 100 нм, принадлежит к реовирусам, содержит
РНК, инактивируется при 37°С в течение 4-6 дн, культивируется на гусиных и КЭ, а также и
в культуре клеток почки цыплёнка; 2-ой - размером 50 нм, содержит ДНК и принадлежит к
парвовирусам, инактивируется при 56°С, у гусей поражает суставы, патогенен только для
гусиных эмбрионов, вызывает ЦПИ в культуре гусиных фибробластов, образуя на 3-м
“слепом” пассаже ацидофильные цитоплазматические включения. Оба вируса устойчивы к
хлороформу и не обладали ГА-активностью (1, 2,3).
Вирус, отнесённый к реовирусам, размножался в КЭ. Проведено до 70 пассажей (шт.
1/33). При этом он не утратил АГ активности - через 15-20 дн индуцировал образование АТ,
которые сохранялись в организме гусят до 10-14 нед. Специфическая профилактика реови-
русной инфекции гусей осуществляется p-пропиолактоновой вакциной. Суточным гусятам
её вводят в области шеи в дозе 0,2 мл. Через 30 дн вводят повторно в дозе 0,3 мл. Вакцина-
ция эффективна, если прививают суточных гусят, не имеющих материнских АТ в первый
месяц их жизни и ревакцинируют через месяц.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н.,Фомина Н.В., Части, вет. вирусология, М, Колос,1979. 2.Сюрин В.Н. и др.,
Вет. вирусология, М, Агропромизд, 1992. 3.Сюрин В.Н. и др., Диагностика вир. бол. жив.,
М , Агропромизд., 1991. 4.Fadly А.М. et.al., Avian Dis,1982, 26, 3 :525.
РЕОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ПОРОСЯТ
Porcine Reoviral Infectious
Реовирусы выявляли как у здоровых поросят, так и у поросят с респираторным и ре-
продуктивным синдромом. Их роль в этиологии болезни свиней не ясна.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Размер вирионов 75 нм, диаметр внутреннего
капсида - около 45-50 нм в диаметре. Вирус реплицируется в цитоплазме, содержит 2-
цепочечную РНК из 10-и сегментов, плавучая плотность в СаС12 - 1,36 г/см3. Свиные рео-
вирусы устойчивы к эфиру, хлороформу, трипсину и pH 3, но чувствительны к 0,1% дезок-
сихолату натрия. Разрушаются при температуре 50°С в течение 1 ч, термочувствительность
их стабилизируется при добавлении MgCl2. Вирус содержит ГА, который агглютинирует
эритроциты человека группы 0 и эритроциты поросят при 4°С, 22°С и 37°С, но не агглюти-
нирует эритроциты морских свинок, крыс, хомячков, телят, собак, кошек и цыплят.
Культивирование. Проводятся в различных культуральных системах. Репликация их
медленная. Большинство реовирусов клеточноассоциированные, лишь около 90% их может
быть экстрацеллюлярным.
ЦПИ варьируют в зависимости от использования клеточной линии. Обычно заражённые
клетки округляются, становятся зернистыми и отделяются от поверхности. При окрашива-
нии инфицированных клеток по Май-Грюнвальду-Гимзе были обнаружены внутриядерные
цитоплазматические тельца-включения.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Реовирусная инфекция поросят широко распространена в стадах неблагополучного хо-
зяйства. АТ ко всем 3-м серотипам этого вируса обнаруживают у свиней в 54% случаев.
Молозивные АТ сохраняются до 11 нед, после чего поросята становятся чувствительными к
инфекции. Реовирусная инфекция распространяется фекально-оральным и респираторным
24
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
путями. После экспериментальной инфекции вирус выделяют из носовых секретах и кала на
6-й и 14-й день соответственно. Экспериментальные исследования свидетельствуют о непо-
стоянности воспроизведения заболевания. Интраназальное, интраперитонеальное или внут-
римозговое заражение поросят - гнотобиотов 1-6-нед возраста реовирусом свиней типа 1
или реовирусом человека типа 1 не вызывало клинических признаков болезни, кроме про-
ходящей температурной реакции. Вирус изолируется из проб органов респираторного и пи-
щеварительного трактов в течение 2-х нед после заражения. Реовирус свиней типа 3 изоли-
ровали из спермы хряков, тканей плода и плаценты.
Анти-ГА выявляли в сыворотках через 7 дн после инфекции или их титр отмечался ме-
жду 11 и 21 дн после экспериментального заражения.
РЕОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ОВЕЦ
(КАТАРАЛЬНАЯ ЛИХОРАДКА)
Bluetongue, Mouth sickness (англ.); Soremuzzle (амер.); Blauzungenkrankchiet
(нем.); Fievre cattarrhale (франц.); Lengua azul (исп.)
Инфекционная катаральная лихорадка овец (“синий язык” КЛО) - вирусная трансмис-
сивная инфекция, передающаяся кровососущими насекомыми из рода Culicoides, характери-
зующаяся лихорадочным состоянием, воспалительно-некротическими поражениями ротовой
полости, особенно языка, пищеварительного тракта, эпителия венчика и основы кожи ко-
пыт, а также дегенеративными изменениями скелетных мышц.
Распространение. КЛО впервые зарегистрирована в Южной Африке в 1876г. Вначале
она поражала овец местных пород и чаще протекала бессимптомно. С ввозом в Африку вы-
сокочувствительных овец европейских пород болезнь приняла злокачественный характер. С
1943 г. болезнь стали регистрировать за пределами Африканского континента. В 1943 г. на-
блюдали тяжелую эпизоотию её на о. Кипр, в том же году в Палестине и Сирии. С 1944 г.
эту инфекцию диагностировали в Турции и Иране. В 1948 г. - появилась в Америке, а в
1956 г. - на юге Португалии, в Испании, и в 1962-1964 гг. - в странах Южной Америки. В
1972 г. она была зарегистрирована в Египте. АТ обнаружены не только у овец, но и у КРС,
буйволов и коз. Вирус широко распространен и болезнь энзоотична в Барботосе, Коста-
Рике, Эль-Сальвадоре, Гватемале, Гондурасе, Ямайке, Никарагуа, Панаме, Тобаго. Про-
изошла смена серотипов. Реовирусы, эпизоотологические особенности болезни в тропиче-
ских странах Карибского бассейна отличны от таковых в субтропических регионах - сероти-
пы вируса и потенциальные переносчики его оказались разными (15). В султанате Оман при
исследовании сывороток овец, коз и КРС выявлено 2 вида кровососущих Culicoides - С.
imicola и С. Schultze, способных передавать вирус КЛО (24). В Российской Федерации не-
благополучными по результатам серологического мониторинга с 1993 г. могут считаться не-
которые районы Бурятии (6).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Клинические прояв-
ления болезни и морфологические изменения варьируют в зависимости от патогенности
штамма, индивидуальных особенностей и породы животных, влияния окружающих условий
(метеорологические факторы, солнечная радиация и т.д.). Инкубационный период в естест-
венных условиях длится 6-8 дн. Далее повышается температура тела до 40,6-42,0°С и удер-
живается на этом уровне 6-8, реже 12 дн. Высота температуры не коррелирует с течением
болезни: легкую, перемежающуюся лихорадку можно наблюдать при тяжелом течении и
гибели животных. Иногда при внезапном подъеме температуры до 42,2°С можно наблюдать
легкое течение болезни и быстрое выздоровление. Через 24-36 ч после повышения темпера-
туры тела развивается конъюнктивит. Кожа морды, губ, слизистые оболочки ротовой и но-
совой полостей гиперемированы. Из ротовой полости заметно истечение пенистой слюны,
что вызывается своеобразными непрерывными движениями языка (влажная морда), а на
25
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
слизистой носовой полости, и конъюнктиве появляются точечные кровоизлияния. Часто из-
меняется цвет языка. Он становится красно-синим, что и определило название болезни.
Слизистая оболочка десен, щек, языка изъязвляется и образуются неправильной формы
кровоточащие поверхности (Рис. 9). Носовые истечения становятся гнойными и засыхают
корочками вокруг носа. Из-за боли в ротовой полости животные не принимают корм и чаще
лежат. Иногда при повышенной температуре, но чаще после спада её на задних конечностях
наблюдают покраснение и опухание венчика (Рис. 11), болезненного при надавливании.
Животные хромают, передвигаются с трудом, походка связанная. Неспособность принимать
корм, наличие специфических поражений в мышцах ног ведет к истощению. В таком со-
стоянии оно может быть в течение 10 дн, затем следует состояние прострации и гибель. Ес-
ли животное выживает, то через 3-4 нед после нормализации температуры начинает выпа-
дать шерсть. Суягные овцы часто абортируют или рожают очень маленьких и слабых ягнят.
Продолжительность болезни разная. Заметное улучшение наступает не ранее 10-15 дн
после понижения температуры тела. Особенно тяжело болеют ягнята. У некоторых из них
может развиваться пневмония, вызванная секундарной микрофлорой, заканчивающаяся ги-
белью. При подостром течении болезни описанные выше признаки менее выражены. Отме-
чают воспаление слизистых оболочек, небольшой отек тканей головы, истощение, выпаде-
ние шерсти. Иногда болезнь протекает в абортивной форме. У КРС болезнь наблюдается
как латентная инфекция, особенно в энзоотических зонах, и только у 5% инфицированных
во время эпизоотии животных болезнь клинически выражена. При первичном возникнове-
нии симптомы болезни напоминают ящур или блютанг овец. Американские ученые сооб-
щают об абортах и рождении уродливых, карликовых, недоразвитых телят. У коз при экс-
периментальном заражении наблюдали повышение температуры и отдельные симптомы.
При вскрытии подкожная клетчатка и межмышечная ткань отечны, пропитаны желтова-
той жидкостью. Отечна также ткань губ, языка, глотки, гортани и межчелюстной области.
Отечная жидкость студениста или с примесью крови. Эту жидкость можно обнаружить так-
же в грудной и брюшной полостях и в перикарде. Если животное пало в период острого те-
чения болезни, то большие изменения находят в пищеварительной системе: слизистая обо-
лочка ротовой полости гиперемнрована, отечна, цианотична, покрыта кровоизлияниями. На
губах, языке, внутренней поверхности щек обнаруживают язвы. Слизистые оболочки рубца,
сетки, сычуга, пищевода, тонкого отдела кишечника гиперемированы, с кровоизлияниями
(Рис. 8). Селезенка увеличена. Лимфоузлы, особенно заглоточные, подчелюстные, шейные,
предлопаточные, мезентериальные несколько увеличены, покрасневшие, на разрезе отеч-
ные. Межмышечная соединительная ткань отечна, фасции пропитаны красноватой, желати-
нозной жидкостью. Гистологические изменения находят, главным образом, в слизистых
оболочках ЖКТ, скелетных мышцах, сосудистой системе.
Патогенез. Вирус выделил Тейлер в 1960 г. Вирус КЛО способен проникать через пла-
центу, что приводит к мумификации эмбрионов, нарушению развития плодов, рождению
нежизнеспособных ягнят.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА
Морфология и химический состав. Возбудитель содержит 2-нитевую неинфекцион-
ную РНК, состоящую из 10 сегментов с мол.м. от 0,28-106 до 2,710бД. РНК нечувствительна
к РНК-азе. Вирус содержит 80% белка и 20% РНК. Капсид гексагональной формы, одно-
слойный, состоит из 32 капсомеров, расположенных в симметрии 5:3:2. Два полипептида в
виде диффузного белкового слоя, окружают капсид. Наружный (экстракапсидный) слой
маскирует капсомеры и увеличивает диаметр вириона по сравнению с нуклеокапсидной
формой. Он, вероятно, “маскирует” и вирусную транскриптазу, которая может быть обна-
ружена после его удаления. Диаметр полных частиц 65-77 нм (вместе с экстракапсидным
слоем). Диаметр нуклеокапсидов 61-67 им (Рис. 3).
26
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Обнаружены вирусные частицы 2-х типов: легкие и тяжелые. Первые частицы обладают
большей инфекционностью, плавучая плотность их в CsCL 1,36 г/см3, коэффициент седи-
ментации 550 S, диаметр 69,2 нм. Они содержали 4 основных (мол.м. 110000, 11000, 58000
и 32000 Д) и 3 минорных капсидных белка (мол.м 155000, 72000 и 38000 Д). Количество и
распределение по размеру те же, что и у реовируса.
Тяжелые частицы так же инфекционны, плавучая плотность их в хлористом цезии 1,38
г/см3, коэффициент седиментации 470 S, диаметр 63,2 нм. На поверхности четко различимы
32 капсомера. Они ие содержат двух белков с мол.м. 11000 и 58000 Д, присутствующих в
капсиде легких частиц. Тяжелые частицы обладают РНК-зависимой РНК-полимеразной ак-
тивностью, которая в присутствии Mg2+ увеличивается и становится максимальной при
28°С. Полагают, что in vitro и in vivo вирусный геном транскрибируется при помощи энзи-
ма, присутствующего в капсиде. Легкие частицы - это зрелые вирионы, а тяжелые - их
предшественники или продукты деградации под действием лизосомальных ферментов.
Различают вирионы без оболочки и с оболочкой. Первые не имеют наружного слоя по-
лых капсомеров, но покрыты слоем тонких поверхностных выступов. Вторые обнаружены
на поздних стадиях инфекции. Оболочка приобретается, очевидно, в процессе выхода виру-
са из клетки и включения клеточной мембраны. Частицы без оболочки, но заключенные в
мембранный мешок, и частицы с оболочкой защищены от нейтрализующего действия спе-
цифических АТ. Этим объясняется факт одновременной циркуляции в крови вируса и АТ.
Расщепление наружного капсидного белка VP2 вируса сопровождается образованием 1-
капсидных частиц с высокой инфекционностью и утратой ГА-активности (17). Они форми-
руют наружный капсид вириона; а полипептиды VP1, VP3 и VP4 находятся в поверхност-
ном слое нуклеокапсида (8). Главными капсидными (наружными) белками данного вируса
являются белки VP2 и VP5. Капсидные протеины - основные для различных серотипов ви-
руса КЛО и перспективны для создания рекомбинантной вакцины (21). Белки вируса КЛО
достаточно подробно описаны Roy Polly в 1992 г. (21а). Длина РНК 10-го сегмента у всех 6-
ти изолятов составляет 822 нуклеотида. Степень гомологии нуклеотидных последовательно-
стей у разных изолятов РНК 10 сегмента генома составляла от 82 до 99% (10, И). Все гены
данного вируса, детерминирующие неструктурные белки (NSI, NS2, NS3), а также большин-
ство полипептидов внутреннего капсида (VPI, VP3, VP4) являются консервативными, дру-
гие же два гена, детермирующие 2 компонента внутреннего капсида (VP6 и VP7) менее кон-
сервативны. В полевых условиях возможен эффективный обмен 5-ю сегментами (из 10 сег-
ментов 2-нитевидной РНК 10 и 11-го серотипов) (18).
Морфология вируса КЛО изучена ЭМ в культуре перевиваемых клеток почки сибирско-
го горного козерога (ПСГК), зараженных штаммами 8,12 и 15 серотипов, и в мозге мышей,
инфицированных 12-м серотипом (3).
Исследовали 5 серотипов вируса КЛО, эндемичных для США. В количестве генов, ко-
дирующих белок сердцевины вируса и неструктурные белки, установлен высокий консер-
ватизм (14). Определена полная нуклеотидная последовательность (1638 н) полноразмерных
копий геномного сегмента 6 у распространенных в США серотипов И и 17, кодирующего
белок Gp5 (28). У вируса установлен обмен сегментами генома в естественных условиях
(18). Показана эволюция гена L вируса КЛО серотипа 10, выделенного в Калифорнии (17а).
Аналогичные рекомбинанты образовывались в организме овец при одновременном введе-
нии нескольких аттенуированных штаммов разных серотипов вируса.
Устойчивость. Вирус КЛО устойчив к эфиру, хлороформу, дезоксихолату натрия. Ре-
зистентность к дезоксихолату обусловлена присутствием чужеродных белков, так как очи-
щенный вирус чувствителен к этому веществу, но инактивируется медленнее, чем арбовиру-
сы. Чувствителен к трипсину, кислому pH. При pH ниже 6,0 вирус инактивируется в услови-
ях 37°С в течение 1 мин. Он стабилен при pH 6,5-8,0, достаточно устойчив в щелочной зоне;
27
Глава1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
очень стабилен в р-ре с pH 9,0 и с низкой концентрацией солей. В баранине и говядине при
созревании, когда pH находится между pH 5,6 и 6,3, вирус инактивируется. В тушах овец
при 4°С, если pH мяса не снижается ниже 6,3, вирус сохраняется до 30 дн. Наличие 2-
компонентной кривой термоинактивации вируса при 37°, 46° и 56° указывает на гетероген-
ность вирусной популяции. Инактивация протеина происходит при 46-5 6°С, а РНК - при бо-
лее низкой температуре (37-46° С).
Вирус сохраняется даже в загнивающей крови. Для вирусологических исследований
кровь помещают в жидкость Эдингтона (5 г щавелевокислого калия, 5 г фенола, 500 мл дис-
тиллированной воды), в которой вирус сохраняет активность при комнатной температуре в
течение нескольких лет. В лиофильно высушенном со стабилизаторами вируссодержащем
материале он сохраняется несколько лет как при 20°, так и при 4°С. При медленном замо-
раживании до -10° или -20°С вирус разрушается, но выживает при более низких температу-
рах. Нагревание при 60°С инактивирует его за 5 мин; 3%-ный р-р формалина - за 48-72 ч,
хинозол в соотношении 1:2000 - за 30 мин., 3% р-р едкого натра и 70% спирт - за 5 мин.
Антигенная структура. Вирус КЛО имеет 2 группоспецифических неинфекционных
растворимых АГ - КС и преципитирующий. Первый представлен частицами диаметром 8
нм и входит в состав вириона, а второй может быть компонентом самой вирусной частицы
или продуктом размножения вируса в инфицированных клетках. Размножение вируса свя-
зано с синтезом растворимого АГ как предшественника (5).
Антигенная активность. У переболевших животных образуются ВН, КС и ПА. Пер-
вые появляются на 14 день после заражения животного. К 30 дню их содержание достигает
максимума и удерживается до 12 мес. Присутствие у реконвалесцентов ВНА к вирусу одно-
го типа не защищает его от заражения вирусами других типов. КСА у зараженных овец об-
наруживаются на 10-й день после первого подъема температуры, достигая пика на 36-й
день, и сохраняются в течение 6-8 нед. Через 12 мес они выявляются в едва уловимых тит-
рах. Для определения чувствительности животного к вирусу наиболее приемлема РДП. У
переболевших овец ВНА достигают максимального титра к 30-му дню и сохраняются не
менее года в течение нескольких месяцев после начала заболевания. Белок VP2 вызывает у
овец образование ВНА и ПА, а также и устойчивость к заражению вирулентным штаммом
(12). Прививка полипептидом VP7 не приводила к образованию ВНА и иммунитета (9а).
Биохимическая характеристика АТ не изучена. ВНА и ПА стабильны при 56°С, КСА
при этой температуре быстро разрушаются. У каждого животного титры ВНА, КСА различ-
ны. Сыворотки крови овец обладают антикомплементарностью, а сыворотки коров содержат
неспецифические ингибиторы.
Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время различают 24 серотипа
вируса КЛО, АГ классификацию которых проводят при помощи перекрестной PH. Проис-
хождение большого числа АГ вариантов не выяснено. Хайг (1959 г.) высказал предположе-
ние об АГ дрейфе этого вируса под влиянием остаточного иммунитета в популяции живот-
ных. Для каждой АГ группы определен штамм-прототип. Вирус каждого серотипа создает
прочный и длительный иммунитет только против гомологичного типа и незначительный
против гетерологичного. Это свидетельствует о существовании общегруппового (для всех
штаммов) АГ компонента. Степень выраженности иммунитета против гетерологичных ти-
пов различна. В РСК установлено родство вируса с возбудителем эпизоотической геморра-
гической болезни оленей (ЭГБО). Последний сравнивали по АГ родству с вирусом Ибараки
и КЛО. Для сравнения использовали РДП, РСК, непрямой вариант ТФ ИФА, являющиеся
группоспецифическими тестами, и типоспецифические - PH и РТГА. Между вирусами ЭГ-
БО и КЛО АГ связи не обнаружено во всех тестах за исключением РСК. Однако вирусы
ЭГБО и Ибараки были антигенно связаны - РДП, РСК и ТФ ИФА выявлена двойная пере-
крестная взаимосвязь между этими вирусами. АГ взаимосвязь была сильнее между сероти-
28
Глава!. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
пом 2 (шт. Альберта) вируса ЭГБО и вирусом Ибараки, чем между серотипом 1 (шт. Нью-
Джерси) и вирусом Ибараки. АГ родство, рассчитанное по формуле Хорсфалла и Орхетти,
составило для 1 и 2-го серотипа (шт. Нью-Джерси и Альберта) 25%, шт. Нью-Джерси и ви-
руса болезни Ибараки - 0%, а шт. Альберта и вируса болезни Ибараки - 65% (1). Недавно
открытый ХВМ/67 - вирус по ЦПД и морфологическим признакам может быть отнесен к
вирусам группы КЛО. Вирус вызывает репродуктивные нарушения, состоящие в ранней ги-
бели эмбрионов, абортах, уродствах плодов телят и ягнят, временной стерильности быков и
баранов и присутствием вируса в сперме. Показано, что контаминация вирусом КЛО живых
вакцин против чумы и парвовируса собак является причиной абортов и гибели беременных
сук (20а). Полипептид VP2 определяет серотиповую, a VP7 - групповую специфичность ви-
руса. С этими полипептидами связана индукция ВНА и КСА (7, 12, 13, 16, 19). На АГ доме-
не VP2 (98 кД) различают 4 эпитопа нейтрализации. В полипептиде VP7 идентифицированы
2 иммунодоминантных эпитопа. Многие из них могут циркулировать одновременно (9t).
При одновременном инфицировании различными серотипами вируса и даже различными
штаммами одного серотипа может происходить генетическая рекомбинация. АГ шифт явля-
ется результатом реассортации сегментов генома при смешанном инфицировании (19а).
Филогенетический анализ показал, что вирус КЛО серотипов 11,13 и 17 более родственен,
чем 2 других АГ. Показано, что серотипы 10,11,13 и 18 вируса КЛО более родственны друг
другу, чем серотипу 7 (27, 28). Белок вируса ЭГБО типа I состоит из 899 аминокислотных
остатков; он на 94,7% гомологичен белку VP3 типа II и на 77% соответствующим белкам
вируса КЛО серотипов 1, 10 и 17 (25, 26).
Гемагглютинирующие свойства не установлены.
Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство. Вирус содержится в крови,
сыворотке, плазме и кроветворных органах больных животных. С повышением температу-
ры со 2-3-го дня по 9-10-й дн после заражения его обнаруживают в крови, где он ассоцииру-
ется с лейкоцитами. В крови коз, зараженных вирусом (шт. ВТ8 и 63-66В), титры его дости-
гали 1О5,5-1О6 0 ЛД50/МЛ, тогда как титры вируса в крови таких же животных, зараженных
другими штаммами вируса (62-45S, 63-75S, Тахас 100b 63-83 В), колебались от 102’5 до 104
ЛД5о/мл. Так как вирус проходит плацентарный барьер, его можно выделить также из крови
плода овец и коров. Он не связан с эритроцитами и может присутствовать в сыворотке од-
новременно с АТ. Сведения о длительности вирусемии у животных-реконвалесцентов про-
тиворечивы. Вирус обнаруживали в крови зараженных коров в течение 28 дн, а в крови овец
- 35-49 дн. Имеются данные о длительных перерывах виремии. В крови отдельных овец его
удавалось обнаружить в течение 3-4 мес, а в крови КРС - в течение года. Селезенка и мезен-
териальные лимфоузлы наиболее подходящие органы для посмертного выделения вируса.
КРС, не проявляя видимых симптомов болезни, может резервировать вирус в межэпизооти-
ческий период (до 700 дн после заражения), оставаясь длительное время вирусоносителем
при наличии ВНА или без них. В экспериментальных условиях у КРС виремия развивается
начиная со 2-го по 50-й день после заражения, пик виремии отмечен на 7-й день. Часто ес-
тественная и экспериментальная инфекция у КРС протекает без клинических признаков, но
при этом всегда отмечается более продолжительная (иногда до 120-150 дн), чем у овец, ви-
ремия. В эпизоотических районах протекает субклинически и трудно диагностируется.
Экспериментальная инфекция. Овец можно заразить при введении материала ин-
траназально, внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно, внутрикожно, внутримышечно, ин-
трацеребрально и per os. Чтобы вызвать болезнь достаточно ввести в вену 0,01 мл виру-
лентной крови. В экспериментальных условиях удавалось заражать горных газелей (Gazella
gazella) в возрасте 4-12 мес. Клинически болезнь не проявлялась, однако развивалась вире-
мия, продолжавшаяся до 35 дн. Высокий уровень ВНА у них отмечен на протяжении 5 мес
наблюдения. Контактным путем вирус не передается. При интрацеребральной инокуляции
29
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
возбудителя удается вызвать летальную инфекцию новорожденных мышат и хомячков. Од-
нокопытные, собаки, кошки, хорьки и морские свинки к данному вирусу нечувствительны.
Культивирование. Вирус культивируют в КЭ 6-8-дн возраста, в организме новорож-
денных мышей и в различных культурах клеток. КЭ заражают в желточный мешок, на ХАО
или внутривенно. В последнем случае используют КЭ 11-13 дн возраста. После заражения
их инкубируют при 33,6°С. Погибают они через 3-6 дн. За 6-8 ч до гибели вирус достигает
наибольшего титра (105,8-108 ЭЛДз0/г). КЭ имеют характерный вишнево-красный цвет. Мы-
шечная ткань, печень н мозг в состоянии дегенеративного изменения. Последовательное
пассирование вируса в КЭ приводит к его аттенуации, что легло в основу получения живой
вакцины (метод Александера). Полевые штаммы эпизоотического вируса блутанга выделя-
ют с большим успехом на эмбрионах, чем на культуре клеток. При интрацеребральном за-
ражении вирус размножается в мозге новорожденных мышей и вызывает симптомы энце-
фалита и гибель через 3-5 дн. Наиболее восприимчивы мыши 1-3-дн возраста. У взрослых
мышей вирус размножается, но инфекция протекает инаппарантно. Концентрация вируса в
мозге мышей достигает 106-108 ЛД 50/г ткани. Последнюю обычно используют для приготов-
ления КСАГ. Штаммы вируса, адаптированные к КЭ или мышам, размножаются в мозге
новорожденных хомячков при интрацеребральном заражении.
К вирусу чувствительны культуры клеток почки ягнят, эмбрионов КРС и молодых хомя-
ков. Вирус, адаптированный к первичной культуре клеток почек ягнят, удается культивиро-
вать в клетках HeLa, МВ-2 н ВНК-21. Первые изменения в зараженных клетках ВНК-21 по-
являются через 18 ч, а полная их деструкция наступает через 59 ч после инокуляции вируса.
Изменения характеризуются округлением клеток, редукцией содержимого цитоплазмы и по-
явлением отдельных структур, напоминающих синцитий. Наиболее чувствительна переви-
ваемая культура клеток VERO. Культуру клеток почек ягнят и эмбрионов КРС в настоящее
время широко используют при изготовлении вакцины против КЛО для размножения атте-
нуированных штаммов вируса. Появление и развитие ЦПИ сопровождается возрастанием
инфекционности титра вируса.
Особенности внутриклеточной продукции. Вирус развивается в цитоплазме зара-
женных клеток, в цитоплазматическом гранулярном матриксе и образует субструктурные
филаменты и трубочки. В культуре клеток он формирует включения 2-х типов: внутриплаз-
матические (РНК-положительные) н внутриядерные (ДНК-положительные). Все штаммы
вируса КЛО образуют бляшки. Вирус КЛО в инфицированной культуре клеток формирует
внутриклеточные включения, которые выявляются через 12-16 ч после заражения. Сердце-
винные частицы, локализованные внутри включений, содержат белки VP5, VP7 и NS1. Ви-
русные частицы, расположенные на периферии включений содержали кроме этого и белок
VP2. Полученные данные свидетельствуют о том, что частицы вируса синтезируются н со-
бираются по периметру включений, а не в их матриксе (7 а).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. КЛО носит сезонный характер и совпадает с
наибольшей активностью насекомых. Основным переносчиком возбудителя служат мокре-
цы (C.variipennis), которые могут переносить также и вакцинный вирус от привитых живот-
ных не привитым. Мокрецы Culicoides (Рис. 10) распространены почти повсеместно. Они
воспринимают вирусы любого АГ типа, а передают только те, к которым в данный момент
животное наиболее восприимчиво. В распространении болезни могут участвовать комары
некоторых видов (Aedes lineftopennis), кровососки (Melophagus ovinus) и, возможно, птицы.
Перелетные птицы могут быть промежуточным звеном, через которое осуществляется не-
прямая трансмиссия вируса от вирусоносителей к восприимчивым животным. Этим, воз-
можно, объясняется внезапное начало некоторых эпизоотий. Обычно погибает от 2 до 30%
овец, но иногда летальность достигает 90-100%. Из диких животных распространять вирус и
поддерживать инфекцию могут большерогие овцы, белохвостые олени. Мокрецы
30
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
C.variipennis питаются, в основном, на КРС, хотя при благоприятных условиях (при резком
увеличении популяции переносчиков или недостаточном количестве КРС) могут питаться на
других случайных хозяевах, и в том числе на овцах, вызывая заболевание. Поэтому КРС
принято считать наиболее значительным резервуаром вируса КЛО в природе.
Представлены данные по серологическому и вирусологическому изучению диких и до-
машних жвачных животных на наличие вируса КЛО. Пробы гепаринизированной крови и
сывороток от 1295 жвачных животных, находящихся в стадах и на фермах исследовали на
наличие вируса в культуре клеток Vero, а после изоляции проводили идентификацию в PH
бляшкообразования. Изолировано 214 шт. вируса, что составило 16,5% от общего количест-
ва обследованных животных: 15,9% изолятов выделены от КРС; 22,1 - от овец; 5,5 - от ко-
шек и 2,7% - от антилоп.
Распределение вируса по серотипам составило: 3,2% - тип 10; 51,8 - тип 11; 19,2 - тип
13 и 25,7% - тип 17. Все 4 серотипа были изолированы от животных в штатах Калифорния и
Орегон, серотипы 11 и 13 выделены от овец. Из 66 изолятов в 1978 г. 4 были отнесены к се-
ротипу 10 (6%), 28 - к серотипу 11 (42,5%), 4 представляли серотип 13 (6%) и 30 - серотип
17 (45,5%). В 1979 г. распределение 153 изолятов было следующим: 3 штамма - серотип 10
(2%). 86 - серотип 11 (56,2%), 38 - серотип 13 (24,8%) и 26 - серотип 17 (17%). У 50% об-
следованных животных (КРС, овцы и антилопы) имелись специфические АТ. У кошек АТ
выявлены только в 21% случаев. Наличие специфических АТ у животных-вирусоносителей
составило: у КРС - 43%, 23 - среди овец, 33 - среди кошек и 50% - среди антилоп. Отмечена
сезонность выявления вируса КЛО с пиком в августе-декабре (20).
Основные переносчики вируса блуганга - мокрецы Culicoi des brevitaris. От этих мокре-
цов часто изолировали и другие арбовирусы, т.е. буньявирусы группы Симбу, орбивирусы
группы Пальям и вирус эфемерной лихорадки. Взаимосвязи динамики популяций мокрецов
и распространения вирусов являются сложными, многофакторными, на основании чего
трудно прогнозировать где, когда и какой вирус может вызвать вспышку болезни (18b).
Персистентная инфекция у животных не является важным фактором длительного сохране-
ния вируса (92). Наличие специфических АТ может не сопровождаться заболеванием. Так, у
шт. Ботсвана КЛО ПА были обнаружены у 90,2% голов КРС, 25,5% овец и 48% коз, хотя
клиническое проявление заболевания отсутствовало (18с).
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к КЛО
наиболее восприимчивы молодые овцы. Овцы европейских пород более чувствительны, чем
овцы африканских и азиатских пород. Восприимчив также КРС и козы. Из дикой фауны
КЛО болеют белохвостые олени, снежные бараны, антилопы, лоси, большерогие бараны не-
которых пород. Во время эпизоотии КЛО вирус удавалось также выделить из организма ди-
ких грызунов. Считают, что дикие животные и грызуны могут быть резервуарами вируса в
природе. Важное значение в прекращении вирусоносительства у овец играют клеточные
факторы иммунитета. Отмечена корреляция между интенсивностью реакций клеточного
иммунитета и устойчивостью к контрольному заражению (22, 23а).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, пато-
морфологических изменений и результатов лабораторных исследований. Для окончательно-
го диагноза проводят выделение вируса, его идентификацию и ставят биопробу. Для выде-
ления вируса более чувствительны 10-11-дн КЭ, заражаемые на ХАО или внутривенно про-
бами испытуемой крови, обработанной ультразвуком. Выделенный вирус идентифицируют в
PH, применяя типоспецифические сыворотки. Для быстрого обнаружения вируса рекомен-
дуется ИФ в культуре клеток. Показано, что PH по бляшкам более чувствительна, чем РСК и
РДП. С помощью РСК удается выявлять АТ в сыворотке крови овец и КРС в эндемических
районах.
31
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Для выделения вируса КЛО проводят иммобилизацию Culicoides триэтиламином, кото-
рым пропитывают специальные аппликаторы. Через 2-3 мин после воздействия паров пре-
парата обездвиженных насекомых микро- скопируют и отбирают самок, которых заморажи-
вают в жидком азоте. Перед началом проведения вирусологического исследования насеко-
мых размораживают и помещают в среду Игла МЕМ с 10% фетальной сыворотки и анти-
биотиками, обрабатывают ультразвуком; суспензию осветляют центрифугированием. Для
выделения вируса КЛО используют перевиваемую линию клеток С 6/36 , полученную из
личинки Aedes olbapietus. Эта линия высоко чувствительна, пригодна для первичной изоля-
ции вируса КЛО из патологического материала. Линию клеток выращивают при температу-
ре 28°С, создавая оптимальные условия для функционирования РНК-полимеразы вируса.
Поскольку в этих условиях ЦПД не проявляется, то его наличие в зараженной суспензии
клеток насекомых определяют с помощью ИФ и ИФА. Разработан укороченный метод
первичной обработки патологического материла (пулов насекомых). Исследование его в
культуре клеток показало высокую чувствительность и пригодность для полевых обследова-
ний популяций насекомых на инфицированность вирусом КЛО (23).
Установлена высокая чувствительность метода выделения вируса в перевиваемой линии
культуры клеток ПСКГ в сочетании с методом ИФА (2). Последний рекомендован для вы-
явления АГ вируса блутанга в инфицированных культурах клеток и в суспензии инфициро-
ванных комаров Culicoides variipennis. Высокая чувствительность ИФА позволяет обнару-
жить одного инфицированного мокреца в смеси с 92 неинфицированными насекомыми.
Разработан непрямой вариант ИФА для серологической диагностики блутанга (9). Оконча-
тельная диагностика КЛО, которая часто протекает субклинически у домашних и диких жи-
вотных, может быть проведена только лабораторными методами выделения вируса, выявле-
ния АГ, нуклеиновых кислот вируса и АТ. Вирус выделяют из компонентов крови, в основ-
ном нз эритроцитов, отобранных у животных во время лихорадочной реакции. Исследуемый
материал вводят в КЭ и проводят пассаж в культуре клеток (ВНК -21, Vero).
Для идентификации вирусных АГ используют ИФ, PH, ИЭМ с применением монАТ и
ИФА. Для выявления нуклеиновых кислот делают гибридизационный анализ и ПЦР. АТ
обнаруживают в РДП в агарозе и в конкурентном ИФА. Последняя реакция с использовани-
ем вирусспецифических монАТ является более чувствительным и специфичным методом
обнаружения АТ к КЛО. PH в культуре клеток служит наиболее общепринятым методом
выявления типоспецифических АТ (6а). Во ВНИИЗЖ также получены монАТ для постанов-
ки ингибирования ТФ ИФА (4).
КЛО необходимо дифференцировать от ящура, контагиозного пустулезного дерматита
(эктимы), оспы, везикулярного стоматита, злокачественной катаральной лихорадки, сердеч-
ной водянки, болезни Найроби, лихорадки долины Рифт и некробациллеза.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие овцы приобретают пожизненный иммунитет к вирусу, вызвавшему забо-
левание. Возможна реинфекция другого типа вирусом в течение того же сезона или на сле-
дующий год. Активный иммунитет у реконвалесцентов сопровождается образованием ВНА
и КСА. На введение живых вакцин у овец появляются ВНА в низких титрах. Однако такие
животные через 10 дн становятся резистентными также к вирулентному вирусу. У вакцини-
рованных овец появляются КСА в низких титрах. Ягнята, родившиеся от иммунных овце-
маток, обладают до 3-6 мес пассивным колостральным иммунитетом, который интерфери-
рует с активной иммунологической реакцией в ответ на введение внрус-вакцины.
Для иммунизации овец против КЛО применяют живую поливакцину Александера
(1947г.), состоящую из 4-х штаммов вируса (Кипр, Эстанция, Блоукоп и Тейлор), аттенуи-
рованных путем серийных пассажей в КЭ и при пониженной температуре. В последние годы
в ЮАР изготовлена вакцина из 14 различных АГ- типов вируса, выращенных в культуре
32
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
клеток почки ягнят и эмбрионов КРС. Вакцину вводят подкожно в дозе 1-2 мл. Иммунитет
продолжительностью до 1 года наступает через 10 дн. Вакцинируют овец в начале лета, по-
сле стрижки. Есть сообщения о возможной риверсибельности выпускаемых вакцин через
насекомых переносчиков. Имеющиеся в настоящее время моно- и поливакцины не удовле-
творяют требованиям из-за одновременной активной циркуляции в энзоотических районах
нескольких иммунологически различных АГ типов вируса.
Предложена инактивированная р-пропиолактоновая вакцина. Доза вакцины 5-20 мл в
составе масляной эмульсии, содержащей драксол, арлацел А и 2% твин-80. АТ появляются
на 8-10 день, достигают максимума к 14-му дн (1:640) н сохраняются в течение года. Бива-
лентную инактивированную вакцину готовят против вируса 3-4-х типов.
В связи с высокой реактогенностью живых вакцин и возможной реверсией вирулентно-
сти аттенуированных штаммов в организме переносчиков и возможным появлением реком-
бинантных штаммов (рестрикция генов), особенно в случае применения поливакцин, пред-
почтение стали отдавать инактивированным вакцинам. Безопасная высокоиммуногенная
вакцина против КЛО впервые была разработана в бывшем СССР (1,2). Наиболее техноло-
гичным и продуктивным (7-8 1g ТЦД 50/мл) оказалось выращивание вируса КЛО в суспензии
клеток ВНК-21, с использованием в качестве инактиванта - формалина и адъювантов - ГОА
(3 мг/мл) и сапонина (1 мг/мл). Устойчивость к контрольному заражению овцы приобретали
спустя 2 нед после однократной прививки в дозе 2,0 мл. При 2-6°С вакцина сохраняла им-
муногенные свойства 21-24 мес, а при комнатной температуре (20-25°С) - 12 мес. Иммуни-
тет у вакцинированных овец был не менее года. У всех вакцинированных животных обна-
руживали ВНА в разведении 1:8-1:16, которые сохранялись на одном уровне в течение года.
Однако КСА у таких животных не обнаруживали, что дает возможность отличать больных
овец от вакцинированных.
Инактивация вируса КЛО диэтиленимином (0,04-0,06%-ным), при температуре 37°С, в
течение 3-5 дн дала возможность получить безопасные высокоиммуногенные препараты.
Разработан метод выделения и очистки белка Р2 этого вируса (моно- или двухвалентными
солями). При очистке сохраняется иммунологическая специфичность Р-2. Вакцинированные
белком Р-2 овцы оказались защищенными против вирулентного штамма вируса (12).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ТЛуницин А.В. и др. Тез. докл. н.-пр. конф, ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :199. 2.Неверовский
А.И. и др. Тез. докл. н. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992:145. 3.Симонова Э.Г. н др. Тез.
докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :92. 4.Стрижакова А.А. и др., Там же :59.
5.Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусол. М, Колос,1979. б.Чичикин А.Ю. н др. Тез. докл. н.-
пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :167. 6a.Afshar A. Comp Immunol, Microbiol and
Inf.Dis.,1994, 17,3-4 :221. 7.Appleton J.A. et.al., Virology, 1983, 124, 286. 7a.Brookes S.M.
et.al. J Gen Virol, 1993, 74, 3 :525. 8.Corman B.M., J Gen Virol, 1979, 44, 1. 9.Drolet B.S.
et.al., Proc US Ann Health ars Ann meet,1988, 92 :113. 9LElfatih M. et.al., Epidem and Inf,
1987 , 99 : 533 . 92.Gibbs E. et.al., Comp Imm Microb and Inf Dis, 1994, 17, 3-4 :207. 9a.Gumm
I.D. et.al., Arch Virol,1982, 72 :83. 10.Hwang G. et. al., Virus Res, 1992, 24, 3 :315. 11.Hwang
G. et.al., Virus Res, 1992, 23, 1-2 :151. ll.Huismans H. et.al., Onderstepoort J Vet Res, 1981,
48, 51. 13.Huismans H. et.al., Virology, 1987, 157, 172. 14.Heidner H.W. et.al., Virus Res, 1991,
21, 2 :91. 15.Homan E.J. et.al. Am J Vet Res,1990, 51, 7 :1089. 16.1wasoki S et.al., J Jap Vet
Med Assn, 1990, 43, 4 :244. 17. Mertens P.P et.al., Virology, 1987, 157 :375. 17a.De Mottos
C.C.P. et.al. Virol, 1994, 201, 1 :173. 18. Mottos C et.al., Amer J Vet Res, 1991, 53, 11, :1794.
18a.Muller M.J. Vet Mier, 1995, 46, 1/3 :101. 18b.Murray M.D. Vet Microb, 1995, 46, 1/3 :91.
18c.Mushi E.Z. et.al., Bull Anim Helth and Prod Afr, 1992, 40, 2 :117. 19.Nonaka T. et.al., Jap J
Vet Res, 1989, 51, 2 :434. 19a.Oberts R.D. et.al., Vet Mier, 1987, 15 :11. 20.Osburn B.I. et. al.,
Amer J Vet Res, 1981, 42, 5 :884. 20a.Osburn B.I., Comp Imm Microbiol Inf Dis, 1994, 17, 3-4
3 Зак. № 171
33
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
: 189. 21.Roy Р. et.al., J Virol, 1990, 64, 5 :1998. 21a.Roy P.J., J Gen Virol, 1992, 73, 12 :3051.
22.Stott J.L et.al., Amer J Vet Res, 1985, 46 :1043. 23.Sanyer M. et.al. J Tissue Cult Methodes
1988, 11, 3 :171. 23a.Stott J.L. et.al., Am J Vet Res, 1985, 46 .1043. 24.TayIor W.P. et.al.
Epidemiol and Infect, 1991, 107, 1 :87. 25.Verwoerd D.W. et. al. Compr Virol, 1979, 14 :285.
26.Wilson W.C., Virus Res, 1991, 21, 3 :225. 27.Yang Vi Yuan et.al. Virus Res, 1992, 23, 1-2
: 163. 28.Yang Vi-Yuan et.al. Virus Res, 1992, 25, 3 :241.
АФРИКАНСКАЯ ЧУМА ОДНОКОПЫТНЫХ
Pferdepest, Pestis equorum (лат.); African horse sicknes, equine plaque (англ.);
Africanische Pferdesterbe (Heiw.);Peste equine (франц.); Peste equina (исп.)
Африканская чума однокопытных (африканская чума лошадей) (АЧЛ) - вирусная бо-
лезнь, протекающая остро и подостро, характеризуется лихорадкой, отеками подкожной
клетчатки и кровоизлияниями во внутренних органах. Болезнь относится к группе транс-
миссивных инфекций, передается кровососущими насекомыми, носит сезонный характер,
проявляясь в теплое, влажное время года (7).
До 1958 г. АЧЛ была распространена, в основном, в Африке. Начиная с 1959 г. инфек-
цию начали регистрировать в странах Ближнего и Среднего Востока. Осенью 1966 г. ее ди-
агностировали в Испании. Экономический ущерб от этой инфекции слагается из падежа жи-
вотных и затрат, связанных с проведением противоэпизоотических мероприятий.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Различают лихора-
дочную, легочную и сердечную, или отечную, формы болезни. Описана также смешанная
форма АЧЛ.
Лихорадочная форма протекает сверхостро и характеризуется высокой температурой,
конъюнктивитом, учащенным дыханием и ускоренным пульсом. Погибают животные на 5-
7-й день после появления клинических признаков.
Легочная форма болезни протекает остро и регистрируется в период эпизоотии среди
животных, очень чувствительных к инфекции. После инкубационного периода резко повы-
шается температура тела, дыхание становится затрудненным, появляются одышка, сухой
болезненный кашель и желтоватые истечения из носа. Погибают больные животные быстро.
Сердечная или отечная форма протекает подостро и отличается сильным отеком го-
ловы и шеи. Инкубационный период продолжается до 20 дн. Наблюдается расстройство
сердечной деятельности. Почти все больные животные погибают. Патологоанатомические
изменения соответствуют форме болезни. При легочной форме отмечают отечность легких и
скопление жидкости в плевральной полости, а также инфильтрацию соединительной ткани у
основания сердца. При разрезе легких из ткани выделяется желтоватая пенистая жидкость.
При сердечной форме наблюдают отечность соединительной подкожной, мышечной тканей
и лимфоузлов. Отечность охватывает голову, шею и доходит иногда до грудной клетки и
плечевых суставов. Иногда у павших лошадей бывает отек век, височных впадин, губ и
межчелюстного пространства.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусную природу болезни впервые установили Александер и др. в 1934г.
Морфология и химический состав. Вирионы АЧЛ характеризуются икосаэдральным
типом симметрии, диаметр их 70-80 нм, капсомеров 32. Капсид вириона состоит из одного
слоя (Рис. 12). Вирус содержит 2-нитевую РНК. В градиенте сахарозы удается разделить ее
на 5 различных по размеру фрагментов. РНК вируса состоит из 10-и сегментов, которые ко-
дируют 6 структурных белков. Неструктурные белки кодируются сегментами 6, 8 и 10. Сег-
мент 5 кодирует неструктурный белок NS1. Показана высокая консервативность гена NS1,
который рекомендуют использовать для гибридизации in situ с диагностической целью (19).
У вируса АЧЛ наружный капсидный слой вириона образован полипептидами VP3 и VP5,
34
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
остальные полипептиды (VP1, VP2, VP3, VP7) находятся в структуре нуклеокапсида (6, 9).
Белок VP2 - главный белок вируса АЧЛ, наиболее доступный на поверхности вириона (15).
Главный сердцевинный белок VP7 вируса АЧЛ серотипа 4 экспрессирован в клетках насе-
комых Sf, зараженных вирусом ядерного полиэдроза Autographa californica. Сердцевинный
белок VP7 может быть использован для выявления АТ к различным АГ вируса АЧЛ.
Установлено АГ родство между вирусами АЧЛ и другими орбивирусами: (КЛО и ЭГБО
(10). Методом ЭФ в ПААГ с додецилсульфатом натрия анализировали структурные и не-
структурные белки, индуцированные в клетках Vero серотипом 4 вируса АЧЛ. Выявлены 22
вирусспецифических полипептида. Методами иммуноблотинга и радиоиммунологически
идентифицировано 4 больших (VP2, VP3, VP5 и VP7) и 3 малых (VP1, VP4, VP6) структур-
ных белка и 4 неструктурных белка (Р58, Р48, Р21 и Р20). Наибольший иммунный ответ вы-
зывают вирионные белки VP2, VP5 и VP7 и 4 основных неструктурных белка. При сравне-
нии в перекрестных серологических реакциях серотипа 4 вируса АЧЛ и 7 других серотипов
показано, что АГ VP5, VP7 и Р48, Р21 и Р21 консервативны. Онн могут быть использованы
для диагностики всех 8-и изученных серотипов вируса АЧЛ (16).
Устойчивость. Нейротропные штаммы вируса инактивируются за 5-15 мин при 60°С.
Штаммы, адаптированные к культуре клеток, сохраняются при 4°С до 90 дн. При хранении
в культуральной среде при температуре от -20° до -30°С вирулентность вируса снижается.
Инактивацию вируса при -22°С можно предотвратить добавлением 5% лактозы, сахарозы
или глюкозы. В лиофилизированном виде вируссодержащий материал сохраняет инфекци-
онную активность в течение нескольких лет. Вируссодержащая кровь больных лошадей,
смешанная в равном объеме с р-ром оксалатфенол-глицерина, при 4°С остается инфекцион-
ной несколько лет. Нейротропные штаммы вируса, выращенные в культуре клеток MS и со-
храняемые при 37°С, утрачивают свою активность через 40 дн. Прн хранении в условиях
25°С титр вируса в том же материале за тот же срок снижается на 1-2 1g, а при 4°С инфек-
ционная активность суспензии сохраняется в течение 40 дн. Лиофилизированная поли-
штаммная вакцина в условиях 4°С сохраняет активность в течение 9 мес и лишь к 18 мес
хранения теряет 2 1g своего исходного титра.
Инактивация вируса связана с присутствием в среде NaCl, СаС12, MgCl2. В р-рах без
этих солей вирус длительно сохраняется при -20°С. Он стабилен в щелочной зоне с pH 7,0-
8,0, устойчив к действию эфира и быстро инактивируется при pH 6,0. Чувствителен к УФ
лучам, причем степень чувствительности различных в АГ-отношенин штаммов вируса не-
одинакова. На этом свойстве основана методика их дифференциации штаммов АЧЛ. Штам-
мы, идентичные в АГ-отношении, одинаково чувствительны к УФ лучам. Формалин инак-
тивирует вирус в концентрации до 1:8000. 50%-ный р-р глицерина используют как стабили-
затор вируса, а 5-10%-ный сапонин - как инактиватор.
Антигенная активность. У естественно переболевших н искусственно зараженных
лошадей, мулов, а также зараженных морских свинок, кроликов и овец вырабатываются
ВНА, КСА и ПА. Кролики дают высокоактивную сыворотку, пригодную для тнпирования
отдельных штаммов вируса в PH. Положительную сыворотку для РСК (контрольную) полу-
чают от искусственно зараженных лошадей. Кровь берут через 30 дн после заражения. Для
получения АГ мышат заражают в мозг (7, 8).
Антигенная вариабельность и родство. Существует 10 серотипов вируса АЧЛ, раз-
личающихся в перекрестной PH, РТГА и иммунитете, и один общий КС АГ. Лошади, пере-
болевшие чумой, становятся невосприимчивыми только к вирусу, вызвавшему заболевание.
Прототипными штаммами выделенных АГ типов являются следующие: I-A501, П-ОД, III-L,
IV-Vryh, V-VH, VI-114, VII-Karen, VIII-18/60, IX-7/6. Различие в АГ структуре вируса носит
скорее количественный, чем качественный характер. Штаммы, принадлежащие к различ-
ным типам, содержат одинаковые АГ компоненты, но в различных пропорциях. При серий-
з*
35
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
ном пассировании на лошадях вирус претерпевает иммунологические изменения, и лошадь,
иммунизированная против определенного штамма, может не иметь иммунитета при зараже-
нии ее этим же штаммом, но прошедшим определенное число пассажей на лошадях.
Гемагглютинируюшие свойства. Висцеротропные эпизоотические и нейротропные
вакцинные штаммы вируса АЧЛ агглютинируют 0,5% эритроциты лошади при pH 6,4.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. У больных лошадей
вирус содержится во всех органах и тканях. В крови естественно больных лошадей вирус
достигает титра 2-3 1g ЛД !Шил. Однако в наибольшем количестве он находится и в легких
павших животных (до 3-4 1g ЛД 5о/мл). У отдельных переболевших лошадей отмечается ви-
русоносительство и вирусовыделение в течение 3 мес.
Экспериментальная инфекция. Неиммунных лошадей удается заразить, если вводить
вирус подкожно, внутрикожно, внутривенно, интратрахеально, интрапульмонально, внутри-
брюшинно и per os. При внутривенном введении вируссодержащего материала в объеме 5
мл на 4-5-е сут у лошади повышается температура тела, а на 10-15-е сут она погибает.
Кроме АГ различий, штаммы различаются и по длительности инкубационного периода,
наблюдаемого у мышей после внутримозгового заражения. Например, при заражении шт.
114 инкубационный период продолжается 46-80 ч, шт. А501 - 60-72 ч, шт. VR1 - 62-72, и т.
д. Белым мышам (4-6-дн) материал в дозе 0,03-0,25 мл вводят интрацеребрально. Мыши
гибнут в период между 4 и 22-м дн. В агональном состоянии у них берут стерильно голов-
ной мозг, готовят из него суспензию 1:10 на физиологическом р-ре (pH 7,5) и используют
его для дальнейшего пассирования на этих же животных. Белые мыши восприимчивы как к
висцеротропным, так и к нейротропным штаммам вируса АЧЛ, в то время как морские
свинки чувствительны лишь к нейротропным штаммам. Хомяки чувствительны при введе-
нии вируса в сердце, а овцы - при заражении в мозг. На 8-й день после подъема температу-
ры хомяков убивают и берут от них селезенку, содержащую вирус. Некоторым исследовате-
лям удавалось заражать собак скармливанием инфекционного материала. У КРС, овец и коз
после заражения отмечают лишь незначительное повышение температуры.
Культивирование. Вирус АЧЛ размножается в организме лошадей, мулов, морских
свинок, белых мышей, КЭ, а также в первичных культурах клеток почки хомяка, ягнят, в
фибробластах КЭ, в перевиваемых клетках MS (клетки почки обезьяны), ВНК-21 (клетки
почки хомяка), LMK (клетки почки молодой обезьяны) и VERO. Перед заражением культур
клеток почки ягнят и эмбрионов овец удается выделять и культивировать вирус, выделен-
ный из крови и органов больных и погибших от чумы животных. Пассирование вируса в
тканевых культурах также сопровождается его аттенуацией с сохранением АГ и иммуноген-
ных свойств.
Нейротропные вирусы размножаются в мозге КЭ, сохраняя свои нейротропные свойст-
ва, но не вызывая гибели эмбрионов. Висцеротропные штаммы вызывают гибель КЭ и с
увеличением числа пассажей аттенуируются. Титр вируса в зараженных эмбрионах достига-
ет максимума на 4-5-й день после заражения, затем быстро снижается. Наиболее пригодны-
ми для культивирования вируса АЧЛ оказались клетки линии ППК (почки поросенка, ка-
занская линия) (8). Установлена возможность использования монослойных и суспензионных
клеток ВНК-21 для изготовления вирус-вакцины против АЧЛ (4). Показана также возмож-
ность выращивания вируса АЧЛ различных серотипов в суспензии клеток ППК-666/17 в
объемах 10-20 л при использовании питательной среды с гидролизатом белков крови КРС.
В ходе пассирования вируса в течение 5 пассажей способность к репродукции и АГ специ-
фичность вируса сохранялись (5). В инфицированных клетках MS и VERO вирус образует
включения через 24 ч после заражения.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
36
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные.
Основная роль в переносе вируса от больных животных здоровым принадлежит мокрецам
из рода Culicoides. Мокрецы (С. nubeculosis и С. variipennis) способны репродуцировать в
вирус АЧЛ 9-го серотипа. Однако вопросы, связанные с длительностью переживания вируса
в мокрецах, возможностью его трансовариальной передачи, а также с ослаблением или уси-
лением патогенности при передаче насекомыми не изучены. Не исключена возможность
участия в переносе вируса комаров Anopheles stephensi и Culex pipiens. Экспериментально
доказана возможность заражения здоровых лошадей комарами (Aedes egypti), накормлен-
ными кровью больных лошадей. Возможно заражение собак при поедании конины, зара-
женной вирусом АЧЛ (18). В межэпизоотические периоды вирус, по-видимому, поддержи-
вается в организме каких-то животных или птиц. АЧЛ является эндемичной инфекцией в
прилегающих к пустыне Сахара странах. В передаче вируса могут также участвовать моски-
ты и мухи. Периодически вирус АЧЛ распространяется за пределы энзоотических зон, но до
настоящего времени он был нештатен, сохраняясь вне этих зон более 2-3 лет. Эго так же
обусловлено отсутствием достаточного количества позвоночных, способностью к распро-
странению и сезонностью существования переносчиков, а также проведением эффективных
мер контроля. Недавние эпизоотии на Пиренейском полуострове и в Северной Африке, как
оказалось, привели к новому способу существования вируса АЧЛ. Вероятно, в этих регио-
нах он связан с постоянным присутствием Culicoides imicola, которые предпочитают теп-
лый климат. В связи с этим его постоянное присутствие на Пиренейском полуострове может
быть обусловлено изменением климата в этом районе (17). В 1987-1991 гг. наблюдали
вспышки АЧЛ в Испании, Португалии и Марокко. Изменения климатических условий могут
привести к дальнейшему распространению на север Culicoides imicola и превращению Ев-
ропы в зону риска по АЧЛ, а также КЛО (18).
Спектр патогенности в естественных условиях. Наиболее восприимчивы лошади,
мулы менее чувствительны, ослы не заболевают даже при экспериментальном заражении.
Гибель лошадей зависит от породы и вирулентности возбудителя.
ДИАГНОСТИКА
АЧЛ диагностируют на основании эпизоотологических данных (внезапность появления
болезни в теплое время после дождей, наличие переносчиков заболевания), анализа сим-
птомов болезни и результатов лабораторных исследований. Лабораторные методы диагно-
стики включают: а) выделение вируса от больных или павших животных на лошадях, белых
мышах и в культурах клеток почек ягнят и эмбрионов овец; б) идентификацию вируса с по-
мощью РСК путем исследования материалов, взятых от павших животных. Для обследова-
ния популяций лошадей на АЛЧ предложен микрометод РСК (Бернерд); в) типирование вы-
деленных штаммов с помощью PH на белых мышах по методу Мак-Интоша (1958) или в
культурах перевиваемых MS, или диплоидных ВНК-21 клеток.
Рекомендовали ИФ для обнаружения АГ в клетках инфицированного монослоя н тканях
(срезах) павших животных (селезенка, печень, лимфоузлы). Применение данного метода
для диагностики болезни имеет преимущество перед РСК и PH. Вирус АЧЛ выделяют из
крови всех экспериментально зараженных лошадей, а специфический АГ обнаруживают с
помощью ИФА в образцах тканей. ИФА оказался чувствительным методом для выявления
вируса в клетках кровососущих насекомых, фиксированных формалином, в период вспыш-
ки заболевания лошадей на юге Испании (12, 13, 14). Для получения гипериммунной сыво-
ротки для РДСК и других серологических реакций в качестве доноров заслуживают пред-
почтение морские свинки. Разработана высокоэффективная схема получения гипериммун-
ных сывороток от лабораторных животных (8).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
37
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Переболевшие чумой животные нечувствительны к вирусу того типа, который вызвал
заболевание, но восприимчивы к вирусу других типов. Реконвалесценты приобретают им-
мунитет несколько лет. Новорождённые жеребята не имеют АТ. Они появляются после пер-
вого кормления материнским молоком. В дальнейшем титр гуморальных АТ у жеребят, по-
лученных от матери, постепенно снижается и к 5-6 мес угасает.
Специфическую профилактику осуществляют инактивированными и живыми вакцина-
ми. Из инактивированных чаще применяют формолвакцину, в которой в качестве АГ ис-
пользуется вируссодержащая селезёнка больной лошади. Вакцина не вызывает осложнений,
и иммуногенность её достаточно надёжна. Успешно испытана инактивированная димером
этиленимина вакцина (11). Показана возможность стимуляции иммунитета при использова-
нии полиштаммных вирусвакцин (3). Установлена возможность использования монослой-
ных и суспензионных культур клеток ВНК для изготовления вакцины против АЧЛ. Получе-
ны индикаторные для морских свинок штаммы вируса 2 и 6-го серотипов пригодные для
изучения иммунитета на вирусвакцину против АЧЛ и перспективные для разработки более
экономичных методов контроля (1). На основании оценки степени нейропатогенности виру-
са АЧЛ по индексу церебральной патогенности и нейропатогенной активности, конкури-
рующих с иммуногенностью вакцины, разработана технологическая схема изготовления
моно- и полиштаммных вакцин против АЧЛ и поддержания вакцинных штаммов посредст-
вом чередования (ограниченного до 10 пассажей) культивирования вируса в клетках ППК с
освежением его на мышах. Схема включает процедуры контроля вакцинного материала и
допускает хранение готовой вакцины до 5 лет при -40°С (2).
Живую нейтропную вакцину готовят из мозга мышей, заражённых аттенуированными
штаммами. Лошади, привитые полиштаммной мозговой мышиной вакциной, приобретают
иммунитет к 10-14-му дню и остаются невосприимчивы в течение нескольких лет. Помимо
мышиной мозговой вакцины, в ветеринарной практике некоторых стран используют вакци-
ну из мозга морских свинок. Вакцина ареактогенна и иммуногенна. Современная живая
вакцина получена из аттенуированного вируса, выращенного в культуре перевиваемых кле-
ток MS или ВНК-21. В районах, неблагополучных по АЧЛ, животных вакцинируют за 1-2
мес до появления кровососущих насекомых. Иммунитет развивается через 15-20 дн после
вакцинации и сохраняется не менее года.
Отсутствие АТ к вирусу АЧЛ после первичного применения вакцины не обязательно
свидетельствует о отсутствии защиты (13).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ГИванющенкова И.В. и др. Сб. Тр. ВНИИЗЖ Владимир, 1995 :164. 2.Иванющенкова
И.В. и др. там же, :62. З.Иванющенкова И.В. и др. там же.: 168. 4.Иванющенкова И.В. и др.
Тез. д. н.-пр. конф ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :227. З.Иванющенкова И.В. и др. Тр. ВНИ-
ИЗЖ Владимир, 1995 :179. б.Сергеев В.А. Вирусные вакцины., Киев, Урожай,1993.
7.Сюрин В.Н. и др. Частная вет. вирусол., М., Колос, 1979. 8.Шажко Ж.А. и др. Сб. тр.
ВНИИЗЖ Владимир, 1995 :134. 9.Corman В.М. J Gen Virol, 1979, 44, 1. lO.ChumaT. et.al. J
Gen Virol, 1992, 73, 4 :925. ll.Hassanian M.M. Rev Elev et Med Vet Pays Trop, 1992, 45, 3-4
:231. 12.Hamblin C. et.al. Epidemiol and Infect, 1992, 108, 1 :193. 13.Hamblin C. et.al. Epid
and Infect,1991, 106, 2 :365. 14.Hamblin C. et.al. J Virol Meth 1991, 34, 2 :221. 15.Levis S.A.
et.al. Arch Virol 1991, 121, 1-4 :233. 16.Laviada M.D. et.al. J Gen Virol, 1993, 74, 1 :81.
17.Mellor P.S. Comp Immunol, Microbiol and Inf Dis, 1994, 17, 3-4 :287. 18.Mellor P.S. et.al.
Ann Trop Med and Parasit, 1995, 89, 1 :1. 19.Mizukoshi N. et.al. Jap J Vet Med, 1992, 4 :29.
38
Г лава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
ЭПИЗООТИЧЕСКАЯ ГЕМОРРАГИЧЕСКАЯ
БОЛЕЗНЬ ОЛЕНЕЙ
Эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей (ЭГБО) - вирусная трансмиссивная бо-
лезнь, характеризующаяся острым течением, сильным угнетением, лихорадкой, резко вы-
раженным геморрагическим синдромом с подкожными отеками и высокой летальностью
белохвостых оленей, напоминающее катаральную лихорадку болезнь “синего языка” у КРС.
Вспышки ее регистрируются на юго-востоке США с 1890 г. Вирус ЭГБО относится к роду
орбивирусов, семейству реовирусов.
Заболевание зарегистрировано в разных зонах мира (на Карибских островах, в Гвиане,
Суринаме, Австралии, на севере Колумбии, Нигерии, Судане, Гайане и ЮАР), где обнару-
жены АТ, что свидетельствует о широком распространении указанного вируса (9). Послед-
ний не вызывает симптомов заболевания овец, однако вызывает виремию. В 1988 г. он
впервые был выделен от клинически здоровых овец в США.
Вирус был выделен у белохвостых оленей, оленей-муллов, антилоп в восточных и юго-
восточных штатах США, на юге Канады. Имеется сообщение о выделении от теленка виру-
са Каванабе, который по данным PH относится к серотипу Нью-Джерси вируса ЭГБО.
Основной переносчик вируса - мокрец из рода Culicidoc.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. В различных тканях
отмечаются кровоизлияния, возможны забрюшинный отек и скопление жидкости в сероз-
ных сумках. Вирус вызывает сильные дегенеративные изменения в эпителиальных клетках,
что приводит к интраваскулярным тромбозам.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые вирус выделил в 1955 г. от белохвостых оленей в штате Нью-Джерси Р. Шоуп.
Морфология и химический состав. Вирионы диаметром в среднем 60 нм, имеют
форму икосаэдра, состоят их 5-6 субъединиц. Геном вируса фрагментированную представ-
ляет собой 2-нитевую РНК, устойчивую к действию панкреатической РНК-азы, мол.м. наи-
более длинного фрагмента (5,8 нм) 12,2-15,1-Ю6 Д. Плавучая плотность в хлористом цезии
1,35 г/см3. В составе вируса ЭГБО обнаружено 8 полипептидов: 4 основных и 4 минорных.
Кроме полипептидов VP2 и VP5 в наружном слое капсида обнаружен дополнительный ми-
норный полипептид (90 КД) (13,14).
Устойчивость. По физико-химическим свойствам установлено полное сходство вируса
ЭГБО и блутанга. Вирус сохраняется в замороженном состоянии свыше 9 мес. При -20°С
активен до 14 мес, при -60°С - в течение 2 лет. Шт. Южная Дакота менее устойчив по срав-
нению со шт. Нью-Джерси (5, 6,7).
Антигенная структура. У вируса определена полная нуклеотидная последовательность
гена минорного капсидного белка VP1 австралийских орбивирусов, построено их филогене-
тическое дерево, учитывающее концепцию топотипов (10), а также установлена полная по-
следовательность нуклеотидов в сегменте 5-геномной 2-нитевой РНК .
Антигенная вариабельность и родство. Установлено наличие 8 серотипов вируса
ЭГБО. Выделено два АГ типа вируса: 1-й (шт. Нью-Джерси) выделен в 1955 г. во время
крупной эпизоотии; 2-й (тип 2 ЭГБО) выделен в 1962 г. во время эпизоотии в Канаде (шт.
Альберта) (Хиф, Трайнер, 1978 г). Вирус Ибараки, выделенный в Японии нз крови коровы,
оказался родственным шт. Альберта, но несколько отличен от него (11).
Локализация вируса, вирусоносительство, вирусовыделение. У белохвостых оле-
ней вирус вызывает виремию. Максимальные титры его обнаружены в эритроцитах. У за-
ражённых животных через 5-7 дн появляются ВНА и виремия исчезает. Вирус можно выде-
лять нз крови и селезенки больных и павших оленей. Из печени и почек его выделяют ред-
ко. Из легких, селезенки, мышцы сердца и почек вирус выделяют только при больших раз-
39
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
ведениях вируссодержащего материала, так как в низких разведениях наблюдается подав-
ление его ЦПД.
Эталонные штаммы вируса ЭГБО. шт. Нью-Джерси, - 1-й тип и 2-й тнп - шт. Альберта
- 3-й пассаж на мышах-сосунах.
Антигенная активность. Выражена у животных реконвалесцентов. ВНА и КСА, кото-
рые появляются через 2-3 нед после клинического выздоровления, что сопровождается
стойким иммунитетом. Сыворотка реконвалесцентов обладает выраженными профилакти-
ческими свойствами. Однако АТ не защищают животных при повторном заражении виру-
лентным гетерологичным вирусом.
Гемагглютинирующие свойства не изучены.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится при внутримышечном и под-
кожном заражении молодняка белохвостых оленей от 10 нед до 2-х лет.
Культивирование. К вирусу ЭГБО чувствительны следующие перевиваемые клеточ-
ные культуры: Vero, ВНК-21, HmLu, L-929, mVPK, HeLa, полученные нз органов тепло-
кровных, а также перевиваемые клеточные культуры холоднокровных: комаров Aedes
obopyctus, Kxenopus levis. Наиболее чувствительными к вирусу ЭГБО ПСГК, CV-1, ПЭАК,
обеспечивающие максимальное накопление его в титрах 6,75-7,0 1g с проявлением ЦПД на
3-4 сут (1,2,3,4, 5, 6).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Популяции диких животных являются резер-
вуаром вируса ЭГБО в природе и играют важную роль в заражении домашних животных. В
1973 г. Борман и Джубе указали на возможность участия мокрецов из рода Culicoides как
векторов в Европе и странах СНГ.
Сосредоточие поголовья КРС, оленей, овец приводит к нарастанию численности пере-
носчиков, что увеличивает риск возникновения и распространения болезни (1,2). Актуаль-
ность изучения ЭГБО связана с возрастающей вероятностью заноса на территорию РФ ви-
русов КЛО и болезни Ибараки, в ассоциации с которыми часто может оказаться вирус ЭГ-
БО. Наличие этих вирусов в пограничных с РФ странах увеличивает риск.
Спектр патогенности в естественных условиях. Белохвостые олени (Odocoileus
nryinianus), чернохвостые олени (Odocoileus gemionus), вилорогие антилопы (Antilocurpa
amerione), лоси (Alcess Alcess) восприимчивы к вирусу ЭГБО. Также вирус выделяли от
оленей-муллов, антилоп в восточных и юго-восточных штатах США, и юге Канады.
Между вирусами ЭГБО и блутанга существует АГ-родство, поэтому положительные ре-
зультаты определения АТ любым конвенциальным серологическим методом, за исключени-
ем PH, не может служить однозначным доказательством инфицированности животных
именно тем или другим вирусом. Дополнительной трудностью является наличие 8 серотипов
вируса ЭГБО и 24 серотипов вируса блутанга (11,12).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на ЭГБО ставят на основании клинических и патологоанатомических данных и
лабораторных исследований (выделение вируса, его индикации и идентификации, серологи-
ческих исследований). Для лабораторной диагностики ЭГБО разработана PH, РДП, РСК и
МФА. Однако каждый из методов имеет недостатки в отношении чувствительности, вос-
производимости, экспрессивности и технической простоты постановки.
Выделение вируса. Показана возможность выделения его из крови и паренхиматозных
органов больных и павших белохвостых оленей. Эталонные штаммы ЭГБО Альберто и
Нью-Джерси хорошо пассируются на новорожденных белых мышах линии BAL 13/9. Из
мозга инфицированных мышат готовят АГ, который озвучают на ультразвуковом дезинте-
граторе MSE. Сахарозо-ацетоновые АГ проверяют в РСК (холодовым методом). Озвучен-
ный АГ имел активность в РСК 1:32-1:64, т е. был в 2-4 раза выше, чем неозвученный. АГ,
40
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
полученные методом сахарозо-ацетоновой экстракции, пригодны для использования в РСК,
но она группоспецифическая и с ее помощью дифференцировать штаммы между собой
нельзя (1, 2).
Индикация вируса в серологических реакциях. Непрямой вариант твердофазного
ИФА с использованием специфического АГ из мозга мышат-сосунов, изготовленного мето-
дом сахарозо-ацетоновой экстракции и антивидовых иммунопероксидазных конъюгатов
против IgG оленя, КРС и овец позволяет обнаруживать специфические АТ в сыворотках
крови чувствительных видов животных и служить основным методом эпизоотологического
мониторинга (1, 2). На основании экспериментальных исследований представлены методи-
ческие указания для лабораторной диагностики ЭГБО с помощью РГА и РЗГА и ТФ ИФА
для выявления специфического АГ вируса ЭГБО в вируссодержащих культуральных мате-
риалах, а также для обнаружения специфичных к вирусу ЭГБО АТ в сыворотках крови пе-
реболевших оленей, КРС и овец. Разработаны и предложен набор диагностических препара-
тов для выявления АТ при ЭГБО непрямым вариантом ТФ ИФА.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Специфическая профилактика не разработана.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Луницин А.В. и др. Сб. Тр. ВНИИВВиМ, Покров,1990, 48; 49;116. 2.Луницин А.В. и
др. Сб. Тр. ВНИИВВиМ, Покров, 1992, 254; 255; 256, 257; 258. З.Руководство по вет. виру-
сол.М.,Колос. 1966. 4.Сергеев В.А. Вирусные вакцины., Киев, Урожай,1993. 5.Сюрин
В.Н.,Фомина Н.В. Части, вет. вирусол., М., Колос,1979. б.Сюрин В.Н. и др. Вет. вирусол.,
М., Агропромизд., 1992. 7.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив. М., Агропромиздат,1991.
Я.Филдз Б., Найп Д. Вирусология, т.2 М, Мир, 1989, 256. 9.Чичикин А.Ю. и др. Сб. Тр.
ВНИИВВиМ, Покров, 1992 :259. lO.Gould A.R. et.al. Virus Res,1991, 21, 1 :1. ll.Iwata H.
et.al. Virus Res, 1991, 20, 3 :273. 12.Viljoen G.J. et.al. Gen Virol,1989, 70 :2007. 13.Corman
B.M. J Gen Virol, 1979, 44:1. 14.Vickers M.L. et.al. J Wildlife Dis., 1982, 18 :149.
БОЛЕЗНЬ ИБАРАКИ
Болезнь Ибараки (орбивирусная инфекция) - болезнь КРС, характеризующаяся лихо-
радкой, язвенным поражением ротовой полости и затрудненным актом глотания. Протекает
остро. Впервые её диагностировал Омори в Японии в 1959 - 1960 гг. и назвали в соответст-
вии с названием префектуры. Летальность варьирует от 6 до 10%. Сезонность инфекции
(август, декабрь) и её географическое распространение (центральная и южная части Япо-
нии) позволяют предположить трансмиссивную передачу болезни. Первые больные живот-
ные появляются летом и выделяются до поздней осени. Сезонность и географическое рас-
пространение болезни зависят, очевидно, от климатических условий. Предполагают, что бо-
лезнь Ибараки встречается также в Индонезии и на о. Тайвань (4).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь продолжает-
ся 2-3 дн. На поражённых слизистых оболочках рта и носа иногда появляются небольшие
некротические язвочки, которые быстро заживают. Характерный признак болезни - затруд-
нённое глотание - наблюдается у 20-30 % больных. Этот симптом появляется через 7-10 дн
от начала заболевания, когда все другие признаки болезни уже исчезли. При таком течении
болезни 30-40 % животных погибает или подвергается вынужденному убою. Чаще поража-
ются мышцы языка, гортани, глотки, пищевода. На губах, во рту, в желудке и на венчике
копыт появляются отёки и кровоизлияния. Сначала развиваются дистрофические изменения
эпителия слизистых оболочек, а затем местами ткань некротизируется, появляются эрозии и
язвы. Если поражается слизистая оболочка глотки и пищевода, глотание затрудняется. На-
чинается обезвоживание организма и истощение. Если развивается аспирационная пневмо-
ния, то большинство животных погибает. Характерные особенности данной болезни - сто-
41
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
матит и ларингофаренгиальный паралич. Патологогистологические изменения при этом ха-
рактеризуются дегенерацией и некрозом мышц пищевода, глотки, гортани. Из крови коров и
клещей Culicoides oxytoma в Японии выделен агент, вначале идентифицированный как ар-
бовирус. Изолят условно был обозначен вирусом Chuzan. Полагают, что этот возбудитель
является причиной рождения телят с водянкой головного мозга и синдромом гипоплазии
мозжечка. У клинически больных животных возрастает активность лактагдегидрогеназы в
сыворотке крови, отмечалась депрессия, отсутствие аппетита.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус Ибараки выделен впервые в Японии (Омори, 1959 г.).
Морфология и химический состав. Вирус имеет 2-нитевую РНК, которая в ПАГ раз-
деляется на 12 сегментов, относящихся к 3 классам. В среднем диаметр вириона равен 55
нм, сердцевины 35 нм. Вирионы икосаэдрической формы без оболочки. Капсид, вероятно,
1-слойный и состоит из 32 капсомеров, имеющих вид полых удлинённых призм, уложенных
с симметрией 5:3:2. Менее 1% вирусных частиц заключено в так называемую псевдообо-
лочку. На срезах инфицированных клеток вирусные частицы с электронно-плотными серд-
цевинами связаны с внутрицитоплазматическим вирусным матриксом. Вирионы приобре-
тают оболочку, почкуясь через мембраны клетки. Диаметр частиц, покрытых оболочкой
около 100 нм. Обнаружено сходство морфологии и морфогенеза вируса Ибараки и вируса
“синего языка”. Вирионы вируса Ибараки формируются в цитоплазматических тельцах-
включениях в виде электронноплоидных частиц диаметром 20-25 нм, транспортируются с
помощью микрофиламентов и тубулярных структур и приобретают оболочку толщиной око-
ло 20 нм, достигая диаметра 50-60 нм. Вирионы вируса Ибараки выделяются во внеклеточ-
ное пространство при лизисе клеточных мембран и, более редко, почкованием через клеточ-
ные мембраны (2).
Устойчивость. Вирус Ибараки устойчив к эфиру, хлороформу, дезоксихолату, 5-
йоддезоксиуридину, но чувствителен к трипсину; лабилен в среде с кислым значением pH,
устойчив в среде с pH 6,4 и выше, а также к повторному замораживанию и оттаиванию;
инактивируется при температуре 56°С в течение 60 мин, при 60° и выше через 5 мин; отно-
сительно стабилен при 37° и очень устойчив при 4°С, однако теряет инфекционность при
хранении в условиях -20°С.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. Введение вируссодержащего материала вызывает образова-
ние АТ, титр которых при естественном течении инфекции коррелирует с широтой распро-
странения инфекции. Титр анти-ГА к вирусу болезни Ибараки составлял 1:320.
Антигенная вариабельность и родство. По АГ-свойствам (в серологических реакци-
ях) вирус Ибараки отличается от вируса “синего языка”. Сообщали о наличии перекрёстной
PH между вирусами Ибараки и “синего языка” овец (тип 10). Аналогичные результаты по-
лучили Луницыным А.В. и соавт. Ими не установлено АГ родство меищу вирусами ЭГБО и
блутанга. Однако вирусы ЭГБО и болезни Ибараки сходны, что установлено в РДП, РСК и
ТФ ИФА (1).
Гемагглютинирующие свойства не изучены.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Детально не изуче-
ны. Вирус Ибараки выделен из проб крови больных животных во время лихорадки
(лихорадка кошек, обильное слюнотечение, паралич гортани). Вирус выделен из пула мок-
рецов Culicoides oxystoma и других видов Culicoides.
Экспериментальная инфекция. У КРС, заражённого экспериментально, болезнь про-
текает так же, как в естественных условиях. Омори с соавт. в 1969 г. выделил несколько
штаммов вируса в культуре бычьих клеток при экспериментально воспроизведённой инфек-
ции. К вирусу Ибараки чувствительны новорождённые мыши.
42
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Культивирование. Вирус Ибараки размножается в первичных культурах клеток почки
телёнка, овцы, хомячка, в перевиваемых мышиных L-клетках, ВНК-21, суспензионной
культуре клеток HmLu-1 и вызывает ЦПД. В этой системе вирус достигал титра 106’75
ТЦДзо/oi мл Он также культивируется в 4-5-дн КЭ при заражении их в желточный мешок
(33,5°С), в мозге мышат моложе 2-3 нед при интрацеребральном заражении. В первичных
культурах клеток почек лошади, свиньи и в культуре клеток HeLa вирус не размножается.
После 6-7 пассажей в бычьих культурах клеток вирус Ибараки становится менее вирулент-
ным для КРС.
По способности размножения в культурах клеток, КЭ и мозге инфицированных мышей-
сосунов вирус Ибараки очень похож на вирус КЛО. По морфологии и циклу развития напо-
минает вирус “синего языка”, АЧЛ и реовирусы.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции не изучены.
Спектр патогенности в естественных условиях. Вирус Ибараки слабопатогенен для
овец, однако у КРС вызывает тяжело протекающую инфекцию.
ДИАГНОСТИКА
Разработан непрямой вариант ТФ ИФА с антивидовым иммунопероксидазным конъю-
гатом против IgG КРС для определения АТ, специфических к вирусу Ибараки. Специфиче-
ский культуральный АГ вируса готовят из лизата клеток CV-1, инфицированных вирусом.
Специфические сыворотки к вирусам Ибараки и КЛО получают на гипериммунизированных
телятах месячного возраста. Для получения сыворотки кролика их иммунизируют иммуног-
лобулином G. Активность антивидового IgG в РДП составляла 1:256. Таким образом, не-
прямой вариант ИФА оказался чувствительным и специфичным экспресс-методом диагно-
стики, позволяющим выделять АТ, специфические к вирусу Ибараки (3).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Патогенность вируса Ибараки для КРС была ослаблена путём серийных пассажей его в
клеточных культурах КЭ. Живая вакцина при введении под кожу не вызывала лихорадки и
клинической реакции у КРС и в 100 % случаев индуцировала образование ВНА, сохраняв-
шихся более 3 лет. Важное значение при лечении болезни Ибараки представляют меры про-
тив обезвоживания и пневмонии, развивающейся в результате затрудненного глотания.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Луницын А.В. и др. - Тез. н. конф. ВНИИЗЖ, Владимир,1995 :199. 2.Новикова М.Б. и
др. Тез. докл. н. конф. ВНИИВВИМ, Покров, 1990 : 81. З.Новикова М.Б. и др. Тез. докл. н.
конф. ВНИИВВИМ, Покров, 1990 :68. 4. Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусол., Москва, Ко-
лос, 1979.
РОТАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Ротавирусная инфекция (РВИ) КРС (диарея неонатальных телят) - остропротекающая
контагиозная болезнь новорожденных телят, характеризующаяся поражением ЖКТ. Болезнь
широко распространена во всех географических регионах земного шара. Практически ее ре-
гистрировали везде, где проводили исследования. Доказана широкая диссиминация ротави-
русов (РВ) телят среди животных разных видов и наличие АТ у грызунов (морских свинок,
крыс, хомяков, мышей).
Патогенез. РВ размножается в дифференцированных эпителиальных клетках ворсинок
(в апикальной части ворсинок) всего тонкого отдела кишечника. На вершинах ворсинок
происходит ускоренная миграция и преждевременное слущивание энтероцитов. Ускоренная
регенерация поверхности апикальной части ворсинок за счет незрелых, резистентных к ви-
русной инфекции эпителиальных клеток и крипт, является причиной нарушенного пищева-
43
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
рения уже после окончания инфекционного процесса. В дальнейшем происходит восстанов-
ление нормальной структуры ворсинок и пищеварения (15).
Симптомы и патологоанатомические изменения. Инфекция клинически проявляется
только у телят в виде рецидивирующей диареи. Заболеваемость достигает 90%, смертность -
5-25%. Наиболее часто болезнь регистрируют поздней зимой и ранней весной. Телята зара-
жаются в первые часы после рождения. У заболевших в первые дни жизни телят наблюда-
ются диарея, атония, слабость, отказ от воды. В отсутствие сопутствующих заболеваний
РВИ телят вызывает энтерит, который связан с незначительными изменениями крови и мо-
жет сопровождаться легко проходящей диареей. Клинически болезнь у телят характеризует-
ся депрессией, потерей аппетита, диареей. Цвет фекалий зависит от вида корма. Температу-
ра тела иногда поднимается до 41°С. Если инфекция не осложняется E.coli, то через 2-3 дня
телята выздоравливают. Чем моложе теленок, тем продолжительнее диарея.
При патологоанатомическом исследовании основные изменения отмечаются в тонком
кишечнике. Мебус (1974) нашел, что верхушки ворсинок часто обнажаются, увеличивается
количество ретикулоподобных клеток. В отдельных участках кишечника ворсинки полно-
стью исчезают, крипты укорочены, ворсинки неоднородны, форма эпителиальных клеток
изменена (они принимали кубическую форму), в них появились вирионы, и это вело к изме-
нению функции клеток. Поступающее в кишечник молоко не переваривается, накапливается
в пищеварительном тракте, обусловливая появление диареи. По мере накопления вирус вы-
ходит из клеток ворсинок. У переболевших животных изменения в кишечнике исчезают че-
рез 8-10 сут после начала заболевания.
На патогенность РВ и тяжесть течения болезни у телят могут влиять многочисленные
факторы: штамм и доза вируса, возраст телят во время инфицирования, возможные сопут-
ствующие инфекции. Наличие циркулирующих в крови АТ недостаточно для предотвраще-
ния РВ диареи у телят. АТ должны находиться в просвете кишечника. Для защиты может
оказаться полезным экзогенный интерферон.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
В 1978 г. Международным Комитетом по таксономии отнесен возбудитель РВИ к се-
мейству Reoviridae, роду Rotavirus.
Устойчивость. Устойчив к хлороформу, эфиру, фреону, кислой среде (pH 3-4). В отли-
чие от реовирусов MgCl2 при pH 6-7 не стабилизирует терморезистентность вирионов РВ в
течение 1 ч при 50°С. РВ высокорезистентны к протеазам. В отличие от реовирусов интакт-
ные вирионы РВ устойчивы к химотрипсину. Полевые штаммы-изоляты (Cody и Lincoln)
вируса сохраняют свои свойства в течение нескольких месяцев при -60°С и менее 30 дн при
4°С. Оба изолята стабильны при pH 3, резистентны к прогреванию, но погибают при 50°С
за 1 ч в присутствии 1 М MgCl2. 10% формалин, 5% лизол инактивируют вирус за 2 ч.
Морфология и химический состав. Изучены недостаточно. Описаны частицы РВ 2-х
типов, вызывающие диарею у телят: частицы плотностью 1,38 г/см3, диаметром 55±0,4 нм и
частицы плотностью 1,36 г/см3, диаметром 66±0,4 нм. Частицы обоих типов содержат 2 ос-
новных полипептида с мол.м. 1,3• 105Д и 4,4-Ю4 Д. Частицы вируса диаметром 66 нм содер-
жат ещё один полипептид с мол.м. 6,3-104 Д, который не обнаружен в частицах вируса диа-
метром 55 нм. У частиц обоих типов минорные полипептиды 1 и 3 идентичны. Более высо-
кий уровень инфекционности у частиц вируса диаметром 66 нм связан с внешней оболочкой
капсида и дополнительным (белок 4) полипептидом. Размножение РВ не ингибируется 5-
йод-2-дезоксиуридином.
Антигенная структура, вариабельность и родство. Вирус, выделенный из фекалий
больных диареей телят, был первым этиологическим агентом диареи неонатальных телят.
Изучение морфологии, частичная характеристика нуклеиновой кислоты очищенного вируса,
отсутствие чувствительности к липидным растворителям и поведение в культуре клеток по-
44
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
зволило предположить, что вирус относится к группе вирусов, содержащих 2-нитевую РНК,
куда включены реовирусы 3-х типов и вирус блутанга. Однако он серологически не связан с
реовирусами 1, 2 и 3-го типов. В АГ отношении РВ телят и человека очень близки, но не
идентичны. Обнаружена общность группоспецифических и типоспецифических АГ РВ телят
и человека.
АТ к РВ телят реагируют с внутренним и не реагируют с внешним капсидным слоем РВ
человека. Однако сыворотки детей, переболевших гастроэнтеритом, реагируют с обоими
слоями капсида РВ человека и телят. Это позволило предположить, что 2 капсидных слоя
отличаются друг от друга: АГ внутреннего слоя - групповые АГ, общие для ротавирусов те-
лят, мышей человека, в то время как АГ наружного слоя - типо- или видоспецифические. У
54% детей, больных гастроэнтеритом, в начале заболевания в фекалиях найдены РВ, кото-
рые оказались серологически родственны аналогичным вирусам телят.
Геном РВ состоит из 11 фрагментов 2-спиральной РНК с мол.м. 0,2-2,2 МД. РВ КРС
присуща значительная вариабельность вирулентности и антигенности. Известны 3 серотипа
возбудителя и, кроме того, у КРС выявлены АТ к 3-м серотипам РВ человека (25). Кроме
существования 3-х серотипов вируса не исключается возможность циркуляции атипичных
РВ (параротавирусов РВ 86) (29), что значительно затрудняет решение и без того сложной
проблемы специфической профилактики ротавирусной диареи телят. Иногда выделенные от
одних и тех же телят штаммы отличались между собой. Это результат реинфицирования од-
них и тех же телят различными штаммами или это связано с АГ дрейфом вируса (10). В
1990 г. в ФРГ выделен изолят РВ КРС серологически отличный от референтных штаммов 1,
2, 3, 4, 5, 6, 8 и 9, но он давал перекрестную нейтрализацию с прототипиыми шт. В223 и
Е4049 и был отнесен к серотипу 10 (8, 9). АГ специфичность связана с полипептидами на-
ружного капсида. Белок VP7 является основным протективным АГ РВ КРС, ответственным
за образование ВНА. До сих пор не выяснено, играет ли гликопротеин VP7 РВ такую же
роль, как отдельные белки вирусов гриппа, ответственные за АГ “дрейф” (16,18,19).
В процессе персистентной инфекции (13) заражение разными серотипами РВ КРС не
сопровождается перекрестной защитой. Проводили вирусологическое наблюдение за теля-
тами с признаками диареи, вызванной РВ КРС на закрытой молочной ферме. Вирус выде-
ляли из 32 образцов (всего исследовано 219) фекалий от телят преимущественно 2-6-нед
возраста за период 1992-1993 гг. При электрофоретическом анализе 2-цепочечных геном-
ных РНК вируса 32 штаммов картина их миграции была сходной с таковой у преобладаю-
щих штаммов РВ КРС, выделенных на этой же ферме в 1990-1991 гг. С помощью тестов
нейтрализации вируса и ПЦР все штаммы идентифицированы как серотип G6 и Р5. Таким
образом, электрофоретическая характеристика геномной РНК и АГ-свойства РВ КРС не из-
менились за период (1990-93 гг.) циркуляции в изолированном молочном стаде (14). Однако
РВ КРС является серологически родственными с РВ человека лишь по групповой АГ детер-
минанте и индуцирует выработку, в основном, видоспецифических ВНА, естественно мало-
эффективных для нейтрализации РВ человека (3, 26). Этим, в частности, можно объяснить
относительно невысокую эффективность вакцины на основании РВ КРС при иммунизации
детей раннего возраста (30,31).
В 1974 г. впервые была показана серологическая связь между РВ телят и человека. Они
имеют общий АГ, выявляемый в РСК, установлено родство РВ телят, свиней, жеребят и
кроликов (в РСК, РИФ и РДП) (22, 21). Группоспецифические АГ этих вирусов локализова-
ны во внутреннем капсиде РВ. Получен реассоргант первого типа РВ КРС WC-3, шт. W179-
9, который индуцировал политипичный АТ ответ у детей раннего возраста (11).
Локализация вируса. Помимо тонкого кишечника, РВ обнаруживают в легких и ме-
зентериальных лимфоузлах больных телят. Вирус поражает цилиндрические эпителиальные
клетки ворсинок тонкого кишечника, размножаясь в эндоплазматической сети этих клеток и
45
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
вызывая их гибель и десквамацию. Отмершие клетки заменяются неинфицированными ку-
бическими клетками из крипт. Эти клетки не имеют рецепторов к РВ. Пораженные вирусом
эпителиальные клетки выделяются с фекалиями в первые 4-5 ч от начала диареи, вирус
обычно выделяется с фекалиями в течение 23 дн, а у животных диарея обычно длится на 3-7
дн дольше, чем выделяется вирус во внешнюю среду. При естественной инфекции среди но-
ворожденных удается выделить вирус из фекалий клинически здоровых телят через 30-40 дн
после болезни. Методом ВИЭФ обнаружен ротавирусный АГ в фекалиях клинически здоро-
вых телят в возрасте от 6 нед до 3-х мес. Есть сообщение о выявлении комплексов PB-Ig у
здоровых животных, что указывает на субклиническую форму инфекции, и иа то, что такие
животные могут быть источником заражения новорожденных телят (4, 5).
Антигенная активность. В организме, пораженном РВ, главную роль играют АТ,
продуцируемые слизистой оболочкой кишечника. В опытах на безмолозивных телятах с
фистулами тощей кишки показано, что в ней АТ появляются между 3-м и 12-м дн, а в фека-
лиях - между 4-м и 18-м дн после инфицирования телят РВ. АТ в фекалиях телят выявляли
в период от 25 до 58 дн после заражения. Реинфекция их через 5-70 ди после первичной ин-
фекции обычно приводила к вторичному иммунному ответу.
У разных телят наблюдается значительное различие в сроках и количестве продукции
кишечных АТ. В жидкости из тощей кишки выявляли АТ классов IgA, IgG и IgM. У боль-
шинства больных телят преобладали IgG. У телят, зараженных per os в возрасте 8-10 дн,
вирус обнаруживали в фекалиях 1-3 дн. Интересно, что АТ появлялись в тонком кишечнике
на 2-12-й день, т е. раньше, чем в фекалиях (на 4-8-й день). Из фекалий они исчезали через
30-60 дн. Вследствие кратковременной секреции АТ в кишечнике возможности локальной
(per os) иммунизации ограничены. РВ-АТ выявлены и в секретах молочной железы; они
также принадлежали к IgG и в меньшей степени к IgG 2, IgA и IgM, а в сыворотке крови по-
сле иммунизации коров живой культуральной вакциной они распределялись между IgG и
IgG 2. Показано, что в ответ на экспериментальное заражение и прививку живой вакциной
первыми выявлялись АТ класса IgM, которые в дальнейшем всегда заменялись АТ класса
IgG. Во время проявления клинического симптома диареи у больных телят в тонком кишеч-
нике и крови выявлялся интерферон. РВ не вызывают внутриутробной инфекции, но имму-
ноглобулины могут пассивно передаваться плоду через неповрежденную плаценту, поэтому
антитела против ротавирусного белка обнаружены в сыворотках эмбриона КРС.
Антигенная структура. Все РВ имеют общий внутренний АГ, выявляемый в РСК,
ИФ, РДП и иммуноэлектронной микроскопией.
Культивирование. РВ КРС размножается в культуре клеток (вначале первичной куль-
туре клеток трахеи эмбриона КРС). Вирус вызывает специфическое ЦПД во вторичной
культуре ПЭК через 3-7 дн после заражения. При высокой множественности заражения вы-
зывает появление очагов серповидных клеток без разрушения клеточного монослоя. Снача-
ла в клетках монослоя появляются мелкие гранулы, которые постепенно увеличиваются в
размере. Поражённые клетки не отделяются от стенок пробирок. Инфекционный титр виру-
са (шт.Линкольн) в 2-6-сут культуре 3,5-4,2 1g ТЦД50/0,1 мл. При низкой множественности
заражения изменения заражённой культуры ничем не отличаются от изменений, наблюдае-
мых при старении незаражённых культур. Поэтому для обнаружения вируса в заражённой
культуре используется прямой метод ИФ.
Недавно показано, что данный вирус размножается в первичной культуре почек обезьян
(макак-резус и зелёных мартышек) и однодневных поросят. К РВ (изоляту Cody) нечувстви-
тельны перевиваемые клетки почки хомяков ВНК, VERO, Lik-MK.2, HeLa и кишечника. В
культуре клеток почки эмбриона КРС к 18 ч титр клеточно ассоциированного РВ достигал
максимальной величины и оставался высоким до наступления следующего цикла размноже-
ния. Циклы репродукции рео- и ротавирусов были сходны.
46
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Интерферон вырабатывался клетками, заражёнными вирусом, обработанным УФ луча-
ми и активным вирусом. При 56°С активность интерферона несколько снижалась в течение
2 ч, исчезала при pH 12,5 в течение 48 ч.
Помимо первичных культур РВ КРС культивируют в перевиваемых клетках почки те-
лят, МДВК, L, Vero, Ма-104 при 37°С в течение 7 дн. Перевиваемые культуры клеток МА-
104, ZZC-MK2 (BSC-1 и CV-1) и Madin-Darby оказались высокочувствительными к РВ
КРС. К вирусу (изоляту Cody) нечувствительны перевиваемые клетки почки хомяков ВНК,
Lie-MK.2 и HeLa. При культивировании РВ лучшие результаты получают при добавлении в
поддерживающую среду трипсина 5-10 мкг/мл. Полагают, что действие трипсина состоит в
диспергировании вирусных агрегатов, повышении проницаемости клеточных мембран, а
также инактивации интерферона. В составе вирионов происходит протеолитическое расще-
пление крупного полипептида VP3 на два полипептида VP5 и VP8 и повышение инфекци-
онности самого вируса. Кроме того, при обработке РВ КРС трипсином в концентрации 1
мкг/мл титр его возрастает почти в 45 раз. Для всех РВ обработка трипсином неочищенных
или высокоочищенных препаратов вируса приводит к увеличению инфекционное™ (в сред-
нем в 4,2 раза). Показана способность бляшкообразования РВ КРС в клетках BSG-1 при до-
бавлении в агаровую среду 4-10 мкг/мл трипсина и 25 мкг/мл ДЕАЕ-декстрана. В отсутст-
вии трипсина бляшки не образуются. Шт. BSG-1 и CV-1 в присутствии 5 мкг/мл трипсина
образуют бляшки, которые более четко конгурируются при введении в покрытие 4%-ой
нормальной куриной сыворотки. Размер бляшек может служить маркером для аттенуиро-
ванных штаммов и титрования их. РВ КРС различаются не только по РНК-сегментам и
РТГА, но и по размеру бляшек, индуцируемых в культуре клеток (23).
При этом клетки культуры ткани в присутствии сыворотки кур не отслаивались под дей-
ствием трипсина. Описана дифференциация 2-х серологически родственных штаммов РВ
телят: UK и NJ - по морфологии бляшек в культуре диплоидной линии клеток почки теленка
и в PH (27а). Размножение вируса в клетках СПЭВ сопровождается слабым ЦПД. Реплика-
ция вируса в роллерной и стационарной культурах зависит от наличия трипсина в питатель-
ной среде. В роллерной культуре титр вируса был в 100 раз выше, чем в стационарной (2).
При длительном пассировании РВ nrr.Reims 18/77 в культуре почечных клеток в присутст-
вии специфических АТ получен АГ измененный вариант. Видимо, подобный дрейф может
происходить и в естественных условиях под воздействием АТ, содержащихся в молозиве.
Гемагглютинирующие свойства. Обусловлены наличием ГА на поверхности интакт-
ных вирионов. Гемагглютинация не происходит с вирионами, у которых отсутствует внеш-
ний капсидный слой. ГА нестабилен, при 22°С его активность за 24 ч снижается на 50%,
при 45°С он инактивируется за 2 мин. С эритроцитами морской свинки ГА-тнтр вируса дос-
тигает 1:64. Было показано, что этот вирус агглютинирует эритроциты 0 группы человека в
разведении 1:256. Однако штаммы РВ, выделенные от больных диареей телят в Англии, не
агглютинировали эритроциты морской свинки и человека.
Гемадсорбирующие свойства - не установлены. У новорожденных телят заражение РВ
сопровождается продукцией интерферона.
Экспериментальная инфекция. У телят-гнотобиотов, заражённых РВ (per os), через
12-14 ч наблюдают депрессию, анорексию, диарею. Если в жидких фекалиях не было E.coli,
телёнок через 24 ч выздоравливал, а при наличии E.coli 50% телят погибало. В естествен-
ных условиях РВИ у телят протекает гораздо тяжелее, чем при эспериментальном зараже-
нии. Вирус в фекалиях появляется через 1-2 дня после заражения и выделяется в течение
месяца. ВНА обнаруживаются в крови на 7-й день и достигают максимума через 4 нед после
заражения (17). Клинически выраженную болезнь удается воспроизвести на телятах, сво-
бодных от специфических патогенных агентов, и на телятах-гнотобиотах, не получающих
молозива. Для заражения используют фекалии, очищенные ультрацентрифугированием и
47
Глава1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
проверенные под электронным микроскопом на присутствие вирионов РВ. У телят-
гнотобиотов, зараженных РВ (per os), через 12-24 ч наблюдают депрессию, анорексию, диа-
рею. Если в жидких фекалиях не находят E.coli, то теленок обычно через 24 ч выздоравли-
вает, при наличии E.coli до 50% телят погибают.
После экспериментального заражения вирус размножается преимущественно в эндо-
плазматическом ретикулуме, а вирусный АГ обнаруживается в эпителиальных клетках тон-
кого кишечника (замороженные срезы) или в фекальных смывах методом ИФ. Вирионы
обычно обнаруживают в эндоплазматических скоплениях высоких бокаловидных эпители-
альных клеток сегментов кишечника. Ультраструктурные изменения клеток отмечают ред-
ко. Макрофаги, содержащие вирионы, обнаруживают только в тощей кишке телят 5-6 и 10
дн возраста. Новорожденные телята оказались чувствительны и к РВ кроликов. Они в воз-
расте 4-5 нед заболевают и погибают (4, 5). В 1974 г. впервые была показана серологиче-
ская связь между РВ телят и человека. Они имеют общий АГ, выявляемый в РСК, установ-
лено родство РВ телят, свиней, жеребят и кроликов (в РСК, РИФ и РДП). Группоспецифи-
ческие АГ этих вирусов локализованы во внутреннем капсиде РВ (30,31). РВ КРС WC3, шт.
W179-9 индуцировал политипический АТ ответ у детей раннего возраста (4).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Основной источник инфекции - больные теля-
та, выделяющие с фекалиями вирус. Однако последний удается обнаружить и в фекалиях
клинически здоровых телят. Заражение телят РВ происходит вскоре после рождения. Важ-
ное эпизоотологическое значение придается фактам обнаружения РВ в фекалиях клинически
здоровых телят, а также способности вируса поражать значительное число гетерологичных
хозяев (широкий спектр естественной патогенности). Мягкие сыры, изготовленные из сыро-
го или прогретого коровьего молока, могут содержать РВ КРС. РВ телят вызывает диарею у
поросят; РВ жеребят и ягнят размножается у свиней, последние могут явиться источником
заражения телят. АТ к нуклеокапсиду РВ телят обнаружены в сыворотках крови собак, ко-
шек и лошадей.
В распространении РВ существенную роль могут играть собаки, кошки и даже дикие
жвачные, например краснохвостые олени. Концентрация вируса в фекалиях может дости-
гать Ю10-Ю12 частиц/мл. В персистенции РВ в стаде важное значение имеет повторное ин-
фицирование взрослых животных от телят (4, 5).
Основной путь заражения - алиментарный. Передача осуществляется путем прямого
контакта, а также через инфицированные предметы ухода. Считают, что возможно внутри-
утробное заражение плода в результате проникновения вируса через плаценту. Одиако, по
другим данным, наоборот, РВ не проникает через плаценту, тогда как иммуноглобулины
пассивно передаются через нее.
Спектр патогенности в естественных условиях. РВ, выделенные от телят, патогенны
и для поросят. Была воспроизведена диарея у телят-гнотобиотов путем заражения их РВ че-
ловека. О спектре патогенности РВ КРС можно косвенно судить по выявлению ВНА у раз-
личных видов животных. Так, например, из 288 сывороток, взятых в разных районах Япо-
нии в 1975-77 гг., исследованных на наличие ВНА к шт. Линкольн РВ, в титре 1:2 или выше
АТ к бычьему РВ были найдены у всех видов животных. Частота положительных находок у
каждого вида в отдельности колебалась от 30 до 100%. Высокие титры АТ (до 1:250) харак-
терны для лошадей, овец, свиней и телят (24).
ДИАГНОСТИКА
На основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных ста-
вят лишь предварительный диагноз, окончательный устанавливают лишь лабораторными
методами. Последние базируются на обнаружении вируса или вирусного АГ в фекалиях
больных телят, содержимом кишечника, клетках слизистой оболочки тонкого кишечника
48
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
павших и вынужденно убитых животных, а также на выявлении АТ к РВ в сыворотках кро-
ви больных и переболевших телят и в сыворотках крови и молозиве коров-матерей.
Экспресс-методы диагностики. Разработана тест-система ИФА иа основе РВ свиней
при выявлении специфического АГ РВ КРС, которая обладает высокой чувствительностью и
специфичностью. Её целесообразно применять в лабораторных условиях для экспресс-
диагностики. Поскольку полипептид VP5 содержит перекрестный групповой АГ, локализо-
ванный в консервативном домене, который является общим для всех РВ группы А (2а). По-
казана возможность индикации рота- и коронавирусов методом флюоресцентных зондов и
АТ к ним. Он основан на регистрации ранних этапов взаимодействия вирусов с рецептора-
ми клеток (1а).
Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют не менее 10 проб
жидких фекалий, тонкий кишечник с содержимым (не позднее 2-3 ч с момента гибели или
вынужденного убоя телят), 10-15 проб парных сывороток больных и переболевших живот-
ных, 6-10 проб сыворотки крови коров и 6-10 проб молозива. С наибольшим постоянством
вирус удается обнаружить в пробах фекалий, взятых в первые дни болезни, поэтому для ис-
следования пригодны фекалии, взятые от 2-14-дн телят с клиническими признаками диареи
на 1-3-й день болезни. Сразу же после доставки в лабораторию пробы обрабатывают или
хранят при 4°С не более суток, при -20-50°С до 1 мес. Сыворотки крови хранят при 4-10°С
не более 1 нед, при -20°С до 1 мес; молозиво - при 4°С не более 2 сут, при -20°С - до 1 мес.
Для вирусологических или электронно-микроскопических исследований готовят 10%-ную
суспензию фекалий на р-ре Хенкса. Суспензию гомогенизируют и центрифугируют 1 ч при
3 тыс. об/мин, надосадочную жидкость переносят в стерильный флакон, добавляют пени-
циллин и стрептомицин (по 1000 ЕД/мл), выдерживают 10-12 ч (ночь) при 4°С и исследуют.
Выделение РВ в культуре клеток. Показана корреляция между заболеванием новоро-
жденных телят диареей с присутствием РВ АГ в фекалиях. Следует иметь в виду, что обыч-
ными методами вирус не культивируется, а применение дополнительных воздействий - хи-
мических (трипсин) и физических (центрифугирование вируса на слое клеток) - дает поло-
жительные результаты при высоких концентрациях вируса в фекалиях, что проверяется
электронной микроскопией. Для этого содержимое одной пробирки после замораживания и
оттаивания и обработки полиэтиленгликолем ресуспендируют в 0,1 мл дистиллированной
воды и исследуют в электронном микроскопе. В положительном случае обнаруживают ти-
пичные частицы РВ и их скопления. Специфический характер частиц подтверждают мето-
дом иммуноэлектрон ной микроскопии.
Индикация и идентификация вируса
ЭМ и ИЭМ. Метод электронной микроскопии (ЭМ) суспензии вируса из жидкой части
фекалий наиболее широко применяется для диагностики инфекции при концентрации виру-
са в фекалиях не ниже 104-105 частиц/мл жидкости. Препараты готовят из осветленной низ-
ким центрифугированием жидкой части фекалий. Однако лучшие препараты получают при
разведении фекалий дистиллированной водой 1:1-1:10 и последующем осветлении суспен-
зии центрифугированием при 4-10 тыс. об/мин в течение 15 мин. Простой метод приготов-
ления препаратов из фекалий, не уступающий по чувствительности ультрацентрифугирова-
нию, состоит в следующем. К 4 мл осветленной низким центрифугированием жидкой части
фекалий добавляют 60% насыщенного р-ра (NH^SQt, смешивают, оставляют на 1 ч при
4°С, а затем центрифугируют 10 мин при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а
осадок ресуспендируют в 4-х каплях дистиллированной воды и готовят препараты. Сущест-
вуют различные способы и модификации приготовления препаратов из. Наиболее широко
используется капельный способ.
Более целесообразно применять ИЭМ. Для этого можно использовать сыворотку лабо-
раторных животных (кроликов, морских свинок), иммунизированных РВ обезьян (SA 11),
4 Зак. № 171
49
Глава!. FamilyReoviridae Реовирусныеинфекции
или сыворотку реконвалесцентов. Содержание и специфичность АТ в сыворотках реконва-
лесцентов могут быть проверены в серологических реакциях с использованием вируса SA
11. При обработке фекальной суспензии иммунной сывороткой одновременно с обнаруже-
нием типичных частиц РВ устанавливается их специфичность, на что указывает выявление
агрегатов, в которых РВ частицы связаны специфическими иммунными глобулинами. Чаще
используют три модификации иммуноэлектрониой микроскопии (4).
При положительном результате РВ частицы выявляются в препаратах в виде специфи-
ческих скоплений (иммунных комплексов). Оценку специфичности реакции проводят путем
подсчета числа и размеров подобных скоплений, а также по степени покрытия отдельных
вирионов АТ сыворотки. Выраженность этого эффекта при определенном навыке можно
оценивать по шкале условных единиц от 0 до 4-х плюсов.
ИФ. Для обнаружения вирусного АГ в замороженных срезах тонкого кишечника, маз-
ках фекалий и культуре клеток успешно применяют прямой и непрямой методы. При иссле-
довании криосрезов кишечника и мазков из фекалий телят лучшие результаты получают в
течение 4-6 ч после обнаружения признаков диареи. Эпителиальные клетки быстро десква-
мируются с поверхности ворсинок кишечника и удаляются с фекальными массами. Чаще
всего суспензией фекалий заражают культуру клеток и идентифицируют вирусный АГ в ре-
акции ИФ. Разработан прямой метод ИФ в клетках МДВК, инфицированных культураль-
ным или фекальным вирусным материалом (4, 5). В методических рекомендациях по инди-
кации РВ КРС непрямым методом ИФ предусматривается использование диагностического
набора, включающего антиген специфический - культуральную вируссодержашую суспен-
зию клеток ПЭК или МА-104; АГ нормальный - неинфицированную суспензию клеток ПЭК
или МА-104; специфическую сыворотку, полученную путем гипериммунизации телят, лабо-
раторных животных; нормальную сыворотку от здорового КРС, не содержащую АТ к РВ;
антивидовую сыворотку против глобулинов КРС, конъюгированную ФИТЦ (выпускает Ин-
ститут эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи). НИФ можно использовать для
обнаружения и идентификации РВ АГ в инфицированных культурах клеток, фекалиях и ки-
шечнике больных и павших телят для выявления и количественной оценки АТ к РВ.
РДП. Эго - простой и доступный метод выявления РВ АГ в фекалиях больных телят,
содержимом кишечника и суспензии слизистой оболочки кишечника павших или вынуж-
денно убитых телят. Для этого 20%-ную суспензию фекалий в фосфатно-буферном солевом
р-ре прогревают в водяной бане при 37°С 30 мин, периодически перемешивая. Затем цен-
трифугируют 15 мин при 8000 g. Надосадочную жидкость фильтруют через фильтр “Милли
пор” и фильтрат концентрируют в 25 раз при помощи диализного концентратора. В резуль-
тате всех этапов обработки 0,2 мл концентрата соответствует 1 г исходного материала фека-
лий. Источником специфических АТ служат сыворотки реконвалесцентов после ротавирус-
ного гастроэнтерита, предварительно проверенные в других серологических реакциях.
РДП проводят в геле агарозы на стеклянных пластинках [0,9% агарозы в буферном р-ре,
содержащем 0,1 М NaCl, 0,01 М трис(гидроксиметил)-аминометана и 0,001 М этилевдиа-
минтетраацетата]. Компоненты реакции помещают в вырезанные в слое агарозы лунки диа-
метром 3 мм, отстоящие друг от друга на 3 мм. Пластинки с гелем выдерживают в течение
ночи при комнатной температуре, после чего учитывают результаты. Меящу лунками с АГ и
АТ в положительных случаях формируется одна четкая линия преципитации. В РДП испы-
тывается АГ - жидкая часть фекалий или надосадочная жидкость после центрифугирования
суспензии фекалий или кишечника, испытуемая сыворотка от переболевших телят, молози-
во и молоко в натуральном виде (в виде сыворотки) после обработки сычужным ферментом.
Реакция иммунопреципитации с окрашиванием преципитатов флюоресцирующими АТ
может применяться для обнаружения в фекалиях РВ человека и РВ диареи телят. Разрабо-
тана ее ускоренная модификация (5). Диагностикум, включающий специфический и нор-
50
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
мальный АГ, специфическую сыворотку, готовят по методике ВИЭВ, а в качестве нормаль-
ной сыворотки используют фетальную сыворотку или сыворотку безмолознвных телят. Ре-
акцию оценивают по образованию характерных линий преципитата.
РСК. Для выявления АГ применяется реже других методов. Она менее чувствительна,
чем электронная микроскопия и РИФ, чаще дает ложноположительные результаты нз-за ан-
тикомплементарносги многих проб фекалий. Однако при обработке фекалий комплементом,
фетальной сывороткой, фреоном, очисткой ПЭГ 6000 или ультрацентрифугированнем, РСК
не уступает по чувствительности электронной микроскопии. Реакцию ставят микрометодом
со специфической сывороткой или сывороткой недавно переболевших телят, свободной от
АТ к другим вирусам.
ВИЭФ. При этой реакции образуется линия преципитации меяоду АГ, движущимся к
аноду, и АТ, движущимся к катоду. Качество и чистота агарозы являются основным факто-
ром получения воспроизводимых результатов. Большинство исследователей считают, что
этот тест не уступает электронной микроскопии или даже превосходит ее (4).
ВИЭФ предложен для обнаружения РВ в фекалиях и патологическом материале и для
выявления АТ в сыворотках крови. Для исследования берут жидкую часть фекалий. Если
для исследования жидкой части недостаточно, то пробы фекалий центрифугируют 10-15
мин при 4 тыс. об/мин при 4-10°С. Исследуют надосадочную жидкость. Кишечник мелко
измельчают, добавляют равный объем физиологического р-ра, затем гомогенизируют в
ступке со стеклом, центрифугируют 10-15 мин при 2 тыс. об/мин при 4-10°С. Надосадочную
жидкость используют в реакции. ВИЭФ ставят в 0,85%-ом р-ре агарозы, приготовленной на
0,5 М веронал-мединаловом буфере (pH 8,6) (4).
ELISA. По чувствительности выше, чем ЭИ, ИФ, РСК, ВИЭФ. Может быть использо-
ван в прямом и непрямом вариантах, а также в постановке на латексе. С помощью ELISA
можно обнаружить РВ в фекалиях телят при разведении исследуемой пробы до 1:5000. Опи-
сан твердофазный ELISA для типирования и деления на подгруппы РВ человека и живот-
ных. Для этого используют IgG в концентрации 5 мкг/мл; разведение кроличьей антисыво-
ротки к IgG КРС до 1:400. Продолжительность инкубации IgG -4 ч, реакции АГ РВ с IgG -
3 ч, реакции антисыворотки к РВ с комплексом IgG - РВ АГ -16 ч, для соединения с конъю-
гатом -4 ч, для изменения цвета субстрата (фосфата Р-нитрофенила) - 10 мни. Перед иссле-
дованием фекалии телят разводят в 4 раза фосфатно-буферным р-ром, осветляют центрифу-
гированием и обрабатывают смесью Твина-20 с азидом натрия. Показания ELISA в 100%
случаев совпадают с результатами электронной микроскопии.
Разработана тест-система ИФА на основе РВ свиней для выявления специфического АГ
РВ КРС, которая обладает высокой чувствительностью и специфичностью (2). В Российской
Федерации разработан иммуноферментный диагностикум, выпускаемый ВИЭВ. Набор
включает: специфический лиофилизированный РВ АГ - вируссодержащая суспензия, полу-
ченная на культуре клеток МА-104, концентрированная ПЭГ 6000 и центрифугированная
при 6000g; контрольный АГ, лиофилизированная специфическая антиротавирусная сыво-
ротка, полученная путем гипериммунизации телят или кроликов вирусом, очищенным в
градиенте плотности хлористого рубидия; сухие иммуноглобулины, выделенные из гипе-
риммунной антиротавирусной сыворотки методом высаливания насыщенным р-ром
(NR|)2SO4 с последующей ионообменной хроматографией на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой.
Существует ряд других методов для выявления РВ АГ в фекалиях больных диареей те-
лят: реакция обратной пассивной гемагглютинации, метод иммуноагрегатной ГА, реакция
агглютинации латекса и др. Так, предложен простой стафилококковый метод для обнаруже-
ния РВ в фекалиях новорожденных телят с использованием кроличьей сыворотки к РВ те-
лят. Метод основан на обнаружении РВ агглютинирующего стафилококка в 10%-ой суспен-
зии образцов фекалий на предметных стеклах с золотистым стафилококком, нагруженным
51
4*
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
РВ АТ. Контролем служат стафилококки, обработанные неиммунной кроличьей сывороткой.
Агглютинация видна под микроскопом через 2-3 мин после кругового покачивания стекла.
Во избежание неспецифических реакций, проводят предварительную обработку образцов
фекалий нагреванием, фильтрацией и N-ацетилцистеином. Такая обработка не снижает спе-
цифичности метода. В сравнении с ELISA данный метод оказался чувствительнее; преиму-
щества его - скорость, простота и низкая стоимость, что очень важно для скрининга боль-
шого числа образцов фекалий.
Метод агглютинации латекса с использованием коммерческого набора Rotalex для вы-
явления РВ в фекалиях больных столь же специфичен, чувствителен, как и методы элек-
тронной микроскопии, ИФ и ELISA. Для дифференциации подгрупп и серотипов изолятов
РВ описан метод гибридизации нуклеиновых кислот, электрофорез в ПААТ вирионной РНК
вирусов. Метод точечной гибридизации высоко специфичен, позволяет выявлять 8 нг ви-
русной РНК ив 10-100 раз более чувствителен, чем ELISA (4).
Вариантная идентификация с помощью монАТ. Получены монАТ к шт. RIT4237
(серотип I) РВ КРС. Нейтрализация АГ выявила вариабельную специфичность к групповым
и подгрупповым детерминантам. Использованием монАТ против субгрупповых АГ в ELISA
было установлено доминирование серотипа II РВ человека в пробах кала больных детей.
Наличие таких АТ увеличивает чувствительность и специфичность тест-систем.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Серологическое исследование сывороток крови телят имеет весьма ограниченную цен-
ность. В течение первых недель жизни не удается обнаружить прироста АТ, несмотря на
прошедшую болезнь. Уровень гуморальных АТ у взрослых животных не позволяет прогно-
зировать возникновение эпизоотии в стаде.
РСК. Для диагностики РВИ показана возможность постановки РСК с парными сыво-
ротками переболевших животных. В первые дни болезни КСА у большинства животных от-
сутствуют. К 7-10 дню уровень их возрастает, достигая максимума к 21 дню, затем проис-
ходит снижение, и к 30-35 дню титр КСА доходит до нуля. РСК ставят общепринятым ме-
тодом в микро- и макрообъемах.
РТГА. Ставят по стандартной методике, используемой диагностическими вирусологи-
ческими лабораториями. Применяют стеклянные пробирки и обычные объемы реагентов
или одноразовые пластиковые панели с лунками и микрообъемы реагентов (4). Для поста-
новки реакции используют эритроциты человека группы О или эритроциты морской свинки.
Исследуемые сыворотки обрабатывают каолином и эритроцитарной массой (последнее - при
использовании эритроцитов человека). Все разведения готовят на физиологическом солевом
р-ре с добавлением 0,04 % альбумина сыворотки КРС.
Непрямая ИФ, PH, радиоиммунологический метод ставятся по общепринятым ме-
тодикам (4, 5).
Дифференциальная диагностика. РВИ у новорожденных телят следует дифференци-
ровать от коронавирусной инфекции, колибактериоза. Необходимо исключать диспепсию
новорожденных телят алиментарного происхождения. Для титрования вирусов группы А
разработаны методы дот- и блот-гибридизации РНК с зондами к ДНК геномного сегмента 4,
полученными с помощью амплификации в ПЦР гипердивергентных областей гена белка
VP4 (нуклеотиды 211-686) к ДНК шт. ИК, IND, NCDV и Сг с использованием олигонуклео-
тидных праймеров. Зонды 3 типоспецифичны (VP4) и не реагируют перекрестно с 2-
нитевыми РНК гетерологичных P-типов РВ (20).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Наряду с системным иммунным ответом при РВ диарее телят важную роль играет мест-
ный кишечный иммунитет. АТ в тощей кишке появляются через 3-12 дн, а в фекалиях через
4-18 дн после инфицирования телят РВ. В содержимом тощей кишки выявляют АТ классов
52
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
IgA, IgG, IgM. У большинства телят преобладали АТ типа IgGl. Предполагают, что иммун-
ная система КРС распознает нейтрализующие АГ, общие для разных РВ. Например, по-
вторная иммунизация коров одним из 4-х серотипов РВ, РВ обезьян или КРС ведет к индук-
ции нейтрализующей активности против всех указанных РВ. При этом отмечается повыше-
ние в 10-100 раз нейтрализующей РВ активности в молоке в первые 8 дн (За). Молоко гипе-
риммунизированных коров, может быть использовано для пассивной пероральной иммуни-
зации детей (7). Гомо- и гетерологическая защита телят представляется более надежной, чем
вакцинация самих телят. Кормление телят молозивом от матерей, ранее иммунизированных
инактивированной вакциной, может предотвращать появление диареи новорожденных. Титр
капро АТ существенно повышается после заражения телят вторым вирусом. Высказано
предположение, что перекрестная защитная активность разных штаммов (серотипов) РВ у
телят обусловлена не ВНА, а другими не выясненными факторами (32). Специфическая
профилактика РВИ КРС находится в стадии разработки и испытания. Создаются и прове-
ряются живые и инактивированные вакцины; предпочтение, как правило, отдается разра-
ботке инактивированных вакцин и способам их применения. Эмульгированную инактиви-
рованную формолвакцину вводят коровам 2-кратно в область подгрудка по 10 мл за месяц
до отела и перед самым отелом. Скармливание иммунного молока новорожденным телятам
оказывает заметный защитный эффект (28). Комбинированную вакцину готовят из рота- и
коронавирусов КРС, инактивированных БПЛ, и вводят коровам подкожно дважды по 5,0
мл. Вакцинация сопровождалась нарастанием титра сывороточных АТ, который достигал
максимума через 3-4 нед после неё, а затем постепенно снижался. Живую вакцину из атте-
нуированных штаммов рота- и коронавирусов КРС вводят стельным коровам в заднюю чет-
верть вымени в дозе 2 мл. У родившихся от них телят в 2 и более раз снижались случаи и
продолжительность диареи по сравнению с контрольными группами животных. Вакцинация
телят в суточном возрасте дала сходные результаты (За).
Иммунопрофилактика основана на вакцинации коров, причем необходимо стимулиро-
вать высокое, продолжающееся свыше 3-5 дн, выделение с молоком специфических АТ.
Механизм защиты основан на постоянном присутствии молочных АТ в кишечнике новоро-
жденных, которые нейтрализуют РВ в просвете тонкого кишечника. Рекомендуется консер-
вирование молозива глубоким замораживанием и скармливание его телятам в первые неде-
ли жизни. В комбинации со специфической активной пероральной прививкой против E.coli
этот метод является оптимальным, хотя и не вполне удовлетворительным способом профи-
лактики диареи новорожденных телят. Почти все коровы выделяют специфичные АТ к РВ с
молозивом, но не установлена связь между исходным титром колостральных АТ против РВ
и развитием связанной с РВ диареей у телят.
С целью профилактики диареи, вызванной РВ, стельных коров вакцинируют в конце су-
хостойного периода, что обеспечивает высокую концентрацию АТ в организме новорожден-
ных телят, хотя высказано выше, что циркулирующие в крови АТ сами по себе несущест-
венны в защите телят против РВ. По мнению ряда авторов вирус, выделенный от новорож-
денных телят и с ассимптоматической инфекцией, может быть естественно аттенуирован и
пригоден для иммунизации (12). Во Франции применяется комбинированная инактивиро-
ванная p-пропиолактоновая вакцина против рота- и коронавирусной инфекции. В Болгарии
применяют бивалентную вакцину против рота- и коронавирусной инфекции телят Ро Ко-81
из местных штаммов, адаптированных к культуре клеток. Телята, инфицированные сероти-
пами I или 11 бычьего РВ, не приобретают перекрестной защиты к гетерологичным бычьим
РВ и могут заболеть вторично.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета ие разработана. В небла-
гополучном по инфекции стаде или при иммунизации стельных коров АТ содержатся в мо-
лозиве в высоких титрах в 1-й день отела, а затем резко снижаются и исчезают к 4-6 дню.
53
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Данные о роли пассивных АТ при РВИ КРС весьма противоречивы. Новорожденные телята
имеют в сыворотке АТ к РВ, хотя из их фекалий выделяли РВ на 1-2 нед жизни. Эго указы-
вает на то, что материнские АТ не подавляют РВИ и репликацию вируса у телят. Относи-
тельно сывороточных АТ как фактора защиты существует мнение, что они не являются не-
обходимыми для защиты против РВИ. Для защиты нужно присутствие АТ в кишечнике те-
ленка. Поэтому выпаивание больших количеств молозива в 1-й день жизни обеспечивает
защиту, по крайней мере, в течение 48 ч. Более эффективно частое выпаивание молозива
мелкими порциями. Двукратная вакцинация коров инактивированной вакциной за 20-40 дн
до отела приводит к значительному повышению специфических АТ в молозиве, скармлива-
ние которого новорожденным телятам предохраняет их от желудочно-кишечных заболева-
ний. Средний уровень АТ в молозиве и молоке достаточен, чтобы предотвратить развитие
инфекции до 5 дня жизни телят, но не более.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ЕРамишвили Л.Г. и др. Вопр. вирусол., 1991, 36, 6. 1а.Мищенко В.А. и др. Сб. тр.
ВНИИЗЖ., 1995, 125. 1б.Рамишвили Л.Г. й др. Ветеринария, 1991, 10, 27. 2.Рухадзе Г.Г. и
др. С-х биология, 1998, 1, 31. 2а. Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, Урожай, 1993.
З.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. живот. Агропромиздат, 1991. 4.Фомина Н.В. и др. Ви-
русы животных. Учебн. пособие, М. 1991, MBA. 5.Bridojer J.C. et.al. J Hyg, 1986, 96, 257.
6.Brussow H et.al. Zbl Bakter Mikrobiol und Hyg 1987, 264, 49. 7.Brussow H. etal. J Gener.
Virol, 1990, 71, 11 :2625. 8.BrussowH et.al. J Clin Microbiol., 1992, 30, 1 :67. 9.CarlsonU. Vet
Res 1991, 128, 7 :145. lO.Clark H.F. et.al. Vaccine, 1990 :327. 11. Chanock R.M. et.al. USA
Departament of Health and Servias 1998 :977 Заявл.21.09.87; опубл.22.05.90/ 12. Entrican G.
et.al. Arch Virol, 199.. 3 :175. 13.Gosztony G. et.al. Clin Neuropathol, 1991, 10, 5 :262. 14.Goto
Y. et.al. Vet.Microbiol.,1986, 11 :177. 14alshizaki H. et.al. Am J Vet Res, 1995, 56, 8 :1019.
15.Johannsen U. et.al. Arch Exp Veterinarmed 1984, 38 :629. 16.Kelling C. etal. Amer J Vet
Res,1990, 54, 12 .2019. 17.Murakami Y. etal. Vet Microbiol, 1986, 12 ;7. 18.Nettletom P.F.
et.al. Compar. Immun Microb and Infect Dies. 1992, 15, 3 :179. 19.Nokadama O. et.al. Arch
Virol, 1991, 120, 43 20.Porwani A.V. et.al. J Clin Mikrob, 1992, 30, 10 :2717. 21.Sawjer M.U.
etal. Arch Virol 1991, 3: 97. 22.Saif L.I. Vet immunol, 1988 .425. 23.Saif L.J. et.al. J Tissue
Cult Methodes, 1988, 11, 3 :147. 24.Sato K. et.al. Vet Microbiol, 1981, 6, 3 :259. 25.Snodgrass
D. et.al. J Clin Microbiol, 1991, 29 :2688. 26.Sowjer M.U. Compar Immun Microb and Infect
Dieseas,1992, 5, 3 :171. 27.Tsunenitsn H. et.al. J Clin Microbiol., 1992, 30, 11:3009. 27a Twist
E. et.al. J Gen Virol. 1984, 65, 7 :1207. 28.Van Openbosch E. etal. Ann Med Vet 1982, 26 :137.
29.Vanderfeckt S.L. et.al. Amer J Vet Res 1986, 47, 1913. 30.Wolderhiwet Z. et.al. Arch Virol,
1991, 3 :267. 3EWoIderhiwet Z. et.al. J Med Microbiol, 1992, 37, 1:5. 32.Woode G. et.al. J Clin.
Microbiol, 1987, 25 :1052.
РОТАВИРУСНАЯ ДИАРЕЯ СВИНЕЙ
Porcine rotaviral infections
Ротавирусы - важнейшие энтеропатогены неонатального периода животных многих ви-
дов, включая свиней. Энтеропатогенность ротавирусов свиней (РВС) подтверждается их
способностью вызывать тяжелые гастроэнтериты и атрофию ворсинок в экспериментальных
условиях у поросят-гнотобиотов и поросят, не получавших молозива, в отсутствие других
возбудителей (58). Ротавирусная инфекция свиней (РВИС) наблюдается во всех странах с
развитым свиноводством. РВС впервые были выделены от телят Mebus и соавторами в 1969
г. (43) и затем идентифицированы у людей и животных других видов (21). Серологические
показатели РВИС впервые обнаружили с использованием РВ КРС как АГ. В настоящее вре-
мя РВС широко распространены в странах с развитым промышленным свиноводством (9,
15,69, 7, 2, 49, 84, 81,18,22, 23, 24,39, 45, 59). Установлено широкое распространение её в
54
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Японии, причем у поросят из разных регионов Японии чаще обнаруживались ВНА к РВС
типа I (75-98%), чем к типам 2 и 3 (30,3-68,9%) (29).
Патогенез. Клетками-мишенями ротавируса являются энтероциты апикальной части
ворсинок тонкого отдела кишечника. Репликация вируса наиболее активна в задней части
тонкого кишечника. Наиболее выраженную атрофию ворсинок вызывает ротавирус группы
А и С. Тяжесть заболевания зависит от сочетания патогенов, возраста животных, условий
содержания (64, 81, 73, 5). В ряде ситуаций установлен эффект интерференции (например,
слабопатогенные энтеровирусы свиней интерферируют ротавирусную инфекцию) (34).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Заболевание наиболее
отчетливо проявляется у поросят в возрасте 3-6 нед и клинически характеризуется развити-
ем диарейного синдрома. Фекальные массы становятся разжиженными, желто-белого и бе-
лого цвета. Поэтому ротавирусную диарею называют “поносом 3-нед поросят” (2, 16, 77).
Заболевание также широко распространяется в 1-ю нед после огьема поросят (82, 83).
Заболеваемость при РВИС достигает 50-80%, а летальность обычно не превышает 5-
10%. Тяжелое течение и высокую летальность (100%) наблюдали при одновременном ин-
фицировании поросят вирусом ТГС и РВС. РВИС часто протекает совместно с кокцидиозом,
ТГС, энтеротоксигенной E.coli. При этом соответственно изменяется и тяжесть заболевания.
У взрослых свиней инфекция протекает бессимптомно. Такие животные являются основны-
ми носителями и распространителями вируса.
Патологоанатомические изменения бывают в тонким кишечнике и проявляются ком-
плексом дегенеративных и функциональных нарушений эпителиальных клеток. Степень
проявления их зависит от возраста животных. Микроскопические поражения в виде дегене-
рации эпителиальных клеток ворсинок начинают проявляться на их вершинах, затем в
группах клеток латеральной поверхности через 16-18 ч после заражения (5, 34, 14, 74, 75).
Дегенерирующие клетки разбухают, цитоплазма разжижается, ядра также набухают и теря-
ют четкость границ. Дегенерировавшие клетки отделяются от соседних и подслизистого
слоя. Через 16-24 ч наблюдается атрофия ворсинок, к 24-72 ч она наиболее выражена
(Рис.4, 6, 7).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Устойчивость. РВС устойчивы к температуре, pH среды в пределах 3-9, химическим
веществам и дезинфектантам. Стабильны при температуре 60°С 30 мин и при 18°С - 7-9 мес
(85). Адаптированные к культуре клеток штаммы варьируют по признаку термостабильно-
сти. Так, шт. A/OSU и C/Cowden инактивировались при 56°С за 30 мин, тогда как
iirr.A/Gnitifried устойчив к 56°С (80). Вирус инактивируется 2%-ным глютаральдегидом,
70% этанолом, 3,7% формалином, 10% препаратом повайдо-йод, р-ром хлорамина Т
(71,85). Устойчив к эфиру, хлороформу. Хлористый кальций (но не MgCl2) стабилизирует
инфекционность РВС. ЭДТА в концентрации 0,5 мМ удаляет внутренний слой и разрушает
инфекционность.
Морфология и химический состав. РВС безоболочечный, имеющий различные коле-
сообразные структуры при электронной микроскопии негативно контрастированных препа-
ратов. Полные РВ частицы имеют хорошо различимые внутренние ободки, характерные для
рео- и орбивирусов семейства Reoviridae. Вирусные частицы с “двойным” капсидом обла-
дают внешним капсидным слоем, внутренним капсидным слоем и икосаэдральным ядром.
Размер около 75 нм в диаметре. Вирионов с одинарным капсидом около 60 нм. Диаметр яд-
ра около 52 нм и содержит вирусный геном и РНК-зависимую РНК-полимеразу. Инфекци-
онностью обладают только вирионы с двойным капсидом (58). Плавучая плотность 2-
слойных, 1-слойных и ядерных частиц в хлористом цезии составляет 1,36 1,38 и 1,44 г/см3
соответственно (6).
55
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
Геном РВС представлен 2-нитевой РНК с 11 сегментами. Общий молекулярный размер
составляет приблизительно 18522 п.о. (66, 20). Ген 6 РВС шт.УМ состоит из 1356 нуклеоти-
дов и кодирует белок VP6, состоящий из 397 аминокислот и образующий внутреннюю обо-
лочку вириона. Он содержит групповые и подгрупповые эпитопы. Ген 10 шт. VM кодирует
белок N528, который состоит из 175 аминокислот. Выявлена наибольшая гомология белка с
РВ человека Wa, тогда как другие белки этих вирусов сильно различались. Белок VP6
шт.УМ ближе к белку подгруппы II, чем подгруппы 1. Это позволило идентифицировать 5
возможных аминокислот VP6, которые могут определять АГ подгрупп. РНК сегментирована
на 4 зоны (I-IV). Группа А РВС имеет 4:2:3:2 сегментов в зонах I, II, III и IV соответствен-
но. Для группы В расположение сегментов 4:2:2:3 и для группы С - 4:3:2:2. В группе Е ко-
личество сегментов в зонах подобно группе В, за исключением сегментов 7-11, подвижность
которых отличалась от других (65). Выявлена корреляция между электрофоретипом и серо-
группами, однако подчеркивается, что серологические исследования - более достоверны.
Антигенная структура. Внутренний капсид состоит из 2 главных белков - VP2 и VP6.
Последний содержит групповой и субгрупповой АГ. Недавно показано, что эпитопы суб-
групповой специфичности могут также локализоваться в белке VP2 (78, 79). Наружний кап-
сид содержит 2 поверхностных протеина VP4 и VP7 (20). Белок VP4 до 1987 г. относился к
белку VP3) (41) негликозилирован, содержит ГА, играет важную роль в инфекционности и
вирулентности (27, 28, 37, 52). Протеолитическое расщепление VP4 на VP5 и VP8 важно
для проявления инфекционности вируса. Это закодировано в 4-м сегменте генома. Белок
VP7 - 2-ой по важности структурный белок, имеет мол.м. 37кД, гликозилирован, кодируется
другим сегментом гена (7-м или 9-м в зависимости от штамма вируса), VP4 и VP7 индуци-
руют ВНА (27, 28, 52), которые важны в плане индукции иммунитета (52) и независимы
друг от друга (31, 32). Возможны реассортантные штаммы РВ, содержащие некоторые ком-
бинации Р и G-типов. Один из таких шт. SBI-A с G4 и Р7 типом уже описан (33,44).
Некоторые штаммы РВС имеют ГА и агглютинируют эритроциты человека 0 группы,
морских свинок и крыс (18а, 60, 61, 62).
Антигенная вариабельность и родство. Первоначально было показано, что РВ разных
видов животных имеют общий групповой АГ (20). Позднее показали, что РВ серологически
отличаются (9, 69, 1, 42а). Стало очевидным, что РВ отличаются в АГ отношении от РВ,
похожих на классические РВ, но утративших общий групповой АГ (9, 69,1, 42а). Такие РВ
называли “новыми ротавирусами”, ротаподобными вирусами, параротавирусами, атипич-
ными вирусами и АГ отличающимися вирусами (1, 9, 10, 69, 42а, 68, 73, 81, 64, 65,). Серо-
группы с общим групповым АГ внутреннего капсида идентифицированы в серологических
реакциях ИФ, ИФА, или ИЭМ (1, 9,10,13, 42а, 64, 65, 69,73, 81).
Было выявлено 7 различных серогрупп (A-G), 4 из которых поражают свиней (10, 65).
Группа А ротавирусов наиболее изучена и наиболее связана с гастроэнтеритами свиней.
Диарею у свиней чаще всего вызывают вирусы группы А. Они имеют 2 поверхностных бел-
ка - VP4 (вирус типа Р) и VP7 (вирусы типа G). Известно 13 G-типов и 12 P-типов ротавиру-
сов А. Группа В ротавирусов относится к отличающимся РВ или ротаподобным вирусам и
обнаружена у свиней, телят, людей. Группа С также определяется как параротавирусы, об-
наружена у поросят и людей (19). Шт. Cowden с помощью теста двойной перекрестной PH
РВ группы С свиней и шт. Shiutoku группы С бычьего типа были классифицированы как
различные серотипы. Другой штамм РВ группы С свиней (HF) не реагировал со шт. Cowden
u Shiutoka, он принадлежал к серотипу J. Приведенные данные подтверждают существова-
ние, по меньшей мере, 2-х различных серотипов Р группы С, а возможно и 3-го серотипа у
животных и человека.
Группа Е обнаружена у поросят только в Великобритании (13), тогда как группы D, F и
G обнаружены у цыплят и индеек (10, 65).
56
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
РВ группы А подразделяются на субгруппы Sj и Sn и серотипы (27), Вирусы дополни-
тельных субгрупп могут преобладать в природе (78). Серотипы в серогруппах определяются
в реакциях подавления бляшкообразования или подавления флюоресцирующих фокусов ги-
периммунными сыворотками (8, 59). Необходимо 20-кратное различие в титре ВНА между
гомологичными и гетерологичными РВ, чтобы установить различающийся серотип. Описа-
но 11 серотипов (20). Серотипирование является комплексным и иногда дает двусмыслен-
ные результаты, обусловленные вовлечением 2-х поверхностных белков VP4 и VP7, кото-
рые индуцируют образование ВНА (27, 28). Генетический код этих поверхностных белков
выделяется независимо друг от друга (31, 32). Белок VP7 обозначается как G тип гликопро-
теина, тогда как VP4 - как Р, протеазочувствительный белок. РВС обозначается следующим
образом: группа/штамм/субгруппа/G тип/Р тип. Недавно описано 5 серотипов по G группе
(VP7) РВС (8, 45, 46, 60, 61, 62). Данные о G-типе и других серотипах РВС представлены в
таблице I. 4. По крайней мере 2 P-типа (VP4) обнаружены среди РВС, однако данных об
этой группе пока недостаточно. МонАТ и РНК-зонды делают возможным получение ин-
формации и типирование G- и P-типов РВС в ближайшем будущем (36,38,60,61,67).
Таблица L4. Серогруппы и серотипы изолятов РВС
Серогру ппы Штамм Серотип VP7 (G)a Серотип VP4 (P)a Обозначения других серотипов Ссылк
А OSU 5 7 Свиной серотип 1
Gottfried 4 6 Свиной серотип 2
SB1-A 4 7 Естественный реассортант
CRW-8 3 ?
1SU-64 Подоб.9 7
ISU-65 3 7
YM 11 ?
В Ohio N1RD-1 1А1146
С Cowden 1A850
Е DC-9
На основании химических свойств по Estes и Cohen, 1989 г.( 20 ).
Общим групповым АГ является белок VP6 внутреннего капсида (20). В перекрестной
PH выявлено родство между РВ обезьян и свиней, а также между ними и РВ КРС. Однако
РВС родственны с РВ человека.
Все 4 штамма РВС, выделенные в Китае, были разделены на 2 различных серотипа:
один (41) нейтрализовался до высоких титров антисывороткой против референс-шт. OSU и
возможно был сходен с OSU (серотип 1-й РВС), другие 3 штамма (Lin 71, Nan 86, Jiang 150)
были АГ отличимы от Li 99 и не реагировали с антисывороткой против OSU. Они характе-
ризовались как РВС серотипа 2. Не выявлено также АГ-родства между РВС и РВ КРС. РВ
свиней (шт. РО-13) нейтрализуется антисывороткой прототипного серотипа 7 того же вируса
(шт. Ch 2), поражающего птиц. При анализе геномов вирусов установлена их близость в
РНК-РНК гибридизации.
Культивирование. Культивирование РВС сложно. К перевиваемым линиям клеток ви-
рус был адаптирован с предварительной обработкой вирионов трипсином (10 мг/мл в тече-
ние 30 мин) перед заражением или панкреатином (81). Позднее вирус успешно размножали
в культуре клеток МА-104 (8). Используя эти приемы проводят и изоляцию РВС. Клеточ-
ноадаптированные РВС вызывают ЦПИ, характеризующиеся округлением клеток и после-
дующим отделением их от стекла. Вирусный АГ обнаруживается в цитоплазме ИФ или им-
57
Г лава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
мунохимическим методом. РВС образуют бляшки под агаровым покрытием в присутствие
нейтрального красного.
Описано размножение одного штамма РВС группы С в первичной культуре клеток по-
росят (80). При этом необходимо добавление в культуральную среду высокой концентрации
панкреатина. После 9 пассажей в первичной культуре клеток почки поросенка штамм адап-
тировался к культуре МА-104 (70). Для культивирования шт. C/Cowden и Jowa C/JA850
группы С РВС использовали также линию интестинальных клеток. Для групп В и Е РВС и
некоторых штаммов группы А не отработаны условия культивирования в культурах клеток.
Экспериментальная инфекция. Использование поросят-гнотобиотов или поросят, не
получавших молозива позволило стабильно воспроизводить клиническое заболевание
РВИС. Наиболее тяжело протекает при заражении в 1-5 - дн возрасте (42, 48). После инку-
бационного периода в 12-24 ч поросята теряют аппетит, становятся угнетенными и вялыми.
Тяжелая, профузная диарея наступает через 1-4 ч. Каловые массы водянистые, от желтого
до белого цвета, разной консистенции. Диарея продолжается 3-5 дн, затем кал постепенно в
течение 7-14 дн. становится нормальным. Наблюдается обезвоживание поросят и возможна
смерть на 2-5-й день после начала поноса; смертность может достигать 50-100%. Диарея и
обезвоживание слабее при заражении поросят в 7-21-дн возрасте (72). При заражении поро-
сят в 28-дн возрасте заболевание ограничивается проходящей диареей (40, 82, 83). Смерт-
ность снижается с возрастом и, как правило, редко наступает при заражении после 14 дн.
Клинические признаки практически отсутствуют когда 21-28-ди поросят выдерживают на
сухой диете в течение по крайней мере 3-х дн после заражения (74, 75, 81, 82).
Роль РВС в послеотъемной диарее поросят не совсем ясна. В ряде случаев РВС являют-
ся первичной причиной тяжелой диареи у недавно отнятых от матерей поросят и приводят к
10-50% смертности (85), в других случаях РВС не вызывают таких поражений. При ассо-
циации РВС с ТГС или гемолитической энтеротоксигенной E.coli развивается тяжелая диа-
рея. Заражение поросят-отьемышей РВС в сочетании с E.coli подтверждает ведущую роль
РВС в патогенезе диареи (40, 81, 82).
При инокуляция поросят серотипами 4, 5 и новыми серотипами (шт. ISU-64) воспроиз-
водилась одинаковая клиническая и патологоанатомическая картина заболевания (3, 4, 5, 8,
34,35, 74, 75). Различий в патогенности штаммов группы А не установлено (14).
Заражение поросят-гнотобиотов РВС группы С обусловливало заболевание, аналогичное
таковому группы А, тогда как РВС групп В и Е вызывали менее тяжелую диарею и в более
короткий период (7, 9,10,11, 12,13, 73,81).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути распространения инфекции. Серологические исследования пока-
зали высокий процент серопозитивности (77-100%) взрослого свинопоголовья к группам А,
В и С (11) У поросят 3-8-нед возраста процент серопозитивности к группам В и С сильно
варьирует, тогда как к группе А он всегда высок. Циркуляция РВ, как правило, энзоотичиа.
Вирус распространяется фекально-оральным путем. Поросята обычно заражаются на 7-41-й
день. РВИС обусловлено около 14% диарей свиней. Из 90 случаев РВИ 67% были обуслов-
лены группой А, 10 - В, 12 - С и 11% - смешанной инфекцией (35, 60,61, 62).
Большой интерес представляет инаппарантная (бессимптомная, латентная) форма
РВИС, которая характеризуется персистированием в организме определенного количества
вируса при отсутствии клинических признаков гастроэнтерита и обнаружении РВС в фека-
лиях внешне здоровых животных. Известный шт. СА-11 был получен от здоровой обезьяны.
Выявить РВС (РДП и ЭМ) при инаппарантной форме инфекции не всегда удается. Вы-
явление АТ к РВС свидетельствует о контакте организма с этим возбудителем, однако АТ
могли остаться и у реконвалесцентов. Поэтому необходим точный ретроспективный анализ
ситуации в хозяйстве (данные о РВ гастроэнтерите с клиническими признаками или без них
58
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
за последние 2-3 года). Чтобы точно определить ту или иную форму болезни, исследование
АТ к РВ следует проводить у поросят-отъемышей, которые находились под наблюдением в
течение 1 мес со дня рождения. Обнаружение АТ при отсутствии клинических признаков
может служить основанием для диагноза - инаппарантная форма инфекции.
Данную форму болезни трудно диагностировать в хозяйствах, где у животных имелись
АТ к РВ и отмечали клинические признаки гастроэнтерита, которые могли быть вызваны
другими вирусами (энтеро-, корона-, адено-, парво-, астровирусами) и бактериальными
агентами, а также погрешностями в кормлении. В этих условиях необходимо установить на-
личие АТ к РВС. Если болезнь вызвана другими этиологическими АГ или погрешностями в
кормлении, то вероятность инаппарантной РВИС увеличивается.
Положительный ответ по РДП всегда соответствовал клиническим проявлениям болезни
как в эксперименте, так и в эпизоотических условиях. Инаппарантная РВИС может быть
обусловлена рядом факторов. Во-первых, наличием низковирулентной популяции РВ
(дефектные или 1-капсидные частицы), которая при отсутствии других негативных факторов
не может проявить патогенность. Во-вторых, частицы РВ становятся инфекционными, если
полипептид VP3 расщепляется на VP5 и VP8 под действием протеолитических ферментов.
При недостаточном количестве их или низкой активности не происходит активизация рота-
вирусных частиц и, как следствие, возникает инаппарантная форма болезни, которая играет
большую роль в эпизоотическом процессе.
Энтероциты тонкого и толстого отделов кишечника обладают разной чувствительностью
к РВ. У 2-4-дн поросят к инфекции устойчивы энтероциты тонкого кишечника, а у 4-8-дн -
тонкого и толстого. Вероятно, резистентность к РВИС связна со специфическими рецепто-
рами для вируса, число которых в тонком кишечнике с возрастом уменьшается. Однако,
РВС поражает поросят и после отъема их от взрослых свиней.
ДИАГНОСТИКА
Для диагностических исследований отбирают образцы кала или содержимого кишечни-
ка при остром заболевании. Наибольшая концентрация РВС отмечается в течение 12-24 ч
после начала диареи (9, 60, 81).
Для выявления РВС используют ряд методов, включая ЭМ, ИЭМ, ИФА, изоляцию, ре-
акцию латекс-агглютинации, дот-блот-гибридизации, РНК-электрофоретипирование.
Индикация вируса
ЭМ и ИЭМ. Это основной метод выявления вируса. Он позволяет обнаруживать раз-
личные группы РВ. Морфология и тип вирусных частиц, обнаруживаемые в негативно кон-
трастированных препаратах, изменяются при окрашивании и зависят от серогрупп РВС. Не-
гативное окрашивание фосфорно-вольфрамовой кислотой (ФВК) при нейтральном pH выяв-
ляет предпочтительно 1-слойные капсиды, тогда как ФВК при pH 4,5 или уранилацетат вы-
являют 2-слойные частицы (47,76). Ядро частиц выявляется у РВС группы В (12, 81). ИЭМ
позволяет дифференцировать различные серогруппы РВС.
ИФА. Часто используется для выявления вирусспецифического АГ в фекалиях или со-
держимом кишечника и более чувствителен, чем латекс-агглютинация (26), но менее чувст-
вителен чем ЭМ (3, 4, 5). Электрофоретипирование вирусной РНК часто используется для
обнаружения и дифференциации серогрупп РВС, но эти результаты должны быть подтвер-
ждены серологически. Дот-блот-гибридизация используется как альтернатива для индика-
ции и идентификации групп РВ и их серотипов (17,36, 60, 61,62, 67).
Выделение вируса. У 90-100% поросят до 5-6-нед возраста можно обнаружить РВ в
фекалиях. Продолжительность экскреции вируса, как правило, не превышает 1 нед. Изоляты
получены из фекалий в клеточных культурах (клетки МА-104). На различном числе пасса-
жей наблюдался типичный ЦПЭ, вирусный АГ обнаруживали в цитоплазме инфицирован-
59
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
ных клеток в ИФ. Адаптация РВ к клеточным культурам подтверждена также с помощью
методов ЭМ и ИФА.
Серологическая диагностика. Разработан метод гемагглютинации и РТГА с РВС
(nrr.S-80). ГА вируса получают при репродукции его в клетках МА-104, предварительно об-
работанных трипсином. Вирус агглютинирует эритроциты человека типа А, В и О, морской
свинки и свиней. Титр РГА с эритроцитами морской свинки равен 1:8 - 1:128. Максималь-
ный титр ГА отмечен при инкубации вируса с эритроцитами в течение ночи при 4°С. Титр
АТ к РВ со шт. S-80 в РТГА достигает Г.320 и коррелирует с PH (г~0,66). Серологическая
(ретроспективная) диагностика имеет небольшое значение в диагностике РВИС, поскольку
АТ широко распространены в стаде. Однако титр АТ и серотип отражают иммунный статус
животных. Помимо вышеописанной реакции АТ к РВС могут выявляться в непрямой ИФ.
Для этого линию клеток МА-104 заражают одной из групп РВС (А, В или С). После куль-
тивирования клетки фиксируют в смеси ацетон-метанол и используют в качестве АГ в не-
прямой ИФ. С этой же целью можно использовать криосрезы слизистой оболочки кишечни-
ка больных поросят. В непрямой ИФА и РТГА обычно выявляют АТ к групповому АГ.
ИФА, комбинированный с типоспецифическими монАТ, используют для определения клас-
сов АТ к РВС (58-62). ВНА выявляются в реакциях подавления бляшкообразования или по-
давления фокусов ИФ (59).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Механизм защиты поросят от РДС основан на антивирусном действии IgA в кишечнике
так же, как и при ТГС. Несмотря на то, что в популяции свиней, в основном, циркулирует
один серотип, наличие двух других серотипов РВ, а также параротавирусов свиней, затруд-
няет специфическую профилактику этой болезни. При естественном заражении у свиней об-
разуются гуморальные и секреторные АТ и устойчивость к гомологичному вирусу. Наличие
в кишечнике АТ, омывающих эпителиальные клетки ворсинок, защищает животных от ин-
фекции. Секреторные IgA более эффективны, чем IgG и IgM. Они преобладают в молозиве
и молоке свиноматок и являются первичными 1g, обеспечивающими пассивную защиту.
Сывороточные АТ не обеспечивают защиту против РВС. В механизме защиты большое зна-
чение имеет клеточный иммунитет (53-57). АТ обнаруживают у многих или у всех свинома-
ток фермы, разница состоит в титре АТ. Если естественная инфицированность маточного
стада высокая, то и защищенность поросят от РВИС в течение первых 2-3 нед жизни обес-
печена за счет колостральных АТ.
Для специфической профилактики РВИС применяют живые вакцины. Аттенуированные
штаммы вируса получают путем серийного размножения его. В США успешно применяют
живую РВ вакцину из аттенуированного РВС 2-х основных серотипов-A! (OSU) и А2 (Iowa)
РВС. При этом смертность снижалась на 72% от всех причин в течение подсосного периода
и 10 дн после отъема. Аттенуированный штамм РВС обнаружил слабую способность раз-
множаться в энтероцитах естественного хозяина. Деструкция их никогда не достигала уров-
ня, достаточного для гистологического обнаружения.
Показана возможность профилактики РВИ у поросят с помощью обезьяньего шт. PBSA-
11. IgG от иммунизированных SA-11 коров по своей активности оказались в 2-4 раза выше
(в PH), чем титры IgG, полученные с помощью тест-штаммов РВ человека серотипов 1, 3 и
4 и РВ КРС; IgG от коров, иммунизированных РВ SA- 11с 8-кратной эффективностью, пре-
дохраняли поросят от инфицирования РВ.
Размножающийся в клетках семенника поросят РВ типа С иногда подвергается модифи-
кациям; такой модифицированный вирус может быть использован в составе живых вакцин
для профилактики ротавирусной инфекции. Как известно, образование протективных ВНА
вызывают 2 белка внешнего капсида: VP4 и VP7. Одним из подходов к иммунизации сви-
ней и КРС против РВИ является экспрессия белков VP4 и VP7 в различных гетерологиче-
60
Глава!. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
ских системах, таких как прокариоты, вирус осповакцины, бакуловирус, герпесвируса, аде-
новирус. Однако в большинстве случаев белки РВ VP4 и VP7, полученные в прокариотиче-
ских системах экспрессии, не вызывают образования протективных АТ, что обусловлено
различиями в посттрансляционном процессинге у про- и эукариот. Оказывается, VP4 и VP7,
полученные в системе экспрессии на основе генома бакуловируса, проходят, видимо, пра-
вильный постгрансляционный процессинг, вызывая образование протективных АТ. Однако
бакуловирус, естественными хозяинами которого являются насекомые, не может быть ис-
пользован как средство доставки рекомбинантного белка в клетки млекопитающих, и, сле-
довательно, не обеспечивает образования местного иммунитета, соответствующего тропиз-
му РВИ. Вектор на основе генома аденовируса способен реплицироваться в кишечнике мле-
копитающих, и обладает емкостью, достаточной для кодирования белков внешнего капсида
РВ поэтому может являться одним из лучших кандидатов на роль вектора-носителя для соз-
дания генно-инженерных вакцин против РВИ (25, 50, 51). Показана экспрессия гена, коди-
рующего белок капсида VP7 РВС в составе генома рекомбинантного аденовируса.
Способ иммунизации свиноматок влияет на образование классов секреторных иммуног-
лобулинов. Первичная оральная иммунизация - наилучший методом для индукции секре-
торных IgA в молоке. Как бустер-стимуляция продукции секреторных IgA используется
внутримышечная вакцинация животных, предварительно вакцинированных орально. Сте-
пень аттенуации вируса также влияет на его способность индуцировать лактогенный имму-
нитет. Индукция активного иммунитета к послеотъемной диарее при наличии пассивных АТ
весьма проблематична. Для вакцинации используют штаммы разных серотипов даже одной
группы РВС: A/OSU, A/Gottfried. Реассорганты РВС, содержащие гены VP4 и VP7 от 2-х
различных серотипов могут быть использованы для индукции защиты против обоих сероти-
пов РВС (33). Коммерческие модифицированные живые и инактивированные вакцины при-
меняются как для свиноматок, так и для поросят орально, орально и внутримышечно или
только внутримышечно. Инактивированные вакцины применяют свиноматкам внутримы-
шечно, подсосным поросятам - интраперитонеально. Недавно идентифицированы новые се-
ротипы РВС (30,58), которые могут быть включены в вакцины. Для иммунизации свиней
успешно применяется аттенуированный шт. К.
Лечение. Пока неизвестны терапевтические агенты, способные специфически воздейст-
вовать на РВС в лечебных целях. Для снижения смертности и возможных осложнений ре-
комендуется общая поддерживающая терапия, антибиотикотерапия, а также регулирование
сроков отъема поросят. Дача солевых р-ров, содержащих глюкозу и глицин, предотвращает
дегидратацию и потерю веса массы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
l.Askaa J. et.al. Acta Vet Scand.,1981, 22 :32. 2.Askaa J. etal. Nord Vet Med, 1983, 35
:441. 3.Benfield D.A. Proc Commer Technol Anim Helth Monit Ames, : 181. 4.Benfield D.A.
etal. Am J Vet Res, 1984, 45 :1998. 5.Benfield D.A. etal. Am J Vet Res, 1988, 49 :330. 6.Bican
P. etal. J Virology, 1982, 43 :1113. 7 .Bohl E.H. et.al. J Clin Microbiol, 1982, 15 :312. 8.Bohl
E.H. et.al. J Clin Microbiol., 1984, 19 :105. 9.Bridger J.C. Vet Res, 1980, 107 :532. lO.Bridger
J.C. In novel diarreahea viruses. Chichester Wiley, CIBA Found. Symp,1987,128 :6. ll.Bridger
J.C. etal. Vet Rec, 1985, 116 :50. 12.Bridger J.C. etal. Infect Immun, 1982, 35 :1058. 13.Chasey
D. etal. Arch Virol, 1986, 89 :235. 14.Collins J.E. etal. Am J Vet Res, 1989, 50 :827.
15.Corthier G. etal. Ann Rech Vet, 1980, 11 :45. 16.Debouck P. et.al. Ann Vet Rech, 1983, 14
:447. 17.Dimitrov D.H. et.al. J Inf Dis, 1985, 152 :293. 18.Dea S. etal. Can J Vet Res,1986, 50
: 130. 18a.Eigushi Y. etal. Kitasato Arch Exp Med, 1987, 60 :167. 19.Espejo R.T. etal. Infect
Immun, 1984, 44 :112. 2O.Estes M.K. etal. Microbiol Rev, 1989, 53 :410. 21.Estes M.K. etal.
Curr Top Microbiol Immunol, 1983, 105 :123. 22.Ferrari M. etal. Microbiologyca (Bologna),
1986, 9 :287. 23. Fu Z.F. etal. Res Vet Sci, 1987, 43 :297. 24.Fu Z.F. etal. Vet Rec, 1989, 125
61
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
:576. 25.Gorziglia М. et.al. J Virol, 1990, 61 :414. 26.Goyal S.M. et.al. Diagn Microbiol Infect
Dis, 1987, 6 :249. 27.GreenbergH.B. et.al. J Gen Virol, 1983, 64 :313. 28.Greenberg H.B. et.al. J
Virol, 1983, 47 :267. 29.HiraharaT. et.al. Jap J Vet Sci, 1988, 50 :353. 30.Hoblet K.H. et.al. Am
J Vet Res, 1986, 47 :1697. 31.Hoshino Y. et.al. J Inf Dis, 1985, 149 :694. 32.Hoshino Y. et.al.
Proc Natl Acad Sci (USA), 1985, 82 :8701. 33.Hoshino Y. et.al. J Virol, 1988, 62 :744. 34.Janke
B.H. et.al. Can J Vet Res, 1988, 52 :364. 35.Janke B.H. et.al. Proc 32d Annu Meet Am Assoc Vet
Lab Diagn,Las Vegas, 1989 :24. 36.Jonsson M.E. et.al. Vet Microbiol, 1990, 24 :307. 37.Kalica
A.R. et.al. Virol, 1983, 125 :194. 38.Kang S. et.al. J Clin Microbiol, 1989, 27 :2744. 39.Kim
Y.H. et.al. Res Rep Rural Div Adm, 1987, 29 :129. 4O.Lecce J.G. et.al. J Clin Microbiol, 1982,
16 :715. 41.Liu M. et.al. Virology, 1988, 163 :26. 42.McAdaragh J.P. et.al. Am J Vet Res, 1980,
41 :1572. 42a.McNulty M.S. et.al. J Gen Virol, 1981, 55 :405. 43.Mebus C.A. et.al. Univ
Nebraska Agric Exp Stn Res Bull, 1969, 233. 44.Midthun K. et.al. J Clin Microbiol, 1987, 25
:295. 45.Nagesha H.S. et.al. J Clin Microbiol, 1988, 26 :171. 46.Nagesha H.S. et.al. J Virol,
1989, 63 :3545. 47.Nakata S. et.al. J Clin Microbiol, 1987, 25 :1902. 48.Narita M. et.al. Nat Inst
Anim Health Q (Tokyo)1982, 22 :54. 49.Nilsson O. Nord Vet Med, 1984, 36 :103. 5O.Nishikawa
K. et.al. Nucleic Acid Res, 1988, 16 :11847. 51.Nishikawa K. et.al. Virology, 1989, 173 :631.
52.Offit P.A. et.al. J Virol, 1986, 57 :376. 53.Offit P.A. et.al. J Virol, 1985, 54 :58. 54.Offit P.A.
et.al. J Virol, 1988, 62 .126. 55,Offit P.A. J Virology, 1989, 63 :3507 . 56.Offit P.A. et.al. J
Virol, 986, 57 :46. 57.Offit P.A. et.al. J Virol, 1986, 60 :491. 58.Paul P.S. et.al. In Dis of Svine,
Ed. W.L. Mengeling, Iowa State Univercity Press /Ames, Iowa, USA, 1994. 59.Paul P.S. et.al.
Arch Virol, 1988, 100 :139. 6O.Paul P.S. et.al. Proc. 11th Int Congr Pig Vet Soc, Lausianne, 1990
:276. 61.Paul P.S. et.al. там же :212. 62.Paul P.S. et.al. Proc Commer Diagn Technol in Anim
Health Monit. Natl Vet Serv Lab and Iowa State Univercity Vet Diagn Lab, Ames, 1990 : 236.
64.Pedley S. et.al. J Gen Virol, 1983, 64 :2093. 65.Pedley S. et.al. J Gen Virol, 1986, 67 .131.
66.Rixon F.P. et.al. J Gen Virol, 1984, 65 :233. 67.Rosen B.I. et.al. Vet Microbiol, 1990, 24 :327.
68.Ruiz A.M. et.al. J Virol, 988, 62 :4331. 69.Saif L.J. et.al. J Clin Microbiol, 1980, 12 :105.
7O.Saif L.J. et.al. J Clin Microbiol, 1988, 26 .1277. 71.Sattar S.A. et.al. Can J Microbiol, 1983,
19 :1464. 72.Shaw D.P. et.al. Am J Vet Res,1989, 50 :1961. 73.Snodgrass D.R. et.al. J Gen
Virol, 1984, 65 :909. 74.Stevenson G.W. Ph D diss, Iowa State Univ.,1990. 75.Stevenson G.W.
et.al. Proc Am Assoc Vet Lab Diagn,1990 :12. 76.Suzuki H. et.al. Arch Virol, 1987, 94 :305.
77.Svensmark B. et.al. Acta Vet Scand, 1989, 30 :63. 78.Svensson L. et.al. J Clin Microbiol,
1988, 26 :1238. 79.Svensson L. et.al. J Virol, 1990, 64 :411. 8O.Terrett L.A. et.al. J Clin
Microbiol, 1987, 25 ;1316. 81.Theil K.W. et.al. J Clin Microbiol, 1985, 21 :844. 82.Tzipori S.
et.al. Aust Vet J, 1980, 56 :274. 83.Tzipori S. et.al. Aust Vet J, 1980, 56 :279. 84.Utrera V. et.al.
Res Vet Sci, 1984, 36 :310. 85.Woode G.N. In Dis of Svine, 6th Ed. A.D.Leman et.al.,1986.
РОТАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ПТИЦ
РВИ птиц - одной из болезней индеек, уток и птиц других видов с симптомокомплек-
сом энтерита. Инкубационный период - 1-3 дня. При этом из содержимого кишечника и фе-
калий птиц, кроме РВ, часто выделяют один или несколько вирусов других таксономических
групп. Тем не менее доказана возможность экспериментального воспроизведения энтерита у
птиц путем заражения их только РВ. Смертность среди зараженных достигает 2-7%. РВ по-
ражает слизистую оболочку тонкого кишечника и выделяется во внешнюю среду с испраж-
нениями, в которых его концентрация может достигать 1О10 частиц/г. Некоторые изоляты
этого вируса удавалось адаптировать к ФКЭ и клеткам млекопитающих. У отдельных цып-
лят через 3 сут после заражения РВ птиц наблюдали диарею. Патологоанатомические изме-
нения отмечали на 4-е сут в виде гиперемии слизистой 12-перстной кишки с наличием то-
чечных кровоизлияний. Гистологическими исследованиями установлена зернистость и ва-
62
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
куолизация цитоплазмы покровного эпителия слизистой и его десквамация, приводящая к
развитию обширных эрозий. Наибольшие нарушения наблюдали в эпителии апикальной
части ворсинок. Аналогичные изменения регистрировали в толстом кишечнике, но интен-
сивность их была значительно ниже.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. РВИ вызывает разви-
тие диареи у индеек и энтерита средней тяжести у цыплят. Инкубационный период - 1-3 дня.
Клинические признаки первоначально проявляются беспокойством птицы, её скучиванием.
Помет у птицы сначала жидкий, в дальнейшем развивается профузный понос. В тяжелых
случаях гибель птицы наступает через 2-4 сут. Патологоанатомические изменения характе-
ризуются обезвоживанием организма, воспалением подошвы конечностей, увеличением и
переполнением жидкостью слепой и толстой кишок, иногда с примесью газа. Гистологиче-
ские изменения обнаруживаются в 12-перстной кишке и толстом кишечнике. Цилиндриче-
ские клетки ворсинок заменяются плоскими, ворсинки укорачиваются, происходит их слия-
ние с последующим образованием безворсинчатой слизистой оболочки.
Патогенез. РВ птиц размножаются в клетках эпителия (ворсинок, ресничек), а также в
клетках эпителия толстой и слепой кишок. В дальнейшем вирус накапливается в помете до
концентрации 1010 в 1 г и выделяется во внешнюю среду.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология. РВ птиц имеют основные морфологические признаки, характерные для
рода Rotavirus семейства Reoviridae и не отличаются от РВ млекопитающих (1).
Антигенная вариабельность и родство. Известны 4 серотипа РВ индюков и кур - ТУ 1
и ТУЗ, РВ индеек, С1 - РВ кур, а также промежуточный серотип РВ индеек Ту2. Их РНК со-
стоит из 4 сегментов, причем по электрофоретической подвижности сегменты 5, 10 и 11 от-
личаются от аналогичных сегментов РВ млекопитающих.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Исследования указывают на широкое распро-
странение РВ заболевания птиц. В сыворотках крови индеек, кур, голубей, цессарок обна-
ружены АТ к РВ в 40-80% случаев. Источник инфекции - больная птица.
Спектр патогенности в естественных условиях. Атипичная группа РВ 993/83 была
выделена в Англии от 3-летнего быка с диареей. В реакции гибридизации было установле-
но, что геномная РНК изолята 993/83 оказалась аналогичной РВ птичьего происхождения,
что свидетельствует о возможности передачи РВ в природе между различными классами по-
звоночных. Показано выделение от цыплят РВ, потерявшего групповой АГ (3).
РВ, обозначенный как вирус 132 (В132), выделен из фекалий цыплят и культивировался
в культуре клеток эмбриональной печени цыплят. По морфологии и морфогенезу не отли-
чим от РВ. При заражении цыплят этим изолятом АТ к РВ появлялись через 3 нед. При
оральном заражении его обнаруживали в фекалиях. Цыплята в возрасте от 1 дня до 4 нед
чувствительны к заражению В132. Наблюдали слабую диарею продолжительностью до 24 ч.
Вирусный АГ обнаружен при ИФ в эпителиальных клетках тонких кишок, содержащих вор-
синки. В цитоплазме этих клеток обнаружены вирусные частицы, которые первоначально
локализовались внутри цистерн шероховатого эндоплазматического ретикулюма. С внешней
стороны цистерн обнаружено большое количество предшественника вируса - гранулярного
материала или вироплазмы, содержащей сердцевины вируса. Подобные же структуры на-
блюдали и в культуре клеток эмбриональной печени цыплят. Геном В132 содержал 11 2-
цепочечных сегментов РНК с мол.м. 2,07; 1,82; 1,62; 1,43; 1,41; 0,75; 0,63; 0,48; 0,45; 0,27 и
0,20 МД. При ИФ не обнаружено антигенного соответствия между В132 и РВ цыплят СМ,
телят Небраска, Сев. Ирландия и Великобритания, индеек Ту1, Ту2 и ТуЗ и свиней
SW20/21. Антисыворотка В132 не вступала в реакцию с АГ известных РВ. Предполагается,
что В-изолят не нес группового АГ, которым обладали все ранее охарактеризованные РВ.
63
Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции
ДИАГНОСТИКА
Выделение и идентификация вируса. РВ выявляется при ЭМ исследованиях фекаль-
ных масс от бройлеров, больных энтеритом. Фекальные массы обрабатывают флюорокар-
бонатом, затем центрифугируют 20 мин при 4°С и 3000g. Надосадочную жидкость повторно
центрифугируют при 90000g 60 мин. Осадок растворяют в нескольких каплях дистиллиро-
ванной воды и проводят негативное окрашивание уранилацетатом (1% р-ром). После этого
ЭМ обнаруживают вирионы диаметром 70 нм, которые имеют ядро и большой капсид, ок-
руженный периферической капсулой.
Для выделения вируса используют культуру клеток почек цыпленка, гепатоцитов КЭ и
ФЭК. Исследуемый материал подготавливают по общепринятым методикам и заражают
культуры клеток. ЦПД проявляется через 48-72 ч. Начиная с 6-го пассажа в клетках почек
вирус размножается без добавления трипсина.
Серологическая диагностика. Непрямой ELISA оказался лучшим методом для опре-
деления IgG, тогда как прямой метод лучше для определения антивирусных IgM и IgA.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
В ответ на ротавирусную инфекцию развивается как системный иммуногенный ответ,
так и местный секреторный иммунитет за счет секреции АТ против РВ лимфоидными клет-
ками слизистой оболочки кишечника (2).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Бакулин В.А. и др. Ветеринария, 1991. 2.Myers T.Y et.al. Avian Dis, 1989. 3.McNulti
M.S. et.al. Virol, 1981.
РОТАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ЛОШАДЕЙ
У лошадей преобладает серотип G-3 РВ. Помимо того, охарактеризован изолят РВ F-
123, выделенный в США в 1984 г. от жеребят с диарейным синдромом. Белок изолята VP7
четко отличается от известных 13 G-серотипов РВ группы А. Даже наиболее сходный с F-
123 серотип G3 (83 % гомология последовательности нуклеотидов, кодирующих белок VP7)
отличается от него присутствием иных аминокислотных остатков в положениях 92, 94, 96,
146 и 147 АГ области А белка VP7. Изолят F-123 характеризовался подгрупповой специ-
фичностью 1/11 и типичным для лошадиных РВ электрофоретипом геномной РНК. Полага-
ют, что вирус F113 представляет прототипный штамм нового серотипа (G14) РВ группы А.
В ФРГ выделен РВ от жеребят, страдающих диареей, в культуре клеток Ма-104
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
Глава II. БИРНАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА BIRNAVIRIDAE
Бирнавирусы (от англ, bi-двойной, гпа - рибонуклеиновая кислота) - небольшая группа
вирусов, поражающая позвоночных, беспозвоночных и насекомых. Вирионы бирнавирусов
представляют собой сферические частицы диаметром 60 нм. Они состоят из сердцевины (45
нм), содержащей РНК и белок, и икосаэдрического капсида, построенного из 92 капсомеров.
Вирионы одержат 90% белка и 10% РНК, липидов нет. Мол.м. их - 55 МД, плавучая плот-
ность в CsCl - 1,33 г/см3, коэффициент седиментации - 435S. Вирионы стабильны при pH 3-
9, устойчивы к обработке 1%-ным р-ром додецилсульфата натрия. Геном бирнавирусов со-
стоит из 2 фрагментов 2-спиральной линейной РНК, каждый из которых связан с белком
мол.м. 94 кД. Фрагмент А содержит 3092 пары нуклеотидов и кодирует полипротеин с
мол.м. 104 кД. Фрагмент В (2784 пары нуклеотидов) кодирует полипептид с мол.м. 94 кД,
который, вероятно, является РНК-полимеразой. В вирионах обнаружено 4 полипептида с
мол.м. 29-94 кД. Основной капсидный белок VP2 гликозилирован и индуцирует синтез
ВНА. Размножение бирнавирусов происходит в цитоплазме с последующим лизисом клеток.
Семейство Birnaviridae состоит из 3-х родов: Aquabirnavirus (вирус инфекционного нек-
роза поджелудочной железы рыб, Avibirnavirus (вирус ИББ) и Entomobirnavirus (вирус X
дрозофилы).
ИНФЕКЦИОННЫЙ БУРСИТ КУР
Gumboro disease of poul try (IBR), Infecrions bursal disease (англ.); Cumboro- Krank
heit, Ansteckende Bursa - Krankheit (нем.); Bursitis Infectiosa Calinae (лат.)
Инфекционный бурсит ИБ, болезнь Гамборо БГ; инфекционная бурсальная болезнь ИББ
- остро протекающая, контагиозная болезнь, поражающая чаще всего цыплят 2-15-нед воз-
раста. Проявляется диареей, апатией, отсутствием аппетита, иногда дрожью, вторичным
нефрозом, поражением фабрициевой бурсы, внутримышечными геморрагиями. Впервые бо-
лезнь зарегистрировали в 1957 г. в местечке Гамборо (США) на ряде птицеферм как конта-
гиозную болезнь цыплят неизвестной этиологии с признаками поражения почек и фабри-
циевой сумки. О специфическом возбудителе болезни впервые сообщил в 1962 г. Госгроу.
Он назвал эту болезнь инфекционным нефрозом птиц из-за чрезвычайно сильного пораже-
ния почек у экспериментально зараженных цыплят. Так как болезнь широко распространи-
лась в окрестностях Гамборо, то название “болезнь Гамборо” стало ее синонимом. В даль-
нейшем при попытке выделения этиологического агента произошла путаница в отношении
этиологии синдрома нефроза птиц. Поэтому в 1970 г. на 14-м Всемирном конгрессе по пти-
цеводству в Испании предложено не пользоваться термином “болезнь Гамборо” в номенкла-
туре заболеваний птиц, а принять название “инфекционый бурсит”, подразумевая под ним
поражение фабрициевой сумки, и как вторичный признак - нефроз.
Болезнь зарегистрирована во всех странах мира. Данные серологического исследования
показывают, что зараженность стад колеблется от 2 до 100%. ИБ распространен преимуще-
ственно в птицеводческих хозяйствах промышленного направления. Причиной этого счита-
ют постоянный импорт птицы.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Поражаются цыплята
3-6-нед возраста, болезнь у них протекает остро; а также цыплята моложе 3-х нед, не со-
держащие материнских АТ. Такая ранняя инфекция приводит к иммунодепрессии и повы-
5 Зак. № 171
65
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
шению чувствительности к секундарной инфекции. В крови больных птиц увеличивается
уровень мочевой кислоты и даже появляются кристаллические ураты в почках. Почечная
ткань дегенерирует с образованием лимфоидных скоплений. Вероятно, поражение почек
связано с появлением иммунных комплексов. Фабрициева сумка и селезенка подвергаются
лимфоидному некрозу. Инкубационный период болезни очень короткий. При эксперимен-
тальном заражении гистологические признаки повреждения бурсы обнаруживают уже через
24 ч, а клинические - через 2-3 дня. Болезнь длится 5-7 дн (Рис. 13). Она может протекать
подостро и латентно в зависимости от иммунного состояния поголовья. В чувствительных к
стадах кур она появляется внезапно, уровень заболеваемости нередко достигает 100%.
Один из первых симптомов ИБ - диарея, сопровождающаяся выделением водянистого
беловато-желтого помета. У больных цыплят наблюдают депрессию, а затем (в более позд-
ней стадии) - сенсорные нарушения: дрожание головы, шеи и затем глубокая прострация.
Заболеваемость и смертность нарастают быстро и достигают максимума на 3-4-й день бо-
лезни, далее, в течение 5-7 дн она обычно идет на убыль. Отличительные признаки болез-
ни - внезапность и высокий уровень поражения, зубчатая кривая смертности и быстрое вы-
здоровление (Рис. 15). Уровень смертности составляет 6%, но может достигать 20-37,6%. У
цыплят-бройлеров ИБ выявляется в раннем возрасте (2-8 нед). Птицы яйценоских пород бо-
лее чувствительны к заражению, чем бройлеры. При заболевании их смертность составляет
5-15% (72). Наибольшие экономические потери вызывает субклиническая инфекция у брой-
леров моложе 4-х нед. Она выражается, главным образом, в замедлении роста. При заболе-
вании взрослой птицы наблюдается лишь некоторое снижение процента жизнеспособности
эмбрионов. Вирус проникает через пищеварительный тракт и через 24-48 ч обнаруживает-
ся в фабрициевой сумке, где на 12-15-й день эмбриональной жизни образуются В-
лимфоциты (58).Иммунодепрессивное действие вируса проявляется снижением уровня сы-
вороточного комплемента и нарушением системы свертывания крови. В последние годы за-
метно увеличилось число вспышек ИБ, протекающего субклинически. При этом, раннее ин-
фицирование приведет к угнетению иммунитета, что способствует возникновению сопутст-
вующих инфекционных болезней. Развитие хронических респираторных болезней на фоне
ИБ может приводить к появлению синдрома опухания головы. У таких птиц обнаруживают
опухшие подглазничные синусы, экссудат в носовых полостях, трахее и легких. При вскры-
тии из пораженных тканей часто выделяют сапрофитную микрофлору, стафилококки, стреп-
тококки, псевдомонады и др. ИБ обычно наблюдают у цыплят между 21-35 дн жизни, как
правило, после вакцинации их против НБ и ИБК. Помимо того, причиной различного про-
явления болезни могут быть различные варианты самого вируса (66а, 66b).
Патологоанатомические изменения при первых вспышках болезни обычно наиболее яр-
кие. В последующих выводах подобные вспышки среди цыплят повторяются время от вре-
мени, протекая менее тяжело и часто проходят незамеченными. Трупы цыплят хорошо упи-
таны, однако мышцы их обезвожены и бледны, зоб пустой. В грудных мышцах, особенно, с
медиальной стороны бедер и крыльев, встречаются точечные и пятнистые кровоизлияния,
реже - на серозных покровах органов грудобрюшной полости. При экспериментальной ин-
фекции кровоизлияния обнаруживаются только у 1% птиц. Печень резко увеличена, на по-
верхности ее видны следы от ребер. Почки набухшие, увеличены, от светло-серого до темно-
коричневого цвета, с четким рисунком заполненных уратами канальцев и мочеточников.
Изменения почек встречаются непостоянно, при экспериментальной инфекции их обнару-
живают примерно у 5% птиц. Кроме того, отмечают увеличение селезенки, катаральный эн-
терит, геморрагии слизистой оболочки железистого желудка и в миндалинах слепой кишки.
Фабрициева сумка является мишенью для вируса. Макро- и микроскопические измене-
ния в ней после заражения 1-сут цыплят появляются в 5-дн возрасте. Ярко выражены и
весьма закономерны поражения бурсы, которые обнаруживаются даже в случаях бессим-
66
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
птомной инфекции. Бурса увеличена в 3-4 раза и более. У экспериментально зараженных
бройлеров выявлены неоднотипные патоморфологические изменения в различные сроки по-
сле заражения. Увеличение бурсы наблюдали через 36 ч после инфекции, наибольшей ве-
личины она достигала через 48 ч, а спустя 33 дня - в 3-4 раза была меньше, чем у контроль-
ных птиц. Серозная оболочка желтоватого цвета, с заметной полосатостью. Слизистая отеч-
ная, покрасневшая, иногда пронизана петехиями. В просвете между складками бывает за-
метен экссудат с хлопьями фибрина, в тяжелых случаях - кровянистая жидкость или сыро-
подобные фибринозные слепки. При вскрытии у птиц находят красноватые эрозии предже-
лудка, гепатит с обесцвечиванием печени, нефрит без гипертрофии почек, атрофированную
селезенку, петехии в фабрициевой бурсе, но без гипертрофии, геморрагии и петехии в груд-
ных мышцах и часто в мышцах ног, серозный перикардит, гипертрофию бурсы. Через неде-
лю поражения становятся иными: серофибринозный перикардит, гепатит и нефрит, псевдо-
мембранный сальпингит. Спустя несколько дней почти у всех бройлеров находили пери-
кардит, аэросаккулит, перигепатит, перитонит.
Патогенез. Микроскопические изменения, характерные для ИБ, находят в фабрициевой
сумке больных птиц. В основном они характеризуются некрозом лимфоидных и гиперпла-
зией ретикулоэндотелиальных клеток, активизацией и пролиферацией кортикомедуллярного
эпителия, формирующего на месте фолликулов железы, подобные кишечным; утолщением
межфолликуляриых соединительных перегородок. Патогенез ИБ заключается в поражении
лимфоидных тканей, причем в первую очередь разрушаются лимфоциты фабрициевой сум-
ки, селезенки, цекальных желез слепых отростков и др. Он зависит от влияния иммунных
комплексов циркулирующих инфицированных лимфоцитов. Наиболее чувствительны к ви-
русу лимфоциты, на поверхности которых фиксируются IgM. Поэтому основная мишень для
вируса - подкласс В-лимфоцитов. Кровоизлияния в фабрициевой сумке, грудных и бедрен-
ных мышцах обусловлены участием комплемента. Вирус проникает через пищеварительный
тракт и спустя 24-48 ч локализуется в фабрициевой сумке.
Изучены детально патоморфологические аспекты ИБ птиц (36). Инфицированные клет-
ки бурсы резко отличаются от интактных. Ядра смещаются к периферии клетки, гетерохро-
матин конденсируется около кариолеммы, поэтому кариоплазма просветляется. Митохонд-
рии увеличиваются до 1-1,2 мкм, крипты разрушаются, матрикс становится электронно-
прозрачным. Цистерны эндоплазматической сети расширяются до 100-130 нм. Аппарат
Гольджи гипертрофирован, появлялись многочисленные вакуоли диаметром 1-1,5 мкм с
электроннопрозрачным или гомогенным электронноплотным содержимым, в последнем
случае связанным со стенками вакуолей рыхлым материалом в виде тяжей, а сами вакуоли
чаще всего имели вытянутую, каплевидную и реже округлую форму. Конечной стадией
формирования вирионов, по-видимому, является их агрегация в виде паракристаллических
скоплений диаметром 2-3 мкм в практически полностью разрушенной клетке (18,36).
Патогенез болезни зависит от воздействия иммунных комплексов циркулирующих ин-
фицированных лимфоцитов. Наличие гемморагических поражений в скелетных мышцах,
печени и других органах обусловлено участием в этих процессах комплемента. Присутствие
уратов в почках и увеличение содержания в крови мочевой кислоты свидетельствуют о по-
ражении почек. Повышение в крови лактатдегидрогеназы и глутаматоксолаттрансминазы
подтверждает поражение печени. Патоморфологические изменения бурсы патогномоничны :
для болезни. В цитоплазме гистиоцитов и макрофагов обнаруживали скопления вирусных
частиц размером 50-70 нм. Гематологические изменения характризуются лимфопенией и
эритроцитозом. За 2 дня болезни снижается общее количество лейкоцитов, на 5-й день оно
возрастает и достигает максимума на 7-й день после заражения. Перед смертью цыплят со-
держание лейкоцитов достигало 70%, половина из них были крупные недоразвитые клетки.
Установлена связь между возрастом цыплят и нарушением свертываемости крови. Высоко
5* ' .. 67
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
чувствительными к вирусу оказались лимфоциты, несущие на поверхности IgM. Эта под-
группа В-лимфоцитов и является мишенью. Вирус проявляет иммунодепрессивный эффект,
поражает преимущественно незрелые В-лимфоциты (61).
У заболевшей птицы ослаблен иммунный ответ на вакцинацию и повышена чувстви-
тельность к интеркурентным заболеваниям в т.ч. БМ, ИБ, ИБ и ЛТ (50). Вирус ИБ может
повышать чувствительность цыплят к кишечной палочке и оба агента вызывают развитие у
цыплят сходных дегенеративных изменений в фабрициевой бурсе и тимусе (34, 7). Первич-
ная атрофия бурсы сопровождается пролиферацией кортико-медулярного эпителия и обра-
зованием слизи в секреторных железах. Диарея при ИБ развивается в следствие репликации
вируса в энтероцитах крипт, что ведет к нарушению функции кишечника, его секреторной
деятельности и обезвоживанию организма. Развитие нефроза связывают с развитием ком-
плекса АГ-АТ, который разрушает эндотелий извитых канальцев и почечных клубочков. В
результате нарушается функция почек, что вызывает интенсивное отложение уратов. Одна-
ко поражение почек не следует считать патогномоничным признаком для ИБ (66). Цыплята,
инфицированные вирусом ИБ в суточном и в 7-дн возрасте E.coly (вирус + высоковирулен-
тая E.coli), погибали в 90% случаев при развитии тяжелой формы болезни, тогда как моно-
инфекция E.Coli индуцировала только 40%-ную летальность. Слабовирулентный шт. E.coli
вызывал 10%-ную гибель. Однако, при сочетанной инфекции погибало 50% цыплят (66).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые описан в 1962 г. в районе Гамборо штате Делавер, США. Вначале забо-
левание характеризовалось как птичий нефроз. Год спустя аналогичное заболевание было
зарегистрировано в Австралии как “уремия”. В 1962 г. вирус был выделен на КЭ (87), а за-
болевание назвали “инфекционной бурсальной болезнью”. Позднее заболевание с почечным
синдромом было отнесено к инфекционному бронхиту, а заболевание с поражением бурсы
Фабрициуса - к инфекционной бурсальной болезни.
Морфология и химический состав. Вирионы имеют форму 20-гранника, капсид со-
стоит из 32 капсомеров, вирион безоболочечный, 55 нм в диаметре. У вируса установлена 2-
спиральная РНК (59). Обнаружено 2 типа частиц вируса: большие - 55-60 нм и маленькие -
18-22 нм при наличии одного поверхностного АГ. Вирус имеет 2 сегмента геномной РНК -
А и В. Сегмент А кодирует полипротеин ПО кД, который превращается в вирусные белки
VP2, VP3, VP4 и VP5 (57). РНК вируса в градиенте сахарозы седиментирует одним пиком с
коэффициентом 14S, что соответствует мол.м. 2,2-10б Д. Плавучая плотность ее в CsCl 1,62
г/см3, в градиенте сахарозы - 1,178 г/см3. Вирусная РНК на 95% устойчива к действию РНК-
азы А. Температура плавления ее в присутствии 1% формальдегида в стандартном буфере
составляет 95,5°С. При электрофорезе в 7,5% ПААГ препараты вирусной РНК разделены на
2 фракции. Геном вируса ИБ представлен 2-мя сегментами 2-спиральной РНК с мол.м.
2,5-105 и 2,2-105 Д. Из вирионов получено 5 полипептидов: VP1 (90000), VP2 (41000), VP3
(35000), VP4 (28000) и VP5 (17, 37, 62).
Белок VP3 обладает высокой иммуногенностью, он имеет эпитопы, индуцирующие син-
тез ВНА. Из вируса выделен один из главных структурных белков VP2b и VP2a. Конфор-
мационный эпитоп белка VP 2а/2Ь - один из главных субъединиц вируса ИБ типа I, ответст-
венных за иммуногенность (43,44). Замена одной аминокислоты в области, кодирующей АГ
структуру, ответственную за индукцию ВНА, ведет к нарушению нейтрализующих свойств.
Методом ПЦР амплифицированы вариабильные участки кДНК гена VP2 5-и штаммов
вируса ИБ. Определена последовательность нуклеотидов и рассчитана последовательность
аминокислот. Установлена тесная связь между 2-мя вакцинными iiit.GLS и Var-r (37а). Оп-
ределена также первичная структура фрагмента области основной АГ-детерминанты струк-
турного гена VP2, 6-и вариантов вакцинных штаммов и проведен их сравнительный анализ.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что выбор вакцинного штамма вируса ИБ
68
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
должен проводиться с учетом АГ структуры эпизоотического штамма. Целесообразно ис-
пользовать вакцинный штамм, обладающий наибольшей степенью гомологии в области АГ-
детерминанты с эпизоотическим штаммов вируса ИБ (27а). Существует корреляция между
АГ-свойствами и последовательностями нуклеотидов и аминокислот области сегмента А ге-
нома вируса, кодирующего VP2 (70а).
Устойчивость. Вирус резистентен к эфиру, хлороформу и изменению pH (2-11). Инак-
тивируется при pH 12. Сохраняет активность при 56°С 5 ч, при 60°С 30 мин, а при 30°С
в сухом помещении 150-180 дн; в присутствии 0,5%-ного фенола или 0,125%-ного мертио-
лята 1 ч. При воздействии 0,5%-ного формалина инактивируется за 6 ч, препаратами йода -
за 2 мин при 23 °C, 0,5%-ным хлорамином - за 10 мин. Устойчив к фотодинамии и УФ-
облучению, чувствителен к актиномицину Д.
Антигенная структура, вариабельность и родство. В структуре вируса обнаружено 5
белков. В структуре вириона выявлены белки VP1, VP2b (происходящий из VP2), УР2а
предшественник протеина VP2 и VP3 (17). Протеин VP2 ответственен за индукцию ВНА и
типоспецифичность, а группоспецифичность обеспечивается белком VP3. Серотип I, выде-
ленный от цыплят и патогенный для них, насчитывает 6 подтипов. Серотип II, изолирован-
ный от индеек, не патогенен для цыплят и индюшат, однако в отдельных случаях вызывает
поражение респираторного тракта и суставов у индюшек до 16-нед возраста.
АГ отличающиеся штаммы одни авторы рассматривают как штаммы серотипа I, а дру-
гие - как его подтипы, полагая, что существенные различия связаны с генетической реассор-
тацией или точечными мутациями. Такие изоляты вируса могут появляться в результате се-
лекции, связанной, в основном, с иммунным статусом птицы. Феномен такого рода присущ
и другим вирусам с сегментированным геномом. Привлекательно предположение о том, что
новые штаммы могут быть производными широко применяемых ранее живых вирус-вакцин
против ИБ. МонАТ, полученные на АГ, индуцирующий образование ВНА, или его детерми-
нанты, позволяют проводить тестирование и идентификацию вновь выделенных изолятов. С
их помощью можно детально изучать эволюцию и географическое распространение вируса
ИБ и различных штаммов. АГ-родство 2-х серотипов вируса ИБ (Си-1 от цыплят и 23/82 от
индюшат) не превышало 10-30%, поэтому перекрестный иммунитет минимальный. В 1986
г. идентифицировано уже 3 серотипа вируса. Вирус 1-го серотипа содержит белки VP1,
VP2, VP3 и VP4, а также белок VPx, который является предшественником VP2. У вируса 2-
го серотипа обнаружены белки, соответствующие VP1, VP2, VP3 и VP4. В Англии в подав-
ляющем большинстве стад кур АТ обнаружены одновременно к обоим серотипам. Между
вирусами 2-х серотипов существует лишь небольшое АГ-родство.
У индеек установлено 2 серотипа вируса ИБ. К 1-му были отнесены шт. AFL, ВВ, LyN и
NC, ко 2-му - МО и ОН (49). У них не обнаружены АТ к 1-му серотипу вируса ИБ (41).
Множество АГ вариантов вируса ИБ делится серологическими методами на несколько
групп: гомология меньше 10% - различия в серотипе, гомология 10-32% - большой подтип,
гомология 33-70% - малый подтип, гомология 71-100% - слабое различие или его отсутст-
вие. Все штаммы данного вируса иммуносупрессивны. Смертность и иммуносупрессия свя-
заны со стандартными и высоковирулентными штаммами 1-го серотипа. До 1980 г. преоб-
ладала циркуляция стандартного вируса, позже - его варианты (53).
Серотип I представлен 2-мя вариантами - VA и IM. Некроз тканей фабрициевой сумки,
вызванный изолятом IM, сопровождается воспалительной реакцией, тогда как у птиц, за-
раженных вариантом VA, воспалительная реакция была сглаженной. Кроме того, изолят IM
индуцировал более сильные изменения в тимусе по сравнению с изолятом VA. Указанные
варианты вируса патогенны и не нейтрализовались полностью АТ против вируса серотипа I.
Следовательно, вакцинация цыплят серотипом I не снимает возможную иммунодепрессию и
экономические потери при инфицировании серологически отличными вариантами (79).
69
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
Недавно в хозяйствах США был выделен новый АГ вариант вируса ИБ, который не
реагировал с монАТ против ранее известных штаммов, включая вакцинные (R63 и В69),
однако взаимодействовал с полиАТ. Авторы рекомендовали выделенный штамм для изго-
товления инактивированных и живых вакцин (76). Изоляты, выделенные в штате Джорджия
США U28 и 3212 различались по АГ сайтам, биологическим свойствам, патогенности и
степени поражения фабрициевой сумки. Атрофию вызывает больше изолят U28 (71,74).
В России изучена АГ вариабельность 6 вакцинных штаммов вируса ИБ с целью их
эффективного применения: Gumboral СТ, Bur 706 (Франция), Taviar IBD (Италия),
Gumbophyl (Венгрия), D78 (Голландия), БГ (Россия). Структурный ген VP2 (444 нуклеоти-
да, что соотвтствует 148 аминокислотам) кэпирован в состав плазмиды рИС-19. Вакцин-
ные штаммы подразделяются на 2 группы, которые существенно отличались друг от друга
(8% аминокислотных замен). Как видно из приведённых примеров выбор вакцинного
штамма вируса ИБ должен проводиться с учетом АГ структуры эпизоотического штамма.
Целесообразно использовать вакцинный штамм, обладающий наибольшей степенью гомо-
логии в области АГ-детерминанты с эпизоотическим штаммом вируса ИБ (27). АГ вариа-
бельность штаммов, изолированных в России, изучена методом прямого секвенирования.
Определена нуклеотидная последовательность детерминанты структурного гена VP2. Уста-
новлено, что значительная часть изолятов (8) образует относительно гомогенную группу (не
более 1,5% нуклеотидных и 1% аминокислотных замен). Остальные 5 изолятов имели более
существенные отличия (от 2 до 7% нуклеотидных и от 1,2 до 5,2% аминокислотных замен).
Локализация вируса. На 3-й день после экспериментального заражения 4-4,5-нед цып-
лят вирус в высоких концентрациях накапливается в фабрициевой сумке и селезенке, и в
более низких концентрациях - в мозге и крови. Из бурсальной ткани его выделяли до 14-го
дня после заражения, в ИФ - до 5-6-го, в ИД - до 3-4-го дня. У 1-дн цыплят через 3 дня по-
сле введения вируса отмечена высокая концентрация его в фабрициевой сумке, печени и
почках. Вирус хорошо реплицируется в макрофагах и несколько хуже - в ретикулярных
клетках, гетерофилах, эпителиальных клетках. Недавно было показано, что вирус размно-
жается в лимфоцитах. Лимфолитические явления наблюдались через 8 ч после заражения. В
цитоплазме макрофагов находили сферические и гексагональные вирусные частицы. По-
следние обнаруживали в цитоплазме макрофагов, лимфоцитов и ретикулярных эпителиаль-
ных клетках единичными или множественными пластами (69, 70).
При экспериментальном заражении вирус удавалось выделять в течение 10 дн, однако
патологические изменения в фабрициевой сумке сохранялись до 10 нед после заражения.
Это указывает на малую вероятность носительства вируса ИБ, кратковременность его нахо-
ждения в крови и возможность длительного обнаружения поражений фабрициевой сумки.
Антигенная активность. Через 3 нед после заражения 3-6-нед цыплят вирусом в сы-
воротках крови обнаруживают ВНА (достигают титра 1:718) и ПА. К 14-му дню титр ПА
достигал 1:128, и цыплята приобретали устойчивость к заражению патогенным вирусом. АТ
у кур-несушек передаются потомству трансовариально. ПА в сыворотке крови появляются у
птиц на 7-й, в фабрициевой сумке - на 12-й, в селезенке - на 15-й день после заражения.
ВНА в индюшиных хозяйствах Германии устанавливали сразу после вылупления птенцов.
Количество положительных сывороток к серотипу I варьировало от 65 до 80%, в других же
хозяйствах количество положительных сывороток к серотипу II достигало 75-100% (67).
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на 20-30-дн цыплятах при инокуля-
ции им вируссодержащего материала на слизистую оболочку глаз, в фабрициеву сумку или
per os. Первые признаки болезни проявляются тремором головы и тела, а через 48 ч - диа-
реей. На 3-й день фекалии становятся беловатыми и содержат слизь, но к 7-му дню болезни
приобретают нормальный вид. На 3-4-й день после заражения у цыплят отмечали увеличе-
ние фабрициевой сумки в 1,5-2 раза и отек. Бурса мягкая, бугристая, содержала вязкий сли-
70
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
зистый материал, внутренние складки воспалены и желтого цвета. На 22-23 сут после зара-
жения фабрициева сумка обычно уменьшается, консистенция ее становится плотной и на
разрезе гладкой, слизь отсутствует. В эпителиальных и ретикулярных клетках пораженных
фолликулов обычно обнаруживались ацидофильные включения, окруженные светлым ареа-
лом. Некротические участки фолликулов обильно заселены макрофагами. У части отмеча-
ют псевдокисты. Через 3-5 дн после заражения патологические изменения фабрициевой
сумки были настолько выраженными, что болезнь диагностировалась без затруднения.
На 33, 51 и 71 дни после заражения можно наблюдать атрофию бурсы. У 1-3 сут белых
мышей при интраперитонеальном и интрацеребральном их заражениях (шт. Becht) отмеча-
ли зуд, атаксию, дрожь, кому й негнойные лимфоцитарные воспаления мозговой ткани, со-
провождавшиеся некрозом, демиелинизацией и скоплением лейкоцитов вокруг кровенос-
ных сосудов. Крысы и хомяки также оказались чувствительными к интрацеребральному за-
ражению. Индейки клинически не реагировали, но образовывали ПА и ВНА. Голуби, утки,
гуси и перепела к экспериментальному заражению оказались резистентны (23). После ин-
трабурсального заражения здоровых цыплят вирусный АГ в тканях фабрициевой сумки по-
являлся в 100% случаев через 12-14 ч и обнаруживался с помощью МФА и РДП (69). Утки
чувствительны к вирусу ИБ серотипов I и II, но не проявляют клинических симптомов бо-
лезни, между тем серотип II широко распространен в природе (39). Патогенность вируса для
утят сравнительно низкая, и переболевание сопровождается анорексией с небольшим подъ-
емом температуры в течение 4-5 дн после заражения.
Культивирование. Вирус можно культивировать в КЭ, свободных от материнских АТ
к ряду вирусных болезней, в том числе и к ИБ. Помимо эмбрионов вирус удается культиви-
ровать и на SPF-цыплятах. У инфицированных эмбрионов вирус накапливается в желточ-
ном мешке и в меньшей степени - в аллантоисной жидкости. Гибель КЭ наступает на 3-8-й
день после заражения. У погибших отмечали отечность брюшной полости, кровоизлияния и
некрозы на теле, некроз и кровоизлияния в печени, почках, гиперемию легких. На ХАО ви-
димых поражений не развивается, лишь иногда обнаруживают небольшие кровоизлияния.
Отмечены “бледное сердце”, гиперемия и некроз почек, гиперемия легких. Японские штам-
мы вируса размножаются в утиных эмбрионах (лучше при заражении на ХАО, чем в жел-
точный мешок) и в культуре утиных фибробластов, но не в культуре клеток почки. Вирус
хорошо репродуцируется в культуре почечных клеток КЭ, вызывая на 3-5-й день заражения
ЦПД. Данная культура пригодна для титрования вируса, последовательные пассажи в ней
не ведут к аттенуации вируса в отношении цыплят. В культуре фибробластов КЭ вирус об-
разует бляшки (9, 28). В-клетки высокочувствительны к вирусу, а Т-клетки - нечувствитель-
ны. Установлено, что для выращивания вакцинного штамма БГ на перевиваемых культурах
клеток необходимо предварительное пассирование его в КЭ или ККФ для D-78 - 1-2 пасса-
жа, для Гумбофил - 2-3 пассажа. После этого (при инфекционной активности 104,”-10 5,5
ТЦД$о/мл) вакцинный вирус при оптимальных условиях в клетках Vero, RK-13, ВНК-21 ре-
продуцировался в титрах 1О5’5-1О6,0 ТЦДго/мл, а в клетках CV-1 и CG-91 - 104,75-105,5. В отли-
чие от вакцинного вирулентный вирус накапливался в более высоких титрах (28).
При инокуляции в аллантоисную полость вирус через 4 дн накапливается в титре 105
ЭИДзо/мл, а в культуре клеток утиных эмбрионов - 105 ТЦД^/шт. В культуре клеток почек
уток вирус не размножается. Показана возможность культивирования, типирования вируса
ИБ и проведения PH в перевиваемой культуре клеток LSCE-BK3, МА-104, Vero, BGM-70
(23). Вирус ИБ более интенсивно размножается в линии промоноцитов IN24, чем в клетках
линии ZSCC-NPJ (получена из клеток фабрициевой сумки курицы с лимфоидным лейкозом)
(64). Вирус ИБ индеек адаптирован к первичной культуре фибробластов КЭ. На 5-й день
клеточный монослой зараженной культуры полностью отделялся от стенок флаконов. Титр
вируса на 3-й день достигал 106,3 ТЦД^/мл (16). Индюшиный шт. М-72 активно размножался
71
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
в первичной культуре фибробластов и почек КЭ, а также перевиваемых линиях BGM-70 и
Vero с образованием характерного для вируса ИБ ЦПЭ. ЦПЭ обычно проявлялся на 3-й
день после инфицирования в виде грануляции клеток. При этом круглые и увеличенные в
размере клетки располагались в монослое одиночно и в виде скоплений клеток (гроздей).
Титр выделенного штамма в культуре клеток составлял на 4-й день после заражения 106'3
ТЦД5О/о,2 ми (16). Описано образование бляшек (шт. IPV) после 60 пассажей в ФЭК. Титро-
вание вируса в ФЭК - более чувствительный метод, чем в организме новорожденных мы-
шей. Телец-включений не находили. Вирус в культуре клеток КЭ формирует крупно-
(диаметр 5 мм) и мелкобляшечные (диаметр 1 мм) клоны. Крупнобляшечные клоны обла-
дали большей патогенностью, чем мелкобляшечные (73, 78).
Гемагглютинирующие свойства не установлены.
Различия в патогенности штаммов. Все классические вирусы ИБ, выделенные до
1985 г., имели сайт В 69, в то время как в вирионах (De Lavare, A, D, G и Е), выделенных в
1985 г., он отсутствовал (80). Для штаммов вируса ИБ характерна как высокая, так и уме-
ренная патогенность. Они могут быть и апатогенными. Высоковирулентные штаммы ИБ
вызывают острую форму заболевания с летальностью 30% и более. Слабовирулентные
(умеренные) штаммы индуцируют инфекцию со стертыми клиническими и патологоанато-
мическими признаками при летальности в среднем до 5%. Апатогенные штаммы индуци-
руют субклиническое течение заболевания, точнее инаппарантную форму болезни, харак-
терную для ряда вирусвакцин, применяемых против ИБ. Следовательно, при внедрении
слабовирулентных и апатогенных штаммов может формироваться постинфекционный им-
мунитет, как при применении вакцин Bursin+, Bursin-2, 228Е и D-78 (17). О выделении
природно ослабленного вируса ИБ впервые сообщили канадские исследователи (47а). В
1990 г. в Японии имела место среди кур эпизоотия ИБ с высокой летальностью. Изучено 29
штаммов вируса в РДП с использованием сыворотки к штамму вируса и АГ, приготовлен-
ных из тканей фабрициевой сумки инфицированных 5-6-нед цыплят. Удалось объединить
изоляты в 3 группы. 1-я группа состояла из 16 штаммов, включая F539. К той же группе от-
носился высокопатогенный шт. DV86, изолированный в 1986 г. в Голландии. Два штамма
(группа 2) отличались как от F539, так и от G691. В 3-ю группу вошел G691 и 10 близких
ему штаммов; они были изолированы до 1984 г. и обладали низкой патогенностью (81, 83).
У SPF-цыплят, предварительно вакцинированных живой вакциной, выделено 4 изолята
вируса (A, D, G и Е). Изоляты отличались от классических штаммов тем, что очень быстро
вызывали атрофию бурсы с минимальной воспалительной реакцией, незначительную
смертность эмбрионов, но индуцируя у них некроз печени.
Интерфероногенные свойства. При заражении КЭ изолятом 2512 вируса ИБ наиболее
высокая его концентрация через 26 ч была обнаружена непосредственно в эмбрионе, а ми-
нимальная - в аллантоисной жидкости. Начало образования интерферона отмечено через 48
ч после инокуляции, но в эмбрионе и ХАО титр его достигал максимума через 72 ч, а в ал-
лантоисной жидкости - через 120 ч.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
ИБ болеют цыплята всех пород с 2-15-нед возраста. Наиболее восприимчивы 3-6-нед
цыплята породы белый леггорн. Сообщалось о самых ранних вспышках ИБ среди цып-
лят 11-дн возраста и самых поздних - в возрасте 84 дн. Заражение происходит при контакте
здоровых цыплят с больными и через инфицированные корма, воду, инвентарь. Возможна
передача вируса через яйцо и аэрогенно. Причиной поддержания инфекции в хозяйстве
служит длительное (до 120 дн) выживание вируса в помещении. Инфицирование цыплят в
раннем возрасте увеличивает процент заболеваемости и способствует более длительному
периоду вирусовыделения после заражения. Наличие этого вируса в организме цыплят сни-
жает иммунологический ответ на введение вакцинного вируса НБ.
72
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
Спектр патогенности в естественных условиях. Куры всех пород - единственный
вид, который поражается вирусом ИБ в естественных условиях. По-видимому, вследствие
высокого тропизма вируса к слизистой оболочке фабрициевой сумки экспериментальное за-
ражение птицы удается в период функционирования этого органа. При заражении взрослых
кур-несушек, а также 1-14-дн цыплят не отмечено симптомов болезни. В 12 штатах США
вирус изолирован от 6-нед индюшат и индеек, у которых была отмечена диарея; вирус ока-
зался родственным референтному шт. ТВ89. Помимо кур и индюков вирус также выделен от
летучих мышей и москитов. В последние годы его стали выделять и от уток. Впервые в на-
шей стране вирус выделен из гомогената фабрициевых сумок индюшат 24-37-сут возраста и
идентифицирован как вирус ИБ индеек II серотипа (шт. М-92) (15,16 ).
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больная птица. Возбу-
дитель передается с корма ми, водой, инвентарем, через яйцо, аэрогенно и др. способами.
Гельминтов и вшей считают прямыми векторами передачи. Дикие птицы могут быть пря-
мыми и непрямыми векторами.
ДИАГНОСТИКА
ИБ трудно выявляемая инфекция, которая распространяется незаметно, маскируется
другими болезнями и физиологическими нарушениями и лишь при типичном течении срав-
нительно легко диагностируется по клиническим и патологоанатомическим признакам. Вне-
запное появление болезни, сопровождающейся массовыми водянистыми поносами, высокой
заболеваемостью, быстрым распространением и переболеванием в течение 5-7 дн и зубча-
той кривой смертности, дают основание заподозрить наличие ИБ в хозяйстве. Подтвержде-
нием диагноза может быть обнаружение характерных изменений в фабрициевой сумке. На
ранней стадии или при субклиническом течении необходимы лабораторные исследования.
Идентификацию вируса проводят с помощью PH и ИФА в модификации, соответст-
вующей цели исследования и на соответствующих тест-системах. Наличие вируса в мазках
из фабрициевой сумки определяют с помощью иммунопероксидазного окрашивания в при-
сутствии авидин-биотинпероксидазного комплекса с использованием монАТ вирусу ВК70.
Этот тест наиболее быстрый и высокоспецифичный.
Экспресс-диагностика. В настоящее время методы экспресс-диагностики детально не
разработаны и не узаконены. Имеются сообщения о возможности применения в качестве та-
ковых непрямого варианта ИФА (3, 4) и ИФ. Разработана схема постановки ПЦР, осущест-
влен подбор вирусспецифических праймеров. Метод ПЦР использован для выявления виру-
са ИБ в фабрициевых сумках инфицированных кур. Отработаны оптимальные условия ам-
плификации фрагментов гена VP2, кодирующего структурный белок, ответственный за вы-
работку ВНА против ИБ. Последующее секвенирование амплифицированных вирусспеци-
фических фрагментов позволяет проводить идентификацию и дифференциацию вакцинных
штаммов и полевых изолятов (27в).
Выделение вируса. Успех выделения вируса зависит от срока после заражения и воз-
раста инфицированной птицы. Выделение вируса обычно успешно до 14 дн после зараже-
ния, а РДП и ИФ - до 3-5-го дня после заражения, эти реакции и более надежны, если ста-
вятся с бурсальной тканью. Вирус ИБ обнаруживается в мышечном желудке, 12-перстной
кишке и почках через 12 ч, а в селезенке и бурсе через 24 ч после заражения цыплят per os.
Наилучшим сроком выделения вируса из пораженной бурсы является период - 4-8 дн. Глав-
ная система репликации вируса - это лимфоциты, макрофаги и ретикулярные клетки бурсы,
а также лимфоидные клетки слепой кишки.
Взятие и подготовка материала. Для лабораторных исследований от павшей или уби-
той птицы берут фабрициеву сумку, печень, селезенку, почки. Пробы отбирают при появ-
лении первых клинических признаков болезни (в течение первых 7 дн). Через неделю после
начала болезни вирус практически выделить не удается. Материал пересылают в лаборато-
73
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
рию в термосе со льдом. Из кусочков патматериала готовят 10%-уею суспензию на изото-
ническом р-ре NaCl, центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость,
после добавления антибиотиков (пенициллин 1000 ЕД/мл и стрептомицин 100 мг/мл), вы-
держивают в холодильнике при 4°С 6-12 ч и используют для заражения КЭ, культур клеток
и восприимчивой птицы
Заражение куриных эмбрионов. Используют 10-11-дн SPF-эмбрионы или эмбрионы
из хозяйств, благополучных по инфекционным заболеваниям. КЭ заражают на ХАО обще-
принятым способом, инкубируют 10 дн, ежедневно овоскопируют. В первые 24 ч после за-
ражения гибель их считается неспецифической. Погибшие КЭ вскрывают в день гибели по-
сле охлаждения при 4°С в течение 2-3 ч, а живые - на 10-й день инкубации, также после ох-
лаждения. При наличии вируса КЭ гибнут на 3-7 день после заражения с характерными из-
менениями. На 3-й день после заражения отмечают гиперемию и точечные кровоизлияния
на коже в области головы и конечностей, иногда незначительные утолщения и помутнение
ХАО. На 4-5-й день появляются отеки подкожной клетчатки в области головы и брюшной
стенки зародыша, многие эмбрионы отстают в развитии. Печень у них увеличена, желтова-
того цвета, с зеленовато-белыми очажками различной формы на поверхности. Селезенка
увеличена, бледная, с некротическими очажками величиной с просяное зерно. Сердечная
мышца бледная, фабрициева сумка без видимых изменений.
Поскольку вирус ИБ не обладает ГА-свойствами, аллантоисную жидкость павших КЭ и
с выраженной задержкой в росте проверяют на отсутствие гемагглютинации. Так как наи-
большее накопление вируса в КЭ отмечается в ХАО и теле КЭ, особенно в печени, для пас-
сажа отбирают ХАО и тело эмбриона (23).
Заражение культуры клеток. Для изоляции вируса используют 24-48-4 культуры
ФЭК. Срок наступления ЦПД зависит от дозы вируса и числа пассажей. При первичном его
выделении специфические изменения обычно наблюдаются после 2-3 пассажей вируссодер-
жащего материала. ЦПД проявляется через 49-72 ч после инфицирования клеток и характе-
ризуется образованием в монослое пустот, вакуолизацией и округлением клеток, в дальней-
шем цитолизом и пикнозом ядер, образованием клеточных конгломератов, соединенных ци-
топлазматическими тяжами. Специфичность ЦПИ подтверждается заражением КЭ и поста-
новкой PH. Рекомендуется использовать для этого линию клеток Лейкозных опухолей -
LSCE-BK3. Изоляты вируса в культуре ФЭК или клетках почки цыплят обычно проверяют
по следующим параметрам: ЦПД, терморезистентность, устойчивость к хлороформу, тип
нуклеиновой кислоты, отсутствие внутриклеточных включений, отрицательная гемагглюти-
нация, АГ тождественность референтным штаммам вируса
Заражение цыплят. Биопробу на цыплятах ставят с целью выделения вируса, изучения
его патогенности, а также экспериментального воспроизведения заболевания. Заражают цы-
плят 21-25-дн возраста, не имеющих АТ к вирусу. Исследуемый материал вводят интрана-
зально в дозе 0,5 мл, на конъюнктиву, в фабрициеву сумку или per os 10-15 цыплятам, за
которыми наблюдают 15 дн. Результаты оценивают учитывая клиническое проявление бо-
лезни, патологоанатомические изменения, наличие специфических АТ в сыворотке крови.
Наиболее восприимчивы к вирусу ИБ SPF-цыплята 20-сут возраста и 40-сут цыплята из
промышленных интактных к ИБ стад. Установлено, что взрослые SPF-куры болеют ИБ, хо-
тя клинические признаки у них менее выражены. Для биопробы используют гомогенезиро-
ванную ткань бурсы Фабрициуса. Клинические симптомы появляются на 3-й день, а на 4-й
наблюдается обширное поражение бурсы. Поражение бурсы проявляется через 1 сут после
заражения и характеризуется исчезновением небольших зон лимфоцитов, которые состав-
ляют сетчатую структуру фолликулов. Через 1-5 дн после заражения появляются гетерофи-
лы, пикнотический дебрис и множество ретикулярных клеток, заменяющих новые быстро
исчезающие лимфоциты. В селезенке наблюдается гиперплазия ретикулоэндотелиальных
клеток. В миндалинах слепой кишки отсутствуют фолликулы и лимфоциты. В почках появ-
74
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
ляются большие цилиндры гомогенного инфильтрированного материала. При инокуляции
слабовирулентного вируса ИБ симптомы болезни и видимые, патологоанатомические изме-
нения в органах и тканях могут и не развиваться. В этом случае результаты биопробы оце-
нивают по обнаружению вирусспецифического АГ и АТ в PH и РДП.
Индикация и идентификация вируса
Вирусоскопия, электронная и иммуноэлектронная микроскопия. Разработан точеч-
ный иммуноблотинг для обнаружения с помощью 2-х монАТ вируса ИБ в материалах из за-
раженных клеточных культур и в образцах ткани селезенки кур. Предел чувствительности
монАТ, как иммунологических зондов, составлял 48 нг АГ. МонАТ выявляли присутствие
вирусного АГ в тканях бурсы и селезенки через 2 сут после заражения (56). Дот-
блотгибридизацией вирусспецифической РНК вирусспецифический АГ выявлялся уже
спустя сутки после заражения. Этот метод более чувствителен, чем методы ИФ и РДП (38).
ИФ. Рекомендуется как дополнительный метод экспресс-диагностики, так как позволяет
установить диагноз в течение 2-3 ч с момента доставки патматериала. С этой целью приме-
няют прямой и непрямой варианты ИФ. Для ИФ из ткани фабрициевой сумки больной или
павшей птицы готовят тонкие мазки-отпечатки (не менее трех) на обезжиренных предмет-
ных стеклах, высушивают на воздухе, фиксируют 10-20 мин в ацетоне, дважды отмывают в
2-х сменах 0,01 М фосфатно-буферного р-ра, приготовленного на 0,15 М р-ре NaCl (pH
7,2-7,4), затем снова высушивают при комнатной температуре и окрашивают общеприня-
тым методом. В качестве контроля используют препараты, приготовленные из фабрициевой
сумки здоровых цыплят и аналогично обработанные. Диагноз считают положительным, ес-
ли во всех 3-х препаратах обнаружено не менее 2-3 клеток со специфическим ярко-зеленым
свечением АГ в цитоплазме (мелкие гранулы или диффузный ореол вокруг ядра). Ядерного
свечения нет. Интенсивность и форма свечения вирусного АГ в клетке зависят от стадии
развития болезни. Так, по данным А.С. Алиева (1-4), АГ выявлялся через 24 ч после инфи-
цирования, значительное возрастание интенсивности свечения обнаружено с 3-го по 10-й
день после заражения, а на 11-12-й день количество флюоресцирующих клеток уже снижа-
лось, и на 13-й день они полностью отсутствовали. Помимо фабрициевой сумки специфиче-
ская ИФ отмечалась в цитоплазме лимфоидных клеток с 3-го по 5-й день после заражения.
В препаратах из головного мозга, тимуса, легких, сердца, печени, почек и миндалин слепых
отростков кишечника экспериментально зараженной птицы не удалось обнаружить АГ.
Кроме мазков-отпечатков для ИФ можно использовать и криосрезы из органов. Для это-
го пробы исследуемых тканей замораживают в петролейном эфире, охлажденном до -76°С в
смеси ацетона и сухого льда, затем их примораживают к блоку микротома и переносят в
криостат (-25°С). Срезы готовят толщиной не более 4-5 мкм. В сравнительных исследова-
ниях мазков-отпечатков и криосрезов из фабрициевых сумок больных цыплят показано, что
в гистосрезах была более отчетливая флюоресценция в цитоплазме и несколько слабее в яд-
рах клеток. Специфические сыворотки для ИФ получают на цыплятах-гнотобиотах 4-нед
возраста путем окулярной инокуляции 104 ИД50 шт. ВАИ53 20-го пассажа. Сыворотки, об-
ладающие высокой активностью и специфичностью в ИФ, были получены при иммунизации
кур и кроликов концентрированным очищенным вирусом (степень очистки препарата со-
ставляла 99%) с титром 106’5 ЭИД5о/о,2мл- Средний титр ВНА составил 5 1g, ПА - 1:32-1:64.
Для конъюгации использовали сыворотки с показателями титра ПА не ниже 1:32.
PH. Это основной тест для идентификации вируса ИБ. В ней используют специфиче-
скую гипериммунную к вирусу и нормальную сыворотку, а в качестве АГ - выделенный на
КЭ вирус. Перед постановкой реакции сыворотки инактивируют 30 мин при 58°С. PH ставят
по общепринятой методике по варианту: постоянная доза сыворотки и различные разведе-
ния вируса. Гипериммунную и нормальную сыворотки разливают по 0,5 мл в стерильные
пробирки. Затем в каждую из них добавляют по 0,5 мл вируса в разведении 10'5-10'9. Шта-
75
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
тив с пробирками встряхивают и выдерживают при 37°С 30 мин или при 4°С 18-20 ч. По-
лученные смеси в дозе 0,2 mj вводят в аллантоисную полость 4-, 6- и 9 дн эмбрионов, кото-
рые затем инкубируют при 37°С. Дважды в день их овоскопируют и павших (после охлаж-
дения) вскрывают. На 10-й день инкубации все эмбрионы вскрывают для выявления специ-
фических изменений. Результаты выражают индексом нейтрализации (ИН), который опре-
деляют по общепринятой методике.
РДП. Широко применяют как с целью индикации и идентификации вируса, так и для
обнаружения АТ. Реакция специфична, может проводиться в более ранние сроки, начиная
с 8-го дня болезни. Предложен быстрый (в течение 45 мин) метод обнаружения в РДП спе-
цифических АТ в сыворотках крови птиц. В качестве АГ могут быть использованы фабри-
циевы сумки зараженных цыплят. Считают, что концентрация преципитиногенов и положи-
тельно реагирующих проб значительно больше при использовании фабрициевых сумок, взя-
тых через 3-4 дня после заражения цыплят. ХАО КЭ не пригодны для диагностики ИБ в
РДП, т.к. не обладают преципитирующими свойствами. РДП ставят по общепринятой мето-
дике на предметных стеклах или в чашках Петри в 1%-м агаровом геле (32). Реакцию учи-
тывают через 24-48 ч инкубирования при комнатной температуре. Чувствительность РДП
связана с применением 0,01 М трис-HCl буфера (pH 7,3), АГ в исходной концентрации и
иммунной сыворотки в рабочем разведении. Для ретроспективной диагностики исследуют в
РДП сыворотки крови от суточных цыплят или от птиц старше 3-х мес (3, 4,12,13,14).
РИГА. Оказалась пригодной для диагностики ранней инфекции, а РТНГА - для индика-
ции и идентификации вируса ИБ, выделенного на КЭ. Установлено, что сывороточные АТ,
агглютинирующие сенсибилизированные эритроциты, выявляются у отдельных птиц уже на
3-5-й день после заражения в титрах 1:8-1:16, а к 2-3 нед после заражения - у 25-70% птиц в
титрах 1:16-1:32. Титр АТ нарастал до 3-4-й нед, затем снижался до 1:2-1:4 (10).
ВНА получают на кроликах массой 2-3 кг по схеме: вируссодержащую аллантоисную
жидкость вводят внутривенно 3 раза в неделю (через день) в течение 2 нед в дозах: в 1-ую
неделю - по 3 мл, во 2-ую - по 5 мл. Через 7 дн после последней инъекции внутрибрюшинно
вводят 10 мл вируса, а на следующие сутки внутривенно - 12 мл. Через 12 дн после послед-
него введения вируса кроликов обескровливают. Стерильные сыворотки расфасовывают по
1 мл и лиофилизируют. Активность и специфичность ее оценивают по ИН, который должен
быть не ниже 100. ПА получают на 21-25-дн цыплятах, 1-кратно зараженных вируссодер-
жащим центрифугатом внутрибрюшинно в объеме 2 мл. Через 7-14 дн после заражения у
цыплят из подкрыльцовой вены берут кровь. При наличии ПА цыплят обескровливают и
получают сыворотку. Цыплят, в крови которых не установлены ПА, дополнительно иммуни-
зируют по следующей схеме: одновременно внутримышечно и внутривенно вводят по 3 мл
вируссодержащей аллантоисной жидкости, через 7 дн иммунизацию повторяют, а спустя 14
дн цыплят обескровливают. Стерильную сыворотку разливают по 1 мл, лиофилизируют.
Активность и специфичность ее проверяют в РДП со специфическим АГ (26).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Основывается на обнаружении ВНА и ПА в сыворотках крови больных и переболевших
птиц. Выделение вируса из пораженных органов удается не всегда, поэтому лучшим мето-
дом диагностики ИБ является серодиагностика. Кроме того исследование сывороток прово-
дят при бессимптомном течении болезни. Используют парные сыворотки крови, получен-
ные от одних и тех же птиц (или от одной и той же группы птиц). Важное значение в про-
филактике ИБ имеет систематический контроль за иммунным состоянием стада. Такой кон-
троль осуществляют посредством периодических исследований парных сывороток крови.
PH. В качестве АГ используют эталонный вирус ИБ. Исследуемые сыворотки и нор-
мальную (контрольную) сыворотку перед постановкой реакции инактивируют при 58°С 30
мин. ВНА в сыворотке больных цыплят обнаруживаются, начиная с 13-го дня после зара-
76
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
жения, их уровень зависит от возраста птицы, используемой для заражения. Так, у 4-нед
цыплят уровень АТ выше (ИН 3,5 1g), чем у 3-нед (1,5-2 1g). Способность вырабатывать АТ
после введения вируса у старших цыплят выражена сильнее, чем у молодых; АТ сохраняют-
ся в течение более 3 мес. ВНА обнаруживали через 3 дн в титре 1:8 у цыплят, зараженных
вирусом Cu-IM. Титр АТ достигал максимального значения (1:8000) через 7 дн.
РДП ПА у птиц появлялись через 5 дн после экспериментального заражения и обнару-
живались в течение 24 дн, по одним данным, и 70 дн, по другим, или всего периода яйце-
кладки. Интенсивность РДП зависит от сроков исследования после заражения: реакция
проявляется слабо до 10-го дня после заражения, становится заметной к 20-му дню и дер-
жится более 20 нед. У цыплят, полученных от несушек, реагирующих интенсивно в РДП,
ПА могут быть обнаружены до 5-6-дн возраста. Сыворотки с высокими титрами ВНА обыч-
но бывают положительными и в РДП.
Установлена зависимость возраста птицы и титра АТ; так, у 1-2-нед цыплят установле-
ны титры АТ 1:4 - 1:16, а у 3-нед - понижение до 1:2, у 4-6-нед - отсутствие АТ, что соот-
ветствовало морфологическим изменениям в исследуемых органах (фабрициева сумка, се-
лезенка, зобная железа и миндалевидные железы слепой кишки). ПА у птиц образуются при
естественном или искусственном заражении на 5-6-й день и сохраняются 2-3 мес, а ВНА
чаще обнаруживают через 3 нед и сохраняются значительно дольше. Из этого следует, что
отрицательный результат в РДП не говорит об отсутствии в сыворотке АТ к вирусу ИБ. Раз-
работан быстрый количественный метод РДП для оценки титра АТ к вирусу ИБ с исполь-
зованием 96-луночных панелей,а также метод обнаружения АТ в РДП в течение 45 мин.
Для приготовление антигена для РДП эталонным штаммом вируса заражают на ХАО
10-11-дн КЭ в дозе 0,2 мл. Через 72 ч инкубации КЭ охлаждают 4 ч при 4°С и вскрывают.
ХАО собирают в отдельные пробирки. Вируссодержащие ХАО (каждую в отдельности) го-
могенизируют 10 мин при 3000 мин'1, центрифугируют и надосадочную жидкость после
проверки в РДП (с положительным результатом) с заведомо известной преципитирующей
сывороткой используют в качестве АГ. Аналогично готовят и контрольный АГ из ХАО не-
зараженных КЭ. Для получения АГ из фабрициевой сумки заражают интраназально 10-15
цыплят 20-25-дн возраста вируссодержащей аллантоисной жидкостью в дозе 0,5 мл. Через
72 ч цыплят с клиническими признаками болезни убивают, берут фабрициевы сумки, из-
мельчают их и готовят 10%-ную суспензию на физиологическом р-ре, центрифугируют 15
мин при 3000 мин1. Надосадочную жидкость после проверки в РДП используют в качестве
АГ. Аналогично готовят контрольный АГ из фабрициевых сумок незараженных цыплят.
ELISA (ИФА). Для широкого серологического обследования применяют ИФА (ELI
SA). Он позволяет раньше других тестов определять появление гуморальных АТ. Предло-
жен кинетический Kits-ELISA для определения уровня АТ у птицы, иммунизированной про-
тив ИБ. Kits-ELISA позволяет на микропланшетах одновременно анализировать 60 образ-
цов. Блокирующий вариант ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью.
Чувствительность этого метода в 100 и более раз выше чувствительности РДП при выявле-
нии АТ к вирусу ИБ. Его можно применять для серодиагностики вирусных инфекций и оп-
ределения напряженности поствакцинального иммунитета. При исследовании сыворотки
крови кур на наличие АТ в ИФА и РДП получены сопоставимые результаты, что позволяет
рекомендовать ИФА для практического использования в диагностике ИБ. Детально отрабо-
тана методика постановки непрямого варианта ИФА (12,19,20, 21).
Дифференциальная диагностика
ИБ необходимо дифференцировать от ИБК, НБ, БМ, лимфоидного лейкоза, саркомы
Рауса, кокцидиоза, нефрозо-нефрита, аденовирусной апластической анемии, синдрома ожи-
рения печени и почек, авитаминоза А, отравлений химическими иммунодепрессантами. При
дифференциальной диагностике учитывают комплекс эпизоотологических, клинических, па-
77
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
тологоанатомических, гистологических исследований и окончательно подтверждают виру-
сологическими и серологическими результатами. Доказано бессимптомное течение ИБ цып-
лят, которое удалось устанавливать с помощью гистологического и серологического иссле-
дований в первую неделю после вылупления.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Применение живых вакцин
Выявление АТ без выделения инфекционного агента не может служить основанием для
вынужденной вакцинации. Прежде всего необходимо идейтифицировать серопринадлеж-
ность вируса, определить вирулентность и подтип. Серотип II, индуцирующий ПА, а также
АТ, выявляемые с помощью ТФ ИФА, не вызывает патологии. Кроме того, следует уточ-
нить, какой уровень АТ и процент их циркуляции в стаде являются показанием для вынуж-
денной вакцинации. По данным зарубежных исследователей, надежный уровень защиты
обеспечивают титр ВНА не ниже 2,0 1g, ПА 1:8 и выше, АТ, выявляемых ТФ ИФА,- не ни-
же 1:8000. В связи с этим следует определиться с диагностическим титром в зависимости от
серологической реакции, применяемой для детекции АТ, и уровня сероконверсии при иссле-
довании парных сывороток.
При проведении мер специфической профилактики необходимо учитывать факторы, от-
рицательно влияющие на формирование стойкого иммунитета у птицы, включая АГ-
различия вируса ИБ. Эго прежде всего тип АГ, способ и частота (схема) его применения в
процессе вакцинации, степень аттенуации или инактивации. Известно, что живой АГ инду-
цирует как системный, так и локальный (в местах наиболее вероятного проникновения воз-
будителя), а инактивированный АГ- только системный (гуморальный) иммунитет. Отрица-
тельно сказывается на иммунной системе высокая плотность посадки птицы, несбалансиро-
ванное кормление, нарушение технологических приемов, санитарного режима и, особенно,
инфицированность стада различными возбудителями, токсины и т.д. Полноценное питание
обеспечивает высокую естественную резистентность, а витамины A, D3, Е и Zn действуют
как адъюванты, способствующие выработке полноценного и напряженного иммунитета.
Схемы иммунизации против ИБ не могут быть одинаковыми для разных хозяйств, не-
обходим глубокий и всесторонний анализ с выявлением соответствия (АГ-родства) приме-
няемых вакцин с циркулирующим среди птиц эпизоотическим штаммам ИБ (17, 23,24, 25).
По наблюдениям ряда исследователей, общие ветеринарно-санитарные мероприятия не
обеспечивают полного оздоровления хозяйств от ИБ. Поэтому в комплексе мероприятий по
профилактике и ликвидации инфекции основное внимание уделяется специфической профи-
лактике - вакцинации, которая должна проводиться с учетом материнских АТ (48а, 89а).
Так, установлена высокая степень корреляции (г) между содержанием АТ в сыворотке крови
несушек и желтках: для вируса ИБ - 0,84, вируса ИБК - 0,84, для реовируса - 0,91. Опреде-
ление АТ в желтке яиц при мониторинге бройлерных промышленных стад с помощью
ELISA вполне выполнимо и рекомендовано для широкого использования (75). Цыплята,
имеющие материнские АТ в 1-сут возрасте, обычно защищены от появления клинических
признаков болезни на протяжении первых 30 дн жизни (32). Дифференциация полевых изо-
лятов (шт. U-28 и 3212), отнесенных к серотипу I, показала, что АГ-родство между ними со-
ставило всего 35%. Эти изоляты вызывали частичную атрофию бурсы без клинического
проявления болезни и гибели птиц, но снижали их мясную продуктивность. АГ родство
указанных изолятов с референс-штаммами было изучено в PH. АГ родство шт. U-28 и 3212
со шт. A (Delmarve), В (Alabama), LU, D-78 не превышало 17,7%, а со шт.МО - 2,2%, тогда
как между шт. А и В оно было равно 100%. У вируса серотипа II АГ-родство с другими
штаммами было еще меньше. Поэтому один из основных факторов эффективности специ-
фической профилактики - соответствие циркулирующих эпизоотических штаммов и реко-
мендуемых вакцин против ИБ.
78
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
Разработанные в 70-е гг. первые вакцины из аттенуированных полевых изолятов часто
не давали положительного результата и могли вызывать клиническую форму ИБ. Усовер-
шенствованные в последствии, так называемые “умеренные” вакцины не могли преодоле-
вать пассивный иммунитет, а у интактных цыплят вызывали иммуносупрессию и клиниче-
скую форму болезни. Полученные затем аттенуированные вакцины из клонированного шт.
PGB-98 (Baxenedal) и шт. D-78 успешно использовались для профилактики ИБ, но и они не
преодолевали высокий уровень трансовариальных АТ и, следовательно, не создавали на-
дежной защиты. Поэтому усилия ученых были направлены на создание живых вакцин, спо-
собных преодолевать пассивный иммунитет н формировать напряженный активный имму-
нитет. Такие “горячие” вакцины (Bursin+, Bursin 2, 228Е и др) обладали повышенной реак-
тогенностью для цыплят с низким уровнем трансовариальных АТ, вызывали переболевание,
активизировали условнопатогенную микрофлору, что вело к осложнениям и повышенной
летальности (17). Во ВНИИЗЖ были созданы живые вакцины на базе отечественных шт. БГ
и Winterfild, которые применяются в настоящее время для профилактики заболевания. Од-
нако в ряде случаев при применении этих вакцин наблюдались осложнения у птиц.
Стратегия борьбы с ИБ должна базироваться на эффективных ветеринарно-санитарных
мероприятиях, а затем на эффективной специфической профилактике (53а). В мировой
практике широко используются вирус-вакцины из клонированных и в различной степени ат-
тенуированных штаммов, обладающих разной реакгогенностью. Их применяют в зависимо-
сти от эпизоотологического и иммунологического статусов птицепоголовья. Профилактику
ИБ осуществляют массовой вакцинацией. Племенные стада вакцинируют инактивированной
или лиофилизированной живой вакциной из умеренно иммуногенного штамма (72). В Анг-
лии, например, цыплятам 2-3-йед возраста вводят “умеренную” вакцину, а по достижении
возраста 16-20 нед - инактивированную эмульгированную маслянную вакцину. В Испании
цыплят в возрасте 3 нед и повторно в 40 дн возрасте прививают вакциной из шт. D-78, а в
100 дн - инактивированной вакциной. Голландские специалисты рекомендуют различные
вирусвакцины и схемы с учетом уровня материнских АТ: для бройлеров от вакцинирован-
ных родителей- вакцину из шт. 228Е в возрасте 14-17 дн, а от непривитых кур - 8-12 дн; для
цыплят яичных пород от вакцинированных родителей - первично в возрасте 3 нед и повтор-
но - 4 нед; от непривитых кур первично в 2 нед и повторно - в 3 нед возрасте; кур родитель-
ского стада прививают инактивированной вакциной в 16-20 нед возрасте.
Сотрудники ВНИИЗЖ рекомендуют применять вакцины из шт. БГ и Winterfild в зави-
симости от иммунного статуса птицы. Первично прививают в 5- или 10-дн возрасте, по-
вторно - в 15- или 20-дн возрасте и третий раз в 100-120-дн возрасте жидкой инактивиро-
ванной вакциной.
Большинство исследователей считают, что необходимо выяснить, какой титр пассивных
АТ не будет сказываться отрицательно на формировании поствакцинального иммунитета в
зависимости от реактогенности применяемых вакцин и выработать единый критерий оценки
(30, 31, 33, 35, 40, 47, 65, 48а, 89а). В Японии сравнительно изучена эффективность 3-х
вакцин против высоковирулентного шт. Ehime 91. Два среднеаттенуированные шт. А и В и
один промежуточный шт. С тестировали на SPF-цыплятах и промышленно выращенных
цыплятах, которые имели АТ. Цыплят вакцинировали в 20-дн возрасте и через 10 дн прово-
дили контрольное заражение шт. Ehime 91. Через 7 дн после этого оценивали уровень защи-
ты по отношению массы фабрициевой сумки к массе тела, гистологическим изменениям и
по титру специфических АТ. Все 3 штамма индуцировали защиту у SPF-цыплят. Однако у
промышленно выращенных цыплят только шт. С создавал 100% защиту от контрольного
заражения. Защитный эффект шт. А составлял 75%, а шт. В не индуцировал защиту. Вак-
цинные шт. А, В и С и шт. Ehime 91 индуцировали бурсальные повреждения у 3%, 0%,
23%, 61% инокулированных промышленно выращенных цыплят соответственно. Авторами
показана необходимость контроля уровня материнских АТ у 1-дн цыплят, чтобы определить
79
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
оптимальное время вакцинации против ИБ (84). Отечественная сухая вакцина против ИБ из
шт. БГ в условиях неблагополучного хозяйства превосходит по эффективности вакцину
Гумбораль (Франция) и Гумбораль СПФ (Хорватия). Она создает напряженный иммунитет
при 2- или 1-кратной вакцинации цыплят в возрасте 10 сут и старше (5, 6, 7). В практике
широко применяется сухая культуральная вакцина против ИБ из шт. ВНИВИП. Препарат
безвреден для молодняка птиц и обладает выраженными иммуногенными свойствами (4).
Установлено, что уровень материнских АТ, соответствующий среднему по данной группе
цыплят титру в ИФА 1:400, гарантирует достаточную защищенность птицы от инфекции и
не препятствует эффективной вакцинации (5, 6, 7). По данным других исследователей, ма-
теринские АТ недостаточны для защиты цыплят от инфекции патогенным штаммом даже
если куры-несушки были раньше вакцинированы бустерными дозами инактивированной
масляной вакцины. Материнские АТ могут интерферировать с вакцинным шт. D-78, кото-
рый способен индуцировать образование АТ в высоком тигре (32).
В настоящее время широко применяют живые вакцины из природно ослабленных
штаммов, а также ослабленных путем пассирования на КЭ или в культуре клеток. Атте-
нуация вируса ИБ в процессе пассирования на КЭ наступала довольно быстро: после 10-го
пассажа вирус терял вирулентность и иммунодепрессивные свойства, но сохранял иммуно-
генность. Для изготовления живой вакцины использовали вирус, пассированный в КЭ 50-60
раз. Помимо КЭ для аттенуации вируса ИБ использовали перевиваемую культуру клеток
Vero. Культуральный аттенуированный штамм хорошо приживлялся в организме 21 дн цы-
плят, размножался в бурсе (около 6 1g ИД5о/мл) и выделялся с фекалиями, если они не имели
АТ до вакцинации. Из аттенуированных штаммов, адаптированных к культуре клеток кури-
ных фибробластов, выделены клоны на основе бляшкообразования (клоны Lp u Sp). Клон
Lp обладал более выраженной иммуногенностью. Известны 4 культуральные вакцины про-
тив ИБ: Burcell, Bursine, D-78 и S-706. В опытах на цыплятах разного возраста в сравни-
тельном аспекте определены иммуногенные и патогенные свойства 5 вакцин против ИБ:
Биогамборо (Италия), CEVA (Франция), Вайнленд (США), Унивакс (США), Интервет D-78
(Голландия). Наилучшей вакциной оказалась Интервет D-78, которая индуцировала хоро-
ший иммунитет как у не иммунных, так и иммунных цыплят, не обладала иммуносупрес-
сивным действием и вызывала умеренные поражения тканей фабрициевой сумки. Все вак-
цинные штаммы способны передаваться птице при контакте. Вакцины D-78 и S-706 оказа-
лись более инвазивными, вызывали небольшую атрофию бурсы, и формирование АТ в бо-
лее высоком титре в том числе у контактной птицы по сравнению с стальными вакцинами.
Культуральные вакцины D-78 и S-706 при крупнокапельном распылении дали такие же ре-
зультаты, как и при закапывании в нос и на конъюнктиву. Интересно, что дефектные интер-
ферирующие частицы вируса ИБ вызывали раннюю защиту цыплят от инфекции вирулент-
ного штамма гомологичного вируса до наступления иммунитета. Явление интерференции
также отчетливо наблюдалось в культуре клеток (45,46, 54, 60, 82, 87).
Доказана целесообразность вакцинации цыплят против субклинического ИБ. Одно, 2- и
3-кратная вакцинация живой аттенуированной вакциной приводит к значительному уве-
личению чистого дохода и средней массы птицы (24,63). Несмотря на проведение полного
цикла иммунизации родительского поголовья против ИБ (2-кратное применение живой вак-
цины + инактивированная вакцина) у 5-10% 1-сут цыплят АТ отсутствовали, что способст-
вовали формированию субклинической формы заболевания. В связи с этим разработана
комплексная вакцина против ИБ и болезни Марека для применения 1-сут цыплятам, которая
эффективно предупреждает субклиническую форму ИБ и повышает эффективность вакци-
нопрофилактики болезни Марека (24).
У разных возрастных групп птицы напряженность и длительность поствакцинального
иммунитета не одинакова. Уровень специфических АТ у цыплят соответствует концентра-
80
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
ции ВНА у взрослых кур-матерей в период яйцекладки. Куры-несушки, привитые живой
вакциной в 18-нед возрасте, имели высокий титр ВНА в течение всего периода яйцекладки
(30-35 нед). Цыплята, вылупившиеся из таких яиц, имели выраженный пассивный имму-
нитет, который обычно длится 10-15 дн ( 29 ).
Применение инактивированных вакцин. Для приготовления инактивированных вак-
цин вирус ИБ размножают в КЭ и культурах клеток. Концентрацию АГ вируса определяют
методом двойного сэндвич-ELISA (55). Вирус инактивируют формалином или р-пропио-
лактоном, добавляют ГОА. Препарат вводят подкожно или внутримышечно. При достаточ-
ной концентрации АГ (не менее 6 1g БОЕ), инактивированная вакцина обладала выражен-
ной иммуногенностью. Инактивированная вакцина из вируса, адаптированного к тканям
фабрициевой сумки, индуцирует более высокий уровень АТ в крови кур-несушек и молод-
няка, чем эмбрионвакцина (38, 52). На Украине разработана инактивированная вакцина для
вакцинации родительских стад кур яичного и мясного направлений. Вакцину применяют за
30 дн до начала яйцекладки, внутримышечно в дозах 0,5-1,0 мл. Эго обеспечивает у цыплят
устойчивость к заражению до 20-25 дн жизни (8). В качестве вирусного сырья для изготов-
ления вакцины используют очищенную суспензию шт. БГ, полученного на КЭ безлейкозных
кур (эмбриональное сырье). Для инактивации вируса применяют димер АЭЭИ. Титры АТ в
РДП через 14 сут после прививки вакцины из эмбрионального и бурсального сырья состав-
ляли 2,8 log2 и 4,3 log2 соответственно, а в ИФА - 1:400-1:600 и 1:400-1:6400 соответствен-
но. Испытанные образцы инактивированной сорбированной вакцины оказались высокоим-
муногенными и защищали птицу от заболевания (18а).
Сообщается о полевых испытаниях сравнительной иммунологической активности 2-х
серий экспериментальной эмульсинвакины БелНИИЭВ против ИБ и коммерческой вакцины
такого же типа фирмы Интервет. Исследования показали, что вакцина БелНИИЭВ способна
индуцировать у привитых ремонтных птиц сывороточные АТ в защитных титрах и оказа-
лась предпочтительнее вакцины Интервет (7а). Вакцинация 1 сут цыплят эмульсинвакциной
создавала, при наличии материнских АТ и заражении их в 4 нед возрасте вирулентным ви-
русом, напряженный иммунитет у 80%, при заражении в 7-нед возрасте - у 90% птиц (88).
Предложена специальная вакцина для цыплят с материнскими АТ (88а).
Предложен новый способ изготовления АГ из местных эпизоотических штаммов ИБ с
использованием для инактивации ультразвука или лазерного излучения (22). Поскольку ма-
теринские АТ конкурируют с живым вакцинным вирусом и снижают иммунологическую ре-
активность, авторами было предложено применять для 1-сут цыплят инактивированную
эмульсин-вакцину которая создает у них напряженный иммунитет в 4-нед (85%) и 7-нед
возрасте (90%). Комбинированное применение инактивированной и живой вакцины не име-
ло преимуществ перед использованием только одной эмульсинвакцины (86, 88). Материн-
ский иммунитет у цыплят после прививки кур-несушек инактивированной вакциной был бо-
лее продолжительным (2-3 нед), чем после иммунизации живой вакциной (10 дн) (85). Ма-
теринские АТ имеют период полураспада 6 дн и могли сохраняться до 30 дн (51).
Генно-инженерные (молекулярные) вакцины.
Самым важным по иммуногенным свойствам оказался белок 35000 Д. Ген, кодирующий
этот белок, встроенный в генетический аппарат E.Coli или дрожжевой клетки, индуцирует
образование этого белка, который в очищенном и концентрированном виде представляет
высокоэффективную абсолютно безвредную вакцину. Получена рекомбинантная субъеди-
ничная вакцина, в которой основ ной протективный иммуноген - белок VP2, продуцируе-
мый в высоко иммуногенной форме в дрожжах Scecharomyces cerevisiae. Рекомбинантный
белок VP2 в виде мясляно-эмульсионной вакцины индуцировал ВНА и ELISA регистрируе-
мые АТ у кур, которые передавались потомству и предохраняли цыплят от заражения виру-
лентным вирусом. Рекомбинантная субъединичная вакцина индуцировала АТ-ответ такого
6 Зак. № 171
81
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
же уровня, который наблюдался у кур при введении им живого вируса. Поэтому считают,
что рекомбинантный субъединичный препарат впоследствии должен вытеснить используе-
мые в повседневной практике инактивированные вакцины (42). При вакцинации 1-сут цып-
лят наиболее выраженный иммунитет (не менее, чем у 90% привитых) наступает при вве-
дении живой вакцины, а спустя 24 дня - инактивированной (77, 89). Прививка кур в 8-12-
нед возрасте живой вакциной усиливает иммунный ответ на введение инактивированной
вакцины в более поздний период (44). Создан высокоиммуногенный пептид VP2 вируса ИБ
в виде агрегированной формы, состоящей из нескольких пептидов (29а).
Кроме вакцинопрофилактики за рубежом в лабораторных условиях с положительными
результатами были испытаны монАТ, полученные, в основном, на эпитопы протеина VP2
(VP2a и VP2b), ответственные за индукцию ВНА, а также на протеин VP3. АТ на VP2a и
VP2b предупреждали развитие инфекции у зараженных SPF-цыплят в 100% случаев, а на
VP3 - всего лишь в 22%.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета.
Динамика изменения титра поствакцинальных АТ на живую и инактивированную вак-
цину по данным ИФА и PH имела сходный характер, а корреляция (г) составила 0,6. Преци-
питирующая активность в агаровом геле регистрировалась выше лишь в ИФА-позитивных
сыворотках и пробах с определенным титром ВНА (90).
Лучшие результаты получены при выпаивании живой вакцины в 2-5-нед возрасте, а в
20-нед возрасте - от применения инактивированной вакцины. В ФРГ (Дессау) при сравнении
аэрозольной и пероральной иммунизации получены сходные результаты. Пассивно иммун-
ные цыплята были устойчивы к заражению вирусом ИБ в возрасте 7, 14, а иногда и свыше
20 дн в зависимости от уровня и длительности сохранения материнских АТ. Пассивные ПА
выявляли до 13 нед возраста у цыплят, полученных от 1-кратно вакцинированных птиц. АТ
сохранялись на 4 нед дольше, если кур вакцинировали дважды. Однако это не увеличивало
уровня иммунитета. У цыплят активный иммунитет развивался недостаточно, если уровень
приобретенных материнских ВНА у них был около 7 logj. Если тиры АТ были ниже этого
уровня, то вакцинация приводила обычно к репликации вируса в фабрициевой сумке при
сильном ее поражении и последующем развитии активного иммунитета.
Установлено, что инкубационные яйца, полученные из хозяйств, неблагополучных по
ИБ, невосприимчивы к этому агенту. Эта особенность была использована для определения
степени благополучия птицеводческих хозяйств в ФРГ. Когда от вируса ИБ погибало свыше
75% зараженных эмбрионов, считали, что они полностью восприимчивы к вирусу, а хозяй-
ства, из которых были получены яйца, относили к полностью благополучным. Партии инку-
бационных яиц, где гибель эмбрионов составляла 25-75% и 0- 25%, относили соответствен-
но к частично восприимчивым и полностью невосприимчивым, а хозяйства - к числу небла-
гополучных по ИБ. Ввиду того, что вирус ИБ поражает иммунную систему птиц, ответст-
венную за выработку гуморального иммунитета, косвенным показателем благополучия хо-
зяйства могут служить результаты исследования продукции накопления АТ в сыворотке
крови птиц после вакцинации их против ИБ. В этом случае в неблагополучном по ИБ хозяй-
стве вакцинация против ИБ не вызывает образования и накопления АТ, при этом у 30-80%
обследуемых птиц титры ГА были ниже 1:8, а индекс нейтрализации - ниже 2 1g.
В США для профилактики ИБ все поголовье в возрасте 14 дн прививают живой вакци-
ной Burgine, которую дают с питьевой водой. Ревакцинацию проводят в 35-дн возрасте.
Третья вакцинация - в 17 нед масляной адсорбатвакциной. По сравнению с живой она га-
рантирует более продолжительную защиту родителей и более высокий титр материнских
АТ. Применяющаяся в Италии и Югославии на родительском стаде кур эмульсин-вакцина
приводит к образованию высокого уровня ПА. Цыплята, полученные от таких кур, также
имеют высокий уровень гуморальных АТ. Введение на фоне базового иммунитета от живой
82
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
вакцины инактивированной вакцины обеспечивает формирование у цыплят в первые недели
жизни высокого уровня невосприимчивости, обеспечиваемого накоплением в яйце значи-
тельного количества материнских АТ (титр их 1:4000 в PH в культуре клеток). Последую-
щее введение масляной вакцины доводит этот показатель до 1:100000. Активную иммуни-
зацию целесообразно проводить только при содержании в крови АТ в титрах не ниже 1:64.
В настоящее время контроль формирования поствакцинального иммунитета против ИБ
целесообразно осуществлять с помощью PH и РДП. У всех цыплят, привитых живой вакци-
ной, АТ в сыворотке крови появлялись начиная с 3-4 нед и обнаруживались в PH и РДП. ПА
после вакцинации в 4-5 нед возрасте они выявлены в среднем у 67,8% кур до 46-иед воз-
раста Материнские АТ сохранялись у цыплят до 10 дн (в РДП) и до 20 дн (в PH). У 80-
100% цыплят, полученных от вакцинированных кур, обнаруживали ПА, но к 17-дн возрасту
они исчезали. Материнские АТ передавались трансовариально и выявлялись в сыворотке
крови цыплят в 1-,11-,19- и 25-дн возрастах у следующего количества птиц: в PH - у 86,
72, 30 и 22% (титр 1:16 и выше), в РДП - у 88, 69, 5 и 0% соответственно. У 1-сут цыплят
положительная PH составляла 52,5%, что свидетельствовало о наличии материнских АТ. В
возрасте 30 дн число серопозитивных цыплят снижалось до 4,7%. Цыплята, полученные
из яиц ферм, где болезнь регистрировалась, содержали материнские АТ в течение 15 дн.
Как постинфекционные, так и поствакцинальные АТ выявляются в PH. Так, при зара-
жении молодых чувствительных цыплят вирусом ИБ получают хороший серологический от-
вет. Определен иммунный ответ у цыплят различного возраста через 3 иед после их зараже-
ния вирусом. Цыплята, иммунизированные в 4-нед возрасте, имели ИН 3,5, в то время как
ИН у 3-дн вакцинированных цыплят находился в более низких пределах - 1,5-2 (87). Взрос-
лые птицы, так же как и молодые цыплята, слабо реагируют на вводимый АГ, возможно, из-
за отсутствия функциональной активности бурсы Фабрициуса. Птица считается устойчивой
к инфицированию вирулентным вирусом при титре АТ в PH, равном 2 1g и выше, а в РДП -
не ниже 1:8. 100%-ную устойчивость цыплят наблюдали через 3 дня после их вакцинации
вирусом Си-1М. Титр АТ у них в PH составлял 1:8, через 7 дн - 1:8000.
Что касается защитной роли пассивных материнских АТ у цыплят, полученных от кур-
реконвалесцентов или иммунизированных вакцинами, то в этом отношении имеется одно-
значная трактовка: пассивные АТ задерживают размножение вируса независимо от пути его
инокуляции в КЭ. Передача родительских АТ цыпленку подобным образом защищает его от
заражения. Для оценки эффективности иммунитета, стимулированного вакцинами на сте-
пень разрушения бурсы, предложено использовать морфометрический анализ. Для этого
измеряют общую площадь и интегральную АГ плотность соседних фолликул на окрашен-
ных гемотоксилинэозииом гистологических срезах бурсы 3-х групп цыплят: невакциниро-
ванных незаряженных (I), невакцинированных зараженных вирулентным вирусом (II), вак-
цинированных зараженных вирулентным вирусом (III). Заражение вирулентным вирусом
проводили через 15 дн после вакцинации, а морфометрический анализ - через 10 дн после
заражения. Общая площадь 10 фолликул у цыплят I, II и III групп составляла соответствен-
но 6,25 104, 5,54-104 и 2,27-Ю4 мк, а интегральная АГ плотность - соответственно 392-Ю2,
254-Ю2 и 147 102 ед (68). Для определения титра АТ и АГ ИБ предложен также метод ВИ-
ЭФ. В качестве АГ используют гомогенат бурс от больных птиц в разведении 1:32 и сыво-
ротки от переболевших и вакцинированных птиц. Метод ВИ ЭФ может быть с успехом ис-
пользован для экспресс-диагностики ИБ и быстрой оценки иммунного статуса птиц (11).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Алиев АС. Ветеринария, 1983, 6. 2.Алиев А.С. и др. В кн. ’’Комплекс меропр. по борьбе с бол.
птиц”, 1990 :35. З.Алиев А.С. и др. - Тез. докл. н пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995:251. 4.Апиев А.С. Тез.
доки. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :242. б.Борисов А.В. игр. Тез. дскл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :
232. б.Борисов А.В. игр. Тез. докл. н.-пр. конф., ВНИИЗЖ, 1995 :234. 7.Борисов А.В. и.пр. Тез. докл.
н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :235. 7а.Бирман Б.Я. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995:241.
6*
83
Глава 2. Family Birnaviridae Бирнавирусные инфекции
8.Герман В.В. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :252. 9.Герасимов В.Н. и др. Тез. докл.
конф., Щелково, 1996 :17. Ю.Голубничий В.П. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :249.
И.Дудников ДА и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :40. 12.Джавадов Э.Д. и др. Тез. докл.
конф., С-Петербург ,1989 :15. 13.Джавадов Э.Д. В кн “Комплекс меропр. по борьбе с бол. птиц”,
1990 :48. 14.Кудрявцев Ф.С. и др. Ветеринария, 1984, 5 :37. 15.Калыкова Г.К и др. Тр. ВНИВИП,
1993 : 7. 16.Калыкова Г.К и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995. 17.Лагуткин НА. и др. Вет.
газета 1996. 18.Малахова М.С. и др. Тез. докл. конф. ВНИВВИМ, 1990 : 28. 18а.Михалишина З.Я. и
др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :236 . 19.Му драк НС. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИ-
ИЗЖ, 1995 :245. 2О.Мудрак НС. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ,1995 :246. И.Новиков Б.В. и
др. Матер, конф. ВНИВВИМ, 1992, 2 :167. 22.Онгсука Бартелеми - Автореф. канд. дисс., 1991.
23.СюринВ.Н. и др. Диагн вир. бол. жив. М., ВО ”Агропромизд”,1991. 24.Соловьёв Б.В. и др. Тез.
докл. конф. ВНИТИБП, 1996 :14. 25.Фомина Н.В. и др. Вирусы животных, MBA, 1991. 26.Шажко
Ж.А. и др. Тез. докл. конф. ВНИТИБП, 1996,18. 27.Щербакова Л.О. и др. Тез. докл. н-пр. конф.
ВНИИЗЖ, 1995 :17. 27а.Щербакова Л.О. и др. там же, :237. 276. Щербакова ДО. и др. там же, :243.
27в.Щербакова ДО. и др. там же, :248. 28.Шипилов В.И. и др. Тез. докл. конф. ВНИТИБП, Щелко-
во, 1996 :16. 29.Anon-Intem. Hatchery Pract. 1990, 4, 7 .37. 29a.Azad A.A. et.al. Пат. 643216, Австра-
лия, опубл. 11.11.93. ЗО.Вох A. Preceadings, 1988, 21. 31.Bemstein F.et.al. J Gen Virol, 1993, 74, 8
: 1563. 32.Berg T.P. et.al. Avian Pathol 1991, 20, 3 :409. 33.Becht H. Curr Top Mier and Imm, Berlin,
1980, 90 :107. 34.Betero H. et.al. Poultry Guide, 1983, 20:53. 35.Cho B.R. et.al. Avian Dis., 1980, 24, 2
:423. 36.Carol-Dumitrin E. et.al. Licrari Sti Ser C Med Veter 1979, 20/21 :114. 37.Dobos P. J Vir 1979,
32, 3 .1046. 37a.Dormitorio T. et.al. Poultry Sci., 1994, 73, Suppl, :5. 38.Davison S. et.al. Avian Dis 1989,
33, 1 :18. 39.Eddy R.K. Vet rec 1990, 127, 15 :382. 4O.Engel M et.al. Vet Rec 1989, 125, 9 :236. 41.Eddy
R. et.al. Vet Rec, 1985, 117, 415. 42.Fahey K.J. et.al. Avian Pathol 1991, 20, 3 :447. 43.Fahey K.J. et.al. J
Jen Virol ,1989, 70, 6: 1473. 44.Fahey K.J. et.al. Atgtr 23th W Vet cong, Monreal, 1987, 310.
45.Giambrone J.J. et.al. Avian Dis, 1986, 30 :557. 46.Giambrone J.J. et.al. Poultry Sci, 1986, 65, 807
:1287. 47.Hahnewald R. etal. Monatsh Vet med, 1989, 44, 233. 47a.Hawre F.J. et.al. Can J Comp Med,
1981, 451. 48.1odrandis P.S. et.al. Bull Hell Vet Med Soc, 1991, 42, 4:245. 48a.Ide P.R etal. Can Vet J,
1979, 21, 2. 49.Jackwood D.J. et.al. Avian Dis, 1982, 26, 4:871. 50.Jhola M.K. etal. Indian J Avian Sc,
1990, 60, 9 :1065. 51.Kreaterk K. Poultry Dig, 1988, 47, 552. 52.Knezevic N. et.al. Praxis Veter, 1987,
35, 1-3:13. 53.Kibenge F.S. et.al. J Gen Vir, 1988, 69, 1757. 53a.Kobilke H. et.al. Taguungsber A
Vad.Laudvir Schaftswiss, 1979, 23, 4. 54.Kulkami AB. etal. Curr Sci India, 1984, 53, 16 :852. 55.Kardy
V. et.al. Acta Vet Hung, 1988, 36, 1/2: 123. 56.Lee Long Hun Avian Pathol, 1992, 21, 1:87. 57.Mandt E.
et.al. J Gen Vir, 1995, 76, 2:437. 58,Muchetuzzi F. etal. Orientac avicola 1980, 50. 59. Muller H. etal.
Zbl Bakteriol, 1980, 1, 246, 4:460. бО.МиПег H etal. Zbl Bakt Microbiol und Hyg, 1985, 260, 496.
61.Muller H. Arch Virol, 1986, 87, 191. 62.Muller H. et.al. J Virol, 1979, 31, 3 :584. 63.Mcilroy S.G.
et.al. Avian Pathol, 1992, 21, 1 :65. 64.Makoto J. et.al. J Vet Med Sci, 1992, 54, 3, :575. 65.Macundie I.G
et.al. Vaccine 1990, 8, 6 :549. 66,Nakamura K. et.al. Avian Pathol, 1990, 19, 4 :713. 67,Neumann U. et.al.
Arch Geph, 1991, 55, 1 .14. 66a.Nagi S.A. et.al. Avian Dis, 1983, 27, 3. 66b.Nagi S.A etal. Proc 16th
Poultry heslth Symp, 1982. 68.Nyska A. et.al. Acta Hiatochem, 1994, 96, 2 :135. 69.Panisup A.S.et.al.
Indian J Poultry Sci, 1987, 22, 3 :245. 7O.Panisup AS. et.al. Acta Vet Scand, 1988, 29, 1: 125. 71.Rosales
AG. et.al. Avian Dis, 1989, 33, 1 :350. 72.Sumasehe B.D. Poultry, 1990, 6, 3 :37. 73.SoijO K. et.al. Arch
Exp Med, 1991, 64, 4 :287. 74.Schnitzer T.J. etal. J Virol, 1982, 43, 3 :1006. 75.Silim A. et.al. Avian Dis,
1989, 33, 4 :643. 76.Snyder D.B. The Univers of Meryland N227311, опубл. 12. 10. 91., пат. США.
5064646, МКИ 5А61К39/12. 77.Sullivan D.C. etal. Virus Res, 1986, 5 :201. 78.Saijo K. etal. J Jap Vet
Med Ass, 1988, 41, 12:856. 79.Sharma J.M. etal. Avian Dis, 1989, 33, 1 :112. 8O.Snyder D.B. Avian
Pathol, 1990, 19, 3 :419. 81.Stewart-Brown B. et.al. World Poultry, 1992, 8, 7 :41. 82.Takase etal. Jap J
Vet Sci, 1982, 44, 207. 83.Takasi K. et.al. J Vet Med Sci, 1993, 55, 1 :137. 84.Tsukamoto K. etal. Avian
Dis, 1995, 39, 2 :218. 85.Velher M. et.al. Praxis Veter, 1986, 34 :275. 86.Voeten AC. Vet Quart, 1985, 7,
2 :91. 87.Winteifield R.W. et.al. Av Dis, 1978, 22 : 721. 88.Wyeth P.G. Vet Rec, 1990, 126, 23 : 577.
89.Witter R.L. Zootech int, 1983, 9, 30 :35. 89a.Wood G.W. et.al. Avian Pathol, 1981, 10, 3. 90.Zojac J.
etal. Vet Med, 1991, 36,12 :737.
84
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
Глава III. ТОГАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА TOGAVHUDAE
Семейство Togaviridae (от лат. toga - плащ) объединяет большую группу вирусов, по-
ражающих многие виды позвоночных и членистоногих. Вирионы тогавирусов представляют
собой сферические частицы диаметром 60-70 нм. Они состоят из нуклеокапсида икосаэдри-
ческой симметрии (35-40 нм) и наружной липидосодержащей оболочки, на поверхности
которой имеются выступы длиной до 10 нм. Плавучая плотность вирионов в сахарозе со-
ставляет 1,2 г/см3, коэффициент седиментации 280S.
Геном представлен единой 1-спиральной линейной молекулой РНК позитивной поляр-
ности с мол.м. 4 МД. РНК составляет 8-9% массы вириона; 5 -конец кэпирован 7-
метилгуанозином, а 3'-конец полиаденилирован. Гены для неструктурных белков находятся
на 5'-концевой части РНК. РНК тогавирусов инфекционна. В вирионах тогавирусов обнару-
жено 3-4 полипептида. Липопротеидная оболочка содержит липиды клеток хозяина и вирус-
специфические полипептиды. Между вирусами одного рода имеется АГ-родство, но его нет
между представителями различных родов. Размножение вирусов происходит в цитоплазме,
а созревание включает процесс почкования через цитоплазматическую мембрану.
Семейство Togaviridae состоит из двух родов: Alphavirus и Rubivirus.
1. Род Alphavirus (от греч. буквы “а” - alpha). Включает арбовирусы группы А (27
членов): Синдбис (прототипный вирус), западного, восточного и венесуэльского энцефали-
тов лошадей, леса Семлики, Гета, Чикунгунья и др. (Рис. 17). Диаметр вирионов составляет
70 нм, мол.м. 46 мД, плавучая плотность в сахарозе 1,2 г/см3, коэффициент седиментации
280S. Геном состоит примерно из 12000 нуклеотидов (4 МД) и составляет 8,7% массы ви-
риона. Около 70% генома с 5'-конца кодирует 4 неструктурных белка, участвующих в реп-
ликации вирионной РНК. Гены структурных белков расположены на 3’-концевой части ге-
нома. В состав нуклеокапсидов входит один белок (С) с мол.м.ЗО кД. Наружная оболочка
вирионов состоит из 2 гликопротеинов (El, Е2) с мол.м. 50-59 кД. Некоторые представите-
ли альфавирусов имеют третий белок (ЕЗ) оболочки с мол.м. 10 кД. Большинство монАТ к
белку Е2 нейтрализуют инфекционную активность вируса. Белки составляют 60-64%, липи-
ды - 27-31% и углеводы - 7% массы вириона.
2. Род Rubivirus (от лат. rubeus - красноватый). Включает всего одного представителя
- вирус краснухи. Вирионы - 60 нм. Геном вируса состоит из 9757 нуклеотидов (3,4 мД), 5 -
конец кэпирован, 3'-конец полиаденилирован. В состав нуклеокапсида входит 1 белок с
мол.м. 33-34 кД (С), в состав наружной оболочки - 2 гликопротеина с мол.м. 58-59 (Е1) и
42-48 кД (Е2). Все 3 структурных белка образуются из полипротеина после трансляции 24S
субгеномной РНК. Естественный хозяин - человек. Вирус передается аэрозольным и конге-
нитальным путями.
ЗАПАДНЫЙ АМЕРИКАНСКИЙ
ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТ ЛОШАДЕЙ
West Equine encephalomielitis (WEE) (англ); Seuchenhafte Hinruckenmarkentzuundung
der Pferde, Amerikanische Hinruckenmarkentzundung (нем)
Болезнь однокопытных и людей характеризуется острым коматозным состоянием, про-
текает с явлениями энцефалита, а иногда бессимптомно.
85
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
Болезнь встречается в западных и центральных районах США, Аргентине, Мексике,
Канаде, Бразилии.
Клинические признаки и пагологоанатомические изменашя Внггиж пояатяется лихсрапга, затем по-
ражается ЦИС (оснливость, тираличи). Смертность лютей не превыпиег 20-30%. Пагсвхпиигсмические именэ-
ния характеризуются да})фузным энтЕфалигсм с напичтЕМ рассеянного нжрсва тетронов, скхиеттяи гигантских
ЮЕГСк наралгии (астрсиитсв) и умеренней клеточной инфипырашет мягких мозговых обопоет или инфипыра-
щей периваскулярной ткани Пораяетиявдрупк органа* выраяеты слабо (2).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые вирус западного американского энцефаломиелита лошадей (ЗАЭЛ) выделили в
Калифорнии в 1931 г. Мейер и др. из мозга больной лошади. В дальнейшем его выделяли от
людей, лошадей, мулов, у которых он в естественных условиях вызывает инфекцию, и, кро-
ме того, от белок, оленей, свиней, птиц многих видов, комаров и птичьих клещей.
Устойчивость. Благодаря большому содержанию липидов вирус разрушается под дей-
ствием эфира и хлороформа, чувствителен к дезоксихолату. Протеазы (трипсин, химотрип-
син и папаин) не оказывают на него влияния (в отличие от арбовирусов группы В). Инакти-
вируется липазой, видимо, вследствие расщепления ферментом липидной оболочки. Уста-
новлена фотодинамическая инактивация метиленовым синим. Вирус чувствителен к дейст-
вию рассеянного света и УФ лучам, которые разрушают его в течение нескольких минут.
Формалин (в концентрации 1:500 - 1:2000), проникая через протеиновую оболочку, действу-
ет на нуклеиновую кислоту. Обработкой вируса формалином (в концентрации 10:2,5) и дей-
ствием на него УФ лучами в эксперименте удавалось получать различные по биологическим
свойствам клоны вируса (по патогенности для мышей, активности размножения в культуре
клеток и терморезистентности в условиях 50°С). p-пропиолактон в концентрации 0,1-0,2%
инактивирует вирусы ЗАЭЛ и ВАЭЛ за несколько часов, поэтому широко используется для
получения неинфекционных диагностикумов для РСК, гемагглютинации и АГ для гиперим-
мунизации животных при получении иммунных сывороток. В отличие от вирусов группы В
вирусы ЗАЭЛ и ВАЭЛ устойчивы к сульфгидрильным соединениям. Изоэлектрическая точ-
ка вируса при pH 6,5, наивысшая устойчивость при pH 6,5-8,5, вне этих пределов pH инфек-
ционность вируса быстро падает. Он разрушается при 60°С в течение 10-20 мин. В условиях
4°С вирус в течение нескольких месяцев сохраняется в 50%-ном р-ре глицерина и в суспен-
зиях, содержащих 2% бычьего альбумина или 20% сыворотки крови кроликов. В высушен-
ном виде при -70° С вирус сохраняет жизнеспособность несколько лет. Р-ры хлорной извести
(5%), фенола (5%) и креолина (2%) инактивируют его за 10 мин, фенол (1%) и хлороформ
разрушают вирус в суспензии мозга за 10 дн.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. При инфицировании лошадей и лабораторных животных в
сыворотке крови обнаруживают КСА, ВНА и анти-ГА. У инфицированных людей ВНА по-
являются быстро и сохраняются долго. КСА появляются значительно позже и менее стойки.
Антигенная вариабельность и родство. В АГ отношении вирус ЗАЭЛ стоит значи-
тельно ближе к вирусу Синдбис, чем другие представители альфавирусов. У данного вируса
обнаружены АГ варианты.
Гемагглютинирующие свойства. ГА свойства выявлены в отношении эритроцитов гу-
сей и суточных цыплят. Обнаружен как связанный, так и отделяемый от вирусной частицы
ГА. Его выявляют в вируссодержащей суспензии мозга мышей после обработки эфиром и
ацетоном или при экстракции боратным буфером (pH 9,0), а также в жидкой фазе инфици-
рованных тканевых культур. Оптимум pH 5,8-6,2, при котором четко проявляется РГА.
Свежевыделенные штаммы обладают ГА-свойствами, тогда как штаммы, адаптированные в
лабораторных условиях, могут их утратить.
86
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
Вирус ЗАЭЛ обладает гемолитической активностью, способен интерферировать в орга-
низме мышей и инфицированных КЭ с различными арбо-, миксо- и другими вирусами.
Экспериментальная инфекция. При интрацеребральном заражении вирус вызывает
менингоэнцефаломиелит у многих лабораторных животных и диких грызунов, обезьян, кро-
ликов, молодых собак, оленей, поросят, телят, коз и некоторых птиц. Хомяков любого воз-
раста, а также молодых мышей и морских свинок можно заразить внутримышечно, интра-
перитонеально и подкожно. Вирус размножается в организме различных членистоногих.
Культивирование. Кроме лабораторных животных (особенно мышат-сосунов), вирус
культивируется в КЭ при любом способе заражения. Эмбрионы погибают через 18-24 ч.
Вирус размножается в различных культурах клеток: ФЭК, почек уток, обезьян, ягнят, телят,
котят, кроликов, мышей, особенно в почечных клетках хомяка и некоторых перевиваемых
линиях. ЦПИ появляются через 24-36 ч. В монослойной культуре клеток эмбрионов живот-
ных указанных видов вирус образует, бляшки, в перевиваемой линии L-клеток вызывает
хроническую инфекцию.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Летом вирус может передаваться лошадям и
человеку при укусе комаров. Вирус может заноситься перелетными птицами вирусоносите-
лями или носителями инфицированных эктопаразитов. Наиболее часто вирус ЗАЭЛ распро-
страняется в США в июле и августе. В это время бывает заражено до 90% перепелов. Вирус
выделен также и от птенцов домашних воробьев, что свидетельствует и о нетрансмисснвной
передаче его в природе.
Спектр патогенности в естественных условиях. По-видимому вирусы ЗАЭЛ, так же
как и ВАЭЛ, патогенны, в основном, для птиц, лошадей, мулов и людей, которые поража-
ются случайно. У птиц многих видов вирус вызывает бессимптомную инфекцию. В 1963 г.
ВНА в США обнаружены в сыворотке крови зайцев-беляков, у земляных белок, леопардо-
вых лягушек и сусликов. В 1965 г. в Канаде во время эпизоотии ЗАЭЛ высокое вирусоноси-
тельство было обнаружено у сусликов. Ранняя сезонная инфекция сусликов обусловлена ко-
марами Culex tarsalis. По-видимому, суслики могут играть важную роль в диссиминации
вируса. Имеется сообщение о выделении возбуди теля ЗАЭЛ из организма опоссума, личи-
нок комаров Aedes caspiens и клопов Rhodnius prolixus и Triatoma infeshons. При экспери-
ментальном заражении их вирус сохранялся в их организме в высоком титре до 28 дн.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании выделения вируса в период острого переболевания и серо-
логических реакций. Его выделяют из крови больных, а в случае аутопсии - из ЦНС и внут-
ренних органов. В природе исследуют диких животных и членистоногих. Для выделения
вируса используют мышат 1-3-дн возраста, КЭ и куль туры клеток. Выделенный вирус
идентифицируют в РЗГА и РСК; серодиагностику проводят в РСК, РЗГА и PH. Поскольку
анти-ГА и ВНА сохраняются годами, а титр КСА после 6 мес значительно снижается, то
обнаружение последних свидетельствует о недавно перенесенной инфекции. Для быстрой
идентификации этого вируса предложен метод ИФ. В мазках-отпечатках из мозга интраце-
ребрально зараженных мышат после появления симптомов болезни обнаруживают специ-
фический АГ. В Канаде с диагностической целью применяют неинфекционный диагности-
кум из вируса ЗАЭЛ, размноженного в культуре ФКЭ и инактивированного УФ лучами.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
В неблагополучных районах применяют инактивированные вакцины. Непатогенный для
мышей вариант вируса ЗАЭЛ был получен из изолята от диких птиц в культуре клеток поч-
ки хомячка и в дальнейшем селектирован методом бляшек (1).
87
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
ИНФЕКЦИЯ, ВЫЗЫВАЕМАЯ
АЛЬФАВИРУСОМ ГЕТА
Вирус Гета является представителем рода Alphavirus семейства Togaviridae, вызывает
вспышки острых заболеваний с высокой температурой и поражениями конечностей у япон-
ских беговых лошадей. В последствии его выделяли от свиней и новорожденных поросят
погибших от подобной болезни. У свиней установлена трансплацентарная передача этого
вируса. Шт. Kanagava хорошо репродуцируется в культуре клеток хомячка HmLu-1.
Шт. ML-ПО вируса Гета индуцирует образование АТ, которые выявляются в РТГА на
4-5-й, в PH - на 5-6-й, в РСК - на 6-9-й день. АТ достигали максимума в первом случае на 7-
9-й день, во втором - через 2-3 мес, в третьем - через 2-3 нед. Дольше всего (до 6-12 мес)
сохранялись в высоком титре ВНА. Выявлена корреляция между титрами 3-х типов АТ (4).
Для обследования свиней на вирус Гета предложен ELISA (3).
СПИСОКЛИТЕРАТУРЫ
1Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, Урожай,1993. 2Сюрин В.Н. и др. Части, вет.
вирусол., М, Колос”,1979. 3.Hohdatsu Т. et.al. Jap J Vet Sci, 1990, 52, 4 :835. 4.Jmamagava H.
et.al. Bull Eq Res Inst., 1992, 29 :32.
ВОСТОЧНЫЙ АМЕРИКАНСКИЙ
ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТ ЛОШАДЕЙ
Eguine West encephalomielitis (EEE) (англ.); Seuchenhafte Hinruckenmarkentzundung
der Pferde, Amerikanische Hinruckenmarkentzundung (нем.)
Восточный американский энцефаломиелит лошадей (ВАЭЛ) - болезнь однокопытных
животных, характеризующаяся поражением преимуществен но ЦНС, желтушностью слизи-
стых оболочек и атонией ЖКТ. Болезнь распространена в центральных районах США, в
Бразилии, Канаде, странах бассейна Карибского моря и восточных районах Южной Амери-
ки. Вирус выделен на Филиппинах. В штате Джорджия (США) ВАЭЛ регистрируют в виде
эпизоотий. В США ВНА к вирусу обнаружены у 18-26% диких и домашних свиней. Однако
клинических признаков инфекции у них не наблюдалось. В 1971 г от Culiseta morsitans в
окрестностях Нью-Йорка выделен вирус ВАЭЛ. В связи с этим в 1977-1979 гг. изучали био-
логию этого вида насекомых н оценивали векторный потенциал в 3-х областях эндемиче-
ского очага - в 40 км от Сиракуз (Нью-Йорк), в центре и периметре болот и возле селений.
Показано, что Culistera. morsitans размножается 1 раз в год, продолжительность жизни его
8-12 нед, он строго орнитофилен. Популяции насекомых различаются в размерах и наблю-
даются от середины мая до начала сентября. Потенциальный вектор Culistera. morsitans, та-
кой же как у Culistera melanura. Насекомые локализуются в очагах ВАЭЛ в период распро-
странения вируса (6).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У инфицированных
лошадей наблюдается лихорадка и виремия, затем появляются симптомы поражения ЦНС.
возбуждение, изменение поведения, сонливость и паралич. Погибает до 20% заболевших.
При патологоанатомическом исследовании отмечают деструкцию серого вещества головно-
го мозга.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус выделили в 1933 г. Тен Брук и Меррилом. Позже его выделяли от больных лю-
дей, а также от птиц и комаров некоторых видов.
88
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
Морфология и химический состав. Размеры вирионов варьируют от 20 до 58 нм, час-
тицы сферической формы.
Устойчивость. Вирус инактивируется в течение 10 мин при 60°С, а также при замора-
живании и оттаивании и обработке СО2, эфиром и дезоксихолатом, сохраняется при -20°С и
-70°С. Воздействием азотистой кислотой на инфекционную РНК удавалось получать мелко-
бляшечные мутанты, которые отличались от исходного вируса. Воздействие гидроксилами-
на в условиях pH 6,1 ведет к более быстрой, чем при pH 9,1, инактивации вируса. Вирус
ВАЭЛ удается концентрировать центрифугированием в градиенте плотности сахарозы
(45%) в течение 2,5 ч при 27000 мин'1, а затем в 30-50% р-ре сахарозы за 20 ч при 24 000
мин'1. Данный метод позволяет сохранять 90% инфекционности вируса.
Антигенная структура. Известно, что белок оболочки вируса ВАЭЛ угнетает иммун-
ный ответ здоровых мышей (СВАхС57В1) F на гетеро АГ при внутривенном введении за 24
ч до иммунизации эритроцитами барана (1). Определена топология АГ детерминант, ответ-
ственных за проявление ГА активности в генах вируса ВАЭЛ. С помощью панели с 17 об-
разцами монАТ анти-ГА, идентифицирован высококонсервативный С домен, распознавае-
мый группоспецифическими монАТ, в гене белка Е2 обоих вирусов. Эти монАТ ингибиро-
вали агглютинацию следующих альфавирусов: ЗАЭЛ, лесов Семлики, Чикунгунья, Аура,
Гета, Синдбис и Пиксина. Определено, что доминанта С-региона ассоциирована с амино-
кислотными остатками порядковых номеров 59 и 232, что было продемонстрировано при
определении нуклеотидной последовательности гена белка Е2 3-х выделенных вариантов
венесуэльского энцефаломиелита лошадей (В ЭЛ) (8).
Антигенная активность. В сыворотке крови переболевших лошадей и людей имеются
АТ, участвующие в РСК, PH и РЗГА, сравнительная динамика которых не изучена. В анти-
генном отношении вирус ВАЭЛ выше, чем вирус ЗАЭЛ. В течение 1971 г. наблюдали
вспышку энцефалита лошадей в США, при которой из 1982 проб (кровь, мозг, селезенка и
др. ткани) от 1551 лошади выделено 76 изолятов вируса ВАЭЛ. Большинство (51,6-76,1%)
инфицированных лошадей были из юго-восточных штатов. Изоляты идентифицировали в
PH и РСК. 58 из 76 изолятов выделены из мозга и селезенки, 18 из сыворотки или крови. У
40 не вакцинированных лошадей был изолирован вирус ВАЭЛ и 26 из них (65%) имели мо-
носпецифические АТ к вирусу ВАЭЛ, 4 имели более высокий титр к вирусу ВАЭЛ, чем к
вирусу ЗАЭЛ; 5 имели ВНА к обоим вирусам. Одна сыворотка имела моноспецифические
АТ к вирусу ЗАЭЛ в PH и 4 сыворотки не имели АТ. Из 67 инфицированных вирусом ВА-
ЭЛ лошадей 54 (80,6%) погибли и 4 (6%) выжили после болезни. Во время эпизоотии 1971
г. 30% изолятов (76/67) отнесены к вирусу ВАЭЛ, 34% (87/80) к ЗАЭЛ (эпизоотический
штамм) и 36% (93/80) к вакцинному штамму вируса ЗАЭЛ. Из 652 обследованных сыворо-
ток 119 (18,3%) имели ВНА к вирусу ВАЭЛ (5).
Антигенная вариабельность и родство. Установлено, что штаммы вируса ВАЭЛ, вы-
деленные в отдаленных геофизических районах, в АГ отношении различны. Так, 8 штаммов
этого вируса, полученных в США, на Ямайке, в Доминиканской Республике, отнесены к се-
вероамериканскому подтипу; другие 8, выделенные в Панаме, Гвинее, Бразилии, Аргентине
и на о. Тринидад, - к центрально-южному американскому подтипу.
Выявлено 4 серотипа вируса ВАЭЛ. 1-й тип включает 5 подтипов: 1А, IB, 1С, 1D и 1Е.
В АГ-отношении вирус ВАЭЛ отличается от вирусов WEE и VEE в РСК, PH на мышах и в
культуре клеток. Однако в РЗГА установлено родство его с другими альфавирусами. При
пассировании и последующем клонировании вируса в культуре клеток КЭ можно получить
АГ различные варианты вируса ВАЭЛ (шт. Ary-В). В этой же системе удалось получить 2
варианта (М и D) вируса, различных по патогенности для мышей и по антигенности в PH на
мышах. По иммуногенным свойствам вирус ВАЭЛ больше близок к вирусу В ЭЛ, чем к дру-
гим альфавирусам.
89
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
Гемагглютинирующие свойства. Для реакции более пригодны эритроциты только что
вылупившихся цыплят и утят. Эмбриональный вирус, обработанный сахарозой и ацетоном,
повышает ГА активность. Вирус содержит гемолизин, а также интерферирует со многими
вирусами, включая альфа-, флави-, миксо- и пикорнавирусы. Используется в качестве инди-
катора на присутствие интерферона.
Локализация, вирусоносительство и вирусовыделение. У больных лошадей вирус
выделяется с секретом носовой полости, мочой, молоком. У лошадей виремия невысокая, и
они, вероятно, являются, так же как и люди, тупиком инфекции.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на белых мышах, крысах,
морских свинках, кроликах, обезьянах, белках, хлопковых крысах, оленях, козах, овцах, ко-
ровах, голубях и цыплятах при интрацеребральной инокуляции вируса. Наиболее чувстви-
тельны мышата н 4-5-нед сирийские хомячки. Белые крысы, морские свинки и кролики не-
восприимчивы к вирусу при периферическом заражении. У мышей болезнь протекает как
энцефалит. Инкубационный период 2-3 дня. Поражается ЦНС. Для мышей вирус ВАЭЛ бо-
лее вирулентен, чем вирусы ЗАЭЛ и ВЭЛ. Вирус высоко патогенен для КЭ. У фазанов и
мелких птиц из отряда воробьиных развивается летальное заболевание. Свежевылупившие-
ся цыплята (до 12-ч возраста) пригодны для пассирования вируса в лабораторных условиях.
Культивирование. Вирус ВАЭЛ размножается в КЭ, в культуре клеток ФЭК, эмбриона
мыши, хомяка, обезьяны, морской свинки, а также в клетках HeLa, индуцируя цитопатиче-
ские изменения. Из первично трипсинизированных тканей наиболее пригодна почка хомяка
20-25-дн возраста. Культуру клеток выращивают на среде Игла с добавлением 2% сыворот-
ки хомяка. ЦПД вируса проявляется через 24 ч. В культуре ФЭК он образует бляшки. В не-
которых линиях человеческих и куриных клеток при 31 °C может развиваться хроническая
инфекция. Вирус ВАЭЛ размножается в организме экспериментально зараженных комаров
и клещей. Имеются сведения о культивировании вируса в эмбрионах рыб и тканевой куль-
туре измельченных личинок комара Aedes egypti.
Реализация генетической информации тогавирусов происходит в цитоплазме клетки в
тесной ассоциации с клеточными мембранами. После инфекции и депротеинизации роди-
тельская РНК прикрепляется к мембране, с мембранами ассоциированы также вирусная
РНК-полимераза и вирусспецифические полирибосомы. Репликация РНК тогавирусов идет
по обычному для РНК-содержащих вирусов типу и проходит стадию репликативной проме-
жуточной формы. Вирионная РНК, распадаясь после депротеинизации вириона на более
мелкие фрагменты, обеспечивает трансляцию вирусспецифических белков. Предполагают,
что эти же фрагменты РНК служат и матрицей для репликации. Репликация вирионной 42-
49S РНК происходит в особом репликативном комплексе, хотя неясно, что является матри-
цей для репликации такой РНК. Синтез более мелких молекул РНК (15-26-33S), обладаю-
щих матричной активностью, происходит, видимо, в другом репликативном комплексе. По-
липептиды вириона (или часть) образуются расщеплением более крупных белков предшест-
венников. Ассоциация РНК с белком нуклеокапсида и образование нуклеокапсида происхо-
дят на внутрицитоплазматических мембранах.
Сформировавшиеся нуклеокапсиды мигрируют к модифицированным участкам наруж-
ной мембраны клетки, в которой клеточные белки заменены вирусспецифическими глико-
протеинами. Ассоциация нуклеокапсида с модифицированной мембраной и “одевание” нук-
леокапсида происходят в процессе выхода вириона из клетки путем отпочковывания. По-
видимому, некоторые структурные полипептиды модифицируются (расщепляются, деглико-
зилируются) уже на стадии вириона.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные жи-
вотные. Инфекция передается комарами. В распространении вируса могут участвовать более
90
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
20 видов комаров Culicinae, однако основной переносчик пока не установлен. В распростра-
нении вируса в естественных условиях, по-видимому, участвуют дикие птицы. Переносчи-
ком вируса среди птиц является Culiseta melanura. Птицам (скворцам и белогорлым воробь-
ям) вирус, очевидно, передается Culiseta morsitons. Переносчик вируса лошадям и людям
неизвестен. Среди фазанов болезнь может распространяться при отсутствии членистоногого
переносчика. Среди лошадей возможно контактное заражение. Распространению инфекции
среди мышей может способствовать каннибализм. Исследовали наличие вирусов ВАЭЛ и
HJ в сперме индюков, зараженных данными вирусами, и возможность их передачи при ис-
кусственном осеменении. Через 1-2 дня после заражения индюков внутримышечно дозой
2000 БОЕ/0,1 мл того или иного вируса наблюдали слабую депрессию, потерю аппетита,
виремию. Через 1-5 дн вирусы обнаруживали в сперме и, по мнению авторов, она является
одним из векторов передачи вирусов (4).
Спектр патогенности в естественных условиях. Вирус ВАЭЛ вызывает эпизоотии
среди лошадей, фазанов и эпидемии среди людей. Клинически у человека болезнь протека-
ет в виде энцефалита с большим процентом летальности или тяжелых последствий в виде
умствен ной слабости. Возможна инаппарантная инфекция. В природе вирус выделяют из
комаров Mousonta, Anopheles, Culiseta разных видов Culicoides. Он обнаружен в организме
птичьих клещей Dermanyssus gallinae и блох Eomenacanthus stramineus и Menopon pallidum.
В США наиболее часто его выделяли из комаров Culiseta melanura.
ДИАГНОСТИКА
Основана на выделении и идентификаии вируса в РСК и PH (на мышах и в культурах
клеток) и исследовании АТ в РСК, PH, РЗГА. Предложен метод получения ГА и КСА раз-
личных арбовирусов из суспензии мозга инфицированных мышат-сосунов, который позво-
ляет получить АГ ряда арбовирусов группы А и В после 1-кратного пассажа на мышах. С
помощью ИФА с IgM к вирусу ВАЭЛ определяют инфекцию на 1 мес раньше, чем в других
иммуноанализах (РТГА, редукции бляшкообразования и PH) (7).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные приобретают иммунитет, продолжительность которого не изу-
чена. В сыворотке крови лошадей-реконвалесцентов обнаруживаются ВНА, КСА и анти-
ГА. Для профилактики применяют живые и инактивированные вакцины. В качестве живой
вакцины используют вирус, аттенуированный пассажами на голубях. Помимо того, получен
вариант К-40 вируса ВАЭЛ. Он полностью утратил нейровирулентиость, но индуцировал
иммунитет, защищающий чувствительных животных (белые мыши, золотистые хомячки) от
заражения высоковирулентным штаммом (2). Вирус, выращенный в суспензии свежеизоли-
рованных клеток КЭ обрабатывают формалином, р-пропиолактоном и подвергают темпера-
турному воздействию. Наибольшим защитным эффектом для морских свинок обладала Р-
пропиолактоновая вакцины (9). Для инактивированной вакцины берут культуральный ви-
рус. В США применяют инактивированную вакцину из вируса, выращенного в культуре
клеток КЭ. Кроме лошадей инактивированной вакциной прививают лабораторных работни-
ков, контактиро- вавших с вирусом. Есть сообщения о применении против ВАЭЛ и ЗАЭЛ
бивалентной тканевой культуральной вакцины.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ГГайдуль К.В. и др. Тез.докл. 1 съезда иммун. России. Новосиб., 1992 :97. 2.Машков А.Е. и
др. Итоги науки и техн. Вирус., ВИНИТИ, 1992, 27 :160. З.Сюрин В.Н. и др. Частная вет.
вирусол., М, Колос, 1979. 4.Guy J.S. et.al. Avian Dis., 1995, 39, 2 :337. S.Manus K.S.C. et.al.
Curr Microbiol., 1981, 5, 5 :311. 6.Morris C.D. etal. JMedEntomol, 1981, 18, 4 :313. 7,Olson
J.G. et.al. J Clin Microbiol, 1991, 29, 7 :1457. 8.Razumov LA. etal. Intervirol, 1994, 37, 6 :356.
9.White A. et.al. Appl Microbiol, 1971, 22 :909.
91
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
ВЕНЕСУЭЛЬСКИЙ
ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТ ЛОШАДЕЙ
Venezuelcu eguine encephalomyelitis (VEE) англ.);
Venezuelische Pferdenzephalomyelitis (нем.)
Венесуэльский энцефаломиелит лошадей (ВЭЛ) - остро протекающая болезнь одноко-
пытных, характеризующаяся поражением ЦНС, желтушностью слизистых оболочек и резко
выраженным нарушением деятельности ЖКТ. Болезнь распространена в странах Американ-
ского континента (9).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые вирус выделили из мозга лошадей Бир и Виков (1938 г.) в Венесуэле.
Морфология и химический состав. Размеры вирионов в ультратонких срезах 25-45
нм, во взвеси - 80 нм. Обнаружены и более мелкие (16 нм) вирионы, которые считают субъ-
единицами вируса. Вирионы имеют спиральный тип симметрии. Длина спиральных нитей
до 400 нм, шага спирали 6 нм и диаметр 7,5 нм. При центрифугирования вируса в градиенте
плотности виннокаменнокислого калия получено 3 фракции: 1-я плотностью 1,2 г/см,3 со-
держала интактные частицы вируса; 2-я плотностью 1,17 г/см3, имела высокий титр ГА, но
слабовыраженную гемолизирующую и инфекционную активность; 3-я плотностью 1,24
г/см3, обладала высокой инфекционной и Г A-активностью. Г А имеют форму полого цилин-
дра длиной 5,5-6,0 нм и диаметром 4,0-4,5 нм. Рибонуклеопротеид представляет собой тяж
толщиной 1,5-1,7 нм. Предполагается, что он упакован внутри вириона таким образом, что
петли наружной части нуклеоида взаимодействуют друг с другом, как капсомеры при куби-
ческом типе симметрии. Это и определяет квазиикосаэдрическую форму нуклеоида. Размер
вирионов 72-86 нм. Кроме белка, в состав входит до 60% липидов и 3,9-6,2% РНК. Геном
вируса состоит из 1-цепочечной (+)РНК с 5'-КЭП-структурой и З'плай (А) последовательно-
стью. После проникновения в клетку РНК транслируется с образованием неструктурных
белков, необходимых для амплификации геномной РНК и последующего синтеза субгеном-
ной 26S РНК, которая является матричной для синтеза структурных белков. Получены ре-
комбинатные штаммы вируса, экспрессирующие ген PRESpS вируса гепатита В (3).
Устойчивость. Вирус сохраняется при -70°С, в 50%-ном глицерине и лиофилизирован-
ном виде. Инактивируется формалином. Гидроскиламин оказывает сильное инактивирую-
щее дейтвие. При облучении вируса ВЭЛ в дозах от 810б до 1610б Рад удаётся получить
инактивированный АГ, обладающий Г А активностью в 4 раза ниже по сравнению с натив-
ным вирусом, но равноценный в АГ отношении. При обработке очищенного вируса трито-
ном Х-100 можно отделить компоненты суперкапсида от капсида. Суперкапсиды неинфек-
ционны, иммуногенны, вступают в РГА, РЗГА, РСК и PH. Инфекционная активность вируса
ВЭЛ утрачивается после обработки его Твином-80, а гемолизирующая - после воздействия
эфиром. Изучено действие УФ и лазерного излучения на вирус ВЭЛ (20).
Антигенная структура. С помощью иммуноэлектрофоретического фракционирования
АГ вируса ВЭЛ удалось выделить 2 фракции: 1-я включает поверхностные мембранные АГ,
идентичные ГА, 2-я содержит гемолизирующий АГ. В составе вирионов ВЭЛ обнаружено 3
белка: белок нукпеокапсида (мол.м. 59000-61000 Д), белок ГА (34000-38000 Д) и белок ба-
зальной мембраны (15000-18000 Д). АГ-структура определяется поверхностными гликопро-
теидами Е1 и Е2. С помощью монАТ в АГ-структуре гликопротеида Е2 выделено 8 эпито-
пов связывания монАТ на белке Е2, 4 из них связаны с нейтрализацией или торможением
гемагглютинации и объединены на основе функциональной активности в ВН-сайт гликопро-
92
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
теида Е2. Разумов и др. (7, 8) создали коллекцию из крысиных гибридом, секретирующих
монАТ к вирусу ВЭЛ. С их помощью изучена АГ-структура вируса и показана схожесть АГ
структуры 2-х вакцинных штаммов вируса ВЭЛ (ТС-83 и 230). Далее ими же была изучена
структура и функция белка Е1, показано сходство 3-х штаммов вируса ВЭЛ: Тринидад, Т-83
и 230. У аттенуированного шт. ТС-83 выявлена замена одной аминокислоты в Е1, 5-и ами-
нокислот в Е2 и делеция в 3'-концевой некодирующей области генома (16, 21). Структурные
гликопротеиды вируса ВЭЛ играют важную роль в формировании противовирусного имму-
нитета, вызывая появление нейтрализующих анти -ГА и протективных АТ. С помощью мо-
нАТ к вирусным гликопротеидам Е1 и Е2 была изучена их полная АГ-структура, выявлены
и картированы эпитопы, определены функции отдельных АГ-детерминант (22), впервые
предложена карта взаимного пространственного расположения эпитопов на гликопротеиде
У2 вируса ВЭЛ и выявлен “критический сайт”, ответственный за формирование ВНА и про-
тективных АТ (18, 22). В результате было установлено, что белок Е1 вируса ВЭЛ содержит
не 1, как это было известно ранее, а по крайней мере 2 протективных эпитопа (12).
Антигенная активность. У переболевших животных обнаружены ВНА, КСА и анти-
ГА. ВНА появляются на 6-й день после заражения, КСА и анти-ГА - позже. У КРС появля-
ются ВНА и анти-ГА. Сыворотки, полученные на компоненты суперкапсида, защищают
мышей от летальной вирусной инфекции. Иммунизация мышей суперкапсидом сообщает им
иммунитет против вирулентного вируса. Обсуждается перспектива использования компо-
нентов суперкапсида вируса в качестве вакцины. Показана возможность выявления АТ к
ВЭЛ в ELISA с применением очищенного в водно-полимерной системе АГ (5, 6).
Антигенная вариабельность и родство. Вирусы комплекса ВЭЛ в АГ-отношении раз-
делены на 4 группы или подтипами. 1-я группа содержит 7 вариантов, из них 4 высокой
вирулентности; остальные 3 группы имеют по одному варианту с низкой вирулентностью.
Вирус ВЭЛ дает перекрестные реакции с другими альфавирусами в РЗГА. Его можно легко
дифференцировать от других вирусов с помощью РСК и PH. На основании опытов перекре-
стной резистентности иммунизированных животных выявлена близость вируса ВЭЛ к ва-
рианту вируса ВАЭЛ. Вирус разделяют на подтипы по спектру патогенности: вирулентный
для хомяков шт. ВеА8 (подтип 3), не вирулентный для хомяков шт. ВеА35645 (подтип 4),
вирулентный шт. 63И2 (подтип 1), аттенуированный ТС83 вакцинный шт. (подтип 1, вари-
ант А) нестабильный по патогенности для хомяков. Вирус ВЭЛ с 1930-1940 гг. изменил
свои свойства, поэтому для изготовления инактивированной вакцины используют вновь вы-
деленные эпизоотические штаммы.
Вирусы Мукамбо, Tonate и НД-1252 классифицированы как варианты III-А, Ш-В и Ш-С
соответственно. Вирус Callassan, который не связан тесно с изолятами комплекса, относится
к новому подтипу V (17).
Гемагглютинирующие свойства. ГА свойства аналогичны другим альфавирусами А.
ГА-антиген обнаружен в мозге зараженных мышей после удаления ингибиторов в жидкой
фазе тканевых культур. Оптимум pH для РГА 5,8-6,0. По мере снижения концентрации
эритроцитов чувствительность РГА возрастает. Используя методику флюоресцирующих АТ,
изучен характер адсорбции вирионов на эритроцитах гусей.
Локализация, вирусоносительство и вирусовыделение. У больных лошадей вирус
выделяется со слизью носа, секретами глаз, слюной, мочой и молоком, поэтому возможен
контактный путь распространения болезни. У экспериментально зараженных лошадей вирус
обнаруживают в носовых, ротовых и конъюнктивальных смывах, в крови, почках, мозге. В
отличие от ЗАЭЛ и ВАЭЛ при ВЭЛ вирус обнаруживают в крови животных в высоком тит-
ре, что способствует инфицированию большого числа москитов, питающихся кровью боль-
ных животных. Два штамма вируса ВЭЛ, принадлежащих к подтипу 1, вызывали виремию
у поросят и КРС продолжительностью от 0,5 до 3 дн. В крови птиц титр вируса невысокий.
93
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
Поэтому предполагают, что естественным резервуаром вируса, по-видимому, являются мле-
копитающие, а не птицы.
Экспериментальная инфекция. Вирус ВЭЛ более патогенен для лабораторных жи-
вотных, чем вирусы ЗАЭЛ и ВАЭЛ, и инфекция у них легко воспроизводится при перифе-
рическом заражении. Титр вируса в мозге лабораторных животных достигает 1О10 ЛДзо/мл
Инкубационный период продолжается 1-3 дня. Помимо экстраневральных путей заражения,
инфекция воспроизводится и при заражении через органы дыхания. У зараженных живот-
ных вирус обнаруживают в мозге, крови, слизи носоглотки и в фекалиях. Вирус высоко ви-
рулентен для КЭ 9-11-дн возраста. При заражении лошадей эпизоотическими штаммами
наблюдается высокая температура, резко выраженная лейкопения и симптомы энцефалита.
Кроме лошадей, к экспериментальному заражению восприимчивы собаки, кошки, овцы
и козы. Последние являются индикатором активности вируса. При заражении их минималь-
ной дозой, передаваемой одним комаром, ВНА и анти-ГА появляются через 6-9 дн после за-
ражения. Титры их быстро возрастают. КРС невосприимчив. Птицы заболевают при зара-
жении в больших дозах. Зараженные голуби имеют в 60-80% случаев ВНА в высоком титре.
Присутствие вируса в ротовой полости голубей, зараженных подкожно, свидетельствует о
возможности передачи вируса ВЭЛ респираторным путем. Имеется сообщение об экспери-
ментальном заражении мышей посредством ингаляции. Вирус ВЭЛ вызывает фатальный
энцефалит у мышей. Дикий тип вызывал 100% летальность у мышей, зараженных интраце-
ребрально и в подушечку лапки. Мутант вируса 209 был апатогенен при заражении мышей
в лапку, ио вызывал 100% гибель при интрацеребральном заражении (14). Удавалось инфи-
цировать также коров шт. MF-8. Симптомов болезни не наблюдалось, но в сыворотке крови
обнаружены специфические АТ. У белых крыс при респираторном заражении первоначаль-
ное размножение происходит как в верхних, так и в нижних участках дыхательного трак та.
Заболевание сопровождается рядом выраженных клинических проявлений. Животные были
малоподвижны, лежали или сидели съеживщись, не перемещались в клетке даже под дейст-
вием сильных раздражителей, отмечалось кровотечение из носа, парезы или параличи ко-
нечностей, животные практически не ели. Развитие заболевания сопровождается вирусеми-
ей, инфицированием многих органов лимфомиелоидной системы, а также обонятельного
тракта и головного мозга. На поздней стадии инфекции у аэрозольно зараженных белых
крыс в сыворотоке крови появляются ВНА (2).
Культивирование. Вирус ВЭЛ легко размножается на КЭ, в культуре клеток почки не-
которых приматов, фибробластов КЭ, почки морской свинки и хомячков, уток, обезьян,
овец, перевиваемых клеток L (мышиных). Размножаясь в диплоидных клетках человека
(W1-38), он вызывает ЦПИ. В культуре клеток L развивается хроническая инфекция. В
культуре клеток КЭ, HeLa и клеток сердца морской свинки вирус аттенуируется настолько,
что становится авирулентным для морских свинок, кроликов и взрослых мышей, заражен-
ных периферически. Аттенуированный вакцинный штамм вируса ТС-83 получен в результа-
те 45 пассажей вирулентного штамма в культуре клеток сердца морской свинки (16, 17, 21).
Аналогичный штамм-15 получен серийным пассированием в культуре клеток КЭ (11).
Апатогенные клоны образуют в тканевой культуре мелкие бляшки, патогенные - более
крупные. При введении мышам они размножаются в печени и селезенке, симптомы болезни
не проявляются. Популяция вируса неоднородна, так как, помимо апатогенного, обнаружи-
ваются патогенные клоны вируса. При серийном пассировании на мышах вирулентность ат-
тенуированных вариантов восстанавливается.
В инфицированных клетках образуются псевдовирусы, представляющие собой комплекс
вирусной РНК с клеточным белком, что играет важную роль в возникновении и поддержа-
нии вирусоносительства. Будучи нечувствительными к вирусспецифическим АТ и, обладая
94
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
инфекционностью, псевдовирусы легко преодолевают иммунные барьеры организма и долго
персистируют в клетках.
Вирионы формируются, по-видимому, на мембранах, окружающих цитоплазменные ва-
куоли, затем достигают поверхности клетки и выделяются из нее. Каждая клетка продуци-
рует приблизительно 2700 бляшкообразующих единиц. При культивировании в культуре
фибробластов КЭ зрелые вирионы формируются на мембранах внутриклеточных вакуолей.
Найдены олиго- и полигеномные формы вирионов. Вирус ВЭЛ инкорпорирует в своей
структуре АГ клеток, в которых он репродуцируется. У высокоочищенного вируса, выра-
щенного в культуре куриных фибробластов, найдены видоспецифический АГ, гетерогенный
АГ Форссмана и групповые АГ А и Н. Эти АГ локализованы у вируса неодинаково: видовой
- поверхностно, групповые и гетерогенный АГ Форссмана - более глубоко. Изучен процесс
прикрепления вирионов аттенуированного шт.ТС-83 вируса ВЭЛ к макрофагоподобным
клеткам липомы BW-J-M. Показана специфическая природа гликопротеидных рецепторов
клеток, ответственных за прикрепление вируса (15). Гликопротеид Е2 вирулентного вируса
(TRD) содержит 3 участка гликозилирования, тогда как гликопротеид Е2 вакцинного вируса
(ТС-80) - только 2 (19).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Естественный резервуар вируса неизвестен; предполагают, что это птицы. Переносчи-
ками вируса могут быть Aedes taeniorhynchus и Mansonia titillans. В США вирус ВЭЛ изо-
лировали из Aedes sollicitans, Psorophora confinnis, Psorophora discoler. Возможно заражение
лошадей путем контакта. В Мексике вирус выделен от хомяков и комаров рода Culex, а в
южной части Флориды - от комаров Culex, полевых мышей и хлопковых крыс. Дискутиру-
ется вопрос о роли КРС как естественного резервуара вируса, поскольку в местности рас-
пространения ВЭЛ АТ обнаружены у КРС, свиней и собак. Собаки могут участвовать в эпи-
зоотическом распространении инфекции.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях заболевают
лошади, ослы, мулы и люди. Симптомы энцефалита отмечают не у всех инфицированных
лошадей и ослов. У некоторых регистрируют только лихорадку, состояние угнетения и диа-
рею. На юго-востоке Мексики сыворотки КРС и свиней содержат АТ к ВЭЛ. Видимо, эти
животные также участвуют в циркуляции вируса, передаваемого комарами и позвоночными
животными.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании выделения и идентификации вируса, серологических ис-
следований и патологоанатомических изменений. Наиболее типичны изменения в легочных
дольках (микрозернистый желто-буроватый пигмент и дистрофические изменения типа зер-
нистого и жирового перерождения). Головной мозг для биопробы берут не позже 6 ч после
смерти животного. Для повышения концентрации вирус 1-кратно пассируют на 7-8-дн КЭ.
Из серологических реакций применяют РСК на холоде и PH. Специфические сыворотки
получают на кроликах. АГ готовят путем многократного замораживания (до -70°С) и оттаи-
вания вируссодержащей ткани мозга или обработкой фреоном-113. Типирование вируса
проводят перекрестным заражением иммунизированных лабораторных животных или в PH.
Разработан точный, высокочувствительный тест выявления АТ к вирусу в PH при участии
анти-у-глобулиновой сыворотки. Показано, что чувствительность этого теста в сотни раз
превышает чувствительность обычной PH. Результат PH с анти-у-глобулиновой сывороткой
учитывают через 24 ч. Также рекомендована гибридизация с олигонуклеотидами как быст-
рый способ идентификации вируса ВЭЛ (10). Разработан непрямой ИФА для обнаружения
АГ вируса ВЭЛ. Он специфичен как и прямой ИФА, но чувствительнее его в 4 раза (5, 6).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
95
Глава III. Family Togaviridae Тогавирусные инфекции
Животные-реконвалесценты приобретают иммунитет, продолжительность которого не
изучена. В США и в странах Латинской Америки для профилактики ВЭЛ применяют атте-
нуированную живую вакцину ( из шт. ТС-83), которая защищает лошадей и ослов против
вирулентного штамма в течение 14 мес. Однократная иммунизация поверхностными глико-
протеинами вируса защищала 70% мышей от летальной инфекции вирулентным штаммом,
а 2-кратная иммунизация обеспечивала 100% защиту от заражения. В крови вакцинирован-
ных животных появляются КС и анти-ГА, динамика титра и продолжительность циркуля-
ции которых не изучены. Помимо того, зарубежными исследователями на основе вирулент-
ного шт. Тринидад получены аттенуированные штаммы линии ТС-82, получившие широкое
применение в ветеринарной практике, ио не нашедшие применения в медицинской практи-
ке из-за высокой реактогенности.
Инактивированную вакцину готовят из шт. Guajira, культивируемого в клетках ВНК.
Введение инактивированной вакцины ТС-84 после живой ТС-83 оказывало хороший бус-
терный эффект (13). На основе ростовой среды Игла разработана высокоэффективная ста-
билизирующая питательная среда MEM Hepes, содержащая в качестве добавки 2-(винил ок-
сиэтилен) дитиокарбомат калия-виндиатат. Добавление в среду виндиатата в количестве 10'
5-10'6 мол% повышает термостойкость мембран клеток и вирусов, так как обладает антиаг-
регационным, антигемолитическим, иммунологическим и термопротективным действием,
что обнаружено впервые и доказано экспериментально. Повышение термоустойчивости ви-
русного материала имеет существенное значение для сохранения биологической активности
вирусных препаратов при их создании и хранении. Биологическая активность вирусных
суспензий, полученных с использованием виндиатата, превышает биологическую актив-
ность контрольных партий вируса ВЭЛ в условиях 37°С (1). Представлена новая вакцина
против вируса ВЭЛ. Использован шт. Тринидад, инактивированный формальдегидом, с ак-
тивностью 3,3-3,9 1g ГАЕ и содержанием белка 100+10 мкг/мл. Цель изобретения - повы-
шение иммуногенной активности вакцины и создание защиты при аэрозольном способе за-
ражения. Для размножения вируса ВЭЛ использовали культуру диплоидных клеток легкого
эмбриона человека Л-68, клетки заражали вирусом в дозе 0,1-0,01 БОЕ/клетку. Вируссо-
держащий материал обрабатывали 3-кратно ультразвуком, концентрировали полиэтиленг-
ликолем, очищали в градиенте плотности сахарозы, инактивировали формальдегидом и
проводили сорбцию на А1(ОН)3. Полученная вакцина обладает более высокой иммуногенной
активностью. За счет того, что инактивации подвергается уже очищенный препарат вируса,
достигается безопасность и ареактивность вакцинного препарата (4).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Амасова С.В. и др. Патент 5025275/13. Заявл. 16.08.91, опубл. 20.5.96. 2.Булычев Л.Е. и
др. Вопросы вирусол., 1995, 2 :79. З.Дрыга С.А. и др. Вопросы вирусол., 1996, 3 ЛОО.
4.Куслий А.Г. и др. Патент 4952924/13, Заявл. 29.04.91; опубл.20. 05. 95. 5.Помелова В.Г. и
др. Вопросы вирусол., 1991, 36, 5 :414. б.Помелова В.Г. и др. Вопросы вирусол., 1991, 36, 6
:486. 7.Разумов И. А. и др. Вопросы вирусол., 1991, 1 :34. 8.Разумов И. А. и др. Молек. гене-
тика, микроб, вирусол. 1991, 6 :21. 9.Сюрин В.Н. Частная вет вирусология, 1979. Ю.Тюхлава
И.Н. и др. Итоги науки и техн. сер. вирус., 1992, 28 :2. П.Филангенков А.Г. и др. Вопросы
вирусол., 1991, 36 :229. П.Шпилевая М.В. и др. Вопросы вирусол., 1995, 2 :82. 13.Engler
R.J.M. et. al. J Med Virol 1992, 38, 4 :305. 14.Grieder B. et. al. J Cell Brochem 1992, 16 Л43.
15.Huggins J.W. et. al. J Gen Virol. 1983, 64, 1 Л49. 16.Kinney R.M. et. al. Virology 1989, 170
Л9. 17.Kinney R. et. al. J Gen Virol. 1983, 64, 1Л35. 18..Mathews J.H. et. al. J Immunol 1982,
129 :2763. 19 .Mecham J. et. al. J Gen Virol 1982, 63, 1Л21. 20.Nikogosyan D. et. al. Photochem
and Photob 1991, 54, 4 :847. 2ERachr G.T. et. al. Virology 1982, 118 .269. 22.Rochrig J.T. et.
al. Ibit 1985, 142 :347.
96
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
Глава IV. ФЛАВИВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА FLAVIVIRIDAE
Флявивирусы (от лат. flavus - желтый)- большая группа вирусов, поражающая позво-
ночных и насекомых. Вирионы флавивирусов представляют собой сферические частицы
диаметром 40-60 нм. Они состоят из нуклеокапсида икосаэдрической симметрии и наруж-
ной липопротеидной оболочки; коэффициент седиментации 140-200S. Геном представлен
единой 1-спиральной (1-нитевой) молекулой РНК с коэффициентом седиментации 44 S и
мол.м. 4106Д. На З'-конце РНК нет поли A-последовательности. Имеется одна открытая
рамка считывания, кодирующая полипротеин, которая расщепляется с образованием всех
вирусспецифических белков. Гены, кодирующие структурные и неструктурные белки, рас-
положены соответственно в 5'- и З'-концевой области РНК. Последняя обладает инфекци-
онностью. В оболочке вирионов обнаружено 2-3 белка, в нуклеокапсиде - 1. Вирусы, объе-
диненные в 1 род, имеют АГ родство, но его нет между членами различных родов. Флави-
вирусы размножаются в цитоплазме, созревание вирионов происходит почкованием через
внутрицитоплазматические мембраны в везикулы. Флавивирусы содержат 3 АГ: вариант-
ный, медленно седиментирующий ГА и растворимый (невирионный) КС АГ. Причем, по-
следний не белок, а комплексная структура - мембраносодержащий рибонуклеопротеид,
включающий АГ-активный вирусспецифический белок NV5 (р93), а также небелковые мак-
ромолекулы - углеводы, липиды и РНК.
Семейство состоит из 3 родов: Flavivirus, Pestivirus и вируса гепатита С.
1. Род Flavivirus. Включает более 60 представителей (9 подгрупп): вирусы желтой ли-
хорадки (прототипный вирус), японского энцефалита, клещевого энцефалита, омской ге-
моррагической лихорадки, израильского менингоэнцефалита индеек и др. Диаметр вирио-
нов составляет 40-50 нм, диаметр нуклеокапсидов - 25-30 нм, плавучая плотность в CsCl
1,22-1,24 г/см3, в сахарозе - 1,15-1,20 г/см3, коэффициент седиментации 170-210S.
Геном состоит примерно из 11000 нуклеотидов (4 МД), кэпирован на 5'-конце, но не
имеет полиА-последовательности иа З’-конце. В оболочке вирионов обнаружено 2 белка с
мол.м. 51-59 кД (Е) и 7-9 кД (М). Нуклеокапсид состоит из 1-го белка с мол.м. 14-16 кД. На
белке Е оболочки содержатся типоспецифические, подгруппоспецифические и группоспеци-
фические АГ - детерминанты. Белок оболочки вириона Е имеет определяющее значение для
реализации таких биологических свойств, как инфекционность, гемагглютинирующая и
протективная активность. Предполагается, что этот белок участвует в pH-зависимом слия-
нии вирусной оболочки с клеточными мембранами. Флавивирусы способны проникать в
клетку 2-мя различными путями: либо адсорбционным эндоцитозом, либо путем слияния с
цитоплазматической мембраной.
Около 30 видов флавивирусов вызывают заболевания у человека и 8-10 видов - у до-
машних животных. У переносчиков инфекция протекает бессимптомно. Чувствительностью
к флавивирусам обладают новорожденные мыши, многие клеточные культуры позвоночных
и членистоногих, размножение вирусов часто не сопровождается ЦПЭ.
2. Род Pestivirus (от лат. pestis - чума) включает вирусы диареи КРС (прототипный ви-
рус) (ВД-БС), классической чумы свиней (КЧС) и пограничной болезни овец (ПБ). Одной из
особенностей пестивирусов является эффективная трансплацентариая передача вируса. В
зависимости от возраста плода инфицирование может привести к гибели, нарушениям раз-
вития, пожизненному вирусоносительству или к специфическому иммунному ответу с или-
минацией возбудителя.
7 Зак. № 171
97
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусиые инфекции
Диаметр вирионов 40-60 нм, плавучая плотность в сахарозе 1,12-1,13 г/см3, коэффи-
циент седиментации 140S. Геном состоит примерно из 12500 нуклеотидов (4,3 мД), мень-
шие или большие размеры обусловлены соответственно делециями или инсерциями; 3 -
конец не содержит поли A-последовательности. Имеется одна открытая рамка считывания,
кодирующая полипротеии, содержащий около 4000 аминокислот, которые расщепляются с
образованием всех вирусспецифических белков. Данная стратегия генома обосновывает от-
сутствие субгеномных РНК в процессе репликации флавивирусов в отличие от тогавирусов.
Трансляция происходит на полисомах, локализованных у мембран эндоплазматического ре-
тикулюма. Нарезание протеина начинается уже во время трансляции с автопротеолитиче-
ского отщепления протеазы Npro (р20/23), которая наряду с клеточными протеазами осуще-
ствляет дальнейший процессинг. В 5'- и 3'-концевых частях вирусной РНК содержатся не-
транслируемые области размером около 400 и 350 нуклеотидов. У пестивирусов отсутству-
ют кэп-структуры на 5'-конце. В оболочке вирионов обнаружено 3 гликопротеина с мол.м.
23-57 кД. Нуклеокапсид состоит из одного белка с мол.м. 20-31 кД.
В структуре пестивирусов идентифицировано 4 белка: нуклеокапсидный протеин С (р14)
и 3 гликопротеина вирионной оболочки, обозначенные как Е0 (gp48 для вируса ВД-БС,
gp42, gp44/48 для различных штаммов вируса КЧС), El (gp25 для вируса ВД-БС, gp 31-33
для вируса КЧС) и Е2 (соответственно gp53 и gp55, 51/54), [El - gp51-55, E2-gp44-48 и ЕЗ-
gp31-33,]. Среди неструктурных белков р23 вируса КЧС и его аналог р20 вируса ВД-БС яв-
ляются аутопротеазами (Npro), участвующими в процессинге вирусных белков. Общим для
всех пестивирусов является белок р125. Для вируса ВД-БС идентифицированы еще 3 не-
структурных белка: р10, р58 и р75. Белки в полипротеине расположены в следующем по-
рядке: Npro, С, Е0, El, Е2, р125 и другие неструктурные белки.
Пестивирусы способны преодолевать видовые барьеры. Однако заболевание при зара-
жении гетерологичных хозяев может вызывать только вирус ВД-БС. Между вирусами этого
рода имеется АГ родство. Размножаются они только в организме позвоночных, передаются
горизонтально и вертикально. Размножение вирусов в клеточных культурах происходит, как
правило, без ЦПЭ. Цитопатогеиный биотип вируса, в основном, характерен для ВД-БС,
причем полевые изоляты могут содержать одновременно оба варианта вируса. Вирусы КЧС
и ПБ представлены нецитопатогенными вариантами. Оптимальным субстратом для всех
пестивирусов является культура клеток основного хозяина. Добавление в среду сыворотки,
содержащей ингибиторы протеаз, подавляет репродукцию пестивирусов. В клетках, зара-
женных нецитопатогенным вирусом ВД-БС, обнаружен неструктурный белок р125, тогда
как в клетках, зараженных цитопатогенным вирусом дополнительно выявлялся р80. Уста-
новлено, что р80 является С-концевой частью р125. Анализ генома позволил выделить де-
леции, составляющие более ’/з генома, включающие все гены структурных белков и N-
концевую часть р125. Таким образом, цитопатогенные варианты представляют собой де-
фектные интерферирующие частицы, способные реплицироваться только в присутствии го-
мологичного нецитопатогенного вируса-помощника. Некоторые цитопатогенные варианты
наряду с полным геномом содержат инсерции, последовательности которых соответствуют
таковым геиа убиквитина других генов клеток-хозяев в сайте, кодирующем р 125. Некоторые
изоляты содержат дуплицированную последовательность р80. У изолята, не содержащего ни
инсерции, ни дупликации, р125 протеолитически расщепляется на р54 и р80. По различиям
в последовательностях 5'-концевой нетранслируемой области РНК и гена, кодирующего
р125, оказалось возможным предположить альтернативные обозначения пестивирусов: ре-
ферентные и родственные штаммы ВД-БС - пестивирус тип 1; штаммы ВКЧС - пестивирус
тип 2; штаммы собственно вируса ПБ - пестивирус тип 3; остальные пестивирусы, отли-
чающиеся от типов 1-3, - пестивирус тип 4. ВН-активностью обладают преимущественно АТ
(в т.ч. монАТ) к Е2 и в меньшей степени к Е0. Наибольшей (свыше 80%) межвидовой гомо-
98
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
логией обладают неструктурные белки р125. Гомология gp55 вируса КЧС и gp53 вируса
ВД-БС составляет порядка 60%. Анализ структуры N-концевой части гликопротеина Е2 по-
казал наличие 2-х структурных единиц. Первая образована доменами В и С, 2-я - высоко-
консервативными доменами А и D. Нейтрализующие монАТ специфичны к эпитопам, лока-
лизованным в доменах В, С и А (1).
3. Род вирусов гепатита С не имеет международного названия. В состав рода входит
вирус гепатита С человека (прототипный вирус). Возможными представителями рода явля-
ются вирус геморрагической лихорадки обезьян и вирус, вызывающий слияние клеток ко-
маров Aedes albopictus. В естественных условиях вирус поражает только человека. В экспе-
риментальных условиях к нему чувствительны шимпанзе. Вирус вызывает острое и хрони-
ческое заболевание печени, может быть причиной цирроза и рака печени. Персистентная
инфекция наблюдается у 60% инфицированных людей (2).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.О.В.Сергеев Вопросы вирусологии. 1997, 3 :5. 2.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вир., М.,
Колос 1979.
ЯПОНСКИЙ ЭНЦЭФАЛИТ
Japanes В Encephalitis(anrn.); Japanische B-Enzephalitis (нем.)
Японский энцефалит (ЯЭ)(японский энцефалит В, русский осенний энце-фалит) -
тяжело протекающая инфекционная болезнь людей, лошадей и других животных, прояв-
ляющаяся общими токсикоиифекционными явлениями и развитием менингиальных и об-
щемозговых симптомов.
Распространение. ЯЭ распространён в Японии, на всей территории Юго-Восточной
Азии и Юго-Восточной Индии. Вирус сохраняется в организме птиц, комаров и других жи-
вотных. В 1978 г. в Индии (в штате Уттер-Прадеш) заболело 3451 человек, из них умерло
1093 (25). ЯЭ эндемичен в Тайланде и Индии. В 25% случаев ЯЭ приводит к летальному
исходу. У 30% выздоравливающих имеет место нейропсихиатрические нарушения (23).
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Различны и неспеци-
фичны. При экспериментальном заражении инкубационный период у лошадей продолжает-
ся от 4 до 15 дн. Болезнь протекает остро и характеризуется токсическими и нервными явле-
ниями. Наблюдаются фибриллярные подрагивания мышц, иногда гиперкинезы, параличи.
Возможны приступы сильного возбуждения. Больные впадают в коматозное состояние, на-
ступает общий паралич и смерть. Болезнь длится 8-10 дн. Выраженные изменения отмечают
в головном мозге. Селезёнка увеличена, с кровоизлияниями под капсулой. На слизистой мо-
чевого пузыря мелкие кровоизлияния. У свиней вирус может вызывать аборты или рожде-
ние мёртвых плодов (1, 2). У супоросных свиноматок вирус ЯЭ вызывает аборты и другие
репродуктивные нарушения; у хряков могут наблюдаться острые орхиты. У лошадей разви-
ваются поражения ЦНС, подобные поражения также регистрируют у обезьян и ослов.
Патогенез. У инфицированных животных развивается виремия от 12 ч до нескольких
дней, после чего вирус диссимилирует в печень, селезенку и мышцы. Дальнейшая реплика-
ция вируса в этих органах поддерживает виремию. Затем вирус проникает в ЦНС с цереб-
роспинальной жидкостью, эпителиальными клетками, макрофагами или лимфоцитами. У
людей и мышей ВЯЭ селективно поражает нейроны, главным образом таламуса, базальных
ганглий и нижнего слоя коры (17). При интраперитонеальном заражении мышей ВЯЭ раз-
множается сначала в перитонеальных макрофагах и только на 3-й день - в макрофагах селе-
зенки. Патогистологические изменения наиболее выражены в ретикулоэндотелиальной сис-
теме в виде фокусов гиперплазии герминативных центров в селезенке, и интерстинальной
пневмонии (9,17,28).
7* 99
Глава TV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые выделил вирус японский исследователь Хаяши в 1934г. В СССР его выделил и
изучил Шубладзе (1940г.), Смородинцев и Неустроев (1941г.).
Морфология и химический состав. Средний диаметр вириона с оболочкой 40 нм
(30). Форма гексагональная. Вирус содержит 1-цепочечную РНК. Полная нуклеотидная по-
следовательность геномной РНК составляет 10976 нуклеотидов, соответствующих 3432
аминокислотным остаткам (30). Плотность в градиенте сахарозы 1,18 г/см3. В вирионах вы-
явлены 3 структурных и несколько неструктурных белков. Структурные белки включают
оболочечный гликопротеин Е (54 кД), негликозилированный оболочечный протеин М (8 кД)
и капсидный протеин С (14 кД). Оболочечный протеин Е носитель эпитопов, ответственных
за индукцию ВНА. По крайней мере 9 эпитопов установлено в протеина Е и один N-сайт ви-
русспецифический (20). По данным других исследователей, в состав вируса входят 3 поли-
пептида: ГП (мол.м. 25000 Д), НП (мол.м. 16000 Д) и МП (мол.м. 9800 Д). Выяснен амино-
кислотный состав белков V3 2-х шт. ВЯЭ: Nakayama-NJH и JaGAr-01 (32). Определена пол-
ная последовательность нуклеотидов его геномной РНК. Общая длина РНК его составляет
10976 нуклеотидов. На N-конце полипротеина локализуется белок С, далее белок М и Е. С-
концевую часть полипротеина занимает неструктурный белок - РНК-зависимая РНК-
полимераза (29). Методом олигонуклеотидного фингерпринта установлено, что имеют ме-
сто мутации штаммов вируса, выделенных в разных зонах Японии и Тайланда (13). Подоб-
но другим альфавирусам в геноме ВЯЭ одна открытая рамка считывания (26). Актиномицин
Д и митомицин практически не влияют на репликацию вируса (24).
Устойчивость. Вирус разрушается при 56°С за 30 мин. Имеется стабильный вариант,
выделенный клонированием в культуре ткани, у которого при 60°С сохраняется 65% исход-
ной инфекциоиности. При 25°С менее устойчив, чем вирус ЗАЭЛ. Не устойчив при pH 10,0
и 7,0; pH 8,5 является оптимально стабилизирующим. При pH 3,0 инфекционный тигр сни-
жается. Разрушается эфиром и дезоксихолатом; в лиофилизированном виде сохраняется не
менее 10 лет, при -70°С - не менее года без снижения титра, при -20° - ие менее года со зна-
чительным снижением титра. При -76°С вирулентность вируса сохраняется до 8 лет.
Антигенная структура. Вирионы содержат 2 КС АГ мол.м. 58-Ю3 Д и 24-Ю3 Д - гли-
козилированный полипептид V-3. Имеются как связанные с вирусной частицей, так и рас-
творимые ГА и КС АГ.
Антигенная активность. У естественно заражённых лошадей и людей обнаруживают
ВНА и анти-ГА, которые выявляются через неделю и сохраняются в течение нескольких
лет. КСА появляются значительно позже и исчезают раньше. В Китае обнаружен высокий
процент серопозитивных в PH сывороток среди животных: свиней - 100%, лошадей - 94,
КРС - 92 и собак - 66% (14). АГ-анализ данного вируса изучен с помощью монАТ (27).
Антигенная вариабельность и родство. Меиэду штаммами ВЯЭ существуют АГ-
различия. Выявлено 2 иммунологических типа вируса. Более однородную и близкую группу
образуют шт. Накаяма, СП-69 и Пекин-1. Другой тип представлен шт. Джагар-01. Установ-
лено родство всех штаммов ЯЭ с вирусом лихорадки Западного Нила, в особенности у шт.
Джагар-01 со шт. Нр-94. В АГ-отношении ВЯЭ близок к вирусам Муррея, энцефалита Сан-
Луи и Илеус. Степень АГ общности разная. Более родственны вирусы ЭЯ, энцефалита до-
лины Муррея, вирус Илеус стоит несколько обособленно. Все 5 изолятов ВЯЭ по всей длине
генома имели высокую гомологию нуклеотидных последовательностей (более 93%). При-
мерно такой же степенью гомологии характеризовались и белки 5 исследованных изолятов
ЕЯЭ (31). С использованием монАТ в РТГА, PH и ELISA также продемонстрирована тесная
связь ВЯЭ с вирусом энцефалита Муррей Валли, вирусом Западного Нила и менее тесную
связь с вирусом энцефалита Сан-Луи (20). Эта связь также подтверждается сравнением го-
мологий нуклеотидов и аминокислот вирусов (26).
100
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
Гемагглютинирующие свойства. Вирус агглютинирует эритроциты цыплят, гусей, го-
лубей, петухов, барана, морской свинки, кролика. ГА получают из мозга мышей и из жид-
кости инфицированных культур. На протяжении 90 пассажей вируса в культуре почек эм-
бриона овцы ГА регулярно обнаруживался в титре 1:128 - 1:512. В культурах ФЭК ГА на-
ходят лишь в 1-ом пассаже после заражения мозговой взвесью вируса. Оптимум pH для
хранения АГ из ткани мозга 6,3-6,5, для культуральных 6,0-6,2. Старые лабораторные
штаммы могут утрачивать Г А активность.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. У многих животных
развивается вирусемия, что имеет большое значение в рассеивании вируса. У мексиканских
летучих мышей вирус размножается в буром жире, депонируется там и поэтому поддержи-
вается 15-30-дн вирусемия. Вирус проходит через плаценту и обнаруживается в органах
плода животных.
Эксперементальная инфекция. Вирус патогенен для мышей. Инкубационный период
болезни при заражении в мозг 4-5 дн, при периферическом введении 30-60 сут, многие жи-
вотные выживают. Титры вируса в мозге заражённых мышей в пределах 10’6 и 10’8. Вос-
приимчивы белые крысы не старше 14 дн, молодые хомяки, морские свинки, обезьяны, яг-
нята и овцы. Экспериментальную инфекцию удаётся легко вызвать у мышей, щенков, коз,
свиней, летучих мышей и птиц различных видов.
Культивирование. Благоприятной средой для размножения вируса является КЭ. Вирус
культивируется также в различных тканях и клетках in vitro. ЦПД его проявляется лишь в
немногих культурах и определяется свойствами штамма и клеточной линии. Оно постоянно
наблюдается в первичных культурах почек эмбрионов свиньи, овцы и почек хомяка. Мак-
симальное накопление вируса происходит на 2-3-и сут, к этому же сроку развиваются и
ЦПИ. В культуре фибробластов КЭ под агаром вирус образует бляшки, которые по размеру
разделены на 3 группы: мелкие (до 3 мм), крупные (более 5 мм) и бляшки непостоянного
размера. Крупнобляшечные варианты вируса оказались высокопатогенными. Вирус репро-
дуцируется в перевиваемых линиях клеток - Veto, ВМК.-21 (baby monkey kidney - клетки
почки обезьян-малышей), L-М. Часто используются культуры клеток москитов из эмбрио-
нальной или личиночной ткани (перевиваемая линия клеток личинок москитов С6/36). Не-
давние исследования показали, что лейкоцитарные культуры различного происхождения -
прекрасная среда для репродукции ВЯЭ (18). Инсулин, адренокортикотропный гормон, кон-
канавалин А, гидрокортизон стимулируют репродукцию ВЯЭ в культурах клеток (19,21).
Созревание вирионов происходит в цистернах эндоплазматического ретикулума, а
транспорт вируса происходит внутриклеточной секреторной системой. Выход вируса осуще-
ствляется за счет лизиса клеток или “обратного” фагоцитоза.
Пассажи вируса ЯЭ на клетках HeLa приводят к аттенуации вирулентности для мышей.
После 6-и пассажей на клетках 4-х штаммов ВЯЭ дикого типа: Nakayama original, 826309,
SA14 и Beijing-1, шт. Nakayama original и 826309 стали аттенуированными для мышей,
причем аттенуация сохранялась при пассажах на первичных клетках КЭ и клетках LLC-
МК2 и С6/36. Аттенуация сопровождалась изменением связывания с препаратами мем-
бранного рецептора из мозга мышей, что указывает на участие в аттенуации белка оболочки
Е1. Сравнение нуклеотидных последовательностей генов структурных белков вирулентных
шт. Nakayama original и 826309 и их аттенуированных вариантов обнаружило соответст-
венно 37 и 46 замен нуклеотидов, вызывающих замены соответственно 8 и 9 аминокислот-
ных остатков. Белок оболочки Е и мембранный белок 2-х аттенуированных ВЯЭ идентичны,
за исключением одной аминокислотной замены в белке оболочки Е (7).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Вирус, вероятно, является паразитом диких
птиц, особенно ночных цапель. В Японии основным переносчиком его является комар Culex
101
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
tritaeniorhynchus; в других странах переносчиками могут быть другие представители семей-
ства Culicine, в Индии, например, C.vishnui. Зимой резервуаром вируса могут служить на-
ходящиеся в зимней спячке комары и летучие мыши. Обычно инфицируются домашние
свиньи, у них наблюдают вирусемию. В Южном Тайланде инфицированы до 70% свиней;
при этом основным вектором передачи вируса являются москиты, однако степень распро-
странения ЯЭ среди людей низка (6). В умеренных зонах ВЯЭ переживает зиму, но инфи-
цирования зимой практически не наблюдается (33). У цыплят и перелетных птиц возможно
круглогодичное носительство АТ (5). Резервирование ВЯЭ возможно и у холоднокровных
животных (10).
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях заболевают
лошади, свиньи и человек. Дикие утки основные носители вируса, который переносится на
домашних животных в течение и после сезона дождей; 90% ворон, голубей и королевских
рыболовов содержали АТ к одному из 3-х вирусов (ВЯЭ, вирусу лихорадки Западного Нила
или вирусу Денге) (25). К вирусу чувствительны также КРС, овцы, козы (8), собаки, утки,
цыплята, перелетные птицы и рептилии (14). Экспериментально заражаются полевые мыши
и некоторые виды ящериц.
ДИАГНОСТИКА
В Японии ВЯЭ выделяют в культуре клеток C6/36Aedes alfopictus (15). Возможно выде-
ление вируса при внутримозговом заражении 1-5-дн мышат. Клинические признаки пора-
жения ЦНС или смерть наступает на 4-14-й день после заражения.
Установлена возможность обнаружения ВЯЭ с помощью обратной транскрипции и
ПЦР. Чувствительность данного метода почти в 1000 раз превосходит чувствительность ме-
тодов титрования (11,12). Для диагностики ЯЭ у свиней рекомендован твердофазный вари-
ант ИФА (7, 25). Диагноз также устанавливают на основании выявления АГ ВЯЭ в клетках
мозга, плаценты и мумифицированных плодов. Для этого используются авидин-биотин-
меченные АТ (при исследовании гистосрезов препаратов, фиксированных в формалине) или
флюоресцирующие АТ (22,16).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Поскольку свиньи являются естественными носителями ВЯЭ, их иммунизируют инак-
тивированной вакциной с адъювантом Фрейнда для предупреждения развития виремии.
Другой метод вакцинации заключается в применении авирулентного вируса Западного Нила
с последующей прививкой инактивированным ВЯЭ. В медицинской практике применяют
вакцину из аттенуированного шт. т-рк/Л. Для специфической профилактики ЯЭ лошадям
вводят живую вакцину из шт. G53, G53g, G53 и 79. Наиболее эффективным оказался шт. 79.
К 14-му дню титр КСА у вакцинированных лошадей достигает максимума и затем в течение
4 нед снижается. ВНА появляются через месяц после иммунизации (1,1а, 2, 3).
Для предупреждений мёртворождений у свиней предложена живая вакцина (из аттенуи-
рованного шт. S). У этого штамма снижается активность репродукции в организме комаров
Culex titaeniorhynchus summorosis. В Японии в результате ежегодно проводимой вакцина-
ции инактивированной вакциной заболеваемость животных ЯЭ не регистрируют с 1967 г.
Другой вакцинный штамм ВЯЭ (кроме шт. Nakayama original) отличался от вирулент-
ного 15-ю нуклеотидными заменами. В белках наружной оболочки обнаружено 5 отличий в
аминокислотной последовательности (4). В E.coli была встроена кДНК ВЯЭ, кодирующая
облолочечные гликопротеины Е и неструктурный белок NS-1. Экспрессированный белок в
смеси с адъювантом создавал у мышей устойчивость к заражению вирулентным вирусом
(29). В опытах с ВЭЛ было установлено, что популяция вируса, размноженного в клетках
ВНК содержит 2 группы клонов: медленно проникающие в клетки и вирулентные, быстро
проникающие в клетки и авирулентные. Используя данный принцип был получен аттенуи-
рованный шт. А-14-2 для живой вакцины Против ЯЭ. Предпринимаются попытки создания
102
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
генноинженерной вакцины. Сообщалось, что монАТ к эпитопам гликопротеина Е оболочки
ВЯЭ защищают мышей от экспериментального заражения (20).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Варович М.Ф. и др. Вопросы вирусол., 1991, 1 :21. 1а.Сергеев В.А. Вирусные вакци-
ны., Киев, Урожай, 1993. 2Сюрин В.Н. и др. Частная вет. вир. М., Колос, 1979. З.Сюрии
В.Н. и др. Вет. вирусология. М., Агропромиздат, 1991. 4.Barrett A.D. et.al. Vaccines'91 Hold
Spring Harbor N.Y. 1991 :259. 5.Bhattacharya S. et.al. Trop Geogr. Med., 1986, 38(1) :46.
6.Burke D.S. etal. South Assian J Trop Med Public Helth,1985, 16(2) : 199. 7,Burke D.S. etal. J
Med Virol, 1987, 23(2) : 165. 8.Cao J.P. et.al. J Gen Virol ,1995, 76, 11 :2757. 9.Chang H.C.
etal. - J Imm Methods, 1884, 72(2) -.401. lO.Doi R. et.al. - Jpn J Exp Med,1983, 53(2) : 125.
ll.Eldodoh Z.A. et.al. J Med Virol, 1991, 33, 4 : 260. 12.Grubhoffer L. et.al. Sc epid, micro. ,
immunol, 1991, 40, 4-5 :209. 13.Hori H. et.al. Acta Virol, 1986, 30(5) :428. 14.Huang C.H. Adv
Virus Res,1982, 27 :71. 15.1gorashi A. et.al. “Нэттей игаку”, Trop Med, 1987, 23, 4 :177.
16.1wasaki Y. etal. Acta Neuropath., 1986, 70, 1 :79. 17.Jonson R.T. J Infect Dis,1987, 155, 3
:359. 18.Kadamath N. et.al. Trans R Soc Trop Med Hyg., 1987, 81, 5 :829. 19.Kelkar S.D.
Indian J Med Res,1985, 81 :437. 20.Kimura-Kiroda J. etal. J Gen Virol., 1986, 67 :2663.
21.Kokarev V.C. et.al. - Vopr Vir,1986, 31, 5 :632. 22.Kurata T. et.al. Ann N. Y. Acad Sci,
1983, 420 :192. 23.Lancet 1994, 8915 :120. 24.Leury K.R. et.al. Exp Mol Pathol., 1983, 38, 2
:264. 25.Mall M.P. etal. Ind Vet Med. J, 1988, 12, 4 :203. 26.McAda P.C. etal. Virol, 1987,
158, 2 :348. 27.Ochiaia K. et.al. Jap J Veter Res, 1989, 37, 1 :21. 28.Rawat S. etal. Ann Inst
Pasteur Immunol., 1986, 1370, 3 :391. 29.Srivastova A.K. etal. Microbiol and Immunol., 1991,
35 :863. 30.Sumiyoshi H. et.al. Virolody, 1987, 16, 2 :497. 31.Tanaka M. et.al. Trop Med,1991,
33, 1-2 :15. 32,Takegami T. etal. Acta Virol, 1982, 26, 5 :321. 33.Takashima I. et.al. Am J Trop
MedHyg., 1988, 38, 2 .420.
ШОТЛАНДСКИЙ
ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТ ОВЕЦ
Louping-Ill (LI); Ovine Encephalomyelitis; Infectious encephalomyelitis of sheep; Acute
viral encephalitis of sheep (англ.); Trembling-ill; Springkrankheit (нем.)
Шотландский энцефаломиелит (вертячка овец, шотландский клещевой энцефалит) -
острая вирусная болезнь, характеризующаяся поражением ЦНС и явлениями мозжечковой
атаксии. Болезнь известна в Шотландии, в северо-западных районах Англии, во Франции, в
Чехословакии, Румынии, Болгарии, Швеции, Финляндии и в бывшем СССР (Белоруссия).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У овец болезнь проте-
кает остро и хронически. Различают резко выраженные и клинически стёртые формы. Бо-
лезнь протекает в 2 фазы: 1-я продолжается несколько дней и характеризуется высокой тем-
пературой и виремией; 2-я проявляется нарушением координации движения, развитием па-
раличей и заканчивается гибелью. Иногда 2-й фазы не бывает. Болезнь может протекать ла-
тентно. В острых случаях инкубационный период после укуса клещей длится 7-18 дн, а ино-
гда до месяца. Болезнь проявляется повышением температуры тела до 41°С и выше и появ-
лением симптомов, характеризующих поражение ЦНС (апатия, вялость, полусонное состоя-
ние, скрежетание зубами, слюноотделение, клонические судороги, контрактура затылка).
Пульс учащён, аритмичен. У некоторых животных наблюдают атаксию, проявляющуюся
скачкообразными движениями по кругу (вертячка) и прыжками в сторону. Больные живот-
ные подпрыгивают, вскакивают на дыбы, спотыкаются и хромают. У них отмечается силь-
ный зуд в области поясницы, крупа и задних конечностей, что объясняется гиперстезией ко-
103
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
жи. Аппетита нет, больные животные худеют. В дальнейшем развиваются параличи и на-
ступает гибель. Болезнь может продолжаться 2-3 мес. Погибает до 20% животных. Иногда у
переболевших овец наблюдается искривление шеи, спины и параличи. Если признаков по-
ражения ЦНС нет, общее состояние животных постепенно улучшается, но, как правило, ос-
таются хромота, искривление шеи и спины.
Патологические изменения при шотландском энцефаломиелите выражены слабо и мало
характерны. Мозговые оболочки, в области извилин головного мозга и его основания отёч-
ны и инфильтрированы крупными и полиморфноядерными клетками, сосуды мозга напол-
нены кровью. В коре головного мозга находят периваскулярные муфты или очаговую ин-
фильтрацию, дегенерацию нейронов и диффузную инфильтрацию полиморфноядерными
клетками.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Устойчивость. Головной мозг, консервированный в 50%-ном глицерине при темпера-
туре от 0° до 4°С, сохраняет инфекционность до 6 мес. При комнатной температуре он инак-
тивируется в течение недели, при температуре 37°С - за сутки, при нагревании до 60°С - че-
рез 2 мин, при 100° С - моментально. В высушенном материале он сохраняет патогенность
до 3-х мес. Его инактивирует перикись водорода, 2%-ный р-р NaOH, 0,5%-ный р-р форма-
лина, фотодинамия краской метиленблау. Лучше сохраняется в холоде при pH 7,5 - 8,5.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. В сыворотке крови овец-реконвалесцентов появляются ВНА и
КСА. Сроки их появления не уточнены, но обнаруживают их до 8-ми лет. Специфическую
сыворотку можно получить на овцах и лошадях, используя для гипериммунизации культу-
ральный вирус. АТ, передаваемые потомству с молозивом, защищают ягнят и после того,
как материнские АТ в сыворотке крови перестают определяться.
Антигенная вариабельность и родство. АГ-варнанты вируса не описаны. Он имеет
иммунологическое родство с вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита: животные,
переболевшие шотландским энцефалитом, устойчивы к весенне-летнему клещевому энце-
фаломиелиту. Родство между указанными вирусами обнаруживают в PH и РСК. Вирус так-
же имеет тесное АГ- и иммунологическое родство со штаммами вируса клещевого энцефа-
лита, выделенными в Чехословакии, штаммом дальневосточного энцефалита (Софьин) и
возбудителем 2-волнового менингоэнцефалита (шт. Абсетаров). Вирус обладает ГА актив-
ностью. Однако Г А свойства его не изучены.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Вирусемия у зара-
жённых овец длиться 6 дн. В максимальном количестве вирус выделяется на 3-4-й день. По-
сле кратковременного безлихорадочного периода температура вновь повышается, вирусемия
прекращается, и вирус проникает в ЦНС, что сопровождается развитием типичных цереб-
ральных симптомов и мозжечковой атаксией. В материале, взятом от больного или павшего
животного, вирус обнаруживают в головном мозге, реже в паренхиматозных органах.
Эксперементальная инфекция. Воспроизводится на ягнятах, овцах, лошадях, мышах,
макаках-резус, хомяках и полёвках и сопровождается вирусемией, появлением вируса во
внутренних органах и в ЦНС. При размножении вируса в ЦНС у крыс развивается скрытая
инфекция. Кролики и морские свинки резистентны. Свиньи чувствительны к заражению, но
серийные пассажи на них не удаются. При заражении овец в мозг и седалищный нерв, в но-
совую полость и конъюнтиву инкубационный период длиться 2-5 дн, после чего температура
тела повышается до 41 °C и выше, появляются признаки общей слабости, аппетит пропадает
и развиваются возбуждение, локомоторные расстройства, появляется хромота, тЭагкая по-
ходка, парезы. На 10-12-й день животное погибает. С развитием болезни овцы стоят с опу-
щенной головой, скрежещут зубами и происходит обильное слюноотделение. В дальнейшем
периодически возникают клонические судороги в конечностях. После приступа судорог жи-
104
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
вотные поднимаются и быстро крутятся вокруг себя. Такие приступы продолжаются не-
сколько минут. Иногда овцы запрокидывают голову или почти непрерывно покачивают ею
вверх и вниз. В агональном периоде (5-14 дн) появляются взъерошенность шерсти, вялость
или, напротив, повышенная возбудимость, дрожь, тремор, спастические контрактуры голо-
вы и грудных мышц. Далее развиваются клинические и тонические судороги, нарушения
координации движения, иарезы конечностей. Через 1-5 дн наступает смерть. Свежевыде-
ленные полевые штаммь^в первых пассажах на мышах могут не вызывать параличей, кото-
рые появляются при дальнейшем пассировании вируса. Кроме мышей, экспериментально
заражаются сирийские хомяки и обезьяны. Заразить лошадей, собак, кроликов, морских
свинок и белых мышей не удавалось .
Культивирование. Вирус культивируется в КЭ 10-12-дн возраста при заражении на
ХАО. Через 20-24 ч на мембране появляются мелкие очаговые помутнения, а в цитоплазме
клеток мембраны (при окраске по Манну) - цитоплазматические включения. Эмбрионы, за-
ражённые в желточный мешок, погибают на 5-6-й день. У них находят общий отёк, желтуху
и некротические изменения в печени. Вирус размножается в культуре клеток КЭ, почки сви-
ньи и перевиваемых линиях Детройт-6 и HeLa. В культуре последних вирус вызывает ЦПИ.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
' Источники и пути передачи инфекции. Для шотландского энцефаломиелита овец ха-
рактерна природная очаговость и сезонность. Болезнь регистрируют в районах, где встре-
чаются пастбищные кровососущие клещи. Ixodes ricinus является переносчиком вируса на
всех стадиях развития (личинка, нимфа, имаго).
Спектр патогенности в естественных условиях. Кроме овец к шотландскому энцефа-
литу восприимчивы олени, КРС, козы, свиньи. Имеются сообщения о выделении вируса от
шотландских куропаток, полёвок, мышей и зайцев. К шотландскому энцефаломиелиту вос-
приимчив также человек, однако инфекция у него наблюдается редко и протекает легко. К
заражению восприимчив и КРС, если находится в инфицированной местности. Наблюда-
лись случаи заболевания лошадей, выпасавшихся на ферме, где ранее наблюдалась гибель
овец от шотландского энцефалита.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоологических данных (наличие клешей-переносчиков,
характер местности, сезонность), симптомов болезни, результатов серологического и виру-
сологического исследований.
Для выделения вируса интрацеребрально заражают мышей и КЭ. В качестве материала
в начале болезни берут кровь больных животных, а в летальных случаях взвесь головного
мозга. При получении положительных результатов (гибель мышей, поражение ХАО) ставят
PH. Применяют РДП в агаре, РГА и РЗГА. Ретроспективный диагноз ставят на основании
исследования проб парных сывороток в PH на мышах.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У переболевших животных вырабатывается длительный иммунитет (до 11 мес). Он
формируется у слабо переболевших овец. Материнские АТ передаются потомству с молози-
вом или с молоком. У ягнят пассивный иммунитет сохраняется до 3-х мес. Для профилакти-
ки применяют формолвакцину. Вируссодержащую суспензию (10%-ную)'мозга овец или
мышей инактивируют 0,25%-ным формалином в течение 14 дн при 4°С. (1, 2)
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусол. М., Колос 1979.2.Сюрин и др. Вет. вирусол., М.
Агропромиздат 1991.
105
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
МЕНИНГОЭНЦЕФАЛИТ ИНДЕЕК
Israel Tyrkey Meningoencephalitis
Менингоэнцефалит индеек (вирусный паралич индеек) - вирусная болезнь, характери-
зующая прогрессирующими параличами.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
В 1962 г. в Израиле выделен вирус, ежегодно вызывающий вспышки прогрессирующего
паралича и менингоэнцефалита индеек. Вирус вызывает гибель до 50% индеек. Обычно за-
болевают индюшата старше 10-нед возраста. Он относится к роду флавивирусов.
Морфология и химический состав. Характерны для флавивирусов. Размер вирионов
50-100 нм.
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру и дезоксихолату натрия, устойчив к по-
вторному замораживанию и оттаиванию. АГ структура не изучена.
Антигенная активность. Вирус индуцирует образование ВНА.
Антигенная вариабельность и родство не изучены.
Гемагглютинирующие свойства. АГ, полученный из данного вируса, агглютинирует
эритроциты животных, в том числе птиц многих видов при pH 6,2-6,4. Более чётко ГА-
активность проявляется по отношению к гусиным эритроцитам.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на индейках и новорождённых бе-
лых мышатах и хомяках. Из лабораторных животных к вирусу восприимчивы только белые
мыши и японские перепёлки.
Вирусемия, вирусоносительство, вирусовыделение. Вирусемию обнаруживают через
24 ч после экспериментального заражения индеек в мозг или внутримышечно. В организме
заражённых индеек Вирус персистирует в течение 5-8 дн и может быть выделен даже на 14-
й день после заражения. В мозге и селезёнке он находится в более высоком титре, чем в
крови и печени. Поэтому его выделяют из головного мозга и селезёнки больных индеек и
на КЭ при заражении эмбрионов в желточный мешок. Эмбрионы погибают на 3-7-й день
после заражения. Вирусоносительство не установлено. Вопрос о латентной форме болезни
индеек менингоэнцефалитом дискутируется.
Культивирование. Вирус размножается в КЭ и первичной культуре фибробластов, где
накапливается в титре до 4-105 BOEso/m® вызывая ЦПИ и появление бляшек. В культуре по-
чечных клеток перепёлки и куриных фибробластах вирус размножается с появлением ЦПИ.
В других клеточных системах (первичные культуры клеток почки мышиного эмбриона, пе-
ревиваемые линии клеток ВНК-21, RR-B) вирус размножается, не вызывая ЦПИ. Размножа-
ясь в КЭ, он снижает патогенность в отношении индеек.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Инфекция контактно не распространяется. Спектр патогенности в естественных услови-
ях в деталях не изучен. Вирус считают монопатогенным в отношении одного вида - индеек.
Эпизоотологические особенности не изучены.
ДИАГНОСТИКА
Основан на выделении (на КЭ) и идентификации вируса в PH, РЗГА и ИФ. PH исполь-
зуют как метод ретроспективной диагностики и выявления поствакцинальных АТ. Её ставят
в культуре ФЭК. РТГА ставят по методу Кларка, Казалса и Нира. АГ служит экстрагиро-
ванная сахарозо-ацетоном вируссодержащая суспензия головного мозга заражённых мышат.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Индейки-реконвалисценты резистентны к реинфекции. Предложена живая вакцина из
штамма, аттенуированного на КЭ. В 1974-1975 гг. прошла широкую проверку живая вакци-
на, изготовляемая из вируса, аттенуированного пассажами на перепелиных эмбрионах и
культуре клеток почек перепёлок.
106
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
ЛИХОРАДКА ДОЛИНЫ РИФТ
Rift Valley fever (англ.); Rifttalfieber (нем.);
Fierve de la Vallee du Rift (франц.)
Лихорадка долины Рифт (ЛДР) - энзоотический гепатит рогатого скота - зоонозная, пре-
имущественно остро протекающая болезнь овец, коз и КРС, передающаяся членистоногими
и характеризующаяся лихорадкой, некротическим гепатитом, гастроэнтеритом, геморраги-
ческим диатезом и высокой смертностью телят и ягнят. У взрослых животных болезнь про-
является абортами.
Распространение. ЛДР зарегистрирована в Кении (в долине Рифт), Уганде, Южно-
Африканской Республике, Родезии, Судане, Анголе, Мозамбике, Нигерии, Экваториальной
Гвинее. В странах Африканского континента периодически протекает в виде эпизоотий с
поражением людей. Например, в 1977 г. во время вспышки заболевания в Египте заболело
200 000 людей, из которых 600 погибло (11). Особенно выделялась массовостью поражения
эпизоотия ЮАР, вызвавшая гибель более 200000 животных, а также заболевание более
30000 человек, связанных с животноводством.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод продолжается 24-72 ч, болезнь протекает различно в зависимости от возраста и вида
животных. Новорожденные и молодые животные более чувствительны и тяжелее переносят
болезнь, чем взрослые. Летальность среди ягнят и козлят достигает 95%, среди овец и коз -
20-30%. У новорождённых ягнят и козлят болезнь протекает сверхостро. При этом видимые
слизистые оболочки бледные, наблюдается понос, в фекалиях видна примесь крови. Смерть
наступает через 24-48 ч после появления первых признаков болезни. У некоторых животных
за 12-20 ч перед гибелью появляется рвота. Молодые овцематки абортируют, 20-30% поги-
бает. У старых овец, коз и более взрослых телят болезнь чаще протекает подостро. С появ-
лением лихорадки животные слабеют, теряют аппетит, на слизистой оболочке носа появля-
ются кровянистые выделения. После абортов нередко развиваются осложнения в виде сеп-
тических метритов и параметритов. Летальность не повышает 20%. У КРС болезнь чаще
протекает бессимптомно. Иногда наблюдается кровавый понос, каловые массы с резким за-
пахом. Характерны также обильное слюнотечение и дисгалактия.
Патологоанатомические изменения у ягнят и коз постоянны и характеризуются увеличе-
нием и некрозом печени. В начале болезни под печёночной капсулой обнаруживают множе-
ственные кровоизлияния, а на поверхности - единичные сероватые некротические участки
около 1 мм в диаметре, размер и количество которых в дальнейшем быстро увеличивается.
По мере развития болезни некоторые участки сливаются и печень приобретает сероватый
цвет. При остром течении болезни можно наблюдать геморрагические повреждения слизи-
стых оболочек ЖКТ, а также множественные кровоизлияния на селезёнке, почках, лимфо-
узлах, семенниках и сердечной мышце. У овец и КРС патологоанатомические изменения
обычно малозаметны или их нет. В клетках печени обнаруживают внутриядерные включе-
ния ацидофильного характера, похожие на тельца Каунсельмана, наблюдаемые при жёлтой
лихорадке (2,3).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусную природу болезни доказали в 1931 г. Доубней и Гудзон. Они выделили от
больных ягнят возбудитель, установили его фильтруемость и воспроизвели болезнь.
Морфология и химический состав. Эго мелкий РНК-содержащий вирус. Размер ви-
рионов 60-75 нм (Рис. 14). Установлено различие в размерах вирионов, отличающихся по
тропизму. Вирус чувствителен к эфиру и другим жирорастворителям, к фотодинамическому
действию метиленовой сини и формальдегиду, инактивируется при 4-5°С. Цитратная вирус-
содержащая кровь больных животных сохраняет вирулентность не менее 6 мес, при комнат-
107
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
ной температуре не более 1 нед. Кислая и щелочная среда действуют на вирус губительно,
оптимальный pH является 6,9-7,3. Дезинфицирующие вещества (0,5%-ный р-р едкого натра,
5%-ный р-р фенола и хлорсодержащие препараты) убивают вирус.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. В крови переболевших животных появляются анти-ГА, ВНА
и КСА. ВНА появляются на 4-й день после начала заболевания и сохраняются пожизненно;
КСА обнаруживаются к 14-му дню после заражения и сохраняются до 6 мес и более. Наи-
более высокие титры АТ к вирусу ЛДР получены в реакции непрямой ИФ. Изоляты вируса,
выделенные во время эпидемий в Египте в 1977 г. и в Мавритании в 1987 г., отличались
между собой в АГ-отношении (6). Впервые ЛДР обнаружена на Мадагаскаре в 1979 г. без
какого-либо воздействия на людей и животных. Однако в 1990 и 1991 гг. описано несколько
вспышек с массовыми абортами у КРС. Во время эпизоотий в районах вспышек обнаружено
широкое распространение IgM к вирусу ЛДР (8).
Антигенная вариабельность и родство. Антигенных вариантов у вируса ЛДР не обна-
ружено. Описана интерференция между пантропным штаммом ЛДР и нейротропным виру-
сом жёлтой лихорадки, а также вирусом чумы КРС. Штаммы возбудителя различаются по
вирулентности и тропизму, последний признак зависит от метода пассирования.
Гемагглютинирующие свойства. Вирус ЛДР агглютинирует эритроциты цыплят од-
нодневного возраста, мышей, морских свинок, а также эритроциты крови человека группы
А. Оптимальные условия гемагглютинации эритроцитов однодневных цыплят - pH 6,5 и
25°С. Ингибитор гемагглютинации, содержащийся в нормальной сыворотке крови мышей,
исчезает при хранении на холоде. Естественный ГА более эффективен, чем экстрагирован-
ный ацетоном и эфиром.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на ягнятах, козлятах, телятах,
которые заболевают при введении вируссодержащего материала. При подкожном зараже-
нии у овец наблюдалась лихорадка в течение 6 дн, 4 дн вирус обнаруживался в крови в тит-
рах 6-7 1g ТЦИДзо/мл, на 9-10-й день вирус из крови исчезал. В нозальном секрете его обна-
руживали с 3-го по 12-й день, а в сперме животных - с 8-го по 22-й день после заражения.
В сыворотке крови обнаружены ВНА (12). Способ заражения оказывает существенное влия-
ние на течение инфекции. Особенно легко заражаются новорождённые животные. Заражён-
ные ягнята гибнут через 24-36 ч после появления первых признаков болезни. Из лаборатор-
ных животных к вирусу чувствительны белые мыши, хорьки, белые крысы, хомяки. Кроли-
ки и морские свинки невосприимчивы.
При экспериментальном заражении взрослого КРС у большинства животных развивает-
ся лихорадка, виремия и появляются ВНА в высоком титре.
Культивирование. Наиболее легко вирус культивируется в организме 1-3-дн мышат.
При церебральном, пиретонеальном и внутривенном заражении вирус накапливается в вы-
соких титрах (1О6-1О10 ЛД50/м;,). Установлена связь между методом серийного пассирования
его и концентрацией в той или иной ткани. Культивирование вируса на взрослых мышах
менее эффективно. При серийном пассировании вируса в мозге мышей происходит его ат-
тенуация. Вирус размножается на КЭ 2-3-й дн возраста при заражении их в желточный ме-
шок. В максимальном количестве вирус накапливается на 2-3 день после заражения. В 7-дн
КЭ он практически не размножается, зато хорошо репродуцируется в первичных культурах
клеток: фибробластах КЭ, почек ягнят, коз, обезьян, хомячков, тестикулярной ткани ягнят, а
также в клетках саркомы мышей и крыс, в перевиваемых культурах клеток Чанга, печени
человека, ВНК-21 и HeLa. Для накопления вируса в культуре клеток оптимальной дозой яв-
ляется 2,5 ЛДдамл на клетку. Размножение вируса сопровождается появлением ЦПИ.
Титрование вируса, предварительно адаптированного к культуре клеток, по ЦПД, бляш-
кообразованию и церебральной патогенности оказалось неравноценным. Наиболее чувстви-
108
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
телен интрацеребральный метод заражения 1-3-дн мышат. Титр вируса в этом случае был
на 1,5 -2 1g выше, чем в культуре клеток.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Болезнь носит сезонный характер. В дождли-
вый период количество больных животных увеличивается. От больного животного к здоро-
вому, а также от человека к человеку болезнь не передаётся. Во время эпизоотий наблюдают
случаи заболевания людей, особенно пастухов и ветеринарных работников. ЛДР могут за-
болеть буйволы и верблюды. Имеются сообщения о заболевании антилоп.
В крови в наиболее высоких титрах вирус содержится в период максимального подъёма
температуры ( титр вируса в крови овец достигает 10 7’6, а ягнят Ю10 ЛД^о/мл при титровании
на мышах ). В более низких титрах его обнаруживают на протяжении всего периода вире-
мии (от 1-2 до 6-8 дн), длительность н сроки появления которой зависят от пути проникно-
вания вируса. Последний в высоких титрах также находят в печени и селезёнке. У больного
КРС также отмечают высокую виремию (до 107’5-108’° МЛДзо/мл). В молоке больных живот-
ных вирус находится в высокой концентрации.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях источни-
кам инфекции служат больные дикие и домашние животные, обезьяны и человек, а также
членистоногие. Доказано, что 6 видов комаров Eretmapodites и 3 вида Aedes служат пере-
носчиками и основными хранителями возбудителя ЛДР в природе. В распространении виру-
са могут участвовать перелётные птицы и членистоногие, которые, очевидно, служат и ре-
зервуаром его в межэпизоотический период. Возможным резервуаром вируса в природе яв-
ляются также крысы Arvicannthis abyssinicus, у которых найдены АТ. Природный очаг за-
болевания - Восточная Африка.
Вирус патогенен для овец, коз, КРС, человека, обезьян, мышей, крыс, хомяков и хорь-
ков. Лошади, свиньи и птицы (куры, утки, голуби) невосприимчивы. Болезнь поражает жи-
вотных независимо от возраста, но погибает чаще молодняк. Более лёгкое переболевание
взрослых животных можно объяснить частичным иммунитетом, который возникает у них
вследствие возможного контакта с возбудителем болезни в молодом возрасте.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотических данных, клинических признаков болезни,
патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Для ЛДР ха-
рактерны: большая смертность ягнят, массовые аборты у овец н коров, некротические изме-
нения в печени, геморрагический гастроэнтерит у погибших ягнят. Из лабораторных мето-
дов диагностики применяют: выделение вируса (взятие материала и заражение мышей, КЭ
и культур клеток); биопробу на ягнятах и козлятах с нативным материалом от больного жи-
вотного; для обнаружения АТ к вирусу ЛДР в сыворотках КРС и овец используется ELISA;
по специфичности он оказался равным PH бляшкообразования, а по чувствительности PH
превосходит ELISA. Как правило, для выделения вируса используют белых мышей, у кото-
рых вирус вызывает летальную инфекцию. К вирусу высокочувствительны хомячки. АГ об-
наруживают в РСК, РДП, ИФ (в мазках-отпечатках) и РВИЭ. Идентификацию вируса про-
водят в PH, РСК, РГА и её задержки. Для идентификации вируса, выделенного на мышах,
наиболее простыми и надежными тестами являются РСК и РДП.
При постановке окончательного диагноза необходимо исключить некоторые сходные
болезни вирусной этиологии - катаральную лихорадку (синий язык) овец, болезнь Найроби,
а также болезнь Вессельборна.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Одной из основных проблем борьбы с ЛДР является быстрое выявление инфицирован-
ных животных. Методы серологической диагностики не позволяют достигнуть этой цели,
вследствие того, что на ранних стадиях инфекции животные являются серонегативными.
109
Глава IV. Family Flaviviiidae Флавивирусные инфекции
Однако АГ вируса ЛДР удается обнаруживать в сыворотке крови всех экспериментально за-
раженных животных (9).
Переболевшие животные вторично не заболевают. В сыворотке крови реконвалесцентов
(овец, КРС, обезьян и человека) появляются ВНА и КСА. Такая сыворотка обладает выра-
женным профилактическим действием. Ягнята, родившиеся от переболевшей овцы, в под-
сосном периоде иммунны. Попытка иммунизировать овец и КРС против ЛДР впервые была
предпринята более 50 лет назад, когда вирулентный штамм вируса был аттенуирован внут-
римозговыми пассажами на мышах. Нейропатогенный штамм вируса (92-й пассаж) был
авирулентным для мышей, обезьян и овец при подкожном введении, но при внутримозговом
введении он вызывал гибель овец и обезьян. В дальнейшем этот штамм был дополнительно
пассирован 50 раз в КЭ и 10 раз - на мышах. В дальнейшем вакцину готовили из вируса
102-го пассажа на мышах, размноженного в культуре клеток ВНК-21. Вакцина экономична
и вызывает длительный иммунитет у овец и КРС после однократного введения. Частичный
иммунитет образуется через 6-7 дн. Потомство вакцинированных животных сохраняет ус-
тойчивость к заражению вирусом ЛДР в течение 5 мес. У ягнят, привитых в возрасте до 6
нед, иногда развивается энцефалит (1). В редких случаях вакцинация вызывает аборты у ов-
цематок или аномальное развитие плодов.
Аттенуации вирулентных штаммов вируса ЛДР так же достигали серийным пассирова-
нием в культуре клеток MRC-5 в присутствии 5-фторурацила. После восьми пассажей шт.
ZH-548 утратил патогенность для мышей, но защищал их от последующего заражения виру-
лентным штаммом вируса (5). Аналогичный мутант MV-412 получен после 12 пассажей
указанной в культуре в присутствии 5-фторурацила. Он оказался апатогенным для овец, не
вызывал аборты у суягных овцематок и сохранял выраженную АГ-ность и иммуногенность.
Ягнята, родившиеся от вакцинированных матерей, приобретали пассивный иммунитет (7). В
связи с тем, что существует теоретическая опасность риверсии аттенуированных штаммов
вируса, живую вакцину рекомендуют применять в эпизоотических регионах. До настоящего
времени отсутствуют доказательства восстановления вирулентности у вакцинных штаммов
в практических условиях. Следует иметь в виду, что живая вакцина способна вызывать ви-
русемию у вакцинированных овец, а это может привести к инфицированию кровососущих
членистоногих, нападающих на овец, и к передаче болезни домашним животным и челове-
ку. Однако в исследованиях, проведенных до настоящего времени, у овец и КРС наблюда-
лись низкие уровни вирусемии и в полевых условиях, инфицирования комаров не отмечено.
Аттенуация вируса ЛДР удается путем выращивания его в культуре клеток в присутст-
вии мутагена. Таким образом получен шт. MVP-12. Вирус выращивали в присутствии вы-
сокой концентрации мутагена (200 мкг/мл 5-фторурацила), а полученное потомство клони-
ровали методом бляшек для отбора аттенуированного фенотипа. После 12 пассажей получен
авирулентный для мышей и ягнят иммуногенный штамм вируса.
В ЮАР и США разработана инактивированная вакцина. Для этого пассированные ви-
рулентные штаммы вируса ЛДР выращивали в культуре клеток ВНК-21 и др., инактивиро-
вали формалином и добавляли ГОА в качестве адъюванта. Вакцина оказалась иммуноген-
ным препаратом только при двукратной вакцинации. Разработанная в Израиле инактивиро-
ванная вакцина с новым адъювантом имела выраженные АГ-свойства. Титр АТ в РТГА у
овец, привитых вакциной с адъювантом, составлял 1:20480, а у привитых без адъюванта -
1:40-1:320 (4). Потомство от иммунизированных матерей следует иммунизировать с 3-мес
возраста (10).
Для пассивной иммунизации новоровдённых ягнят используют гипериммунную сыво-
ротку КРС. Для активной профилактики ЛДР применяют живые и инактивированные вак-
цины. Иммуногенность препарата находится в прямой зависимости от исходного титра ви-
110
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
руса в суспензии. Живую вакцину готовят из нейротропного штамма вируса, адаптирован-
ного на мышатах. Препарат безвреден для КРС и сообщает иммунитет до года.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
l.Cepreee О.С. Киев, Колос, 1993. 2.Сюрин В.Н. и др. Частная вет. вирус., М., Колос,
1979. З.Сюрин В.Н. и др. Лаб. диагностика вир. бол. жив., 1991. 4.Выводы и рекоменда-
ции совещания ВОЗ/ФАО Бюлл. ВОЗ, 1983, 2 :16. 5.Cunliffe Н. Appl Microbiol, 1973, 26
:747. 6.Dobos Р. et.al. J Virol 1979, 32 : 93. 7.Morrill J.C. etal. Amer J Vet Res, 1987, 48
:1042. 8.Morvan J. et. al. Rev clev et med vet pays trop,1992, 45, 2 :121. 9.Peters C.J. et.al.
Res Virol, 1989, 140, 1 :43. lO.RedaJ.M. et.al. Assint Veter Med J, 1987, 18 :96. ll.Robbins
A.K. et.al. J Virol ,1987, 61 :2691. 12.Wassel M.S. et.al. Assiat Vet Med J ,1989, 21, 42 :28.
ЧУМА СВИНЕЙ
Hog Holera, Classikal swine Fever, Svine Fiver (англ.);
Schweinepest (нем.); Pestes Porcine (франц.); Peste Porcina (исп.)
Чума свиней (классическая чума свиней, КЧС) - высоконтагиозная инфекционная бо-
лезнь, характеризующаяся лихорадкой, поражением кровеносной и кроветворной систем,
крупозным воспалением легких и крупозно-дифтерическим воспалением толстого кишечни-
ка. Первые описания КЧС, согласно Hanson (47), относятся к 1810 г. в штате Теннеси
(США). Позже в 1830 г вспышка зарегистрирована в штате Охио. Во Франции подобное за-
болевание отмечалось в 1822 г., в Германии - в 1833 г., но другие сообщения подтверждают,
что эта болезнь впервые была открыта в Англии в 1862 г. и, соответственно, распространи-
лась на Европейский континент. В Южной Америке и Южной Африке заболевание появи-
лось в 1899 и 1890 гг. соответственно. В настоящее время встречается повсеместно, за ис-
ключением США, Канады, Австралии, Исландии, Ирландии, Новой Зеландии, Норвегии,
Швеции. В результате плановых противоэпизоотических мероприятий и, в частности, широ-
кого применения живой вакцины, масштабы её распространения резко сократились. Наблю-
даются ограниченные энзоотические вспышки, наносящие, однако, значительный экономи-
ческий ущерб (9а, 49а, 73а, 74а).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод в зависимости от вирулентности вируса и чувствительности животных длится 3-9 дн,
реже - 12, иногда - до 20 дн (20, 21, 22, 23). КЧС может протекать сверхостро, остро, подо-
стро и хронически. Некоторые исследователи выделяют особую нервную форму, когда до-
минирующий симптом болезни - поражение ЦНС. Сверхострое течение болезни наблюда-
ется очень редко и у молодых животных. Оно характеризуется быстрым течением, высокой
температурой (41-42°С), угнетенным состоянием, апатией, полным отсутствием аппетита и
рвотой, учащенным сердцебиением и дыханием, ярко-красными пятнами на коже. Живот-
ные погибают через 1-2 дня. Острое течение чаще регистрируется в начале эпизоотии.
Температура тела повышается до 40,5-41°С, животные неохотно передвигаются, больше
лежат. Наблюдают угнетение, слабость, отказ от корма. Развивается гнойный конъюнкти-
вит, появляется рвота, запор, а затем понос (фекалии иногда с примесью крови). Мочеис-
пускание затруднено. У некоторых животных моча темно-коричневого цвета. Супоросные
свиньи абортируют (Рис.31). Нередко возникает слизисто-гнойный ринит, а у отдельных
животных - носовое кровотечение. На коже внутренних поверхностей бедер, живота, шеи и
у основания ушных раковин появляются пустулы, заполненные желтоватым экссудатом, а
несколько позже - точечные кровоизлияния, которые в дальнейшем сливаются и образуют
темно-багровые пятна, не исчезающие при надавливании. Прогрессирующая слабость со-
провождается учащенным и затрудненным дыханием, сердечной недостаточностью, в ре-
зультате кожа пятачка, ушных раковин, живота и конечностей приобретает синюшную ок-
111
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
раску. Развивается выраженная лейкопения и резкий сдвиг нейтрофильного ядра до миело-
цитов. Перед гибелью температура снижается до 35-36°С. Обычно животные погибают на 7-
10-й день.
Нервная форма относится к острому течению болезни и характеризуется судорожным
подергиванием отдельных групп мышц, манежными движениями, параличами задних ко-
нечностаей, нервным возбуждением и апатией, сонливостью. Температура - в пределах
нормы или повышена до 40,5-41 °C. Смерть наступает довольно быстро - через 24-48 ч.
Подострое течение наблюдается нередко после острого течения, болезнь затягивается
до 3 нед. Температура тела при подостром течении несколько ниже, чем при остром. Выздо-
ровление отмечается редко. При затяжном течении чумы наблюдается наслоение вторичных
бактериальных инфекций: сальмонеллеза и пастереллеза. В случае осложнения чумы саль-
монеллезом местом локализации вторичных поражений является ЖКТ (кишечная форма
чумы). Запор, характерный для острого течения чумы, сменяется изнурительным поносом со
зловонным запахом и примесью слизи, а иногда крови. Свиньи прогрессивно худеют и бо-
лезнь обычно заканчивается гибелью, реже приобретает хроническое течение.
При осложненении чумы пастереллезом поражения локализуются в органах дыхания
(легочная форма). У животных наблюдают затрудненное дыхание, кашель, иногда удушье,
признаки бронхопневмонии, слизисто-гнойные истечения из носа; температура тела выше
40°С. Болезнь чаще всего кончается гибелью животного, нередко наблюдают осложнение
чумы сальмонеллезом и пастереллезом одновременно (смешанная форма). И в том и другом
случае животные гибнут.
Хроническое течение характеризуется продолжительным течением болезни (несколько
недель и даже месяцев), тяжелым крупозно-дифтероидным поражением ЖКТ, гнойно-
фибринозным воспалением легких и плевритом. У больных животных наблюдают пониже-
ние илн потерю аппетита, конъюнктивит, понос, иногда сменяющийся запором, анемию и
прогрессирующее исхудание; свиньи превращаются в заморышей. Голова и хвост у них
опущены книзу, спина изогнута, заостренный зад отвисает, задние конечности подогнуты
под живот. Животные большей частью лежат, зарывшись в подстилку. Температура тела
повышена, но нередко повышение темпера туры отсутствует. Часто отмечаются некрозы
кончиков ушей и хвоста. При хроническом течении появляются благоприятные условия для
развития вторичных инфекций: сальмонеллеза и пастереллеза. Однако часто стало появ-
ляться субклиническое н хроническое течение, характеризующеся нарушением функции
воспроизводства (бесплодие, аборты, мертворождаемость). Одной из причин, способствую-
щих появлению этих форм, является размножение вирулентных штаммов в недостаточно
иммунном организме, в частности, у привитых инактивированными вакцинами. Мертворо-
ждаемость, отставание в росте свидетельствуют о заражении плодов через плаценту. Конге-
нитальная передача вируса может сопровождаться персистентной виремией в течение всей
жизни животных или очень длительного периода. В первые недели жизни у поросят, родив-
шихся с персистентной виремией, не находят никаких видимых признаков болезни, но такие
животные передают вирус другим. В одном помете могут быть поросята инфицированные и
неинфицированные. Клинически невозможно отличить поросят, имеющих вирус в крови, от
здоровых животных. Только через некоторое время наблюдали хроническое течение болез-
ни, отставание в росте и гибель в возрасте 3-8 нед. У поросят описан врожденный тремор
мышц, связанный с хроническим течением КЧС (Табл. ГУЛ.).
Патологоанатомические изменения. Патологоанатомические изменения (1) при КЧС
очень вариабельны и зависят от течения болезни н наличия осложнений секундарной ин-
фекцией (сальмонеллез, пастереллез и др.) Наиболее типичные изменения встречаются у
подсвинков н взрослых животных. Острая (септическая) форма чумы протекает обычно без
осложнения вторичной инфекцией. На краях век и в углах глаз образуются коричневые ко-
рочки. Конъюнктива, слизистые оболочки носа и рта, цианотичны. Кожа ушей, шеи, живо-
112
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
та, внутренней стороны бедер пятнисто или диффузно окрашены в багрово-красный цвет,
видны точечно-пятнистые кровоизлияния. Обращает внимание выраженные явления гемор-
рагического диатеза в различных органах. Наиболее характерные изменения в лимфоузлах,
селезенке и почках. Лимфоузлы, преимущественно головы и шеи, набухшие, сочны, красно-
го цвета снаружи и мраморного вида на разрезе. Селезенка обычных размеров или несколь-
ко уменьшена, часто (в 40-50% случаев) с инфарктами по краю органа. Почки обычно блед-
ные, с многочисленными точечными кровоизлияниями в корковом слое. Геморрагии встре-
чаются также в слизистой оболочке лоханки, мочеточников и мочевого пузыря. Надпо-
Таблица IV. 1. Общие признаки острой, хронической и
латентной чумы свиней (Van Oirshot J.T. , 1994)____________________________
Показатели Острая Хроническая Латентная
Вир у лента ость вируса Высокая Умеренная Низкая
Время за- ражения Постнатальное Постнатальное До рождения
Течение Короткий инкубацион- ный период, тяжелая де- прессия, высокая лихо- радка, анорексия, конъ- юнктивит, запор, диарея, конвульсии, нарушение координации, геморра- гии на коже Короткий инкубационный пе риод, три фазы заболевания: 1.Депрессия, лихорадка, ано рексия; 2.Клиническое улучшение; З.Коиечная фаза обострения заболевания Латентное заболевание, особенно тяже- лая депрессия и анорексия, нормальная или слегка изменяющаяся темпе ратура тела, конъюнктивит, дерматиты, двига- тельные на рушения
Виремия Высокого уровня Непостоянная Высокого уровня
Лейкопени я Развивается быстро Развивается быстро, следует за лейкоцитозом Развивается поздно в течение заболе- вания
Иммунный ответ на КЧС Отсутствует Присутствует Отсутствует
Наступ ле- ние смерти Через 10-20 дн Через 1 -3 мес Через 2-11 мес
Выраженн ость пора- жении Множественные гемор- рагии, особенно в лим- фоузлах и почках, ин- фаркты селезенки Изъязвления толстого кишечника .“бутоны”, инфарк- ты селезенки Лимфоузлы увеличены, ти- мус атро- фирован
Патогис- тология Дегенерация эндотели- аль ных клеток, проли- ферация регику лярных клеток, энцефалит Дегенерация эндотелиальных клеток, тяжелое лимфоцитар- ное истоще ние, гистиоцитар- ная гиперплазия, громеруло нефриты Дегенерация эпителиальных клеток, тяжелое лимфоцитарное истоще ние, гистиоцитарная гиперплазия
чечники набухшие, полнокровны. В сердце и печени иногда регистрируют кровоизлияния. В
желудке и кишечнике острое, катаральное, реже крупозно-геморрагическое воспаление сли-
зистой оболочки с кровоизлияниями, гиперплазия лимфоидных (солитарных) фолликулов и
пейеровых бляшек. Легкие полнокровны, иногда с очагами серозно-катаральной или кру-
позно-геморрагической пневмонии. Головной и спинной мозг и их оболочки отечны, полно-
кровны, местами с точечными кровоизлияниями (72, 77) (Рис. 47, 48, 128-134).
При чуме, осложненной пастереллезом (грудная форма), основные изменения наблюда-
ют в органах грудной полости: крупозно-геморрагическую пневмонию, множественные нек-
розы, серозно-геморрагический или фибринозный плеврит и перикардит, интенсивные кро-
воизлияния на серозных покровах грудной полости, а также на слизистой гортани и трахеи.
Кроме того, встречаются кровоизлияния в коже, в почках и в кишечнике, набухание и изъ-
язвление фолликулов толстого кишечика.
8 Зак № 171
113
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
При чуме, осложненной сальмонеллезом (кишечная форма), болезнь протекает пре-
имущественно хронически и характеризуется язвенно-некротическими процессами в пище-
варительном тракте (глотке, миндалинах, желудке и кишечнике). Наиболее часто поража-
ются слепая и ободочная кишки, где находят дифтерические “бутоны” и язвы, реже диффуз-
ное дифтерическое воспаление. Кроме того, отмечают экзему и некрозы кожи, очаги брон-
хопневмонии, фибринозный плеврит и перикардит, а также характерные для острой чумы
изменения в лимфоидных органах и почках.
Гистологические изменения при КЧС неспецифические. Большая часть процессов, на
которых может базироваться гистологическая диагностика, очень легко распознается на
вскрытии (геморрагический лимфоденит, инфаркты селезенки и др.) Определенную диагно-
стическую ценность представляют лишь изменения кровеносных сосудов, преимущественно
в легких, с которыми связано формирование ряда характерных для чумы патологических
процессов в различных органах (лимфоузлах, селезенке, почках, ЦНС и др.). В лимфоузлах
устанавливают полнокровие сосудов, гомогенизацию, фибриноидное набухание и некроз
стенок сосудов, микронекрозы лимфоцитов, очаговые скопления плазмоцитов, чаще по ходу
сосудов. В селезенке, в зоне инфаркта, отмечают некроз ткани, а вне зоны - кровоизлияния,
очаги кариорексиса лимфоцитов и небольшие группы незрелых клеток лимфоидного ряда. В
почках зернистая дистрофия и некроз канальцевого эпителия, гломерулонефрит и кровоиз-
лияния в виде петехий и экхимозов во всех слоях, а также в слизистую лоханки мочевого
пузыря. В большинстве случаев (70-90%) в ЦНС обнаруживают негнойный лимфоцитарный
энцефаломиелит, характеризующийся наличием периваскулярных лимфоцитарных ин-
фильтратов, очаговой пролиферации клеток микроглии (глиальных узелков) и дистрофии
ганглиозных клеток.
Патогенез. При КЧС патогенез необходимо рассматривать в 2-х аспектах: на клеточном
уровне и на уровне целого организма. Как установлено, тип взаимодействия вируса с клет-
ками - персистентный, проникновение вируса в клетку - рецептор-зависимое. Несмотря на
продуктивную инфекцию и образование инфекционного вируса, возбудитель не оказывает
ЦПД на зараженную клетку и, следовательно, не ясен патогенетический механизм in vitro.
Система мононуклеарных фагоцитов (СМФ) обеспечивает диссиминацию вируса в организ-
ме свиней. Вирусный патогенез на уровне целого организма представляется так: инфекг
(ВКЧС) - ворота инфекции (миндалины и носоглотка) - первичная виремия (16-24 ч после
заражения) - максимальное накопление ВКЧС в органах иммунной системы (лимфоузлы,
селезенка, костный мозг, пейеровы бляшки). На 4-6-е сут - вторичная инфекция. С 4-х сут
после инфицирования - вирусовыделение с секретами и экскретами (1).
Патогенез КЧС можно рассматривать как вирус-индуцированное нарушение фермент-
ных систем у больных животных (30, 72). В организме вирус размножается в лимфоцитах
лимфоузлов, селезенки, костного мозга и эндотелии кровеносных сосудов, вызывая дистро-
фические и некротические изменения. Под влиянием вируса развиваются некротические из-
менения и основного вещества стенок кровеносных сосудов микроциркулярного русла раз-
личных органов в виде мукоидного и фибриноидного набухания и некроза, накопления кис-
лых мукополисахаридов. В результате этого сильно повышается проницаемость стенок со-
судов, что приводит к возникновению кровоизлияний, отеков, некродистрофических и вос-
палительных процессов в различных тканях и органах. Размножаясь в клетках иммунной
системы и вызывая их разрушение, вирус сильно снижает защитные (иммунные) свойства
организма, что способствует активации вторичной инфекции (пастерелл, сальмонелл) и отя-
гощению основного процесса (1).
В патогенезе болезни основными факторами ее развития являются химотрипсин и дру-
гие субстанции нормальной ткани поджелудочной железы. Химотрипсин является одним из
АГ, индуцированных вирусом, поэтому КЧС можно рассматривать как инфекцию, при ко-
торой происходит расстройство ферментных систем организма с повышенной продукцией
114
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
химотрипсина (20). Известно, что макрофаги (МФ) являются не только эффекторной клет-
кой иммунной системы, но и секреторной, обладающей значительным цитолитическим по-
тенциалом (протеазы и свободные радикалы кислорода). Неспецифическая цитотоксичность
МФ селезенки резко возрастает при персистенции вирусов в клетках (30). Ингибиция фаго-
цитарной функции и активация секреторной функции МФ под действием репродукции
ВКЧС является характерным проявлением прямого ЦПД возбудителя как in vitro, так и in
vivo. В то же время ВКЧС не оказывает прямого ЦПД на лимфоциты, так как все попытки
показать in vitro тяжелые нарушения реактивности Т- и В-лимфоцитов имели отрицатель-
ный результат (78). Поэтому поражение клеток (некроз лимфоцитов) при КЧС является ре-
зультатом непрямого действия вируса, и развивается в результате активации цитолитиче-
ского потенциала зараженных клеток-мишеней (МФ) при непосредственным контакте с дру-
гими клетками (лимфоцитами, эпителиальными, эндотелиальными и др.). Кроме того, мак-
роорганизм в отличие от культивируемых клеток имеет систему кровообращения. Следова-
тельно, циркулярные нарушения кровообращения, вызванные непрямым вирусиндуциро-
ванным поражением стенок сосудов и воспалительной реакцией, играют важную роль в па-
тогенезе КЧС, вызывая отек, геморрагии, инфаркты.
Существуют 6 концепций патогенетического механизма при КЧС: 1) КЧС как имму-
нопатологический процесс циркулирования в крови комплексов АТ-АГ и их оседания на по-
верхности сосудов ; 2) КЧС как процесс нарушения коагуляционных механизмов крови ; 3)
КЧС как сверхострый паралимфобластический лейкоз; 4) КЧС как процесс вирусиндуциро-
ванного расстройства ферментных систем организма с гиперпродукцией химотрипсина ; 5)
КЧС как процесс вирусиндуцированного поражения надпочечников с гиперпродукцией глю-
кокортикостероидов из гиперплазированной корковой зоны (78); 6) КЧС как процесс виру-
синдуцированной активации клеток СМФ и(или) нейтрофилов с гиперпродукцией цитоток-
синов-протеаз и свободных радикалов кислорода.
Клетки, зараженные ВКЧС, не несут или несут очень мало вирусного АГ на своей по-
верхности, поэтому инфицированные клетки могут избегать иммунной атаки клеток хозяина
(78, 79). Имеется рад интересных фактов, подтверждающих патогенетическое значение про-
теаз - выраженнее болеют КЧС более упитанные животные, получающие богатый белками
корм (опыты на крысах показали, что у них при таком режиме кормления усиливается обра-
зование протеаз). Установлены резкие возрастные колебания уровня химотрипсина в крови
и соответствующие изменения уровня лимфоцитов. Одним из путей, приводящих к разви-
тию поражений при КЧС, являются нарушения в системе свертывания крови, в частности
развитие тромбоцитопении и изменение коагуляционных параметров. Вследствие макси-
мальной активности коагуляционной системы развивается синдром диссиминированного
внутрисосудистого свертывания крови, приводящий к появлению геморрагий. Одна из рас-
пространенных в настоящее время точек зрения состоит в том, что патологические процессы
н летальный исход определяются разрушением В-лимфоцитов или В-лимфобластов в заро-
дышевых центрах лимфоузлов (10а, 36а, 92а).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусную природу КЧС установили в 1908 г. Швейнитц и Дорсе.
Морфология и химический состав. Вирионы - оболочечные частицы (Рис. 16) диа-
метром 40-60 нм с нуклеокапсидом диаметром около 29 нм (61). В структуре ВКЧС обнару-
жено 3 гликопротеина с мол.м. 44, 33 и 55 кД (69). Белок Е1 (51-56 кД) очевидно представ-
ляет собой гликопротеин оболочки вируса, содержит главные консервативные иммунодоме-
нантные области, отвечающие за индукцию синтеза ВНА и протекгивный иммунитет. Белок
Е1 всегда находится в ассоциации с гликопротеином 31 кД в виде гетеродимера (85). Мо-
дель готового иммунодоминантного сайта ВКЧС выглядит следующим образом: 13 эпито-
8»
115
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
пов формируют 4 АГ домена - А, В, С и Д. ВН-активностью обладали АТ против доменов
А, В и С (97).
Геном вируса - 1-нитевая РНК положительной полярности с размером в 12284 тыс. нук-
леотидов. Единственная рамка считывания, вероятно, соответствует полипротеину с длиной
3898 аминокислотных остатков (12 kb) (58, 62), 4 структурным белкам (3 гликопротеида -
VPI, VP2, VP3 и 1 капсидный белок -СР) и 3-7 неструктурным белкам (р125, р80, gp62,
gp53, gp48, gp25 и gp20) (60, 61). Полагают, что VP1 и VP2 представляют собой оболочеч-
ные белки. В составе генома ВКЧС неструктурные белки располагаются в следующем по-
рядке (от N-конца к С-конпу): gp44/48 - gp33 - gp55 (17, 36, 42). Плавучая плотность, в за-
висимости от градиента материала и клеток, обеспечивающих размножение вируса, состав-
ляет 1,12-1,17 г/см3. Коэффициент седиментации составляет 140-180S (49). На основании
строения генома, состава белков и стратегии репродукции Collet M.S.et.al. (86) считают не-
обоснованным относить пествирусы к семейству Togaviridae и предложили считать их от-
дельным родом семейства Flaviviridae. Геномная РНК этого вируса может быть использова-
на в качестве исходного материала для получения кДНК и ее клонирования (69).
Разработана методика получения очищенного ВКЧС (11). В настоящее время дана пол-
ная характеристика его генома, определен порядок расположения генов структурных белков:
5'- р23 - р14 - gp44 - 48 - gp25 - 31-gp53 - 55 - 3'. Общая гомология между вирусами по нук-
леотидной последовательности составляет 60%, по аминокислотной - 85%. Однако уровень
перекрестной нейтрализации их довольно низкий. Более тонкие АГ-различия и сходства, а
также детерминанты патогенности и нейтрализации, определены с помощью АТ (94).
Устойчивость. ВКЧС считается сравнительно малоустойчивым к высоким температу-
рам. Сыворотка крови больных КЧС при 37°С содержит активный вирус в течение 11 дн.
Полная его инактивация при такой температуре наступает через 18-20 сут. При 56°С вирус
инактивируется через 60 мин, при кипячении - моментально. В свинарниках (полы, стены)
не теряет вирулентности в течение года; низкие температуры его консервируют. Вирус, со-
держащийся в сыворотке крови больных свиней, хранившейся при температуре 2-4°С, не
теряет активности 4-6 мес. В свиных тушах остается вирулентным после 2-6-мес хранения в
холодильнике при температуре -20-25°С. Хорошо сохраняется в лиофилизированном со-
стоянии при pH между 5 и 10. Быстро инактивируется под действием эфира, хлороформа и
дезоксихолата, чувствителен к трипсину и липазам, MgCl2 не оказывает на него стабилизи-
рующего действия. Лучшими дезинфицирующими средствами являются 2%-ный р-р NaOH,
хлорная известь 1:20 и 3-6%-ное крезоловое масло.
ВКЧС сохраняет вирулентность и АГ-свойства в нативной и лиофилизированной крови
при хранении в замороженном состоянии длительное время - 2456 дн (срок наблюдения)
(96). Инактивация вируса физическими средствами зависит от среды, содержащей вирус. В
культуральной жидкости инфекционность теряется через 10 мин при 60°С, тогда как в де-
фибринированной крови вирус не инактивируется в течение 30 мин при 68°С. Вирус стаби-
лен при pH 5-10, но при значениях выше и ниже указанных теряет инфекционность (79).
Антигенная структура, вариабельность и родство. По вирулентности различают А-,
В- и С-варианты вируса. В группу А входят вирулентные эпизоотические штаммы, вызы-
вающие у свиней всех возрастов остропротекающую болезнь, а также лапинизированные и
“холодные” варианты культурального вируса. Вирусы подгруппы В вирулентны только для
поросят и при циркуляции в стаде вызывают т.н. атипичную или хроническую чуму. К под-
группе С относится американский слабовирулентный шт. 331 (20, 21, 22). Достоверных
данных в отношение АГ-вариабельности вируса нет. Это подтверждается высокой эффек-
тивностью вакцин из шт. SFA (АСВ) и К в различных зонах земного шара. Заметное АГ-
различие представлено среди различных штаммов ВКЧС (45). Основываясь на реакциях с
монАТ были выделены АГ группы. Даже внутри некоторых штаммов ВКЧС имелась гете-
116
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
рогенность. Наблюдалось отсутствие связи между АГ группами и вирулентностью (81, 82,
83, 84). Полевые изоляты, которые нейтрализовывались в большей степени ВД-БС-АТ, чем
ВКЧС-АТ, имели пониженную вирулентность (80).
Вариабельность вируса проявляется не только различной вирулентностью для свиней,
но и различными АГ взаимоотношениями с вирусом диареи КРС. Установлено односторон-
нее родство между ВКЧС и вирусом диареи КРС: АТ к вирусу диареи КРС нейтрализуют
ВКЧС, но АТ к ВКЧС не нейтрализуют вируса диареи (44, 48, 66).
Локализация вируса. Вирус пантропен, накапливается во всех органах и тканях, но
преимущественно в лимфоузлах, костном мозге, слизистой оболочке кишечника и эндоте-
лии кровеносных сосудов. Он проникает в организм через кишечный и дыхательный трак-
ты. В тонзиллярных лимфоузлах отмечается наибольшая его концентрация. Возбудитель
размножается в лейкоцитах периферической крови. Через 6-10 ч после попадания в орга-
низм его можно обнаружить в крови. На 3-й день после подъема температуры тела накапли-
вается там в максимальной концентрации. У поросят, зараженных экспериментально per os,
через 7 ч вирус выделяли из миндалин, а через 16 ч - из крови. С 3-го по 7-й день титр ви-
руса, выделяемого из миндалин, крови и селезенки, был наивысшим и составлял 105
БОЕ/мл. В околоушной и поджелудочной железах, подчелюстных, заглоточных, мезентери-
альных и других лимфоузлах, респираторных путях и кишечном тракте вирус обнаруживали
на 3-й день; в ЦНС, сердце, костном мозге, яичниках, матке - на 4-й день после заражения в
титрах 103’2-105 БОЕ/мл. Он выявлен также в эпителии миндалин, в слизистой оболочке
глотки, почек, мочевого и желчного пузыря, в поджелудочной железе, слюнных железах,
надпочечниках, щитовидной железе. В легких вирус локализовался в эндотелии кровенос-
ных сосудов и адвентиции, а также в альвеолярных макрофагах. На 6-й день после зараже-
ния вирус из организма больных свиней выделяется с мочой, фекалиями, истечениями из
носа и глаз. Вирусовыделение начинается в инкубационном периоде и усиливается по мере
развития признаков болезни. Выделение вируса прекращается уже через 3 дн после исчез-
новения лихорадки, однако имеются данные о том, что у хронически больных животных ви-
русоносительство обнаруживают до 95-го дн после заражения.
Доказана трансплацентарная передача ВКЧС в различные периоды супоросности. Поро-
сята после рождения длительное время остаются скрытыми вирусоносителями и служат ис-
точником заражения. Свиноматки-носители вируса рождают клинически здоровых, но ин-
фицированных и иммунотолерантных поросят, которые выделяют вирус в больших количе-
вах в течение 4-6 мес (73, 74). Этот феномен и случаи хронической инфекции являются
факторами персистенции вируса среди популяции свиней (20). Трансплацентарная передача
вируса сопровождается тератогенным действием и высокой перинатальной смертностью.
Уровень летальности среди новорожденных поросят находится в прямой зависимости от
инфицированности плодов. Все поросята с виремией в конечном счете погибают (57).
Антигенная активность. В сыворотке крови свиней-реконвалесцентов на обнаружи-
вают ВНА, ПА и КСА. Получены монАТ, специфичные к 3-м структурным вирусным про-
теинам: РТ2, Р150 и Р12. АТ реагировали только с высоко очищенным вирусом. Выражен-
ный иммунитет развивается у свиней, начиная с 6-8-нед возраста, ВНА появляются на 7-10-
й день после инфицирования или иммунизации, достигают максимума через 3-4 нед и со-
храняются более года (8). Пассивные АТ у поросят могут сохраняться 2-3 мес. АТ молозива
к ВКЧС, продуцированные свиньями, вакцинированными за 55 дн до опороса, характеризо-
вались высокой активностью и коротким периодом полураспада, но подавляли первичную
яммунную реакцию потомства на последующую вакцинацию. У свиноматок, вакцинирован-
зых не ранее, чем за 86 дн до опороса, они обладали значительной авидностью (43).
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на неиммунных подсвинках
лассой 40-50 кг при подкожном заражении.
117
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
Культивирование. Культивирование вируса в лабораторных условиях на неиммунных
свиньях можно проводить практически бесконечно. Этот метод дорог и небезопасен. Вирус
удается репродуцировать также в первичной культуре клеток легких, селезенки, почки и
лейкоцитов без выраженного ЦПД. Оптимальный возраст культуры свиных лейкоцитов ко-
леблется от 1 до 5 сут. Максимального уровня титр вируса достигает через 4-8 дн после за-
ражения. Уровень репродукции различных штаммов вируса в культурах макрофагов ин-
тактных н иммунизированных поросят одинаков. Он так же размножается в культуре клеток
тестикул поросят, вызывая ЦПД при использовании аргинин буферной среды, и в переви-
ваемой линии клеток почки поросенка (РК-15). При 39-40°С вирулентные штаммы в этой
культуре клеток активно репродуцируются, образуя большие флюоресцирующие участки
клеток. Вакцинные штаммы в культуре РК-15 размножаются медленно при 33-34°С, обра-
зуя небольшие флюоресцирующие участки клеток. В клетках указанной линии титр его дос-
тигает 107-108 БОЕ/мл и цикл репликации длится 15-16 ч. Большое количество вновь обра-
зующегося вируса связано с клетками или адсорбировано на них, и только 1% инфекцион-
ных вирионов находится в жидкой фазе. Максимальные титры вируса (шт. Ши-Мынь) в
культуре клеток РК-15 отмечали на 2-5-е сут (5,25-6,26 1g ИД5о/мл)- Вакцинный шт. ЛК-
ВНИИВВиМ максимально накапливался только на 4-5-е сут и титр его был одинаков (24).
Вирус хорошо репродуцируется в культуре клеток почки мини-свиней. Оптимальным
методом выращивания культурального вируса (шт. ЛК-ВНИИВВиМ и Ши-Мынь) оказалась
роллерная технология (34). Разработана методика культивирования вируса КЧС в культуре
клеток лимфомы свиней. Установлена пестивирусная контаминация некоторых перевивае-
мых культур свиного происхождения (31). Изучено накопление персистирующего вируса-
контаминанта КЧС в перевиваемой культуре клеток ППК-666 и разработана методика де-
контаминации ее путем, во-первых, культивирования монослоя клеток с сывороткой крови,
содержащей высокие дозы ВНА, во-вторых, клонированием и реклонированием культуры
клеток. Таким образом, была показана перспектива деконтаминации перевиваемой культу-
ры ППК-666 от вируса-контаминанта КЧС (29). Установлена корреляция между вирулент-
ностью штаммов ВКЧС и их способностью размножаться в культуре альвеолярных макро-
фагов. Культура лейкоцитов свиней более чувствительна к вирусу, чем РК-15. Вирулентные
штаммы размножаются в условиях одиночного цикла (one step cycle) роста только при по-
вышенной температуре (39-40°С). Для репродукции вируса оптимальной является темпера-
тура 39°С. Аналогичные штаммы хорошо размножаются in vitro и при температуре 37°С.
Только аттенуированные штаммы способны размножаться при 22° С, поэтому их репродук-
ция in vitro может лимитироваться относительно высокой температурой тела свиней.
Точно определить инфекционную активность вируса можно методом флюоресцирующих
бляшек, поскольку инфекционные титры воспроизводимы и могут быть определены уже че-
рез 24 ч после инфицирования культуры. Разработан метод титрования вируса путем учета
негативных колоний под агаровым покрытием. Подобраны 3 линии клеток, формирующих
негативные колонии при культивировании в монослое: РК.15, ЯРД 10 и RPTY. Предложен
также метод титрования ВКЧС в культуре клеток с помощью феномена экзальтации. Вна-
чале культуру инфицируют ВКЧС, а затем (через определенное время) - вирусом НБ (шт.
Миадера). Клетки, в которых размножился ВКЧС, под влиянием вируса НБ разрушаются
(ЦПД), тогда как клетки, зараженные одним ВКЧС, не изменяются. Вместо вируса НБ мож-
но использовать вирус болезни Тешена. Кроме того, предложен тест экзальтации гемагглю-
тинации и ингибиции ЦПЭ с использованием клеток почки свиней и вируса НБ (шт. Сато).
Здесь цитопатогенный вирус ингибируется в результате предварительной инокуляции
ВКЧС; эта ингибиция сопровождается значительным увеличением образования ГА вируса
НБ. Вместо последнего успешно применяли один из штаммов вируса гриппа(93) .
118
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
Помимо РК-15 во ВНИИВВиМ используют стабильные линии клеток свиного происхо-
ждения ПКПС. Исходным материалом для первичного выделения клеток служат почки 1,5-
мес поросят из благополучного по КЧС хозяйства. Культура ПКПС оказалась чувствитель-
ной к вакцинному (шт. ЛК-ВНИИВВиМ) и эпизоотическому (шт. Ши-Мынь) штаммам (88).
Приемлемой для промышленного выращивания ВКЧС оказалась перевиваемая линия кле-
ток почки эмбриона кролика (ПЭКр) (18). Шт. ЛК-К ВКЧС накапливался в суспензионной
культуре клеток ПСГК до 5-7 1g ККИД 50/мл (105).
Г А- и гемадсорбирующие свойства ВКЧС - не установлены.
Тератогенные свойства. ВКЧС обладает тератогенными и др. патогенными свойства-
ми в зависимости от стадии беременности, когда происходит встреча матери и плода с виру-
сом. Так, например, при инфицировании супоросных маток на 65-й день происходила ги-
бель плодов более чем в 30% случаев. У оставшихся в живых гистерэктомированных пло-
дов обнаруживалась виремия и отсутствовали ВНА. При заражении свиноматок между 94 и
101 дн супоросности гибели плодов не наблюдалось. Очевидно 65-й день беременности яв-
ляется последним сроком для установления персистентной виремии у плода (46).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные, вы-
деляющие вирус во внешнюю среду с мочой, фекалиями и секретами слизистых оболочек
глаз и носа, а также реконвалесценты. Здоровые свиньи, находясь в контакте с больными и
пользуясь общим кормлением и водопоем, легко и быстро заражаются. Заражение происхо-
дит, главным образом, через пищеварительный тракт с инфицированными кормами и во-
дой, а также через дыхательные пути и поврежденную кожу. Один из основных путей рас-
пространения инфекции - завоз продуктов убоя больных чумой свиней и скармливание их
животным без надлежащего обезвреживания, а также ввоз в хозяйство свиней в инкубаци-
онном периоде болезни и вирусоносителей, занос вируса с грубыми и сочными кормами, за-
раженными дикими свиньями.
Из неблагополучных хозяйств ВКЧС свободно выносится за 2 нед до появления болезни
и после начала ее до установления диагноза, когда животных без ограничения вывозят на
мясокомбинаты и в другие хозяйства. Реализация продуктов убоя таких свиней - главная
причина распространения чумы в современных условиях. Описана передача ВКЧС комара-
ми. Примерно из 100 комаров разных видов, отловленных в двух неблагополучных по КЧС
фермах, готовили суспензии и заражали поросят. В 8 случаях поросята заболевали. Пато-
генной оказалась суспензия комаров из родов Aedes, Anopheles, Psorophora и Culex (20, 67).
Наиболее важным аспектом в циркуляции вируса КЧС в природе является трансплацен-
тарная передача полевых и вакцинных штаммов, врожденная персистентная КЧС-инфекция
у плодов и новорожденных поросят. Прослеживается тесная связь кругооборота вируса с
кругооборотом репродуктивного цикла воспроизоводства свиней. Циркуляция вируса в по-
пуляции “свиноматка - плод -потомство” является основным связующим звеном естествен-
ного кругооборота вируса (36а).
Природная очаговость. Природная очаговость КЧС среди кабанов представляет опас-
ность для промышленного свиноводства возможным вовлечением домашних свиней в цепь
циркуляции возбудителя. Появление природной очаговости чумы в стране обусловлено ря-
дом объективных факторов:
- прямыми и косвенными связями между дикими и домашними свиньями вследствие
продолжающегося расселения кабанов. Зоологи отмечают, что северная граница ареала ка-
банов сдвинулась на север европейской части страны до линии Беломорск - Березняки -
Няндома - Котлас - Мураши. Активное расселение кабана идет и в южных районах России
при устойчивой общей численности поголовья;
119
Глава IV. Family Haviviridae Флавивирусные инфекции
- устойчивостью возбудителя КЧС, длительным вирусоносительством, разнообразием
путей его передачи от больных кабанов здоровым при непосредственных контактах или че-
рез объекты внешней среды, инфицированные выделениями больных животных, длитель-
ным поддержанием вируса в популяциях благодаря конгенитальному заражению плодов;
- антропогенным воздействием на среду обитания кабанов, приводящим к вынужденно-
му использованию ими кормов, пищевых отходов, подстилки на полях и фермах и взаимно-
му обмену вирулентным вирусом при наличии больных среди диких и домашних свиней;
- связывающими факторами в распространении возбудителя КЧС между отдельными
популяциями кабанов в результате миграции животных (суточный переход достигает 10-20
км). Не исключена в этом процессе роль кровососущих членистоногих. Дополнительным,
нередко важным, связующим звеном с домашними свиньями могут быть пищевые отходы
вследствие использования человеком мяса кабанов.
Результаты эпизоотологического анализа и исследования материала во ВНИИВВиМ по
выделению ВКЧС от павших и отстреляных кабанов показали, что болезнь среди кабанов
регистрировали с 1901г. (Беловежская Пуща) и в течение последующего периода. Диагноз
на чуму до разработки лабораторного метода диагностики ставился на основе комплекса
признаков, что часто используется в современной практике. Чума среди кабанов появлялась
и распространялась постепенно через определенные промежутки времени и возникала вновь
зачастую в одних и тех же регионах. В течение 1964-1977 гг. чуму регистрировали пооче-
редно в Белоруссии, Молдавии, Западной Украине, Центральной России, Северном Кавказе
и Приморье. Новая волна КЧС в 1986-1989 гг. охватила Молдавию, Одесскую, Черновиц-
кую и др. области Украины. В 1990-1991 гг. случаи распространения КЧС среди кабанов, а
затем и домашних свиней установлены в Брянской, Тверской, Смоленской, Московской,
Курской и др. областях. Продолжают оставаться неблагополучными по чуме кабанов При-
морье, Забайкалье, Бурятия. В Приморском крае чума также широко распространена в хо-
зяйствах 12-ти районов. Основываясь на многократных фактах выявления больных и пав-
ших кабанов, можно предполагать неблагополучие по КЧС в Днестровско-Бугском между-
речье, Дунайских плавнях, Закарпатье, Беловежском лесном массиве, Приморье. Имеется
такая же вероятность для средней полосы России, Северного Кавказа. Поэтому необходим
регулярный эпизоотологический надзор за дикими кабанами и усовершенствование системы
его проведения (10).
Помимо отечественных работ имеется сообщение R. Krassnig et.al. (50) о том, что ряд
вспышек КЧС в 1990 г. в Австрии привел также к инфицированию диких кабанов в северо-
восточной части страны (в Федеральной земле Нижняя Австрия). Одной из наиболее важ-
ных причин вспышек болезни является поедание пищевых отходов. Серологические иссле-
дования домашних свиней в Штирии и диких кабанов в Нижней Австрии показали, что ин-
фекция может не вызывать гибели животных, а также развития типичных клинических
симптомов. Инфицированные свиньи, как правило выживают. Вакцинация в Австрии за-
прещена. Кроме того, установлено, что имеющие недостаточный иммунитет супоросные
свиноматки, инфицированные вирусом чумы свиней разной вирулентности, в случае заноса
инфекции являются основным источником вируса для новорожденных, играют важную роль
в его поддержании и распространении (9).
Спектр патогенности в естественных условиях. К ВКЧС восприимчивы домашние
свиньи всех пород и возрастных групп, особенно чистопородные, а также дикие кабаны. В
лабораторных условиях путем длительных серийных пассажей ВКЧС удается адаптировать
к организму кроликов (20, 21).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патоло-
гоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Эпизоотические,
120
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
клинические и патологоанатомические данные зависят от восприимчивости свиней, виру-
лентности штамма и комплекса мероприятий по профилактике КЧС.
Если в очаге штамм вируса вирулентный, поголовье свиней не иммунное, то болезнь
характеризуется высокой контагиозностью, большей смертностью, гипертермией, геморра-
гическими поражениями кожного покрова, признаками поражения органов ЖКТ и ЦНС.
Обращают внимание выраженный геморрагический диатез в различных органах, мрамор-
ностъ лимфоузлов, инфаркты селезенки, кровоизлияния в почках на фоне их анемии, ката-
рально-геморрагический гастроэнтерит, лимфоцитарный энцефаломиелит. Однако частая
вакцинация свиней против чумы создает иммунный фон, влияющий на симптомы болезни и
характер патоморфологических изменений. При хроническом течении характерными изме-
нениями являются очаговый дифтеритический налет (бутоны), коричневая экзема, фибри-
нозный плеврит и перикардит, некроз миндалин. Хроническая болезнь часто протекает на
фоне других инфекций. Правильный диагноз может быть поставлен только лабораторными
методами (20).
Экспресс-методы обнаружения вируса КЧС. Рекомендована дифференциация пести-
вирусов с использованием ДНК-зонда на ВКЧС. В качестве гибридизационного зонда ис-
пользуют комплементарную ДНК (меченую 32Р) к участку гена белка Р125 (71). Для быстро-
го обнаружения ВКЧС в тканях с помощью ПЦР из образцов тканей животных фенольным
методом выделяют препараты РНК, подвергают обратной транскрипции и амплифицируют
в ПЦР. Используемые “гнездовые” праймеры позволяют амплифицировать разные изоляты
ВКЧС (53). ПЦР обладает высокой чувствительностью и специфичностью и позволяет диф-
ференцировать различные пестивирусы (38а, 47а, 54а, 85а). Предложен вариант ПЦР для
выявления ВКЧС с использованием 4-х праймеров для амплификации фрагментов гена бел-
ка Е1. Чувствительность метода составляет 10 ТЦД50 (90).
Выделение вируса.
Взятие и подготовка материала. Для выделения вируса берут пробы крови, кусочки
селезенки, миндалин, лимфоузлов, грудной кости, почек и легких от 2-3 животных в первые
2 ч после гибели или убоя больных в агональном состоянии. Материал отбирают в стериль-
ные флаконы, закрывают резиновыми пробками, флаконы обрабатывают снаружи 5%-ным
р-ром хлорамина или осветленным 20%-ным р-ром хлорной извести, обертывают марлей,
смоченной дезинфицирующим р-ром, и помещают в полиэтиленовый пакет. Взятый патма-
териал помещают в термос со льдом, опечатывают и отправляют с нарочным в лабораторию
с соответствующим сопроводительным документом. В лаборатории из каждой пробы гото-
вят 20%-ную суспензию на 0,85%-ном р-ре NaCl, которую трижды замораживают и оттаи-
вают, центрифугируют при 3-4 тыс. мин’1 20-30 мин. Надосадочную жидкость обрабатыва-
ют антибиотиками 1ч при 37°С и используют для выделения вируса.
Выделение вируса в культуре клеток. Используют перевиваемую культуру клеток
РК-15, выращенную на стеклянных пластинках. На каждую пробу материала берут не менее
8 пробирок, в которые вносят по 0,4 мл исследуемого материала. Адсорбируют вирус 2 ч
при 37°С, затем его удаляют, клетки отмывают средой и заливают 2 мл поддерживающей
среды с 2% сыворотки теленка. Для контроля качества культуры клеток оставляют 10 про-
бирок незаряженными. Инкубируют 24-96 ч. ВКЧС в культуре клеток РК-15 не вызывает
ЦПД, поэтому индикацию его проводят методом прямой ИФ. Через 24-96 ч после инокуля-
ции пластинки с монослоем клеток извлекают из пробирок, подсушивают на воздухе и 10
мин фиксируют в холодном (4°С) ацетоне, подсушивают на воздухе и помещают их клетка-
ми вниз на капле ФИТЦ-Ig ВКЧС, нанесенного в рабочем разведении на предметные стек-
ла. Препараты выдерживают во влажной камере 30 мин при 37°С, затем промывают в сосу-
де с 0,01 М ФСБ с pH 7,2-7,5 30-40 мин в темном месте, ополаскивают в дистиллированной
воде, подсушивают на воздухе и заключают в забуференный глицерин (9 частей глицерина
121
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
и 1 часть 0,01 М ФСБ с pH 7,5). Для этого на обезжиренное предметное стекло наносят кап-
лю забуференного глицерина, помещают препарат клетками вниз и заливают края расплав-
ленным парафином. Просматривают под люминесцентным микроскопом (20, 21).
В инфицированных препаратах, обработанных ФИТЦ-Ig, АГ вируса обнаруживают по
ярко-зеленому диффузному свечению цитоплазмы пораженных клеток, располагающихся
группами, которые называют флюоресцирующими микробляшками. Через 24-48 ч в культу-
ре клеток РК-15 наблюдают появление микробляшек. При их отсутствии в первом пассаже
проводят 2-й и 3-й пассажи испытуемого материала с последующим ИФ через 24-96 ч (64).
Индикация и идентификация вируса
Гистологические исследования. Проводят с целью обнаружения специфических изме-
нений нервных тканей. От павших или убитых свиней берут кусочки полушария головного
мозга, мозжечка, аммоновых рогов, спинного мозга в различных участках. Гистологические
препараты окрашивают гематоксилин-эозином. В большинстве случаев (70-93%) в ЦНС об-
наруживают негнойный лимфоцитарный энцефаломиелит, характеризующийся периваску-
лярными лимфоцитарными инфильтратами, очаговой пролиферацией клеток микроглии
(глиальных узелков) и дистрофией ганглиозных клеток. В срезах, приготовленных из лим-
фоузлов, сердечной мышцы и печени, можно обнаружить присутствие ацидофильных внут-
риядерных телец-включений, несколько меньших, чем ядрышки. В лимфоузлах их находят
на 6-12-й день после заражения.
ВКЧС обладает выраженным гематотропизмом в отношении костного мозга, содержа-
щего большее количество бластных клеток, чем лимфоузлы и селезенка. Поэтому костный
мозг поражается первым; ингибируются миелопоэтические и эритропоэтические клетки и
пролиферируют крупные клетки с базофильной цитоплазмой. Наряду с этим обнаруживают
картину глубокого цитолиза и дистрофию лимфопоэтических органов.
При подозрении на чуму для уточнения диагноза несколько тяжелобольных животных
убивают и исследуют мазки из костного мозга грудной клетки.
Биопроба. Из благополучного по инфекционным болезням хозяйства берут поросят в
возрасте 2-3 мес массой 20-30 кг. В качестве материала используют 10%-ную суспензию,
приготовленную из органов (селезенки, лимфоузлов, костного мозга) или крови от павших
животных. Суспензию обрабатывают антибиотиками, выдерживают не менее 4 ч при 4°С,
центрифугируют и надосадочную жидкость используют для заражения животных. Трем по-
росятам вводят подкожно по 1 мл крови или по 2 мл суспензии органов. Двум животным
исследуемый материал не инокулируют, содержат их отдельно для контроля. Двум порося-
там, иммунным к ВКЧС, вводят исследуемый материал в тех же дозах с целью дифферен-
циальной диагностики в отношении АЧС. За всеми животными наблюдают 21 день и еже-
дневно измеряют температуру тела (20).
Диагноз считают положительным, если 2 из 3-х неиммунных поросят заболевают, про-
являя симптомы болезни, и погибают, а 2 иммунных остаются здоровыми или проявляют
незначительные и кратковременные (1-4 дн) признаки болезни слабой интенсивности
(повышение температуры тела не выше 41 °C). Однако следует иметь ввиду, что при отсут-
ствии реакции у восприимчивых животных или в случае ее недостаточной выраженности,
нельзя с уверенностью исключить присутствие вируса в исследуемом материале. Отрица-
тельный результат заражения может быть следствием либо слишком малого количества в
нем вируса, либо слабой вирулентности последнего. Поэтому следующим шагом является
повторное, спустя 3-6 нед после инокуляции исследуемого материала, заражение (реинфек
ция) подопытных свиней на этот раз вирусом с заведомо известной вирулентностью. Отсут-
ствие у животных реакции на это заражение свидетельствует о приобретении ими иммуни-
тета в результате первой инокуляции (бессимптомного переболевания) и косвенно указывает
на присутствие вируса в исследуемом материале. Одновременно с проведением второй про-
122
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
бы заражают дополнительно двух восприимчивых поросят (контроль) вирусом, использо-
ванным для реинфекции.
Иногда биологическая проба себя не оправдывает или дает неясные результаты при вы-
делении штаммов вируса, вызывающих легкое заболевание. Такие штаммы у инокулиро-
ванных поросят вызывают хроническую болезнь. Дело осложняется тем, что штаммы со
слабой вирулентностью могут не обладать иммунизирующими свойствами, а это не позво-
ляет уточнить диагноз при использовании дополнительного контрольного заражения виру-
лентным штаммом (реинфекции). При диагностике заболевания, обусловленного такими
штаммами могут понадобиться более молодые животные и дополнительные пассажи для
повышения вирулентности (20).
Предложена шкала оценки вирулентности полевых штаммов ВКЧС:
- слабовирулентные (патогенные лишь для поросят-сосунов) не иммунизирующие
штаммы. Поросята-сосуны заболевают в первые дни жизни и смертность их велика, порося-
та-отъемыши (12-15 кг) реагируют только в определенные дни подъемом температуры тела,
не приобретая иммунитета;
- слабовирулентиые (патогенные для молодых животных) иммунизирующие штаммы. У
животных массой 15-20 кг развивается хроническая болезнь, подсвинки массой 35 кг реаги-
руют подъемом температуры тела, продолжающимся несколько дней. На вскрытии обнару-
живаются незначительные точечные кровоизлияния. Животные приобретают иммунитет;
- сильно вирулентные штаммы вызывают у животных массой 30 кг острое заболевание,
смертность 40% и больше. На вскрытии характерны геморрагические изменения.
Тест модуляции фагоцитарной активности макрофагов. Дефицит фагоцитарной
функции приводит к нарушению локальных иммунных реакций с развитием воспалитель-
ных процессов на слизистых оболочках. При КЧС происходит локализация фагоцитарной
функции лейкоцитов: при репродукции вакцинного шт. ЛК-ВНИВВиМ снижается процент и
индекс фагоцитоза нейтрофилов и макрофагов, а при репродукции вирулентного вируса шт.
Ши-Мынь повышается процент и индекс фагоцитоза нейтрофилов и снижается таковой у
макрофагов. При КЧС in vivo и in vitro фагоцитарная активность лейкоцитов крови кратко-
временно (до 4 сут) снижается при инфицировании вакцинным штаммом и повышается у
макрофагов при инфицировании вирулентным штаммом ВКЧС. Установленный в инфици-
рованных клетках-мишенях цитопатический эффект, выражающийся в модуляции фагоци-
тарной активности свиных макрофагов, используют в диагностике КЧС (33).
Серологическая идентификация
Иммунофлюоресценция. Из проб органов (лимфоузлы, селезенка, почки, миндалины)
готовят замороженные срезы. Из проб костного мозга и лейкоцитарного концентрата - маз-
ки. Для приготовления последних берут грудную кость, делают продольный разрез и выни-
мают красный костный мозг, из которого делают несколько мазков. Для приготовления
мазков из лейкоцитарного концентрата от больных или подозреваемых в заболевании сви-
ней берут 15 мл крови с антикоагулянтом, энергично встряхивают, оставляют на 1 ч при
комнатной температуре, затем отбирают плазму с лейкоцитами и центрифугируют 10 мин
при 1000 мин'1, из осадка лейкоцитов (беловатый осадок) делают 2-3 мазка. Приготовлен-
ные препараты (срезы и мазки) фиксируют в охлажденном ацетоне 10 мин, после испарения
ацетона промывают 15-20 мин в ФБР pH 7,2 и окрашивают при 37°С 30 мин конъюгатом в
рабочем разведении, к которому добавляют краситель Эванса в соотношении: 3 части
конъюгата и 1 часть красителя, затем препарат промывают в фосфатном буфере и оставля-
ют на 10 мии в дистиллированной воде. После частичного подсушивания на воздухе на пре-
парат наносят забуференный глицерин (9 частей глицерина и 1 часть ФБР pH 8), покрывают
покровным стеклом и микроскопируют (20). Аналогично ставят контроля: а) исследуемый
123
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
материал и нормальный конъюгат с красителем Эванса; б) неинфицированный материал и
специфический конъюгат с красителем Эванса.
При микроскопии фон препарата флюоресцирует красно-оранжевым цветом, ядра кле-
ток темные, специфическое свечение характеризуется зеленым цветом цитоплазмы. В маз-
ках из красного костного мозга и лейкоцитарного концентрата специфическая флюоресцен-
ция отличается большой яркостью и количеством флюоресцирующих клеток. Специфиче-
ское свечение в цитоплазме даже в отдельных клетках препаратов, полученных от подозри-
тельных по заболеванию животных, указывает на наличие вируса КЧС. В контрольных пре-
паратах подобного свечения не должно быть.
Указанный метод отличается специфичностью и быстротой. Однако во избежание по-
грешностей метода при внедрении его в лаборатории следует иметь в виду, что специфич-
ность результатов зависит от следующих факторов: качества сыворотки-маркера (она долж-
на иметь высокие титры, быть моновалентной, полученной от свиней, не обработанных дру-
гими АГ), качества исследуемого материала (должен быть отобран не позже 2-3 ч после
смерти животного, фиксирован в ацетоне или замораживанием и сразу же отправлен на ис-
следование). В сопроводительном письме необходимо указывать клиническую и эпизоото-
логическую характеристику болезни, даты и названия прививок. При учете реакции следует
иметь ввиду, что вакцинный вирус сохраняется в организме вакцинированных свиней до 15
дн после вакцинации и в ИФ не дифференцируется от полевого вируса.
В Болгарии (12, 13,14) для ИФ диагностики КЧС из вены больных животных получают
кровь, готовят препараты лимфоцитов и лизированных эритроцитов и вносят их в пробирки
с пластинками, содержащими культуру клеток СПЭВ. Через определенные промежутки
времени пластинки извлекают и подвергают ИФ-обработке для выявления АГ вируса. Пер-
вые признаки размножения вируса в клеточном монослое выявляются через 12 ч после за-
ражения. Максимального развития признаки достигают через 48-72 ч. Ценность прямого
метода ИФ повышается при использовании его для прижизненной диагностики путем ис-
следования биопсированных миндалин. В Японии с этой целью сконструирован прибор.
Установлено преимущество метода для идентификации АГ вируса с использованием
культуры клеток РК-15 по сравнению с исследованием гистопрепаратов или мазков-
отпечатков. В случае исследования органов свиней, иммунизированных вирус-вакцинами,
когда АГ вакцинного вируса еще можно обнаружить в мазках-отпечатках, существует ре-
альная возможность получения ложноположительных результатов. Поэтому для идентифи-
кации изолятов ВКЧС чаще применяют метод флюоресцирующих АТ в культуре клеток РК-
15, который, несмотря на трудоемкость, характеризуется большей чувствительностью и лег-
костью учета результатов по сравнению с выявлением АГ в срезах ткани. Через 24-48 ч по-
сле заражения обнаруживали флюоресцирующие микробляшки из 5-30 клеток.
При помощи метода ИФ в сочетании с методом культуры клеток удается диагностиро-
вать чуму почти у всех больных свиней. В таком сочетании метод позволяет обнаружить
ВКЧС и в мясе вынужденно убитых животных. Для обнаружения АГ вируса в миндалинах
наиболее эффективен метод непрямой ИФ с контрастированием синькой Эванса.
РИГА. Для обнаружения АГ вируса в патологическом материале из органов и тканей
свиней используют следующие компоненты: а) АТ-эритроцитарный диагностикум; б) спе-
цифический АГ - вирус-вакцина КЧС; в) нормальный (контрольный) АГ; г) 1%-ный р-р
нормальной лошадиной сыворотки в забуференном физиологическом р-ре с pH 7,2; д) фор-
малинизированные и танизированные эритроциты барана; е) исследуемый материал ( 96а).
РИГА ставят микрометодом в объеме 0,075 мл с помощью аппарата Такачи или Титер-
тек. Готовят двукратные разведения исследуемого материала (от Г. 2 до Г. 512) в объеме 0,05
мл и такие же разведения контрольных АГ (специфического и нормального). Затем во все
луночки вносят 0,025 мл 3%-ной суспензии эритроцитарного диагностикума. Кроме того,
ставят дополнительно контроля; а) 0,05 мл 1%-ного р-ра нормальной сыворотки лошади и
124
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные иттфекпии
0,025 мл эритроцитарного диагностикума; б) 0,05 мл исследуемого материала в разведениях
и 0,025 мл формалинизированных и танизированных эритроцитов. После этого пластинки
встряхивают и оставляют на 1,5-2 ч при комнатной температуре. Учет реакции проводят в
крестах по 4-бальной системе. РИГА считают положительной при обнаружении агглютина-
ции не менее чем иа три креста в разведениях 1:8 и выше (96а).
РДП и ИЭОФ. Реакции различаются методами получения линий преципитации: в РДП
это происходит посредством свободной диффузии р-ров АГ и АТ из лунок в агаровом геле
равномерно во все стороны, а в ИЭОФ АГ и АТ движутся строго навстречу друг другу под
действием электрического поля, в результате чего увеличивается их концентрация в месте
встречи и там образуются более выраженные полосы преципитации.
Для постановки ИЭОФ необходим специальный прибор для электрофореза, дающий ре-
гулируемое напряжение постоянного тока до 300В. ИЭОФ в несколько раз чувствительнее
метода РДП, требует незначительного количества материала и позволяет получать результа-
ты через 30 мин (6). Метод стандартизован, описана методика приготовления агарозного ге-
ля. Он используется для выявления АГ ВКЧС в мезентериальных лимфоузлах и суспензии
ткани поджелудочной железы при клинических случаях болезни. Помимо АГ, данный метод
позволяет выявлять и специфические АТ. Метод быстрый, легко осуществим и более чувст-
вителен для лабораторной диагностики КЧС, чем РДП.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
В настоящее время в лабораторной диагностике КЧС используются три метода обнару-
жения специфических АТ к ВКЧС: реакция нейтрализации флюоресцирующих микробля-
шек (РНФБ), реакция непрямой ИФ и непрямой вариант твердофазного ИФА. Наиболее
эффективными методами обнаружения специфических АТ к ВКЧС являются РНФБ и ИФА.
Эффективность обнаружения АТ к ВКЧС в ИФА по сравнению с РНФБ составляла 96,5%.
На основании этих данных непрямой вариант ИФА рекомендован для обнаружения специ-
фических АТ к ВКЧС (40,96а).
НИФ. НИФ применяется для выявления и титрования АТ в сыворотках крови перебо-
левших свиней. Используют зараженные вирусом перевиваемые клетки (РК-15) на стек-
лышках, на которых титруют испытуемые сыворотки в 2-кратных разведениях от 1:20 до
1:640 в непрямой ИФ по общепринятой методике с использованием во втором этапе реак-
ции антисвиного ФИТЦ-Ig. Титром АТ к КЧС считают последнее разведение сыворотки,
обеспечивающее зеленое свечение (на 2 креста) диффузного цитоплазматического АГ виру-
са при отсутствии подобного свечения в контролях с интактными тест-объектами и нор-
мальной свиной сывороткой.
Реакция нейтрализации флюоресцирующих бляшек (РНФБ). В качестве чувстви-
тельной системы необходимо использовать перевиваемую культуру клеток РК-15, выращен-
ную на покровных стеклах в пробирках. РНФБ проводят микрометодом, используя пласти-
ковые панели Titertek. Суспензию клеток (в 1 мл 10-800 тыс. клеток) готовят на среде Игла
(МЕМ) с 5% фетальной сыворотки крови КРС с добавлением буфера HEPES. Постановка
микрометодом РНФБ более производительна, чем использование макрометода (28). Данный
метод может успешно применяться и для титрования специфических АТ (20, 26). Пробы
сывороток крови берут от животных не ранее 15 дн после клинического выздоровления. Пе-
ред использованием их инактивируют при 56°С 30 мин. Сыворотки разводят от 1:2 до
1:2560 и смешивают с равным объемом вакцинного вируса в количестве 100 ККИД50
(клеточно-культуральных инфекционных доз), встряхивают и выдерживают 60 мин при
37°С. Каждое разведение сыворотки с вирусом вносят по 0,4 мл в 4 пробирки с культурой
клеток РК-15 на стеклышках. Адсорбируют 2 ч при 37°С. Смесь сыворотка-вирус сливают,
отмывают клетки средой, заливают 2 мл поддерживающей среды и инкубируют при 37°С.
Реакцию учитывают через 48 ч инкубации. Препараты вынимают из пробирок, ополаскива-
125
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
ют в 0,01 М ФБР pH 7,2-7,4 и обрабатывают, как указано выше (см. “Выделение вируса в
культуре клеток”). Реакция сопровождается соответствующими контролями (смесь вируса со
средой, гипериммунной и нормальной сыворотками и незараженная культура клеток). От-
сутствие флюоресцирующих микробляшек (при наличии их в контроле вируса в смеси с пи-
тательной средой и нормальной сывороткой) в препаратах ВКЧС, обработанных гиперим-
мунной и испытуемыми сыворотками в разведении 1:2 и выше, указывает на наличие в ма-
териалах специфических АТ. Титром АТ считают то предельное разведение сыворотки, при
котором наблюдается полное подавление образования флюоресцирующих микробляшек.
Во избежание получения ложных результатов при использовании культуры клеток необ-
ходимо добавлять в среду бычью сыворотку, свободную от вируса диареи КРС и АТ. ВНА
выявляются через 21 день после заражения. Обнаружение их с помощью непрямой ИФ в
культуре клеток широко применяли в США на последних этапах программы искоренения
болезни. Однако при интерпретации результатов следует учитывать частые случаи инаппа-
рантной инфекции у свиней, вызванной серологически родственным вирусом диареи КРС,
поэтому все положительно реагирующие сыворотки свиней необходимо исследовать и на
вирус диареи.
Для массового обследования свиней на субклиническую инфекцию КЧС в ФРГ пред-
ложен тест, сочетающий PH с ИФ (20). В качестве тест-системы используют культуру клеток
РК-15. Если у одной или нескольких свиноматок отдельного стада в сыворотке крови обна-
руживают ВНА, всех поросят убивают с последующим исследованием органов ИФ.
При исследовании проб сывороток из неблагополучных хозяйств в PH (с 200-300 БОЕ
патогенного шт. Альфорт 331) до 50% их оказалось положительными. Наличие АТ свиде-
тельствовало о носительстве вируса. Вирус смогли выделить только у молодых поросят.
Описана усовершенствованная методика выявления ВНА к ВКЧС, в которой постановка
теста значительно облегчена за счет использования цитолитического штамма вируса, выде-
ленного из персистентно инфицированной перевиваемой культуры клеток JB-RS-2 и инду-
цировавшего четкое ЦПД в нескольких перевиваемых линиях клеток почки поросенка. Ре-
акцию ставят в культуре клеток РК-15 на микропанелях при 38°С в термостатах с подачей
СОг (20). По воспроизводимости и чувствительности методика не уступает реакции с ис-
пользованием метода ИФ АТ, но требует значительно меньшего труда. Предлагаемый метод
обладает рядом преимуществ: исключает необходимость использования ИФ; учет результа-
тов можно проводить без микроскопа; реакцию ставят микрометодом; используемый вирус
аттенуирован. Для постановки PH необходимо вначале провести титрование ВКЧС.
Титрование ВКЧС. Поскольку титрование на чувствительных подсвинках связано с
экономическими трудностями, а в культуре клеток вирус не вызывает ЦПД, то для титрова-
ния используют разработанный Менлингом в 1963 г. метод ИФ зараженных серийными
разведениями вируссодержащего материала культур клеток (20). Точное определение ин-
фекционной активности вируса может быть осуществлено методом флюоресцирующих бля-
шек. Для этого с монослоя клеток удаляют ростовую среду и заражают каждым разведением
вируса (от 10'1 до 10’6) по 0,4 мл 6 пробирок культуры клеток РК-15, выращенных на пла-
стинках. После 2 ч инкубации в пробирки добавляют по 2 мл поддерживающей среды и ин-
кубируют 72 ч при 37°С. Затем по 4 пластинки на каждое разведение вируса вынимают из
пробирок и обрабатывают методом прямой ИФ, как указано выше (см. “Выделение вируса в
культуре клеток”) (20,41).
Титром ВКЧС считают наибольшее его разведение, вызывающее образование специфи-
ческого цитоплазматического АГ, выявляемого после второго пассажа вируса в культуре
клеток РК-15. Титр вычисляют по методу Рида и Менча, выражая его в ККИД 30/объем. При
рассмотрении такого монослоя в люминесцентном микроскопе обычно обнаруживают
флюоресцирующие фокусы, состоящие из 20-30 инфицированных клеток. Число таких фо-
кусов обычно соответствует числу инфекционных единиц в инокуляте. Такой метод имеет
126
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
преимущества, так как инфекционные титры воспроизводимы и могут быть определены уже
через 24 ч после инфицирования культуры; титр вируса обычно бывает высоким, точность
метода удовлетворительная и результаты можно получить уже через 24 ч. Однако метод до-
вольно сложен, чтение результатов под микроскопом при массовых исследованиях утоми-
тельно. Метод обладает тем важным преимуществом, что позволяет идентифицировать и
титровать даже ослабленный, применяемый в качестве живой вакцины вирус. Установлена
некоторая разница между титрами вируса по ЦПД, ИФ и титром патогенности для свиней.
ИЭОФ. Используется в 1%-ной агарозе как диагностический при выявлении АТ к
ВКЧС в сыворотках зараженных свиней. Для исследования применяется АГ, экстрагиро-
ванный из зараженных ВКЧС клеток РК-15. Показано, что этот культуральный АГ ВКЧС
идентичен преципитирующему АГ вируса, экстрагированного из ткани селезенки заражен-
ных свиней. Обнаружено, что ПА к ВКЧС появляются в сыворотках через 2-3 нед после за-
ражения животных слабовирулентными штаммами или модифицированным живым вак-
цинным штаммом. Выявлено, что метод ИЭОФ в 2-16 раз чувствительнее, чем иммунодиф-
фузия в агаровом геле. Несмотря на меньшую его чувствительность по сравнению с PH, ре-
зультаты, полученные с помощью ИЭОФ, хорошо согласуются с результатами, полученны-
ми методом подавления бляшкообразования. Считается, что ПА к ВКЧС могут персистиро-
вать до 3 лет после 1-кратной вакцинации шт. С. Методом ИЭОФ невозможно было диф-
ференцировать АТ к ВКЧС от АТ к вирусу диареи КРС; при получении положительных ре-
зультатов необходимо сочетать его с PH.
ИФА в непрямой модификации. На миллипоровские фильтры (тип ОН, диаметр пор
0,3 мм), диаметр которых равен 0,6 см, смоченные р-ром АГ ВКЧС, наносят свиные сыво-
ротки. Затем фильтры инкубируют в р-ре кроличьего IgG (против IgG свиньи), меченого пе-
роксидазой хрена RZ=3,0. Активность связанной пероксидазы определяют в р-ре субстрата
3,3-диаминобензидина. Опытные образцы окрашивались в коричневый цвет, контрольные
оставались бесцветными. Реакция громоздкая.
ELISA. Разработан метод определения АТ к ВКЧС на микроплатах, поддающийся ав-
томатическому анализу (37). Описана методика получения очищенного и концентрирован-
ного АГ для теста ELISA из шт. Альфорт, размноженного в культуре клеток РК-15. Резуль-
таты ELISA и PH близки (20). ELISA легок в выполнении, дешев, позволяет быстро иссле-
довать большое количество образцов, высокочувствителен и рекомендован в качестве мето-
да оценки при крупномасштабных обследованиях (96а).
С использованием иммуноглобулинов баранов, инфицированных ВКЧС, разработана
технология изготовления ИФ-коиъюгатов, пригодных для выявления вирусного АГ в пато-
логическом материале. При постмортальной диагностике вирус выявляется со 100% эффек-
тивностью без биологического накопления. При экспериментальном заражении вирус в про-
бах мочи и крови обнаруживали через 8-10 ч, при контактном заражении - через 72-96 ч.
Положительные результаты при индикации ВКЧС в объектах ветеринарного надзора (зерно,
почва, вода) получены при концентрации вируса, превышающей 100 ИДзо/и^мг) (100). Пока-
зано успешное применение ИФА для выявления ВКЧС в культуре клеток РК-15 (65).
Описано получение монАТ для диагностики КЧС на мышах линии BALB/c 4-кратно
иммунизированных ВКЧС (шт.Альфорт). Клетки селезенки мышей “сливали” с миеломны-
ми клетками Sp2/0. Полученные гибридомы культивировали в 20% среде ДМЕМ Ну-Нт при
37°С в атмосфере 5% ССЬ. Продуцирующую специфические АТ культуру дважды субклони-
ровали и после определения изотипа АТ инокулировали интраперитонеально мышам
BALB/c. Образующаяся асцитная жидкость содержала высокие концентрации монАТ, кото-
рые после соответствующей очистки конъюгировали пероксидазой хрена (40,55).
Разработан способ изготовления иммуноферментных конъюгатов для ИФА с использо-
ванием моиАТ к ВКЧС с сохранением активности фермента и высокой специфической ак-
127
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
тивностью иммуноглобулина (91, 92), а также метод флюоресцирующих зондов (МФЗ), ко-
торый не уступал по чувствительности и специфичности МФ А. Разработан метод выявления
ВКЧС методом молекулярной гибридизации и ПЦР (89,90).
Дифференциальная диагностика
КЧС необходимо отличать от африканской чумы, пастереллеза, сальмонеллеза, рожи,
БА, ВД-БС, парагриппа и гриппа. При африканской чуме ярче выражен геморрагический
диатез, увеличена и размягчена селезенка, полнокровие и кровоизлияния в почках. Чаще
поражаются, имея вид кровяных сгустков, портальные, почечные и брыжеечные лимфоуз-
лы. Сильно выражен отек интерстициальной ткани легких, скопление в грудной полости
кровянистой жидкости. Редко отмечают инфаркт селезенки, постоянно - тотальный распад
лимфоцитов и тканей лимфоидных органов. Для дифференциации ставят тест перекрестного
иммунитета, тест гемадсорбции и РИФ (20).
Пастереллез, как правило, не принимает характера эпизоотии, поражает преимущест-
венно взрослых животных. Для него характерны отек подкожной клетчатки подчелюстного
пространства, распространяющийся на шею и глотку, серозный лимфаденит, фибринозно-
некротизирующая пневмония, слабо выраженный геморрагический диатез. Кроме того, об-
наруживают возбудителя при бактериологическом и биологическом исследованиях.
Рожа обычно возникает в летний период года и характеризуется застойными явлениями
кожи (рожистая эритема) и во внутренних органах, увеличением селезенки, гломерулонеф-
ритом и катаральным гастроэнтеритом. Рожу свиней диагностируют выделением возбудите-
ля. Не исключено одновременное течение чумы и рожи. В этом случае диагноз ставят на ос-
новании биологической пробы на чуму и бактериологического исследования на рожу.
Сальмонеллез наблюдают спорадически и энзоотически среди молодняка 1-5-мес воз-
раста. Характеризуется слабым геморрагическим диатезом, развитием в толстом кишечнике
плоских рыхлых струпьев и язв, а не “бутонов”, очаговыми некрозами печени. Результаты
бактериологических исследований являются также основанием для дифференциации КЧС.
Грипп и парагрипп свиней исключаются вирусологическим исследованием материала,
взятого из верхних дыхательных путей (наличие ГА вируссодержащего материала в первых
пассажах на КЭ, гемадсорбции в культуре ткани, цитоплазматических включений при ри-
ноцитоскопии). Болезнь Ауески чаще наблюдается среди поросят. Проводят вирусологиче-
ские исследования и биопробу на кроликах. Вирусную диарею у инфицированных свиней
устанавливают с помощью ПЦР, поскольку большой неструктурный протеин пестивирусов
125 кД высоко консервативен, а мажорный протеин конверта gm53 четко различается у
ВКЧС и диареи КРС (52).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Животные-реконвалесценты приобретают стойкий иммунитет, продолжающийся не-
сколько лет. Пассивный иммунитет непродолжителен - до 10-12 ди.
Применение живых вакцин. Иммунитет при КЧС обусловлен ВНА. Иммунные реак-
ции, направленные на цитолиз инфицированных клеток, не «работают» при КЧС из-за от-
сутствия экспрессии вирусспецифических белков на клеточной поверхности. Однако форми-
рование резистентности к заражению вакцинированных свиней происходит до выявления
ВНА. Лейкоциты и лимфоциты иммунизированных свиней способны лизировать аутогенные
клетки-мишени (лейкоциты), интегрировавшие вирионы КЧС. Однако эти же клетки либо
вовсе не вызывали цитолиз незараженных лейкоцитов, либо лизировали их в меньшей сте-
пени. Поэтому весьма вероятно, что в защите от КЧС наряду с нейтрализацией вируса АТ
важную роль играют иммунологические реакции, опосредуемые клетками, в частности ЕК
(естественные киллеры) и ЦГЛ (цитотоксические лимфоциты) (101).
С 70-х гг. в арсенале средств специфической профилактики КЧС первое место занимают
живые вакцины из шт. К и ЛК-ВНИИВВиМ. Лучшая из отечественных - вакцина ЛК-
128
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
ВНИИВВиМ, разработанная проф. В.И.Поповым и соавт. (102), получена на основе шт. К
ВКЧС, который репродуцируется в гетерологичной системе - культуре клеток тестикулярной
ткани ягнят. Препарат обладает высокой иммуногенностью и полностью лишен вирусных
контаминантов, патогенных для свиней. Вакцина не уступает по активности лучшим миро-
вым аналогам - вирус вакцине GPE (Япония) и Phiverval (Франция), но и превосходит их по
универсальности применения и потенциальной безвредности. Все характеристики вирус-
вакцины ЛК-ВНИИВВиМ соответствуют требованиям Европейской фармакопеи и общепри-
знанным мировым стандартам (35).
С помощью живой вирус-вакцины ЛК-ВНИИВВиМ можно создавать специфическую
защиту от заболевания и гибели 100% вакцинированных свиней уже через 48 ч после 1-
кратного внутримышечного введения ее в дозе 6,0 1g ИмД50/гол. Вакцина может быть с ус-
пехом использована для обрыва инфекции в неблагополучных хозяйствах и до минимума
сократить экономический ущерб (3). Вакцина из шт. К ранее репродуцировалась в организ-
ме кроликов, в настоящее время её размножают в культуре клеток почки эмбриона свиньи
(103). За рубежом применяют вакцины из шт. Минисотта, GPE и др. Эффективность вакци-
нации при КЧС во многом зависит от схемы иммунизации супоросных свиноматок, поросят
различных возрастных групп и их ревакцинации. Схемы вакцинации разрабатывают с уче-
том иммунологического статуса вакцинированных свиней и эпизоотической ситуации (68).
С целью передачи потомству материнского иммунитета свиноматок рекомендуют вакцини-
ровать за 20-30 дн до опороса, а полученных от них поросят - на 45-й (63) или на 70-й день
жизни (59). Другие авторы считают, что поросят от полученных свиноматок следует приви-
вать в возрасте 7-9 нед (73, 74, 75, 76, 99). Имеются сообщения, что оральное введение жи-
вой вакцины за 1-2 ч до приема молозива сводит на нет отрицательное влияние материн-
ских АТ и индуцирует устойчивый поствакцинальный иммунитет (13).
На основе монАТ разработана тест-система, позволяющая дифференцировать вакцин-
ные и полевые штаммы ВКЧС, и родственный вирус диареи КРС (81).
Шт. К обладает слабой реактогенностью для свиней всех возрастов, включая новорож-
денных поросят и супоросных свиноматок, он не передается неиммунным животным и при
совместном содержании с иммунными, и не реверсирует при пассировании на свиньях (6-12
пассажей). Он также не персистирует у привитых свиней, а после экспериментального зара-
жения последних вирулентный вирус не выделяется из организма вакцинированных живот-
ных. После 1-кратной прививки свиней старше 3-мес возраста иммунитет наступает через 3-
5 дн. В бывшем СССР в течение многих лет успешно применяли 2 сухие живые вакцины из
лапинизированного шт. К, адаптированного к культуре клеток. Вакцину ЛК-ВНИИВВиМ
готовили из вируса, размноженного в субкультуре клеток тестикулярной ткани ягнят (102).
Вакцину ВГНКИ (103) получали из вируса, репродуцированного в первичной культуре кле-
ток почки эмбриона свиней. Сухие культуральные вакцины отличаются от сухой лапинизи-
рованной (АСВ) более высоким содержанием вакцинного вируса: ВГНКИ - примерно в 10
раз, ЛК-ВНИИВВиМ - в 10-100 раз (104).
Китайский штамм ВКЧС (шт. Porto Allegro) адаптирован к клеткам RK13 (почки кроли-
ка) и уже после 10 пассажей утратил исходную патогенность, сохранив высокую иммунизи-
рующую активность (39, 54, 56). Недавно сотрудниками ВНИИВВиМ был выделен полевой
изолят ВКЧС №. 187Л, обладающий низкой вирулентностью для 3-4-мес поросят, но иден-
тичный шт. Ши-Мынь (35). В Болгарии получена лиофилизированная живая бивалентная
вакцина против КЧС и болезни Ауески. Препарат оказался безвредным для поросят и овец,
стимулирует стойкий иммунитет к обеим инфекциям.
Во ВНИИВВиМ разработан и испытан с положительным эффектом способ пероральной
вакцинации новорожденных поросят против КЧС. Единственным и обязательным условием
является вакцинация тотчас после рождения до контакта с инфицированной средой и до 1-го
9 Зак. № 171
129
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
приема молозива. Поросят допускают к соскам матки не ранее, чем через 30 мин после вак-
цинации последнего поросенка. В силу строения плаценты (сендесмохориальный) ни один
класс АТ, циркулирующих в организме свиноматки, не передается плоду. Поросята рожда-
ются от иммунной свиноматки абсолютно интактными, практически стерильными и имму-
нологически компетентными. Вакцинировать подсосных поросят, уже получивших молозиво
иммунных свиноматок, бессмысленно, так как при наличии колостральных АТ поствакци-
нальный иммунитет у поросят не формируется. Вынужденная вакцинация поросят отъемно-
го возраста чревата риском провокации инфекции, так как нейтрализуя остатки материнских
АТ, вакцина лишает поросят возможности защищаться в инфицированной среде. Следова-
тельно, вакцинировать поросят до отъема еще рано, а после отъема уже поздно. Поэтому
чрезвычайно важно поросенка вакцинировать перорально до сосания, т.е. практически тот-
час после рождения и до контакта его с инфицированной средой, упреждая таким образом
внедрение патогенного вируса (38).
При пероральном введении вакцинный вирус проникает в организм через естественные
ворота инфекции, где организм биологически подготовлен к встрече с агентом, благодаря
мощным лимфоидным образованиям глоточного кольца, которые сразу же запускают им-
мунный процесс. Кроме того, вакцинный вирус, блокируя чувствительные рецепторы, под-
чиняя метаболизм клетки и ее энергетический потенциал регулирующему влиянию генома
вакцинного вируса, лишает полевой вирус обязательных условий, необходимых для проник-
новения и репродукции. Срабатывает механизм упреждения. Таким образом, ни последую-
щее инфицирование поросят полевым вирусом, ни массированное поступление с молозивом
АТ не способны прервать или повлиять на формирование полноценного (с секреторным
компонентом) иммунитета против КЧС. В.Г.Витин и соавт. установили, что 1-кратной перо-
ральной вакцинации новорожденных поросят живой вирус-вакциной (ЛК-ВНИИВВиМ) дос-
таточно, чтобы защитить их от заболевания в течение всего технологического цикла выра-
щивания вплоть до сдачи на мясокомбинат (3, 55).
До настоящего времени ограничено применение рекомбинантных вакцин, полученных
на основе вирусов осповакцины и псевдобешенства (94).
Получена живая вакцина для пероральной иммунизации диких кабанов против КЧС на
основе шт. ЛК-К с активностью 3,0-3,8 1g БОЕ50/О,1мл. Вакцина высушена методом кон-
тактного обезвоживания, обладает хорошей сыпучестью, легко смешивается с кормом. В
опыте использовано 1300 голов диких кабанов, которым дважды с интервалом в 3 дня
скармливали смесь, состоящую из 2 кг зерна и 18 г вакцины в расчете на одно животное.
Через месяц 69%, а через 3 мес 80-90% исследованных животных имели напряженный им-
мунитет (титр ВНА 1:8), который сохранялся на удовлетворительном уровне не менее 3 мес
т.е. по эффективности пероральный метод не уступал парентеральному (95).
Применение инактивированных вакцин. В прошлые годы профилактика КЧС осно-
вывалась на применении кристаллвиолетвакцины, которая, несмотря на ряд недостатков, в
свое время играла положительную роль в санации хозяйств от данной инфекции. С 1967 г.
этот препарат в хозяйствах Российской Федерации и стран СНГ не применяется, хотя мысли
о возможности получения инактивированного и абсолютно безвредного препарата продол-
жают поддерживаться. Так, например, Р.Д.Устаров (25) и В.И.Жестерев и соавт. (6а) пока-
зали, что ВКЧС, выращенный любыми технологическими приемами, надежно инактивиро-
вался сернокислой медью (3-5 мМ) при 37°С в течение 98 ч с сохранением иммуногенных
свойств. Использование других инактивантов (глутаральдегид, димер этиленимина, тритон
Х-100) не обеспечивало получения иммуногенных препаратов в нативном виде (макси
мальная доза АГ). Автором разработана инактивированная вакцина против КЧС, содержа-
щая культуральный материал вирулентного шт. Ши-Мынь, сернокислую медь в качестве
инактиванта и гидроокись алюминия. Вакцина создавала 100%-ную защиту привитых жи-
130
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
вотных от контрольного заражения вирулентным вирусом (1000-10000 ЛДз0), в то время как
аналогичные препараты из шт. ЛК обеспечивали, в общей сложности, 30%-ную защиту. Во
Франции разработана инактивированная вакцина против КЧС. Культуральный вирус инак-
тивировали глутаральдегидом (0,01-0,001%-ным при 25-35°С в течение 4-7 ч), а затем
эмульгировали в масляном адъюванте. Во ВНИТИБП были получены опытные образцы
инактивированной вакцины против КЧС из шт. Гудзон, выращенного в культурах клеток
РК-15, ПЭКр и первичной культуре клеток почки поросенка. Вирус инактивировали этиле-
нимином и эмульгировали с разными масляными адъювантами. Вакцина обеспечивала 75-
100%-ную защиту в экспериментальных условиях при контрольном заражении /10000 ЛДз0
(18,19). Имеется патент на вакцину, содержащую полипептид вируса КЧС (15).
О генноинженерной вакцине против КЧС. В 1991 г. было осуществлено встраивание
генов гликопротеинов ВКЧС в вектор (вирус осповакцины). Полученный рекомбинантный
вирус оказался высокоиммуногенным (70). На поверхности клеток зараженных ВКЧС обна-
ружены гликопротеины Е0 и Е2. Устойчивыми к контрольному заражению оказались только
те животные, которые были привиты рекомбинантным вирусом вакцины, экспрессирующим
Е0 и(или) Е2 (51). В настоящее время получен рекомбинатный аттенуированный вирус БА,
экспрессирующий gp55 (Е2) вируса КЧС. Он вызывал у свиней выраженный иммунитет
против обоих вирусов. Иммунизация свиней белками Е0 и Е2, полученными в оспенно-
бакуловирусных системах, также защищала свиней от летальной инфекции вирусом КЧС
(48а, 48b, 70а, 76а).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Показана возможность
оценки поствакцинального иммунитета по тем же тестам. Например, при помощи РДСК об-
наруживали АТ в 45% случаев в сыворотке свиней, иммунизированных вакциной АСВ (на
6-7-й день после вакцинации). При иммунизации живыми вакцинами ВНА в крови появля-
ются на 7-10-й день, достигая пика (1:128 и выше) к концу месяца, и сохраняются на высо-
ком уровне в течение всего периода невосприимчивости. Вакцинацию можно считать ус-
пешной, если титр АТ в PH флюоресцирующих микробляшек, спустя 2-5 мес после иммуни-
зации, составляет 1:20 и выше. Серологическое обследование поголовья свиней, вакциниро-
ванных против КЧС, позволяет оценивать эффективность проведенной вакцинации.
Оценка напряженности поствакцинального иммунитета проводится по титру АТ. Так
титр АТ 1:32 и выше свидетельствует о напряженном иммунитете. У молодняка до 2-3-мес
иммунитет ненапряженный и титр АТ в РИГА составлял 1:4-1:8. Через 20 дн после вакци-
нации поросят вирус-вакциной титр ВНА постепенно повышался до максимального уровня к
60-му дню, клеточной реакции не отмечено. В 3-х группах поросят, привитых штаммами,
вызывающими хроническую чуму, ВНА не обнаружено, клеточный иммунный ответ наблю-
дали у 4 животных из 9. Наивысший клеточный иммунный ответ был у поросят, иммунизи-
рованных инактивированным вирусом. Несмотря на то, что иммунный ответ у поросят в
разных подопытных группах был неодинаковым, после контрольного заражения вирулент-
ным вирусом выжили все животные.
У поросят, отнятых в 7-дн возрасте от иммунных животных, пассивная защита может
продолжаться свыше 2 мес. При этом уровень иммунитета будет зависеть от времени, про-
шедшего между вакцинацией свиноматки и родами. Так, поросята, рожденные от свинома-
ток, вакцинированных за 10 мес до родов, могут быть вакцинированы не ранее возраста 5
нед. Бустер-вакцинация поросят этой группы в возрасте 6 мес вызывала подъем титров АТ
и устойчивость к вирусу продолжительностью до 4 лет. В ряде опытов поросят, рожденных
от свиноматок, вакцинированных за 1 мес до случки, иммунизировали в возрасте 5, 7 и 9
нед. Несмотря на то, что перед вакцинацией животные имели эквивалентные титры пассив-
но приобретенных АТ, в последующем уровень иммунитета зависел от времени вакцинации:
131
9»
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
чем позже вакцинированы поросята, тем выше титры АТ. Наилучшие результаты получены
в группе поросят, вакцинированных в возрасте 9 нед.
Установлено, что при титре ВНА в PH флюоресцирующих бляшек Г.4 и выше животные
устойчивы к внутримышечному заражению эпизоотическим штаммом в дозе 104 ЛД50, при
титре 1:2 - переболевают и независимо от исхода представляют опасность как вирусоноси-
тели. Однако у значительного числа вакцинированных животных ВНА к ВКЧС отсутствуют.
Среди поросят 30-дн возраста АТ в титре 1:16 были обнаружены лишь у 30%, у остальных
их выявить не удалось. В группах доращивания серопозитивных животных было 16%, в
группах откорма через 140-200 дн после вакцинации серопозитивные животные составляли
50%. Вакцинация поросят от невакцинированных свиноматок в возрасте 9-90 дн вызывала у
них иммунный ответ, который характеризовался появлением в сыворотке крови ВНА, а
также защитой от прямого заражения вирулентным шт. ВКЧС в полевых условиях на 12-18-
й день после заражения. Высокий уровень АТ в сыворотке был обнаружен у поросят через
30-40 дн после вакцинации (20). Отмечено, что материнские АТ не ингибируют вакцинный
вирус, благодаря чему у них и формируется достаточно напряженный вакцинальный имму-
нитет. Все контрольные поросята после прямого заражения пали от чумы. Следовательно,
материнские АТ не обеспечивают достаточно надежную защиту против вирулентных штам-
мов ВКЧС. Продолжительность поствакцинального иммунитета у поросят от не привитых
против чумы свиноматок продолжительнее, чем у поросят от вакцинированных свиноматок.
В связи с этим поросят от вакцинированных свиноматок предпочтительнее вакцинировать в
конце 1-го мес опороса, однако при неблагополучных эпизоотических ситуациях поросят
можно вакцинировать после 2-нед возраста и через месяц ревакцинировать.
Вакцинация поросят, обладающих колостральным пассивным иммунитетом, вызывала
появление у них различного иммунного состояния, которое зависело от количества колост-
ральных АТ на момент вакцинации. Обнаружено, что иммунизация поросят аттенуирован-
ным шт. Тиверваль эффективна тогда, когда нейтрализующая активность сыворотки ниже
уровня колостральной нейтрализующей активности. Это так назывемый порог эффективно-
сти вакцинации, который наступает у поросят в возрасте 30-35 дн. Авторы считают, что
вакцинация поросят от иммунных свиноматок в возрасте 30-35 дн надежно защищает их от
заражения вирулентным ВКЧС (20, 21). Период полураспада материнских АТ у поросят от
свиноматок, иммунизированных за 9 и 5 мес или за 85 дн до опороса, составлял 10 дн; АТ у
поросят обладали высокой или средней авидностью к АГ вируса и оказывали умеренный
эффект на иммунный ответ у поросят после активной иммунизации. У поросят от свинома-
ток, иммунизированных за 55 дн до опороса, период полураспада молозивных АТ составлял
6 дн; АТ обладали слабой активностью и в значительной мере подавляли образование АТ
после активной иммунизации у поросят. У поросят от свиноматок, вакцинированных до су-
поросности, пассивный иммунитет сохранялся до 2 мес, а у поросят от свиноматок, вакци-
нированных за 10 мес до беременности, пассивный иммунитет сохранялся до 5 мес. Вакци-
нация в этот срок защищала более 80% поросят. Если поросят ревакцинировали в возрасте 9
нед, то прочный иммунитет у них поддерживался в течение 4 лет.
В последние годы КЧС в хозяйствах, где проводится ежегодная плановая профилакти-
ческая иммунизация животных, часто проявляется по типу персистирующей инфекции, что
значительно затрудняет постановку диагноза, оценку эпизоотического статуса свинопоголо-
вья и своевременность проведения противоэпизоотических мероприятий.
Для контроля эффективности профилактической иммунизации против КЧС И.Ф. Виш-
няков и соавт. (4,5) рекомендовали проведение серологического обследования свинопоголо-
вья в РНФБ с использованием культуры клеток РК-15.
К серотерапии классической чумы свиней. При лечении поросят гипериммунными
сыворотками получали разный исход в зависимости от стадии болезни в момент серотера-
пии. Так, лечение свиней через 8 сут после заражения не защищает их от гибели, а лечение
132
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
в более ранние сроки приводит к переводу острого течения в хроническое и позволяет жи-
вотным выживать в течение месяца после гибели контрольных животных. Однако у таких
свиней выявляется постоянная виремия - титр вируса в лейкоцитах достигал 104ККИД
5о/млн. кл., а введение иммуномодулятора больным животным приводило к быстрому ле-
тальному исходу в течение 1-2 сут. Все ингибиторы воспалительной реакции вполне способ-
ны ликвидировать симптомы болезни, но не ликвидировать персистенцию вируса в клетках-
мишенях - макрофагах. В то же время все активаторы воспалительной реакции (ЛПС, адъ-
юванты, некоторые медиаторы и т.п.) усиливают симптомы болезни и ускоряют гибель сви-
ней от КЧС (сверх острое течение). Разработан способ получения гипериммунных сыворо-
ток к ВКЧС, позволяющий получать высокоактивные моноспецифические сыворотки крови
с титрами ВНА Г. 16-1:64 и более (36).
Химиотерапия КЧС. В.И.Чермашенцевым и соавт. (32) впервые установили эффек-
тивность нетрадиционной химиотерапии. Применение больным животным комплекса пре-
паратов, обладающих противовоспалительным и антибактериальным действием (фарма
комплекс Анти-КЧС) не позднее 7 сут после заражения вирулентным ВКЧС в дозе 20000
ЛДзо/животное приводило в 100% случаев к клиническому выздоровлению подсвинков в те-
чение 2-4 сут после начала лечения. После выживания поросят в критический период (7-11
сут после инфекции) уровень постинфекционных ВНА у них достигал на 14-е сут защитного
титра (4 1о&) и обеспечивал напряженный и продолжительный иммунитет. Однако следует
иметь в виду, что переболевшие подсвинки представляют определенную опасность как по-
тенциальные вирусоносители и должны выбраковываться. Стоимость полного курса терапии
летально инфицированных свиней указывает на вполне реальную экономическую целесооб-
разность данного мероприятия в индивидуальном порядке.
Предложена новая концепция патогенеза КЧС, на основе которой разработаны способы
обострения хронической болезни и основы патогенетической терапии летально инфициро-
ванных животных. Установлено, что использование активаторов воспалительной реакции
позволяет переводит хроничекое течение болезни в острое, что может иметь диагностиче-
ское значение при КЧС. Разработан эффективный фармакомплекс “Анти-КЧС”, позволяю-
щий добиваться лечебного эффекта в 100% случаев при применении не позднее, чем за 4 сут
до гибели животных (32).
Таким образом, наиболее важными для практики по проблеме КЧС вопросами, тре-
бующими немедленной научной проработки, являются: 1) изучение иммунного статуса жи-
вотных в свинохозяйствах различных типов; 2) изыскание препаратов для коррекции и сти-
муляции иммунного ответа у поросят на АГ КЧС в период доращивания; 3) изучение моле-
кулярной биологии возбудителя; 4) совершенствование вирус-вакцины в направлении по-
вышения и иммуногенной активности и сокращения сроков формирования защиты у живот-
ных, а также групповых методов иммунизации диких свиней; 5) разработка высокоэффек-
тивных инактивированных вакцин на основе культурального вируса и генноинженерных
вакцин; 6) разработка высокоспецифических методов лабораторной диагностики болезни,
выявления вирусоносителей и оценка напряженности поствакцинального иммунитета (16).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Архипов Н.И. и др. В кн Пат. анат. дцагн вир. бол. жив., М., Колос 1984. 2.Борисова О.И. и др.
Матер, и конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992 :153. З.ВигинВ.Г. и др. Мат. и конф. ВНИИВВиМ, По-
кров, 19992 :104. 4.Вишняков И.Ф. и др. Ветеринария, 1985, 7 :31. 5.Вишняков И.Ф. и др. Тез. докл.
н-пр. конф. Новосибирск, 1985 :152. б.Вишняков И.Ф. Ветеринария, 1986, 3 :27. ба.Жестерев В.И. и
др. Пат .№ 93021007/13, опубл. 10.12. 1995. 7.Ильков Р.П. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, Покров,
1992 :125. 8.Иммунопрофилактика болезней животных. М., 1981. 9.Коломыцев А.А. и др. Ветерина-
рия, 1991, 5 :30. 9а.Коломыцев А.А. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :168.
Ю.Коломыцев А.А. и др. Мат. н конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992. Юа.Кломыцев А.А. и др. Мол.
ген микробиол. и вирусол., 1995, 2 :18. 11.Лыска В.М. и др. Тезисы докл. н конф. ВНИИВВиМ. По-
133
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
кров, 1990. 12.Милев Н. Ветер. Сбгфка, 1980, 78, 6:29, 30, 39. 13.Милев Н. и др. Вет. мед. Науки.,
1987, 4 :7. 14.Петков Д. и др. Ветер. Сбгфка. 1979, 77, 2 :12. 15.Патент ЕРО 614979 А1, выдан
AkzoNobel, N.V. (Нидерл.). 1б.РудобельскийЭ.В. и др. Мат. н. конф. ВНИВВИМ, Покров, 1992 :86.
17.Семенихин А. Л. и др. Тез. н. конф. ВНИВВИМ, Покров, 1990 :161. 18.Соловьёв Б.В. и др. Тез.
докл. н. конф. ВНИТИБП, Щелково, 1992. 19.Соловьёв Б.В. и др. Тез. докл. н. конф. ВНИТИБП,
Щелково, 1992. 2О.Сюрин В.Н,Фомина НВ. Част. вет. вирусол. Москва, Колос, 1979. И.Сюрин
В.Н. и др. Диагн вир. бол. жив., М, Агропромиздат, 1991. 22.Сюрин В.Н и др. Лаб. диагн вир. бол.
жив. Москва, Колос, 1972. 23.Фомина НВ. и др. Вгфусы животных, Моск. Вет. академия., 1991.
24.Устаров Р.Д. и др. Мат. и. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992 :122. 25.Устаров Р.Д. Автореф. канд.
дисс., Покров, 1993. 2б.Хухоров И.Ю. и др. Тез. докл. и. конф ВНИИВВиМ, Покров, 1990 :170.
27.Хухоров ИЮ. и др. Тез. докл. и. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1990 :169. 28.Хухоров И.Ю. и др.
Ветеринария, 1991, 6 :26. 29.Чермашенцев Н.А и др. Тез. докл. и. конф. ВНИИВВиМ Покров, 1990
: 130. ЗО.Чермашенцев В.И. и др. Тез. докл. к конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1990 :92. 31.Чермашенцев
В.И. и др. Тез. докл. и. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1990 :55. 32.Чермашенцев В.И. и др. Тез. докл. к
конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1990 :50. ЗЗ.Чермашенцев В.И. и др. Тез. докл. и. конф. ВНИИВВиМ,
Покров, 1990 :95. 34.Чермашенцев В.И. и др. Мат. и. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992 .121.
Зб.Чермашенцев В.Н и др. Мат. и. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992 :101. Зб.Чермашенцев В.И. и
др. Тез. докл. и. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1990 :166. Зба.Чевелев С.Ф. Тез. докл. н-пр. конф.
ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :170. 37.Afshar A et.al. J Virol Meth, 1989, 23 :253. 38.Aynaud J.M. In
Classical Svine Fever and Relted Vir Inf. Ed.B.Liess. Boston: Nijhoff Publishing, 1988, :. 165-180.
38a.Becher P. et.al. Virology, 1995, 209 :200. 39.Biront P. etal. Vet Microbiol, 1987, 14 :105. 40.Cay B.
et.al. Vet Microbiol, 1989, 20 :123. 41.Charley B. etal. Ann Rech Vet, 1980, 11 :27. 42.Cheng X. Sci Agr
Sin, 1992, 5, 3 :76. 43.Corthier G. etal. Ann rech Vet 1978, 9 :245. 44.Dahle J. et.al. J Vet Med B, 1993,
40, 1 :46. 45.Edwards S. et.al. Dtsch Tieraerztl. Wochenschr, 1990, 97 :79. 46.Frey HR. et.al. Zbl
Veterinarmed,1980, 27, 2 :154. 47.Hanson RP. J Am Vet Med Ass, 1957, 131 :211. 47a.Harding M. et.al.
J Clin Microbiol, 1994, 32 :2600. 48.Holm J.M. Acta Vet Scand, 1981, 22 :85. 48a.Hulst M.M. et.al.
Virol, 1991, 200 :558. 48b.Hulst M.M. et.al. J Virol, 1993, 67 :5435. 49.Horzinek M.C. N.Y. Academic
Press, 1981. 49a. HorzinekM.C. Arch Virol, 1991, 3 :1. SO.Krassnig R. et. al. Wien Tierarztl. Monatsschr,
1993, 80, 8 :229. Sl.Koenig M. et.al. J Virol, 1995, 69, 10 :6479. 52.Liess B. et.al. Rev Scient techn off
intern Epizoot, 1990, 9, 1 :151. 53.bin T.T. et.al. Proc 7th fait Congr Pig Vet Soc, Mexico City, :132. 54-Lin
S.T. et.al. J Virol Meth, 1991, 35, 2 .227. 54a.Lowing J.P. et.al. J Gen Virol, 1994, 75 :3461.
55.Markowska D.J. et.al. Med Vet 1994, 50, 4 :159. 56.Martins RM. Agr bros med vet e zootechn, 1991,
43, 4 :301. 57.Meyer H. et.al. Zbl Veterinarmed, 1981, 28, 8 :659. 58.Meyers G et.al. Virology, 1989, 171
:555. 59.Mondini S. Sci vet e biol anim, 1986, 5,5, 33, 35. 60.Moennig V. etal. Dtsch Tieraerztl
Wochenschr 1990, 97 :91. 61.Moennig V. Comp Immun Microbiol and Infect Diseases, 1992, 15, 3 :189.
62.Moormann R.J.M. et.al. Virus Res, 1988, 11 :281. 63,Panjevic D. Veter Glasnik, 1986, 40 :13L.
64.Pearson J.E. Comp Imm Microbiol and Infect Dis, 1992, 15, 3 :213. 65.Pejson Z. Med Vet 1993, 49, 6
:265. 66.Peters W. etal. Vet Microbiol, 1986, 12, 195. 67.Picard M. Epidemiol Sante Anim, 1989, 16 :27.
68.Remond M etal. Zentralbl Veterinaermed,1981, 28 : 743. 69.Ruminapf T. etal. Virology, 1989, 171, 1
:18. 70.Ruminapf T. et.al. Arch Vir, 1991, Suppl, 3, 7. 70a.Ruminapf T. et.al. J Virol, 1991, 65 :589.
71.Schelp C. etal. Arch virol, 1991, 3 :209. 72.Stewart W.C. In Dis of Swine, 5th ed. Ed. A.D. Leman,
Iowa St Univ Press, 1981. 73.Terpstra C. etal. Veter Q, 1987, 9 :50. 73a.Terpsta C. Brit Vet J, 1991, 147
:397. 74.Terpstra C. et.al. Vet Microbiol, 1987, 13 :143. 74a.Terpatra C. et.al. Dtsch Tierarztl Wchenschr,
1990, 97 :77. 75.Terpstra C. etal. Vet Microbiol, 1984, 9 .113. 76.Terpstra C. etal. Res in veter Sci, 1988,
45, 137. 76a. Van Zijl M. et.al. J Virol, 1991, 65 :2761. 77.Van der Molen et.al. Zentralbl. Veterinarmed,
1981, 28 :89. 78.VanOirschot J.T. etal. Vet Microbiol, 1981, 6 :41. 79.VanOirschot J.T. Hog Holera.”Dis
of sw Ed. Leman., lova St.Un. Press,1994. 80.Wensvoort G. Thesis State Univ of Utrecht, 1989.
81.Wensvoort G. etal. Vet Microbiol, 1986, 12, 2 :101. 82.Wensvoort G. et.al. Vet Microbiol, 1988, 17
:129. 83 Wensvoort G. et.al. Vet Microbiol, 1989, 21 :9. 84.Wensvoort G. etal. Vet Microbiol, 1989, 20
:291. 85.Weiland E. et.al. J Virol, 1990, 64 :3563. 85a.Wirz B. et.al. J Clin Microbiol, 1993 , 31 :1148.
86.Collet M.S. et.al. J Gen Virol, 1989, 70 :253. 87.Витин В.Г. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. ВНИ-
ИЗЖ, Владимир, 1995 :180. 88.Вигина С.А. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф., Владимир, 1995
: 104. 89Безбородова С.В. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. Владимир, 1995 :14 90.Безбородова
С.В. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. Владимир, 1995. 91.Ильясов и др. Тез. докл. Всеросс. н-
134
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
пр. конф. Владимир, 1995 :41. 92.Новожипова Е.В. и др. Тез. докл. Всеросс. н.-пр. конф. Владимир,
1995 .43. 92а.Ющенко Ю.А. и др. Тез. докл. и.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :27. 93.Юрков
С.Г. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. Владимир, 1995 :83. 94.Цыбанов С.Ж. и др. Ветеринария,
1995, 3 :14. 95.Хрипунов Е.М. и др. Ветеринария, 1995. 96.Юсупов Г.Р. и др. Тез. докл. Всеросс. н-
пр. конф., Владимир, 1995 :209. 96а.Юсупов Р.Х. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир,
1995 :39. 97.Wensvoort G. J Gen Virol, 1989, 70 :2865. 98.Collett M.S. et.al. Virol., 1988, 165 :200.
99.Terpstra C etal. Dtsch tieraertzl Wochenschr, 1990, 2 :77. ЮО.Ильясова Г.Х. и др. Тез. докл. Все-
росс. и.-пр. конф., Владимир, 1995 :42. 1О1.Шубина Н.Г. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф., Вла-
димир, 1995. 102.Попов В.И и др. Ветеринария, 1983. ЮЗ.Мищенко Н.К. и др. Ветеринария, 1983.
1О4.Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев, Урожай 1993. Юб.Балышева В.И. и др. Тез. докл. Все-
росс. и.-пр. конф., Владимир, 1995,82.
ВИРУСНАЯ ДИАРЕЯ-БОЛЕЗНЬ СЛИЗИСТЫХ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine Viral Diarrhea/Mucosal disease (англ.); Schleimhautkrankheit der Rinder
(нем.); Maladia muqueuse des bovines (франц.); Diarrea virica bovina (ней.)
Вирусная диарея - болезнь слизитых оболочек (ВД-БС) - инфекционная контагиозная
болезнь КРС, преимущественно молодых животных, характеризующаяся эрозивно~
язвенным воспалением слизистых оболочек пищеварительного тракта, ринитом, увеличени-
ем лимфоузлов, высокой лихорадкой, общим угнетением, лейкопенией, постоянной или пе-
ремежающейся диареей, эрозивным и язвенным стоматитом с обильным слюноотделением,
появлением слизисто-гнойных истечений из носовой полости. У коров возможны аборты.
Впервые как самостоятельное заболевание ВД-БС была определена в штате Нью-Йорк
(США) в 1946 г. при вспышке острой, часто со смертельным исходом болезни КРС, харак-
теризовавшейся диареей и эрозийными поражениями ЖКТ. В настоящее время ВД-БС ши-
роко распространена на территориях многих стран и вместе с 2-мя другими пестивирусами
(ВКЧС и вирус ПБО) инфицирует 173 вида домашних и диких жвачных животных и 11 ви-
дов свиней. Имеются публикации об обнаружении АТ и АГ пестивируса у человека, но
возможность его инфицирования только предполагается.
На основании различий в клинических проявлениях вирусную диарею и болезнь слизи-
стых оболочек КРС первоначально рассматривали как разные болезни. Позднее на основа-
нии анализа патологических изменений, особенностей эпизоотологии и клинических прояв-
лений эти 2 болезни стали обозначать под названием вирусная диарея - болезнь слизистых
оболочек КРС (119,132). Поскольку установлена идентичность возбудителей этих болезней,
то их считают одной инфекцией с различными клиническими проявлениями, преимущест-
венным развитием респираторного или диарейного синдрома, в связи с чем болезнь чаще
стали называть вирусная диарея КРС (2а).
Болезнь зарегистрирована во всех странах мира. В некоторых штатах США обнаружи-
вается до 70-90% серопозитивных животных (16,18).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Симптомы болезни,
тяжесть переболевания, широта распространения и процент летальности зависят от виру-
лентности вируса, чувствительности животных и наличия неблагоприятных факторов. В ес-
тественных условиях болеют телята 5-6-мес возраста. Среди взрослых коров до 90% живот-
ных могут иметь специфические АТ, однако клинически болезнь не проявляется. Особенно
типично она протекает в откормочных хозяйствах среди молодняка КРС. В Австралии ВД-
БС поражает овец. Различают острое, подострое, хроническое и латентное течения болезни.
При остром течении симптомы появляются внезапно и выражаются лихорадкой (39,5-
42,4°С) в течение 12-60 ч, умеренной или сильной депрессией, тахикардией, учащением ды-
хания и потерей аппетита, появлением множества эрозий и язв на слизистых оболочках ро-
135
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
товой полости и почти всего пищеварительного тракта (Рис. 135). С подъемом температуры
регистрируют лейкопению. Особенностью острой формы ВД-БС является тромбоцитопения
~(ТЗЗ, 144). У коров может развиваться и генитальная форма в результате контаминирования
спермой. Эта форма у коров может клинически и не проявляется, однако имеются данные о
том, что ВД-БС может быть связана с воспалением яичников у яловых телок (5).
У больных животных наблюдается истощение, обезвоживание и ацидоз. У лактирую-
щих коров снижается продуктивность. При осмотре ротовой полости у больных животных
можно обнаружить эрозии на губах, краях десен, языка, комиссуры рта и задней части твер-
дого нёба. Поражения могут сливаться, формируя большие зоны некроза и отторгаться в ро-
товую полость. Эрозии могут развиваться на носовом зеркальце, ноздрях и в носовой полос-
ти, а также вызывать сходные поражения вульвы и сосков вымени. Гиперсаливация являет-
ся результатом поражения ротовой полости, которые встречаются в среднем у 75-80% боль-
ных животных. Часто наблюдается слизисто-гнойное истечение из носа, иногда слезотече-
ние и отек роговицы. Отмечают также хромоту, затрудняющую движение, связанную с эро-
зиями и некрозом кожи межкопытной щели, ламинит и воспаление венчика. Профузная
диарея часто развивается на второй, третий день после появления клинических признаков,
но в сверхострых ситуациях смерть может наступить раньше развития этого симптома. В
i фекалиях часто обнаруживают фибринозные отторжения. Движения рубца уменьшаются и
слабеют, развивается умеренная тимпания (9,33).
На ранних стадиях заболевания отмечают сильную лейкопению. Развивается лимфопе-
ния без сдвига влево и тромбопения; секундарные инфекции обычны. Смерть может про-
изойти в острой фазе болезни, но чаще через 3-10 дн после проявления клинических при-
знаков. На 7-9-й день появляется диарея и продолжается 1-4 нед. Испражнения водянистые,
темные, содержат пузырьки зловонных газов, часто сгустки слизи и крови. В затяжных слу-
чаях в области шеи, плеч, колен, промежности и седалищных бугров кожа сморщивается,
становится жесткой и покрывается перхотью. На препуции, основании мошонки и вымени
появляются эрозии и засохшие корочки экссудата. Иногда выпадают волосы. Больные жи-
вотные сильно худеют.
У пораженных коров отмечают выраженное снижение молочной продуктивности, абор-
ты, гибель 6-8% телят от гнойной или фибринозной пневмонии, а у более старших (от 3 нед
до 5 мес) - гибель от диареи с поражением кишечника. Телята, персистентно инфицирован-
ные вирусом диареи, после инфекции in uteri предрасположены к инфекции другими микро-
организмами, имеющимися в стаде, что приводит к развитию у них пневмонии (137а, 147).
Чаще всего абортируют коровы, зараженные в ранний период стельности. С увеличением
срока стельности острота инфекции у плода снижается. Болезнь продолжается от 4 дн до 2
нед и почти всегда заканчивается летально. У новорожденных телят наблюдается мозжеч-
ковая гипоплазия, проявляющаяся затрудненным вставанием и выраженной атаксией. У те-
лят с гипомиелогенезом наблюдается тремор мышц сразу после рождения. Врожденные де-
фекты глаз могут привести к слепоте различной степени. При офтальмологическом исследо-
вании легко выявляется катаракта. Недоразвитие скелетномышечного аппарата может при-
вести к задержке роста плода (80). Это проявляется рождением слабых, мелких телят, кото-
рые часто гибнут уже в первые дни жизни. Телята, рожденные персистентно инфицирован-
ными коровами, имеют низкую жизнеспособность, подвержены ранним болезням и обычно
погибают. Болезнь может проявляться респираторным и энтериты ым синдромами (34).
На поздних стадиях стельности (после начального формирования иммунокомпетентно-
сти) инфекция редко вызывает врожденные пороки. Телята могут родиться нормальными и
иметь ВНА к вирусу, однако они всегда будут внутриутробно инфицированными носителя-
ми вируса диареи (ВД). Новорожденные иммунокомпетентные телята могут заражаться от
матерей при рождении. В таком случае часто развивается тяжелая форма энтерита, которая
136
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
сопровождается высоким процентом летальности (129). От больных коров-матерей часто
рождаются телята с признаками ВД-БС. У них отмечают некрозы в легких, коже, мозге или
поражения в ротовой полости, лихорадку, лейкопению, поражения в носовой полости. Па-
деж при дегидратации наступает в период от 18 до 96 ч.
Подострое течение характеризуется внезапностью, подъемом температуры тела на 1-
2°С, учащенным сердцебиением и дыханием, снижением или полной потерей аппетита. У
некоторых больных поражаются слизистые оболочки ротовой полости, появляются истече-
ния из носа, кашель и кратковременная (12-24 ч) диарея. Иногда болезнь протекает атипич-
но и сопровождается гиперемией, цианизом слизистых оболочек и атонией преджелудков.
Абортивное течений инфекции, проявляющееся невысокой кратковременной лихорад-
кой, незначительным ринитом, иногда диареей, чаще наблюдают у молодняка старшего
возраста и коров, в тех стадах, где регистрируют хроническое течение болезни; болезнь
длится 3-4 дн, больные животные выздоравливают. Хроническое течение ВД-БС чаще на-
ступает после острой вспышки болезни. Характерны длительная диарея и кахексия. Часто
инфекция протекает субклинически (стертая форма), иногда сопровождается абортами, по-
носами и появлением слабого потомства. При латентном течении болезнь протекает бес-
симптомно и переболевание определяют по наличию специфических АТ. Последние часто
находят у клинически здорового КРС неблагополучных хозяйств.
Превалирующее течение болезни - острое, одно из наиболее редких течений - перси-
стентная инфекция (1 случай на 100 или 1000 животных). Она развивается у телят, рожден-
ных от персистентно инфицированных коров при заражении эмбриона в течение первых 4
мес стельности нецитопатогенным вирусом. Хроническое течение ВД-БС - следствие перси-
стентной инфекции. Идентификация персистентно инфицированных животных основана на
выделении вируса и обнаружении ВНА. Однако не у всех персистентно инфицированных
животных образуются ВНА к не цитопатогенному вирусу. Bolin S.R. (45) привел схемы раз-
вития различных клинических течений болезни, вызываемых цитопатогенными и нецитопа-
тогенными вирусами, и прямых методов диагностики (45).
Характерные патологоанатомические изменения обнаруживают на слизистых оболочках
ЖКТ и верхних дыхательных путей. Эрозии и язвы находят на слизистой оболочке губ, щек,
десен, на боковых поверхностях языка, на нёбе, у основания гортани. Аналогичные пораже-
ния обнаруживают в рубце и сычуге. В тонком кишечнике отмечаются изменения, харак-
терные для катарального, фибринозно-некротического или геморрагического энтерита. У
отдельных больных животных на 21-й день после заражения отмечают поражения глаз.
Врожденная курчавость волосяного покрова телят является симптомом персистентной ин-
фекции у коров (100). Полагают, что вирус может индуцировать у телят диабет (31,141).
Клиническое проявление ВД-БС в определенной степени зависит и от биотипа зара-
жающего штамма. Так, цитопатогенный шт. TVM-2 вызывает у телят явные клинические
признаки, характерные для острого течения болезни. Не цитопатогенный шт. Нью Йорк-1
вообще не индуцирует каких-либо клинических признаков болезни. Однако инфицирование
любым из 2-х биотипов телят, иммуносупрессированных дексаметазоном приводит к ле-
тальному исходу. Смешанная инфекция, вызываемая обоими биотопами, не вызывает ка-
кой-либо серьезной болезни, что, возможно, исключает потенциальную иммуносупресси-
рующую активность самого вируса (57).
В США сообщалось о геморрагическом синдроме у КРС с острой инфекцией, вызванной
нецитопатогенными штаммами ВД КРС. Отмечалась тяжелая тромбоцитопения. Аналогич-
ный синдром идентифицирован в нескольких стадах Южной Бельгии (48).
Патогенез. Вирус легко преодолевает плацентарный барьер и вызывает у плода разви-
тие патологических изменений, приводящих к морфологическим и функциональным нару-
шениям (церебральная гипоплазия, микроофтальмия, катаракта). Если заражение плода
137
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
произошло в течение первой половины беременности, развивается иммунологическая толе-
рантность и теленок родится персистентно инфицированным нецитопатогенным штаммом
вируса. Если такие животные суперинфицируются цитопатогенным штаммом вируса, раз-
вивается тяжелая болезнь с летальным исходом. Если суперинфекция вызвана гетерогенным
цитопатогенным штаммом вируса, то развивается хроническая болезнь (92). У большинства
телят, родившихся от больных матерей, еще до первой дачи молозива имеются ВНА, что
свидетельствует о внутриутробном инфицировании.
В патогенезе болезни характерным моментом является блокирование иммунореактивно-
сти организма вследствие поражения иммунокомпетентных клеток, доказательством чему
служит значительное снижение титров противовирусных АТ и, в частности противогрип-
позных, после заражения телят ВД. При ВД-БС КРС подавляются нормальные защитные
механизмы, предположительно гуморальные факторы или фагоцитарная функция, что при-
водит к неингибируемому циркулированию бактерий в крови. Последствием клинически
f легкой диареи КРС является иммуносупрессия, повышается восприимчивость животных к
^другим инфекциям. Персистентная форма ВД-БС наблюдается у телят, родившихся от ко-
ров, зараженных не цитопатогенным вирусом. Клинически такие телята представляются
здоровыми, хотя у них наблюдается постоянная виремия. Полагают, что ВД путем подавле-
ния иммунных реакций способствует диссеминации вируса ИРТ в организме телят. Показа-
на возможность передачи инфекции через инфицированную вирусом сперму и способность
трансплацентарной передачи. Вирионы и обусловленные вирусом ультраструктурные изме-
нения выявляются, главным образом, в Т-лимфоцитах, моноцитах и лишь в единичных слу-
чаях в В-клетках. В патогенезе ВД-БС еще многое не ясно. Например, в сыворотке крови
реконвалесцентов до 9-18 мес выявляются специфические АТ, далее животное становится
серонегативным, но не выздоравливает. У таких хронически больных животных удается
выделить вирус из крови и лимфоузлов. Не ясна причина, обусловливающая серонегативное
состояние больного хроника. Трансплантация лимфоцитов от такого животного здоровому
сопровождается заболеванием и гибелью от обезвоживания в течение 6 мес.
У плодов после заражения отдельных коров (150-дн стельности) на 17-й день находили
воспаление мягких оболочек мозга, некроз клеток наружного зародышевого листка, очаги
геморрагий и умеренный отек. На 42-й день поражались весь мозжечок, кожа
(ненормальный волосяной покров) и бронхиолы. Нередки случаи мумификации плода. Ус-
тановлена следующая зависимость действия вируса на зараженные эмбрионы, при зараже-
нии эмбрионов до 125-дн возраста наблюдали латентную персистентную инфекцию (не ци-
топатогенным штаммом) или с проявлением симптомов болезни (цитопатогенным штам-
мом). Инфицирование приводило к аборту стельных коров или рождению нежизнеспособно-
го потомства (со скрытой инфекцией). Гибель телят при остром течении болезни наступала
в течение 5-7 сут, при хроническом - от 10 сут до нескольких месяцев; у телят развивались
эрозии и язвы на слизистой оболочке носа.
Помимо мононуклеарных клеток, АГ ВД-БС обнаруживают в лимфоидной ткани плодов
КРС. Инфекция плодов ведет к патологическим изменениям лимфоидной ткани, гипоплазии
тимуса. Гистопатологические изменения обнаружены в мозжечке, коже и слизистых обо-
лочках. С 5-мес срока стельности титр специфических АТ у плода нарастает. При зараже-
нии плода в 7-мес возрасте вирус, как правило, в организме не находят, так как титр АТ
достаточно высок. С возрастом плода нарастает способность его отвечать плазмоцитарной
реакцией в ответ на заражение. Интересно, что IgM у плодов от зараженных стельных коров
появляется примерно через 2 нед после инокуляции вируса коровам и через 7 дн он сменял-
ся IgG. Предполагают, что раннее появление 1g в сыворотках эмбрионов - результат АГ ак-
тивации поликлональных В-клеток эмбриона. С эпизоотической точки зрения вертикальная
передача ВД играет важную роль в поддержании и сохранении инфекции. При наличии на
138
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
ферме вирусоносителей другие телята активно продуцируют АТ после исчезновения мате-
ринских АТ, не проявляя симптомов болезни.
Предложена и экспериментально доказана гипотеза, согласно которой для появления
клинически выраженной болезни требуется персистентная инфекция животных нецитопато-
генным и последующая инфекция цитопатогенным ВД. Животные становятся персистентно
инфицированными нецитопатогенным вирусом после внутриматочной инфекции плода до
развития иммунокомпетентности. Когда в постнатальный период такие телята суперинфи-
цируются цитопатогенным ВД, это приводит к появлению клинически выраженной болезни,
обычно заканчивающейся летально (51, 37, 131, 138). Не цитопатогенные штаммы вызыва-
ют латентную персистентную инфекцию КРС без образования АТ, что предрасполагает к
развитию тяжелого клинически выраженного заболевания после заражения цитопатогенным
штаммом ВД (44). Цитопатогенные штаммы вируса попадают в организм извне или появ-
ляются в результате мутации эндогенного нецитопатического штамма.
Болезнь слизистых оболочек с тяжелой диареей, выделениями из носа, язвами на слизи-
стой оболочке рта иногда заканчивается летально. Смерть обычно наступает через 1-3 нед
(32, 73). Основная причина снижения репродуктивной способности коров при ВД-БС - это
нарушение оплодотворения. ВД оказывает иммуносупрессивное действие, связанное с по-
давлением защитной функции и разрушением инфицированных лимфоцитов и лейкоцитов
(клеток-мишеней) (54а, 137а, 67), что в полевых условиях резко снижает устойчивость телят
и повышает тяжесть неонатальных диарей и респираторных заболеваний (32, 98).
Распространение повреждений при БС связано со способностью прямого некротического
воздействия вируса на эпителиальные клетки ЖКТ. Вирус также воздействует на эндотели-
альные клетки сосудов, особенно в кишечнике и лимфоидной тканн (33). Наиболее часто у
вирусоносителей возникает хроническое течение болезни. Патогенез хронической болезни
слизистых не определен, но он во многом сходен с таковым при остром течении болезни.
Как и при остром течении ВД-БС может быть вызвана как нецитопатогенным, так и цитопа-
тогенным штаммами вируса (110). Предполагают, что различия в антигенности суперинфи-
цирующего цитопатогенного вируса дают различную клиническую картину у персистентно
инфицированных животных (46, 49, 50). В одном случае это может проявляться острым те-
чением, когда суперинфицированный вирус обладает близкой гомологией с персистентно
инфицирующим нецитопатогенным штаммом, в другом - латентным течением без клиниче-
ских симптомов. Между 2-мя этими крайностями может встречаться течение болезни, опи-
сываемое как хроническое. Хроническое течение характеризуется отсутствием аппетита, по-
терей массы тела, прогрессирующим истощением и задержкой развития животного. Диарея
может быть постоянной и перемежающейся. Может наблюдаться хроническая пневмония,
часто появляются носовые и глазные истечения. Могут развиваться аллопеции (обычно в
области шеи) и гиперкератозы. Хронические эрозии часто обнаруживают в ротовой полости,
на коже промежности, препуции, вульве, вокруг рудиментарных пальцев, межпальцевой
щели и пяточной части копытца. В этих случаях обычны секундарные бактериальные ин-
фекции. Животные с хронической ВД-БС могут прожить до 18 мес и, в конце концов, поги-
бают от тяжелого истощения или секундарной инфекции (33).
Влияние вируса на плод. Плоды КРС очень чувствительны к заражению ВД из-за сво-
ей агамма-глобулинемии, иммунологической незрелости и наличия во многих органах не-
дифференцированных клеток. Цитопатогенные штаммы вируса ПБО повреждают плаценту
и плод. При заражении коров шт. NADL и овец шт. ВД-3 наблюдается ранняя смерть эм-
брионов, аборты, мертворождения, недоразвитость плодов, малая масса родившихся телят,
наличие у них вирусной персистенции и иммунологической толерантности. На 80-90-й день
стельности изменения выявлялись в легких плода и коже, при инфицировании на 140-150-й
день возникала дисплазия сетчатки и гипоплазия мозжечка, вызванная непосредственным
139
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
повреждением вирусом этих органов. При заражении суягных овец шт. ВД-3 ягнята рожда-
лись слабыми, с курчавой шерстью. У них наблюдался тремор, персистентная виремия, им-
мунологическая толерантность и гипомиелинизация (121,125).
Конгенитальные аномалии. В 1986-97 гг. в Японии были зарегистрированы 25% кон-
генитальных аномалий на ферме молочного скота голштино-фризской породы. Часть коров
абортировали, у 43% родились телята с нарушением ЦНС. Инфицирование происходило
между 90-150 дн беременности. Инфицирование после 150 дн беременности не отражалось
на (140) иммунотолерантности плода к ВД-БС. Такие телята оставались на всю жизнь пер-
систентно инфицированными. Иммунотолерантность и персистентная инфекция встречают-
ся естественно и могут быть воспроизведены экспериментально. Точная стадия развития
плода, когда инфекция может вызвать иммунотолерантность, неизвестна, однако приблизи-
тельно она возникает в сроки 100-125-дн стельности. Кроме того, показано, что иммуното-
лерантность и персистенция обусловлены только не цитопатогенными штаммами ВД (39,
40, 41, 43, 44,110).
Инфицирование коров в период 50-100-дн стельности может привести к смерти плода с
последующей его мумификацией, абортом или мертворождением (27, 128). Освобождение
от плода может произойти в промежутке от нескольких недель до месяца после заражения,
однако в стационарно неблагополучных стадах процент таких случаев низок. В стадах, где
преобладают коровы, не имеющие АТ к ВД КРС, этот процент может достигать 30 (25, 72).
Инфицирование плода примерно 100-150-дн стельности может привести к появлению врож-
денных дефектов у новорожденных телят (73, 103, 105). В этот период вирус поражает ство-
ловые клетки развивающихся систем.
Связь биотипов вируса с клиническим проявлением заболевания. Воздействие и
взаимодействие 2-х биотипов вируса, описанных ранее, в последние 6 лет стало предметом
пристального изучения и вызывает не только научный, но и практический интерес к рас-
шифровке патогенеза ВД-БС КРС. При остром течении инфекции первично вирус проникает
через слизистую носа или рта, затем распространяется по лимфоидной системе организма.
Некоторые полевые штаммы хорошо адаптируются к росту на слизистой оболочке носовой
полости (94). Эта способность быстрой репродукции в слизистых оболочках рта и носа мо-
жет объяснить возникновение слюнотечения, неглубоких эрозий, язв, а также катарального
воспаления тонкого кишечника, что характеризует острую инфекцию. Дальнейшие ослож-
нения острой инфекции встречаются, когда к ВД-БС КРС присоединяются другие патогены.
Многократно отмечали смешанные инфекции с возбудителем ИРТ (1), респираторно-
синцитальной инфекцией (139а). ВД-БС в ассоциации с ротавирусной и коронавирусной
(145), или сальмонеллезной (140) инфекциями проявляется в виде тяжелой формы болезни с
энтеритным синдромом.
Некоторые эпителиальные ткани поддерживают репликацию ВД. Его АГ бьш обнару-
жен в кератоцитах языка, кожи и губ (36) и это может быть связано с образованием эрозии в
ротовой полости, на носовом зеркальце, что характерно для хронического течения болезни.
Необходимость антигенной гомологии между персистирующим и суперинфицирующим био-
типом вируса стала решающей для развития клиничски выраженной формы ВД-БС и инду-
цирования персистенции и иммунотолерантности (50). Выявлено, что VII биотип имеет тро-
пизм к мезентериальным лимфоузлам (60) и что при последующем развитии поражений
этот биотип вируса быстро переходит в пейеровы бляшки (52), вызывая их поражение и
диарею. Патогенез хронического течения болезни объяснить трудно. В подавляющем боль-
шинстве случаев персистентно инфицированные животные не проявляют хроническую фор-
му болезни и этот синдром экспериментально не воспроизводится. Если иммунотолерант-
ные животные суперинфицируются VII изолятом, который только частично гетерологичен и
140
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
на его детерминанты могут быть выработаны АТ, то такой вирус из организма полностью не
элиминируется.
В патогенезе БС первоначально не цитопатогенный вирус заражает плод и приводит к
развитию персистентной виремии у телят. БС у таких телят может возникнуть при суперин-
фекции “гомологичным” цитопатогенным вирусом, образовавшимся в результате мутации.
По мнению Becker J.C., БС - это спорадическая форма ВД, возникающая обычно у жи-
вотных в возрасте от 6 мес до 2-х лет. Заболевает менее 5% животных, но летальность дос-
тигает 100% (33). Хроническая болезнь может развиваться у телят при суперинфекции гете-
рогенным цитопатогенным биотипом вируса с персистентной виремией (53). У персистент-
но инфицированных быков ВД постоянно контаминирует сперму, которая служит источни-
ком заражения чувствительных к вирусу телок, но инфекция не всегда передается потомству
вертикально (123).
В патогенезе ВД-БС первыми поражаются нейтрофилы, затем инфицируются макрофа-
ги, отмечается 2-кратное уменьшение числа Т-супрессоров с сохранением числа Т-хелперов
без изменений. Увеличивается содержание общего белка и IgG, а снижение числа В-
лимфоцитов и моноцитов бывает переходящим и нормализуется к 30-му дню (3). Поскольку
вирус реплицируется во всех главных субпопуляциях лимфоцитов и в других клетках, ре-
зультатом могут быть лейкопения, что является продолжением инфекции; повреждаются В-
клетки и Т-клеточные субпопуляции. В- и Т- клетки повреждаются вследствие воздействия
ВД и их способность противостоять другим инфекциям утрачивается (93, 94).
Согласно концепции патогенеза ВД-БС (131) клинически выраженное заболевание воз-
никает только у животных, которые инфицируются вирусом на ранней стадии беременности
и рождаются с персистирующей вирусной инфекцией и специфической иммунотолерантно-
стью. Врожденные дефекты могут развиваться, когда инфекция плода происходит на про-
межуточных сроках стельности. Плод может быть инфицирован внутриматочно на поздних
строках стельности, при этом инфекция не персистирует и у плода вырабатываются АТ. По-
стнатальная инфекция проявляется в виде субклинических заболеваний с нормальным им-
мунным ответом (90,131).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Прошло более 50 лет с тех пор, как Olafson Р., Mac Collum A.D. и Fox F.H. (119) и
Childs Т. (62) одновременно описали болезнь КРС, протекающую с острым энтеритом, ко-
торый вызывается вирусом (92а).
Морфология и химический состав. Установлено наличие 8 вирусспецифических бел-
ков (VP1-VP8) с мол. м. от 120кД (VP1) до 230кД (VP8). Геном вируса представлен 1-
нитевой РНК, состоящей из 9800±200 нуклеотидов. Идентифицированы структурные и не-
структурные полипептиды и кодирующие их участки генома (63). В геномах обоих шт. ВД в
области кодирования неструктурного белка pl25 обнаружены небольшие вставки клеточных
последовательностей, отсутствующие в штаммах вируса КЧС. Вставка, идентифицирован-
ная в шт. Ослосс ВД-БС кодирует полный элемент, похожий на убиквитин. Вставка в гено-
ме шт. NADL не имеет гомологии с геном убиквитина, но почти полностью идентична по-
следовательности другой мРНК КРС. Ген белка р80 шт. Osloss ВД КРС амплифицирован
методом ПЦР и клонирован в E.coli на плазмидном векторе под контролем просмотра фага
Т7. Экспрессия р80 в E.coli вызывает образование цитоплазматических телец-включений,
которые денатурировались мочевиной и ренатурировались диализом (85а, 86,102).
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину и дезоксихолату.
Быстро инактивируется при pH 3. При изменении pH среды от 5,7 до 9,3 инфекционность
его снижается, он наиболее устойчив при рН7,4; переносит температуру 4°С, годами сохра-
няет активность при температуре ниже -20°С. ВД КРС обладает высокой устойчивостью,
141
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
хорошо сохраняется в нативном виде без добавления стабилизирующих р-ров при 4°, -20°, -
40°С и в лиофилизированном состоянии, восстанавливая заданные характеристики (8а).
Однако имеются сообщения, что при -20° С некоторые штаммы вируса быстро гибнут, а
последовательное замораживание и оттаивание ведет к инактивации. В культуральной жид-
кости при -15°С вирус активен до года; в крови, лимфоузлах, селезенке и другом патологи-
ческом материале сохраняется до 6 мес; при 37°С погибает через 5 дн. Прогревание (56°С) в
течение 15 мин снижает его активность в 10 раз, однако для полной инактивации при этой
температуре требуется 1 ч. Добавление к среде IM MgCl2 не стабилизирует вирус при 50°С.
Антигенная структура. В структуре VP3 вируса выявлено 3 АГ-участка, один из кото-
рых оказался высоко консервативным нейтрализующим эпитопом (40). Только монАТ к
консервативному эпитопу ВД узнают все изоляты этого вируса и не реагируют с изолятами
вирусов КЧС и пограничной болезни (109).
Геном шт. Osloss представляет собой (+) нить РНК длиной 12480 нуклеотидов и может ко-
дировать полипротеин из 3975 аминокислотных остатков. Получены данные, подтвер-
ждающие возможность различать близкородственные пестивирусы мелких жвачных, вирус
ПВО и ВД КРС (113а). Гликопротеин 53-58 кД является основным белком, ответственным
за выработку ВНА у инфицированных (151,152) и вакцинированных животных (45а). С по-
мощью монАТ дифференцировано два биотипа ВД КРС - цитопатогенный и нецигопатоген-
ный. В организме персистентно инфицированных животных нецитопатогенные штаммы ви-
руса могут превращаться в цитопатогенные путем включения клеточных последовательно-
стей в геном вируса в результате рекомбинации (114а). Первоначально нецитопатогенный
вирус заражает плод и приводит к развитию персистентной виремии у телят. У последних с
персистентной виремией хроническая болезнь может развиваться вследствие суперинфек-
ции гетерологичным цитопатогенным биотопом вируса (53).
Недавняя оценка патогенности цитопатогенного и нецитопатогенного биотопов ВД при-
вела к выявлению детерминации цитопатогенности. Полагают, что цитопатогенный биотип
вируса возник в результате мутации от низко патогенного биотипа в организме персистент-
но инфицированных животных (95), причем эта мутация, видимо, расположена в гене ви-
русной протеазы, которая ответственна за расщепление полипептида предшественника
(67а). Генетические различия между цитопатогенным и нецитопатогенным штаммами виру-
са проявляются экспрессией цитопатогенного штамма, содержащего белок р80 в заражен-
ных клетках. Кроме того, у цитопатогенных штаммов обнаружены вставки клеточных генов.
В 1960 г. Darbyshire (67а) показал АГ-родство между ВКЧС и ВД КРС. Для детального
анализа АГ структуры вирусов используют монАТ (127,148). При тестировании других пес-
тивирусов с помощью непрямой ИФ и ИФА было показано, что некоторые монАТ выявляли
только цитопатогенный вариант ВД, тогда как другие широко реагировали со всеми изоля-
тами ВД или с ВКЧС и ПВО (42, 58, 83, 136). Убиквитин обнаружен в геноме цитопатоген-
ного штамма и не выявлен в геноме нецитопатогенного. Полагают, что рекомбинация виру-
са с клеточной РНК приводит к образованию геномов цитопатогенных ВД КРС (112). Пред-
ставлена более точная и полная картина организации вирусного генома и строения его экс-
прессии (64). При изучении геномных разнообразий 28 цитопатогенных и 37 не цитопато-
генных изолятов вируса диареи КРС с помощью зондов установлено, что геномы 15 изоля-
тов отличались менее, чем на 15% от геномных фрагментов ВД nrr.NADL. Геномы других
изолятов отличались на 36-43% и еще 10 изолятов более, чем на 43% (135). Описано при-
менение ПЦР для выявления ВКЧС и ВД КРС в культуре ткани (138а).
Антигенная вариабельность и родство. Различные штаммы ВД различаются по виру-
лентности, тропизму и цитопатогенному действию, но идентичны в АГ отношении.
По результатам PH и непрямой ИФ с монАТ референтные цитопатогенные и не цитопа-
тогенные штаммы ВД-БС разделены на три группы: I - NADL-подобные, II - New York I-
142
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
подобные, III - Oregon С24У-подобные. Полевые изоляты вируса были отнесены к I или II
группе и не один из них не был отнесен к группе III. Однако по результатам PH большинст-
во штаммов ВД обладает общим АГ, который несет основной эпитоп нейтрализации (115).
Все изоляты ВД относятся к одной серологически родственной группе (95). Шт. Орегон С-
24V по антигенным свойствам отличался от других референтных шт. NADL и Нью-Йорк-1,
которые явились прототипами полевых изолятов (10). Обнаружена тесная АГ связь ВД с
вирусами КЧС (32) и ПВО вероятно за счет сходства АГ структуры гликозилированного по-
липептида 55кД (130).
Среди изолятов ВД КРС обнаружена вариабельность, в результате которой возможно
заражение плодов вирусом диареи даже у вакцинированных коров-матерей. Все 13 изолятов
ВД КРС в 4-х различных фермах Швеции, выделенных от КРС и овец, оказались сходными.
Однако определенные эпитопы, присутствующие в изолятах, полученных от КРС, укорачи-
вались при последующей передаче вируса овцам. Все изоляты были отнесены к ВД КРС.
Обнаруженная у них специфичность для стада, но не для вида, показала, что ВД КРС легко
передается между овцами и КРС (123а).
С помощью монАТ установлено значительное генетическое разнообразие популяций
вируса. Использование зондов нуклеиновых кислот для диагностики затруднено обнаружен-
ной у изолятов вируса вариацией нуклеотидной последовательности (79). Одновременно по-
казано АГ-родство белков ВД КРС pl75, р80 и р125 (69). Современные данные о молеку-
лярной биологии пестивируса, вызывающего ВД-БС КРС, изложены в монографии (46).
В 1973 г. Horzinek (91) предложил термин песгивирусы, чтобы сгруппировать 2 АГ
родственных оболочечных РНК-содержащих вируса - возбудитель КЧС и ВД КРС. В 1982 г.
Международный Комитет по таксономии вирусов принял эту номенклатуру и определил ро-
довой статус для пестивирусов, включив их в семейство Togaviridae. Однако в настоящее
время молекулярно-биологические данные подтверждают, что ВД КРС, в прошлом вклю-
ченный в семейство Togaviridae, обоснованно перенесен во вновь образованное семейство
Flaviviridae, которое ранее было родом (76).
Референтные штаммы. Известно следующие референс-штаммы ВД: Singer, Орегон
C24V, NADL, New York. Фиигерпринтирование олигонуклеотидов позволяет эффективно
различать референс-штаммы Singer, NADL, New York-1. Данный метод рекомендован для
определения чистоты штаммов ВД КРС (99).
Получены вирусспецифические монАТ к ВД (120). Они используются для идентифика-
ции референс-штаммов вируса в PH и РДП с белком gp56.
Локализация вируса, вирусоносительство. У естественно восприимчивых больных
животных вирус или вирусный АГ ВД-БС обнаруживали практически во всех органах: в
клетках эпителия, лимфоцитах и макрофагах (118). Из организма возбудитель выделяется с
калом, мочой, слюной, носовыми и глазными секретами, а также с экссудатом местных оча-
гов поражения. Вирус способен длительно персистировать в организме больных животных^
поэтому, часто в неблагополучном стаде большинство животных становятся вирусоносите-
лями. Под влиянием стрессовых факторов происходит угнетение механизмов иммунологи-
ческой защиты, поэтому вирусоноситель может становиться вирусовыделителем (24,25).
Вирусоносительство может быть продолжительным. В органах переболевших вирус мо-
жет сохраняться до 200 дн, в респираторном тракте - до 56 , а в лимфоузлах кишечника - до
39 дн. Из крови переболевших телят его удавалось выделять в течение 4 мес.
Антигенная активность. Вирус обладает выраженной АГ-активностью. В крови пере-
болевших животных обнаруживают ПА, ВНА и КСА. Наиболее выраженный гуморальный
ответ наблюдали у телят на VP2 и VP3 ВД (77). Нейтрализующие монАТ к ВД связывают
гликопротеином VP3 с мол.м. 56-58 кД (77а). Ракетным ИЭФ показано различие между IgG
143
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
в сыворотке плодов и телят, что указывает на то, что АТ плода не материнского, а феталь-
ного происхождения, индуцирование вирусным АГ.
Экспериментальная инфекция. Результаты воспроизведения оказались различными.
В некоторых случаях удавалось вызывать слабую интерстициальную пневмонию, в других
слабое респираторное заболевание, сопровождающееся лейкемией (126). Заражение удается
при внутривенном, интраназальном, внутрибрюшинном и подкожном введениях вируссо-
держащего материала, а также контактным путем на телятах 2-6-мес возраста.
Контакт “нос к носу” является эффектным путем экспериментального заражения (143).
Температура повышается на 2, 4 и 7-й дни после заражения. При внутривенном заражении
телят культуральным вирусом наблюдают повышение температуры, лейкопению, слизистые
истечения из носовой полости и диарею на 4-7-й день. При внутривенном заражении телят
1-15-мес возраста цитопатогенным вирусом клинические признаки развивались через 5-7
дн. Вирус вызывал снижение абсолютного количества В- и Т-лимфоцитов и процентного со-
отношения Т-лимфоцитов в периферической крови. Действие вируса определяют по цили-
арной активности трахеального эксплантата н гистологическим изменениям в срезах, окра-
шенных гематоксилин-эозином. Снижение цилиарной активности и слабую дегенерацию
эпителия наблюдали через 4 дн после инфекции. Дегенерация прогрессировала до полной
деструкции эпителия к 35-му дню. Титр вируса в экстрацеллюлярной жидкости резко нарас-
тал с 4-го дня, достигая пика (105 ТЦДзо/мл) между 15-м и 18-м днями, затем снижался. Экс-
периментально зараженные телята, переболевшие энтеритом или респираторной формой,
как правило, остаются вирусоносителями в течение длительного времени, а иногда и пожиз-
ненно, что доказано прямыми опытами с применением иммунодепрессанта дексаметазона и
последующего выделения от них активного вируса. Поэтому, не случайно, что у таких жи-
вотных-вирусоносителей в возрасте от 6 мес до 2-х лет могут возникать спорадические слу-
чаи острой БС.
При заражении стельных коров per os, внутривенно и внутримышечно на любой стадии
беременности вирус проникает через плаценту в плод. Если заражение производится в 70-
90-дн периоде стельности, плод погибает в период с 90-го по 180-й день, у инфицированного
плода поражаются роговица (слепота), ротовая полость и мозжечок. Инфицирование неим-
мунных стельных коров с 90-го дня стельности приводит к иммунизации плодов, но более
ранняя трансплацентарная инфекция вирусом не сопровождается развитием иммунитета у
плодов, и только с 4 мес происходит становление их иммунокомпетентности. Вследствие
иммунной толерантности у ранних плодов возникает персистентная инфекция, которая мо-
жет быть выявлена в постнатальном периоде. Иммунотолерантность является предпосылкой
для цепи последующих иммунопатологических событий.
У экспериментально зараженных телят вирус обнаруживали в кишечнике, трахее, брон-
хиальных лимфоузлах и легких в течение 56, а в носовых секретах доЮЗ дн (12,13).
Заражение коров при случке может вызывать раннюю гибель плодов, рождение телят с
поражениями глаз и нервной системы. У иммунных коров рождаются неинфицированные
телята, у неиммунных - потомство почти всегда инфицировано. В большинстве случаев ин-
фицирование плода происходит в первые 40 дн беременности и сопровождается гибелью
эмбриона, его рассасыванием, мумификацией или абортом. Заражение плода на 40-120-м
дне беременности приводит к рождению персистентно инфицированных телят без вирусспе-
цифических АТ. В последнем случае телята не продуцируют АТ при одновременном и дли-
тельном выделении вируса в большом количестве.
Прн экспериментальном заражении супоросных свиней не отмечали клинических при-
знаков болезни и повышения температуры тела. Однако развитие болезни было подтвер-
ждено выделением вируса из крови на 7-е сут после заражения, а также обнаружением спе-
цифических АТ через 21 день. Иногда экспериментальная инфекция у поросят протекает
субклинически и проявляется слабой лихорадкой. Виремия подтверждена выделением виру-
144
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
са из носового секрета, фекалий, крови, мезентериальных лимфоузлов, селезенки. Вирус
размножается в организме поросят 20-30-дн возраста. Вирус, выделенный от свиней, утра-
чивает способность вызывать цитопатические изменения в культуре клеток. Необходимо
учитывать возможность носительства вируса свиньями, которые служат промежуточным хо-
зяином, что способствует сохранению вируса в природе. При заражении ВД КРС свинома-
ток различной стадии супоросности рождались нормальные пометы поросят. Свиноматки
передавали через молозиво АТ к ВД. Эти же пробы молозива содержали АТ к ВКЧС.
Вакцинный и полевой вирусы могут вызывать поражения ЦНС (атаксия, кривошеесть,
астазия и опистотонус) у плода, если он инфицируется в период 3-4 мес. Заражение после
180-дн беременности не сопровождается выраженным поражением плода. Персистентная
инфекция нецитопатогенным вирусом предрасполагает животных к развитию тяжелого кли-
нического заболевания после заражения цитопатогенным вирусом. Иногда происходят му-
мификация плода, мертворождение, дефекты глаз, церебральные дефекты, недоразвитие
нижней челюсти, деформация скелетных мышц и облысение. Иногда экспериментально за-
раженные животные переболевают бессимптомно. У зараженных животных вирус сравни-
тельно легко удается выделить из крови.
Имеются сообщения о возможности экспериментального заражения овец, коз, поросят и
кроликов. Белые мыши, крысы, морские свинки, собаки, кошки, цыплята, голуби устойчивы
к заражению. Некоторые штаммы вызывают заболевание крольчат в возрасте до 1 мес (15,
17,19). У взрослых свиней инфекция протекает бессимптомно, а у поросят - с клиническими
признаками, сходными с хронической КЧС (142). Доказана передача ВД от КРС овцам, и
наоборот (54а). При экспериментальном заражении коз в различной стадии беременности,
не содержащих ВНА к ВД, аборты и мертворождения составляли около 100% у всех инфи-
цированных в первые 7-8 дн беременности (68).
Культивирование. Все известные штаммы вируса по цитопатогенной активности под-
разделяются на 2 группы (биотипа): цитопатогенные (Орегон С-24, NADL, ТМ-1, ТН-2,
61/1487 ST, C-60F и др.) и не цитопатогенные (New York, Indiana, С61220, SAN и др. (4, 6,
18, 19, 95). По характеру ЦПД штаммы 1-ого биотипа подразделяются на 2 подгруппы:
штаммы, вызывающие ЦПД, сходные с эталонными шт. Орегон C-24V, и штаммы, вызы-
вающие депрессию роста клеточного монослоя, подобно шт. NADL. ЦПД, вызываемое шт.
Орегон C-24V, начинается через 16-48 ч (в зависимости от типа культуры клеток) и дости-
гает максимума на 3-4-е сут после заражения (16, 17, 21). Оно проявляется мелкозернистой
инфильтрацией в клетках фибробластного типа, вокуолизацией в перинуклеарной зоне.
Сроки развития цитопатических изменений не соответствуют увеличению титра вируса. К
72-96 ч после инокуляции, когда титры вируса достигают максимума 105,5-106,5 ТЦЕЦо/мл в
первичной культуре тестикул отмечают лишь начало ЦПД (17, 22). У цитопатогенных
штаммов ВД 2-ой подгруппы (подобных NADL) характер ЦПД заключается в дегенерации,
округлении и отслоении округлых клеток от стекла при отсутствии вакуолизации. Округлые
клетки, уменьшенные в размере, собираются в группы произвольной конфигурации (18).
Многие авторы пытались адаптировать цитопатогенные штаммы к стабильным переви-
ваемым или диплоидным линиям клеток. Шт. NADL и Орегон C-24V были адаптированы в
1969 г. к диплоидной культуре почки свиньи (линии РК-12-15) (55), почки хомяка (линия
НАК), человеческим клеткам ERK-1, клеткам носовых раковин (110), к перевиваемым ли-
ниям MDBK (Madin-Darby-Bovine-Kidney), ППЭК (2), почки овцы (20) и др. Показана вы-
сокая чувствительность диплоидного штамма эпителиальных клеток коронарных сосудов
плода коровы к данному вирусу (8). Он также размножается в макрофагах и лимфоцитах,
культивируемых in vitro (52). Перевиваемая линия культуры клеток MDBK оказались при-
годной для накопления больших количеств вируса ВД-БС. Наибольшей чувствительностью,
как при изоляции, так и культивировании оказалась перевиваемая линия клеток коронарных
10 Зак. № 171
145
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
сосудов теленка (КСТ) (14). Она более чувствительна по сравнению с первичной культурой
тестикул бычка (ТБ). Вирус, репродуцированный в перевиваемых клетках КСТ, обладал
большей АГ активностью по сравнению с эталонным шт. Орегон C24-V. Использование
указанного изолята и вируса ИРТ на чувствительных перевиваемых клетках КСТ (для ВД-
БС) и MDBK (для вируса ИРТ) позволило Г.Халеневу и др. (23) изготовить активную ассо-
циированную инактивированную вакцину против 2-х инфекций.
Установлена возможность выращивания вакцинного шт. ВК1-В1 ВД КРС в суспен-
зионной культуре клеток ВНК-21 и определены оптимальные условия его культивирования
(8а). На КЭ культивируются далеко не все штаммы вируса. Лишь отдельные из них
(например шт. Вирджиния) после нескольких пассажей через желточный мешок удалось
адаптировать к этой системе. Размножение таких штаммов в желточном мешке происходи-
ло к 48 ч после инокуляции, и обычно на 3-6-е сут после заражения около 50% эмбрионов
погибали. При гистологическом исследовании пораженной мембраны находили зернистые
или вакуолизированные клетки.
Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства не установлены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Персистентно инфицированные животные яв-
ляются основным источником распространения ВД, которая чаще всего наблюдается в воз-
расте от 6 мес до 2-х лет. Иногда персистентно инфицированные коровы достигают репро-
дуктивного возраста; их потомство всегда бывает персистентно инфицированным (22). Ви-
рус имеется в кишечнике новорожденных телят, которые могут заразиться внутриутробно и
постнатально. Иногда такое заражение клинически не проявляется. Основным источником
возбудителя - больные и персистентно инфицированные, а также клинически здоровые жи-
вотные, выделяющие вирус во внешнюю среду с калом, мочой, слюной, носовыми и глаз-
ными экскретами, со спермой (15, 18). У персистентно инфицированных животных вирус
присутствует во многих тканях, особенно в эпителиальных и ретикуло-эндотелиальных
клетках. Наличие персистентно инфицированных животных поддерживает постоянные
вспышки вируса в стаде, где процент серопозитивных животных достигает 85-100%.
В 1982 г. (111) впервые обнаружили практически здоровых, но персистентно инфициро-
ванных быков, а некоторые авторы обратили внимание на репродуктивные качества спермы
от таких быков-производителей (33, 134, 146), которые могут инфицировать здоровых ко-
ров. При наличии у быков-производителей баланопостита, последний проявляется периоди-
ческим выделением вируса со спермой в титрах 103-104 ТЦДго/мл У некоторых быков обна-
руживали более серьезные нарушения сперматогенеза, вызванные разрушением спермато-
зоидов и эпителиальных клеток спермопроводящих путей, что иногда приводит к полному
отсутствию жизнеспособных сперматозоидов в пробе спермы (35а, 115, 113, 134, 106). Ме-
стные АТ в матке могут защищать эмбрионы после осеменения или естественной случки.
Перинуклеарная зона эффективно предохраняет от эмбриональной инфекции до выхода яй-
цеклетки и в течение 8-9 дн после оплодотворения и в это время местный иммунитет уже
активно отвечает на вирус, введенный со спермой. Имеется сообщение о том, что большое
количество цитопатогенного вируса, введенного в матку, на 7-й день после осеменения вы-
зывает дегенерацию эмбрионов (149, 31). Вирус выделяется со спермой как у персистентно,
так и у клинически инфицированных быков, хорошо сохраняется в условиях замораживания
и передается при осеменении.
Передача возбудителя от коров к потомству происходит путем проникновения вируса
через плацентарный барьер, в результате возникает внутриутробная инфекция плода. Ново-
рожденным телятам вирус может передаваться через инфицированное молоко и фекалии.
Среди телят возбудитель передается фекально-оральным и воздушно-капельным путями (50,
116). Передача через эмбрион - один из наиболее важных путей распространения ВД. Если
146
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
эмбрион инфицируется трансплацентарно, от персистентно инфицированного реципиента,
возникает возможность получения персистентно инфицированных телят (139). Передача
также возможна через другие вирусвакцины, контаминированные ВД. Таким образом вирус
может сохраняться в пораженных стадах. В Австралии примерно половина случаев ВД-БС у
стельных коров была подтверждена выделением вируса, от них получено потомство клини-
чески нормальных, но персистентно инфицированных телят (107).
Дикие животные также инфицируются вирусом диареи и представляют резервуар воз-
будителя. Скорость, с которой инфекция распространяется, может зависеть от штамма ВД и
условий содержания животных.
У коров с субклинической формой ВД-БС обычно замечают небольшое повышение тем-
пературы тела и лейкопению с последующим образованием ВНА (87). Иногда такая иЦфек-
ция может обостриться. Когда инфекция переходит в клиническую форму, то охватывает
нетелей в возрасте от 6 мес до 2-х лет (38). В чувствительных неиммунных стадах заболе-
ваемость может быть высокой, ио смертность низкой или совсем отсутствовать. Инкубаци-
онный период 5-7 дн с последующей временной лихорадкой и лейкопенией (88). Виремия
происходит на 4-7-й день после инфицирования (49, 50), а в некоторых случаях вирус может
циркулировать в организме до 15 дн (80). Клинические признаки включают депрессию, от-
каз от корма, носовые и глазные истечения, иногда поражение ротовой полости, характери-
зующееся эрозиями и неглубокими язвами. Как вторичный процесс может развиться острое
респираторное заболевание с гипертермией, что неправильно диагностируют как пневмо-
нию (124, 15, 18). Перемежающаяся диарея может быть у лактирующих коров и сопровож-
даться снижением удоя. ВД принимает участие в этиологическом комплексе агентов, ответ-
ственных за возникновение респираторных заболеваний у КРС, обычно старше 1,5-2-мес
возраста (72).
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях восприим-
чив КРС, буйволы, олени, косули. Заболевает КРС в возрасте от 2 мес до 2-х лет независимо
от пола. Взрослый КРС относительно устойчив к инфекциям, но иногда болеют коровы,
особенно после первого отела. О восприимчивости других животных сведений нет, хотя
Френч (1962) в Австралии обнаружил АТ к ВД в крови овец (16%) и свиней (20%). У по-
следних описана бессимптомная инфекция, вызванная ВД. Изолят вируса от таких свиней
вызвал у телят симптомы болезни, тогда как поросята, от которых был изолирован вирус,
оставались здоровыми. Вирус ВД-БС выделен от человека и КРС при наличии у них специ-
фических АТ. При заражении суягных овцематок культуральным вируса у потомства на-
блюдали нарушение функции ЦНС, выпадение волосяного покрова, задержку роста, пони-
жение жизнеспособности и тремор головы. Природным резервуаром ВД может быть крас-
ный олень. У животных 2-х заповедников Северной Танзании выявляли ВНА к ВД-БС. В
1986-1987 гг. исследовано 256 сывороток от 123 африканских буйволов, 130 гну и 3
Damaliscus lunatus. Серопозитивными оказались 48 буйволов, 49% гну и один Damaliscus
Lunatus (97).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании клинических, эпизоотологических данных и лабораторных
методов исследования. Однако эпизоотологические данные, симптомы болезни и характер
патологических изменений дают основание лишь заподозрить болезнь. Поскольку ВД-БС
напоминает многие другие болезни (чуму, инфекционный язвенный стоматит, грибковый
стоматит, ПГ-3, катаральную лихорадку КРС, паратуберкулез и алиментарные отравления),
лабораторные исследования в диагностике имеют решающее значение. При постановке ди-
агноза на ВД-БС следует учитывать следующее: заболевают отдельные животные в возрасте
3-36 мес, типичные клинические изменения проявляются поражением слизистых оболочек
или кровянистым поносом с эрозией или без эрозии слизистых мембран, все заболевшие
10*
147
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
животные погибают в течение нескольких дней, у больных животных нет специфических
АТ в крови, хотя остальное поголовье имеет их в высоких титрах.
Лабораторная диагностика ВД-БС включает: 1) обнаружение в патологическом мате-
риале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных АГ в РИФ; 2) выде-
ление возбудителя из патологического материала в культуре клеток ТБ, ПЭК или ЛЭК и его
идентификация в PH или РИФ; 3) выявление АТ в сыворотке крови бальных и переболев-
ших животных (ретроспективная диагностика) в РСК и PH.
Лабораторную диагностику ВД-БС проводят с использованием набора диагностикумов
(ТУ 4621-529-79), выпускаемых биологической промышленностью. Ее ведут параллельно с
исследованием материала на ПГ-3, аденовирусную (адено 1 и 2), PC и ИРТ.
Предварительный диагноз на ВД-БС КРС ставят на основании положительных резуль-
татов обнаружения АГ в патологическом материале в ИФ и ПЦР с учетом эпизоотологиче-
ских и клинических данных, а также патологоанатомических изменений. Окончательный
диагноз ставят на основании: совпадения результатов ИФ с ПЦР, выделением и идентифи-
кацией вируса; совпадения результатов ИФ с обнаружением АТ в 30% н более вторых проб
парных сывороток в титрах не ниже 1:4 в РСК и 1:16 в PH; обнаружения 4-кратного и более
прироста АТ в парных пробах сывороток. Предварительный диагноз ставят в ветеринарных
лабораториях в течение 2-3 дн, окончательный - до 30 дн.
Выделение вируса.
Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют патологический матери-
ал от больных животных, взятый в первые 2-3 дня при выраженных симптомах болезни,
или от животных, убитых с диагностической целью в острой стадии заболевания. От баль-
ных животных берут 15-20 проб следующего материала: смывы со слизистой оболочки но-
совой полости, получаемые путем введения стерильного ватно-марлевого или поролонового
тампона в носовые ходы; пробы крови в первые 3 дн болезни и через 3 нед от тех же живот-
ных с соблюдением правил асептики в стерильные пробирки по 8-10 мл; соскобы с изъязв-
ленных или эрозированных участков слизистых оболочек ротовой полости и носового зер-
кала, взятые жесткими ватно-марлевыми тампонами или скальпелем. Тампоны с материа-
лом помещают в стерильные пенициллиновые флаконы или пробирки с 2-3 мл стерильного
физиологического р-ра или р-ра Хенкса, содержащего 500-1000 ЕД/мл антибиотиков
(канамицина, мономицина, неомицина, пенициллина, стрептомицина и др ). Из крови после
свертывания стерильно сливают 3-4 мл сыворотки и доставляют в лабораторию.
От животных, убитых с диагностической целью, берут с соблюдением правил асептики
кусочки легких с бронхом (на границе пораженного и здорового участков), селезенки, сре-
достенные, бронхиальные и брыжеечные лимфоузлы, миндалины, пораженные участки сли-
зистых оболочек носовой и ротовой полостей, трахеи, ЖКТ, а также пробу крови. Кусочки
материала массой до 20 г помещают в стерильную, плотно закрывающуюся посуду. Легче
вирус выделить в начале болезни и в период обострения из крови, легких, различных участ-
ков тонкого кишечника (в особенности из клеток слизистой оболочки 12-перстной кишки),
лимфоузлов и селезенки. При хроническом течении болезни его удается регулярно выделять
из разных отделов кишечника, но не из крови. Исследование носовых смывов и фекалий в
этих случаях также дает отрицательные результаты, хотя в отдельных случаях вирус удава-
лось выделять из фекалий даже через 5 мес после болезни. В начале болезни в период подъ-
ема температуры от больных животных берут пробы крови в р-р цитрата натрия или гепа-
рина и помещают их в термос со льдом. Из крови экспериментально зараженных животных
выделяли вирус с 1-14-го дн после заражения. Выделяли его также из тканей абортирован-
ных или мертворожденных плодов, плаценты и околоплодной жидкости.
Заражение культур клеток. Вирус выделяют в первичных субкультурах клеток эм-
бриона КРС (ПЭК, ЛЭК, СЭК) или ТБ. Изолят считается выделенным в случае, если он вы-
зывает стабильное однотипное ЦПД не менее чем в 2-х последовательных пассажах. В этом
148
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
случае возможна его идентификация в PH. В первичных культурах клеток почки эмбриона
коров первые ЦПИ обнаруживают через 2-5 дн после инокуляции. Они выражаются в появ-
лении мелкозернистой инфильтрации в клетках фибробластоидного типа. По мере развития
инфекции клетки постепенно отторгаются от поверхности стекла, но некоторые долго со-
храняются, образуя островки клеток эпителиоидного типа. В конце концов на стекле остает-
ся только сеть зернистого материала.
При использовании вторичных культур клеток цитопатические изменения появляются
почти одновременно во всех клетках монослоя, причем они становятся удлиненными, угло-
ватыми и кажутся переплетенными. В окрашенных препаратах клеточного монослоя при
наличии цитопатических изменений обнаруживают вакуолизацию протоплазмы и измене-
ние ядер, выражающиеся в сокращении мембраны, пикнозе и кариорексисе. В некоторых
случаях вакуолизация бывает так выражена, что ее наблюдают при микроскопии неокра-
шенных препаратов. Развитие ЦПИ не соответствует возрастанию титра вируса. К 72-96 ч
после инокуляции, когда титры вируса достигают максимума (105,5-106,5 ТЦДзо), отмечают
лишь начало ЦПД. При отсутствии ЦПД в 3-х последовательных пассажах клеток 4-й пас-
саж проводят с попыткой выявления вируса в монослойной культуре на покровных стек-
лышках в ИФ. При отрицательной реакции дальнейшее исследование прекращают. Однако
отрицательный результат в этом случае не дает права на постановку диагноза. Для иденти-
фикации таких штаммов японские исследователи предлагают использовать феномен экзаль-
тации вируса БН в присутствии возбудителя ВД-БС. Сущность метода сводится к появле-
нию ЦПИ при совместном выращивании этих агентов в культурах клеток тестикулярной
ткани КРС (18). Методика исследования заключается в следующем. Диспергированные
трипсином клетки тестикулярной ткани КРС суспендируют до концентрации 2- 10б клеток в 1
мл в 0,5%-ном р-ре ГЛАХ с сывороткой КРС, проверенной на отсутствие ВНА к возбудите-
лю ВД-БС. Суспензию распределяют по 0,5 мл в пробирки. В каждую из них инокулируют
по 0,1 мл вирусного материала (разведенного ВД) и инкубируют при 37°С в наклонном ста-
ционарном положении. В качестве контроля в каждый опыт включают не инокулированные
культуры. После 4 дн инкубирования жидкость удаляют, а культуры заражают вирусом БН
(Ю6БОЕ в 0,5 мл среды). После дополнительного 3-дн инкубирования при 37°С культуры
исследуют на наличие ЦПД. В культурах, первоначально инфицированных нецитопатоген-
ным штаммом ВД, после заражения вирусом БН появляется четко выраженные ЦПИ. В
контрольных культурах один вирус БН обычно не вызывает ЦПИ. Незаряженные культуры,
в которые не вводили ни одни из вирусных агентов, должны оставаться нормальными.
Для пассирования не цитопатогенных штаммов культуры, инокулированные вирусом
диареи каждого пассажа, инкубируют 3 дн при 37°С, после чего собирают культуральную
жидкость, которую используют для дальнейших пассажей, а культуры инфицируют вирусом
БН и дополнительно инкубируют для индикации ВД при помощи феномена экзальтации.
Заражение телят. Биопробу на телятах ставят в тех случаях, когда попытки выделить
специфический вирус оказались безуспешными или возникает сомнение в его наличии в
связи с тем, что в зараженных культурах клеток нет ЦПИ. Используют телят 2-6-мес возрас-
та, проверенных на отсутствие ВНА к ВД, или телят 4-6-дн возраста, полученных из благо-
получного хозяйства. В качестве материала для заражения используют культуральную жид-
кость 3-5 пассажей, 5-10 мл которой вводят внутривенно. Если в исследуемом материале
есть вирус диареи, у телят на 4-7-й день после заражения отмечают повышение температу-
ры, лейкопению, появление слизистых истечений из носовой полости и диарею; у некоторых
животных могут отмечаться тенезмы. В случае положительного результата у зараженных
животных вирус сравнительно легко удается выделить из крови. В наибольшей концентра-
ции (103-105 ИДзо/мл) вирус обнаруживают через 4 дн после заражения, хотя присутствие его
в крови подтверждается на протяжении 15 дн.
Серологическая идентификация
149
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
ИФ. Аналогична таковой при диагностике аденовирусной инфекции. Этим методом АГ
ВД обнаруживают в клетках слизистой оболочки прямой кишки, селезенки, легких и лим-
фоузлов экспериментально зараженных животных. Изучено распределение АГ ВД-БС в
тканях животных остром и хроническом течениях болезни. В лимфоидных тканях АГ рас-
полагается в клетках системы фагоцитирующих мононуклеаров. Между первоначальным
обнаружением АГ в слизистой кишечника, кератинизированном эпителии верхних отделов
пищеварительной системы и кожи и прогрессированием патологических признаков имеется
скрытый период.
ИФ биопсийного материала слизистых оболочек ротовой и носовой полостей пригодна
для ранней прижизненной диагностики вируса диареи. ИФ для обнаружения АГ вируса в
клетках из носоглоточных смывов - надежный и быстрый способ выявления животных, пер-
систентно инфицированных вирусом. При исследовании препаратов обращают внимание на
свечение АГ в цитоплазме не разрушенных клеток. Яркая зеленая флюоресценция в виде
гранул или диффузного свечения цитоплазмы не менее чем в 10% клеток позволяет оценить
препарат как положительный. Предварительный диагноз ставят при наличии не менее 30%
положительных препаратов от общего количества исследованных проб. Удобным оказался
непрямой метод ИФ с использованием конъюгированных Fab-фрагментов АТ из гиперим-
мунной свиной сыворотки против ВД-БС КРС. Специфическая флюоресценция вирусного
АГ в культуре бычьих макрофагов обнаруживалась в цитоплазме клеток. Для идентифика-
ции не цитопатогенных изолятов метод ИФ практически единственный. При наличии ЦПД в
культурах клеток, зараженных изолятом, и положительной флюоресценции проводят окон-
чательное типирование вируса в PH.
PH. Это основной метод идентификации вируса. Новые изоляты возбудителя ВБ-БС, не
обладающие цитопатогенной активностью, могут быть идентифицированы при помощи ги-
периммунной сыворотки к вирусу диареи по подавлению феномена экзальтации вируса НБ,
который используют для индикации подобных штаммов.
РДП. Обеспечивает быструю и точную постановку диагноза, однако пока чувствитель-
ность метода невелика, и его следует использовать в комплексе с другими методами лабора-
торной диагностики и идентификации возбуди теля. Приготовление испытуемого АГ и ме-
тодика постановки РДП описаны ранее (15, 16). Антисыворотку для РДП готовят на КРС.
Для иммунизации животных используют нитрированную кровь, взятую асептически от экс-
периментально зараженных животных в период подъема температуры. Кровь вводят внут-
ривенно (некоторым животным делают несколько таких инъекций). Кровь берут через 60-90
дн после инокуляции.
Выявление вируса ПЦР. Данный метод рекомендован для быстрой диагностики ВД-
БС. После цикла обратной транскрипции образцы ткани инфицированной культуры клеток
подвергают амплификации с использованием праймеров, обеспечивающих репликацию оп-
ределенного сегмента гена белка gp48 ВД. Для обнаружения амплифицированных последо-
вательностей используют электрофорез в ПААГ и гибридизацию с биотинилированным
ДНК-зондом на последовательности генома вируса лейкоза (35, 89). При идентификации
молочных стад, инфицированных вирусом ВД-БС КРС, также предложен метод ПЦР для
работы с пробами молока. Вирусную ДНК выделяют из соматических клеток цельного мо-
лока методом экстракции изотиоцианатом гуанидина и фенолом-хлороформом. При острой
инфекции РНК вируса обнаруживалась через 6-10 дн после заражения, а при хронической -
с использованием обоих праймеров (5'-нетранслируемая область (S'-HT) и область р80) до
разведения молока 1:640. ПЦР оказалась в 14,6 раза чувствительнее других методов выде-
ления вируса Для выяснения РНК ВД методом ПЦР необходимо не менее 580 соматических
клеток, тогда как для выделения вируса - не менее 8500 клеток. Чувствительность и специ-
фичность ПЦР подтверждена гибридизацией по Соузерену (132а). Чувствительность метода
150
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
превышает чувствительность выделения вируса в культуре клеток в 102-104 раза. Показана
возможность обнаружения персистентной инфекции ВД-БС КРС методом ДНК-
гибридизации и ПЦР (47).
Биотинилированные зонды комплементарной ДНК уже широко используются для обна-
ружения пестивирусов (КЧС, ВД-БС КРС и ПБО) (66). В Бельгии разработан метод обнару-
жения специфических АТ к ВД с помощью ИФА, проводимого с рекомбинантным АГ и мо-
нАТ (101). ИФА с монАТ удобен для выявления виремии у животных; с его помощью в
лейкоцитах обнаруживали 2 родственных неструктурных белка (р80К и р120-130К). Вирус-
ный АГ был обнаружен в В- и Т-лимфоцитах, моноцитах (74). Помимо общепринятого ме-
тода ИФА предложена иммуноферментная реакция захвата АГ ВД КРС в лимфоцитах пе-
риферической крови КРС. В реакции для захвата АГ используют монАТ к консервативному
АГ домену неструктурного белка (р125/р80) ВД (85).
Кроме ИФА разработан и предложен метод взаимодействия специфической антисыво-
ротки с вирусным АГ ВД в лимфоцитах инфицированных животных с помощью проточной
цитометрии. Метод отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Для повы-
шения чувствительности реакции лимфоциты фиксируют, их клеточные мембраны солюби-
лизируют, и вирусный АГ выявляют при использовании биотинилированных 1g из антисы-
воротки свиней с последующей инкубацией с ФИТЦем, конъюгированным авидином (122).
ИФА. ИФА позволяет легко идентифицировать культуры клеток, инфицированные ВД.
Идентификация с помощью монАТ в практическом диагностическом применении не разра-
ботана. Однако получено 5 монАТ (XI А9, АЕЗЕ2, AM2G5, ВТ48, BT6G9) против вируса
ВД-БС КРС с ВН-активностью, которые позволили разделить изоляты ВД на 4 группы. По-
лучена и изучена панель монАТ против Singer-изолята, с помощью которой были обнару-
жены полипептиды мол.м. 56-58 кД и доказано, что гликопротеин, локализуется на поверх-
ности вирионов и является носителем нейтрализующих эпитопов. Анализ с панелью монАТ
показал АГ гетерогенность среди изолятов этого вируса (70).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Серодиагностика заболевания затруднительна, так как при хроническом течении инфек-
ции АТ обнаруживаются непостоянно и бывают в невысоких титрах (29). Диагноз на про-
шедшую инфекцию, а также латентное вирусоносительство обычно ставят при помощи PH в
культуре клеток, определяя титры АТ в сыворотках реконвалесцентов. Для этого лучше ис-
следовать парные сыворотки, взятые с интервалом 3-4 нед. При диагностике скрытого тече-
ния инфекции чаще используют сыворотки крови убойного скота, поступающего с клиникой
не диагностированной инфекции кишечного и респираторного трактов. Обычно в таких слу-
чаях процент положительных сывороток (титры от 1:16 до 1:128) варьирует в широких пре-
делах и может достигать 30-50 (иногда до 80). У клинически здоровых животных процент
положительных проб может колебаться от 6-8 до 20-30. Динамика появления и угасания
титров ВНА недостаточно изучена. Перед исследованием сыворотки прогревают в водяной
бане при температуре 57-58°С 30 мин.
В США разработан быстрый количественный метод титрования ВД КРС. Он состоит в
микротитровании с использованием цитопатогенных и не цитопатогенных изолятов вируса
и перевиваемой линии клеток бычьей почки - МДВК. Для этого серийные разведения вирус-
содержащей жидкости и суспензию клеток в концентрации 1105 в среде с 2% сыворотки
крови лошади заливают в лунки пластин Terasaki и проводят микротитрование в НИФ, ко-
торую учитывают на дне лунок пластин, используя водно-иммерсионный объектив микро-
скопа. Вирус также титруют и по бляшкообразованию. Специфическую флюоресценцию в
клетках наблюдали уже через 12 ч после заражения, окончательные результаты считали че-
рез 72 ч инкубирования. Результаты титрования вируса по бляшкам и в микротитровании
совпадали. Микротитрование вируса по ИФ имеет ряд преимуществ над стандартным мето-
151
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
дом титрования по бляшкам: требует меньше времени и материалов и особенно незаменимо
при титровании не цитопатогенных изолятов ВД (137).
PH. Её ставят методом разведения испытуемых сывороток с постоянной дозой стан-
дартного вируса в культуре клеток ПЭК или ТБ. Положительными считают сыворотки с
титром АТ 1:16 и выше, в парных сыворотках - повышение титра АТ во второй пробе в 4
раза и более. При экспериментальном заражении у всех телят через 15-61 день обнаружива-
ли ВНА в титре 1:64 - 1:1024. Реакция, суть которой заключается в подавлении образования
бляшек АТ исследуемой сыворотки, оказалась пригодной для серологических исследований
при ВД-БС. После получения гомогенного слоя клеток культуру промывают 1 раз фосфат-
ным буферным р-ром и заражают 15 мл суспензии вируса в таком разведении, чтобы в 1 мл
ее содержалось около 20 БОЕ. После адсорбции вируса при 37°С в течение 30 мин суспен-
зию отсасывают и наносят на культуру 15 мл агара. После застывания агара на его поверх-
ности раскладывают кружки фильтровальной бумаги, насыщенной неразведенной иссле-
дуемой сывороткой. После 4 дн инкубации при 37°С учитывают результаты. Доказательст-
вом того, что исследуемая сыворотка содержит АТ, служит отсутствие повреждения слоя
клеток вокруг насыщенного ею кружка фильтровальной бумаги, что обнаруживается в виде
венка клеток.
РСК. Ставят микрометодом с использованием микротитратора Такачи или Титертека.
При их отсутствии возможна постановка РСК в пробирках в общем объеме 0,5 мл (17,18).
РДП Не иашла широкого применения в ветеринарной диагностической практике при
обнаружении АТ в сыворотках животных. ПА появляются в сравнительно поздние сроки (3-
4 нед) после инфицирования и могут сохраняться 4 мес (титры АТ до 1:16).
ELISA. В 500 раз чувствительнее PH, менее трудоемок и быстрее выполним. В качестве
АГ использовали вирус, концентрированный ПЭГ и очищенный градиентным равновесным
ультрацентрифугированием. Оптимальная концентрация АГ составляла 1 мкг на лунку.
Дифференциальная диагностика
При постановке диагноза на ВД-БС необходимо исключить ИРТ, аденовирусную ин-
фекцию, ПГ-3, злокачественную катаральную лихорадку, ящур, паратуберкулезный энтерит
и др. Ввиду того, что ВД-БС может проявляться в различных формах (от острой до латент-
ной), часто ассоциируется с такими инфекциями, как ПГ-3, аденоинфекция, хламидиозы и
др., для окончательного диагноза необходимы лабораторные исследования. Лишь в качестве
подозрения на ВД-БС следует учитывать быстрое распространение в стаде болезни, сопро-
вождающейся лихорадкой, диареей, эрозиями в ротовой полости и ранней лейкопенией.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевание ВД-БС сопровождается развитием иммунитета. Однако у некоторых жи-
вотных возможны рецидивы, которые связывают с недостаточностью иммунитета. Образо-
вание иммунитета сопровождается повышением уровня ВНА и других АТ, что используют
для оценки напряженности иммунитета после вакцинации. ВНА образуются также у плодов
при заражении матерей во 2-й половине беременности (13). У телят установлен выражен-
ный колостральный иммунитет. Титр материнских АТ в сыворотке крови телят снижается и
исчезает в течение 3-7 мес после приема молозива. Реконвалесценты сохраняют невоспри-
имчивость к повторному заражению в течение 2-3 лет. Однако у них образуется нестериль-
ный иммунитет и такие животные длительное время являются вирусоносителями. При хро-
ническом течении инфекции на фоне иммунодепрессивного действия ВД возникает истоще-
ние иммунной системы, поэтому у животных обнаруживают низкий титр ВНА (25, 95а).
Новорожденные телята приобретают пассивный иммунитет к ВД через молозиво матери
(98, 986), так как 1g не проникают через плаценту стельных коров (99а,148а). Продолжи-
тельность колострального иммунитета у телят составляет 4-6 нед. В слизистой оболочке
Ж КТ под воздействием ВД появляются 1g класса А, причем, образование их в значительном
152
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
количестве происходит только в том случае, если вирусный АГ непосредственно воздейст-
вует на слизистую оболочку (99а). Секреторные АТ образуются в слизистых носовой полос-
ти при аэрозольном применении аттенуированного вируса (2). В настоящее время исследу-
ется клеточно-обусловленный иммунитет. Развитие ВД-БС происходит в результате специ-
фической иммунологической толерантности при инфицировании плода.
Большинство сывороточных АТ относится к классам IgG] и IgG2, что является типич-
ным для инфекции (95а, 107,115а). Установлено, что животные, не имеющие высокий уро-
вень АТ, невосприимчивы к реинфекции (129), однако, у некоторых из них после несколь-
ких месяцев болезни титр ВНА в сыворотке низок, но через некоторое время отмечено его
возрастание (50). Это происходит, по-видимому, вследствие нескольких случаев заражения
и показывает, что иммунитет после естественной инфекции не пожизненный. Нет прямой
корреляции между титрами ВНА и сроками выделения вируса от больных животных. ВНА
могут быть комплементзависимыми и комплементнезависимыми. В ответ на первичную ес-
тественную инфекцию происходит накопление АТ 1-го типа, титр их быстро снижается и
через 6 мес приближается к титру комплементнезависимых АТ. Эти различия могут быть
использованы в ретроспективной диагностике с целью определения срока переболевания
животного (17,148а).
Проблемы специфической профилактики ВД-БС имеют свои особенности, обусловлен-
ные её патогенезом. Наиболее существенная из них - внутриутробная передача вируса и
длительная его персистенция у клинически здоровых животных-реконвалесцентов при на-
личии специфических АТ. Профилактика инфекции заключается в индикации и удалении
животных с персистирующей инфекцией и вакцинации иммунокомпетентных (131).
Применение инактивированных вакцин. Инактивированная вакцина впервые была
лицензирована в США в 1981 г., испытана в полевых условиях с положительными резуль-
татами. В настоящее время инактивированные вакцины готовят из шт. Орегон C-24V,
Singer и Нью-Йорк-1. В качестве адъюванта используют ГОА. Инактивированная вакцина
из шт. Singer через 7 дн после повторного введения вызывала у телят образование ВНА в
высоких титрах и защищала их от экспериментальной инфекции вирулентным шт. New-
York-1. Вакцинация глубоко стельных коров инактивированной вакциной против ВД-БС
обеспечивает создание колострального иммунитета у их потомства; пассивные АТ сохраня-
ются в высоком титре до 40-45-дн возраста и обеспечивают защиту животных от экспери-
ментального заражения. Двукратная вакцинация 7-10-дн телят с интервалом 11 дн на фоне
колострального иммунитета не ведет к существенному повышению титра АТ и не усиливает
защиту при экспериментальном заражении. Однако АТ у таких телят сохраняются дольше,
чем у невакцинированных. Двукратная вакцинация 7-10-дн серонегативных телят с интер-
валом 11 дн к 40-45-дн возрасту вызывает образование АТ в более низких титрах, т.е. обес-
печивает создание менее напряженного иммунитета по сравнению с животными, имевшими
пассивный иммунитет (84). Вакцина оказалась эффективной при двукратном применении в
дозе 2 мл с интервалом в 21 день; продолжительность иммунитета 1 год (142а). В настоящее
время инактивированные вакцины против ВД-БС получают все большее признание (88).
Разработана методика получения инактивированного АГ ВД КРС. Инактивация выра-
щенного в культуре клеток вируса осуществляется путем обработки полученных при замо-
раживании и оттаивании лизатов многоатомными спиртами (61). В последние годы успешно
используют димер этиленимина (6а). Поскольку вирус проникает через плацентарный барь-
ер, это приводит к широкому распространению скрытой инфекции среди новорожденных
телят, что также обусловливает высокую контаминированность этим вирусом первичных
культур клеток и живой вакцины. Чтобы устранить эту опасность, вакцину против ВД-БС
(iut.NADL) получают на гетерогенной культуре - клетках свиной почки. По данным болгар-
ских исследователей (11), препарат был иммуногенным и безвредным.
153
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
В 1989 г. Моханти и др. (108) предложили использовать растворимые протеины ВД в
качестве субъединичной вакцины, которые по иммуногенности оказались аналогичны инак-
тивированному вирусу. Для получения растворимого АГ авторы использовали детергенты,
разрушающие вирионы: твин 20 или 10%-ный р-р (3-cholamido-propyl-dimethyl ammonio)-l-
пролина- Sulfonate (CHAPS).
Инактивированной вакцине также свойственны определенные недостатки - они менее
иммуногенны при 1-кратном введении поэтому необходима ревакцинация и увеличение до-
зы введения, особенно при вакцинации молодых животных. Продукция секреторных АТ и
интерферона при введении инактивированных вакцин значительно понижена или отсутству-
ет. Сроки и условия хранения их отличаются по сравнению с живыми сухими вакцинами.
Применение живых вакцин. Разработано множество стратегий использования живых
вакцин. Применение модифицированных живых вакцин полезно в крупных стадах, которые
выпасаются на больших площадях или содержатся в откормочных комплексах, так как для
иммунизации модифицированными живыми вакцинами требуются малые дозы при 1-
кратном введении. Наряду с довольно высокой эффективностью, живые вакцины имеют ряд
существенных недостатков, в т.ч. они могут вызывать аборты. В результате проникновения
в плод вакцинный вирус ВД-БС может вызвать его инфицирование, сопровождающееся
аномалиями развития и абортами (24, 25). Живые вакцины обладают определенным имму-
нодепрессивным действием, что может привести к активации других агентов бактериальной
и вирусной природы. Кроме того вакцинный вирус может длительное время персистировать,
что приводит к широкому рассеиванию вируса во внешней среде, создает опасность его ри-
версии и препятствует проведению диагностических мероприятий (96).
У стельных коров и персистентно инфицированных телят, кроме того аттенуированные
штаммы возбудителя, как правило, индуцируют состояние иммунодепрессии (117). В связи
с чем в поствакцинальный период отмечают повышение частоты секундарных, иногда ле-
тально протекающих инфекций. В связи с возможным нарушением эмбрионального разви-
тия и возможного возникновения абортов, живыми вакцинами прививают только глубоко
стельных коров (88). Идеально аттенуированные вакцинные штаммы наряду с высокой им-
муногенностью не должны проникать через трансплацентарный барьер и вызывать состоя-
ние толерантности у новорожденных телят, иммунодепрессию и гиперчувствительность к
последующему заражению вирулентным штаммом вируса (30). Фирма Мерье (Франция)
предложила новую живую вакцину из аттенуированного штамма ВД-БС, которая прошла
широкие испытания на КРС всех возрастов и физиологических групп и оказалась безвред-
ной и эффективной. Температурно-чувствительный аттенуированный шт. RTT4350 ВД полу-
чен в результате химического мутагенеза (обработка вирулентного шт. CNCM1-198 in vitro
азотистой кислотой). Таким образом, решение проблемы с ВД-БС может быть достигнуто
защитой плода от заражения в течение 1-й трети беременности (104).
Для первичной иммунизации стад, в которых ранее вакцину не применяли, желательно
использовать инактивированную вакцину (54).
Относительно практического применения живых вакцин имеются весьма разноречивые
данные. Вакцинация перед случкой предупреждает острую инфекцию в течение раннего пе-
риода беременности. Однако живая вакцина обладает иммунодепрессивными свойствами,
потенциально может вызвать поствакцинальную болезнь, оказать неблагоприятное воздей-
ствие на плод. Серьезные недостатки, свойственные живым вакцинам, послужили поводом
для создания и совершенствования инактивированных препаратов, основным преимущест-
вом которых является полная безвредность для стельных коров и молодняка. Однако они
вызывают иммунологическую реакцию с образованием преимущественно гуморальных АТ,
которые у стельных коров накапливаются в сыворотке крови и в молозиве.
154
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
Большие перспективы представляют генноинженерные субъединичные вакцины (42).
Вакцинацию против ВД-БС наиболее целесообразно проводить до предполагаемого сезона
респираторных болезней, чтобы свести до минимума иммунодепрессию, вызываемую поле-
выми штаммами вируса.
Методы применения вакцин. Применение поливалентных живых вакцин на коровах
до случки и ревакцинация за месяц до отела, а также вакцинация ремонтных нетелей в воз-
расте 5-6 мес - необходимое условие профилактики данной болезни. Персистентно инфици-
рованные коровы всегда передают инфекцию теленку. У коров, вакцинированных живой
вакциной на ранней стадии беременности, могут родиться персистентно инфицированные
телята (114). Как живые, так и инактивированные вакцины для профилактики ВД-БС КРС
постоянно совершенствуются. Так, в Болгарии культуральную живую вакцину получают на
культуре клеток почки свиней. Используют не цитопатогенный шт.NADL. Вакцина на его
основе оказалась безвредной и иммуногенной (11). Установлено, что шт. 3018 ВД-БС в ор-
ганной культуре кишечника эмбриона коровы и овцы в более активен, чем аналогичный
штамм, аттенуированный в первично-трипсинизированной культуре клеток почек эмбрио-
нов овец и коров (7). Живая вакцина стимулирует образование АТ достаточного уровня для
предотвращения болезни, но ее нельзя применять беременным животным (150).
Вакцинация КРС, ранее инфицированного нецитопатогенным вирусом, не вызывает
развития болезни (56). В большинстве стран вакцины против ВД-БС используют в ассоциа-
ции с препаратами против ИРТ, ПГ-3, рео- аденовирусной и хламидийной инфекцией, леп-
тоспироза, пастереллеза в 2-х, 3-х и поливалентных сочетаниях. Таким образом, в проведе-
нии профилактических мер борьбы с ВД-БС большое значение имеет привентивное свое-
временное обнаружение и удаление из стада персистентно инфицированных животных (28).
Поэтому использование только одной вакцинации, как практикуется для других вирусных
болезней, при ВД-БС КРС оказывается неэффективным, поскольку некоторые животные ос-
таются персистентно инфицированными, для удаления которых разработан метод ПЦР, по-
зволяющий обнаруживать вирус в тканях и органах инфицированных животных. Тест явля-
ется высокочувствительным, специфичным и недорогим (59, 81, 82).
В США от 50 до 90% КРС серопозитивно к ВД, от 1 до 2% (в некоторых стадах до 90%)
животных персистентно инфицированы. Меры по предотвращению проникновения вируса в
стадо основаны на системе строгой изоляции, серологической проверке всех ввозимых на
ферму животных, ограничения перемещений животных, особенно стельных коров, контроле
спермы для искусственного осеменения, отдельном содержании мелких жвачных (овец,
коз). В настоящее время меры борьбы с инфекцией основываются на обнаружении перси-
стентно инфицированных животных и удалении их из стада. Для подтверждения персистен-
ции необходимо выделение вируса из клеток крови, сыворотки, носового секрета, спермы
(42, 75, 78). Руководствуясь этой идеей, в Швеции разработана программа по контролю и
предотвращению ВД-БС КРС. Она основана на ежегодной проверке образцов молока из
всех молочных стад на наличие АТ к ВД, уничтожении персистентно инфицированных жи-
вотных, служащих основным источником распространения вируса (26, 65, 71, 75).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. При удачно выбранной
схеме 2-кратной вакцинации иммунитет у животных сохраняется до 5 лет. У новорожден-
ных телят он может быть различным, охватывать более 70% животных и длиться от 3,5 мес
до года в зависимости от наличия пассивных АТ или внутриутробного или неонатального
образования иммунитета. У внутримышечно вакцинированных животных (живой вакциной
из шт. Singer) ВНА выявляли на 23-й день после иммунизации, титр АТ был 1:32-1:128. У
подкожно привитых животных титр АТ был 1:32-1:64. При заражении вирулентным виру-
сом у вакцинированных животных наблюдали некоторое повышение температуры тела. У
коров, иммунизированных инактивированной вакциной на 7 мес стельности, средний титр
155
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
ВНА составлял в крови 7,4+0,27 loga, в молозиве - 9,3+0,39 loga- У новорожденных телят (от
вакцинированных коров) на 3-й день после выпойки молозива отмечали высокий титр АТ -
6,9+0,66 loga. При вакцинации коров на 7-8 мес стельности инактивированной вакциной в
день отела выявляли высокий уровень АТ в крови и молозиве (7,1-7,2 logz). Затем титр АТ в
крови начинал постепенно снижаться, но и через 6 мес (срок наблюдения) он сохранялся
еще на довольно высоком уровне (4,8-4,9 loga) (6а). ВНА сохранялись в молозиве и молоке
до 7 дн и полностью исчезали после 17 дн лактации. По данным разных исследователей,
пассивный иммунитет у телят сохраняется до 2-6 мес и более. Установлено, что уровень IgG
в сыворотке крови телят зависит от общего количества этого иммуноглобулина в молозиве.
Прямой связи между уровнем иммуноглобулинов и заболеваемостью телят установить не
удалось, хотя у телят с уровнем IgG ниже 8 мг/мл диарея возникала чаще.
Результаты исследований свидетельствуют, что вакцинация глубоко стельных коров
обеспечивает создание колострального иммунитета у их потомства. Пассивные АТ сохра-
няются на высоком уровне (4,0-4,5 loga) до 40-45-дн возраста и обеспечивают защиту жи-
вотных от экспериментального заражения (18). Связь титров АТ с вирусоносительством и
вирусовыделением не изучена.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Андреев Е.В. и др. Тез. докл. конф. ВГНКИ, Москва, 1981 :86. 2.Гизигдинов Н.Н. и др. Вете-
ринария, 1976, 12 :29. 2а.Жидков С.А. и др. Вестник с/х биол., 1974, 3 :22. 3. Калинина О.С. Рукоп.
деп во ВНИИТЭИСХ, 1982 .270. 4.3удилина З.Ф. Бюлл. ВИЭВ, 1972, 14 :39. 4а.ЗакутскийН.И. идо.
Тез. докл. н-гр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :88. 5. Калинина О.С. и др. Вести, с/х науки, 1983,
1 :91. б.Зудилина З.Ф. идо. Бюлл. ВИЭВ, 1971, 11 :11. 7.Кудимова Е.В. и др. Инф. бол. жив. ивогр.
природ очаг., 1989, 11 :71. 8.Куликова И.Л. и др. Цитология 1982, 34, 9 :75. 8а.Ким Т.Г. и др. Тез.
докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :143. 8б.Ким Т.Г. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИ-
ИЗЖ, Владимир, 1995 :84. 9.Мусабекова М.Б. идо. 5 конф. биол. раст. Ср. АзиииКазахст., 1991:70.
Ю.Панина Г.Ф. Биотехнология клеток животных, М.,1989. И.Петкова К. и др. Пробл. иммун проф.
с/х бол. жив. София, 1988, 2 :267. Па.Родькин С.П. и др. Экспресс информ. , М., 1987, 3 :5.
12.Сергеев В.А. и др. Структ. и биол. вир. жив., М., 1983. 12а.Сатина ТА. и др. Тез. докл. н-пр.
конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :142. 13.Сергеев В.А. Вирус, вакцин, Киев, Урожай, 1993.
14.Сидибе Шарль Эмиль Калилу. Канд дасс., MBA, 1985. 15.СюринВ.Н. идо, Части вег. вир., М.,
Колос, 1979. 16.Сюрин ВН. и др. Лаб. диагн вир. бол. жив., М., Колос, 1972. 17.Сюрин В.Н и др.
Мет. лаб. диагн вир. бол. жив., М., Агропромизд 1986. 18.Сюрин В.Н. и др. Диагн вир. бол. жив.,
М., Агропромизд, 1991 :528. 19.Троценко Н.И. и др. Практ. по вет. вир., М., Агропромизд, 1989. 20.
Файзулина С.И. и др. Изв. АН Кирг. ССР, 1977, 5 :60. 21.Фомина Н.В. и др. Вир. жив. MBA, 1991.
22.Файзулина С.И. и др. Изв. АН Кирг. ССР, 1985, 2 :49. 23. Халенев Г.А. Тез. докл. н конф., Пробл
вет. иммун, М., MBA, 1982. 24.Харламбиев X. Нац центр науч. тех. инф. по С/Х, София, 1975, 132.
25.Харламбиев X. Нац центр науч и тех. инф. С/Х, София, 1977, 62. 26.Alemius Stefan et. al. Sven.
Veter., 1992, 44, 2 :51. 27.Ames T.R. Vet. Med., 1986, 81 :848. 28.Ames T.R. et. al. Vet. Med, Lenexa,
1990, 85,10 :1140. 29.Anon, Bull. Acad Vet. Fr., 1990, 63, 4 :391. 30.AntoineH. Ann Med Vet, 1986, 130
:393. 31.Archbald L.F. etal. Theriogenology, 1979, 11 :81. 32.Backer J.C. J Am Veter Med Assn, 1987,
190 :1449. ЗЗ.Васкег J.C. Rev Scient te ch of Intern Epizoot, 1990, 9, 1 :25. 34.Barber D.M.L. et. al. Vet
Rec, 1985,117, 18 :459. 35.Belak S. et. al. Arch Virol, 1991, 3, Supol :181. 35a.Binkhorst G.J. et. al. Vet
Cl, 1983, 5 :145. 36.Bielefeld O. Res Vet, 1983, 34 :5. 37.Bermann H. et. al. Mh Vet Med, 1989, 44, 11
:365. 38.Blood D.C. et. al. Bailliere Tindall, London, 6th, 1983 :754. 39.Bolin S.K. et. al. Amer J Vet Res,
1985, 46 :2467. 40.Bolin S.K. et. al. Amer J Vet Res, 1985, 46, 4 :884. 41.Bolin S.R. et. al. Arch Virol,
1988, 99 :117. 42.Bolin S.R. Rev Sci Tech of Int Epizoot, 1990, 9 :173. 43.Bolin S.R. Rev. Scient. techn
off intern Epizoot, 1990, 9, 1 :163. 44.Bolin S.R. et. al. Amer J Vet Res, 1985, 46 :573. 45.Bolin S.R. Vet.
Med. (Lenexa), 1990, 85, 10 -.1024. 45a.Bolin S.R. et. al. Am J Vet Res, 1990, 51 .703 . 46.Banlanger D.
et. al. Ann. Vtl Vet, 1992, 136, 1 :33. 47.Brock K.V. Arch Virol, 1991, 3, Suppl, : 199. 48.Broes A. Ann
Med Vet, 1993, 137, 1 :33. 49.Brownlie J. et. al. CES, Seminar, Brussels, 1985 :147. 50. Brownlie J. etal.
Anns Rech Vet, 1987, 18 .157. 51.Bronwlie J. et. al. Vet Res 1984, 14, 114, :535. 52.Bronwlie J. et. al. 15е1
Wordl Briatrics Cong Palma, Spain, Proc. 1988, 11, 899. 53.Brownlie J. Arch, Virol, 1991, Suppl., 3 :79.
156
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
54.Bulgin M.S. Med Vet Pract, 1985, 66 :609. 55.ButnerM. et. al. Tierarztl Prax, 1989, 17 :39. 55.Carbrey
E.A. Mart Nijhoff Publ, Boston. Dordrecht Langcaster, 1988 :99. 56.Costrucci G. Compar Immun
Microbiol Infect Diseases, 1991, 14, 1 :31. 57.Costrucci G. et.al. Compar Imm Microb Inf Dis, 1992, 15, 3
: 163. 58.Cay B. et. al. Vet. Miero, 1989, 20 :123. 59.Cepica A.A. Cattlemen, 1991, 54, 2 :58 . 6O.Clarke
M.C. CES Seminar, Brussels, 1985 :3. 61.Chlupova L. et. al. A.C. 269885, ЧССР, Заявл. 04.08.87,
Опубл. 12.02.91. 62.Childs T. Can J Comp Med 1946, 10 :316. 63.Collet M. et. al J Cell Biochem, 1986,
Suppl, 10D :292. 64.Collet M. et. al. Arch Virol, 1991, 3, Suppl. :19. 65.Corapi W.V. et. al. J Virol, 1988,
62 :2823. 66.Crucieri C. et. al. Arch Virol, 1991, 3 :191. 67.Dahte G. et. al. Pestivirus inf, 1987 :195.
67a.Darbyshire J.H. Vet Res 1960, 72, :331. 68.Depner K. et. al. Arch Virol 1991, 3 :253. 69.Derigt D. et.
al. Can J Microb, 1991, 37, 11 :815. 70.Donis R.O. et. al. J Amer Vet Res, 1987, 48 .1549. 71.Donis R.O.
et. al. J Gen Virol, 1988, 69 :77. 72.Emst P.B. et. al. BVD: an update. Compend Ed., 1983, 5 :581.
73.Duffell S.J. et. al. Vet Res 485, 117 :240. 74.Fenton A. et. al. Arch Virol, 1991, 3 :169. 75.Femelins
A.L. Arch des virusforch, 1969, 27, 1 :1. 76.Francki R. et. al. Classific and nomenklat of virus. Report Int
comitee, 1991. 77.Donis R.O. et. al. Arch Virol, 1991, 3 :29. 77a.Donis R.O. et. al. Arch Virol, 1991, 3
:29. 78.Dreze F. et. al. Arch Virol, 1991, 3 :239. 79.Dubar et. al. Compar Immun Microb and Infect Dis
1992, 15, 3 :155. SO.Duffell S.J. et. al. Vet Res, 1985, 17 :240. Sl.Emst P.B. et. al. Comp Educ, 1983, 5
:5581. 82.Qardiner AC. J Comp Path, 1980, 90 :513. 83.Gwiser-Wilke et. al. Cor Europ Com 1987, Publ
Ear, EN Luxemburg :29. 84.Gonda M.A. et. al. Proc Nat Acad USA, 1986 :4007. 85.Gottscholk E.E. et. al.
J Vet Med B, 1992, 39, 6 :467. 85a.Grunder H et. al. Dtech Tierartz Wochen Schr, 1981, 88, 3 :94.
86.Grunder H. et. al Dtech Tierartzl Wochen Schr, 1991, 88, 3 :94. 87.Harkness J.M. et. al. Vet Res Sch,
1978, 24 :98. 88.Harkness J.W. Ann Rech Vet, 1987, 181 :167. 89.Hertig C. et. al. Vet Microb, 1991, 26
:65. 9O.HhuH.J. et. al. Vet Microb, 1985, 10,4 :325. 91.Horzinek M.C. Prog med Virol, 1973, 16 :109.
92.Houe Hans Dan Vet, 1992, 75, 8 :313. 92a.House J. A. et. al. J Am Vet Med, 1973, 163 :819. 93.Howard
C.J. et. al. J Vet Microb, 1989, 19 :195. 94.Howard C.J. Rev Scient techn of inter Epizoot, 1990, 9, 1 :95.
95.Howard C.J. et. al. Vet Microb, 1987, 13 :361. 95a.Howard C.J. et. al. Vet Microb, 1985, 10 :359.
96.Howbet J. Vet Med A all Anim Clin, 1981, 76, 12 :1719. 97.Huera J.M. et.al. Bull Anim Health and
Prod Afr, 1992, 40, 3 :143. 98.Katz J.B. et. al. Jap J Vet Sci, 1984, 46 :669. 98a.Katz J.B. et. al. Vet
Microbiol, 1987, 13 :153. 98b.Kendrick J.W. et. al. Am J Vet Res, 1974, 35 :589. 98c.Istewicz D.M. et. al.
Vet. Immun. Immunopat., 1987, 14 :377. 99.Kelling C. et.al. Amer J Vet Res, 1991, 52, 8 :1237. 99a.Kolb
E. Mh Vet Med, 1975, 30, 2 : 73. lOO.Larsson B. et. al. Arch Virol, 1991, 3 .143. lOl.Leconte C. et.al.
Veter Microbil, 1990, 23, 1, 4 :193. 102.Leconte C. et.al. Arch Virol, 1991, 3 :149. 103.Liess B. Berl und
munch tierartl, W. Schr., 1985 :98. 104.Liess B. Die Tierarzt, W. Schr, 1988, 95 :264. 105.Lobmann M.
et. al. Am J Vet Res, 1984, 45, 12 :2498. 106.Lucas M.H. Vet Res, 1986, 119 :15. 107.Littlegohns S.R.
Washington St Univ Press Publishing, 1985 :179. lOS.Mohanty J.G. et.al. Cop Immun Mirob infect Dis,
1989, 12, 4 :129. 109.Mc.Hugh P.H. et.al. J Vet Med, 1988, 35 :207. HO.McClurkin A.W. et.al. J Am Vet
Med, 1985 :186. lll.McClurkin A.W. et.al. J Am Vet Med ASS, 1979 :174. 112.Meyer G. et.al. Arch
Virol, 1991, 3 :133. 113.Meyling A. et.al. Vet Microbiol, 1988, 17 :97. 113a.Moerlooze L. et. al. J Gen
Virol, 1993, 74, 7 :1433. 114. Meyling A. et.al. Rev Scient techn Intern Epizoot, 1990, 9, 1 :75.
114a.Meyers G. et.al. Nature, 1989, 341, 6242 :491. 115.Mogar R. et.al. Can J Vet Res, 1988, 52 :42.
115a.Muscoplat C.C. et.al. Am J Vet Res, 1973, 34 :1101. 116.Narit M. et.al. J Comp Pathol, 1982, 92 :41.
117.Neaton H.J. Vet Med Edwardsville, 1986, 81 :9. IlS.Ohmann B.H. Acta Vet Scjnd, 1988, 29 :77.
119.Olafson P. et.al. Cornell Vet, 1946, 36 :205. 120.Onisk D.V. et.al. Arch Virol, 1991, 121, 1-4 :219.
121.Osburn B. J. Arch Virol, 1991, 3:71. 122.0vist P. et.al. Arch. Virol, 1991, 3 :165. 123.Paton D.J. et.al.
Brit Veter J, 1990, 2 :171. 123a.Paton D.J. et.al. Vet Microbiol, 1995, 43, 4 :283. 124.Perdizet J.A. et.al.
Cornell Vet, 1987, 77 :46. 125.Philip J. Ph D thesis University of London, 1973. 126.Potgieter L.N. et.al. J
Vet Diagn, 1989, 1 :29. 127.Peters W. et.al. Vet Microb, 1986, 12 :195. 128.Potter M.L. et.al. Am J Vet
Res, 1984, 45 :1778. 129.Pritchard W.R. et.al. In Adv Vet Acad Press, N.Y., 1963 :1. 130.Purchio A.F.
et.al. J Virol, 1984, 50 :666. 131.Radostits O.M. et.al. Com Vet J, 1988, 29 :513. 132.Ramsey F.K. et.al.
North amer Vet, 1953, 34 :629. 132a.Radwan G.S. et.al. Vet Microb, 1995, 44, 1 :77. 133.Rebhun W.C.
etal. J Vet Med, 1989, 3 :42. 134.Revell S.G. et.al. Vet Res, 1988, 123 .122. 135.Ridpath J.F. et.al. Mol
and Cell Probl, 1991, 5, 4 :291. 135a.Ridpath J.F. et.al. Virology, 1995, 212, 1 :39. 136.Ring C. et.al. Dt
tierarztl Wschr, 1985, 92, 10 :400. 137.Roberts P.C. et.al. Vet Microbiol, 1988, 18, 3/4 :209. 137a.Roth
J.A et.al. Am J Vet Res, 1981, 42 :244. 138a.Stadejek T. etal. Med Vet, 1994, 50, 3 :122. 138.Shimizu
M. et.al. Jap J Vet Sci, 1989, 51 :157. 139.Singh E.L. et.al. Rev Sci tech of int Epiz, 1985, 4,(4) :867.
157
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
139a.Stott E.J. et.al. Vet Res, 1987, 121 :342. 14O.Taguchi M. et.al. J Jap Vet Med Ass, 1991, 43, 6 :413.
141.Tajiama M. et.al. J Vet Med Ass, 1992, 39, 8 :616. 142.Terpstra C. etal. Res Vet Sci, 1988, 45 :137.
142a.Thomas P.C. et.al. Veter Med, 1986, 81 :974. 143.Traven M. et.al. J Vet Med B, 1991, 38, 6 :453.
144.Truitt R.L. et.al. Arch ges Virusforsch,1973, 42 :78. 145.VanOpenbosch E. et.al. Vlaams Diergenesk
Tijdscher, 1981, 50 :163. 146,Veber H. et.al. Pract Tierarztl, 1975, 56, 3 -.142. 146a.Vilcek S. Vet Med,
1994, 39, 11 : 687. 147.Wellemans G. et.al. Arms Med Vet, 1987, 131 :665. 148.Wensvoort G. et.al. Vet
Microbiol, 1986, 12 :101. 148a.Wentink G.H. et.al. World Congr on diseasis of cattle, 14, Dublin, Ireland.
149.Wray C. etal. Res Vet Sci, 1987, 42 :213. 150.Yokota O. et.al. J Jap Vet Med Ass, 1990, 43, 4 :239.
151,Xue W. etal. J Clin Microbiol., 1990, 28 :1688. 152,Xue W. et.al. J Gen Virol, 1993, 74, 1 :73.
ПОГРАНИЧНАЯ БОЛЕЗНЬ
(Бордер болезнь)
Border Disease (BD); hairy shaker disease (англ.)
Пограничная болезнь, (Бордер болезнь, пограничная болезнь овец - ПБО) - хроническая
контагиозная болезнь плодов и овец, характеризующаяся изменением волосяного покрова
эмбрионов и новорожденных ягнят, наличием у них обесцвеченных или пигментированных
пучков шерсти, мышечным тремором, патологией миелогенеза.
В Англии в графствах, расположенных по границе Англии и Уэльса, у овец зарегистри-
рована специфическая болезнь, названная пограничной болезнью - Border disease, от англ,
border - граница (22). Впервые болезнь зарегистрировали в 1953 г. в Новой Зеландии(25).
Распространение её в зоне границы между Англией и Уэльсом обусловлено присутствием в
этом районе большого количества овец наиболее восприимчивых пород. Болезнь, подобную
ПБ, фермеры регистрировали в этой местности еще около 30 лет назад, но в то время отме-
чались лишь единичные случаи ее. За последние годы число больных животных увеличи-
лось. Чаще поражается потомство молодых овец (в возрасте около года). По данным 1956-
1968 гг. приблизительно в 10 отарах в Англии заболеваемость в потомстве молодых овец
составляла более 30%. Экономические потери, вызываемые ПБ, значительны. Заболевание
зарегистрировано в Америке и Австралии (1,3, 27,29).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. ПБ развивается у но-
ворожденных овец в случае конгенитального инфицирования нецитопатогенным вирусом в
1-й половине беременности. Болезнь характеризуется низкой плодовитостью овец, аборта-
ми, рождением мертвых, слабых ягнят, иногда с нервным тремором. Обычно такие ягнята
не поддаются откорму и погибают в течение 100 дн. Масса ягнят бывает ниже нормального,
рождаются они с избыточным шерстным покровом и пигментом, растут медленно. Трубча-
тые кости короткие и тонкие. У многих наблюдается нарушение координации движения: от
незначительного дрожания задних конечностей до тремора или настолько выраженной дро-
жи, что они не могут стоять без посторонней помощи. Поскольку большее количество шер-
сти выпадает и симптомы болезни со временем исчезают, то не всегда можно точно диагно-
стировать ПБО. В зависимости от возраста плода во время инфицирования наблюдают 4
различных синдрома: 1) раннюю гибель эмбриона; 2) аборты и мертворождения мацериро-
ванных или мумифицированных плодов; 3) рождение ягнят с пороками развития; 4) рожде-
ние мелких, слабых ягнят с признаками иммуносупрессии. Состояние специфической имму-
нотолерантности, связанное с персистенцией вируса, сохраняется на протяжении всей жиз-
ни, хотя клинические признаки со временем исчезают, но персистенция вируса может вли-
ять на молодых и даже взрослых овец (31). У новорожденных ягнят характерные признаки
варьируют от легких до сильно выраженных. Волосяной покров ягнят содержит избыточные
волосы и длинные завитки шерсти. В шерсти встречаются пигментированные волокна, кон-
центрируемые главным образом в области шеи. Тяжелая дисфункция мышц приводит к на-
158
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
рушению координации движения и делает невозможным передвижение ягнят и их выращи-
вание. Заболеваемость достигает 35%, смертность также высока, особенно в течение 1-го
мес жизни. Большинство ягнят, инфицированных вирусом ПБО, погибает в раннем возрас-
те. Однако у выживших от инфекции животных постепенно исчезал тремор и менее очевид-
ными становились ненормальности волосяного покрова. Потомство от таких овец имело
признаки ПБО (волосистое руно, наличие тремора тела). У поросят при ПБО отмечают кон-
генитальный тремор, анемию, взъерошенность волосяного покрова, задержку роста, исто-
щение. Могут также наблюдаться конъюнктивиты, полиартриты, кровоизлияния на коже.
Смертность в возрасте до 2 дн составляет 30-70% (38,39).
Патологоанатомические изменения не характерны. Обьино наблюдают истощение н
пневмонию. У некоторых животных находят дистрофические изменения скелетных мышц.
Кровь без изменений. В сыворотке кровн, головном мозге, а возможно и в печени, несколь-
ко понижено, а в спинном мозге повышено содержание меди. При вспышке ПБО у свиней в
Голландии как наиболее постоянные признаки описаны: хронический гастроэнтерит, гемор-
рагии в лимфоузлах, эпикарде н почках, утолщение, изъязвление н катар слизистой желуд-
ка, некротические тонзиллиты, полисерозиты, полиартриты, атрофия тимуса (34, 35, 36, 37).
При экспериментальном заражении свиноматок вирусом ПБО через 34 дн после оплодотво-
рения на вскрытии новорожденных поросят установлена гипоплазия мозжечка у 9 из 19 го-
лов (44). Шт. Aveyron вируса ПБО вызывал поражения лимфоидных органов, кровоизлияния
в лимфоузлах (13).
Паткартина характеризуется накоплением лимфоцитов, плазмоцитов, эозинофильных
полиморфноядерных лейкоцитов, увеличением количества вторичных фолликулов, популя-
ции ретикулоцитов, лимфоидной гипоплазией с пикнозом и карнорексисом в лимфоузлах
(23, 24). У ягнят главные изменения локализуются в спннном и головном мозге в виде ги-
помиелогенеза и уменьшения гиалиновых клеток в интерфасцикулярных узлах.
Патогенез. При заражении суягных овцематок вирус ПБО при виремии повреждает
кровеносные сосуды карункулов матки и возрастает тромбозы н некрозы тканей. После про-
никновения через плацентарный барьер вирус поражает нейроглиальные ткани эмбриона н
подавляет миелогенез в спинном н головном мозге. Некоторые зараженные овцы абортиру-
ют, у других рождаются больные ягнята. Вирус ПБО (как и ВД-БС) обладает эмбриотоксич-
ностью, которая наиболее выражена при заражении через 25-41 дн после оплодотворения
маток (23, 24, 26). У большинства конгенитально инфицированных поросят вирус ПБО вы-
зывает персистентную инфекцию и иммунотолерантность.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусы ПБО образуют особую группу в роду пестивирусов. Трн штамма ПБО, выделен-
ные от овец в Великобритании и Австралии, отличались от вируса диареи КРС по амино-
кислотной последовательности 2-х белков El - Е2 (11).
Морфология и химический состав. Вирус ПБО подобен ВКЧС и ВД-БС. Это оболо-
чечный вирус, содержащий 1-цепочечную плюс-РНК, 25-120 нм в диаметре. Плавучая
плотность в CsCl 1,09-1,16 г/см3 н зависит от типа клеточной системы культивирования (20).
Антигенная активность, вариабельность и родство. После инокуляции инфекцион-
ного материала здоровым овцам у них выявляются АТ к вирусу диареи КРС. У овец, искус-
ственно инфицированных вирусом ПБО на ранней стадии суягностн, развивался иммунитет
продолжительностью не менее года. Открытие в 1961 г. АГ взаимосвязи между пестивиру-
сами стимулировало дальнейшее изучение естественной и экспериментальной инфекции
ВД-БС и ПБО у овец и свиней. Иммунологическое родство вирусов ПБО и ВД-БС установи-
ли Гамильтон и др. в 1972 г. (18). Некоторые исследователи считают, что термин вирус ВД-
БС и вирус ПБО используются, чтобы обозначить источник выделения вируса - КРС или ов-
цы; очевидно, что имеет место перекрестная инфекция вирусами ПБО н ВД-БС (5, 6, 7, 8, 9,
159
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
10, 32, 33). Известны шт. вируса ПБО - Моредун, Обан и Aveyron. При сравнении 3-х шт.
вируса ПБ с 4-я штаммами вируса диареи КРС (3-х цитопатогенных и 1-го нецитопатоген-
ного) методом олигонуклеотидного фингерпринта вирусной РНК, оказалось, что штаммы
ПБО более близки с нецитопатогенными шт. вируса диареи КРС, чем между собой (4, 15). О
естественном заболевании свиней, обусловленном вирусом ПБО, впервые сообщили в Авст-
ралии в 1964 г., но вирус ПБО выделили от свиней только в 1973 г. (17). Наличие АТ к ви-
русам ВД-БС и ПБО в сыворотках свиней усложняет выполнение программ борьбы с КЧС.
Показаны тератогенные свойства вирусов (34,35,36,37,38,39, 40, 41, 42,43).
Культивирование. Вирус, содержащийся в инфицированных тканях овец, удавалось
пассировать на козах с сохранением патогенности для овец. В лабораторных условиях он
культивируется в первичных и перевиваемых культурах клеток тканей жвачных животных.
Экспериментальная инфекция. Пограничная болезнь легко воспроизводится введени-
ем суягным овцам неочищенной суспензии тканей головного и спинного мозга и селезенки
от больных ягнят. Удавалось экспериментально заражать овец per os и через конъюнктиву;
видимо, заражение возможно даже через неповрежденные слизистые оболочки. У экспери-
ментально инфицированных овец 70-80% лимфоцитов содержат вирус. При эксперимен-
тальной инфекции суягных маток выживаемость потомства от шт. Моредун - 59%, а от шт.
Обан - 88%. Две наиболее общие причины гибели заключались в развитии хронического ат-
рофического синдрома и синдрома, напоминающего ВД-БС.
При экспериментальном заражении результаты зависят от использованного штамма ви-
руса ПБ илн ВД-БС. Так, заражение штаммом NADL (National Animal Disease Laboratory)
вируса ВД-БС на 28-54-й день беременности не приводило к трансплацентарной инфекции
плодов (30,30а). Инокуляция 9-18-кг поросят шт. Singer вируса ВД-БС не вызывала заболе-
вания, хотя вирус выделялся из крови и тканей инокулированных свиней (14). АТ выявля-
лись в пробах сыворотки крови через 3 мес. При заражении таких свиней вирулентным ви-
русом КЧС развивалось тяжелое заболевание у 7 из 8 животных. Заражение этим штаммом
41-65-дн плодов сопровождалось их гибелью или значительным отставанием в росте (26).
Полевой вирус ПБО при введении свиноматкам на 30-74 день беременности инфициро-
вал плоды и вызывал заболевание, характеризующееся снижением массы плодов и рожде-
нием “укороченных” поросят (44). Возрастала смертность, наблюдалась лихорадка, отеч-
ность век и анемия в течение 2-ой нед жизни поросят (23, 24). В связи с развитием диареи и
респираторных поражений замедлялся рост поросят, часть из которых погибала в течение 2
мес. Вирус изолировался из крови и органов всех павших поросят, но не выделялся от вы-
живших животных. У 40-дн SPF-поросят, содержавшихся в контакте с трансплацентарно
инфицированными поросятами, заболевание отсутствовало, но выявлялся высокий титр АТ
к вирусу ПБО, который защищал их от заражения вирулентным шт. вируса КЧС (24).
Локализация вируса. АГ вируса ПБО обнаружен при персистентной инфекции в 12,86
% лимфоцитов периферической крови, из них на долю Т-лимфоцитов приходи лось 67,82
%, а В-лимфоцитов - 5,39 %.
ГА свойства. Изолят вируса ПБО, описанный И. А. Третьяковой (2), не обладает ГА- и
гемадсорбирующими свойствами.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
В странах, свободных от КЧС (Австралия, Ирландия, Великобритания, Дания), прева-
лируют АТ к вирусу ВД-БС; процент позитивных проб крови свиней составляет 1,6-43,5 в
зависимости от возраста животных и вероятности контакта с КРС (21). В странах, где КЧС
имеет место, ситуация примерно такая же, но при отсутствии контакта свиней с КРС, АТ к
вирусам ВД-БС или ПБ у свиней не выявлялись. Вероятно, длительное присутствие латент-
но инфицированных животных способствует распространению ПБО или ВД-БС в стаде, ви-
рус может передаваться другим видам чувствительных беременных животных (34-39).
160
Глава IV. Family Flaviviridae Флавивирусные инфекции
Источники и пути передачи инфекции. При совместном содержании с больными жи-
вотными овцы, как и другие виды, могут инфицироваться алиментарным путем (с кормом
или водой) или аэрогенным путем (при вдыхании инфицированной аэрозоли).
Спектр патогенности. В последнее время в Центральной ветеринарной лаборатории в
Вэйбридже и в Уорчестекском ветеринарном исследовательском центре установлено, что
возбудитель ПБО обладает незначительной патогенностью для свиней, высокопатогенен для
плодов КРС и является потенциально серьезной причиной нарушения воспроизводства.
ДИАГНОСТИКА
Диагностика, в том числе и дифференциальная, может быть проведена при исследова-
нии ультракриосрезов тканей методами ИФ и ИФА .
Гибридизация in situ оказалась чрезвычайно чувствительным тестом для диагностики
ПБ. Пробы на РНК - эффективный тест для выявления вирусных нуклеотидных последова-
тельностей в мозге экспериментально зараженных животных (лошадей и овец) вирусом
ПБО, в том числе и от животных, срезы мозга которых хранились более 30 лет.
Вирус выделяют из эндокринной, мышечной, нервной, а также ретикулоэндотелиальной
ткани. Диагностика основана на выявлении персистентной инфекции и специфических АТ.
Дифференциальная идентификация изолятов пестивирусов от овец, свиней и КРС может
быть проведена только с помощью монАТ. Для этого необходимо использовать: монАТ,
выявляющие все пестивирусы, включая ВКЧС; монАТ, выявляющие только ВКЧС и мо-
нАТ, выявляющие только пестивирусы жвачных (ВД-БС и ПБО) (12, 16, 19, 28, 40-43). С
использованием реакции перекрестной нейтрализации и теста с использованием монАТ ус-
тановили, что в прошлом вирус ВД-БС мог быть изолирован от свиней, но обозначался как
ВКЧС на основе только реакций с полиАТ (38,39).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.СюринВ.Н. и др. Част. вет. вирусол., М., Колос,1979. 2.Третьякова И.А. Бюлл. ВИЭВ, 1989, 69 :16.
3.Acland Н.М. et.al. Aust Vet J, 1972. 4.Akkina R.K. et.al. Virus Res, 1990, 16 :95. 5.Barlow R.M. et.al. J
Comp Pathol , 1980, 9, 1:67. 6.Barlow RM. et.al. J Comp Pathol, 1983, 93, 3 :451. 7.Barlow R.M.
Immunol Nervous Syst Infect, 1983, 255. 8.BarlowR.M. et.al. Vet Rec 1979, 104, 15 :334. 9.BarlowR.M.
J Comp Pathol, 1980, 90, 1 :87. lO.Barlow R.M. et.al. Fortscher Veterinarmad, 1980, 36 :99. ll.BecherP.
et.al. Virol, 1994, 198, 2 :542. 12.Bolin S et.al. Arch Virol, 1988, 99 :117. 13.Chappuic G. et.al. Epid Sante
Anim, 1984, 6 :117. 14.Coria M.E. et.al. Can J Comp Med Vet Sci, 1978, 42 :239. 15.Dutia B.M. et.al. J
Gen Virol, 1990, 71 :1227. 16.Edwards S. et.al. Arch Virol, 1988, 102, (3,4) :197. 17.Femelius A.L. et.al.
Can J Comp Med, 1973, 37 :13. 18.Hamilton A. et.al. Vet Res, 1972, 91 :468. 19.Hess R.G. et.al. Vet
Microbiol,1988,16 :315. 20.Horzinek M.C. et.al. Ann Rech Vet, 1987, 18 :115. 21.Holm J.M. Acta Vet
Scand, 1985, 26 :72. 22.Hughes L.E. et.al. Vet Res, 1959, 71 :313. 23.Leforban Y. et.al. Proc 11‘ Cong,
Pig Vet Soc, Rio de Janeiro, 1990 :228. 24.Leforban Y. et.al. Ann Rech Vet, 1990, 21 :119. 25.Manktelow
B.W. etal. New Zealand Vet J, 1969, 17:245. 26.Mengeling W.L. Proc 10th Int Cong Pig Vet Soc, Rio de
Janeiro, 1988 :228. 27.OsbomB.L etal. IAMA, 1972,160 :442. 28.Peters V. et.al. Vet Microbiol, 1986, 12
: 195. 29.Shelton M. J Anim Sci, 1964, 23 :360. 3O.Stewart W.C. et.al. J Am Vet Med Ass, 1971, 159
: 1556. 30a. Stewart W.C. et.al. Am J Vet Res, 1980, 41 :459. 31.Sweasey D. et.al. Vet Rec, 1992, 104, 20
:447. 32.Terlecki S. et.al. Br Vet J, 1980, 136 :602. 33.Terlecki S. et.al. J Comp Pathol, 1983, 93, 2 :243.
34.Terpstra C. etal. Vet Sci Communications, 1977, 1,1 :75. 35.Terpstra C. Sidschr dergeneski, 1980, 105,
16 :650. 36.Terpstra C. Inf and Immun Farm Animal, 1985 :175. 37.Terpstra C. et.al. Res Vet Sci, 1988, 45
: 137. 38.Vannier P. et.al. Ann Rech Vet, 1988, 19 :283. 39,Vannier P. et.al. In Book. Dis of Swine, New
York, 1994 :242. 40.Wensvoort G. et.al. Res Vet Sci, 1988, 45 :143. 41.Wensvoort G. et.al. Vet Microbiol,
1988,17 :129. 42.Wensvoort G. et.al. Vet Microbiol, 1989, 20 :291. 43.Wensvoort G. et.al. Vet Microbiol,
1989, 21: 9. 44.Wrathall A.E. et.al. Zentralbl Veterinarmed, B, 1978, 25 :62.
11 Зак. № 171
161
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Глава V. КОРОНАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ CORONA VTRIDAE
Коронавирусы - РНК-содержащие вирусы, имеющие липопротеиновую оболочку. Коро-
навирусы содержат плюс-цепи РНК и обладают уникальным механизмом репликации. У
них отсутствует нейраминидазная активность и они не связываются с рецепторами, содер-
жащими сиаловую кислоту. Основные свойства коронавирусов приведены в табл. V. 1.
В семейство коронавирусов, включающее один род - корона вирус, входят вирусы ин-
фекционного бронхита кур (ИБК) - Infectious bronchitis virus (IBV); инфекционного гастро-
энтерита свиней (ИГС) - Porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV); коронавирус диа-
реи новорояеденных телят (ДНТ) - Neonatal calf diarrhea coronavirus (NCDCV); вирус си-
нюшной болезни индюков (СБИ) - Turkey bluecomb disease virus (TBDV), сииоиим
Coronavirus enteritis of turkey; коронавирус собак (KBC) - Canine coronavirus (CCV); корона-
вирус инфекционного перитонита кошек (ИПК) - Feline infectious peritonitis virus (FIPV).
Они вызывают заболевания у человека и животных.
Таблица V I. Свойства коронавирусов
Структура Сферический вирион диаметром 80-160 нм, оболочка с большими далеко отстоящими друг от друга пепломерами. Спиральный нук- леокапсид диаметром 10-20 нм
Геномная РНК Плюс цепь. Одна молекула. Мол.м. 5,5-10б. Полиаденилирована, имеет кэп, может служить в качестве мРНК
Структурные белки Пепломерный гликопротеин Е2 (180-200 кД). Нуклеокапсидный фосфопротеин N (50-60 кД). Матриксный гликопротеин Е1 (23-30 кД)
Ферментативная активность Слияние клетки, гемагглютинация (не у всех коронавирусов), протеинкиназа
Место почкования мРНК Мембраны ШЭР и аппарата Гольджи. Перекрывающийся набор мРНК с общим З'-концом. При трансляции гена на 5 -конце каж- дой мРНК образуется один полипептид
Коронавирусы представляют собой отдельную группу вирусов, во многом отличающуюся от
орто- миксо- и парамиксовирусов (См. табл.У.2.).
Вирусный геном представляет собой 1-цепочечную РНК (плюс-цепь), длиной от 16 до
21 нм мол.м. 6,5-11 мД. Как и в случае других вирусов, содержащих плюс-цепи РНК, ге-
номная РНК коронавирусов иифекциониа при введении в клетку эукариот. Молекулы ос-
новного фосфопротеина N (50-80 кД ), взаимодействуя с геномной РНК, образуют гибкий,
протяженный нуклеокапсид, обладающий спиральной симметрией (2, 7, 12, 15, 17, 19). В
зависимости от плоскости сечения на тонких срезах вирионов такие спиралеобразные нук-
леокапсиды видны в виде “бублика” или трубчатой нити диаметром 9-11 нм. Нуклеокапсид
окружен липопротеиновой оболочкой, формирующейся из шероховатого эндоплазматиче-
ского ретикулума (ЭР) или аппарата Гольджи зараженных клеток (4, 20, 21). Оболочка со-
стоит из липидного бислоя, включающего 2 вирусных гликопротеина Е (матриксный Е1) и
пепломерный (Е2) гликопротеин.
162
Глава V. Family Coronaviridae Короиавирусные инфекции
Таблица V. 2. Коронавирусы, названия, природные
хозяева и заболевания
АГ группа Вирус Хозяин Респ. инф. Киш. инф Гепатит Нейро- инф. Другие инф.
I HCV-229E Человек +
TGEV Свинья + + +
CCV Собака +
FECV Кошка +
FIPV + + + + +
II HCV-OC43 Человек +
MHV Мышь + + + +
HEV Свинья + + + +
BCV Корова +
RbCV Кролик +
III IBV Курица + +
IV TCV Индюк + +
Н/кл вирусы НЕСУ Человек +?
Матриксиый гликопротеин Е1 (20-30 К) является трансмембранным белком, глубоко
погружен в оболочку, не переносится на плазматическую мембрану. Он накапливается в ап-
парате Гольджи, где происходит почкование коронавирусов (11). АТ к Е1 нейтрализуют
инфекционность вирусных частиц только в присутствии комплемента (9). Гликопротеин Е2
(180-200 кД) напоминает гликопротеины больших вирусов, содержащих минус-цепи РНК: в
липидный бислой погружена только небольшая часть молекулы гликопротеина, тогда как
большая часть молекулы находится снаружи. Гликопротеин Е2 является структурным бел-
ком пепломеров и поэтому играет роль антирецептора, с помощью которого вирусная час-
тица прикрепляется к рецепторам на поверхности клетки. АТ к Е2 нейтрализуют инфекци-
онность вируса (9), а присутствие Е2 на плазматической мембране делает зараженные коро-
навирусом клетки восприимчивыми к цитотоксическим лимфоцитам (4). Расщепление гли-
копротеина Е2 протеазами клетки хозяина на 2 полипептида с мол.м. по 90 кД индуцирует
способность вируса вызывать слияние клеток (22). Как и у других вирусов с плюс-цепью
РНК, в вирионе коронавирусов нет РНК-зависимой РНК-полимеразы.
Большинство коронавирусов обладает значительной тропностью к клеткам эпителия
дыхательных путей и кишечного тракта. Характерно, что кишечные коронавирусы вызыва-
ют слабые, незаметно протекающие инфекции у взрослых особей и тяжелые, сопровождаю-
щиеся поносом заболевания у новорожденных и молодых животных (6). Многие коронави-
русы вызывают персистентную инфекцию in vivo (3, 4, 5).
Антигенная вариабельность и родство. Имеются 4 группы коронавирусов, разли-
чающихся по своим АГ-свойствам (см. табл. V.2.). Внутри каждой группы вирусов имеют
место постоянные АГ перекресты, однако вирусы одной группы легко различаются по спе-
цифичности к хозяину и клиническим синдромом.
Культивирование. В культуре клеток коронавирусы имеют латентный период от 6 до 7
ч. При инфицировании культуры клеток вирулентными коронавирусами клетки могут сли-
ваться, образуя синцитий, или лизироваться. В некоторых клеточных культурах, заражен-
ных коронавирусом человека (HCV-22gE), вирусные частицы образуются в течение не-
11*
163
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
скольких недель, но гибели клеток и цитопатического эффекта не наблюдается (8). Многие
коронавирусы вызывают персистентную инфекцию in vivo (1,13,14).
Одним из факторов, способных превращать абортивные коронавирусные инфекции в
пермиссивные вирулентные, является трипсин. Для продуцирования вируса и достижения
ЦПЭ в культуральную среду, зараженную коронавирусом КРС, необходимо добавлять трип-
син (18, 23). Этот коронавирус обычно реплицируется в кишечнике, где присутствует трип-
син, который способствует расщеплению пепломерного гликопротеина Е2 (22).
Репликация. Коронавирусы обладают некоторыми уникальными особенностями в транс-
крипции РНК, составе белков и механизме сборки. Они проникают в клетку посредством
абсорбционного эндоцитоза. После чего происходит прикрепление геномной РНК к рибосо-
мам, что приводит к синтезу вирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы. При транскрипции
геномной РНК образуется комплементарная минус-цепь РНК полной длины. Синтез ее за-
вершается через 5-6 ч после заражения. Минус-цепь РНК служит матрицей для синтеза как
новых геномных, так и субгеномных РНК. Синтез гликопротеинов Е1 и Е2 происходит на
полисомах, прикрепленных к эндоплазматическому ретикулуму, однако в их процессинге и
транскрипции имеются различия. В аппарате Гольджи или на плазматической мембране Е2
расщепляется протеазами клетки-хозяина на 2 больших гликопептида (90 кД). Такое расще-
пление необходимо для проявления инфекционности вируса. Гликопротеин Е1 также синте-
зируется на полисомах, связанных с мембранами. Удивительно, что олигосахаридный со-
став Ely разных коронавирусов сильно различается.
Сборка вирионов. Спиральный нуклеокапсид коронавирусов образуется в цитоплазме
зараженных клеток за счет взаимодействия вновь синтезированной РНК с молекулами белка
N. Размеры нуклеокапсида, по-видимому, определяются свойствами белка N, его способно-
стью к связыванию.
Вирионы коронавирусов образуются путем почкования от мембраны ШЭР и (или) аппа-
рата Гольджи (10). Почкование коронавирусов происходит только на тех внутриклеточных
мембранах, на которых локализованы молекулы Е1. Вирионы образуются на мембранах
ШЭР и аппарате Гольджи. Способность коронавирусов выходить из клетки без ее лизиса
является важным фактором, обеспечивающим возможность умеренной (не цитопатической)
инфекции.
Вирионы коронавирусов представляют собой сферические или плеоморфные частицы
диаметром 60-200 нм. Они состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопроте-
идной оболочки, на поверхности которой имеются булавовидные выступы длиной 12-24 нм,
образующие подобие солнечной короны. Плавучая плотность вирионов в сахарозе 1,15-1,18
г/см3. Вирионы чувствительны к жирорастворителям и детергентам.
В составе вирионов обнаружено 3-4 белка с мол.м. 18-220 кД. В инфицированных
клетках обнаружено 5-7 видов субгеномных РНК, которые содержат идентичные последова-
тельности нуклеотидов на 3'- конце и уникальные последовательности на 5’ - конце. Все
они копированы и полиаденилированы. Каждая субгеномная РНК обеспечивает синтез толь-
ко одного белка, размер которого соответствует кодирующему потенциалу 5-концевой по-
следовательности, отсутствующей в более короткой субгеномной РНК. Созревание вирионов
происходит почкованием через мембраны эндоплазматического ретикулюма и аппарата
Гольджи.
Семейство Coronaviridae состоит из двух родов: Coronavirus и Torovirus.
1. Род Coronavirus. Основным структурным белком коронавирусов является нуклеок-
цидный белок (N), мембранный гликопротеид (МЕ1) и спайковый (отростчатый) гликопро-
теид (S, Е2). Кроме этих белков, присущих всем коронавирусам, у коронавирусов человека
и КРС обнаружен дополнительный гликопротеид (gp65), который не связан ни с S, ни с N
полипептидами. У прототипного штамма коронавируса человека ОС43 и коронавируса, вы-
164
Глава V. Family Corcnaviridae Коронавирусные инфекции
зывающего диарею у новорожденных телят, имеются общие АГ-детерминанты, что уста-
новлено в PH, РСК и подтверждено обнаружением сероконверсии у лиц с коронавирусной
инфекцией, причем для шт. ОС43 и NCDCV (коронавируса телят) они более близки по
внутренним, чем по поверхностным АГ.
2. Род Torovirus (от лат. torus - тор) включает вирусы Берне (прототипный вирус) и
Бреда. Вирионы торовирусов представляют собой плеоморфные частицы, (в виде полумеся-
ца, двояковогнутого диска, округлые) диаметром 120-140 нм. Они состоят из тороидального
нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки.
Геном состоит примерно из 20 тыс. нуклеотидов. В вирионах обнаружен нуклеокап-
сидный фосфопротеин N (18-20 кД), матриксный фосфопротеин М (37 кД). МонАТ к пеп-
ломерному белку нейтрализуют инфекционную и ГА активность вируса. Торовирусы пере-
даются фекально-оральным путем и вызывают, в основном, поражения кишечника у лоша-
дей, КРС и человека. Серологическими исследованиями показана широкая циркуляция то-
ровирусов у свиней, овец, коз, кроликов и диких мышей. Между торовирусами лошадей,
КРС и человека имеется АГ родство.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сергеев В.А., Орлянкин Б.Г. Структ. и биология вир. жив., М., Колос, 1983. 2.Сюрин
В.Н. и др. Части вет. вирусол., М., Колос.,1979. З.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив.,
М., Агропромизд.,1991. 4.Филдз Б., Найл Д. Вирусология., М., Мир. , 1989. 5.Фомина Н.В,
и др. Вирусы животных., М., MBA, 1991. 6.Barthold S.W. et.al. Arch Virol,1984.7.Coul E.O.
et.al. FES Microbiol, Lett 1979, 5 :101. 8.Chaloner-Larson G. et.al. Adv Exp Med Biol,1982, 142
:309. 9.Collins A.R. et.al. Virol., 1982, 119 :358. lO.David-Ferreira J.F. et.al. J Cell Biol., 1965,
24 :57. ll.Holmes K.V. et.al. Adv Exp Med Biol ,1981,142 :133. 12.Flemming J.O. et.al.
Virology, 1983, 131 :296. 13.Hoshino Y. et.al. Arch Virol, 1980, 63 :147. 14.Knobler R.L. et.al.
Nature (Lend), 1982, 298 :279. 15.Macnayghton M.R. et.al. J Gen Virol., 1978, 39,:545.
16.Siddell S.G. et.al. Intervirology, 983, 20 :181. 17.Stohlman S.A. et.al. J Virol., 1979, 32 :672.
18.Storz J. et.al. Immunol ,1981, 31 :1214. 19.Sturman L.S. et.al Virology, 1977, 77 :650.
2O.Sturman L.S. Adv Exp Med Biol, 1981, 142 .1. 21.Sturman L.S. et.al. Adv Virus Res ,1983,
28:35. 22.Sturman L.S. et.al. In Molecular Biol and Pathogenesis of Coronavirus, 1984.
23,Yashikuza H. et.al. Virology, 1981, 113 :503.
ИНФЕКЦИОННЫЙ ГАСТРОЭНТЕРИТ СВИНЕЙ
Transmissible Gastroenteritis (TGE) (англ.); Gastroenteritis infectiosa suum (лат.);
Transmissible Gastroenteritis des Schweines, Virusdiarrhea der Schweine (нем.)
Инфекционный гастроэнтерит свиней (ИГС) (трансмиссивный гастроэнтерит свиней -
ТГС, болезнь Дойла и Хитчингса) - остро протекающая высококонтагиозная болезнь, глав-
ным образом поросят до 3-мес возраста, проявляющаяся рвотой, тяжелой диареей и высокой
смертностью (часто до 100%) среди поросят до 2-нед возраста (101).
ИГС первыми описали Дойл и Хитчингс (США) в 1946 г. Вспышки его отмечены в
Японии (1956), Великобритании (1957), Канаде (1964) и во многих странах Европы, в т.ч. в
странах СНГ. Показано, что 19-54% свиноферм Европы и Северной Америки серопозитив-
ны по ТГС (46). Распространенность в большинстве европейских стран составляет около
100%. Эта ситуация обусловлена респираторным вариантом вируса ИГС, названным респи-
раторным коронавирусом свиней (РКВС), который быстро распространился с 1986 г. (32,
88, 89, 90а). Экономические потери весьма значительны (19, 78, 81, 92, 93). Они складыва-
ются из высокой смертности новорожденных поросят, низкой эффективности лечения,
сложности предупреждения заноса вируса в весеннее время, поскольку существенную роль в
165
Глава V. Family Coronaviridae Ксронавирусные инфекции
этом играют птицы, особенно скворцы. Эффективность коммерческих вакцин весьма огра-
ничена (82,83,100 ).
Симптомы и патологоанатомические изменения. Вирус поражает поросят до 3-нед
возраста. В более старшем возрасте они переболевают без летального исхода. У больных
кормящих свиноматок снижается продукция молока. Болезнь клинически проявляется от-
сутствием аппетита, рвотой, диареей (беловатые, желтоватые или зеленоватые пенистые фе-
калии), обезвоживанием, слабостью и высоким падежом. Инкубационный период у 1-5-дн
поросят длится 12-18 ч, погибают все заболевшие. У 6-10-дн поросят инкубационный пери-
од - 18-36 ч, смертность среди них достигает 67%. С возрастом животных инкубационный
период увеличивается, смертность уменьшается. Относительно высокая чувствительность к
вирусу ИГС может быть связана со снижением цитотоксичности лимфоцитов в отношении
клеток, инфицированных вирусом у свиноматок при опоросе, а также отсутствием цитоток-
сичности лимфоцитов у поросят в течение 1-й нед после рождения (35). В этих условиях по-
росята могут быть защищены только АТ матери, полученными с молозивом и молоком.
Кроме энтероцитов, поражение которых сопровождается атрофией ворсинок тонкого отдела
кишечника, клетками-мишенями для вируса могут служить альвеолярные макрофаги (70), а
также клетки миндалин и др. органов. В клетках миндалин больных поросят АГ ВИГС вы-
являли даже чаще, чем в клетках тощей кишки.
Различают 3 стадии болезни: предклиническую, клиническую и выздоровления. В пред-
клинической стадии наблюдают снижение аппетита, сонливость, повышенную жажду, ино-
гда лихорадку (41-41,5°С) и рвоту. Клинический период характеризуется сильной диареей с
выделением газов. Фекалии серо-красного или жёлто-зелёного цвета, выделяются самопро-
извольно. Стадия выздоровления более длительная. Заболевшие поросята испытывают
сильную жажду, пьют много воды и сосут молоко, которое в непереваренном виде выходит
с жидкими фекалиями. Потеря жидкости ведёт к сильному обезвоживанию организма,
вследствие чего развиваются метаболический ацидоз и другие изменения в электролитиче-
ском балансе крови. Смерти обычно предшествует кома, наступающая на 3-й день. У вы-
живших поросят через 3-4 дня начинается регенерация ворсинок диарея прекращается. Бо-
лезнь длится 2-5 дн, смертность снижается по мере увеличения возраста поросят. Возрас-
тной фактор также влияет на продолжительность и тяжесть болезни. У свиноматок, зара-
жённых при контакте с больными поросятами, повышается температура тела, исчезает ап-
петит, отмечаются депрессия, умеренная диарея и прекращение лактации. Выздоровление
наступает через 7-10 дн. Выжившие поросята отстают в росте. Иногда к желудочно-
кишечным расстройствам присоединяется энцефаломиелит с гиперестезией. От 43 до 98%
взрослых свиней в различных странах имеют к вирусу ВНА. Материнские АТ исчезают у
поросят к 15 нед жизни. Затем появляются активно выработанные АТ за счёт инаппарантно
перенесённой инфекции под защитой материнских АТ. Вирусный гастроэнтерит, в основ-
ном, протекает в ассоциации с бактериальными инфекциями и чаще с колибактериозом
(37,9%), вызываемым шт. 0-138, 0-103, 0-78, 0-86 и 0-1. Необходимо учитывать, что РКВС
обычно вызывает субклиническую респираторную инфекцию. Лихорадка наблюдалась по-
сле интратрахеального заражения, тогда как другие исследователи наблюдали пневмонию
со смертельным исходом (85, ПО, 111), а также выраженную потерю массы у 90-дн поро-
сят, что не наблюдалось у 15-нед свиней.
Патизменения у поросят-сосунов, павших в первые 3 дня жизни, наблюдают, главным
образом, в желудке и тонком кишечнике. В желудке небольшое количество свернувшегося
молозива, слизистая его набухшая, покрасневшая, местами ослизневшая. Аналогичные из-
менения и в тонком кишечнике. У поросят 2-нед возраста картина вскрытия более выраже-
на. Труп истощен, конъюнктива, слизистые носовой и ротовой полостей бледные, с синюш-
ным оттенком, скелетные мышцы вялые, суховатые. На ушах, брюхе, шее часто появляются
166
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
красно-фиолетовые пятна. Слизистая оболочка дна желудка резко гиперемировала, набух-
шая, покрыта слизью, иногда усеяна точечными кровоизлияниями, местами эрозирована и
изъязвлена. Тонкий кишечник растянут газами, заполнен жидким содержимым, в состоянии
катарального или катарально-геморрагического воспаления. Слизистая тонкого кишечника
полнокровна или в состоянии катарально-геморрагического воспаления. Брыжеечные, пор-
тальные, почечные и желудочные лимфоузлы набухшие, сочные, селезенка полнокровна.
Печень бледная или пятнисто окрашена, дрябловатой консистенции. Почки бледные, иногда
с мелкими кровоизлияниями под капсулой. Слизистая мочевого пузыря набухшая, усеяна
кровоизлияниями. Сердце увеличено, миокард серого цвета, дрябловатый, под эпи- и эндо-
кардом по ходу сосудов мелкие кровоизлияния. Легкие без особых изменений или несколько
полнокровные. Оболочки головного мозга гиперемированы, вещество мозга иногда размяг-
чено, отечно, с мелкими кровоизлияниями. У подсвинков и взрослых свиней картина вскры-
тия сходна с таковой у 2-нед поросят, но слабее выражена.
У поросят, погибших через 1-3 дня после рождения, в желудке и тонком кишечнике ус-
танавливают слизистую дистрофию и некроз эпителиальных клеток, полнокровие и отек со-
единительно тканной пластинки и подслизистого слоя кишечника. У поросят 2-нед возраста
обнаруживают более глубокие изменения. В желудке - полнокровие и кровоизлияния, дис-
трофия покровных клеток, обширные эрозии и некрозы, окруженные клеточными инфильт-
ратами из лейкоцитов. Часто отмечают серозный или фибринозный гастрит. В тонком ки-
шечнике гиперемия, гиперсекреция, вакуолизация, некроз и десквамация эпителия ворсинок
вплоть до полного их оголения. Большая часть ворсинок атрофирована и деформирована.
Собственный и подслизистый слои гиперемированы, отечны, часто с кровоизлияниями, ин-
фильтрированы лимфоидными, эозинофильными и плазматическими клетками. В толстом
кишечнике гиперемия, иногда дистрофия и некроз клеток эпителия крипт. Селезенка и лим-
фоузлы инфильтрированы эритроцитами, строма их отечна. В печени гиперемия, зернистая
дистрофия гепатоцитов и нарушение балочного строения, в почках зернистая дистрофия ка-
нальцевого эпителия, в сердце изменения тинкториальных свойств саркоплазмы мышечных
волокон, отек межмышечной соединительной ткани. В головном мозге находят периваску-
лярные лимфоцитарные “муфты”, очаги пролиферации глии (2) (Рис.25, 29, 30).
Патогенез. Попадая в организм через ЖКТ или органы дыхания, вирус проникает в
эпителий тонкого кишечника. Размножаясь в цитоплазме клеток ворсинок слизистой обо-
лочки, он вызывает дегенерацию и некроз их. Под влиянием продуктов распада этих клеток
и токсинов происходит нарушение гемодинамики и усиливается проницаемость стенок мик-
роциркулярного русла, что способствует проникновению части вируса в кровь. Однако ос-
новная масса вируса локализуется в эпителии кишечника, вызывая дистрофию, некроз и де-
сквамацию клеток ворсинок, из-за чего последние укорачиваются (атрофируются). Наиболее
выраженный некроз клеток и атрофию ворсинок отмечают в каудальной части 12-перстной,
тощей и подвздошной кишок. Названные изменения эпителиальных клеток являются при-
чиной острого нарушения процессов пищеварения, диспепсии, диареи и обезвоживания, на-
рушения обмена веществ. Отмечают ацидоз, общую интоксикацию и гибель животных.
Распространение вируса ИГС по эпителию кишечника происходит путем выделения ви-
руса из инфицированных клеток в просвет кишечника, а затем заражаются близлежащие
клетки через апикальный домен (98). При инфекции РКВС атрофии сосочков тонкого ки-
шечника не наблюдается. Однако в легких развивается интерстициальная пневмония у
большинства инокулированных животных (39,86,111).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусную этиологию подтвердил Doyle и Hutchings (1946), когда они описали фильт-
руемость этиологического агента (45). Вирус относится к семейству Coronaviridae роду
Coronavirus (14, 105). Вирус инфекционного гастроэнтерита свиней (ВИГС) впервые выде-
167
Глава V. Family CorcnaviridaeKopOHaBHpycHbie инфекции
лил и описал японский исследователь Тайима (1970). Помимо ВИГС, к коронавирусам сви-
ней также относятся ГА-вирус энцефаломиелита и вирус эпизоотической вирусной диареи.
Последняя протекает несколько легче. Видимо, к группе эпизоотической вирусной диареи
следует отнести вирус КВ-777, вызывающий массовые вспышки диареи у свиней разных
возрастов и индуцирующий образование АГ в цитоплазме тонкого и толстого кишечника.
При электронной микроскопии его обнаруживают в содержимом кишечника и фекалиях
больных поросят.
Морфология и химический состав. ВИГС оболочечный, плеоморфный, диаметром 60-
160 нм (55), имеет один слой булавообразных отростков (Рис.26, 27) на поверхности проек-
ции длиной 12-25 нм (105). Вирус содержит одну большую полиаденилированную плюс
РНК (>23кД) (71b, 105). РНК, экстрагированная из вирионов, обладает инфекционностью
(28). В процессе репликации синтезируется 5-7 субгеномных мРНК с общими 3'- концами
для продукции вирусных белков (30, 64, 71b, 115а). Определена нуклеотидная последова-
тельность по 3 - концу генома, соответствующая мРНК (67, 94, 95). Плавучая плотность ви-
рионов в градиенте сахарозы составляет 1,18-1,20 г/см3 (28, 66). Фосфо- и гликолипиды, ин-
корпорированные в оболочку, имеют клеточное происхождение, таким образом, оболочка
вириона клеточнозависимая. ВИГС содержит 3 главных структурных белка: нуклеокапсид-
ный белок (N), мелкий оболочечный гликопротеин (М) и большой гликопротеин пепломеров
(S) (106). В зрелом вирионе N-протеин “вплетен” в вирусную РНК, образуя рибонуклеопро-
теидный комплекс. Гетерофильный N-конец гликопротеина М выступает из вириона и имеет
единственный доступный гликопротеиновый сайт и обеспечивает индукцию КСА и ВНА, а
также интерферона (71а, 117). Гликопротеин S (или пепломерный белок) мол.м. 195-220 кД
смотрится на электронограммах как корона вируса. Он отвечает за прикрепление вируса к
клетке, расплавление мембраны и индукцию комплементнезависимых ВНА. Очищенный S-
гликопротеин индуцирует образование ВНА, которые нейтрализуют репликацию вируса на
всех стадиях (84,108).
Определена последовательность 3' главных 8300 нуклеотидов геномной РНК ВИГС шт.
Perdue, адаптированного к клеткам (71b). Этот участок генома содержит 3 главных струк-
турных гена с согласованностью коронавирусной ориентации 5' - S - М - N -3' и 4 больших
открытых рамки считывания, которые кодируют потенциальные вирусные протеины.
5' часть генома кодирует вирусную репликазу/транскрипгазу как и у вируса ИБК (27).
Степень гомологии аминокислот среди структурных белков ВИГС и антигенно не связанных
коронавирусов подтверждает, что эти коронавирусы имеют общее эволюционное происхож-
дение. Однако методом перекрестной гибридизации нуклеиновой кислоты среди антигенно
не связанных коронавирусов родства не наблюдается в связи с низкой базой гомологичных
последовательностей (22, 104). Недавно был секвенирован 3' конец геномной РНК РКВС
(96). Сопоставление нуклеотидной и аминокислотной последовательностей РКВС и ВИГС
выявляет 96% гомологии. Геном РКВС содержит 2 отличающиеся карты: 1 - в гене S не-
достает 672 нуклеотидов в 5' зоне, кодирует большой белок пепломеров; 2 - первая открытая
рамка считывания от гена S имеет двойную делецию. Это генетическое изменение обуслов-
ливает измененный тканевый тропизм РКВС. О подобных изменениях фенотипа сообща-
лось относительно мелкобляшечного варианта ВИГС (119). Хотя ген S мелкобляшечного
варианта и дикого ВИГС похожи, большая делеция (462 нуклеотида), происходящая из S -
гена, имеет место в мелкобляшечном варианте (115а). Эта делеция выявляет открытую рам-
ку считывания одного потенциально кодируемого белка и N-концевую часть второго потен-
циального вирусного белка. Очевидно, патогенность РКВС и мелкобляшечного варианта
ВИГС снижается как результат этих генетических делеций.
Нуклеотидная последовательность S-гена вируса инфекционного перитонита кошек
(ВИПК) определена и сравнивалась с таковой S-гена ВИГС (64а). На основе нуклеотидной и
168
Глава V. Family Cor<maviridae Киронавируспые инфекции
аминокислотной гомологии идентифицированы 2 различающихся домена. Один домен
(аминокислоты 1-274) имел нуклеотидную гомологию 39%, тогда как гомология во 2-ом
домене (аминокислоты 275-1447) была 93%. Возможная эксплантация для этих высоких ди-
вергенций последовательности в 3' конце может быть такой, что ВИПК происходит при ре-
комбинации РНК-РНК ВИГС со связанным вирусом. Высокая частота РНК-РНК - рекомби-
нации также описана и для коронавирусов мышей (76).
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу и дезоксихолату натрия, ус-
тойчив к трипсину. Не подавляется ДНК-ингибиторами. Инактивируется 0,03%-ным р-ром
формалина, 1%-ным Lysovet (смесь фенола и альдегида), 0,01%-ным р-ром 0-пропио лакто-
на, гипохлорита натрия, едкого натрия, йода (31). Изучена сравнительная термическая инак-
тивация 2-х штаммов вируса инфекционного гастроэнтерита Perdue и Д25. Возбудитель ус-
тойчив к замораживанию. В замороженном виде вируссодержащий материал сохраняется 5-
8 нед, при -18°С - до 18 мес, при -20, -40 или -80°С - 365 дн; при нагревании до 56°С инак-
тивируется за 30 мин и до 50°С в присутствии IM MgC^ - за 1 ч, при 37°С полная потеря
инфекционности наступала через 4 дн. Устойчив к pH (4-9). В жидком кале на солнце инак-
тивируется за 6 ч, в тени - за 3 дня. Амантадин и пуромицин тормозят репродукцию вируса.
ВИГС стабилен в желчи поросят при pH 3,0 (69, 80, 80а), сохраняющую его инфекцион-
ность в тонком кишечнике.
Антигенная структура. Сердцевина ВИГС представлена геномной РНК с ковалентно
связанным и фосфорилированным нуклеокапсидным белком (N) с мол.м. 47 кД. Вокруг неё
располагается ведущий свое происхождение из эндоплазматического ретикулума клеток хо-
зяина липидный белок, в котором локализованы вирусспецифические липопротеины 2-х ти-
пов: интегральный мембранный липопротеин (М) с мол.м. 28 кД и пепломерный гликопро-
теин (S) с мол.м. 200 кД, который формирует поверхностные отростки (пепломеры). В виру-
се ТГС выявлены 4 АГ-сайта (А, В, С и D) и идентифицировано 11 эпитопов, 8 из которых
вируснейтрализующие.
Нейтрализующие вирус ТГС монАТ против gpS не зависят от комплемента (117), тогда
как АТ против гликопротеина М тоже нейтрализуют вирус ТГС, но исключительно в при-
сутствии комплемента. ВНА к S- и М-белкам свидетельствуют об АГ гетерологичности изо-
лятов вируса ТГС (121). У коронавирусов свиней и собак в протективном белке обнаружено,
по крайней мере, одна общая АГ-детерминанта, обеспечивающая практически одинаковую
защиту поросят при иммунизации матерей гомо- и гетерологичным вирусом (120). По более
ранним сообщениям вирионы ТГС содержат следующие белки: пепломерный белок Е2 (220
кД), белок Е'2 (175 кД), который является предшественником белка Е2, низкомолекулярный
оболочечный белок Е1 (29 кД), нуклеопротеин N (47 кД). Сыворотка реконвалесцентов со-
держит ПА к S и М протеинам, часто к вирус-кодируемому внутриклеточному протеину
мол.м. 14 кД (115). МонАТ получены к аттенуированному (38, 43, 66, 71) и вирулентному
штаммам ВТГС (ИЗ, 121) и используются для характеристики протеинов вируса и карты
эпитопов, которые выявляют АТ. Главные нетрализующие детерминанты связаны с S гли-
копротеином; эти эпитопы высококонсервативны у большинства штаммов ВИГС (51, 52, 66,
71, ИЗ). Антигликопротеин-М монАТ обладают низкой нейтрализующей активностью или
она полностью отсутствует, однако, она может быть значительно увеличена комплементом
(71b, 117). Использование нейтрализующих монАТ для определения эпитопной карты S-
гликопроте-ина показало наличие 4-5 различных АГ-сайтов, содержащих в сайтах А и В
высоко консервативные эпитопы, узнаваемые сильной нейтрализацией монАТ (38, 43, 51,
52,102). В 2-х последних работах положение каящого из 4-х главных АГ-сайтов (А-D) кар-
тировано на первичной структуре гликопротеина S.
Антигенная вариабельность. Штаммы вируса, выделенные от животных в разных
странах, серологически идентичны, хотя в последние годы появились варианты. Существует
169
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные ивфекции
иммунологическое различие между кишечным и культуральным ВИГС. Кишечный вирус
содержит АГ А. В 1977 г. установлено АГ-родство ВИГС с ВИПК, а также коронавирусом
собак (КВС). Вирус ИГС имеет 1 серотип, не имеет связей с вирусом энзоотической диареи
свиней и ГА-вирусом свиней (41). Выделенный недавно респираторный коронавирус свиней
(RSCV/PKBC), получивший широкое распространение в ряде западноевропейских стран,
оказался в АГ-отношении тесно родственным ВИГС. Главным отличием его является ис-
ключительный пневмотропизм при отсутствии энтеропатогенности (65). В АГ-отношении
оба вируса сходны между собой и имеют одинаковые нейтрализующие эпитопы во всех ви-
рионных белках (N, S, М). Однако монАТ, специфичные к белку S ВИГС, распознают РКВС
(88, 89). Вирус эпизоотической диареи свиней по всем свойствам является типичным коро-
новирусом, хотя и не обладает АГ родством с другими представителями семейства корона-
вирусов (47, 89). Исследована степень родства ВИГС и РКВС по уровню индукции специ-
фических реакций клеточного иммунитета и защиты против контрольного заражения поро-
сят. ВИГС не имеет АГ родства с 2-мя другими коронавирусами свиней: ГА-вирусом энце-
фаломиелита (PEDV) и вирусом эпидемической диареи поросят (CV777) (90). Энцефалит,
обусловленный ГА-вирусом, регистрируется в Европе и на Тайване, АТ выявлены на огра-
ниченном поголовье взрослых свиней в США (42). ВИГС, КВС и ВИПК АГ связаны (97,
118). Подтверждено, что эти 3 вируса могут представлять ряд мутантов исходного вирусного
штамма (62). Перекрестная реакция имеет место также на уровне структурных белков S, N и
М в реакциях радиоиммунопреципитации, иммуноблотинга, ИФА (62). Аналогичные пере-
крестные реакции со структурными белками ВИГС и РКВС наблюдали с использованием
поликлональной сыворотки в иммуноблотинге (34).
Локализация вируса. В клетках тонкого кишечника заражённого поросёнка вирус раз-
множается в течение 2 нед, а с калом выделяется 7-10 дн после клинического выздоровле-
ния. В достаточно высокой концентрации он накапливается в эпителии тонкого кишечника,
содержимом ЖКТ и ткани лёгких. Вирус, попавший в организм с кормом, благодаря кисло-
тоустойчивости проходит в желудок и размножается в тонком кишечнике, разрушая эпите-
лий ворсинок. Другие клетки не повреждаются. Вирус локализуется в цитоплазме цилинд-
рических клеток ворсинок тонкого кишечника. Поражённые клетки обнаруживают уже через
5 ч после заражения. Через 9-12 ч происходит повторный цикл его репликации, и через 16-
18 ч в большинстве клеток отмечают специфическую ИФ. Через 24 ч происходит атрофия
ворсинок, а спустя 3 дня - регенерация клеток, которая завершается на 7-й день.
Больные и переболевшие свиньи являются вирусовыделителями до 2 мес. Концентрация
вируса в экскрементах особенно высока в начале болезни и в период её развития (10б-107
ИДго/мл) В крови и паренхиматозных органах его обнаруживают в продромальный период
при первом повышении температуры тела. При развитии виремии он выявляется в парен-
химатозных органах, а также в слизистой носа, трахеи, миндалинах, в более низком титре -
в крови. У взрослых свиней вирус редко обнаруживают в органах пищеварения и дыхания, а
также в региональных лимфоузлах. В лимфоцитах он не реплицируется. При эксперимен-
тальном заражении 3-дн поросят на 2-е сут после инокуляции вирус выделяют из лёгких,
печени, поджелудочной железы, а также крови. В последующие 9 дн титр его ещё высокий,
но к 15-му дню его в органах уже не обнаруживают. У 3-нед поросят вирус выделяют только
из кишечника в течение 3-5 дн после заражения. Однако при заражении новорождённых по-
росят per os или интраназального вирус реплицируется в слизистой оболочке носа, минда-
линах и тонком кишечнике, затем передвигается по нервным путям в перефирические ганг-
лии и появляется в нейронах спинного и головного мозга. У поросят, полученных с помо-
щью гистеректомии от экспериментально заражённых свиноматок на 74-й и 95-й дни супо-
росности, обнаруживали кишечную локализацию вируса и атрофию ворсинок кишечника.
Поросята имели АТ к вирусу ВИГС. Недостаток цинка в корме отягощает болезнь.
170
Глава V. Family CormaviridaeKopoHaBHpycBbie инфекции
Из организма больного животного вирус выделяется, в основном, с калом и в меиьшей
степени с мочой и экскретами. Во внутренних органах и лимфоузлах животных-
реконвалесцентов он может переживать многие месяцы и годы. Равновесие вирус - хозяин
может быть нарушено стрессовыми воздействиями. Поросята, заражённые в возрасте 5 нед,
оставались вирусоносителями в течение 104 дн. Установлено, что заражение супоросных
свиноматок за 2-3 нед до опороса приводит к массовому заболеванию и высокой смертности
их поросят. При заражении маток за 1,5-2 мес до опороса поросята остаются здоровыми в
течение всего подсосного периода. После отъёма от матерей они легко переболевают,
смертность незначительная. У экспериментально заражённых поросят наблюдали вирусоио-
сительство в течение 2,5 мес (срок наблюдения).
Антигенная активность. Вирус ИГС обладает выраженной АГ активностью и индуци-
рует синтез ВНА, активность которых обусловлена IgA, а при иммунизации - IgG. У сви-
ней, заражённых per os вирулентным шт. Miller, появлялись AT IgA, а у заражённых парен-
терально аттенуированным культуральным шт. Purdue- IgG. Вирусный нуклеопротеин (N)
не способен индуцировать синтез ВНА (117). В молозиве, а затем в молоке свиноматок- ре-
конвалесцентов, такие АТ присутствуют в течение нескольких недель. Поросята от перебо-
левших или ранее инфицированных в естественных условиях свиноматок устойчивы к за-
болеванию, если они сразу после рождения и не реже, чем через каждые 4 ч потребляют та-
кое молозиво или молоко. Пассивный иммунитет против кишечной инфекции обусловлен
IgA молока. Титры АТ в молозиве и молоке инфицированных свиноматок выше, чем в сы-
воротке крови. Значительный уровень IgA обнаруживается в молозиве и молоке только по-
сле поедания свиноматками вируссодержащего материала. Возможный механизм, объяс-
няющий это явление; - АГ-сенсибилизированиые иммуноциты из Lamina propria кишечного
тракта заселяют молочную железу. Субъединичный компонент ВИГС (гликопротеин), буду-
чи выделенным из вирионов с помощью ультразвука и отделенным из остальных вирусных
компонентов (с помощью изопикнического центрифугирования), способен при внутримы-
шечном введении защищать поросят. У вакцинированных животных развивался гумораль-
ный иммунный ответ (53, 53а). Главным механизмом нейтрализации является ингибиция
прикрепления вируса к клетке (108).
Экспериментальная инфекция. Вызывается введением вируса per os или интрана-
зальио. Наиболее восприимчивы поросята - сосуны в возрасте от 1 до 15 дн, хотя во многих
случаях болезнь удаётся воспроизвести и у взрослых животных. Заражение легко удаётся
только при введении материала per os. Поросят 1-5-дн возраста можно заразить иитраиа-
зально; очевидно, что при интразанальной инстилляции материала около 90% его попадает
в ЖКТ. При парентеральных методах заражения воспроизвести болезнь обычно не удаётся
или требуются для этого в 1000 раз большие дозы вируса, чем при оральном инфицирова-
нии. Морские свинки, белые мыши и мышата-сосунки 1-5-дн возраста, кролики, хомячки к
ВИГС нечувствительны.
Культивирование. Вирус размножается в первичных культурах клеток тестикул, кожи,
лёгких, щитовидной железы, тощей, подвздошной кишок, эпителии слизистой оболочки но-
совой полости и в перевиваемых клетках тестикул поросёнка, не вызывая в первых пасса-
жах ЦПД, а также в органных культурах пищевода. Редко полевые изоляты вызывают дест-
рукцию клеток в первом пассаже; ЦПД появляется лишь после предварительной адаптации
вируса. Адаптированный к культуре клеток, он быстро размножается и разрушает их в тече-
ние 2-4 дн, в зависимости от дозы. Вирус хорошо культивируется в суспензионной культуре
линии клеток почки поросенка ППК-666. Эта культура оказалась высокопродуктивной сис-
темой для крупномасштабного производства вакцинного штамма ВИГС (15). Степень сти-
муляции репродукции коронавируса КРС трипсином различна в зависимости от культуры
клеток, тогда как коронавирус свиней в присутствии трипсина накапливается в высоком
171
Глава V. Family Coronaviridae Ксронавирусные инфекции
титре (108-109 ТЦ/^о/мл) в 2-х постоянных линиях клеток свиней (СПЭВ и ППС). Макси-
мальные титры инфекционности при культивировании шт. “Правда”, ВГНКИ №5 и V-91 в
монослойной культуре клеток ППС составляли 106 ТЦД^о/мл, тогда как при выращивании в
суспензии эксплантатов кишечника и легких плода свиньи достигали 106,5-107,5 и 108,°
ТЦД50/МЛ соответственно (11,12).
Для выделения вируса наиболее пригодны культура клеток щитовидной железы свиньи
и перевиваемая линия РК-15. ВИГС интерферирует с вирусом ВД-БС и ВБА. ЦПД вируса
начинается с развития малого или большого синцития уже через 24 ч после инокуляции. В
последствии мелкие синцитии сливаются и поражённые клетки отделяются от поверхности
стекла. Большой синцитий с 20-40 ядрами можно наблюдать при заражении культуры кле-
ток из щитовидной железы свиней, в то время как синцитий, обнаруживающийся в культуре
клеток из почек свиней, чаще всего содержал 2-5 ядер, редко - больше. Тельца-включения
не обнаруживались ни в цитоплазме, ни в ядре. В культуре клеток почки свиней ЦПИ менее
выражены. Почти все изоляты вируса в первично-трипсинизированной культуре клеток щи-
товидной железы свиньи индуцируют образование бляшек, размеры которых колеблются от
1 до 5 мм в диаметре. Свежевыделенные изоляты индуцируют более мелкие бляшки, чем
лабораторные штаммы. Бляшки образуются и в перевиваемой линии клеток семенников
свиней. В монослойной культуре клеток щитовидной железы взрослой свиньи при pH 6,5
титр вируса в 10 раз выше, чем при pH 7,2, и в 100 раз выше, чем при pH 8.
Отмечены различия при культивировании ВИГС и КВС in vitro. Оба вируса размножа-
лись в культуре клеток почек собак (97) или перевиваемой линии клеток кошек (118). Виру-
сы ИПК и КВС не репродуцировались в клетках ST или культуре клеток щитовидной желе-
зы поросят, тогда как ВИГС в обеих культурах изолировался (97). В альвеолярных макро-
фагах репродуцировался только адаптированный к культуре клеток не вирулентный ВИГС
(70). АГ ВИГС обнаруживается в цитоплазме МФА через 4-5 ч после заражения. Зрелые
вирионы встречаются в цитоплазме почкующимися из цитоплазматического ретикулюма и
вирусные частицы (диаметром 65-90 нм) часто наблюдаются в цитоплазматических вакуо-
лях. Вирус виден прилегающим к мембране клетки-хозяина после выхода из зараженной
клетки. Гликопротеины вируса идентифицируются на поверхности тестикулярных свиных
клеток (72).
Гемагглютинирующие свойства. Установлена ГА активность вируса в отношении
эритроцитов цыплят, морских свинок и КРС. Однако только вирус, размноженный в культу-
ре клеток ППС, обладал ГА-активностью, не влияющей на иммуногенность. Не установлено
разницы в индукции ВНА и выраженности протективного иммунитета при использовании
ГА и не ГА вируса. ГА активность коронавирусов связана с 4-тым структурным белком НЕ
(ГА эстероз). ВИГС не имеет НЕ-гликопротеина. ГА активность ВИГС зависит от системы
его репродукции и связана с пепломерным гликопротеином. При размножении вируса в пе-
ревиваемых линиях клеток IBRS и щитовидной железы свиней вирус агглютинирует эрит-
роциты морской свинки в титрах 1:64 и 1:256 (9, 10).
В цитоплазме клеток свиней, заражённых ВИГС, обнаруживают ферментативную ак-
тивность, которая отсутствует в нормальной культуре клеток и не обнаруживается в очи-
щенных вирионах. Для проявления ферментативной активности требуются ионы Mg2+.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Эпизоотологическая характеристика ИГС
представлена в обзорах (92, 93). Различают 3 формы инфекции: эпизоотию, энзоотию и ин-
фекцию, обусловленную РКВС, серологически тестируемым как ИГС (79, 88, 89). Основной
источник инфекции - животные, находящиеся в инкубационном периоде, больные и перебо-
левшие (в течение месяца). Инфекция передаётся с кормами, тарой, транспортом, навозом и
субпродуктами. Вирус выделяется из молока инфицированных животных в течение острой
172
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
фазы заболевания. В носовых истечениях он обнаруживается в течение 10 дн после зараже-
ния (85, 116). Особенно опасны фекалии больных животных. Инфекцию могут распростра-
нять собаки и лисицы, так как вирус размножается в кишечнике. Вирус может передаваться
домашними мухами (Musca domestica) (53). Из гомогенатов тонкого кишечника мух его
удавалось выделять в течение 104 дн после заражения, из органов дыхания - 11 дн. В орга-
низме экспериментально зараженных поросят разновозрастных групп вирус выделяется нз
кишечника, печени, селезенки, фекалий, легких через 12 ч после заражения и сохраняется
до 20 дн (срок наблюдения), что свидетельствует о том, что поросята могут быть носителями
вируса и источником инфекции (4, 5).
Серологические исследования, проведенные в Бельгии в 1984 г, неожиданно показали
значительное увеличение числа носителей АТ к ВИГС на фоне отсутствия вакцинаций или
клинических признаков ИГС. Не энтеропатогенный вирус, АГ родственный ВИГС, оказался
этиологическим агентом этого явления и был выделен в культуре клеток (90а). Вирус инфи-
цировал эпителиальные клетки респираторного тракта и альвеолярные макрофаги. При экс-
периментальном заражении инфицировал только некоторые не идентифицированные клетки
тонкого кишечника, при этом вирус ограниченно обнаруживался или вовсе отсутствовал в
кале (39, 40, 86). У поросят продуцировались АТ, которые нейтрализовали ВИГС. Вирус
широко распространен в Европе: Бельгии, Англии, Франции, Нидерландах, Германии (32,
59, 65, 71а, 89). В Дании и США также регистрируется заболевание (61, 89, 116). Инфекция
РКВС персистирует в закрытых фермах с циклическими эпизоотическими вспышками даже
на фоне пассивных сывороточных АТ.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к вирусу
восприимчивы свиньи и собаки; новорождённые поросята в 2-1000 раз восприимчивее, чем
свиньи, достигшие убойной кондиции. У собак отмечали потерю аппетита, понос, рвоту и
гипертермию. Вирусом, выделенным от больных собак, заражали недельных поросят. Соба-
ки могут быть носителем вируса и инаппарантным источником для восприимчивых свиней.
КВС, ВИГС и ВИПК входят в одну группу ангигенно родственных агентов, отличающихся
от других членов семейства коронавирусов по PH и ИФ. В естественных условиях установ-
лено существование штаммов ВИГС различной вирулентности. Вирусы ИГС, ИПК и КВС
отличаются по патогенности для новорожденных поросят. Вирулентный ВИПК вызывает
такие же симптомы заболевания, как и ВИГС. КВС не вызывает клинические признаки за-
болевания. До сих пор нет сообщений о естественном заражении поросят ВИПК или КВС. У
поросят, экспериментально зараженных ВИПК или КВС, не образуются АТ к ВИГС.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни и резуль-
татов лабораторных исследований. Лабораторная диагностика включает изоляцию вируса из
органов погибших поросят, идентификацию его в PH и РИФ в культуре клеток и выявление
специфических АТ в сыворотках крови больных и переболевших животных. В качестве экс-
пресс-диагностики используют РИФ для обнаружения вирусного АГ в органах животных.
Выделение вируса
Взятие и подготовка материала. Для исследования в лабораторию направляют тонкий
кишечник (тощую и подвздошную кишки с содержимым) и мезентериальные лимфоузлы от
поросят в начальной стадии проявления клинических признаков болезни (первые часы диа-
реи). Кроме того, целесообразен отбор органов и тканей (кусочков лёгкого, печени, селезён-
ки, почек, головного мозга). Патологический материал от трупов, пролежавших более 2 ч
после гибели, для исследования не пригоден. Материал необходимо брать от 8-9 больных
поросят 3-5 поражённых помётов (по 2-3 поросёнка из помёта). От каждого поросёнка берут
пробы массой 10 г. Отрезок кишки длиной 10-12 см перевязывают и берут с содержимым.
Пробы патматериала доставляют в лабораторию в плотно закрытых стеклянных флаконах,
173
Глава V. Family Carmaviridae Коронавирусные инфекции
помещенных в сосуд Дьюара с жидким азотом или в термос t сухим льдом. Для серологи-.
ческих исследований направляют парные сыворотки крови от свиноматок, в помётах кото-
рых болеют новорождённые поросята, взятые с интервалом в 21 день. Вируссодержащий
материал сохраняют в активном состоянии в течение нескольких лет при температурах ми-
нус 20:-70°С. При -28°С вирус остаётся активным около 3,5 лет. При 4°С он может сохра-
ниться в течение 1-го мес. В связи с фоточувствительностью вируса все вируссодержащие
материалы следует защищать от действия света. С целью длительного сохранения патологи-
ческий материал (фрагменты кишечника) можно замораживать до -30:-70°С и использовать
по мере надобности в течение 2-3,5 лет. Для вирусологических исследований оттаиванию
подвергают лишь необходимую часть патологического материала. Исходный материал ста-
раются постоянно держать в глубоко замороженном состоянии. Упаковка должна надёжно
предохранять материал от какого-либо воздействия на него жидкого азота. Для выделения
вируса из органов поросят (отдельно паренхиматозных органов и кишечника) готовят 10%-
ную суспензию на р-ре Хенкса по общепринятой методике и после проверки её на стериль-
ность используют для заражения чувствительной системы (культура клеток, поросята).
Заражение культуры клеток. Выделение вируса проводят на первичных и перевивае-
мых линиях клеток поросят (почек, щитовидной и слюнных желез, тестикул). Материалом
каждой пробы инокулируют не менее 4-8 пробирок с культурой клеток. Для исследования
методом ИФ заражают культуру клеток, выращенную на стеклышках. Её просматривают
ежедневно в течение 5-7 сут. При отсутствии ЦПД в первом пассаже проводят 5-7 последо-
вательных пассажей. Обычно ЦПД вируса наступает через 2-7 пассажей и характеризуется
набуханием, утолщением с последующим укорочением и округлением клеток до полного
разрушения монослоя. Идентификацию выделенного вируса проводят в РИФ и PH.
Заражение восприимчивых животных. В связи с наличием большого количества
штаммов ВИГС, не обладающих ЦПД, биопроба на восприимчивых поросятах - надежный
метод выделения вируса. У зараженных животных вирус сравнительно легко удается выде-
лить из фекалий, однако в наивысших концентрациях он содержится в слизистых оболочках
тонкого кишечника, особенно двенадцатиперстной и тощей кишок. Уже через 24-72 ч после
клинического проявления болезни титры вируса в этих тканях достигают 106-107 ИДз0/г. По-
этому, если необходимо выделить вирус, поросят убивают через 24 ч после появления диа-
реи и полученные от них материалы (содержимое и соскобы слизистой тонкого кишечника)
подвергают вирусологическому исследованию. В крови и почках поросят вирус удается об-
наружить через 24-48 ч после заражения, но титры его обычно низкие - Ю'-Ю2 ИДзо/г, лишь
изредка концентрация вируса в почечной ткани может достигать 105-106 ИД 50/г.
У новорожденных поросят, зараженных интраназально, через 2 ч после заражения вирус
может быть обнаружен в ткани легких (титры до 104 ИДз0/г), а у поросят, зараженных ин-
траназально в 6-дн возрасте, вирус может быть обнаружен в слизистой оболочке носа
(титры до 104 ИДзо/г). Для подтверждения диагноза важно также исследование в PH парных
сывороток, 1-ую из них берут на 3-5-й день после начала болезни, а 2-ую (от выживших жи-
вотных) - через 1-2 нед.
Для биопробы можно использовать супоросных свиноматок за 3-5 дн до опороса. Сви-
номатку заражают 10%-ной суспензией, приготовленной из пораженных стенок тонкого ки-
шечника вынужденно убитых больных поросят, или вируссодержащей культуральной жид-
костью. Исследуемый материал вводят per os в количестве 10 мл. Контролем служит 2-я су-
поросная свиноматка. Биопробу считают положительной, если через 24 ч (реже через 48 ч)
поросята, родившиеся от зараженной свиноматки, заболевают с клиникой ИГС. В сомни-
тельных случаях проводят исследования органов от вынужденно убитых в агональном со-
стоянии поросят подопытной группы на наличие вируса методами РИФ и PH.
Индикация и идентификация вируса
174
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусиые инфекции
Электронная и иммуноэлектронная микроскопия. Возбудителя болезни определяют
по ультраструктуре, выявляемой с помощью негативного контрастирования, а также марки-
ровки вируса гипериммунной сывороткой. За положительные результаты ЭМ считают нали-
чие в препаратах вирионов размером 70-120 нм, на оболочке которых размещены булаво-
видные шипы, характерные для коронавирусов. В препаратах, обработанных иммунной сы-
вороткой к вирусу, на оболочках вирионов обнаруживают скопления белковых молекул. В
контрольных препаратах, обработанных гетерологичной иммунной сывороткой, таких скоп-
лений нет (Рис. 20). Иммуноэлектронная микроскопия более чувствительный метод (100а).
Гистологические исследования. Кусочки ткани двенадцатиперстной, тощей и под-
вздошной кишок фиксируют в 10%-ном забуференном р-ре нейтрального формалина, гото-
вят из них гистологические препараты при помощи обычных методов и исследуют под мик-
роскопом на наличие поражений, характерных для ИГС. Особенно характерно наличие ат-
рофии кишечных ворсинок, которая наиболее ярко бывает выражена первые 3-4 дн после
начала болезни. Соотношение длины ворсинок тощей кишки к глубине крипт у здоровых
животных составляет 7:1, у больных ИГС около 1:1. Наиболее характерными изменениями
являются выраженная дегенерация эпителия слизистой оболочки кишечника, поверхност-
ный некроз эпителия кишечника и кишечных ворсинок. Для уточнения диагноза в условиях
практики рекомендуется убить 2-3 больных поросят, взять небольшие участки тощей и под-
вздошной кишок (10-15см), продольным разрезом вскрыть слизистую оболочку, осторожно
промыть её физиологическим р-ром и погрузить в дистиллированную воду, затем просмот-
реть под лупой при увеличении в 60-80 раз (например МБС 6 или МБС 9) и верхнем осве-
щении на предмет состояния ворсинок. Укорочение их служит подкрепляющим патолого-
анатомическим тестом в подозрении на ИГС. Контролем при этом служит аналогичная
часть кишечника от клинически здорового поросенка или передний отрезок (5-7 см от пило-
рического сфинктера) 12-перстной кишки. Помимо атрофии ворсинок в тонком кишечнике,
в протоплазме эпителиальных клеток выявляют вакуоли.
Взаимодействие вируса с энтероцитами тонкого кишечника сопровождается глубокими
деструктивными изменениями их апикальной части, а в более поздние сроки болезни - всей
клетки. Для этих изменений характерны полная потеря микроворсинок, нарушение целост-
ности плазматической оболочки и полный лизис клетки. Вследствие указанных поражений
энтероциты кишечника не способны выполнять нормальные процессы адсорбции, всасыва-
ния, пристеночного пищеварения и другие физиологические функции.
Метод интерференции. Встречаются полевые штаммы ВИГС, которые хорошо раз-
множаются в клеточных культурах, но не проявляют ЦПД. Для обнаружения нецитопато-
генных изолятов в монослое культур клеток свиных почек используют феномен интерфе-
ренции. Такие шт. тормозят развитие ЦПД в культурах клеток, инфицированных ВД-БС
КРС. Аналогичные результаты получены и при применении интерфероногенных шт. ВБА.
Метод иммуноцитолиза. Метод иммуноцитолиза использовался в Чехословакии для
идентификации ВИГС в культуре клеток СПЭВ.
ИФ. Её используют для быстрой индикации и идентификации АГ ВИГС в культуре кле-
ток, инфицированных вирусным материалом, а также мазках-отпечатках, гистологических
срезах патологического материла (фрагментов тонкого кишечника) от животных, естествен-
но-больных или заболевших после экспериментального заражения. РИФ применяют в пря-
мом и непрямом вариантах по общепринятым методикам. ИФ считается положительной при
наличии в препаратах ярко-зеленого свечения клеток или цитоплазмы с ярко светящимися
гранулами разного размера при отсутствии флюоресценции в контрольных препаратах.
Свечение лейкоцитов и дегенеративно измененных клеток не учитывается. Выявление виру-
са может быть успешным, если исследования проводятся на поросятах не позднее чем через
24 ч после их заболевания. Наибольшее количество флюоресцирующих эритроцитов обна-
175
Глава V. Family Conxiaviriclae Коронавирусные инфекции
руживают до и с наступлением диареи, позже число их невелико. Наиболее эффективным
методом диагностики болезни оказалось исследование в РИФ замороженных срезов тощей
кишки животных, убитых в период острой фазы заболевания. Однако, по мнению других
исследователей, метод мазков-отпечатков миндалин с помощью прямой РИФ превосходит
исследования тощей кишки (Рис. 21).
Для ИФ диагностики ИГС применяли меченый конъюгат против вирусного перитонита
кошек. Такие конъюгаты готовили из перитонеальной жидкости больной кошки с титром
АТ в жидкости не ниже 1:2560. Конъюгат анти-ВИГС получают из иммунной сыворотки
поросят, свободных от патогенной микрофлоры, титр АТ 1:256. При исследовании срезов
слизистой оболочки тонкого кишечника поросят, зараженных вирусом, получены одинако-
вые результаты с конъюгатом анти-ВИПК и анти-ВИГС равной интенсивности свечения.
При исследовании с помощью конъюгата анти-ВИГС срезов селезенки кошек, зараженных
ВИПК, получены отрицательные результаты. Это свидетельствует об одностороннем анти-
генном родстве между этими вирусами. Таким образом, для диагностики ИГС можно с ус-
пехом использовать конъюгаты анти-ВИПК. Поскольку наличие у кошек АТ к вирусам сви-
ней маловероятно, перитонеальная жидкость, полученная при заражении вирусом перитони-
та, может служить хорошим препаратом для изготовления диагностического конъюгата.
Конъюгаты к ВИГС, полученные из иммунной сыворотки поросят, могут давать неспецифи-
ческую флюоресценцию.
Для диагностики ИГС ИФ в качестве источника АТ предложено иммунное молозиво.
Показано, что концентрация иммуноглобулинов в молозиве даже выше, чем в сыворотке
крови. ИФ как метод диагностики имеет ряд проблем, главная из которых наличие перекре-
стной реакции с ВИПК, КВС и РКВС. Поликлональные АТ не дифференцируют ВИГС и
РКВС, некоторые монАТ реагируют с ВИГС и не реагируют с РКВС. Такая дифференциа-
ция может быть проведена как в ИФ, так и в ИФА (52, 111). РКВС обнаруживается в респи-
раторных тканях и эпителиальных клетках носовой полости, но тем не менее для дифферен-
циации необходимо использовать монАТ, поскольку ВИГС может также реплицироваться в
указанных органах.
PH. При выделении вируса в культуре клеток его идентификацию проводят с помощью
PH, используя 1000 ТЦД50 вируса и 20 нейтрализующих доз сыворотки (вирус и сыворотку
предварительно титруют).
Помимо культуры клеток для идентификации вируса, изолированного в биопробе, ста-
вят PH на восприимчивых поросятах в возрасте 1-5 дн.
ВИЭОФВ. Вирус ИГС в этой реакции образует 1-2 линии преципитации с гомологич-
ными сыворотками и может быть легко выявлен в экстрактах из содержимого кишечника
экспериментально зараженных поросят. Богатая АГ структура (наличие трех АГ с различ-
ной электрофоретической подвижностью) позволила использовать для его обнаружения мо-
дифицированную методику ВИЭОФ (двойной ВИЭОФ), повышающую результативность.
ELISA. Разработан ELISA - метод с использованием монАТ и поликлональных АТ для
выявления АГ ВТГС в различных материалах: культуральном и очищенном вирусах, смы-
вах тонкого кишечника или фекалиях экспериментально инфицированных поросят. Метод
пригоден для обнаружения вирулентного полевого штамма, не адаптированного к культуре
клеток. Метод специфический, быстрый и недорогой.
Идентификация с помощью монАТ. Показано существование 6 различных эпитопов
ВИГС (шт. ТО-163). Антигенная вариабельность вируса имеет эпизоотологическое значение
и должна подтверждаться с помощью монАТ. Метод гибридизации нуклеиновых кислот не-
давно разработан для обнаружения ВИГС по геномной последовательности в образцах кала
или инфицированных тканей (22, 104). Остатки (фрагменты) РНК 5'-конца ВИГС пепло-
мерного гена не отличаются от ВТГС и РКВС. В исследованиях избирательно дифференци-
176
Глава V. Family Corcnaviridae Коронавирусные инфекции
ровали кишечные ВИГС изоляты из США, Японии, Англии, живые аттенуированные ВИГС
вакцинные штаммы из США, изоляты РКВС, ВИПК и КВС (21,116а).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
PH. Диагноз на прошедшую инфекцию обычно ставят при помощт PH в культуре кле-
ток, определяя титры ВНА в сыворотках крови реконвалесцентов. Для этого используют по-
стоянную дозу вируса (100-1000 ТЦД50) и двукратные разведения испытуемой сыворотки,
которую предварительно инактивируют 30 мин при 56°С. Для более точной диагностики
лучше исследовать парные сыворотки, взятые с интервалом 3-4 нед. Титры АТ у перебо-
левших животных могут колебаться от 1:8 до 1:1280. ВНА обычно появляются на 7-8-й день
после заражения и циркулируют в крови 18 мес. На 14-й день титр их у свиноматки, 3-дн и
3- нед поросят достигает 1:128 - 1:1024, ау отъемышей и откормочных свиней - 1:32 - 1:256.
С 3-4 мес титр медленно снижается, через год он уже на 2-3 разведения ниже максимально-
го. У некоторых свиноматок, наоборот, титр АТ резко снижается. Колостральные АТ обыч-
но исчезают у поросят в возрасте 3-4 мес, в связи с чем обнаруженные у животных в это
время ВНА следует относить за счет инфекции.
Для выявления и титрования АТ предложен микрометод PH с использованием микро-
планшетов. Сначала готовят двукратные разведения исследуемых сывороток (от 1:4 до
1:256) в объеме 0,05 мл, затем во все лунки микропипеткой вносят по 0,05 мл вируса, со-
держащего 100 ТЦДзо- После часовой инкубации при комнатной температуре во все лунки
вносят по 0,05 мл суспензии клеток почек или щитовидной железы свиней в концентрации
300 тыс. клеток в 1 мл питательной среды, содержащей 30% инактивированной телячьей
сыворотки. Пластины с культурой клеток выдерживают в термостате при 37°С в течение 4
дн с 5% СОз- Контролем PH служат 8 лунок с незараженной культурой клеток. Реакцию
учитывают через 48-96 ч при условии наличия ЦПД в лунках, инфицированных вирусом в
разведении 10’1 и 10’2, и в лунках, инфицированных смесью вируса с отрицательной сыво-
роткой, и при отсутствии ЦПД в лунках, инфицированных смесью вируса со специфической
сывороткой, и в лунках, не зараженных вирусом. Положительными считают сыворотки, ко-
торые в разведении не ниже 1:4 полностью нейтрализуют 100 ТЦД50 вируса.
Тест нейтрализации бляшкообразования более чувствителен, чем PH. Титр АТ в нём ко-
леблется от 1:100 до 1:5000, а в PH- 1:10 до 1:160.
РНГ. Используют для определения АТ в парных сыворотках крови больных животных,
а также для контроля за эпизоотическим состоянием племенных хозяйств-репродукторов в
отношении гастроэнтерита. При этом у 5% поголовья 2 раза в год выборочно исследуют сы-
воротку крови на наличие АТ к вирусу. РИГА ставят в макро - и микровариантах по обще-
принятой методике. Положительными считают сыворотки, которые в разведении 1:16 и
выше вызывают агглютинацию эритроцитарного диагностикума. РИГА более чувствитель-
на, чем PH. АТ у заражённых поросят выявляются на 4-й день. РИГА используют как для
подтверждения клинического диагноза, так и для выявления скрытых форм болезни и виру-
соносительства. Реакция позволяет выявлять антитела к ВИГС в 2 раза чаще, чем PH. В
бывшем СССР разработан эритроцитный диагностикум, с помощью которого можно вы-
явить специфические АТ у вакцинированных и больных ИГС.
ИФ. Описана модификация этого метода, обеспечивающая быстрое выявление и титро-
вание АТ к ВИГС. Сущность её заключается в приготовлении большого количества тефло-
низированных стёклышек с лунками, содержащими АГ ВИГС. Их получают путём посева в
лунки смеси инфицированных и неинфицированных клеток перививаемой линии свиных
тестикулов. Стёклышки помещают в чашки Петри, которые инкубируют 16-18 ч в термоста-
те с газовой смесью воздуха, содержащей 5% СО?. Около половины клеток в каждой лунке
оказывались инфицированными вирусом, что обеспечивает контрастность, помогающую
определить специфическую флюоресценцию в присутствии разной степени фонового окра-
шивания. После фиксирования ацетоном стёклышки можно хранить до использования в
12 Зак. № 1?1
177
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
НИФ при минус 20°С. Сравнение этой модификации с PH, показывает что по чувствитель-
ности она не уступает, обладая рядом преимуществ: быстротой получения результатов (3 ч
по сравнению с 4-6 дн для PH); простотой постановки; значительно меньшим расходом
культуры клеток; возможностью хранения полученных препаратов в замороженном состоя-
нии в течение нескольких месяцев. Важным оказалось также то обстоятельство, что токсич-
ность исследуемых сывороток, часто существенно осложняющая проверку их в PH, не явля-
ется препятствием для получения результатов.
РДП. Позволяет выявлять АТ к ВИГС. АГ в данной реакции служит щелочной экстракт
содержимого кишечника поросят, зараженных ВИГС.
ELISA. Успешно используется для выявления и количественного определения сыворо-
точных АТ к ВИГС. При исследовании сывороток от поросят, инокулированных культу-
ральным или кишечным ВИГС, ELISA выявлял АТ к вирусу в среднем на 3 дня раньше,
чем PH при исследовании проб сывороток от поросят, заражённых культуральным вирусом,
и на 1 день раньше при обследовании сывороток от поросят, заражённых кишечным виру-
сом, причём титры АТ в ELISA превышают титры ВНА. Имеются и другие достоинства
ELISA по сравнению с PH, в частности, на результаты реакции не влияет присущая некото-
рым полевым сывороткам цитотоксичность. С 1981 г. этот тест в двух вариантах - косвен-
ный и послойный (двухсэндвичный) - успешно используется в ветеринарной практике в
Италии. Интересно, что с его помощью можно количественно оценивать 1g 3 классов: G, М
и А. Модифицированный авторадиографический тест для выявления АТ к вирусу ИГС был
предложен в 1983 г. в Чехословакии.
Метод блокирования ELISA. Этот метод используется для дифференциации ВИГС и
РКВС с помощью монАТ (23, 33, 52, 71а, 102, 111). В блок-ELISA АГ ВИГС реагирует с
сывороткой к ВИГС или монАТ к РКВС.
РТГА. ВИГС обладает ГА активностью в отношении эритроцитов цыплят, морских
свинок и КРС, но не агглютинирует эритроциты гусей и мышей. Наиболее высокие титры
ГА отмечены при 4°С. Поскольку специфическая антисыворотка к вирусу ингибирует Г А, то
для серодиагностики ИГС можно использовать РТГА. Титры гемагглютининов в свиных
сыворотках коррелируют с титрами ВНА. РТГА с культуральным вирусным АГ ставят на
физиологическом р-ре (pH 7,2) с эритроцитами морской свинки в концентрации 0,6% при
температуре смеси 4°С, учёт реакции проводят через 1,5-2 ч. Установлена зависимость ГА
активности вируса от его инфекционной активности. Определены оптимальные условия по-
становки РТГА для обнаружения АТ к вирусу ИГС в сыворотках крови свиней. Показана
пригодность ее для исследования полевых материалов - сывороток крови и молока свинома-
ток на наличие специфических к ВИГС АТ. Выявлена корреляция между уровнем АТ, вы-
являемых в РТГА, и иммуноферментным методом (9,10).
Дифференциальная диагностика. В полиэтиологической структуре вирусных гастро-
энтеритов свиней доминируют рота - и коронавирусы, вызывающие диарейный синдром.
ИФА даёт возможность проведения широкого эпизоотологического анализа и дифферен-
циации указанных болезней (18,33).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
При ИГС имеет значение местный иммунитет кишечника, так как гуморальные АТ не
защищают животного от заражения. У переболевших свиней иммунитет сохраняется более 2
лет. У поросят он слабый и непродолжительный. Изучена роль респираторных и кишечных
лимфоидных тканей в создании иммунитета против ВИГС. Вероятно при защите от этой
инфекции большое значение имеет появление IgA после перорального введения ВИГС
(109). Специфическая профилактика ИГС несмотря на свою многолетнюю историю все еще
остается актуальной проблемой (82,83).
178
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
При активной иммунизации важное значение имеют секреторные IgA, обнаруживаемые
в кишечном содержимом и сыворотке после оральной, но не парентеральной инокуляции
(68, 68а, 107). Недавно методом ELISPOT исследовали кинетику IgG и IgA в клетках мезен-
териальных лимфоузлов (24, 109). Наряду с местным антитело обусловленным иммуните-
том, клеточио обусловленный иммунитет играет важную роль в защите против ИГС (35, 73,
113). Пассивная иммунизация и её механизм мало изучены (99, 100, 100а). IgA молозива
образуются в результате стимулирования иммуноцитов, мигрирующих в молочные железы.
Вакцинация супоросных свиноматок возможна аттенуированными, авирулентными и субъе-
диничными вакцинами орально, интраназальио, внутримышечно и внутрь молочной железы
(82, 100а, 112). По аналогии с естественным путем заражения используют сочетанную
оральную и интраназальную вакцинацию, хотя и она часто не оправдывает надежд (48, 58,
82, 112). Новорожденных поросят или поросят-сосунов вакцинируют орально, чтобы инду-
цировать быструю защиту посредством интерференции или стимулирования локального
иммунитета, что в некоторой степени облегчает контроль эпизоотической ситуации (54, 60).
Вакцинация свиноматок, ранее инфицированных ВИГС, в ряде случаев приводит к значи-
тельному увеличению продукции IgA и IgG и обеспечивает лучшую защиту поросят (75,
100), что приемлемо при энзоотическом ИГС.
Применение живых вакцин. Аттенуированные штаммы ВИГС получают серийным
пассированием вирулентных штаммов в первичных культурах и постоянных линиях клеток
свиного происхождения (8, 49). Для заметного ослабления вирулентности вируса требуется
не менее 100 пассажей. Пероральная вакцинация супоросных свиноматок живой вакциной
оказалась более эффективной, чем внутримышечная (6). Вакцинация новорожденных поро-
сят перорально живой вакциной за 1 ч до получения молозива оказалась более безвредной и
снижала заболеваемость и гибель поросят в неблагополучных хозяйствах (7). Живую вак-
цину применяли перорально двукратно. Первый раз на 6-й нед супоросности, второй- за 3
нед до опороса. У вакцинированных животных развивался иммунитет, о чем свидетельство-
вала защита новорожденных поросят от ИГС во время вспышки заболевания (74). Для по-
вышения эффективности оральной иммунизации были предложены живые вакцины с по-
вышенной устойчивостью к содержимому ЖКТ. К ним относятся микрокапсулированная
вакцина из шт. N, устойчивая к кислой среде и ферментолизу. Высокую степень устойчиво-
сти поросят к экспериментальному заражению достигали двукратной вакцинацией свинома-
ток аттенуированным шт. Nuzilly орально или в конъюнктиву за 6-7 нед до оплодотворения
и за 7-15 дн до опороса (103). Поскольку главная роль в защите новорожденных поросят при
кишечных заболеваниях принадлежит лактогенному иммунитету, основное внимание при
разработке вакцин против ИГС и способов применения стали уделять индукции синтеза сек-
реторного иммуноглобулина в молочной железе иммунизированных свиноматок. Перспек-
тивным оказался комбинированный способ иммунизации (1). Живая вакцина из шт. РИМС
при двукратном внутримышечном введении супоросным свиноматкам обеспечивала менее
выраженную защиту поросят, чем при оральном применении. Лучший эффект отмечен при
комбинированном введении вакцины свиноматкам (за 4-6 нед до опороса перорально и за 2
нед до опороса внутримышечно) для получения оптимального бустер-эффекта (49).
Фирма «Рон-Мерье» (Франция) изготовляет вакцину Gastertefa в двух формах для двух
способов применения. Кислотоустойчивую вакцину в виде таблеток применяют для ораль-
ной иммунизации свиноматок в течение трех дней, по крайней мере, за 3 нед до осеменения.
Лиофилизированную вакцину вводят внутримышечно однократно за 1 нед перед каждым
опоросом. В одной дозе вакцины независимо от способа её применения содержится 6
1цТЦДзо вакцинного вируса. Другую живую вакцину та же фирма рекомендует применять в
зависимости от эпизоотической ситуации. В угрожаемом хозяйстве свиней вакцинируют на
2-3-м мес супоросности орально, а спустя 15 дн - внутримышечно. В неблагополучном хо-
12*
179
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
зяйстве 1-й и 2-й раз свиней прививают внутримышечно. Вакцинация сопровождается вы-
соким уровнем лактогенного иммунитета (56).
Фирма «Nissei Кеп» (Япония) также готовит вакцину в двух формах для двух способов
применения из шт. h-5 ВИГС, размноженного в культуре постоянной линии клеток почки
поросенка (линии МРК -111а). Живую сухую вакцину свиноматкам вводят интраназально в
дозе 1 мл по истечению 6 нед супоросности. Эффективность вакцинопрофилактики ИГС при
использовании аттенуированных шт. ТО-163, Purdue, Riems, Ckp, коммерческой вакцины
(Ambico Inc) и разных способов применения значительно колебалась (отход поросят состав-
лял 10-70%) (20, 23, 25, 26, 29, 36, 37, 44, 48, 49, 50, 57, 77, 80, 83,103, 114).
Применение инактивированных вакцин. Инактивированные вакцины готовят из ви-
руса, выращенного в однослойных первичных или перевиваемых культурах клеток свиного
происхождения, используя, как правило, масляный адъювант. Полная инактивация культу-
рального вируса различными веществами в 0,01% -ной концентрации при 37°С наступала в
случае использования NP 40 через 2, БПЛ и АЭИ через 3, формалина через 4 ч. Более вы-
раженную деструкцию вирионных полипептидов вызывал формалин. Инактивированные
вакцины свиноматкам вводят внутримышечно двукратно за 7-10 дн и 2-4 нед до опороса.
Инактивированную концентрированную вакцину применяют внутримышечно в дозе 1 мл за
2-3 нед до опороса. Для изготовления вакцины вирус концентрируют и инактивируют фор-
малином. Инактивированный АГ перед введением объединяют с масляным адъювантом и
встряхивают до состояния гомогенной суспензии. Во время последующей супоросности вак-
цинацию повторяют полностью. Вакцина обеспечивает защиту новорожденных поросят на
протяжении подсосного периода за счет высокоэффективной иммунизации их матерей.
В ВИЭВ разработаны высокопроизводительные методы культивирования нереверси-
бельного аттенуированного штамма ВИГС в однослойной (16) и суспензионной культурах
(15) постоянной линии клеток почки свиней. Создана эмульгированная вакцина для внутри-
мышечного и сухая живая для интраназального применения. Свиноматок на 70-75-й день
супоросности прививают одновременно интраназально и внутримышечно, а за 2 нед до опо-
роса - только внутримышечно.
Недавно получена и испытана с положительным результатом в лабораторных условиях
субъединичная вакцина против ИГС. Иммуногенные компоненты, выделенные из вирионов
с помощью ультразвука, с последующей очисткой и концентрацией методами изопикниче-
ского центрифугирования и гельфильтрации через Сефадекс G-200, представляли собой, по-
видимому, пепломеры (1,20 см3; 25000 Д). Внутримышечное введение субъединичного пре-
парата в смеси с масляным или ГОА адъювантом индуцировало синтез ВНА в высоких тит-
рах. При иммунизации супоросных свиноматок компонентная вакцина обеспечивала со-
хранность поросят (53, 53а, 53b). Проводятся исследования по изучению эффективности
применения гетерологичных коронавирусов (ИПК,КВС). Показана выраженная защита КРС
против ВИГС (120). Целесообразно использование свиного лейкоцитарного интерферона в
качестве лечебно-профилактического средства против ИГС (3).
В странах СНГ применяют живую вакцину из аттенуированного шт. Римс Г ДР и сухую
живую вирус-вакцину ВГНКИ из шт. № 5. Эти вакцины дважды вводят супоросным свино-
маткам: первый раз за 6-8 нед и второй - за 2-3 нед до опороса. Поскольку имеется тесная
связь между степенью защиты и образованием секреторных IgA, продукция которых зави-
сит от ряда факторов, в том числе и от способов введения АГ, наиболее рациональным ока-
зался пероральный метод вакцинации, который индуцирует строго локальный иммунитет.
Живой аттенуированный вирус, введённый перорально, приживляется только в эпителиаль-
ных клетках, покрывающих ворсинки тонкого кишечника, стимулируя плазматические
клетки к образованию местных секреторных АТ.
180
Глава V. Family Coronaviridae Ксронавирусные инфекции
Новые типы вакцин. Снижение отхода поросят от ИГС до 25% обеспечивала вакцина
из ВИПК. Однако этот вирус патогенен для новорожденных поросят (120). Sp-вариант виру-
са (мелкобляшечный, аттенуированный ВИГС) снижал смертность до 14-34%. Очищенные
субъединичные компоненты ВИГС (S-гликопротеин, субъединичные частицы) с адъюван-
том не дали положительных результатов (53). Вакцина из низкомолекулярных субъединиц
(около 23 кД), полученных из ВИГС, инъецированная супоросным свиноматкам, обеспечи-
вала образование ВНА в сыворотке и молоке, а смертность поросят, полученных от таких
свиноматок, составляла 4% (53, 53а, 53в). Гликопротеин S, экспрессированный в вирус ос-
повакцины, индуцировал некоторый уровень ВНА на мышах (63). Пептиды из S-области
(аминокислоты 377-391) индуцируют ВНА у крыс (91). Получены положительные результа-
ты профилактики ИГС с использованием РКВС (23, 87, 88, 89,111).
Серологическая оценка иммунитета. Среднее геометрическое значение титра ВНА в
сыворотках крови свиноматок после первого введения вакцины составляло 4,1-7,5 logz и по-
сле второго - 7,6-10 logz. Титр АТ в молозиве доходил до 1:3072 и был в 2-4 раза выше, чем
в сыворотке крови свиноматок, но через 2-5 дн после опороса быстро снижался. Уровень АТ
в сыворотке крови поросят коррелировал с уровнем АТ в молоке. Максимальный уровень
специфических АТ (в РИГА) в сыворотке крови супоросных свиноматок выявлен через 7-14
дн после вакцинации и в день опороса. Наиболее высокие титры АТ (1:115-1:355) в молози-
ве были в день опороса. Установлена корреляция титров АТ в PH и РИГА, хотя в PH они
всегда были несколько ниже. Спустя 7 дн после внутримышечной вакцинации титр АТ дос-
тигал 1:8, затем повышался, достигая максимума (1:64) к 42-49-му дню (на 14-21-й день по-
сле ревакцинации), после чего резко снижался, исчезая, примерно, через 3 мес после вакци-
нации (около 2 мес после ревакцинации). После вакцинации 3-дн поросят живой вакциной
уровень АТ у поросят от иммунных свиноматок был более низкий (1,6 logz). К 3 мес напря-
жённость иммунитета снижалась в обоих случаях: меньше единицы у поросят от иммунных
свиноматок и 4,5 logz от неиммунных.
Не отмечено корреляции между устойчивостью поросят и титром АТ в их крови. Счи-
тают, что недостаточная иммунизирующая эффективность использованных аттенуирован-
ных штаммов объясняется потерей ими способности размножаться в тонком кишечнике
свиней. Активный иммунитет возникает только при попадании вируса в кишечник. При
этом иммунитет, предупреждающий развитие клинических признаков болезни, связан с ре-
зистентностью эпителиальных клеток тонких кишок к вирусу. Как обеспечивается эта рези-
стентность - неизвестно. Полагают, что для нейтрализации вируса до его внедрения в эпите-
лиальные клетки АТ должны или свободно находиться в просвете кишечника, или быть тес-
но связаны с чувствительными клетками. Выздоровевшие поросята устойчивы к повторному
заражению. В содержимом подвздошной, слепой и прямой кишок обнаружены ВНА, кото-
рые маскируют выделяющийся вирус, затрудняя выявление вирусоносительства.
Отмечены чёткие различия гуморального и клеточного ответов на введение вирулентно-
го и аттенуированного вирусов. При введении аттенуированного вируса титр ВНА выше,
чем при введении вирулентного штамма. Однако клеточный ответ при определении прямым
методом ингибиции миграции лейкоцитов был более продолжительным и выраженным у
поросят, заражённых вирулентным вирусом, чем у привитых аттенуированным штаммом.
Гуморальный ответ достигал пика через 21 после заражения, клеточный - через 28 дн, затем
снижался. Однако у отдельных животных относительно постоянный уровень ВНА и макси-
мальная ингибиция миграции лейкоцитов удерживались до 56-го дня после заражения.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Аяипер Т.Н. и др. Ветеринария 1988, 10 :69. 2.Архипов Н.И. Пат. анатом, диагн. вирус, бол.
живот .М. ’’Колос” 1984, 119. 3.Дьякова И.Н. и др. Морд Гос. Ун-т, Саранск, 1933 :71. 4.Ирская Г.Е.
Дон Гос. аграр. Ун-т, Персиановка 1933 : 7. 5.Ирская Г.Е. и др. Дон Гос. аграрн Ун-т, Персиановка
1933 :3. 6.КасюкИ.И. и др. С-хбиол. 1984, 7 :116. 7.МотовскиА. и др. Ветимед. науки 1985, 5 :11.
181
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
8.Мотовски А. и др. Вет. мед Науки 1985, 4 :3. 9.Непоклонов Е.А. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф.
ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :60. 10.Непоклонов Е.А и др. Тез. докл. Всерос. н-пр. конф. ВНИ ИЗЖ,
Владимир, 1995 :59. 11. Обухов И.Л. Сб. н. труд. ВГНКИ, 1991, 53 :95. П.Обухов И.Л. Биопрепара-
ты: метод стандарт. ВГНКИ, М., 1990 :105. 14.0рлянкин Б.Г. Классиф. вирус, жив. М, 1996.
15.Сергеев В.А. и др. Вопросы вирусологии 1989, 1 :3. 16.Сергеев В.А. и цр. Вопр. вирусологии
1987, 6 :718. 17.Сергеев В.А. и др. Вирусные вакцины. Киев, Урожай, 1993. 18.Стрижакова О.М. и
др. Тез. докл. Всерос. н-пр. конф., Владимир, 1995 :58. 19.Arendonk et.al. Tijdschr Diergeneeskd, 1983,
108 :608. 2O.Aynaud J.M. et. al. J Gen Virol, 66 :1911. 21.Bae I. et. al. J Clin Microb 1990, 29 : 215.
22.Benfield D.A. et.al. Arch Virol, 1991,116,:91. 23.Bemard S. et. al. Vet. Microbiol. 1989, 21:1.
24.Berthon P. etal J Immunol Meth, 1990, 131 :173. 25.Bohl E.H. et. al. Ohio Swine Res Ind Rep, Anim
Sci Ser 82-1, 1982 :66. 26.Bohl E.H. et.al. Comp diagnosis of viral diseases, 4, N.Y., Acad pres,1981.
27.Bourshnell M.E.G. et. al. J Gen Virol 1987, 68 :57. 28.Brian AB. et. al. J Virol 1980, 34 :410. 29.Brim
T.A. et. al. Veter Immun Immunopat 1995, 48 :35. 30.Britton P. et. al. Arch Virol 1989, 105 :165.
31.Brown T.T. Am J Vet Res, 1981, 42 :1033. 32.Brown I. et. al. Vet Res 1986, 119 :282. 33.Callebaut P.
et. al. J Vet Microb 1989, 20, 1 :9. 34.Calebaut P. et. al. J Gen Virol. 1988, 69 :1725. 35.Cepica A. et. al.
Canad J comp Med 1984, 48 :258. 36.Charley В et.al. J Virol, 1988, 62 :8. 37.Chen K.S. Fm J Vet Res
1985, 46 :632. ЗЗ.Соггеа I. et. al. J Gen Virol 1990, 71 :271. 39.Cox E. Res Vet Sci 1990a, 48 :165.
40.Cox E. et. al. Vet Microb 1990b, 23 :237. 41.Dea S. et.al. Virol, 1990, 64 :3112. 42.De Bouck et. al.
Proc 7 th Int Congr Pig Vet Soc Mexico City, 1982 :45. 43.Delmas B. et. al. J Gen Virol,1990, 71 :1313.
44.Dimitrow P. Vet Med Nauki 1982, 19 :90. 45.Doyle L.P., and Hutchings, L.M. J Vet Med Ass 1946,
108 : 257. 46.Egan I.T. Pros 86h Annu Meet US Anim Health Assoc 1982 :497. 47.Euberlick H. F. et.al.
Am J Vet Res, 1988, 49 :1320. 48.Fitchner D. Arch Exp Vet Med., 1982, 36 :165. 49.Fitchner D. et. al.
Mon Vet Med 1985, 40, 19 :669. 50.Fitzgerold G. et. al. J Pigs, 1990, 6 :27. 51.Garwes D.J. et.al. Edv Exp
Med Biol, 1987, 218 :509. 52.Garwes D..J. et.al. Vet.Res.,1988, 122 :86. 53.Gough P.M. et.al. Antivir Res,
1983, 3 :211. 53a.Gough P.M. et.al. Am J Vet Res, 1983, 44 :2078. 53b.Gough P.M. et.al. Vaccinie, 1983,
1:37. 54.Graham J. A Vet Med Smol Anim Clin, 1980, 75 :1618. 55.GranzowH. et.al. Arch Exp Vetmed
1981, 35 :177. 56.Godard A. Cultivar, 1987, 207 :18. 57.Harris D.L. et.al. Proc Am Ass Swine Pract Des
Moines Iowa, :555. 58.Hennig E.R. et.al. Vet Med Smol Anim Clin,1981, 76 :1789. 59.Henningsen D.
et.al. Dansk Vet Tidsskr,1989, 71 :1168. 6O.Hess R.G. etal. Proc 7-th Int Cong Pig Vet Soc, Mexico City,
1982 :1. 61.Hill H. et.al. Proc Am Assoc Swine Pract Des Moines, Iowa,1990 :333. 62.Horzineck M.C.
et.al. Infect Immun, 1982, 37 :1148. 63.Hu S. et.al. In Imm of Protein and Peptides. New York, Piesum
Press 1985 :63. 64.Jacobs L. et.al. J Virol ,1986, 57 .1010. 64a.Jacobs L. et.al. Virus Res, 1987, 8 :363.
65.Jestin A. et.al. Rec Med Veter ,1987, 163 :583. 66.Jiminez G. et.al J Virol , 1986, 60 :131. 67.Kapke
P.A. etal. Virology, 1986, 151 :41. 68.Kodama Y. et.al. Am J Vet Res, 1980, 40 :740. 68a.Kodama Y.
et.al. Am J Vet Res , 1981, 42 :437. 69.Laude H. et.al. Am J Vet Res 1981, 42:447. 7O.Laude H. et.al. J
Gen Virol, 1984, 65 :327. 71.Laude H. et.al. J Gen Virol ,1986, 67 :119. 71a.Laude H. et.al. J Rech Pore Fr
, 1988, 20 :89. 71b.Laude H. et.al. Vet Microbiol, 1990, 23 .147. 72.Laviada M.D. et.al. Virus. Res.,1990,
16 :247. 73.Liou P.P. J Chin Soc Vet Sci, 1982, 8 :135. 74.Lojkic M. et.al. Praxis Vet, 1982, 30, 1-2 :101.
75.Lutter K. et.al. Monatch Vet med, 1982, 37 : 121. 76.Makino S. et.al. J Virol ,1986, 57 :1642.
77.Matishek P. et.al. Vet Med Smol Anim Clin,1982, 77 :262. 78.Miller G.Y. etal. Proc 3-th Int Symp Vet
Epid Econ, 1982 :527. 79.Morin M. et.al. Can J Comp Med, 1983, 47 :11. 80.Moscari E. Acta Vet Acad
Sci Hung 1980, 28 :341. SOa.Moscari E. Acta Vet Acad Sci Hung, 1980, 28 : 131. 81.Mousing J. et.al. J
Am Vet Med Ass, 1988, 192 : 756. 82.Maxley R.A, et.al. Am J Vet Res,1989, 50 :708. 83.Maxley RA.
et.al. Am J Vet Res, 1989, 50 :111. 84.Nguyen T.D. et.al. J Gen Virol, 1986, 67 :939. 85.Onno M. et.al. J
Vet Med [B], 1989, 36 :629. 86.O'Toole D. et.al. Res Vet Sci, 1989, 47 :23. 87.Patton D.J. et.al. Vet Res
Commun, 1990, 14 :329. 88.Penseart M.B. et.al. Agri Pract, 1989, 10 :17. 89.Penseart M.B. et.al. Agri
Pract, 1989, 10 :17. 9O.Penseart M.B. et.al. Arch Virol, 1981, 68 :45. 90a.Penseart M.B. et.al. Vet Q,
1986, 8 :257. 91.Posthumus W.P. et.al. J Virol, 1990, 64 -.3304. 92.Pritchard G.C. Vet Rec, 1982, 110
:465. 93.Pritchard G.C. Vet Rec, 1987, 120 :226. 94.Rasschert D. et.al. J Gen Virol, 1987, 68 :1883.
95.Rasschert D. etal. Biochem, 1987, 69 :591. 96.Rasschert D. et.al. J Gen Virol, 1990, 71 :2599.
97.Reynolds D.J. et.al Vet Microbiol, 1980, 5 :283. 98.Rossen J.W. et.al. J Virol , 1994, 68, 12 :7966.
99.Saif L. J. Ann NY Acad Sci, 1983, 409 :708. lOO.Saif L. J. In Inf Diarr in the Young, Amsterdam:Elsevier
Sci., 1985 :456. lOOa.Saif L.J. et.al. Boca Raton Flac CRC Press, 1990. lOl.Saif L.J. et.al. Diseases of
swine,7th Ed., W Mingeling 195 :362.102.Sanchez C.M. et.al. Virology, 1990, 174 :410. 103.Shirai J. et.al.
182
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Ann Rech Vet, 1988, 19 :267. 104.Shockley L.J. et.al. Clin Microbiol, 1987, 25 :1591. 105.Siddell S.
et.al. J Gen Virol, 1983, 64 :761. 106.Spaan W. et.al. J Gen Virol, 1988,69 :2939. 107.Sprino P.J. et.al.
Am J Vet Res , 1982, 43 :255.1O8.Sune S., et.al. Virol, 1990, 177 :559. 109.Van Gott. L et.al. J Immunol,
1994, 8 :3980. HO.Vannier P. J Vet Med [B], 1990, 37 :177. lll.VanNieuwstadt A.P. et.al. Vet
Rec,1989,124 :43. 112.Voets M. et.al. Vet Q , 1980, 2 :211. 113.Welch S.K W. etal. Arch Virol,1988,101
:221. 114.Welter C.J. Vet Med Smol Anim Clin, 1980, 75 :1757. H5.Wesley R., et.al. Adv Exp Med Biol,
1987, 218 :475. 115a.Wsley R. et.al. J Virol, 1990, 64 :4761. 116.Wesley R. et.al. J Vet Diagn Invest,
1990, 2 :312. 116a.Wesley R., et.al. J Vet Diagn Invest, 1991, 3 :29. 117.Woods R.D. et.al. Am J Vet
Res,1988, 49 :300. 118.Woods R.D. Vet Microbiol, 1982, 7 All. 119.Woods R.D. et.al. Am J Vet Res,
1981, 42 :1163. 120.Woods R.D. et.al. Am J Vet Res, 1986, 47 :1239. 121.Zhu X.-L. et.al. Am J Vet Res,
1990, 51.
ИНФЕКЦИОННЫЙ БРОНХИТ ПТИЦ
Avian Infectious Bronchitis, Infectious Bronchitis of baby chicken (англ.);
Infectiose Bronchitis des Huhnes, Austeokende tracheobronchitis der Kuken (нем.);
Bronchite infectiouse (франц.)
Инфекционный бронхит (ИБ) - болезнь, поражающая кур. У цыплят проявляется рес-
пираторным и уремическим синдромами, у кур - поражением герминативных органов, что
ведет к длительному снижению яйценоскости. Болезнь встречается во всех странах, где пти-
цеводство поставлено на промышленную основу.
Симптомы и патологоанатомические изменения. Отмечают три клинических син-
дрома: респираторный, нефрозно-нефритный и репродуктивный.
Респираторный синдром проявляется у молодняка и характеризуется кашлем, трахе-
альными хрипами, носовыми истечениями, затрудненным дыханием (с открытым клювом),
иногда конъюнктивитом, ринитом и синуситом. Высокая летальность наблюдается, главным
образом, среди цыплят до 1-мес возраста, у 2-3-мес молодняка она может достигать 90 %,
но чаще бывает в пределах 10-35 %. У цыплят 30-60-дн возраста болезнь протекает, как
правило, хронически и в ассоциации с колибактериозом и микоплазмозом. При патолого-
анатомическом вскрытии обнаруживают серозный, катаральный или казеозный экссудат в
трахее или бронхах.
Нефрозно-нефритный синдром. Некоторые штаммы вируса обладают нефротропно-
стью и могут в течение первых 2-х нед поражать почки и мочеточники с отложением уратов.
Течение болезни - острое. У больных птиц отмечают депрессию и диарею с примесью ура-
тов. При первичной циркуляции вируса в хозяйстве летальность птицы достигает 50-70%.
При патологоанатомическом вскрытии обнаруживают набухание почек и пестроту рисунка.
Микроскопические изменения варьируют от нефрита до некротического нефроза (Рис. 136).
Поражение репродуктивных органов (репродуктивный синдром) регистрируется обыч-
но у кур старше 6 мес. Заболевание протекает бессимптомно или с незначительным пораже-
нием органов дыхания. Единственным проявлением болезни в этих случаях является дли-
тельное снижение яйценоскости на 30-80%, которое зависит от возраста птицы. В дальней-
шем яйценоскость восстанавливается, но не достигает прежнего уровня. Больные куры несут
мелкие, неправильной формы яйца с тонкой скорлупой (Рис. 137). При патологоанатомиче-
ском исследовании кур, переболевших ИБ в раннем возрасте, часто наблюдают инфантиль-
ное состояние всего яйцевода, недоразвитость яйцевых фолликул.
В крупных птицехозяйствах ИБ имеет стационарный характер и протекает как хрониче-
ская инфекция без ярко выраженных симптомов поражения респираторных органов; цыплят
более уязвимом возрасте (1-30 дн) в значительной степени защищает пассивный иммуни-
тет. Поражение репродуктивного тракта у цыплят и кур неизбежно приводит к снижению
яйценоскости. Только вирусологические исследования и анализ экономических показателей
183
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
выращивания цыплят и продуктивности кур дают возможность диагностировать ИБ, проте-
кающий хронически или в ассоциации с другими болезнями.
Острое течение ИБ характеризуется контагиозностью, массовой заболеваемостью, зна-
чительным снижением продуктивности, проявлением респираторных признаков болезни и
появлением деформированных мелких яиц (2).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые вирус выделили Бич и Шалк в США в 1936 г. ВИБ - первый, описанный в
литературе коронавирус птиц и первый коронавирус, в геноме которого полностью опреде-
лена последовательность нуклеотидов. Сравнение нуклеотидной последовательности генов
нуклеокапсида 3-х штаммов ВИБ (Grey, Arcansas 99 и Holland 52) свидетельствует об их
высокой консервативности (гомология 91,1 - 96,5).
Морфология и химический состав. Анализ последовательностей гена S1 австралий-
ских штаммов ВИБ позволил идентифицировать две генотипически различных группы. Шт.
VicS, V5/90, Nl/62, N3/62, N9/74, и N2/75 относятся к группе 1. Все штаммы группы 1 спо-
собны размножаться в трахее и почках, но только 4 из них (VicS, Nl/62, N9/74, и N2/75)
являются нефропатогенными с летальностью 32-96%. К группе 2 отнесены шт. N1/88, 03/88
и VI8/91. Они размножаются лишь в трахее и не ведут к гибели птицы. Идентичность ами-
нокислотной последовательности при сравнении 3-х штаммов составляла 72,3 - 92,8 %, при
сравнении с вирусами группы 1 - 53,8 - 61,7%. Данные штаммы отличаются также от шт.
Массачусетс 41 и Д1466 (идентичность 47,5 - 55,7 %). По мнению авторов, шт. N1/88, 03/88
и VI8/91 образуют новую группу вирусов, генотипически отличающуюся от всех, ранее оха-
рактеризованных. Не установлено корреляции между аминокислотной последовательностью
S1 и нефропатогенностью (49). Морфологически ВИБ типичный коронавирус (Рис. 18,19).
Устойчивость. В трупах павшей птицы вирус быстро теряет инфекционную активность;
в питьевой воде при комнатной температуре он сохраняется 11 ч; в пораженных тканях, в
50%-ном р-ре глицерина при температуре 4°С - до 80 дн; в аллантоисной жидкости при
температуре 37°С - 3 дн, при 20-30°С - 24, при 4°С - 427, при -25°С - 537 дн. В инфициро-
ванной аллантоисной жидкости при температуре -30°С вирус активен 17 лет.
Большинство штаммов ВИБ кур инактивируется при 56°С за 10 мин, однако среди них
встречаются варианты, различающиеся по терморезистентности.
Все штаммы ВИБ относительно резистентны к кислой среде (рНЗ,0) и чувствительны к
щелочной среде (рНП). Все они также чувствительны к хлороформу и дезоксихолату на-
трия. Некоторые из них (Ве-42 и Connauqht) после обработки эфиром обладают остаточной
инфекционностью. По чувствительности к эфиру и прогреванию при 45°С в течение 90 мин
все штаммы ВИБ разделены на 3 группы: - первая группа включает Ве-42 и Connauqht -
штаммы, чувствительные к 2-м обработкам; - вторая группа включает 6 штаммов, которые
относительно резистентны к эфиру, но чувствительны к прогреванию при 45°С в течение
90 мин; в 3-ю группу входят шт. В-41 и КН, которые резистентны к эфиру и прогреванию.
При лиофилизации все штаммы резистентны к трипсину, очень чуствительны к УФ-
облучению. Глюкоза (10%-ный р-р) стабилизирует вирус. Под действием УФ-лучей ВИБ
разрушается через 18-24 ч. Солнечные лучи инактивируют его при 36-38°С за 3 ч; 1%-ные
р-ры фенола, крезола, формалина, 70%-ный этиловый спирт и р-р соды (1:10000) обезвре-
живают в течение 3 мин.
Антигенная структура. ВИБ имеет 2 гликопротеина: поверхностный S и мембранный
М. Белок SP этого вируса состоит из 2-х гликопротеидов SP1 и SP2, образующихся в резуль-
тате посттрансляционной модификации (21). Пепломерный белок путем протеолиза был
разделен на 2 части: N-терминал S1 и С-терминал S2 гликопептида (26). Белки ВИБ разли-
чаются по тканевому тропизму. Изменение патогенности штаммов вируса связано с измене-
нием изоэлектрических точек их белков, поэтому классификация белков на основе изоэлек-
184
Глава V. Family Coronaviridae Коронавгфусные инфекции
трических точек позволяет идентифицировать высокопатогенные и персистентные штаммы
(35). У 4-х английских штаммов, принадлежащих к 3-м разным серотипам ИБ, S1 белки
различаются по аминокислотному составу только на 2-3 %. Их аминокислотные последова-
тельности были также очень близки аминокислотным последовательностям S1-белков 3-х
голландских изолятов (D207, D274 и D3896). С использованием 16 монАТ были обнаруже-
ны общие эпитопы ВНА у всех 8 изолятов, хотя поликлональные сыворотки дифференци-
ровали их только на 3 серотипа. Эпитопы ВНА локализованы на первой и третьей четвер-
тях S1 - белка. Авторы полагают, что серологические, эпизоотологические исследования ИБ
должны быть дополнены анализом данных по секвенированию нуклеиновой кислоты и по
взаимодействию с монАТ (14). Белки S, М и N ВИБ имеют мол.м. 84-87, 90-91 и 27-30 кД
соответственно. Различают несколько европейских (>4) и американских (>4) серотипов, АГ
связанных между собой (13). Сероспецифические эпитопы вируса локализованы, в основ-
ном, в первых 300 аминокислотных остатках пепломерного белка S (27). На поверхности
ВИБ обнаружено 5 АГ эпитопой: А, В, С, D и Е, из которых первые 4 ответственны за ней-
трализацию вируса. Из 16 монАТ все реагировали с белками пепломеров, а один тип АТ
нейтрализовал инфекционность и подавлял ГА-активность вируса (33).
Антигенная активность. Переболевание птицы сопровождается образованием анти-
ГА, ВНА и практически пожизненным иммунитетом к гомологичному типу вируса. АГ-
свойства вируса ассоциированы с шипами вирусной мембраны, состоящими из ди- и три-
мерного белка пепломера Е-2. Эти свойства связаны с субъединицей S1. Кроме основного
белка S у ВИБ в меньшей степени участвует в индукции ВНА также и белок М, он ответст-
вен за синтез ингибирующих ГА АТ (12). Гуморальные ВНА появляются через 2 нед после
заражения, между 6 - 8-й нед титр их достигал максимума и далее до 20-й нед оставался по-
стоянным, после чего снижался. У кур-реконвалесцентов ВНА обнаруживались 482 дн.
ПА появлялись в сыворотке крови через 2-3 нед, но исчезали раньше, чем ВНА. При
повторном заражении уровень ПА повышался. У экспериментально инфицированных 8-нед
цыплят они были выявлены на 10-й день и сохранились в течение 10-14 дн, после чего про-
цент цыплят, положительно реагирующих в РДП, постепенно снижался. Через месяц после
заражения только 39,5% цыплят имели ПА, а через 2 мес они не были выявлены ни в одной
исследованной сыворотке. В крови кур-реконвалесцентов найдены КСА.
Антигенная вариабельность и родство. Показана АГ- и иммуногенная вариабель-
ность полевых штаммов ВИБ. Четко определены 7 серотипов: A(D207), B(D3896), C(D31
28), D(D212), Массачусетс (Mass), ИК11 и ИК12. В пределах указанных серотипов извест-
ны следующие штаммы: Массачусетс-41, Коннектикут А5968, Айова-97, Айова-609, Грей,
Холт, УМК Армиленд, Брисбеин, КН, Нерима, Ишида, Шида.
Выделен АГ вариант вируса, который отнесен к типу Индиана, и новый нефропатоген-
ный АГ отличный вирус Р-84084. Антисыворотка к шт. Коннектикут А5968 нейтрализует
все вышеуказанные гетерологичные штаммы, за исключением шт. Ишида. С помощью фин-
герпринтного анализа (теста “отпечатки пальцев") нуклеотидов РНК датских штаммов вы-
делены 2 группы вирусов. В 1-ую группу из них вошли шт. Н52, Н120, D387, 1259, 1385,
1397, у которых установлено 99% гомологии; во 2-ю - шт. D207, D274, D212, D1466, D3128,
D3896, имевшие 95% гомологии. Большинство выделенных в Нидерландах полевых изоля-
тов ВИБ отличались по АГ составу от серотипов Массачусетс и датских серотипов D274,
D1466, D3128. Поэтому возникла необходимость создания новой вакцины. Выделенные в
нашей стране штаммы вируса в большинстве случаев имели родство с серотипом Массачу-
сетс и значительно реже встречались штаммы, относящиеся к серотипу Коннектикут.
Спектр патогенности вируса. К ВИБ в естественных условиях восприимчивы куры
всех возрастных групп, наиболее восприимчивы до 30-дн возраста. Человек восприимчив к
ИБ и переболевает с легкими признаками поражения верхних дыхательных путей.
185
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Локализация вируса, вирусовыделение. Развитие инфекционного процесса сопрово-
ждается виремией с локализацией вирусного АГ в лейкоцитах и эритроцитах в течение 16
дн после заражения. Вирулентные штаммы вируса инфицируют и разрушают реснитчатые
эпителиальные клетки, выстилающие трахею. Вирус локализуется в субэпителиальных
клетках и обнаруживается в них в течение 21 дня, и в селезенке - до 49 дн. Авирулентный
вирус локализуется там же, но инфицирует только часть эпителиальных клеток. У птиц, за-
раженных контактно, вирус обнаруживают в глотке и трахее через 7, 14, 21 и 27 дн, а в поч-
ках - через 35 дн. У цыплят, зараженных ингратрахеально, вирус в трахеальной слизи выяв-
ляли в течение 5 нед после заражения. Показана возможность вирусоносительства перебо-
левшей птицы. Наличие инфекции в одном и том же хозяйстве в течение ряда лет свиде-
тельствует о том, что выздоровевшие птицы остаются носителями вируса.
Персистенция ВИБ, ее сроки зависят от штамма. Так, шт. Kagoshima-34 размножался и
персистировал, в основном, в почках, а шт. Tottori-2 дольше персистировал в легких.
Экспериментальная инфекция. Ее можно вызвать при ингратрахеальном, интрана-
зальном, подкожном, внутримышечном, интраперитонеальном и клоачном заражениях цы-
плят. Однако интратрахеальный метод заражения более надежный. Инкубационный период
продолжается 18-36 ч, но может затянуться до 6 дн и более, если инфицируют цыплят, со-
держащих материнские АТ. Длительность инкубационного периода зависит также от дозы
и пути введения вируса. При аэрозольном методе заражения симптомы болезни у цыплят
проявляются уже через 18-24 ч.
После инфицирования респираторного тракта ВИБ локализуется и размножается в эпи-
телиальных клетках яйцевода и остается там в течение 6-24 дн после инфекции. Инфициро-
ванный яйцевод становится инфантильным или кистозным. Вирус персистирует в организме
кур не менее 30-45 дн. Из клоаки его выделяют чаще, чем из трахеи.
Кроме цыплят можно заразить обезьян макака-резус и пещерных летучих мышей. Ин-
дейки невосприимчивы, однако при интравенозном введении вируса возникает виремия в
течение 48 ч. Мышата-сосуны восприимчивы к шт. Боддет при интрацеребральном зараже-
нии. Штаммы, прошедшие небольшое число пассажей на КЭ, для мышей непатогенны.
Культивирование. Удается в КЭ при заражении в аллантоисную полость, амнион или
на ХАО. Адаптация ВИБ к КЭ происходит параллельно с возрастанием процента и сокра-
щением срока гибели их. Заражают обычно 9-10-дн КЭ. Адаптация вируса наступает че-
рез 3-6 и более пассажей. Зараженные КЭ погибают через 3-6 дн в 1-м пассаже до 10%, в
5-м - до 61 ив 9-м - до 83% и более. Однако гибель КЭ - не единственный признак зараже-
ния ВИБ. Характерно замедление их роста через 6-7 дн после заражения и увеличение коли-
чества экстраэмбриональной жидкости. Инфицированные КЭ шарообразной формы, муми-
фицированы, мельче, чем здоровые. Такой "эффект карликовости" - патогномоничный при-
знак для ВИБ, имеет диагностическое значение при выделении полевых изолятов на КЭ
(Рис. 28). Кроме того, у инфицированных КЭ желток обычно сморщен, постоянно поражены
почки и повышено содержание уратов. ХАО и амниотическая оболочки отечны, объем ал-
лантоисной жидкости увеличен. При введении вируса в аллантоисную полость наивысшая
концентрация его обнаруживается через 36 ч после заражения в ХАО, затем в аллантоис-
ной жидкости, амнионе и печени эмбриона. Если погибшие эмбрионы остаются на некото-
рое время в инкубаторе, титр вируса снижается (4).
Максимальный выход вируса 107’2 ИД50/01мя выявляется при заражающей дозе 103
ЭИДзо/од мл в условиях 36°С. Более высокие заражающие дозы не увеличивают общего
«урожая» вируса. Подбор оптимальной температуры и продолжительности культивирования
является важным для повышения «урожая», если иметь в виду, что в аллантоисной жидко-
сти погибших КЭ обнаружено интерферирующее вещество. Различные штаммы ВИБ могут
при изменении температуры проявлять различную вирулентность для КЭ и органных куль-
тур, что отражает их вирулентность и тропизм.
186
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Большинство штаммов вируса размножается в культуре клеток почки КЭ, фибробластов
КЭ и ВНК-21. В клетках HeLa никакие штаммы ВИБ не размножались. Органные культуры
яйцеводов оказались высокочувствительными к инфицированию вакцинным шт. Н52. Одна-
ко, прежде чем вирус приобретает способность размножаться в первичной культуре клеток и
органных культурах трахеи кур, его нужно адаптировать к КЭ. Вирус, адаптированный к
мозгу мышей-сосунов, может обусловить прямую реакцию ГА и реплицироваться в клетках
Vero. Титры вируса в этой культуре достигают 4,6-5,0-104 БОЕ/мл. Культура клеток легкого
и почек КЭ в 40-60 раз чувствительнее культуры клеток печени. Вирус также можно культи-
вировать в органной культуре трахеи КЭ. ЦПД его в культуре клеток почки КЭ проявляется
образованием синцития с последующим некрозом. Синцитий появляется через 6 ч, а через
18-24 он увеличивался, включая 100 и более ядер.
Все шт. ВИБ в присутствии трипсина в среде покрытия 20-40 мкг/мл на 3-4-й день ин-
кубации образуют бляшки до 6 мм в диаметре. Титр вируса в присутствии трипсина для
разных штаммов достигает 3,3-105 БОЕ/мл. Все изученные 17 австралийских штаммов ВИБ
образовывали бляшки на 2-м пассаже в культуре клеток почки КЭ, которые различались по
срокам их появления, размерам (от 2 до 5 мм) и внешнему виду. Хотя метод культивирова-
ния на КЭ в 18-84 раза более чувствителен метода бляшек, однако титрование методом
бляшек оказалось более точным. Половые гормоны (эсграген, тестостерон, кортизон) повы-
шают продукцию вируса в органных культурах трахеи (6). Из многих штаммов шт.
Beaudette индуцирует бляшки в культуре клеток ВНК-21, на этих клетках из этого штамма,
после обработки его мутагеном, был изолирован ts-мутант.
ГА свойства. Большинство штаммов ВИБ не агглютинируют эритроциты птиц, однако
при обработке вируса фосфолипазой С типа 1 он легко вызывает ГА. Энзим модифициру-
ет оболочку вируса за счет разрушения фосфолипидов и вызывает появление на поверхности
вириона ГА (30). Кроме того, ГА-свойства обоих типов ВИБ проявляются после обработки
их 0,5% р-ром трипсина (90 мин при 37°С), который разрушает пептидные связи аргинина
и лизина поверхностных молекул вирусного белка и освобождает скрытые молекулы ГА.
Однако было показано, что у глубоко адаптированных к КЭ штаммов (подобных шт.
Beaudette), имеющих высокий инфекционный титр после обработки трипсином, фосфолипа-
зой С, нейраминидазой ГА активность не проявляется. Феномен объясняется изменением
физической и химической структуры вирусного белка, связанной с потерей патогенности и
иммуногенности вируса для птицы. В настоящее время уточнено, что шт. Коннектикут
(Konnekticut) способен агглютинировать эритроциты кур, в то время как шт. Массачусетс
(Massachusets) подобную активность проявляет только после обработки трипсином или
фосфолипазой С. Отработан метод изготовления ГА антигена из изолятов ВИБ. Лиофилизи-
рованный ГА сохранял активность при -20°С в течение 8 нед, при 4°С в эти же сроки терял
до 50% ее. Титр ГА вируса повышается до 1:256 - 1:512 при его пассажах в трахее кур или
клеточной культуре трахеи кур.
Гемадсорбирующие свойства не установлены.
Интерфероногенная активность. Штаммы ВИБ различаются по интерферониндуци-
рующей способности. Так, из 10 штаммов только 3 (шт. IB-41, Нерима и Ишида) не индуци-
ровали синтез интерферона в КЭ, тогда как остальные вызывали образование его до 190 ед.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Основным источником инфекции служат
больные и переболевшие цыплята и куры, которые выделяют вирус во внешнюю среду или
остаются вирусоносителями до 49-105 дн после переболевания. Выделение вируса из орга-
низма больной птицы происходит со слюной, истечениями из носа и из глаз, с фекалиями.
Птица заражается, в основном, аэрогенным путем, а также при приеме инфицированного
корма и воды. Распространение инфекции возможно также через инфицированную внеш-
187
Глава V. Family Corcnaviridae Коронавирусные инфекции
нюю среду: помещения, кормушки, подстилку, одежду и обувь обслуживающего персона-
ла. Кроме того, человек может быть и активным переносчиком вируса в период переболе-
вания птицы ИБ. У петухов вирус выделяется со спермой в течение 20 дн после заражения,
поэтому возможно заражение половым путем. Кроме того, вирус передается трансовариаль-
но при остром, хроническом и бессимптомном течениях болезни. Доказана возможность
выделения его из яиц, полученных от кур через 1, 2, 4 и 6 нед после их заражения. Выделен
вирус из яиц, полученных от кур в ранний период снижения яйценоскости, а у 30% цыплят,
выведенных из таких яиц, отмечали отечность. От этих цыплят удавалось выделить возбу-
дителя ИБ. Вирус изолирован из желтка и белка яиц с глубоким поражением скорлупы, ко-
торые были получены от кур из хозяйства, неблагополучного по данной болезни. Таким об-
разом, поколеблено прежнее представление об ИБ, как о заболевании только с горизонталь-
ным путем передачи инфекции.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на ИБ ставят на основании эпизоотологических данных, клинических призна-
ков болезни, патологоанатомических изменений и лабораторных исследований (выделение и
идентификация вируса и обнаружение специфических АТ у переболевших птиц).
Экспресс-диагностика. Разработан быстрый предварительный метод диагностики и
типнрования ВИБ. Для этого из аллантоисной жидкости зараженных КЭ выделяют РНК, на
базе которой синтезируют к ДНК, которую используют для постановки ПЦР. Продукты ам-
плификации анализируют в агаровом геле. Показаны отличия в последовательностях у се-
рологически неотличимых вариантов вируса, что открывает новые возможности для эпизо-
отологического анализа и составления филогенетического древа, указывающего на высокий
уровень рекомбинации между штаммами ВИБ (41).
Указанный метод типнрования штаммов основан на амплифицировании фрагмента к
ДНК вируса величиной 400 пар оснований из N-терминальной области S2 гликопротеиново-
го гена, который обрабатывают рестриктазными ферментами и определяют длину фрагмен-
тов путем электрофореза в ПААГ. Фрагменты разных штаммов вируса сравнивают между
собой. Различие их АГ структуры подтверждено в PH (28).
Диагностику клинических образцов коронавируса индеек удается успешно осуществ-
лять, используя специфические однонитевые зонды, приготовленные с помощью ПЦР (37).
Выделение вируса
Взятие и подготовка материала. Для исследования от больной птицы берут смывы с
трахеи, гортани во время инкубационного периода или проявления ярких клинических при-
знаков. От вынужденно убитых или только что павших птиц берут кусочки легких, почек,
соскобы трахеи, гортани, бронхов, от взрослой птицы - почки и яйцеводы. В период острого
течения болезни вирус может быть выделен из яиц. Испытуемый материал до исследования
можно хранить при температуре -20-70°С в течение недели. Из образцов взятого материала
готовят 10%-ную суспензию на р-ре Хенкса или изотоническом буферном р-ре, центрифуги-
руют 15 мин при 2-3 тыс. мин'. Надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками
(2000 ЕД/мл пенициллина и 1 мг/мл стрептомицина), выдерживают 1,5-2 ч при 4°С и ис-
пользуют для заражения чувствительной системы (КЭ, культура клеток почек КЭ или фиб-
робластов цыплят 10-25-дн возраста).
Заражение куриных эмбрионов. Используют 8-10-дн эмбрионы; суспензию испытуе-
мого материала инокулируют в дозе 0,2 мл в аллантоистую полость 5-10 КЭ и инкубируют
прн 37°С, ежедневно овоскопируя. Все погибшие в течение 24 ч КЭ не учитывают (гибель
неспецифическая). Через 3-4 дн после заражения 1-3 КЭ убивают путем охлаждения при
4°С и собирают от них аллантоисную жидкость, ХАО для следующего пассажа. Остальных
(2-3 эмбриона) вскрывают на 7-8-й день и исследуют на наличие макроскопических измене-
ний. Иногда при выделении полевых изолятов вируса приходится делать не менее 6-8
188
Глава V. Family Caronaviridae Короцавируспые инфекции
"слепых" пассажей до тех пор, пока не станут проявляться типичные для ИБ патологиче-
ские изменения: карликовость эмбрионов (8-14 г вместо 35 г) с перекручиванием шеи и
прилипанием лапок к голове. Свернувшиеся в клубок инфицированные зародыши округлой
формы, уплотненной консистенции, количество амниотической жидкости уменьшено, обо-
лочка утолщена, имеются фиброзные налеты. В экстраэмбриональной жидкости повышено
содержание уратов.
Признаками поражения КЭ ВИБ считают гибель их на 2-8-й день (летальность зависит
от вирулентности полевого штамма) и характерные патологические изменения. ВИБ быст-
рее адаптируется при инокуляции в амниотическую полость, чем в аллантоисную и на
ХАО. Для подтверждения наличия вируса в экстраэмбриональной жидкости зараженных
КЭ можно поставить РГА, предварительно обработав материал трипсином. Для этого к од-
ному объему вируссодержащей суспензии добавляют один объем трипсина, разведенного
1:100. Вместо кристаллического трипсина можно использовать аморфный, разведенный
1:500. Затем смесь вируссодержащей аллантоисной жидкости и трипсина инкубируют 3 ч
при 37°С и добавляют одну часть 1%-ного куриного белка. Реакцию ставят с 1%-ной взве-
сью куриных эритроцитов по общепринятой методике. Параллельно также обрабатывают
нормальную аллантоисную жидкость, используемую в качестве контроля. С нормальной ал-
лантоисной жидкостью можно наблюдать неспецифическую агглютинацию в титре 1:4-Г. 8.
Вируссодержащую жидкость собирают в стерильные пробирки и после проверки на от-
сутствие бактериальной загрязненности помещают в холодильник при -20°С. Перед исполь-
зованием ее оттаивают, центрифугируют при 2500 мин'1 10 мин и над осадочную жидкость
используют для дальнейшей работы (титрование, идентификация вируса).
Биопроба на цыплятах. Используют цыплят 10-25-дн возраста из хозяйств, благопо-
лучных по респираторным болезням и ИБ. Суспензией, полученной из патологического ма-
териала, заражают 10 цыплят интратрахеально по 0,2-0,3 мл. За птицей ежедневно наблю-
дают в течение 7 дн, отмечая симптомы болезни. Первые признаки болезни появляются че-
рез 18-36 ч, а иногда через 4-5 ди. У птиц отмечают хрипы, насморк, кашель, чихание, за-
тем угнетение и сонливость. Заболевают 10-100% зараженных птиц. Случаев падежа может
не быть. Через 7 дн цыплят вскрывают. Изменения в органах дыхания, свойственные брон-
хиту, при наличии респираторных симптомов дают основание для постановки предвари-
тельного диагноза. При вскрытии в носовой полости, трахее, бронхах, бронхиолах и возду-
хоносных мешках обнаруживают обильный серозно-слизистый экссудат.
Заражение культуры клеток. Этот метод при первичной изоляции вируса не находит
практического применения. Только после 6-10 пассажей на КЭ изолированный вирус при-
обретает способность размножаться и вызывать ЦПД в культурах клеток почки, легких и
печени 15-18-дн КЭ. Выделение ВИБ удается с первого пассажа при использовании метода
органной культуры трахеи зараженных цыплят. На КЭ вирус не всегда удается выделить.
Этот метод удобен тем, что не требует предварительной адаптации вируса к КЭ. Для выде-
ления ВИБ 1-дн цыплят заражают испытуемым материалом, убивают через 3-4 дня и гото-
вят органную культуру из трахеи, помещая в питательную среду трахеальные кольца. За со-
стоянием органной культуры наблюдают 7 дн; о действии вируса судят по прекращению
движений ресничек слизистой оболочки.
Для выделения вируса предложили использовать органную культуру трахеи 19-днКЭв
качестве чувствительного метода изоляции вируса. Показатель заражения - цилиостаз - пре-
кращение движения мерцательного эпителия спустя 3 дня после инокуляции культуры.
Описан простой, надежный, чувствительный и недорогой метод определения ВИБ при
использовании аллантоисных клеток. Метод заключается в заражении испытуемым мате-
риалом 6-дн SPF-КЭ в аллантоисную полость. Через 48 ч инкубации при 37°С аллантоис-
ную жидкость собирают, центрифугируют при 700g и 4°С в течение 10 мин. Клетки ресус-
пендируют в ФБР в 1/20 первоначального объема, наносят на стекло, высушивают на возду-
189
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
хе, фиксируют в ацетоне. Далее клетки обрабатывают куриной антисывороткой против ВИБ.
Затем, после отмывания, окрашивают конъюгированным ФИТЦ'ем кроличьим антикури-
ным IgG. Тест ИФ аллантоисных клеток также чувствителен, как и метод бляшек или пас-
сирования на КЭ, но имеет преимущество в скорости и простоте при выявлении ВИБ (20).
Титрование вируса. Титрование вируса на КЭ производят общепринятым методом.
Вируссодержащий материал разводят мясопептонным (от 10’1 до 10’8) бульоном и опреде-
ляют ИД50 или ЛД50 (в зависимости от патогенности штамма). Зараженные КЭ просматри-
вают ежедневно в течение 8 дн. Уменьшение массы зараженных эмбрионов, по сравнению с
контрольными на 25 % и более, рассматривают как результат действия вируса. Высокий
титр последнего получают при заражении 10-11-дн КЭ адаптированным штаммом, и мате-
риал берут от живых эмбрионов через 30 ч после инфицирования. Вирус в экстраэмбрио-
нальной жидкости зараженных эмбрионов устанавливают РГА с трипсинизированным ви-
русом, а принадлежность выделенных вирусов к инфекционному бронхиту PH, РДП и РЗГА
с гипериммунными специфическими сыворотками кроликов и кур.
При титровании на восприимчивых цыплятах учитывают способность вируса вызывать
респираторные симптомы. Обычно глубоко адаптированные “эмбриональные” штаммы ут-
рачивают способность вызывать поражения у цыплят. При титровании вируса цыплят зара-
жают аэрозольно, вводят материал интратрахеально или интраназально в объеме 0,1 мл, на
каждое разведение берут по 4 цыпленка. Подопытных и контрольных цыплят содержат изо-
лированно. Наблюдение ведут 7 дн. Проявление клинических признаков экспериментальной
инфекции зависит от биологической природы титруемого штамма. При отсутствии выра-
женных симптомов подопытных цыплят убивают и учитывают патоморфологические изме-
нения. Признаки болезни обычно проявляются на 2 - 4-й день. Метод бляшек может быть с
успехом использован для количественного учета инфекционной активности ВИБ.
Идентификация вируса. Идентификацию вируса проводят при помощи PH, РДП, РЗГА,
РСК, РИГА, ИФ и др. PH и РЗГА - типоспецифические и используются при определении се-
рологического типа вируса. РДП и РИГА идентифицируют вирус без выявления типовой
принадлежности. РСК устанавливает штаммоспецифичность в пределах одного АГ типа.
PH на куриных эмбрионах. Для ее постановки требуется следующее: типоспецифиче-
ские иммунные сыворотки ко всем эталонным сероварам. В нашей стране используют спе-
цифические сыворотки в PH к трем первым сероварам: Массачусетс, Коннектикут, Айова-
97, а также нормальные сыворотки, испытуемый вирус, мясо-пептонный бульон или р-р
Хенкса, пенициллин и стрептомицин, 8-10-дн КЭ. Чаще ставят PH с различными разведе-
ниями вируса и постоянной дозой сыворотки.
Зараженные КЭ инкубируют при 37°С в течение 8 дн, ежедневно овоскопируют, погиб-
ших эмбрионов в первые 24 ч не учитывают. PH считается положительной, если нет гибели
эмбрионов и при вскрытии нет изменений, характерных для ВИБ, т.е. размножение вируса
будет подавлено АТ. Результаты оценивают по индексу нейтрализации. При индексе 1 1g PH
считается отрицательной, от 1 до 2 1g - сомнительной, выше 2 1g - положительной.
Вирус можно идентифицировать также в PH на культуре клеток почек КЭ или фиброб-
ластов. Специфическая сыворотка ингибирует цитопатический эффект, вызванный ВИБ.
Однако адаптация выделенного вируса к культурам клеток удается не сразу, поэтому не-
обходимо проводить несколько пассажей.
PH является высокочувствительной и типоспецифической, но она трудоемка, оконча-
тельный ответ по ее результатам учитывают на 7-8-й день. Так, как ВИБ имеет несколько
серологических типов, то в случае появления типичных изменений у КЭ (отрицательная ре-
акция) со специфическими сыворотками необходимо поставить РДП, которая идентифици-
рует вирус без учета его типовой принадлежности.
190
Глава V. Family Coronavindae Коронавируспые инфекции
РДП. Компоненты реакции: специфическая сыворотка к ВИБ (желательно, набор диаг-
ностических гипериммунных сывороток к вирусам ИЛТ, БН, оспы птиц и др.); нормальная
сыворотка; специфический АГ (ХАО КЭ через 48 ч после заражения ВИБ); испытуемый АГ
(ХАО КЭ через 48 ч после заражения полевым вирусом); 1%-ный агаровый гель.
Для РДП в агаровом геле при использовании аллантоисной жидкости в качестве АГ оп-
тимальная концентрация ВИБ оказалась разной для различных штаммов ИБ. Так, для шт.
Коннектикут (Konnektikut) - 20 у, шт. Австралия, Массачусетс, Арканзас (Arcansas), Айова
(Ajowa) - 68 у, для шт. Дж.МК, изолятов из Новой Зеландии - 120 у. Более высокой АГ-
активностью обладали аллантоисные жидкости после обработки их полиэтиленгликолем,
протаминсульфатом и сульфатом аммония (43).
РСК. Применяют в диагностической практике редко. Для ВИБ используют АГ из ал-
лантоисной жидкости КЭ, инфицированных вирусом. Реакцию проводят обычным способом
в макро- и микровариантах. В обоих случаях используют 1,5 и 2 дозы комплемента, инку-
бацию АГ и антисыворотки проводят при 4°С 18 ч. Вследствие разной степени антикомпле-
ментарности АГ рекомендуется проводить индивидуальный подход к определению дозы
комплемента; для АГ подбирают дозу в диапазоне 1,5-2 ед. в предварительном опыте.
РИФ. Метод не уступает по чувствительности методу выделения вируса на КЭ. Для
РИФ используют осадок клеток, полученный при центрифугировании смыва. Из него дела-
ют мазки на предметных стеклах, подсушивают на воздухе, фиксируют ацетоном при ком-
натной температуре и окрашивают по общепринятой методике (прямым или непрямым ме-
тодом). Фиксированные мазки можно хранить в фольге или целлофане при -20°С. При раз-
множении ВИБ в КЭ часть пораженных клеток ХАО выпадает в аллантоисную полость. В
связи с этим для РИФ можно использовать мазки из осадка после осветления аллантоисной
жидкости центрифугированием при 3000 мин'1.
Успешно использовали прямая ИФ для выявления АГ ВИБ в органах инфицированных
цыплят, а также в клетках ХАО КЭ, инфицированных изолятами ВИБ. Свечение в клетках
КЭ отмечали уже через 5-25 ч после заражения, что позволяло сократить срок обнаружения
вируса. В исследованиях авторов в качестве флюоресцентной метки вместо изотиоционата
флюоресцина был использован родаминсульфохлорид. Наилучшие результаты при опреде-
лении АТ к ВИБ в сыворотках кур с помощью непрямого ИФА достигается при использо-
вании в качестве субстрата для размножения вируса клеток СЕК, взятых через 36-48 ч по-
сле заражения. Использование в качестве АГ шт. Массачусетс (М41) обеспечивало возмож-
ность выявления АТ ко всем другим штаммам ВИБ (44).
Серотипизация с помощью ИФ возможна в 70% случаев при использовании группоспе-
цифических монАТ или гипериммунной сыворотки. Это новый и очень быстрый метод ди-
агностики ИБ, что позволяет при необходимости в короткий срок изменить программу вак-
цинации неблагополучного поголовья птицы (50).
РЗГА. Используется для быстрого типирования изолятов ВИБ и определения уровня АТ
к вирусу любого серовара. Для приготовления АГ вируссодержашую аллантоисную жид-
кость эмбрионов концентрируют и затем обрабатывают фосфолипазой С. С помощью РЗГА
идентифицированы шт. Агк99 и Hollend, считающиеся идентичными по результатам PH.
ЭМ и ИЭМ. Материал для электронной микроскопии должен быть достаточно очищен-
ным и концентрированным. Для индикации и идентификации вируса используют ИФА. В
качестве индикаторных АТ используют IgG из крови кур или кроликов, иммунизированных
шт. М41, а также кроличьи антикуриные IgG. Для выявления АГ метод оказался высокоспе-
цифичным. Он позволяет выявлять только нуклеопротеидный (NP, 50 кД) вирусный белок.
В PH шт. М41, А-5968 и L2 почти ие перекрещиваются, тогда как в ИФА высоко перекрест-
но реактивны, что указывает на то, что NP вируса ИБ является общим АГ. Получен очищен-
191
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
ный и специфический АГ ВИБ для ИФА без предварительной концентрации вируссодержа-
щей аллантоисной жидкости (45).
Тест интерференции. Предложен между ВИБ и НБ (шт. В1).
Идентификация с помощью монАТ. Индикация вируса в инфицированных тканях
удавалась методом основного иммунопероксидазного теста с монАТ.
В США разработан основной непрямой ИФ метод обнаружения ВИБ в срезах заморо-
женных тканей патматериала (ХАО, трахеи, легких и железах прямой кишки птиц). Патоло-
гический материал, взятый от птиц перед постановкой реакции, обрабатывают 0,28% -ным
р-ром перйодистой кислоты для инактивации эндогенной пероксидазы. Ткани эмбрионов из-
за отсутствия последней в такой обработке не нуждаются. При постановке теста используют
конъюгат пероксидазы и стрептавидина, а также монАТ к ВИБ. МонАТ должны относиться
к подклассу IgG2a. Субстратом служит аминоэтилкарбазол. Тест позволяет обнаружить ви-
русный АГ в ХАО КЭ и тканях респираторного тракта цыплят через 15 и 90 ч после зара-
жения, соответственно (32).
Непрямой ИФА диагностики ИБ с помощью монАТ, полученных к белку нуклеокапсида
вируса (шт. М41), позволяет выявлять вирус в инфицированных клетках почки цыплят, в
мазках трахеи экспериментально зараженных цыплят (39).
Серо- и ретроспективная диагностика. Серологические исследования позволяют бы-
стрее поставить диагноз, определить степень распространения ВИБ. В то же время сероло-
гические данные не позволяют судить о резистентности исследуемой популяции, так как не
всегда уровень АТ коррелирует с резистентностью. Серодиагностика основана на выявлении
АТ у больных и переболевших птиц в реакциях (PH, РДП, РЗГА, РИГА и др.).
Как для серодиагностики, так и для оценки поствакцинального иммунитета при ИБ птиц
вместо сыворотки крови можно использовать желтки яиц. Для этого их предварительно
смешивают 1:1 с 0,01 М фосфатным буфером (pH 7,2) и добавляют равный объем хлоро-
форма, тщательно встряхивают, отстаивают при комнатной температуре 1 ч, центрифуги-
руют при 1500g. Супернатант используют вместо сыворотки крови, предварительно нейтра-
лизовав комплемент при 56°С 30 мин.
PH. Сроки образования ВНА и их уровень в сыворотке крови и желтке яиц при ИБ за-
висят от вирулентности вируса и возраста инфицируемой птицы, а также от сроков перебо-
левания птицы и исследования яиц на присутствие АТ в желтке. В основном ВНА накапли-
ваются с 10-го по 36-й день болезни и сохраняются в сыворотках крови до 483 дня, достигая
наивысшего уровня в течение 6 нед. Перед постановкой реакции все исследуемые сыворотки
прогревают при 58°С30мин, добавляют пенициллин и стрептомицин по 100-1000 ЕД/мл.
Для постановки реакции необходимы эталонные, адаптированные к КЭ штаммы. Чаще все-
го используют шт. Бодает типа Массачусетс, который вызывает гибель КЭ через 24-48 ч.
Менее пригодны штаммы, вызывающие только задержку роста (карликовость), так как это
затрудняет учет результатов.
Если для 20% и более сывороток результат PH получится сомнительным (индекс ней-
трализации от 1 до 2 1g), то рекомендуется исследование повторить в РДП. При сомнитель-
ных результатах РДП необходимо повторно исследовать ту же группу птиц через 14-24 дня.
Для обнаружения и количественного определения АТ к ВИБ рекомендуется использо-
вать реакцию микронейтрализации в культуре клеток почек КЭ. Постановка PH с разведе-
нием сыворотки позволяет определить уровень АТ в различных стадах птиц, тогда как при
разведении вируса и постоянной концентрации сыворотки этой цели не достичь.
РДП. Реакция особенно ценна для быстрой диагностики острых случаев болезни, так
как АТ можно обнаружить между 7-м и 21-м дн после начала болезни (оптимальное вре-
мя 15 дн). Однако с помощью РДП АТ к ВИБ выявляются лишь в 10-15% случаев. В случае
192
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
' выявления большого процента преципитируклцих сывороток стадо птицы считают неблаго-
получным по ИБ.
РИГА. Более ранний иммунологический ответ цыплят, инфицированных вирусом ИБ,
можно выявить РИГА. Образование АТ, выявленных РИГА, наблюдалось с 2-го по 14-й
день после заражения ВИБ. Средний титр их в эти же сроки составлял 9,2. АТ, выявляемые
с помощью РНГ А, сохранялись 111-187 дн.
Нормальную сыворотку получают из крови кролика, которую берут из сердца, она не
должна иметь следов гемолиза эритроцитов. Кроличью сыворотку прогревают в водяной
бане при 56°С в течение 30 мин и истощают формализированными и танизированными
эритроцитами. С этой целью к 10 объемам сыворотки добавляют 1 объем осадка эритроци-
тов, тщательно перемешивают и выдерживают в водяной бане при 37°С 30 мин, затем цен-
трифугируют при 3000 мин'1 15 мин, сливают и хранят 3 мес.
В главный опыт РИГА берут эритроциты, которые дают равномерную гомогенную
взвесь без наличия гемолиза и спонтанной агглютинации. Реакцию ставят на плексигласо-
вых досках. РИГА наиболее удобно ставить микрометодом при помощи аппарата Такачи и
Титертека. В этом случае исследуемые и контрольные сыворотки разводят двукратно в объ-
еме 0,025 мл, а затем добавляют по одной капле (0,025 мл) эритроцитарного диагностикума.
ELISA. Достаточно быстрый, высокочувствительный, дешевый; позволяет исследовать
j одновременно большое количество образцов. Его можно использовать в лабораториях для
обследования птиц на ВИБ. ELISA наиболее чувствителен и быстрее, чем PH, РЗГА и др.,
( выявляет специфические АТ. Дает возможность определить в сыворотках специфические 1g
i G спустя 3-4 дня, тогда как ВНА обнаруживаются не ранее 3 нед. В трахеальном секрете
1 IgA и IgG выявляют на 3-7-й день, а ВНА - на 17-й день и в очень низком титре.
ELISA- оптимальный метод объективной оценки содержания специфических АТ у цып-
лят - бройлеров (40). С помощью ELISA перекрестные серологические реакции установлены
между шт. В42, Grey типа Делавар и А-5968 типа Коннектикут, хотя в PH перекрестные ре-
акции были выражены слабо. ИФА оказался чувствительным, экономичным и простым ме-
тодом лабораторной диагностики ИБ (29), тем более при использовании одного разведения
сыворотки (34).
РЗГА. В нашей стране РЗГА при ИБ не нашла широкого применения, однако за рубе-
жом она успешно используется. С помощью этой реакции выявляют более высокие титры
АТ, чем в PH. Для титрования анти-ГА к ВИБ рекомендовано использовать промокатель-
ную бумагу. Для этого в пробу взятой от кур крови опускают конец полоски фильтровальной
бумаги "Ватман N3" размером 51 см. После насыщения кровью полоски подсушивают и
отправляют в лабораторию, где их выдерживают 2 ч при 37°С, после чего хранят при 4°С.
При проведении анализа из полоски вырезают два кружка диаметром 4,8 мм, которые по-
мещают в одну лунку микротитровальной пластины. Сыворотку с дисков элюируют в 100
мкл ФБР путем встряхивания в течение 2 ч с последующим выдерживанием в течение ночи
при 4°С. Полученный материал соответствует разведению 1:10 нативной сыворотки. Его
используют для постановки РЗГА. Снижение титра проб на фильтровальной бумаге при
хранении в течение 33 нед при 4°С было небольшим (6).
; Относительно корреляции между титрами сыворотки в PH и РЗГА мнения ученых раз-
? личны. По данным Kanfhold et.al (25) такая корреляция имелась при исследовании 3-х
штаммов ИБ. PH для ГА может быть заменена более простым серологическим тестом -
> РЗГА. Авторы использовали штаммы ВИБ М42/н52 и датские варианты Д 274/Д 207 и Д
< 1466/Д212. Противоположные данные приводят Cavanogh и др. (12). Они не установили
корреляции между напряженностью иммунитета и содержанием в сыворотке крови ВНА и
анти-ГА, уровень которых достигал максимума через 4 нед после иммунизации.
13 Зак. № 171
193
Глава V. Family Corcnaviridae Коронавирусные инфекции
Чем выше уровень поствакцинальных гуморальных АТ, тем меньше уровень снижения
яйценоскости при заражении птицы вирусом.
Дифференциальная диагностика. При дифференциальной диагностике ИБ следует
учитывать его сходство с ИЛТ, НБ, гриппом, гемофилезом и др (см.табл. V.3. и V.4.).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшая птица резистентна к заражению гомологичным штаммом вируса в течение
5-6 мес. Трудность в проблеме специфической профилактики обусловлена большой естест-
венной АГ и иммунологической вариабельностью полевых штаммов вируса. К вирусу ИБ
высокорезистентны цыплята линии С и высокочувствительны - линии 151. Для профилакти-
ки инфекции применяют живые и инактивированные вакцины. Отработана технологическая
схема изготовления как моновалентных инактивированных форм вакцин против ИБ, БН,
ИББ, синдрома снижения яйценоскости. Испытания поливалентной вакцины показали на-
личие высокого уровня АТ к вирусам ИБ, БН, ИББ, ССЯ76 после вакцинации инактивиро-
ванными вакцинами (42).
Применение инактивированных вакцин. Достаточно эффективными оказались
эмульгированные вакцины из концентрированного вируса. Введение инактивированной
вакцины в 3 и 16-нед возрасте дало такой же эффект, как и прививка живыми вакцинами:
первый раз вакциной Н-120 (120 пассажей вируса прививка живыми вакцинами: первый
раз вакциной из шт.Н120 (120 пассажей в КЭ) и вакциной из шт. Н52 (52-ой пассаж вируса
в КЭ). Наиболее выраженный иммунный ответ у 100% цыплят получен при вакцинации в
3-нед возрасте живой вакциной из шт. Н120, а в 16-нед возрасте - инактивированной эмуль-
синвакциной (10). Рекомендовано при конструировании инактивированных вакцин против
ИБ использовать несколько штаммов (создавать поливалентную вакцину).
Применение живых вакцин. Штаммы, полностью утратившие вирулентность, практи-
чески неиммуногенны. Поэтому живые вакцины готовят из аттенуированных штаммов, об-
ладающих различной степенью остаточной вирулентности. Для первой прививки приме-
няют более аттенуированные и менее иммуногенные штаммы, для второй - более вирулент-
ные. Живые вакцины применяют орально ( с питьевой водой) или путем закапывания в нос.
Введение живой вакцины в зоб цыплятам создавало устойчивость к заражению без образо-
вания циркулирующих АТ (24). Эти данные свидетельствуют о важной роли местного им-
мунитета при ИБ. Материнские АТ от иммунных кур-несушек передаются через яйцо цып-
лятам, которых они защищают в первые 2-4 нед жизни от ИБ. Период полужизни материн-
ских АТ составляет немногим более 5 дн. Со второй недели жизни титр их начинает сни-
жаться. Оптимальный возраст для вакцинации цыплят живыми вакцинами составляет 2-3
нед (19). Учитывая корреляцию титра ВНА в сыворотках крови кур-несушек и в желтке
яиц, был предложено использовать последние для оценки иммунитета в PH. Яйца, снесен-
ные в течение 60 дн после повторной вакцинации содержат высокий уровень
(концентрацию) АТ (31).
Последовательная вакцинация живыми вакцинами разных типов обеспечивает накоп-
ление в сыворотке крови птиц широкого спектра АТ, которые превосходили даже типы,
примененные для вакцинации. Полученный от иммунизации против ИБ молодняк за счет
материнских АТ IgG-класса устойчив к заражению патогенным вирусом. Вирусспецифиче-
ский IgG обнаружен и в желтке яиц больных ИБ кур в течение 60 ди.
Сотрудниками ВНИВИП создана живая вакцина из аттенуированного штамма ВИБ. В
неблагополучных пунктах иммунизируют всех цыплят в 10-15-дн возрасте 2-кратно через
14-15 дн. Ревакцинируют птиц в 100-120-дн возрасте. Вакцину вводят интраназально или с
питьевой водой. В последние годы в России применяют вакцины против ИБ производства
различных зарубежных фирм.
194
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Таблица V.3. Дифференциальная диагностика респираторных
болезней птиц (по А.А. Ибрагимову, 1981)
Болезнь Эпизоотол. особенности Патанатомичес- кие изменения Гистологические изменения Основания диагноза
Инфекцион Острая высо- Гиперемия,отек Гиперемия, даф- Диффузый сероз-
ный ко конгагиоз- легких, скопле- фузный серозный ный отек, гипер-
бронхит ная инфекция, клинически пр являющаяся у цыплят до 60 да Про- должитель- ность болезни 8-10 да ние слизи и мелкие точеч- ные кровизлия- ния в слизи- стой трахеи, се- розно-слизис тый экссудат в просвете брон- хов и полости воздухоносных мешков отек и диапедезные кровоизлияния, со- провождающиеся лимфоидно- гистиоцигарной инфильтрацией, гиперплазией и ме- таплазией респира- торного эпителия плазия и метапла- зия респираторного эпителия слизи- стой оболочки тра- хеи и бронхов
Респира- Хроническая Серозно-ката Гиперсекреция и Лимфоцитарная
торный ми- чаще патент- ральный ринит, гипертрофия ели- инфильтрация и
коплазмоз ная инфекция, клинически про- являющаяся при небла- гоприятных условиях. Бо- леют птицы преиму- щественно в возрасте 30- 180 дн синусит, скоп- ление слизи и зернистость слизистой тра- хеи, помутне- ние воздухо- носных мешков зистых желез, лимфофолликуляр ная реакция и диф- фузная лимфоци- тарная инфильтра- ция, обусловли- вающие трубчатое удлинение желез, аэросаккулит, эндо- и перибронхит, не- равномерное утол- щение и полипооб- разное разрастание слизистой трахеи лимфоретикуляр- ная реакция, обус ловливающие аэро- саккулиг, эндо- и перибронхиг, не- равномерное утол- щение, полипооб- разное разрастание слизистой трахеи
Адено- Острая конга- Серозно - ката- Гиперемия, псевдо Гиперплазия и ме-
вирусная гиозная ин- ральный ринит, эозинофильная ин таплазия респира-
инфекция фекция, кли- нически про- яляющая-ся у птиц до 15-дн воз- раста.Продол житель ность болезни 8-10 да синусит, тра- хеит, катараль- ная пнев мония, некротический панкреатит, ге- патит фильтрация, бурная пролиферация рес- пираторного и же- лезистого эпителия, обусловливающая полную или час- тичную обтурацию просветов бронхов и пара бронхов торного и железис того эпителия, со- держащего внутри ядерные базофиль ные включения
Инфекционн Острая конга- Фибринозно- Гиперемия, темор Фибринозно-
ый ларингот- гиозная бо- геморрагиче- ратин, псевдоэози- геморрагический
рахеиг лезнь пре- имущественн о цыплят в возрасте 60- 180 да Про- должительное тью 10-15 дн ский ларинготра- хеит но ф иль на я инфиль грация и выпот фибринозного экс- судата с десквама- пцей и пролифера- цией респиратор- ного и железистого эпителия ларинготрахеит, десквамация и про- лиферация эпите- лия, содержащего внутриядерные ацидофильные включения
13*
195
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Таблица V.4. Бактериальные инфекции, сопровождающиеся
респираторным синдромом
Болезнь Эпизоотологические особенности Патологоанатомические изменения Г истологические изменения Диаг- ноз
Аспергил- лез Колисепти цемия Острая, реже хрони- ческая болезнь, вспышке которой способствуют не- благоприятные усло- вия. Болеет птица в возрасте 1-150 дней Острая септическая, которой способству- ют неблагоприятные условия, респиратор- ные инфекции. Про- долж8-15 дн. Болеет птица преиму- щест- венно в 30-140 дней Фибринозная пневмония, аэросаккулит и некрозы (гранулемы) размером 1- 5 мм с характерной кон- центрической слоисто- стью Фибринозный аэро- саккулиг, пневмония, пе- рикардит, сальпингит Гиперемия, отек, псев- доэозно-фильная и эпителиоидно-клеточ- ная ифильтрция, со- провождающаяся раз- витием некроза с ги- гантоклеточной и гра- нулематозной реакци- ей по периферии Гиперемия, псевдоэо- зинофильная инфиль- трация, выпот фибри- нозного экссудата и микробная тромбоэм- болия с некрозами, с гигантоклеточной и гранулематозной ре- акцией по периферии Обнару жение мице- лия гриба в зоне некроза
Температурочувствительный мутант ВИБ (тип Арканзас) получен путем серийного пас-
сирования при пониженной температуре (35-28°С). Вирус, в основном, размножался в верх-
них дыхательных путях и очень слабо в других органах. Он оказался авирулентным для 3-
7-дн цыплят-бройлеров. Доза вакцины, обеспечивающая 100% защиту привитой птицы, со-
ставляла 103-105 ЭИД50. Вакцинация 2-нед цыплят аэрозольно или закапыванием в глаз
вакцины из шт. Н120 создавала устойчивость примерно к 31-му дню (5).
При оценке различных программ вакцинации против ИБ в компании Питман Моор
сравнивали титры АТ в реакциях задержки гемагглютинации и нейтрализации. Цыплят
первый раз иммунизировали в возрасте различными живыми вакцинами, а повторно - в 16-
нед возрасте инактивированными адъювант вакцинами из шт. М41 или GV101. В итоге ус-
тановлено, что уровень АТ у привитых цыплят был выше к вирусу М41, чем к вирусу серо-
типа Д207. У птиц, иммунизированных вакциной из шт. М41 и ревакцинированных убитой
вакциной из двух штаммов, имелись более высокие титры АТ к серотипам Массачусетс и
Д207 (22). Аттенуированные вакцинные шт. Массачусетс 33 и Н120 персистируют в трахее
и легких с 3 до 13 дн после вакцинации.
Связь титров антител с резистентностью. Нет прямой зависимости напряженности
иммунитета от уровня ВНА. В резистентности птицы важную роль играет местный тканевой
иммунитет респираторного тракта. Цыплята, вакцинированные аэрозольно живым вирусом,
резистентны, даже если в сыворотке крови нет специфических АТ. Установлена прямая за-
висимость между устойчивостью птицы к заражению вирулентным вирусом и наличием
обширных гистопатологических изменений в гарднеровых железах после вакцинации.
Оценку степени иммунитета у вакцинированных цыплят можно проводить по активно-
сти реснитчатого эпителия трахеальных эксплантатов, полученных после трахеального кон-
трольного заражения. Интраназальная или интраокулярная иммунизация суточных цыплят с
наличием материнского иммунитета вакцинным шт. Н120 обеспечивает устойчивость про-
тив интратрахеального заражения патогенным ВИБ (5). Эффективность вакцинации против
196
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
ИБ вакцинами из шт. Массачусетс и Арканзас оценивается на основании выделения ВИБ из
трахеальных тампонов после 1-нед периода заражения в полевых условиях (23).
Установлена иммунологическая совместимость вирус-вакцины из шт. Н120 ВИБ и ви-
русвакцины из шт. Бор74 ВГНКИ вируса НБ при ассоциированном применении аэрозоль-
ным способом. Продолжительность иммунитета против ИБ и НБ составляла 120 ди (47).
Попытка разработать способ вакцинации против ИБ in ovo не дала явно положительных
результатов. Вакцины Iboral 1 или Bioral Н120 приводили к развитию лишь незначительных
поствакцинальных реакций со стороны респираторной системы у вылупившихся цыплят. На
15-й день после вакцинации (12-й день после вылупления) в сыворотках цыплят определя-
лись повышенные титры АТ в РЗГА по сравнению с контролем. Вакцина Iboral 1 приводила
к некоторым нарушениям диаграммы вылупления.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Эффективность вакцины
оценивается по разным критериям, из которых основным являются клинический ответ, но-
сительство и диссиминация вируса, реакция трахеального эпителия in vivo и in vitro, защита
от вирулентного гомологичного и гетерологичного типов ВИБ, образование секреторных и
гуморальных АТ. Для оценки профилактической эффективности вакцинации цыплят против
ИБ предложен клиренс-тест.
Длительность циркуляции поствакцинальных антител. Высокий уровень АТ дости-
гается к концу 3-ей нед и регистрируется в течение года. На прививку инактивированной
вакциной ВНА в сыворотках крови цыплят и кур появляются с 7-14-го дня в титрах 5-7
log2, нарастают к 30-60-му дню до 8-10,5 log2 и сохраняются на таком уровне до 6 мес.
Пассивный иммунитет. В желтке яиц, полученных от кур-реконвалесцеитов, имеются
АТ, которые затем передаются цыплятам. Уровень их у цыплят сразу же после вылупления
высокий, затем в течение 4 нед постепенно снижается. Пассивные АТ не предотвращают
респираторную инфекцию у цыплят, но несколько ослабляют течение болезни. Материнские
АТ обеспечивали устойчивость цыплят к заражению в течение 3 нед.
Связь титров антител с носительством и выделением вируса. Предложен метод оп-
ределения напряженности иммунитета у вакцинированной птицы после ее заражения виру-
лентным вирусом путем выявления вирусного АГ с помощью флюоресцирующих АТ. Кро-
ме того, предложена оценка поствакцинального иммунитета на основе активности ресничек
в кольцах трахеи. При изучении гуморального иммунитета установлена тесная корреляция
между активностью реснитчатого эпителия и выделением вируса из тканей, что послужило
основанием рекомендовать первый тест в качестве критерия оценки местного иммунитета
при определении перекрестного иммунитета. Однако корреляция между уровнем АТ и чис-
ленностью подверженных к заражению ВИБ птиц незначительна. Резистентность связана с
клеточным опосредованным иммунитетом, что подтверждено методом бласттрансформации
лимфоцитов и реакцией гиперчувствительности замедленного типа (16). Оценка иммунитета
у птиц, привитых инактивированными вакцинами, основана на обнаружении ВНА и ПА.
Обычно через 2 нед после второй вакцинации индекс нейтрализации составляет 3 1g. С по-
мощью ИФА можно достоверно оценить как поствакцинальный, так и постинфекционный
статус у экспериментально зараженных птиц. Метод не является специфическим для серо-
типирования ВИБ, ио высокочувствителен для выявления АТ в сыворотке крови. Данные,
полученные методом ИФА, при оценке иммунного статуса, хорошо совпадают с результата-
ми, полученными в других серологических реакциях: PH, РЗГА, вирусовыделения и реакции
ткани трахеи (36).
Установлена тесная корреляция между активностью мерцательного эпителия и гистоло-
гическими изменениями, вызванными вирусом, и незначительная - между титрами АТ (в
PH и РИГА) и напряженностью иммунитета. Однако не установлено корреляции между по-
казателями клеточного и гуморального иммунитета у цыплят, иммунизированных инакти-
197
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
вированной эмульсинвакциной. Установлена корреляция титров ВНА в сыворотках крови и
желтках яиц и вакцинированных кур.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, "Урожай" 1993. 2.Фомина Н.В. и^др. Вирусы живот-
ных, MBA,1991 :112. З.Сюрин В.Н. и др. Диагн вирус, бол. жив. "Агропромиздат" 1991 :335.
4.Сюрин В.Н. и др. Част, ветеринарная вирусология. М. "Колос", 1979 :409. S.Tarcha В. et.al. Acta vet
Hung 1991, 39,1/2 :83. 6.Amboli A.G. et.al. Rev roum virol 1990, 41, 3-4 :151. 7.Amboli AG. et.al. Anim
Helth Pwd 1991, 39, 2 :213. 8.Balia Z. et.al. Magy allatow lapja 1986, 41 :531. 9.Balla Z. et.al. Magy
allatow lapia 1986, 41 :531. lO.Brussow H et.al. J Gen Virol 1988, 69 :1647. ll.Batcher G.D etal. Avion
Dis 1989, 33, 4 :823. 12.Cavanagh D et.al. G Gener Virol ,1986. 13.Cavanagh D et.al. J Avian Pathol,
1987, 61 :1. 14.Cavanagh D. et.al. Avian Pathol 992, 21, 1 :33. 15.Chandra M Poultry Sc. 1987, 66, 6
:954. 16.Chubb R. Huynh Avian Pathol, 1988, 17, 2 :371. 17.Cook G. Paultry World 1986, 140, 20 :6.
18.Collisson Ellen W, et.al. Poult Sci Rev 1992, 4, 1 :41. 19.Darbyshire J.H. et.al. Res Vet Sci, 1985, 38
:14. 20.Endo Munoz.B. et.al. Austral veter J 1989, 66, 10 :338. 21.DoiMoncito et.al. Kitasato Arh Exp
Med 1992, 1 :73. 22.Finney P.M et.al. Avian Pathol. 990, 19, 3 :435. 23.Gelb J. Jr et.al. Avian Dis. 1989,
33, 4 :764. 24.MacDonald J.W .et.al. Zootech Intern, 1984, 4 :44. 25.Kaufhold C. et.al. Tierarztl Umsch,
1988, 43, 9 :595. 26.Koch G. et.al. Nucl Acids Res 1990, 18, 10 :3063. 27.Kusters J.G. et.al. Virology
1987, 169 :217. 28.Lin Z. et.al Arch Virol, 1991, 120, 1-2 :145. 29.Muneer M. A. et.al. Avian Dis 1988,
32, 1 :137. ЗО.Мипеег M.A. etal. Pakist veter J 1989, 9, 2 :57. 31.Mockett A.P. etal. Avian Pathol, 1987,
16, 407 :493. 32.Nagi S.A. Avian Dis 1990, 34, 4 :893. 33.Niesters H.G.M. et.al. Virology 1987, 161, 511.
34.Penzes Z., et.al. Acta vet hung 1992, 40, 4 :311 . 35.SadasivEileen C. et.al. J Virol Meth.1991, 33, 1-2
:115. Зб.Того H.J. Veter Med Ser B.,1988, 35, 2 :109. 37.Verbeek A. et.al. Arch Virol 1991, 121, 1-4
: 199. 38.Williams Anna K. et.al. Virus Res 92, 25, 3 :213. 39.Yagyu K. et.al Avian Dis, 1990, 34, 2 :246.
40.Zojac J. et.al. Vet med, 1992, 37, 1 :57. 41.ZwaagstraK.A. et.al. Clin Microbiol, 1992, 30, 1 :79.
42.Дубовой AC. и др. Тез. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995, 253. 43.Lohr J.L Avian Dis, 1980,
24, 2 :463. 44.Feng W. et.al. Zootech.Sin. 1994, 25, 2 :163. 45.Токарских В.В. и др. Тез. н-пр. конф.
ВНИИЗЖ, Владимир, 1995, 268. 46.Cook Jane К.А. et.al. Avian Pathol 1992, 21, 4 :681. 47.Бирман Б.Л.
и др. Вет. наука - произв, 1992, 30 :15. 48.Borzemska W. et.al. Med. Vet., 1993, 49, 2 :76. 49.Sapats S.I.
etal. J Gen Virol, 1996, 77, 3 :413. 50.Wit J.J. de. et.al. Avian Pathol. 1995, 24, 3 :465.
ЭПИДЕМИЧЕСКАЯ ДИАРЕЯ ПОРОСЯТ
Womiting and wasting disease in piglets (англ.); Erbrechen und
Kummern beim Saugferkel (нем.)
Эпидемическая диарея поросят (ЭДП) впервые зарегистрирована в 1971 г. в Великобри-
тании. Клинически болезнь проявляется аналогично ТГС, за исключением важного отличия,
заключающегося в том, что поросята-сосуны (до 4-5 нед возраста) не заболевают. Подобная
болезнь наблюдалась в Бельгии в 70-е годы. Позднее выделили вирус при ТГС-подобном
заболевании, который назвали ЭДП тип 2. Последний отличался от ранее выделенного, обо-
значенного как вирус ЭДП тип 1, только тем, что вызывал заболевание и у поросят-сосунов.
Только в 1978 г. удалось установить связь коронаподобного вирусного АГ со вспышкой
ЭДП типа 2 (27, 28).
Экспериментальное заражение подтвердило энтеропатогенность изолята, но только не
для поросят-сосунов (8), а для свиней на откорме. Недавно показано, что вспышки ЭДП ти-
па 1 и 2 обусловлены одним и тем же вирусом (28).
В ELISA-блокинг АТ к вирусу ЭДП обнаружены среди свинопоголовья Бельгии, Анг-
лии, Германии, Франции, Нидерландов, Швейцарии, Болгарии (12, 18). В США, по крайней
мере до 1990 г., обнаружить АТ к вирусу ЭДП не удалось, как и в Австрии (26). Получены
данные, свидетельствующие о возможности распространения инфекции, обусловленной ви-
русом ЭДП в хозяйствах стран СНГ. При исследовании на наличие вирусов ИГС и ЭДП в
одних и тех же образцах патматериала положительные результаты получены в большинстве
198
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
случаев как на ИГС, так и на ЭДП. Эго ставит вопрос о широком распространении смешан-
ной вирусной инфекции ИГС-ЭДП. Возникает необходимость полномасштабных исследова-
ний по изучению этиологической роли вируса ЭДП при массовых вспышках острых диа-
рейных заболеваний новорожденных поросят и молодняка, особенно в случаях когда боле-
ют также откормочные и взрослые свиньи (1,2).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Главным и часто
единственным признаком ЭДП является водянистый понос. При вспышках заболевания на
чувствительном поголовье заболеваемость и смертность могут значительно варьировать.
Болезнь клинически очень похожа на ТГС, за исключением медленного распространения и
невысокой смертности новорожденных поросят. Поросята до 1 нед возраста могут погибать
от дегидратации при диарее в течение 3-4 дн. Смертность в среднем составляет 50%, но мо-
жет достигать 90%. Животные более старшего возраста выздоравливают через 1 нед. На не-
которых фермах, однако, тяжело поражаются поросята на откорме и даже взрослые свиньи,
тогда как поросята-сосуны не поражаются вовсе, или у них развивается легкая диарея. Забо-
леваемость у новорожденных поросят низкая. Нет объяснения различию клинического про-
явления заболевания при отсутствии иммунитета. На откормочных фермах наблюдаются
большие различия клинических признаков при острой вспышке ЭДП. У всех поросят выра-
жена диарея в течение недели. Животные угнетены, аппетит отсутствует, кал водянистый
(но без крови). Выздоровление наступало через 7-10 дн. Смертность - 1- 3%. Поросята поги-
бают обычно на ранней стадии диареи или даже перед ее появлением. Самая высокая
смертность обычно наблюдалась при стрессах.
ЭДП тяжелее болеет откармливаемое поголовье, чем на новорожденные поросята. От-
кармливаемые поросята более чувствительны к вирусу и заболеваемость достигает 100%.
Распространение ЭДП в помещении закрытых племенных ферм, а также в откармливаемых
стадах более медленно, чем ТГС. В племенных фермах на это уходит, как правило, 4-5 нед
после заражения животных различных возрастных групп.
Макроскопические поражения локализуются в тонком кишечнике, который заполнен
желтой жидкостью (25,29). Микроскопически через 24 ч после заражения заметны вакуоли-
зация клеток эпителия и выход гистеоцитов в ворсинках тонкого кишечника, что соответст-
вует последующей диарее. С этого момента укорачиваются ворсинки (13). Ультраструкгур-
ные изменения находят только в цитоплазме энтероцитов (22), в которых клеточные органе-
лы уменьшены, имеют электронно-ответные зоны.
Патогенез. Патогенез изучали на поросятах-гнотобиотах, не получавших молозива,
инокулированных прототипным шт. CV777 в возрасте 3-х дн (11). Поросята заболевали че-
рез 22-36 ч. Вирус репродуцировался в цитоплазме в эпителиальных клетках ворсинок в
тонком и толстом кишечнике. Флюоресцирующие фокусы обнаружены также в криптах и
мезентериальных лимфоузлах, но инфекция в этих зонах всегда оставалась рассеянной и,
возможно, непродуктивной.
Заражение эпителиальных клеток наблюдалось уже через 12-18 ч после инокуляции по-
росят и достигало максимума через 24-36 ч. Развивалась дегенерация клеток тонкого отдела
кишечника, что приводило к укорачиванию ворсинок. Отношение длины ворсинок и глуби-
ны крипт от нормального 7:1 снижалось до 3:1. В эпителиальных клетках толстого отдела
кишечника дегенерации не отличались. Флюоресценция в клетках отмечалась до 5-го дня
после заражения поросят. Поражения в тонком кишечнике были очень похожи на таковые
при ТГС. При ЭДП отмечался более продолжительный инкубационный период. Размноже-
ние вируса ЭДП вне клеток кишечника не происходило.
Патогенез ЭДП на поросятах более старшего возраста изучен также детально. Флюо-
ресценция вирусспецифического АГ обнаруживалось в эпителиальных клетках ворсинок
тонкого и толстого отделов кишечника откармливаемых поросят как после эксперименталь-
199
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
ного, так и после естественного заражения. До сих пор не ясно, каким образом поражения
толстого отдела кишечника усиливало клиническое проявление болезни. Нет также объясне-
ния наличию внезапных мышечных некрозов, часто наблюдаемых как у молодняка, так и у
взрослых свиней.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфологический и химический состав. Морфология вируса ЭДП - типична для ко-
ронавирусов. Частицы, обнаруживаемые в фекальных массах, плеоморфны, чаще сфериче-
ские. Их диаметр составляет 130 нм ( от 95 до 190 нм). Многие частицы имеют электронно-
плотную центральную зону размером 18-23 нм. Внутренние структуры не просматриваются.
Морфогенез вируса ЭДП происходит в эпителиальных клетках кишечника по схеме, анало-
гичной другим коронавирусам. Собранные вирусные частицы могут проходить через цито-
плазматические мембраны (14,15,16).
Физико-химическая и биологическая характеристики подтверждают принадлежность
вируса ЭДП к семейству коронавирусов. Вирус эфиро- и хлороформочувствителен. Плаву-
чая плотность составляет 1,18 г/см3. Концентрированный и очищенный вирус агглютиниру-
ет эритроциты 12 видов животных (5, 6, 7). Адаптированный к культуре клеток вирус ЭДП
теряет инфекционность при 60°С в течение 30 мин, но значительно стабильнее при 50°С.
Вирус стабилен при pH 5-9 при 4°С и 6,5-7,5 при 37°С. Инфекционность вируса не снижает-
ся при обработке ультразвуком или многократным замораживанием-оттаиванием.
Репликация не ингибируется 5-йод-2-дезоксиуридином, что показывает принадлежность
вируса к РНК-содержащим (17,19, 20, 21). Основные структурные белки вируса ЭДП такие
же, как и у других коронавирусов. Вирус содержит гликозилированный пепломерный проте-
ин мол.м.85-135 кД, гликозилированный оболочечный протеин 20-32 кД, негликозилиро-
ванный РНК-связанный нуклеокапсидный протеин мол. м. 58 кД. Идентифицирован мем-
бранный гликопротеин (М) вируса с использованием кроличьей антипептидной сыворотки,
клонированного М-гена в клетках Vero и в бакуловирусной системе. Нативный М-белок ви-
руса включается в вирионы, является N-гликозилированным и мигрирует с относительной
подвижностью 27 К в полиакриламидном геле. М-белок, синтезированный рекомбинантным
бакуловирусом, мигрирует с подвижностью 23К, т.е. идентично подвижности дегликозили-
рованного продукта. Показано, что 19К полоса, определяемая в клетках, инфицированных
вирусом ЭДП, но не в вирионах, представлена фрагментом М, из которого С-конец был
удален. Ориентация М внутри оболочки вириона определялась также электронной микро-
скопией и с помощью иммунозолотой метки. Все данные подтверждают гипотезу о том, что
вирус ЭДП должен быть отнесен к группе 1 коронавирусов (33).
Антигенная вариабельность и родство. В прямой ИФ или ЭМ установлено отличие
вируса ЭДП от ТГС и ГВЭС, коронавируса собак, вируса диареи неонатальных телят, виру-
сов ИБ, ИПК (27). Однако исследования, проведенные с помощью более чувствительных
методов (иммуноблоттинг), показали, что вирус ЭДП имеет АГ-детерминанты, общие с ви-
русом ИПК. Эти детерминанты локализуются в нуклеокапсидном белке (37). Серологиче-
ских различий вируса ЭДП не обнаружено. Изоляты из Германии и Франции серологически
идентичны прототипному шт. С\ПП (17а).
Культивирование Высокоочищенный вирус получают после орального заражения по-
росят-гнотобиотов несколькими серийными промываниями тонкого кишечника, начиная с
первых признаков диареи. Эта перфузия может продолжаться 12 ч, объем вирусного мате-
риала достигает 1,5 л с титром 104-105 ИД (для поросенка) в 1 мл (8, 9, 10). Адаптация ви-
руса ЭДП к лабораторным моделям требует исключительных условий. Попытки культиви-
рования различных изолятов ЭДП в кишечных или легочных эксплантатах плодов поросят
или новорожденных поросят оказались безуспешными. Непостоянная репродукция вируса
отмечалась в ряде культур клеток, как обработанных, так и необработанных трипсином или
200
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
панкреатином (5, 17а, 35, 36). Однако линия Vero оказалась способной поддерживать се-
рийное пассирование вируса. Рост вируса зависел от наличия трипсина в культуральной
среде. ЦПД проявляется вакуолизацией и формированием синцитиев. Синцитий может со-
держать до 100 ядер. Кинетика роста характеризуется пиком титра вируса (105,5 БОЕ/мл)
через 15 ч после заражения (18-21).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Вирус ЭДП передается, главным образом, с калом больных животных. Заражение в ес-
тественных условиях происходит орально. Орально-фекальный путь передачи инфекции
главный, если не единственный.
Вспышки ЭДП на ферме часто встречаются в течение 4-5 дн после продажи или покуп-
ки поросят. Заражение возможно через контаминированный транспорт, обувь или другие
контаминированные вирусом предметы. После вспышки на ферме вирус может исчезнуть
или заболевание принимает энзоотическую форму.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз нельзя поставить на основании только клинических признаков. Острая вспыш-
ка ЭДП, при которой диарея наблюдается среди животных всех возрастов, включая ново-
рожденных поросят, клинически не дифференцирована от ТГС. Острая диарея поросят-
огьемышей и более старших поросят на родительских фермах с клиническими признаками
или очень легкими клиническими признаками у новорожденных поросят указывает на воз-
можность ЭДП. Если диарея имеет место постоянно на взрослых животных, необходимо ис-
ключить эшерихиоз и ротавирусную инфекцию свиней. Вирус ЭДП или вирусный АГ обна-
руживается в ЭМ и ИФА, чувствительность которой выше (4, 6). В ИФА вирусный АГ об-
наруживался уже на 7-й день после заражения в пробах кала.
Специфические АТ выявлены в сыворотке крови как экспериментально, так и после ес-
тественного заражения вирусом ЭДП. Их обнаруживали в ИЭМ, ИФА, ИФА-блокинге, ИФ,
подавлении ИФ и PH на поросятах или в культуре клеток линии Vero (6, 20, 21, 27, 30, 31,
32, 35). В ИФА АТ к пепломерному белку обнаруживаются легче, чем АТ к нуклеокапсид-
ному протеину (23).
Индикация вируса. Лабораторные исследования позволяют поставить этиологический
диагноз обнаружением вируса ЭДП или его АГ, или вирусспецифических АТ. Прямой метод
ИФ криосрезов тонкого кишечника поросят наиболее чувствительный и приемлемый метод
диагностики. Он может быть использован при получении материала от поросят, убитых
только при острой диарее примерно через 48 ч после ее начала. При исследовании материа-
ла от павших животных метод малоэффективен (5). Вирусные частицы могут выявляться в
кале при прямой электронной микроскопии. Наибольший процент (73) положительных проб
кала получают при экспериментальном заражении поросят при сборе проб в первые часы
после проявления диареи. ИЭМ используется для дифференциации вирусов ИГС и ЭДП, по-
скольку морфологически они очень похожи. Чувствительным и приемлемым методом диаг-
ностики ЭДП у взрослых животных и поросят является ИФА кала или кишечного содержи-
мого. Этот тест более чувствителен, чем ЭМ. Материал собирают от нескольких животных с
острой диареей. У экспериментально инфицированных поросят вирусспецифический АГ
(ВСА) постоянно обнаруживают на 2-5-й день и непостоянно на 6-8-й день (6).
Выделение вируса. Выделение вируса из тонкого кишечника поросят в культуре клеток
Vero удается только в присутствии в поддерживающей среде 10 мкг/мл трипсина. ЦПИ про-
являются в виде слияния клеток и образования синцития. Вирусспецифический АГ в цито-
плазме выявляется методом непрямой ИФ. После ряда пассажей в клетках Vero в присутст-
вии трипсина вирус удавалось адаптировать к культурам клеток МА 104, СРК и ESK. Од-
нако попытки адаптировать вирус к 6 типам первичных эмбриональных культур клеток сви-
ньи не увенчались успехом. Вирус отличается по АГ-свойствам от вируса ТГС и энцефало-
201
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
миелита свиней (24). Цитопатогенные шт. вируса ЭДП могут быть изолированы на культуре
клеток линии Vero, ио диагностическое значение вирусовыделения не определено (19).
Серологическая диагностика. С этой целью используют несколько методов: непрямой
ИФ, метод подавления ИФ в криосрезах, ИФА и подавление ИФА (ELISA-блокииг). Во всех
этих методах используются парные сыворотки крови. Повторные пробы (реконвалесцентные
пробы) сыворотки получают через 4 нед после начала диареи, поскольку при эксперимен-
тальном заражении АТ обнаруживаются не ранее, чем через 15 дн (21,30,35).
АТ, выявляемые в сыворотке методами ELISA-блокинг и ИФ-блокинг, персистируют в
течение 1 года. Реинфекция кишечника с развитием диареи у серопозитивных животных,
переболевших после первичной инфекции, возможна через 5 мес. Однако в этом случае на-
блюдается быстрая бустер-реакция (9,35).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Специфические средства и методы профилактики ЭДП в настоящее время не разработа-
ны. Искусственное распространение вируса ЭДП среди взрослых свиноматок, возможно,
стимулирует лактогенный иммунитет и укорачивает сроки переболевания на ферме. Сани-
тарные меры предупреждают занос вируса ЭДП на ферму. Эпизоотологические исследова-
ния показали, что вирус ЭДП заносится на ферму главным образом (или только) с переме-
щающимися людьми или животными.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Краснобаев Е.А. Тез. докл. н-пр конф ВНИИЗЖ, 1995 -.44. 2.Краснобаев Е.А. и др. Тез. н-пр. конф
ВНИИЗЖ, 1995 :200. З.Сюрин В.Н. и др. Части вет вирусология. М, Колос, 1979. 4.Bollwahn W. Pig
News Inf, 1983, 4 :141. 5.Callebaut P. et.al. Proc.5111 hit Cong Virol, Strasbourg,1981 .420. 6.Callebaut P.
et.al. Vet. Microbiol, 1982, 7 :295. 7. Callebaut P. et.al. Proc 9th hit Cong Pig Vet Soc, Barce Iona, 1986,
:213. S.DeBouck P. et.al. Am J Vet Res,1980, 41 :219. 9.DeBouck P. et.al. Proc 8th Int Cong Pig Vet Soc
Ghent, 1984 :53. lO.DeBouck P. etal. Vet Microbiol, 1981, 6, : 157. 11.DeBouck P. et.al. Cun Top Vet
Med Anim Sci, 1981, 13 :59. 12.DeBouck P. et.al. Proc 7th hit Copng Pig Vet Soc Mexico City,1982 :53.
13.Ducatelle R. etal. Zentralbl Veterinarmed [B], 1981, 28 :483. 14.Ducatelle R. et.al. Acta Virol., 1981,
68 :35. 15.Ducatelle R. etal. Vet Path, 1982, 19 :46. 16.Ducatelle R et.al. Vet Pathol, 1982, 19 :57.
17.Egbering H.I. etal. Am J Vet Res, 1988, 49 :1320. 17a.Hess R.G. etal. Virus Berl Muench Tieraerztl
Wochensch, 1980, 93 :445. lS.Hofinann N et.al. Schweiz Arch Tierhailkd, 1987, 129 :437. 19.Hofinann N.
etal. J Clin Microbiol, 1988, 26 :2235. 20.HofmannN. et.al. Vet Microbiol, 1989, 20 :131. 21.HofinannN.
et.al. Vet Microbiol, 1990, 21 :263 . 22.Horvath L. et.al. Arch Virol, 1981, 68 .103. 23.Knuchel M. et.al.
Proc 11ш Int Congr Pig Vet,Lausanne,1990 :214. 24.Kusanagi K. etal. J Vet Med Sci, 1992, 54, 2 :313.
25.Leopoldt D. etal. Monatch Veterinaermed, 1981, 36 :411. 26.Mostl K. et.al. Wien Tieraerztl
Monatsschr, 1990, 77 :10. 27.Pensaert M.B. et.al. Arch Virol, 1981, 68 :45. 28.Pensaet M.B. et.al. Proc
7th hit Congr Pig Vet Soc,Mexico City, 1982 :52. 29.Pospeschil A. et.al. Zentralbl Veterinaermed [B],
1981, 28 :564. 3O.Prager D. etal. Tieraerztl Umsch, 1981, 36 :404. 31.Prager D. etal. Tieraerztl Umsch,
1981, 36 :477. 32.Prager D. etal. Tieraerztl Umsch, 1983, 38 :155. 33.Utiger A. etal. Virus Genes, 1995,
10, 2 :137. 34.Vannier P. et.al. Rec Med Vet, 1983, 159 :19. 35.Witte K.H. et.al. Tieraerztl Umsch, 1987,
42, :817. 36.Witte К. H. etal. Tier Umsch, 1981, 36 :235. 37.YalingZ. et.al. Arch Virol, 1988, 102 :63.
ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТ СВИНЕЙ
Encephalomielitis of pigs
Энцефаломиелит свиней (ЭС) рвотная болезнь поросят, коронаинфекция - контагиозная
болезнь поросят раннего возраста, проявляющаяся симптомами рвоты, потерей аппетита,
истощением и гибелью иа первой неделе жизни. Болезнь впервые описали Григ и др. (9) в
штате Онтарио (Канада) как энцефаломиелит поросят в возрасте от 4 до 7 дн жизни.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. При заражении ГА
вирусом энцефаломиелита свиней (ГВЭС) возможны 2 клинических проявления болезни:
острое течение с явлениями энцефаломиелита и синдромом рвоты и истощения. Оба син-
202
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
дрома встречаются у поросят менее 3 нед возраста, хотя свиньи старшего возраста также
могут заболевать с кратковременной потерей аппетита и массы. У больных поросят отмеча-
ют депрессию, частую рвоту, потерю аппетита, гиперстезию, расстройство координации, ис-
тощение. В помете заболевает от 20 до 100% поросят с максимальной смертностью на пер-
вой неделе жизни.
В начале вспышки синдрома рвотной болезни наблюдается кашель и истечения из носа.
Инкубационный период обычно составляет 4-7 дн. Поросята 4-х нед возраста начинают со-
сать, но быстро прекращают, отходят от свиньи, у них наблюдается рвота от только что по-
лученного молока. Они скучиваются, выглядят бледными и безразличными, часто выгибают
спины. Температура тела может подниматься в начале заболевания, но возвращается к нор-
ме через 1-2 дн. Зараженные свиньи часто скрежещут зубами, они погружают рот в воду, но
пьют мало, у некоторых из них возможен паралич глотки. Рвота и снижающийся объем по-
требляемого корма приводит к запорам и быстрому снижению упитанности. У наиболее мо-
лодых поросят наблюдается обезвоживание в течение нескольких дней, проявляются дисп-
ния и цианоз, кома и смерть. Более старшие поросята теряют аппетит и быстро истощаются.
У них продолжается рвота, хотя менее часто, чем в начале заболевания. У некоторых жи-
вотных наблюдается растяжение краниальной части живота. Эта стадия исхудания может
длиться несколько недель вплоть до гибели поросят. Смертность среди таких животных
достигает 100%.
Вспышка с явлениями энцефаломиелита может начинаться так же, как и синдром рвоты
и исхудания. У некоторых поросят отмечается рвота через 4-7 дн после рождения. Рвота
может продолжаться 1-2 дня и не приводит к обезвоживанию. В других случаях первым
признаком является острое угнетение и тенденция к скучиванию. Истощение может насту-
пать через 2 дня после рождения. Иногда наблюдается кашель, чихание или поражение ор-
ганов верхних отделов респираторного тракта. Поросята быстро теряют массу и волосяной
покров. Через 1-3 дня появляются тяжелые симптомы энцефаломиелита. Молодые поросята
поражаются более тяжело, у них проявляются различные комбинации нервных признаков,
общий мышечный тремор, поза сидячей собаки, лежание на спине. Поросята быстро стано-
вятся очень слабыми и не способными вставать, шлепают губами. Слизистые оболочки рта
и носа цианотичны. Наблюдаются эпистотонус, нистагмы и слепота. В большинстве случаев
кома предшествует смерти. Смертность обычно 100%. У старших поросят может быть лег-
кое, проходящее заболевание, при котором последующий паралич - основной признак. Па-
резы в некоторых случаях сопровождаются слепотой. Животные могут выздоравливать че-
рез 3-5 дней.
Патогенез. Некоторые наблюдения показали, что ГВЭС способен реплицироваться в
верхнем отделе респираторного тракта без проявления клинических признаков. Выделяли
вирус из носовых истечений здоровых свиней. Главный путь выделения вируса - носовые
секреты. При экспериментальном ороназальном заражении новорожденных, лишенных мо-
лозива поросят штаммом, вызывающим рвотный синдром, инкубационный период состав-
лял 4 дня, после чего отмечалась рвота и отсутствие аппетита. В эпителиальных клетках
слизистой оболочки носа, гландах, легких, тонком кишечнике обнаруживались очаги пер-
вичной репродукции вируса. После первичной репликации в месте проникновения вирус
распространяется по периферической нервной системе в ЦНС. При этом задействованы, по
крайней мере, три пути. Первый путь ведет из слизистой оболочки носа и гланд в тригеми-
нальные ганглии и тригеминальные сенсорные ядра в головном мозге. Второй путь - вдоль
n.vagus в сенсорные центры головного мозга. Третий путь ведет от интерстинального спле-
тения к спинному мозгу, также после репликации в местных сенсорных ганглиях (1, 2, 3, 4).
Виремия не имеет существенного значения в патогенезе заболевания.
В ЦНС инфекция начинается в хорошо различимых ядрах среднего мозга и позднее
прогрессирует в головной и спинной мозг.
203
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Рвота может обусловливаться репликацией (Рис.23) вируса в сенсорных центрах n. vagus
или импульсами в рвотный центр, обусловленными инфицированными нейронами различ-
ных зон (4). Для изучения патогенеза истощения проведены исследования хронически ин-
фицированных, вагоэктомированных и контрольных животных, которые показали, что рас-
стройство желудка пустотой играет важную роль в патогенезе исхудания и рвотной болезни.
Гистологические изменения в ЦНС характеризуются негнойным энцефаломиелитом с
периваскулярной инфильтрацией мононуклеарных клеток, глиозом, гибелью нейронов.
Микроскопические поражения отмечаются в заглоточных лимфоузлах, нервной системе, ор-
ганах дыхательной системы и желудка в острый период заболевания. Тонзиллярные изме-
нения характеризуются дегенерацией эпителиальных клеток и инфильтрацией крипт лим-
фоцитами (13). Негнойный энцефаломиелит наблюдается у 70-100% свиней с нервными
признаками болезни у 20-60% поросят с синдромом рвоты-исхудания. Поражения характе-
ризуются периваскулярными манжетами, глиозисом и дегенерацией нейронов (14). Энцефа-
литические поражения являются специфическим иммунным ответом на реплицирующийся
ГВЭС в ЦНС (14). Микроскопические изменения в желудочной стенке и лёгких обнаружи-
ваются только у поросят с синдромом рвотной болезни. Дегенерация ганглий стенки желуд-
ка и периваскулярные муфты встречаются у 15-85% больных животных. Поражения наибо-
лее выражены в ганглиях пилорной части. У 20% наблюдается интестинальная перибронхи-
альная пневмония с инфильтрацией альвеол нейтрофилами и макрофагами.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ. ГВЭС выделен в Польше в 1971 г. от боль-
ных новорожденных поросят, а также изолирован из носовых раковин свиней с симптомами
атрофического ринита в 1972 г. в США. В 1962 г. в Канаде Григ и соавт. (9) выделили ви-
рус, патогенный для свиней Он был назван ГА вирусом энцефаломиелита свиней и позднее
отнесён к семейству коронавирусов (1, 9, 20). В 1964 г. подобный вирус был выделен в Анг-
лии от поросят-сосунов и отъёмышей с признаком анорексии, угнетения, но без признаков
энцефаломиелита (болезнь рвоты и истощения). Экспериментально воспроизвести эти фор-
мы заболевания удалось в 1976 г.
Эпизоотологические исследования показывают преобладание инфицирования свиней
ГВЭС, однако естественное распространение болезни невелико. Поросята обьино защище-
ны пассивными колостральными АТ, а затем развивается соответствующая возрастная ус-
тойчивость к потенциальному заражению с развитием клинических признаков заболевания.
Морфология и химический состав. Морфология ГВЭС аналогична другим коронави-
русам. Вирусные частицы сферические, диаметр их 120 нм, содержат две концентрические
мембраны, включённые в центральное ядро (11а) и 5 полипептидов, 4 из которых гликози-
лированы, мол. м. от 31 до 180 кД (5). Плавучая плотность в CsCl2 составляет 1,21 г/см3.
Устойчивость. Вирус устойчив при pH 4-10 и очень чувствителен к нагреванию: - пол-
ностью утрачивает инфекционность при 56° С в течение 30 мин, при 4° С в течение 7 дн
инфекционность снижается только на 0,8 1g. Чувствителен к жирорастворителям, включая
дезоксихолат натрия. Жирорастворители могут применяться для дезинфекции. УФ облуче-
ние также инактивируют вирус.
Антигенная активность. У экспериментально заражённых поросят (через рот или ин-
траназально) через 6-9 дн выявляют АТ (анти-ГА и ВНА). Анти-ГА в сыворотках поросят
проявляются через 6 дн после заражения, а ВНА - через 9 дн.
Антигенная вариабельность и родство. Вирус представлен двумя идентичными шт.
67N и VW-572, которые не родственны вирусу ТГС и возбудителю болезни Тешена. Вирус,
выделенный в 1971 г. в Польше от больных поросят, в антигенном отношении также отли-
чался от вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Он проходит через фильтр с пора-
ми в 50 нм, агглютинирует эритроциты кур. При 56° С инактивируется в течение 5 мин, при
20° С - за 4 дня, при 4° С сохраняется 4 нед, при - 40° С - в течение 12 мес. Культивируется
204
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
в гомологичной культуре клеток; в естественных условиях поражает поросят до 2-нед воз-
раста. Не известно, аналогичен ли по своему таксономическому положению вирус, изолиро-
ванный в Польше, ГА вирусу энцефаломиелита свиней, выделенному в США. В настоящее
время описан только один серотип вируса несмотря на наличие по крайней мере 2-х клини-
ческих форм заболевания. Чувствительность поросят и вирулентность штамма обусловли-
вают то или иное клиническое проявление болезни. АГ взаимосвязь между ГВЭС и вирусом
неонатальной диареи телят установлена в PH и РТГА (21), ИФ и ИЭМ (19), а также с чело-
веческим респираторным коронавирусом ОС43 (11) и вирусом гепатита мышей (17). Уме-
ренная перекрёстная PH наблюдалось между ГВЭС и коронавирусом энтерита индеек (6).
ГА свойства. ГА активность вируса выявлена с эритроцитами кур, крыс, кошек и мор-
ских свинок. Наибольшие титры были отмечены с эритроцитами морской свинки. Вирус не
агглютинирует эритроциты свиньи, хомяка, овцы и КРС. ГА-свойства вируса более устой-
чивы к воздействию физико-химических факторов, чем инфекционные. Кроме ГА-свойств,
вирус HEV обладает ГА-свойствами с эритроцитами кур, мышей и крыс. Элюция ГВЭС с
эритроцитов не наблюдается. ГА-свойства с эритроцитами животных указанных видов ис-
пользуются для индикации репродукции вируса в инокулированных культурах клеток.
Экспериментальная инфекция. У заражённых поросят, не получающих молозива по-
сле инкубационного периода, продолжающегося 4-6 дн, развивается рвотная болезнь. 5-дн
сосунки погибают через 3-4 дня после заражения.
Культивирование. Вирус размножается в культуре клеток почки поросенка, образуя
гигантские клетки. Шт. VW-572, активно размножаясь, вызывает ЦПИ. На первичных куль-
турах клеток почки поросят, индуцирует ЦПИ, проявляющиеся образованием синцитиев.
Добавление нецитотоксических количеств диэтиламиноэтилдекстрана может усиливать
ЦПЭ (22). Обнаружить репродукцию ГВЭС с использованием ИФ удавалось в культурах
клеток щитовидной железы свиней, легких эмбрионов свиней, перевиваемой линии тестику-
лярных клеток свиней, линиях клеток РК-15, IBRS2, SK-K (10). Клетки не свиного происхо-
ящения малочувствительны к ГВЭС. Вирусные частицы могут выявляться электронным
микроскопом в цитопатических везикулах инфицированных клеток. Скопление вирусных
частиц наблюдается у мембран эндоплазматического ретикулума (7).
Первые признаки репликации были обнаружены через 7 % ч после заражения. Вирус
локализуется преимущественно в ядре. При окраске культур через 24 ч после заражения об-
наруживают множество пикнотических ядер. В заражённых культурах отмечена задержка
митоза. В некоторых клетках были видны ядерные включения. Часто отмечалось уплотне-
ние цитоплазмы и появление округлённых клеток, а к 120-му ч после заражения клетки от-
делялись от стекла в питательную среду.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ. Поросята - единственный известный
вид животных, чувствительных к ГВЭС. Инфицированность свиней достаточно высока и
почти повсеместна. На откормочных фермах Канады 31% проб сыворотки крови оказались
положительными, в Северной Ирландии - 46, в Англии - 49, в Японии - 52, в Германии - 75
и в США - 0-89 % в зависимости от зоны обследования. Процент серопозитивных свинома-
ток в период подсоса варьировал от 43% до 98%. Высокий процент серопозитивных живот-
ных установлен в Дании, Франции (23), Австралии (8), Бельгии (18), Австрии (12). В ста-
дах, где ЭС является энзоотическим заболеванием, большинство поросят имеют протектив-
ные колостральные АТ, которые персистируют 4-18 (в среднем 10,5) нед (15). Со временем
уровень их снижается, поросята приобретают возрастную устойчивость. Естественным хо-
зяином являются свиньи. В экспериментальных условиях вирус может адаптироваться к
мышатам (24). Чувствительность их зависит от возраста и пути инокуляции.
ДИАГНОСТИКА. Для эффективного выделения вируса асептически получают загло-
точные лимфоузлы, мозг, лёгкие от больных поросят, убитых как можно раньше после пер-
205
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
вых признаков болезни. Трудно выделить вирус от поросят, заболевших в возрасте до 2-х
дн. Суспензией отобранных органов заражают первичную культуру клеток почки поросят
или субкультуру тироидных клеток поросят. Наличие вируса определяют по развитию син-
цитиев, РГАд и РГА (2). Возможны “слепые” пассажи, поскольку концентрация вируса в ис-
следуемых органах невысока даже после экспериментального заражения. АТ выявляют в
PH, реакции подавления бляшкообразования или РТГА (21). При субклинической инфекции
титры АТ могут оцениваться очень осторожно. Однако значительный подъём титра АТ
можно получить только при сравнении с первичной (острой пробой) сывороткой, получен-
ной как можно быстрее после проявления клинических признаков. Поросята, которые забо-
левают после 6-7 дн инкубационного периода уже могут иметь достаточно высокий титр АТ
к моменту проявления клинических признаков и интерпритировать результаты исследова-
ния парных сывороток крайне сложно. Дифференцировать необходимо болезнь Тешена и
Ауески. Признаки энцефаломиелита, связанные с ними, обычно более тяжелые, чем обу-
словленные ГВЭС, и могут проявляться как среди поросят, так н среди взрослых животных.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Обычно в энзоотически неблагополучных хозяйствах циркулирующий вирус обеспечи-
вает у подсосных свиноматок достаточно высокий титр колостральных АТ, которые защи-
щают поросят от клинического проявления зоболевания. При полной серонегативности сви-
номаток и в случае заноса ГВЭС в течение первых 3-х нед после рождения могут возникать
клинически выраженные заболевания. Профилактнровать ЭС в таком случае можно введе-
нием поросятам в момент рождения специфической гипериммунной сыворотки.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Сюрин В. Н. и др. Част. вет. вирус. М. Колос, 1979. 2.Andres, К. et. al. Zentralbl
Veterinaermed [В], 1980a, 27:280. 3.Andres, К. et. al. Am J Vet Res, 1980b 41 :215. 4.Andres,
K. et. al. Am J Vet Res, 1980c 41:1372. 5.Callebaut, P. E. et. al. J Gen Virol, 1980 48:193.
6.Dea, S. et. al. Am J Vet Res, 1989 50:226. 7. Ducatelle, R. et. al. VI. Diergeneeskd Tijdschr,
1981 50 :326. 8.Forman, A. J. et. al. Aust Vet J, 1979, 55 :503. 9.Greig, A. S. et. al.
VI.Morphology of the virus.Res Vet Sci,1971,12:305. 10.Hirano, N. et. al. J Virol Methods, 1990
27:91. ll.Kaye H. S. et.al. J Inf. Dis,1977, 135, :201. 12.Mostl K. Wien Tierarztl Monatsschr,
1990, 77 (4): 117. 13.NaritaM. et.al. J Comp Pathol., 1989, 100, 305. 14.NaritaM. et.al. J Comp
Pathol, 1989, 100, 119. 15.Neuvonen E. et.al. Nord Vet Med, 1982, 34, :334. 16.Paul P.S. et.al.
Am J Vet Res, 1984, 45 :932. 17.Pederson N.C. et.al. Arch Virol, 1978, 58, :45. 18.Pensaert M.
et.al. Vet Q, 1980, 2 :142. 19.Pensaert M. et.al. Arch Virol, 1981, 68, :45. 2O.Phillip J.I. et.al.
Vet Rec, 1971, 88, :311. 21.Sato K. et.al. Arch Virol, 1980, 66, : 157. 22.Sato K. et.al. Vet
Microbiol, 1983, 8, :521. 23.VannierP, et.al. Ann Zootech, 1981, 30, :379. 24.Yagami K. et.al. J
Comp Pathol, 1986, 96, :645.
КОРОНАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ТЕЛЯТ
У неонатальных телят коронавирусы вызывают диарею. Заболевание мало изучено.
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. В естественных усло-
виях болеют телята в возрасте 8-9 дн. Болезнь продолжается 2-3 нед, тогда как реоинфекция
чаще проявляется в возрасте до 5 дн. В США при вспышках диареи у телят в возрасте 3 нед
чаще выделяли или рео-, или коронавирус, или оба вируса вместе.
При заражении коронавирусами у телят per os развивается диарея. До появления диареи
у заражённого телёнка наблюдается депрессия н анарексия. Диарея продолжается 4-5 дн.
Без лечения телёнок через 7 дн обычно погибает от обезвоживания. У телят коронавирусы
поражают прямую кишку, вызывают поражение ворсинок и увеличение мезентериальных
лимфоузлов (в препаратах из них обнаруживают специфический АГ).
206
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Патогенез. Особенность инфекции состоит в том, что коронавирус размножается как в
кишечнике, так и в респираторном тракте телят, хотя вызывает диарею. Вирус преимущест-
венно размножается в дистальной части тонкого и толстом кишечнике, эпителиальных клет-
ках слизистой оболочки носовой полости, трахеи и легких. Однако, несмотря на размноже-
ние в респираторном пути, коронавирус КРС сам по себе не может вызвать респираторные
заболевания телят.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Коронавирусы КРС впервые выделены в США.
Морфология и химический состав. Морфологически они сходны с вирусом транс-
миссивного гастроэнтерита и в культуре клеток вызывают образование синцития. Основные
структурные белки коронавирусов - нуклеокапсидный белок (N), мембранный гликопротеид
(М, Е1) и спайковый (отростчатый) гликопротеид (S, Е2). Кроме них, присущих всем коро-
навирусам, у коронавирусов человека и КРС обнаружен дополнительный гликопротеид (gp
65), который не связан ни с S-, ни с N- полипептидами. Инфекционность вируса in vitro ней-
трализуют только монАТ к белкам S и N, но не к М (10,1 1).
Антигенная вариабельность и родство. Коронавирусы крупного рогатого скота не
имеют антигенного родства с ГВЭС, ВИГС, ВИБП. В перекрестной PH установлено, что
кишечные и респираторные изоляты коронавируса КРС принадлежат к одному серотипу не-
зависимо от источника выделения (17). Коронавирусы КРС имеют тесную антигенную связь
с кишечными коронавирусами индеек, четырьмя главными S НЕ, М и N) коронавируса ко-
шек, перекрестно реагируют с четырьмя гомологичными белками кишечного коронавируса
КРС - белками N-М и белком N ВИБП (9). В настоящее время привлекает внимание иссле-
дователей изучение антигенных взаимоотношений между коронавирусами человека и жи-
вотных. Все известные коронавирусы с учетом их антигенной структуры объединены в 4
группы. Первые две группы составили антигенно различные коронавирусы млекопитающих.
В одну из групп вошли коронавирусы человека во главе с прототипным шт. 229 Е, корона-
вирус ТГС и коронавирус собак. Во вторую группу объединены коронавирусы человека с
прототипным шт. ОС-43, коронавирус КРС, коронавирус мышей и крыс. Третью и четвер-
тую группы составили коронавирусы птиц, которые по морфологическим и антигенным
свойствам значительно отличаются от коронавирусов млекопитающих.
Шт. ОС-43 коронавируса человека обнаружил антигенное родство с коронавирусом, вы-
зывающим диарею новорожденных телят. Наличие общих антигенных детерминант уста-
новлено в PH, РСК и РТГА и подтверждено обнаружением сероконверсии у людей с коро-
навирусной инфекцией.
Сравнительное изучение 4 главных структурных белков (gp 190, gp 140, gp 52 и gp 26)
шт. ОС-43 человека и шт. Mebus КРС показало их идентичность. При олигонуклеотидном
анализе шт. ОС-43 человека и бычьего коронавируса обнаружено, что 55% РНК обоих виру-
сов выявляется в виде фермента. Уровень гомологии их РНК составляет более 96%. Значе-
ние коронавирусов КРС как причины заболеваний человека в настоящее время точно не оп-
ределено, но потенциальная опасность этих вирусов для людей имеет важное эпидемиоло-
гическое значение, особенно в сельской местности. Подавляющее большинство сообщений
свидетельствует о широких антигенных и биологических взаимосвязях между коронавиру-
сами человека и животных некоторых видов(КРС, обезьян, мышей) (4).
Экспериментальная инфекция. У телятне получающих молозива,или у гнотобиотов,
диарея развивается через 18-24 ч после заражения. Поражение эпителиальных клеток тон-
кого кишечника и в последующем замена их незрелыми клетками приводят к нарушению
всасывания, диарее и смерти от потери ионов, бикарбонатов и сывороточных белков от аци-
доза и обезвоживания. Интраназальное и интратрахеальное заражение телят сопровожда-
лось лишь незначительными респираторными нарушениями (15).
207
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
Культивирование. Ронавирусы размножаются (после предварительной адаптации) в
культуре клеток почки КРС. Кроме того, их культивируют в организме телят 6-нед возраста,
не получающих молозива (телят кормят пастеризованным молоком). Система культивиро-
вания влияет на полипептидный состав вируса (8).
ГА и ГАд свойства. Установлены АГ свойства с гликопротеином 140 кД, состоящим из
двух молекул 65 кД, соединенных дисульфидным мостиком (12). Вирус обладает агглюти-
нирующей адсорбирующей активностью в отношении эритроцитов хомяка, мыши и крысы.
ГА неотделим от вирусной частицы. В градиенте сахарозы он имеет плотность 1,18 г/см3.
Белок НЕ (47 кД) ответственен за ГА. (16). Коронавирусы КРС могут обусловливать ла-
тентную инфекцию. Клинически здоровый КРС может быть хроническим носителем вируса,
выделяя его с фекалиями в течение 3 мес (7).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ.
В Швеции описаны вспышки среди взрослого поголовья, молочных стад показали, что
в 9 стадах обнаружены АТ к коронавирусу КРС, а в одном - к коронавирусу и вирусу диареи
КРС. АТ к коронавирусу КРС выявлены через год после перенесенной болезни, передава-
лись потомству и обнаруживались в сыворотке телят до 4-6 -мес возраста (13).
ДИАГНОСТИКА
В подготовка материала, хранение, консервирование и пересылка материала произво-
дится по общепринятым методикам. Инфекции диагностируют по выявлению вируса в фе-
калиях или содержимом кишечника методом ЭМ, ИФ исследованием фекалий или инфици-
рованной культуры клеток. Дифференциальная диагностика корона- и ротавирусных инфек-
ций основана на ИФ препаратов - криосрезов и ЭМ обнаружении вирусных частиц.
При коронавирусной диарее телят вирус с одинаковой частотой выделяется как из желу-
дочно-кишечного, так и из респираторного трактов.
Можно использовать тест ГАд-элюции и ГА, а также исследовать культуральный вирус
и в РГА с эритроцитами крыс. Отработана схема исследований кишечных смывов (14). Зна-
чение коронавируса в ассоциации с возбудителем диареи у телят установлено однозначно и
не вызывает сомнений. Сотрудниками ВИЭВ выделено несколько штаммов коронавирусов
телят, разработаны методы культивирования вируса с использованием отечественных пита-
тельных сред. Диагностические исследования проводятся достаточно широко с использова-
нием набора диагностикумов (3, 5).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У животных-реконвалесцентов установлены специфические гамма-глобулины классов
IgM и IgA, которые нейтрализовали коронавирусы в разведении 1:32. Это можно рассмат-
ривать как оценочный тест иммунной защиты организма. Наиболее эффективным методом
борьбы с вирусной диареей новорождённых телят является оральная вакцинация живой вак-
циной, полученной из аттенуированных штаммов рота- коронавирусов. В эксперименталь-
ных условиях она защищает всех телят, а в полевых - снижает число заболевших. Инакти-
вированные вакцины пригодны для вакцинации коров и создания молозивного иммунитета.
Получена комбинированная вакцина против рота- и коронавирусной инфекции.
Аттенуация вируса наступала быстро. Для изготовления вакцины использовали вирус с
активностью 5,-6, 1g ТЦД50/мл. В инактивированной вакцине использовали культуральный
вирус, который инактивировали формалином. АГ сорбировали на ГОА. Живую вакцину
вводили подкожно стельным коровам (1-5 мл) за 30-90 дн до отела, инактивированную -
применяли телятам орально (1,0-5 мл). В России разработана и внедряется в ветеринарную
практику инактивированная ГОА вакцина против коронавирусного энтерита телят, которая
предназначена для двукратной вакцинации глубокостельных коров. Испытание вакцины по-
казало, что иммунный ответ у коров на введение препарата зависел от исходного уровня АТ.
Вакцинация животных с низким уровнем АТ (6 loga и ниже) в крови индуцировала иммун-
208
Глава V. Family Coronaviridae Коронавирусные инфекции
ный ответ с увеличением титра АТ в 4-16 раз. Выпаивание телятам молозива вакциниро-
ванных коров, содержащего АТ в титре 7 logz и выше, снижало заболеваемость телят в 4-7
раз и предотвращало их гибель (3, 5, 6).
Разработка новых технологических схем лечения и средств специфической профилакти-
ки гастроэнтеритов инфекционной этиологии (колибактериоз, рота- и коронавирусные диа-
реи) в настоящее время особенно актуальна. Опыт сотрудников БелНИЭВ показывает, что
применение комплексной схемы вакцинации стельных коров за 1,5-2 мес до отела, а также
применение специфических иммуноглобулинов, полученных из молозива, на 1, 3 и 5-й дни
жизни внутримышечно или подкожно независимо от клинического состояния, дает выра-
женный эффект (1,2).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ЕБелянко Л.В. Тез.докл.науч.-пр.конф.ВНИИЗЖ,1995,:217. 2.Белянко Л.В. Тез. докл.
н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :218. З.Коромыслов Г.Ф. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИ-
ИЗЖ, 1995:219. 4.Панченко Л.А. и др. Вопр. вирусол, 1991, 1 :4. 5.Соколова Н.Л. Тез. докл.
н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :38. б.Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусология, М. Колос, 1979.
7,Crough C.F. et.al. J Gen Virol, 1985, 66 :1489. 8.Cyr-Coats K.S. et.al. Arch Virol., 1988, 103
:35. 9.Dea S. et.al. J Virol., 1990, 64 :3112. lO.Degert D. et.al. J Can Virol, 1989, 70, :993.
lEDegert D. et.al. Virology, 1987, 161 :410. 12,King B. et.al. Virus Res, 1985, 2, :53.
13.Larsson B. et.al. Sven veterinartidn, 1991, 3, 13 :547. 14.Malick K. Med Vet, 1991, 47 :310.
15.McNulty M.S. et.al. Vet Microbiol., 1984, 9, 5 :425. 16.Parker M.D. et.al. J Gen Virol, 1989,
70:155. 17.Reynolds D. etal. Arch Virol, 1985, 85, :71.
КОРОНАПОДОБНАЯ ИНФЕКЦИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Вирусная диарея неонатальных телят, вызываемая коронаподобными вирусами, мало
изучена. Болезнь зарегистрирована в США. Наличие её в других странах неизвестно.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У зараженных телят-
гнотобиотов поражаются мезентериальные лимфоузлы и тонкий кишечник. У телята, уби-
тых через 4 ч после появления признаков диареи, на ворсинках тонкого кишечника и по-
верхности толстой кишки находили ИФ эпителиальные клетки. У телят, убитых через 44 ч,
находили укороченные кишечные ворсинки и кубовидные эпителиальные клетки. ИФ была
обнаружена в клетках вершин ворсинок, а также на поверхности крипт толстой кишки. У
телят, не получавших молозива, при оральном заражении вирусом развивалась диарея. Бы-
ла отмечена корреляция между гистологическими, ИФ и ИЭМ данными.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ. Коронаподобный вирус впервые выделили и
изучили Стайнер, Мебус и Твихаус в 1972 - 1974 гг. в США. Вирус был выделен в культуре
клеток почки эмбриона КРС, заражённой фекалиями больных диареей телят.
Морфология и химический состав. Вирионы размером 107-160 нм, имеют выступы,
нуклеоапсид полимор-фный, однако после обработки дихлордифлиорометаном приобретают
гексо-гональную структуру (Рис. 32).
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на телятах-гнотобиотах и на теля-
тах, не получавших молозива. У заражённых телят развивалась диарея.
Культивирование. Коронаподобный вирус удаётся культивировать в культуре клеток
ПЭК. После серийных пассажей вирус аттенуировался. В цитоплазме инфицированных кле-
ток при обработке конъюгированными сыворотками обнаруживают флюоресцирующие
гранулы. После 7-го последовательного пассажа вызывал образование синцития на 3-4-й
14 Зак. № 171
209
Глава V. Family Caronaviridae Коронавирусные инфекции
день после заражения. При дальнейшем пассировании сроки развития синцития сокраща-
лись и количество его в заражённой культуре клеток увеличивалось (большее число много-
ядерных клеток). Титр ТЦД Зо/мл возрастал до 5-6 Lg.
В цитоплазме инфицированных клеток обнаруживали вирионы в тесной связи с мем-
бранами клеток. Диаметр их в среднем равен 78 нм. В препаратах из инфицированной куль-
туры клеток негативно окрашенные вирионы идентичны вирионам, выделенным из фекалий
телят, заражённых коронаподобным вирусом. Вирионы заключены в оболочку из клеточных
органелл, иногда видны отпочковавшиеся и развивающиеся в тесной ассоциации с мембра-
ной клетки. Одни вирионы имеют центральный плотный нуклеоид с внутренней структурой,
другие - неполные. В инфицированных клетках обнаруживали вакуоли, содержащие полные
и неполные вирусные частицы.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании результатов ЭМ и ИФ исследований препаратов фекалий.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Телята, привитые аттенуированным штаммом, резистентны к вирулентному вирусу, вы-
деленному из фекалий больных животных. Для вакцинации коров и телят предложена инак-
тивированная вакцина. Телятам ее выпаивают сразу же после рождения в объёме 1-5 мл.
Стельных коров вакцинируют парентерально за 30-90 дн до отёла.
ИНФЕКЦИОННЫЙ ПЕРИТОНИТ
КОШЕК
Feline Infectious Peritonitis
Первый коронавирус кошек FIPV (возбудитель инфекционного перитонита) проявляет
антигенное родство с коронавирусом собак, тогда как второй коронавирус кошек FICV
(возбудитель энтерита кошек) отличен от вируса инфекционного перитонита (FJPV) и не
имеет родства с коронавирусами собак (1,3).
Патогенность двух вариантов вируса довольно четко различается. Так, известны две
группы коронавирусов кошек, которые очень близки по биологическим н биохимическим
свойствам, но резко различаются по патогенности in vivo. Энтеропатогенные коронавирусы
кошек (FeCV) поражают эпителий кишечника и вызывает у молодых животных легко про-
текающие, но высококонтагиозные энтериты. У переболевших кошек развивается иммуни-
тет, но иногда наблюдается персистенция возбудителя.
Другую группу составляют штаммы FIPV, вызывающие тяжелый перитонит, как прави-
ло, с летальным исходом, у кошек в возрасте от 6 мес до 2 лет. Помимо энтероцитов эти ви-
русы поражают макрофаги. АТ к вирусу не создают устойчивость, даже ухудшают течение
болезни. Характерным является развитие васкулита. По титру АТ нельзя с достоверностью
дифференцировать обе формы коронавирусной инфекции (4).
Как референтные штаммы вируса известны шт. Welcom, прошедший 11 пассажей в
культуре клеток легкого эмбриона кошек и кишечный шт. 79-1683.
Антигенная активность характеризуется следующими данными. Инфицированные кош-
ки на основании иммунного ответа и клинических признаков подразделяются на 3 группы.
В 1-й, самой многочисленной, у кошек регистрировали титры АТ 1:160 - 1:10000 при отсут-
ствии клинических признаков. Среди этой группы спорадически выявлялись кошки (группа
2), у которых наблюдали быстрое увеличение титров АТ и развитие клинических признаков
с последующей гибелью. Кошки 3-й группы длительное время выглядели здоровыми, титры
АТ у них постепенно достигали плато, затем у них выявляли паралич задних конечностей,
снижение тигров АТ и гибель (5).
В экспериментальных условиях инфекция легко воспроизводится через 24 ч после за-
ражения возбудитель локализовался в миндалинах и тонком кишечнике, а в дальнейшем
210
Глава V. Family COTonaviridae Коронавирусные инфекции
инфекция распространялась на слепую и ободочную кишки, мезентериальные лимфоузлы и
печень. Вирус удавалось обнаружить в смывах из ротоглотки и в фекалиях, начиная с 2-4 и
3-5 дн после заражения соответственно и на протяжении 14 дн наблюдения. Патологоанато-
мические изменения миндалин инфицированных кошек характеризовались инфильтрацией
полиморфнонуклеарных нейтрофилов и макрофагов, экссудативными процессами (8,9).
Рост кишечного коронавируса кошек, шт. 79-1683, в клетках эмбриона кошек ингибиру-
ется в присутствии 1 мкг/мл актиномицина D. В этих культурах не образуется вирусспеци-
фичная мРНК, а урожай инфекционного вируса уменьшается более чем в 100 раз. В отличие
От этого, размножение антигенно родственного вируса ИПК, шт. 79-1146, не зависит от при-
сутствия актиномицина. Таким образом, фундаментальное различие между этими корона-
вирусами кошек состоит в их разной зависимости от функций, кодируемых хозяином (6).
Выявлена интересная зависимость между вирулентностью коронавирусов кошек и кле-
точным тропизмом, вирулентные штаммы, в основном, поражают моноциты, авирулентные
реплицируются в эпителии кишечника (8, 9). Вирус проникает через слизистые оболочки
респираторного и ЖКТ, попадает в кровь и поражает макрофаги. На патологический про-
Йесс протекает с участием вирусных АТ, поэтому создание вакцины сложно. Убитые вакци-
Пы лишь повышают чувствительность к инфекции. Неэффективны и живые вакцины.
Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства не изучены.
ДИАГНОСТИКА
Предложены реакции РЗГА и PH. Помимо того, разработан конкурентный метод ELISA
для определения АТ к вирусу перитонита кошек. Для этого получены и испытаны монАТ к
Трем мажорным вирусным компонентам: гликопротеину и протеину пепломера. Положи-
тельно реагирующих в конкурентном ELISA 98,5% проб сывороток имели АТ к капсидному
протеину и 4,8% - к протеину пепломера (10).
СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Предложена вакцина. Биомассу вируса получают путем культивирования клеток селе-
зенки инфицированных животных в суспензионных условиях. Вакцина против инфекцион-
ного перитонита кошек разработана на основе температурно-чувствительного мутанта виру-
са. При интраназальном введении ее вирус реплицируется только в верхних дыхательных
'путях и инактивируется в других органах. При испытании его на кошках в эксперименталь-
ных условиях из 20 вакцинированных животных после контрольного заражения заболело 3,
Гав группе невакцинированных - все 12, из них погибло 10. У вакцинированных кошек обра-
зовались сывороточные и секреторные ВНА, а также развился клеточный иммунный ответ.
Полевые испытания подтвердили безопасность и эффективность вакцинации (2). В Англии
применяется живая вакцина Primucell IPV из ts-мутанта FJPV шт. DF-2. Её вводят в нос. Ре-
комендуется иммунизировать котят в возрасте 16 нед и через 3-4 нед (7).
Указанный метод типирования штаммов основан на амплифицировании фрагмента
кДНК вируса величиной 400 пар оснований из N-терминальной области S2 гликопротеи-
нового гена, который обрабатывают рестриктазными ферментами и определяют длину
фрагментов путем электрофореза в ПААГ. Фрагменты разных штаммов вируса сравнивают
между собой. Различие их АГ структуры подтверждено в PH (28).
Диагностику клинических образцов коронавируса индеек удается успешно осуществ-
лять, используя специфические для КРС однонитевые зонды, приготовленные с помощью
ПЦР (37).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ЕСюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М., Колос,1979. 2.Gerter J.D. et.al. Vaccine,
1990, 8, :536. 3.Goitsuka R. et.al. J Vet Med Sci, 1991, 53, 2, :337. 4.Harder F.C. Monatch
Veterinaermed, 1993, 48, 5 :233. 5.Kai K. et.al. J Vet Med Sci, 1992, 54, 3 :501. 6.Lwies E.L.
etal. J Gen Virol, 1992, 73, 12 :3285. 7.01sen C.W. et.al. Feline Helth Topics, 1991, 6, 2 :1.
14*
211
Глава V. Family Carcnaviridae Коронавирусные инфекции
8.Stoddart М.Е. et.al. Vet Micro biol, 1988, 18, 3/4 :259. 9.Stoddart M.E. et.al. J Virol, 1989, 63,
:436. lO.inston S .et.al. Vet Immunol, 1988, 89, 3809 :453.
КОРОНАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ СОБАК
Коронавирусы собак описаны Такеуши, А. Бинн, Джервес и др. (1976).
Вирус хорошо культивируется в культуре клеток почки собак. При экспериментальном
заражении вызывает у щенков диарею, характеризующуюся атрофией ворсинок и потерей
эпителиальных клеток. Коронавирус собак имеет антигенное родство с вирусом трансмис-
сивного гастроэнтерита, респираторной коронавирусной инфекцией свиней и вирусом ИПК.
Анализ последовательности 9,6 тыс. нуклеотидов 3 конца геномной РНК коронавирус-
ной инфекции собак привел к заключению о высокой степени близости между указанными
коронавирусами (4).
Разработан метод получения вакцины против коронавирусной инфекции собак. Шт. 1-
171 (АТСС VR-809), TN-449 (АТСС VR-2068) или другие коронавирусы собак культивиро-
вали в перевиваемой линии почечных клеток кошек (CRFK, FC) или собак (ДК, МД СК) и
др. и инактивировали бетапропиолактоном (0,2-0,5%) или бинарным этиленимином (0,5-4%
от/об). В качестве адъюванта использовали этиленмалеиновый ангидрид в сочетании с
NEOCRYL А-640 (Кополимер стирена со смесью акриловой и метакриловой кислот) и др.
Вакцина вызывала у собак образование АТ и устойчивость к заражению вирулентным
штаммом вируса.
Помимо инактивированной вакцины в США применяется вакцина из модифицирован-
ного живого коронавируса собак, который полностью адаптирован к культуре клеток и из-
бирательно инфицирует кишечный эпителий собак. Запатентована технология изготовления
и применения вакцины (2,3).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М. Колос, 1979. 2. Acree W. et.al. Am Home
Products Corp.,173202, НКИ 424/89. З.Асгее W.M. et.al. патент США 5013663 МКИ C12
7/08. 4.Horsburgh В.C. et.al. J Gen Virol, 1992, 73, 11 :2849.
ГлаваУГ. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Глава VI. ПАРАМИКСОВИРУСНЫЕ
ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА PARAMYXOVTRIDAE
Парамиксовирусы (от грен, para - около и туха - слизь) - группа вирусов, поражающая
!позвоночных животных. Вирионы парамиксовирусов - частицы плеоморфной, чаще округ-
лой формы, диаметром 150-300 нм, состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и ли-
попротеидной оболочки, на поверхности которой имеются выступы длиной 8-12 нм. Высту-
пы расположены на расстоянии 7-10 нм друг от друга. Диаметр спирали нуклеокапсида ра-
вен 13-18 нм, шаг спирали 5,5-7,0 нм, длина около 1 мкм. Мол.м. вирионов 500-700 мД,
плавучая плотность в сахарозе 1,18-1,20 г/см3, коэффициент седиментации около 1000S.
Парамиксовирусы чувствительны к жирорастворителям, формальдегиду, неионным детер-
гентам и окисляющим агентам.
Геном представлен единой 1-спиральной линейной молекулой минус-РНК, состоящей из
15-16 тыс. нуклеотидов. РНК не обладает инфекционностью и составляет всего 0,5% массы
Вириона. В некоторой части вирионов содержится плюс-РНК. В вирионах обнаружено 6 по-
липептидов, три из которых связаны с нуклеокапсидом, а 3 входят в состав липопротеидной
Оболочки, причем 2 из последних являются гликопротеинами. Гликопротеины образуют вы-
ступы наружной оболочки и отвечают за адсорбцию вирионов на клеточной поверхности и
слияние клеток. В вирионах содержится 70% белка, 20-25% липидов и 6% углеводов. Угле-
воды и липиды имеют клеточное происхождение.
Парамиксовирусы размножаются в цитоплазме, проникают в клетки путем сплавления
оболочки вириона с клеточной мембраной. Транскрипция геномной минус-РНК осуществля-
ется в составе нуклеокапсида вирион-ассоциированной транскриптазой; образованные 60
• информационных РНК обеспечивают синтез всех вирусспецифических белков. Репликация
вирионной РНК происходит в 2 этапа. На первом из них синтезируется плюс-нить РНК, на
’втором - минус-нити. Из минус-нитей РНК и белка формируются нуклеокапсиды, и в это же
время наблюдаются включения в определенные участки клеточной мембраны вирусных
Пшкопротеидов. Созревание вирионов происходит почкованием нуклеокапсидов через мо-
дифицированные участки клеточной мембраны.
В семействе выделено два подсемейства: Paramyxovirinae и Pneumovirinae
Подсемейство Paramyxovirinae состоит из трех родов:
Paramyxovirus, Morbillivirus, Rubulavirus.
1. Род Paramyxovirus включает парамиксовирусы птиц (9 типов), и вирусы парагриппа
(4 типа). Все представители обладают нейраминидазной активностью. Типичный предста-
витель рода - вирус парагриппа человека 1. Вирус парагриппа-1 патогенен для человека и
мышей; вирус парагриппа-2 - для человека, обезьян и собак; вирус парагриппа-3 - для чело-
века, обезьян, КРС и овец; вирус парагриппа-4 - для человека.
2. Род Morbillivirus (от лат. morbillus - корь) включает вирус кори (прототипный ви-
рус), вирус чумы КРС, мелких жвачных, собак и тюленей. Вирусы не обладают нейрамини-
дазной активностью, имеют АГ-родство и имеют цитоплазматические и внутриядерные
Включения, содержащие вирусный рибонуклеопротеин.
3. Род Rubulavirus включает вирус паротита, который обладает гемагглютинирующей,
нейраминидазной и гемолитической активностью.
213
ГлаваV I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
НЬЮКАСЛСКАЯ БОЛЕЗНЬ
Newcastle disease (ND), Avian pneumoencephalitis,
Ranikhet (англ.), Asiatische Oder Atypishe Gefhigelpest,
Newcastle-Kraukheit, Psevdovogelpest (нем.)
Ньюкаслская болезнь (НБ), псевдочума птиц - высоко контагиозная вирусная инфекция,
главным образом куриных, характеризующаяся пневмонией, энцефалитом, множественны-
ми точечными кровоизлияниями и поражением внутренних органов. Зарегистрирована на
всех континентах. Наносит громадный экономический ущерб и относится к особо опасным
инфекциям. Её впервые диагностировал и описал Краневельд в 1927 г. на острове Ява.
Клинические и патологоанатомические изменения. При естественном течении ин-
кубационный период длится от 5 до 15 дн (в среднем 5-6 дн). Симптомы болезни довольно
разнообразны. Описаны четыре формы клинического проявления болезни. При первой - ве-
логенной форме наблюдают угнетение, слабость, расстройство функции органов дыхания,
диарею с появлением водянистых зеленоватых фекалий с примесью крови, тремор, описто-
тонус. Возможны параличи лап и крыльев, а также гибель птицы без каких-либо признаков.
Смертность достигает 90%. Основной патологоанатомический признак - геморрагическое
поражение пищеварительного тракта. Полагают, что эта форма болезни вызывается высо-
копатогенными (велогенными) азиатскими штаммами вируса. Велогениая висцеротропная
НБ с летальностью до 100% в 1966 - 1973гг. получила эпизоотическое распространение,
особенно в Европе и США.
Вторая форма болезни характеризуется поражением, главным образом, органов дыха-
ния (кашель, удушье) и нервной системы. Погибает от 10 до 50% заболевшей птицы. Среди
цыплят гибель достигает 90%. Пневмоэнцефалит с летальностью до 100% был широко рас-
пространен в Западном полушарии в 1940-1950 гг., в настоящее время регистрируется очень
редко. Старая птица погибает редко. Некоторые мезогенные штаммы, вызывающие эту
форму болезни, до сих пор используются в качестве вакцинных (шт. Н, Комаров и др ).
Третью наиболее легкую форму болезни вызывают лентогенные штаммы вируса. На-
блюдают незначительные изменения респираторного и герминативного трактов (оофориты
и сальпингиты). Яйценоскость прекращается на 7-22-й день, снижается аппетит, легкий ка-
шель можно услышать ночью.
Четвертая - асимптоматическая форма протекает без клинических признаков и заболе-
вание часто определяется серологически или выделением вируса.
При вскрытии трупов птицы, павшей при остром течении болезни, обнаруживают вос-
паление слизистых оболочек носа и ротовой полости, полосчатые кровоизлияния на слизи-
стой оболочке пищевода, зоб переполнен слежавшимися или жидкими кормовыми массами,
слизистая оболочка желудка покрыта слизью. На границе железистого и мышечного отделов
желудка видны кровоизлияния в виде пояска. В тонком кишечнике наиболее характерны
очаги некроза и эрозии вокруг пейеровых бляшек, в толстом - везикулярные папулы, эрозии
и изъязвления на всем протяжении слизистой оболочки. Селезенка в состоянии атрофии. На
слизистой ротовой полости, пищевода и пилоруса - изъязвления, эпителий либеркюновых
желез дегенерирован и слущен, вокруг расширенных и некротизированных крипт в слизи-
стой оболочке тонкого кишечника скопление слизистого секрета и выпотевание нейтрофи-
лов. Атрофия и некроз обнаружены в селезенке, печени, солитарных лимфоузлах и тимусе.
Изменения в печени непостоянны. Селезенка поражается довольно часто. Она увеличена,
бледная, пятнистая. Яичники гиперемированы, яйцевые клетки увеличены, иногда разорва-
ны, и желточная масса находится в брюшной полости. В сердечной мышце заметны крово-
излияния, в полости сердечной сорочки экссудат. Слизистые оболочки гортани и трахеи ка-
тарально воспалены. Характерно поражение кишечника: острый катар, резкая гиперемия,
214
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
кровоизлияния, наличие фибринозно-некротических участков. Последние часто встречаются
в двенадцатиперстной и тонкой кишках. Иногда поражается весь кишечник. Точечные и
пятнистые кровоизлияния обнаруживают у 50-70 и даже 90% больных кур в двенадцатипер-
стной, прямой и слепой кишках. Изменения в печени носят непостоянный характер. У от-
дельных цыплят она увеличена, полнокровна, темно-вишневого цвета, иногда с единичными
точечными геморрагиями под капсулой. Желчный пузырь наполнен желчью темного цвета,
а на слизистой оболочке иногда отмечают точечные кровоизлияния и некротические очаги.
Почки полнокровны и отечны. Селезенка нормальной величины или уменьшена в размере.
Слизистые носовой полости, гортани и трахеи гиперемированы, с мелкими точечными кро-
воизлияниями, нередко с дифтерийными наложениями. Легкие у большинства кур бывают
воздушными, светло-розового цвета, иногда с явлениями застойной гиперемии и отека. В
перикарде и грудобрюшной полости небольшое количество жидкости светло-соломенного
цвета. Сердечная мышца темного цвета, дряблая, полнокровная, иногда с мелкими точеч-
ными кровоизлияниями в области эпикардиального жира. В головном и спинном мозге яв-
ления отека и гиперемии, в отдельных случаях точечные кровоизлияния в твердой н мягкой
мозговых оболочках и веществе мозга (Рис. 138, 139).
Гистологические изменения. Постоянно обнаруживают поражения в железистом же-
лудке и по всей длине кишечиой трубки. Слизистая оболочка резко утолщена за счет отека и
клеточной инфильтрации и находится в состоянии выраженного десквамативного катара.
Покровный эпителий и эпителий крипт подвергаются дистрофии, некрозу и слущиванию в
просвет. Крипты в форме вытянутых мешковидных бесстуктурных образований, окрашен-
ных в серо-синеватый цвет. Соединительнотканные волокна подслизистого слоя сильно раз-
двинуты в результате воспалительного отека и инфильтрации лимфоцитами и другими кле-
точными элементами. Закономерно для НБ - некротические поражения толстого кишечни-
ка. Отмечают также сильное развитие клеточно-пролиферативных реакций в ЦНС и внут-
ренних органах, по ходу капилляров и мелких сосудов, а в веществе мозга со стороны кле-
ток микроглии - образование глиозных узелков. Кроме того, встречаются тигролиз, вакуо-
лизация цитоплазмы и ядра, хроматолиз и гибель нейронов. В селезенке, печени, почках и
ЖКТ пролиферативные явления вокруг сосудов, в междольковой, межканальцевой и подэ-
пителиальной соединительной ткани. В селезенке резкая гиперплазия фолликулов, утолще-
ние и фибриноидный некроз стенок сосудов с развитием около концевых артерий очагов
крупноклеточной пролиферации с некрозами в центре их и отложением фибрина. В почках -
признаки некробиоза эпителия канальцев и картина тяжелого нефроза. В легких - явления
застойной гиперемии и отека и редко некротическая пневмония.
Описанная картина вскрытия и гистологические изменения характерны для классиче-
ского проявления НБ при заражении велогенными штаммами. Из многочисленных наблю-
дений и экспериментальных исследований установлено, что течение инфекции с поражени-
ем нервной системы или респираторного тракта без острого септического процесса чаще вы-
зывается вирусами с природно-ослабленной вирулентностью.
Патогенез. Вирус, проникая в организм, размножается в клетках эндотелия, в результа-
те чего клетки кровеносных сосудов разрыхляются, нарушается их порозность и в них раз-
виваются воспалительно-некротические процессы. Через 24-36 ч вирус локализуется в па-
ренхиматозных органах, костном и головном мозге, кишечнике и мышцах, вызывая наряду
с резким расстройством гемодинамики тяжелые некрозо-дистрофические изменения.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ.
Вирус впервые выделил Кранвельд (1927) и описал Дойл (1940).
Морфология и химический состав. Размер вириоиов от 120 до 300 нм. Оболочка ви-
рионов имеет выступы нити длиной 8 нм и содержит АГ-компоиенты. Внутренний компо-
нент - нуклеокапсид (G-АГ) представляет собой длинную заостренную пуговку диаметром
13 им. Структурные единицы - протеины этой трубки (капсомеры) расположены по спирали
215
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
вокруг центральной оси, внутри них находится РНК (Рис. 33-35). Определен полный геном
вируса (12492 основания), выяснена степень структурной однородности у разных штаммов
методом “фингерпринта”(отпечатков пальцев). Оказалось, что РНК велогенных штаммов в
США (Са-1083 Фонтана и Ларго) обнаружила высокий уровень структурной однородности.
Наоборот, при сравнении “фингерпринта” олигонуклеотидов РНК шт. Фонтана и Техас GB
выявлена наименьшая степень однородности (32).
Как патогенные, так и апатогенные штаммы вируса НБ содержат 6 полипептидов: Z,
HN, F, М, NP и полипептид с мол. м. 47000 Д. В составе вируса обнаружены 3 основных и
5 минорных белковых компонентов. В какой степени они соответствуют 6 вышеуказанным
полипептидам неизвестно. К основным относятся гемагглютинин, белок внутренней оболоч-
ки и белок РНП. Нейраминидаза - один из минорных компонентов. Кроме этого, в вирионах
вируса НБ обнаружена эндорибонуклеаза, а в вирусе, полученном из хронически инфициро-
ванных клеток Z, РНК-зависимая ДНК-полимераза (обратная транскриптаза). Возможно,
имеется связь между наличием обратной транскриптазы и способностью вируса вызывать
хронически протекающую инфекцию. Очищенный нуклеокапсид не обладает РНК-полиме-
разной активностью, так как не содержит необходимых белков, либо в процессе приготов-
ления препарата нуклеокапсидов инактивируется сам энзим.
Вирионные и целлюлярные полипептиды, обладающие одинаковой электрофоретиче-
ской подвижностью, идентичны. Неспецифичный вирусный гликопротеин Fo, обнаружен-
ный только в зараженных клетках, родствен малому вирионному гликопротеиду F. Поли-
пептид NP (мол.м. 53 000) из зараженных клеток родственен нуклеокапсидному белку NP. В
сумме мол. м. 6-и вирусных полипептидов равна 491000 Д, что соответствует максимальной
кодирующей способности генома вируса НБ. Белок Fo играет основную роль в вирулентно-
сти вируса (29). Он синтезируется в виде неактивного предшественника - белка Fo и расще-
пляется трипсиноподобным ферментом в трансмембранных комплексах Гольджи на 2 субъ-
единицы F1 и F2. Это необходимо для проявления инфекционности и составляет сущность
протеолитической активации вируса (8).
Устойчивость. Инфекционность, гемагглютинирующая активность и иммуногенность
вируса разрушаются при 56°С в период 5 мин -6 ч. При 37°С эти изменения наступают че-
рез несколько часов и даже дней, при 20 и 8°С для утраты вирусом своей биологической ак-
тивности нужны месяцы и даже годы. Вирус устойчив к низкой температуре, в заморожен-
ном состоянии активность его сохраняется более 2-х лет. Нет корреляции между уровнем
вирулентности и ГА-акгивности штаммов вируса при прогревании. Вирус устойчив к pH в
диапазоне от 2 до 10, быстро разрушается при воздействии ультразвука. Р-ры формалина (1-
2%-ные), гидроксида натрия (1-2%-ные), мыльного крезола (1%-ный) и фенола (3-4%-ные)
его быстро убивают.
Стабильность вируса в значительной мере зависит от среды, в которой он находится.
Под воздействием дневного света инфекционность его снижается за 4 ч на 3-5 1g. ГА свой-
ства сохраняются при более длительной инактивации, чем инфекционные. Установлено, что
висцеротропные велогенные штаммы обладают термочувствительным, а лентогенные - тер-
мостабильным ГА, т.е. вирулентность штаммов прямо не связана с термостабильностью ГА.
Антигенная структура. Вирус содержит гемагглютинин и нейраминидазу, М-, F-белки
и S (РНП) - антигены, различающиеся по локализации в вирионе, иммуногенности и АГ-
активности. Каждый вирион содержит определенное число идентичных молекул HN, каждая
молекула HN содержит 2 домена: НА и NA. Каждый домен содержит идентичные или от-
личные друг от друга АГ-детерминанты (эпитопы) (30). В молекуле F-протеина выявлено 4
различных АГ-сайта (1-4). АТ к сайтам 1, 2 и 3 предотвращают вирусиндуцированный ге-
молиз эритроцитов птиц. АТ к сайту 4 ингибируют или гемолиз, или разрушение клеток.
АГ-активность F-протеина высоко консервативна, поэтому рекомбинантные штаммы, экс-
216
ГлаваУ! Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
премирующие белок F, желательны в качестве кандидатов для живых вакцин. Кроме того,
при вакцинации птицы белком F можно легко дифференцировать иммунный ответ, индуци-
рованный вакцинацией, от иммунного ответа, связанного с инфекцией. В противополож-
ность F-белку, ГА и нейраминидаза обладают выраженной АГ-изменчивостью.
Различия в вирулентности штаммов вируса НБ связаны с изменением в структуре HN-
гена, кодирующего Г А-нейраминидазу. Большинство аминокислотных замен располагается
в четырех участках N-конца HN-белка (40). Имеются данные, свидетельствующие о связи
вирулентности вируса НБ с расщеплением гликопротеина слияния (белка Fo) клеточными
протеазами (28,31), или изменением других свойств белков F и HN (37).
Антигенная активность. Гликопротеидный ГА-нейраминидазный комплекс вируса
(шт. La-Sota) обладает выраженной АГ- и протективной активностью на курах. Большинст-
во исследованных клонов монАТ против ГА-нейраминидазы вируса НБ в равной степени
вызывают оба варианта слияния (43).
Антигенная вариабельность и родство. Подавляющее большинство полевых и вак-
цинных штаммов вируса НБ в АГ- и иммунобиологическом отношениях сходно. Некоторые
природно-ослабленные штаммы (F, Bl, La Sota, КД, Beaudette, Бор/74/ВГНКИ и др.) широ-
ко используют в качестве живых вакцин. Установлено различие природных штаммов не
только в вирулентности, но и значительное различие в тропизме к нервной, легочной и эн-
теральной тканям. Показано, что при серийном пассировании (37°С, 120 ч) неразведенного
вируса НБ в КЭ продуцируется избыточное (по отношению к контрольному вирусу) количе-
ство ГА; образование “неинфекционных” частиц является, вероятно, следствием множест-
венной инфекции клеток; неинфекционный ГА формируется в результате интерференции
при созревании активного вируса с вирусом неполным, инфекционность вируса более чувст-
вительна к термальной инактивации, чем его ГА-акгивность (44).
Локализация вируса. Вирус локализуется в паренхиматозных органах, костном и го-
ловном мозге, мышцах, трахеальной слизи, толстом и тонком кишечниках, содержится в
различных выделениях. В период выраженной клинической картины болезни в изобилии
выделяется во внешнюю среду с фекалиями, трахеальной слизью и выдыхаемым воздухом.
Вирус, как правило, можно выделить только в начале болезни. Переболевшие птицы могут
долго быть вирусоносителями.
В организме неиммунных птиц велогенный вирус НБ обнаруживался через 24-48 ч и
далее в течение 10 дн во всех органах и тканях. У иммунных или частично иммунных птиц
наиболее продолжительное время (19 дн) вирус выделяли из железистого желудка, лимфо-
идных образований слепой кишки, фабрициевой сумки и мозга. Поскольку ни один из ука-
занных органов не отличался в отношении тропизма вируса, то в полевой диагностике ре-
комендуется исследовать все четыре органа. Не отмечено гибели среди групп птиц с высо-
ким и низким уровнем иммунитета, на основании чего сделан вывод, что в странах, где про-
водится поголовная вакцинация или, где распространены лентогенные штаммы вируса, по-
явление велогенного штамма может пройти не замеченным (33).
При наличии циркулирующих АТ вирус иногда удается выделить из мозга переболев-
ших птиц. Показано, что вирулентные штаммы могут бессимптомно персистировать в орга-
низме иммунных птиц в течение 70 дн. Нет зависимости между титрами анти-ГА и степе-
нью выделения вируса во внешнюю среду. С увеличением продолжительности вирусоноси-
тельства (выше 70 дн) вирулентность исходных штаммов вируса снижается независимо от
первоначального титра анти-ГА, однако латентная форма инфекции может свободно пере-
ходить в клинически выраженную. Было показано, что после заражения иммунизированной
птицы велогенным вирусом возможно носительство и выделение последнего в течение 14-17
дн, т.е. поствакцинальный иммунитет не исключает циркуляции дикого вело- или мезоген-
217
ГлаваV I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
ного вируса. Возможность длительной персистенции вирулентного вируса в организме вак-
цинированной птицы может обусловливать возникновение вирусоиосительства (13).
Изучено in vitro связывание шт. V4 вируса НБ с клетками различных отделов пищева-
рительного тракта цыплят. Оказалось, что энтероциты 12-перстиой, тощей, повздошиой,
слепой и прямой кишок связывали 97, 85, 99, 92 и 90% вируса соответственно, в то же вре-
мя к энтероцитам пищевода, зоба и железистого желудка вирус не прикреплялся, поэтому и
инфекционность супернатанта не изменялась.
Антигенная активность. Все формы НБ вызываются идентичными в АГ-отношении
штаммами и протекают с образованием ВНА, анти-ГА и КСА. В сыворотке птиц АТ появ-
ляются через 6-10 дн после заражения, пока еще у больной птицы проявляются клинические
признаки болезни. Наивысший титр их отмечают через 3-4 нед. Снижение титра АТ обычно
происходит медленно и становится заметным через 3-4 мес, а спустя 8-12 мес АТ уже ие
выявляются. Установлена корреляция между анти-ГА и ПА. Низкий процент птиц (до 12) с
ПА указывает на наличие в стаде выраженного иммунитета против НБ, а высокий процент
(более 50) свидетельствует о персистентной инфекции.
Получены раздельно АТ на гликопротеин ГА-нейраминидазы (ГП-ГН) и на гликопроте-
ин слияния (ГП-С). Первые из них подавляют ГА- и нейраминидазную активность вируса
НБ и тормозят его гемолитическое действие, АТ иа ГП-С не влияют на его первые две ак-
тивности, но подавляют его гемолитическую активность и тормозят эффект вирусиндуциро-
ванного слияния клеток. Шт. 575, выделенный от диких лебедей и королевских крачек в Ка-
наде, обладал уникальной способностью вызывать образование не только анги-ГА, но и АТ,
блокирующих элюцию вируса с эритроцитов.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на курах, цыплятах и индю-
шатах вирулентными штаммами при любом методе заражения. Вся зараженная велогенны-
ми штаммами птица, не имеющая пассивных материнских АТ, погибает. Мезогенные
штаммы (подобные вакцинному вирусу Н) вызывают летальный исход у цыплят до 45-60-
сут возраста. Среди взрослой птицы отход достигает 25-30%. Чаще наблюдают параличи и
парезы. У кур-несушек яйценоскость прекращается иа 25-30-й день.
Лентогенные штаммы (Bl, F, La Sota, Бор/74/ВГНКИ) вызывают у цыплят слабую или
инаппарантную форму болезни. Даже при интрацеребральном заражении цыплята не гиб-
нут, КЭ также обычно не гибнут ранее 100 ч после введения минимальной летальной дозы.
Кроме кур и цыплят к экспериментальному заражению восприимчивы перепела, воро-
бьи, тетерева, голуби. При парентеральном заражении некоторые штаммы оказались пато-
генными для морских свинок, кошек, собак и других млекопитающих. Интраназально и ин-
трацеребрально удается заразить и золотистых хомячков. Вопрос о трансвариальной пере-
даче вируса НБ однозначно не решен. Однако факты последних лет свидетельствуют о воз-
можности такой передачи. Так, например, в содержимом желудка очень молодых невакци-
нироваиных цыплят были обнаружены лентогенные штаммы вируса. Последний обнаружи-
вался даже в КЭ, несмотря на присутствие материнских АТ. Поствакцинальные титры АТ
низки и вариабельны у цыплят, предварительно инфицированных вирусом НБ (34).
Культивирование. Помимо восприимчивой птицы вирус культивируется в КЭ при лю-
бом способе заражения, иа изолированных ХАО, в культуре фибробластов КЭ, некоторых
первичных и перевиваемых клетках.
Через 48 ч вирус (шт. R2B) накапливался в значительных количествах в ХАО и в низ-
ких титрах определялся в аллантоисно-амниотической жидкости. Если эмбрионы инкуби-
руют до 60 ч, то вирус выходил из ткани мембран и в больших количествах накапливался в
экстраэмбриональной жидкости (15). В клетках ВНК-21 М-белок вируса НБ обнаруживался
в цитоплазме с 5-го ч после инфицирования (22). При совместном культивировании в КЭ
218
ГлаваУ! Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
шт. La-Sota вируса НБ и шт. ЦНИИПП клон НТ вируса ИЛТ синергизма и интерференции
не отмечено, т.е. накопление вирусов было таким же как и при монокультивировании.
Цитопатология заражённой культуры клеток Вирус развивается в культурах кле-
ток 18 первичных и 11 перевиваемых линий, вызывая цитологические изменения. Репро-
дукция его в культуре тканей сопровождается уплотнением цитоплазмы клеток, появлением
в них вакуолей и вирусных частиц. Через 40 ч в цитоплазме некоторых клеток обнаружива-
ли множество малых аморфных эозинофильных включений, окруженных прозрачной зоной.
В одной клетке могло быть до 12 (и более) таких включений. Через 2 дня в зараженных
культурах увеличивалось количество клеток с пикнотическим ядром, а через 7 дн поража-
лись все клетки.
ГА свойства. Вирус агглютинирует эритроциты амфибий, рептилий, птиц, человека,
мышей и морских свинок. Эритроциты КРС, овец, коз, свиней и лошадей агглютинируются
не всеми штаммами вируса. Разнообразие в агглютинабельности эритроцитов КРС зависит
от ионной силы, концентрации солей и pH р-ра. Инагглютинабельность эритроцитов опре-
, деленных видов объясняется, вероятно, быстрой элюцией с них вируса. Приблизительно 105
инфекционных единиц (ИД50) вируса равны 1 ГА. Некоторые штаммы вируса теряют ГА-
активность при 56°С за 5 мин, сохраняя инфекционные свойства, другие, наоборот, сохра-
няют ГА-способность после прогревания при 56°С в течение 180-240 мин, а инфекционная
активность их утрачивается через 90 мин. Для отдельных штаммов НБ характерна опреде-
ленная температура, при которой они утрачивают ГА-активность. Это свойство можно ис-
пользовать для дифференциации штаммов. ГА лентогенного шт. В1 в инфицированных
клетках ХАО накапливаются к 12 ч культивирования в более низких титрах (1:16 - 1:32),
чем ГА велогенного (Т/53) штамма (1:64 - 1:128).
Вирус НБ, выращенный в КЭ, состоит из инфекционных и неинфекционных ГА частиц.
У этих 2 типов частиц изучены структурные белки, ГА- и нейраминидазная активности, по-
липептидный состав жирных кислот в липидах мембраны. Фиксация эритроцитов цыплят
глютеральдегидом не снижает их агглютинабельности по отношению к вирусу НБ. Фикси-
рованные таким образом эритроциты можно использовать в РГА и РТГА после хранения
при температуре 4°С в течение 2 мес. Велогенные штаммы отличаются от лентогенных по
ГА-свойствам. Оптимальный режим для дифференциации указанных возбудителей - обра-
ботка их в течение 1 ч азотистой кислотой при pH 4 и температуре 37°С,
Нейраминидазная активность. Выявлена обратная корреляция между нейроминидаз-
ной активностью и вирулентностью штаммов вируса. Считают, что параметры энзиматиче-
ской активности могут являться маркерами вирулентности вируса in vivo.
Гемолитические свойства. Все штаммы вируса обладают гемолитической активно-
стью по отношению к эритроцитам морских свинок, лошадей и кур, которая не связана с
вирулентными свойствами и находится в прямой зависимости от Г А-титра вируса. Однако
имеется и противоположное мнение. По гемолитической активности штаммы вируса НБ
можно разделить на слабоактивные (S и М) и высокоактивные (Т, Н и В). На гемолитиче-
ские свойства вируса влияют концентрация солей, pH и температура среды, вид эритроци-
тов. При 4°С она резко снижается. Гемолитические свойства вируса можно инактивировать
специфической антисывороткой и формалином.
Токсические свойства. Токсичность вируса зависит от метода введения вируса: интра-
церебрально, интраназально, внутривенно. У кроликов, зараженных в мозг, в первые 2 дн
развиваются параличи, и к исходу 3 сут животные гибнут. При внутривенном заражении
кроликов вирус вызывает пирогенную реакцию, могут появиться лимфоцитопения и лихо-
радка. У мышей при интраназальном введении развивается летальная пневмония, а после
нескольких повторных интраназальных введений - гепатизация легких. После 1-кратного
замораживания-оттаивания вируссодержащей экстраэмбриональной жидкости или обработ-
ки ее in vitro гомологичной иммуносывороткой токсические свойства вируса исчезают.
219
FnaBaVI. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Интерфероногенные свойства. Многие штаммы, особенно шт. Н, - хорошие индукто-
ры интерферона. Выделены ts-мутанты этого вируса и изучена их способность индуцировать
интерферон в первичных клетках КЭ. Показано, что 5% вирусного генома, связанного с ин-
фекционностью, необходимо для индукции интерферона. Существенную роль в индукции
интерферона играет ранняя транскрипция (2-3 ч после заражения) генома вируса. Способ-
ность индуцировать интерферон у интактных вирионов НБ, инактивированных [3-пропио-
лактоном от вирионов и некоторых структурных компонентов сравнивали в тест-системе
Р/3 ML - интерферон продуцирующих клеток (60).
Вирулентные свойства. По вирулентным свойствам все выделенные и охарактеризо-
ванные штаммы вируса НБ разделяются на велогенные (Т, Сато, Миадера и др.), мезоген-
ные (Н, Комаров, Муктесвар, Роакин и др.) и лентогенные (В 1, F, La Sota, Бор/74/ВГНКИ).
Велогенные штаммы отличаются от лентогенных по уровню репродукции и спектру ин-
вазивности. Они накапливаются в органах больных цыплят (легкие, селезенка, печень, мозг)
в концентрации 5,5 1g ЭЛД5о/г, лентогенные же штаммы (Bl, La Sota) в мозге ие выявляют-
ся, а уровень накопления в легких и селезенке не превышает 2,5 1g ЭЛД 50/г. ЦПА велоген-
ных штаммов обычно соответствует инфекционности для КЭ, тогда как лентогенные штам-
мы ЦПА не обладают (25а).
С помощью метода фингерпринта можно идентифицировать высокопатогенные штаммы
вируса, имеющие очень близкое АГ родство, а также определять корреляцию между нали-
чием специфических олигонуклеотидов и патогенностью. Разработан культурально-
тканевый метод дифференциации мезо- велогенного и других штаммов вируса НБ, основан-
ного на изучении характеристики ЦПД штаммов вируса, их инфекционных титров в культу-
ре клеток LSGFS-SF3. Лентогенные штаммы в этой культуре клеток продуцируются в низ-
ком титре и ЦПД их слабо выражено (1, 2). Получены также монАТ, пригодные для штам-
мовой дифференциации. Для дифференциации лентогенных штаммов вируса НБ применяют
РГА - элюции. Эти штаммы можно разделить на две группы: быстро (-24R) и медленно
(+24R+) элюирующие. Кроме того, используют тест термостабильности ГА и среднюю
смертность зараженных КЭ (1,2).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больная птица. Зараже-
ние происходит при контакте больной птицы со здоровой, а также через инфицированную
воду и пищевые отходы. Особенно быстро инфекция распространяется аэрогенно. Больная
птица через 2 дня после заражения и за день до появления клинических признаков болезни
выделяет вирус с выдыхаемым воздухом, во время кашля .
Распространение инфекции на большие расстояния (по воздуху до 15 км) связано с пе-
ревозкой птицы, тушек вынужденно убитой птицы, инфицированной тары, яиц из неблаго-
получного хозяйства, а также необезвреженной одежды, обуви. В яйцах, собранных от боль-
ной птицы, зародыш при инкубации погибает от вируса.
Проведены интересные исследования роли лектинов злаков во взаимодействии вакцин-
ного вируса НБ hit.V4. Показаны как сродство, так и антагонизм их ГА-активности (48).
Имеются данные о передаче вируса через некоторых паразитов, в частности E.tenella, Е.
noeca-trix. Такую же роль могут играть кокцидии. Было доказано, что после заражения ви-
русом цыплят, которые до этого были инвазированы половозрелыми или развивающимися
формами Ascaridae galli, вирус внедрялся в паразитов и его можно было выделить. Особую
важность имеет наличие вируса в яйцах A.galli, в которых он может длительное время со-
храняться и передаваться восприимчивым птицам. В Австралии проведена оценка патоген-
ности 45 изолятов вируса НБ, циркулирующих в настоящее время. Все патогенные изоляты
передавались путем контакта (47).
220
ГлаваУ! Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях вирус вы-
деляли от домашних разных видов (индейки, цесарки, утки), синантропных (голуби, воро-
бьи, галки) и диких птиц. В 1979 г. от попугаев (Katakoe Sulpurea) выделен велогенный
штамм (GND-1) вируса НБ. В 1-5% случаев вирус выделяли из клоаки водоплавающих
птиц. В 1982 г. от японского ястреба-перепелятника (Accipiter Virgatus golaris) выделен ва-
риант вируса НБ, отличающийся температурочувствительностью в РГА; он вызывал ГА
только при 4°С, а не при 25 или 37°С. В 1980 г. в Бельгии выделен вирус от голубей, все
штаммы его оказались лентогенными. Высказано предположение о том, что голуби - естест-
венные носители лентогенных штаммов (23, 26).
В литературе приведены случаи заражения людей вирусом НБ, которые, главным обра-
зом, могут быть при нарушении гигиены на предприятиях и индивидуальной гигиены пер-
сонала. У больных лиц развивался конъюнктивит.
Имеются сведения об эпизоотологических особенностях и клинической картине НБ сре-
ди голубей в некоторых районах Судана в 1982 г. Клинически эта болезнь характеризова-
лась внезапным угнетением, потерей аппетита, нервными явлениями, неспособностью ле-
тать. В ряде хозяйств летальность среди голубей достигала 100%. Выделенный вирус не от-
личался от прототипных штаммов вируса НБ. В течение 1984 г. в Австрии резко возросла
инфицированность голубей вирусом НБ. В 1990-1991 гг. при серологическом определении
АТ против вируса НБ у водоплавающих (уток и гусей) с помощью РТГА и ИФА показано,
что АТ в РТГА выявлены у 3,1% мускусных и 10% пекинских уток, по ИФА - у 20,3 и
24,8% соответственно (26а).
В 1970-1972 гг. в Голландии погибло большое количество норок от менингоэнцефалита.
Причиной смертности был вирус НБ. Выделенный на КЭ, он обладал низкой патогенностью
для норок при интрацеребральном введении. Оказывается, животные заражались при по-
едании потрохов инфицированной птицы, среди которой в это время наблюдалась НБ.
Описан случай острого респираторного заболевания у 3-мес дрофы вихляя в Таифе
(Саудовская Аравия). Из легких, селезенки и трахеи пораженной птицы был впервые выде-
лен вирус НБ и вирус оспы птиц. Диагностирована также тяжелая вторичная бактериальная
инфекция, описаны клиническая и патологоанатомическая картины (54).
ДИАГНОСТИКА
При характерном течении болезни постановка диагноза не представляет сложности. При
вспышке болезни на фоне пассивного или поствакцинального иммунитета, а тем более в
стационарно неблагополучном хозяйстве поставить диагноз бывает чрезвычайно трудно. В
этих случаях тщательно изучают эпизоотическую ситуацию, клиническую и патологоанато-
мическую картину. Решающее значение имеют лабораторные исследования - выделение ви-
руса на КЭ, его индикация и идентификация в РГА - РТГА, определение вирулентности ви-
руса на КЭ и цыплятах, а также выявление АТ в сыворотке переболевших или вакциниро-
ванных птиц в РТГА (10,11).
Выделение вируса
Вирус, в зависимости от его тропизма можно выделить из головного и костного мозга,
трахеи, кишечника, селезенки, легких, печени. Для исследования рекомендуется брать голо-
ву, легкие, трахею и селезенку от только что павших или вынужденно убитых птиц. Вирус
удается выделить только в период вспышки болезни. Через 15 дн выделить его обычными
методами, как правило, не удается. Поэтому патологический материал необходимо брать в
начале вспышки (в первые 3-5 дн) и направлять в лабораторию в термосе со льдом. Внут-
ренние органы можно помещать в стерильный 50%-ный р-р глицерина на дистиллирован-
ной воде. Смывы из трахеи и клоаки лучше консервировать на холоде или при температуре
не выше 4°С. Мазки-отпечатки исследуют методом ФА, срезы - с помощью ЭМ или ИЭМ, а
221
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
суспензию - в РГА. Эго позволит выявить специфический АГ (вирус) и ГА-агент в течение
3-5 ч, определить направленность дальнейших исследований.
Заражение КЭ. Эмбрионы 9-11-дн возраста заражают по 0,2 мл, не менее 10 КЭ на ка-
ждый материал, в аллантоисную полость общепринятым методом и инкубируют 72 ч при
37,5°С (погибших в первые 24 ч эмбрионов не учитывают). Если через 72 ч нет погибших
КЭ, то 5 из партии зараженных убивают, оставляя их при 4°С на ночь. Остальные 5 КЭ ин-
кубируют до 120 ч и затем убивают. Аллантоисную жидкость от погибших и живых КЭ
проверяют на ГА в РГА с куриными эритроцитами (1-5%-ная взвесь). Обычно велогенные
штаммы вируса вызывают гибель КЭ уже через 32-60 ч после заражения, мезогенные - че-
рез 60-90, а лентогенные - через 100 ч и более. Иногда при первом пассаже не удается выде-
лить вирус, поэтому необходимо провести не менее 3-х “слепых” пассажей. Учитывая, что в
вакцинируемых стадах можно выделить и вакцинный вирус (шт. Н, La Sota , Бор 74/ВГНКИ
и др.), вторым этапом исследования должно быть определение патогенности выделенного
изолята. Первым ориентиром могут служить данные РГА. Обычно полевые изоляты обла-
дают низкой ГА-активностью, проявляя ее в разведениях 1:16- 1:128, тогда как вакцинные
штаммы, наоборот, проявляют высокий ГА-титр - 1:256 - 1:2048.
Ненадежным оказался метод выделения вируса от зараженных иммунных кур: чем вы-
ше иммунитет у несушек, тем меньше вероятности выделения вируса из их эмбрионов. При
исследовании большого количества полевых образцов на выделение вируса НБ можно ис-
пользовать фрагменты ХАО, связанные с яичной скорлупой. Для этого фрагменты ХАО
размером 0,6-1,0 см2 культивируют в среде Игла. Эффективность выделения вируса 97%.
При внесении вируса в среду культивирования или непосредственно на ХАО КЭ получены
совпадающие результаты (55).
Заражение культуры клеток. Выделение вируса в культуре клеток осуществляется
редко, так как культуральный вирус по Г A-активности значительно уступает эмбрионально-
му. Однако в тех случаях, когда в лаборатории можно получить культуру фибробластов КЭ
и специалисты владеют этим методом, его можно применять для выделения и идентифика-
ции вируса. Приготовление вирусной суспензии, выращивание и заражение культуры клеток
куриных фибробластов производят общепринятым методом. Можно использовать переви-
ваемые линии ВНК-21 и Нер-2.
В зараженной культуре фибробластов КЭ вирус НБ через 48-60 ч вызывает ЦПИ, спе-
цифичность которых подтверждается реакцией гемадсорбции с эритроцитами кур. С вирус-
содержащей культуральной жидкостью может быть поставлена РГ А в отношении эритроци-
тов крови кур. Обычно при первичном выделении ГА-титр культурального вируса не пре-
вышает 1:32 - 1:128. Отсутствие или низкие титры ГА вируса в первом пассаже на культуре
ткани не дают основания исключить НБ.
Заражение птиц. Если КЭ под руками нет, вирус можно выделить на неиммунной к НБ
птице. Для этого испытуемый материал 1:10 (0,5 мл) внутримышечно инокулируют цыпля-
там в возрасте 2-4 мес. За инфицированной птицей наблюдают 10-12 дн. При появлении ха-
рактерных для болезни симптомов птиц в агональном состоянии убивают и берут пробы го-
ловного мозга и селезенки, которые можно использовать для заражения КЭ и иммунологи-
ческой пробы (для одновременного заражения птиц иммунной и неиммунной групп).
Титрование вируса. Обычно проводят на КЭ, культурах клеток по общепринятой ме-
тодике и на 6-10 нед цыплятах. Доза инокуляции вируса для цыплят 0,5 мл (внутримышечно
или внутривенно). Срок наблюдения 15 дн.
Индикация вируса
Экспресс-методы выявления антигена вируса НБ. Через 24 ч в инфицированных
культурах клеток (шт. Н) наблюдают появление многоядерных симпластов и цитоплазмати-
ческих эозинофильных включений неправильной глыбчатой формы. Через 48 ч после зара-
222
ГлаваV I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
жения цитоплазма бывает нафарширована тельцами-включениями. В ядрах изменений не
отмечалось. Разработан высокочувствительный авидин-биотиновый ИФА. В данном тесте
применяют монАТ к вирусу НБ, очищенные и меченые биотином. Тест характеризуется
простотой выполнения и короткими сроками (3-4 ч) получения результатов (41). Непрямой
точечный вариант ИФА является быстрым, легким, специфическим методом обнаружения
вируса в смывах с различных органов (42).
Для идентификации РНК вируса НБ пользуются экспресс-методом ПЦР, амплифици-
рующей участок длиной 238 п.н. в гене белка слияния F с использованием в качестве прай-
меров нуклеотидов, фланкирующих последовательность (27).
В организме птицы, зараженной вирусом НБ, в процессе продолжительного контакта с
вирусом эритроциты теряют способность Г А (становятся инаглютинабельными). Чтобы кос-
венно доказать присутствие вируса в организме, от исследуемой птицы берут 0,04 мл крови
в формалинизированую (0,1%-ную) вируссодержащую аллантоисную жидкость, вирус дол-
жен обладать высокой агглютинирующей активностью. Если на стекле наступает гемагглю-
тинация, это свидетельствует об отсутствии в исследуемой капле крови вируса НБ. Учет ре-
акции ведут через несколько секунд. Метод применим для выявления патогенного вируса в
вакцинированном стаде, так как вакцинные штаммы лентогенной группы инагглютинабель-
ности эритроцитов не вызывают (19).
РГА. Используют с целью ориентировочного определения присутствия вируса в иссле-
дуемом материале и для его титрования. ГА вируса входят в состав вирусной частицы
(вириона) и могут содержаться в инфицированных аллантоисной и амниотической жидко-
стях, оболочках и органах КЭ, легких, печени, почках и селезенке погибшей птицы, в жид-
кой и клеточной фракциях тканевых культур. Можно брать эритроциты крови кур, морской
свинки, лошади, человека и др. Разные виды вирусов и даже шт. одного и того же вируса
могут отличаться друг от друга способностью агглютинировать эритроциты указанных жи-
вотных. Спектр Г А служит характеристикой биологической активности вируса и штаммов.
Например, большинство шт. вируса НБ не вызывает Г А эритроцитов лошади, чем отличает-
ся от вируса классической чумы птиц, который способен ГА их в высоких разведениях.
Предложена экспресс-диагностика атипичных форм НБ кровекапельной реакцией ге-
магглютинации (ККРА). Простота постановки её, совмещение исследований на НБ и пулло-
роз-тиф позволяют включить ее в технологический процесс ветобработки птицы (7).
Серологическая идентификация
Вирусы НБ можно идентифицировать в РТГА, PH, РСК, РИФ и др.
РТГА. Основной, высокоспецифичный и простой в выполнении метод идентификации
вируса НБ. Для постановки необходимо иметь эталонные специфические сыворотки к виру-
су и выделенный на КЭ вирус (аллантоисная жидкость). РТГА ставят общепринятым мето-
дом в макро- и микровариантах. Идентификацию вируса считают завершенной, если эта-
лонная специфическая сыворотка тормозит ГА-активность вируса в пределах целого илн
1/2-1/8 титра с гомологичным эталонным АГ.
Для быстрой идентификации выделенного вируса рекомендуют следующий метод: на
предметное стекло наносят капли аллантоисной жидкости и 1%-ную суспензию куриных
эритроцитов. Затем ставят пробу на нейтрализацию ГА-активности. Для этого на предмет-
ное стекло наносят каплю той же аллантоисной жидкости, каплю эталонной специфической
сыворотки и хорошенько перемешивают. Если агглютинации эритроцитов нет, значит вы-
деленный вирус является вирусом НБ.
Приготовление гипериммунных сывороток. 5-8-мес кур с титрами анти-ГА поствакци-
нального иммунитета против НБ 1:4-1:64 гипериммунизируют вирус-вакцинами из шт. В1,
La Sota, Н. Первое введение делают с адъювантом (автоклавированная смесь ланолина с ва-
223
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
зелином в соотношении 1:1,5). На 1 мл смеси добавляют 5 мл вакцинного вируса. Смесь
растирают в ступке и помещают в водяную баню на 30 мин при температуре 56°С.
1-й раз вакцину вводят с адъювантом в объеме 1 мл внутримышечно, 2-й раз - через 3
дня без адъюванта, 3-й раз еще через 3 дня без адъюванта. Через 10 дн проверяют актив-
ность гипериммунных сывороток. Титр их обычно составляет 1:6144-1:12288.
PH на КЭ. Используют для идентификации вируса редко, так как она трудоемка и дли-
тельна. Реакцию используют в спорных ситуациях. PH ставят общепринятым методом
обычно в варианте разведения вируса и постоянной дозы сыворотки. Реакцию считают по-
ложительной при индексе нейтрализации >21g.
РСК. В диагностической практике при НБ используют редко. Предложена РСК как бы-
стрый и дешевый метод дифференциации штаммов вируса НБ по вирулентности.
РИФ. Метод основан на применении родаминсульфохлорида для конъюгации иммун-
ной сыворотки к вирусу с целью идентификации вирусного АГ в пораженных клетках пав-
ших и убитых птиц. Применение этого красителя наиболее приемлемо и удобно благодаря
яркому оранжево-красному свечению АГ. ФИТЦ-конъюгаты (флюоресцеинизотиоцианат)
менее пригодны. Для обнаружения специфического АГ применяют гомологичные РСХ-
конъюгаты общепринятым методом. В большинстве случаев АГ выявляется в ядрах клеток
белой крови (лимфоцитах, моноцитах, псевдоэозинофилах и эозинофилах) или пораженных
клеток указанных органов в виде яркой флюоресценции оранжево-красного цвета. В кон-
трольных препаратах, обработанных теми же гомологичными конъюгатами, подобного све-
чения не наблюдается, лишь в некоторых случаях выявляется точечное желто-оранжевое
свечение в цитоплазме юных эозинофилов.
Установлено, что вирусный АГ в зараженных культурах клеток (ФЭК и ВНК-21) выяв-
ляется, начиная с 4 ч (для велогенных штаммов) и с 6 ч (для лентогенных штаммов), до 10-
12ч свечение АГ отмечали только в цитоплазме, а через 20 ч - в цитоплазме и ядрах клеток.
РИГА. Во ВНИВИП разработана методика получения высушенных стандартных высо-
кочувствительных и специфических эритроцитарных тест-препаратов с АТ к вирусу НБ для
экспресс-диагностики. Указанный эритроцитарный диагностикум позволяет выявить вирус
в экскретах органов и тканей (10,11).
ИФА. Методом ИФА вирусный АГ выявляют в ранние сроки после заражения до появ-
ления ЦПД. Через 12 ч после заражения видны единичные АГ-содержащие клетки.
Идентификация при помощи монАТ. Исследованы различные штаммы вируса и изо-
ляты НБ на гомологичное родство к монАТ. В результате тестирования 40 изолятов и
штаммов с использованием набора из 9 монАТ выявлено 8 групп. Вирусы каждой группы
обладали не только общими АГ-свойствами, но и одинаковыми эпизоотическими чертами.
МонАТ к ГА и гликопротеину F рекомендовано использовать для определения патогенности
и биологической характеристики штаммов, циркулирующих в стадах вакцинированных и
невакцинированных птиц. Они могут быть использованы для идентификации полевых изо-
лятов, АГ-родственных шт. La Sota и Bl, быстрой дифференциации этих вакцинных штам-
мов от вирулентных полевых изолятов.
Метод картирования олигонуклеотидов. Этим методом исследован биохимический
состав нескольких штаммов вируса НБ, выделенных в штатах Калифорния, Техас и Флори-
да, это позволило легко дифференцировать штаммы друг от друга. Часть штаммов оказа-
лись идентичными. Считают, что метод олигонуклеотидного картирования может быть эф-
фективно использован с целью оценки эпизоотической ситуации на любой территории.
Определение вирулентности выделенного вируса. Помимо серологической иденти-
фикации часто возникает необходимость определения вирулентности выделенного изолята.
Это особенно важно в том случае, когда возникает подозрение, что выделенный возбудитель
224
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
является штаммом, применяемым для массовой вакцинации. Степень вирулентности можно
определить следующими методами.
Метод Хенсона - определение индекса внутримозговой вирулентности. Исследуемым
материалом в разведении 1:10 заражают интрацеребрально в дозе по 0,05 мл 10 1-дн цып-
лят, полученных от невакцинированных против НБ кур. Время наблюдения 8 дн. Все по-
гибшие цыплята считаются специфическими; их сумму умножают на коэффициент 2. Все
цыплята, проявившие клинические признаки, тоже считаются специфическими; их сумму
умножают на коэффициент 1. Индекс интрацеребральной патогенности вычисляют путем
деления суммы балов на 80 (число наблюдений за 10 цыплятами в течение 8 дн). Для ленто-
генных штаммов индекс до 0,2, для велогенных штаммов - больше 1,5. Недостатком данной
методики является - постоянный период наблюдения - 8 дн.
Метод определения среднего времени гибели 10-дн эмбрионов, вызванный минималь-
ный летальной дозой (СВГ/МЛД). Для этого готовят серию 10-кратных разведений иссле-
дуемого вируса от 10’1 до 10’10, пять из них (10'1, 10‘7, 10‘8, 10‘9, 10‘10 используют для зара-
жения 10-дн КЭ в аллантоисную полость в объёме по 0,1 мл. Каждым из этих разведений
инокулируют по 10 КЭ: по 5 заражают в 8 ч утра и 5 - в 16ч (в общем заражают 50 эмбрио-
нов) и инкубируют их при 37°С. Наблюдают за ними 2 раза в день через 8 ч в течение 120 ч.
Час гибели каяодого погибшего эмбриона регистрируют. Минимальной летальной дозой
Считают самое большое разведение вируса, вызывающее гибель всех инокулированных эм-
брионов. Среднее время гибели находят путем деления суммы часов гибели всех эмбрионов,
вызванной минимальной летальной дозой, на число эмбрионов:
среднее время гибели до 60 ч - велогенные штаммы;
среднее время гибели от 61 до 90 ч - мезогенные штаммы;
среднее время гибели от 90 и больше 100 ч - лентогенные штаммы.
Однако методы эти дорогостоящие и требуют много времени - необходимо затратить по
меньшей мере 7 дн для того, чтобы дифференцировать дикие штаммы от вакцинных.
РСК. Быстрый и дешевый способ дифференциации штаммов. Диагноз ставят в течение
3 дн после получения проб. Самое слабое связывание комплемента вызывают велогенные
дикие штаммы, самое сильное -лентогенные (например La Sota), в границах между сильны-
ми и слабыми - мезогенные. Кроме того, вирулентные штаммы менее антигенны, чем вак-
- цинные, в отношении индукции синтеза КСА у морских свинок. Самую отчетливую диффе-
ренциацию дает сыворотка морских свинок, иммунизированных штаммом Хитчнера (В1).
Биопроба. Начиная с 1972 г. в США, а затем и в других странах были выделены
щтаммы с очень высокой вирулентностью. Их называют штаммами WND (висцеро-
тропные штаммы НБ). Для идентификации проводится биопроба на восприимчивых цыпля-
тах в возрасте не менее 6 нед. Цыплят заражают в клоаку. Несколько особей заражают в
глаз, внося туда каплю вируса. За птицами наблюдают 10 дн. Если в течение этого периода
ни один цыпленок не погибает, считают, что штамм не относится к WND. Если же птицы
заболеют и погибнут в течение 10 дн, производят вскрытие. В США принята следующая
оценка интенсивности изменений (в баллах): точные кровоизлияния или некротические из-
менения в трахее - 25; точечные кровоизлияния или некротические изменения в трахее и
^сопутствующая им отечность трахеи и в области входа в грудную клетку - 100; точечные
кровоизлияния или некротические изменения в зобе - 100; некроз и изъязвление желез спе-
лой кишки и пейеровых бляшек - 100; точечные кровоизлияния или некротические измене-
; ния слизистой оболочки клоаки - 10; воспаление брюшины в области яичника - 10; точечные
кровоизлияния в других местах - 10. Диагностика WND считается обоснованной, если об-
.дцее число баллов достигает 150 или более.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Критерием, позволяющим судить о персистенции вирулентного вируса в стаде, являют-
ся тигры АТ в сыворотке крови птиц. Исследования проводят только с парными сыворотка-
15 Зак. № 171
225
ГлаваУТ. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
ми, полученными от одних и тех же птиц (или на одной и той же группе птиц). Первую про-
бу берут перед вакцинацией (или в начале болезни), вторую - на 15-20-й день, последующие
- в любое время (обычно 1 раз в месяц).
РТГА. Реакцию ставят с 4 ГАЕ в макро- и микровариантах по общепринятой методике.
Результаты считают положительными, если разница в титрах 1-й и 2-й сывороток составля-
ет не менее 3-х разведений. Повышение числа положительно реагирующих в РТГА между
двумя исследованиями свидетельствует о распространении инфекции в стаде. Постинфекци-
онные АТ обычно бывают в титре 10 1g и более и устанавливаются в течение продолжи-
тельного времени, что указывает на проходящую или прошедшую инфекцию. Обнаружение
в стаде птицы анти-ГА в разведении сыворотки крови 1:1024 - 1:2048 через 12-25 дн после
применения живых вирусвакцин не является сигналом о неблагополучии его в отношении
НБ, наоборот, это свидетельствует о высокой реакции птицы на вакцину. Но если через 4-5
мес после вакцинации в стаде будут обнаружены титры АТ 1:2048 или неровные титры, т.е.,
когда у части проб крови (10-15%) их нет или они не превышают 1:2 - 1:4, а в другой части
(14-20%) составляют 1:1024 - 1:2048 и выше, то стадо надо считать имевшим контакт с ви-
рулентным вирусом.
Для определения активности эпизоотического процесса птиц через 2 нед обследуют по-
вторно. Обнаружение высоких титров АТ (1:4096 и выше) свидетельствует об обострении
эпизоотической ситуации. Для серологического контроля нз каждого птичника берут по 25
проб крови. Кратность исследований определяется эпизоотической ситуацией.
АТ обнаруживаются не только в сыворотке крови. Большое количество их содержится,
например, в желтке яиц иммунизированных птиц. Этим путем происходит передача пассив-
ной резистентности потомству. Обнаружение АТ в желтке яиц, полученных от вакциниро-
ванных кур, по мнению ряда авторов, более достоверно для определения состояния рези-
стентности поголовья птиц. Готовят экстракт из желтка (38): в пробирку наливают 1,5 мл
яичного желтка и 6 мл физиологического р-ра и тщательно перемешивают; добавляют 2 мл
дихлорэтилена н 1 мл эфира. Содержимое тщательно смешивают встряхиванием. Оставля-
ют смесь при 37°С до следующего дня, после чего центрифугируют в течение 10 мин при
1,000 мин1. Фракция дихлорэтилена находится внизу на дне пробирки, над ней расположе-
на полоса жира. Слегка мутную надосадочную жидкость (она соответствует разведению 1:5
желтка яиц) отсасывают пипеткой и используют в РТГА. Более простой метод заключается
в следующем: желток отделяют от белка и 1 мл его разводят 2 мл фосфатного буфера с pH
7,2. Полученную смесь гомогенизируют, затем центрифугируют 15 мин при 1,000 мин'1. Для
РТГА берут надосадочную жидкость между самым верхним слоем и осевшими частицами
желтка. Титры АТ в желтке соответствуют содержанию их в сыворотке крови кур. Считают,
что для определения иммунного статуса стада кур к НБ значительно проще исследовать АТ
в яичных желтках, чем в сыворотке крови. Такой подход экономичен, исключает стрессы и
опасность распространения болезни при взятии крови (10,11).
Исследуя желток, можно определить время первичной иммунизации цыплят, выведен-
ных из анализируемой партии яиц. Титр пассивных АТ в постнатальный период за 4,5 дня
снижается на 1 loga.TaK, при исходном титре АТ 7 log к 18 дню он уменьшается до 3 log 2, и
до 5 log2 - к 9 дню. Надежный иммунный ответ будет получен у 80-100% птиц при вакцина-
ции цыплят в указанном возрасте per os, интраназально или аэрозольно. Результаты иссле-
дования желтка и парных сывороток кур позволяют судить об уровне сероконверсии и по
нему определять напряженность поствакцинального иммунитета. Четырехкратное и более
увеличение анти-ГА свидетельствует о циркуляции эпизоотического вируса. Аналогичное
заключение делают по возрастанию индекса нейтрализации в 50-100 раз по сравнению с
первоначальными данными (6).
226
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусикге инфекции
Ставить диагноз по сероконверсии при внедрении полевого вируса в стадо иммунной
птицы трудно без выделения вируса и определения его вирулентности на цыплятах. Можно
только предполагать, что птица имела контакт с полевым штаммом.
РРГ. Эта реакция (РРГ) получила широкое применение и высокую оценку при многих
парам иксов ирусных инфекциях. В опытах с вирусом НБ показаны линейная зависимость
диаметра зоны гемолиза от концентрации АТ и полная корреляция результатов РРГ и РТГА.
Так, при титрах в РТГА 1:16-1:32 диаметр зоны гемолиза составлял 6-7 мм, а при 1:64 и
1:1024 - 7,5±0,3 и 9,5±0,5 мм соответственно. При повторных исследованиях одних и тех же
сывороток расхождение показателей не превышало 0,5 мм.
ELISA. Многочисленные данные зарубежных исследователей свидетельствуют о высо-
кой чувствительности, специфичности этого метода и корреляции между титрами АТ в
РТГА и ELISA. В Марокко разработан набор для скрининга сыворотки птиц на присутствие
АТ к НБ. Титры в ELISA выше, чем в РТГА и показывают высокую степень корреляции
(17).
При исследовании сывороток крови от вакцинированных птиц титр АТ в ELISA был в
2-4 выше, чем в РТГА. АТ к вирусу в ELISA и РТГА выявляются в 98, и 91,7% соответст-
венно, коэффициент корреляции равен 0,85 (21). Однако ELISA отличается большей чувст-
вительностью (9). На основании реактивности с монАТ штаммы вируса НБ разбиты на 5
групп. Для постановки реакций ELISA и РЗГА при обнаружении АТ к вирусу НБ целесооб-
разно использовать хлороформный экстракт.
Дифференциальная диагностика. НБ следует дифференцировать от ИБП, гриппа,
ПМВ-2, ИЛТ и микоплазмоза птиц. Для лабораторной диагностики гриппа птиц, ИБ и НБ
используют диагностикумы биофабричного производства. Дифференциация вирусов гриппа,
насчитывающих 14 подтипов, и парамиксовирусов, включающих 9 серотипов, возможна
только в лаборатории. Особое внимание следует сосредоточить на эпизоотологическом мо-
ниторинге при этих болезнях, исследовании парных сывороток и периодическом лаборатор-
ном анализе патматериала (5).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Естественно переболевшая или вакцинированная птица приобретает иммунитет, про-
должительность и напряженность которого зависит от возраста птицы, биологических
свойств вируса и метода введения его в организм.
Для специфической профилактики применяют инактивированные и живые вакцины.
Количество первых последнее время значительно сокращалось. Однако односторонняя ори-
ентация на живые вакцины разной степени аттенуации и в ряде случаев нежелательные по-
следствия их применения вынудили исследователей и практических специалистов вновь
вернуться к инактивированным препаратам, правда, более современным.
Применение живых вакцин. Ассортимент живых вакцин, применяемых в настоящее
время весьма широк: Н, В, F, FR, Комаров, Roakin, Ла Сота, Банковский, Муктесвар, Мин-
несот, Бургас, Нью-Джерси, Нью-Йорк, Накарелла, К, ГАМ, V4 и др. (10а). Среди вакцин-
ных лентогенных штаммов вируса НБ известны - В, NDP, LZ58 и Clone 30, Ulster 2С. По
эффективности вакцина из шт. Ulster 2С занимает промежуточное положение между Clone
30, NZ58 и NDP (24).
В 1989 г. в Австралии выделен шт. N4, характеризующийся полной авирулентностью
для птицы и активным распространением его среди птиц (высокой контагиозностью). Вирус
вызывает иммунитет при введении интраокулярно, внутримышечно и аэрозольно. Он перси-
стирует в организме привитой птицы до 2 лет. У подсаженной не привитой птицы к вакци-
нированной в течение 80 дн обнаруживались АТ. Несмотря на низкие титры (ниже 3 logj)
привитая птица обладала устойчивостью к заражению вирулентным вирусом, что свиде-
15*
227
ГлаваVI. Parammyxoviridae Парамиксовирусвые инфекции
тельствует о развитии местного секреторного или клеточно-опосредованного иммунитета
без высоких титров гуморальных АТ (36).
Пероральная вакцинация hit.V4 (Австрия) стимулирует лимфоидные ткани кишечного
тракта, что индуцирует секреторные иммуноглобулины и обеспечивает защиту даже при
низком уровне циркуляторных гуморальных АТ. Шт. V4, заданный с питьевой водой или
кормом, после вакцинации выделяется в окружающую среду. По мнению авторов, перо-
ральная вакцинация этим штаммом может разрешить ряд проблем профилактики НБ в не-
больших фермерских хозяйствах (39).
Пылевидная вакцина из шт. La-Sota разработана во ВНИИВВиМ. В основе технологии
изготовления использован метод сушки смеси вируссодержащего материала с наполните-
лем. Вакцина обеспечивает высокий иммунологический эффект и практически не обладает
реактогенностью в широком диапазоне доз, имеет выраженную иммуногенность для цыплят
14-16 нед возраста в благополучном и стационарно неблагополучном стаде птиц (4, 6).
В ВГНКИ ветпрепаратов проведены исследования по совершенствованию методов кон-
троля иммуногенности вакцин против НБ. Установленный минимальный защитный титр ан-
ти-ГА 3 log2 и более давал вполне объективную информацию о иммуногенности вакцины.
Для исключения погрешностей в методику была включена референс-вакцина НБ, позво-
ляющая правильно интерпретировать получаемые результаты и более дифференцировано
подходить к оценке этого показателя у серийно производимого препарата. Референс-серии
готовят во ВГНКИ, контролируют на соответствие заложенным в ТУ параметрам и постав-
ляют на биопредприятия. Новая методика предусматривает 10-кратный запас иммуногенно-
сти и обязательное соответствие параметрам референс-серий не менее чем на 80%. Экспе-
риментально определены иммунизирующие дозы (ИМД), обеспечивающие абсолютную за-
щиту птицы от 1000 ЛД50 вирулентного вируса (ИМ Дю), равные для шт. La Sota I 6,7 1g
ЭИДо, для шт. Бор/74 ВГНКИ - 6 1g ЭИД0 при интраназальном применении и 7,7 и 7,0 1g
ЭИДо соответственно при энтеральном применении. Они оказались значительно выше,
чем в случаях применения серий вакцин с минимально допустимой по ТУ активностью (8,0
1g ЭИДо /см3). В связи с этим минимально допустимая инфекционная активность препара-
тов увеличена до 9 1g ЭИДо /см3. Соответственно утверждены новые наставления по при-
менению вакцин из шт. La Sota и Бор/74 ВГНКИ (9в).
В СНГ широко применяют сухие вирусвакцины из шт. Н, Bl, La Sota, Бор/74/ВГНКИ. В
профилактике НБ важна разработка оптимальной схемы иммунизации птицы. Наиболее
подходящий возраст для первой вакцинации - 10-14-й день, а для ревакцинации - 5-6 нед.
Лучшие результаты получены при аэрозольной вакцинации в 10-дн, 5- и 8-нед возрасте. У
индюшат осложнения после применения живой вакцины против НБ в 2-3 нед возрасте свя-
зывают с подавлением вакцинным вирусом фагоцитарной активности альвеолярных макро-
фагов. Во избежание этого предложена более рациональная схема иммунизации индюшат. В
первый день жизни им вводят подкожно инактивированную вакцину в дозе 0,1 мл, а через 2
нед аэрозольно вакцинируют живой вакциной из шт. В1. Такая вакцинация обеспечивает
длительный иммунитет. Высокий уровень поствакцинального иммунитета у матерей не пре-
пятствовал иммунизации суточных индюшат инактивированной вакциной (34а). В неблаго-
получных товарных хозяйствах рекомендуют прививать индеек аэрозольно с интервалом 5
нед в течение всего производственного периода.
Преимущество гранулированных форм вакцин из шт.У4 u Roakin в их более высокой
термостабильности; их можно транспортировать без рефрижератора и смешивать с любым
обычным кормом (40, 49).
Активность клеточного иммунитета у цыплят, вакцинированных шт. V4 вируса НБ, оп-
ределяли с помощью теста ингибиции миграции лейкоцитов (ИМЛ). Исследовали иммуно-
генность шт. V4 вируса НБ, задаваемого орально в комплексе с различными адъювантами.
228
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Ни один из адъювантов, кроме авридина, не усиливал серологическую реакцию у вакцини-
рованных цыплят (51).
Исследовали роль защитных реакций слизистых оболочек в создании поствакцинально-
го иммунитета. Цыплят вакцинировали 2-кратно с 2-недельным интервалом интраназально,
интраокулярно и введением вакцины в зоб. Каждый цыпленок получал дозу 7,8 1g ЭИД50
/шт.У4. Через неделю в сыворотке и слезной жидкости цыплят, вакцинированных всеми
способами, обнаруживали повышение уровня АТ. Оральная вакцинация шт.У4 индуцирует
у цыплят не только гуморальные иммунные реакции, но и реакции иммунокомпетентных
элементов слизистых оболочек (52). Показана высокая интерферирующая активность ПМВ-
2, что необходимо учитывать при изготовлении эмбриональной вакцины против НБ (3).
Получена живая вакцина из мутанта шт. Hitchner В1 путем клонирования методом бля-
шек серийными пассажами при температуре 28-30°С (56). Н. А. Лагуткин и соавт. (5а) реко-
мендуют выпускать вакцины из шт. Bl, La Sota и Бор/74 ВГНКИ с активностью не ниже 9
1g ЭИДзо/мл и с титром в РГА не ниже 1:128. Доза при интраназальном (окулярном) введе-
нии должна быть 2-4 млн. ЭИД50 / мл, а при пероральном применении 10-20 млн. ЭИДзо/мл
с выпаиванием 2 дня подряд (57).
Э.Ф. Токарик и соавт. рекомендовали свой способ профилактики НБ, суть которого со-
стоит в том, что цыплят в суточном возрасте иммунизируют вакциной из шт. La-Sota в дозе
20-40 ЭИДзо/на голову. После вакцинации цыплятам с кормом вводили пробиотик Авилакт-
1К в суточной дозе 0,5 - 1,5% от массы корма 2-мя циклами по 7-15 дн с перерывом 15-12
дн. Использование пробиотика Авилакт-1К повышал антигенность вируса La Sota, усиливал
иммунный ответ и устраняет нежелательное действие материнских АТ при иммунизации су-
точных цыплят (9а, 12а). Экспериментальное обоснование эффективной дозы вакцины и
перевод её дозировки с объёмных единиц в количественные (ЭИД50) проведено во ВНИ-
ТИБП (12). Для цыплят 15-20-сут возраста эффективная защитная доза (защита 80-100%)
при инграназальной вакцинации составляет 103-106,3 ЭИД50 при титрах анти-ГА 1:8-1:512.
Для цыплят 5-сут возраста, имевших материнские АТ, эффективная доза составляет 106,3
ЭИД50. В опытах с использованием для заражения цыплят как 100 ЛДзо, так и 210б ЛД50
вирулентного штамма вируса НБ показано, что применение вакцины в дозах 110б-5 106
ЭИД50 обеспечивало защиту как 5, так и 20-сут цыплят. Динамика накопления анти-ГА и
устойчивости птицы следующая: на 4-й день титр анти-ГА составлял 1:8-1:16, степень за-
щиты - 70%; на 6-й день - титр - 1:32, защита - 90%; на 8-й день титр - 1:32-1:64, защита
100%; на 14-й день титр - 1:64-1:512, защита - 100%. Максимальное накопление анти-ГА
наблюдалось через 30 дн, к 120-му дню титр их снижался до 1:8-1:4. Однако степень защи-
ты через 3 мес составляла 92-100%, через 5 мес - 70-85% (12). Полученные авторами дан-
ные послужили основанием для корректировки как нормативно-технической документации
по изготовлению вакцин, так и наставления по её применению.
Пассивный иммунитет у цыплят имеет прямое отношение к вирусоносительству и виру-
совыделению. Так, при заражении пассивно иммунных цыплят патогенным вирусом 68% из
них не проявляли признаков болезни в течение 80 дн наблюдения, но выделяли вирус в те-
чение 45 дн, а вирусоносительство наблюдалось 54 дня. Этот факт имеет большое эпизоото-
логическое значение при проведении мероприятий по санации хозяйств от НБ.
Во ВНИИВВиМ разработана новая технология ассоциированной вирус-вакцины против
ИЛТ и НБ. Она позволяет получать вакцины для аэрогенного применения с активностью 7
1g ЭИД50 /см3 по вирусу ИЛТ и 7,2-7,7 1g ЭИД50 /см3 по НБ; для интраназального и орально-
го применения - по ИЛТ не ниже 7,0 1g ЭИД50 /см3, по НБ не ниже 9,0 1g ЭИД50 /см3. После
двукратной вакцинации в оптимальных дозах иммунитет формируется у 85-100% птиц и со-
храняется около 6 мес (2а, 26, 4а).
229
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
На основе мезогенного шт. ГАМ-61[А(в)ВН], выделенного из эпизоотического и затем
аттенуированного в культуре клеток почек теленка и КЭ, разработана новая вакцина. После
испытания в лабораторных и камеральных условиях установлено, что штамм обладает вы-
сокой иммуногенностью: обеспечивает защиту 97-100% птицы, привитой различными спо-
собами; безвреден в 10- и 100-кратной дозе для цыплят моложе 60-дн возраста; кроме того,
его можно использовать в хозяйствах с острой эпизоотической ситуацией. Иммунитет на-
ступает через 72-96 ч. Высокая эффективность вакцины подтверждена на 8-миллионном по-
головье птиц в стационарно неблагополучных хозяйствах Ставропольского и Краснодарско-
го краев. Серийное производство вакцины начато на Краснодарской биофабрике (96). Авто-
рами изучен механизм формирования ранней невосприимчивости экспериментально инфи-
цированных цыплят, привитых вакциной из шт.ГАМ-61. Оценку иммунитета проводили по
тестам, представленным в таблице VI. 1.
Таблица VI. 1. Динамика формирования факторов резистентности у
цыплят, привитых вакциной из шгГАМ-61
Показатели Время после вакцинации (час) 4 8 12 24 30 48 72 96 120 168
Устойчивость к заражению % 75 75 100 100
Средний титр ан- тител (log2) 0 0 0,8 2,5 2,6
Титр интер- ферона(1о£2) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Т-лимфоциты (% ГОК) 12,8 13,8 16,4 48,9 29,4 35,4 - 30,9
Результаты опытов показали, что в механизме формирования ранней невосприимчиво-
сти к вирусу НБ ведущая роль принадлежит факторам клеточного иммунитета. Защитное
влияние гуморальных АТ проявляется значительно позже, и в течение первых 3-5 сут не в
полной мере отражает истинный иммунологический статус организма (9г, 9д).
Аэрозольная вакцинация эффективна и безопасна только в стадах, благополучных по
респираторным заболеваниям вирусной или бактериальной природы. В противном случае
она провоцирует проявление ИЛТ, микоплазмоза и других болезней.
Применение инактивированных вакцин. Инактивированные вакцины обычно при-
меняют в сочетании с живыми. Хороший защитный эффект получали, если однодневных
цыплят прививали живой вакциной, а через 3 и 8 нед - инактивированной (25).
Предложено одновременное применение живых и убитых вирусов НБ для вакцинации
суточных цыплят с низким уровнем материнских АТ. В качестве живой вакцины использо-
вали лентогенный шт. La Sota, а в качестве инактивированной - формолвакцину, содержа-
щую неионизированный детергент твин-80 в виде водно-масляной эмульсии с низким со-
держанием минерального масла. Живую вакцину вводили в глазнично-носовую область, а
инактивированную- подкожно. Титры специфических АТ у цыплят, привитых живой вакци-
ной медленно возрастали в период с 28-го по 73-й день, в то время как уровень АТ у цыплят
второй группы, привитых одновременно живой и инактивированной вакцинами, был по-
стоянен. Разовая одновременная вакцинация в инкубационном зале обеспечивает стойкий
иммунитет на весь период откорма бройлеров и позволяет исключить ревакцинацию (21а).
Инактивированные вакцины готовят из вируса, размноженного в КЭ. Активность одной
дозы вакцины обычно не менее 8 1g ЭИД5о/См3 инактивированного вируса. Концентрация
его оказывает существенное влияние на титр сывороточных АТ. В качестве инактивантов
вируса НБ используют формальдегид, p-пропиолактон, этиленимин. Хорошими адъювант-
230
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
ными свойствами обладал авридин. Вакцина с авридином не вызывала реакций на месте
введения (35). Помимо того, инактивированную эмульгированную вакцину типа “вода в
масле” готовили с помощью р-пропиолактона и в качестве эмульгатора использовали арла-
цел и твин-80. Кур прививали в возрасте 8 нед, когда полностью исчезали материнские АТ.
Вакцину вводят 2-3 раза с 4-нед интервалом. Подкожное введение оказалось более эффек-
тивным, чем внутримышечное. Максимальные титры сывороточных анти-ГА составляли
1:1280-1:2560. АТ сохранялись в течение 30 или 35 нед соответственно после 2- и 3-кратной
вакцинации. Напряженный иммунитет сохранялся свыше года. При хранении вакцины с
адъювантом при 4°С более 18 мес ее эффективность не снижалась. При однократной вакци-
нации кур в возрасте 16 нед титр АТ начинал снижаться через 12 нед (38а).
Вакцина против НБ оказалась эффективной против парамиксовируса птиц типа 3, вызы-
вающего снижение продуктивности у индеек. Хороший иммунитет создавала вакцина из го-
мологичного вируса, вводимая двукратно. Вакцина из парамиксовируса-3 защищала птицу
от вируса НБ, но не наоборот, т.е. имеет место одностороннее АГ родство (20). Сотрудники
ВНИИЗЖ предложили готовить инактивированную вакцину из шт. La Sota, которую инак-
тивировали этиленимином, а вместо ГОА предложили свой более дешевый адъювант (56).
Оценка поствакцинального иммунитета. Эффективность вакцинации зависит от им-
муногенности вакцинного штамма, наличия пассивного иммунитета, возраста цыплят, дозы
и метода введения вакцины, соблюдения сроков между прививками, техники вакцинации,
очередности применения более или менее аттенуированных штаммов, физиологического со-
стояния организма птицы и пр. Поэтому схемы и методы вакцинации должны разрабаты-
ваться для конкретных хозяйств исходя из эпизоотической ситуации. При проведении про-
филактической вакцинации необходимо добиваться создания 100%-ного напряженного им-
мунитета у птицы всех возрастных групп. Этого можно достигнуть в том случае, если в хо-
зяйстве хорошо организована система контроля поствакцинального иммунитета.
Эффективность вакцинации против НБ можно оценивать двумя способами: биопробой и
определением титра анти-ГА. Во втором способе исследуют сыворотки в РТГА. Для этого
через 12-15 дн после вакцинации берут кровь от 25 цыплят из 5-6 точек каждого птичника.
Напряженность иммунитета проверяют также за несколько дней перед следующей вакцина-
цией. В угрожаемых и бывших неблагополучных хозяйствах напряженность иммунитета у
взрослой птицы проверяют через каждые 60 дн. Вакцинацию считают эффективной, если в
более 80% проб исследуемой сыворотки крови цыплят в возрасте до 30 дн АТ выявляли в
разведениях 1:8 и выше, у молодняка до120дн - 1:16и выше, у взрослых кур - 1:64 и выше,
меньшие титры АТ служат показателем необходимости ревакцинации птицы.
Анти-ГА появляются на 7-10-й день после вакцинации; титр их достигает максимально-
го уровня 1:256-1:2048 к 25-30-му дню. Через 60 ди после вакцинации титры АТ снижаются
(1:8-1:256), а через 5-6 мес остаются только их следы. Через 2 мес после вакцинации у 99,5-
100% исследованных желтков яиц титры АТ выше 1:8. Выявлена четкая корреляция титров
в сыворотке крови и пульпе пера в отношении материнских АТ, так и в отношении активно
выработанных АТ на 60-96-й дн после вакцинации.
Если после ревакцинации уровень сероконверсии равен 1,2 и более, то иммунизация
проведена качественно и своевременно, если он ниже 1,2 или отрицательный, то прививка
птицы была сделана без учета титра пассивных или высокого титра активных АТ. Случаи
низкой сероконверсии или слабой напряженности иммунитета после первичной вакцинации
отмечают при недостаточном АГ-раздражении (заниженной прививной дозе), иммунизации
птицы с высоким титром АТ, сближении срока ревакцинации и частых АГ раздражении
(многократные вакцинации за короткий промежуток времени), нарушении гигиены кормле-
ния и содержания, острых инфекционных болезнях или влиянии других иммунодепрессив-
ных факторов (5).
231
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Высокий уровень АТ и сохранение его в течение года и более после однократной имму-
низации вирусвакцинами из штаммов Bl, La Sota, F, Вг или инактивированной ГОА-
вакциной свидетельствует о циркуляции среди птиц полевого вируса НБ.
Необходимо обратить внимание на недостаточное АГ раздражение при оральном при-
менении вакцины. Однократное выпаивание препарата в рекомендуемых дозах индуцирует
выработку специфических АТ только у 20-70% птиц, а применение его 2 дня подряд, как
правило, обеспечивает устойчивость к вирулентному вирусу у 80-100%. Расчет дозы сделан
в зависимости от активности вакцины, выпускаемой биологической промышленностью
(табл. VI.2)
Таблица VI.2. Расчетная доза в зависимости от исходной
активности вакцины (ЭИД50 см3) против НБ
Метод введения Возраст (дн) ЭИД5о на 1 голову
2-108 6,32-108 2109 6,32-109
Интраназальный 1-300 0,4 1,264 4,0 12,64
Пероральный 1-25 2,0 6,32 12,64 20,0 63,20
26-45 4,0 18,98 40,0 126,0
46-300 6,0 60,0 189,0
Согласно наставлению, в 1 ампуле (2 мл) 500 назальных или 200 оральных доз; содер-
жимое ее растворяют соответственно в 50 и 1000 мл воды. Вакцину вводят птице интрана-
зально - 2 капли (0,1 мл), перорально цыплятам до 25-дн возраста - по 5 мл, до 45-дн воз-
раста - по 10 мл и взрослым - по 15 мл (2 дня подряд). Так как вакцину из шт. Бор/74
ВГНКИ выпаивают однократно, то птица получает дозу в 2 раза меньше, чем указано в таб-
лице. (5).
Генно-инженерные вакцины. Сконструирован рекомбинант вируса оспы птиц, экс-
прессирующий ГА-нейраминидазный протеин вируса НБ. Рекомбинант обладал выражен-
ными защитными свойствами - птица, иммунизированная внутримышечно, после одной
прививки через 28 сут выдерживала заражение вирулентным вирусом (14). Для получения
рекомбинантной живой вакцины ген слияния А вируса НБ клонировали под контролем про-
мотора Р75 в вакцинный штамм ВЧП по Coity Spel. Был отобран один рекомбинант fp EFF2,
у которого ген F был выявлен в концевых повторах геномной ДНК. Считается что данная
векторная система может быть использована для получения генно-инженерной мультива-
лентной вакцины, экспрессирующей гены таких патогенных для птиц вирусов как ИБ, БМ,
ИЛТ, ИББ (18).
СПИСОК ЛИТЕРАТРУРЫ
СГерганов Г. и др. Вет. мед. науки,1978, 15 :8. 2.Герганов Г. и др. Общая и сравн. па-
тол., 1991, 29 :36. 2а.Зуев Ю.В. и др. Ветеринария 1955, 3 :22. 2б.3уев Ю.В. и др. Тезисы
докл. н.-пр. конф., ВНИИЗЖ, Владимир,1995 :262. З.Козаков С.Л. Матер, н. конф., ВНИ-
ИВВИМ, 1992 :155 4.Кушнир А.Т. и др. Матер, н. конф. ВНИИВВИМ, 1992. 4а.Кушнир
А.Т. и др. н.-пр. конф. ”100 лет Курской биоф.”, Курск, 1966 :172. 5.Лагуткин Н.А. Ветери-
нария, 1991, 3 :29. 5а.Лагуткин Н.А. Мат. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :260.
5б.Лагуткин Н.А. и др. Мат. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :259. б.Мавликаев Р.Г.
и др. Ветеринария, 1991, 2 :31. 7,Макагон В.Ф. и др. Тез. докл. н.-пр. конф., 1985 :29.
8.Сергеев В. А. и др. Структ. и биол. вир. жив., М, 1983. 9.Силаева Н.В. и др. ВНИИТИБП,
Труды, Щелково, 1991 :439. 9а.Скотникова Т.А. и др. Мат. Рос.-Амер. конгр. ”Экол. ини-
циатива”, 1966, 4-5. 9б.Смоленский В.И. и др. Ветеринария, 1995 :3. 9в.Смоленский В.И. и
др. Мат. н.-пр. конф. ”100 лет Курской биоф”, Курск, 1996 :296. 9г.Смоленский В.И. и др.
Мат. н.-п. конф. ”100 лет Курской биоф.”, Курск, 1996 :288. 9д.Смоленский В.И. и др. Сб.
тр. ВГНКИ, 1994, 55 :214. Ю.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., М, Колос, 1979 .230.
232
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Юа.Сюрин и др. Курская биофабр., Курск, 1996 :502. И.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол.
жив., Агропромиздат, 1991 :237. 12.Токарик Э.Ф. и др. Ветеринария, 1991, 5 :22.
Иа.Токарик Э.Ф. и др. Патент России № 92014691/13, опубл 27.05.95. 13.Ярмин П. и др.
пробл. имм. специф. проф. с.-х. жив, Птица, София, 1988 :2. 14.Agrawal Р.К. et. al. Avian
Dis, 1991, 35 :2. 15. Barman N.N. et. al. - Indian J anim Sc, 1989, 5 :5 16.Bell I.G. et. al.
Austral Vet J, 1991, 68 :3. 17.Bell I.G. et. al. Rev med zootechn, 1991, 69 :59. 18.Boursnell
M.E.G. et. al. J Gen Virol, 1990, 71 ;3. 19.Bowles M. et.al. Virginia J Sci, 1954 :5. 20.Box P.G.
et.al. Turkeys, 986, 3 :23. 21.Brown J.et.al.- Avian Dis, 1990, 34, 3 :585: 21a.Cajves S. et. al.
Vet Arch, 1995, 65 :1. 22,Doumanova L.Y. et.al. Докл. болг. АН, 1991, 44 :10. 23.Edbauer C.
et.al. Virology, 1990, 179, 2 :901. 24.Eck H. Von Goren E. Avian Pathol, 1991, 20, 3 :497.
25,Ernawati R. Vet Rec, 1984, 115 :352. 25a.Hamid H. et. al. Avian Hath, 1991, 20, 4 :561.
26.Hassan A.B. et. al. Indian Vet J, 1989, 66, 5 :389. 26a.Hiinak A. et. al. J Vet Med, 1992, 39,
9 :641 27.Jestin V. et. al. Arch virol, 1991, 118, 3-4 :151. 28.Glickman R. et. al. J Virol, 1988,
62, 1 :354. 29.Neyt C. et. al. J Virol, 1989, 63 :95. ЗО.Нао О. et. al. Avian Dis, 1987, 31 :649.
31.Hsu M. et. al. Virology, 1987, 156 :84. 32.Palmieri S. et. al. Avian Dis, 1991, 35, 2 :384.
33.Parede L. et. al. Avian Dis, 1990, 34, 4 :803. 34.Paspisil L. et. al. Acta vet Brn J, 1991, 60, 3
:263. 34a.Prenuet J. C. et. al. Proc World Congr on dis of cattle, Dublin, 1986, 1 :685.
35.Rweyemamu M.M. Am J Vet Res, 1986, 47 :1243. 36.Samuel J. L. et.al. Vet Rec, 1989, 124,
8 :193. 37.Schaper U. M. et. al. Virology, 1988, 165, 1 :291. 38.Schmittle S.C. et. al. Cornell
Vet, 1948, 38 :306. 38a.Smitsaart E. N. et. al. Vet Immun and Immunopat, 1990, 26 :254.
39.Spradrow P. B. et.al. Austral Vet J, 1991, 68 , 3 :114. 4O.Wemers C. D. et. al. Arch Virol,
1987, 97 :101. 41.Wong J. P. et. al. J Virol Meth, 1991, 34, 1:13. 42.Zheng S. et. al. Acta Vet of
zootechn Sin, 1992, 23, 2 :187. 43.1orio R. et.al. J Gen Virol, 1992, 73, 5 :1167. 44.Sarmah R.
et.al. Sud J Anin Health, 1991, 2 :147. 45.Spradbrow S.F. et.al. Vet Microb, 1995, 46, 1 :3.
47.Sprodrow P.B. et. al. Vet Microb, 1995, 46, 1 :3. 48.Rehmani S. F. et. al. Vet Microb, 1955,
46, 1/3 :55. 49.Spradbrow S.F. et.al. Vet Microb, 1995, 46, 1/3. 5O.Jayawardane G. W. L. et. al.
Vet Microb, 1995, 46, 1/3. 51.Rehmani S.F. et.al. Vet Microb, 1995, 46, 1/3 :63. 52.Jajawardane
G.W. L. et.al. Vet Microb, 46, 1/3 :69. 54.Ostrowski S. et.al. Avian Path, 1995, 24, 3 :5. 56.Gelb
J. Ledenberg Pa 808046 (заяв. 12.12.91, опубл. 5.10.93). 57.Wertz К. et.al. Vet Microbiol,
1994, 39, 3-4 :299.
ПАРАМИКСОВИРУСНАЯ
БОЛЕЗНЬ ИНДЕЕК (ПМВ-3)
Впервые вирус выделен в 1967 г. от индеек в Канаде (штат Онтарио) (10). В дальней-
шем вирус был выделен в Англии, США и других странах (5, 6, 7, 8). Полагают, что ПМВ-3
может быть вариантом вируса НБ.
Важными клиническими признаками заболевания являются резкое снижение яйцеклад-
ки и нарушение функции дыхательных путей, которое сопровождается учащенным дыхани-
ем, слабым кашлем и хрипами в трахее. Наряду со снижением выводимости цыплят, при-
мерно на 5% ниже нормы, отмечается повышение отхода эмбрионов на 7-9%. Другие авто-
ры снижения оплодотворяемости яиц не наблюдали и указывают, что при отсутствии ос-
ложнений секундарной микрофлорой клинические признаки могут не проявляться.
В Англии штаммы ПМВ-3 были выделены от отловленных экзотических птиц (1). По-
липептидные характеристики различных штаммов, выделенных в Англии и США и наличие
ПМВ-3 инфекции у индеек Северной Америки (2) позволяют авторам предполагать, что ис-
точником инфекции является Северная Америка.
233
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
В естественных условиях наиболее восприимчивы к заболеванию индейки-несушки.
Экспериментальное заражение взрослых индеек вызывает у них кашель (10). При экспери-
ментальном внутривенном и интраназальном заражениях цыплят и индюшат шт. MFH уда-
валось вызвать клинику поражения органов дыхания и значительную гибель птиц. При под-
кожном заражении клинические признаки заболевания были слабее, а контактное заражение
вызывало только сероконверсию. Экспериментальное заражение КЭ и цыплят отдельных
пород кур вызывает их заболевание и гибель (9). Интрацеребральное и интраназальное за-
ражение белых мышат не приводило к гибели. Однако у них через 21 дн выделялись АТ. С
целью диагностики заболевания вируссодержащим материалом заражают в аллантоисную
полость КЭ или культуру тканей фибробластов КЭ и клетки почек КРС. Выделенный вирус-
ный агент тнпируют в PH или в МФА. Указанные реакции применяются также для обнару-
жения АТ в сыворотке крови индеек. Для борьбы с заболеванием проводят полный ком-
плекс ветеринарно-санитарных мероприятий. В Англии (3, 4) применяют ПМВ-3 вакцину
для профилактики болезни. Положительный профилактический эффект также достигается
при применении монАТ (9).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
l.Alexander D.S. et.al. Avian Pathol, 1983, 12, 4 :462. 2.Alexander D.S. etal. Avian
Pathol, 1986, 12 :469. 3.Andersen C. et.al. Avian Pathol, 1987, 12 :469. 4.Awang J.P. etal.
Poultry Sci, 1990, 46 :211. 5.Eskahmd K.H. Procedings, 1988 :43. 6.Leydauli M.M. etal. Proc
37th Western Poultry Dis conf, Davis, Calif, 1988, 46. 7.Marius-Jestin M. et.al. Comp Imm Mier
Infect Dis, 1982, 10, 3/3 :173. 8.Russel P.H. et.al. Avian Pathol, 1989, 18 :125. 9.Saif V.M.
et.al. Poultry Sci Simp, Series, 1989, 21 :235. 10. Tumova B. et.al. Res Vet Sci, 1979, 27 :135.
РИНОТРАХЕИТ ИНДЕЕК
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Ринотрахеит индеек
(РТИ) - это новое респираторное заболевание, впервые зарегистрированное в Англии и
Эльф в середине 1985 г. и быстро распространившееся на птиц всех возрастов. Воспроизво-
дится с развитием вторичных симптомов поражения верхних дыхательных путей при зара-
жении индеек респираторным путем. Вирус распространяется горизонтально. У утят и кур
вспышка заболевания клинически проявляется опуханием головы.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус ринотрахеита индеек (ВРТИ) впервые выделил во Франции Cavanagh в 1986 г.
(1). Не классифицирован. По морфологическим и биологическим свойствам отнесен к се-
мейству Paramyxoviridae, роду пневмовирус.
Морфология и химический состав. Вирионы от 70 до 600 нм, средний диаметр нук-
леокапсида около 150 нм, содержит РНК и липиды, не агглютинирует эритроциты цыплят,
индеек, уток, свиней, лошади, коровы, овцы, мыши, морской свинки, не обладает нейрами-
нидазной и гемолитической активностью.
Культивирование. Размножается в культуре клеток трахеи эмбриона цыплят и индеек,
в линиях клеток почки обезьяны (Vero, МА 104) (5, 6).
Антигенная активность, родство и вариабельность. Вирус отличается в PH от виру-
сов гриппа птиц А (Н1, НЗ до Н12), парамиксовирусов типов от1до4иот6до9и инфек-
ционного бронхита. ВРТИ АГ-родственен вирусу пневмонии мышей (7). Изучено 5 изолятов
вируса, выделенных от больных ринотрахеитом индюшек. Все они идентифицированы как
пневмовирус птиц (8). У больных кур и индеек обнаружены ВНА в РТИ (2,3, 5).
ДИАГНОСТИКА
Для серологического тестирования ВРТИ использовали коммерческий набор для ИФА и
2 метода PH. Сопоставляли выработку АТ против ВРТИ у птиц, которых заражали 4-мя
234
Глав a V I. Parammyxoviridae Парамиксовврусные инфекции
свежевыделенными штаммами вируса или иммунизировали живой вакциной. Выявили в
обоих случаях нарастание титра, уровень которых зависел от метода исследования. Спустя 3
нед после иммунизации живой аттенуированной вакциной выбор неадекватного АГ для тес-
тирования мог быть причиной отсутствия иммуногенности вакцины. Неправильный выбор в
ИФА может препятствовать ранней диагностике РТИ через 2 нед после заражения среди
вакцинированных и невакцинированных индеек (4).
СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Вначале ВРТИ аттенуировали пассажами в культуре клеток Vero и затем использовали в
качестве живой вакцины. Год спустя была получена аттенуированная вакцина, для чего ви-
рус был аттенуирован в клетках Vero до 2-х уровней пассажей (16 и 25) при использовании
2 доз вируса (103 и 104 ТЦД50) птице. Индюшат 10-дн возраста прививают вакциной (одна
капля вакцины на конъюнктиву). Вакцина предохраняет индюшат от клинического заболе-
вания через 3 нед после вакцинации. Введение вируса 25-го пассажа в дозе 103,5 ТЦД50 пти-
цу предохраняло от заболевания 20-дн индюшат в течение 22 нед (9). Описан и другой ме-
тод получения живой вакцины против ринотрахеита индеек. Так, после 30 альтернативных
пассажей (КЭ и органная культура трахеи) вирус вызывал умеренные быстро проходимые
респираторные признаки и создавал иммунитет.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Cavanagh D. et.al. Virus Res, 1988, 11, 3, :241. 2.Cook J. K. A. et.al. Avian Path, 1987, 2,
:403. З.Соок J.K.A. et.al. Avian Path, 1990, 19, 1, : 181. 4.Eterradossi N. et.al. J Vet Med B,
1995, 3,: 175. 5.GiraudP. et.al. Proc, 1988, 61-62, 37 Western Poultry disease conf, Davis, Calif.
6.LeGros F.X. et.al.Proc 1988,63-66, 37 Western Poultry Dis conf, Davis, Calif. 7.Ling R. et.al.
Gen Virol, 1989, 70, : 1427. 8.0’Loan C.J. et.al. J Vet Med В 1992, 39, 6, :459. 9.Williams R.A.
et.al. Avian Pathol, 1991, 20, 4 :585.
ПАРАМИКСОВИРУСНАЯ БОЛЕЗНЬ
ПТИЦ-2 (ПМВ-2)
ПМВ-2 - высококонтагиозная болезнь домашних, синантропных и диких птиц, проте-
кающая в виде эпизоотий, энзоотий и латентного вируносительства без проявления клини-
ческих признаков. В острых случаях болезнь, в зависимости от свойства штамма вируса и
других факторов, проявляется поражением респираторных органов, ЖКТ и снижением яй-
ценоскости. Часто протекает в ассоциации с другими инфекциями и клинически, и патоло-
гоанатомически трудно диагностируется (8, 10). Заболевание зарегистрировано в Англии.
Возбудитель (ПМВ-2/цыпленок/Тула/6889169) также выделен в нашей стране Исаченко и
сотр. (3). В течение 1981-1983 гг. во многих странах Европы, а также в ряде других стран
мира регистрировали заболевание голубей с характерными поражениями нервной системы.
Однако все выделенные вирусы отнесены к птичьему ПМВ-1 (12). Описана вспышка забо-
левания среди голубей в феврале-марте 1992 г. в одном из центральных районов Саудов-
ской Аравии. Клинические проявления были сходны с таковыми при поражении нервной
системы при НБ. Был выделен ПМВ-1 (Па).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Вирус парагриппа кур был изолирован и иденти-
фицирован в 1961 г. Р.А.Банковским и др. от цыплят с поражениями органов дыхания (13).
Вирионы имеют форму палочковидную, шаровидную, отростчатую и мультигеномную. Ша-
ровидные вирионы диаметром 120-300 нм. ПМВ-2 обладают ГА-свойствами. Мол. м РНК
вируса 5,6-10бД. Вирус содержит 9 структурных полипептидов размером от 0,38 до 1,39 кД.
Хорошо репродуцировался в КЭ и клетках фибробластов КЭ. Экстраэмбриональная
жидкость агглютинировала эритроциты цыплят.
235
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Вирус не имел АГ родства с возбудителем НБ. Помимо вируса НБ, в группу парагрип-
позных вирусов птиц входят вирусы Jucapia; PI (Ту) Ont. 6661/68, родственные вирусу пара-
гриппа человека 2-го типа. Недавно от зяблика выделен новый парамиксовирус Bangor, АГ-
отличный от предыдущих. Описаны штаммы парагриппозных вирусов, выделенные от по-
пугаев: шт. 0121, Bangor finch/N 1 relang и Jucapia chicken California 160 (16).
Белок слияния F парамиксовирусов синтезируется в виде неактивного предшественника
Fo, расщепляемого одной из протеаз клетки хозяина с образованием активного белка, со-
стоящего из субъединиц F1 и F2 с дисульфидным мостиком между ними. Выявлен участок
расщепления белка F вируса SV5, состоящий из аргининовых остатков (5).
Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время известно 9 серологических
вариантов парагриппа птиц: ПМВ-1 - цыпленок/Ньюкасл/27; ПМВ-2 - цыпленок /Калифор-
ния/Юкейпа/56 и около 20 Юкейпа - штаммы индюков, попугаев, вьюрков, дроздов, цапель
и др.; ПМВ-3 - индейка /Висконсин/68; ПМВ-4 - утка /Гонконг/ДЗ/75; ПМВ-5 - Австралий-
ский зеленый длиннохвостый попугайчик/Япония/75; ПМВ-6 - утка/Гонконг/199/77; ПМВ-7
- голубь/Теннеси/4/75; ПМВ-8 - гусь/Делавер/1053/76; ПМВ-9 - утка/Нью-Йорк/22/78. Эти
штаммы являются эталонными (12).
Наиболее распространенным сероваром ПМВ птиц является серовар ПМВ-1, который
представлен штаммом различной инфекционное™. От кур изолировано 5 штаммов ПМВ-1,
различающихся по тропизму и спектру патогенности, а именно энтеротропный штамм
(смертность 100%), респираторный и нейротропный (летальность 50%), нейротропный не-
легальный и медленный асимптоматический, не вызывающий клинических признаков забо-
левания. Показана также гетерогенность популяции вирусов Юкейпа (18). В 1981 г. вирус
Юкейпа (шт. В 8599) также изолирован от индюков (15). Степень АГ-родства между виру-
сами Сендай и паротита, Сендай и Юкейпа составляет 37 и 31% соответственно (17).
Проведенный анализ АГ- и биологических свойств 5 штаммов ПМВ-2, изолированных в
СССР в 1986 г., показал их неоднородность как между собой, так и по отношению к этало-
нам ПМВ-2, что подтверждает происходящую эволюционную изменчивость их в современ-
ных условиях (2).
В 1956 г. в Калифорнии был выделен слабовирулентный вирус от больных цыплят, се-
рологически отличавшихся от вируса НБ. Новый серотип ПМВ оказался широко распро-
страненным на территории США. В течение 1975-1978 гг. в США, Японии, Нидерландах,
Гонконге и ряде других стран было выделено еще несколько серотипов ПМВ от диких и до-
машних птиц разных видов. От домашних птиц выделено 5 серотипов вируса (12). Локали-
зация вируса у естественно-восприимчивой птицы и вирусовыделение не изучены.
Антигенная активность. Установлена стабильность АГ-детерминант нуклеопротеинов
ПМВ птиц серотипов 1 и 2 внутри серотипа и полное отсутствие перекрестных реакций с
другими серотипами ПМВ (11). При инфекции индуцирует КСА, ВНА и анти-ГА, обладает
нейраминидазой и гемолитической активностью (14).
Экспериментальная инфекция. Экспериментальная инфекция на цыплятах, как пра-
вило, не сопровождалась клинически выраженным заболеванием. Однако в сыворотках на
14-й день после инфицирования независимо от пути введения вируса, обнаруживались АТ в
титре 1:160. Они выявляются и у контактно подсаженных цыплят к зараженной группе, что
свидетельствует о высокой контагиозное™ казахстанских изолятов. Последние, в отличие от
эталонного шт. СССР/86, оказались апатогенными (6).
Культивирование. Выделенный в 1960 г. от птиц в разных регионах (США, Канада,
СССР, Африка, Ирландия, ФРГ, Израиль) ПМВ культивируется в КЭ и куриных фибробла-
стах, клетках почки обезьяны, вызывает образование синцитиев с эозинофильными цито-
плазматическими включениями, которые содержат вирусные нуклеокапсиды. ПМВ-3
(индюк/Висконсин/68) хорошо размножается в 9-10-дн КЭ и накапливается в титре 6,0-7,0
236
ГлаваVI. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
1g ЭИД50/мл в течение 72-96 ч. Интерферирующая активность установлена у ПМВ-2 серова-
ра в отношении репродукции вакцинного шт. La Sota (ПМВ-1) в КЭ (4).
Ингибитор-чувствительность и резистентность/ Все штаммы ПМВ-2 оказались рези-
стентными к сывороточным ингибиторам овец, свиней, уток и куликов и чувствительны к
термолабильным ингибиторам сывороток морских свинок.
ГА свойства. Все ПМВ обладают ГА активностью (ПМВ-5 ГА эритроциты кур только
после очистки и концентрации). Выделенные в 1987-1989 гг. 14 юкейпаподобных вирусов
проявляли одинаковый спектр ГА активности, а именно, агглютинировали эритроциты кур,
уток, морских свинок, крыс, белых мышей. Не агглютинировали эритроциты баранов, сви-
ней, КРС и лошадей 4 полевых изолята юкейпаподобных вирусов, не связывались с эритро-
цитами белых мышей и крыс. Лучше всего ГА ПМВ-2 проявлялась с эритроцитами КРС,
уток и морских свинок. Помимо ГА активности они различались и по скорости элюции с
эритроцитов, на основании чего были разделены на 2 группы: быстроэлюцирующие (72/87,
307/88, 407/88) - характеризующиеся десорбцией 100% адсорбированного вируса, и слабо-
элюцирующие (11 штаммов) с эритроцитов (лишь на 40-50%). ПМВ-3 (индюк Висконсин)
агглютинирует эритроциты петуха (п-23, Р < 0,005) и морской свинки (п-7, Р < 0,005) и не
вызывает гибели зараженных КЭ (1).
ГАд свойства не изучены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник - больная птица, латентные виру-
соносители. Заражение птицы происходит, в основном, контактным, аэрогенным или тран-
совариальным путями, не исключен алиментарный путь (16).
Спектр патогенности в естественных условиях. Заболевание регистрируется у кур.
Однако к возбудителю чувствительны индейки, воробьи, попугаи. Появление вирусов
Юкейпа в Казахстане, территория которого находится на пути миграции диких птиц, воз-
можных переносчиков данных вирусов также указывает на дрейф вирусов Юкейпа. Приве-
денные факты не исключают возможности появления в ближайшие годы высокопатогенного
юкейпаподобиого вируса и обусловливают необходимость систематического вирусологиче-
ского надзора за ходом АГ-изменчивости ПМВ домашних птиц в различных регионах стра-
ны. ПМВ поражают птиц всех видов, однако распространение того или иного сероварианта
в разных странах и среди птиц различных видов сильно варьирует. Установлена одновре-
менная циркуляция миксо- и парамиксовируса среди декоративных птиц.
ДИАГНОСТИКА
ПМВ-2 широко циркулирует в птицеводческих хозяйствах страны, но мало изучен. Вы-
делен оригинальный ПМВ-2, на основе которого изготовлен диагностикум. Все серовариан-
ты ПМВ выделяются из патологического материала на 9-10-дн КЭ путем заражения в ал-
лантоисную полость (кроме ПМВ-5, который выделяют заражением эмбрионов в амнион
или культуру фибробластов КЭ.
Дифференциальная диагностика. Принадлежность выделенного изолята к ПМВ оп-
ределяют в серологических реакциях (РТГА, PH) с помощью диагностического набора к 9
серовариантам, производимого отечественной биологической промышленностью. Показана
возможность идентификации серотипов 1 и 2 ПМВ птиц с помощью ИФА (главным обра-
зом прямого варианта). Этот метод позволяет проводить детекцию АГ ПМВ в патологиче-
ском материале после предварительного накопления вируса в КЭ (4а).
СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Получена инактивированная вакцина PM-VAC против ПМВ инфекции голубей на ос-
нове шт. La Sota вируса НБ. В качестве адъюванта авторы использовали минеральное мас-
ло. Вакцина обеспечивает продукцию анти-ГА в титрах 6,9 log2 у голубей и 7,2 logz у цып-
лят (19). Создана инактивированная вакцина против ПМВ второго сероварианта (1а).
237
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Амиров А.Х. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИВВиМ, Покров, 1992 :158. 1а.Амдий Э.М.
Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :283. 1б.Амдий Э.М. Там же, :280.
2.Говоркова Е.А. и др. Вопросы вирус, 1991 :59. 3. Исаченко В.А. и др. Экология вирусов,
М, 1975, 3, :67. 4.Козаков С.Л. и др. Тез. докл. н.-пр. конф, ВНИИВВиМ, Покров, 1992,
:155. 4а.Козаков С.Л. и др. Тез. докл. н.-пр. конф, ВНИИЗЖ, Владимир, 1995,281.
5.Вопросы вирусол. “Парамиксовирусы птиц”, 1991, 1, :59. 6.Лагуткин Н.А. и др. Тез. докл.
н.-пр. конф, ВНИИВВиМ, Покров,1992, 156. 7.Саятов М.Х. и др. Вопр. Вирус., 1992, : 116.
8.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив, М., ВО Агропромизд, 1991. 9.Тер-Петросян В.Э. и
др. Докл. АН Казахстана, 1992, 2 :66. Ю.Фомина Н.В. и др. Вир. жив, MBA 1991.
11.Черных А.А. и др. Тез. докл. н.-пр. конф, ВНИИВВиМ, Покров, 1992 :326. lla.Al Afaleq
A.J. et. al. Rev.e'lev et med vet poys trop, 1993, 46 :545. 12.Alexander D.J. Vet Bull, 1980, 50
:737. 13.Bankowski R.A. et.al. Sci, 1960, 132 :292. 14.Eleury H.J. Bull Soc path exot, 1982, 75,
1 :9. 15.Franciosi C. et. al. Bull Inst sieroter, Milan, 1981, 60, 3 :225. 16Paterson R.C. et.al. J
Cell Biochem, 1991, Suppl 15Ec-90. 17.Ramachondron S. et.al. Indian Vet J, 1988, 65, 10:855.
18. Vindevogel H. et. al. Ann Vet Med, 1992, 136, 5, 347: 19.Wawrzkiewic Z. S. et. al. Med Vet,
1991, 47, 3 :108
СИНДРОМ “ГОЛУБОЙ ГЛАЗ” СВИНЕЙ
Синдром “голубой глаз” свиней (СГГС) болезнь, проявляющаяся кератоконъюнктиви-
том с голубой окраской роговицы, нарушением нервной системы, снижением репродуктив-
ности, высокой гибелью поросят.
В 1980 г. в Мексике впервые зарегистрировали неизвестную ранее болезнь “sindrome del
ojo azul” (SOA). Она широко распространилась на территории Мексики - зарегистрировано
более 500 случаев, проявлявшихся преимущественно в весенне-летний период (11,12).
Клинические признаки. В хозяйствах с замкнутым циклом первые симптомы наблю-
дали у поросят-сосунов. Характерные клинические признаки выявили у 2-15-сут поросят:
выраженное угнетение и нервные расстройства, изгибание тела (спереди назад); атаксия,
ригидность тазовых конечностей, мышечный тремор, атипичная поза (сидячее положение);
у отдельных особей сильное возбуждение. Анорексия наступала после того, как животные
теряли способность двигаться. Одновременно у больных наблюдали конъюнктивит с отеком
век и слезотечением, причем у 1-10% животных обнаруживали одно- или двустороннее по-
мутнение роговицы. Гибель наступала в течение 4-6 сут после начала появления клиниче-
ских признаков. Среди поросят, родившихся во время вспышки, заболевало 20-50%
(смертельный исход у 87-90%).
Болезнь прогрессировала в течение 2-9 нед. У 30-сут поросят и старше отмечали крат-
ковременную анорексию, гипертермию, чихание, кашель, иногда депрессию, атаксию, ма-
нежные движения, покачивание головой, одно- и (или) двусторонний кератит и конъюнкти-
вит. Среди животных старше 3 мес эти признаки проявлялись у 1-4% (при этом отмечали
низкую смертность). Смертность быстро возрастала и затем быстро снижалась. При оконча-
нии одной вспышки новых случаев заболевания не регистрировали до ввоза на ферму чув-
ствительного поголовья.
Клинические признаки различны и зависят от возраста поросят. В 2-15-дн возрасте они
наиболее чувствительны и клинические признаки проявляются внезапно. На разных этапах
изучения заболевания констатировались разные клинические признаки и степень их прояв-
ления. Так, в 1980-е гг. смертность и первые признаки заболевания отмечались у поросят
30- дн и более старшего возраста. С 1983 г. отмечались вспышки энцефалитов с высокой
238
ГлаваУГ Paramtnyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
смертностью среди поросят массой15-45 кг (6, 15, 16, 17, 18, 19). С 1988 г. возникли про-
блемы тяжелых орхитов, эпидидимитов и атрофии тестикул (22, 23). Синдром “голубой
глаз” может начинаться в любой зоне в имбредных стадах, но обычно наблюдается в ма-
точных стадах с признаками поражения ЦНС и высокой смертностью поросят (14, 16, 20).
При этом часто наблюдалось помутнение роговицы без других признаков. Больные поросята
погибали через 48 ч после появления клинических признаков, иногда смерть наступала
лишь на 4-6-й день.
В помете свиноматки поражалось 20-65% поросят. Клинически заболеваемость в поме-
те проявлялась у 20-50%, смертность составляла 87-90%. Гибель продолжалась 2-4 нед в за-
висимости, главным образом, от системы свиноводства. Большинство свиноматок поражен-
ных пометов клинически были здоровы. У некоторых развивалась анорексия за 1-2 дн до
клинического проявления болезни у поросят; на роговице также возможны помутнения в те-
чение вспышки заболевания.
У поросят старше 30 дн наблюдались легкие, проходящие клинические признаки в виде
анорексии, лихорадки, чихания и кашля. Признаки поражения нервной системы менее вы-
ражены, но когда они есть, включают угнетение, атаксию, вращение головы, запрокидыва-
ние головы. Как и у поросят 5-15-дн возраста наблюдалось одно-или двухстороннее по-
мутнение роговицы и конъюнктивиты, длительно наблюдаемые на ферме без других клини-
ческих признаков заболевания. Только у 1-4% поросят старше 30 дн может быть летальный
исход. В других случаях описаны вспышки заболевания среди поросят массой 15-45 кг с
20%-ной смертностью и тяжелыми поражениями ЦНС; помутнение роговицы при этом бы-
ло в 30% случаев (15).
У супоросных маток наблюдались аборты, увеличивалось количество мертворожденных
и мумифицированных плодов до 24 и 12% соответственно. У маток заболевших поросят
клинические симптомы болезни не выражены. У некоторых новорожденных за 1-2 сут до
начала болезни наблюдали помутнение роговицы. Бесплодие у зараженных маток достигало
20% (спустя 6-8 мес после переболевания воспроизводительная функция у маток восстанав-
ливалась). У хряков на 14-40% снижалась плодовитость, что связано с орхитами и эпиди-
димитами (3, 22). Возможна вторичная инфекция, но заболеваемость и гибель при этом
снижались, одновременно возрастало количество безрезультатных осеменений маток, абор-
тов, мумифицированных плодов, появлялись животные с голубой окраской глаз.
Патоморфологические изменения. При патологоанатомическом исследовании трупов
поросят, пораженных синдромом “голубой глаз”, специфических признаков не установили,
иногда наблюдали пневмонию в вентрально-краниальных долях легкого, легкую дистонию
желудка и незначительный асцит, в перитонеальной полости содержалась серозная жид-
кость с хлопьями фибрина. Иногда наблюдались геморрагии в перикарде и почках, у хряков
- орхиты, эпидидимиты, позднее - атрофия тестнкул с наличием или без грануломатозных
образований ( 3,22).
Главные патогистологические изменения локализовались в головном и спннном мозге.
Признаки энцефаломиелита в сером веществе таламуса, сред него мозга и коры характери-
зовались многофокусным или диффузным глиозисом, периваскулярной инфильтрацией
(манжетного типа) лимфоцитов, плазматических и ретикулярных клеток, некрозом нейро-
нов, нейрофагией, менингитами (10). Внутриклеточные (цитоплазматические) тельца-
включения обнаруживались в нейронах. В легких - рассеянные или локализованные зоны
интерстициальной пневмонии с инфильтрацией мононуклеарными клетками.
Изменение глаз - помутнение роговицы - характеризовалось отеком роговицы, инфильт-
рацией нейтрофилами, макрофагами или мононуклеарными клетками эндотелия роговицы.
Наружный слой роговицы часто содержит цитоплазматические вакуоли и, иногда, цито-
плазматические тельца-включения. У некоторых животных наблюдался тонзиллит с деск-
239
ГлаваУ! Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
вамацией эпителия и разрастанием клеток в криптах. Более значительными были микро-
скопические изменения ( в основном в головном и спинном мозге): негнойный энцефалит,
поражение серого вещества таламуса, среднего мозга и коры головного мозга, мультифо-
кальное и диффузное поражение глии, скопление в периваскулярных пространствах лейко-
цитов, лимфоцитов и ретикулярных клеток, нейрононекроз, нейронофагия, менингит, хо-
риоидит, выраженность которых варьировала. У животных наблюдали помутнение и отек
роговицы, инфильтрацию радужной оболочки нейтрофилами, макрофагами и мононуклеар-
ными клетками.
Патогенез. Не ясен механизм помутнения роговицы. Экспериментально воспроизвести
этот признак заболевания оказалось сложно. Возможно, что эти изменения обусловлены
иммунологическими реакциями, подобно наблюдаемым и при аденовирусном гепатите со-
бак. Недавние результаты показали, что вирус реплицируется в роговице, формируются ци-
топлазматические включения и в этот период начинает развиваться помутнение роговицы.
Иногда помутнение роговицы наблюдалось у клинически здоровых и устойчивых к зараже-
нию свиней; через некоторое время такие поражения проходит бесследно. Установлено, что
вирус проникает в матку, преодолевая плацентарный барьер (8, 9,10,11,12,17).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус выделен Н.А. Stephano и др. в 1981 г, идентифицирован как член рода
Paramyxovirus, серологически не связан с ранее описанными парамиксовирусами (11). Изо-
лят назван blu eye paramyxovirus (ВЕР). Представители рода парамиксовирусов выделены
от свиней и в других странах. Так , в Японии в 1954 г. Sasahara и др. выделили японский
Г A-вирус или вирус Сендай от поросят с признаками инфлюэнцы и энцефалита. В Канаде
(5) выделили гемагглютинирующий вирус из мозга свиньи при энцефаломиелите. В Израи-
ле (7) парамиксовирус выделен из носоглоточных смывов свиней.
Морфология и химический состав. Электронно-микроскопическими исследованиями
(негативное контрастирование) установили, что возбудитель болезни можно отнести к пара-
миксовирусам. Вирусные частицы полиморфны, чаще сферические с ворсинками (шипи-
ками), величиной от 135-148 до 257-360 нм, нуклеокапсиды разрушенных вирусных частиц
характерны для парамиксовирусов и располагаются одиночно (диаметр - 20 нм, длина -
1000-1630 нм). Вирус не имеет АГ-родства с ПМВ птиц 1, 2, 3, 4, 6 и 7 серотипов и с виру-
сом Сендай; а также с ПГ 1, 2, 3, 4а, 4в и 5 и коронавирусами. При проведении ИФА с
конъюгатами к ВИГС, ПГ-3, коронавирусу КРС, синцитиальному вирусу, ВБА и ГА ВИРУ-
СУ энцефаломиелита получили отрицательные результаты. Вирионы - плеоморфные, более
или менее сферические частицы размером (135-148) (257-360) нм имеют оболочку. Нуклео-
капсид разрушенных вирусных частиц единичный, полный, диаметром 20 нм и длиной
1000-1630 нм и более.
Устойчивость. Инфекционность вируса нейтрализуется обработкой эфиром, хлорофор-
мом, формалином, р-пропиолактоном, однако устойчива к актиномицину Д и нагреванию:
при 56°С вирус инактивируется в течение 4ч. Плавучая плотность в градиенте сахарозы 1,21
г/см3 (14,15).
ГА свойства. Вирус агглютинирует эритроциты цыплят, морских свинок, мышей, крыс,
кроликов, хомячков, лошадей, свиней, коз, кошек, собак, и человека (групп А, В, АВ и 0).
Спонтанная элюция наблюдается через 30-60 мин при 37°С. Гемадсорбцию эритроцитов
цыплят наблюдали при заражении культуры клеток РК-15. Возбудитель агглютинирует так-
же эритроциты КРС, козы, кур, вызывает гемадсорбцию на зараженных клетках и, видимо,
обладает ГА- и нейраминидазной активностью (8,10,13,15,17,18,19).
Культивирование. Вирус хорошо размножается в перевиваемых культурах клеток го-
мо- и гетерологичных животных: РК - 15, почек кошек, эмбриональной ткани КРС, дер-
мальной ткани лошади, ВНК-21, вызывая ЦПЭ в виде образования синцития, включающего
240
Глава VI. Parammyxoviridae Парамиксов ярусные инфекции
от 3 до 20 ядер. В культуре клеток РК-15 спустя 24-48 ч после заражения обнаруживали ок-
руглые клетки, в цитоплазме - вакуоли. Через 7 сут после заражения отмечали генерализо-
ванный ЦПЭ (в других культурах клеток наблюдают частичный лизис и очаговый ЦПЭ).
После инокуляции 6-дн КЭ до 50% последних через 72 ч.
Экспериментальная инфекция. При экспериментальном инфицировании (внутри-
черепное введение) 1-дн поросят-сосунов в дозе 104,5 ТЦД 50 вируса инкубационный период
составлял 18 ч, при интратрахеальном и интраиазальном - 66-85 ч, при совместном содер-
жании с больными животными - 19 сут. При этом гибель животных наступала спустя 4 сут,
6-30 сут, и 21 сут. соответственно. У 1-дн поросят развивается нервный синдром через 20-66
ч после заражения. У некоторых, 20-50-дн поросят развивался нервный синдром через 11 дн
после заражения. У супоросных свиноматок, зараженных в течение беременности, поража-
ются репродуктивные органы. Здоровые восприимчивые поросята при контакте с экспери-
ментально зараженными заболевают через 19 дн (4, 8, 9). При всех способах заражения об-
наруживали негнойный энцефалит. Помутнение и голубое окрашивание роговицы при экс-
периментальном заражении поросят не наблюдали, но отмечали гиперчувствительность, со-
провождающуюся образованием отека. Удавалось экспериментальное заражение кошек
(Felis catus). Через 2 нед определяли специфические АТ (в РПГА 1:6 и в PH 1:4). Через 3 нед
после заражения титры АТ составляли 1:192 и 1:64 в РПГА и PH соответственно. При экс-
периментальном заражении кошек вирусом СГГС имеет место сероконверсия, но не возни-
кает вирусоносительство (2).
Локализация вируса. Вирусологическими исследованиями возбудитель обнаружили в
крови, головном мозге, печени, селезенке, мезентериальных лимфоузлах, но видимых мор-
фологических изменений в этих органах не установили.
Антигенная активность. У зараженных 20-80-сут поросят с помощью РТГА обнару-
жили ВНА до появления у животных клинических признаков болезни, у 1-дн поросят после
интраназального заражения АТ выявили в титре 1:256 и выше спустя 28 сут (за 2 дн до ги-
бели). Во всех случаях у экспериментально зараженного молодняка вирусспецифический АГ
обнаруживали ИФ в нейронах коры головного мозга (20).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
В Мексике заболевание имеет важное экономическое значение, поскольку получило ши-
рокое распространение. В естественных условиях восприимчивы только поросята. Субкли-
ническая инфекция свиней - главный резервуар вируса СГГС. Вирус может распространять-
ся людьми и транспортом и, возможно, птицами и ветром. Заболевание вновь развивается
при добавлении в стадо чувствительных животных. СГГС чаще встречается в марте-июле -
самые сухие и жаркие месяцы, но вспышки могут быть и в течение года. Предполагается,
что естественное заражение может происходить через дыхательные пути (20, 21, 22, 23).
ДИАГНОСТИКА
Основана на клинико-морфологических данных, гисто- и вирусологических исследова-
ниях. Для изолирования вируса суспензию из головного мозга, лимфоузлов глотки и легких,
подозреваемых особей, инокулируют в первичную культуру клеток почки поросенка (или
перевиваемую культуру клеток РК-15). Монослой каждые 24 ч просматривают для обнару-
жения синцития. Специфичность ЦПЭ подтверждают в РГА и гемадсорбции с эритроцита-
ми разных животных, а также ЭМ и МФА (последний применяют также для прямого обна-
ружения вирусспецифического АГ вируса в клетках срезов органов, замороженных в крио-
стате). Для определения вирусспецифических АТ используют РЗГА, PH и ИФА.
Известно, что у свиней помутнение роговицы встречается очень редко, его наблюдают у
отдельных животных при травмах, авитаминозе А и экспериментальном заражении ВБА.
БА имеет с СГГС сходные клинические признаки, при ней также поражаются ЦНС, легкие,
репродуктивные органы, но ВБА индуцирует образование внутриклеточных включений, а
16 Зак. Na 171
241
ГлаваVI. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
главным признаком могут служить аборты. Следует помнить, что помутнение роговицы при
естественном течении БА никогда не наблюдается. К тому же ВБА является ДНК-
содержащим и имеет много отличий от возбудителя СГГС (например, при инокуляции кро-
ликам вызывает энцефалит и гибель).
Синдром “голубой глаз” имеет также сходство с энцефалитом, вызывемым ГА вирусом,
но помутнение роговицы при этом отсутствует. ГА-вирус, к тому же, не агглютинирует
эритроциты лошади, с трудом культивируется в культурах клеток (за исключением первич-
ной почки свиньи), величина его составляет 80-120 нм.
По некоторым признакам СГГС имеет сходство и с другими болезнями: парвовирусной
инфекцией (поражаются генитальные органы самок); гриппом (респираторные органы); с
болезнями, протекающими с нервным синдромом (классическая чума свиней, энтеровирус-
ная инфекция, отечная болезнь и др.). Все эти патологии следует дифференцировать от син-
дрома “голубой глаз” (20, 21).
ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ
Специфическое лечение при СГГС не разработано, эффективна симптоматическая тера-
пия, направленная на предупреждение развития микрофлоры, устранение диареи, кашля.
Сыворотка свиноматок-реконвалесцентов при пероральном введении не защищает поросят
от болезни (1).
В Мексике разработана и испытывается убитая вакцина из вируса, выращенного в мо-
нослойных культурах клеток (23).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Бакулов И.А. и др. Ветеринария, 1992, 9 :65. 2.Аге11апе A. et.al. Vet Мех, 1992, 23,
4:380. 3.Campos H.R. et.al. Mem 24th Congr Mex Vet Esp Cerdos, Morelia, Mex, 1989:62.
4.Garcia G.J. etal. Mem 23th Congr Ass Mex Esp Cerder, Leon, Mex,1988:88. 5.Greig A.S.
et.al. Res Vet Sci, 1971, 12:305. 6.Gay G.M. etal. Proc 23th World Vet Congr, Monreal,
1987:161 7.Lipkind M. et.al. J gen Virol, 1986, 67:427. S.Moreno-Lopes J. etal. Arch Virol,
1986, 91:221. 9.Perez P.F. et.al. Mem 23th Congr Ass, Mex Vet Esp Cerdos, Leon,1988:81.
lO.Ramires T.C. et.al. Proc 7th Int Congr Pig Vet Soc, Mexico City, 1982:152. ll.Stephano H.A.
Sint Pore, 1986, 5 (12):41. 12 Stephano H.A. et.al. Mem Reum Inv Pecu Mex, 1983:523.
13.Stephano H.A. et.al. Proc 8th Int Congr Pig Vet Soc, Ghent, 1984 :71. 14.Stephano H.A. Sint
Pore, 1985, 4 (5):42. 15.Stephano H.A.. Mem 19th Congr Assoc Mex Vet Esp Cerdos, Merida,
1985:71. 16.Stephano H.A. Vet Mex, 1986, 17:120. 17.Stephano H.A. Sint Pore, 1986, 5(12):26.
lS.Stephano H.A. et.al. Proc 8th Int Congr Pig Vet Soc, Barcelona, 1986:445. 19.Stephano H.A.
et.al. Proc 9th Int Congr Pig Vet Soc, Barcelona, 1986:456. 20.Stephano H.A. et.al. Vet Res,
1988, 122:6. 21.Stephano H.A. et.al. Mem 23th Congr Assoc Mex Esp Cerdos, Leon, 1988:90.
22.Stephano H.A. et.al. Proc 11th Int Congr Pig Vet Soc, Barcelona, 1990:456. 23.Stephano H.A.
Bleu Eye Disease. Disease of swine, New York, London, Tokio,1994:237.
ПАРАГРИПП-3
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Parainfluenza-3
Парагрипп-3 (ПГ-3) КРС (транспортная лихорадка КРС, параинфлюэнца-3) - острая
контагиозная вирусная болезнь, главным образом телят, характеризующаяся поражением
органов дыхания.
Впервые ее писали в США в 1932 г. (7) установив при этом роль пастерелл в этиологии
болезни. Представление об этиологии болезни изменилось в 1959 г., когда от больных телят
242
ГлаваУТ. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
был изолирован вирус, сходный по АГ-структуре с вирусом ПГ-3 человека. В СССР ПГ об-
наружен в 1968 г. (11). В настоящее время болезнь зарегистрирована во всех странах мира,
где развито промышленное животноводство (32,33,35,38, 39,42).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Диапазон проявления
болезни разнообразен: от легких ринитов или бронхитов до тяжелой бронхопневмонии. Те-
чение болезни обусловливается многими факторами: способом заражения животных, их
иммунным и физиологическим состоянием, вирулентностью штамма. Ввиду того, что сим-
птомы ПГ-3 сходны с клиническими проявлениями ВД-БС, ИРТ, аденовирусной инфекции и
хламидиозов, клиническое течение болезни изучали путем постановки опытов на телятах-
гнотобиотах. Инкубационный период болезни длится 24-30 ч. Клинические признаки прояв-
ляются через 24-36 ч после введения вируса. Первые симптомы - повышение температуры
тела и серозные истечения из носа. Максимально температура повышается на 3-5-й день до
40,9-41,5°С, нормализуется на 7-10-й день. У животных выражены угнетение, одышка, ка-
шель, серозно-слизистые истечения из носа, которые переходят в гнойные, дыхание поверх-
ностное и частое, хрипы продолжаются до 12-14-го дня. Животное отказывается от корма.
Если нет осложнений секундарной бактериальной микрофлорой, через 2-3 нед наступает
выздоровление (2,3, 4,5, 6,10,28).
В естественных условиях животные имеют АТ, но вирус способен вызывать инфекцию.
В зависимости от титра АТ проявляется реакция. Наиболее продолжительное выделение ви-
руса наблюдается у телят, не имеющих АТ. В естественных условиях заболевание сущест-
венно отличается от экспериментального, так как может наблюдаться присутствие несколь-
ких вирусных агентов, осложнение стрессовыми факторами, снижающими резистентность
организма, и соответствующими секундарными инфекциями. У телят при подостром и хро-
ническом течениях отмечают слизисто-гнойные выделения из носа и глаз, признаки пнев-
монии и плеврита, иногда энтериты. При вскрытии: бронхопневмонию, плеврит, фибриноз-
ный перикардит, иногда гидроторакс, гнойное воспаление кишечника. У буйволов болезнь
сопровождается поражением органов дыхания и диареей, у молодняка наблюдается взъеро-
шенность, а иногда и выпадение шерстного покрова. На исход болезни влияют вирулент-
ность циркулирующего штамма вируса и факторы, осложняющие течение болезни. Тяжелое
течение болезни, приводящее животных к гибели, - результат одновременного инфицирова-
ния вирусом ПГ-3 и пастереллами, а также воздействия стрессов, в то же время каждый
фактор в отдельности не приводит к столь тяжелому течению болезни. У взрослых живот-
ных болезнь, как правило, не сопровождается симптомами респираторного заболевания. У
стельных коров инфекция может привести к внутриутробному заражению плода, абортам
или рождению нежизнеспособных телят (12,13,14,15,16,17,26,27).
Патологоанатомические изменения, в основном, наблюдаются в органах дыхания:
катаральное воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей; в течение 7-9 дн
(в острый период) слизистая оболочка отечна, гиперемирована. В полостях носа и околоно-
совых пазух слизисто-гнойный, в просветах трахеи и бронхов серозно-гнойный экссудат. В
брюшной и грудной полостях скапливается серозный экссудат. Отмечается бронхопневмо-
ния. Пораженные участки от сине-красного до серого цвета, увеличены, плотны. Поверх-
ность разреза влажная, при надавливании отделяется большое количество мутной жидкости.
Средостенные лимфоузлы отечны и пронизаны кровоизлияниями. Обильные точечные и
пятнистые кровоизлияния находят в тимусе, на плевре, брюшине, эпикарде. На слизистой
оболочке сычуга, кроме кровоизлияний, наблюдают также эрозии и язвы. Слизистая обо-
лочка кишечника отекшая и с кровоизлияниями (10,18, 19, 20,28,37).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделили и описали Рейзенгер и Хедделсон в 1959 г.
16»
243
ГлаваVI. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Морфология и химический состав. Морфология ВПГ-3 сходна с таковой вируса НБ
(Рис.36). О существовании 5 структурных белков вируса было известно ранее: - фосфопро-
теин (Р, мол.м. 83 кД), ГА-нейраминидазный гликопротеин (HN, мол. м. 69 кД), главный
нуклеокапсидный протеин (NP, мол.м. 66 кД), гликопротеин (F, мол.м. 55 кД), матричный
белок (М, мол.м. 38 кД). Шестой белок L (мол.м. 180 кД) является, очевидно, полимеразой.
Клеточный активный белок А(мол.м. 43 кД), ассоциированный со многими оболочечными
вирусами, обнаружен как седьмой белок (21,25, 40).
Устойчивость. ВПГ-3 не обладает высокой устойчивостью. Он быстро разрушается
под действием высокой температуры и УФ-излучения. При 37°С титр вируса в течение 2-4
сут снижается на 1-3,5 1g ТЦД; прогревание при 56°С в течение 30 мин ведет к утрате ин-
фекционной и ГА активности. Вирус инактивируется при 60°С в течение 30 мин, при 50°С -
за 120 мин, при обработке 0,5%-ным р-ром формалина и 1%-ным р-ром р-пропиолактона
повреждаются ГА и уничтожается инфекционность вируса; 0,2%-ный р-р додецилсульфата
натрия и 1 М р-р MgCl2 снижает как инфекционную, так и ГА-активности. Обработка 0,4%-
ным этиленимином в течение 20 ч не действует на ГА-активность, но уничтожает инфекци-
онность вируса. Под воздействием жирорастворителей (хлороформа, эфира) полностью те-
ряется инфекционная активность вируса. Р-р (8 М) мочевины уничтожает ГА-активность
вируса. Дезоксихолат натрия при 37°С в течение 1 ч действует на вирус слабее: при концен-
трации 0,1% титр ГА снижался в 8 раз, а инфекционный титр падал на 5-6 1g ТЦД50. ЭМ
показала, что детергент растворяет только липиды, оставляя в свободном виде ГА. На вирус
губительно действуют низкие значения pH: при 6,8-7,5 он хорошо сохраняется, но при pH
3,4 быстро инактивируется. Изучено влияние температуры н относительной влажности на
выживаемость ВПГ-3 в аэрозоле. Наибольшая стабильность его в аэрозоле наблюдалась в
среде Игла при 6°С и относительной влажности 30% (1, 7, 9,34)
Антигенная структура, вариабельность и родство. ВПГ-3 обладает выраженной АГ
активностью и имеет 2 типа АГ, различающихся по свойствам и специфичности: рибонук-
леопротеидный, или S-АГ, и поверхностный V-АГ. 1-й обнаруживается в РСК, 2-й - в РСК и
РТГА. АГ вариабельности штаммов вируса ПГ-3 не установлено. Все штаммы в разных
странах от телят и взрослых животных по АГ- структуре идентичны и соответствуют прото-
типному шт. SF-4, выделенному в США. Установлены различия в вариантах вируса ПГ-3 по
ГА-, нейраминидазной и синцитий-образующей активности. Вирусы ПГ-3 КРС и человека
АГ-сходны между собой. Их прототипные штаммы различаются между собой в перекрест-
ной РЗГА только 4-кратно. В HN-АГ идентифицировано 6 АГ-сайтов, 3 из которых связаны
с нейтрализацией и содержат 11 эпитопов. HN-гликопротеины вирусов ПГ-3 человека и КРС
имеют 3 общих эпитопа. Остальные 10 HN-эпитопов ВПГ-3 человека у ВПГ-3 КРС отсутст-
вуют. У обоих вирусов обнаружена значительная консервативность и гомология в амино-
кислотной последовательности NP-, Р-, С- и М-белков (34а). ПГ-3 КРС отличается от вируса
ПГ-3 человека по белку HN (41а). Однако белок F ПГ-3 КРС имеет 80,44 и 22% гомологии с
аналогичными белками ПГ-3 человека, вирусов Сендай и НБ.
Локализация вируса. Вирус ПГ-3 относится к возбудителям, которые оказывают пря-
мое воздействие на респираторный тракт. При попадании в носовую полость или другие
участки дыхательной системы вирионы внедряются в эпителиальные клетки, где они быстро
размножаются. Затем большое число их выделяется на поверхность слизистых оболочек,
поступает в слизь, тем самым разрушая важный защитный барьер - слизистую оболочку,
что создает благоприятные условия для секундарной микрофлоры. Движение слизи и возду-
ха способствует распространению вирусных частиц по всей дыхательной системе с после-
дующим заражением других эпителиальных клеток.
ВПГ-3 удается изолировать от экспериментально инфицированных и естественно боль-
ных животных: через 1-9 дн после заражения - из экскретов респираторного тракта, через 3-
244
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
10 дн - из гортани и трахеи, через 1-17 дн - из легких, в течение 2-4 дн - из миндалин и над-
гортанных, бронхиальных лимфоузлов; в течение 1-2 дн - из селезенки, печени, сердца,
надпочечников. Его также изолируют из тестикул телят и быков-продуцентов и часто из
спермы быков-производителей.
Антигенная активность. АГ-активность штаммов не зависит от нейраминидазной ак-
тивности. Как при естественной инфекции, так и при иммунизации появляются специфиче-
ские АТ, которые обнаруживаются в PH, РСК, РТГА, РДП. У экспериментально заражен-
ных телят анти-ГА появляются первыми - на 6-7-й день, титр их быстро нарастает и в пери-
од с 15-го по 21-й день достигает 1:256 и более, сохраняясь на этом уровне 6 мес. ВНА иг-
рают незначительную роль в образовании иммунитета к ПГ-3, который обусловлен, глав-
ным образом, секреторными АТ. При нормальном развитии беременности материнские АТ
де проникают через плацентарный барьер в эмбрионы. Поэтому присутствие специфических
АТ в сыворотке крови плода доказывает возможность внутриутробной инфекции. Различ-
ные белки одного и того же вируса отличаются по АГ активности, например, гликопротеины
HN вируса ПГ-3 вызывали более выраженный АТ-ответ, чем гликопротеин F (49а).
Экспериментальная инфекция. Лабораторные животные невосприимчивы. Заражение
телят удается в случае отсутствия у них специфических АТ. Пики цитотоксичности, которые
колебались от 12 до 53%, наблюдали на 6-9-й день после заражения при соотношении эф-
фекторных клеток и клеток-мишеней 100:1. Гибель инфицированных вирусом ПГ-3 клеток
де превышала 5% (33а).
Культивирование. ВПГ-3 хорошо размножается в первичных культурах клеток ПТ,
ПЭК, легких и тестикул теленка; наиболее чувствительны клетки почки, легкого и тонкого
кишечника, менее чувствительны клетки лимфоузлов, тестикул, тимуса и печени. В различ-
ных культурах клеток КРС все штаммы ПГ-3 вызывают сходное ЦПД, характеризующееся
.образованием синцития и вакуолей. Сроки проявления гемадсорбции и ЦПД зависят не от
щтамма, а от вида культуры клеток.
ВПГ-3 размножается в диплоидных перевиваемых культурах клеток: HeLa, Нер-2, КВ,
.МДВК, ВНК-21, Vero, АИ-ВЕК. В стационарных 2-3-сут культурах MDBK и ПС (почка сай-
ги) в течение 10 пассажей титр вируса ПГ-3 составлял 4,75-5,0 1g ТЦД^о/мл и 7,0-7,5 1g
ТЦДзо/мл соответственно (9а). ВПГ-3 размножается в КЭ, зараженных на ХАО, в аллантоис-
ную и амниотическую полости, накапливаясь в титрах 103-108’3 ЭИ^о/мд. Однако заражен-
ные эмбрионы не погибают, поэтому при первичном выделении вируса можно использовать
КЭ, но для доказательства наличия его в экстраэмбриональной жидкости ее испытывают в
культуре клеток почки теленка.
ГА свойства. ВПГ-3 агглютинирует эритроциты морской свинки, кролика, свиньи,
обезьяны, коровы, мышей, голубя, буйвола, овцы, козы, плохо агглютинирует эритроциты
человека и не агглютинирует эритроциты лошади. Данные об агглютинации эритроцитов
кур противоречивы.
ГАд свойства. В основе явления ГАд лежит сродство рецепторов ВПГ-3, находящихся
на поверхности пораженной клетки, с рецепторами эритроцита, что приводит к их взаимно-
му сцеплению аналогично РГА. Преимущество этой реакции состоит в том, что она стано-
вится положительной еще до появления отчетливых цитопатических изменений в инфици-
рованных клетках уже через 4 ч после заражения. Клетки, инфицированные ВПГ-3, лучше
всего сорбируют эритроциты морской свинки, слабее - эритроциты кролика, белой мыши и
других животных. Вирус вызывает диффузную адсорбцию эритроцитов. Для постановки ре-
акции используют 0,5%-ную взвесь стерильно взятых и отмытых эритроцитов морской
свинки, которые добавляют по 0,2 мл в пробирки с испытуемой клеточной культурой.
245
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные телята, кото-
рые в острой стадии болезни выделяют вирус в количестве 106-107’5 ТЦД5о/мл. Заражение те-
лят происходит воздушно-капельным путем и, возможно, перорально, так как установлено
выделение вируса с молоком, фекалиями и вагинальными истечениями. Не исключается пе-
редача возбудителя и половым путем.
В естественных условиях ВПГ-3 вызывает заболевание у КРС, поражая до 90-100% жи-
вотных и обусловливая в 20-25% случаев вспышки респираторных болезней. Парагриппом
болеют телята не старше года. АТ к ВПГ-3 обнаружены у 60-100% клинически здоровых те-
лят; они также выявляются у овец, коз и верблюдов. Ввиду широкого распространения ПГ-3
среди поголовья овец, рекомендуется регулярная вакцинация овец живой вакциной к ПГ-3
КРС. Имеются сообщения о выделении вируса ПГ-3 (шт. SF-4) от буйволов, лошадей, собак
и крыс (22,23,24,36, 55, 56).
ДИАГНОСТИКА
Включает: а) обнаружение АГ в патологическом материале (мазках, отпечатках, сре-
зах), полученном от больных животных в РИФ; б) выделение возбудителя из патологическо-
го материала в культуре клеток почки эмбриона коровы (ПЭК) или легких эмбриона коровы
(ЛЭК) и его идентификацию в РТГА, РИФ и др.; в) выявление АТ в сыворотке крови боль-
ных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в РТГА. Лабораторную ди-
агностику ПГ-3 проводят с использованием набора диагностикумов, выпускаемого биологи-
ческой промышленностью. Ее обычно ведут параллельно с исследованием материала на
аденовирусную и PC-инфекции, ИРТ и ВД-БС КРС. Схема проведения исследований на ПГ-
3 аналогична схеме диагностики аденовирусной инфекции КРС. Предварительный диагноз
на ПГ-3 ставят в течение 2-3 дн на основании положительных результатов обнаружения АГ
в патологическом материале в РИФ с учетом эпизоотологических и клинических данных, а
также патологоанатомических изменений, а окончательный - в течение 10-30 дн на основа-
нии совпадения результатов РИФ с выделением и идентификацией вируса. В настоящее
время для быстрой индикации вируса ПГ-3 может быть использована ПЦР; г) обнаружение
4-кратного и более прироста АТ в парных пробах сывороток.
Выделение вируса
Ввиду малой устойчивости парагриппозного вируса испытуемый материал рекомендует-
ся помещать в контейнеры с обычным льдом, немедленно доставлять в лабораторию й сразу
же использовать для заражения культуры клеток. Если сделать это невозможно, нужно за-
морозить материал в смеси сухого льда и спирта и хранить при - 20-60°С до исследования.
ВПГ-3 выделяют в первичных субкультурах клеток ПЭК, ЛЭК, ПТ, ТБ и др., которые
готовят по общепринятой методике. Для парагриппозных вирусов характерным является
диффузный характер РГАд, которая проявляется раньше, чем ЦПД вируса.
Первые ЦПИ зараженной культуры можно наблюдать иногда спустя 48 ч после иноку-
ляции. Они состоят в появлении округлившихся клеток, сильнее преломляющих свет, в
дальнейшем образуется синцитий и дегенерация клеток. При отрицательном результате в
первом пассаже проводят второй пассаж на том же виде культуры клеток. Параллельно с
пробирочными культурами ее выращивают и на покровных стеклах для ИФ. Всего рекомен-
дуется не менее 4-х “слепых” пассажей. Изолят считают выделенным, если он вызывает
стабильное однотипное ЦПД и положительную ГАд. В этом случае возможна его идентифи-
кация в РТГАд, PH, РТГА и других реакциях. Метод выделения вируса на эмбрионах менее
чувствителен, чем заражение культур клеток и применяется сравнительно редко.
Заражение естественно-восприимчивых животных. Применяют редко вследствие
дороговизны и большой трудности в подборе телят, восприимчивых к ПГ-3, ие имеющих
специфических АТ. Заражать восприимчивых животных вирусом ПГ-3 лучше нанесением
на слизистую оболочку носовой полости и трахеи. От экспериментально зараженных телят
246
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусиые инфекции
вирус удается выделить из экссудата носовой полости во время подъема темпера туры или
же из крови на 4-6-й день после интраназального и на 2-й день после внутривенного зара-
жения. С носовым истечением вирус обычно выделяется со 2-го по 10-й день.
Индикация и вируса
В клетках HeLa и КВ вирус размножается менее активно, чем в клетках почки теленка.
В культуре этих клеток, а также клеток почки обезьяны, помимо синцития, вирус вызывает
образование цитоплазматических, а иногда внутриядерных включений. Их находят и в эпи-
телиальных клетках бронхов и бронхиол.
Для ускоренной индикации вирусов ИРТ, ПГ-3 стафилококки обрабатывают иммунной
сывороткой. Готовят мазок, на который наносят исследуемый вируссодержащий материал,
обрабатывают его иммунной противовирусной сывороткой и вирусспецифическим имму-
ноглобулином, меченым ФИТЦем. По специфическому свечению на поверхности стафило-
кокка осуществляют индикацию вируса. При использовании ускоренного метода индикации
время индикации сокращается до 3-4 ч (6а).
Серологическая идентификация
РИФ. В основном АГ локализуется в цитоплазме клеток, однако в ранние сроки инфи-
цирования одновременно наблюдается свечение ядрышек. Парагриппозный АГ выявляют в
первые дни болезни и до 10-14 дня. При осложненных формах болезни АГ выявляют более
длительное время. В некоторых случаях его удается выявить даже во время инкубационного
периода, за 1-2 дня до появления клинических симптомов. Специфичность ИФ составляет
94% при сопоставлении с результатами серологического исследования. Существует одно-
значное мнение о большей чувствительности ИФ по сравнению с РГАд при индикации па-
рагриппозных вирусов, что делает ее перспективной для быстрой диагностики.
РТГАд. Является быстрым методом идентификации выделенного вируса. Для этого ис-
пользуют иммунные сыворотки кроликов или морских свинок. РТГАд ставят общеприня-
тым методом с эритроцитами морской свинки. Исследуемый вирус считают идентифициро-
ванным, если иммунная сыворотка к ПГ-3 блокирует гемадсорбцию.
РНГАд. Используют 100 Г Ад единиц вируса. По реакции гемадсорбции вирус ПГ-3
можно титровать в культуре ткани, используя для заражения культуры последовательные
10-кратные разведения. После 3 дн инкубации ставят РГАд с содержимым всех пробирок и
регистрируют наличие гемадсорбции. За одну Г Ад единицу принимают конечное разведение
вируса, вызвавшего гемадсорбцию. Положительная РГАд в контрольных пробирках, отсут-
ствие реакции в пробирках со смесью вируса и сыворотки свидетельствует об идентичности
выделенного вируса данному типу сыворотки.
РТГА. Применяется для типнрования выделенного вируса при наличии в жидкой фрак-
ции зараженных культур клеток гемагглютинина в титре, достаточном для выбора 4 ГАЕ.
Следует иметь в виду, что вирус парагриппа, выращенный в культуре клеток почки КРС,
агглютинирует эритроциты гусей, индюков и морских свинок, в отличие от эритроцитов
кур и уток. Агглютинация развивается в следующие сроки: эритроциты гусей за - 1-3 мин,
индюка - за 2-5, морской свинки - за 60-90 мин. Наиболее высокие и стабильные титры вы-
являются с эритроцитами индюка и при значениях pH: эритроциты гусей при 5,7; индюка
5,7-7,2; морской свинки 6,8-7,2. Иммунные сыворотки, используемые в РТГА, должны
быть освобождены от термолабильных и термостабильных ингибиторов, для этого сыворот-
ки прогревают при 56°С 30 мин и обрабатывают каолином или фильтратом холерного виб-
риона. РТГА ставят общепринятым методом.
Иммуноферментная идентификация. Сотрудниками ВНИ ТИБП разработана мето-
дика идентификации вируса ПГ-3 в ELISA (12а). Вариантная идентификация с помощью
монАТ не разработана.
247
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Иммунодиффузия (ИД) может быть с успехом использована доя диагностики ПГ-3 ин-
фекции. В ИД выявлено 2 линии преципитации, что соответствует 2-м АГ ПГ-3 (49b).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. При серологической диагностике
ПГ-3 КРС исследуют парные сыворотки телят или взрослых животных для выявления при-
роста АТ. Интервал между взятием проб 2-3 нед.
РГА, PH, РЗГАд и РСК дают в целом идентичные результаты при исследовании АТ в
период развития болезни и реконвалесценции. Однако РТГА самая чувствительная и самая
простая. Кроме исследования парных сывороток крови, при серодиагностике ПГ-3 рекомен-
дуется метод выявления секреторных АТ в РТГА. Для этого берут парные пробы носовых
секретов от 8-10 животных, проявивших клинические признаки болезни (повышение темпе-
ратуры, истечения из носовой полости и др.), и повторяют исследования через 6-8 дн.
Перед постановкой РТГА пробы размораживают, центрифугируют 10 мин при 2 000
мин'1, затем обрабатывают следующим образом: к 0,2 мл надосадочной жидкости добавля-
ют 0,2 мл 20%-ной суспензии эритроцитов морской свинки, встряхивают, выдерживают 30
мин при 4°С, 10 мин центрифугируют при 1500 мин'1; надосадочную жидкость в объеме 0,3
мл смешивают с 25%-ной суспензией каолина на физиологическом р-ре, встряхивают 25
мин, центрифугируют 15 мин при 2 000 мин'1. После этого надосадочную жидкость исполь-
зуют в РТГА.
Положительный результат исследования на ПГ-3 считают в случае выявления АТ во 2-й
пробе носовых секретов в титре 1:16 и выше (при отсутствии титров АТ в 1-й пробе) или ус-
тановления 4-кратного и более увеличения титра АТ во 2-й пробе носовых секретов по
сравнению с 1-й.
При положительной РНГАд в контролях вируса (пробирки с культурой клеток, куда был
внесен вирус в рабочем разведении с равным объемом питательной среды), учитывают её
отсутствие в пробирках, куда была залита смесь того или иного разведения сыворотки и ви-
руса. Диагностическим является не менее чем 4-кратный прирост нейтрализующих гемад-
сорбцию АТ в реконвалесцентной сыворотке по сравнению с сывороткой, взятой в начале
болезни. РСК не нашла широкого применения в ветеринарной диагностической практике.
Максимальный срок обнаружения АТ в сыворотках крови телят после инфицирования
вирусом ПГ-3 точно не установлен. Ряд исследователей полагают, что АТ сохраняются в те-
чение 4-6 мес. Уровень образования ВНА и анти-ГА достигал пика Г.320 и выше к 14-21
дню после заражения. ELISA широко используется за рубежом для индикации и титрования
АТ. Он в 4 - 64 раза чувствительнее, чем РТГА.
Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на ПГ-3 необходимо ис-
ключить ИРГ, ВД-БС, адено- и PC-инфекции, имеющие очень сходные эпизоотологические,
клинические и патологоанатомические данные. Поэтому материал, поступивший с подозре-
нием на ПГ-3, в лаборатории исследуют параллельно на все вышеуказанные инфекции.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Для специфической профилактики ПГ-3 применяют живые и инактивированные вакци-
ны. Однако последние пока еще не нашли широкого применения. Широкое использование
живых вакцин против ПГ-3 более 20 лет показало их высокую эффективность. Кроме того,
вследствие индукции интерферона они обладают лечебным эффектом и могут быть исполь-
зованы в первые дни болезни животных с целью быстрого прекращения эпизоотической
вспышки (1а, 22,23,24,29,30,31, 49).
Независимо от способа введения живых вакцин рекомендуется двукратная иммунизация
телят. Первая (за 2-3 нед до перевода на комплекс) - в 2- 4-нед возрасте и вторая - через 4
до 8 нед в комплексе. Телят, вакцинированных в неблагополучных стадах в возрасте 1-2
мес, через 4-8 нед ревакцинируют. Все чаще применяют живые комбинированные вакцины,
248
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
содержащие аттенуированные штаммы вирусов ПГ-3, ИРТ,ВД-БС и аденовироза (43, 45, 46,
46). Иногда к таким вакцинам добавляют инактивированные пастереллы.
Следует отметить, что интраназальная вакцинация не всегда создает достаточно выра-
женный иммунитет (8, 9,32а).
Не оставлена идея создания инактивированной вакцины против ПГ-3. В настоящее вре-
мя ученые и практики высоко оценивают инактивированные вакцины, разработанные на ос-
нове новой технологии (10а). Так, трехвалентная инактивированная вакцина из вирусов
ИРТ и ВД-БС КРС, ПГ-3 зарекомендовала себя надежным препаратом Vira shield-4 ТМ.
В СНГ для профилактики ПГ-3 применяют живую вакцину “Паравак”, изготовленную
из авирулентного штамма вируса ПГ-3, а также бивалентную “Бивак” для одновременной
профилактики ПГ-3 и ИРТ (23, 24). Вакцины рекомендуют для интраназального введения.
При вакцинации молодняка КРС велико значение колострального иммунитета. Чем вы-
ше уровень молозивных АТ, тем труднее добиться желаемого иммунизирующего эффекта
при вакцинации. Колостральные АТ даже в низких титрах (1:16) препятствуют активной
продукции сывороточных АТ в связи с блокированием вакцинного АГ. По этой причине ре-
комендуют прививать телят интраназально.
Молозивные АТ в титрах 4,3-6,3 log? ингибируют АГ-ответ у 2-2,5-мес телят после под-
кожного введения вакцины. Однако при интраназальном введении вируса они практически
не препятствуют образованию поствакцинальных анти-ГА, но чем выше уровень молозив-
ных АТ, тем менее выраженную сероконверсию наблюдали у привитых телят. Однократная
вакцинация телят с молозивными АТ не вызывает увеличения титров сывороточных АТ.
Повышение уровня АТ происходит только после ревакцинации, которая вызывает их бы-
строе накопление (41,44,48).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. В отношении оценки по-
ствакцинального иммунитета существуют различные мнения. Одни считают, что оценка на-
пряженности поствакцинального иммунитета при респираторных вирусных инфекциях по
уровню сывороточных АТ не полностью отражает иммунологический статус организма, т.к.
важную защитную роль при этих болезнях играют местные секреторные АТ. По мнению
других, оценку иммуногенной активности парагриппозных вакцин необходимо проводить по
результатам экспериментального заражения и продолжительности выделения вирулентного
вируса (50, 54). Поствакцинальные ВНА и анти-ГА, имеющие наибольшее значение, появ-
ляются в сыворотках крови на 8-14 сут после прививки, достигают пика к 16-28-му дню и
сохраняются в течение 4-6 мес. При изучении динамики поствакцинальных АТ в носовых
секретах местные секреторные АТ выявлялись с 5-6-го дня (1:8 - 1:16), достигали максиму-
ма на 9-й день (1:64 - 1:128) и в последующем снижались. При этом сывороточные АТ реги-
стрировались в более поздние сроки. Уровень их коррелировал с секреторными АТ.
Телята получают материнские АТ в зависимости от уровня АТ в организме матери. У
коров титр молозивных анти-ГА в день отела составлял 1:640 - 1:5120, а в сыворотке крови
-до 1:60 - 1:1280. Период полу распада молозивных АТ потомства - 3-14 дн (в зависимости
от класса глобулинов), но при достаточно высоком начальном титре они могут сохраняться
до 2-3 и даже 5 мес. Гуморальные и секреторные поствакцинальные АТ у вакцинированных
телят сохраняются от 6 мес до одного года. Повторное подкожное введение живой вакцины
вызывало АГ-ответ с максимальным пиком АТ на 14-15-й день, продолжительность их цир-
куляции составляла 4-4,5 мес. При интраназальной ревакцинации АТ персистировали в 1,5
раза дольше. После интраназального введения живого вируса титр секреторных АТ сохра-
нялся в течение 6-8 нед, после ревакцинации АТ выявляли до 5 мес. Продолжительность и
напряженность постинфекционного или поствакцинального иммунитета ПГ-3 обеспечива-
ются преимущественно IgG и секреторными AT IgA, выработка которых стимулируется ин-
фекционным и активным вакцинальным процессом. Считают, что уровень сывороточных
249
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
АТ не всегда коррелирует с устойчивостью вакцинированных животных к заражению. При-
витые телята с титром гуморальных АТ 6,3-10,3 log2 оказались устойчивыми.
Что касается роли материнского иммунитета в резистентности животного к ПГ-3, то в
этом отношении нет однозначной точки зрения. Так, заражение телят с колостральными АТ
аэрозольно вирусом ПГ-3 вело к развитию заболевания, но в несколько меньшей степени,
чем у серонегативных животных, лишенных молозива. У телят с молозивными АТ уровень
гуморальных и секреторных АТ не увеличивался. В то же время было показано, что телята с
титром материнских АТ 1:32 и выше были устойчивы к интраназальному заражению, тогда
как титр АТ 1:20 и ниже не предохранял их от болезни. Считают, что молозивные АТ пре-
дохраняют в среднем менее 50% телят месячного возраста.
Многие авторы доказали, что интраназальная прививка сокращает продолжительность
выделения вирулентного вируса. Животные, иммунозированные внутримышечно, после аэ-
рогенного заражения вирулентным вирусом ПГ-3 выделяли вирус в течение 6-9 дн, а приви-
тые интраназально - в среднем 0,8-1,8 дня. Выделение вируса ПГ-3 зависит от метода вве-
дения вакцины, а продолжительность выделения - от иммунного статуса животных. В защи-
те против ПГ-3 преобладают гуморальные факторы, но также хорошо выражен и клеточный
иммунитет. Наличие его регистрируют в различного рода тестах: реакции кожной гиперчув-
ствительности, реакции стимуляции лимфоцитов н реакции ингибиции миграции лейкоци-
тов (51,52, 53).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Амирбеков М.А. и др. Ветеринария, 1985, 1 :38. 1а.Амирбеков М. и др. Ветеринария,
1992, 1 :34. 2.Андреев Е.В. и др. Тез. докл. респ. н.-пр. конф., Харьков, 1979 :33.
3.Артемов Б.Т. и др. ЦЧЗ, Воронеж, 1984, 5-8. 4.Атамась В. А. и др. Сб. инф. и инваз. бол.
с.-х. жив. и птиц, Одесса, 1983. 5. Бобрович В.Г. и др. Ветер. Наука - производству, Минск,
1984, 22 :58. б.Борьба с респ. бол. КРС, Обзор иностр, лит. Ветеринария, 1985, 5 :71.
ба.Гудков В.Г. и др. А С № 4123722/14. Опубл Бюлл №23, 1991. 7.Гуненков В.В. и др. Жив.
и вет., серия “Итоги науки”, М, 1975, 8:5. в.Гуненков В.В. Контроль качества и стандартно-
сти биопреп., 1982 :20. 9а.3акутский Н.И. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Влади-
мир, 1995 :88. 9.Девришов Д.А. Ветеринария, 1985, 3 :67. 10.Иванов П.А. и др. Сб. инф.
бол. с.-х. жив., Новосибирск, 1983 : 66. 10а.Иванов В.С. и др. Мат. н.-пр. коиф., ВНИИ-
ТИБП, 1996. 11.Крюков Н.И. и др. Бюлл. ВИЭВ, 1980, 38 :7. 12.Крюков Н.И. и др. Труды
ВИЭВ, 1983, 57 :23. 12а.Кузнецова С.В. и др. Мат. н.-пр. конф. ВНИИТИБП, 1996.
13.Мартынов Ю.В. Ииф. бол. с.-х. жив., 1984, Новосибирск, : 106. 14.Мартынов Ю.В. и др.
Инф. бол. с.-х. жив., Новосибирск, 1984 :100. 15.Муравьев В.Н. и др. Сб. Проблемы вет.
биол., М, 1984 :15. 1б.Онипенко Н.И. и др. Бол. телят., К, Урожай, 1981, :101. 17. Осидзе
Н.Г. и др. Сб. н. тр. MBA, 1979, 106 :89. 18.Пат. анат. диагн. вир. бол. жив. Под ред Архи-
пова Н.И., Колос, 1984. 19.Погуляева Л.В. и др. Инф. бол. с.-х. жив., Новосибирск, 1984
: 102. 20.Подкопаев В.М. и др. Инф. и инваз. бол. мол. КРС, М, Рос с/х изд, 1985 :103.
21.Сергеев В.А. и др. Струкг. и биол. жив., М.,1983. 22.Сухарев О.И. и др. - Сб. н. труд.
MBA, 1981, :87. 23.Сухарев О.И. и др. Сб. н. тр. MBA, 1981: 82. 24.Сухарев О.И. и др. Сб.
н. тр. MBA, 1981, 120 :5. 25.Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусол., М, Колос 1979 :226.
2б.Сюрин В.Н. и др. Разв. мол. и мясн. скотоводства в СССР, М, 1980. 27.Сюрин В.Н. и др.
Вет. вирусол., М, Колос, 1984 :61. 28.Шевцова И.Н. Респ. бол. телят, их проф. и леч., С.-х.
за рубежом, 1984, 8 :59. 29.Шесточенко М.А. Проф. инф. бол. молод., М, 1983 .44.
ЗО.Цветков П. и др. Вет. мед. науки, 1979, 16, 4 :41. 31.Afshar A., et.al. Zbl Vet -Med Reihe
В, 1979, 26, 8 :641. 32.Assaf R. et.al. Can J Comp Med, 1983, 47, 2 :140. 32a.Burroughs A.L.
et.al. Can J Comp Med, 1982, 46 :264. 33.Baczynski Z etal. Med Vet, 1980, 36, 4 :196.
33a.Bamfort A.I. et.al. Vet Immunol and Immunophath, 1995, 45, 1-2 :85. 34.Данчев П. Вет сб,
1979, 77, 1 :11. 34a.Chanock R.M. et.al. Vaccine, 1988, 6 :129. 35.Douglas F.A. J Am Vet Med
250
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Ass, 1982, 181, 10 :1005. 36.Duptula W. et.al. Med Vet., 1983, 39, 3 :153. 37.Ferrari M. et.al.
Comp Imm Microbiol Inf Dis, 1981, 4, 3/4 :301. 38.Comez Z. et. al. Rev cub Scienc Vet, 1980,
11, 1 :53. 39.Gonzalez R. etal. Rev cub Scienc Vet, 1983, 14, 1 :35. 4O.Hussain A et. al. Am J
Vet Res, 1984, 45, 6 :1219. 41.Kita J et.al. Zbl Veterinarmed, 1983, 1330, 7 :502. 41a.Klippmark
E. et.al. J Gen Virol, 1990, 71 :1577. 42.Koves B. et.al. Acta Vet Acad Scient Hung, 1982, 30, 1-
3 :45. 43.Koves B. et.al. Magyar allatori Lapja, 1983, 38, 1 :14. 44.Lang H. Tierarztl Umsch.,
1980, 35, 2 :86. 45.Lugovic B. et.al. Vet Arch 1984, 54, 4 :183. 46.Marschall R. Am J Vet Res,
1981, 42, 6 :907. 47.Martin S.W. Can Vet J, 1984, 25, 1 :44. 48.Mozaffari-Nezhad H. et.al. Pol
Arch Vet, 1980, 21, 4 :473. 49.Muller K. Tierarzt Umsch., 1982, 39, 1 :31. 49a.Ray R. et.al. J Inf
Dis, 1988, 157 :648. 49b.Rulke J. Med Vet, 1990, 46, 4 :88. 5O.Schirmeir H. Mh Vet Med, 1980,
35, 1 :35. 51.SchibutaH. etal. Inf Imm, 1981, 34 :262. 52.Schibuta H. et.al. Inf Immu, 1982, 35
:437. 53.SchibutaH. et.al. Inf Imm,1983, 41 :780. 54.SieraP.L. Agriculture, 1984, 53, 624 :563.
55.Spire M.F. J Am VA Med Ass, 1982, 181, 10 :1158. 56.Zugraich N. et.al. Ann Med Vet,
1983, 121, 1 :23.
СЕНДАЙ-ИНФЕКЦИЯ
Парагрипп свиней и мышей, вызываемый вирусом Сендай, представляет контагиозную
вирусную инфекцию свиней и мышей (особенно в питомниках), проявляющуюся поражени-
ем респираторного тракта.
Впервые болезнь, вызванную вирусом Сендай, диагностировали в г. Сендай (Япония) в
1952 г. Сообщалось о выделении вируса от людей, свиней, мышей и крыс в Японии, СССР,
Китае. В Российской Федерации вирус Сендай впервые выделила О.Г. Генгросс в 1956 г. во
Владивостоке во время вспышки гриппоподобного заболевания людей. Имеются сообщения
о наличии инфекции среди людей и грызунов в Америке и Англии. Вирус Сендай выделен в
Болгарии от свиней, где наблюдалась респираторная болезнь среди поросят в возрасте от 2
до 15 дн. Вирус идентифицирован как парагриппозный 1-го типа и обозначен SD-2. Он ока-
зался идентичным штамму Сендай-960/56, выделенному во Владивостоке.
Чаще заболевают подсосные поросята, у которых болезнь протекает остро и характери-
зуется поражением респираторного тракта, пневмониями. У взрбСлых животных наблюдают
лёгкие кратковременные симптомы поражения дыхательных путей и незначительный подъ-
ём температуры.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделил в 1952 г. Куроя в японском городе Сендай; в 1956 г. в СССР
были выделены штаммы Сендай во время эпидемий гриппоподобных заболеваний среди
людей и животных (Генгросс).
Морфология и химический состав. Вирус Сендай отличается от вирусов гриппа зна-
чительным полиморфизмом и большей величиной вирионов (155-215 нм). Он содержит 7
основных полипептидов: 1 - тяжёлый Р (мол.м. 75000 Д) обладает нейраминидазной актив-
ностью; 2 - гликопротеин - HANA (мол.м. 67000 Д ) обладает ГА-активностью; 3 - гликопро-
теин F (мол.м. 65 000Д ); 4 - полипептид NP (мол.м. 60000Д) - структурный белок нуклеокап-
сида; 5 - полипептид М (мол.м. 35000Д) - основной внутренний белок, обладающий сродст-
вом как к нуклеокапсиду, так и оболочке вириона, является аналогом мембранного белка
вируса гриппа (Рис. 37, 38). Гликопротеин F обнаруживают в вирионах, продуцируемых
различными тканевыми культурами, нет его у вирионов, выращенных в КЭ. Гликопротеин F
- предшественник гликопротеина F1 (мол.м. 51000Д) и F2 (мол.м. 15000Д), ответственных
за лизис инфицированных клеток. Гликопротеины HANA и F расположены в вирионе по-
верхностно; другие три: - Р (мол.м. 75000Д), NP (мол.м. 60000 Д) и М (мол.м. 35000 Д) ло-
кализованы внутри вириона. Вирус Сендай - оболочечный вирус, содержащий 2 поверхно-
251
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
стных гликопротеина ГА-нейрамииидазу (HN) и белок слияния (Fo), ответственный за при-
крепление и проникновение вирусной частицы в клетках хозяина (5). По последним данным
оболочка вируса Сендай содержит 2 гликопротеина: белок слияния (БС) и ГА нейраминида-
зу (ГН). Инактивация БС вызывает потерю активности слияния и увеличение нейрамини-
дазной активности (4). У вируса Сендай содержится 28% липидов, что выше, чем у вируса
НБ (24%). Из РНП (S-АГ) этого вируса, выделенного из инфицированных клеток, удалось
изолировать и РНК 3-х классов: 18S, 24S и 33S. 18S РНК представляет собой транскрипт
полного генома. Матрицами для вирусных белков служит 18S РНК, которые комплемен-
тарны вирионной 5 OS РНК.
Устойчивость. Наиболее чувствительна инфекционная и гемолитическая активность
вируса. При обработке трипсином инфекционность значительно снижается, а под воздейст-
вием эфира, формалина и подогрева полностью утрачивается. Устойчивость ГА японского и
владивостокского вариантов к действию трипсина различна. ГА штаммов владивостокского
варианта резистентны к этому ферменту даже при концентрации его 2,5 мг/мл, в то время
как ГА обоих вариантов полностью разрушается под действием трипсина в концентрации 1-
1,5 мг/мл. Болгарский шт. SD-2 более чувствителен к действию трипсина, чем шт. Сендай-
960/56. Оба они одинаково чувствительны к действию эфира и резистентны к действию 5-
йод-2-дезоксиуридина.
Инфекционность лиофилизированного вируса разрушается при 80°С. Гемолитические
свойства, возраставшие вдвое при замораживании-высушивании, увеличиваются в 5 раз при
прогревании до 100°С, но полностью разрушаются при 130°С. ГА сохраняется при прогре-
вании до 130°С, но разрушается при 150°С. Наиболее стабильна нейраминидаза, её актив-
ность снижается только при 130°С и разрушается при 160°С.
Антигенная структура. В составе капсида вируса Сендай, культивированного на ХАО
КЭ, найдено 4 АГ хозяина: видоспецифический, гетерогенный АГ Форсмана, групповые АГ
А и Н. При культивировании на клетках СОЦ обнаружено 3 АГ: вирусспецифический и
групповые В2 и Н. АГ хозяина у вируса Сендай связаны с его ГА-фракцией (V-АГ). В S-AT
их нет.
Антигенная вариабельность и родство. Чёткое АГ различие между вариантами виру-
са Сендай выявлено в РДП, в перекрёстных РТГА с нативными и истощёнными сыворотка-
ми. В РСК у разных штаммов обоих вариантов установлена идентичность общего внутрен-
него S-АГ. Парагриппозный вирус Сендай имеет прямое антигенное родство с парагриппоз-
ным вирусом человека типа 1-НА2 Это родство наиболее отчётливо проявляется в РСК и
менее чётко в - РТГА или PH. Кроме того, установлено наличие разной АГ-связи между ви-
русом Сендай и возбудителями эпидимического паротита и НБ.
ГА свойства. Вирус Сендай может агглютинировать эритроциты: человека (0 группы),
курицы, морской свинки, хомяка, белой мыши, барана, крысы, голубя, обезьяны, коровы,
свиньи, кролика при 22 и 37,5°С и не агглютинирует эритроциты лошади. У вируса Сендай
обнаружены шипики 2-х различных типов. Шипики первого типа не обладают ни ГА-, ни
нейраминидазной активностью (HANA' -шипики). В них содержатся гликопротеиды VP4
(мол.м. 51000Д) и SCP (мол.м. 15000Д). Шипики 2-го типа обладают ГА- и нейраминидаз-
ной активностью (HANA+- шипики). Они содержат гликопротеин VP2 (мол.м. 67000Д).
Оказалось, что шипики необходимы для обеспечения гемолизирующей и симпластообра-
зующей активности вируса, процесса слияния оболочек и для инфекционное™ вирионов.
Гемолитические свойства. К литическому действию вируса Сендай наиболее чувстви-
тельны эритроциты мыши и морской свинки, менее чувствительны - эритроциты кролика.
Установлена различная гемолитическая активность у штаммов владивостокского и японско-
го вариантов по степени агглютинации эритроцитов барана в условиях комнатной темпера-
туры (22°С).
252
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Детально не изуче-
ны. Вирус выделяли со слизистых оболочек носовой полости, из трахеи и лёгких.
Экспериментальная инфекция. В экспериментальных условиях заражали подсосных
поросят, мышей, белых крыс, хомяков, морских свииок, у которых отмечали гриппоподоб-
ную инфекцию с поражением органов дыхания. При интраназальном введении белым мы-
шам он вызывает локальную или сливную геморрагическую пневмонию с десквамацией
эпителия бронхов, а нередко со смертельным исходом. При этом вирус не только размножа-
ется в лёгких, но н обнаруживается в крови, в мышце сердца, печени и мозге. При инфици-
ровании морских свинок вирусом Сендай отмечено его размножение, однако парагриппоз-
ные вирусы человека в организме этих животных не размножаются. У поросят, эксперимен-
тально инфицированных в возрасте 2 дн, обнаружена сезонная десквамативная пневмония с
очагами перибронхеального и интралобулярного некроза.
В бронхиальных клетках обнаружена трипсиноподобиая протеаза, которая активирует F
гликопротеин вируса Сендай. Выделен мутант вируса, активируемый протеазой TR, у кото-
рого F был устойчив к трипсину, но активировался химотрипсином in vitro. При инфициро-
вании мышей химотрипсин-активируемым TR рост вируса ограничен одним циклом и вирус
не вызывал пневмонии. Обнаружили замену Fiy-116 на 11е-116 в F белке мутанта по сравне-
нию с диким типом. Таким образом, показана возможность применения TR-мутанта в каче-
стве сильнодействующей вакцины (3).
Культивирование. Все штаммы вируса Сендай размножаются в 10-12-дн КЭ при за-
ражении как в аллантоисную, так и в амниотическую полости. Вирус накапливается до 107-
109 ЭИДзо/мл, обладая высоким ГА-титром. Эмбрионы не гибнут в течение 48-96 ч. Иноку-
ляция вируса, адаптированного к белым мышам и КЭ, в желточный мешок вызывает гибель
КЭ в течение 48 ч после заражения.
Вирус размножается также в культуре фибробластов КЭ. К нему высокочувствительна
культура клеток почки обезьян циномолыус. Размножение вируса и появление ЦПИ подав-
ляет 6-азауридин. В культуре клеток китайского хомячка вирус Сендай вызывает пульвери-
зацию хромосом. В культуре клеток почки свиньи вирус вызывает ЦПД с вакуолизацией ци-
топлазмы, кариолизисом и формированием гиганских клеток. На перививаемых линиях
клеток он быстро исчезает, образуя неполный вирус, или вызывает латентную инфекцию.
Показана возможность пассирования вируса в перививаемых линиях клеток почек свиней
(RS), кроликов (RK-13) и зелёных мартышек (СМК-2) при пользовании систем с добавле-
нием трипсина. К вирусу очень чувствительны органные культуры реснитчатого эпителия
морской свинки и лёгких эмбриона человека и крыс.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути распространения инфекции. Источником инфекции - больные и
переболевшие животные. Инфекция передаётся при контакте больных животных со здоро-
выми воздушно-капельным путём.
Спектр патогенности в естественных условиях. Основным хозяином вируса, по-
видимому, являются мышевидные грызуны. Циркуляция его у белых мышей вивариев и пи-
томников впервые установлена в Японии, затем Китае и СССР. Вирус также был обнару-
жен у морских свинок, белых крыс, хомяков и у домашних свиней. У одних животных ин-
фекция протекала в виде лёгкой респираторной болезни, у других - в виде бессимптомного
носительства. Присутствие АТ к вирусу Сендай в крови телят, собак, морских свинок и хо-
мячков, хотя в небольшом проценте (6,4-6,8%), свидетельствует о распространении вируса
среди животных.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании выделения вируса на КЭ и белых мышах и его идентифи-
кации в РТГА и PH. Вирус выделяют из лёгких, головного мозга и трахеи. К ретроспектив-
253
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
ной диагностике относится исследование сывороток больных и переболевших животных на
обнаружение АТ.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Данных о продолжительности и напряжённости постинфекционного иммунитета нет.
Нет также и данных о специфической профилактике.
ПАРАГРИПП СОБАК
Вирус парагриппа собак (Рис. 40) вызывает у щенят тонзиллиты и легко протекающий
ринит без повышения температуры тела. Вирус впервые изолирован в 1967 г. Он родствен
вирусу параинфлюэнцы обезьян SV5 в РСК, а в PH и РТГА отличается от него. Размножа-
ется в культуре клеток почек собак, африканских зелёных мартышек, обезьян резус и почек
эмбриона человека, вызывая образование больших эозинофильных включений. Он также
размножается в КЭ, не вызывая их гибели.
ГА свойства. Вируссодержащая экстраэмбриональная жидкость обладает ГА активно-
стью в титре до 1:128.
Экспериментальная инфекция. Подкожное и внутримышечное введение вируса не
вызывает заболевания. При введении вируса в мочевые пути развивается цистит.
Специфическая профилактика. Предложена живая вакцина из шт. Д-008, прошедше-
го 20 пассажей в культуре перевиваемых клетках почки собаки (1,2).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., М, Колос, 1979. 2.Сюрин В.Н. и др. Лабор. ди-
агн. вир. бол. жив., М, Агропромиздат, 1991. З.Наппа М. Int Syrnp "100 Years Virol”, S-
Peterburg, 1992, Abstr, M, 1992 :85. 4.Dallocchio F. et.al. Bioch and Biophis Res Conemun,
1994, 201, 2 :980. 5.Stecker R. Experient. 1991, 47, Abstr, :50.
ЧУМА КРУПНОГО РОГАТОГО
СКОТА И МЕЛКИХ ЖВАЧНЫХ
Pestes bovina (лат.); Rinderpest (нем.); Cattle plaque (англ.);
Peste bovine (франц.); Peste bovina (исп.)
Чума КРС - острая заразная вирусная болезнь, характеризующаяся высокой лихорадкой,
катарально-геморрагическим, крупозно-дифтерическим воспалением слизистых оболочек.
Распространена в Индии, странах Ближнего Востока, Египте и в 22 странах Центральной
Африки. Вспышки болезни происходят в результате разноса её дикими буйволами и анти-
лопами куду.
Инфекция в бывшем СССР не регистрируется с 1928 г. Однако наличие её в сопредель-
ных государствах представляет постоянную угрозу проникновения и распространения на
нашей территории (9,13).
Чума мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) - заболевание овец и коз, характеризующее-
ся лихорадкой, диареей, язвенными поражениями слизистой оболочке ротовой полости,
пневмонией (6 а). Характерные клинические признаки: тифоподобное состояние, некротиче-
ский стоматит, поражение слизистых оболочек носа и глаз, профузная диарея, а в терми-
нальных стадиях - вторичная бактериальная пневмония (32).
Клиническая признаки и патологоанатомические изменения. В естественных усло-
виях инкубационный период длится 6 дн. Болезнь сопровождается повышением температу-
ры тела до 40-42,2°С, снижением удоя. Со 2-3-го дня у больного животного появляются сла-
бость и угнетение. Температура поверхности тела неравномерная, рога и уши горячие, носо-
254
ГлаваУ! Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
вое зеркальце сухое. Кожа местами покрыта потом, волосяной покров без блеска и взъеро-
шен. Развивается анарексия, усиливается жажда, прекращается жвачка, кал сухой, темного
цвета, мочеиспускание редкое, моча темная. Со 2-го дня болезни развиваются воспаление и
некроз слизистых оболочек: конъюнктива ярко-красная, с точечными кровоизлияниями, ве-
ки припухшие, слезотечение. Вначале появляется серозный ринит, слизистый секрет стано-
вится гнойным, затем грязно-серым или буроватым, иногда кровянистым. Слизистая обо-
лочка носа вначале пятнистая, затем равномерно ярко-красная и усеяна мелкими кровоиз-
лияниями. Саливация усилена, слизистая оболочка ротовой полости £ красными пятнами.
Вскоре на её поверхности появляются вначале твердые, позже мягкие желтовато-белые
узелки размером с конопляное зерно. Затем они сливаются, образуя серый или серо-желтый
налет, который может самопроизвольно отделяться, обнажая кровоточащую ткань слизистой
оболочки. Поражение кишечного тракта в первые дни проявляется запором, позднее - про-
фузным поносом с выделением кашицеобразных или жидких грязно-серых, цвета глины или
темно-бурых отвратительно пахнущих, иногда кровянистых испражнений, содержащих
слизь, серый детрит или клочья пленок. У коров и телок из влагалища выделяются слизи-
стые или слизисто-гиойные, иногда кровянистые истечения. Иногда на коже вымени и мо-
шонки появляются кровоизлияния величиной с чечевицу. Животные быстро худеют, скре-
жещут зубами, мотают головой. Наблюдается гнойный секрет из глаз, носовые истечения,
пенистая слюна в углах рта, ускоренное затрудненное со стонами дыхание, жидкие испраж-
нения - характерные признаки чумы КРС. Большинство больных погибает.
У резистентных пород КРС в стационарно неблагополучных районах, а также у буйво-
лов и зебу болезнь может протекать в виде легкого недомогания, умеренного повышения
температуры в течение 4-5 дн, слабых явлений катара желудка, кишок, ограниченного нек-
роза слизистой оболочки на отдельных участках ротовой полости и неба.
Практически вирус находят во всех органах, но больше всего его накапливается в лим-
фоузлах, селезенке, тимусе, слизистой оболочке сычуга. Сильные поражения лимфоидной
ткани лимфоузлов головы, туловища и внутренних органов, селезенки, тимуса, миндалин,
лимфоидные скопления и образование в слизистой оболочке пищеварительного и дыхатель-
ного трактов свидетельствуют о размножении ВЧ КРС в клетках кроветворной ткани. Раз-
рушение защитной системы организма обусловливает развитие воспалительных процессов в
слизистых оболочках и коже, беспрепятственно развивается секундарная микрофлора, оби-
тающая на покровном эпителии. Это придает воспалению крупозный или дифтерический
характер, сопровождается образованием обширных эрозий и язв (1).
Трупы сильно истощены. Наружные покровы вокруг естественных отверстий запачканы
секретами и экскретами. На коже живота, вымени, бедер, промежности наблюдают сыпь в
форме кровоизлияний, узелков и пузырьков с выделением экссудата, который, подсыхая,
образует корочки.
Слизистая оболочка носовой полости, гортани и трахеи покрасневшая, пронизана кро-
воизлияниями, часто усеяна эрозиями и язвами, покрыта пленками фибринозного экссудата.
В грудной и брюшной полостях мутная сероватая жидкость с примесью крови. Бронхи из-
редка содержат желатинозный экссудат, при надавливании выделяющийся в виде эластич-
ных цилиндров. Легкие чаще в состоянии интерстициальной эмфиземы. Реже выявляют
рассеянные лобулярные очаги пневмонии крупозного характера (20). Слизистая оболочка
ротовой полости покрыта серо-желтыми наложениями, оставляющими после себя ярко-
красного цвета эрозии. Бывают более глубокие поражения типа дифтерического воспаления
и язв. Крупозные и дифтерические процессы начинаются с появления на слизистой оболочке
ротовой полости узелковой сыпи. Слизистая оболочка миндалин - также место для крупоз-
ных и дифтерически-язвениых процессов (13, 15, 16, 17, 18, 19, 20). Преджелудки обычно
не изменены. Исключение составляет книжка, растянутая скопившимися в ней плотными,
сухими, иногда как бы спрессованными кормовыми массами. На листках книжки имеются
255
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
узелки, эрозии и язвы. Сычуг пуст или в нем небольшое количество жидкости с примесью
слизи, окрашенной в светло-желтый или шоколадный (примесь крови) цвет. Слизистая обо-
лочка его, главным образом по вершинам складок и в области пилоруса, набухшая, ярко-
красного или вишнево-красного цвета, пронизана кровоизлияниями и усеяна эрозиями и яз-
вами, покрытыми пленками фибрина (1).
Изменения кишечника наиболее выражены в тощей и прямой кишках. Содержимое то-
щей кишки жидкое, напоминающее рисовый отвар. Позднее от примеси крови оно приобре-
тает красно-коричневую окраски н, наконец, желто-зеленую. Обычно к содержимому при-
мешаны хлопья фибрина. Слизистая оболочка тощей кишки крупозно-геморрагически вос-
палена, пронизана многочисленными кровоизлияниями н покрыта пленками фибрина. Од-
новременно в тощей кишке может развиваться дифтерический процесс, поражающий, глав-
ным образом, пейеровы бляшки и солитарные фолликулы. Последние с поверхности покры-
ты желтоватыми творожистыми массами, проникающими до подслизистой ткани. При раз-
мягчении некротических масс и их отторжении в фолликулах остается язва. В прямой киш-
ке фибринозно-геморрагическое воспаление с образованием фибринозных пленок, струпьев
и язв. Толстый кишечник менее поражен. Обычно в нем находят явления острокатарального
воспаления. Илеоцекальный клапан со стороны слизистой оболочки пронизан кровоизлия-
ниями и покрыт крупозным и дифтерическим налетом. Мезентериальные лимфоузлы сильно
набухшие и геморрагически инфильтрированы. Печень дряблая, глинистая или шафрано-
желтого цвета. Желчный пузырь обычно сильно растянут густой, темно-зеленого цвета жел-
чью с примесью крови. Его слизистая диффузно или полосчато гиперемировала и содержит
небольших размеров язвы, окаймленные красным ободком, на дне которых различают серо-
зеленого цвета струпья. Слизистая оболочка мочевого пузыря покрыта точечными и полос-
чатыми кровоизлияниями. Моча красно-бурого цвета, а при значительной примеси крови -
кровянистая. На клиторе и на слизистой влагалища нередки кровоизлияния и крупозные
пленки. Поверхностные лимфоузлы (подчелюстные, околоушные, заглоточные, шейные,
предлопаточные, паховые, подколенные и др.) у павших животных атрофированы, на разре-
зе бывают от бледно-серого до красного цвета, рисунок стерт. Селезенка уменьшена, выгля-
дит более бледной и плотной. На разрезе пульпа темно-красная, фолликулы не различаются,
трабекулы отчетливо выявляются, соскоб скудный.
Патологоанатомические изменения у овец и коз такие же, как у КРС. Однако они не так
ярко выражены, реже наблюдается крупозное воспаление ЖКТ н совсем редки дифтериче-
ские процессы.
Гистологические изменения. Микроскопически начальные стадии формирования .
узелков характеризуются появлением воспалительных клеточных инфильтратов в сосочко-
вом слое дермы или соединительнотканной основе слизистой оболочки. В дальнейшем в
клеточном инфильтрате преобладают нейтрофильные лейкоциты, выпотевает серозный экс-
судат. Клетки шиловидного слоя эпителия подвергаются баллонирующей дегенерации и
колликвации. Формируются узелки, а потом пузырьки. Некротизируется их покровный эпи-
телий, который превращается в рыхлые наложения, а затем образуются эрозии и язвы. Раз-
витие вторичной микрофлоры обусловливает возникновение крупозного или дифтерическо-
го воспаления. На слизистой оболочке глотки, особенно в области миндалин, наряду с ката-
ральными, выявляют и дифтерически-язвенные процессы. Слизистая иногда геморрагиче-
ски инфильтрирована. Микроскопически наблюдается стертость рисунка и размытость об-
щей картины миндалин в результате исчезновения лимфоидной ткани. В подслизистом слое
атрофированы лимфофоллнкулы, где в норме они выявляются в большом количестве.
Наибольшего внимания заслуживает микроскопическая картина лимфоузла. До подъема
температуры тела, когда болезнь клинически ничем не проявляется, в зародышевых центрах
некоторых лимфофолликулов отчетливо улавливают признаки распада лимфобластов. Ми-
тотическая активность среди них подавляется. В морфологическом отношении поражения в
256
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
инкубационном периоде болезни можно определить как острый серозно-катаральный лим-
фаденит, сопровождающийся гиперплазией клеток РЭС и некрозом лимфобластов зароды-
шевых центров. С появлением первых клинических признаков (повышение температуры те-
ла) распад клеток постепенно распространяется на весь лимфоузел. Наступает атрофия лим-
фофолликулов. Количество лимфоцитов резко сокращено. Отчетливо проявляются макрофа-
гальная реакция, инфильтрация паренхимы и стромы гистиоцитарными элементами, ней-
трофильными лейкоцитами и эозинофилами. У павших животных лимфатический узел при-
обретает более или менее однородное строение, он выглядит опустошенным. Лимфофолли-
кулы не просматриваются. Граница между корковым и мозговым слоями, синусами и мя-
котными шнурами отсутствует. Орган заполнен большой массой эритроцитов. Общий ха-
рактер микроскопических изменений в селезенке аналогичен тому, что и в других лимфоид-
ных органах. Пульпа селезенки у павших животных бедна лимфоцитами. В области фолли-
кулов остаются лишь ретикулярные клетки.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусную природу возбудителя болезни впервые установили Николь и др. в 1902 г.
Морфология и химический состав. Вирус чумы КРС (Рис. 39) и мелких жвачных в
своей структуре имеет 6 белков (Н, F, L, N, Р и М), которые характеризуются высокой сте-
пенью гомологии. Степень гомологии белка F ВЧ КРС и вируса кори (В К) составляет 78,9%
(42а). По данным других авторов, гомология аминокислотных последовательностей белка F
ВЧ КРС и ВК составляет 81,3%, а ВЧ КРС и ВЧС - 68,2% (30). Обнаружено АГ- родство Н-
и особенно NP-белков ВЧ КРС, ВК и ВЧС (26). Нуклеотидная девергенция в гене НА атте-
нуированного штамма ВЧ КРС в 3-концевом некодирующем участке гена была более выра-
женной, чем внутри кодирующей области (48). Гомология матриксного гена (кодирует бе-
лок М) ВЧ КРС и ВК составляет 77,6%, а ВЧ КРС и ВЧС - 78,2% (35). Клонирован ген N-
белка нуклеокапсида ВЧ КРС вирулентного шт. Kabet О и адаптированного к кроликам
шт.Ь ВЧ КРС . При сравнении нуклеотидных последовательностей генов NB4 ВЧ КРС, ВК и
ВЧС, установлено, что геном состоит из 1575 п.о. и кодирует N белок нуклеокапсида, со-
стоящий из 575 остатков (мол.м.59000Д). По нуклеотидной последовательности кодирую-
щей области этот ген ВЧ КРС (шт.К) гомологичен генам ВЧ КРС (шт.Ь), ВК и ВЧС соот-
ветственно на 88,6, 68,9 и 63,2% (35).
Сконструирован рекомбинантный вирус ядерного полиэдроза Autographa californica,
экспрессирующий N белок нуклеокапсида в клетках насекомых S19 и в личинках Spudaptera
frugipezda. Рекомбинантный N белок использован в качестве покрывающего АГ в ИФА для
того, чтобы отличить вакцинированных животных от животных инфицированных ВЧ КРС,
а также для диагностики 2-х других морбилливирусов ВК и ВЧ. Неочищенного лизата одной
инфицированной личинки достаточно для серологической диагностики 7200 образцов сыво-
ротки (31). Н-ген у штамма К ВЧ КРС, кодирующий белок гемагглютинина, определяет
вместе с белком А основные иммуннобиологические свойства этого вируса (2). При разра-
ботке методов молекулярной диагностики ВЧ КРС целесообразно использовать определение
нуклеотидной последовательности этой области гена для штаммовой дифференциации, так
как это позволяет получить максимальные различия между изучаемыми штаммами
(см.Табл. VI.3).
В последнее время проведены работы по созданию банка клонов ДНК и определению
первичной структуры концов некоторых кДНК для дальнейшей работы по определению
полной структуры генома, изучению структурной организации штаммов ВЧ КРС и конст-
руирования генноинженерных вакцин (экспрессия фрагментов структурных генов в E.coli).
Фрагменты кДНК на Н или F гены могут быть использованы для диагностики ВЧ КРС ме-
тодом гибридизации (1а, 2,2г).
17 Зак. № 171
257
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
Устойчивость. В отношении физических факторов ВЧ КРС нестоек и легко разрушает-
ся под влиянием химических веществ. Нагревание до 60°С убивает его немедленно, до 55°С
- за 20 мин; в условиях комнатной температуры вируссодержащая цитратная кровь сохраня-
ет активность 4-6 дн, при 5°С - 1 нед, при 0°С - более 5 лет.
Таблица VI.3.Нуклеотидная последовательность между Н-генами штаммов ВЧ КРС и
аминокислотная гомология соответствующих ГА.
Участок Н-гена Уровень гомологии между парами штаммов
К - L Kabet О - L Kabet О - R
1-1951 87,63 87,44 87,84
1-485 93,05 89,75 89,57
486-1311 86,42 87,17 88,61
1312-1850 88,50 89,45 90,17
1851-1952 67,96 65,69 80,39
Г емагглютинин
1-609 86,34 88,01 90,15
1-155 97,42 92,90 91,63
156-430 82,55 85,09 88,73
431-609 89,94 88,27 91,06
Время инактивации терморезистенгного вируса, за которое инактивируется 50% его при
45°С, составило 4 дн вместо 1,8 дн для исходного родительского вируса. Полученный тер-
морезистентный клон (1613-1009) характеризовался безвредностью для КРС и высокой им-
муногенностью, что позволило использовать его для производства сухой лиофилизирован-
ной, устойчивой к хранению вакцины.
В мясе больных животных вирус сохраняется в зависимости от скорости аутолиза и ко-
личества молочной кислоты. Если pH изменяется в кислую сторону - вирус погибает за 4-6
ч. Поваренная соль консервирует его. В соленом мясе (10%-ный р-р NaCl) ои сохраняется
более месяца. В шкурах жвачных животных, высушенных в темном месте, вирус утрачивает
патогенность через 48 ч, а в шкурах необескровленных животных - за 24 ч. При гниении ма-
териала вирус быстро погибает, поэтому в тропических странах трупы уже через несколько
часов после гибели животного обезвреживаются. В моче и кале вирус сохраняется не более
30 ч. 2%-ный р-р карболовой кислоты, 1%-ное известковое молоко, 2%-ная щелочь, 2%-ные
р-ры крезола и лизола обезвреживают зараженные вирусом материалы. Глицерин инакти-
вирует вирус при комнатной температуре до 10 дн. Вирус чувствителен к эфиру и хлоро-
форму. УФ-лучи и солнечный свет инактивируют его в течение от 40 мин до 5 ч. В солевых
экстрактах из инфицированных органов вирус сохраняется больше 1 мес.
Антигенная структура. Антигенная структура изучена недостаточно. Идентифициро-
вано 5 вирусспецифических полипептидов: Н (в РГА) размером 74 кД; белок нуклеокапсида
размером 62 кД; (фосфопротеид) размером 70 кД; белок слияния Fo размером 46 кД и по-
липептид М (матриксный белок) размером 38 кД. Изучена гомология в нуклеотидной по-
следовательности белка слияния у 3-х вирусов (чумы КРС, чумы собак и кори). Проведено
клонирование и анализ последовательности гена фосфопротеина ВЧ КРС (25). Получены
монАТ к структурным белкам (нуклеотидному белку и гликопротеинам Н и Fo) вакцинного
шт. К17.79 ВЧ КРС (5). Показано, что из 24 видов монАТ 10 распознавали нуклеопротеин
(NP), 8- фосфопротеин, 4 - ГА (Н) и 2 - белок слияния (Fo). МонАТ против Н нейтрализова-
ли инфекционную активность вируса, тогда как подобные АТ против Fo белка проявляли
нейтрализующую активность только в присутствии комплемента морской свинки (41). Так-
258
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
же с помощью монАТ к нуклеокапсидному белку Np, ГА (Н) и белку Fo изучена персистен-
ция вируса и синтез белка М в клетках Vero (40).
Антигенная вариабельность и родство. АГ вариантов вируса нет. Иммунологическая
идентичность полевых штаммов подтверждена многочисленными опытами перекрестного
заражения. Между ВЧ КРС, ВК и ВЧС существует антигенное и иммунологическое родство.
Кроме того, к ВЧ КРС оказались близки в антигенном отношении морбилливирусы, выде-
ленные от дельфинов и морских свиней в Европе (43). Штаммовая дифференциация ВЧ
КРС может производиться при сравнении нуклеотидной последовательности транслируемой
последовательности F-гена исследуемых штаммов в ПЦР (2в).
Локализация вируса. Вирус разносится кровью по всему организму и исчезает из нее с
поражением ЖКТ (обычно с 4-го по 10-й день). Вирусемия совпадает с периодом гипертер-
мии. Иногда вирус обнаруживают в крови на протяжении всей болезни и даже за 12 ч до
начала лихорадки. Его можно обнаружить в выделениях из носовой полости с 6-го по 14-й
день, в органах животных, убитых на 6-й день. За день до развития лихорадки и через не-
сколько часов после смерти животного большое количество вируса содержится в слезном
секрете. Концентрация вируса в крови не превышает 102-104 ТЦД50/МЛ.
ВЧ КРС - пантропный вирус. В органах и тканях накапливается неодинаково, в более
высоких титрах находится в лимфоузлах (106,5 ИД^/мл), в слизистой оболочке сычуга
(105,5), в легких (104) и почках (103-104 ИДзо/мл). В небольших количествах он присутствует
в мозговой ткани, поперечнополосатой мышечной ткани и спинномозговой жидкости. Виру-
соносительство у животных-реконвалесцентов практически не доказано.
Антигенная активность. У животных-реконвалесцентов обнаруживаются ВНА, КСА,
анти-ГА и ПА. Поэтому наиболее надежными методами оценки поствакцинального имму-
нитета являются PH и РСК. Телята приобретают иммунитет через молозиво от коров-
реконвалесцентов или активно иммунизированных. Он сохраняется 6-8 мес. Поскольку ма-
теринские колостральные АТ тормозят образование иммунитета, телят нельзя вакциниро-
вать ранее этого срока. У ягнят пассивный иммунитет сохраняется не менее 4-х мес (38).
Изучались различные участки гемагглютинина и их роль в проявлении иммунобиологиче-
ских свойств его и вируса в целом (2а).
Экспериментальная инфекция. У КРС она удается, как правило, введением вируссо-
держащей крови, взятой в кульминационный период болезни per os, подкожно или внутри-
мышечно. Заразить можно также слюной, истечением из влагалища больного животного.
Овцы и козы заражаются, однако болезнь у них проявляется общей лихорадкой и вирусоно-
сительством до 45 дн. К искусственному заражению восприимчивы также верблюды и оле-
ни. Относительно восприимчивости свиней мнения расходятся. У зараженных кроликов
временно повышается температура тела. Грызуны, непарнокопытные, плотоядные, птицы и
человек невосприимчивы. В конечной стадии летальной инфекции происходит интенсивное
истощение лимфоцитов в лимфоузлах, селезенке и миндалинах. В трахее обнаружен некроз
эпителиальных клеток с периферическим распределением АГ в эпителии бронхов (27а).
Культивирование. Вирус культивируется в организме восприимчивых животных и в
культурах клеток почки телят без предварительной адаптации. Вирус чумы КРС хорошо
размножается в первичных культурах клеток почки теленка, ягненка, эмбриона коровы,
макрофагах и перевиваемых клетках. ЦПД вируса развивается медленно и длится при ис-
пользовании больших концентраций вируса в течение 5-8 сут. Вслед за появлением цито-
плазматических включений в инфицированных клетках, в том числе и симпластах, образу-
ются внутриядерные оксифильные включения в количестве 2-4. Хроматиновая сеть ядра на-
рушается лишь вокруг включений. В некоторых случаях они занимают почти все ядро.
Развитие вируса в культуре начинается через 3-6 ч после заражения. В этот период ви-
рус ни в клетках, ни в среде не обнаруживается. Культура клеток СПЭВ чувствительна к ви-
17*
259
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
русу чумы мелких жвачных животных и может быть использована для изготовления диаг-
ностических АГ (6а).
Специфичность цитопатических изменений подтверждаются PH. Цитопатические изме-
нения развиваются одновременно с накоплением вируса в инфицированных культурах кле-
ток. Новую популяцию вируса обнаруживают через 6-8 ч после заражения в титре 103-104
ТЦД so/мл. Позднее титр вируса нарастает и к 5-7 сут достигает максимальной величины
(105,5-106,5 ТЦДзо/Мл). Одновременно происходит и накопление КС-антигена. Титр его на 5-
7-е сут равен 1:16 - 1:64 (24, 27, 34). В клеточной линии почек африканских зеленых мар-
тышек вирус образует бляшки. Однако лапинизированный (LIII) и капринизированный
штаммы вируса, размножаясь в культуре клеток, не вызывают в первых пассажах ЦПД.
Помимо первичных культур клеток, культивирование вируса удавалось и на перевивае-
мых линиях клеток. Отработаны основные параметры поддержания клеток и ВЧ КРС
шт.ЛТ, определен возраст культуры, плотность клеток в монослое, состав питательной сре-
ды, периодичность её смены, доза заражения клеточных культур МДВК, ПТП, ПС, СП ЭВ,
время сбора вируса (5а). Линия клеток СПЭВ оказалась более чувствительной к вирусу чу-
мы мелких жвачных. ЦПД выявлялось с 1-го пассажа, процент пораженных клеток состав-
лял 70-90. ЦПД проявлялось на 3-11 сут в зависимости от количества проведенных пасса-
жей. Титр вируса на культуре Vero составлял 104 ТЦД50/МЛ. Культура СПЭВ, как наиболее
чувствительная к ВЧ МЖЖ, может быть использована для изготовления диагностических
АГ (6а). Вирус способен индуцировать образование интерферона в культуре клеток, причем
более старые культуры образовывали больше интерферона, чем молодые.
ГА свойства. ГА ВЧ КРС получают экстрагированием вируссодержащей культуры кле-
ток эмбриона КРС. Экстракт концентрируют в 20 раз диализом. Концентрированный вирус
с титром не ниже 106 ТЦД зо/мл агглютинирует эритроциты обезьян и в меньшей степени
эритроциты кроликов, морских свинок, мышей и крыс. ГА ВЧ КРС и ВК антигенно различ-
ны, а иммунологическое родство обусловлено присутствием общего АГ в их нуклеокапсидах
(13). Клонирован ген ГА шт. Kabete О и лапинизированного штамма. Показано, что в гене
ГА шт. Kabete О по сравнению с геном лапинизированного штамма отсутствуют первые 17
нуклеотидов (48). Гемагглютинирующий АГ у ВЧ КРС выявляют только после специальной
обработки. Антисыворотка к ВЧ КРС нейтрализует ГА активность вируса кори (3).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Последние случаи возникновения чумы КРС, вследствие заноса из Монголии (1991 ),
были зарегистриованы в Читинской области и Республике Тува (1991-1993 гг.). В последние
годы неблагополучными по чуме КРС ежегодно являются 8-13 африканских и азиатских
стран, в том числе Иран и Турция, из которых возможен занос возбудителя на территорию
России (6). Получены данные о циркуляции ВЧ КРС среди мелких жвачных, содержащихся
совместно с поголовьем яков и КРС, перенесших эпизоотию и привитых вирус-вакциной.
Установлено участие овец и коз в эпизоотии чумы яков (10).
Идентифицировано две линии штаммов. Одна включает изоляты из Восточной и Запад-
ной Африки, полученные в 1960 г., филогенетически родственные азиатским и ближнево-
сточным изолятам. Вторая линия включает большинство изолятов, полученных в Восточ-
ной, Западной и Северной Африке в 1983-1993 гг. Во время эпизоотиии в Нигерии в 1980 г.
совместно циркулировали изоляты обеих линий (46).
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные и переболев-
шие чумой животные. Распространению ее способствуют трупы павших и вынужденно уби-
тых животных, шкуры, кишечное сырье, кости, рога, копыта, шерсть. Определенную роль в
распространении болезни могут играть козы и овцы, которые чаще переболевают бессим-
птомно. Собаки, хищники, птицы могут разносить вирус механически в случае поедания
трупов животных, павших от чумы. Имеются сообщения о распространении чумы суслика-
260
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
ми. Механический перенос вируса возможен через одежду обслуживающего персонала,
корм, воду, подстилку, предметы ухода, транспорт. У клещей, слепней и мух вирус обнару-
живали через 15-30 мин после того, как они находились на больном чумой животном. В ес-
тественных условиях заражение чумой происходит через пищеварительный тракт, возможно
также через слизистую оболочку носовой полости и конъюнктиву.
Спектр патогенности в естественных условиях. К вирусу восприимчив КРС, зебу,
буйволы, иногда поражаются овцы и козы. Яки и верблюды переболевают легко. Дикие
жвачные (лани, антилопы, газели, жирафы) болеют и могут распространять болезнь на ог-
ромные пространства. Буйволы менее восприимчивы, чем КРС, однако иногда болезнь сре-
ди них принимает злокачественный характер. В Индии наблюдается заболевание свиней,
вызванное этим вирусом. В природе встречаются штаммы, высокопатогенные для КРС, но
не вызывающие заболевания овец и коз, и штаммы, патогенные для всех этих животных.
Однако в последние годы установлено, что ВЧ КРС и ВЧ мелких жвачных животных ВЧ
МЖЖ значительно различаются между собой. ВЧ МЖЖ не является вариантом ВЧ КРС.
Это оригинальный вирус, который на шкале родства в пределах Морбилливирусов одинако-
во далек от ВК и ВЧ КРС (34). Чувствительность к ВЧ КРС различна и зависит от породы
(местный скот менее чувствителен, чем скот улучшенных пород), эпизоотического состояния
страны (там, где чума встречается энзоотически, скот менее восприимчив и легче переболе-
вает благодаря остаточному иммунитету) и физико-географических условий (наблюдалась
меньшая восприимчивость скота в низменных местах, чем в горных).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических
данных, результатов лабораторных исследований и биопробы на восприимчивых животных.
Лабораторная диагностика предусматривает: выделение вируса в культуре клеток и иденти-
фикация его в PH, обнаружение вирусного АГ в органах и тканях от павших и вынужденно
убитых животных в РСК, РДП, ВИЭОФ, РТНГА, РИГА, РИФ, ИФА; обнаружение специ-
фических АТ у переболевших животных в РСК, PH, РДП, РТГА, ИФА. Разработан экс-
пресс- метод диагностики болезни и видовой дифференциации морбилливирусов. Для этого
используется ПЦР небольшого участка (430 п.н.) P-гена с 389 по 821 н. в связи с тем, что
нуклеотидная последовательность его 5'- и 3'- концов является достаточно консервативной,
что позволяет унифицировать праймеры для всех морбилливирусов. С другой стороны, уча-
сток, ограниченный этими праймерами, имеет достаточную степень вариабельности, что по-
зволяет дифференцировать видовую принадлежность вируса. Нуклеотидная гомология ам-
плифицированного участка P-гена в парах ВЧ КРС - ВЧ МЖЖ, ВЧ КРС - ВЧС, ВЧ МЖЖ -
ВЧС для исследованных штаммов составляет соответственно 66,67, 60,84 и 59,21%. Нуклео-
тидная гомология этого участка гена Р у вируса, выделенного от норок ,с ВЧ КРС, ВЧП и
ВЧ МЖЖ составила 60,84, 98,6 и 59,21% соответственно (26).
Выделение вируса
Взятие и подготовка материала. Материал для выделения вируса берут от больных
(кровь, пункта? лимфоузлов) или убитых и павших животных (предлопаточные, мезентери-
альные лимфоузлы, селезенка). Патматериал берут в стерильную, плотно закрывающуюся
посуду и доставляют в лабораторию нарочным в опечатанном термосе со льдом при строгом
соблюдении мер предосторожности. Гепаринизированную кровь в стерильных условиях
разливают по пробиркам и центрифугируют при 2500 мин'1 15-20 мин. Образовавшийся
слой лейкоцитов между эритроцитами и плазмой в форме суспензии или пленки переносят
пастеровской пипеткой в стерильный флакон. Пленку лейкоцитов отмывают от эритроцитов
питательной средой и измельчают. Суспензию лейкоцитов в питательной среде используют
для заражения культуры клеток. Заражать последнюю можно и цельной кровью (29, 44, 45).
Вирус от больных животных можно выделить прижизненно из пунктата предлопаточных
261
Г лава VI. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
лимфоузлов в инкубационный период за сутки до начала лихорадки, а затем на всем протя-
жении болезни.
Лимфоузлы и селезенку можно хранить при -20°С в течение 60 дн, при -40°С - 6 мес,
при 2-4°С - ие более 7 дн. В кусочках размером 1-2 см, помещенных в 10%-ный NaCl, вирус
сохраняется при 2°С 15-30 дн. Вируссодержащая цитратная кровь в условиях комнатной
температуры сохраняет активность 4-6 дн, при 5°С - 1 нед, при 0°С - 3-4 нед. В лиофильно
высушенном материале, находящемся в ампулах под вакуумом при -20°С, вирус выживает
более 5 лет, а при 2-4° С - не менее 1 года. При лиофилизации в качестве стабилизатора в
суспензию добавляют 2% глюкозы и 5% пептона.
Заражение культуры клеток. Используют культуру клеток почки телят, которую после
удаления ростовой среды заражают, нанося на слой клеток суспензию лейкоцитов исследуе-
мого животного или суспензию его органов. Для адсорбции вируса культуры выдерживают
2 ч при 37° С, после чего инокулят отсасывают и вносят питательную среду с 2,5% телячьей
инактивированной сыворотки. За культурой наблюдают 9-18 дн. На положительный резуль-
тат указывает ЦПЭ. При отсутствии ЦПЭ делают слепой пассаж. Обычно при изоляции ви-
руса таким методом затрачивается 20-25 дн. Идентификацию проводят в PH.
Заражение восприимчивых животных. Рекомендуют заражать молодняк КРС или те-
лят буйволов кровью или 10-20%-ной суспензией лимфоузлов, полученной от больных жи-
вотных в первые 5 дн после заболевания. Животным вводят подкожно 10 мл исследуемого
материала. Это неразбавленная кровь или 10-20%-ная суспензия селезенки и лимфоузлов.
На положительный результат указывает подъем температуры тела через 5 дн после зараже-
ния и последующее развитие типичной картины болезни. Смертность очень высокая - около
90%. В случае выздоровления животных дополнительным критерием специфичности тече-
ния болезни является рост уровня АТ.
Индикация и идентификация вируса
Вирусоскопия. ЭМ и ИЭМ в практических условиях не применяются. Из экспресс-
методов диагностики наибольшего внимания заслуживает применение гибридизационного
зонда. С помощью его (точечной гибридизации) удается дифференцировать два родствен-
ных морбилливируса - ВЧ КРС и ВЧ МЖЖ (28). Дифференциальная диагностика с помо-
щью ДНК-зондов помогла идентифицировать вспышку чумы КРС среди популяции баранов
в Индии (39).
Обнаружение специфических телец-включений. В зараженных культурах клеток в
цитоплазме одиночных клеток и симпластов появляются сначала мелкие эозинофильные
включения округлой формы со светлым ободком вокруг. С увеличением размеров симпла-
стов растут объем и число цитоплазматических включений. Последние принимают много-
угольную, продолговатую формы или форму кольца, охватывающего ядра симпластов; в ци-
топлазме располагается до 10 включений. Вслед за появлением цитоплазматических вклю-
чений в инфицированных клетках, в том числе и в симпластах, образуются внутриядерные
оксифильные включения в количестве 2-4. Хроматиновая сеть ядра нарушается лишь вокруг
включений. В некоторых случаях они занимают почти все ядро.
Биопроба. Идентифицировать ВЧ можно биопробой на иммунном и неиммунном скоте.
Двух животных вакцинируют сухой вирусвакциной из шт. ЛТ (согласно утвержденному на-
ставлению по применению препарата). Через 12 дн вакцинированных и двух невакциниро-
ванных животных заражают испытуемым материалом (суспензия селезенки, лимфоузлов и
крови). При наличии у невакцинированных животных специфической температурной реак-
ции, клинических признаков и отсутствии таковых у иммунных животных биопроба счита-
ется положительной. У заболевших или павших животных обнаруживают специфический
АГ в РСК и РДП.
262
ГлаваVI, Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
PH. Применяют качественную и количественную PH. Для установления специфичности
вызываемых вирусом поражений клеток проводят качественную PH, а для определения ко-
личества АТ в сыворотке иммунных животных - количественную.
РСК. Применяют для прижизненной и посмертной диагностики чумы с целью выявле-
ния АГ в гомогенатах лимфоузлов, селезенки, а также в инфицированной культуре клеток.
При использовании РСК с целью идентификации вируса в культуре клеток в качестве спе-
цифического и контрольного АГ используют культуральную жидкость с зараженной и неза-
ряженной культурами клеток.
Предложена упрощенная модификация РСК для определения растворимых АГ ВЧ КРС.
АГ готовят из лимфоузлов или селезенки КРС, коз и кроликов. Отмечено, что АГ, подверг-
нутые замораживанию - оттаиванию или ультразвуковой обработке, или осаждению сульфа-
том аммония или сульфатом натрия, более активны.
Гипериммунные сыворотки для идентификации вируса готовят по методу Скотта. Кровь
берут от кроликов, иммунизированных лапинизированным, авинизированным или JTT-
вирусами. Такие сыворотки нужны для обнаружения испытуемого АГ в РСК. Положитель-
ные сыворотки и соответствующие им контроли (нормальные сыворотки) получают на КРС
в возрасте 12-18 мес. От них берут сыворотку до иммунизации (контрольная) и через 21
день после подкожной прививки 100 иммунизирующих доз (позитивная сыворотка). Такая
сыворотка обычно в PH реагирует положительно в разведении 1:40 - 1:80. Полученную сы-
воротку сохраняют при -20°С и используют в РСК и PH с испытуемым АГ в течение 4-6
мес. Диагностическую сыворотку для РСК получают также от кроликов, инфицированных, а
затем гипериммунизированных ВЧ КРС.
РДП. Реакцию ставят по методу Оухтерлони. Выявление преципитирующего АГ ВЧ в
органах больного КРС является ценным диагностическим тестом, поскольку этот АГ регу-
лярно появляется в лимфоузлах больных животных, начиная с 1-го дня повышения темпе-
ратуры. На 3-й день болезни он выявляется лишь у 50% больных. РДП, как и РСК, дает бы-
стрый ответ (через 12-18 ч). Оптимальный срок для взятия проб - период от 4-6 дн после
начала лихорадки до появления поражений во рту и диареи. Если нет животного в этой ста-
дии болезни, рекомендуют брать образцы от погибшего животного. Для исследования при-
годен материал даже от разлагающихся в течение 52 ч трупов, в качестве антител исполь-
зуют гипериммунные сыворотки кроликов и КРС.
Заведомо положительные и отрицательные АГ, приготовленные соответственно от
больных и здоровых животных, используют в РДП одновременно. Положительную преци-
питирующую сыворотку получают от кроликов, иммунизированных инфицированными кро-
личьими тканями. РСК, РДП, PH и РИГА являются специфичными и эффективными лабо-
раторными методами выявления АГ и идентификации ВЧ КРС. Однако данные A. Prowost и
др. (37) показали, что аттенуированные штаммы ВЧ КРС в естественных условиях не сти-
мулируют продуцирование преципитирующего антигена в тканях животных. Это может
быть характерным признаком отличия вакцинного штамма от эпизоотического. В Иране в
1982 г. в зонах, где скот был вакцинирован, у привитых животных не обнаруживали образо-
вание преципитирующего антигена. Поэтому в зонах систематической вакцинации скота
против данной инфекции диагноз поставить сложно (11).
ВИЭОФ. Предложен вместо РДП для быстрой диагностики чумы КРС. В качестве ис-
пытуемого АГ служит суспензия селезенки и лимфоузлов толстого кишечника КРС и овец,
полученных во время вспышки болезни. ВИЭОФ проводят в 0,8%-ной агарозе на веронало-
вом буферном растворе с pH 8,6. Гипериммунную сыворотку помещают в лунки вблизи
анода, исследуемый материал - вблизи катода. Пластины помещают в горизонтальную ван-
ночку с охлажденным вероналовым буфером. Линии преципитации образуются через 45
263
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
мин при силе тока 6 мА. ВИЭОФ при обнаружении АГ в тканях павших животных он ока-
зался в 4-16 раз чувствительнее РДП и позволяет получить результат в течение 40 мин.
РТГА. Разработана для экспресс-диагностики чумы КРС. Если исследуемый материал
содержит вирус, анти-ГА связываются, а их отсутствие или нехватку можно потом выявить,
исследуя сыворотку в РТГА с использованием гемагглютинина ВК. При отсутствии вируса в
исследуемом материале количество АТ остается неизменным. В этой реакции используют
родство АГ ВЧ КРС и ВК. Особую ценность она имеет для диагностики случаев заболева-
ния, вызванных штаммами с ослабленной вирулентностью.
ИФ. В качестве исследуемого материала используют мазки-отпечатки и гистологиче-
ские срезы (селезенка, лимфоузлы, печень, слизистые оболочки ротовой полости и кишеч-
ника) из органов и тканей больных животных или инфицированные этими материалами
культуры клеток. Возможно применение непрямого ИФ для обнаружения специфического
АГ. Четкие результаты получают в случаях, если ФИТЦ-конъюгат изготовлен на основе
гамма-глобулина, выделенного ионообменной хроматографией из специфической сыворот-
ки. Прямая ИФ позволяет обнаруживать АГ в более ранние сроки: в мазках-отпечатках из
органов больных животных через 2 ч, в зараженной культуре клеток - на 1 пассаж ранее по-
явления ЦПД - т.е. раньше на 8-10 дн (11). С помощью прямой ИФ возможно оценивать
результаты PH в культуре клеток через 24-48 ч после постановки опыта, тогда как для оцен-
ки реакции по ЦПД вируса требуется 6-8 сут. Поэтому прямой метод ИФ признан высоко-
специфичным, чувствительным и пригодным для экспресс-диагностики чумы КРС (8).
РИГА и РЗГА. Обе реакции позволяют дифференцировать сыворотки и АГ при исполь-
зовании обработанных дубильной кислотой эритроцитов крови коз. Реакции основаны на
адсорбции перекрестных АТ из сыворотки, которая используется в РТГА (47).
ИФА. ИФА позволяет быстро выявлять АГ ВЧ КРС в патматериале. Наиболее часто АГ
выявляли в мазках из поражений слизистой ротовой полости и лимфоузлов. АГ ВЧ наибо-
лее часто выявляли у КРС моложе 3 лет, а у буйволов - в более старшем возрасте. В РДП и
ИФА результаты совпадали, но последний позволял получить результат через 2-3 ч. Успеш-
но вирус определяли в назальных и глазных секретах через 4 дн несмотря на то, что он там
содержался в количестве не более 1,75 1g ТЦДзо/мл. ИФА оказался более чувствительным по
сравнению с выделением ВЧ КРС (45). Получены компоненты набора для диагностики чу-
мы КРС методом твердофазного ИФА, которые обеспечивают обнаружение вирусспецифи-
ческого АГ (нуклеопротеина) ВЧ КРС в лизатах зараженных клеточных культур и пробах
органов больных животных, а также обеспечивали обнаружение АТ в сыворотках больных и
переболевших животных. Чувствительность ТФ ИФА при выявлении специфических анти-
тел в сыворотках крови больных и иммунных животных (метод ингибирования) сравнима с
чувствительностью РТНГА с использованием эритроцитарного диагностикума на основе
монАТ к ВЧ КРС (Па).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Для обнаружения АТ используют
PH, ВИЭОФ, РРГ и ELISA (22). Для серологического исследования берут кровь как можно
раньше после установления клинических проявлений и повторно через 10-14 дн. Исследуют
парные сыворотки крови не менее чем от 10 животных. ВНА и КСА у животных-
реконвалесцентов обнаруживаются через 3-5 дн, поэтому чаще всего применяют РСК и PH.
Ретроспективную диагностику чумы КРС проводят в очагах инфекции или при атипичном
её течении на вакцинированном поголовье животных, имевших слабый поствакцинальный
иммунитет. 4-кратное увеличение титра КСА и ВНА свидетельствует о наличии прошедшей
инфекции.
РСК. Применяют чаще всего. На 3-4-й день после снижения температуры у животных
обнаруживают КСА в титре от 1:10 до 1:40. На 21-30-й дн достигают максимума и удержи-
ваются в течение 3 мес на уровне 1:80-1:160. Через 8 мес титр их составляет 1:20-1:40.
264
ГлаваУ!, Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
PH. Можно ставить на кроликах, имея лапинизированный штамм. Учитывая дорого-
визну этого метода, его используют крайне редко. Реакция в культурах клеток с использова-
нием адаптированных к ним штаммов - метод более простой и дешевый. Для выявления и
титрования ВНА метод микротитрования ие уступает пробирочному, но выгодно отличается
от него меньшей чувствительностью к колебаниям дозы. Чтобы избежать цитотоксического
и ингибирующего проявления, рекомендуется делать первоначальное разведение сыворотки
1:5. Количественную PH можно проводить в двух вариантах: 1) с постоянной дозой вируса
(200-500 ТЦД3о) и двукратно возрастающими разведениями сыворотки; 2) с постоянной до-
зой сыворотки (разведение 1:5-1:10) и 10-кратными разведениями вируса W’-IO'6.
РТГА. В качестве АГ в этой реакции используют вирус кори.
ELISA. Непрямой твердофазный микрометод позволяет обнаруживать АТ к ВЧ КРС.
Данные его коррелируют с результатами PH. Считают, что указанный метод можно успешно
применять для оценки эпизоотической ситуации и при проведении кампаний по вакцинации
животных.
Проведена сравнительная оценка эффективности использования ИФ, ИФА и ВИЭОФ
для выявления АТ против чумы КРС у телят, вакцинированных культуральной вирус-
вакциной против чумы КРС. Исследования проведены с использованием первичных куль-
тур бычьей почки, выращенных на покровных стеклах и инфицированных шт. К90 ВЧ КРС,
или с использованием мазков-отпечатков ткани лимфоузлов КРС, зараженного шт. Гиссар.
При применении ИФА мазки-отпечатки предварительно обрабатывали антипероксидазной
сывороткой для удаления эндогенной пероксидазной активности клеток лимфоузлов. Уста-
новлено, что в первые 7 нед после вакцинации у телят удавалось выявить АТ в 100% случа-
ев всеми испытуемыми методами. В последующий период (с 8 до 12 нед после вакцинации)
наиболее эффективным был метод ИФ (АТ выявлены у 84,6-100% телят). Менее чувстви-
тельными в этот период были методы ИФА и ВИЭОФ (соответственно АТ обнаружены у
23-77,7 и 7,7-77,7% телят). Для определения АТ к ВЧ КРС в Индии успешно применяют ме-
тод microELISA. Показаны преимущества конкурентного ELISA со специфическими монАТ
над непрямым ELISA (21).
Реакция радиального гемолиза (РРГ). Рекомендована для обнаружения АТ к ВЧ
КРС. В качестве АГ используют суспензию лимфоузлов от зараженных телят. Реакцию ста-
вят на пластинках, куда вносят 2-4 мл 1%-ной агарозы с 0,3 мл конъюгированных с АГ ба-
раньих эритроцитов, обработанных хлоридом хрома и 0,3 мл неразведенного комплемента.
Дифференциальная диагностика. Проводится по данным исследования вируссодер-
жащего материала (гибридизационным тестом, биопробой, серологическими реакциями с
видоспецифической сывороткой). В связи с тем, что в некоторых странах, в том числе и в
европейских, чума КРС давно ликвидирована, при случайном заносе она может быть оши-
бочно диагностирована как вирусная диарея или злокачественная катаральная горячка, что
необходимо иметь в виду при дифференциальной диагностике чумы.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У переболевших животных образуется прочный, практически пожизненный иммунитет.
Животные-реконвалесценты или привитые живыми вакцинами во время беременности так-
же сообщают иммунитет потомству продолжительностью до 11 мес. Такой иммунитет раз-
вивается в результате не только передачи АТ с молозивом и молоком , но и проникновения
вакцинного вируса в развивающийся эмбрион. Установлено снижение иммунного ответа на
вакцину против чумы КРС у животных, перенесших экспериментальный тейлериоз.
Применение живых вакцин. В настоящее время для профилактики чумы КРС исполь-
зуют живые культуральные вакцины из аттенуированных uit.TCRV, ЛТ и К37/70. Шт. ЛТ
получен во ВНИИВВиМ Н.И. Митиным, В.Н. Сюриным и др. путем адаптации японского
лапинизированного шт. ЛЗ ВЧ КРС в культуре клеток почки теленка. Вирус прошел 1271
265
ГлаваУ! Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
пассаж на кроликах и 60 пассажей в культуре клеток, в том числе 8 пассажей методом пре-
дельных разведений, для выделения генетически однородной и стабильной популяции. Шт.
ЛТ безвреден для КРС и овец различных породных групп и возрастов. Сухая вакцина ЛТ
обладает более высокой терморезистентностью по сравнению с вакциной из шт. TCRV. Она
является генетически стабильной ввиду длительного пассирования вируса через организм
кролика, что гарантирует полную безвредность препарата для КРС (12, 14). В Индии с це-
лью замены культуры клеток почки теленка при массовом производстве вакцины аттенуи-
рованный штамм вируса был адаптирован к культуре клеток почки ягненка. Эта вакцина
стандартизирована, её изготовляют в 11 странах Африки, 14 странах Азии и 2 странах Ев-
ропы. Культуральная вакцина из шт. K.obete-02 не снижала биологическую активность ниже
рекомендуемого ВОЗ и МЭБ уровня в условиях 5°С в течение 2-х лет, при 25°С - 56 дн, при
37°С - 7 дн (33).
Живые вакцины против чумы КРС исключительно эффективны и высокоэкономичны. У
привитых животных может наблюдаться невысокая лихорадка, появляющаяся спустя 4-11
дн после прививки и продолжающаяся 1-11 дн. После однократной прививки (100 ИДюо)
иммунитет наступает через 72 ч и продолжается 7-8 лет (3, 36). Для стран с жарким клима-
том разработана и изготовляется более терморезистентная вакцина. Использовали шт. Пло-
урайт, адаптированный к культуре клеток Vero и лиофилизированный с различными стаби-
лизаторами. Получена вакцина, сохраняющая активность согласно рекомендации ФАО при
37°С в течение 4-х нед. Вакцину против чумы КРС можно использовать для иммунизации
овец и коз, которые могут иметь субклиническую инфекцию. Японская вакцина из шт. На-
камура III (лапинизированного) проявляет в ряде случаев абортогенные свойства. По дан-
ным японских исследователей шт. LA-AKO успешно используется в качестве вакцинного,
он индуцирует АТ против шт. Kabete О LA-AKO, а сыворотка на шт. LA-AKO более пред-
почтительна для определения и идентификации ВЧ КРС (32).
Положительно зарекомендовала себя вторая отечественная живая вакцина из шт. К-
37/70, с помощью которой в 1991-1992 г. удалось оборвать вспышку инфекции в ряде рай-
онов Тувы (9). С использованием культуры клеток СПЖВ разработана более экономичная
технология вакцины против чумы КРС из шт. К 37/70 (14а).
Инактивированные вакцины. Несмотря на общепризнанную эффективность живых
вакцин против чумы КРС, идея создания инактивированного препарата не канула в лету.
Так, для иммунизации овец против чумы КРС предложена инактивированная ГОА-вакцина
с сапонином. Все овцы, иммунизированные данной вакциной, как в цельном виде, так и в
разведениях 1:3 и 1:9, противостояли контрольному заражению вирусбм чумы КРС на 14-е
сут после вакцинации (4).
Инактивированные вакцины, по-видимому, необходимо использовать для создания бу-
ферной зоны и на заключительном этапе искоренения инфекции после применения вирус-
вакцины для ограничения возможного вирусоносительства. Инактивированная вакцина на
основе аттенуированного шт. ЛТ ВЧ КРС , выращенного в перевиваемой клеточной линии
почки сайгака, и применения в качестве инактиванга ионов меди, индуцирует достаточно
напряженный иммунитет, вызывая образование ВНА , которые сохранялись в титре 1:19 в
течение 12 мес (7). Испытания инактивированной вакцины против чумы КРС по срокам на-
ступления иммунитета показали, что однократная вакцинация в дозе 3 мл защищает живот-
ных от контрольного заражения на 3 и 5-е сут после иммунизации. У животных, иммунизи-
рованных за 1 сут до заражения, отмечается 2-5-дневная задержка гибели от чумы КРС (4а).
Генно-инженерные вакцины. При использовании достижений генной инженерии соз-
даны новые типы вакцин: субьединичная, синтетическая и векторная или рекомбинантная.
Наиболее перспективна рекомбинантная, состоящая из живого вируса (например оспы) или
бактерий (E.coli, дрожжи), в которых интегрирован ген, кодирующий протективный АГ ВЧ.
266
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Чаще для интеграции берут сайты тимидинкиназы или гемагглютинина (Н). В Японии скон-
струированы 3 типа рекомбинантной вакцины. Вакцина, имеющая модифицированный ген
Н с промотором МР7,5 К, наиболее иммуногенна. ВНА к вирусам оспы и чумы персистиру-
ют более года (23, 42). В США также получены рекомбинанты инфекционного вируса оспы,
экспрессирующие гены ГА и растворимых поверхностных белков, включая белок слияния
Fo ВЧ КРС. У привитых животных продуцировались ВНА, которые защищали животных
при заражении вирусом в дозе в 1000 раз больше летальной. Вакцину применяют путем
скарификации. Она термостабильна, безопасна (49, 50).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. В результате сравни-
тельного изучения эффективности 3 реакций (PH, РИГА и РТГА) для выявления АТ у жи-
вотных, иммунизированных культуральной вакциной против чумы, было установлено, что
наиболее выраженная корреляция титров АТ наблюдалась между PH и РТГА, взятых через
2-3 нед после вакцинации. В ответ на прививку живой вирусвакциной из шт. ЛТ КС и ВН
АТ обнаруживаются на протяжении года. Максимальный титр их через 1 мес достигает 1:80
и 1:160-1:640 соответственно. Через год после прививки титр АТ соответственно снижается
до 1:10-1:20 и 1:40-1:80. В ряде случаев ВНА обнаруживаются через 18 мес в титре 1:60-
1:320 к 200 ТЦД50. Материнские АТ сообщают иммунитет телятам на 6-7 мес, поэтому ак-
тивную иммунизацию их можно проводить после этого срока. В тех случаях, когда титр
ВНА и КСА равен 1:10 и выше, животные, как правило, устойчивы к экспериментальной
инфекции ВЧ в дозе 103 ЛД50. Однако следует иметь в виду, что отсутствие КСА не свиде-
тельствует об отсутствии специфического иммунитета, так как эти АТ у вакцинированных и
переболевших животных исчезают раньше, чем специфическая резистентность и ВНА. Нет
также прямой корреляции между специфической резистентностью вакцинированных живот-
ных и титром ВНА как в первые дни (3-5) после вакцинации, когда резистентность живот-
ных обусловлена феноменом интерференции, так и в последующие, когда резистентность
при отсутствии КСА и ВНА, видимо, обусловлена механизмами клеточного иммунитета.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРАЫ
1-Архипов Н.И. Пат. анат. диагн. вир. бол. жив., М, Колос, 1984. Ха.Аминев А.Г. и др.
Тез .докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :11. 2.Аянот П. К. и др. Тез. докл. н.-пр. конф.
ВНИИЗЖ, 1995 :9. 2а.Аяцот П.К. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :6. 2б.Аянот
П.К. и др. Там же, 1995 :30. 2в.Аянот П.К. и др. Там же.1995 :31. 2г.Аянот П.К. Автореф.
канд. дисс.1996, Владимир. З.Бомфорд Р. Биотех. клеток жив. Москва, 1989 :2. 4.Борисова
О.А. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992. 4а.Борисова О.А. и др. Тез. докл. н.-
пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995, :121. 5. Горе лов С.В. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, 1995 :42.
5а.Горшкова Т.Ф. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995. 6.Гуленкин В.М. и др. Тез.
докл. н. пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :178. 6а. Диев В.И. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ,
1995 :94. 7.Жестерев В.И. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :140. 8.Карпов Г.М.
и др. Тез. докл. н. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1990 :126. 9.Коломыцев А. А. и др. Ветери-
нария, 1992 :9. Ю.Коломыцев А.А и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 .177.
П.Курченко Ф.П. и др. Ветеринария, 1993, 3 :19. Па.Луницин А.В. и др. Тез. докл. н.-пр.
конф. ВНИИЗЖ, 1995 :34, 12.Митин Н.И. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992
: 146. ХЗ.Митин Н.И. Руководство по вет. вирусол., М. Колос, 1966 :570. 14.Митин Н.И. и др.
Матер, и. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992. 14а.Старов С.К. и др. Тез. докл. н.-пр. конф.
ВНИИЗЖ, 1995 :78. 15.Сюрин В.Н. и др. Вет. вирус. М., Колос, 1991. 16.Сюрин В.Н. и др.
Диагн. вир. бол. жив. М., Агропромиздат 1991. 17.СюринВ.Н. и др. Част. вет. вирус. Колос,
1979. 18.Сюрин В.Н. и др. Лаб. диагн. вир. бол. животных, М, Колос, 1992. 19. Фомина
Н.В. и др. Вирусы животных. Моск. вет. акад. 1991. 2О.Чевелев С.В. Пат. анат. диагн. вир.
бол. жив, М., Колос, 1984 :78. 21.Anderson J., et.al. Proc Int Symp IAEA and
FAO“Viena”1991 :491. 22.Asserman M. et.al. Vet Med,1990, 9, 2 :121. 23.Anon Asian
267
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Livestock, 1991, 16, 5 :49. 24.Bansol R.P. J Vet Res Int 1986. 25.Baron M.D. et.al. J Gen virol
1993, 74, 2 :299. 26.Bhavani K. et.al. Virus Res., 1989, 12 :331. 27.Brown R.D. et.al. Vet.
Rec.1960 :27. 27a.Brown C.E. et.al. Vet Pathol., 1994, 31, 2 :194. 28.Diallo A. etal. Rev Etvage
Med, 1989, 42, 3 :311. 29.Harl Babu. Akta virol. 1993, 37, 1 :110. 3O.Hsu D. et.al. Virology,
1988, 166 :149. 31.1smail T. etal. Virology, 1994, 198, 1: 138. 32.Kawazu S. et.al. J Vet Med
1991, 53, 2 :341. 33.Languet. B. etal. Comp. Immun. Microb. Infect. 1992, 4 .12. 34.Libeau G.
et.al. Veter Microbiol, 1990, 25, 1 :1. 35.Limo M. et.al. Virology, 1990, 175 :323. 36.Plowright
W. et.al. Hyg, 1984, 92 :285. 37.Prowost A. et.al. Rev Eliv Med Vet Paus trop 1969 :16.
38.Provost A. Rev. Sci. Techn, Int Epizoot, 1982, 1: 589. 39.Ramachandran S. et al. Curr
Sci.(India)1992, 63, 2 :55. 4O.Schaila M.S. J Indian Inst Sch 1990, 70, 5 :463. 41.Sugujama M.
etal. J Gen Virol, 1989, 70, 1 :2605. 42.Tsukiyama K. et.al. Vaccines, 1989, 89 :397.
42a.Tsukiama K. et al. Virology, 1988, 164 :523. 43.Visser Ilona K.G. et.al. J Gen Virol, 1993,
74, 4 :631. 44.Wafulu I.S. et.al. Bull Anim Health and Prod Art 1991, 39, 2 :241. 45.Wamwayi
H.M. et.al. Trop Anim Health and Product 1991, 23, 1 :17. 46.Wamwaayi H.M. etal. Vet
Mirobiol, 1955, 44, 2 :151. 47,Wosu Z.O. et. al. Biomed Lett. 1991, 46, 183 :173. 48.Yamanaka
Metal. Virology, 1988, 166, 1 :251. 49,Yilma T. et.al. Vaccinec, 1989, 89 :393. 5O.YilmaT.
etal. Rev. mond. techn. 1991, 69, 2-6 Dis. 1985, 8, 285
ЧУМА ПЛОТОЯДНЫХ
Febris catarrhalis infectiosa canum; Febris catarrhalis et nervosa canum (лат.); Canin
Distemper, Had pad, Dog distemper (англ.), Maladia de Carre, Maladie des Chiencs,
Maladia du jeune age (франц.); Handstaupe, Staupe des Handes (нем)
Чума плотоядных (ЧП), чума собак (ЧС), болезнь Карре, - остропротекающая контаги-
озная болезнь собак, хорьков, волков, лисиц, шакалов, норок, соболей, енотов и других пло-
тоядных, характеризующаяся лихорадкой, острым катаром слизистых оболочек, пневмо-
ниями, кожной экзантемой и поражением нервной системы. Распространена повсеместно.
Клинические признаки. У зверей различных видов клинические признаки зависят от
ее течения. У лисиц, песцов, норок и соболей при легочной форме отмечают лихорадку, ка-
шель, серозные и серозно-гнойные истечения из глаз и носа, опухание век, ноздрей и ка-
шель, при кишечной форме - понос, при нервной -судороги, эпилептические припадки, па-
раличи конечностей. У норок, кроме этого, часто обнаруживают опухание лапок, которые
принимают вид боксерской перчатки, и пустулезную сыпь на коже головы и лап. У хорошо
развитых и упитанных собак болезнь может протекать с единственным признаком - лихо-
радкой. У енотовидных собак чума протекает без повышения температуры тела и характе-
ризуется слезотечением, изъязвлением роговицы, истечением из носа, кашлем, поносом.
Инкубационный период продолжается от нескольких дней до 3-х нед. Болезнь начинается
повышением температуры тела до 39,5-40°С, которая с колебаниями держится иногда дол-
гое время. У больных отмечают угнетение, озноб, снижение или исчезновение аппетита, ги-
перемию конъюнктивы, катаральное воспаление слизистых оболочек. При легочной форме
развиваются ринит, трахеит, бронхит. Учащенное дыхание (до 80 в мин), влажные хрипы,
очаги притупления и резко повышенная температура указывают на катаральное воспаление
легких. При кишечной форме наблюдают рвоту, запоры, сменяющиеся поносом. Каловые
массы содержат слизь, а иногда при кожной форме на бесшерстных участках кожи живота и
бедер появляется пустулезная сыпь. Сначала появляется красноватый узелок, наполненный
зеленоватым содержимым, вскоре он лопается, образуется мокнущее пятно и затем сухая
корочка.
Нервная форма проявляется то малозаметными признаками, то эти признаки становят-
ся основными в клинической картине болезни. Наблюдают угнетение, пугливость и раздра-
268
Г лава VI. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
жительность, периоды возбуждения, доходящие до припадков, после которых нередко оста-
ются клонические судороги отдельных мышц или групп их. У других животных развивается
атаксия или параличи. Неврологические заболевания чаще наблюдаются у щенков. В голов-
ном мозге находят многофокусные очаги демиелинизации и некрозов в белом веществе, в
частности, в области мозжечка и варолиева моста
Поражение глаз наблюдают при всех формах болезни. Отмечают гиперемию конъюнк-
тивы, светобоязь, вначале прозрачные, затем слизисто-гнойные истечения, гиперемию и
опухание век. Роговица в некоторых случаях мутнеет, становится синевато-белой (кератит),
могут появиться язвы.
Чаще наблюдается смешанное течение болезни. При остром течении животное может
погибнуть за несколько дней. При невыраженных катаральных явлениях в органах дыхания
и пищеварения и при отсутствии обострений животные через 2-4 нед выздоравливают. Ино-
гда остаются хронические процессы в легких, задерживающие развитие молодняка. Нерв-
ные явления (параличи и тики) могут остаться на всю жизнь (31,33,36).
Болезнь, описанную как hard-pad (твердая лапа), в настоящее время рассматривают как
форму ЧС. При ней наблюдают болезненность, ороговение кожи ног, нервные симптомы и
гибель. Клинические проявления заболевания у инфицированных хорьков имели типичный
характер. На 4-е сут после заражения повышалась температура тела до 41,2°С (норма
38,4°С). В последующие сутки наблюдали адинамию, анорексию, конъюнктивит и обильные
выделения из носа, на 8-9-е сутки - судороги и парезы задних конечностей (7). Помимо об-
щеизвестных клинических признаков у собак отмечают ювенильный целлюлит, увеличение
периферических лимфоузлов, везикуло-пустулезный дерматит, рассеянное подкожное абс-
цессообразование и лихорадку. Одновременное развитие ювенильного целлюлита и гипо-
трофической остеодистрофии указывает на то, что оба синдрома могут быть следствием од-
ной и той же болезни (48).
Патологоанатомические изменения. У павших зверей вокруг глаз и носа корочки за-
сохшего экссудата. Слизистая носовой полости набухшая, покрыта слизью, имеет язвочки.
Глаза впавшие, зрачок расширен, на роговой оболочке возможны эрозии. Слизистая горта-
ни и трахеи покрасневшая. Легкие полнокровны, с очагами красной и серой гепатизации.
Плевра утолщена, инфильтрирована точечными или полосчатыми кровоизлияниями. Мио-
кард дряблый. В полости перикарда иногда содержится серозный экссудат. В сердечной
мышце видны сероватые или желтые очаги, точечные и полосчатые кровоизлияния на эпи-
карде и перикарде. Печень и корковое вещество почек в состоянии жирового перерождения.
Селезенка чаще без изменений и лишь в отдельных случаях несколько увеличена. Сосуды
мозговых оболочек и мозга инъецированы, вещество головного мозга отечно, количество
субдуральной жидкости повышено. Слизистая оболочка желудка и кишок гиперемирована и
покрыта густой, клейкой, желто-зеленого цвета слизью, в слизистой желудка возможны
кровоизлияния, эрозии и мелкие язвочки. В слизистой прямой кишки часты точечные или
полосчатые кровоизлияния. Печень рыхлая, паренхима полнокровна, с желтым оттенком.
Желчный пузырь растянут светлой разжиженной или густой и черной желчью. Почки пол-
нокровны, слизистая мочевого пузыря гиперемирована, иногда с синюшным оттенком и
мелкими точечными и полосчатыми кровоизлияниями. Вещество головного мозга гипере-
мировано, иногда отечно.
У песцов часты инвагинация кишок и очаги некроза в печени, у норок в 2-3 раза увели-
чиваются селезенка и подушечки лап. У соболей преобладают воспалительные изменения в
легких. Главными общими патологическими поражениями являются панэнцефалит с пора-
жением мононуклеарньгх клеток, тельца-включения в почечных клетках и нейронах и неко-
торая демиелинизация (2, 5).
269
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
При смешанной инфекции на первый план выступают бактериальные и микоплазмен-
ные агенты. В носовом и конъюнктивальном экссудатах собак основным микробным аген-
том является Staphylococcus epidermidis, а также Bordetelle bronchisepticus, которые выде-
ляются при ЧС в 30% случаев. Помимо этого важным секундарным возбудителем при чуме
собак были Micrococcuc caseulyticus, Micrococcus aurantiacus, гемолитический стрептококк
(группы С и Д) и негемолитический стрептококк. При чуме выделяли анаэробную культуру
из легких больных и павших животных.
Гистологические изменения. У норок устанавливают, в основном, бронхит и периб-
ронхит, катаральную бронхопневмонию и гастроэнтерит, гиперплазию лимфофолликулов
селезенки. У лисиц - острый катаральный гастроэнтерит, острый паренхиматозный нефрит
и гломерулит, серозно-геморрагический цистит, десквамированный лимфоденит и спленит с
редукцией лимфофолликулов, а также разлитая катаральная пневмония. У песцов обнару-
живают чаще всего очаговый некроз клеток паренхимы печени, реже - язвенное поражение
кишечника. У енотовидных собак устанавливают острый серозно-десквамативный катар
кишечника, изъязвление слизистой вплоть до мышечного слоя и энцефаломиелит с преиму-
щественным поражением нервных волокон и нейронов, у соболей - катаральное воспаление
легких, у собак - преимущественно катарально-гнойную бронхопневмонию и негнойный эн-
цефалит, связанный в 50% случаев с демиелинизацией нервных волокон, а также нефрит и
застойную гиперемию печени.
В эпителии мочевого пузыря, бронхов, желчных протоков и в ретикулярных клетках
лимфоузлов больных и павших зверей обнаруживают вирусные тельца-включения, которые
локализуются преимущественно в цитоплазме и имеют круглую или овальную форму. Наи-
больший процент включений выявляют у лисиц и песцов, меньший - у норок. При исследо-
вании 38 собак, павших от энцефаломиелита, вызванного ВЧС, заболевание наблюдалось в
виде полиэнцефалопатии (ПЭП), лейкоэнцефаломиелопатни и смешанного типа. ПЭП
обычно наблюдалась у молодых животных. Начало болезни острое, с судорогами. Энцефа-
лопатии чаще отмечались у взрослых особей с более длительным течением болезни в виде
вестибулярных нарушений и изменений походки (59).
В полости перикарда иногда содержится экссудат. В сердечной мышце видны серова-
тые или желтые очаги, точечные и полосчатые кровоизлияния на эпикарде и эндокарде. Пе-
чень и корковое вещество почек в состоянии жирового перерождения. На гиперемированной
слизистой оболочке мочевого пузыря заметны точечные кровоизлияния. Селезенка чаще без
изменений и лишь в отдельных случаях несколько увеличена. Сосуды мозговых оболочек и
мозга инъецированы, вещество головного мозга отечно, количество субдуральной жидкости
повышено. Главными общими патологическими поражениями являлся панэнцефалит с по-
ражением мононуклеарных клеток, тельца-включения в глиальных клетках и нейронах и
некоторая демиелинизация.
Проведено ЭМ исследование патологических изменений и клеток-мишеней в органах
хорьков, инфицированных ВЧП (шт. Snyder Hill) (42). При морфологическом изучении лег-
ких обнаружено уменьшение воздушности легочной паренхимы, очаговые ателектазы. Ме-
жальвеолярные перегородки несколько утолщены вследствие полнокровия капилляров. От-
мечено ярковыраженное повышение тонуса гладких мышц большинства ветвей бронхов и
сосудов малого круга. Часто просвет мелких бронхов полностью закрыт. Покровный эпите-
лий бронхов дистрофически изменен, местами слущен.
Как показало ультраструктурное изучение, репродукция ВЧП происходит в разных ти-
пах легочных клеток. Наиболее активная репродукция вируса выявлена в клетках покровно-
го эпителия бронхов и слизистых желез. В некоторых случаях практически каждая из этих
клеток имела морфологические признаки инфекции: скопление нуклеокапсидов в цитоплаз-
ме, почкующиеся вирионы на апикальной поверхности клетки (уровень инфицированности
составлял 75-100%). Размножение вируса сопровождалось дистрофическими изменениями
270
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
клеток с последующим слущиванием. Среди спущенных в просвет бронха клеток часто
встречались почкующиеся формы. В легочной паренхиме репродукция ВЧП была зафикси-
рована в альвеолоцитах II типа, в единичных случаях было выявлено почкование вируса в
альвеолоцитах I типа. Таким образом, морфологические признаки репродукции ВЧП были
обнаружены во всех типах эпителиальных клеток респираторной системы.
Вирус размножался также в клетках системы моноНуклеарных фагоцитов (СМФ) лег-
ких. Макрофаги, содержащие скопление нуклеокапсидов в цитоплазме и почкующиеся ви-
русные частицы, встречаются в собственной пластинке слизистой оболочки бронхов, в ин-
терстиции межальвеолярных перегородок и в полости альвеол. В печени инфицированных
животных дольчато-балочное строение сохранено. Воспалительно-клеточная инфильтрация
внутри долек и в области портальных трактов отсутствовала. Обращает внимание большое
количество крупных липидных капель в гепатоцитах. При ЭМ в клетках печени также обна-
ружена репродукция вируса, но менее интенсивная, чем в легких. Наиболее часто репродук-
ция вируса в клетках, сопровождающаяся мелкоочаговыми некрозами, встречалась в пор-
тальных зонах. Самый высокий уровень инфицированное™ вирусом был характерен для
эпителиальных клеток желчных протоков (до 100%). Почкование вирусных частиц происхо-
дило преимущественно на поверхности клеток. Кроме того, вирус размножается в макрофа-
гах, расположенных интерстициально, и гепатоцитах портальной зоны. Почкование вирус-
ных частиц в гепатоцитах зафиксировано также на поверхности клеток. У некоторых жи-
вотных обнаруживали высокий процент инфицированности клеток Купфера (77,2%), но и в
этих случаях размножение вируса отмечали также в небольшом числе гепатоцитов, причем
зараженные клетки, содержащие вирусные частицы, концентрировались в портальных зо-
нах. По-видимому, ВЧП обладает более высоким тропизмом к эпителиальным клеткам
желчных протоков по сравнению с другими клетками печени, а попасть к ним вирусные
частицы могут как с базальной поверхности от инфицированных интерстициальных макро-
фагов, так и с апикальной - из желчных капилляров от почкующихся гепатоцитов.
Во всех исследованных образцах селезенки инфицированных хорьков выявлено измене-
ние в соотношении между белой и красной пульпой в сторону преобладания клеток послед-
ней. Эти изменения обусловлены, с одной стороны, выраженной редукцией белой пульпы, а
с другой - резкой гиперемией органа в целом. Белая пульпа представлена тяжами лимфоид-
ных клеток; лимфоидные фолликулы встречаются крайне редко. У одного животного был
выявлен мелкоочаговый некроз клеток фолликула. На ультраструктурном уровне морфоло-
гические признаки репродукции вируса обнаруживались в клетках СМФ и в некоторых слу-
чаях - в мононуклеарных клетках со слабовыраженными признаками дифференцировки
(39). В почках инфицированных животных выражены дистрофические изменения клеток
проксимальных канальцев. Эти клетки выглядели отечными, часто содержали крупные ли-
пидные включения, набухшие митохондрии В просвете проксимальных канальцев встреча-
лись некротизированные клетки. В клетках остальных отделов канальцевой системы дис-
трофические изменения были менее выраженными. Структура клубочков не претерпевала
заметных перестроек. Явных морфологических признаков размножения ВЧП в клетках по-
чек не выявлено.
Патогенез. Естественный путь передачи вируса чумы у собак - воздушно-капельный.
ЧС значительно отличается от заболевания чумой хорьков. Смертность среди хорьков почти
100%, среди собак примерно 50%. Хорьки обычно не продуцируют протекгивные АТ про-
тив ЧС.
Еще в 1905 г. Сагге показал виремию у больных собак, обнаружив вирус в крови боль-
ных животных с 3-го по 6-й день после инокуляции. После установления виремии вирус об-
наруживается в ряде органов в высоком титре: в селезенке, брыжеечных лимфоузлах, кост-
ном мозге, почках и головном мозге. Установлена обратная связь между наличием АТ и ви-
руса. В течение первой недели после инокуляции вирус распространялся и быстро обнару-
271
ГлаваУТ. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
живался в клетках селезенки, тимуса, костного мозга и лимфоузлов желудка и кишечника,
купферовских клетках печени (63, 64).
Вирусная репликация начинается в отдельных макрофагах, которые переносят вирус в
лимфатические ткани. Далее он появляется в селезенке, тимусе и костном мозге в течение
нескольких дней. Если ВНА появляются в течение недели после инокуляции, то инфекция
становится инаппарантной и вирус не может долго выделяться из суспендированных тканей.
Если у инфицированных собак не хватает протективных ВНА в течение 2 нед после иноку-
ляции, то вирус локализуется в эпителии многих органов и в мозге, в результате чего появ-
ляются клинические признаки болезни (34,35). Проникнув в организм, ВЧС размножается в
лимфоидной ткани, вызывает тяжелую иммунодепрессию, а затем проникает в эпителиоид-
ные ткани и нервную систему, где реплицируется в нейронах и глиальных клетках. Проис-
ходит демиелинизация белого вещества в инфицированных участках без восстановительных
процессов. В олигодендроцитах, где продуцируется миелин, вирус не реплицируется. Одна-
ко в них происходит транскрипция всех вирусных генов и клетки дегенерируют, хотя вирус-
ные белки в них не обнаруживаются. В процессе выздоровления, когда восстанавливается
функция иммунной системы, в местах демиелинизации появляются воспалительные изме-
нения с усилением демиелинизации у некоторых животных. Независимо от дальнейшего те-
чения заболевания вирус продолжает персистировать в ЦНС, причем происходит распро-
странение нецитолитического вируса с ограниченным его почкованием (62).
ВЧС вызывает разрушение лимфатической ткани на ранних стадиях болезни. Эго про-
является снижением резистентности организма к секундарным агентам. Секундарные ин-
фекции играют важную роль в естественном течении болезни. В специальной литературе
опубликовано много сообщений относительно клинического проявления чумы у собак. Carre
(1905 г.) описал чуму как острое контагиозное заболевание, характеризующееся 2-фазным
подъемом температуры, лейкопенией, насморком, конъюнктивитом, расстройствами ЖКТ и
дыхательного. У небольшого количества собак развиваются нервные явления и пустулы на
коже. Синдром заболевания, возникающий у собак среднего и старшего возраста, называе-
мый “энцефалитом старых собак”, или сверхострый диффузный склерозирующий энцефа-
ломиелит, вызван вирусом ЧС. Заболевание характеризуется прогрессирующими двигатель-
ными и психическими нарушениями, которое приводят к гибели животного.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые его обнаружил французский исследователь Карре в 1905 г. Однако оконча-
тельно вирусную природу ЧС доказали Данкин и Лейдлоу в 1926 г., используя в качестве
лабораторной модели хорьков.
Морфология и химический состав. Размер вирионов от 150 до 300 им, вирионы име-
ют внешнюю оболочку толщиной около 5-8 нм с выступами длиной 9-13 нм. Нуклеокопсид
имеет размер 15-18 нм.
Нуклеиновая кислота вируса метится 3Н уридином. Тельца-включения при ЧС пред-
ставляют агрегаты вирусных частиц. Плавучая плотность вирионов в CsCl (1,231 r/см3) н
тартрате калия (1,233 г/см3) оказалась одинаковой. Вирусные частицы, обнаруженные в
гиалоплазме клеток селезенки, легких и почек, инфицированных ВЧП (шт. Snieder Hill)
тхорзофреток, имели различные формы - сферическую, овальную, типа ракетки, филамен-
тозную (до 800 нм). Размеры вирионов колебались от 100 до 200 нм, у некоторых - до 300
нм. В легких они почковались в межклеточное пространство. Капсид представлял матрикс
умеренной осмиефилни с рассеяными в гранулами. Рибонуклеопротеид (РНП) имеет фор-
му гранул в поперечном и тяжей в продольном сечении и хаотично рассеяны в плотном
матриксе капсиды. Нуклеокапсиды, окруженные 3-слойной наружной мембраной, имели на
поверхности большое количество “шипиков”- пепломеров размером 15-17 им (15а).
272
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
Вирионы ВЧС содержат 6 основных белков - L, Н, Р, NP, F1 и F2, имеющих мол.м. 20,
76, 66, 58, 40 и 23 кД соответсвенно. Белки F1 и F2 связаны дисульфидным мостиком в бе-
лок F с мол.м. 62 кД. Белки Н, F1 и F2 гликозилированы, a NP и Р - фосфорилированы. По-
мимо структурных белков вириона в инфицированных клетках выявляется вирусспецифиче-
ский белок NS (мол.м. 18 кД). Иммунологическое родство белков ВЧС с белками вируса ко-
ри (ВК) имеет место по белку Н. Несмотря на близкое иммунологическое родство этих мор-
билливирусов пептидные карты их сильно разнятся (37). Белки с мол.м. 59, 41 и 34 кД со-
ставляют нуклеокапсидный белок (NP), полипептид слияния (F) и мембранный полипептид
(М) соответственно (55, 56). Полипептидный состав ВЧП характерен для группы морбилли-
вирусов (14). В клетках Vero, инфицированных ВЧС, выявлено 7 вирусспецифических
мРНК. Преобладающая из них с мол.м. 52 кД по кодирующей способности наиболее подхо-
дит для кодирования белка NP (23).
Устойчивость. Во внешней среде в выделениях больных животных (кал, слизь) сохра-
няется 7-11 дн, в крови при 4°С - до 14 дн, в селезенке - до 2 мес, в органах павших живот-
ных при -20°С - до 6 мес, в крови - до 3, в носовой слизи - до 1-2 мес. При -10°С сохраняет-
ся в течение нескольких месяцев, при -76°С - неограниченное время, а в лиофилизирован-
ном состоянии - более года. Высушенный вирус устойчив при комнатной температуре, а
инактивированный формалином или фото динамически (метиленовым синим) сохраняет АГ-
свойства в течение длительного времени. При 60°С вирус инактивируется за 30 мин, при
100°С - мгновенно. Вирус, культивированный в КЭ, менее стабилен, чем содержащийся в
гомогенатах вируссодержащей ткани. ВЧП инактивируется видимым светом. Телячья сыво-
ротка или глютатион снижают скорость инактивации ВЧП. Аминокислоты и р-р Эрла ока-
зывают стабилизирующий эффект на световую чувствительность вируса. Однако некоторые
ингредиенты среды могут увеличивать чувствительность вируса к свету. Вирулентный ВЧП
в ткани селезенки собак при 60°С сохранялся в течение 30 мин при 37°С - в течение 60
мин, ио инактивировался при 56°С. Вирус в экссудате носовой полости при комнатной тем-
пературе сохранялся в течение 20 мин. При 0°С относительно быстро инактивируется, за-
мораживание и оттаивание ведет к снижению его титра. Шт. Anderstepoort сохранял инфек-
ционность в ХАО в течение 37 мес при -16-18°С, а в 10%-ной суспензии при -5°С в течение
60 дн. Селезенка инфицированных хорьков сохраняла патогенность для этих животных в
течение 693 дн при -24°С. Инфекционность вируса в клеточной суспензии сохранялась в те-
чение 172 дн при -30°С. Адаптированные к КЭ штаммы ВЧП (Onderstepoort и Lederti) в
суспензии, приготовленной на р-ре сахароза-глюкоза-глютамии, сохраняют инфекционный
титр в течение 6 мес при 65°С. Вирус, размноженный в КЭ, в замороженных эксплантатах
ХАО сохранял активность в течение 7 лет при -65°С. Сходные результаты получены и с ви-
руссодержащими эксплантатами селезенки и мозга инфицированных собак.
Для штаммов, адаптированных к КЭ, лиофилизация может явиться причиной потери
титра вируса, который обычно снижается на 0,5-1,5 1g, что может отражаться на активности
коммерческих вакцин. Лиофилизированный ВЧП при 5°С сохранял активность в течение 5
мес. Он сравнительно устойчив при pH 4,5 и выше, частично инактивируется при pH 9,0.
Оптимальный pH - 7,0. Наиболее стабильный шт. Wigeonsin FXNO сохранялся при pH 8,8,
но активность его падала при pH выше 9 и ниже 8. ВЧП инактивируется Уф лучами - 22000
Эрг/см2 снижает титр вируса на 1 1g. Радиация 105 рентген р-частицами снижала титр на 4
1g при -70°С и на 1 1g при 0°С. Вирус инактивируется хлороформом и эфиром. 0,05% р-р
формалина инактивирует его при 37° С в течение 4 ч. p-пропиолактон в конечной концен-
трации 0,1% инактивировал данный вирус в течение 2-х ч при 37°С. Инфекционность ви-
руссодержащей ХАО исчезала через 7-8 нед в условиях 4°С и через 7-8 дн при 25°С. Сус-
пензия вируссодержащей ХАО полностью инактивировалась через 15 ч при 15°С, через 1 ч
при 37°С. Вирус, репродуцированный в культуре клеток КЭ, через 2 ч инактивировался на-
18 Зак. № 171
273
ГлаваУТ. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
половину при 21°С, через 1 ч - при 37°С, через 10 мин - при 45°С и через 2-3 мин - при
56°С.
Антигенная структура, вариабельность и родство. ВЧП в составе имеет преципити-
рующий и КС АГ. Растворимые АГ из ВЧП преципитируются в агаровом геле гипериммун-
ной сывороткой. ВЧ в иммунобиологическом отношении однороден. Различные изоляты и
варианты адаптированных штаммов ВЧП не могут быть серологически идентифицированы
подобно другим членам группы MRD (М - meacles - корь, R - rinderpest - чума КРС, D -
distemper - чума собак).
Все выделенные штаммы обладают общими свойствами, позволяющими отнести их в
одну группу. Однако по происхождению и некоторым биологическим особенностям их мож-
но разделить на 2 подгруппы: классические и вариантные. Классические штаммы нейтрали-
зуются в высоких титрах сыворотками к гомологичным штаммам, тогда как вариантные
штаммы нейтрализуются в очень низких титрах. Между вирусами ЧП и кори установлено
АГ иммунобиологическое родство, а также односторонняя АГ связь между ВЧП и ВЧ КРС.
Связь между ВЧС и ВК у других видов животных была более комплекс ной. У обезьян,
хорьков и морских свинок, инфицированных ВК, образовывались антикоревые ВНА и низ-
кий тигр АТ к ВЧП. Хорьки, инфицированные ВК, были частично устойчивы к последую-
щему контрольному заражению вирулентным ВЧП.
Недавно выделенные в США, Европе, Африке изоляты вируса от различных видов жи-
вотных значительно отличаются от вакцинных штаммов ВЧС. Все проанализированные
изоляты дикого штамма группируются согласно географическому распространению, а не в
соответствии с видами хозяина. Эпизоотию у крупных кошачьих в Калифорнийском Сафа-
ри-парке связывают с заражением вирусом не кошачьих плотоядных (38).
Установлено уникальное родство между ВЧС и вирусом чумы тюленей (ВЧТ). Отмечена
максимальная (67%) гомология гена М ВЧТ с ВЧС, далее следует ВК (58%) и ВЧ КРС
(57%). По белку М ВЧС и ВЧТ имеют 90% гомологии; гомология с другими морбилливиру-
сами составляет 73-77%. Белок М - наиболее консервативный белок морбилливирусов (58).
В другом сообщении степень гомологии генов N и Р ВЧТ и ВЧС составляла 84-76% соот-
ветственно. Эти различия на геномном уровне показывают, что ВЧТ и ВЧС относятся к раз-
ным видам морбилливирусов (27). Подтверждается ранее высказанное предположение о
том, что тюлени могут быть источником заражения млекопитающих (собак, норок) (25).
В 1987-1988 гг. в популяции байкальской нерпы зарегистрирована эпизоотия, при кото-
рой пало несколько тысяч животных. Возбудителем оказался слабопатогенный для собак
морбилливирус (18). Помимо озера Байкал подобная эпизоотия имела место на Балтийском
море. Возбудитель её оказался близким или идентичным вирусу ЧП. У собак, инокулиро-
ванных ВЧ КРС, образуется устойчивость к вирулентному вирусу ЧП. Иммунологические и
серологические связи между вирусами ЧП и чумы КРС детально освещены Imogava и
Plowright (42). ВЧП не вызывал защиту против ВЧ КРС. Вирус морских свиней имеет бо-
лее тесную связь с ВЧП и ВЧТ, чем с другими морбилливирусами (49). Что касается АГ ак-
тивности ВЧП, его стабильности и локализации, то данные литературы не изобилуют фак-
тическим материалом. При центрифугировании в градиенте CsCl выделены 3 стабильных
КС АГ (шт. Onderstepoort). Один из них, вероятно, был белком с плавучей плотностью
1,289S, а 2 других - липопротеинами с плавучей плотностью 1,234S и 1,140S.
Локализация вируса. До последнего времени считалось, что виремия при ЧС связана
исключительно с лейкоцитами, что подтверждалось ИФ. Однако недавно было показано,
что ВЧС может быть в плазме крови, которая обеспечивает экстрацеллюлярную диссемина-
цию вируса, а также в лейкоцитах. Раньше всего вирус удается выявить в миндалинах и
бронхиальных лимфоузлах. Отсюда с кровью он проникает в костный мозг, селезенку, лим-
фоузлы, что сопровождается первым подъемом температуры. У большинства выживших со-
274
ГлаваVI. Parammyxoviridae Парамиксовврусные инфекции
бак вирус обнаруживается в эпидермальных клетках конечностей (синдром расстройства
ЦНС и затвердение подушечек лап после переболевания, по-видимому, объясняются этим
явлением.)
Доказана персистенция ВЧС в ЦНС. Вирус выделяют из крови, лимфоузлов, селезенки и
других внутренних органов собак. У переболевших животных наблюдается вирусоноситель-
ство в течение 1-2 мес.
У хорьков репродукция ВЧП осуществляется в нескольких типах клеток (Рис. 41). Во
всех изученных органах выявлены клетки СМФ с морфологическими признаками инфек-
ции. Очевидно благодаря клеткам именно этого типа происходит диссиминация вируса в
различные ткани органов (6). Недавно установлено, что оболочечный ГА (ГА белок) опре-
деляет клеточный тропизм (58а).
Антигенная активность. При введении ВЧС на 5-6-й день в организме вырабатывают-
ся АТ на все его АГ. КСА обнаруживаются в кровн с 10-15-го дня ; на 15-20-й день дости-
гают максимального титра н обнаруживаются в течение года после переболевания. У песцов
и серебристо-черных лисиц АТ в РСК обнаруживаются на 12-14-й день; на 25-30-й день
тигр их достигает максимума, а через 90-110 дн они не выявляются совсем. У норок АТ в
РСК обнаруживаются на 20-25-й день после заражения, а исчезают через 60-70 дн. Более
надежными иммунологическими показателями являются ВНА, которые появляются впервые
через 8 дн после аэрогенного заражения вирулентным вирусом. В сыворотке они были об-
наружены на 8-9-й день приблизительно у 50% собак.
Серологические обследования собак в Ливерпуле на АТ к коронавирусу собак (в PH со
шт. К-378 в клетках А-72), ВЧС (в PH со шт. Onderstepoort в клетках VERO) и ротавирусу (в
непрямой ИФ с ротавирусом обезьян S -11, на клетках МА-104) АТ обнаружены соответст-
венно у 54, 84, 70 и 80% животных. Количество животных с АТ к ВЧ, корона- и ротавирусу
возрастало с увеличением возраста животных (60). Для титрования АТ к ВЧП перспективно
применять метод латекс-агглютинации. Этот тест в сравнении с другими реакциями гораздо
проще, быстрее и дешевле при диагностике кори и оценке эффективности коревой вакцины
и чумы собак (1). ВНА к ВЧП передаются от матери к потомству in utero и с молозивом.
Щенки с титром материанских АТ менее чем 1:20 чувствительны к заражению вирулент-
ным шт. Snyder Hill ВЧП, с титром АТ выше 1:100 устойчивы к контрольному заражению.
Материнские АТ препятствуют иммунологической реакции на вакцинацию; с ними связаны
неудачи при иммунизации щенков вакцинным вирусом. Установлена высокая степень кор-
реляции результатов реакции иммуносорбции фермент-мечеными АТ (РИФМА) и PH для
выявления клонов AT IgM и IgG в течение 70 дн после инфекции (52).
Экспериментальная инфекция. Клиническое течение чумы у экспериментально зара-
женных хорьков проявляется перемежающей лихорадкой с 4-6-го дня после инокуляции.
Через 4 дня появлялись поражения кожи.
Одновременно с адаптацией к организму хорьков наблюдается ослабление вирулентно-
сти вируса для собак. Кролики и морские свинки реагируют на искусственное заражение
только кратковременным подъемом температуры, хотя вирус у них хорошо сохраняется.
Взрослые кошки невосприимчивы к ВЧП, тогда как месячные котята тяжело переболевают
при парентеральном заражении. Белые мыши мало восприимчивы, но при последователь-
ном пассировании вируса удается получить фиксированный для мышей штамм, вирулент-
ность которого для собак сохраняется. Наиболее восприимчивы к ВЧП оказались мыши ли-
нии Balb. Обезьяны невосприимчивы к вирусу, хотя его удается выделить из организма за-
раженных особей. В качестве лабораторных животных используют белых африканских
хорьков и тхорзофреток.
Экспериментальная инфекция почти всегда удается при введении вируссодержащего
материала per os, подкожно, внутривенно и путем аэрозоля. Для этого лучше использовать
18*
275
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
щенков 6-12-мес возраста. Кроме собак, парентеральным и контактным способами удается
заразить волков, лисиц, норок, хорьков, ласок и речных выдр.
Культивирование. Первые опыты по культивированию ВЧП в эксплантатах ткани про-
водил Mitscherlich в 1938 г. Позднее его размножали в эсплантатах селезенки, мезентери-
альных лимфоузлов, легких и тестикул 10-14-дн щенят. Авторы провели 19 пассажей, при
этом тигр вируса в эксплантатах селезенки достиг 2-104 ИД/г. ВЧП активно размножается в
первичных культурах клеток почки собак, хорьков, легких собак и хорьков; в первичной
культуре клеток почки щенят 3-4 дн возраста. В этих культурах на среде 199 с добавлением
20% сыворотки телят ВЧП образует бляшки под агаровым покрытием. В клетках HeLa и
линии клеток печени человека вирус не вызывал ЦПЭ (9,10).
При сравнительном изучении репродукции 3-х штаммов ВЧП на различных клеточных
системах установлено, что у 1-го из них (шт. Рокборн) отсутствовало выраженное ЦПД, 2-й
штамм накапливался в титре 3,5-5,0 1g ТЦДзо/Мл и шт. Акбар-37 накапливался в титре 5,0-
6,5 1g ТЦДзо/Мл (17). Штаммы, адаптированные к КЭ, хорошо развиваются в культуре фиб-
робластов КЭ, перевиваемых линиях клеток HeLa, Hep и др. Максимальное накопление
адаптированных штаммов в культуре клеток отмечено на 8-9-й день. Вирус репродуцируется
в культуре альвеолярных макрофагов легких собак. Через 2-6 дн в ней формируются харак-
терные круглые многоядерные гигантские клетки, которые через 1-2 нед исчезают с образо-
ванием синцития. Адаптированный к клеткам Vero шт. Green ВЧП способен образовывать
бляшки в клетках Hep-2, BS-C-1 и HeLa, но не в клетках Vero и культуре клеток почки собак
(41). Адаптированный к КЭ или культуре клеток, вирус может размножаться во многих кле-
точных системах (собак, КРС, обезьян, человека). ВЧП вызывает ЦПЭ и титры его выше в
роллерных культурах, чем в стационарных.
Предложен метод крупномасштабного культивирования ВЧП на микроносителях
Gelaspker М (Lachema, Bruc) (диаметр 150-200 мкм), для чего клетки КЭ или Vero выращи-
вают в виде псевдосуспензионной культуры. При этом биологическое накопление вируса
более чем в 10 раз превышало таковое при использовании стационарных культур (46).
Разработан метод дифференциации патогенных и аттенуированных штаммов ВЧП in
vitro. МонАТ реагируют с нуклеокапсидным АГ аттенуированного шт. Onderstepoort, кото-
рый культивируется в клетках Vero и не реагирует с патогенными шт. А75/17 и СН84, куль-
тивируемыми в первичных культурах клеток собак. Однако после нескольких пассажей в
клетках Vero штаммы приобретали эпитоп, реагирующий с монАТ, одновременно утрачи-
вали патогенность для собак (40).
Шт. Д84-1 ВЧС, адаптированный к культуре фибробластов КЭ, вызывает выраженные
ЦПИ в культуре клеток и незначительное бляшкообразование на ХАО. Шт. Д84-1 генетиче-
ски стабилен и нейровирулентен для мышат (53).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Спектр патогенности в естественных условиях. ВЧП обладает широким спектром
патогенной активности: во-первых, это животные рода Carnivora (плотоядные) подвида
Fissepeda (имеющие несоединенные перепонкой пальцы задних конечностей) или land
cornivous (сухопутные земные плотоядные); во-вторых, все животные семейства собачьих,
енотовых и куньих чувствительны к заражению, хотя это доказать не так легко из-за недос-
татка “под руками” некоторых видов; в-третьих, плотоядные (Carnivores), относящиеся к
семействам гиен и медведей, относительно устойчивы к ВЧС. У зараженных домашних ко-
шек развивается инаппарантная и абортивная инфекция на экспериментальное их зараже-
ние. Сравнительные данные заболеваемости ЧС в зависимости от возраста характеризуются
следующим: в возрасте 4-6 мес заболевают 74% собак; в возрасте 6-12 мес - 51; в возрасте
1-2 года - 37; в возрасте 2-3 года - 19; в возрасте 3-4 года - 16; в возрасте 4-5 лет - 6; в воз-
расте 6-10 лет - 3-4%. Щенки, полученные от иммунных матерей, более устойчивы к кон-
276
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
тральному заражению вирулентным вирусом. Патогенность ВЧС варьирует от вида к виду
от инаппарантной инфекции до летальной в 100% случаев (50).
Чувствительность домашних хорьков (Mustela putorius) была показана в 1926 г. Dunkin
nLeidlouw. С 1958 г. эти животные вследствие их высокой чувствительности к ВЧС стали
успешно использоваться для изучения передачи инфекции и титрования самого вируса.
Чума у черно-бурых лисиц (vulpes vulpes) впервые описана Grun в 1926 г. Клинически
чума у лисиц протекает легче, чем у собак, и смертность среди них (в случаях осложнения
сальмонеллезом) достигала 20%, у щенков черно-бурых лисиц - 80%. Взрослые норки
(Mustela Vison) сравнительно устойчивы к заражению, тогда как щенки норок чувствитель-
ны, смертность среди них колебалась от 40 до 60%. У норок наблюдали 2 клинические фор-
мы инфекции: острую - внезапная смерть без клинических предвестников болезни и хрони-
ческую форму с проявлением нервных явлений. В зоопарке Иоганесбурга наблюдались
вспышки ЧС среди серебристых шакалов (Vulps choma). Имеются сообщения об эпизоотиях
среди собачьих: красных лисиц (Vilpes fulva), серых лисиц (syon einercoargentueus), амери-
канских карликовых лисиц (Vulpes macrotis), южноамериканских лисиц, австралийских
динго (Conis dingo), енотовидных собак (Conis pwyannodes), европейских барсуков (Meles
meles) и гибридов котят с собакой. Чувствительность американских барсуков (Taxidea taxus)
доказана Gorham в 1966 г. Тогда же Keymer и Epps установили чувствительность к ВЧС
горностаев (Mustelo erminea), ласок (Mnivalis) и маленьких ласок (M.rixosa). В 1968 г.
Mickwitz показал чувствительность к этому вирусу гималайского енота. Данные последних
лет также подтверждают восприимчивость к ЧП среди мустелид (куницы, барсуки, хорьки,
ласки) (47). Таким образом, чувствительны к ВЧС представители ряда семейств: Ailuridae,
Canidae, Hyaenidae, Mustelidae, Procyonidae, Ursidae, Viverridae, Felidae. В последние годы
благодаря широкой вакцинации число вспышек ЧС, пушных зверей на фермах и плотояд-
ных в зоопарках сильно понизилось, однако все еще происходят регулярные вспышки у пло-
тоядных, живущих на свободе. Так, неожиданные вспышки ЧС имели место у экзотических
кошачьих в калифорнийском заповеднике и в заповеднике Серенгети в Танзании, а также у
некоторых плотоядных в Аризоне (21).
Haig и др. (1948) были первыми исследователями, которым удалось серийно пассиро-
вать шт. Onderstepoort ВЧС на КЭ (при 35°С), заражаемых на ХАО. Авторы провели 30
пассажей, отмечали значительные утолщения ХАО и появление на ней серых фокусов начи-
ная с 9-го пассажа. Позднее (1956) обнаружили, что 130-й пассаж на КЭ оказался безопас-
ным для хорьков и собак. В дальнейшем последовал ряд сообщений о получении апатоген-
ных вариантов ВЧС после серийных пассажей на КЭ.
Высказано предположение, что ВЧС может быть этиологическим агентом болезни Пед-
жета. Методом ИФА АТ к ВЧС обнаруживались в сыворотках больных и в контрольной
группе. Существенных различий в титрах АТ не выявлено. Интересен факт образования АТ
ВЧС у людей, что свидетельствует о возможности заражения их ВЧС (32).
Экспериментально вызванная туляремия у собак имела клиническое сходство с чумой.
Анаэробная культура выделяется из легких в 70% случаев при ЧС. Анаэробные бактерии
были обнаружены в 63% случаев: 22%-стрептококк; 13% - Е. coli; 8% - Proteus Vulgaris и
4%- Staphilococcus epidermidis. Описаны случаи двойной инфекции норок вирусами алеут-
ской болезни и ЧС (51). Чаще всего сопутствующим при ЧС вирусом является возбудитель
инфекционного гепатита собак. В комбинации с ВЧС могут присутствовать реовирус, гер-
песвирус, вирус ПГ собак, сходный с SV 5, и аденовирус.
Адаптированный к КЭ ВЧС, контаминированный вирусом птичьего лейкоза, не вызы-
вал патологических изменений у собак и АТ вирусу саркомы Рауса не образовывались. Со-
общалось об обнаружении вируса ЛХМ как контаминанта при пассировании коммерческого
277
ГлаваVI, Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
вакцинного ВЧС. Предполагают, что ВЧС может активировать латентную токсоплазменную
инфекцию. Кокцидиоз сильно осложняет клиническую картину болезни у молодых собак.
В 1994 г. поголовье львов в Национальном парке Серенгети (Танзания) уменьшилось с
3000 до 2000. Эпизоотия распространилась на львов в Кении. Резервуаром инфекции скорее
всего являлись обитающие в районе Серенгети домашние собаки, от которых заразились
пятнистые гиены, инфицировавшие затем львов (57).
ДИАГНОСТИКА
Многообразие симптомов болезни затрудняет своевременную постановку диагноза. До
последнего времени ЧП диагностировали на основании эпизоотологических, клинических и
патологоанатомических данных, а в затруднительных случаях ставили биопробу на 30-45-дн
щенках собак, лисиц, песцов, норок или на белых африканских хорьках.
Микроскопия телец-включений. Цитоплазматические и реже внутриядерные эозино-
фильные тельца-включения являются патогномоническими для ЧС. Они обнаруживаются в
ретикулярных и эпителиальных клетках, лейкоцитах, глиальных клетках и нейронах. Обна-
ружение телец-включений важно при диагностике ЧС.
Для обнаружения телец-включений предложен метод окраски мазков гематоксилином
Делафильда с эозином. Более простой и быстрый метод окрашивания включений, которым
можно пользоваться непосредственно в зверохозяйствах, заключается в следующем. Готовят
2 основных насыщенных р-ра красок на метаноле (метиловом спирте): а) 9 г метиленового
синего растворяют в 90 мл метанола и б) 3 г основного фуксина - в 30 мл метанола. Для со-
зревания р-ры необходимо выдержать не менее 12 сут. Их можно длительное время хранить
при комнатной температуре в плотно закрытых флаконах из темного стекла. Для получения
рабочего р-ра краски к 10 мл дистиллированной воды добавляют 3 капли раствора метиле-
нового синего и 1 каплю р-ра основного фуксина. При таком соотношении краска имеет си-
не-фиолетовый цвет.
На фиксированный или нефиксированный препарат пипеткой наносят краску. Через 1
мин её сливают (остатки краски можно смыть водопроводной водой или удалить фильтро-
вальной бумагой). Окрашенный мазок подсушивают на воздухе и просматривают под им-
мерсионной системой микроскопа. Крупные включения видны при среднем увеличении.
Парафиновые срезы, после их депарафинирования, окрашивают 3-6 мин. Ядра эпителиаль-
ных клеток окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, цитоплазма в светло-сиреневый, вирус-
ные тельца-включения в ярко-красный или малиновый. Включения расположены в цито-
плазме или внеклеточно. Величина их - от мельчайших частиц до размера ядра клетки, ко-
личество - от единичных до 10 и более в одной клетке. Они могут быть круглые, овальные,
полиморфные. Имеют четкие ровные края. Как правило, включения обнаруживаются во
многих клетках, иногда лишь в единичных.
Для прижизненного исследования можно взять эпителий конъюнктивы, языка и других
доступных слизистых оболочек больного животного, а также пробы крови для выделения
телец-включений в лейкоцитах. Последнее позволяет поставить диагноз на ЧП в самый ран-
ний период болезни, даже до появления типичных клинических признаков.
Экспресс-диагностика. В качестве методов экспресс-диагностики, по-видимому, могут
применяться РИГА и реакция латекс-агглютинации.
Выделение вируса
От собак с острой инфекцией почти всегда выделяли вирус. Он обнаруживался в смывах
из носовой полости больных животных через 28 дн после заражения. Вирус можно выделить
из носового и конъюнктивального экскретов, слюны, крови (лейкоцитов кровяного сгустка)
и некоторых органов, реже из мозга и фекалиев собак в ранней стадии развития болезни.
Взятие и подготовка материала. От больных животных берут кровь в период лихора-
дочного состояния, а также мазки из носа и конъюнктивы. От свежих трупов (не менее чем
3-4) берут кусочки легких, трахеи, селезенки, почек, головного мозга и мочевой пузырь. Для
278
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
серологических исследований берут кровь как можно быстрее после проявления клиниче-
ских признаков и повторно спустя 14-21 день. Материал отправляют нарочным в термосе со
льдом. Подготовку материала для выделения вируса проводят общепринятым методом.
Использование культур клеток. Для выделения полевого вирулентного вируса ис-
пользуют монослойную культуру клеток легких и почки собак и кроликов, причем наиболее
подходящей для этой цели оказались культуры клеток почки хорька. Для размножения ви-
рулентного ВЧС использовали альвеолярные макрофаги собак, полученных путем стериль-
ного измельчения кусочков легкого от SPF собак. Этот метод оказался пригодным и для
титрования вирулентного ВЧП.
Биопроба. Биопробу ставят на животных того вида, от которых исследуют патматериал.
Лучше ее проводить на щенках через 15 дн после отъема от самок. Животные заболевают на
10-14-й день, а иногда и через 1-2 мес с характерными признаками болезни.
Выделение вируса на КЭ. В первых пассажах ВЧП вызывает лишь слабое помутнение
ХАО и гибель КЭ в 5-10% случаев. При дальнейшем пассировании поражение ХАО стано-
вится более выраженным. О наличии вируса судят по специфической гибели эмбрионов, по-
ражению ХАО и РГА. При инокуляции в желточный мешок гибель эмбрионов наблюдается
на 7-11-е сут, титр вируса достигает 105-106 ЕЛД50/МЛ. Вирусоскопия, электронная и имму-
ноэлектронная микроскопия широко не используются.
Индикация и идентификация вируса
ИФ. Позволяет поставить быстрый и ранний прижизненный диагноз на ЧП. У хорьков
самые надежные результаты получают при исследовании мазков крови. ИФ используют
также для исследования кусочков органов от павших животных. Наиболее пригодны мозже-
чок, мочевой пузырь, желудок, легкие, большой и продолговатый мозг. В ИФ АГ ВЧП об-
наруживали в мазках костного мозга, фиксированных ацетоном, в лейкоцитах крови и эпи-
телиальных клетках конъюнктивы. В мононуклеарных клетках крови его обнаруживали на
2-3-й день после экспериментального заражения. Ряд авторов рекомендуют применять ИФ
для обнаружения вирусного АГ в ЦНС, а также проводить гистологическое исследование
препаратов мочевого пузыря, почечной лоханки и кожи.
PH. Её применяют для идентификации вируса в культуре клеток. Сущность реакции со-
стоит в том, что к зараженной культуре добавляют питательную среду с 5%-ной специфиче-
ской сыворотки сразу же после контакта вируса с культурой клеток. По подавлению ЦПД
вируса судят о специфичности поражений клеточного монослоя.
РСК. При диагностике чумы РСК применяют для обнаружения специфического АГ в
органах больных животных или культуре клеток. Реакцию ставят методом разведения ком-
племента при постоянном контакте АГ и иммунной сывороткой. В качестве АГ используют
10%-ную суспензию органов (селезенки, печени, мозга), взятых в период ярко выраженной
клинической картины болезни, или культуральную жидкость на 5-7-е сутки. В качестве спе-
цифической сыворотки берут гипериммунную сыворотку и сыворотку реконвалесцентов.
РДП. Преципитирующий АГ появляется в органах животных на 3-4-й день болезни и
всегда обнаруживается в органах павших животных. В качестве АГ используют 10%-ую
суспензию органов больных животных (селезенка, лимфоузлы, костный мозг, тимус, голов-
ной мозг, легкие, печень, почки, слюнные железы, поджелудочная железа, моча, перитоне-
альная жидкость). Свиньи - хорошим источником антисывороток против ВЧП (2,4,5).
ИФА. При ретроспективной диагностике метод не описан, хотя успешно используется
иммуноферментная тест-система на основе вируса кори, полученного при культивировании
клеток на микроносителях цитолар. В 1990 г. (66) предложено получать свиной иммуногло-
булин к ВЧП. С этой целью иммунизировали поросят шт. Рокборн н CND.65.4n дважды
интраназально. Полученная сыворотка не реагировала со специфичными для плотоядных и
культуральных компонентов (фетальная сыворотка, лактальбумин) АГ, что является боль-
279
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
шим преимуществом в иммунологических исследованиях. Меченный пероксидазой свиной
иммуноглобулин к ВЧП использовали для обнаружения и титрования ВЧП в культуре кле-
ток Veto. Для определения и титрования ВНА разработан соответствующий ELISA (66).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Для ретроспективной диагностики
ЧП используются PH, РСК, РДП. Объектом исследования в данном случае являются пробы
сыворотки крови переболевших животных. Реакции выполняются общепринятыми метода-
ми. Наличие АТ, выявляемых в любой из указанных реакций, в сыворотке крови животных
свидетельствует о переболевании их чумой. Для выявления АТ к ВЧП предложены РИГА,
которая не уступает ELISA (29).
А.В. Васильев и соавт. (3) разработали набор на основе сенсибилизированных эритро-
цитов, содержащий все необходимые компоненты в готовом виде: специфический ВЧП,
эритроцитарный диагностикум, специфическую и отрицательную к ВЧП сыворотки, разба-
витель и микропанель для постановки реакции. Набор можно использовать в ветеринарных
лабораториях и других специализированных учреждениях. РИГА по сравнению с PH более
чувствительна, совпадаемость результатов превышает 90%. В- РИГА улавливают АТ не
только к поверхностным АГ вируса, но и ко всем вирионным белкам (1), а также выявляют
АТ в более низких титрах, ещё не улавливаемых в PH. При исследовании сывороток крови,
полученных в динамике развития болезни, устанавливается 4-кратное увеличение титра АТ
(диагностический прирост титра) уже на 5-7-е сут после первого взятия крови. Таким обра-
зом, РИГА, осуществляемая с помощью набора эритроцитарных диагностикумов, - быст-
рый, чувствительный, специфический и воспроизводимый метод выявления АТ к ВЧП. С
помощью набора можно быстро подтвердить или исключить клинический диагноз - чума,
при этом в спорных случаях образцы сыворотки необходимо дополнительно обработать
меркаптоэтанолом для тестирования специфических IgM. Показано, что латексный АТ ди-
агностикум эффективен на ранней стадии болезни (8). Обнаружение АГ ВЧП также воз-
можно с использованием радиоактивных ДНК-РНК-зондов (43).
Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на чуму исключают ин-
фекционный гепатит (инфекционный энцефаломиелит плотоядных), бешенство, болезнь Ау-
ески, вирусный энтерит норок, паратиф, пастереллез, авитаминоз Вь парвовирусный энте-
рит, алеутскую болезнь, отравления.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У собак-реконвалесцентов наступает продолжительный, практически пожизненный им-
мунитет, однако устойчивость переболевших животных к реинфекции не абсолютная. Мно-
гие собаки, легко перенесшие искусственное заражение, в дальнейшем погибают от реин-
фекции. При естественном заражении животные даже при легком переболевании приобре-
тают прочный иммунитет. Щенки от иммунных матерей, а также подсосные, невосприим-
чивы к чуме в течение 2-3 мес.
Применение живых вакцин. В Российской Федерации и странах СНГ для профилак-
тики ЧП применяют сухие культуральные вирус-вакцины из аттенуированных штаммов.
Живая вакцина против ЧП обеспечивает выраженный гуморальный и клеточный иммунный
ответ и полную защиту от болезни. Необходимо учитывать данные об иммуносупрессивном
действии парвовирусной инфекции на иммунизацию против ЧП.
Щенков прививают в возрасте 10-12 нед, когда угасает колостральный иммунитет. Ре-
вакцинацию следует проводить ежегодно. Маточное поголовье зверей (норок и лисиц) вак-
цинируют в зимние месяцы, а молодняк - аэрозольно после отсадки от матерей в возрасте
около 10 нед. При аэрозольной вакцинации наряду с гуморальным образуется также мест-
ный иммунитет. Щенков лисиц вакцинируют подкожно.
ВНА появляются спустя 6 дн после вакцинации и сохраняются не менее 6 мес. Позже
обнаруживаются КСА. У переболевших животных вирусоносительство длится 1-2 мес. Ино-
280
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
гда вирус удавалось выделить от старых собак с явлениями энцефалита (61). При введении
живых вакцин начиная с 3-го дня наблюдается устойчивость к заражению ВЧП, обуслов-
ленная интерференцией, тогда как АГ эффект обнаруживается через 7-10 дн (6). Материн-
ский иммунитет длится 6-8 нед, а период полураспада ВНА равен 8,5 дн (11,12,19).
Для профилактической иммунизации собак против чумы поверхностный F-антиген ви-
руса представляет больший интерес, чем Н-АГ, так как он индуцирует иммунитет, блоки-
рующий инфекцию, предотвращает репликацию вируса и появление клинических признаков
болезни. ИСКОМ, содержащий F-АГ и Н-АГ ВЧП, вызывал у привитых собак образование
ВНА и развитие иммунитета, а также защищал тюленей от патогенного для них морбилли-
вируса. ИСКОМ, содержащий белки F и Н вируса кори, создавал частичную защиту у собак
к ВЧП (54). Некоторые исследователи считают, что АГ F вируса представляет большой ин-
терес, так как индуцирует иммунитет, способный блокировать латентную инфекцию, пре-
дотвратить реактивацию вируса и появление клинических признаков болезни (44, 45, 54).
В состав вакцины ‘Тетравак” входят, используемая в качестве растворителя, жидкая
инактивированная вакцина против инфекционного гепатита, аденовироза н парвовирусного
энтерита собак (2 см3), а также сухая живая вакцина против ЧП из шт. ЭПМ (1 см3). Имму-
низацию собак проводят за 1 мес до вязки и не ранее чем через 14 дн после вакцинации про-
тив других инфекций. Щенков прививают с 8-нед возраста. Вакцину вводят подкожно в об-
ласть лопатки или внутримышечно с внутренней поверхности бедра собакам массой до 5 кг
по 1 см3, более 5 кг - по 2 см3. Щенков через 7-10 дн ревакцинируют. Иммунитет наступает
через 2 нед после ревакцинации и сохраняется до 1 г (13,26, 28, 68).
Использование гетеротипичных вирусов. Такими вирусами являются ВК, ВЧ КРС.
Однако вакцинация собак ВК не имела преимущества перед аттенуированными вакцинами
из ВЧС. При этом не ясно действительно ли ВК размножается в организме собак, т.к. пред-
принимаемые попытки изоляции ВК от привитых собак не имели успеха. И тем не менее, со
времени открытия тесной родственной связи между возбудителями ЧП, кори человека и чу-
мы КРС миллионы доз противокоревой вакцины были с успехом применены для иммуниза-
ции щенков собак против ЧП. Иммунитет, к вирусу чумы, индуцируемый коревой вакциной,
у собак длится 5 мес.
Применение инактивированных вакцин. Инактивированные вакцины нашли широ-
кое применение, хотя надежда в получении такого рода вакцин не оправдана. Ныне приме-
няются два варианта инактивированной вакцины. Для изготовления препарата вирулентные
шт. Snyder Hill и Onderstepoort выращивали в первичных культурах почек собак. Вируссо-
держащую культуральную жидкость концентрировали ультрафильтрацией и инактивирова-
ли биэтиленимином, который добавляли в вируссодержащий концентрат на 14 мин при
36°С. Затем к инактивированному вирусу добавляли адъювант В.
Для приготовления второго варианта инактивированной вакцины (из шт. Rockborn) ви-
рус выращивали на первичной культуре почек собак на среде Игла с 5% прогретой сыворот-
ки КРС. Культивирование проводилось в роллерных флаконах (при 35-38°С). На 8-й день
вируссодержащую культуральную среду концентрировали ультрафильтрацией в кассетной
системе Pelliton (фильтры миллипор РТНКООО С5). Далее концентрат вируса инактивиро-
вали 8-метоксипералином (10мг/мл) и дополнительно обрабатывали УФ лучами. Перед
инактивацией прививочный препарат должен содержать 104-Ю8ЛД50 вируса. Для повыше-
ния его иммуногенности к препарату добавляли адъювант. Инактивированная вакцина за-
щищала привитых собак от вирулентного вируса.
В создании инактивированных вакцин немаловажное значение имеют выбор адъюванта.
В США фирма Ribi Immunolhem завершила исследования нового адъюванта ДЕТОК пред-
ставляющего собой монофосфорил липида А из клеточной стенки микобактерий. Адъювант
оказался в 2 раза более эффективен при введении в состав противомалярийной вакцины по
281
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
сравнению с ГОА. Предполагается введение нового иммуностимулятора в состав других
вакцинных препаратов (24), в т.ч. и инактивированной вакцины против ЧС.
В Польше применяют инактивированную вакцину из адаптированного к культуре клеток
КЭ шт. Canivak F. Запатентован также способ получения вакцины из ВЧС МК, клон 31, в
монослое клеток Vero (46).
Серопрофилактика. Разработан метод производства и получения полиАТ из яичного
желтка кур и их применения в диагностике, лечении и профилактике вирусных инфекций
животных, в т.ч. и ЧС. ПолиАТ выделяют ие только из крови иммунизированных кур. Пти-
цы образуют АТ против многих белков млекопитающих со стабильной структурой, а коли-
чество АГ, необходимое для развития иммунного ответа, очень мало (20-30 мкг ). Примене-
ние полного адъюванта Фрейнда для получения длительного синтеза АТ в высоких титрах в
желтках дает возможность получить в течение месяца от птицы до 65 мг чистых АТ. Выде-
ление и очистка АТ осуществляется просто, недорого и быстро. С помощью осаждения по-
лиэтиленгликолем удается очистить более 90% АТ. АТ птиц устойчивы к воздействию на-
гревания и кислой среды. Следовательно, они могут применяться перорально для профилак-
тики и лечения инфекционных болезней кишечника при энтерите, обусловленном чумой.
Применение полного адъюванта Фрейнда не вызывает тяжелой восстановительной реакции
и переносится птицами хорошо. В отличие от взятия крови от животных сбор яиц - метод не
инвазионный (30).
Предложен также метод выделения иммуноглобулина из яиц иммунизированных кур с
применением РП. Причем АТ в крови иммунизированных кур можно контролировать с по-
мощью ИФА (или др. тестов). Концентрация АТ в желтке яиц оказалась аналогичной или
была выше, чем в сыворотке крови. Самый высокий уровень АТ в яйцах кур отмечали на 9-
8-й нед после иммунизации. Иммуноглобулин из желтка яиц от иммунизированных кур вы-
деляют путем высаливания желточной суспензии 33%-ным р-ром (КП-Ц^ЗОд. Иммуноглобу-
лин ресуспендируют в воде и проводят диализ в течение 24 ч против 0,15 М р-ра NaCl.
Окончательную очистку препарата осуществляют хроматографией на сефадексе G-25, после
чего препарат хранят при -20°С (65).
Разработан и предложен лечебно-профилактический глобулин против ЧП, пригодный в
качестве лечебно-профилактического средства. Для этого сыворотку получают от телят, им-
мунизированных ВЧП шт. Рокборн. Активность вируса составляла 7,0 1g ТЦД50/МЛ в куль-
туре клеток Vero. Вирус концентрировали сорбцией на ГОА. В качестве адъюванта исполь-
зовали сапонин. Специфический глобулин получали высаливанием сульфатом аммония с
последующим диализом против дистиллированной воды. Иммуноглобулин использовали
для лечения ЧП у собак и пушных зверей всех возрастов и на разных стадиях заболевания.
Показана высокая активность препарата (16, 67).
Колостральный иммунитет. С молозивом передается щенку до 80% АТ. Однако, к 2-
3-мес возрасту титр материнских АТ становится недостаточным для защиты от инфициро-
вания - это сигнал для проведения профилактической вакцинации (22). Недостаточно высо-
кий уровень АТ в сыворотке крови щенков этого возраста свидетельствует о возможности
заболевания их чумой (3). По мнению авторов, при наличии клинических признаков болез-
ни титр АТ выше 1:64-1:128 является серологическим подтверждением диагноза. Низкий
титр у животных может свидетельствовать об их иммунологической незащищенности и о
большой вероятности заражения ВЧП, если это еще не произошло. Исследование сыворотки
крови клинически здорового щенка может быть достаточно информативным для проведе-
ния корректировки срока вакцинации.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Александер С.К. и др. Акт. пробл. диагн. проф. кори ...,М. 1992 , 25. 2.Бунина Н.С-
Мат.8 Всес. конф, по пат. анатом, живот. Л.,1982,:233. 3. Васильев А.В. и др. Ветеринария
282
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
1996,11 :20. 4.Дибаров Ш. и др. -Тез. докл. н.-пр. коиф., ВНИИЗЖ, 1995 :62. 5.Дымина Т.П.
Пат. анатом, диагн. вир. бол. живот. М. Колос, 1984 :168. б.Колесникова Л.В. и др. Вопросы
вирусологии, 1996,6. 7.Лазовская А.А. и др. Ветеринария, 1996, 2 :53. 8.Иммунопрофи-
лактика болезней животных, М. 1981. 9.Миронова Л.А и др. Ас. 1693044, СССР МКИ с
12,5/00. Ю.Миронова Л.А. и др. Мат. н. конф, 85-лет Том.НИИВС ч.1, Томск, 1991 :104.
И.Нагиева Ф.Г. и др. Вопр. вирус., 1991, 36, 4 :334. 13.Карпов В.М. Кроликовод, и зверо-
водство, 1993, 4 :30. 14.Николаева Н.П. и др. Доклады ВАСХНИЛ, 1980, 6 :30. ^.Сили-
ванов АВ. и др. Ветеринария,1979, 7 :32. 16.Старов С.К. и др. Тез. докл. н.-пр. конф.,
ВНИИЗЖ, 1995 :158. 17.Фомин К.Ю. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995.
18.Титенко AM. и др. Вопросы вирус. 1991,1 :57. 19.Appel M.J. et.al. J Am Vet Med Ass
1988, 193 :332. 2O.Appel M.J. J Gen Virol, 1978, 41 :385. 21.Appel M.J. Vet Microbiol, 1995,
44, 2-4 :187. 22,Appel M.J. In Virus inf of Cornivores Ed M. Amsterdam-Oxford-N.Y.,1987.
23.Barret T. etal. J Gen Virol, 1984, 65, 3 :549. 24.Biogen N. 1991,12 :21. 25.Blixenkrone M.
et.al. Veter Rec 1990, 127, 10 :263. 26.Bass P. et.al. Патент 49 GO367CIIIA, МКИ5, A61,
K39/12 27,Blaxenkrone M. J Gen Virol, 1992, 73, 4 :885. 28,Bass P. et.al. Патент 4992272,
США, МКИ5, Д61, K39/12 опубл. 12.02.91. 29.Gheeseman S.H. et.al. J Clin Methods, 1984 :20.
3O.Gassman M. etal. Schweiz Arch Tierheilk, 1990, 132, 6 :289. 31.Gilden D.H. et.al. J Neurol
Sci, 19.81, 52, 2-3 :327. 32.Gordon M.T. et.al. J Med Vet 1993, 40, 4 :313. 33.Gosset K. et.al. J
Amer Vet Med Assoc, 1882, 181, 4 :387. 34.Gyula К et.al. Magy allatorv, 1983, 38, 5 :305.
35.Gorska C. et.al. Bull Veter 1983, 26, 1-4 :27. 36.Glardon O. et.al. Schweiz Arch Tierheilk,
1985,127 :11. 37.Hall W.W. et.al. Virology, 1980, 100, 2 :433. 38.Harder T.C. et.al. J Gen Virol
1996, 77, 3 :397. 39.Ho C.K. et.al. Can J Microb, 1979, 25, 6 :680. 4O.Hawburger D. et.al.
Experientia 1991, 47, 8 :842. 41.Hirayama N. etal. J Gen Virol, 1985, 66, 1 :149. 42.1magawa
D.T. et.al. Abst 79th Ann Meet Amer Sos Mier, Los Angeles, Calif, 1979, Waschington
D.C.,1979 :306. 43.Kazuhiro Y. et.al. Molecular and cell Probes 1989, 3 :4. 44.Krakowka S.
et.al. Amer J Vet Res, 1980, 41, 1 :144 . 45.Krakowka S.et.al. J Infec Dis, 1978, 137, 5 :605.
46.Lesko J. et.al. Acta virol, 1993, 37, 5 :412. 47.Moll P et.al. Vet Microbiol, 1995, 44, 2-4 :193.
48.Malik R. et.al. Austral Vet Pract, 1995, 25, 2 :62. 49.Cullowgh S.J. etal. Arch Virol 1991,
118, 3-4 :247. 5O.New Sci, 1988, 120 :28. Sl.Nieto J.M. et.al. Scientifur, 1993, 17, 2 :148.
52.Noon Kerry F. et.al. Am J Vet Res 1980, 41, 4 :605. 53.Neubert von A. et.al. Monatsch
Veterinar med. 1991, 46, 10: 376. 54.Norrbi E. et.al. J Virol, 1986, 58 :536. 55.Orvell C. Arch
Virol, 1980, 66, 3 :193. 56.Orvell C. et.al. J Gen virol, 1985, 66, 3, :443. 57.Sci News, 1996,
149, 5 :70. 58.Sharma B. et.al. Virus Res. 1992, 23, 1-2 :13. 59.Thomas W.B. et.al. J Amer
Anim Hosp Ass, 1993, 29, 2 :129. 6O.Tennat B.J. et.al. J Smol Anim Pract, 1991, 32, 4 :175.
61,ToblerL. et.al. Intervirology, 1984, 21 :77. 62.Vandervelde M. et.al. Vet Microbiol, 1995, 44,
2-4 : 271. 63.Vandervilde M. et.al. Vet Pathol, 1980, 17, 1 :17. 64.Vandervilde M. et.al. Acta
neuropathol, 1985, 67, 3-4 :211. 65.Wallmann J. et.al. J Vet Med, Ser. B. 1990, 37, 4 :317.
66.Zaghawa A. et.al. J Vet Med Ser B, 1990, 37, 5 :353. 67.Guerena M.J.A. Vet Mex, 1992, 23,
4 :375. 68.Summers B.A. et.al. J Comp Pathol, 1984, 94 1 :65.
МОРБИЛИВИРУСНАЯ
ИНФЕКЦИЯ ЛОШАДЕЙ
Морбилливирусная инфекция лошадей - остропротекающая болезнь, характеризующая-
ся лихорадкой, атаксией, учащенным дыханием, высокой летальностью.
Первое сообщение (пока единственное) о заболевании появилось в Австралии в 1994 г.
на конеферме в провинции Квинсленд. Заболевание имело явный зооантропонозный харак-
тер. Возбудитель заболевания не был ранее зарегистрирован, относится к роду Morbillivirus
283
Глава5/1. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
семейства Paramixoviridae, но значительно отличается от уже хорошо известных морбилли-
вирусов. В описываемом случае в течение 2 нед заболели 20 лошадей, причем 14 из иих
вскоре погибли или были вынужденно убиты. Перед вспышкой на конеферме погибли 2 же-
ребые кобылы с аналогичными признаками заболевания. Отмечено заболевание обслужи-
вавшего персонала и тренера, скончавшегося через 6 дн несмотря на интенсивное лечение.
Возбудитель заболевания выделен в культурах клеток Vero и ВНК-21. Вирус хорошо
размножался в этих культурах и КЭ. Характерная особенность вируса - его способность
размножаться в культурах клеток различного происхождения (клетках млекопитающих,
птиц, рептилий, амфибий и рыб). Вполне вероятно, что вирус способен инфицировать жи-
вотных многих видов. Ультраструкгурный анализ показал, что вирус оболочечный, плео-
морфный, размером от 38 до 600 нм. Выступы 10-18 нм длиной образуют как бы двойную
бахрому на его поверхности. Ширина нуклеокапсида 18 нм с периодичностью 5 нм. При-
надлежность выделенного вируса к роду морбиллливирусов подтверждена сравнительным
анализом последовательности частей гена матричного белка.
Заболевание воспроизводится экспериментально путем внутривенного и интраназально-
го заражения лошадей гомогенатами селезенки и легких от больных животных. Через 6-10
дн после заражения животные заболели с признаками поражения респираторного тракта и
лихорадкой. При вскрытии лошадей, убитых на 12-й день после заражения, отмечали интер-
стициальную пневмонию, отек легких, увеличение лимфоузлов. Патологоанатомическая
картина при вскрытии умершего в Квинсленде тренера имела сходство с отмеченной у ло-
шадей. При экспериментальном заражении домашних, сельскохозяйственных и лаборатор-
ных животных установлено, что кошки и морские свинки восприимчивы к инфекции при
подкожном введении вируса. У кошек развивалась болезнь, сравнимая по признакам с бо-
лезнью лошадей, зараженных естественным путем или экспериментально. У морских сви-
нок болезнь качественно отличалась от болезни кошек (более длительный инкубационный
период и менее выраженные макроскопические проявления). Однако полученные результа-
ты не означают, что кошки или морские свинки могут поражаться естественным путем или
являться вирусоносителями и потенциальными источниками вируса при вспышке в Квинс-
ленде. При массовом обследовании проб сывороток крови кошек региона, а также музейных
проб, ни в одной пробе не обнаружены АТ к возбудителю данной инфекции лошадей.
Серологические исследования людей, имевших контакт с больными лошадьми, работ-
ников конюшен и ветеринарных специалистов, работавших в очаге заболевания, а также
конепоголовья в карантинном помещении и в окружности неблагополучной конефермы дали
отрицательные результаты. О патогенезе болезни и иммунобиологических свойствах возбу-
дителя в настоящее время данных нет. В Австралии официально санкционировано проведе-
ние исследований в плане дальнейшего изучения вируса, его репликации, патогенеза болез-
ни, определения степени опасности для животных других видов (1).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.ДубровинВ. и др. Ветеринарная газета., 1996, 14
ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПАРОТИТ (СВИНКА)
Mumps infectious
Вирус паротита (Рис. 44), помимо человека - основного хозяина, был изолирован от ко-
шек и собак. Вирус вызывает ЦПД в культуре клеток HeLa, обладает ГА-активностью, с го-
мологическими позитивными сыворотками собак участвует в РТГА. По данным Стоуна, па-
тогенный вирус свинки у собак может вызывать менингоэнцефалиты без поражения щито-
видной железы. Вирус хорошо репродуцируется в культуре клеток почки и лёгких кошек.
Прямое заражение кошек вирулентным вирусом в слюнную железу или тестикулы сопрово-
284
ГлаваУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
ждается развитием артрита и паротита. Вирус удавалось выделить в течение 59 дн после
инокуляции. Заражение беременных кошек per os и внутривенно, как правило, сопровожда-
лось проникновением вируса через плаценту в плод (9,10).
***
Подсемейство Pneumovirinae состоит из одного рода Pneumovirus
1. Род Pneumovirus (от греч. pneuma - дыхание) включает респираторно-
синцитиальный вирус человека (прототипный вирус) и КРС, вирусы ринотрахеита индеек и
пневмонии мышей. Все представители рода не содержат нейраминидазы; ГА выявлен толь-
ко у вируса пневмонии мышей. В составе вирусной оболочки обнаружен второй белок - М.
Нуклеокапсид имеет диаметр 13-14 нм, шаг спирали 7 нм, длина выступов 10-12 нм.
В состав семейства Paramyxoviridae входят еще парамиксовирусы, выделенные от сви-
ней (парамиксовирус “голубого глаза”), грызунов, летучих мышей, пингвинов и рептилий.
Они недостаточно изучены и пока не отнесены ни к одному из родов.
РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНАЯ
ИНФЕКЦИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Respiratory Syncitial Virus Infectious
Респираторно-синцитиальная болезнь (РСБ) характеризуется поражением респиратор-
ного тракта и кратковременной гиперемией его у КРС. В стадах КРС с респираторными за-
болеваниями ВНА к респираторно-синциальному вирусу (РСВ) выявляли чаще (41%), чем к
ПГ-3 (17%) (1,2, 49). Вспышки респираторного заболевания КРС моложе 7 лет, вызванные
РСВ, отмечались в хозяйствах Швейцарии, Бельгии, Японии и других странах (9, 10, 13, 40,
51, 52, 79).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инфекцию регистри-
руют в любое время года, но наивысшая заболеваемость отмечается осенью и ранней зимой.
Увеличение числа клинически больных животных наблюдают примерно через 30 дн после
прибытия в хозяйство новой партии скота, о чем свидетельствует 4-кратный и более подъем
титров АТ. Симптомы РСБ проявляются слабо и могут быть не замечены. Если болезнь
прогрессирует, наблюдают кашель, повышенное слюноотделение, серозное истечение из но-
са, учащенное дыхание, инфекция может протекать и как острая респираторная болезнь на
фоне высокой температуры тела и диагностируется как эмфизема легких или интерстици-
альная пневмония. Болезнь длится от 3 до 10 дн и, как правило, заканчивается выздоровле-
нием. В большинстве случаев процесс ограничивается повышением температуры, катаром
верхних дыхательных путей и серозным ринитом (17, 53, 61, 64). Тяжелую бронхопневмо-
нию с высокой температурой (до 41,5°С) наблюдают крайне редко. У молодняка болезнь,
как правило, продолжается не более 3-5, у взрослых животных - 8-10 дн. Помимо того, РСВ
вызывает пневмонии и аборты. В Англии описан падеж телят при острой пневмонии, вы-
званной РСВ. При гистологическом исследовании респираторных путей у погибших телят
обычно выделяют гигантские синцитиальные клетки в бронхиолах, дегенерацию и некроз
эпителиальных клеток бронхиол и легочной ткани, явления клеточной инфильтрации (62).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Существует два типа синцитиальных вирусов КРС: 1) синцитиальный вирус, тесно свя-
занный с клетками. Отличается серологически от РСВ КРС (BRSV); 2) BRSV выделен в ря-
де стран при респираторных вспышках болезни среди КРС. Впервые его выделили в 1969 г.
в Бельгии Веллмане и Леннен из смывов верхних дыхательных путей больных телят (шт. V
220/69).
Морфология и химический состав. Геном РСВ достаточно изучен. Вирус содержит 10
генов, которые транскрибируются с образованием 10 мРНК (50). Определены нуклеотидные
285
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
последовательности 7 генов (N-Р, Р-М, M-SH, SH-G, G-F, F-M2 и M2-Z ) РСВ КРС (шт. А
51908). Оказалось, что все стартовые последовательности РСВ человека и РСВ КРС совпа-
дают, кроме гена SH, который отличается заменой одного нуклеотида от гена SH ЧРСВ А2
и гена Z, который у РСВ КРС на один нуклеотид короче, чем у ЧРСВ (23, 43, 44, 70а, 80). С
помощью монАТ выделена группа А и В с двумя подгруппами в каждой (13а). Вирус отли-
чается от других парамиксовирусов большим количеством идентифицированных структур-
ных белков, порядком генов, присутствием ГА и N, а также диаметром нуклеокапсида (10-
12 нм). Морфологические характеристики представлены на рис. 42 и 43.
В структуре РСВ КРС идентифицировано 9 (6) или 10 (36) полипептидов, 2 из которых
- G и F - гликозилированы и располагаются на поверхности вириона. Аминокислотная по-
следовательность F-белка РСВ КРС (шт. 51908) оказалась гомологичной аминокислотной
последовательности (81-99%) F-белка РСВ человека (39). У РСВ белок F содержит основ-
ную долю эпитопа, индуцирующего ВНА. Белок F состоит из 2-х субъединиц и исполняет
функцию слияния, белок G-прикрепительную функцию (рецепторную). С помощью монАТ в
структуре F-белка идентифицируют не менее 4-х АГ детерминант, 2 из которых причастны к
слиянию с клеточной мембраной (77). В белке слияния F РСВ КРС выявлено 2 АГ-участка,
один из которых ответственен за нейтрализацию (55). Гликопротеины G и F ответственны за
индукцию (76) ВНА и образование протективного иммунитета. Внутренние вирионные АГ
выявляются соответствующими монАТ. Изучена нуклеотидная последовательность генов
неструктурных белков NS 1 и NS 2 РСВ (шт. А51 908). Оказалось, что ген NS 1 имеет
длину 524 н, кодирует белок длиной 136 остатков и гомологичен генам NS 1 овечьего и че-
ловеческого вируса (подгрупп А и В) соответственно на 82, 67 и 65% на нуклеотидном
уровне и на 89, 69 и 68% на аминокислотном уровне (61а). Ген NS 2 имеет длину 489 н., ко-
дирует белок из 124 остатков и гомологичен генам NS 2 овечьего и человеческого РСВ на
нуклеотидном уровне и на 87, 84 и 84% на аминокислотном уровне (58).
Устойчивость. Вирус очень нестоек к замораживанию. Два шт. РСВ КРС (Bov и Bov-x)
оказались чувствительны к низким значениям pH. При 4°С он сохраняет активность в тече-
ние 1нед и при -70°С до 2 мес. Температура 56°С полностью разрушала его инфекционную
активность в течение 30 мин. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, дезоксихолату,
трипсину (19).
Антигенная структура. РСВ не содержит нейраминидазы. Содержит 2 растворимых
КСА - А и В. АГ А , кроме того, индуцирует образование ВНА. Вирус также имеет струк-
турный белок слияния - Fo белок. Определена последовательность аминокислот в белке Fo.
Своеобразный ключ к расшифровке структурной организации РСВ - использование монАТ.
С их помощью было показано, что гликопротеины F имеют решающее значение для форми-
рования защитного иммунитета Гены, кодирующие гликопротеины и F, клонированы и
расшифрована их нуклеотидная последовательность. Выявлены и описаны полипептиды,
нуклеотиды и компоненты РСВ, пригодные для изготовления диагностических реагентов -
вакцин против РСИ КРС. Выделенные полипептиды включают в себя короткие полипепти-
ды, связанные с нейтрализующим эпитопом к эпитопам белка слияния РСВ или с нейтрали-
зующими эпитопами G-белка (37). Благодаря применению монАТ были выявлены два под-
типа РСВ, которые в антигенном отношении отличаются от подгрупп РСВ человека . Белки
NP, М, Р и F, но не G, у РСВ КРС и РСВ человека имеют общие эпитопы. Среди изолятов
РСВ КРС наибольшие варианты в мол.м. обнаружены у Р и F белков (15). Для типирования
штаммов РСВ используют метод белкового профиля, основанный на определении электро-
форетической подвижности Р-белка (фосфопротеина). Данным методом 75 штаммов разде-
лены на 2 группы. У вирусов 1 группы, содержащей в качестве прототипа шт. Ланг, наблю-
дались минимальные вариации в подвижности Р белков. У вируса II группы, содержащей в
качестве прототипа шт. СН 18537, Р белки негомогенны по подвижности. Указанные 1 и II
286
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
группы белков соответствуют А и В подгруппам (75). Получено 5 монАТ к РСВ КРС, спе-
цифичность которых была изучена с помощью иммуноблотинга н эпитопного анализа. Эти
АТ специфичны в отношении белка слияния РСВ, который имеет 2 антигенных участка,
один из которых ответствен за нейтрализацию (55, 67,69).
Антигенная вариабельность и родство. Установлено АГ-различие между некоторыми
штаммами, выделенными от человека и обезьян. Все штаммы РСВ КРС родственны штам-
мам РСВЧ. Основные АГ-различия между РСВ человека и КРС выявлены в гликопротеине
G (50). Белки слияния этих вирусов гомологичны на 83-84% (48). Сыворотки крови морских
свинок, привитых субъединицами РСВ человека и КРС, обладают хорошей перекрестной
реактивностью и нейтрализует РСВ как человека, так и КРС (16, 20, 66, 70).
Локализация вируса. Изучена недостаточно. На 3-6-й день после инфицирования в
мазках-отпечатках со слизистой оболочки носа методом ИФ обнаруживают специфический
АГ, а при окраске их - гигантские клетки с включениями. РСВ КРС выделяли из конъюнк-
тивально-назальных смывов, в культуре клеток ПЭК. Данных о локализации вируса, виру-
семии и вирусовыделении у естественно больных животных нет. Возможно длительное ви-
русоносительство. Нередко вирус выделяют от новорожденных телят. Из организма боль-
ных животных во внешнюю среду вирус выделяется с носовым экссудатом и выдыхаемым
воздухом (24).
Антигенная активность. Вирус вызывает образование ВНА у человека, обезьян, хорь-
ков, морских свинок и лошадей. ВНА были выявлены с 8-го по 14-й день у телят, свободных
от материнских АТ. Отмечена линейная корреляция между титрами КСА и ВНА. Сыворот-
ки морских свинок и хорьков проявляют слабую нейтрализующую активность, которая уси-
ливается после добавления к ним комплемента. Однако сыворотки крови лошади достаточ-
но активны и без добавления его. РСИ может развиться на фоне циркулирующих АТ. АТ
играют защитную роль при наличии их в титрах не ниже 2 1g. Колостральные АТ к РСВ не
предохраняют телят от инфекции. ВНА у экспериментально зараженных животных выявля-
ются на 6-й день с максимальным титром на 13-15-й день (25,26, 70).
Экспериментальная инфекция. При интраназальном заражении телят РСВ в дозе
7,5 ТО1 БОЕ на 5-й день развивалось слезотечение, истечение из носа, учащенное дыхание,
угнетение и лихорадка, а также выраженная ингибиция миграции лейкоцитов перифериче-
ской крови. Ингибиция достигала максимума к 2-3-му дню после заражения. Мигрирующие
клетки представляли собой полиморфноядерные лейкоциты периферической крови, которые
чувствительны в реакции задержки миграции. У зараженных интраназально и интратрахе-
ально телят в месячном возрасте через 3-5 дн вирусный АГ выявляли методом ИФ в цито-
плазме зараженных клеток трахеи и бронхов, иногда в альвеолярных макрофагах и клетках,
а также эпителиальных клетках носовой полости, носоглотки и бронхиол. Развившиеся у за-
раженных телят бронхиты и трахеиты характеризовались, помимо некроза, гиперплазией
эпителиальных клеток, образованием клеточных синцитиев. Значительно реже наблюдали
риниты, бронхиолиты и интерстициальную пневмонию. На 30-й день после заражения из-
менения исчезали. Таким образом, экспериментальная РСИ у телят сопровождается обрати-
гмыми изменениями эпителия респираторных путей и усилением фагоцитарной функции
макрофагов. Вирусный АГ выявляли в зараженных клетках бронхиол, вблизи клеточного
детрита и просвета, протока в эпителии трахеи (60а). При внутрикожном введении появля-
лась местная реакция гиперчувствительности замедленного типа со второго дня с макси-
мальным утолщением кожи между 2-м и 3-м дн после заражения. У зараженных телят РСВ
выделяют из слизистой оболочки носа, бронхов и легких. Трудность изоляции его объясня-
ется присутствием секреторных АТ. Наиболее чувствительной при изоляции РСВ оказалась
культура клеток тестикул бычков (41). При заражении ягнят референтным шт. Номи и бол-
гарским изолятом Антонова интратрахеальио и внутривенно удавалось вызвать клинически
287
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
выраженное заболевание. Кроме того, экспериментальную инфекцию сравнительно легко
воспроизводят на обезьянах (шимпанзе, мартышка), хорьках, норках и морских свинках.
Хорошей моделью для изучения РСИ оказались новорожденные хорьки. Вирус можно вы-
делить из трахеи и носовых ходов в течение 7-10 дн. Симптомов болезни не отмечалось, но
у хорьков наблюдалось повышение температуры тела. На хорьках удалось провести более
25 пассажей, причем титр вируса достигал 4,7-6,9 1g ИД50. Шт. ММК7, выделенный от ко-
ровы при вспышке болезни в Японии в 1968-1969 гг., серийно размножался в мозге 1-дн
мышей, хотя симптомов болезни у них не наблюдалось. В США выделен вирус (шт. FSJ-1),
близкий, но не идентичный РСВ человека. Данный штамм широко распространен среди
КРС в США.
Культивирование. РСВ КРС не размножается на КЭ, хорошо репродуцируется в пер-
вичных культурах клеток почки, тестикул, легких и селезенки КРС. Вновь изолируемые бы-
чьи штаммы РСВ размножаются только в первичных культурах клеток почки, легких и тес-
тикул эмбриона коров. Вирус обычно выделяют в течение 3-4 пассажей, так как в первых
генерациях выраженных ЦПИ не развивалось. Фибробласты эмбриона человека, обезьян,
перевиваемые клетки КВ, HeLa, ВНК-21 не чувствительны к бычьим штаммам РСВ. По-
следний культивировался в перевиваемых клетках почки КРС, клетках легкого и некоторых
органов новорожденных телят. Он так же хорошо культивировался в культуре перевивае-
мых клеток слизистой оболочки носа КРС (линия М-57) в однослойной статической культу-
ре и на микроносителях в перевиваемой культуре MDBK, а также диплоидных клеточных
культурах щитовидной железы ягненка. Для культивирования РСВ X. Харламбиев и др. (41)
использовали перевиваемые линии клеток почек и тестикулов телят, ягнят, хронически ин-
фицированных вирусом лейкоза КРС. Флюоресцирующие клетки впервые становятся за-
метными в период между 16 и 18 ч и после заражения. Флюоресценция ограничивается ци-
топлазмой (71, 72). Максимальный титр вируса 103-104 ТЦД 50/мл выявляется на 6-7-й день
после заражения. Добавление в питательную среду 2% сыворотки КРС без специфических
АТ или 0,1 мг профлавина стимулирует развитие синцитиальных клеток, что способствует
обнаружению ЦПД (56, 57, 59).
Гемагглютинирующие свойства. Респираторно-синцитиальный вирус не агглютини-
рует эритроциты КРС, овец, морских свинок, мышей.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные.
Инфекция передается воздушно-капельным путем. Считают, что естественная внутриутроб-
ная инфекция поддерживает циркуляцию в стаде РСВ. Нет данных о наличии его в сперме
быков-производителей.
Спектр патогенности. Среди КРС клинически болезнь бывает выражена у телят. Осо-
бенно чувствителен к нему КРС герефордской породы. В 9 западных штатах США в 42%
случаев с помощью PH обнаружены АТ к РСВ у снежных баранов. Для проведения PH ис-
пользовали шт. Mohanty А 51908, изолированный от КРС. РСВ удается заразить овец и бе-
лохвостых оленей.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на РСБ ставят на основании эпизоотологических и клинических данных, пато-
логоанатомических изменений и лабораторных исследований. Лабораторная диагностика
РСИ заключается в следующем: обнаружении АГ в патологическом материале (мазках, от-
печатках, срезах), полученном от больных животных в РИФ; выделение возбудителя из па-
тологического материала в культуре клеток тестикул бычка (ТБ), почки эмбриона коровы
(ПЭК) или легких эмбриона коровы (ЛЭК) и его идентификация в РИФ, РДП и РСК (8, 11,
12, 42, 45).
Выделение вируса
288
Г лава VI. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
Успех выделения вируса из патологического материала в большой степени зависит от
правильности сбора и хранения подлежащих исследованию проб. Выделение РСВ затрудне-
но ввиду его чрезвычайной лабильности. Выделить его от больных животных возможно
только на ранней стадии инфекции и вероятность выделения снижается с появлением при-
знаков заболевания. У телят вирус выделяли из носоглотки на 2-11-й день после заражения.
Важно отметить, что РСВ, в основном, выявляют в выделениях и тканях дыхательных пу-
тей. Лучшие результаты получают, проводя заражение культур клеток как можно скорее по-
сле взятия материала и до исследования, избегая его замораживания. Однако выделение
вполне возможно и из материала, хранившегося 3-5 ч при 4°С или быстрозамороженного и
помещенного для хранения при -70°С.
Заражение культур клеток. Для выделения РСВ КРС используют прием сокультиви-
рования клеток периферической крови или лимфоидных органов с чувствительными к реп-
ликации РСВ клетками эмбриона КРС. Обычно выделение вируса проводят в первично-
трипсинизированных культурах клеток эмбриона КРС (ПЭК, ЛЭК, ТБ). Культуры клеток
овечьего происхождения (FLK, почки и семенники ягнят) обладают большей чувствительно-
стью к РСВ КРС, и титр вируса достигает больших величин, чем в культурах клеток телят
(до 105 БОЕ/мл); в синцитиях наблюдали от 10 до 40 ядер. РСВ КРС хорошо размножается в
клетках Vero. В связи с этим предложен метод селективного удаления вируса диареи, часто
контаминирующего РСВ (4, 5, 18). Вирус можно выявить еще и до развития ЦПЭ при вы-
ращивании клеток линии НЕР-2 на покровных стеклах при анализе их через 2-4 дня после
заражения методом ИФ (14).
Идентификация вируса
Обнаружение специфических телец-включений. У экспериментально зараженных
телят наблюдают резкие изменения в бронхах, бронхиолах и альвеолах, характеризующиеся
появлением много ядерных эпителиальных клеток, многие из которых на 4-6-й день после
заражения содержали эозинофильные тельца-включения. В зараженных культурах ПЭК,
ЛЭК, ТБ, окрашенных по Селлерсу, Май-Грюнвальду, Гимза или гематоксилин-эозином,
фокусы ЦПД состоят из синцитиальных клеток различного размера. Такие клетки содержат
гомогенные ацидофильные цитоплазматические включения различного размера и формы.
Поскольку эти включения не окрашиваются акридиновым оранжевым, то они представля-
ются оптически пустыми на фоне красной цитоплазмы.
ИФ. Идентификацию выделенного вируса проводят в ИФ, она чувствительна и точна.
Постановка её аналогична таковой при диагностике аденовирусной инфекции. ИФ клеток
респираторного тракта КРС выявляется в виде полиморфных флюоресцирующих включе-
ний в цитоплазме или свечения всего цитоплазматического поля клетки. Для исследования в
ИФ готовят мазки со слизистой оболочки носа, трахеи, а также препараты-отпечатки легких
и лимфоузлов. Цитологический материал, используемый для ИФ, должен быть свежим, за-
мораживание его резко снижает качество флюоресценции. Методом ИФ вирус обнаружи-
вали в клетках бронхиального эпителия и альвеолярного экссудата в течение 11 лет. После
заражения эпителиальные клетки легких, очевидно, являются клетками-мишенямн для ви-
руса, индуцирующего образование эпителиально-клеточного синцития во многих участках
легких (22, 68, 71, 72).
В ИФ можно использовать не только зараженные культуры клеток на покровных стек-
лах, но и мазки, приготовленные из клеток зараженной пробирочной культуры. Мазки луч-
ше всего готовить, когда, примерно, в 25% клеток монослоя наблюдается ЦПД.
РДП. РДП часто используют для идентификации вирус», выделенного в культуре кле-
ток. Методика постановки, приготовления АГ и учета результатов реакции аналогична тако-
вой при диагностике аденовирусной инфекции.
19 Зак. № 171
289
ГлаиаУ I. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
PH. В ветеринарной диагностической практике PH применяется редко. Существуют
штаммы, которые значительно хуже нейтрализуются иммунной сывороткой к прототипному
штамму (например, шт. Long), чем гомологичной иммунной сывороткой. В подобном случае
или при очень высоком титре исследуемого штамма синцитиальные клетки могут появиться
и в пробирках с иммунной сывороткой. Однако в этом случае наблюдается значительно бо-
лее позднее их появление по сравнению с контрольными пробирками (41, 74).
ИФА. Предложен для определения АГ РСВ в парафиновых срезах легких телят, ес-
тественно больных пневмонией. Специфическое окрашивание иммунопероксидазным конъ-
югатом регистрируют в цитоплазме эпителиальных клеток, в синцитии малых бронхов,
бронхиол и альвеол. Метод пригоден и для ретроспективной диагностики РСВ при исследо-
вании парафиновых блоков, хранящихся в течение нескольких лет.
В качестве экспресс-диагностики предложен метод обнаружения РСВ путем точечной
гибридизации с применением нерадиоактивного синтетического олигодезоксирибонуклео-
тидного зонда (38). Такие зонды дифференцируют подгруппы РСВ в реакции гибридизации
нуклеиновых кислот. Кроме того, предложен быстрый метод диагностики РСВ с помощью
коммерческих тест-тампонов Pernasal. Последующий скрининг мазков в покровных стеклах
с мечеными АТ к РСВ показал, что данная процедура упрощает и ускоряет диагностику рес-
пираторных вирусных инфекций (54). Обнаружение РСВ в секретах носоглотки можно про-
водить одним из двух методов: либо методом гибридизации in situ с применением меченых
биотином алигонуклеотидных зондов на геномную РСВ, либо меченым флюоресцеином.
Иммунологический метод оказался более быстрым и эффективным (21). Возможно быстрое
обнаружение РСВ в носоглоточных смывах с помощью обратной транскрипции и амплифи-
кации в ПЦР ( 616 ).
Серологическая и ретроспективная диагностика. Основана на выявлении АТ в
сыворотке крови больных и переболевших животных в РДП, непрямой РИФ, РСК, PH и
других реакциях. Для этой цели необходимо иметь высокоактивный эталонный РСВ. Испы-
туемые сыворотки прогревают при 56°С 30 мин. При РСБ, протекающей в естественных ус-
ловиях, отмечали нарастание титра АТ у животных в первые 10 дн болезни. ВНА были вы-
явлены с 8-14-й дн у телят, свободных от материнских АТ. Отмечена линейная корреляция
между титрами АТ, выявляемых в РСК и PH.
PH проводят в культуре клеток. Титр эталонного РСВ должен быть не ниже 105
ТЦД50/МЛ . Для этого его пассируют до такого уровня, когда дегенерация 100% клеток на-
ступает в течение 4 дн. При PH используют различные разведения сыворотки и постоянную
дозу вируса 103 ТЦД50/МЛ. Смесь сыворотки с вирусом выдерживают 2 ч при комнатной
температуре, затем вносят по 0,2 мл в культуру клеток и инкубируют. Начиная с 4-го дня
после заражения ежедневно проверяют пробирки с “контролем вируса”. При признаках де-
генерации у 75-100% клеток (обычно на 5-6-й дн) учитывают результаты всего опыта.
Обычно в пробирках с сывороткой в интервале 3-5 последовательных разведений наблюда-
ется отчетливое, но не полное подавление активности вируса, поэтому для оценки титра
критерий полной нейтрализации вируса не используют.
Титром сыворотки считают разведение, подавляющее развитие синцития на основной
площади клеточного слоя при возможном возникновении маленьких очагов синцития или
округлении клеток не более чем на один плюс (25% клеток культуры, в которой обнаружи-
вается дегенерация). Конечный результат, который учитывают в пробирках одного разведе-
ния сыворотки, является средней величиной результатов, зарегистрированных в каждой из
пробирок. При добавлении к культуре нейтрального красного в конечной концентрации
1:80000 синцитий в течение 1 ч при 36 °C окрашивается в красный цвет, что может помочь
при оценке результатов. Повышению чувствительности PH способствует использование сы-
вороток, не подвергавшихся нагреванию.
290
ГлаваУ!. Parammyxoviridae Парамиксовирусныеинфекции
Более чувствительной и точной пробой для обнаружения и оценки уровня АТ является
реакция подавления бляшкообразования. На клетках с покрытием из метилцеллюлозы син-
цитиальные бляшки образуются в течение 4 дн. Бляшки легко обнаруживают и подсчиты-
вают в культурах, окрашенных по Гимзе, под стереоскопическим микроскопом. Оценку ней-
трализующей активности сыворотки можно провести по снижению титра бляшкобразования
или разведению сыворотки, подавляющей образование 50% бляшек.
Метод непрямой ИФ применяют для выявления специфических IgM к РСВ. Предложен
сухой эритроцитарный диагностикум РСБ. Положительные результаты в РИГА составляли
72,2%, в PH - 69 и в РСК - 55,2 %.
При сравнительной оценке эффективности различных методов было установлено, что
титры АТ в ИФА и РСК были сопоставимы. В PH в большем проценте АТ выявлялись в
острой фазе болезни и в меньшем- ELISA, что зависело от эффективности конъюгата при
обнаружении ранних IgM. Однако PH была менее эффективна при постановке диагноза на
основании увеличения титров АТ в парных сыворотках, поскольку в полевых условиях не-
которые животные могут быть исследованы относительно поздно и уловить нарастание тит-
ров трудно. В качестве диагностического теста при РСБ КРС более эффективен ELISA как
наиболее чувствительный, требующий меиьших затрат труда, независящий от наличия чув-
ствительной культуры клеток по сравнению с PH и РСК. Некоторые исследователи пришли
к выводу, что наиболее чувствительной реакцией для серодиагностики острой РСБ является
нарастание титра IgG при использовании ELISA (3). ELISA широко применяются в Швей-
царии (30). РИГА используется для ретроспективной диагностики РСБ КРС. Этот простой
высокоспецифичный метод более перспективен, чем PH.
Дифференциальная диагностика. По данным эпизоотологического анализа, клиниче-
ским и патологоанатомическим признакам поставить диагноз очень трудно ввиду сходства
РСБ со многими патологоанатомическими явлениями различной этиологии (ПГ-3, ВД-БС,
ИРТ, хламидиоз и т. д.). Поэтому основу диагностики составляют лабораторные методы, а
клинические показатели помогают ускорить постановку диагноза. Необходимо учитывать
вероятность смешанной этиологии. Патологический материал, поступивший от животных с
подозрением на РСБ, исследуют параллельно с помощью наборов диагностикумов, выпус-
каемых биопромышленносгью, на ИРТ, ПГ-3, ВД-БС и аденоинфекцию. Схема проведения
исследований при РСБ аналогична аденоинфекции. Предварительный диагноз на РСБ ста-
вят в патматериале в ИФ с учетом эпизоотологических и клинических данных, а также па-
тологоанатомических изменений. Окончательный диагноз ставят на основании выделения и
идентификации вируса, совпадения результатов в РИФ с обнаружением АТ в 30% и более
вторых проб сывороток и обнаружения 4-кратного и более прироста АТ в парных пробах
сывороток (не менее 3-4 животных из 10-15 проб).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет при РСБ не изучен. В нашей стране вакцины против этой инфекции нет.
Инфекция у телят в возрасте 1-3 мес на фоне материнских АТ не стимулирует образование
гуморальных АТ, хотя в слизистой оболочке дыхательных путей появляются IgA. Инфици-
рование таких телят сопровождается появлением в респираторном тракте противовирусных
IgM, IgA, IgG. Ускоренная их продукция отмечается при повторном заражении. На поверх-
ности эпителиальных клеток верхних дыхательных путей при РСБ идентифицированы АТ
всех 3-х типов, но преимущественно IgA (46). Нижние отделы респираторного тракта со-
держат большее количество IgG, чем носоглоточная область (2). Секреторные АТ отличают-
ся от сывороточных меньшей специфичностью, поскольку они способны нейтрализовать
инфекционную активность гетерогенных штаммов в пределах подтипа (65 а). Однако не вы-
явлено корреляции меяоду уровнем вирусспецифических IgA и приживляемостью вируса в
носоглотке. Потенциальное значение специфических антител в защите легких от РСБ про-
19*
291
I naBaVI. Parammyxoviridae Парамиксовирусные инфекции
демонстрировано в опытах на мышах (34). При реинфекции они способствуют более выра-
женной иммунной реакции. Подавление материнскими АТ формирования сывороточных и
секреторных АТ затрудняет создание вакцины против РСБ. Наибольшей иммуногенностью
и протекгивностью из 10 белковых АГ РСВ обладает белок слияния - гликопротеин А за ко-
торым идет белок G (46). В защите от РСБ важную роль играют клеточные механизмы, опо-
средованные специфическими АТ и инфицированные вирусом. Моноциты лизируются све-
жими лимфоцитами этого же животного в присутствии иммунной сыворотки. Только РСВ
и рекомбинантный вирусвакцины, экспрессирующий белок F РСВ, индуцирует образование
вирусспецифических Т-лимфоцитов у мышей. Инактивированный РСВ или его гликопро-
теины F и G таким действием не обладают (60,73, 78).
Главным АГ - мишенью для Т-лимфоцитов является F-белок и в меньшей степени белок
G РСВ (46, 60). Поэтому разрабатываемые вакцины для надежной защиты должны индуци-
ровать у привитых животных формирование Т-клеточного иммунитета. Нуклеопротеид РСВ
распознается лучше Т-клетками-эффекторами, чем поверхностный G гликопротеин. При
РСБ имеет место АТ зависимая клеточная цитотоксичность, в которой основной мишенью
является А белок вируса, экспрессируемый на поверхности инфицированных клеток. Эта
иммунологическая реакция играет важную роль в защите организма и его выздоровлении от
РСБ (7). В настоящее время клеточный иммунитет - предмет пристального изучения РСБ;
разрабатываемые вакцины должны индуцировать у привитых животных формирование Т-
клеточного иммунитета. Одним из перспективных направлений в вакцинной профилактике
РСБ является создание субъединичной вакцины, содержащей один или оба вирусных глико-
протеина. Весьма перспективным считают получение рекомбинантов вируса осповакцины
для профилактики РСБ. В Нидерландах применяют живую вакцину из шт. Rispoval - она
иммуногенна и безвредна. Разработана также живая комбинированная вакцина Rispoval -
R.S-BVD против РСБ и ВД-БС КРС. Вакцина безвредна в полевых условиях и сообщает на-
дежный иммунитет против этих инфекций. Во Франции применяют живую вакцину из шт.
КВ94. В ФРГ предложена вакцина из аттенуированного штамма. В Бельгии аттенуирован-
ный штамм РСВ был получен путем проведения 94 пассажей в культуре клеток эмбриона
КРС (27, 28,31,35). На живую вакцину из шт. RS-52 у привитых телят через месяц образо-
вывались ВНА, сохранявшиеся до 6 мес у 70-90% животных (32, 47). Инактивированную
вакцину против РСБ КРС удалось приготовить из инфицированных вирусом клеток, обрабо-
танных глютаральдегидом. Продуцентом АГ РСВ являлась персистентно инфицированная
культура эпителиальных клеток слизистой оболочки носа КРС. Эта вакцина оказалась более
иммуногенной, чем живая из аттенуированного штамма РСВ КРС и TS-мутанта РСВ чело-
века (65).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. ВНА у привитых живой
вакциной животных появляются на 5-й день и сохраняются после ревакцинации до 5 мес.
Наличие АТ почти не препятствует возникновению болезни. Видимо, велика роль местного
иммунитета. Высокие титры ВНА (1:640) свидетельствовали о тяжести болезни. АТ к РСВ,
полученные от матерей, не предохраняют телят от инфекции.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ГБастанджиева Р. и др. Вет Мед Науки, 1984, 21, 9 :45. 2.Кастрикина Л.Н. и др. Во-
просы вирусол, 1989, 6 :50. З.Добров И. и др. Эпидем, микробиол инфекц болезни, 1981,
28, 2 :16. 4.Корнеева Э.П. и др. Препараты для экспресс-диагн, Л., 1981. 5.Метервили Г. Д. и
др. Разработка мет. проверки биол. свойств произв. шт. микроорган, и диагн. препаратов.
М. 1983 ;57. б.Первинов Ю.В. и др. Вопросы вирусол 1988, 5 :523. 7.Сергеев В.А. Вирусные
вакцины. Киев, Урожай, 1993. 8.Смородинцев А.А. Иммунол. Диагност. Вирусн. инфекций
М. 1985, 41. 9.Сюрин В.Н. и др. Частная вет. вирусология М., Колос, 1979 :257. 10.Сюрин
В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив., М., Агропромиздат, 1991. 11. Трофимова М.Г. и др. Диаг-
292
ГлаваУГ Parammyxoviridae Парамиксокируснкге инфекции
ноет. Вирусн. бол., Свердловск. 1980, 21. 12.Юркова Г.Е. и др. Мат 2 съезд. Инфекц.
УССР, Киев, 1983 : 128. 13.Христозова Ц и др. Вет. Мед. Науки, 1985, 2, 1 :31. 13a.Billandel
S. et.al. Publ Trim Assoc anciens eleves Just Pasteur, 1994, 36.139. 14.Bromberg K. et.al. Amer
J Clin Pathol 1991, 96, 1 :127. 15.Baker J. et.al J Clin Microb 1992, 30, 5 ; 1120. 16.Bahlender
R.E. Met Vet Proct, 1984, 65, 8 :606. 17.Bromberg K. et.al. J Clin Microbiol, 1984, 20,1 :123.
18.Bem M. и др. Лабор. диагн. вир. риккетс. бол., 1974 :391. 19.Bryson et.al. Amer J Vet Res
1983, 44, 9 :1648. 2O.Beem M.O. et. al. New Engl J Vtd 1960, 263 :523. 21.Cubie H. et.al. J
Virol Meth, 1991,1 :27. 22.Collins J.K. et.al. Amer J Vet Res, 1988, 49, 1045 .1316.
23.Chanock R. et. al. J A M A , 1961,176 :647. 24Coates H.V. et.al. Am J Epidemiol, 1966, 83
:299. 25.Chomel J.J. et.al. Med et maled infect 1981, 11, 11 :648. 26.Costleman W.L. et.al. Am J
Vet Res, 1985, 46,3 :547. 27.Delforge J .et. al. Ann Med Vet, 1978, 122, 6 :545. 28.Dunbar
M.R. et. al. J Amer Vet Med 1985, 187, 11 :117. 29.Elango Narayanasamy et.al Nucleic Acrds
Res, 1985, 13, 5 :1559. 30.Florent G. et.al. Schwaz Ish Fiasfeuk, 1985, 127, 10 :661. 31. Frennet
J.C. et.al. Ann Med Vet 1984, 128, 5 :375. 32.Field E.W. et.al. Am J Vet Res 1984, 45, 8 .1641.
34.Graham B.S. et.al. J Med Virol, 1991, 34 : 7. 35.Gabathuler K. Schweiz Tierheilk, 1983, 125,
3 :149. 36.Grint P.J. Roy Soc med, 1988, 82 :56. 37.Henriksen O. NCRR Reporter 1993, 17, 3
:5. 38.Hemandez O. et. al. J Med Virol, 1992, 37, 3 :165. 39.Himes S. et.al. J Gen Virol, 1992,
73, 6 :1563. 4O.Hamparian V.V. et.al. Proc Soc exp Biol (1), 1961, 106 :717. 41.Haralambiev H.
et. al. Докл. Болг. АН 19826, 356, 116, :1611. 42.Holzbauer C. Tijdschr Diergeneesk, 1979,
104, 17 : 674. 43.Hhang Y.T. et. al. J Virol, 1983, 46, 2 :667. 44.Haung Y.T et.al. J Virol, 1982,
43, 1 .150. 45. Holzbauer C. Tijd schr Diergeneesk 1979, 104, 17 :679. 46.Kimman T.G. et.al.
Arch Virol, 1990, 112, 1 :2. 47.KubotaM. et.al. J Vet Med Sci 1992, 54, 5 :957. 48.Kit S. et.al.
Am J Vet Res 1987, 48 :780. 49.Lunghi T. et.al. Schweiz Arch Tierheilk 1985, 127, 10 :651.
5O.Lerch R et.al. J Virol, 1989, 63 : 833. 51.Lehmkul H. et.al Am J Vet Res, 1979, 40, 4 :512.
52.Lehmkuhl H.D. et.al. Amer J Vet Res, 1979, 40, 12 :1729. 53.Lambert D.M. et.al. Virology,
1983, 130, 1 :204. 54.Mackie Peter L.K. et.al. J Clin Microbiol, 1991, 29, 11, :2653. 55. Mulkey
K. et. al. - J Clin Mikrobiol, 1991, 29 .2038. 56,Mc Nulty M.S. et.al. Am J Vet Res, 1983, 44, 9
: 1656. 57.Meurman O. et.al. J Meth Virol, 1984, 14, 1 :67. 58.Mori I. et.al. J Gen Virol, 1995,
76, 5 .1251. 59,Marschall R G et.al. Amer J Vet Res 1983, 44, 7 :1366. 60.Nicholas J. et.al. J
Virol , 1990, 64 : 4232. 60a.Otto P. et.al. Tuberc and Lung Diseas, 1994, 75 : 98. 61.Perrin В
et.al. Rec Med Vet, 1979, 155, 5 :465. 61a.Pastey M.K. et.al. J Gen Virol, 1995, 76, 1 :193.
616.Patton A.W. et.al. J Clin Microbiol, 1992, 30,4 :901. 62.Pirie H et.al. Veter Rec, 1981, 19
:411. 63.Peeples M. etal. Virology, 1979, 95, 1:137. 64.Sullenger W.M. et.al. J Clin Microbiol,
1991, 29, 6 :1255. 65.Stott E.J. et.al. J Hygg, 1984, 93 :251. 65a.Tamura S. et.al. Eur J Immunol,
1991, 21 :1337. 66.Trudell M. et.al. Vaccine, 1989, 7 :12. 67.Thomas T. et.al. J Virol Meth,
1983, 6, 4 :241. 68.Trigo F.J. et.al. Am J Vet Res, 1984, 45, 8 :1663. 69.Thomas L. et.al. Vet
Rec, 1981, 108, 20 :432. 7O.Trenhaft M. et.al. Infect and Immunol, 1982, 37, 2 :439. 70a.Voss
G. et.al. Virus Res, 1992, 24, 2 :197. 71,Verhoeff J. et.al. Vet Rec, 1984, 114, 1 :9. 72.Verhoeff J.
et.al. Vet Rec, 1984, 115, 19 :488. 73.Van Den Ingh T.S. et.al. Res Vet Sci, 1982, 33, 2 .152.
74.Verhoeff J. et.al. Vet Quart, 1985, 7, 2 :106. 75.Walpita P. et.al. J Clin Microbiol, 1992, 30, 4
: 1030. 76.Wiliver R.C. et.al. J Clin Microbiol, 1989, 27 :295. 77.Walsh E. et.al. J Gen Verol,
1986, 67 :505. 78.Westenbrinn F. et.al. Res Veter Sci, 1985, 38, 3 :334. 79.Wellemans G. et.al.
Ann Med Vet, 1978, 122 :527. 80.Zamora M. et.al. Virus Res, 1992 ,24, 1:115.
293
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекпии
Глава VII. РАБДОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБДОВИРУСОВ
Семейство Rhabdoviridae (от грен, rhabdos - стержень, палочка) - большая группа
вирусов, поражающая позвоночных и беспозвоночных животных и растения. Рабдовирусы
позвоночных и беспозвоночных имеют пулеобразную форму, а рабдовирусы растений - ба-
циллоподобную. Вирионы рабдовирусов состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и
липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются выступы длиной 5-10 нм и
диаметром около 3 нм. Размеры вирионов (100-430)-(45-100) нм, диаметр нуклеокапсида
около 50 нм, длина спирали около 700 нм. Часто встречаются укороченные вирионы - 0,1-
0,5 длины нормальных. Иногда также обнаруживают необычно длинные экземпляры.
Мол.м. вирионов 300-1000 МД, плавучая плотность в CsCl 1,19-1,20 г/см3, в сахарозе 1,17-
1,19 г/см3, коэффициент седиментации 550-1000S. Рабдовирусы стабильны при pH 5-10, бы-
стро инактивируются при 56°С и УФ облучении.
Геном представлен единой 1-спиральной линейной молекулой минус-РНК с мол.м. 3,5-
4,6 МД и коэффициентом седиментации 24-45S. Вирионная РНК рабдовирусов не обладает
инфекционностью. В вирионах рабдовирусов обнаружено 5 полипептидов, 3 из которых (L,
NS, N) связаны с нуклеокапсидом, а 2 (G, М) входят в состав липопротеидной оболочки. Бе-
лок G гликозилирован, образует на поверхности вириона выступы и индуцирует синтез
ВНА. В вирионах содержится 65-75% белка, 15-25 липидов, 3 углеводов и 1-2% РНК.
Рабдовирусы размножаются в цитоплазме. Вначале вирионная РНК транскрибируется
вирионассоциированной транскриптазой с образованием нескольких информационных РНК,
обеспечивающих синтез вирусспецифических белков, а затем она реплицируется. На матри-
це вирионной минус-РНК синтезируется полная копия плюс-РНК, которая, в свою очередь,
служит матрицей для синтеза дочерних геномных минус-РНК. Синтезированные минус-РНК
связываются с белком и образуются нуклеокапсиды. Созревание вирионов происходит поч-
кованием нуклеокапсидов через модифицированные участки клеточной оболочки, в которой
находятся вирусспецифические белки G и М. Некоторые представители семейства размно-
жаются в организме позвоночных и членистоногих, другие - в организме членистоногих и
растений. Рабдовирусы передаются членистоногими, аэрозольно и при контакте.
Семейство Rhabdoviridae состоит из пяти родов:
Vesikulovirus, Lyssavirus, Ephemerovirus, Cytorhabdovirus, Nucleorhabdovirus.
1. Род Vesikulovirus (от лат. vesycula - пузырек). Включает 29 представителей: вирусы
везикулярного стоматита Индиана (прототипный вирус), Нью-Джерси, Алагоас, весенней
виремии карпов и др. Средний размер вирионов составляет 170-70 нм, внешний диаметр
нуклеокапсида 49 нм, внутренний - 29 нм, длина спирали около 1 мкм, коэффициент седи-
ментации 625S. Геном вируса везикулярного стоматита (ВВС) состоит из 11161 нуклеотида
и кодирует 5 вирусных белков. Гены расположены в следующем порядке: З'-N-NS-M-G-L-
5'. Первые 47 нуклеотидов с З'-конца траскрибируются с образованием лидирующей РНК,
которая необходима для транскрипции 5 вирусных генов. Пять моноцистронных иРНК
обеспечивают синтез всех вирусных белков. Межгенные области состоят из 2-х нуклеотидов
(между лидирующей РНК и N-геном - 3 нуклеотида) и не транскрибируются. В вирионах
ВВС содержится 500-1500 молекул гликопротеина G (70-80 кД), 1500-4000 молекул мат-
риксного белка М (20-30 кД), 1000-2000 молекул нуклеопротеина N (50-62 кД), 100-300 мо-
лекул фосфопротеина NS (40-50 кД) и 20-50 молекул белка L (150 кД). Первые 2 белка
входят в состав вирусной оболочки, а остальные формируют нуклеокапсид. Белки нуклео-
капсида L и NS являются компонентами траскриптазы. Размножение вирусов происходит в
цитоплазме и не зависит от функции клеточного ядра. При инфицировании клеток ВВС и
294
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовируспые инфекции
другими вирусами (парамиксовирусы, ретровирусы птиц и млекопитающих, вирус простого
герпеса) образуются фенотипически смешанные частицы (псевдотипы), содержащие геном
вируса везикулярного стоматита и наружные белки другого вируса.
2. Род Lyssavirus (от греч. lyssa - бешенство). Включает 32 представителя: вирусы
бешенства (ВБ - прототипный вирус), Мокола, Котонкан, Дювенхаге, Лагос, геморрагиче-
ской септицемии форели, инфекционного некроза кроветворной ткани лососевых и др. Воз-
можными представителями рода являются 44 вируса, выделенные от позвоночных и беспо-
звоночных животных.
Таблица VII. 1. Вирусы группы бешенства, патогенные для человека и
животных (по М.А.Вагабову и И.Ф.Баринскому,1979)
Вирус Источник выделения
Бешенство (уличный, фиксированный, дикования, летучих мышей) Лагос Бат (ВЛБ, Lagos Bat) Мокола (BM.Mokola) Дювенхейдж (BD, Duvenhage) Острого энцефаломиелита (ОЭМЧ) Бешенствоподобный Котонкан (BK,Kotonkan) Ободьянг (BO,Obodhiang) Фландрас (Flandres,Hart Park) Человек, плотоядные, летучие мыши Летучие мыши Человек, землеройка Человек, лет. мыши Человек Грызуны в Центр.Евр. КРС, комары Комары (Mangonia uniformis) Комары (Culex quinquetosa cialis)
Средний размер вирионов составляет 180-75 нм, длина выступов около 10 нм, длина
спирали нуклеокапсида в вытянутом состоянии 4,2-4,6 мкм. Геном ВБ состоит из 11932
нуклеокапсида и кодирует 5 вирусных белков. Гены расположены в том же порядке, что и у
вируса везикулярного стоматита. В вирионах ВБ содержится 1600-1900 молекул белка G
(65-80 кД), 1650-1700 молекул белка М (22-25 кД), 1750 молекул белка N (58-62 кД), 900-
950 молекул белка NS (35-43 кД) и 17-150 молекул белка L (190 кД). На основании перекре-
стной PH некоторые лиссавирусы подразделены на 4 серотипа: 1-й - ВБ, 2-й - Лагос, 3-й -
Мокола, 4-й - вирус Дювенхейдж. Белок G индуцирует синтез ВНА и обеспечивает развитие
иммунитета. Белки нуклеокапсида N и NS имеют группоспецифические АГ -детерминанты
Лиссавирусы размножаются в организме позвоночных и членистоногих. Созревание
происходит в период их отпочковывания от цитоплазматических мембран, в которые вклю-
чены вирусные белки G и М.
3. Род Ephemerovirus. Включает вирус эфемерной лихорадки КРС, который передается
кровососущими насекомыми.
4. Род Cytorhabdovirus и 5. Род Nukleorhabdovirus - рабдовирусы, поражающие мно-
гие виды растений. Размножаются в клетках членистоногих и растительных клетках.
ВЕЗИКУЛЯРНЫЙ СТОМАТИТ
Vesicular stomatitis (англ), Stomatite
vesiculouse (франц), Stomatitis vesicularis (нем)
Везикулярный стоматит (ВС) - остропротекающая болезнь лошадей, мулов, КРС и сви-
ней, проявляющаяся образованием везикул в ротовой полости, поражением сосков вымени,
реже тканей области межкопытной щели, венчика и мякишей. Протекает в виде энзоотиче-
ских вспышек или эпизоотий.
295
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
Болезнь впервые диагностировали в Южной Америке в 1802 г. В 1915-1917 гг. она про-
никла из Канады во Францию, затем её регистрировали в Германии, Англии, Италии. В
1939 г. обнаружена среди лошадей и КРС в Аргентине, в 1944 г. - в Венесуэле среди КРС,
лошадей и свиней. В 1949 г. в США эпизоотия охватила 14 штатов. В 1950 г. болезнь рас-
пространилась в Мексике. За последние годы ВС наблюдается в Северной и Южной Амери-
ке, Англии, Франции, Италии, Индии, Китае. В PH ВНА к вирусу типа Индиана выявлены в
большом проценте случаев у животных, живущих на деревьях, а к вирусу типа Нью-Джерси
- у грызунов. У домашних животных и людей титры АТ высоки к обоим типам вируса (4).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод продолжается 2-9, чаще 2-5 дн. Первыми клиническими признаками болезни являются
красные пятна, появившиеся на слизистой оболочке щек, губ, на твердом и мягком небе и
особенно на языке. Затем появляются единичные и множественные болезненные пузырьки,
наполненные прозрачной или желтоватого цвета серозной жидкостью, которые, сливаясь,
образуют красные пузыри. Последние быстро лопаются, обнажая ярко-красную кровоточа-
щую поверхность. Такие эрозии иногда поражают большую поверхность языка и десен.
Обычно они в течение 3-7 дн эпителизируются. Перед образованием пузырьков или во вре-
мя появления их животные угнетены, температура тела повышена до 41-42°С. После разры-
ва пузырьков снижается до нормальной. При поражении слизистой оболочки ротовой полос-
ти происходит обильное слюнотечение. Животные издают чмокающие звуки (1).
У коров часто поражаются соски. На них появляются везикулы, которые увеличиваются
и лопаются. Образуются кровоточащие болезненные язвы. Если поражена большая поверх-
ность вымени, развивается мастит. Иногда пузырьки появляются на слизистой оболочке но-
са, конъюнктиве, зеркальце, на венчике и коже межкопытной щели. Выздоравливают жи-
вотные на 8-16-й день после разрыва везикул. Этот срок зависит от тяжести поражения.
У лошадей пузырьки появляются преимущественно на поверхности языка, затем на
внутренней и наружной поверхностях губ, в углах рта, на морде, в ноздрях, реже на ушах,
на нижней поверхности живота, препуции, на вымени и конечностях. В результате пораже-
ния венчика возможно отслоение всего рогового башмака или только его пяточной части.
При тяжелых поражениях конечностей животные хромают. Длительность болезни зависит
от величины поражения и осложнений. В среднем болезнь продолжается 12-16 дн .
У свиней ВС протекает остро и характеризуется лихорадкой (41-42°С) и появлением ве-
зикулярной сыпи на слизистой оболочке ротовой полости, языка, на коже губ, рыла, межко-
пытной щели на пятачке, вымени. Инфекция протекает в виде энзоотии (возможно, эпизо-
отии) с поражением от 5 до 90% (в среднем 30%) животных. Первые патизменения появля-
ются в глубине шиловидного слоя эпидермиса. Затем процесс распространяется на базаль-
ный и зернистый слои. С распространением патологического процесса цитоплазма вокруг
ядра клетки сокращается так, что клетки приобретают вид больших лимфобластов. В ре-
зультате вокруг ядра и плазмы образуются пузырьки, заполненные жидкостью. Такой пузы-
рек окаймляется лишь тонким ободком. Объем внутриклеточной жидкости увеличивается,
прибавляется воспалительный экссудат, вследствие чего цитоплазма становится более жид-
кой. Ядра клеток изменяются. Вначале клетки уплотняются, а позднее происходит их грану-
лированное разложение. Многие измененные клетки сливаются и образуются пузырьки,
распространяющиеся как вниз на базальный слой, так и вверх на роговой слой эпидермиса.
В более глубоких слоях кожи возникают отек и воспалительные процессы с инфильтрацией
нейтрофильных элементов. С развитием патологического процесса содержи мое пузырей
становится гнойным. Все эти изменения можно наблюдать, примерно, 12 ч.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус везикулярного стоматита открыли Коттон, Олитский, Траум и Шенинг в 1925 г.
Морфология и химический состав. Вирионы пулевидной формы, размер их 70-175 нм
(130-220). Палочковидные субъединицы (9-3-3 нм) прикреплены к нити нуклеиновой кисло-
296
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
ты, которая свернута в спираль, состоящую из 30 витков с наружным диаметром 49 нм и 4
витков с меньшим диаметром, находящихся в полусферической части вириона. Спиральный
нуклеокапсид заключен в оболочку (толщиной 18 нм), на поверхности которой имеются ха-
рактерные ворсинки длиной 10 нм. Наружная оболочка вирионов содержит фосфолипиды
клетки, а внутренний спиралевидный остов представлен вирусспецифическим АГ. Наруж-
ные шиловидные выступы связаны с внутренним спиралевидным компонентом. Они прони-
зывают оболочку вириона, образуя на его поверхности выступы (Рис. 45). Геном ВВС - это
нефрагментированная 1-нитевая молекула РНК, с мол.м. 4-4,5 МД. РНК, выделенная из ви-
рионов (около 2%), неинфекционна. Геном содержит не менее 6 цистронов. Основные бел-
ковые компоненты ВВС Р2 и Р5, а также минорные Р1 и Р4, находятся в поверхностной
оболочке вируса и частично погружены в липидную мембрану. Компонент РЗ, представ-
ляющий белок ядра вириона, изолирован оболочкой от внешней среды. При размножении
вируса образуются частицы 3-х типов: полноценные инфекционные В частицы и неинфек-
ционные дефектные LT и Т- частицы. В частицы содержат 42 S РНК, LT- 28 S РНК и Т - 23
S РНК. Предполагают, что 42 S РНК В - частиц, возможно, является продуктом “сшивания”
28S и 23S РНК, причем это “сшивание” может происходить уже на стадии соответствующих
нуклеокапсидов. Образование LT и Т частиц в таком случае есть следствие дефекта этого
“сшивающего” механизма, приводящего к “надеванию” внешней оболочки “несшитых”
100S и 80S нуклеокапсидов. Нуклеокапсиды В частиц имеют константу седиментации 140S,
LT100 S и T80S. В частицы содержат специфическую РНК-полимеразу, которая участвует в
двух реакциях: в транскрипции и в посттранскрипционной модификации продукта РНК. В
составе нуклеокапсидов всех 3-х типов частиц обнаружен основной белковой компонент (N
белок) и небольшое количество L, М и NS1 белков. L белок - большой белок (мол.м. 190кД),
представляет собой нерасщепленный предшественник других вирусных белков. Он ассоции-
рован с вирионным нуклеокапсидом и, вероятно, образует вирусную РНК - полимеразу. G
белок (мол.м. 69кД) - гликопротеин, представлен двумя субъединицами G11 и G2. Они
представляют собой компоненты оболочки вириона и могут быть изолированы в достаточно
чистом виде с помощью протеолитических ферментов. N (мол.м. 50кД) - структурный белок
нуклеокапсида всех изученных рабдовирусов. Он связан с вирионной РНК, что делает по-
следнюю резистентной к РНК-азе. NS 1 - белок (мол.м. 40кД) - минорный компонент ядра
вирусного нуклеокапсида Он связан с L и N белками так же, как и с вирионной РНК. Функ-
ция NS белка неясна. М белок-матрикс, служащий для связывания рибонуклеокапсида с
белком оболочки. РНК-полимераза (транскриптаза), вероятно, представлена в вирионе L
или NS1 белком, а нуклеокапсидная матрица состоит из РНК, “одетой “ N белком. Т части-
цы не обладают транскриптазной активностью, содержат активную транскриптазу, но не со-
держат активной матрицы. Основная масса нуклеокапсидов имеет константу седиментации
100S и содержит 28 S РНК. Дефектные интерферирующие частицы обладают транскриптаз-
ной активностью. Предполагают, что РНК ВВС содержит 2 различных участка, один из ко-
торых осуществляет транскрипцию, а другой - репликацию. Первый участок у РНК дефект
ных частиц либо отсутствует, либо по какой-то причине не функционирует. Внутри вириона
ВВС и вируса бешенства локализована эндогенная протеинкиназа, которая фосфорилирует
NS1 - минорный белок нуклеокапсида и в меньшей степени М белок оболочки. Источником
происхождения протеинкиназы вирионов, по-видим ому, является клетка хозяина (3).
Устойчивость. Добавление сыворотки к вируссодержащей суспензии способствует за-
щите вируса от неблагоприятных воздействий. Вирус хорошо сохраняется в замороженном
(-20°С и ниже) и лиофилизированном состояниях. В 50%-ном забуференном р-ре глицерина
(pH 7,5) при 4-6°С вируссодержащие материалы сохраняют активность около 4-х мес. В ин-
фицированных кормушках и поилках вирус сохраняет активность 3-4 дня, в садовой земле
при 4°С - до 30 дн. Температура 100°С и 2%-ный р-р NaOH убивают его почти мгновенно.
Различные штаммы вируса неодинаково чувствительны к протеолитическим ферментам
297
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
(трипсину и хемотрипсину). Высокочувствительны шт. Индиана и Нью-Джерси, малочувст-
вителен шт. Кокэл и нечувствительны шт. Аргентина и Бразилия. Оба фермента удаляют
АГ с поверхности вирионов у шт. Индиана. У шт. Бразилия удаляется около 70% АГ и ос-
тальные 30% устойчивы даже при продолжительной обработке. Он имеет поверхностные
выступы 2-х типов, отличающиеся по своей устойчивости к протеолитическим ферментам.
Антигенная структура. Первый растворимый АГ вируса (шт. Индиана), представляю-
щий белок сердцевины вириона, имеет константу седиментации 20S. Второй растворимый
АГ (константа седиментации 6S) реагирует перекрестно с АТ на вирусную оболочку. Дан-
ный АГ в оболочках вирусных частиц 2-х серотипов (Индиана и Нью-Джерси) различен.
Антигенная активность. Все штаммы 2-х серотипов (Индиана и Нью-Джерси) при
экспериментальной инфекции индуцируют ВНА. Вирус вызывает появление в крови рекон-
валесцентов специфических ВНА и КСА. Первые обнаруживаются на 7-10 день болезни.
КСА у КРС и лошадей можно обнаружить на 6-8 день после заражения, к 9-16-му дню они
достигают максимума и, постепенно снижаясь, к 50-110-му дню исчезают. У некоторых жи-
вотных ВНА в высоких титрах могут сохраняться до 13 и даже 48 мес. Выздоровевшие жи-
вотные с высоким уровнем ВНА, но отрицательно реагирующие по РСК, чувствительны к
повторному заражению гомологичным вирусом.
Антигенная вариабельность и родство. Имеется 4 АГ различных типа ВВС: Нью-
Джерси, Индиана, Коралл и Керн-Каньон, различающихся в PH иммунологически в опытах
перекрестного заражения. Однако в РСК и реакции камедь-агглютинации вирусы дают пе-
рекрестные реакции, что свидетельствует о наличии у них общего АГ. При помощи РДП в
агаровом геле также удалось выявить общий для обоих серотипов растворимый АГ. Однако
субвирусные структуры, полученные при обработке вирусов твином и эфиром или дезокси-
холатом натрия, в РСК давали значительные перекресты. Вероятно, типо- и штаммоспеци-
фические особенности вирусов определяются белком, входящим в состав поверхностных
структур, а за реакцию с гетерологичными сыворотками ответствен белок РНП. ВВС не
имеет АГ и иммунологического родства с вирусом ящура и с вирусом везикулярной экзан-
темы. Серотип Нью-Джерси встречается чаще и вызываемая им болезнь протекает тяжелее,
чем вызываемая шт. Индиана.
ГА свойства. Серотипы Индиана и Нью-Джерси различаются по адсорбции и элюции.
Оба активно сорбируются эритроцитами гусей при низкой темпера туре в узком диапазоне
pH (для шт. Индиана pH 5,8, для Нью-Джерси pH 6,4). Адсорбция и гемагглютинация шт.
Индиана стабильны при pH 5,8 и 37°С, тогда как шт. Нью-Джерси элюирует медленно при
0°С и pH 6,4. Оптимальные условия для постановки РГА: температура 4°С, pH 5,8 и эрит-
роциты гусей. При 56°С ГА разрушается за 1 мин; при 35°С и pH 9,0 стабилен несколько
дней. При 4°С - 60°С ГА сохраняется довольно долго. При центрифугировании вируса в
градиенте плотности CsCl ГА выявляется во фракциях плотностью 1,22-1,24 г/см3.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на КРС, лошадях, овцах, ко-
зах, мулах, свиньях, косулях, белых мышах, морских свинках, хомяках и хорьках и нерегу-
лярно - на кошках, крысах, кроликах, енотах. При заражении КРС в язык или десну, а также
при втирании вируса в скарифицированную слизистую оболочку, развивается типичная кар-
тина болезни. При аэрозольном заражении клинически болезнь не проявляется, хотя у жи-
вотных отмечают появление специфических АТ. Контактное заражение в эксперименте не
всегда удается. При интрацеребральном заражении у мышей 3-4-нед возраста развивается
энцефалит. У морских свинок массой 500-600 г после введения вируса в плантарную по-
верхность кожи лапки через 44-50 ч появляются везикулы, поражаются также почки и пе-
чень. Кроликов удается заразить в язык (не всеми штаммами) и в мозг. Цыплят можно зара-
зить интрацеребрально, но непрерывные серийные пассирования вируса на них не удаются.
Можно заразить уток и гусей при введении материала в язык и в плантарную поверхность
298
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
лапок. Возможно экспериментальное заражение голубей, енотов и лягушек. Последние по-
сле инфицирования могут быть носителями вируса в течение многих недель. Возможно слу-
чайное заражение человека при манипуляции с вирусом и при контакте с животными (2).
Культивирование. Удается в 7-8-дн КЭ при нанесении материала на ХАО и инкубиро-
вании при 35°С. С возрастом чувствительность эмбрионов к вирусу снижается. Если эм-
брионы в течение 1-2 дн не погибают, у них развиваются пролиферативные, а затем некро-
тические изменения на оболочке. Вирус размножается также в аллантоисной полости. Кро-
ме КЭ, вирус удается культивировать на мышатах-сосунах 7-10-дн возраста, зараженных
интрацеребрально и интраперитонеально. Титры вируса в КЭ и мышатах-сосунах могут
достигать 107,5-109 ИД 50/МЛ. Вирус культивируют также в первичных культурах фибробла-
стов КЭ и клетках почечной ткани морских свинок, КРС, свиней, а также во многих пере-
виваемых линиях клеток различного происхождения (L, HeLa, КВ, КЕМ, СОЦ, Hep, RES и
др.). Размножение его сопровождается развитием ЦПИ. В монослойной культуре почечных
клеток под агаровым покрытием вирус вызывает образование бляшек. Его можно титровать
методом бляшек. Все штаммы ВВС размножаются в дрозофиле. Наиболее адаптированы к
ней серотипы Нью-Джерси и Бразильский. У зараженных дрозофил возникает такая же чув-
ствительность к СО2, как и при заражении вирусом сигма.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Животные заражаются во время приема кор-
ма, воды, инфицированных слюной больных животных. Перезаражению животных способ-
ствуют насекомые: Stomoxyc calcitrans (6 видов), слепни (3 вида), Chrysops и Aedes (4 вида).
Считают, что в циркуляции вируса в природе участвуют дикие крысы. Предполагают, что
вирус может сохраняться в почве и на растениях и разноситься кровососущими насекомы-
ми. Эту экологическую особенность объясняют сходством с фитопатогенными вирусами.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях ВС боле-
ют лошади, мулы, КРС, свиньи, овцы, еноты, косули, кабаны. Взрослый КРС более воспри-
имчив, чем телята. Возможно случайное заражение людей в лабораториях или в результате
прикосновения руками к пораженным соскам вымени больных коров. У людей болезнь мо-
жет протекать в латентной форме или напоминать грипп.
ДИАГНОСТИКА
Клинически ВС протекает, примерно, так же, как ящур и везикулярная экзантема сви-
ней. Поэтому симптомы болезни и патологические изменения не могут служить основой для
диагностики этой инфекции. Кроме анализа эпизоотической обстановки, необходимо выде-
лять вирус из патологического материла, взятого от больных животных, и проводить его
идентификацию; ставить биологическую пробу на морских свинках и лошадях. Для под-
тверждения диагноза ставят РСК и PH в культуре ткани или на КЭ, камедь-агглютинацию и
реакцию ингибиции камедь-агглютинации. Для обнаружения ВВС применяют реакцию ка-
медь-агглютинации. Суть её состоит в том, что АТ к этому вирусу адсорбируются частица-
ми ионообменной смолы. Покрытые АТ частицы камеди агглютинируются вируссодержа-
щим материалом. Результаты исследования сывороток с помощью ингибиции камедь-
агглютинации четко совпадают с данными PH. С помощью камедь-агглютинации можно
обнаружить формалинизированный вирус с утраченной вирулентностью. Между титрами
инфекционности вируса и камедь-агглютинации прямой связи нет.
При дифференциальной диагностике необходимо исключить ящур, везикулярную экзан-
тему свиней (ВЭС), инфекционное папулезное воспаление ротовой полости у КРС, простой
пузырьковый стоматит и язвенный ринит у лошадей. Дифференцировать ВВС от ВЯ и ВЭС
можно на основании различий их по некоторым физико-химическим свойствам, в частно-
сти, по устойчивости к кислой среде (pH 5,0) и чувствительности к эфиру, а также по ре-
зультатам биопробы. Диагноз на прошедшую инфекцию ставят при помощи РСК и PH, од-
нако исчезновение КСА через 2-3 мес после переболевания позволяет использовать эту ре-
299
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
акцию только для диагностики относительно свежих случаев болезни. В противоположность
этому ВНА сохраняются до 4-х лет и дольше, что делает использование PH особенно полез-
ной для ретроспективной диагностики, а также для выяснения общей эпизоотологической
ситуации путем массовых серологических исследований скота. Выздоровевшие животные с
высоким уровнем ВНА, но отрицательно реагирующие по РСК, чувствительны к повторно-
му заражению гомологичным вирусом.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные приобретают стойкий иммунитет только против определенного
серотипа вируса на срок от 6 до 12 мес. Для активной иммунизации животных применяют
вакцину из инактивированного кристаллвиолетом или p-пропилактоном вируса. Вакцина
создает полный иммунитет на 1 мес и неполный - на 3 мес. После вторичной прививки им-
мунизирующее действие вакцины усиливается.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Частная вет. вирусология, М, Колос, 1979. 2.Commer J.A et.al. Am J
Trop Med Hyg, 1990, 42 .483. 3.Redelman D. et.al. Vet Immunol Immunopathol, 1986, 20 .345.
4.Stallknecht D.E. et.al. Am J Epidemiol, 1985, 122 :876.
БЕШЕНСТВО
Rabies (англ), Tollwuut (нем), Lyssa, La Rage (франц), Rabia (исп).
Бешенство (Б) - остро протекающая болезнь теплокровных животных, характеризую-
щаяся поражением ЦНС. Восприимчивы домашние и дикие животные всех видов, а также
человек. Клинические признаки заболевания описали Плутарх и Селкус в 100 г. н. э. (80).
Е.С Tierkel (81) относит наиболее ранние ссылки на заболевание в Азии как одно из встре-
чавшихся в античном Вавилоне в XXIII веке до н. э. и в последующем имевшее название
Hammurabi. Вопреки античной истории заболевания многие аспекты Б неясны до настояще-
го времени. Большинство теплокровных животных чувствительны к вирусу бешенства (ВБ).
Длительно удерживавшаяся концепция фатального исхода заболевания человека, как и жи-
вотных всех видов, постепенно меняется - имеют место фактически документированные
случаи выздоровления от Б человека и собак после экспериментальной инфекции. Живот-
ные некоторых видов более устойчивы к бешенству, чем другие (24, 25,36).
Болезнь регистрируется в различных странах земного шара. Не отмечено случаев про-
явления болезни в Австралии, Великобритании, Японии. В зависимости от резервуаров и
особенностей течения распространение Б в мировом масштабе условно принято делить на
несколько ареалов.
Полярный ареал включает арктическую территорию бывшего СССР, Гренландию, Аля-
ску, где в 60-90% случаев носительство ВБ проявляется дикованием (у песцов). Известны
случаи заболевания с летальным исходом людей, контактировавших с больными песцами.
Западная, Центральная Европа, азиатская часть бывшего СССР (85) США, Мексика
входят в зону, характеризующуюся многочисленными резервуарами (куницы, лисы, волки,
грызуны). Южная и Центральная Америка рассматриваются как самостоятельный тип при-
родной очаговости, где резерву арами являются летучие мыши. В Африканском ареале ос-
новным носителем вируса являются мангусты. В последнее десятилетие в Азии, Африке и
Латинской Америке от Б ежегодно погибает около 20 тыс. человек, в Индии - около 30 тыс.
человек. 96% укусов наносят собаки (61).
К 1950 г. большинство европейских стран стало свободным от Б собак. Затем инфекция
стала распространяться с востока на запад: в период 1960-1970 гг. волна Б среди лисиц ох-
ватила ФРГ, Австрию, Бельгию, Францию, Люксембург. Всего за 1972-1989 гг. было заре-
гистрировано 300 тыс. случаев Б у животных. В 83% случаев болели дикие животные, в ос-
300
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
новном лисицы (74,5%). В период 1977-1990 гг. в Европе заболело 69 человек. Изучение
экологии лисиц в эндемичном в отношении Б регионе на северо-востоке Франции показало,
что величина помета лисиц зависит от количества грызунов (в основном полевок Microtus
arvalis). Резкое увеличение популяции грызунов может быть причиной роста Б среди лисиц
(17). Страны, в которых собаки продолжают быть главным источником человеческого бе-
шенства, почти все страны Латинской Америки. Среднее годовое число сообщений о чело-
веческом Б увеличилось от 258 в 1970-1979 гг. до 293 в 1980-1989 гг. Между 1990 и 1994 гг.
в трех странах -Бразилии, Мексике и Перу - насчитывалось 65% случаев человеческого Б от
общего количества случаев в других странах. Специфическая смертность от Б упала от 1,3
случая на 1 млн. населения в 1980 г. до 0,3 в 1993 г. Число случаев Б собак в странах Ла-
тинской Америки упало с 20518 в 1980 -1982 гг. до 8069 в 1991-1993 гг, В период 1990-1993
гг. собаки были ответственны за 84,1% случаев человеческого Б, летучие мыши - за 7,2,
кошки - за 4 и другие животные (обезьяны, волки, койоты) - за 4,7%. В ряде стран передача
Б вампирными летучими мышами имеет важное значение для общественного здравоохране-
ния и экономики. С 1987 г. 73 человеческие смерти были вызваны Б, передаваемым вам-
пирными летучими мышами (83). В Шри-Ланка отмечается высокая заболеваемость Б среди
людей. За 1950-1975 гг. умерло 5287 человек (84).
Помимо собак в распространении Б существенную роль играют кошки. Они составляют
обычно не более 5% от общего числа иммунизированных животных. К некоторым штаммам
ВБ кошки даже более чувствительны, чем собаки, причем они выделяют большее количест-
во вируса Поэтому санитарные мероприятия по борьбе с Б кошек заключается в исключе-
нии контактов их с животными - векторами инфекции - содержание в изолированных усло-
виях и удаление бродячих кошек из инфицированных районов.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У собак инкубацион-
ный период варьирует от нескольких недель до года, в среднем 2-8 нед. Его продолжитель-
ность зависит от вида, возраста, резистентности животного, количества проникшего вируса
н его вирулентности, места локализации и характера раны. Чем богаче нервными оконча-
ниями ткань в месте внедрения вируса, чем глубже рана и больше она ослюнена, тем короче
инкубационный период. У 70% заболевших домашних животных клинические признаки Б
начинают проявляться между 15-60 дн после заражения, а у остальных - раньше или позже.
В развитии болезни различают 3 стадии: продромальную, возбуждения (Рис. 46) и пара-
личей. Продромальная стадия (стадия предвестников) характеризуется повышением чувст-
вительности животных к шуму, свету, прикосновениям, извращением аппетита, нарушением
зрения, повышением температуры тела. Эта стадия длится от 12 ч до 3-х сут. Стадии возбу-
ждения свойственны приступы буйства, ярости, расстройства чувствительности и сознания,
оглумообразное состояние. Наблюдаются судороги, парезы жевательных мышц и мышц
глотки, сужение зрачков, учащенные позывы к мочеиспусканию. Лихорадка достигает мак-
симума. В стадию параличей снижается и даже исчезает болевая чувствительность. Наруша-
ется деятельность центров кровообращения и дыхания. Температура тела понижается. Тече-
ние болезни заканчивается летально. Однако при серологическом исследовании диких жи-
вотных, собак, кошек и вампиров в сыворотке крови обнаруживают ВНА, что, вероятно,
явилось результатом бессимптомного переболевания.
Течение Б за последние годы претерпело существенные изменения и проявляется без
стадий, свойственных классической болезни. В последние годы стали преобладать парали-
тическое и атипичное проявления болезни.
У КРС инкубационный период продолжается от 2 нед до нескольких мес, чаще 3-6 нед.
Клинические признаки в начале болезни неспецифичны: потеря аппетита, замедленная мо-
торика рубца, иногда дрожание, затем паралич глотки и связанный с этим отказ от корма,
301
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
обильное слюнотечение. Стадия возбуждения может отсутствовать. Она лучше выражена у
животных выпасного содержания по сравнению с животными стойлового содержания.
Для буйной формы характерны возбуждение животного, затрудненное жевание и глота-
ние, прекращение лактации. Затем возбуждение переходит в буйство, животное стремится
сорваться с привязи, хрипло мычит, бросается на препятствия, оглядывается на живот, па-
дает на землю. Наблюдаются обильное слезотечение и потоотделение, фибриллярное подер-
гивание отдельных групп мышц. Зрачки расширены, конъюнктива гиперемирована, иногда
возникает зуд на месте укуса и половое возбуждение. Жвачка становится вялой или совсем
прекращается, часто повторяются позывы к мочеиспусканию и дефекации. Затем развива-
ются параличи нижней челюсти, языка, мышц конечностей. Смерть наступает на 3-6-й день.
Паралитическая стадия Б у КРС встречается наиболее часто. Начало болезни характери-
зуется снижением молочной продуктивности и аппетита. Наблюдается хриплое мычание,
животное отстает от стада. Развиваются атония преджелудков, слюнотечение, затрудненное
дыхание, глотание, животное подолгу пережевывает корм, но не проглатывает его. Темпе-
ратура тела повышается до 40-41°С. Наблюдаются фибриллярное подергивание мышц, по-
вышение потоотделения, признаки нарушения координации движения, запрокидывание го-
ловы. У некоторых животных в период вышеперечисленных признаков появляется возбуж-
дение (в том числе половое, хриплое мычание). Смерть наступает на 3-6-й день. В 1990-
1991 гг. в Аргентине наблюдалась эпизоотия паралитического Б среди КРС и людей. В это
время отмечались случаи гибели рукокрылых, гематофагов и от них выделяли ВБ.
У собак Б проявляется в буйной или тихой форме. При буйном Б различают 3 стадии:
продромальная характеризуется угнетением и длится до 3-х сут. Животное угнетено, прячет-
ся в темные углы. В иных случаях собака ласкова. К концу стадии животное лает на предме-
ты, извращается аппетит. Иногда на месте укуса возникает сильный зуд, животное вылизы-
вает, расчесывает, грызет это место. Затрудняется глотание, появляется слюнотечение, хри-
плый лай. Животное бросается на человека, других животных, что свидетельствует о стадии
возбуждения, которая продолжается 3-4 дня. Затем наступает стадия параличей, продол-
жающаяся 1-4 дня. Болезнь длится 8-11 дн.
Тихая форма часто проявляется у собак, покусанных инфицированными лисицами. Пер-
вые признаки болезни - затрудненное глотание, слюнотечение, затем параличи нижней че-
люсти, конечностей, туловища. Гибель наступает через 2-4 дня.
У овец, свиней, лошадей болезнь проявляется также в двух формах: буйной и паралити-
ческой (69).
Лисицы при заболевании настораживают необычным поведением, теряют чувство стра-
ха, нападают на собак, коров и людей. Больные животные быстро худеют, часто возникает
зуд в области инфицирования. Возможны вялость, паралич; гидрофобии не наблюдается
(40, 44). Считают, что суслики являются естественным резервуаром ВБ и могут служить мо-
делью для изучения закономерностей его персистенции.
Патологоанатомические изменения неспецифичны. Обычно при вскрытии отмечают ис-
тощение, шерсть головы и шеи смочена слюной. В желудке иногда обнаруживают инород-
ные предметы. У жвачных в сетке и книжке находят сухие, плотные кормовые массы. Часто
тонкий кишечник воспален, с кровоизлияниями.
Патогенез. Рецепторами ВБ на мембранах нейронов служат полисиалогликозиды. Про-
водимость импульсов на синаптических мембранах зависит от взаимодействия отрицатель-
но заряженной сиаловой кислоты тиогликозида и ионов Са2+. Препараты гликопротеинов
выделяли из отдельных частей головного мозга здоровых и экспериментально инфициро-
ванных ВБ лисиц. В препаратах определяли отсутствие полисиалогликозидов и концентра-
цию сиаловой кислоты, ионов кальция, белка. Во всех проверенных частях мозга заражен-
ных лисиц обнаружено повышенное содержание сиаловой кислоты, причем в препаратах
коры головного мозга и аммонова рога в 20 раз превышала контрольные значения. Это не-
302
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
посредственно приводит к увеличению отрицательного заряда на синоптических мембранах
и, следовательно, к более высокой проницаемости этих мембран (39, 41, 43). Kucera et.al.
(49) сообщили о трех путях проникновения вируса от глаз до мозга: по окуломоторному па-
расимпатическому нерву, перкорнеальный путь заражения; путь по зрительному нерву.
Механизм, посредством которого вирус достигает ЦНС, изучался рядом исследователей.
При прогрессировании Б на хомячках было показано, что начало продвижения вируса свя-
зано с сокращением мышечных клеток около места инокуляции с инфицированием миоци-
тов и последующим выходом вируса в экстрацеллюлярное пространство. ВБ может распро-
страняться в ЦНС также за счет цереброспинальной жидкости (32, 40, 43).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Установлен генетический плеоморфизм гена нук-
леопротеида Б. Все 69 изолятов ВБ из различных частей мира принадлежат к серотипу 1,
причем идентифицировано по крайнем мере 12 филогенетических линий в соответствии с
географической локализацией хозяина. Селекция, возможно, связана со специфичностью
хозяина, ограничивает изменения аминокислотных последовательностей и АГ дрейф (82).
Морфологические особенности ВБ представлены на рис. 49-51.
Устойчивость. Низкие температуры консервируют вирус. Температура 23°С инактиви-
рует его через 28-53 дня, 50°С - через 1 ч, 60°С - за 5-10 мин, 70°С - мгновенно. Высушива-
ние без вакуума инактивирует вирус в течение 10-14 дн. В гниющем материале он гибнет
через 15 дн. УФ лучи убивают за 5-10 мин. Дезинфицирующие вещества (р-ры формальде-
гида, гидроксида натрия, хлорной извести) действуют на ВБ губительно. Вирус устойчив к
pH 5-10 при 4°С.
Антигенная структура. Нуклеокапсид ВБ представляет собой спиральные тела, со-
стоящие из белков N, NS и L, составляющих 96% его массы, белок N-вирионной РНК, за-
щищающей ее от действия РНК-азы; высокомолекулярный белок L и небольшой белок NS
не связаны с нуклеокапсидом и содержатся в вирионе в незначительном количестве. Внут-
ренним белком вирусной оболочки является негликозилированный мембранный или мат-
риксный (М) белок. Кроме белка М у ВБ в состав внутреннего слоя оболочки входит белок
А или клеточный актин с мол.м. 43 кД, содержание которого достигает 1-5% массы вирион-
ных белков. До недавнего времени считалось, что все штаммы ВБ имеют одинаковый АГ
состав. Однако с помощью монАТ удается легко различать фиксированные и дикие его
штаммы как по нуклеокапсидным, так и по гликопротеиновым АГ. В вирионах ВБ обнару-
жено 5 белков (33). Гликопротеин G способен индуцировать образование ВНА и защищать
животных от заражения. Нуклеокапсидный АГ индуцирует образование КСА и ПА.
Антигенная вариабельность и родство. Ранее все штаммы ВБ рассматривались как
единые в АГ отношении. Однако благодаря гибридомной технологии появилась возмож-
ность получения монАТ к отдельной АГ детерминанте. МонАТ позволили выявить тонкие
АГ связи и различия между штаммами вирусов группы Б. В настоящее время считают, что
вирус Б имеет 4 серотипа, что, видимо, обусловлено различием в составе мембранных бел-
ков. Учитывая это, была предложена следующая классификация вируса: вирус 1-го сероти-
па; прототип этого вируса - шт. CVS и сходные с ним полевые и лабораторные штаммы,
выделенные в различных частях света; вирус 2-го серотипа; прототип его - шт. Lagos Bat,
выделенный из костного мозга летучей мыши в Нигерии; вирус 3-го серотипа; прототип его
- шт. Мокола, выделенный от землеройки и человека; вирус 4-го серотипа - шт. Obodhiang,
выделен от лошадей, комаров и москитов в Нигерии и еще не классифицирован.
Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны. Нуклеопротеидные
АГ различных ВБ имеют группоспецифическое родство с другими рабдовирусами (63). Мо-
нАТ к различным штаммам ВБ открыли новую страницу в изучении тонкой АГ структуры
лиссавирусов, представили дополнительные возможности для решения теоретических и
303
Глава УП. Family Rabdoviridae. Рабдовирусиые инфекции
прикладных задач рабиологии (5, 67). Показана перекрестная защита мышей против широ-
кого спектра изолятов ВБ. При этом мышей вакцинировали рекомбииатной вакциной (на
основе вируса вакцины) экспрессирующей гликопротеин G, нуклеопротеин N или оба (N+G)
лабораторного шт. CVS, или полученной на диплоидных клетках вакциной (HDCV), и опре-
деляли устойчивость мышей к 17 штаммам ВБ, представляющих весь спектр известных ва-
риантов возбудителя. В итоге сделан вывод, что любой штамм ВБ или его гликопротеин мо-
гут быть использованы для вакцинации во всем мире (50).
Локализация и выделение вируса. Многочисленные исследования патогенеза Б по-
зволили условно разделить острую рабическую инфекцию на III основных фазы: I - экстра-
невральная фаза, без видимого размножения вируса в месте инокуляции; II - интра-
невральное, центростремительное распространение инфекции и III - диссеминация вируса по
всему организму, сопровождаемая появлением симптомов болезни и, как правило, гибелью
животного (36). Распространение ВБ по нервным путям впервые доказано Пастером и Ру.
Вирус проникает в организм со слюной в местах укуса н непродолжительное время сохраня-
ется в месте внедрения (до 2-х нед), а затем по центростремительным нервам (Рис. 22 и 23)
продвигается к спинному и головному мозгу. Из мозга по центробежным нервам он попада-
ет в слюнные железы, где репродуцируется в нервных узлах и после дегенерации нервных
клеток выходит в протоки желез, инфицируя слюну. Из мозга вирус также нейрогенным пу-
тем попадает в слюну, роговицу, надпочечники. Выделение вируса по слюной начинается за
10 дн до проявления клинических признаков, поэтому французский регламент предусматри-
вает 15-дн срок наблюдения за покусавшим животным. У бешенной лисицы накапливается
в слюнных железах столько вируса, что можно заразить 67 млн. лисиц. Доказано нахожде-
ние вируса во всех внутренних органах и крови, кроме сальника, селезенки и желчного пу-
зыря. Из ЦНС по нервным путям вирус попадает во внутренние органы, а затем в кровь. Та-
ким образом происходит стадия генерализации инфекционного процесса (49).
Персистенция вируса. За последние годы описаны казуистические случаи неоднократ-
ного выделения ВБ из слюны здоровых собак на протяжении почти 2-х лет после их инфи-
цирования. Аналогичная картина наблюдалась и у некоторых экспериментально заражен-
ных кошек. В 1981 г. представлены результаты 4-летного изучения Б мангустов, выловлен-
ных в ряде районов Гренады. С помощью ИФ ВБ обнаружен в срезах мозга 100 (2,1%) из
4754 обследованных мангустов. Среди 1675 обследованных животных обнаружены ВНА в
пробах 498 сывороток (30%). При сопоставлении результатов обнаружения Б и соответст-
вующих АТ обнаружено, что число больных животных в течение 1971-1974 гг. ежегодно
снижалось (с 3,5 до 0,6%), количество мангустов с определяемыми АТ увеличилось с 20,8
до 43,2%. АТ к Б, как отмечено, в опытах с отловленными в природе мангустами (20 осо-
бей), циркулировали в крови еще 35 мес. У животных с наиболее высокими титрами АТ
(Г. 1400) отмечена и наибольшая скорость их снижения (20,35, 44).
Одно из свойств ВБ - способность к персистенции in vivo и in vitro. Хроническая инфек-
ция клеток Нер-2/2 и ВНК-21/13 фиксированным ВБ сопровождается определенными изме-
нениями клеточного метаболизма. АГ ВБ образуется в цитоплазме клеток независимо от
включений. Персистенцию ВБ удается наблюдать при хронической инфекции в клеточных
культурах, причем по морфологии и скорости размножения клеток хронически инфициро-
ванные культуры не отличались от незараженных. Вирусный АГ передавался при делении
клеток. После того, как была показана возможность образования дефектных интерфери-
рующих частиц (ДИЧ) ВБ при первичной инфекции in vivo, ДИЧ были выделены и охарак-
теризованы при хронической инфекции ВБ клеток ВНК. Генерация ДИЧ в нейронах ЦНС
может не только определять окончательный исход инфекции, но и объяснять ее латентный
характер. В настоящее время данные о роли интерферона и ДИЧ в механизме хронической
инфекции ВБ в клеточных культурах противоречивы. Показано, что ts-мутанты, представ-
304
Глава УП. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
ляющие собой условно дефектные вирусы, могут интерферировать с размножением вируса
дикого типа. Вопрос о роли ts-мутантов при хронической инфекции ВБ изучен недостаточно.
Современные представления о мутации этого вируса подтверждаются рядом примеров. Так,
с помощью монАТ из популяции вирулентного ВБ удавалось селекционировать варианты с
измененным поверхностным гликопротеином и признаками аттенуации для ЦНС. Мутант
ВБ, имеющий 2 аминокислотные замены (лейцин-132 на фенилаланин; аргинин-333 на глю-
тамин), утратил нейровирулентность для взрослых мышей (64).
Вирулентность шт. ERA и CVS ВБ для мышей зависела от наличия аргинина или лизи-
на в положении 333 вирусного гликопротеина. Замена аргинина в положении 333 на лейцин,
изолейцин, метионин, цистин или серин полностью лишала вирулентности (65). Такие вари-
анты характеризовались минимальным количеством точечных мутаций.
Антигенная активность . Животные, иммунизированные против Б, продуцируют ВНА,
КСА, ПА, анти-ГА и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии
комплемента) АТ. Поверхностный гликопротеин G оболочки ВБ - единственный белок, от-
вечающий за индукцию ВНА и формирование протективного иммунитета, защищая лабора-
торных животных от латентной инфекции (71). В отличие от цельных вирионов субвнрус-
ный препарат не обладает Г А активностью (70). Нуклеокапсидный АГ вызывает образова-
ние КСА и ПА. Он является группоспецифическим АГ для всех лиссавирусов. Препараты
очищенного нуклеокапсида из клеток ВНК-21, зараженных шт. FLURI-HEP и ERA, индуци-
руют только КСА. Иммунные АТ сыворотки крови в присутствии комплемента лизируют
зараженные культуры клеток. Между титрами КСА и ВНА никакой корреляции не обнару-
жено. Эти АТ появляются независимо друг от друга и индуцируются, по-видимому, разны-
ми АГ. Накопление КСА характеризует ответ на вакцинацию, но этому не обязательно со-
путствует накопление ВНА.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на теплокровных всех видов,
однако в условиях лаборатории - чаще всего на мышах и сравнительно редко (требуются
особые условия) на собаках. Показана различная чувствительность мышей к эксперимен-
тальному Б в зависимости от патогенных свойств вируса, пола, возраста и способа инфици-
рования. Показано, что патогенность v. fixe Б для взрослых мышей зависит от АГ детерми-
нант поверхностных гликопротеинов вируса. Изменение патогенности коррелирует с заме-
щением аргинина в позиции 333 молекулы гликопротеина другой аминокислотой. Послед-
нее время появились сообщения о возможности выздоровления больных Б животных в есте-
ственных и экспериментальных условиях (20, 25).
Культивирование. Помимо интрацеребральных пассажей на кроликах и белых мышах
ВБ (шт. Fluri-HEP и Lep) успешно репродуцируется в кулыуре фибробластов КЭ. Установ-
лена его способность образовывать бляшки в клетках ВНК-21/13, взвешенных в агарозе. ВБ
также образует бляшки в культуре CER, отличающейся высокой чувствительностью к лнс-
савирусам. Показана высокая чувствительность к ВБ (шт. ТС-80 н CVS) и высокий уровень
накопления АГ в зараженных перевиваемых культурах - почки сайгака (ПС) и почки эм-
бриона африканской козы (ПЭАК) (2). Получен мелкобляшечный мутант ВБ, который отли-
чается способностью продуцировать дефектные неинтерферирующие частицы. Полагают,
что в основе появления их лежит дефицит белка G. Показана также возможность культиви-
рования ВБ в культурах клеток слюнной железы и почки собаки, жировой ткани летучей
мыши, почек поросенка, кролика, сирийского хомяка, эмбрионов овцы, человека и японских
перепелок. ВБ адаптирован н к перевиваемым линиям клеток (ВНК-21/13, эндотелия кроли-
ка, диплоидной линии клеток легких эмбриона человека - HDC S, известной под названием
Wi-38). Показана возможность его репродукции в перевиваемых линиях клеток пойкило-
термных позвоночных, в частности, в клетках рыбы, змеи, черепахи и ящерицы. Наиболее
перспективна перевиваемая линия клеток ВНК-21/13, использование которой позволяет на-
20 Зак. № 171
305
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовирусиые инфекции
капливать вирус в больших количествах. Не все штаммы с одинаковой легкостью поддают-
ся адаптации к культуре клеток. При адаптации ВБ к культурам клеток прибегают к различ-
ным приемам. Интенсивность размножения вируса в культуре клеток можно постоянно кон-
тролировать методом ИФ (31). К ВБ после предварительной адаптации восприимчивы и КЭ.
Для культивирования штаммов уличного ВБ обычно используют 1 дн КЭ (3).
ГА свойства. Обусловлены наличием у вируса ГА АГ, находящегося на поверхности
вириона в выступах его оболочки. Было показано, что выращенный в культуре клеток и
концентрированный ВБ вызывает феномен гемагглютинации. Между инфекционной и ГА
активностью существует линейная зависимость, поэтому титрование вируса по инфекцион-
ности может быть заменено тестом определения ГА активности.
ГАд свойства. Впервые гемадсорбирующие свойства ВБ (шт. Мочалин), выращенного
в культуре первичных клеток почки сирийского хомячка, описаны в 1967 г. Феномен вос-
производился с эритроцитами гуся, курицы, сирийского хомячка, морской свинки и обезья-
ны при температуре 4°С. Специфичность реакции была подтверждена с помощью иммунной
сыворотки; после 3-4-кратного отмывания гемадсорбция не разрушалась и не воспроизво-
дилась с другими штаммами ВБ (Внуково, Тенчу).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источник и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные. Для
штаммов ВБ, поддерживаемых в организме собак и волков, характерна высокая тропность к
ЦНС и низкая к висцеральным органам, поэтому вирус, выделяемый со слюной, может от-
сутствовать в крови, моче, молоке больного животного. Естественное распространение Б
среди собак почти полностью зависит от классической цепи передачи укус - рана. Почти все
случаи передачи Б собак и волков человеку и сельскохозяйственным животным также объ-
ясняются попаданием вируссодержащей слюны в раны, нанесенные при укусах, однако воз-
можно заражение при ослюнении пораженной кожи. Алиментарный и аэрогенный пути за-
ражения в принципе возможны, но они не играют существенной роли. Доказана возмож-
ность трансплацентарной передачи вируса в естественных условиях путем выявления вируса
в органах плода КРС. В настоящее время доказана роль летучих мышей различных видов в
распространении ВБ. Лисицы (Vulpes vulpes) являются вектором Б в Европе и Северной
Америке, обусловливая 60-85% заболевания. Необычная их роль в современной эпизоото-
логии Б объясняется непомерным увеличением популяции, чрезвычайной восприимчиво-
стью к ВБ, а также возможностью перорального заражения.
Спектр патогенности в естественных условиях. Очень широк. Эпизоотические
штаммы ВБ различают по вирулентности и другим свойствам. Описанные варианты разде-
ляют на 5 групп. К 1-ой группе относятся так называемые усиленные штаммы (или вирусы
ремфорс), характеризующиеся высокой вирулентностью, коротким инкубационным перио-
дом болезни (1-2 дня) и постоянным образованием телец Бабеша - Негри. Во 2-ю группу
входят следующие варианты: а) вирус, выделенный от собак (Улу-Фато). Подобные ему
штаммы встречаются в различных районах Африки. Характерный признак - внезапное из-
менение поведения и развитие параличей; б) вирус, выделенный от больного КРС в Кадей-
росе. Клинически болезнь напоминала чуму, но затем развились параличи. Установлено,
что этот вирус передается летучими мышами; в) вирус, выделенный от погибших людей во
время эпидемии Б на острове Троица в 1929 г. Одновременно болели и КРС, лошади, мулы,
ослы. Возбудитель передавался через укусы летучих мышей-вампиров. К 3-й группе отнесе-
ны штаммы, выделенные от песцов и собак при заболевании, именуемом днкованием,
встречающемся в северных районах России и Канады. Симптомы дикования несколько от-
личаются от течения истинного Б. Почти никогда не болеет человек. В 4-ю группу включен
вирус, выделенный в США в 1940 г. Личем и Джонсоном из мозга умершей девочки по
имени Флури (шт. Флури, неадаптированный). Вирус вызывает у собак, кошек, морских
306
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
®инок, мышей болезнь, проявляющуюся параличами. Болезнь очень сходна с заболевани-
ем, вызываемым фиксированным вирусом. Кролики малочувствительны. В мозге больных
Животных данный штамм не индуцирует образования телец Бабеша - Негри. В 5-ю группу
объединены вирусы, выделенные от людей. Сюда отнесен вирус, изолированный в 1929 г.
Корчнером, вирус Кобояси и герпесподобный вирус ДК. От диких грызунов выделено много
волевых штаммов, подобных ВБ и родственных с ним в АГ-отношении. В 1967 г. в Сури-
наме (Южная Америка) из мозга павших телят, зараженных в естественных условиях, изо-
лированы 2 полевых штамма Б (Д-292 и Д-298), подобных штамму-фикс Пастера.
Следует отметить, что если Б - в основном летальная инфекция, то при инфицировании
вирусами Мокола, Лагос Бат, Ободьянг и Котонкан случаи гибели при экспериментальном
заражении относительно редки. Вирусы Котонкан и Ободьянг патогенны только при интра-
церебральном заражении мышей-сосунов и патогенны для собак и обезьян при заражении в
мозг или внутримышечно. Вирусы Лагос Бат и Мокола апатогенны для мышей при экстра-
невральном заражении и не вызывают образования телец Бабеша - Негри. Вирус острого
энцефалита человека формировал включения в нейронах мозга животных и эктодермальных
клетках ХАО зараженных КЭ, но они отличались по структуре от телец Бабеша - Негри:
имели отчетливую 1-слойную оболочку, представляли собой РНК-содержащие плотные об-
разования размером 2-4 мкм и выявлялись как в цитоплазме, так и в ядре клеток. Одно-
значных представлений о рецепторах, обусловливающих проникновение ВБ в ЦНС, не су-
ществует. Предполагается роль ацетилхолиновых рецепторов, холинэргических рецепторов
мускаринового типа, а также проникновение через тройничные и другие нити. Авирулент-
ные варианты теряют способность проникать в парасимпатические нервные нити, но сохра-
няют способность к пенетрации в волокна тройничного нерва.
Спектр патогенности ВБ тесно связан с его экологией, которая имеет свои особенности.
Так, имеются 2 формы эпизоотиии Б: городская и лесная. При 2-й форме возбудитель цир-
кулирует среди диких плотоядных по типу природно-очаговой инфекции. С 60-х гг. Б диких
плотоядных снова стало преобладающим. Основным резервуаром и источником инфекции
оказались рыжие лисицы, тогда как остальные дикие животные играют второстепенную
роль. Чрезмерному увеличению численности лисиц способствовало истребление их естест-
венных врагов - волков, рысей, медведей, орлов и других хищников. Установлено, что сред-
няя плотность популяции лисиц 5 голов и более на 250 га обеспечивает высокий уровень
поддержания и распространения эпизоотии. Б среди лисиц появляется прежде всего на тер-
риториях с массовым распространением грызунов - основного источника корма для них.
КРС заражается исключительно на пастбищах, входящих в ареалы зараженных лисиц.
При лесном Б большое количество лисиц (40-80%) переживает инфекцию за счет
“нелетального” Б. Болезнь у них часто протекает хронически и латентно, обеспечивая пер-
систенцию вируса в естественных условиях. Наоборот, Б собак в городских эпизоотиях, как
правило, заканчивается их гибелью, поэтому механизм поддержания вируса иной, он сво-
дится к коротким циклам репродукции в организме и быстрой передаче восприимчивому
организму.
Экология, география и эпизоотология. Хотя эпизоотии Б поддерживаются в настоя-
щий период, главным образом, дикими животными, человеку угрожают прежде всего соба-
ки и кошки. Численность домашних и диких млекопитающих - потенциальных резервуаров
и переносчиков Б не поддается в большинстве стран полному учету.
Возбудителя Б многократно продолжают выделять от грызунов - белок, сурков, крыс,
зайцев, ондатр, хомяков, мышей. Известны также ограниченные эпизоотии Б, в которых
грызуны доминировали. Однако роль этих животных в экологии Б окончательно не установ-
лена, а исследования по некоторым регионам указывают на неучастие грызунов в циркуля-
ции вируса. В Америке природные очаги Б продолжают поддерживаться двумя группами
летучих мышей (кровососущими и насекомоядными) и плотоядными (12).
20*
307
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
В Европе в период 1970-1980 гг. не оправдались прогнозы, высказанные на VIII кон-
грессе сравнительной патологии в г. Бейруте в 1966 г. относительно того, что Б на этом кон-
тиненте является уходящей болезнью. Б в Европе продолжает распространяться с большой
интенсивностью. За исключением Великобритании, Норвегии и Швеции случаи Б продол-
жают регистрироваться во всех странах континента (46). Польша относится к числу стран
Европы, где Б регистрируется в дикой фауне и среди домашних животных (62). В Италии Б
было широко распространено в первой половине нашего столетия (главным образом среди
собак и кошек). Случаи Б диких животных (лисиц) отмечали в 1961-1963 гг. в провинции
Мессина и в 1968-1969 гг. в провинции Палермо. В феврале 1977 г. Б вновь возникло среди
диких животных в провинции Больцано, куда оно проникло из Австрии через перевал
Криммель. В этом районе за небольшой период было установлено 78 случаев Б диких жи-
вотных, в основном лисиц. Появлению Б в Дании предшествовало резкое нарастание на-
пряженности ситуации в ФРГ (Шлезвиг-Гольштейн). В XIX в на северо-востоке Швейцарии
Б распространялось крысами. В 1967-1968 гг. распространение Б почти точно повторило
географию этой болезни 1803-1834 гг., что свидетельствует об известном постоянстве рас-
пространения болезни в стране. Весной 1967 г. первый случай Б был зарегистрирован в кан-
тоне Шиафуза на границе с ФРГ. Затем очаги болезни возникли в кантоне Цюрих. Фронт
эпизоотии распространялся со скоростью 25-35 км в год. С 1974 г. Б снова начало продви-
гаться в глубь страны (66).
В Белоруссии установлена положительная связь между размещением лесных площадей
и вспышками Б (1). На Северном Кавказе в условиях горно-лесистой местности Кабардино-
Балкарии имеются природные очаги Б, в которых основным резервуаром являются лисицы,
в степной зоне, где численность лисиц значительно меньше, реже регистрируется и инфек-
ция. Периодичность эпизоотии - характерная особенность Б (46). Сезонные подъемы забо-
леваемости Б среди животных тесно связаны с географией региона и биологическими цик-
лами активности животных (51).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патоло-
гоанатомических изменений (они имеют меньшее значение) и, главным образом, результа-
тов лабораторных исследований. Лабораторная диагностика заключается в исследовании
головного мозга животных с целью выявления вирусного АГ в ИФ, РДП, обнаружении те-
лец Бабеша - Негри и биопробе на белых мышах.
В Российской Федерации в настоящее время организовано производство наборов для
диагностики Б в ИФ и РДП в ВНИТИБП (73) и КазНИВИ (74).
Выделение вируса. В лабораторию для исследования направляют свежие трупы мел-
ких животных, от крупных животных - голову или головной мозг. В некоторых случаях до-
пускается консервирование головного мозга в 50%-ном глицерине. Труп или голова должны
быть тщательно упакованы в полиэтиленовый мешок, мозг - в банку с притертой стеклянной
или резиновой пробкой, залитой парафином. Материал упаковывается во влагонепроницае-
мую тару. Для вирусологических исследований пригоден только не консервированный мозг.
Необходимо помнить, что вскрытие трупа, извлечение мозга и другие операции с патологи-
ческим материалом следует проводить в условиях стерильности и строгого соблюдения мер
личной профилактики: прочно фиксируют голову животного, защищают руки 2-мя парами
перчаток (хирургические и анатомические), для защиты глаз надевают очки, а на нос и рот -
6-слойную марлевую повязку.
Лабораторные исследования материала на Б проводят вне всякой очереди; результаты
немедленно сообщают врачу хозяйства и главному врачу района (города).
Индикация и идентификация вируса. Порядок проведения исследований: из каждого
отдела головного мозга левой и правой сторон (аммонова рога, мозжечка, коры полушарий
308
Глава VU. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
и продолговатого) готовят по 4 мазка-отпечатки для ИФ и обнаружения телец Бабеша - Нег-
ри; с мозговой тканью ставят РДП; при отрицательных результатах ставят биопробу.
Обнаружение специфических телец-включений. Мазки-отпечатки окрашивают по
Селлерсу, Муромцеву или другими методами. После окрашивания препараты просматрива-
ют в световом микроскопе с иммерсионной системой. Положительным результатом считают
наличие специфических телец Бабеша - Негри (при окраске по Селлерсу - четко очерченные
овальные или продолговатые гранулярные образования розово-красного цвета в протоплаз-
ме, при окраске по Муромцеву - светло-фиолетовые с темно-синими включениями тельца
Бабеша - Негри, чаще они расположены вне нервных клеток.
Наиболее характерная особенность телец Бабеша - Негри - их внутренняя структура, по-
зволяющая абсолютно точно дифференцировать их. Внутри видны маленькие зернышки -
базофильные зернистости темно-голубого, даже черного цвета величиной 0,2-0,5 мкм.
Диагностическая ценность обнаружения телец-включений для доказательства заражения
ВБ общепризнана. Однако и у здоровых животных, в особенности у кошек и белых мышей,
имеются образования, присутствие которых может вызвать диагностические затруднения. В
отдельных случаях в мозге кошки можно с уверенностью дифференцировать подобные
включения от телец Бабеша - Негри, и здесь рекомендуется воспользоваться методами иден-
тификации, в особенности ИФ. Равным образом и у собак, погибших в результате отравле-
ния змеиным ядом или поражения электрическим током, можно найти тельца-включения,
напоминающие тельца Бабеша - Негри. Тельца Бабеша - Негри выявляют лишь в 65-85%
случаев Б, поэтому отсутствие их не является отрицательным ответом, и материал исследу-
ется в других тестах (ИФ, РДП, биопроба) (27, 53).
ИФ. Одни из основных тестов при диагностике Б. При высококвалифицированном вы-
полнении получают в 99-100% совпадения с методом биопробы. Обычно в диагностической
практике используют прямой метод ИФ, который проводят с применением антирабического
флюоресцирующего 1g. Фиксацию препаратов в охлажденном (8-10°С) ацетоне проводят не
менее 4-х ч. В качестве отрицательного контроля используют мазки-отпечатки головного
мозга здоровых белых мышей. Учитывают результаты визуально в люминесцентном микро-
скопе иа основе оценки интенсивности свечения комплекса АГ-АТ. АГ ВБ выявляется в ви-
де ярких желто-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках (чаще
вне клеток). Диагноз считают установленным, если в нескольких полях зрения обнаружи-
вают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленым свечением
или множество мельчайших точек. В контроле подобного свечения не должно быть.
Для доказательства специфичности свечения комплекса АГ-АТ используют метод по-
давления ИФ, который заключается в способности рабического АГ, связанного с нефлюо-
ресцирующими АТ, вторично не вступать в соединение с флюоресцирующими специфиче-
скими АТ. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого голов-
ного мозга, наносят 5%-ный антирабический нефлюоресцирующий 1g, выдерживают 30 мин
при 37°С во влажной камере, промывают физраствором, а затем окрашивают флюоресци-
рующим антирабическим 1g общепринятым прямым методом. В обработанных таким обра-
зом препаратах флюоресценции не должно быть.
Метод ИФ дает возможность обнаруживать ВБ в клетках роговицы глаз и предвари-
тельно поставить диагноз прижизненно: во время болезни животных, а также за 1-2 дня и
более до клинического её проявления. Метод может быть использован для исследования по-
дозреваемых в заболевании Б животных, а также клинически здоровых собак и кошек, по-
кусавших людей и животных. Для этого готовят отпечатки с роговицы, соблюдая все прави-
ла личной безопасности, раскрывают глазную щель животного большим и указательным
пальцами и на слегка выпяченное глазное яблоко надавливают поверхностью предметного
стекла, отступив 0,5 см от конца. Нужно следить, чтобы животное не моргало третьим ве-
ком, так как со стекла удаляются эпителиальные клетки и получается некачественный ма-
309
Глава VOL Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
зок. С каждого глаза делают не менее 2 препаратов, содержащих по 2 отпечатка. Для кон-
троля аналогичным образом готовят отпечатки роговицы от здоровых животных. Их можно
приготовить в хозяйстве. Отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в тече-
ние 4 ч при 4°С, упаковывают и отправляют в лабораторию. Окрашивают препараты, как
при ИФ, по общепринятой методике.
В препаратах, полученных от больных животных или находящихся в конце инкубаци-
онного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдаются разной
формы ярко светящиеся гранулы разного размера - от пылевидных точек до 2 мкм и более.
С целью получения достоверных результатов в каждом препарате просматривают по 50-100
клеток, а всего от животного - не менее 200-400 клеток. Результаты микроскопии считают
положительными, если в отпечатках роговицы животного обнаруживают 11% и более кле-
ток с характерными очажками свечения. Необходимо иметь в виду, что в препаратах от здо-
ровых животных (контроль), вследствие аутофлюоресценции, могут встречаться единичные
клетки с подобными по форме и свечению очажками.
Важно отметить, что ИФ дает возможность ускорить ответ при окончательной постанов-
ке диагноза путем биопробы, поскольку диагноз при Б может быть установлен только на 4-
8-й день после заражения мышей исследуемым материалом, а инкубационный период забо-
левания мышей может достигать и 20 дн. ИФ может выявлять ВБ в тканях подчелюстной
слюнной железы. Из подчелюстных слюнных желез готовят препараты-мазки, беря матери-
ал не менее чем из 6 разных участков железы, так как распределение в ней вируса нерав-
номерно. Часто, чтобы получить отпечаток, приходится делать сильный нажим, поскольку
из-за обилия муцина на стекле остается мало материала.
Показана возможность идентификации ВБ в коже методом ИФ. С этой целью берут
пробы кожи головы, а также фолликулы сенсорных и тактильных волос морды или лате-
ральных сенсорных сосочков (на щеке собаки). Пробы хранят при -20 или -70°С. Из них де-
лают криосрезы, которые обрабатывают флюоресцирующим глобулином. Результаты ИФ
анализа, полученные при идентификации ВБ в коже, в высокой степени коррелируют с дан-
ными, полученными при исследовании мозга того же животного. Показана близкая корре-
ляция между обнаружением АГ вируса в пробах мозга и тканях губы методом ИФ (13, 14,
23,24,32).
РДП. Применяют для обнаружения АГ ВБ в неконсервированном головном мозге жи-
вотных, павших от уличного Б, или мышат, используемых в биопробе. РДП ставят микро-
методом на предметных стеклах, используя 1-1,5%-ный агаровый гель по общепринятой ме-
тодике. Наибольший процент положительных результатов выявляют при использовании
следующего трафарета: А - аммонов рог (правая сторона); В - кора головного мозга (правая
сторона); С - мозжечок (правая сторона); Д - продолговатый мозг (правая сторона); +(плюс)
- положительный контроль; -(минус) - отрицательный контроль; 1, 2, 3, 4 - лунки с разведе-
нием специфического иммуноглобулина 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 соответственно
Из каждого отдела головного мозга с помощью пинцета готовят гомогенную пастооб-
разную массу, которую и помещают в соответствующие лунки. От мышей исследуют весь
головной мозг. Из отделов головного мозга левой стороны готовят АГ аналогичным образом
( на каждую экспертизу в общей сложности требуется 4 предметных стекла с агаровым ге-
лем). Реакцию учитывают через 6, 24, 48 ч. При наличии 1 или 2-3 линий преципитации
между лункамн, содержащими АГ и иммуноглобулин, реакцию считают положительной.
РДП проста по выполнению и специфична, но процент выявления вирусного АГ в ис-
следуемом материале составляет 45-70. При исследовании головного мозга мышей, полу-
ченного при положительной биопробе, РДП выявляет до 100% случаев. Отсутствие в иссле-
дуемом материале телец Бабеша - Негри, специфической флюоресценции и отрицательная
РДП не дают основания исключить наличие вируса. В этом случае окончательный диагноз
ставят по результатам биопробы на белых мышах с последующей идентификацией вируса.
310
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
Биопроба. Принято считать, что биопроба является более эффективным методом, чем
обнаружение телец Бабеша - Негри, ИФ и др. Однако и она в отдельных случаях оказыва-
лась отрицательной, несмотря на подтверждение диагноза Б путем обнаружения телец-
включений и ИФ. Процент отрицательных результатов по биопробе колебался от 1,3 до 12.
Сведения о различной эффективности биопробы могут быть объяснены рядом факторов:
выбора экспериментального животного, количества их в опыте, способа заражения, способа
и срока хранения материала до поступления в лабораторию. Может играть роль и явление
интерференции инфекционных частиц неактивными частицами, если для инокуляции ис-
пользуют недостаточно разведенный материал.
В мозге и слюнных железах лисиц и скунсов, павших от Б, обнаружено вещество, инги-
бирующее инфекционность вируса, что не позволяет провести диагностику болезни у этих
животных методом внутримозгового заражения мышей. Наличие ингибирующего вещества
в исследуемом материале не препятствует выявлению вирусного АГ методом ИФ; для скун-
сов и лисиц это самый чувствительный метод диагностики.
Из животных всех видов (кролики, морские свинки, взрослые белые мыши и хомячки),
использованных для биопробы, многие отдают предпочтение мышам-сосунам, поскольку
они более чувствительны к разным штаммам ВБ и менее опасны в работе. Сирийские хо-
мячки по чувствительности не уступают мышам, но они менее доступны.
РСК. Выявление специфического АГ в РСК при диагностике Б применяется реже, чем
другие методы. Из присланного для исследования мозга готовят АГ. Для этого мозговую
ткань (особенно богаты АГ, связывающим комплемент, кусочки таламуса и стволового от-
дела мозга) растирают в вероналовом буфере в соотношении 1:10 и оставляют при комнат-
ной температуре на 1 ч, после чего суспензию инактивируют при 56°С в течение 5 ч. Такая
обработка убивает вирус и снимает антикомплементарность мозговой ткани, не повреждая
специфический АГ. Суспензию центрифугируют 15 мин при 3500 мин’1; из надосадочной
жидкости, которая представляет собой материал для исследования на наличие АГ, готовят
2-кратно возрастающие разведения от 1:2 до 1:64 и используют для исследования в РСК.
ИФА. В ИФА специфическое окрашивание АГ в клетках мозга павших от Б животных
выявляют как в свежевзятых, хранившихся в глицерине, а также в пробах, хранившихся без
глицерина при 20°С 8-18 ч. Данный тест пригоден для рутинной диагностики Б у животных,
для выявления АГ ВБ в тканевых парафиновых срезах при фиксации препаратов 10%-ным
р-ром формалина с pH 5,3 и последующей обработки препаратов, заключенных в парафин,
пепсином (18,26, 59).
В отличие от PH на мышах и в культуре клеток ИФА позволяет выявить АТ у животных
в течение нескольких часов, ИФА - наиболее перспективный лабораторный метод обнару-
жения АТ и индикации самого вируса (72). Экспресс-методом диагностики Б является тех-
ника захвата и метод ИФ для выявления АГ ВБ. Доказано, что метод выявления АГ ВБ в
парафинизированных срезах пероксндазо-антиперокисдазным методом значительно пре-
восходит метод ИФ (26). В 1987 г. создан набор для быстрой энзим-иммунодиагностики Б
(RREID), приемлемый для эпидемиологических и лабораторных исследований.
PH. Используется редко. Рекомендуется модификацйя с разведением ВБ и постоянной
дозы у-глобулина. ИН 2 указывает на АГ специфичность выделенного вируса.
Вариантная идентификация с помощью монАТ. С помощью монАТ к гликопротеи-
нам ВБ селектированы АГ варианты, среди которых выделены фенотипически термола-
бильные (авирулентные) варианты. При использовании 2-х групп монАТ показано, что
штаммы дикования отличаются от шт. Fixe (Пастера), CVS, Flury HEP, ERA и “утиных”
штаммов по АГ детерминантам. Изучение с помощью монАТ 7-ми штаммов, выделенных
от больных Б людей, позволило выявить определенные отличия их от вакцинного штамма в
отношении АГ детерминант.
311
Глава VU. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
Общепризнано, что АГ отличия между дикими штаммами удается обнаружить, исполь-
зуя монАТ против нуклеокапсидного АГ N, которые реагируют с цитоплазматическими
включениями зараженных вирусом клеток; против гликопротеина (G АГ), которые реаги-
руют с мембранами инфицированных клеток, лизируют эти клетки в присутствии компле-
мента и нейтрализуют вирус. В связи с возможной АГ вариабельностью поверхностного
гликопротеина ВБ из различных географических зон в качестве протективного АГ исполь-
зовали рибонуклеопротеин, характеризующийся консервативностью АГ структуры. Таким
образом, не только G белок, но и РНП ВБ обладают протективной активностью.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Эти методы для Б нетипичны, поскольку используются только с целью проверки по-
ствакцинального иммунитета. Для обнаружения и титрования поствакцинальных АТ ис-
пользуют PH, которую ставят общепринятым методом. В качестве АГ используют фиксиро-
ванный ВБ. PH на клетках ВНК-21 была более чувствительной, чем непрямая ИФ при выяв-
лении АТ в сыворотках вакцинированных лис. Кроме того, предложены РТГА и ELISA.
РТГА. Пока еще не нашла широкого применения в диагностической практике из-за на-
личия в сыворотках крови неспецифических ингибиторов, к которым ВБ высокочувствите-
лен, а главное, ГА АГ, не подвергавшиеся достаточной очистке, обладали низкой чувстви-
тельностью. Для приготовления ГА АГ ВБ предложено использовать шт. Москва, выращен-
ный в культуре клеток ВНК-21, после его обработки сапонином с последующей очисткой и
концентрированием. ГА отделяют от других компонентов вириона ультрацентрифугирова-
нием. Полученный препарат имел степень очистки 99,92%, обладал высокой ГА активно-
стью (1:128), хорошо сохраняющейся в течение 1 мес при pH 5-9.
Перед постановкой РТГА следует проводить умеренную 2-кратную трипсинизацию гу-
синых эритроцитов для их сенсибилизации. При использовании 0,25%-ной взвеси трипси-
низированных эритроцитов (лучше 107 клеток в 1 мл) чувствительность РТГА повышается в
4 раза. Для разбавления АГ и сывороток применяют боратно-солевой р-р (pH 9) с добавле-
нием 0,4% бычьего сывороточного альбумина. Взвесь эритроцитов готовят в солевом р-ре с
кислым pH, чтобы после соединения со смесью вируса и сывороток, pH которой 9, оконча-
тельный pH установился бы в пределах 6,2. После внесения в лунки суспензии эритроцитов
панель встряхивают, заклеивают прозрачной пленкой и ставят на лед. Результаты РТГА
учитывают через 40-50 мин, а с эритроцитами 2-дн цыплят или макаки-резус - через 1-1,5 ч.
Разработан радиоиммунологический анализ, основанный на способности АТ связы-
ваться с меченым 125'1-АГ ВБ. Меченый IgG, выделенный из антирабической гипериммун-
ной сыворотки, можно применять для обнаружения АГ ВБ твердофазным РИА. Лучшие ре-
зультаты получены при использовании фосфатно-солевого р-ра (pH 6,0) с ионной силой 0,01
М и меченого IgG с активностью 200-250 тыс. имп./мин.
Твердофазный конкурентный РИА применим для выявления антирабических АТ в сы-
воротке и гибридомных супернатантах (75).
Дифференциальная диагностика. Необходимо исключить болезнь Ауески, при кото-
рой больные животные неагрессивны, не бывает извращения аппетита. У собак исключают
нервную форму чумы. Подозрение на Б может возникнуть при инфекционном энцефаломие-
лите лошадей. Комплекс лабораторных исследований позволяет поставить точный диагноз
на Б. Предложен новый метод дифференциации различных штаммов ВБ, основанный на ре-
стриктазном расщеплении продуктов амплификации в ПЦР сегмента гена N.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
В настоящее время для специфической профилактики Б применяют инактивированные и
живые вакцины. В медицине используются только инактивированные, слабо аллергенные и
безаллергенные вакцины. Они, в основном, различаются по способу размножения вируса,
концентрации и степени очистки вирусного АГ. В качестве адъюванта используют соли
312
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
алюминия. Антирабические вакцины, полученные из нервной ткани, уступают в отношении
чистоты, активности и безопасности препаратам, приготовленным на клеточных культурах.
В странах СНГ для профилактики Б у людей изготавливают культуральную антирабиче-
скую вакцину из шт. Внуково-32. Однако до сих пор неясно, в каком отношении находится
АГ-структура гликопротеидного и нуклеокапсидного белков указанного вакционного штам-
ма со штаммами ВБ, циркулирующими в СНГ и других регионах мира. Эта задача может
быть решена с помощью монАТ к различным эпитопам структурных белков вируса (5).
Для изготовления инактивированных вакцин вирус выращивают в культурах клеток жи-
вотных разных видов. Использовали первичные культуры клеток, диплоидные клетки чело-
века, постоянные линии клеток ВНК-21 и Vero. Последние дают более высокий выход АГ,
чем диплоидные культуры клеток человека и животных. Клетки Vero можно выращивать на
микроносителях, получая клеточные популяции высокой плотности. Культивирование этих
клеток в ферментерах большой емкости обеспечивает возможность крупномасштабного
промышленного производства вакцин, что снижает её стоимость.
Характеристика антирабических вакцин. Со времени изготовления Пастером в 1885
г. первой вакцины против Б историю антирабических вакцин условно можно разделить на 3
периода. Первый - до 1948 г., когда вакцины готовили из мозга взрослых животных
(кролики, овцы, козы), инфицированных фиксированным ВБ. Это вакцины типов Ферми
(1908), Семпл (1911), Умедо, Дои (1916), в которых ВБ частично инактивирован фенолом, и
вакцины типов Хемпт (1925) и Келсер (1925), инактивированные эфиром + фенол и эфиром
+ хлороформ соответственно; второй период - с 1949 г. по 1955 г., когда готовили живые ат-
тенуированные вакцины (после того, как шт. Флюри ВБ был адаптирован Копровским и
Коксом к КЭ); третий период - с 1956 г. живые или инактивированные вакцины готовят из
штаммов ВБ, адаптированных к культуре клеток (9).
Антирабическая вакцина должна быть безопасна и высокоэффективна для животных,
т.е. неэнцефалогенна, содержать минимальное количество балластных белков, индуциро-
вать в короткий срок напряженный и длительный иммунитет при малых дозировках и огра-
ниченном количестве инъекций, обладать защитной способностью при введении животным,
уже инфицированным ВБ, быть простой в изготовлении н стабильной при длительном хра-
нении, а также быть пригодной к применению в составе ассоциированных вакцин. Хотя в
настоящее время нет антирабической вакцины с такими качествами, достижения современ-
ной техники и вирусологии делают её получение вполне реальным. Требования безвредно-
сти и иммунологический эффективности должны соблюдаться при конструировании любой
антирабической вакцины.
Для профилактической вакцинации животных мозговые вакцины типа Ферми, Семпла,
Хемпта недостаточно эффективны. Поэтому в настоящее время используют живые аттенуи-
рованные или инактивированные культуральные антирабические вакцины и реже - вакцины
из мозга мышей-сосунов. По данным Fields (76), частично очищенная методом хроматогра-
фии и инактивированная вакцина из мозга мышей-сосунов (индекс иммуногенности по ме-
тоду NIH 3,15) защищала собак от летальной дозы уличного ВБ (шт. NJc-GA) через 37 мес
после иммунизации. Средний титр ВНА в крови привитых собак через 1, 11, 24, 36 мес со-
ставил соответственно 1:512, 1:146, 1:19, 1:6. Через 30 дн после контрольного заражения
уличным вирусом тнтр АТ повышался до 1:217. К моменту заражения уличным вирусом
титр ВНА в крови собак был минимальным или не обнаруживался совсем. Однако все соба-
ки выдерживали летальную дозу вирулентного вируса. Определяющим фактором эффектив-
ности антирабической вакцины является ее способность стимулировать высокий уровень
ВНА в течение начального периода после иммунизации животного.
В опытах успешно применена живая антирабическая вакцина из шт. Внуково-32 (12).
Более высокая иммунологическая эффективность отмечается прн введении вакцины живот-
313
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
ним внутримышечно по сравнению с подкожной инокуляцией. Выраженными иммуноген-
ными свойствами обладает живая вакцина из аттенуированного шт. ERA. Она индуцирует
образование ВНА в организме собак, кошек, овец, свиней, лошадей, КРС, высокий уровень
которых удерживается в течение 2 лет и более.
Сравнительное изучение эффективности вакцины из шт. ERA и Flury HEP показало, что
1-кратная вакцинация КРС вакциной из шт. ERA более эффективна, чем 2-кратное введение
вакцины из шт. Flury HEP. Будучи наиболее иммуногенной по сравнению с рядом вакцин,
живая вакцина из шт. ERA равна по иммуногенности или уступает инактивированной р-
пропиолактоном культуральной вакцине “алурабиффа”, которая приготовлена из фиксиро-
ванного вируса, выращенного в культуре клеток линии NIL. В опыте на КРС сравнивали
иммуногенность мозговой вакцины с ГОА, инактивированной формальдегидом, культу-
ральной живой вакцины из шт. ERA и культуральной вакцины “алурабиффа”, которая за-
щищала 76,9% зараженных животных. Живая вакцина из шт. ERA защищала 71,4%, а моз-
говая - 50% зараженных животных. Количество погибшего в результате заражения скота
соответствовало уровню ВНА в крови животных до заражения. Из 19 гол., имевших титр
АТ 1:10 и выше, погибло 3, а из 20 гол. с титром АТ ниже 1:10 - 50%. Однако исследовате-
ли считают, что один уровень ВНА не может быть критерием иммунитета против Б у КРС.
В последнее время опубликовано значительное число сообщений о пероральной имму-
низации лисиц против Б. Поскольку лисицы - общепризнанный источник распространения
Б, идея их иммунизации заманчива. Экспериментальные данные, полученные в опытах по
оральной иммунизации лисиц и других животных, подтверждают перспективность этой
идеи (34, 52). Однако на пути к осуществлению на практике оральной иммунизации диких
плотоядных стоит целый ряд трудностей биологического, технологического и практического
характера. К факторам биологического характера относится, прежде всего, возможная ре-
версия аттенуированных штаммов ВБ при естественном пути его введения (оральный путь -
один из естественных путей введения вируса). Этот вопрос требует специальных глубоких
исследований. Трудности технологического характера складываются из решения вопросов
формы препарата (высокая стабильность действующего начала вакцины в препарате и его
“привлекательность” для лисиц). И, наконец, трудности чисто практического характера, ко-
торые касаются вопроса применения вакцины. Для успешной оральной иммунизации лисиц
и других животных - переносчиков Б необходима точная информация о местах их обитания
и векторах миграции. Кроме того, необходим точный расчет возможностей поедания при-
манок с вакциной птицами и животными других видов. Преодолеть эти трудности невоз-
можно в настоящее время в большинстве стран, неблагополучных по Б, в т.ч. и в СНГ.
Применение живых вакцин. Живые вакцины готовят из 4-х аттенуированных шт..
CVS, Flury, ERA и HBR, которые размножают в культуре клеток (21, 47). Чаще всего ис-
пользуют культуру клеток ВНК-21, в которой вакцинные вирусы накапливаются в титре 6,5-
7,0 1g ТЦД50/МЛ (20, 30). Два штамма фиксированного ВБ были так же адаптированы к
культурам клеток Vero и ВНК-21 (20,29,30).
Испытание живых оральных и энтеральных антирабических вакцин показало высокую
эффективность и безопасность ряда аттенуированных штаммов. Даже после 20 интрацереб-
ральных пассажей на собаках риверсий вирулентных свойств не отмечено (6). Безвредность
шт. в Flury-Нер/ ВНК-21 подтверждена в опытах на 207 диких животных 15 видов, обитаю-
щих в Европе. Живая вакцина из шт. SAD/BHK-21 (7,3 ^ТЦД^о/мл) оказалась безвредной
при введении собакам, кошкам и лисицам.
Живой вакциной ERA прививали КРС в Южной Америке (6) при парентеральном и
оральном применении. Она оказалась незаменимой для иммунизации диких животных
(особенно лисиц) в естественных условиях. В 1978 г. в Швейцарии, в 1979 г. в ФРГ, затем
еще в 19 странах и различных регионах страны на площади 2277км2 было распределено бо-
314
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
лее 82000 приманок (куриных голов), содержащих живой вакцинный вирус. Поствакци-
нальные АТ выявили примерно у 50% лисиц. В ряде районов распространение Б было при-
остановлено, а в некоторых заболевание вообще исчезло; не отмечено ни одного случая Б
среди диких и домашних животных, который можно было бы отнести за счет применения
вакцины (4). Аналогичные данные получены при оральной иммунизации лисиц в Германии.
Установлено, что 78% лисиц поедали приманки с вакциной (25 приманок на 1 км2). У 63%
лисиц в крови были обнаружены ВНА к ВБ. В результате наблюдали снижение случаев Б
или даже его ликвидацию на обширных территориях . Приманка должна содержать не ме-
нее 7 1g вакцинного вируса (68). Повторная вакцинация во всех неблагополучных областях
страны дает возможность ликвидировать Б в зараженных районах (45).
Для пероральной иммунизации лисиц использовали рекомбинантный вирус вакцины
(WTGgR АВ), несущий в своей оболочке иммуногенный гликопротеин G ВБ. В качестве
приманки использовали куриные головы, внутрь которых помещали капсулы, содержащие 8
1g БОЕ рекомбинантного вируса. Иммунизация лисиц таким способом сопровождалась об-
разованием высокого титра ВНА и обеспечивала их устойчивость к контрольному зараже-
нию в течение 18 мес (22, 58).
Установлена полная безвредность и эффективность оральной вакцинации лисиц живой
вакциной из шт. SAD В-19, адаптированного к культуре клеток ВНК-21 (28). В течение
1986-1987 гг. в 7 областях Австрии проводилась пероральная вакцинация лисиц путем раз-
брасывания приманок с ВБ. В этих областях Б было ликвидировано, в остальных заболе-
ваемость лисиц значительно снизилась (48).
С помощью монАТ на вакцинный шт. SAD(BepH) ВБ выделен мутант SAG1, в котором
серин в позиции 333 заменен аргинином. Мутант оказался авирулентным для взрослых
мышей, не вызывал заболевание лисиц, других плотоядных животных и диких грызунов
(при введении per os и под слизистую оболочку в дозе 106 БОЕ он не вызывал гибель живот-
ных - выжило 100% лисиц). Не обнаружена его реверсия после трех внутримозговых пасса-
жей на новорожденных мышах. Получен также двойной мутант SAG2 с двумя мутациями в
кодоне АргЗЗЗ. Штамм широко применяют для пероральной полевой вакцинации лисиц.
Вакцинацией уже охвачены Швейцария, Франция, Германия, Бельгия, Канада (37).
Проводились исследования по влиянию оральной иммунизации против Б на динамику
популяции лисиц (ФРГ). В связи с введением оральной иммунизации лисиц во многих ре-
гионах Германии значительно уменьшилось распространение Б. На регулирование популя-
ции лисиц влияют не только борьба с Б, но и многие другие факторы, в частности, условия
места обитания, кормовые ресурсы, степень воспроизводства, сезоны года, смертность от
естественных врагов и болезней, охотничье-промысловое использование и др. При опреде-
лении плотности популяции обращается внимание на точность применения методов. Рас-
сматриваются преимущества и недостатки методов составления кадастра численности лисиц
и анализа статистических данных охотничьего промысла. На основании исследований по-
следних лет со всей настойчивостью делается вывод о необходимости продолжения ораль-
ной иммунизации лисиц. Б как зооноз представляет большой риск для здоровья людей и не
может быть регулятором популяции лисиц. Предстоит срочное проведение биолого-охото-
ведческих исследований и выдвижение новых концепций регулирования численность лисиц
(54). В Бельгии в 1994 г. проведены две компании по вакцинации лисиц в ограниченном ре-
гионе. Обе они оказались неспособными остановить распространение инфекции из первич-
ных очагов. Полагают, что высокая плотность лисиц приводит к слишком медленному по-
еданию приманок (88). В Чешской Республике после иммунизации антирабической вакци-
ной Lysvulpen из шт. SAD Bern ВНА появлялись у 90% лисиц и выявлялись в течение года.
Через год выжившим лисицам был введен в жевательные мышцы уличный ВБ в виде взвеси
тканей слюнной железы естественно инфицированной лисицы. При этом погибла только 1
315
Глава VU. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
лисица из 9 зараженных, у которой не было АТ, т.е. защита составляла 89%. Пероральная
вакцинация лисиц вакциной фирмы “Bioveta” проводится с 1992 г. В 1989 г. заболела 1501
лисица, в 1994 г. - 221 лисица (87).
Применение инактивированных вакцин. К инактивированным вакцинам интерес ие
угас. В РФ разработана инактивированная концентрированная антирабическая вакцина из
шт.Щелково-51 (7, 8, 9), репродуцированного культуре клеток ВНК-21, обладающая высо-
кой иммунизирующей активностью. Помимо нее (77) на основе культурального шт. КП-85,
фиксированного ВБ, адаптированного к культуре клеток эмбрионов японских перепелов
(ЭЯП) с применением отечественных и зарубежных питательных сред, была получена куль-
туральная инактивированная концентрированная вакцина. По данным авторов, шт. КП-85
отличается высокой иммуногенностью, безвредностью, стабильностью репродукции и низ-
кой нейровнрулентностью. При введении собакам в относительно малых концентрациях и
объемах (1-2 мл) она сообщает стойкий иммунитет к уличному вирусу (более 300 дн). Для
иммунизации животных против Б в России ежегодно применяется более 700 млн. доз куль-
туральных антирабических вакцин из шт. Щелково-51, репродуцированного в роллерном
монослое перевиваемых клеток ВНК-21/13 (7). Описан способ получения культуральной ан-
тирабической вакцины из шт. Внуково-32 в культуре клеток 3-4-нед сирийских хомячков
(10). Разработан способ изготовления инактивированной антирабической вакцины, согласно
которому шт. Внуково-32 выращивают в культуре клеток, вирусодержащую жидкость инак-
тивируют последовательно УФ лучами и формалином. Инактивированный вирус концен-
трируют н очищают с помощью ультрафильтрации через пористые мембраны и гельфильт-
рации на пористых кремнеземах (89). В настоящее время отмечается тенденция отдавать
предпочтение инактивированным вакцинам, обладающим большей эффективностью и лег-
костью применения. Инактивированные вакцины лучше поддаются стандартизации при
контроле, минимальная АГ доза соответствует 4,5-1 ME. Если их применяют с адъювантом,
они создают иммунитет такой же продолжительности, как и живые вакцины. Получены вак-
цины с повышенной антигенностью, равной 3-5 ME на дозу (22).
Инактивированную вакцину готовят из фиксированного штамма вируса, выращенного в
культуре фибробластов хомячков. Вирус инактивируют р-пропиолактоном и добавляют
ГОА и сапонин в качестве адъюванта. Живую вакцину вводят внутримышечно 1-кратно в
дозе 2 мл, инактивированную - подкожно 1- и 2-кратно в дозе 2 мл. Предложена вакцина
для оральной вакцинации кошек против Б (19). Изучена эффективность культуральной ан-
тирабической вакцины на морских свинках в условиях предварительного заражения их фик-
сированным ВБ (90).
Фирма Мерье (Франция) разработала вакцину из фиксированного вируса, адаптирован-
ного вначале к ДКЧ (диплоидные клетки человека), а затем к постоянной линии клеток эм-
бриона хомячка. Вирус инактивировали Р- пропиолактоном. Испытание вакцины на лабора-
торных животных, собаках, кошках, КРС, овцах, свиньях и лошадях показало, что у живот-
ных всех видов иммунизация сопровождалась прочным иммунитетом длительностью 1,5-3
г. Ее можно использовать в комбинации с противоящурной вакциной для КРС и свиней,
противочумной и лептоспирозной - для собак и вакциной против панлейкопении кошек (56,
57, 78, 79). При 5°С вакцина в течение 3-х лет сохраняла активность. Двукратная прививка
ею КРС защищала животных от заражения вирулентным штаммом ВБ. После 1-кратной
вакцинации этой вакциной иммунологическая память составляла не менее 16 мес. Устойчи-
вость к заражению сочеталась с высокими титрами ВНА (21). Вакцина из очищенного виру-
са, размноженного в клетках Vero, после двукратного применения с интервалом 12 мес вы-
зывала напряжений иммунитет продолжительностью до 1,5 лет (60).
В Бразилии готовят инактивированную антирабическую масляно-эмульсионную вакци-
ну из шт. PV, выращенного в монослойной культуре клеток ВНК-21 и инактивированного
316
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
БПЛ. Титры АТ сохранялись в течение 2-х лет. Для изготовления инактивированной анти-
рабической вакцины выращивают вирус в первичной культуре клеток почки собаки на мик-
роносителе. На одной культуре получают несколько урожаев вируса при замене среды через
каждые 4-5 сут. Титр инфекционности такого вируса составлял 6±1 1g ИД50/МЛ. Разработана
оптимальная схема учета результатов при применении иммуноферментной тест-системы для
определения АГ активности культуральной антирабической вакцины (15).
При крупномасштабном производстве инактивированной вакцины против Б используют
постоянную линию клеток Vero, которую размножают на микроносителе в суспензии с ис-
пользованием возрастающего объема 150-500-1000 мл. При заражении вирусом используют
среду без сыворотки. Помимо адъювантов при использовании инактивированных антираби-
ческих вакцин применяют иммуномодулятор - у-интерферон (адъювант-модулятор), исполь-
зование его в короткий промежуток перед введением инактивированного препарата (за 2 ч
перед вакцинацией) повышает защитный эффект в 20-77 раз (42). Разработанная и широко
применяемая в СНГ вакцина Рабикан из шт. Щелково-51 (7), которая готовится с использо-
ванием суспензионной культуры клеток ВНК-21/13 в реакторах типа КМ-2000 (16).
В Тунисе антирабическая вакцина для людей представляет собой 5%-ную взвесь в р-ре
сахарозы мозговой ткани зараженных ВБ (шт.УРП) ягнят, инактивированную р-
пропиолактоном и лиофилизированную. Антирабическую вакцину для ветеринарной прак-
тики готовят аналогичным образом с добавлением в качестве адъюванта ГОА и стабилиза-
тора. Помимо того, получают также вакцину на клетках Vero, зараженных шт. KS2061. Ви-
рус инактивируют p-пропиолактоном затем концентрируют центрифугированием (35000
мин'1) в градиенте плотности сахарозы (86).
Генно-инженерные вакцины. Еще в 1982 г. французские исследователи выделили
клон, образующий вирусный белок - поверхностный гликопротеин ВБ. Испытывается вак-
цина, разработанная Wister Just совместно с Rhone-Merieux. Она содержит рекомбинантный
вирус коровьей оспы, несущий ген основного гликопротеина оболочки ВБ. Помимо выше-
указанных вакцин, с 1989 г. в Бельгии успешно применяют рекомбинантную вакцину
WTGgRAB (шт. 187XP26D3) для пероральной вакцинации лисиц. Вертолетами разбрасы-
вали приманки, содержащие 108 ТЦД50 рекомбинантного вируса. Показателем поглощения
вируссодержащей приманки (биомаркером) являлся тетрациклин (28). Разработана также
рекомбинантная антирабическая вакцина с использованием в качестве вектора оспы канаре-
ек. Препарат обладал таким же защитным действием, что и рекомбинантная антирабическая
вакцина на основе вируса оспы, и применяется в ветеринарной практике (38).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Механизм поствакциналь-
ного иммунитета окончательно не расшифрован. Имеет значение наличие специфических
ВНА в крови и особенно в ликворе. Установлено, что сами клетки головного мозга устойчи-
вы к вирусу. Для выяснения роли поствакцинальных АТ у КРС, привитого живой культу-
ральной и мозговой фенолвакциной, использовали PH на мышах и РДП. Титры АТ после
культуральной вакцины варьировали от 1:10 до 1:40, на 60-й день - от 1:20 до 1:30, к 180-му
дню - до 149, на 360-й день - 1:59 против 35 ЛД50 вируса. Динамика поствакцинальных АТ
в РДП на фенолвакцину показала, что наибольшие титры выявляются в период с 300 nol So-
il день; на 270 и 360-й дни после вакцинации АТ в РДП уже не обнаруживали. На культу-
ральную вакцину у аналогичной группы КРС АТ в PH были выявлены в период с 10-го по
360-й день, максимальный титр их отмечался с 30-го по 180-й день.
Результаты титрования сывороток в PH показали большую иммуногенность культураль-
ной вакцины. Средний титр ВНА в крови привитых собак через 1, 11, 24, 36 мес составлял
1:512, 1:146, 1:19, 1:6 соответственно.
У ревакцинированных коров ВНА появлялись через 4-8 дн после прививки, у иммуни-
зированных впервые - через 18 дн (титр 1:10-125 и более). У овец, привитых инактивиро-
317
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
ванной культуральной вакциной ВНИТИБП (7), ВНА обнаруживали в PH через 225 дн после
первой иммунизации. Активность сывороток, выраженная в международных единицах,
варьировала от 0,21 до 2.
Инактивированная вакцина из мозга мышей-сосунов защищала собак от летальной дозы
уличного ВБ через 37 мес после иммунизации. При этом средние титры ВНА через 1 и 36
мес составляли 1:512 и 1:16 соответственно, а к моменту заражения титры АТ были мини-
мальными или не обнаруживались совсем. Однако все собаки выдержали летальную дозу
вируса. Считают, что определяющим фактором эффективности антирабической вакцины
является ее способность стимулировать высокий уровень ВНА в начальный период после
иммунизации животного.
Следует учитывать, что для оценки эффективности вакцинации против Б, как правило,
используется PH вируса на мышах или в культуре клеток. Процедура эта достаточно трудо-
емкая и длительная. Предложен ELISA для выявления сывороточных АТ в крови привитых
животных. В качестве АГ используют оболочечный IgG ВБ.
Поствакцинальные осложнения. Данный вопрос получил широкое освещение в рабо-
тах по Б. Значительно большую частоту осложнений при введении вакцины типа Ферми
объясняют наличием в препарате не только мозговой ткани, но и незначительного количест-
ва живого фиксированного вируса (11). '}
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Адамович В.Л. 2th Cong Tiriologicus, Inf., Abstrs, Pap, Brno, 1978 :432. 2.Балабанов
В.А. и др. Тез докл н.-пр. конф. ВНИВВИМ, Покров, 1990 3. Bektemirova M.S.et.al. Arch
Virol, 1979, 61, 1-2 :61. 4.Бюлл. ВОЗ 1984, 626, 26 :19. 5.Гребенча C.B. и др. ЖМЭИ, 1986,
4 :24. б.Иммунопрофилактика бол. жив., М, 1981. 7.Иванов В.С. Тез докл. н.-пр. Конф
ВНИИЗЖ, 1995 .203. 8.Кузнецов П.П. и др. Передовой н.-пр. опыт в биопром., М, 1979, 3
:3. 9.Кузнецов П.П. и др. Бешенство животных, М., ВНИИТЭИСХ, 1981 :11 Ю.Крутилина
Я.В. и др. НПО Имм. преп. 4911891/13 опубл. 10.4.95.Бюлл. 10 П.Озеровский Н.А. и др.
Мат. Всерос. н.-пр. конф., Ленинград, 1991 :79. 12.Селимов М.А. Бешенство, М, 1978.
13.Сюрин В.Н. и др. Лаб. диагн. вир. бол. жив., М, Агропромиздат, 1991 :255. 14.Сюрин
В.Н., Фомина Н.В. Част. вет. вирусол., М, Колос, 1979. 15.Цетлин Е.М. и др. Вопр. Виру-
сол., 1996, 1 :21. 16.Шипилов В.И. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995
:36. 17.Artois М. Mesogec, 1992, 52 :82. 18.Atanasiu Р. et.al. Ann Microbiol (Inst Pasteur),
1979, 130A :257. 19.Baczinski Z. et.al. Med. Vet, 1991, 2 :53. 2O.Baer G.M. Rev Inf Dis, 1988,
10, Suppl, 4 :644. 21Blancou J. et.al. Ann rech vet, 1984, 15 :543. 22.Blancou J. Rev Scient Off
Inf Epizoot, 1985, 4, :235. 23.Blenden D.C. Zoonoses 1, PAHO/WHO Zoon Cetr, 1979 :7, Pers
Comm. 24.Blenden D.C. et.al. J Clin Microb, 1983, 18 :631. 25.Botros B.A. et.al. J Trop Med
Hyg, 1979, 8, 2 :137. 26.Bourgov A.R. et.al. Can J Vet Res, 1987, 51, 1 :117. 27.Bradley J.A.
Can Vet J, 1979, 20, 7 :186. 28,Brochier B. et.al. Ann Med Vet, 1987, 131 :463. 29.Brouwnlic J.
et.al. Vet Res, 1984, 114 :535. 3O.Buul WHO, 1987 :65. 31.Celer V. et.al. Acta Vet, Brno, 1991,
60, 2 :161. 32.Charlton K.M. etal. Lab Invest, 1979, 41 :36. 33.Cox J.H. Comp Imm Mier Inf
Dis, 1982, 5 :21. 34.Dubreuil M. et.al. Ann rech Vet, 1979, 10, 1 :9. 35.Everard C.O.R. et.al.
Trans Roy.Soc Trop Med and Hyg, 1981, 75, 5 :654. 36.Fekadu M. etal. Arch Vir, 1983, 78 :37.
37.Flamand A. et.al. Nature (Gr Brit), 1992, 360, 6400 :115. 38.Lancet, 1992. 39.Gosztonyi G.
MT A, 1992, 7, 2 :95. 4O.Haxlett M.F. et.al. Can Vet J, 1986, 27 :116. 41.Hrzenjak T. et.al. Comp
Imm and Inf Dis, 1994, 17 :71. 42.Interferon Res, 1991, Suppl, 1 :19. 43. Jackson A.C. et.al. Acta
Neuropath, 1989, 78, 2 :159. 44.Jubb K.F.V. et.al. Pathol of Dom Anim, 1985, 1, NY, Academic
Press, :295. 45.Kappeler A. et.al. Rev Ecol,1985, 40 :267. 46.Kauker E. et.al. Berl Munch
Tieraerztl Schr, 1977, 90, 21 :416. 47.Kiefect C. et.al. Tieaerztl Umsch, 1982, 37, 3 :165. 48.
Kissling R.et.al. - Wien Tierarztl Monatch, 1992, 79, 11, :333. 49. Kucera P et.al. J Virol, 1985,
55 :158. 50.Lodmell D.L. et.al. J Virol, 1995, 69, 8 :4957. 51.Malaga H. et.al. Int J Epidem,
318
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
1979, 8, 3 :243. 52.Manz D. Berl Munch tieraerztl Wochenschr, 1979, 92, 19 :376. 53.Muller V.
Dansk Vet haztidsskruft, 1979, 621 :8. 54.Muller T. et.al. Tieraerztl Umsch, 1995, 50, 1 :743.
56.Precausta P. et.al. Comp Imm Microbiol Inf Dis, 1982. 57.Precausta P. et.al. Tieraerztl
Umsch, 1982, 37, 4 :274. 58.Pastoret P.P. et.al. Ann Med Veter, 1988,132 :28. 59.Perrin P. et.al.
Bull WHO, 1987, 65(4) :489. 60.Saliou P. Abstr 23th World Vet Cong, Monreal, 1987 :410.
61.Sehgal S. Gelben Hefte, 1992, 32, 13 :126. 62.Serokova D.W. Prz.epidemiol, 1979, 33, 1
:161. 63.Smith J.S. et.al. J Inf Dis, 1984, 149 :769. 64.Tidke R. et.al. Vaccine, 1987, 5 :229.
65.Tufferean C. et.al. Virol, 1989, 172 :206. 66.Wandeler A. Sei Vet, 1978, 19, 3 :64.
67.Webster W.A. et.al. Comp Imm Mier Inf Dis, 1986, 9 (1) :59. 68.Wilthelm U. et.al. Bull
WHO, 1990, 68, 1 :61. 69.Yates W.D. et.al. Can Vet J, 1983, 24 :162. 70.Робертс В. Биогехнол.
клеток животных, М, 1989. 71.Dierzschold В. et.al. Virol, 1980, 64 .3087. 72.Сазанова Э.Я. и
др. Ветер., 1991, 8 :62. 73.Бирюков А.Г. и др. Тез. докл. н. конф., ВНИиТИБП, М, 1996.
74,Хисматуллина Н.В. и др. Тез. докл. н.-пр. конф., ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :73.
75.Тургенбаев А.А. и др. Тез. докл. н.-пр. конф., ВНИВВИМ, Покров, 1991 :37. 76.Fields М.
et.al. Vet Med Small an Cl, 1976, 71, 1 :37. 77.Осидзе Д.Ф. и др. Ветеринария, 1991.
78.Precausta Р. et.al. Comp Imm Microbiol Inf Dis, 1982. 79.Soulebot J.P. et.al. Ann Virol,
1982, 52 :415. 8O.Kelser R.A. et.al. Inf Dis Transm Animal to Men, 3th Ed Hull T.G. 81.Tierkel
E.S. 1971, Ed G Nagano and F M Davenport, Baltimor, Un Parc Press. 82.Kissi B. et.al.
Virology, 1995, 209, 2 :52. 83.Weekly Epidemiol Rec, WHO, 1995, 70, 37 .264. 84.Курпальник
В.Л. и др. Акт. вопр. бол. жив., МГАВМиБ, М, 1995 :130. 85.Ботвинкин А.Д. и др. 5 Съезд
гигиенистов, Алма-Ата, 1991 :95. 86.Arroreji A. et.al. Arch Inst Pasteur, Nunis, 1994, 71, 1-2
:257. 87.Vrzal V. et.al. Vet Med, 1996, 41, 4 :107. 88.Brochier B. et.al. Ann Med Vet, 1995,
139, 4 :263. 89.Акснова T.A. и др. А. св. 1367487, опубл. 27.10.95. 90.Мовсесян А.А. и др.
ЖМЭИ, 1992, 4 :35.
ЭФЕМЕРНАЯ ЛИХОРАДКА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine ephemeral fever, Three day sickness,Stiff sickness (англ),
Fievre de trois joursdu boeuf (франц), Dreitagekrankheit des Rindes (нем)
Эфемерная лихорадка (ЭЛ) - 3-дневная лихорадка, болезнь неподвижности, эпизоотиче-
ская лихорадка КРС - острая, быстропротекающая, лихорадочная болезнь КРС.
Распространение. ЭЛ в течение многих лет диагностируют в Южной Африке и Авст-
ралии. Вспышки остропротекающей фибрильной болезни КРС, так называемой “инфлю-
энцы скота”, регистрировали в Японии с 1949 по 1951 г. В Австралии первая большая эпи-
зоотия болезни началась в 1936 г. и до 1971г. повторялась там неоднократно (8). Болезнь
распространялась, в основном, потоком ветра. Наиболее вероятным переносчиком её счита-
ют москитов Culex annulirostris и Anopheles annulipes. Болезнь широко распространена на
Африканском, Европейско-Азиатском и Австралийском континентах, регистрируют её и в
сопредельных бывшему СССР странах (1, 2, 10). В 1976 г. отмечали эпизоотию ЭЛ, охва-
тившую поголовье КРС северо-западных провинций Индии, северо-восточных провинций
Китая и южные районы Монголии (5, 7). Спорадические случаи болезни КРС наблюдали в
1946 и 1952 гг., в южных приграничных районах Таджикистана и Узбекистана (поймы рек
Амударьи, Пяндж и Вахш). При этом, на основании эпизоотологических данных и клиниче-
319
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
ских наблюдений за животными, вначале поставили диагноз - грипп, а затем - 3-дневная
болезнь КРС. Однако окончательный диагноз на ЭЛ не был установлен. Распространение
болезни в 1988 г. на фермы характеризовалось распределением Пуассона и соответствовало
эпидемической кривой модели Рида Фроста с вероятностью соответствующего контакта в
0,0226. Если популяция КРС на ферме составляет менее 5 голов, вероятность первоочеред-
ной вспышки практически равна нулю (14).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь характеризу-
ется внезапным повышением температуры тела до 41-42°С. Через 1-2 дня она понижается
до нормальной. В это время отмечается быстропроходящий лейкоцитоз и лейкопения, уча-
щённое дыхание, что сопровождается появлением эмфиземы. Иногда вследствие удушья на-
ступает смерть. У некоторых больных животных развивается подкожная эмфизема в задней
части шеи, в передней части грудной клетки или в области лопатки. У отдельных животных
отмечают насморк, слёзо- и слюнотечение, одышку, болезненность в суставах, мышечный
тремор и параличи конечностей. Наблюдается сухость передней части морды, общее недо-
могание, анорексия, прекращение жвачки, снижение (иногда полное прекращение) удоя,
хромота, неспособность стоять из-за артрагии. При снижении температуры до нормальной
эти симптомы исчезают. При гематологическом исследовании характерно наличие своеоб-
разной формы ядер у лейкоцитов.
Патологоанатомические изменения чаще локализуются в лёгких; там находят кровоиз-
лияния в слизистой оболочке верхних дыхательных путей, носовой полости, глотке, гортани,
трахеи. В редких случаях лёгкие становятся похожими на большие воздушные шары, эмфи-
зема распространяется на диафрагму, на внутримышечные и подкожные участки шеи и
брюшной полости. В паренхеме лёгких нечётко выражены участки гепатизации. Типичными
патологоанатомическими изменениями является серофибриоз, множественный артикулопе-
риостит, периартрит, лимфаденит. У многоплодных коров, отелившихся нормально, изме-
нялись показатели картины крови, макро- и микроминеральные изменения, а резкое сниже-
ние уровня Са в плазме крови часто сопровождалось внезапным параличом и другими при-
знаками, характерными для острой формы ЭЛ (18).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Вирус открыт впервые японскими исследователя-
ми Цубаки и др. в 1951 г. Вирионы пулевидной формы, размер 140'70 нм, имеют полый
осевой канал и сходны с вирусами везикулярного стоматита, фландерс, бешенства и Керн
Каньон, относящихся к семейству рабдовирусов. В отличие от них вирус ЭЛ не имеет попе-
речной полосатости. Вирионы имеют конусовидную форму, длина их 176 нм, диаметр у ос-
нования 88 нм (Рис. 52). Вирионы южноазиатского штамма вируса конусовидной формы,
австралийского и японского штаммов - пулевидной. На всех этапах развития вирионы име-
ют усечённые Т-частицы. Несмотря на определённое сходство вируса ЭЛ с другими рабдо-
вирусами, он отличается от них тем, что внутренняя структура вирусной частицы представ-
ляет 6-гранную белковую массу, а нуклеиновая кислота 2-нитевая. Плавучая плотность
1,196 г/см3, вирионы устойчивы к РНК-зе. При ультрацентрифугировании в течение 2 ч при
4°С большая часть вируса осаждается при 73000 g.
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, дезоксихолату и трипсину.
Частично инактивируется при pH 7,4 или 8,0, инактивация наступает при pH 6,1 (60 мин) и
pH 9,1 (90 мин), полностью инактивируется при pH 3. Нагревание при 56°С в течение 20
мин ведёт к полной инактивации. В условиях 34 и 37°С происходит постепенное снижение
инфекционности, а при 30°С она не снижается в течение 24 ч. При дальнейшем нагревании
в тех же условиях инфекционность вируса понижается приблизительно на Ю0,7 ТЦД50 в сут.
320
Глава VII. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
Вируссодержащая кровь при +2 -2 °C не снижает инфекционности 48 ч. Лиофилизированная
вируссодержащая кровь при -40°С остаётся патогенной даже после 958 дн хранения. Вирус-
содержащая культуральная жидкость (при выращивании в культуре ВНК-21) в условиях -
80°С сохраняла патогенность через 278 дн, а при -20°С уже на 73-й день наблюдалось зна-
чительное снижение титра инфекционности. При 4°С вируссодержащий материал можно
сохранять не более 40 дн. Многократное замораживание и оттаивание не влияют на инфек-
ционный титр вируссодержащего материала.
Антигенная структура. АГ структура не изучена, обнаружен лишь растворимый КС
АГ. У крыс, заражённых в мозг, появляются ВНА. У заражённых кроликов, свиней н овец
АТ не обнаружены. КС АГ в более высоком титре накапливается в культуре клеток ВНК-21
к 5-му дню культивирования при 30°С, далее титр его постепенно снижается.
ВНА у КРС появляются на 2-й, а КСА - на 3-й нед после заражения. ВНА у животных-
реконвалесцентов достигают своего пика через 2 мес после заражения и сохраняются более
400 дн. Затем титр их резко снижается. Между наличием АТ и восприимчивостью к инфек-
ции имеется прямая связь. Материнские АТ у телят обнаруживаются до 6-7-мес возраста.
Стандартным штаммом вируса ЭЛ является ВВ7721. Большинство исследователей считает,
что этот вирус в АГ-отношении идентичен. Однако в литературе появились данные, указы-
вающие на то, что в Австралии существует несколько серотипов вируса (8).
Гемагглютинирующие свойства не изучены.
Локализация вируса. Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение не
изучены. Известно лишь, что самая высокая инфекционность эритроцитов у больного жи-
вотного совпадает с периодом виремии.
Экспериментальная инфекция. Вирус размножается в мозге мышей, хомячков и кры-
сят-сосунов. Экспериментально болезнь можно воспроизвести у телят при внутривенном за-
ражении кровью естественно больных животных. У молодняка КРС (1,5-2-летнего возраста)
заболевание наблюдали на 4-й день; температурная реакция регистрировалась на протяже-
нии 3 дн. Мышат-сосунов заражают интрацеребрально фракцией лейкоцитов крови больных
животных. У заражённых мышат через 1-3 дня наблюдали недомогание, а на 10-й день и
позже появлялись симптомы паралича задних конечностей. Исход летальный. Интрацереб-
ральное заражение мышат-сосунов в 3-дн возрасте и старше не вызывало их гибели. Мыши
не являются адекватной моделью для изучения ЭЛ. Вирус можно выделять на хомячках и 1
дн крысятах-сосунах. После 3-х последовательных пассажей на мышатах-сосунах вирус
удаётся адаптировать к мозгу крысят-сосунов и к культурам клеток. Однако он обычно ут-
рачивает патогенность и АГ-активность в отношение КРС. Вирус ЭЛ шт. Юмагучи оказался
более вирулентным для 1-сут мышей, тогда как шт.Ml976 КРС5 проявил низкую патоген-
ность для этих животных. Односуточные морские свинки, взрослые нелинейные белые мы-
ши, хомячки и крысы оказались нечувствительными к интрацеребральному заражению ви-
русом ЭЛ шт. М1976 КРС5 и Юмагучн (2).
Культивирование. Кроме мозга мышат-, крысят- и хомячков-сосунов, вирус культи-
вируется в клетках ВНК-21, Т, перевиваемой линии опухолевых клеток хомячка, индуциро-
ванных саркомой Рауса (шт.Шмидт-Руппин), в первичной культуре клеток почки хомячка, в
перевиваемой линии клеток ВЕК-1, полученных из почки эмбриона КРС и прошедших в те-
чение четырёх лет 103 пассажа. В первичных культурах клеток эмбриона хомячка, почек и
эмбриона крысы, почек и семенников телят вирус размножается, не вызывая ЦПИ. Вирус не
размножается и не вызывает ЦПИ в культурах клеток почки и эмбриона мышей, почки мор-
ской свинки, цыплят, лейкоцитов, костного мозга, щитовидной, вилочковой железы и над-
почечника телят. Различные штаммы после серийного пассирования в мозге мышат-сосунов
или в клетках ВНК-21 сравнительно быстро теряют патогенность для КРС. Для выделения
вируса используют культуру клеток Vero, где титр вируса достигает 10-3-4 ТЦД50/МЛ. Изу-
21 Зак. № 171
321
Глава VH. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
чены оптимальные условия бляшкообразования в культуре этих клеток. Отмечен феномен
аутоинтерференции, связанный с присутствием дефектных интерферирующих частиц в
культуре клеток. Для культивирования вируса оптимальная температура 30-34°С. Повыше-
нию титра инфекционности вируса способствует добавление в инфицированную культуру
клеток кортизона. Вирус размножался в организме москитов Culex annulirostris при внутри-
грудной инъекции. Развитие вируса связано с клеточными мембранами. Характер размно-
жения его в клетках ВНК-21 сходен с размножением вирусов везикулярного стоматита,
Фландерс, Керн Каньон.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. ЭЛ - трансмиссивная болезнь. Переносчика-
ми вируса служат москиты Culex annulirostris и, вероятно, также Anopheles annulipes. Бо-
лезнь проявляется в тёплое влажное время года, в период биологической активности крово-
сосущих насекомых и протекает в виде энзоотий и эпизоотий. Инфекция наносит значи-
тельный экономический ущерб из-за больших потерь массы, молочной продуктивности,
абортов, временного бесплодия и гибели тяжелобольных животных (11, 13, 15, 16, 17). Бо-
лезнь регистрируется во многих странах мира, в том числе в сопредельных с Россией госу-
дарствах: Узбекистане, Таджикистане, Монголии (3, 4, 5, 6, 7,8, 9).
Спектр патогенности в естественных условиях. Вирус монопатогенен, в естествен-
ных условиях поражается только КРС. Овцы, козы, свиньи и лошади невосприимчивы.
ДИАГНОСТИКА
Для постановки диагноза используют ИФ. Специфическая флюоресценция обнаружива-
ется в цитоплазме лейкоцитов, взятых от естественно больного скота до снижения лихорад-
ки. Результаты ИФ совпадают с данными серологических тестов. Вирус выделяли на белых
мышах при инфицировании их гепаринизированной кровью, полученной от эксперимен-
тально заражённых шт. 45733 вируса ЭЛ, выделенным в Австралии и адаптированным к
культурам клеток. Для этого суточных белых мышат-сосунов заражают гепаринизированной
кровью интрацеребрально в дозе 0,01-0,02 мл. Для последующих пассажей используют
10%-ную суспензию мозга больных и павших мышах предыдущего пассажа. На 5-7-е сут у
мышат, инфицированных кровью, наблюдали повышенную возбудимость, которая сменя-
лась угнетением и малоподвижностью, отставанием в росте и развитии. При первичном за-
ражении на 7-10-е сут погибало 27% заражённых мышат. После 3-х последовательных пас-
сажей патогенность возбудителя повышалась, и на 4-м пассаже гибель всех инфицирован-
ных мышей наступала через 2-3-е сут. Интрацеребральное заражение мышат-сосунов
шт.45733 вируса ЭЛ вызывало появление клинических признаков болезни на 4-5-е сут и ги-
бель 64% животных на 7-9-е сут. На 2-ом пассаже инкубационный период сокращался до 2
сут и погибали все заражённые мыши. Симптомы проявления болезни у мышат-сосунов,
инфицированных шт. 45 733 вируса ЭЛ, кровью естественно заболевших и экспериментально
заражённых животных, были идентичны.
Для выделении вируса используют первично-трипсинизированную культуру клеток ПТ,
перевиваемые линии клеток ПО и ВНК-21, гепаринизированную или дефибринированную
кровь больных животных (цельную и разведённую 1:10), 10%-ную суспензию мозга боль-
ных мышат и шт.45 733 вируса ЭЛ. Идентификацию выделенного агента в PH осуществляли
в пробирочной культуре клеток ВНК-21 с использованием вируса, выделенного в культуре
клеток из крови больных животных и мозга инфицированных мышат, шт. 45733 вируса ЭЛ,
сыворотки крови, полученной от переболевших и находившихся в контакте с больными жи-
вотных, а также сыворотки специфической к шт.45733 вируса ЭЛ. Диагностические сыво-
ротки к вирусам ящура, везикулярного стоматита, ВД-БС, ИРТ и оспы КРС служат гетеро-
логическим контролем.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
322
Глава VU. Family Rabdoviridae. Рабдовирусные инфекции
Иммунитет не изучен. В Японии удовлетворительные результаты получены при приме-
нении аттенуированной вакцины. Оптимальный интервал между введениями составлял 1-5
нед. Из вируссодержащей крови, обработанной кристаллвиолетом, удалось получить инак-
тивированную вакцину, которую вводят 2-кратно подкожно по 10 мл с интервалом 3-7 дн. В
крови привитых животных образуемыми ВНА, выявляемые более 2-х лет. Кроме того,
предложена ГОА-формолвакцина с использованием вируса, репродуцированного в культуре
HmLu-1. При 4°С вакцина сохраняет активность в течение 9 мес. Она безвредна для стель-
ных коров. Рекомендуется двукратная иммунизация с последующей ревакцинацией через
год поздней осенью или ранней весной. Для получения гипериммунной сыворотки КРС им-
мунизируют вируссодержащей дефибринированной кровью, суспензией селезёнки и лимфо-
узлов, взятых во время лихорадки. Гипериммунная сыворотка в дозе 250 мл предохраняет
животное от прямого заражения. Перспективна и живая вакцина, но это связано с большими
трудностями, так как в гетерогенной биологической системе вирус быстро теряет свою пато-
генность и иммунизирующие свойства. Серийное пассирование вируса ЭЛ в линии клеток
HmLu-1 ведёт к быстрой аттенуации его в отношении КРС. Аттенуированный вирус не вы-
зывает у животных образования ВНА. Однако максимальное накопление их и устойчивость
к заражению у КРС происходит после подкожного введения аттенуированного вируса (около
105 ТЦД50/Мл) и затем через 2-4 нед после внутримышечной инъекции формолвакцины.
Иммунизация КРС по такой схеме безвредна даже для стельных коров (12).
В 1982-1984 гг. в Клинсвенде проведена оценка иммунных реакций 24 стад КРС после
различных схем вакцинации против ЭЛ. Использовали вакцину, приготовленную на основе
шт. 919, аттенуированного на телятах и клетках Vero, в сочетании с адъювантом Quit А и ге-
лем ГОА. Две последовательных инокуляции вакцины, смешанной непосредственно перед
введением с адъювантом QuilA, индуцировали самый высокий титр ВНА и обеспечивали
высокую защиту от естественного контрольного заражения вирулентным вирусом, по край-
ней мере, в течение 12 мес. В то же время после 1-кратного введения вакцины с этим адъю-
вантом и 2-кратного введения титр АТ был значительный, но не обеспечивал напряжённой
защиты от вирулентного вируса. Отмечена чёткая взаимосвязь титра ВНА и уровня иммуно-
защиты (18). При перемежающемся пассировании КРС - культура клеток ВНК-21 получен
аттенуированный вариант вируса ЭЛ, который утратил вирулентность для КРС, но сохранил
иммуногенные свойства. Минимальная иммунизирующая доза равна 100 ТЦД50, а приви-
вочная - 10000 ТЦДзо. После 1-кратной подкожной вакцинации иммунитет у КРС наступает
через 21 дн и длится не менее 6 мес (2).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Диев В.И. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ., 1995 .128. 2.Кулешбекова Ш.К. Автореф. канд.
дисс., ВНИИВВиМ, Покров, 1983. З.Курченко Ф.П. и др. Ветеринария, 1991, 2 :26.
4.Курченко Ф.П. Карантинные и малоизвестные бол. жив., М, 1983. 5.Курченко Ф.П. и др.
Ветеринария, 1986, 1 :26. б.Мирзаев Д. и др. С. х. Таджикист.,1984, 12. 7.Пурэвцэрэн Б. и
др. Труды НИИЖ, Улан-Батор, 1982, 25. 8.Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусология., М.,
Колос, 1979. 9.ЦионР,А., Раевский А.А. Ветеринария, 1950, 2. lO.Baj Wenbin et.al. Austr J
Biol Sci,1987, 40 :7. ll.George T.D. et.al. Austr Vet, 1977. 12.1anaba J. Bull Off Inst Epizoot,
1973, 79. 13.McKeras J.M. et.al. Bull Covinc Sci Ind Res 1940 :136. 14.Ogava T. et.al. J Vet
Med Sci, 1992, 54, 5 :923. 15.Ralph W. et.al. Ruraige Res, 1984 :122. 16.Ralph W. Viral
Research, 1984 :28. 17.Uren M.F. Austr Vet J, 1989, 66 :8. 18.Vanselow B.A. et.al. Vet
Microbiol, 1995, 46, 1/3 :141.
21*
323
Глава УШ. Family Orthamyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
Глава VIII. ОРТОМИКСОВИРУСНЫЕ
ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОРТОМИКСОВИРУСОВ
Вирусы имеют особое сродство к мукополисахаридам и гликопротеидам (в частности, с
клеточными рецепторами, содержащими сиаловую кислоту). Кроме того, имеют сходные
биологические свойства, а именно: способность агглютинировать эритроциты, наличие у не-
которых представителей нейраминидазы, легкость культивирования в КЭ и тропизм к орга-
нам дыхания. Вирусы имеют принципиальные различия по внутриклеточной локализации
АГ, по чувствительности и препаратам, затрагивающим синтез белков и нуклеиновых ки-
слот и по генетическим свойствам. С 1980 г. принята следующая номенклатура субъединиц
вирусов гриппа рода А, включающая вирусы человека, лошади, свиньи, кур, уток, индюков
и некоторых видов птиц (табл.УШ. 1).
Таблица УШ, 1. Номенклатура субъединиц вирусов гриппа рода А
Субъеди- ница Обозначение Характерный штамм
НА Г1 Г2 ГЗ Г4 Г5 Гб Г7 Г8 Г9 ПО Г11 Г12 A/WS/33; A/FM/1/47; А/свинья/Айова15/30 А/Сингапур/1/68 А/Гонконг/1/68;А/лошадь/Майами1/63; А/утка/Украина1/63 А/утка/Чехословакия/ 5 6 А/крачка/Ю. Африка/61 А/индюк/Массачусетс 3440/65 А/лошадь/Прага1/56; A/FPV/Dutch/27 А/индюк/Онтарио 6118/68 А/индюк/Висконсин/66 А/цыпленок/Г ермания/49 А/утка/Англия/5 6; А/утка/Альберта 60/76
NA Н1 Н2 НЗ Н4 Н5 Н6 Н7 Н8 Н9 A/WS/33; A/PR/8/34 А/Сингапур/1/57 А/крачка/Ю.Африка/61; А/индюк/Англия/63 А/индюк/Онтарио 6118/68 А/буревестник/Австралия/72 А/утка/Англия/5 6 А/лошадь/Прага1/5 6 А/лошадь/Майами 1/63 А/утка/Мемфис 546/74
Согласно Международной номенклатуре любой штамм вируса гриппа рода А обознача-
ется по следующей схеме: род/источник изоляции/место изоляции/ собственный номер изо-
лята/год изоляции/формула вида - серотипы ГА и нейраминидазы. Для штаммов, изолиро-
ванных от человека, источник изоляции не пишется; для всех других штаммов год изоляции
обозначается 2-мя последними цифрами. Семейство ортомиксовирусов (от греч. orthos -
правильный, прямой и туха - слизь) включает три рода: вирусы гриппа А и В, вирусы
гриппа С и тоготпоподобные вирусы.
Типичным представителем рода вирусов гриппа А и В является вирус гриппа
A/PR/8/34(HlNl). Вирионы представляют собой частицы плеоморфной, чаще округлой
формы, диаметром 80-120 нм. Они состоят из фрагментированного нуклеокапсида спираль-
ной симметрии диаметром 9-15 нм и липопротеидной оболочки, на поверхности которой
имеются выступы длиной 10,0-13,5 нм. Иногда обнаруживают филаментозные частицы
324
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
длиной до 4 мкм. Мол. м. вирионов 250 МД, плавучая плотность в сахарозе 1,19 г/см3, ко-
эффициент седиментации нефиламентозных вирионов 700-800S (Рис. 53). Вирусы чувстви-
тельны к жирорастворителям, детергентам, формальдегиду, 0-пропиолактону, быстро инак-
тивируется при прогревании (56°С), УФ облучении и pH среды ниже 5.
Геном состоит из 8-и неодинаковых по размеру (900-2350 нуклеотидов) фрагментов 1-
спиральной минус-РНК, суммарная длина которых составляет около 14 тыс. нуклеотидов
(4,5 МД). Каждый фрагмент РНК вируса гриппа А содержит одинаковую последователь-
ность из 13 нуклеотидов на 5'-конце и 11-12 нуклеотидов на 3'-конце (для вируса гриппа В
- соответственно 11 и 9 нуклеотидов). Установлена кодирующая функция каждого фрагмен-
та РНК. У вируса гриппа А 3 больших фрагмента РНК (1-, 2-, 3-й) кодируют белки полиме-
разного комплекса (РВ1, РВ2, РА), 3 промежуточных по размеру фрагмента РНК (4-, 5- и 6-
й) кодируют нуклеопротеин и поверхностные гликопротеины и 2 малых фрагмента РНК (7-
и 8-й) - матриксные белки и 2 неструктурных белка. Кодирующие зоны белков на каждом
малом фрагменте РНК частично перекрываются. Вирионная РНК ортомиксовирусов не об-
ладает инфекционностью. В вирионах обнаружено 7 белков, 4 из которых (РВ1, РВ2, РА,
NP) связаны с нуклеокапсидом, а 3 (НА, NA, Ml) входят в состав липопротеидной оболоч-
ки, причем 2 из них (НА и NA) являются гликопротеинами. Гликопротеины образуют 2 ви-
да выступов наружной оболочки вирионов. Выступы 1-го вида образованы гемагглютини-
ном (НА) с мол.м. 75-80 кД (около 500 а.к.). Каждый выступ состоит из 3-х молекул НА, ко-
торые организованы в палочкообразную структуру. Каждая молекула НА в свою очередь
состоит из 2-х субъединиц (НА 1-330 а.к., НА 2-22 - а.к.), соединенных дисульфидной свя-
зью. НА ответственен за адсорбцию и проникновение вирионов в клетку и ГА-активность
вируса. АТ к НА нейтрализуют инфекционность вируса и подавляют его ГА-активность.
Выступы 2-го типа образованы нейраминидазой (NA) с мол.м. 60-70 кД (450-470 а.к.). Каж-
дый выступ состоит из 4-х молекул NA, которые организованы в грибообразную структуру.
На поверхности вириона имеется примерно 500 выступов, из которых около 100 образованы
нейраминидазой и 400 - ГА. В вирионах содержится 70% белка, 18-37 липидов, 5 углеводов
и 1% РНК. Углеводы и липиды имеют клеточное происхождение. Белки вирионов NP и Ml
вируса гриппа А имеют общие АГ-детерминанты, отличные от таковых вируса гриппа В.
Штаммы вируса гриппа А различаются между собой по поверхностным гликопротеинам НА
и NA, с которыми связано развитие иммунитета. Все подтипы НА и NA вируса гриппа А
обозначают последовательными номерами независимо от происхождения вируса. Установ-
лено 14 АГ подтипов по НА и 9 подтипов по NA (см.таблУПЫ). Вирус гриппа В не под-
разделяют на АГ подтипы.
Вирионы проникают в клетку путем эндоцитоза и сплавления оболочки вириона с мем-
браной клетки хозяина. Транскрипция происходит в ядрах клеток и осуществляется вирион-
ассоциированной транскриптазой. Каждый фрагмент вирионной РНК транскрибируется не-
зависимо, и образуются информационные РНК, которые полиаденилированы на 3'-конце и
не содержат последовательности, комплементарной 16 нуклеотидам с 5'-конца каждого
фрагмента РНК. На 5-конце информационных РНК имеется кэп-структура и 8-15 нуклеоти-
дов клеточного происхождения. 5'-концевой фрагмент клеточной РНК с кэп-структурой от-
щепляется вирусным белком РВ2, обладающим эндонуклеазной активностью, и использует-
ся в качестве затравки для синтеза вирусных информационных РНК. Вирионные РНК по-
томства не кэпированы и не полиаденилированы.
Синтез вирусспецифических белков происходит в цитоплазме клетки. Гликопротеины
мигрируют к наружной оболочке и встраиваются в нее. Созревание вирионов происходит
почкованием нуклеокапсидов через модифицированные участки клеточной мембраны. Клю-
чевая роль в процессе созревания принадлежит М белку, выстилающему клеточную мем-
брану с внутренней стороны.
В естественных условиях вирус гриппа А поражает человека, свиней, лошадей и птиц, а
вирус гриппа В - только человека. Передаются вирусы аэрогенным путем.
325
Глава УТЛ Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
Типичный представитель рода вирусов гриппа С - вирус гриппа С/Тау1ог/1233/47. Фор-
ма и размер вирионов аналогичны таковым вируса гриппа А. Геном состоит из 7-и неодина-
ковых по размеру (975-2350 нуклеотидов) фрагментов 1-спиральной минус-РНК с суммар-
ной мол.м. 4-5 МД. Каждый фрагмент РНК содержит одинаковую последовательность из 11
нуклеотидов на 5'-конце и 10 нуклеотидов на 3'-конце. Фрагменты 1, 2, 3 кодируют белки
полимеразного комплекса; фрагменты 4, 5 и 6 - соответственно гликопротеин оболочки,
нуклеопротеин и мембранный белок; фрагмент 7-2 неструктурных белка.
В вирионах обнаружено 6 белков, 4 из которых (РВ1.РВ2, РВЗ и NP) связаны с нуклео-
капсидом, а 2 других (НЕЕ и М) входят в состав липопротеидной оболочки. Гликопротеин
НЕЕ ответствен за адсорбцию и проникновение вирионов в клетку, ГА- и эстеразную актив-
ность. Он состоит из 2-х субъединиц (НЕЕ1 - 48 кД, НЕЕ2 - 22,5 кД), соединенных дисуль-
фидной связью. Подобно вирусам гриппа А и В для размножения вируса гриппа С необхо-
дима функция клетки-хозяина. Созревание вирионов происходит почкованием нуклеокапси-
дов через клеточную мембрану. Вирус гриппа С обнаружен у человека и свиней.
В состав рода тоготоподобные вирусы входят вирусы Тогото (прототипный вирус) и
Дори, переносимые клещами и иногда поражающие человека. Морфологически они сходны
с другими ортомиксовирусами и содержат 6-7 фрагментов 1-спиральной минус-РНК.
ГРИПП КУР
Pestis Galinarum (naT.);Fowl Pest, Chicken plaque (англ.); Peste aviaire (франц.); Eu-
ropische, lombardische oder Klassische Gefaugelpest, Hunerpest, Geflugelpest (нем.)
Грипп кур (классическая чума птиц, КЧП - грипп птиц А1, подтип 7, экссудативный
тиф, брауншвейгская болезнь кур) - острая контагиозная вирусная болезнь, характеризую-
щаяся общим угнетением, отеками, поражением органов дыхания и пищеварения.
В настоящее время грипп птиц в форме КЧП регистрируется редко. Чаще инфекция
проявляется эпизоотическими вспышками, вызываемыми штаммами других АГ подтипов с
более низкой, чем вирус КЧП, патогенностью. Такие вспышки зарегистрированы в США,
Италии, Англии, ФРГ, СССР и других странах. Вирусы гриппа птиц (ВГП) выделены от
кур, индюков, уток, перепёлок, фазанов, глухарей, длиннохвостых попугаев, цесарок и др.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Для КЧП, вызывае-
мой вирусом гриппа Al/Duthch/27, характерны депрессия, потеря чувствительности, си-
нюшность видимых слизистых оболочек, гребня и серёжек. Отёк подкожной клетчатки в
области головы и шеи, специфический, но непостоянный признак, позволяющий дифферен-
цировать КЧП от НБ, наблюдается также и при заболеваниях, вызываемых пгг. цыплёнок/
Шотландия/59 и реже - крачка/Ю. Африка/61. Признаки поражения органов дыхания,
обычно наблюдаемые при гриппе птиц, слабо выражены при КЧП и не отмечаются при бо-
лезнях, вызванных шт.: А/цыплёнок/Шотландия/59, А/крачка/ Ю. Африка/61 и А/индюк/
Онтарио /7732/66. Диарея обнаруживается при заражении птиц гриппом шт. А/крачка/ Ю.
Африка/61. Шт. гриппа А/индюк/Онтарио/7732/66 постоянно вызывал этот симптом у инде-
ек. Все остальные штаммы ВГП независимо от серологической принадлежности, вызывают
болезни, симптомы которых чрезвычайно разнообразны и зависят от вида, возраста и пола
животного, сопутствующих инфекций, патогенности вируса, стресс-факторов и пр.
Среди кур грипп протекает не только как КЧП, но и в виде респираторной болезни, при
которой погибают от 1 до 70-80% больных, что зависит от вирулентности штамма, возраста
и вида птицы, условий содержания и сопутствующих инфекций. У больной птицы наблю-
дают сонливость, чихание, хрипы, одышку, выделения из носа, слёзотечение, взъерошен-
ность оперения, отставание в росте и развитии. У отдельных птиц отмечают тремор, указы-
вающий на поражение нервной системы. Снижение яйценоскости у взрослой птицы - харак-
326
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
терний признак, наблюдаемый и при отсутствии симптомов поражения органов дыхания.
При этом ухудшается качество скорлупы, снижаются оплодотворяемость и выводимость.
Выделенный в 1970-1971 гг. штамм вируса гриппа А/курица/СССР/ 315/70 вызвал за-
болевание птиц с поражением преимущественно ЖКТ. Больная птица была угнетена, отка-
зывалась от корма, яйценоскость снижалась. Выраженным клиническим признаком была
диарея. Хотя гибель больной птицы не превышала 2-5%, однако с вынужденным убоем
больных достигала 30%. После 2-3-иед переболевания птица выздоравливала и продуктив-
ность её восстанавливалась. При некоторых вспышках, вызываемых низкопатогенными
штаммами вируса гриппа кур, у птиц наблюдалось поражение почек (21). Часто инфекция у
птиц протекает бессимптомно, о чём свидетельствуют выявляемые в РТГА АТ. Это наблю-
дается среди домашних уток. У индеек болезнь характеризуется резким снижением яйце-
носкости и жизнеспособности вылупившихся индюшат (8,9, 5а, 6а, 66).
При вскрытии птицы с респираторной формой гриппа обнаруживают катаральный
конъюнктивит, ринит, синусит, трахеит, аэросаккулит, интерстициальную пневмонию, ката-
рально-геморрагические энтериты и нефриты. В отдельных случаях наблюдается поражение
яйцеводов и яичников. В случае осложнения болезни патогенной E.coli отмечают фиброзно-
дифтерический аэросаккулит, перикардит и синусит. Патоморфология респираторного трак-
та весьма сходна и не зависит от серологической принадлежности вируса и вида птицы. У
индюшат и перепелят встречаются некрозы в поджелудочной железе, а у цесарят - в гона-
дах. Сведений о вирусных включениях при гриппе птиц в литературе иет.
При КЧП (грипп Н7) наблюдают кровоизлияния преимущественно в серозных покровах,
паренхиматозных органах, скелетных мышцах, пищеварительном тракте. Характерны ката-
ры ЖКТ с сильным утолщением слизистой оболочки и обилием слизистых выделений, оча-
говые некрозы в селезёнке, печени, почках и ЦНС. Три штамма ВГП А5, как и вирус КЧП,
оказывают пантропиое действие. При вскрытии обнаруживали венозный застой и цианоз
кожи, мышечной ткани внутренних органов, кровоизлияния в строму фолликул и желточ-
ный перитонит у несушек, а также энтериты, выраженные в различной степени. У кур, за-
ражённых шт. крачка/Ю. Африка/61, преобладал катарально-геморрагический гастроэнте-
рит вплоть до язвенного воспаления.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Четании и Савонуции (1901) впервые доказали вирусную природу КЧП. В 1956 г. Шеф-
фер и Уотерсон впервые установили принадлежность вируса КЧП к гриппу типа А -
Myxovirus influenza А. В дальнейшем сообщалось о выделении вирусов гриппа от кур, цып-
лят, уток, индеек, перепелов, крачек, воробьёв и других птиц. В 1967 г. в СССР был выде-
лен атипичный вариант вируса гриппа А (шт. 314), в 1968 г. - другой высоковирулентный
шт. С, в АГ-отношеиии родственный вирусу КЧП.
Морфология и химический состав. ГА - один из самых крупных белков в вирионе, на
его долю приходится 25-35% белков. Он ответствен за прикрепление вирусной частицы к
клетке хозяина и вовлекается в начальные стадии инфекции. Именно против ГА направлены
АТ, нейтрализующие инфекционность вируса гриппа. Ввиду столь важной роли Г А в разви-
тии инфекции, структура этого белка привлекла внимание многих исследователей, и к на-
стоящему времени в структурном отношении он наиболее изучен (23). Часть сахаров ГА
ВГП может изменяться в различных хозяйских клетках даже в течение одного пассажа (17).
Второй поверхностный АГ вируса гриппа - нейраминидаза. Этот фермент в составе ви-
руса гриппа известен с 1942 г., одиако функциональная роль его в репродукции вируса до
сих пор в полной мере не выяснена. Предполагается, что главная функция нейраминидазы -
предотвращение агрегации вирусных частиц иа поверхности клеток. Также известно, что
нейраминидаза играет большую роль в иммунологии и патогенезе заболевания.
Устойчивость. При температуре 55°С ВГП инактивируется за 1 ч, при 60°С - за 10 мин,
при 65-70°С - за 2-5 мии. При низких температурах и в лиофилизированном состоянии (при
-30°С в запаянных ампулах в тёмном месте) сохраняется до 2 лет. В присутствии MgCl2 ви-
327
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
рус инактивируется быстрее, a MgSO4 стабилизирует его. ГА и инфекционность вируса
обычно сохраняются при - 60°С несколько лет, а при 4°С - несколько недель. ГА свойства
более стабильны, чем инфекционные. Инфекционность и ГА-активность вируса можно со-
хранить, если в осадок добавить простой белок (протамин), квасцы или фосфат кальция или
же обработать 35%-ным метанолом при -5°С. Инфекционность вируса пропадает при обра-
ботке его формальдегидом, детергентами, оксидированными агентами (йодин), слабыми ки-
слотами, додецилсульфатом, гидроксиламином, ионами аммония. Степень термоинактива-
ции оказалась различной для штаммов, выделенных в одной и той же географической зоне.
Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время вирусы гриппа А птиц на
основании их поверхностных АГ - ГА (Н) и нейраминидазы (N) - разделены на 13 по Н-АГ
и 9 вариантов по N-АГ (таблЛТП.2.) Штаммоспецифические АГ-связи определяются с по-
мощью: РТГА - для определения сходства по ГА; РТНА - для определения сходства или
различия по НА; теста двойной диффузии - для определения сходства ГА и НА. У штаммов
вируса гриппа А птиц, имеющих АГ характеристику H1N1, выявлено не менее 4 АГ детер-
минант нейраминидазы. Четкие различия выявлены также у НА штаммов вируса гриппа А
птиц с АГ формулой H3N8, следовательно, НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ харак-
теристиками H1N1 и H3N8 имеет на своей поверхности не менее 4-х АГ различных детер-
минант: 1 общую для вирусов, имеющих одинаковый сероподтип, 2 - перекрестно реаги-
рующих и 1 - штаммоспецифическую (7).
Таблица VIII.2. Обозначения серотипов вируса гриппа А птиц
Серовариант Наименование штамма Формула
1. А/утка/Альберта/35/76/ H1N1
2. А/утка/Г ермания/1215/73 H2N3
3. А/утка/У краина 1/63 H3N8
4. А/утка/ЧССР/56 H4N6
5. А/крачка/Ю. Африка/61 H5N3
6. А/индюк/Массачусетс/3740/65 H6N2
7. A/вирус чумы птиц/Росток/34 H7N1
8. А/утка/Онтарио/6118/68 H8N4
9. А/индюк/Висконсин( 1 /66) H9N2
10. А/цыпленок/Г ермания/49 H10N7
11. А/Утка/Англия/5 6 H11N6
12. А/утка/ Альберта/ 60/16 H12N5
13. А/черноголовый хохотун/Астрахань/142/7 H13N2
Кроме 13 подтипов Г А, все штаммы ВГП содержат в своей структуре НА или птичьего,
или человечьего, или лошадиного происхождения. Собственно птичьей НА известно 6 ти-
пов. Подтиповая классификация ВГП продолжается и по сегодняшний день, т.к. новые фак-
ты выделения их от птиц различных видов регистрируются ежегодно в различных регионах
земного шара. В 1971 г. была опубликована номенклатура вирусов гриппа А, рекомендо-
ванная группой экспертов ВОЗ. Согласно этой рекомендации каждый штамм обозначается
по месту и времени выделения, а в скобках указывается его АГ формула. Эта номенклатура
себя оправдала, однако накопившиеся за последние годы данные требуют ее пересмотра. В
1980 г. ВОЗ предложила новую номенклатуру ВГП. Предложено обозначать серотипы ГА и
НА последовательными номерами, независимо от происхождения вирусов. Таблица эталон-
ных штаммов ВГП свидетельствует о том, что изменения нуклеотидной последовательности
и, как следствие, замена аминокислотных остатков сопряжено с изменением патогенности
вируса гриппа в отношении птиц и КЭ. Так, например, изолят А/индюк/Висконсин/68
328
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
(H5N9) ВГП состоит из 2-х популяций вируса, имеющих разные гены NS и вызывающих
разные биологические реакции в КЭ: быструю (эмбриолетальную - /REL/) или медленную
(эмбриолетальную - /SEL/) летальность. Секвенирование показало, что гены NS вариантов
REL и SEL различаются лишь 2-мя нуклеотидами, что вызывает замену одного аминокис-
лотного остатка в белках NSIh NS2. Замена в NS1 нейтральна, а появление остатка гена в
NS2 приводило к сильному гидрофобному сдвигу. Таким образом, 2 природных варианта
гена NS влияют на скорость гибели зараженных КЭ, не затрагивая репликацию вируса (14).
Дикие водоплавающие птицы - резервуар различных подтипов ГА (Н) и нейраминидазы
(N) вируса гриппа. В этих популяциях заражения часто происходят там, где водоплавающие
птицы, свиньи и люди живут близко и за счет генной реассортации могут образовываться
новые более патогенные штаммы вируса гриппа (11). Анализ АГ свойств методами ИФА и
РТГА свидетельствует о родстве внутренних белков “человеческих” и “птичьих” вирусов
гриппа и различиях в структуре поверхностного гликопротеина - ГА. Вирус гриппа А с АГ
формулой H2N2 не выделятся от человека с 1968 г, но изолируется от птиц и, в случае ре-
версии, может стать эпидемическим (2). Выделенный в Японии в 1925-1926 г. ГА вирус чу-
мы птиц шт. Chiba имеет АГ состав Havl Neql и обозначен как вирус гриппа А/курица/
Япония/25 (HavlNeql) (20). Основные направления изучения АГ-вариабельности вируса
гриппа А птиц - это характеристика Г А и НА первичной структуры белков клеточных мем-
бран, которые служат мишенью для адсорбции вируса (18).
Антигенная активность. Вирусы гриппа индуцируют в организме больной и перебо-
левшей птицы АТ, обладающие анти-ГА- и КС свойствами. В экспериментальных условиях
специфические АТ можно получить на кроликах, крысах и морских свинках как на натив-
ный вирулентный вирус, так и на инактивированный р-пропиолактоном.
Экспериментальная инфекция. Вирусы КЧП (грипп А - H7N1, а также H5N3) пато-
генны для кур и цыплят при любом методе заражения. Белые мыши заболевают при зара-
жении в носовую полость и мозг. Некоторые штаммы токсичны при внутривенном введе-
нии. Экспериментальное заражение вирусом других подтипов иногда протекает бессим-
птомно. Экспериментальная инфекция у восприимчивых птиц зависит от вирулентности ви-
руса, степени его адаптации и сопутствующих инфекций (микоплазмоз, колибактериоз, ас-
пергиллёз и др.).
Культивирование. Все штаммы ВГП хорошо размножаются в КЭ при заражении в ал-
лантоисную или амниотическую полость. Накопление вируса зависит от вирулентности
штамма и степени его адаптации к этой системе. Все штаммы КЧП уже в 1-ом пассаже (при
выделении) вызывают гибель эмбрионов через 26-36 ч, по мере адаптации вирулентность их
возрастает, достигая 107-108 ЭЛД50/мл и выше. Вирус гриппа А6 слабовирулентен для эм-
брионов, и ГА-титр его возрастает. Одни штаммы ВГП после адаптации размножаются в
культуре клеток фибробластов КЭ, почек обезьян и других первично-трипсинизированных
культурах клеток. Другие дают в определённых клеточных культурах один цикл размноже-
ния, продуцируя инфекционный вирус. Так размножаются вирусы КЧП в L-клетках и неко-
торые штаммы гриппа птиц в диплоидных культурах клеток человека. Вирус КЧП, адапти-
рованный в культуре клеток WI-38, развивался в миелобластах цыплят, заражённых виру-
сом миелобластоза, и в первичных культурах клеток лёгких эмбриона человека. Большинст-
во штаммов вируса дают бляшки в первичной культуре клеток фибробластов.
Нейраминидазная активность. Нейраминидазная активность штаммов ВГП не зави-
сит от ГА- и инфекционной активности и не коррелирует с ними (5) .
ГА свойства. Все ВГП агглютинируют эритроциты кур, морских свинок, кроликов, ло-
шадей, овец и других животных. В отличие от вируса НБ штаммы вируса КЧП агглютини-
руют эритроциты лошади и овцы. Эго свойство используют для дифференциации выделен-
ных на эмбрионах штаммов вируса КЧП и НБ.
329
Глава VUI. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
Эталонные штаммы ВГП (смесь различных сероподтипов) обладают разной ГА- (1:64-
1:1024) и инфекционной активностью (5,28-8,70 ЭИД50/мл) при однотипных условиях нако-
пления (табл. VIII.3.)
Таблица VIII.3. Сравнительная характеристика ГА
и инфекционной активности штаммов
Вирусы Титр ГА ЭИДдомл NA актиность на 1 ГАЕ
А/цыпленок/Г ермания/49(Н10N7) 1:1024 6,27-7,66 1,64-10,5
А/утка/Англия/56(Н11N6) 1:128-1:512 5,66-7,80 42,0-299,0
А/утка/Чехословакия/ 5 6(H4N 6) 1:64-1:256 5,39-8,70 39,0-157,0
А/крачка/Ю. Африка/61(Н5№) 1:64-1:256 6,77-8,23 26,0-165,0
А/индюшка/Массачусетс/5 6(H6N2) 1:128-1:512 5,84-8,31 6,0-39,0
А/утка/У краина/63 (НЗ N 6 8) А/индюк/ О 1:126-1:256 5,28-7,66 85,0-390,0
нтарио/6118(H8N4) 1:128-1:512 6,59-8,0 1,2-2,58
NA-активность в условных единицах (у) у разных штаммов варьирует в пределах от 1,2
до 390 у. ГАд свойства проявляются с эритроцитами кур, при культивировании вируса в
культуре фибробластов КЭ.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источники инфекции - больная птица. Ин-
фекция передаётся воздушно-капельным путём. Больная птица выделяет вирус и с фекалия-
ми, что даёт возможность заражения птицы через инфицированный корм и воду. Установ-
лено, что распространять КЧП могут и дикие перелётные птицы. Так, высокопатогенный
вирус индюк/Англия/63 был занесён в Великобританию перелётными птицами. От больных
и мёртвых диких крачек выделен вирус, АГ родственный вирусу цыплёнок/Шотландия/59
(5-й подтип). Полагают, что 2 вспышки гриппа птиц в Шотландии были обусловлены уча-
стием перелётных крачек. Трудно объяснить, почему в США вирус гриппа выделяли от ин-
деек, а в Европе - от цыплят и кур. Показано, что вирус гриппа А (шт. FPV Росток) способен
репродуцироваться в организме комаров A. Egypti.
В Японии вирус гриппа выделен от диких водоплавающих птиц - лебедей, уток, чаек и
др., в том числе подтипов H7N7, H5N3, H10N4 и H2N2. Изучена патогенность для цыплят
91 штамма вируса гриппа. Большинство вирусных изолятов оказались патогенными для цы-
плят и только отдельные были практически апатогенны. Они относились к подтипам:
H13N1, H13N6, Hl 1N3, Hl 1N6 (13).
Особенно часто заболевают домашние птицы с ноября по март в районе Карачи, когда
тысячи птиц мигрируют из бывшего СССР через Афганистан и горные хребты в сторону
Пенджаба, Белудпастана и провинции Синд. Самым большим пристанищем птиц является
озеро Халей в 85 км от Карачи, а также меньшее по размеру озеро Дабей в 35 км от города.
Мигрирует около 70 видов птиц, главным образом водоплавающие - утки, пеликаны, фла-
минго и др. В поисках пищи они часто располагаются на отдых вокруг птицеферм и свалок -
обычно в октябре-ноябре регистрируется грипп птиц, инфекционный бронхит, инфекцион-
ный ларинготрахеит. К декабрю инфекции широко распространяются и с наступлением хо-
лодов у птиц выявляют колисептицемию, микоплазмоз, адено- и реовирусные инфекции. В
этот период гибнет до 30% бройлеров и резко снижается яйценоскость (15). Вирулентность
ВГП коррелирует с чувствительностью их ГА к клеточным протеазам. Наиболее вероятным
ферментом, расщепляющим ГА вирулентных вирусов является, фурин-процессирующая
пропротеин-эндопротеаза, родственная субтилизину (22). Показано, что способность расще-
пления ГА вирусов гриппа птиц в куриных фибробластах определяет их вирулентность (12).
330
Глава УШ. Family Orthomyxovindae Ортомиксовирусные инфекции
Обнаружена гетерогенность популяции ВГП. На молекулярном уровне различия между
вирусами были в неструктурном гене (14). Штаммы ВГП, выделенные в 1977-1979 гг. с АГ
характеристикой H1N1, характеризовались не только качественными, но и количественны-
ми изменениями ГА, в частности, изменением Г A-активности и термостабильности. Нейра-
минидазы ВГП оказались близкими, но неидентичными в АГ-отношении (7, 5а).
Вирусы гриппа A (H1N1) вызывали эпидемии гриппа на протяжении 2-х периодов:
1933-1957г. и с 1957 г. по настоящее время. Исследования Е.И.Исаевой и соавт. (3) показа-
ли, что одна общая детерминанта остается АГ стабильной в составе ГА-вирусов гриппа А
подтипа H1N1 начиная с 1933 г, в то время как другая является лабильной. Авторы сделали
вывод о нескольких путях дрейфа начального вируса А/СССР/090/77. Наиболее перспектив-
ным и иммунологически значимым представляется то изменение, которое обусловливается
одновременно сменой 2-х детерминант ГА, свидетельствуя о наиболее интенсивной эволю-
ционной изменчивости (3).
Спектр патогенности в естественных условиях. Он неоднороден и зависит от АГ
подтипа. Известны 2 подтипа ВГП: А5 и А7, вызывающих заболевание типа КЧП. Патоген-
ные штаммы, относящиеся к этим подтипам, разрушают протеазу многих клеток и активи-
зируют протеолиз, что и составляет сущность инфекционности вируса. Грипп А7 КЧП чаще
поражает птиц семейства куриных, менее восприимчивы водоплавающие птицы.
Дикие утки и др. виды водоплавающей птицы также чувствительны даже к самым сла-
бопатогенным штаммам ВГП и являются не только переносчиками инфекции, но и резер-
вуаром. Сезонные миграции диких птиц вызывают сезонные заболевания болотных птиц.
Проблема межвидовой передачи и реассортации между ВГП, свиней и человека еще не
разрешена. Из 14 подтипов вируса гриппа А только 3 обнаруживаются у человека (Hl, Н2 и
НЗ). Прошло уже 25 лет с тех пор как из человеческой популяции исчез подтип Н2 вируса
гриппа. Однако ген ГА Н2 циркулирует среди птичьих штаммов вируса гриппа (23).
ДИАГНОСТИКА
Поставить диагноз на грипп птиц можно путём выделения вируса и идентификации его
в РСК, PH и РТГА, а также выявления специфических АТ в процессе эпизоотии или по
прошествии её (ретроспективная диагностика). В нашей стране биопромышленность выпус-
кает 2 диагностических набора: а) набор специфических АГ и сывороток к ним для диагно-
стики гриппа птиц 13-и серотипов; б) диагностический набор для идентификации вируса НБ
и ГП (актуального эпизоотического типа). Диагностическими наборами пользуются в соот-
ветствии с наставлениями по их применению (5а, 6).
Выделение вируса
Взятие и подготовка материала. В качестве вируссодержащего материала используют се-
лезёнку, головной мозг, синусы, трахею, лёгкие, воздухоносные мешки, кишечник от боль-
ной птицы или свежих трупов. Материал в лабораторию доставляют в замороженном виде в
термосе со льдом. Инфекционные титры вируса в назальных смывах бывают максимальны-
ми через 2-4 дня после заражения птицы и достигают 105-107 ЭИД50/мл смыва. Реизолиро-
вать вирусы из клоачных смывов удаётся чаще всего на 5-8-й день после экспериментально-
го заражения птицы.
Заражение куриных эмбрионов. Испытуемую суспензию инокулируют 9-10-дн КЭ (не
менее 5 на одну пробу) в аллантоисную или амниотическую (лучше) полости общепринятым
методом и инкубируют в течение 72 ч. Экстраэмбриональную жидкость каждого эмбриона
раздельно проверяют на ГА-активность капельной РГА с 1%-ной взвесью эритроцитов кур.
При отсутствии положительной РГА проводят еще 3-5 слепых пассажей, используя для за-
ражения КЭ эмбриональную жидкость предыдущего пассажа. Если титры Г А низкие, про-
водят таким же образом еще 2-3 дополнительных пассажа. Проба испытуемого материала
считается отрицательной, если в 3-5 слепых пассажах не будет обнаружено ГА и патогенно-
го действия вируса (гибели КЭ). При положительной РГА проводят идентификацию выде-
ленного вируса.
331
Глава VTTT- Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
Заражение культуры клеток. В диагностической практике этот метод применяют ре-
же. Вирус после 2-5 пассажей хорошо развивается в культуре фибробластов КЭ. ЦПД обыч-
но проявляется через 24-48 ч (в зависимости от дозы и адаптации). Присутствие его уста-
навливают при помощи РГА и РГАд. Предложен ускоренный метод титрования инфекцион-
ности вируса гриппа в культуре клеток путем подсчета гемадсорбирующих клеток. Метод
позволяет получить результат через 8 ч после заражения.
Биопроба на цыплятах. Испытуемую суспензию инокулируют цыплятам 2-3-месячного
возраста. Летальную инфекцию у цыплят можно вызвать при любом методе заражения
(подкожно, внутримышечно, в мозг, конъюнктиву) подтипами Al, А7 и А5. Заражение per
os с кормом и водой удается непостоянно, лишь в случае высокой патогенности эпизоотиче-
ского изолята гриппа. Зараженные цыплята, как правило, гибнут через 36-72 ч в зависимо-
сти от дозы и вирулентности возбудителя.
Индикация и идентификация вируса. Для этой цели широко используют методы ИФ,
цитоскопию, биопробу (на птице и КЭ) и серологическую идентификацию. С помощью мо-
нАТ можно идентифицировать не только разные группы вирусов (ВГП и ПМВ), но и опре-
делять подтипы ВГП и серотипы ПМВ птиц, и даже штаммы внутри одного подтипа, а так-
же локализацию компонентов вириона в зараженных клетках (МРВГП - МА клонов 1С6,
5С10, N:2 - МА клоны 303 и т.д.). На основе монАТ можно готовить диагностические пре-
параты для выявления АГ и АТ в РТГА, НИФ, РСК, ИФА и др. реакциях (4).
РГА. Для индикации вируса в патологическом материале можно использовать РГА. На-
досадочную жидкость после центрифугирования суспензии проб из органов и тканей боль-
ной птицы, а также смывов исследуют в капельной или пробирочной РГА с 1%-ной суспен-
зией эритроцитов кур или 0,5%-ной взвесью эритроцитов морской свинки. Реакцию учиты-
вают через 20 мин и 1 ч. Специфичность определяют в РТГА.
Цитоскопия. Метод заключается в исследовании тканевых элементов в отпечатках, по-
лученных со слизистой оболочки верхних дыхательных путей (лучше) и органов. Препараты
высушивают и окрашивают одним из методов: по Романовскому, Пигаревскому, Быковско-
му и т. п. При окраске по Быковскому и Пигаревскому в цитоплазме клеток при гриппе
обычно обнаруживают тельца-включения ярко-красного цвета; при окраске по Романовско-
му - фиолетового цвета. Внутриклеточные включения находят не только в клетках цилинд-
рического эпителия, но и в цитоплазме макрофагов, лейкоцитов и плоского эпителия. В на-
стоящее время этот принцип исследования используется с применением люминесцентной
микроскопии.
Метод простого флюорохромирования. На мазки-отпечатки из органов и смывов на-
носят 1-2 капли рабочего раствора акридина оранжевого (1:10000), покрывают покровным
стеклом и свежий препарат (в течение 10 мин после приготовления) рассматривают в лю-
минесцентном микроскопе. Ядра клеток выявляются по изумрудно-зеленому свечению, РНК
плазмы клеток - в виде не резко ограниченных гранул красного или оранжевого цвета. В
препарате, имеющем вирус гриппа, выявляются включения в виде четко отграниченных яр-
ко-красных гранул в цитоплазме клеток (5,6).
Серологическая идентификация
Для идентификации гриппа млекопитающих и птиц наиболее простым и высоко досто-
верным методом является РТГА. PH - штаммоспецифическая и также высоко достоверная,
но используется в диагностике значительно реже. Ее обычно применяют при некоторых не-
ясных и спорных случаях.
РСК. Используют для определения типоспецифичности выделенного вируса, когда в
РТГА не удается установить родственных связей между выделенным и эталонными штам-
мами вируса гриппа по антисывороткам к ним. В этом случае в РСК с эталонными иммун-
ными сыворотками против вирусов гриппа типов А, В и С устанавливают типовую принад-
лежность штамма.
332
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
В последнее время для типирования нейраминидазы вируса начали применять РТНА, но
в диагностической ветеринарной практике она пока еще не применяется. Ее используют, в
основном, для изучения АГ связей различных штаммов вируса гриппа.
РТГА. Идентификацию испытуемого вируса проводят с набором эталонных штаммос-
пецифических гриппозных сывороток к его АГ вариантам. Для дифференциации в реакцию
вводят сыворотку против вируса НБ. РТГА ставят микро- или макрометодом по общеприня-
той методике.
ИФ. Может быть использована как экспресс-метод диагностики гриппа птиц. Препара-
ты готовят непосредственно ex tempore от убитой больной или свежепавшей птицы. Прямой
метод ИФ позволяет определять АГ ВГП в мазках-отпечатках тканей птиц, идентифициро-
вать АГ данного вируса из различных тканей организма, инкубационных яиц, печени зара-
женных эмбрионов и культур клеток фибробластов; выявить вирусный АГ даже в тех случа-
ях, когда вирус из пораженных тканей выделить не удается.
В ветеринарной диагностической практике для идентификации выделенного вируса РДП
не используют, так как необходимы концентрированные и очищенные АГ. В основном при-
меняют ее для изучения АГ структуры вирусов гриппа. Разработаны наборы для ИФА с мо-
нАТ, непосредственно обнаруживающие ГА, нуклеокапсидный или матриксный белки виру-
са гриппа. Идентификацию вирусспецифической нуклеиновой последовательности предла-
гается осуществлять ПЦР с 2-мя типами праймеров (на основе генов неструктурного белка и
ГА) (19). Тест стандартизован для определения АТ к ВГП в сыворотке крови у индеек.
Минимальные АГ различия между вариантами и родительским вирусом выявлялись
только монАТ, продуцируемыми клетками гибридомы PEG-1 или фрагментами селезенки
гипериммунных животных. МонАТ дают возможность точно проследить филогенетические
взаимоотношения между вирусными штаммами в составе субтипа, а в сочетании с методами
пептидного картирования и определения последовательности а.к. - выяснить молекулярную
структуру АГ участка ГА.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Обнаружение анти-ГА, ВНА и
КСА - надежный признак протекающей или уже прошедшей инфекции ГП в стаде.
РТГА. Исследование парных сывороток проводят с диагностической целью при ати-
пичном, часто вялом течении болезни с поражением органов дыхания. Сыворотку от диких
птиц на присутствие противогриппозных АТ исследуют при изучении роли перелетных птиц
в распространении гриппа. Обязательным условием для ретроспективной диагностики ГП
является одновременное исследование парных сывороток, так как для диагностических це-
лей имеет значение сравнительный титр АТ против вирусов различных серологических под-
типов в 1-й и 2-й пробах сыворотки. Первую пробу сыворотки хранят при 4°С или в замо-
роженном виде. Обе пробы исследуют одновременно. Перед постановкой реакций сыворот-
ки прогревают при 60°С 30 мин, а затем освобождают от термостабильных ингибиторов,
используя СОг, КЮ4 и др. методы. Если титр АТ во 2-й пробе сыворотки (через 10-14 дн
после заболевания) превышает не менее чем в 4 раза титр АТ к тому же типу вируса в 1-й
пробе, то РТГА считается положительной, подтверждающей диагноз гриппа птиц. При по-
становке РТГА с парными сыворотками больных птиц необходимо использовать не только
набор эталонных штаммов (например, к вирусам А/Fowl plague, A/Chick/Scotland, А/Turkey,
А/Duck), но и местные штаммы того птицехозяйства, где зарегистрирована болезнь. При
анализе результатов РТГА необходимо указывать, сколько сывороток было с низким, сред-
ним и высоким титром к тому или иному штамму вируса гриппа. В ряде случаев вместо ин-
дивидуальных сывороток показатели иммунитета стада (после переболевания или прививки
живой вакциной) можно изучить на сыворотках, полученных от нескольких птиц. В этих
случаях испытуемые сыворотки, взятые от отдельных птиц, нужно соединять в равных объ-
емах. На протяжении опыта (120 дн после реконвалесценции) в сыворотках кур находили
анти-ГА: до 75-го дня титры сохранялись примерно на одном уровне (5-5,8 log2), а в даль-
нейшем снижались (до 4,4-4,6 log?).
333
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
РСК применяют для обнаружения АГ и АТ в целях ранней и ретроспективной диагно-
стики гриппа. Ставят с аллантоисными жидкостями КЭ или с очищенными диагностикума-
ми. РДП широкого применения не нашла, так как необходимы высокие концентрации чис-
тых АГ. Среди исследователей нет единого мнения о чувствительности этой реакции. Неко-
торые авторы указывают, что чувствительность РДП сравнительно невысока, поскольку
достоверные положительные результаты получали лишь при исследовании сывороток с тит-
ром АТ в РТГА 1:80 и выше.
Реакция радиального гемолиза. В настоящее время используется для серо-эпидемио-
логических исследований и при оценке эффективности противогриппозных вакцин. РРГ с
ВГ А обладает выраженной штаммовой специфичностью: диаметр зон гемолиза с гомоло-
гичными АГ при исследовании сывороток хорьков, зараженных 6-ю различными вирусами,
были в 1,5-3 раза больше, чем с гетерологичными. При правильном подборе штамма РРГ
может быть с успехом использована для определения анти-ГА.
Таблица VIII.4. Лабораторные методы дифференциации КЧП и НБ
Маркеры Вирусы КЧП (H7N1) Вирус НБ
Экспресс-диагностика (РГА)
взрослых кур + -
ЦЫПЛЯТ + +
РГА с эритроцитами:
петуха + +
лошади + -
кошки + -
Чувствительность ГА к действию азотистой кислоты. + -
Адсорбция ГА на формалинизированных эритроцитах, предварительно обработанных:: вирусом КЧП - +
вирусом НБ + -
Лабораторная диагностика: Выделение вируса на КЭ Сроки гибели заражённых: + +
эмбрионов (зависит от дозы) До 30 ч Более 30 ч
ПТИЦЫ 48 ч 96 ч
Патогенность для: мышей - голубей - Титр ГА в ХАО/титр ГА в аллантоисной жидкости Чувствительность к фотодинамическому действию мети- леновой сини + >1 + + <1
Обозначения: (+) - положительные результаты;
(-) - отрицательные результаты
Показано хорошее совпадение результатов титрования АТ в ELISA, РСК и ИФ. Однако
в ELISA значительно выше (титр 1:481-1:1520), чем в РСК и РИФ. Сенсибилизацию лунок
панелей проводят РНК-АГ вируса гриппа А. Предложен новый метод приготовления АТ
эритроцитарных диагностикумов к вирусам гриппа, которые с успехом могут быть изготов-
лены на основе любых штаммов вируса гриппа. Они позволяют определять типовую при-
надлежность эпизоотических и межэпизоотических штаммов ВГП, свиней и лошадей (1).
В практической работе врачу ветеринарной лаборатории, возможно, придется встретиться
не только с гриппом кур и уток, но и с гриппом индеек. Умея диагностировать грипп кур и
334
Глава УПТ- Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
уток, имея набор диагностикумов, врач лаборатории при необходимости сможет поставить
диагноз при гриппозной инфекции индеек.
При респираторных вирусных болезнях КРС, свиней и птиц (грипп, парагрипп, РС-
инфекция) разработан направленный тест. Это новый иммуноферментный мембранный тест
быстрого обнаружения вирусов гриппа в носоглоточных смывах. Чувствительность направ-
ленного метода Flu-A составляла 90%. С помощью этого теста более легко обнаруживается
клеточно-ассоциированный АГ, присутствующий в клинических пробах, чем свободный ви-
рус. С помощью Flu-A теста удалось обнаружить вирусы гриппа А птиц (субтипы ГА НЗ и
Н6) и свиней (H1N1) в клоачных смывах и гомогенатах (16).
Дифференциальная диагностика. КЧП (H7N1) и другие формы гриппа птиц следует
отличать от НБ, ИБ, ИЛТ, гемофилеза и респираторного микоплазмоза. Для идентификации
вирусов НБ и КЧП используется диагностический набор (табл.УША).
В сомнительных случаях для дифференциального диагноза ставят PH на КЭ и заражают
птиц, иммунных к вирусу НБ.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
АГ изменчивость ВГП, затрагивающая поверхностные белки вириона - ГА и нейрами-
нидазу, изменяющиеся независимо друг от друга, создает существенные трудности в реше-
нии проблемы вакцинопрофилактики. Поэтому необходимы своевременное выделение но-
вых эпизоотических вариантов вируса и подбор адекватных вакцинных штаммов, для чего
необходимо применять эффективный метод оценки АГ соответствия вакцинных штаммов,
циркулирующим эпизоотическим. Для этого широко используют радиоиммунологический
метод. Для профилактики гриппа, вызываемого вирусом H7N1, применяют живые вакцины
из аттенуированных шт. Ру и Р5. С целью профилактики гриппа птиц, вызываемого вируса-
ми подтипов А1-А8, применяют активную инактивированную вакцину, которая производит-
ся биофабриками (5а). Для специфической профилактики в Англии применяют живую ней-
раминидазо-М-специфическую вакцину, преимущество которой в том, что она не интерфе-
рирует при серологической диагностике болезни в РЗГА. Разработан метод получения ре-
комбинантного ВГП, который экспрессирует иммуногенные белки и выполняет функцию
живой вакцины для домашней птицы (10). В США успешно применяют масляно-
эмульсионную вакцину против ГП на цыплятах-бройлерах и курах-несушках.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Переболевшая классиче-
ской чумой птица иммунна в течение 1-2 лет. В сыворотке крови птиц-реконвалесцентов по-
стоянно обнаруживают АТ, обладающие КС, анти-ГА и ВН свойствами. Какие из этих
свойств появляются раньше и в какой последовательности происходит смена их в иммунных
сыворотках неизвестно. Обычно ранние АТ (анти-ГА) чётко обнаруживаются в РТГА в пер-
вые 3-4 мес после переболевания или иммунизации птицы. ВНА выявляются в течение 10-
12 мес. Корреляция между серологическими показателями и фактической резистентностью
переболевшей или активно иммунизированной птицы не изучена, особенно в отношении
гриппа, вызываемого подтипом МИ А2 - А8.
Инактивированная p-пропиолактоновая ГОА-вакцина против КЧП индуцирует образо-
вание АТ в титрах 1:16- 1:64 и предохраняет от гибели птицу при заражении 5 х106,5 ЭЛД50
вируса даже через 33 нед после прививки. Возбудитель не обнаруживается в крови, кале,
моче, но выделяется из лёгких привитых птиц через 7-8 ч после заражения. Установлена
корреляция между титрами поствакцинальных АТ и резистентностью птиц к эксперимен-
тальному заражению через 5-7 нед после прививки инактивированной вакциной. При испы-
тании инактивированных вакцин (из шт. ГП-1, ГП-4, ГП-5, ГП-8) АТ выявляли на 5-е сут
после первого введения вакцины, титры их достигали максимума к 7-му дню после 2-й при-
вивки. Показателем специфического иммунитета служило наличие в сыворотке крови при-
витой птицы анти-ГА в титрах 1:16 и ВНА в титрах 1:2 и 1:4. Длительность иммунитета со-
ставляла 6 мес у взрослых птиц и 4 мес у молодняка. У цыплят, выведенных из яиц перебо-
335
Глава VDI. Family Orthomyxoviiidae Ортомиксовирусные инфекции
девших кур, пассивные анти-ГА исчезали к 20-му дню. В эксперименте была показана об-
ратная зависимость распространения вируса в органах и тканях от уровня анти-ГА.
ГРИПП УТОК
Duck influenza, Duck flu (англ.); Euten influenza (нем.);
Influenza des canard (франц.)
Грипп уток (инфекционный синусит, заразный насморк, заразный катар дыхательных
путей) - вирусная инфекционная контагиозная болезнь утят, проявляющаяся слабостью,
воспалением слизистых оболочек носа, подглазничных синусов, нарушением дыхания, се-
розно-катаральным ринитом и появлением подглазничных воспалительных отёков (5, 6).
Впервые болезнь описали Уолкер и Банистер (1953) в Канаде. В настоящее время она
зарегистрирована в США, Канаде, СНГ, Чехословакии, Англии, Италии, Венгрии и других
странах. В бывшем СССР инфекция впервые описана на Украине в 1958 г.
Симптомы и патологоанатомические изменения. Болеют в основном утята 15-20-дн
возраста более поздних выводов (июль-сентябрь). Возникновению болезни способствуют
неблагоприятные условия, плохое содержание и кормление. При естественном течении бо-
лезни инкубационный период длиться 2-5 дн. У больных утят отмечают слабость, угнетение,
слёзотечение, частичный, а затем полный отказ от корма. Из носовых пазух при надавлива-
нии выделяется слизь. Утята чихают, дыхание затруднённое. Развивается конъюнктивит, в
поражённых синусах скапливается прозрачная бурая жидкость. В случаях затяжной болезни
в подглазничных синусах накапливается экссудат, появляются 1- или 2-сторонние подглаз-
ничные припухлости. Часто синусит осложняется паратифом, колибациллёзом и гельмин-
тозной инвазией. Характерны припадки судорог, после которых утёнок погибает. Часто на-
ступает паралич шеи, конечностей, крыльев. Испражнения жидкие, зелёного цвета. Забо-
левшие утята отстают в росте, выздоровевшие плохо растут и не поддаются откорму. Гибнут
до 50% заболевших.
Патологоанатомические изменения, в основном, отмечают в верхних дыхательных пу-
тях. Трупы истощены, носовые отверстия заклеены засохшим экссудатом. Слизистая обо-
лочка носа и придаточных полостей гиперемирована, покрыта слизью, которая содержит
сгустки фибрина. Носовые ходы и подглазничные синусы заполнены серовато-жёлтой фиб-
ринозной массой. Сердечная сорочка растянута экссудатом и сгустками фибрина, иногда
перикард срастается отдельными тяжами с миокардом. Фибринозные массы часто покры-
вают сердечную сорочку снаружи и склеивают её с прилегающими органами и тканями, ча-
ще всего с печенью. Печень увеличена и покрыта фибринозной плёнкой. В клетках печени и
РЭС могут встречаться тельца-включения, окрашиваемые тетрацин-фуксином и по методу
Нобле. При гистологическом исследовании отмечают некрозы печёночных клеток, гипере-
мию и точечные кровоизлияния. Если болезнь протекает остро, изменения находят только
на слизистой оболочке носа и подглазничных синусов.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Устойчивость. Вирус инактивируется при 56 и 60°С за 20 мин, при 37°С за 48 ч. При
4°С и -15°С вируссодержащая аллантоисная жидкость не теряет инфекционности в течение
года (срок наблюдения). Прямые солнечные лучи обезвреживают его за 55 ч, а рассеянный
свет - за 13 сут. Лучи БУВ-30 обезвреживают вирус в течение 25 мин. Из дезинфицирующих
веществ наиболее сильным вирулицидным действием обладают 3%-ный р-р NaOH, 3-5%-
ные эмульсии креолина и 5%-ный р-р фенола. На вирус губительно действуют формальде-
гид 1:4000, р-ры кислот, дезоксихолат натрия, додецилсульфат, ионы NH4+ и другие вещест-
ва. Он чувствителен к эфиру, но хорошо сохраняется при низких температурах и в лиофили-
зированном состоянии.
336
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусвые инфекции
Антигенная вариабельность и родство. Известны штаммы вируса гриппа уток (ВГУ):
А/утка/Англия/56(НЗГИ), А/утка/Чехословакия/56 (H4N1), А/утка /Украина/1/63 (H7N2).
Выявлено родство по нейраминидазе между ВГ уток и человека А2/Гонконг/68.
Локализация вируса. Вирус содержится в экссудате гортани, подглазничных синусов,
в соскобах со слизистой оболочки носа, лёгких, трахеи. Выделяется с носовыми истечения-
ми, слюной и яйцами. Длительность вирусоносительства не изучена.
Антигенная активность. ВГУ вызывает образование ПА, КСА, анти-ГА и ВНА у кур,
уток, крыс, морских свинок, кроликов, белых мышей и других животных. ВГУ (шт.
A/Duck/czech/56) обладает низкой нейраминидазной активностью.
Экспериментальная инфекция. В экспериментальных условиях к ВГУ восприимчивы
утята до 25-дн возраста и белые мыши. Интраназальное, конъюнктивальное или внутримы-
шечное введение вируса через 5-10 дн может вызвать у утят острое заболевание с симпто-
мами естественной инфекции, однако вызвать экспериментальную инфекцию не всегда уда-
ётся. Для этого нужно создать им неблагоприятные условия содержания - переохлаждение,
сырость, скученность, иногда наличие паратифозной инфекции. Экспериментальную инфек-
цию удаётся вызвать также у мышей. Однако не все штаммы ВГУ патогенны для них.
Культивирование. ВГУ можно пассировать на утятах до 25-дн возраста. Хорошо раз-
множается он на КЭ 9-11-дн возраста и утиных эмбрионах 14- 15-дн возраста при заражении
на ХАО и в аллантоисную полость. Уже в 1-х пассажах проявляет ГА активность и накап-
ливается в титрах 104-10б ЭИД50/МЛ, вызывая в течение 48-72 ч гибель 40-90% эмбрионов
независимо от способа заражения. Вирус накапливается в экстраэмбриональной жидкости,
оболочках, лёгких и головном мозге заражённых эмбрионов. Патологические изменения у
инфицированных эмбрионов, в основном, характеризуются гиперемией, кровоизлияниями
на коже, в области головы, шеи и конечностей. Титры вируса в аллантоисной жидкости дос-
тигают 107 ЭИДз0/мл.
ГА свойства. Спектр ГА свойств отдельных штаммов ВГУ различен (табл.VIII.5.).
Таблица VIII. 5. Сравнительная гемагглютинирующая активность
двух штаммов вируса гриппа уток
Эритроциты Шт.А/утка/Чехо словакия/56 Шт. А/утка/ Англия/56 Эритроциты Шт. А/утка/ Чехо- словакия/56 Шт. А/утка/ Англия/56
Кур + + Морских свинок + +
Кроликов + 0 Мышей + 0
Лошадей + 0 Кошек + 0
Уток + + Овец + 0
Крыс + 0 Коров + 0
Человека + + Свиней + 0
Гусей + + Хомяков + 0
Голубей + +
Выделенные на территории бывшего СССР 4 штамма ВГУ проявили чёткую ГА актив-
ность по отношению к эритроцитам кур, уток, гусей, индеек, голубей, морских свинок, бе-
лых крыс, белых мышей, кроликов, овец, лошадей, КРС, человека и озёрной лягушки в тит-
рах до 1:2048. В 1-х пассажах вируссодержащая экстраэмбриональная жидкость утиных эм-
брионов обычно не обладает ГА свойствами. ГА вируса А/Утка/Чехословакия/56 чувстви-
тельны к 2%-ному р-ру трипсина. Шт. A/Утка/Англия/56 имеет терморезистентные ГА.
Гемадсорбирующие свойства такие же, как у ВГ кур и индеек.
22 Зак. № 171
337
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Основной источник вируса - больные и пере-
болевшие птицы. Заражение происходит аэрогенным путём при контакте здоровых утят с
больными и орально с кормом и водой. Возможна передача вируса через яйцо.
Спектр патогенности в естественных условиях. Наиболее восприимчивы утята 1-24-
дн возраста. Цыплята, гусята, индюшата клинически не болеют.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании выделения вируса из органов павших и истечений больных
утят. Вирус идентифицируют в РТГА. Прошедшую инфекцию гриппа уток устанавливают
по обнаружению специфических АТ РТГА или PH (ретроспективная диагностика). В сомни-
тельных случаях иногда ставят биопробу на утятах 5-8-дн возраста, для чего используют со-
скобы со слизистой оболочки носа, трахеи и экссудат подглазничных синусов. Испытуемый
материал инокулируют интраназально. Грипп утят необходимо дифференцировать от пара-
тифа, гепатита, авитаминоза и НБ. Лабораторные методы диагностики гриппа уток анало-
гичны методам диагностики гриппа кур.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие утята приобретают иммунитет, продолжительность которого не установ-
лена, поскольку по мере роста утят развивается и возрастная резистентность к вирусу. В сы-
воротке крови реконвалесцентов обнаруживают АТ - анти-ГА. Иммунизация инактивиро-
ванной вакциной против гриппа кур полностью защищает птиц от гомологичного вируса,
частично - от гетерологичного штамма с идентичным ГА и слабо - от заражения гетероло-
гичным вирусом, имеющим нейраминидазу, отличную от того вируса, из которого приго-
товлена вакцина. Серологические поствакцинальные реакции у уток на прививку инактиви-
рованной вакциной не изучены.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ (к статьям «Грипп птиц» и «Грипп уток»)
Х.Жуматов К.Х. и др. Докл. АН Респ. Казахстан , 1992, 4, 4 :48. 2.3айцева А.А. и др.
Тез. интерн, вир. конф. мол. уч. и студ, КГУ Алма-Ата, 1990 :7. 3. Исаева Е.И. и др. Вопр.
вирусол., 1991, 1 :7. 4.Митин Н.И. и др. Ветеринария 1991, 10 :23. б.Мунтяну Л.Н. Канд,
дисс., М., MBA, 1989. 5а.Осидзе Н.Г. Автореф. докг. дисс., М. MBA, 1980. 6.Родин Ю.В. и
др. Сб. н. труд., ВГНКИ, 1991, 53 :80. ба.Рамишвили Л.С. и др. Ветеринария, 1991, 1 :27.
7.Сургучева И.М. Тез. докл. н. конф. ВНИИВВиМ 1990, : 136. 8.Сюрин В.Н. и др. Диагн.
вирус, болез. живот. Агропромиздат, 1991. 9.Фомина Н.В. и др. Вирусы животных, М.,
MBA, 1991. lO.Cohen Lowrenu.et.al. Therion Biol Corp Патент 237285, опубл. 03. 3. 92.
ll.De Boer G.F. et.al. Tijdschr diergen 1992, 117, 24 :735. 12.Horimoto T. et.al. J Virol 1994,
68, 5 :312O. 13.Otsuki K. et.al. Vet Microbiol 1988, 18, 3/4 :357. 14.Perdne M. Virus Res 1992,
23, 3 :223. 15.Qureshi A.A. Paultry Sc 1988, 4, 5 :34. 16.Ryan-Pairer K. J Clin Microb 1992, 30,
5 :1072. 17.Santer C. Experientia 1989, 45 :594. 18.Skenel J. MRC News 1993, 59 -.32.
19.Sominina A. A. et.al. Int Symp lOOYeas of Virol St-Peterburg, 1992, M. :103. 2O.Sugimura T.
et.al. Nat Inst Anim Health Quart 1981, 21, 2 :104. 21.Swayne D. et.al. J Avian Pathol, 1994,
23, 2 :345. 22.Walker J. et.al. J Viral, 1994, 68, 2 :1213.
ГРИПП ЛОШАДЕЙ
Influenza equi (лат.); Epizootic cough in horses, Equine influenza (англ.);
Seuchenhafter Husten, Hoppegartener Husten, Pferdegrippe, Pferdeinfluenza (нем.);
Bronchite infectieuse on epizootique (франц.)
Грипп лошадей (ГЛ, - заразный катар верхних дыхательных путей, инфлюэнца лоша-
дей), - остро протекающая высоко контагиозная болезнь лошадей, характеризующаяся крат-
ковременной лихорадкой, угнетением, конъюнктивитом, слезотечением, катаром верхних
дыхательных путей, сухим, отрывистым, глубоким и болезненным кашлем. Болезнь сопро-
338
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
вождается ларинготрахеитом, бронхитом и в тяжелых случаях пневмонией. Эпизоотии ГЛ
описаны задолго до выделения вирусов. В настоящее время они регистрируются во всех
странах Европы, в США, Канаде, СНГ и других странах. В 1969г. во время эпизоотии ГЛ в
СССР было выделено несколько эпизоотических штаммов вируса, в АГ-отношении родст-
венных ВГЛ А/лошадь/2/Майами/1963. Тяжелая эпизоотия ГЛ в мае 1993 г. во Внутренней
Монголии и Китае, распространившаяся среди мулов и ослов, породила вопрос - не являет-
ся ли её возбудителем вирус, сходный с вирусом гриппа птиц ( 86).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод продолжается 1-3 дн. На 2-е сут температура внезапно повышается до 39-40°С и выше
и держится до 4-6 дн. Дыхание и пульс учащаются, аппетит ухудшается или пропадает, по-
являются сухой кашель и одышка. Впоследствии кашель становится сухим и болезненным,
дыхание - жёстким, в лёгких прослушиваются бронхиальные хрипы и крепитация. Конъ-
юнктива гиперемирована, влажная и отёчная. На 3-й день болезни появляется серозное ис-
течение из носа, которое сменяется серозно-слизистым, а затем слизисто-гнойным. При
пальпации можно отметить болезненность трахеи, увеличение и чувствительность регио-
нарных лимфоузлов, которые иногда не абсцедируют. Конъюнктивит, ринит и кашель -
наиболее характерные клинические признаки ГЛ. Течение болезни во многом зависит от ус-
ловий содержания и эксплуатации животных. Оиа тяжело протекает у лошадей-продуцентов
гипериммунных сывороток или при смешанной вирусной инфекции, например, на фоне
ИНАН. Грипп иногда может быть причиной абортов в 1-й половине жеребости. Он проявля-
ется внезапно, без видимых патологических симптомов. При злокачественной форме гриппа
отмечалась гибель лошадей (4,4%); одни из них погибали внезапно на 2-3-й день после по-
вышения температуры тела, у других смерть наступала в результате развития плевропнев-
монии. При вскрытии трупов отмечают гиперемию, набухание и отёчность конъюнктивы и
слизистой оболочки носа, в лёгких - пневмонические участки розовато-серого, серо-красного
или сероватого цвета. Если болезнь затягивается, то эти участки, сливаясь вместе, образуют
сплошные поражения. На разрезе участка на общем фоне розового или тёмно-красного цве-
та выделяются различной величины и формы беловатые и сероватые очажки. Из них высту-
пает полужидкое беловато-серое, серозно-слизистое или слизисто-гнойное содержимое.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделен и описан в 1956 г. в Чехословакии. В США в 1963 г. был выде-
лен вирус подтипа 2. Различий в структуре вирионов ГЛ и гриппа А человека не обнаруже-
но. В СССР ВГЛ изолирован в 1969 г. (2,3).
Устойчивость. К воздействию физико-химических факторов у ВГЛ, примерно, такая
же, как у гриппа человека типа А. Вируссодержащие суспензии теряют активность при ком-
натной температуре за 1 сут , при 4°С - 2-3 мес; при -20°С вирус сохраняет активность не-
скольких лет. УФ-лучи его быстро инактивируют. Распылённый в воздухе вирус погибает
при действии активного хлора в концентрации 5-15 мг на 1 м3 воздуха.
Антигенная вариабельность и родство. Согласно современной классификации все
выделенные штаммы ВГЛ относятся к роду А (табл.УШ.6.), Некоторые вирусы гриппа А
птиц содержат нейраминнзаду, АГ связанную с таковой у ВГЛ.
Таблица VIII.6. Подтипы гемагглютинирующих и нейраминидазных
антигенов вируса гриппа лошадей
Подтип ГА Эталонный штамм Подтип НА Эталонный штамм
Н7 НЗ А/лошадь/Прага/1/5 6 А/лошадь/Майами/1/63 N7 N8 А/лошадь/1/56/ H7N7 А/лошадь/Майами/ H3N8
22*
339
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусшле инфекции
Некоторые штаммы вируса гриппа уток оказались родственны ВГЛ (2, 3, 4). Между
штаммами ВГЛ и уток существуют 2-сторонние и 1-сторонние АГ связи, что также свиде-
тельствует о возможности обмена компонентами вирусов гриппа в природе. В последние го-
ды во многих странах мира активно циркулирует ВГЛ с формулой H3N8 и, в частности,
А/лошадь/2/Битца-85. С помощью монАТ в ИФА с различными штаммами ВГЛ выявлены
изменения в ГА НЗ у свежих изолятов в сравнении с прототипными штаммами (1). Уста-
новлено АГ- родство ВГЛ и человека в РТГА (А/Ленинград/Н2К2 и А/Бангкок/1/79) (6).
При исследовании проб сыворотки крови лошадей, перенесших гриппозную инфекцию
в 1993 г. во Внутренней Монголии и Китае, получены свидетельства продолжающейся цир-
куляции вируса, подобного вирусу гриппа птиц A (Equine/ Julin/1/89(H3N8 Equ/Julin). Се-
рологические данные о продолжающейся циркуляции у лошадей вируса H3N8, сходного с
вирусом птиц, указывает на возможность самостоятельного существования этого вируса у
лошадей в Азии (86).
Локализация вируса. У естественно больных лошадей вирус локализуется в трахее,
бронхах, ткани лёгких, слизистой оболочке носа, гортани, в период гипертермии - в крови.
Больные животные выделяют вирус с выдыхаемым воздухом, носовыми выделениями, сле-
зами, иногда с фекалиями и мочой.
Антигенная активность. У переболевших лошадей обнаруживают анти-ГА, ВНА и
КСА, которые выявляются в РТГА, PH и РСК.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится у лошадей и мышей
(предварительно адаптированными к ним штаммами).
Культивирование. Вирус хорошо репродуцируется в КЭ. Максимальный титр его дос-
тигает к 72 ч. Содержится в равных титрах в экстраэмбриональной жидкости и оболочках
эмбриона. Заражённые эмбрионы обычно не погибают. Вирус, выделенный на КЭ, обычно
легко адаптируется к клеткам почек обезьян. В монослойной культуре клеток эмбриона сви-
ньи 2 подтипа ВГЛ - А/Прага (H7N7) и А/Майами (H3N8) - образуют бляшки (5, 6). Пока-
зана способность вируса гриппа А лошадей A/equi2/Kentucky 81 размножаться в культуре
клеток МДСК. ЦПД вируса наблюдали через 24 ч после заражения (10).
ГА свойства. По способности агглютинировать эритроциты различных видов полевые
штаммы ВГЛ можно разделить на 2 группы, соответствующие 2-м АГ подгруппам (табл.
VIIL7.). Установлено, что вирусы гриппа человека A2/Sing/57 и А/Equi/ Прага/56 имеют
идентичный ГА компонент - АГ эритроциты телят, лошадей и свиней. Сыворотки лошадей,
кур, белых крыс, белых мышей не содержат ингибиторов к отечественным и эталонным
штаммам ВГЛ.
Таблица VIII.7. Сравнительный анализ гемагглютинирующей
активности штаммов двух групп
Эритро- циты Шт. подтипа Н7А/ Equi/npara/56 Шт. подтипа N3A/Equi/ Майами/63 Эритроциты Шт. подтипа H7A/Equi/ Прага/56 Шт. подтипа N3A/Equi/ Майами/63
Человека + + Мыши + ±
Курицы + + Кошки + 0
Утки + + Овцы + 0
Гуся + + Теленка + 0
Голубя + + Коровы + 0
Мор. свинки + + Лошади + 0
Собаки + + Свиньи + 0
Кролика + 0 Хомячка + 0
Крысы + ±
340
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
ГА активность отечественных и эталонных штаммов ВГЛ при 37°С сохранялась на дос-
таточно высоком уровне (1:64) в течение 10 сут.
ГАд свойства. Предложен ускоренный метод титрования ВГЛ по подсчёту гемадсор-
бирующих клеток. Этот метод при использовании высокочувствительной перевиваемой ли-
нии клеток МДСК (почки собак) и 0,4%-ной взвеси эритроцитов морской свинки обеспечи-
вает получение результатов уже через 8 ч после заражения.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. ГЛ, как и грипп людей, передаётся воздушно-
капельным путём. Источник инфекции - больные животные.
Спектр патогенности в естественных условиях. ВГЛ рассматриваются как патоген-
ные для человека. Вирусом А/лошадь/ 2/63 удавалось заражать людей. В свою очередь и
вирус гриппа человека может развиваться в организме лошадей.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании симптомов болезни, эпизоотологических данных, патоло-
гоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Раннюю
! (выделение вируса и его идентификация с помощью серологических реакций) и ретроспек-
тивную (по обнаружению анти-ГА, ВНА и КСА) диагностику ВГЛ проводят также, как ди-
, агностику гриппа людей, свиней и птиц.
Выделение вируса. Материалом для исследования служат выделения слизистой обо-
лочки носа (смывы) от больных животных или бронхиальный экссудат и кусочки лёгких от
павших животных. Инфекционный материал в лаборатории исследуют как можно быстрее.
Если в течение 6-8 ч сделать это невозможно, пробы следует заморозить до -60°С и хранить.
Вирус чаще всего выделяют в КЭ 10-12-дн возраста, которые заражают обычно одно-
временно в полость алантоиса и амниона, инкубируют в течение 2-4 дн при температуре 33-
35°С, затем жидкость исследуют в РГА. При отрицательном результате проводят дальней-
шие пассажи в аллантоисную полость, используя суспензию лёгких эмбрионов. Вирус
A/Equi/2 обычно выделяется после 1-2-х пассажей на эмбрионах; выделение же вируса
Д/Equi/1 более сложно и требует нескольких «слепых» пассажей (5,7).
Индикация и идентификация вируса
Проводят методами, используемыми при ГП и ГС. Для идентификации полевых штам-
мов ГЛ их вначале адаптируют к КЭ, определяют титр ГА и затем используют в РТГА. ИФ
- надёжный метод ранней диагностики. АГ обнаруживается в цитоплазме клеток.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Ретроспективный диагноз на ин-
фекцию гриппа среди лошадей устанавливают исследованием их сывороток в РТГА с заве-
домо активными штаммами ВГЛ, принадлежащим и к 2-м АГ подтипам. О длительности
циркуляции АТ в организме лошадей-реконвалесцентов нет точных данных. Известно лишь,
что к концу 1-й нед после переболевания в сыворотке крови появляются АТ, титр которых
возрастает. После вспышки ГЛ выявляли анти-ГА в титрах 1:128-1:512. В Болгарии разра-
ботан набор для выявления подтипов ВГЛ с помощью РТГА (8а). Сыворотки для РСК инак-
тивируют при температуре 56°С в течение 30 мин. Сыворотки, предназначенные для иссле-
дования в РТГА, инактивируют при 60°С в течение 30 мин, а затем дополнительно воздей-
ствуют KIO для удаления неспецифических ингибиторов. Уровень АТ определяют и в PH на
КЭ или культуре клеток почки телёнка, но метод дорогостоящий и отнимает много времени.
Дифференциальная диагностика. Особое значение имеет дифференциация гриппа от
ринопневмонии и артериита лошадей. Массовые аборты и преждевременная выжеребка с
рождением нежизнеспособных жеребят, часто с признаками бронхопневмонии, дают осно-
вание заподозрить ринопневмонию. Выделенный вирус надёжно дифференцируется с пози-
тивными сыворотками гриппа в РТГА и ринопневмонии. Контагиозная плевропневмония,
гели протекает типично, то сопровождается симптомами плевропневмонии, серозной ин-
фильтрацией подкожной клетчатки и сухожильных влагалищ, при атипичном течении ха-
341
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
растеризуется как гриппоподобная непродолжительная лихорадочная болезнь. Восприимчи-
вы к ней лошади старше года. К тому же длительность энзоотий этих инфекций различна,
иногда плевропневмония носит стационарный характер. Распространяется болезнь чаще
медленно, прерывисто, тогда как для гриппа свойственны высокая контагиозность и быст-
рый охват большого числа животных.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Два подтипа ВГЛ различаются не только серологически, но и иммунологически. Лоша-
ди, переболевшие гриппом, вызванным вирусом одного подтипа, не приобретают иммуни-
тета к вирусу другого подтипа. Иммунитет у реконвалесцентов не более года. Жеребята при-
обретают пассивный иммунитет за счёт материнских АТ. Вакцины против ГЛ, содержащие
цельный инактивированный вирус и адъювант Coclomer, стимулируют у пони более выра-
женный и длительно сохраняющийся уровень АТ к ГА, чем аналогичные вакцины, содер-
жащие в качестве адъюванта фосфат алюминия. Установлена обратная корреляция между
уровнем антител, выявляемых методом радиального гемолиза, длительностью выделения
вируса и проявлением клинических симптомов заболевания (9).
В нашей стране для профилактики ГЛ применяют поливалентную инактивированную
вакцину. Жеребят вакцинируют с 3-мес возраста, жеребых кобыл - не позднее чем за 3 мес
до выжеребки 2-кратно с интервалом 4-6 нед. Иммунитет наступает через 14 дн после 2-й
вакцинации. Далее лошадей ревакцинируют через каждые 12 мес однократно. Живые вак-
цины для профилактики ГЛ не применяют. Эффективность вакцинации зависит от АГ из-
менчивости вируса. Со времени выделения первоначальных изолятов появились АГ-
варианты вируса, отличающиеся от прототипов. Получена субъединичная липосомная вак-
цина против ГЛ от 2-го подтипа шт. А2 (Equi Myami 1/63/H3N8). Содержащиеся в ней субъ-
единицы ГА (НА) и нейраминидаза (NA), получены с помощью неионного детергента ок-
тил-Ь-д-гликозида. Вакцина испытывалась на 23 лошадях. Её высокая иммуногенная актив-
ность (79,0%) установлена в РТГА (78,2%) и нейраминидазной активности (73,9%) (2,3).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Поствакцинальный имму-
нитет у лошадей можно оценивать по кинетике анти-ГА и ВНА. В результате введения же-
ребятам инактивированного вируса двух подтипов образуются анти-ГА и КСА, которые со-
храняются в течение 3 лет при условии, что животных ежегодно ревакцинируют. Образова-
ние АТ на инактивированную вакцину у взрослых лошадей активнее, чем у жеребят (8).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1-Байтубаев Н.Г. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, Покров,1992 :330. 1а.Жуматов К.Х. и
др. Тр. инет, микрбиол. и вир. АН КазССР, 1991 :58. 2.Муравьёв В.Н. и др. Тез. докл. Меж-
вуз. н. конф. вет. вир., MBA, 1973, 1 :71. З.Муравьёв В.Н. и др. Доклады ВАСХНИЛ, 1973,
10 :32. 4.Муравьёв В.Н. и др. Тез. докл. Межвуз. н. конф., М., MBA, 1973, 1 :75. б.Сюрин
В.Н. и др. Диагн. вир. бол. животных. Москва, Колос, 1991. б.Соловьёва С.Я. и др. Тр.
Ставроп. с\х инет., Ставрополь, 1992 :49. 7.Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Част. вет. вирусоло-
гия. М., Колос, 1979. 8.Чечнев И. и др. Биотехнол. А, 1992, 6, 3 :51. 8а.Чечнев И. и др.
Вет. мед., 1995, 1, 3 :176. 86.Guo Y. et.al. J Gen Virol, 1995, 76, 8 :2009. 9.Mumford J.A. et.al.
Epidem. and Infect, 1994, 112, 2 :421. 10.Razek W. et.al. Bull Vet inst.Pulawy, 1995, 39, 2 :77.
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
ГРИПП СВИНЕЙ
Influenza suis (лат.), Swine Influenza, swine flu, hog flu, pig flu (англ);
Schwieneinfluenza, Shope’s Schwiene grippe (нем.)
Грипп свиней (инфлюэнца свиней, энзоотическая бронхопневмония) - высоко контаги-
озная, остро протекающая болезнь, возникающая в холодное время года и характеризую-
щаяся внезапным началом, резко выраженной лихорадкой, общей слабостью и поражением
органов дыхания. Вирус гриппа свиней (ВГС) может вызвать заболевание людей и, наобо-
рот, установлена возможность заражения свиней вирусом гриппа человека.
Болезнь впервые диагностирована в США в 1918 г. во время пандемии гриппа людей.
Встречается во многих странах Европы и Америки, зарегистрирована и в бывшем СССР. В
отдельных хозяйствах причиняет большой экономический ущерб. Описана вспышка гриппа
среди 115 свиноматок, вызванная “новым типом” вируса гриппа H3N2, который появился в
Дании в 1990 г. Степень опоросов сократилась с 90 до 43% - через 14 дн после появления
заболевания. Снизилось количество новорожденных поросят (15).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод длится от 1 до 6-7 дн. Болезнь протекает остро, подостро, типично и атипично. Наибо-
лее восприимчивы поросята-отъёмыши. Ведущим патоморфологическим синдромом инфек-
ции является развитие множественных очагов некроза бронхиального эпителия. Начинается
болезнь с повышения температуры тела до 41-42°С, сопровождается вялостью, отказом от
корма, конъюнктивитом, слизистым истечением из носовой полости, чиханием и кашлем. В
области пятачка образуются струпьевидные корки. Дыхание становится сопящим вследст-
вие набухания слизистой оболочки носа и сужения воздухопроводящих путей. Больные жи-
вотные чаще лежат, зарывшись в подстилку, не реагируют на окружающее, во время подъё-
ма у них возникает болезненный кашель (21). При типичном течении болезни развивается
воспаление лёгких - затруднённое дыхание брюшного типа. Из-за ослабления сердечной
деятельности кожа в области живота приобретает синюшный оттенок. Иногда поражаются
мышцы и суставы. При хороших условиях содержания свиней болезнь продолжается 7-10
дн. При типичном течении летальность не превышает 1-4%. Поросята-сосуны и отъёмыши
переболевают гриппом тяжело. У них наблюдается поражение лёгких, плевриты, перикар-
диты, истощение.
На вскрытии находят изменения в верхних дыхательных путях и лёгких; на слизистой
оболочке носовой полости - пенистая слизь красноватого цвета; в просвете бронхов - слизи-
стые пробки; в лёгких - пневмонические очаги катарального характера, увеличение, гипере-
мия и отёчность бронхеальных и средостенных лимфоузлов. Иногда развиваются односто-
ронние или двусторонние плевриты. В качестве атипичной формы гриппа свиней описана
пролифирирующая некротическая пневмония, которая наряду с РРСС представляет новую
угрозу свиноводству (19).
Brown и др. (8) описали легочную гипоплазию эмбрионов свиней, зараженных ВГС
H1N1 на 55-й день супоросности. В течение 3-7 дн наблюдались некрозы в бронхиолах и
слабая дифференцировка главных бронхов. Через 28 дн после инокуляции легкие составля-
ли не более половины нормальной величины. Патогистологически наблюдается распростра-
ненная дегенерация и некрозы эпителия бронхов и бронхиол. Просвет бронхов, бронхиол и
альвеол заполнен экссудатом, содержащим десквамированные клетки и нейтрофилы, позд-
нее, главным образом моноциты. Наблюдается различной степени гиперемия с инфильтра-
цией альвеолярной ткани лимфоцитами, гистиоцитами, плазматическими клетками. Ателек-
таз альвеол, интерстициальная пневмония, эмфизема; периваскулярная и перибронхиальная
клеточная инфильтрация сопровождает эти поражения (5,33).
343
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделили и идентифицировали Шоуп и Левине в 1931 г. Он был обозна-
чен как А/Айова/15/31. Аналогичные штаммы ВГС были выделены в ряде государств Евро-
пы и США. К 1980 г. среди всех вирусов гриппа А было идентифицировано 13 типов ГА и 9
типов нейраминидаз (32). Большинство случаев гриппа свиней обусловлены вирусом H1N1;
вирус гриппа H3N2 как этиологический агент встречается значительно реже. Однако, выра-
женное заболевание, обусловленное этим штаммом описано в Англии и Европе (9,14,27).
Устойчивость. Возбудитель гриппа свиней сравнительно мало устойчив к факторам
физического и химического воздействия. Нагревание до 60°С в течение 20 мин его полно-
стью инактивирует. При -20-70°С он сохраняется несколько месяцев, в лиофилизированном
виде под вакуумом - в течение 3,5 - 4 лет. Оптимальный pH для хранения вируса 7,0-7,2.
Антигенная структура типична для миксовирусов.
Антигенная вариабельность и родство. Установлено АГ родство между вирусами
А(свинья)Айова/15/31 и вирусом ГП А/цыплёнок/Шотландия/59. Считают, что свиньи мо-
гут являться резервуаром для человеческих пандемических штаммов. Во время вспышек
гриппа свиней в Европе зимой 1990-1991 гг., кроме классического серотипа H1N1 был вы-
делен серотип H3N2 (19). Клонированы гены ГА вируса гриппа А свиней (H1N1), изолиро-
ванные в плазмидных векторах, определен их нуклеотидный состав. Сконструировано фило-
генетическое дерево генов свиных и человеческих вирусов гриппа А. Установлено, что ди-
вергенция между свиными и человеческими вирусами гриппа произошла в период 1905 г.
(31). Определены нуклеотидные последовательности кодирующей НА1 части гена ГА 3-х
вирусов гриппа свиней. Показано, что гены ГА 2-х европейских штаммов ВГС (SW38,
SW39) (А/свинья/29/37) и N176 (A/New-Jersey/11/76) произошли скорее от какого то друго-
го эволюционного предка Н1 нежели от ГА классического штамма ВГС (25). С помощью
набора монАТ к АГ вируса гриппа, выделенным от птиц и лошадей, показан широкий
спектр родства между ВГС и этих животных (31).
Из анализа случаев одновременного распространения гриппа среди свиней и людей, вы-
званных одними и теми же этиологическими агентами, считают, что назрела необходимость
систематической вакцинации свиней против гриппа, чтобы исключить этот резервуар вируса
в природе (10, 16, 24). Недавно сравнение ВГС H1N1 показало, что ГА ВГС H1N1 не изме-
нялся интенсивно по крайней мере последние 50 лет в противоположность активному АГ
дрейфу штаммов ВГ человека. Эго, по-видимому, связано с менее выраженным иммунным
прессингом на свиньях, как коротко живущих, и их вирус быстро передается на чувстви-
тельных животных (30).
Локализация вируса. В период острого течения болезни вирус в высоких концентра-
циях содержится в экссудате трахеи, слизи носовой полости, бронхах и лёгочной ткани.
Свиноматки-реконвалесценты являются вирусоносителями и служат резервуаром инфекции.
Показана способность ВГС независимо от типа эффективно преодолевать плацентарный
барьер, заражать и приводить к гибели заражённые эмбрионы (7).
Антигенная активность. У животных-реконвалесцентов формируются АТ, выявляе-
мые в PH, РЗГА и РСК. Специфические сыворотки в условиях лаборатории получают на
кроликах, морских свинках и белых крысах. Не всегда отмечают корреляцию между уров-
нем АТ и тяжестью проявления болезни.
Экспериментальная инфекция. Из лабораторных животных к ВГС чувствительны бе-
лые мыши, крысы, хорьки и хомяки. Уже через 24-48 ч после интраназального заражения у
мышей проявляются симптомы болезни. Обычно они гибнут через 3-8 сут после заражения.
Смертность зависит от вирулентности штамма, которая по мере серийного пассирования
вируса возрастает для мышей и снижается для свиней. В лёгких павших мышей видны тём-
но-красные участки, влажные на поверхности разреза, гепатизация. Мыши не чувствитель-
ны к подкожному, интраперитонеальному и внутримозговому заражению. Исключение со-
344
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
ставляют хорьки, у них легко возникает контактное заражение. Установлена высокая вос-
приимчивость к ВГС серых крыс (пасюков), которые рассматриваются как резервуар вируса
в природе. Кролики и щенки к данному вирусу не восприимчивы. Свиньи восприимчивы к
различным подтипам вируса гриппа А и, возможно, вместе с водоплавающей птицей явля-
ются главным резервуаром вируса гриппа в природе. Помимо мелких лабораторных жи-
вотных, экспериментальная инфекция легко воспроизводится на поросятах, заражаемых ин-
траназально. Через 6 ч после заражения вирус обнаруживали в трахее и разных частях лёг-
ких; максимальное содержание его выявлялось уже через сутки и удерживалось на одном
уровне до 5-го дня после заражения. Через 6 ч титр вируса составлял 103 ИД30 в 1 г ткани.
С 9-го дня после экспериментального заражения активная репродукция вируса прекра-
щается. Скрытое вирусоносительство может продолжаться до 3-х мес. Вирус гриппа челове-
ка H3N2 легко передается свиньям, а вирус гриппа H1N1 представляет большую опасность
для человека. Подтверждена также возможность передачи ВГС телятам (20).
Культивирование. Вирус репродуцируется в КЭ, не вызывая их гибели, мышах, хорь-
ках и культуре клеток. Адаптированные к КЭ штаммы вызывают появление на ХАО бело-
ватых точечных фокусов. При заражении КЭ в аллантоисную полость на теле зародышей
появляются геморрагии. Для культивирования используют 10-11-дн КЭ. Максимальное на-
копление вируса происходит в течение 48-72 ч, титр его в аллантоисной или амниотической
жидкости обычно достигает 107-108 ЭИД30/мл. Присутствие вируса в экстраэмбрнональных
жидкостях устанавливают с помощью РГА. ВГС можно адаптировать к организму белых
мышей или хорьков н непрерывно вести интраназальные пассажи. Показана возможность
репродукции вируса в культуре клеток почки телёнка, обезьяны, хомяка, мыши, поросёнка и
лёгких эмбриона свиньи. Вирус приобретает цитопатогенные и ГА-свойства и накапливает-
ся в высоких титрах 105-106 ЭИД5о/Мл и 106 ТЦД30/МЛ. При одновременном инфицировании
культуры фибробластов КЭ вирусами чумы птиц FPV, и гриппа свиней SW, размножается
только FPV, так как размножение SW ингибируется, причём интерференция происходит не
на стадии адсорбции, а на более поздней стадии вирусной репликации. В естественной по-
пуляции ВГС A/N1/11/ 76 обнаружены варианты Z и Н, имеющие мутации ГА и различаю-
щиеся по степени репродукции в КЭ, организме свиней и клетках МДСК (24).
ГА свойства. ВГС агглютинирует эритроциты кур морской свинки, человека (0-
группы), утки, галки, хорька, крысы, собаки, ежа, но в более низких разведениях, чем вирус
гриппа человека типов А и В. При выращивании в КЭ при 35-37°С вирус имел титр ГА
1:10-1:80, однако после серийных пассажей при 38°С титр ГА возрос до 1:2048. Отмечена
корреляция титра ГА и инфекционности вируса для КЭ.
ГАд свойства. Воспроизводятся общепринятым методом в культуре фибробластов КЭ с
эритроцитами курицы, морской свинки или 0-группы человека.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Грипп свиней подобно гриппу человека - воз-
душно-капельная инфекция. ВГС могут долгое время существовать в организме свиней,
возможно, в географически ограниченных районах. Отличные друг от друга штаммы ВГС
циркулировали в Южном и Центральном Квебеке (Канада) по крайней мере до 1993 г. (6). В
природе вирус поддерживается необычным биологическим механизмом, например лёгоч-
ными гельминтами свиней (Metagastrongilus elangatus, Chaerostrongilus puderdorectus), ин-
фицированные яйца которых попадают во внешнюю среду и захватываются дождевыми
червями. При поедании последних свиньями создаются условия для возникновения энзо-
отии. В дождевых червях вирус может сохранятся до 19 мес. Однако появились данные о
наличии хронической или латентной инфекции у отдельных животных, свободных от лёгоч-
ных гельминтов. Так, в частности, появились данные о трансплацентарной передаче ВГС.
Он участвует в пролиферативной и некротической пневмонии свиней (23).
Спектр патогенности в естественных условиях. Впервые межвидовую передачу ме-
жду вирусами гриппа человека и животных описал ветеринарный врач Косен в 1919 г. Ос-
345
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
новываясь на изучении изолятов ВГС с 1980 г. сделан вывод о том, что последние вспышки
гриппа свиней обусловлены вирусом H1N1, тесно связанным с птичьим вирусом гриппа
H1N1. Это показывает, что птичьи штаммы вируса гриппа способны инфицировать и вызы-
вать заболевание у свиней. Штаммы ВГС H1N1 обусловили 84 вспышки заболевания у ин-
дюков с сильными респираторными поражениями и снижением яичной продуктивности.
Циркуляция вирусов H1N1 имеет место среди следующих видов: утки, индюки, человек.
Свиньи могут заражаться от птиц и людей (29), что позволяет говорить о свином вирусе
“как о сосуде смеси” вирусов птичьего и человеческого происхождения. В последнее время,
однако, многократно выделялся H2N2 от больных свиней в европейских странах; в США
это редчайшее явление (4, 9,14,16,17, 22,27,29).
ДИАГНОСТИКА
Основана на клинических, эпизоотологических, патологоанатомических и лабораторных
данных. Трудность распознавания гриппа свиней связана с тем, что вирусные респиратор-
ные болезни (инфекция Сендай, пневмонии хламидийной природы, аденовирусная инфек-
ция), а также наличие микоплазмоза сопровождаются катаральными процессами в дыха-
тельных путях. Атипично протекающий грипп свиней иногда может быть хроническим.
Возможны случаи смешанной инфекции, когда поросята заражаются бактериальными и ви-
русными агентами. Сходство ВГЧ типа А и ВГС определило общие приёмы исследований в
медицине и ветеринарии, иногда несколько различающиеся спецификой объектов.
Выделение вируса
Выделение вируса на лабораторных животных. Используют хорьков, белых крыс, но
чаще белых мышей. В качестве исходного материала для выделения вируса используют ку-
сочки лёгкого, трахеи, бронхиальный экссудат, носовые смывы от больных свиней.
Мышей заражают интразально под эфирным наркозом и в течение 5-7 дн наблюдают за
ними, обращая внимание на общее состояние животных. Если животные не гибнут, их уби-
вают. На вскрытии отмечают изменения в лёгких. Затем проводят ещё 3-4 пассажа. По мере
адаптации вирулентность вируса для белых мышей значительно возрастает, они гибнут на
4-7-й, а иногда на 14-й день после заражения.
Выделение вируса на КЭ. Испытуемый материал инокулируют в аллантоисную или
амниотическую полости 9-12-сут КЭ, которые после заражения инкубируют 48-72 ч, иногда
до 96 ч при температуре 37°С. Для выделения вируса обычно проводят 2-3 слепых пассажа.
Выделение вируса в культуре клеток. Культура клеток почек поросёнка - универ-
сальная биологическая система, применяя которую можно выделить вирус от больных сви-
ней. Для быстрой индикации вируса гриппа в 1-слойных культурах почечного эпителия по-
росят используют РГАД с эритроцитами курицы, морской свинки или 0-группы человека.
ГАд, положительная РГА, а также дегенеративные изменения клеток указывают на присут-
ствие вируса в исследуемом материале. Вирус, вызвавший явление ГАд, должен адаптиро-
ваться к КЭ и вызывать накопление ГА.
Индикация и идентификация вируса. Вирусоскопию, ЭМ и ИЭМ в диагностической
практике не применяют (1,2).
Риноцитоскопия. Со слизистой оболочки носа делают мазки-отпечатки. Положитель-
ный диагноз ставят на основании обнаружения в отпечатке в первые 1-3 дн болезни большо-
го количества клеток цилиндрического эпителия. Позднее содержание цилиндрических кле-
ток в мазке уменьшается. Вопрос о диагностическом значении цитоплазматических включе-
ний при гриппе свиней неясен; в литературе нет достаточно обоснованных сообщений.
Обнаружение вируса в РГА. При постановке РГА обычно используют эритроциты кур
или морской свинки. Берут 0,5 мл носового смыва, добавляют 0,5 мл 0,5%-ной взвеси эрит-
роцитов, тщательно встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 1-2 ч. Резуль-
таты реакции учитывают общепринятым методом. Чувствительность реакции можно повы-
сить, увеличив объем испытуемых смывов. РГА со смывами используют только при массо-
вом заболевании гриппом, так как процент специфических реакций не превышает 30.
346
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
Серологическая идентификация
РСК. Все ранее выделенные эпизоотические штаммы ВГС относятся к типу А. Однако
это не исключает возможности обнаружения вируса гриппа иной типовой принадлежности,
поэтому тип выделенных вирусов определяют в РСК. Данную реакцию используют при вы-
делении вируса, идентификация которого не удается с помощью РТГ А. В этом случае в РСК
с эталонными иммунными сыворотками против гриппа типов А, В и С устанавливают типо-
вую принадлежность выделенного вируса. В Ленинградском институте им. Пастера предло-
жена усовершенствованная методика РСК для идентификации вирусов гриппа, в которой
используют иммунные типовые сыворотки морских свинок (коммерческие лошадиные ти-
поспецифические сыворотки для этой цели непригодны). В РСК применяют две дозы ком-
племента. Использование в реакции сыворотки морской свинки и аллантоисного АГ не тре-
бует титрования комплемента в их присутствии, так как они не обладают антикомплемен-
тарными свойствами. При идентификации вирусов гриппа РСК не заменяет РТГ А. Позволяя
установить типовую принадлежность штаммов, РСК не вскрывает различий между ними.
ИФ. ИФ (прямой и непрямой варианты) используют для быстрого обнаружения АГ ви-
руса в патологическом материале и в биологических системах, в которых проводят выделе-
ние вируса (КЭ, лабораторные животные, культура клеток). Локализация вирусного АГ ха-
рактеризуется вначале нежной диффузной флюоресценцией в ядре, затем в перинуклеарной
зоне. Постепенно мелкогранулярное свечение распространяется по всей цитоплазме, а внут-
риядерное - ослабевает. Методика постановки ИФ общепринятая.
РТГА. Идентификацию выделенного на КЭ вируса проводят с набором штаммоспеци-
фических сывороток с использованием эритроцитов кур. РТГА ставят по общепринятой ме-
тодике. Сыворотка, задерживающая РГА до разведения не меньше четверти ее гомологич-
ного титра, соответствует типу вируса. Например, РТГ А со штаммами: ____________
Сыворотка к вирусу гриппа Гомологии ный титр шт. №2 шт.№ титр 3 отношен шт.№ 4
титр отношен титр отношен
Шт. №1 типа А 1:320 1:80 1 0,25 1:160 1 0,5 1:40 1 0,125
В данном примере штаммы № 2 и 3 принадлежат к ВГС типа А и родственны штамму
№ 1, так как сыворотка к этому штамму нейтрализует ГА активность штаммов 2 и 3 соот-
ветственно до 0,25 и 0,5 своего гомологичного титра (1:320).
PH. Ставят, главным образом, в КЭ, где хорошо размножаются вирусы гриппа. Приме-
нение ее на мышах весьма ограничено ввиду того, что немногие штаммы вируса гриппа па-
тогенны для мышей. PH может быть поставлена в 2-х вариантах по общепринятой методике.
ИФА. Внрусспецифические АГ выявлялись в ИФА в цитоплазме ФКЭ и клеток эпите-
лия дыхательного тракта мышей в виде гранул желтого цвета. Установлена высокая чувст-
вительность метода. Недавно иммуноферментная методика модифицирована. Стало воз-
можным использовать ее для выявления ГА вируса гриппа как в составе вирусных частиц,
так и в изолированном из вирионов состоянии. Модификация основана на прямой адсорб-
ции вирионов гриппа и вирусспецифических белков на полистироловых гранулах. Опреде-
лены параметры тест-системы для реализации ее максимальной чувствительности. Эффек-
тивность выявления ГА зависит от сорбционных свойств ГА содержащих вирусных препа-
ратов. Для интактных вирионов гриппа максимальная чувствительность тест-системы равна
1-2 нг ГА в образце. Разработан экспресс-вариант методики, позволяющий выявить 30-40 нг
ГА в образце при полной продолжительности анализа около 4 ч.
Метод молекулярной гибридизации. Применяют для анализа носоглоточных смывов,
полученных от заболевших в период эпидемиологического подъема заболеваемости грип-
пом, что позволяет рекомендовать его для использования в эпизоотологическом анализе. С
помощью РТГА с использованием наборов монАТ, метода ПЦР и секвенирования ее про-
дуктов, продемонстрирована высокая система АГ- и генетической консервативности ГА
изолятов ВГС, полученных в 1986-1991 гг. (26).
347
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. При ретроспективной диагностике
важно выяснить, отмечалась ли циркуляция вируса гриппа у животных на данной ферме.
Для этого исследуют кровь 10-20 свиней на присутствие анти-ГА. Начиная с 7-10-го дня по-
сле начала болезни в крови реконвалесцентов появляются АТ. ВНА у свиней появляются на
6-7-й день. Максимальный титр их обычно бывает между 14-м и 27-м дн.
РТГА. Обнаружение анти-ГА в крови переболевших животных - наиболее простой, дос-
таточно точный и пригодный метод проведения единичных и массовых исследований при
диагностике гриппа. Для этого при помощи РТГА определяют сдвиг специфических АТ в
парных сыворотках, взятых от животных в различные сроки после переболевания. Получа-
ют от каждого больного животного две пробы сыворотки: в первые дни болезни (1 проба) и
в период реконвалесценции (2-я проба). Интервал между взятием 1-й и 2-й проб должен
быть не менее 8-14 дн. Если в сыворотке, полученной от больных свиней в стадии выздо-
ровления (через 14-30 дн после начала болезни), количество АТ возросло по сравнению с
исходным уровнем в 1-й сыворотке, взятой в первые дни болезни, в 4 раза и более, то это
свидетельствует о том, что вспышка гриппа прошла. Анти-ГА в крови экспериментально
зараженных поросят образуются во всех случаях на 8-10-й день, на 21-й день наблюдается
некоторое снижение их титра, и к 40-му дню титры их в РТГА колеблются от 1:8 до 1:32.
Сыворотки перед исследованием прогревают при 60°С 30 мин, освобождают от термо-
стабильных ингибиторов (обработкой ССГ) и неспецифических АГ (адсорбцией с помощью
эритроцитов кур). РТГА ставят общепринятым методом с 4 ГАЕ вируса. Для удаления не-
специфическйх ингибиторов из сывороток, содержащих АТ к вирусу гриппа, в Румынии за-
патентован способ обработки, в котором используют фильтрат Clostridium welchii, позво-
ляющий с большей надежностью получить сыворотки без ингибиторов, но сохранившие ис-
ходные концентрации специфических АТ. Использование рекомбинантного вируса, устой-
чивого к неспецифическим сывороточным ингибиторам, позволяет исследовать сыворотки
без их предварительной обработки. При сопоставлении чувствительности РТГА и ИФА бы-
ла установлена их равноценность в выявлении числа сероконверсии к вирусам гриппа, од-
нако величина титров АТ, по данным РТГА, была в 2 раза ниже, чем в ИФА.
PH. Ставят ее в монослойной культуре клеток, для чего используют адаптированный
штамм с хорошо выраженным ЦПД. Испытуемые сыворотки инактивируют 30 мин, а для
реакции используют 100 ТЦД50 вируса; смеси инкубируют при температуре 37°С 30 мин.
При необходимости PH ставят и на КЭ по общепринятой методике. В США PH по подавле-
нию бляшкообразования вирусами гриппа Al, А2 и В в перевиваемой линии клеток почек
собак оказалась в 100 раз чувствительнее, чем РИГА.
Перед постановкой реакции сыворотки разводят от 10’1 до 10‘8 и инкубируют с 60-160
БОЕ индикаторного вируса гриппа в течение 1 ч при 34-36°С. Затем смеси вносят в чашки
Петри с культурой клеток почек собак, выращенной в среде Игла при добавлении глутамина
и нормальной телячьей сыворотки. На клетки наслаивают среду покрытия (среда Игла с
50% декстрозы, 1% декстрана и 0,1% трипсина), затем чашки в течение 2-5 дн инкубируют
при 34-36°С в атмосфере с 5% СОг К вирусу гриппа А1 чувствительна только 1-дн культу-
ра, а к вирусу А2 - 2-дн культура клеток почек собак. Указанная модификация PH удобна
тем, что не требует освобождения сывороток от неспецифических ингибиторов и выявляла
АТ в сыворотках, в которых не удавалось обнаружить АТ с помощью РТГА.
РРГ. Более чувствительна, чем РТГА. Она была предложена для определения титра АТ
в сыворотках свиней, для чего из свежеотмыгых эритроцитов цыплят готовят 10%-ную сус-
пензию на фосфатном буфере pH 7,2. Вирус гриппа А, выделенный от свиней (шт.
А/свинья/Висконсин/15/30), в форме аллантоисной жидкости, содержащей 1024 ГАЕ в 0,05
мл, добавляют к равному объему суспензии эритроцитов. Смесь выдерживают 10 мин при
4°С, а затем дважды отмывают и ресуспендируют. Готовят расплавленную 1,5%-ную агаро-
зу (А-37), содержащую 0,1% азида натрия. Затем к 4,5 мл суспензии эритроцитов с адсор-
бированным вирусом добавляют 1 мл комплемента и смешивают с 24,5 мл расплавленной и
348
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
охлажденной до 45°С агарозой. После застывания среды вырезают луночки диаметром 3
мм. Каждую луночку заполняют исследуемой сывороткой и пластины выдерживают ночь во
влажной камере при 4°С, а затем инкубируют 3 ч при 37°С. Испытуемые сыворотки перед
исследованием инактивируют 30 мин при 56°С. О наличии АТ к вирусу судят по образова-
нию зоны лизиса вокруг луночек. Установлена корреляция титров АТ в полевых и экспери-
ментальных сыворотках, выявленных при использовании РРГ и РТГА.
Описанный метод прост и быстро выполним. Неспецифическая ингибиция свиных сы-
вороток снимается при прогревании. РРГ оказалась более чувствительной при выявлении
АТ к слабоавидным штаммам вируса А/Виктория/3/75 и В/Анон/2114/76. При правильном
подборе штамма вируса РРГ может быть с успехом использована для определения антиней-
раминидазных АТ при массовых обследованиях на грипп.
РИГА. При серодиагностике гриппа эта реакция позволяет выявлять АТ в значительно
более высоких разведениях сывороток, чем РСК и РТГА (в 35 и 10 раз соответственно).
Различия между показателями в РИГА и PH не превышали 1,1%. Благодаря высокой чувст-
вительности РИГА давала возможность регистрировать сероконверсию раньше, чем другие
серологические методы. ELISA применительно к гриппу свиней не разработан. РСК не на-
шла широкого практического применения из-за трудностей, связанных с прокомплементар-
ными свойствами сывороток свиней.
Дифференциальная диагностика. Трудность распознавания ВГС связана с тем, что
вирусные респираторные болезни (инфекция Сендай, пневмонии хламидиозной природы,
аденовирусная инфекция и пр ), а также микоплазмоз сопровождаются катаральными про-
цессами в дыхательных путях. Атипичные формы гриппа свиней иногда могут протекать
хронически и напоминают вирусную пневмонию свиней (весьма собирательный термин
прошлого, под которым могут скрываться пневмонии разной этиологии). В последнее время
установлено, что гриппоподобные болезни свиней могут быть обусловлены микоплазмами.
Поэтому необходимо строго дифференцировать респираторные болезни свиней, из которых,
по-видимому, лишь некоторые, по крайней мере в странах восточного полушария, могут
быть обусловлены истинным вирусом гриппа свиней, открытого Шоупом. Свинопоголовье
может явиться как резервуаром для сохранения и возникновения эпидемических вариантов,
так и промежуточным звеном в ходе эпидемического и эпизоотического процессов (3).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Продолжительность иммунитета у свиней-реконвалесцентов не изучена. Анти-ГА и
ВНА в крови выявляются до 8-10 мес. Для профилактики ГС в ряде стран используются
инактивированные вакцины, обеспечивающие достаточно напряженный иммунитет. Сви-
ньи, привитые дважды вакциной Suvaxyn Flu-З, приобретают полную устойчивость к экспе-
риментальному заражению. В организме вакцинированных свиней гомологичный вирус не
размножался. В случае возникновения заболевания проводят поголовную вакцинацию сви-
ней (18). Разработка и испытание инактивированных вакцин для профилактики ГС продол-
жаются (11, 28, 34). Живой, температурочувствительный штамм ВГС обеспечивал некото-
рую защиту свиней (11). Gourean и др. (12, 13) описали инактивированную адъювант-
вакцину против ГС (H1N1), которая превосходит жидкую инактивированную вакцину. АТ
не её введение выявлялись через 15 дн и сохранялись до 2 мес после вакцинации. При 2-й
инокуляции (бустериммунизации) АТ сохранялись до 8 мес (12, 13). О выявления поствак-
цинальных АТ и зависимости устойчивости вакцинированных животных от уровня гумо-
ральных АТ в доступной нам литературе не найдено.
СПИ СОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Част. Вет. вирус., М., ’’Колос”, 1979. 2.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вирусн.
бол. жив., М., Агропромиздат, 1991. З.Жуматов К.Х. и др. Труды инет, микроб, и вирус. АН
Каз. ССР, 1991, 37 :48. 4.Andral В. et.al. Vet Rec, 1985, 116 :617. 5.Bachmann P.A. Sv infl vi-
rus. In Virus Inf Por, Ed. Pensert et.al., Amsterdaml989 :193. 6.Bikons M.H. et.al. J Gen Virol,
1995, 76, 10 :2539. 7. Brown T.T. et.al. - Am J Vet Res, 1982, 43 :817. 8. Brown T.T. et.al. - Vet
349
Глава УШ. Family Orthomyxoviridae Ортомиксовирусные инфекции
Pathol, 1980, 17, :455. 9. Castro J.M. et.al. Vet Rec, 1988, 122(17) :418. 10.Dasco S.S. etal.
Abstr Ann Meet, Am Soc Microbiol, 1980, 80 :288. ll.Easterday B.C. et.al. J Inf Dis, 1977, 136
(Suppl) :699. 12.Gourrean J.M. et.al. Ann Virol, 1981, 2 :287. 13.Gourrean J.M. et.al. - Comp
Immunol Microbiol Infect Dis, 1980, 3 :147. 14.Haesebrouck F. et.al. Am J Vet Res, 1985, 46(9)
:1926. 15.Haugegaard J. Den Veterinaertidsskr, 1993, 76, 19 :829. 16.Hinshaw V.S. et.al. Bull
WHO, 1984, 62 :871. 17.Hinshaw V.S. et.al. Sciense, 1983, 220 :206. 18.Kuiper A. Pigs, 1979,
3, 5 :31. 19.Kyriakis S.C. et.al. Bull Hell Vet Med Soc, 1992, 43, 2 :89. 20.Lopez J.W. et.al. Pigs,
1987, 4 :48. 21.Madec F. et.al. Comp Imm Microbiol Infect Dis, 1989, 12(1/2) :17. 22.Mohan R.
et.al. Avian Dis, 1981, 25 :11. 23.Morin M. et.al. Canad Vet J, 1990, 31, 12 :837. 24.Murphy
B.R. et.al. Inf Viruses In Virology. Ed Fields, N.Y., 1990 :1091. 25.Newmier E. et.al. Virus Res,
1992, 23, 1-2 :107. 26.Noble S. et.al. J Gen Virol, 1993, 74, 6.1197. 27.Pritchard C.C. et.al. Vet
Rec, 1987, 121 :548. 28.Pirtle E.C. J Inf Dis, 1977, (Suppl), 136 :703. 29.Scholtissec C. et.al.
Nature. 1988, 331 :215. 3O.Sherrar M.G. et.al. J Gen Virol, 1989, 70 :3297. 31.Sugita S. et.al.
Anim Inst Genet, Jap, 1991, 42 :86. 32.WHO, 1980, Bull WHO, 58 :585. 33.Witte K.H. et.al.
Tierarztl Umsch, 1981, 36 :591. 34.Wood G.T. Bovine Practic, 1980, 1 :41.
Глава IX. Family Bunyaviridae Болезнь Найроби
Глава IX. БУНЬЯВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА BUNYAVIRIDAE
Это большая группа вирусов, поражающая позвоночных, членистоногих и растения. Их
название “бунъявирусы” связано с местностью Буньямвера в Уганде, где впервые был изо-
лирован вирус из москитов. В состав семейства входит более 300 вирусов, которые переда-
ются кровососущими членистоногими. Буньявирусы вызывают заболевания у животных и
человека. Так, вирусы лихорадки долины Рифт (флебовирус) и болезни Найроби (наиро-
вирус) являются этиологическими агентами остропротекающих трансмиссивных болезней
овец, коз и КРС в Восточной и Южной Африке. Вирионы буньявирусов представляют собой
округлые или плеоморфные частицы диаметром 80-100 нм. Они состоят из нуклеокапсида
спиральной симметрии и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются вы-
ступы длиной 5-10 нм. Нуклеокапсид представлен 3-мя спиральными циркулярными нитями
диаметром 2,0-2,5 нм и длиной 0,2-3,0 мкм. Мол.м. вирионов 300-400 МД, плавучая плот-
ность в CsCl 1,2 г/см3, коэффициент седиментации 350-500S. Вирусы чувствительны к жи-
рорастворителям и детергентам.
Геном состоит из 3-х различных по размеру молекул 1-спиральной кольцевой РНК,
обозначаемых как L (2,2-4,9 мД), М (1,0-2,3 мД) и S (0,28-0,8 мД). Кольцевые формы обра-
зуются за счет комплементарных последовательностей нуклеотидов на 5 - и 3'-концах РНК.
Вирионная РНК буньявирусов не обладает инфекционностью. Установлена кодирующая
функция каждой РНК. Так, L-РНК кодирует белок L, М-РНК - 2 гликопротеина (Gl, G2) и
неструктурный белок, S-РНК - белок N и неструктурный белок. В вирионах обнаружено 4
белка, два из которых (N и L) связаны с нуклеокапсидом, а два других (G1 и G2) входят в
состав липопротеидной оболочки и являются гликопротеинами. Гликопротеины индуцируют
синтез ВНА. Транскриптазная активность обусловлена, вероятно, белком L. У буньявирусов
нет мембранного (матриксного) белка и нуклеокапсид непосредственно прилегает к внут-
ренней поверхности липидной оболочки. В вирионах содержится 58-70 белка, 20-30 липи-
дов, 2-7 углеводов и 1-2% РНК. Углеводы и липиды имеют клеточное происхоящение.
Буньявирусы размножаются в цитоплазме клеток. Каждая вирионная РНК транскрибируется
и реплицируется независимо друг от друга. Созревание вирионов происходит почкованием
нуклеокапсидов в пузырьки аппарата Г ольджи и цистерны эндоплазматического ретикулума
(6, 8, 12, 13, 14). Буньявирусы принадлежат к экологической группе арбовирусов, поэтому
они связаны как с позвоночными хозяевами, так и с кровососущими членистоногими. Боль-
шинство буньявирусов передаются комарами из подсемейства Culicinae. Адаптация к иксо-
довым клещам Ixodes putus, являющимся облигатными паразитами колониальных птиц в
высоких широтах Северного и Южного полушарий, привела к образованию чрезвычайно
активных природных очагов этих вирусов на птичьих базарах около полярных областей. С
иксодовыми и аргасовыми клещами связано свыше 20 буньявирусов. Круг позвоночных хо-
зяев буньявирусов широк. Более 1/2 их связано с грызунами и зайцеобразными, около 1/4 - с
птицами, около 1/4 - с жвачными и другими домашними животными, ряд вирусов - с сум-
чатыми, летучими мышами, приматами и др.
Буньявирусы распространены практически повсеместно на всех материках. На террито-
рии бывшего СССР их изолировано 18. Клиническая картина болезней, вызываемых возбу-
дителями буньявирусных инфекций, не проявляется патогномоничными признакаами, что
обусловливает использование лабораторных методов диагностики. Только на основании вы-
деления вируса от больного или ретроспективного нарастания (2 1g) титров АТ в парных
сыворотках, взятых в ранней стадии (1-7-й дн болезни) и в период рекоивалесценции (через
351
Глава IX. Family Bunyaviridae Болезнь Найроби
2-4 нед), может быть поставлен диагноз любой буньявирусной инфекции. В случае леталь-
ного исхода для вирусологического исследования должны быть использованы взятые при
вскрытии пробы мозга, печени, легких, селезенки, почек. Поскольку буньявирусы чувстви-
тельны к теплу и колебаниям температуры, для сохранения вируссодержащего материала
важно быстрое охлаждение его до -80-120°С. В крайнем случае для кратковременного хра-
нения или транспортировки проб можно использовать 50%-ный глицерин в щелочном бу-
фере при 4°С. Лучшему хранению способствует добавление в субстрат 20%-ного сыворо-
точного белка, 25%-ный кроличьей сыворотки крови.
Для выделения буньявирусов используют 1-2-дн белых мышей-сосунков, которые явля-
ются высокочувствительной системой в отношении всех буньявирусов. Мышей-сосунов за-
ражают в мозг 0,01 мл 10%-ный суспензией исследуемого материала. Наблюдение за жи-
вотными ведут до 3 нед. Заболевших мышат вскрывают, используя их мозг для дальнейше-
го закрепления штаммов. Слепые пассажи проводить не следует, так как при этом повыша-
ется возможность выделения спонтанных мышиных вирусов. Выделенные штаммы после
первого пассажа лиофилизируют, готовят к ним антисыворотки (иммунные асцитические
мышиные жидкости) и идентифицируют с набором референс-сывороток в РСК, РПГА,
РДП, PH. Последняя ставится на мышах или в культуре клеток по феномену интерференции
и является более чувствительной, чем РСК и РДП, но используется редко в силу дороговиз-
ны и громоздкости.
Семейство Bunyaviridae состоит из пяти родов: Bunyavirus, Phlebovirus, Nairo-
virus, Hantavirus, Tospovirus.
1. Род Bunyavirus включает 166 вирусов, из которых 162 сгруппированы в 18 АГ групп,
а 4 не входят ни в одну из этих групп. Типичным представителем рода является вирус Бунь-
ямвера. Вирус Акабане вызывает у КРС, овец и коз гибель плода и аборты.
2. Род Phlebovirus включает (от названия москитов рода Phlebotomus, передающих ви-
русы) 23 вируса, сгруппированных в 8 АГ-комплексов, 16 вирусов, не входящих в эти ком-
плексы, и группу из 12 вирусов Укуниеми. Типичным представителем рода является вирус
сицилийской москитной лихорадки.
3. Род Nairovirus (от названия болезни Найроби) включает 33 вируса, сгруппиро-
ванные в 7 АГ групп. Типичным представителем рода является вирус болезни Найроби.
4. Род Hantavirus (от названия реки Хантаан в Южной Корее, где был выделен вирус)
включает 6 вирусов. Типичным представителем рода является вирус Хантаан. Вирусы этого
рода не передаются членистоногими, их основные хозяевами - грызуны.
5. Род Tospovirus (от англ. Tomato spotted wilt - пятнистое увядание томатов) имеет
только одного представителя - вирус пятнистого увядания томатов, который поражает более
360 видов растений, относящихся к 50 семействам; переносится 9 видами трипсов. Возмож-
ные представители семейства Bunyaviridae - вирусы (более 30 представителей), которые не-
достаточно изучены и пока не включены ни в один из перечисленных родов.
БОЛЕЗНЬ НАЙРОБИ
Naiobi sheep Disease (англ.); Nairobi-Kankcheit des Schafes und der Liege (нем.);
Maladie de Nairobi du mouton (франц.)
Болезнь Найроби БН (геморрагический гастроэнтерит, болезнь Кении) - остро проте-
кающая трансмиссивная вирусная болезнь овец, коз, характеризующаяся высокой рециди-
вирующей лихорадкой и геморрагическим гастроэнтеритом. Болеет также человек. Наблю-
дается преимущественно в Кении, Уганде, Конго, ЮАР, некоторых регионах Восточной
Африки, протекает в виде периодических эпизоотических вспышек.
Клинические и патологические изменения. БН может протекать остро и подостро.
Она, как правило, начинается внезапной лихорадкой, которая достигает максимума на 2-3-и
352
Глава IX. Family Bunyaviridae Болезнь Найроби
сут. У животных появляется вялость, депрессия, угнетение и затрудненное дыхание, уча-
щенный пульс, снижение или потеря аппетита, слизисто-гнойные истечения из носа, жидкие
слизистые, часто с примесью крови фекалии. Иногда после спада температурной реакции
наступает второй подъем продолжительностью 3-7 дн. В этих случаях овцы теряют упитан-
ность. У переболевших баранов-производителей наступает стерильность (бесплодие).
При осмотре трупов отмечают сильное загрязнение перианальной области и задних ко-
нечностей испражнениями, отек и гиперемию влагалища, выделение из носа, часто с приме-
сью крови. На вскрытии характерные и постоянные изменения наблюдают в ЖКТ, трахее,
легких, желчном пузыре, почках. В ЖКТ отмечают катарально-геморрагическое воспале-
ние. Особенно сильные изменения в слепой, ободочной кишках и сычуге. Слизистая оболоч-
ка слепой и ободочной кишок утолщена, темно-красного цвета, с некрозами и полосчатыми
по складкам кровоизлияниями, а слизистая оболочка сычуга покрасневшая, с кровоизлия-
ниями и язвами. В тяжелых случаях геморрагическое воспаление охватывает весь толстый
кишечник. Содержимое слепой и ободочной кишок почти всегда с примесью крови, слизи,
отёчной жидкости. Слизистая желчного пузыря отечна, разрыхлена, покровный эпителий
некротизирован, местами дескваминирован. Летальность овец и коз высокая - от 70 до 90%.
Болезнь Найроби у овец вызывается орбивирусом (сем.Буньявирусы, род Найровирусы),
поражающим мелких жвачных. Овцы более чувствительны к нему по сравнению с козами.
В наиболее тяжелой форме болезнь характеризуется лихорадкой и геморрагическим гастро-
энтеритом и приводит к быстрой гибели больных животных (11 ).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Устойчивость. Вирус не стабилен. Он не погибает при нагревании до 50°С в течение 60
мин, при 60°С разрушается за 5 мин. При -20°С сохраняет 59 дн, в глицерине - до 93 дн, в
цитрате - до 35 дн. Вирус остается вирулентным в некормленых половозрелых клещах
Rhipicephalus appendiculatus в течение 871 дн, в нимфах - 859 и личинках - 186-345 дн. Не
стабилен в объектах внешней среды, при комнатной температуре снижается вирулентность
на 1 1g в течение 2 ч.
АГ структура. Вирус содержит 3 основных белка, 2 из которых - гликопротеины.
АГ вариабельность и родство. Отличается от арбовирусов по АГ свойствам.
Локализация вируса. При укусе вирус из слюнных желез инфицированного клеща по-
падает в кровь животного и разносится по всему организму, адсорбируясь на чувствитель-
ных клетках. В крови он появляется в начальном периоде болезни во время первого подъема
температуры тела. В селезенке, печени, мезентериальных лимфоузлах, сердце, легких, сле-
пой кишке его обнаруживают постоянно и в высоком титре, где, по-видимому, размножает-
ся и вместе с продуктами распада вызывает развитие значительных патологических измене-
ний, приводящих к гибели животных.
У больных животных вирус обычно находится в крови и паренхиматозных органах, а
также в моче и фекалиях. В наиболее высоких титрах содержится в мезентериальных лим-
фоузлах, слепой кишке, селезенке и печени. Максимальной вирулентностью обладает в пе-
риод подъема температуры при первом приступе лихорадки. В плазме и клетках крови его
удается выявлять в течение 24 ч после снижения температуры. Через сутки после снижения
температуры до нормы, а также в период вторичного приступа лихорадки, вирус менее ак-
тивен, и выделить его удаётся не всегда. Кровь в период второго подъема температуры не-
инфекционна. Вирус постоянно выделяют из мочи и фекалий.
АГ активность. В организме овец и коз вирус индуцирует образование КСА, ПА и
ВНА, выявляемых в соответствующих реакциях.
Экспериментальная инфекция. В естественных условиях и эксперименте к БН вос-
приимчивы овцы, козы независимо от возраста и пола животного. На 3-4-й день после ин-
трацеребрального введения вируса у взрослых мышей развивается энцефалит. Однако овцы
при подкожном заражении в 10 раз чувствительнее, чем мыши при внутримозговом. К ви-
русу восприимчив грызун Arvicanthus abyssinicus. В экспериментальных условиях инфекция
23 Зак. № 171 353
Глава IX. Family Bunyaviridae Болезнь Найроби
легко воспроизводится на овцах и козах при подкожном, внутривенном, внутрибрюшинном
введениях вируса. Совместное содержание больных и здоровых животных (при отсутствии
переносчиков) не приводит к заражению.
Культивирование. Вирус репродуцируется в первичных культурах клеток почки и се-
менника ягненка, а также в перевиваемых линиях клеток: почек хомяка (ВНК), почек ягнен-
ка (ПЯ). Вирусный АГ синтезируется в цитоплазме клеток. Этот вирус пассировали и на
мышах. Попытки культивировать его на развивающихся КЭ не имели успеха. ГА и гемад-
сорбирующие свойства не установлены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные.
Распространению ее способствуют скрытые вирусоносители (КРС, грызуны). Переносчика-
ми вируса являются главным образом клещи Rhipicephalus appendiculatus во всех стадиях
их развития. Животные заражаются на пастбище при нападении на них инфицированных
клещей, которые, по-видимому, являются основным резервуаром вируса в природе. Уста-
новлена трансовариальная передача возбудителя. Инфицированные клещи, находясь на па-
стбище, способны заражать овец в течение 18 мес. В клещах, голодающих в течение 9 мес,
вирус сохраняет свою активность. Летающие насекомые не являются переносчиками вируса.
Контактная передача его не наблюдается. Клещи других видов: Rhipicephalus bursa,
Ambluomma variegatum - передают вирус овцам только на стадиях нимфы и имаго.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к возбуди-
телю БН наиболее восприимчивы овцы (особенно ягнята) и значительно слабее - козы. КРС,
буйволы, лошади, ослы, мулы, свиньи, а так же лабораторные животные (кролики, морские
свинки, крысы, мыши) не чувствительны. Однако вирус может быть адаптирован к взрос-
лым белым мышам, вызывая у них энцефалит при интрацеребральном введении. Мышат-
сосунов можно инфицировать интрацеребрально или интраперитонеально.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических (сезонность, болеют только овцы и
козы с высокой летальностью), клинических признаков (лихорадка, слизистые истечения из
носа, диарея, трахеит), патологоанатомических изменений (отек легких, холецистит, гемор-
рагический гастроэнтероколит с полосчатыми кровоизлияниями по верхушкам складок сли-
зистой оболочки, нефрозонефрит) и лабораторных исследований (выделение и идентифика-
ция вируса, обнаружение АТ), учитывая географию распространения болезни.
Выделение вируса
Взятие и подготовка материалов. Для выделения возбудителя БН используют кровь
больных животных в период первого подъема температуры. Для этого можно также исполь-
зовать кусочки паренхиматозных органов (в особенности селезенки и печени) и пораженные
лимфоузлы от больных животных, специально убитых во время первого подъема темпера-
туры, ибо в последующие периоды болезни выделить вирус от больных животных почти не
удается. Сразу после взятия образцов (кусочки паренхиматозных органов, лимфоузлы) их
погружают в стерильный 50%-ный глицерин или помещают в термос со льдом. На наличие
вируса целесообразно также исследовать живых клещей, которых собирают с больных овец
во время первого приступа лихорадки.
Для выделения вируса из крови используют гепаринизированную или дефибринирован-
ную кровь, а также сыворотку, плазму или растертый в солевом р-ре сгусток, которые обра-
батывают по обычной методике с соблюдением стерильности и после соответствующего
бактериологического контроля используют для биопробы. Кусочки паренхиматозных орга-
нов отмывают от глицерина, готовят 10%-ную суспензию на фосфатном буферном р-ре с
антибиотиками, центрифугируют и полученную жидкость используют для биопробы. Соб-
ранных клещей сортируют по видам и объединяют по 10-50 особей, растирают в ступке и
готовят взвесь на физиологическом или фосфатном буферном р-ре. Если материалы не ис-
следуют сразу, их замораживают и хранят при -70°С.
354
Глава IX. Family Bunyaviridae Болезнь Найроби
Хранение и консервирование материала. Вирус хорошо сохраняется в лиофилизиро-
ванном или замороженном состояниях, а также в глицерине. Инфицированная кровь или
сыворотка в холодильнике при 4°С остаются активными длительное время. В 50%-ном гли-
церине вирус остается активным 93 дня. В запаянных ампулах лиофильно высушенный ви-
рус сохраняет жизнеспособность 143 дня. В клещах теряет инфекционность при кормлении
на иммунных животных.
Выделение вируса на культуре клеток. Вирус выделяют на культурах клеток (почка
ягненка и козленка). ЦПЭ проявляется образованием плеоморфных цитоплазматических те-
лец-включений, окружающих ядро. Через 18-24 ч после заражения наблюдают деструктив-
ные изменения в виде зернистости, пикноза и рексиса ядер.
Выделение вируса на животных. Используют 3-4-дн мышат (внутримозговое или
внутрибрюшинное заражение). Вирус через 72 ч после заражения вызывает характерные
некротические изменения тканей головного мозга, геморрагии, инфильтрацию лимфоцитов.
При выделение вируса на естественно восприимчивых животных наличие вируса в па-
тологическом материале определяют при помощи биопробы на ягнятах, которые не имели
соприкосновения с инфицированными клещами - переносчиками возбудителя БН. Ягнятам
вводят внутривенно, внутрибрюшинно или подкожно вируссодержащую кровь или сыворот-
ку от больных животных в объеме 0,001-1 мл. При наличии возбудителя в первые 48 ч по-
сле инокуляции у зараженных животных резко повышается температура тела (до 41,1-
41,6°С). При внутривенном или внутрибрюшинном заражении температура повышается
раньше, чем при подкожной инокуляции. Симптомы болезни проявляются только после
снижения температуры. Они характеризуются слизисто-гнойными истечениями из носа,
часто с примесью крови, водянистой диареей с частой самопроизвольной дефекацией и вы-
делением темно-зеленых фекалий. Зараженные животные погибают через 2 дня снижения
температуры (между 4-8 дн после заражения). При вскрытии обнаруживают изменения, на-
блюдаемые при естественном течении болезни. Для выделения вируса от зараженных ягнят
берут кровь в период первоначального подъема температуры, а также паренхиматозные ор-
ганы и лимфоузлы от убитых животных.
Индикация и идентификация вируса. Вирусоскопия, электронная и иммуноэлектрон-
ная микроскопия не применяются.
Обнаружение специфических телец-включений. Наиболее характерный признак для
данного вируса - способность его формировать своеобразной морфологии цитоплазматиче-
ские эозинофильные тельца-включения. Последние имеют разнообразную форму - от коль-
цевидных образований, окружающих ядро со всех сторон, до огромных глыбчатых причуд-
ливой формы и структуры тел. Включения содержат РНК и вирусный АГ и служат важным
диагностическим признаком.
Серологическая идентификация. Выделенный вирус идентифицируют в РСК, РДП,
PH, ИФ, РИГА и др. Быстрый (через 24-48 ч) ответ получают при заражении клеток ВНК21
с последующей идентификацией в непрямой ИФ. Однако более чувствителен метод зараже-
ния мышей и использования мышиного мозга в прямой ИФ или РСК. Немецкие исследова-
тели использовали для количественного и качественного выявления вирусного АГ иммуно-
пероксидазный метод. Конъюгаты готовят из сыворотки овец, полученной через 33 дня по-
сле заражения вирусом БН, и кроличьего антиовечьего Ig. С помощью прямого и непрямого
иммунопероксидазных тестов АГ вируса БН обнаруживают в культурах клеток ВНК и кле-
ток почки овцы через 24 ч после заражения. Лучшие результаты получены через 36-48 ч.
Гранулярно окрашенные скопления АГ в виде колец и полусфер обнаруживают в цитоплаз-
ме клеток, вокруг неокрашенного ядра. В зараженной перевиваемой линии клеток клещей
R.appendiculatus обнаружено 2 типа клеток, содержащих специфически окрашенный АГ: ок-
руглые и веретенообразные со множеством темно окрашенных гранул в цитоплазме.
Из испытанных культур предпочтительнее использовать культуру клеток ВНК. Клетки
почки овцы быстрее дегенерируют, и возникают трудности в дифференциации специфиче-
23*
355
Глава IX. Family Bunyaviridae Болезнь Найроби
ского и неспецифического окрашивания. Эффективность метода зависит от качества культур
и плотности монослоя: неудовлетворительные результаты могут быть получены при боль-
шой или недостаточной концентрации засева клеток.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. РСК используют для определения
АТ в сыворотке крови животных-реконвалесцеитов через 10-20 дн в течение 6-9 мес, а так-
же в сыворотке вакцинированных животных на протяжении 2-6 мес. ПА проявляются рано -
через 1-2 дня после окончания виремии и сохраняются у овец более года, а у коз - до 1,5 лет.
ВНА выявляют в PH в течение 15 мес. после заражения.
Результаты сравнительной оценки нескольких методов для обнаружения АТ показали,
что у экспериментально инфицированных овец АТ в РИГА отмечали на 7-й день после за-
ражения, в ИФ - на 12-й день. Максимальные титры АТ в РИФ и РИГА в течение 33 дн бы-
ли 1:128. ELISA удавалось выделять АТ в несколько более высоких титрах, но в поздние
сроки после заражения, чем в РНГА и ИФ. С его помощью выявляли более высокие титры
АТ (до 1:2560), в РИГА- 1:1024иРИФ- 1:156.
Дифференциальная диагностика. БН следует отличать от лихорадки долины Рифт,
катаральной лихорадки овец и гидроперикардита жвачных. Для лихорадки долины Рифт
характерны некротические очажки в печени. При гистологическом исследовании в печеноч-
ных клетках выявляют внутриядерные ацидофильные тельца-включения. При катаральной
лихорадке овец наиболее выраженными патологоанатомическими признаками являются
опухание и изъязвление языка, губ, морды, а также дегенеративно-некротические изменения
скелетных мышц и сердца. Гидроперикардитом болеют жвачные и всеядные животные. Бо-
лезнь характеризуется развитием серозно-фибриозного перикардита.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные приобретают иммунитет до 3,5 и более лет. Гипериммунная
сыворотка крови овец обладает гемолитическими свойствами и для лечебных целей непри-
годна. Живые вакцины применяют в странах Африки на основе шт. Энтеббе, аттенуирован-
ного путем длительного пассирования через мозг мышей (140-150 пассажей).
Сравнительная оценка поствакцинального иммунитета не изучена.
БОЛЕЗНЬ АКОБАНЕ
(Буньявирусная инфекция КРС)
Вирус Акобане имеет электронноплотную сердцевину диаметром 65-70 нм, ограничен-
ную 1-2-слойной оболочкой, и внешнюю 2-слойную оболочку толщиной 6,5-7 нм. Общий
диаметр вирионов 120-130 нм, поверхность их зернистая, окружена слоем шипиков длиной
около 10 нм. Морфология вируса характерна для представителей семейства Bunyaviridae,
рода Bunyavirus (5).
Вирус Акобане (шт. Р) репродуцируется в перевиваемых культурах клеток CV (титр
6,6+0,1 1g ТЦДзо/мл) и ПСГК (титр 6,4+0,1 ТЦД50/мл (3, 4). Изучен характер взаимодейст-
вия вируса Акабане (шт.Р) с клетками перевиваемой культуры CV-1. При заражении по-
следней в дозе 104,5 ТЦДзо/мл вирус вызывал ЦПИ через 48 ч. Они проявлялись расширени-
ем межклеточных пространств, снижением митотической активности клеток, набуханием,
полиморфизмом ядер большинства входящих в состав монослоя клеток, конденсацией в них
хроматина, выраженной зернистостью и вакуолизацией периферических участков цито-
плазмы. К 72-96 ч после заражения процессы деструкции были максимально выраженными
и проявлялись в разрежении монослоя, образовании обширных “окон”, обрамленных пик-
нолитическими клетками с ярко выраженной эозинофильной цитоплазмой (1,2,3, 4).
Экспериментальная инфекция воспроизводится на 5-6-дн СПФ КЭ, мышатах- и крыся-
тах-сосунах и мышатах-прыгунках. КЭ заражают в ЖМ 10-кратными разведениями суспен-
зии мозга инфицированных мышат-сосунов. На 7-10 сут у погибших КЭ наблюдали уродст-
356
Глава IX. Family Bunyaviridae Болезнь Найроби
ва конечностей, у некоторых - водянку головного мозга. У выживших цыплят отмечали
уродства конечностей и потерю координации движений. Вирус Акобане накапливается в
мозге СПФ КЭ в титре до 4,5 1g ЭЛДзд/мл. Мышат- и крысят-сосунов и мышат-прыгунков
заражали интрацеребрально 1%-ной вируссодержащей суспензией мозга мышей. Клиниче-
ские признаки (потеря рефлекса сосания, параличи и гибель) наблюдали с первого пассажа.
После 3-х последовательных пассажей вирус Акобане накапливался в мозге мышей-
прыгунков от 5,1 1g ЛД50/МЛ, в мозге крысят-сосунов - 6,43±0,18, в мозге мышат-сосунов -
7,07±0,23 1g ЛД50/МЛ. Титр АГ, приготовленных из мозга мышат-сосунов, составлял в РСК
1:32, в твердофазной ИФА 1:3125 (1,2,3,4, 7).
Штаммом вируса Акобане, прошедшим в лабораторных условиях 3 пассажа, заражали
овец на 32-36 дн беременности. Плоды животных обследовали на 69-108 дн беременности.
От 39 овец родилось 55 ягнят, у 44 из которых (80%) были тяжелые врожденные дефекты, в
основном мозга. Наблюдали гипоплазию легких и т.п. Гистопатологически обнаружен ши-
рокий спектр поражений - атрофия скелетных мышц и их дегенерация, общий отек мозга,
периваскулярные муфты. Сходные изменения обнаружены в мозге и мозжечке. Обширные
поражения с воспалением и без него отмечены в спинном мозге (10).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Анализируя результаты серологических и вирусологических исследований, направлен-
ных на выяснение этиологии болезни Акобане и связи данной патологии с вирусом болезни
Акобане, сделали заключение о том, что вирус Акобане широко распространен среди коров
и овец. В пользу этиологической роли вируса Акобане в болезни Акобане говорят результа-
ты частого выделения вируса Акобане от плодов стельных коров. Вирус Акобане, судя по
результатам перекрестной PH, РСК, РТГА и ИФ, АГ связан с вирусами группы Синбу, од-
нако имеет отношение и к вирусам группы Oroponche, lugwawuma и Manzanilla (9).
ДИАГНОСТИКА
Предложен специфический культуральный АГ вируса Акобане для серологической ди-
агностики. Для изготовления АГ накопление вируса проводят в культуре клеток CV-1 (шт.
В8935). Получена асцитическая жидкость, содержащая вирус Акобане. Ее испльзовали в
РДП. Титр ее - 1:8.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Х.Балашова Е.А. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1990:122 2.Балашова
Е.А. и др. Там же : 123. З.Балашова Е.А. и др. Там же, : 141. 4.Балашова Е.А. и др. Там же,
:142. 5.Малахова М.С. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992:83.
б.Орлянкин Б.Г. Классификация вирусов животных. М, 1996. 7.Черных Н.В. и др. Тез. докл.
н.-пр. конф. ВНИИВиМ, Покров, 1992:140. 8.Brinton N. Flaviviruses. Clin and Mol Aspect
Neurotr Virus Infect, 1989 69. 9.Matumuto M. et.al. Ktasato Arch Exp Med, 1980, 53,1-2:1.
lO.Parsonson L.M. et.al. Vet Microbiol, 1981, 6, 3:209. ll.Pricovet D.P. Rev Med Vet (Fr),
1991, 142, 7:545. ll.Wagner R.R. The Rabdoviruses. N.Y, 1987. 13.Weiss M. et.al. Arch Virol,
1987, 92, 1-2:1. 14.WiIdy P. Classification and nomenclature of viruses. First report of the Int
Committi on Nomenclature of viruses. Monogr, Virol, Karger, Basel, 1971, 5.
357
Глава X. Family Arenaviridae Лимфоцитарный хориоменингит
Глава X. АРЕНАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
СЕМЕЙСТВА ARENAVIRIDAE
Семейство Arenaviridae включает только один род Arenavirus, в состав которого входят
вирусы АГ- комплексов лимфоцитарного хориоменингита, Ласса (5 вирусов) и Такарибе (9
вирусов) (4). Типичный представитель рода - вирус (ЛХМ).
Вирионы аренавирусов представляют собой округлые или плеоморфные частицы диа-
метром 50-300 нм (средний диаметр 110-130 нм). Они состоят из нуклеокапсида спиральной
симметрии и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются булавовидные
выступы длиной 10 нм. Нуклеокапсид представлен спиральными циркулярными нитями
длиной 450-1300 нм. В составе вирионов обнаружены электронноплотиые частицы диамет-
ром 20-25 нм, которые представляют собой рибосомы. Название “аренавирусы” (от лат.
arenosus - песчаный) отражает наличие мелких, напоминающих песчинки, частиц внутри
вирионов (Рис. 54). Плавучая плотность вирионов в CsCl 1,19-1,20 г/см3, в сахарозе 1,17-
1,18 г/см3, коэффициент седиментации 325-500S. Вирусы быстро инактивируются при 56°С,
ультрафиолетовом облучении, действии липидных растворителей и pH среды ниже 5,5 и
выше 8,5. В состав вирионов входят белки, липиды, углеводы и РНК, однако количествен-
ное соотношение их пока не определено.
Геном аренавирусов состоит из 2-х молекул 1-спиральной неинфекционной РНК, обо-
значенной как L (2,2 - 2,8 МД) и S (1,1 МД). L-РНК содержит 7102-7220 нуклеотидов и ко-
дирует большой белок L (компонент транскриптазы) и малый белок Z, который имеет цинк
связанный домен. S-РНК содержит 3375-3432 нуклеотида и кодирует белок нуклеокапсида и
гликопротеины. Обе РНК в 3-концевой половине кодируют 1 белок, а в 5-концевой - другой,
т. е. они амбиполярны. В межгеииой области РНК имеется последовательность нуклеотидов,
которая действует как терминатор транскрипции. В вирионах обнаружены также 3 вида кле-
точных РНК: 28S, 18SH4-6S (5).
В состав оболочки вирионов входят 1 или 2 гликопротеина, формирующие булавовид-
ные выступы. Гликопротеины индуцируют синтез ВНА и играют основную роль в иммун-
ном ответе. С нуклеокапсидами вирионов ассоциированы белки L и N с мол.м. 200 и 63-72
кД. Размножение аренавирусов зависит от функции клеточного ядра и не наблюдается в
присутствии актиномицина Д. Созревание вирионов происходит в период прохождения нук-
леокапсидов через модифицированные участки клеточной мембраны.
ЛИМФОЦИТАРНЫЙ
ХОРИОМЕНИНГИТ МЫШЕЙ
Lymphocytic choriomeningitis, Humphreys’ disease
of guinia-pigs (англ.); Pneumopatie des Cobayes (франц.)
Сравнительно недавно род аренавирусов был выделен в отдельную таксономическую
группу. Он объединяет 10 представителей на основании общности морфологии, структуры,
биохимических, биологических свойств и АГ- взаимосвязей. В группу входят вирусы така-
рибе, вирус боливийской геморрагической лихорадки и вирус ЛХМ. Другие члены этого ро-
да - вирусы АГ группы Такарибе (Хунин, Мачупо, Ласса, Парана, Пичинде, Латино, Писти-
льо и Тамиами). Таксономически ареновирусы близки вирусам лейкоза птиц и мышей. Все
они иммунологически связаны друг с другом, и их прототипом является вирус ЛХМ. Четыре
358
Глава X. Family Arenaviridae Лимфоцитарный хориоменингит
представителя рода определенное значение имеют в патологии человека. Недавно был от-
крыт ещё один вирус, относящийся к аренавирусам - Lassa-вирус - возбудитель геморраги-
ческой лихорадки, характеризующейся высокой летальностью и контагиозностью. Болезнь с
1969 г. регистрируют в странах Западной Африки. Вирусы Хунин и Мачупо из комплекса
вирусов Токарибе являются возбудителями аргентинской и боливийской лихорадок. Арена-
вирусы способны длительно находиться в организме грызунов - естественных хозяев и обу-
словливать вирусоносительство, характеризующееся вирусемией и вирусурией, вертикаль-
ной передачей потомству, что поддерживает их циркуляцию в популяции грызунов.
ЛХМ (пневмопатия морских свинок, болезнь Хемфриса морских свинок) - эпидемиче-
ская инфекционная болезнь животных, преимущественно мышей, характеризующаяся по-
ражением ЦНС, в особенности мозговых оболочек и сосудистых сплетений. Болезнь переда-
ётся людям, зарегистрирована повсеместно.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. ЛХМ - антропозо-
оноз. Главным хозяином и источником для людей являются мыши. Тесная связь между за-
болеванием мышей и случаями заболевания людей подтверждается результатами серологи-
ческих исследований. Болезнь протекает разнообразно, но чаще в виде острого серозного
менингита. У диких мышей вирус вызывает латентную инфекцию. Внешне здоровые белые
мыши могут быть носителями вируса и служить источником заболевания. При заражении
лабораторных мышей адаптированными штаммами вируса возникает сильная реакция и
животные погибают. У морских свинок отмечают симптомы генерализованной, часто смер-
тельной болезни, характеризующейся крупозной пневмонией и появлением экссудата в
лимфатических пространствах.
У людей может развиваться асептический менингит, “грипп”, менингоэнцефалит и об-
щее остролихорадочное заболевание с летальным исходом. Часто лимфоцитарный менингит
протекает без клинических проявлений. Наиболее распространены менингиальная и грип-
поподобная форма болезни.
При вскрытии трупов животных отмечают инфильтрацию мозговых оболочек, сосуди-
стых сплетений и стенок сосудов лимфоидными клетками, плазмоцитами, макрофагами и
другими клетками. Местами видны участки узелкового глиоза. Инфильтрация лимфоидны-
ми клетками встречается в почках, слюнных и поджелудочной железах. Часто наблюдают
серозный перитонит и гепатит. Последний встречается у морских свинок и обезьян (1,2,3).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделен Армстронгом и Лилли в 1934 г. от обезьяны, на которой прово-
дили опыты по изучению вируса энцефалита Сан-Луи, и назван вирусом лимфоцитарного
хориоменингита (ВЛХМ) вследствие наблюдавшейся у заражённых обезьян выраженной
реакции сосудистого сплетения и оболочек мозга. Штаммы этого вируса, выделенные в раз-
личных географических зонах земного шара, различаются по биологическим признакам,
что, возможно, связано с “западной” и “восточной” ветвями их происхождения.
Морфология и химический состав Размеры вирионов аренавирусов варьируют от 50
до 300 нм. Мелкие частицы округлые, частицы больших размеров - чаще чашевидные. Ви-
рионы покрыты 1-мембранной оболочкой, имеют отростки и содержат одну или несколько
электронно-плотных гранул диаметром 20-30 нм, напоминающих рибосомы. Гранулы - наи-
более характерная особенность аренавирусов. Вирусные частицы образуются отпочковани-
ем, главным образом от плазматической мембраны. В местах отпочкования мембрана клет-
ки-хозяина становится плотнее и покрывается выступами. Позже в цитоплазме возникают
паракристаллические зоны, состоящие из фибрилл.
Аренавирусы отличаются от других РНК-содержащих, чувствительных к липидным
растворителям вирусов, по следующим признакам: не имеют спирального типа симметрии,
характерной для миксовирусов; более плеоморфны и содержат гранулы, не характерные для
вируса краснухи и некоторых арбовирусов и онкорнавирусов типа С. РНП, содержащийся в
359
Главах. Family Armavnidae Лимфоцитарныйхориоменингит
вирионах, является группоспецифичным АГ и выявляется методами ИФ и в РСК. Кроме то-
го, при центрифугировании вируса от него отделяется растворимый gs-AT; в цитоплазме
инфицированных клеток образуется большое количество гранул размером 20 нм, которые
представляют либо рибосомы клетки, либо внутренние части самих вирионов; в перевивае-
мой культуре клеток Vero вирус вызывает характерное ЦПД (однако некоторые штаммы
ВЛХМ не обладают этим свойством); вирус продолжительное время персистирует в орга-
низме грызунов; вирулентность ВЛХМ для мышей зависит от целостности тимусзависимой
лимфоидной системы. Вирионы округлые, овальные или плеоморфные, диаметр их 50-300
нм в тонких срезах и 85-89 нм при негативном окрашивании. Оболочка состоит из мембра-
ны с упорядоченной поверхностной структурой и близко расположенными ворсинками.
Внутренняя часть частиц кажется неструктурной и содержит различное число электронноп-
лотных гранул диаметром 20-30 нм. Градиент плотности равен 1,24-1,15 г/см3. В вирионах
ВЛХМ обнаружено несколько видов 1-нитевых РНК, среди которых 23S и 31S РНК являют-
ся собственно вирусными. Кроме того, в вирионах обнаружены 28S, 18S, 4S, 5S и 5,5S РНК.
Три последних, по-видимому, рибосомного происхождения. Репродукция вируса не подав-
ляется ингибиторами ДНК. Мол.м. нитей РНК не установлена (1,2,3, 4).
Устойчивость. При 56°С вирус инактивируется в течение 1 ч. Хорошо сохраняется в
50%-ном глицерине, при -70°С и в лиофилизированном состоянии. Чувствителен к эфиру.
Мертиолят в разведении 1:10 000 значительно понижает титр вируса в суспензии. Возбуди-
тель лабилен при pH ниже 7,0.
Антигенная структура не изучена. У L-клеток, инфицированных вирусом, образуется
АГ 2-х видов. Один находится на поверхности клеток и соответствует инфекционному виру-
су, другой включён в цитоплазму и является КС-АГ (“растворимым”). Он продуцируется
инфицированными клетками, является структурным компонентом инфекционного вируса;
не обладает инфекционностью, иммунными свойствами, но индуцирует КСА. Цитолитиче-
ские свойства вируса изменяются в зависимости от его предшествующего пассирования.
Антигенная активность. В сыворотке реконвалесцентов образуются КСА и ВНА. Пер-
вые можно обнаружить через 1-3 нед после начала болезни, вторые - не ранее чем через 6-
10 нед. ВНА присутствуют в крови людей-реконвалесцентов в течение 3-х лет, а титр КСА
снижается уже через 3-6 мес после начала болезни.
Антигенная вариабельность и родство. Изучены недостаточно. Все аренавирусы
имеют общий группоспецифический АГ, выявляемый методом ИФ и в некоторых случаях в
РСК. Все штаммы вируса в иммунологическом отношении родственны.
Гемагглютинирующие свойства не установлены.
Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство. У людей в период приступа
лихорадки вирус находится в крови, в спинномозговой жидкости, мозге и в секрете носо-
глотки. Его можно выделить из лёгких и из мозга людей, погибших от ЛХМ. В крови лиц,
которые никогда не болели хориоменингитом, обнаружены ВНА. Вирус выделяли также из
кала и мочи мышей. У латентно больных лиц отмечают длительное вирусоносительство.
Оно было обнаружено и у клинически здоровых мышей, морских свинок, обезьян и собак.
Экспериментальная инфекция. Патогенность различных штаммов ВЛХМ для экспе-
риментальных животных различна. Наиболее пригодны для изучения данного вируса мор-
ские свинки и белые мыши. Последние регулярно заболевают при введении вируса в мозг
или в носовую полость в разведениях 10'3-10'7 Через 5-12 дн после заражения шерсть у них
взъерошивается, появляется дрожь и клонические конвульсии, при которых животные могут
погибнуть. Смерть наступает через 1-3 дн после появления симптомов болезни. При введе-
нии вируса в небольших дозах после переболевания у мышей развивается иммунитет.
Большие дозы вируса при введении в брюшную полость могут вызвать смерть животного. С
возрастом чувствительность мышей к экспериментальной инфекции повышается.
360
Глава X. Family Arenaviridae Лимфоцитарный хориомешшгит
Чувствительность линий мышей к данному вирусу различна. Наиболее чувствительны
мыши линий Сс 57 Br, СВА, AKR, более резистентны мыши линии BALB/c, ДВА/2. Мор-
ские свинки, как и мыши, наиболее чувствительны при интрацеребральном заражении. По-
сле подкожного и внутрибрюшного введения вируса смерть наступает через 9-16 дн. У ин-
фицированных хомяков отмечали лишь продолжительную вирусемию. Удавалось заразить
обезьян различных видов, крыс и собак. Кроликов инфицировать трудно, легче в период бе-
ременности - вирус вызывает у них аборт. При внутрикожном заражении у кроликов появ-
ляется специфическая местная кожная реакция. У мышей-вирусоносителей при интрацереб-
ральном введении стерильного бульона может развиваться вирусный менингит.
Вирус можно обнаружить в мозге, крови, селезёнке, лёгких и в моче мышей и морских
свинок. Он тесно связан с эритроцитами этих животных.
Культивирование. Вирус поддерживается интрацеребральным заражением мышей-
сосунов. Он размножается также на ХАО КЭ, но специфических поражений не вызывает.
Аренавирусы (вирус ЛХМ, вирус Такарибе и шт. НУР комплекса Такарибе) хорошо раз-
множаются в первичнотрипсинизированных культурах клеток эмбриона человека, мыши,
кур, хомяка и в перевиваемых линиях HeLa, НЕР-2, СПЭВ, L и Vero. В большинстве куль-
тур клеток ЦПИ вирус не вызывает. Они наблюдаются только после адаптации вируса. В
монослойной культуре клеток КЭ после 12-дн культивирования удавалось получить бляшки.
Первичная инфекция культур клеток вирусом характеризуется образованием дефектного
интерферирующего и полноценного исходного вируса. При последовательном пассировании
вируса появление дефектных и полноценных вирионов чередуется; через 50-100 пассажей
стандартный вирус перестает образовываться, и продуцируются дефектные частицы. Не-
смотря на иммунологическое родство между штаммами ВЛХМ, отдельные штаммы разли-
чаются по интенсивности репродукции в культуре клеток L. Например, шт. Трауб достигал
наивысшего титра через 32 ч, а шт. WCP - через 40 ч после заражения. Наиболее стабиль-
ным в отношении роста в культуре клеток L оказался шт. С А 1371. К данному вирусу осо-
бенно чувствительна перевиваемая культура клеток Vero. В определённых культурах клеток
вирус дает персистентную инфекцию.
Вирус размножается в цитоплазме. При репродукции вируса отмечают чередование ин-
фицирования и рефрактерности клеток, которые освобождаются от вирусной инфекции, по-
сле чего процесс повторяется. Механизм этого явления связан с изменением лизосом инфи-
цированных клеток.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Инфекция распространяется аэрогенно и в
передаче ее участвуют членистоногие - комары, постельные клопы, вши, обитающие на
обезьянах. Вирус выделен от инфицированных клещей, а также от их потомства. Хомяки
являются гипотетическими переносчиками инфекции. Домовые мыши выделяют вирус с но-
совым секретом, семенной жидкостью, мочой и калом и таким путем, вероятно, заражают
окружающую среду.
Спектр патогенности в естественных условиях. Заболевают люди, обезьяны, мор-
ские свинки и мыши.
ДИАГНОСТИКА
Решающее значение в диагностике данного заболевания, как и других ареновирусных
инфекций, имеют серологические методы исследования. Иммунные сыворотки получают от
морских свинок после интрацеребрального заражения. АГ готовят с применением сахаро-
зо-ацетоновой экстракции. РСК проводят микрокапельным методом в модификации С.Я.
Гайдамович С.Я и Т.В. Кирющенко (1972). PH ставят на мышах. Чувствительным методом
групповой и видовой идентификации аренавирусов является РИГА. Ее ставят микрометодом
с применением эритроцитов барана, сенсибилизированных иммуноглобулином, который
выделяют из иммунных сывороток морских свинок или асцитных жидкостей иммунных
361
ГлаваХ. Family Arenaviridae Лимфоцитарный хориоменингит
мышей. Сенсибилизацию эритроцитов барана проводят по методу Боудена в модификации
Рицай. До сенсибилизации эритроциты барана обрабатывают глютаральдегидом. Реакцию
агрегации тромбоцитов проводят микрометодом. Прямая ИФ - надежный метод экспресс-
диагностики. Препараты-отпечатки готовят из головного мозга, печени, легких и почек. У
экспериментально зараженных хомячков специфический АГ обнаруживают в течение 5-10
нед. КСА и ВНА образуются у животных, вакцинированных живым и инактивированным
вирусами. АТ появляются на 10-й день, продолжительность их циркуляции неизвестна. У
мышей АТ может не быть. Чтобы обнаружить их, иногда нужно инкубировать сыворотку и
вирус в течение 24 ч при 37°. АГ ВЛХМ вызывает у мышей, морских свинок и кроликов об-
разование КСА только с полным адъювантом Фрейнда.
КС-АГ получают из инфицированных органов морской свинки или L-клеток методом
экстракции бутанолом. АГ в смеси с адъювантом Фрейнда индуцирует синтез КСА, но не
ВНА. Он не вызывает иммунитет и не защищает морских свинок от заражения ВЛХМ. Ан-
тисыворотка на КС-АГ не реагирует с очищенным вирусом, так как АГ не содержится на
поверхности вириона.
Для индикации АГ ВЛХМ и Такарибе в инфицированных материалах успешно приме-
няют РИГА. Реакция высокоспецифична и чувствительна. При сенсибилизации эритроцитов
иммуноглобулинами, выделенными из иммунных сывороток морских свинок, титры РИГА
составляют 1:250 - 1:512. Для титрования АТ в сыворотках экспериментальных животных,
в т.ч, при хронически протекающем хориоменингите у мышей, применяют РТНГА. У инфи-
цированных мышей образуются специфические Т-лимфоциты, цитотоксичные по отноше-
нию к клеткам-мишеням. Полагают, что на ранней стадии инфицирования лимфоцитарный
хориоменингит представляет собой аутоиммунный процесс (2).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет у мышей инфицированных линий, возможно, обусловлен стойко переноси-
мой инфекцией сосунков или активным иммунитетом взрослых. Элиминация вируса из ор-
ганизма персистентно инфицированных животных (вирусоносителей) связана с Т-клетами.
Морских свинок удалось иммунизировать вирусом, модифицированным путем последова-
тельных интрацеребральных пассажей на мышах. С уничтожением диких мышей опасность
заболевания человека уменьшается.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев,Урожай,1993. 2.Сюрин В.Н. и др. Части, вет.
вирусол. М., Урожай,1979. З.ВпШоп М. Flaviviruses. Clin and Mol Aspects Neurotrop Virus
Infect, 1989, 2:141. 4.Francki R.I.B. et.al. Class and Nomenci. of Viruses.5th rep of Int Common
Taxonomy of Viruses. Arch Virol, 1991, 2, suppl. 5.Oldstoune M.B. (Ed) Arenaviruses: genes,
proteins and expression., Berlin, e.a.1987.
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Глава XI. РЕТРОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЕТРОВИРУСОВ
Семейство Retroviridae - большая группа РНК-содержащих вирусов, поражающих по-
звоночных. Характерная особенность вирусов - наличие в составе вирионов РНК-зависимой
ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы), обеспечивающей синтез ДНК на матрице ви-
рионной РНК. Эго послужило основанием для названия семейства Retroviridae (от лат. retro
- обратный).
Название семейства Retroviridae предложил в 1973 г. W.Parks. Оно происходит от англ,
reverse transcriptase - обратная транскриптаза (фермент, входящий в состав вириона ретро-
вирусов). Ретровирусы выделены в отдельное семейство в 1974 г. К семейству ретровирусов
относятся возбудители лейкоза КРС , лейкемии и саркома кошек, лейкоза птиц, ретикулоэн-
дотелиоза птиц, аденоматоза, висны-маэди, артрита-энцефалита коз, инфекционной анемии
лошадей и заболеваний морских свинок, мышей, крыс, гиббонов, шерстистых обезьян. Все
представители семейства имеют следующие признаки: наличие липидной оболочки и серд-
цевины; характерную морфологию; наличие обратной транскриптазы (РНК-зависимой
ДНК-полимеразы), внутри вириона - геном в виде 1-нитчатой линейной РНК, которая обра-
зует комплекс, состоящий из 2-х идентичных субъединиц (около 3 ИД каждая), репликация
происходит стадию образования 2-нитчатого ДНК-провируса; интеграция ДНК-провируса с
клеточным геномом; осуществление транскрипции клеточной РНК-полимеразой; созревание
вирионов путем почкования на клеточных мембранах. О принадлежности агента к ретрови-
русам судят по его морфологии, физическим и химическим свойствам (плотность вириона
1,15-1,19 г/см3, сердцевины 1,21-1,2 г/см3, нуклеотида 1,26-1,31 г/см3; наличие 60-70S РНК,
наличие обратной транскриптазной активности), чувствительности репликации к ингибито-
рам синтеза ДНК в первые 4-6 ч после заражения.
К настоящему времени ретровирусы обнаружены у всех основных таксонов позвоноч-
ных и даже беспозвоночных (ленточные, глисты, дрозофила). Некоторые характеристики
наиболее известных ретровирусов приведены в табл. XI. 1. Все ретровирусы по морфологии
делят на 4 основных типа - А, В, С и Д. По способности заражать клетки различного проис-
хождения ретровирусы делят на 4 группы: экотропные вирусы, способные инфицировать
только клетки того вида животных, от которого они выделяются, ксенотропные - инфици-
руют клетки животных других видов, но плохо размножаются в тех клетках, из которых они
выделяются; амфитропные - реплицируются в клетках различного происхождения - как
“своих”, так и “чужих”; политропные вирусы, способные заражать клетки животных раз-
личных видов, хотя и отличаются по кругу хозяев от амфотропных. В зависимости от круга
хозяев куриные ретровирусы подразделяют на подгруппы - А, В, С, Д и Е (реплицируются в
клетках различных пород кур). Мышиные экотропные ретровирусы на основании сходных
критериев разбивают на N, В, NB-тропные. Некоторые ретровирусы содержатся в геноме
животного уже от рождения и передаются потомству по наследству. Такие ретровирусы на-
зывают эндогенными. Они могут находиться в “молчащем” либо в активном состоянии, ко-
гда из нормальных, лишенных контакта с каким-либо вирусом клеток вдруг начинает про-
дуцировать ретровирус. Причиной, вызывающей переход эндогенного ретровируса из
“молчащего” состояния к активному, может быть действие ионизирующего излучения, ка-
ких-либо химических или биологических факторов. В тех случаях, когда причина активного
эндогенного ретровируса не известна, говорят о спонтанной экспрессии вируса. Другая
группа ретровирусов - экзогенные. Они, как обычные вирусы, могут попасть в клетку хозяи-
на только путем инфекции извне. Таким образом, если эндогенными ретровирусами зара-
363
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
зиться нельзя, поскольку они являются частью генетического аппарата от рождения, то экзо-
генными - вполне возможно. Основной способ заражения ретровирусами - контактный, но
можно заразиться через молоко. Важно отметить, что между экзогенным и эндогенными ви-
русами не существует непроходимой пропасти: эндогенный вирус может стать экзогенным и
наоборот. Вирионы ретровирусов представляют собой частицы сферической формы диамет-
ром 80-100 нм. Они состоят из сердцевины, внутренней белковой мембраны и липосодер-
жащей наружной оболочки, на поверхности которой имеются выступы длиной
Таблица XL 1. Основные характеристики некоторых ретровирусов.
Обозначе ние Вирус Источник Общая характе- ристика Онко ген Происхожде ние онкогена
AEV Эритробластоза птиц Курица С, X, Д, 4 + ДНК курицы
ALV Лекоза птиц Курица C,N или X,R,2 - -
AMV Миелобластоза птиц Курица С, X, Д, 4 + ДНК курицы
BLV Лейкоза КРС Корова С, X, R, 3 +? Вирусный
FeLV Лейкоза кошек Кошка C,N или X,R,2 - -
FeSV Саркомы кошек Кошка С, X, Д, 5 + ДНК кошки
HTLV Лейкоз человека шт.1 Человек С, X, R, 3 +? Вирусный
HTLV Лейкоз чел. шт. II Человек С, X, R, 3 - -
RAV-O Асе. с RSV, шт. О Курица С, X, R, 1 - -
RSV Саркомы Рауса Курица С, X, R, 5 + ДНК курицы
примерно 8 нм. В сердцевине различают капсулу сердцевины, имеющую икосаэдральное
строение, и нуклеоид. У ретровирусов типа С нуклеоид находится в центре вириона, в ви-
рионах типов В и D он расположен эксцентрично. Плавучая плотность вирионов в сахарозе
составляет 1,16-1,18 г/см3. Вирусы чувствительны к жирорастворителям и детергентам, от-
носительно устойчивы к УФ облучению.
Геном ретровирусов в отличие от такового всех других известных вирусов диплоиден и
представлен 2-мя идентичными молекулами плюс-РНК, соединенными водородными связя-
ми в области 5'-концов. Каждая РНК полиаденилирована на 3'-конце и кэпирована на 5 -
конце. Геномная РНК ретровирусов состоит из четырех основных генов: (5-3), gag, pro, pol и
env, кодирующих соответственно внутренние вирионные белки, протеазу, обратную транс-,
криптазу и гликопротеины наружной оболочки вирионов. Геном ряда ретровирусов содер-
жит также гены, кодирующие неструктурные белки, которые играют важную роль в репли-
кации вирусов. Некоторые ретровирусы содержат клеточные гены (онкогены), играющие
ключевую роль в индукции неопластической трансформации клеток. Вирионная РНК ретро-
вирусов не обладает инфекционностью.
В вирионах ретровирусов обнаружено 6-7 белков. В состав наружной оболочки вирио-
нов входят 2 белка - поверхностный и трансмембранный, на которых имеются типоспеци-
фические АГ-детерминанты, индуцирующие синтез ВНА. В состав сердцевины входят 3-4
белка, один из которых непоцзедственно связан с РНК. Белки сердцевины являются груп-
поспецифическими АГ. С сердцевиной вириона ассоциировано более 10 ферментов, в т.ч.
обратная транскриптаза, которая обладает 3-мя ферментативными активностями: РНК-
зависимой ДНК-полимеразной, обеспечивающей синтез 1-спиральной комплементарной
ДНК (кДНК) на матрице вирионной РНК; ДНК-зависимой ДНК-полимеразной, обеспечи-
вающей синтез 2-й спирали ДНК, и рибонуклеазной (рибонуклеаза Н), гидролизующей
РНК в составе гибрида РНК-ДНК. В вирионах содержится 60% белка, 35 липидов, 3,5 уг-
364
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
леводов и около 2% РНК. Углеводы и липиды имеют клеточное происхождение и обнару-
жены в наружней оболочке вирионов.
Размножение ретровирусов происходит в цитоплазме и ядре клетки. Вирионы ретрови-
русов проникают в клетку путем слияния липопротеидной оболочки с плазматической мем-
браной клетки, а также в результате эндоцитоза. В цитоплазме клетки происходит синтез
ДНК на матрице вирионной РНК с помощью обратной транскриптазы. Синтез ДНК индуци-
руется клеточной транспортной РНК, которая служит затравкой (праймером). Синтезиро-
ванная 2-спиральная линейная ДНК (провирус) на концах имеет длинные концевые повторы
(LTR), необходимые для встраивания в клеточную ДНК и функционирования провирусной
ДНК. Провирусная ДНК транспортируется в ядро, превращается в ковалентно замкнутую
кольцевую форму и встраивается в геном клетки с помощью вирусной интегразы. Вирусная
ДНК встраивается во многие участки клеточной ДНК, реплицируется вместе с ней и переда-
ется дочерним клеткам.
Синтез вирусспецифических РНК происходит на матрице провирусной ДНК, встроенной
в клеточный геном, с помощью клеточной ДНК-зависимой РНК-полимеразы II. Синтезиро-
ванные РНК транспортируются в цитоплазму клетки, где они направляют синтез вирусспе-
цифических белков, а также участвуют в формировании вирионов, что происходит в период
их почкования от клеточной мембраны, в которую включены гликопротеины.
Международным комитетом по таксономии вирусов в 1990 г. было отменено деление
семейства Retroviridae на 3 подсемейства: Oncovirinae; Spumavirinae; Lentivirinae. Теперь
оно подразделяется на семь родов: ретровирусы типа В млекопитающих, ретровиру-
сы типа С млекопитающих, ретровирусы типа D, ретровирусы типа С птиц, пеня-
щие вирусы (Spumavirus, от лат. spuma - пена), ретровирусы лейкоза крупного рогато-
го скота и Т-клеточного лейкоза человека, лентивирусы (Lentivirus, от лат. lenti -
медленный).
1. Род ретровирусов типа В млекопитающих. Включает вирусы опухолей молочных
желез мышей. В вирионах обнаружено 7 белков с мол.м. 10-52 кД. Геном состоит из 10 тыс.
нуклеотидов, имеется дополнительный ген orf. Длина LTR 1300 пар нуклеотидов.
2. Род ретровирусов типа С млекопитающих. Включает 3 подрода: вирусы типа С
млекопитающих (вирусы саркомы и лейкоза кошек, вирус лейкоза гиббонов, вирусы типа С
свиней и морских свинок, вирус саркомы шерстистых обезьян); вирусы ретикулоэндотелио-
за (вирус ретиколоэндотелиоза птиц); вирусы типа С рептилий (ретровирус гадюк). Типич-
ным представителем рода является вирус лейкоза мышей. В вирионах обнаружено 7 белков
с мол.м. 10-70 кД. Геном состоит из 8,3 тыс. нуклеотидов, длина LTR - 600 пар нуклеоти-
дов. В геноме многих представителей рода имеется онкоген.
3. Род ретровирусов типа D. Включает вирус обезьян Мезон-Пфайзер (прототипный
вирус), ретровирусы беличьих обезьян и лангустов. В вирионах обнаружено 6 белков с
мол.м. 10-70 кД. Геном состоит из 8 тыс. нуклеотидов, длина LTR - 350 пар нуклеотидов.
4. Род ретровирусов типа С птиц. Включает вирусы лейкоза (прототипный вирус) и
саркомы птиц. В вирионах обнаружено 7 белков с мол.м. 10-85 кД. Геном состоит из 7,2
тыс. нуклеотидов, длина LTR - 350 пар нуклеотидов. В геноме имеется онкоген.
5. Род Spumavirus. Включает пенящие вирусы человека (прототипный вирус) и обезьян,
синцитиальные вирусы КРС и кошек. Геном состоит, примерно, из 11 тыс. нуклеотидов,
длина LTR - 1150 пар нуклеотидов. Вирусы вызывают слияние клеток, вследствие чего
культура выглядит как бы вспененной. Инфицирование вирусами не сопровояедается разви-
тием патологических изменений.
6. Род ретровирусов лейкоза КРС и Т-клеточного лейкоза человека. Включает вирус
лейкоза КРС (прототипный вирус), вирус Т-клеточного лейкоза человека типов 1 и 2 и вирус
Т-клеточного лейкоза обезьян. В вирионе 6 белков с мол.м. 16-60 кД. Геном состоит из 8,3
365
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
тыс. нуклеотидов; имеются 2 дополнительных гена (tax, rex), продукты которых участвуют
в синтезе и процессинге вирусной РНК. Длина LTR - 550-750 пар нуклеоидов.
7. Род Lentivirus. Включает 5 подродов: 1. Вирусы иммунодефицита приматов (вирусы
иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 и 2, вирус иммунодефицита обезьян); 2. Лентивирусы
овец и коз (вирус висна-маэди, вирус артрита-энцефалита коз); 3, Лентивирусы лошадей
(вирус инфекционной анемии); 4. Лентивирусы кошек (вирус иммунодефицита кошек); 5.
Лентивирусы КРС (вирус иммунодефицита КРС). Типичный представитель рода - ВИЧ
типа 1. В вирионах 6 белков с мол.м. 7-120 кД. Геном состоит из 9,2 тыс. нуклеотидов, дли-
на LTR - 600 пар нуклеотидов. В геноме ВИЧ несколько дополнительных генов, продукты
которых участвуют в регуляции синтеза и процессинге вирусной РНК.
Появилось большое количество выделенных неонкогеиных оикорнавирусов. Роль их в
возникновении и развитии неопластических заболеваний неясна. Но сам факт их существо-
вания интересен. Поэтому выяснение их роли и механизмов взаимодействия с организмом
несомненно помогает иам приблизится к пониманию природы неопластических процессов.
Гипотезы вирусного канцерогенеза. Чтобы объяснить присутствие онкор-навирусов
типа А, В и С в клетках организма и их роль, выдвинуто несколько гипотез, некоторые из
них основываются на взаимоисключающих положениях.
Гипотеза онкогена Хюбнера и Тодаро (1969 г.). Авторы предложили общую гипотезу
вирусного канцерогенеза, согласно которой клетки большинства, если не всех позвоночных,
несут вертикально (наследственно) передаваемую информацию РНК-содержащего вируса
типа С и онкогена, который трансформирует нормальную клетку в опухолевую.
Представление о клеточном происхождении онкогена согласуется с провирусной гипоте-
зой Темина. В 1965 г. Г. Темин предложил гипотезу о синтезе ДНК на матрице РНК. В 1970
г. гипотеза подтверждена экспериментально. ДНК-копии оикорнавирусов встраиваются в
ДНК клеток и передаются потомству.
Опухолеродный вирус может действовать на клетки двояко. В 1-м случае вирус или ви-
русный геном осуществляет “запуск” трансформационного процесса, но не участвует в его
поддержании (гипотеза “запуска”); во 2-м случае - для возникновения и поддержания
трансформированного состояния клетки необходимо присутствие вирусного генома (гипо-
теза “присутствия”). Предпочтение отдаётся 2-му варианту, поскольку должен существовать
надёжный механизм закрепления вирусного генома в клетке. Таким механизмом может
быть физическая интеграция вирусной ДНК с ДНК хромосом, как это показано для вирусов
полиомы и аденовирусов. Сходный механизм можно предполагать и для РНК-содержащих
вирусов путём синтеза ДНК-провируса с помощью обратной транскриптазы. Для объясне-
ния того, как интегрированный вирусный геном поддерживает трансформацию, предложены
две гипотезы: гипотеза положения и гипотеза функционирования. Согласно первой гипотезе,
вирусный геном занимает в клеточном геноме такое положение, при котором нарушается
контроль клеточного деления, функционирование вирусного генома в этом случае необяза-
тельно. Согласно второй, не вирусный геном, а его продукты ответственны за поддержание
трансформации.
По-видимому, более обоснована гипотеза функционирования. По существующим пред-
ставлениям, трансформационные изменения клетки возникают и поддерживаются за счёт
строго определённых, а ие любых вирусиндуцированных белков. Геи, ответственный за син-
тез такого белка, можно обозначить как “раковый” геи, или онкоген, а его продукт - как ра-
ковый, или онкогенный, белок. Следовательно, гипотеза присутствия и функционирования
может быть конкретизирована в виде гипотезы оикогеиа.
Гипотеза, согласно которой оикориавирусам отводится положительная роль в защите
организма от злокачественного роста, принадлежит Хиршгорну и corp. (1973). Согласно
этой гипотезе, латентные онкогенные вирусы, персистирующие в нормальном организме,
по-видимому, чаще предохраняют организм от развития и отторжения последних, чем ин-
366
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
дуцируют злокачественный рост, т.е. симбиоз между РНК-вирусом и макроорганизмом, вы-
работанный в процессе эволюции, играет, вероятно, положительную для организма роль.
Ретровирусы обладают диплоидным геномом, который имеет следующие участки: 1) R -
короткий прямой концевой повтор 20-80 нуклеотидов, он необходим для репликации; 2) U5 -
1 участок уникальной последовательности нуклеотидов между R и PBS, обычно 80-100 осно-
ваний; 3) PBS - участок, комплементарный РНК, служащий затравкой при синтезе (-)цепи
ДНК ретровируса, область комплементарное™ этого участка 11-24 нуклеотида. Участок
PBS также необходим для репликации; 4) L - нетрансплантируемый, или лидерный участок.
Он содержит сигнал, необходимый для упаковки РНК в вирион, а также сигнал для сплай-
синга; 5) ген gag.(2 тыс. оснований -Т.О.) кодирует внутренние структурные белки вириона;
6) ген pol (3 Т.О.) кодирует полипептиды, обладающие ревертазной (РНК-зависимой, ДНК-
полимеразной), специфической РНК-азной (РНКаза Н) и ДНК-эндонуклеазной активностя-
ми; 7) ген evn (2 Т.О.) кодирует поверхностные белки вириона, по крайней мере, один из
них является гликопротеидом; 8) РРТ -участок, богатый пуринами. В этом месте начинается
синтез (+)ннти ДНК вируса; 9) U3- уникальный участок между РРТ и R (0,2 -1 Т.О.). Содер-
жит участки инициации и терминации транскрипции. Гены gag, pol, evn б необходимые для
размножения вируса, называют репликативными. Средн ретровирусов широко распростра-
нены дефектные вирусы. Если вирус потеряет репликативные гены gag, pol, evn, то все рав-
но может существовать и размножаться, если в клетке присутствуют продукты генов. Обыч-
но эти продукты поставляют другой полноценный (недефектный) вирус, который называют
вирусом-помощ-ником. Кроме указанных репликативных (gog, pol, evn) генов, многие онко-
генные (трансформирующие) вирусы содержат дополнительные гены one. Обычно приобре-
тение дополнительных генов сопровождается утратой части (или целиком) одного из репли-
кативных генов полноценного вируса, поэтому трансформирующие вирусы в подавляющем
большинстве случаев являются дефектными.
Экспрессия различных генов ретровирусов осуществляется различными путями. Ретро-
вирус, связываясь со специфическим рецептором на мембране клетки, проникает внутрь.
Там с помощью ревертазы на геномной РНК синтезируется ДНК вируса, которая интегриру-
ет в ДНК клетки. ДНК-овую форму ретровируса называют провирусом, который может
быть интегрированным или неинтегрированным. Интегрированный провирус по многим по-
казателям ведет себя, как нормальные гены клетки, и передается потомкам клетки по закону
Менделя. Если интеграция вируса произошла в герминальные клетки (клетки зародышевого
пути, из которых в дальнейшем формируются сперматозоиды и яйцеклетки), то этот вирус
будет передаваться по наследству дочерним особям и, следовательно, станет эндогенным.
Поэтому, правильнее говорить о передаче по наследству эндогенного провируса, а не виру-
са. Интегрированный провирус начинает экспрессироваться, в результате чего в клетке об-
разуются различные виды вирусных РНК и белков. После того, как в клетке образуется дос-
таточное количество геномных РНК и необходимых вирусных белков, образуются вирионы,
которые выделяются из клетки путем почкования, и, таким образом, жизненный цикл рет-
ровируса замыкается. Обычно ретровирус не убивает клетку, как большинство других виру-
сов, а продолжает мирно сосуществовать до её смерти.
Две стадии в жизненном цикле ретровирусов (синтез ДНК на матрице РНК и интегра-
ции провируса) уникальны для ретровирусов и имеют большое значение для понимания ме-
ханизмов ретровирусного канцерогенеза.
Основная масса ретровирусов эндогенного происхождения, и они повсеместно распро-
странены; любое животное или человек уже от рождения несет в себе ретровирусные после-
довательности. Однако, каждое животное и человек не обречены на гибель от рака, так как
основная масса ретровирусов не обладает онкогенными свойствами. Эндогенные провирусы
наиболее подробно изучены у кур. Локализация эндогенных провирусов специфична для оп-
ределения пород кур; например, в геноме породы бурых леггорнов описаны 6 локусов эндо-
367
Глава XI. Family Retroviridae Ре1ровирусные инфекции
генных провирусов, тогда как в геноме кур породы итальянская куропатчатая не обнаруже-
ны последовательности, родственные лейкозу птиц. Эндогенные провирусы не являются
строго необходимыми элементами генома. Однако имеются примеры участия их в жизне-
деятельности организма хозяина. В частности, экспрессия гена env эндогенных провирусов
кур ведет к синтезу поверхностного гликопротенда, способного взаимодействовать с экзо-
генным вирусом подгруппы Е и, следовательно, к созданию резистентности организма к
инфекции собственным экзогенным вирусом.
По онкогенным потенциям ретровирусы можно разделить на группы:
1. Неонкогенные вирусы. К ним относится подавляющее большинство эндогенных виру-
сов. Они защищают организм от инфицирования онкогенными вирусами. К этой группе от-
носятся как полноценные, так и дефектные вирусы.
2. Вирусы лимфоцитарных лейкозов. Эго слабоонкогенные вирусы, которые в культуре
клеток размножаются без видимых последствий, а у части чувствительных животных после
скрытого периода (несколько месяцев, вплоть до года) вызывают большей частью лейкозы.
Типичные представители - вирусы лейкоза птиц (ALV) и вирусы лейкоза мышей (Мо-
MuLV, GrMnLv и др.) Эти вирусы обычно недефектны по репликации.
3. Вирусы острых лейкозов. В эту группу входят вирусы, обладающие средними и силь-
ными онкогенными потенциями. In vitro эти вирусы не трансформируют фибробласты, но
часто трансформируют клетки других типов, a in vivo у значительной части (вплоть до
100%) чувствительных животных после короткого или среднего латентного периода (от 2-х
нед до нескольких месяцев) вызывают различные виды лейкозов. Вирусы этой группы бы-
вают как дефектными, так и недефектными. К ним относятся вирусы, индуцирующие фоку-
сы на селезенке (SFFV), I и II типы вируса лейкоза человека (HTLV-I и HTLV-II - см. виру-
сы СПИД) и др. Основное отличие этих вирусов от 4-й и 5-й групп высокоонкогенных рет-
ровирусов заключается не в степени онкогенности, а в механизме индукции опухолей.
4. Вирусы острых лейкозов 1 типа. Высокоонкогенные вирусы, за редким исключени-
ем, трансформируют фибробласты или другие типы клеток in vitro, a in vivo - почти у 100%
чувствительных животных вызывают различные виды лейкозов после короткого латентного
периода. Все известные вирусы этой группы дефектны. Типичные представители - вирус
лейкоза мышей HB-MuLV, миелоцитоза птиц МС-29, эритробластоза птиц AEV и др.
5. Вирусы саркомы. К ним относятся высокоонкогенные представители, которые транс-
формируют фибробласты in vitro, a in vivo практически у всех чувствительных животных
вызывают после короткого латентного периода различные виды неоплазий, в основном сар-
комы. За исключением вируса саркомы Рауса (а также близкородственных вирусов), все ви-
русы этой группы также по репликации дефектны. Кроме этого вируса, сюда относятся ви-
русы саркомы птиц (FuSV), саркомы мышей (Mo-MuSV, HA-MuSV) и др.
Вирусы 4 и 5 групп очень близки между собой как по строению, так и по способу индук-
ции опухолей; их обычно объединяют в одну группу трансформирующих вирусов, обла-
дающих онкогенностью благодаря присутствию у них особого гена one (онкогена), имеюще-
го много разновидностей, действие этих генов приводит к возникновению опухолей. Онко-
гены трансформирующих вирусов имеют не вирусное, а клеточное происхождение, и были
захвачены ретровирусом из клеточного генома в результате рекомбинации. Практически все
вирусы лимфоцитарных лейкозов мышей содержат вирусы типа MCF (это название они по-
лучили за способность вызывать на фибробластах норки цитопатические фокусы; вирусы
содержат ген env, очень похожий на таковой у вирусов LFSV ( 3 группа), обладающих вы-
сокой онкогенностью и вызывающих рак.
К 1-й группе относят ретровирусы, не обладающие онкогенными потенциями, однако
это не совсем точно, так как, рекомбинируя между собой или с другими ретровирусами, эти
вирусы могут внезапно приобрести онкогенность. Основная причина, обусловливающая этот
эффект, связана, по-видимому, с изменившейся эффективностью репликации вируса. Суще-
368
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ствуют некоторые неонкогенные ретровирусы, которые отличаются от неонкогенных вари-
антов лишь двумя признаками: структурой участка U3 и эффективностью репликации. Неон-
когенный вирус размножается значительно хуже онкогенного. Поскольку область U3 опре-
деляет эффективность экспрессии вируса, можно предположить, что эти 3 фактора (онко-
генность, эффективность репликации, область U3) связаны между собой. Основное отличие
неонкогенных вирусов от онкогенных заключается в том, что неонкогенные вирусы плохо
размножаются. Во многих случаях появление онкогенности у неонкогенного вируса связано
с рекомбинациями или (реже) мутациями в области генов gag, pol и особенно env.
Сборная 3-я группа вирусов - вирусы лейкозов тип 1, трансформирует клетку разными
путями. Единственное, что объединяет вирусы острых лейкозов и отличает их от трансфор-
мирующих, - это отсутствие в их составе клеточных онкогенов. Вирусы острых лейкозов 1
типа можно разбить на 2 подгруппы. К 1-й можно отнести вирусы, онкогенность которых
связана, по-видимому, с присутствием у них особого вирусного гена X, отсутствующего у
других ретровирусов. Это вирус лейкоза КРС (BLV), I и II тип вируса лейкоза человека
(HTLV-I HTLV-II). Ко 2-й относят вирусы, формирующие фокусы на селезенке. Эти вирусы
(SFFV) обладают высокой онкогенностью, не уступающей тран-сформирующим вирусам. В
составе SFFV не найдены участки клеточного происхождения, ответственные за онкогенные
потенции этих вирусов. Участок с геном env определяет онкогенную потенцию.
Возбудители ряда неопластических заболеваний животных (род ретровирусов типа В,
С млекопитающих, типа D и С птиц) имеют необычные для других вирусов принципиаль-
ные особенности репликации (репликация РНК-содержащего вируса через стадию ДНК-
провируса, интегрирующего с клеточным геномом); имеют уникальную экологическую ха-
рактеристику, позволяющую вирусам существовать в геноме клетки хозяина в форме ДНК-
провируса н распространяться вертикально не инфекционным, а генетическим путем, по-
добно обычным клеточным генам (эндогенные вирусы). Такие вирусы, по-видимому, при-
нимают участие в нормальных клеточных процессах. Установлено их принципиальное
сходство с бактериальными транспозонами. Для оикорнавирусов в отличие от других ретро-
вирусов характерна способность размножаться в клетке, за редким исключением не повреж-
дая её жизнеспособности. Роды онковирусов В и С в основном состоят из онкогенных пред-
ствителей; род D включает экзогенные и эндогенные вирусы, но не обладающие онкогенно-
стью. Род онковирусов С делится на подроды. Из большого числа представителей подсемей-
ства Oncovirinae в ветеринарной практике приходится встречаться с лейкозом кошек
(FeLV), лейкозом и саркомой птиц (ALSV), ретикулоэндотелиозом птиц (REV) и лейкозом
КРС. В вирионе любого типа различают: наружную липидосодержащую мембрану; распо-
ложенные на поверхности мембраны отростки (spike), заканчивающиеся закруглениями -
головками (knobe); расположенный под мембраной внутренний слой, плотно прилегающий
к наружной мембране; находящуюся внутри вириона сердцевину (core), в которой различа-
ют капсулу сердцевины и нуклеотид. Вирионы всех онковирусов построены по этому прин-
ципу, но отличаются деталями. По строению сердцевины онковирусы делятся на 3 типа: С,
В, D. Вирионы типа С (диаметр около 100 нм) имеют крупную (74-80нм) центрально распо-
ложенную сердцевину. У вирусов типа С млекопитающих и вирусов ретикулоэндотелноза
птиц капсула сердцевины практически сливается с нуклеоидом; у вирусов лейкоза и сарко-
мы птиц (ВЛПС) капсула сердцевины видна более четко. Вирионы типов В и D имеют экс-
центричный круглый (у типа В) или цилиндрический (у типа D) нуклеоид и четко выражен-
ную капсулу сердцевины.
Таким образом, вирионы типа С отличаются от вирионов типов В и D по морфологии
сердцевины; вирионы типов В и D - по строению наружной оболочки и по форме нуклео-
ида. Вирионы типа А являются незрелыми формами вирионов типов С, В и D.
Культивирование. Онковирусы можно культивировать на животных и в культуре кле-
ток. Обычно на животных культивируют онковирусы, обладающие четко выраженной онко-
24 Зак. № 171
369
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
темностью для своих хозяев. Вирус, как правило, содержится в опухолевых тканях, а также
в плазме крови зараженных животных. Онковирусы хорошо накапливаются в перевиваемых
хронически зараженных культурах клеток, которые постоянно продуцируют вирус. Причем
обязательное условие активной репродукции - размножение клеток, поэтому такие вирусы
всегда культивируют в среде, содержащей сыворотку эмбриона коровы. Активно размно-
жающиеся онковирусы могут накапливаться в высокой концентрации. Так, в 1 мл плазмы
цыплят, зараженных вирусом миелобластоза, может содержаться до 1012 вирионов (около 1
мг по массе). В культуральной жидкости стационарных клеточных культур накапливается от
108,5 до 109,5 вирионов в 1 мл. Родственные связи между онковирусами устанавливаются по
внутренним белкам вириона. Главный внутренний белок (ГВБ) онковирусов, из которого
построена капсула сердцевины вириона РЗО у вирусов типа С мышей и вирусов ретикуло-
эндотелиоза птиц, общий. Все вирусы типа С мышей имеют очень близкий по АГ свойствам
РЗО и отличаются от вирусов типа С кошек (FeLV); вирусов типа С обезьян (SSV1, CALV),
вирусов типа С крыс; вирусов типа С хомяков; вирусов типа С свиней; вирусов типа С груп-
пы RD114/BEV. Однако вирус бычьего лейкоза имеет ГВБ, отличающийся от ГВБ всех дру-
гих известных вирусов. Все вирусы типа С птиц (вирусы лейкоза и саркомы птиц) имеют
общий ГВБ-Р27. Распространение экзогенных вирусов, в отличие от эндогенных, происхо-
дит инфекционным путем - горизонтально или вертикально. Но вертикальный путь передачи
их принципиально отличается от вертикальной передачи эндогенных вирусов, в случае экзо-
генных вирусов происходит заражение половых клеток или эмбриона, или новорожденного
сразу после рояодения; эндогенный же вирус передается как генетический материал без ин-
фекционного процесса. Большинство известных экзогенных онковирусов патогенны для
своих хозяев; они, как правило, вызывают неопластическую патологию. Вирусы типа С вы-
зывают лимфоидный лейкоз у кур, мышей, кошек, обезьян и КРС. Эти вирусы могут быть
причиной развития сарком. Вирусы типа В мышей вызывают рак молочной железы. Разра-
ботана современная таксономия ретровирусов человека, животных, в том числе птиц. Осо-
бое внимание уделено естественно встречающимся онкогенным вирусам, содержащим онко-
гены, и ретровирусам, имеющим эпидемиологическое и эпизоотическое значение.
Общая характеристика рода Lentivirus
В род Lentivirus включены вирусы ИНАН, висна-маэди овец и другие медленные ретро-
вирусы. В последние годы опубликовано значительное число работ относительно биохими-
ческой характеристики указанных возбудителей, их генетической организации и главного
свойства - персистенции и феномена АГ дрейфа в организме больного животного. Установ-
лено, что у лошадей, больных инфекционной анемией, вирус индуцирует ряд последова-
тельных острых гемолитических атак из-за действия мутантных вирусов, которые не ней-
трализуются АТ, появившимися на исходный вирус. Возникновение определенного АГ ва-
рианта связано с рецидивами лихорадки, и эволюция нового штамма может занимать от 2
нед до 3 мес. Овцы, зараженные вирусом висна-маэди, становятся персистентно инфициро-
ванными, несмотря на продукцию ВНА. В процессе персистенции этот вирус претерпевает
АГ изменения, подобно вирусу инфекционной анемии лошадей, но АГ варианты вируса
висны обнаружены только у 25% больных животных. Вирус артрита-энцефалита коз не
элиминируется из организма благодаря молекулярному маскированию вирусных эпитопов,
ответственных за нейтрализацию. В генах конверта лентивирусов имеются гипервариабель-
ные зоны. Возникновение мутаций в процессе персистенции - это только один аспект АГ
фенотипа протеинов конверта лентивирусов. Три пространственные структуры протеина на-
ружной мембраны также определяют распознавание эпитопов иммунной системой. Таким
образом, изучение структуры и организации протеинов конверта лентивирусов, понимание
молекулярных механизмов гипервариабельности в небольшой генетической зоне послужит
ключом для создания путем генной инженерии иммуногенных препаратов, стимулирующих
образование ВНА широкого спектра.
370
Глава XI. Family Retrovindae Ретровирусные инфекции
ЛЕЙКЕМИЯ МЫШЕЙ
Murine leukemias
Онкорновирусы мышей можно разделить на 2 группы: лейкозные и саркоматозные. От-
дельно стоит вирус Биттнера - единственный РНК-содержащий вирус, вызывающий рак.
Онкорнавирусы мышей по морфологии разделяются на вирионы типов В и С. Вирионы
типа В, основным представителем которых является вирус опухоли молочных желёз MTV,
трансформируют клетки эктодермального происхождения (карциномы), их РНК негомоло-
гична MuLV или MSV. Основной структурный белок вирионов типа В представлен глико-
протеином с мол.м. 52кД, иммунологически белки этого типа вирионов отличны от белков
вирионов типа С, нуклеоид эксцентричен. В настоящее время выделено несколько типов
MTV. Одни из них передаются генетически, другие нет. По биологическому эффекту они
подразделяются на трансформирующие и нетрансформирующие. Основной белок их имеет
мол.м. ЗОкД; нуклеоид занимает в вирионе центральное место (Рис. 55-58).
По способности репродуцироваться в гомологичных и гетерологичных клетках вирусы
типа С мышей (MuLV) разделяют на 4 группы: N-тропные, способные к репродукции в
клетках мышей линии NIH; В-тропные, способные к репродукции в клетках мышей линии
BALB; NB-тропные, репродуцирующиеся в клетках мышей обеих линий, и ксенотропные,
способные к репликации в гетерогенных клетках (кролика, крысы). Чувствительность клеток
к вирусам типа С, по-видимому, контролируется геном Fvl.
По способности вызывать первичную реакцию в инфицированном хозяине вирусы типа
С классифицированы на 3 категории: лейкемические вирусы (MuLV), вирусы, вызывающие
фокусы в селезёнке (SFFV), и мышиные саркоматозные вирусы (MSV). Лимфатическую
лейкемию в основном индуцируют MuLV. Оии способны реплицироваться в различных
тканях, но не могут их трансформировать. SFFV выделены в лабораториях Френд, Раушера
и Попе. Они легко трансформируют гемопоэтические клетки в костном мозге и селезёнке.
Эти вирусы высоколетальны, дефектны и реплицируются в присутствии вируса-помощника.
Вирус саркомы мышей (MSV) вызывает характерные опухоли у мышей и способен
трансформировать клетки, но также дефектен. Биологический эффект проявляется только в
присутствии вируса-помощника - MuLV. Клетки, трансформированные MSV, разделяются
на 2 класса: 1) непродуцирующие, не освобождающие вирусных частиц и негативные по gs-
АГ клетки. Вирус из них может быть активирован суперинфекцией лейкемическим вирусом;
2) саркомо-позитивные лейкемия негативные (S+ L‘) клетки, содержащие геном саркоматоз-
ного вируса, продуцирующие gs-АГ и незначительное количество вирусных частиц. В пре-
паратах мышиных онкорнавирусов обнаружены 5 АГ, различия между которыми устанав-
ливают в 2-х тестах: цитотоксическом, с помощью которого определяют клеточные поверх-
ностные АГ в инфицированных клетках (тест CSA), и тест нейтрализации (тест VEA). По
тесту VEA онкорнавирусы мышей делят на 2 группы: Гросса и группу, подразделяющуюся
на 4 типа: - тип а (вирусы Френд, Граффи, Роусон-Парр, SimLV); тип b - (вирусы Молони,
Абельсон; тип с - вирусы Раушер, Рич, Брейар); тип d - (вирус Буффей). По тесту CSA также
выделены 2 группы: Гросс (G) и Френд-Молони-Раушер (FMR).
В оболочке вирусов лейкемии мышей (MuLV-F), кошек (FeLV-T), саркомы кошек
(FeSV-st) и эндогенном вирусе крыс (NWR-1) имеются общие АГ. Так, вирусы MuLV-F и
FeLV-T содержат общие поверхностные АГ, вирус FeSV-st, продуцируемый клетками кры-
синой опухоли, имеет общие поверхностные АГ с эндогенным вирусом крыс (NWR-1).
24*
371
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Кроме указанных вирусов, адаптированных к клеточным системам, от мышей выделены
эндогенные вирусы типа С (из первичных опухолей, спонтанных или индуцированных из
нормальных неопластических клеток в культуре). Так, из клеток мышей линии BALB с по-
мощью йод-дезуксеуредина удалось активировать 2 эндогенных вируса типа С: N-тропный
BALB-1, и ксенотропный BALB-2. В последнее время из этих клеток удалось активировать
ещё один эндогенный вирус. Активированные частицы типа С содержат обратную транс-
криптазу. По спектру чувствительных клеток эндогенные вирусы типа С разделяются на 2
группы ксенотропные, инфекционные только в клетках других видов, и экотропные, среди
которых имеется группа, инфекционная для мышей линии BALB.
Эндогенные вирусы типа С, как правило, вообще не обладают онкогенными потенциа-
лами либо обладают ими в очень слабой степени. В настоящее время биологическую функ-
цию этих вирусов сводят к тому, что они либо выполняют определённую физиологическую
роль в развитии опухоли путём регулирования процессов узнавания клеток и их дифферен-
цировки, либо обусловливают частичную резистентность клеток к суперинфекции экзоген-
ными вирусами. Передаются вирусы типа С генетически, вертикально.
Мишенью действия вирусов лейкоза мышей Гросса, AKR и Молони являются Т-
лимфоциты, вируса Абельсона - В-лимфоциты, вирусы Френд и Раушера - эритробласты,
вируса Граф фи - миелобласты и Т-лимфоциты.
ЛЕЙКЕМИЯ КОШЕК
Feline leukaemia
Лейкоз кошек (лимфатическая лейкемия, лимфосаркома) - хронически протекающая бо-
лезнь, характеризующаяся анемией, перитонитом, гломерулонефритом, фибросаркомой и
поражением молочной железы (3, 4).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Вирус вызывает у
кошек лейкоз, анемию, гломерулонефрит, остеосклероз и иммунодепрессивный синдром.
Различают эритроидный, миелоидный и лимфоидный лейкоз. Лимфоидный лейкоз может
быть 4-х типов: вилочковый, полицентрический, алиментарный и подлинная лейкемия.
Наиболее распространены тимусная лимфосаркома и лимфатическая лейкемия.
Кроме того, вирус вызывает ретикулосаркому и гранулоэритромонозную лейкемию, а в
некоторых случаях аутоиммунный гломерулонефрит, некоторые формы анемии, инфекци-
онный перитонит, гломерулонефрит, фибросаркому и, возможно, карциному молочной же-
лезы. Считают, что FeLV вызывает атрофию вилочковой железы и истощение лимфоидной
системы, что приводит к нарушениям иммунологической компетентности. По чувствитель-
ности к FeLV кошки могут быть разделены на 6 классов. Горизонтальная передача FeLV
может происходить либо эпигенетических, либо путём контакта.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Возбудитель лейкоза кошек - онкогенный онкорнавирус. Широко распространен в попу-
ляции кошек и может передаваться горизонтально (9). Ранее предполагалось, что поражая
гемолимфо-ретикулярные клетки, он часто вызывает кошачью форму СПИДа (1).
Онкорнавирусы кошек можно разделить на эндогенные и экзогенные. Эндогенные виру-
сы (ССС и RD 114) выделяются из клеток либо спонтанно, либо под действием различных
индукторов передаются вертикально, неонкогенны, сенотропны. Они могут размножаться в
клетках человека и приматов, не способны размножаться в клетках кошек. В геноме нор-
мальных клеток содержится более 100 копий генома этих вирусов. По данным молекуляр-
ной гибридизации, вирусы RD114 и ССС очень сходны.
Экзогенные онкорнавирусы (FeLV и FeSV) способны репродуцироваться в клетках хо-
зяина (экотропны), передаются горизонтально, высокоонкогенны. Вирус FeSV вызывает
372
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
злокачественную трансформацию фибробластов, приводящую к фибросаркоме кожи, а ви-
рус FeLV трансформирует лимфоретикулярные клетки, что приводит к образованию лимфо-
сарком и сарком ретикулярных клеток, вызывает инфицирование гемапоэтических клеток и,
следовательно, может быть ответственен не только за другие формы лейкозов, но и за про-
явление некоторых онкогенных заболеваний.
Основной белок оболочки вируса FeLV представлен полипептидом с мол. м. 68кД, а
оболочки вируса RD114 - 77кД. В геноме клеток домашних кошек содержатся нуклеоидные
последовательности, родственные 2-м вирусам С-типа - эндогенному вирусу RD 114 и экзо-
генному вирусу лейкоза FeLV. Геном клеток леопардовых кошек не содержит этих последо-
вательностей.
Большинство взрослых кошек инфицированы экзогенными вирусами. Однако относи-
тельно низкий процент заболеваемости можно объяснить или развитием у кошек иммуните-
та в результате постоянной реинфекции малыми дозами вируса, или гибелью их от незлока-
чественных болезней, частота которых повышается за счёт вирусной иммунодепрессии. По
gs-AT эндогенные и экзогенные вирусы типа С кошек отличны друг от друга.
Морфология и химический состав. В 1964 г. Джаретт с сотр., заражая бесклеточным
экстрактом котят, выделил вирус лейкоза кошек. Каваками с сотр. (1967), Рикард с сотр.
(1968) и др. подтвердили эти данные. Харди с сотр. (1967) обнаружили вирус лейкемии ко-
шек с помощью иммунодиффузии.
При центрифугировании вируса FeLV выделено 3 компонента - 75S; 35S и 4S, плот-
ность в градиенте сахарозы 1,13-1,17 г/см3. Выявлено 10 полипептидов (VP1-VP10) с раз-
личной мол.м., процентным содержанием и локализацией в вирионе. По мол.м. АГ вируса
лейкемии кошек разделены на 4 класса: 50, 30, 15 и 12кД. В структуре вируса различают
белки, связанные с сердцевиной (рЮ, р12, р15 и р27), и 2 оболочечных белка - гликозили-
рованный 70 кД (gp70) и негликозилированный 15 кД (pl5) (10). Гликопротеин gp70 содер-
жит единственный нейтрализующий эпитоп (2).
Антигенная структура. Вирус лейкемии кошек (ВЛК) существует в 2-х формах: 1-й -
“вирус в себе”, индуцируемый метилколантрином из клеток здоровых кошек, не культиви-
рующийся из пассажа в пассаж (эндогенный, спонтанный вирус), и 2-ой - инфекционный
агент, передаваемый от кошки к кошке. ВЛК подгрупп А, В и С различают по структуре
главного гликопротеина оболочки gp70 (5). FeL-virus содержит 2 групповых специфических
эфироустойчивых АГ (gs), общеспецифический внутренний gs-1, и межвидовой gs-З, харак-
терный для частиц С-вирионов мышей, хомяков, кошек, крыс.
ВЛК содержит белки, сходные с белками вируса лейкемии мышей. Однако, в отличается
от последних в данном вирусе АГ gs-1 обнаружен только у одного белка (14кД), а не у 3-х.
Межвирионный АГ gs-З найден в вирусах лейкемии кошек и лейкемии мышей во фракции
белка с мол.м. 34кД gs-АГ. Определяют его в РСК, РДП, ИФ.
Антигенная активность. Показана прямая зависимость между уровнем гуморальных
АТ и выраженностью противоопухолевой резистентности, на основе чего делаются попытки
создания эффективной вакцины против вируса FeLV.
Иммунный статус кошек определяют по уровню АТ в крови. В качестве АГ для обнару-
жения АТ служат вирус-ассоциированные АГ клеточных мембран (CSA-AT). Резистент-
ность кошек к ВЛК зависит, по-видимому, от количества циркулирующих АТ к вирусу
FeLV. Кошки с титром АТ 1:32 и выше могут не проявить признаков болезни, но выделяют
вирус. У клинически больных кошек АТ, как правило, не выявляются. Примерно 90% кли-
нически здоровых кошек не имеют защитного титра АТ к вирусу FeLV и поэтому подверже-
; ны инфекции. АТ тестируются в непрямой реакции ИФ и розеткообразования. ВНА к гли-
j копротеину gp70 контролируют латентное инфицирование ВЛК, вызывая его элиминацию
5 из организма кошек (10).
373
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Антигенная вариабельность и родство. В 1969 г. был открыт вирус кошачьей сарко-
мы (FeLV), близкородственный к ВЛК.
Экспериментальная инфекция. Изолированным вирусом лейкемии сравнительно лег-
ко воспроизвести лейкемию у котят (инкубационный период от нескольких недель до года).
Для заражения вирус концентрируют. От больного котёнка вирус можно изолировать и вос-
произвести экспериментальное заболевание у следующего животного. Патологические из-
менения характеризуются атрофией тимуса и других лимфоидных тканей. У некоторых ко-
шек обнаруживают интеркуррентные инфекции. Развивающаяся лимфоидная малигнизация,
так же как и атрофия тимуса, приводит животных к гибели либо с признаками лимфатиче-
ской лейкемии, либо лимфосаркомы. У животного, заражённого вирусом лейкемии, можно
наблюдать различные состояния клеток: клетки морфологически выглядят нормальными и
не содержат вируса (1-й вариант), клетки трансформируются, но не содержат вируса (2-й
вариант); клетки морфологически выглядят нормально, но содержат вирус (3-й вариант),
клетки морфологически представляются трансформативными, содержат и выделяют вирус
(4-й вариант). При лейкемиях чаще встречается 3-й вариант, при саркоме - 4-й. Если же ви-
рус лейкемии кошек инокулировать другим животным, можно наблюдать 2-й вариант. FeLV
и FeSV онкогенны не только для кошек, но и для животных других видов, включая собак и
нескольких видов приматов.
Вирусоносительство и вирусовыделение. Вирус первоначально попадает в кровь, от-
туда в костный мозг, где происходит его репродукция, затем вновь переходит в кровь, что
сопровождается персистентной виремией. У здоровых кошек АГ FeLV обнаруживают толь-
ко в 0,14% случаев, а у лейкозных - в 90% случаев. Многие кошки могут быть заражены
FeLV, но не болеть лейкемией.
Культивирование. Вирус лейкемии кошек (FeLV) развивается в культуре клеток фиб-
робластов эмбриона кошек без видимых морфологических изменений. Выявить этот вирус
можно методом смешанных культур, используя в качестве “культуры партнёра” линию кле-
ток ХС, полученную из опухоли крысы, индуцированной вирусом саркомы птиц. Предвари-
тельно частично повреждают заражённый клеточный монослой, на который затем засевают
индикаторные клетки ХС. Через 48 ч в зоне дефекта монослоя из индикаторных клеток об-
разуются многочисленные гигантские многоядерные клетки. Кроме того, установлено, что
FeLV способен размножаться в культуре клеток человека и собаки. Линия клеток FZ74, по-
лученная от кошки с Т-клеточным лейкозом, продуцирует подтипы А, В и С ВЛК и ком-
плекс вирусного АГ, ассоциированного с мембранами клеток.
Особенности внутриклеточной репродукции. В чувствительные клетки вирус прони-
кает путём пиноцитоза, финоцитоза, филоцитоза и прямого проникновения. Вирус лейкемии
кошек - первый лейкозный вирус-помощник, который преодолевает видовые барьеры. Он
способен одевать в свою оболочку дефектный, т.е. неспособный самостоятельно заканчивать
полный цикл размножения вирус мышиной саркомы, тем самым обеспечивая ему проявле-
ние трансформирующего (онкогенного) действия в культуре клеток эмбриона кошек. Полу-
ченный таким образом гибрид, т.е. вирус, состоящий из генома (нуклеиновой кислоты) ви-
руса мышиной саркомы и оболочки вируса лейкоза кошек, трансформировал клетки эм-
бриона кошек и не трансформировал клетки культуры эмбриона мышей.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Установлена чрезвычайно высокая распро-
странённость и способность к горизонтальной передаче вируса FeLV, сближающая его с
обычными инфекционными вирусами. Поэтому вирус может передаваться от кошки к кошке
контактно и аэрогенно (горизонтальный путь передачи), per os, через мочу, а также возмож-
на передача блохами. Он находится не только в клетках гемопоэтической системы, но и в
слизистых оболочках респираторных путей и ЖКТ и выделяется с мочой.
374
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
В отличие от вируса лейкоза мышей, ВЛК не передаётся вертикально потомству. Поэто-
му вследствие широко распространённого латентного вирусоносительства такие кошки мо-
гут служить источником заражения для контактирующих с ними здоровых особей.
ДИАГНОСТИКА
FeLV обнаруживается с помощью двух методов: ИФ и прямым выделением из плазмы.
Группоспецифический АГ gs-1 вируса FeLV можно выявить в лейкоцитах перифериче-
ской крови методом непрямой ИФ. С этой целью используют кровь и мозг исследуемых ко-
шек. Метод позволяет выявить заражённость кошек ВЛК в 90% случаев. В США использу-
ют метод определения АГ ВЛК в лейкоцитах периферической крови. Инфекцию можно ди-
агностировать методом ЭМ. Вирус изолируют из лейкемийных клеток, плазмы, костного
мозга и выращивают в культуре клеток кошки, собаки и человека.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен, однако доказана возможность вакцинации кошек против лейке-
мии, на основании чего в США создана эффективная вакцина. Доказана возможность ла-
тентного инфицирования ВЛК без развития лейкоза у кошек, но с формированием выра-
женного иммунитета (7), что явилось основанием к разработке средств специфической про-
филактики. Разработана рекомбинантная субъединичная вакцина против лейкоза кошек. В
качестве АГ использовали негликозилированный гликопротеин оболочки ВЛК подгруппы
А. Такой рекомбинантный белок включал белок оболочки (gp70) и первые 34 аминокислоты
трансмембранного белка р15Е. Вакцина представляет собой очищенный белок, адсорбиро-
ванный на ГОА, и содержит сапонин. У вакцинированных кошек образуются ВНА и разви-
вается реакция на введение ВЛК: иммунизированные животные были защищены от вирус-
ной инфекции (8). Помимо этого, для изготовления инактивированной формолвакцины ис-
пользовали шт. КТ-FeLV-UCD-l, репродуцированный в линии клеток FL-74-UCD-1, на сре-
де Лейбовица с 15-30% фетальной сыворотки КРС. Оптимальная концентрация формальде-
гида для инактивации вируса была равна 0,5-1,5%. Оптимальная протекгивная доза состав-
ляла 0,02-0,4 мг инактивированного белка вируса при внутримышечном введении. В каче-
стве адъюванта используют неполный адъювант Фрейнда или ГОА. Вакцина предотвраща-
ла персистентную инфекцию (11).
Вакцинация кошек с последующей ревакцинацией через 2 и 11 нед субъединичной вак-
циной, включающей АГ подтипов А, В и С и мембранный АГ онкорновируса кошек защи-
щала животных от развития инфекции при последующем их заражении вирулентным
штаммом ВЛК. Она хорошо защищала кошек от персистентной инфекции и возникновения
опухолей. Живая рекомбинатная вакцина оказалась безопасной и эффективной. У половины
вакцинированных котят вакцинный вирус обнаружен в костном мозге со 2-й по 4-ю нед, но
отсутствовал в периферической крови и не выделялся со слюной, мочой и калом. Он не пе-
редавался горизонтально невакцинированным котятам. Вакцина, приготовленная из клеток
FL74, обработанных формалином, защищала котят от виремии и образования опухолей.
Вакцинация кошек оболочечными гликопротеинами ВЛК (gp70/85) сопровождалась об-
разованием АТ, выявляемых в ИФА, но не в PH. При заражении вакцинированных котят
ВЛК наблюдали персистентную инфекцию. Вакцинация кошек с последующей ревакцина-
цией через 2 и 11 нед субъединичной вакциной против ВЛК (Leucocell), включающей АГ
подтипов А, В и С ВЛК, а также мембранный АГ (FASMA) онкорнавируса кошек также за-
щищала животных от персистентной виремии и развития опухолей (6). В настоящее время
не оставлены попытки создать генно-инженерную вакцину для профилактики лейкоза ко-
шек. С этой целью гены nv и gag ВЛК экспрессировали в герпесвирусе кошек, неактивном
по тимидинкиназе, и в бакуловирусе. Предложена схема вакцинации этими рекомбинанта-
ми, приводящая к 100% защите кошек от вирусной лейкемии (12).
375
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Голубев Д.Б. и др. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии.
Л.,1976. 2.Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев, Урожай, 1993. З.Сюрин В.Н.,Фомина
Н.В. Части, вет. вирусол., Колос, 1979. 4.Сюрин В.Н. и др. Вет. вирусол., Агропромиздат,
1991. 5.Abkowitz J.L. Int J Cell Cion,1991, 9, 4 :312. 6.HafferK.N. et.al. Vaccine, 1987, 5 :133.
7.Hardy W.D. et.al. J Amer Vet Med Assoc, 1974, 165 :1020. 8.Mnarziani D.J. et.al. Vaccine,
1991, 9 :89. 9.Parkas D. et.al. Патент США, опубл. 06.10.92. lO.Pacitti AM. et.al. Cell
Biochem, 1986, Suppl 10a :209. ll.Pedersoen N.C. et.al. патент ЧСША 62737 от 28.4.81.
12.Wardley R.C. et.al. J Gen Virol, 1992, 73, 7 :1811.
ЛЕЙКОЗ ПТИЦ
Leukosis gallinarum (лат.); Gefluggelleukose, Leukemie des Huhnes, Aviare Leukosen
(нем.); Avian leukosis (англ.); Leukose aviare (франц.); Leukosis aviar (ней.)
Лейкоз (гематолимфоматоз, диффузный остеопороз, лимфоидный лейкоз, эритробла-
стоз, миелобластоз) - злокачественная болезнь, вызываемая вирусами и характеризующаяся
поражением, главным образом, органов кроветворения. Лейкоз птиц распространён повсе-
местно. При обследовании некоторых птицехозяйств нашей страны (1) установлено, что до
80% проб сыворотки крови положительны в отношении вирусов лейкоза.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. При лейкозе наблю-
дают истощение, бледность гребешка, диарею, снижение яйценоскости. Различают 3 формы
лейкоза: лимфоматоз (лимфоидный лейкоз), эритробластоз и миелобластоз. При миелоид-
ной и эритроидной формах лейкоза характерно появление в периферической крови значи-
тельного количества миело- и эритробластов. Содержание гемоглобина понижается до 15-
20%. Лимфоидный лейкоз - самая распространенная форма лейкоза птиц (92-97% по отно-
шению ко всем другим формам). Классические лабораторные штаммы вируса лимфоидного
лейкоза птиц (RPL-12, L-29, L-31), выделенные и изученные на курах породы белый леггорн
высокоинбредной линии 15, вызывают разные формы неоплазий: лимфоидную, эритроид-
ную, саркомы и др. У кур иногда можно наблюдать появление в мышечной и соединитель-
ной тканях опухолей, главным образом, сарком. Опухоли по гистологическим критериям
могут быть идентифицированы как низкодифференцированные рабдомиосаркомы.
При лейкозах бывают изменены печень, селезенка, яичники, реже сердце и легкие. По-
раженные органы увеличены в объеме. В брюшной полости видно скопление светло-
желтого экссудата. На поверхности печени - серовато-белые и саркомоподобные узлы раз-
личной величины. В органах заметно очаговое разрастание лимфобластических клеток.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусы эритро- и миелобластоза выделили Эллерман и Банг в 1908 г. Вирус саркомы
Рауса изолировал Раус в 1911 г. Возбудитель лимфоидного лейкоза открыл Бурмистер в
1947 г. Основные свойства вируса лейкоза птиц изучены на модели вируса саркомы Рауса.
Морфология и химический состав. Все вирусы лейкоза имеют сферическую форму
диаметром около 100 нм, мол.м. РНК составляет 10-12 МД, содержание Г 25-30; А 19-26; Ц
22-27; У 22-29%. Тип симметрии нуклеокапсида не установлен. Наружная мембрана вирио-
нов формируется в процессе почкования их на мембранах клетки (Рис. 59-61). Оболочки ви-
русов лейкозов птиц содержат липиды, а также белки и углеводы. Липиды обусловливают
низкую величину плавучей плотности (1,14-1,20 г/см3) и чувствительность вируса к фосфо-
липазе и растворителям липидов. РНК-зависимая ДНК-полимераза, обеспечивающая синтез
ДНК-интермедиата, способного к интеграции в клеточный геном. Вирус миелобластоза со-
376
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
держит 2 обратные транскриптазы. Одна состоит из а-, другая из р-субъединиц. Для данно-
го вируса характерно присутствие АТФ-азы. Кроме обратной транскриптазы и АТФ-азы в
очищенных препаратах вируса саркомы Рауса обнаружена РНК-аза. Причем этот фермент в
вирусной частице разобщен с РНК. Кроме ДНК-полимеразы, в онкорнавирусах птиц найде-
но более 10 ферментов, которые могут иметь непосредственное отношение к репродукции
этих вирусов в чувствительных клетках. Вирионная РНК обладает матричной активностью в
бесклеточных системах биосинтеза белка из бактерий и животных клеток.
На ранней стадии инфекции ФЭК вирусом саркомы Рауса выделена вирусспецифиче-
ская ДНК 2 форм: А (мол.м. 7МД) и В (мол. м. 1МД). Плавучая плотность этих форм в CsCl
1,605 и 1,570 г/см3 соответственно. Форма А, в основном, представлена замкнутыми коль-
цами, а форма В - неполными линейными молекулами. ДНК, обнаруженная в онкорнавиру-
сах птиц, ассоциирована с ядром вириона и не является контаминацией со стороны клеток
хозяина, причем она имеется только у трансформирующего вириона RSV (SR-RSV-t) и нет
её у дефектного по трансформации вируса (SR-RSV-td). Видимо, присутствие ДНК в ядре
только трансформирующих вирусов объясняется тем, что ДНК играет какую-то роль в
трансформации клеток, либо включается в вирион только в трансформированных клетках.
Несмотря на то, что вирус саркомы Рауса был выделен еще в 1911 г., до сих пор нет од-
нозначных сведений относительно структуры и размера его РНК- генома. Ни одна из моле-
кул РНК, экстрагированная из вирионов этого вируса не является репродуктивно инфекци-
онной. Большинство авторов склонны считать, что 60-70S РНК является агрегатом субъеди-
ниц, т.е. геном вируса саркомы Рауса сегментирован. Имеется и вторая точка зрения, что
30-35S РНК служит предшественником 60-70S РНК (2).
Устойчивость. Вирусы лейкозов птиц чувствительны к эфиру, актиномицину Д, быстро
инактивируются при 46°С и выше, погибают при 37°С в течение 2 сут, при 4°С - через 3-4
нед. При 60°С инактивация происходит за 1 '/2 - 2 ч, при 100°С - за 5-10 мин. Под действи-
ем УФ-лучей вирусы инактивируются за 45-60 мин. Мгновенная гибель их происходит под
действием 30%-ного р-ра хлорамина и 5%-ного р-ра карболовой кислоты. В лиофилизиро-
ванном состоянии вирусы лейкоза птиц сохраняют активность до 9 лет (4, 5).
Антигенная структура. В состав онкорнавирусов птиц входят типо- и группоспецифи-
ческие АГ. Типоспецифический АГ обусловлен белковыми компонентами вирусной оболоч-
ки и характерен для каждого из 4-х известных вирусов лейкоза. Вирусы с различными ти-
поспецифическими АГ имеют гликопротеидный компонент с различной РНК.
Вирусы ретикулоэндотелиоза - это самостоятельная группа онкорнавирусов птиц. По-
мимо вируса ретикулоэндотелиоза в новую группу онкогенных вирусов птиц включены вы-
деленные недавно куриный синцитиальный вирус, вирус инфекционной анемии уток и вирус
некроза селезёнки. В PH эти вирусы серологически родственны, но не идентичны. Наиболее
вирулентным для цыплят оказался вирус некроза селезёнки.
Все вирусы лейкозно-саркоматозного комплекса (ALV) разделены на 6 АГ подгрупп: А
(RSV-RAV-1, RSV-RIF-1, RSV-FAV-1, AWV-1, RPL-12, MH-RSV, SR-RV-1): В (RSV-RAV-
2, SR-RSV-2, AWV-2, RSV-RIF-2, HA-RSV, RAV); С (RSV-RAV-3, PR-RSV); D (CZ-RSV,
RSV-RAV); Е и F (RAV-50, RPL-22, RAV-5 и др). Разделение вирусов на АГ-подгрупы ос-
новано на различии оболочек вирионов, интерфирирующей активности в отношении вируса
саркомы Рауса и способности поражать определённые фенотипы клеток. В природе наибо-
лее распространены вирусы подгрупп А, реже В и С и почти не встречаются представители
остальных подгрупп (D, Е, F). Правда, недавно описана новая группа вирусов саркомо-
лейкозного комплекса птиц, относящихся к подгруппе D (вирус золотистых фазанов).
В связи с разнообразием АГ свойств онкорнавирусов птиц для индикации их в иссле-
дуемом материале и изучения распространения в хозяйствах следует использовать штаммы
наиболее ярких подгрупп: A (RSV-RAV-1), В (RSV-RAV-2), С (PR-RSV) и D (CZ-RSV).
377
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
С помощью PH штаммы вируса саркомы Рауса удалось разделить на 4 серологические
подгруппы. A (RSV-RAV-1 и Бриан), родственные в АГ отношении вирусу лимфоидного
лейкоза, миелобластоза и эритробластоза; В (RSV-RAV-2 и Шмидт-Руппин-Shmidt-Ruppin-
SR)), родственные вирусу миелобластоза; С (Карр); D (Бриан С, PRL-22, Энгельберт-Холм,
Дядькова). Возможен переход представителей одной подгруппы вируса саркомы Рауса в
другую. Так, в экспериментальных условиях показано превращение шт. RSV-RAV-1, RSV-
RIF-1 в шт. RSV-RAV-2, RSV-RIF-2 и наоборот.
Установлено, что в плазме крови кур, больных лейкозом, вызванным вирусом миелоб-
ластоза, содержится 2 вируса (VMP-1 и VNP-2), различающихся между собой по АГ-
структуре. Первый относится к подгруппе А, второй - к подгруппе В.
В 1960 г. выделен в культуре фибробластов КЭ вирус, который обладал свойством ин-
гибировать репродукцию вируса саркомы Рауса. Он был назван вирусом RIF (Resistence
inducidi factor - фактор, вызывающий резистентность). Вирус саркомы Рауса, размножаясь в
течение нескольких дней, трансформирует культуру фибробластов КЭ в опухолевые очаги.
В естественных условиях вирус RIF встречается в эмбрионах достаточно часто. Считают,
что вирус RIF сходен с возбудителем лимфоидного лейкоза. Клетки КЭ, заражённые этим
вирусом, становятся частично или полностью устойчивыми к повторному заражению виру-
сом саркомы Рауса. Этот метод положен в основу индикации возбудителей лейкоза птиц,
поскольку установлено, что хотя вирусы лейкоза птиц весьма разнообразны в АГ отноше-
нии, однако феномен интерференции между ними и вирусом саркомы Рауса иммунологиче-
ски строго специфичен: трансформирующая активность вируса Рауса подавляется только
таким штаммом вируса лейкоза контаминанта ФЭК, который соответствует ему в АГ отно-
шении и принадлежит к одной группе.
Онкогенные свойства. В составе генома вируса саркомы птиц (ASV) обнаружен спе-
цифический трансформирующий ген (DNAsarc). Все штаммы ASV содержат sarc
(специфические последовательности), РНК лейкозных вирусов птиц, РНК саркоматозных
вирусов мышей и геноме ДНК-содержащих онкогенных вирусов. Групповой специфический
АГ (gs-АГ), открытый Хюбнером и сотр. в 1964 г., является основным белком с различной
электрофоретической подвижностью. Он присутствует в опухолях птиц, индуцированных
вирусом саркомы Рауса или другими лейкозогенными вирусами кур; gs-АГ строго специфи-
чен для всей группы птичьих РНК-содержащих онкогенных вирусов, что облегчает прижиз-
ненную диагностику лейкоза птиц. Он постоянно синтезируется в клетках раусовских опу-
холей. Вероятно, генетическая информация вируса, ответственная за его синтез, присутству-
ет в геноме опухолевой клетки, причём в интегрированной с ним форме. В gs-АГ онкорна-
вирусов птиц содержится 2 различных АГ-компонента - gs-a и gs-b. Если учесть, что gs-АГ
обнаруживается в нормальных безлейкозных эмбрионах, то этот факт подтверждает гипоте-
зу Хюбнера-Тодаро о наличии во всех нормальных клетках онкогенных вирусов, находя-
щихся в интегрированном состоянии с геномами клеток.
Группоспецифический gs-АГ передаётся при скрещивании кур как аутосомальный геи,
подчиняющийся менделевскому распределению. Относительно связи между находками gs-
АГ, вируса и АТ имеется интересное сообщение. В яичном белке кур, в крови которых об-
наружен вирус лейкоза, но нет АТ, gs-АГ обнаружен в 100% случаев, тогда как в белке яиц,
снесёнными курами, в крови которых обнаружены АТ, gs-АГ выявлен лишь в 29% случаев.
В белке яиц кур, в крови которых вирус не обнаруживается, gs-АГ находят очень редко.
По типоспецифическому АГ вирусы миелобластоза и эритробластоза отличаются от ви-
русов лимфоматоза и саркомы Рауса. В состав первых 2-х вирусов входят специфический
для вируса АГ, проявляющий свою активность в организме хозяина, и АГ, идентичный АГ
нормальной куриной ткани, активный только в гетерологичном организме. Кроме того, в со-
став вируса миелобластоза входит форсмановский АГ.
378
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Антигенная активность. У кур, заражённых вирусами лейкоза, вырабатываются ВНА.
Наибольшей АГ активностью обладает вирус саркомы Рауса, поэтому его используют для
изготовления специфических сывороток с целью идентификации вновь выделенных вирусов
лейкоза. Остальные вирусы лейкоза индуцируют у птиц АТ в незначительном титре.
При постоянной циркуляции вирусов в стаде кур у вновь попавших особей через 2-3 нед
титр АТ в крови достигает 1:8-1:10. Кб мес пребывания в таком стаде, если у этих кур не
развивается лейкоз, титр АТ составляет 1:100, достигая к концу года 1:120 - 1:150. Такие
птицы регулярно передают АТ потомству, предохраняя его от заражения лейкозом в течение
2 нед с момента вылупления.
Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время у птиц обнаружены 2
группы ретикулоэндотелиоза (REV). Вирусы обеих групп сходны между собой по наличию
6O-7OS ДНК и обратной транскриптазы. Они реплицируются через ДНК-провирус. Различия
между вирусами состоят в том, что ALV имеют эндогенную РНК-зависимую ДНК-
полимеразную активность, а в REV её нет. Предполагают, что онкорнавирусы птиц возник-
ли из части клеточного генома последовательным переносом информации с ДНК. Sarc най-
дены и в нормальных клетках птиц (цыплят, перепёлок, уток). Они находятся в неповто-
ряющейся части ДНК и представляют собой одну (или несколько) копию на каждый гапло-
идный набор ДНК клеток птиц. Транскрипция sarc идёт на низком уровне в нормальных
клетках (1-3 копии на клетку) и лишь незначительно возрастает в клетках, трансформиро-
ванных химическими канцерогенами (3-8 копий).
В экспериментальных условиях вирусы лейкоза практически патогенны для птиц всех
видов. Наиболее онкогенен вирус саркомы Рауса. При парентеральном введении его птицам
происходит индукция быстрорастущих опухолей. В зависимости от штамма, дозы, породы и
возраста гибель цыплят наступает на 30-60-й день с момента введения возбудителя. Осо-
бенно восприимчивы молодые особи. По данным отечественных исследователей? в РА наи-
более чувствительны к вирусу саркомы Рауса куры породы бурый и белый леггорн, наибо-
лее резистентны куры породы Суссекс, корниш и московская.
Известно, что чувствительность или резистентность той или иной породы кур к вирусу
саркомы Рауса может быть обусловлена присутствием АТ к вирусам лейкозно-саркоматоз-
ного комплекса (ALV) и передачей их потомству; интерференцией между возбудителем
лимфоматоза, контаминирующим эмбрионы (и вылупившихся цыплят), вирусом саркомы
Рауса и генетическими особенностями клеток организма птицы. Основную роль, ответст-
венную за резистентность или чувствительность птицы к вирусу саркомы Рауса, играют ге-
нетические особенности организма. Благодаря этому при оценке чувствительности линий и
пород кур к лейкозу можно использовать в качестве разрешающего агента вирус саркомы
Рауса. Если культуры той или иной линии резистентны к нему, они невосприимчивы к лей-
козу. Используя этот принцип за рубежом выведены резистентные и чувствительные к лей-
козу линии и породы кур. Куры линии 15 породы бурый леггорн и куры эдинбургской поро-
ды высокочувствительны (до 100%) к вирусам лейкозно-саркоматозного комплекса, а куры
линии 7 и 8 породы белый леггорн резистентны.
При совместном культивировании клеток безвирусных перепелиных опухолей с заведо-
мо инфицированным лейкозом материалом, клетки саркомы перепёлок теряют свой перво-
начальный признак (безвирусность) и приобретают способность реплицировать активный
вирус саркомы Рауса. Этот феномен может служить одним из методов индикации опухоле-
родных вирусов птиц (1).
Вирус саркомы Рауса оказался способным преодолевать межвидовые барьеры, проявляя
онкогенную активность на пресмыкающих (змеи, удавы, ящерицы) и млекопитающих
(кролики, крысы, хомяки, морские свинки, детёныши обезьян). Кроме того, он способен
трансформировать диплоидные клетки и фибробласты человека.
379
Глава XI. Family Rdroviridae Ретровирусные инфекции
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. У больных птиц ви-
русы лейкозов локализуются в опухолях, в крови, паренхиматозных органах, главным обра-
зом в печени. В организме конгенинтально заражённых петухов вирус накапливается в
большем количестве в печени и тесгикулах, чем в крови. В то же время петухи не передают
вирус со спермой. Вирус миелобластоза встречается в высоких концентрациях в плазме
больных миелобластозом птиц. В крови поражённых лимфатическим лейкозом кур вирус
может достигать значительных концентраций (до 10б вир.частиц/1 мл). У кур, инфициро-
ванных вирусом лейкоза, в первые 2-3 сут наблюдается интенсивное размножение в крови
возбудителя, однако птицы не выделяют его во внешнюю среду. Вирусемию сменяет виру-
соносительство в течение всей жизни. Вирусовыделение начинается с момента размножения
возбудителя в паренхиматозных органах и продолжается до гибели птицы. От больной пти-
цы вирус выделяется со слюной, экскрементами и яйцами.
Культивирование. Вирус саркомы Рауса можно культивировать на цылятах породы
белый леггорн. Суспензию вируса вводят в перепонку крыла цыплёнка в дозе 0,1-0,2 мл.
Через 8-12 дн на месте введения вируса появляются опухоли. Вирус саркомы Рауса титруют
на 10-14-дн цыплятах также инъекцией в перепонку крыла. Титр рассчитывают по Риду и
Менчу. этот вирус можно культивировать также на КЭ 6-12-дн возраста при заражении
внутривенно, на ХАО, в амнион и в культуре фибробластов КЭ. Вирус вызывает опухали у
цыплят, бляшки на ХАО и очаги малигнизации в культуре клеток.
На ХАО заражённых КЭ вирус индуцирует поражения 3-х типов: крупные единичные
узлы, возникающие вследствие прямого проникновения вируса в мезодерму через повреж-
дение на оболочке, средние повреждения размером 1,0-1,5 мм и мелкие очаги размером 0,4-
0,5 мм с разной степенью чёткости. Наиболее чувствительны к вирусу саркомы Рауса эм-
брионы кур бурый леггорн.
По размеру бляшек в культуре ФКЭ штаммы вируса саркомы Рауса делят на 2 группы:
крупнобляшечную (RSV-RAV-1, RSV-RAV-2, Бриан, RPL-22 и Дядькова, средний диаметр
пятен составляет 0,8-1 мм) и мелкобляшечную (средний диаметр колеблется от 0,44 до 0,55
мм) (1). IIIt.RSV-RAV-1 вируса размножается на определённых фенотипах куриных фиб-
робластов. Штаммы подгруппы А размножаются в клетках С/В и С/О, подгруппы В - С/А и
С/О, подгруппы С - С/О. Чувствительность различных фенотипов куриных клеток к данно-
му вирусу один из тестов классификации возбудителей лейкозно-саркоматозного комплекса.
Эмбрионы и эмбриональная культура ткани японских перепёлок рекомендованы в каче-
стве новой безлейкозной клеточной системы для производства вирусных и риккетсиозных
вакцин и в научно-исследовательской работе.
Вирус лимфоматоза (шт. RPL-12) культивируют в суточных цыплятах, которых через 3-
6 мес убивают и проводят гистологическое исследование органов. Вирус лимфоматоза раз-
множается также в культуре ткани куриных фибробластов (не вызывая ЦПИ) и в КЭ при за-
ражении в желточный мешок.
Вирус миелобластоза культивируют на 11 дн КЭ, заражая их внутривенно плазмой и
клеточной суспензией из тканей больных миелобластозом птиц. У 100% вылупившихся цы-
плят развивается лейкоз, главным образом миелобластоз. Вируссодержащие миелобласты,
выделенные из крови больной птицы, можно длительно культивировать in vitro, при этом
вирус миелобластоза переходит в культуральную среду, не нарушая жизнедеятельности кле-
ток. Размножение их in vitro продолжается неопределённо долго без каких-либо выражен-
ных морфологических изменений. Необходимым для поддержания культуры миелобластов
является высокая концентрация фолиевой кислоты в питательной среде.
Вирусом эритробластоза (вируссодержащий материал костного мозга больных птиц)
удаётся заразить 10-11-сут КЭ, инокулируя материал на ХАО. К 20-му дню инкубации у %
заражённых эмбрионов развивается типичный эритробластоз. Далее можно последователь-
но пассировать вирус на ХАО КЭ. Вирус также удаётся культивировать in vitro в культуре
380
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
нормальных куриных фибробластов, нормального и эритробластического костного мозга.
При синтезе вируса эритробластоза складываются иные взаимоотношения между клеткой и
вирусом, чем при миелобластозе: инфицированные эритробласты в культуре in vitro относи-
тельно быстро изменяются (вакуолизация цитоплазмы, окучивание хроматина ядра), и с 90-
го дня культивирования происходит гибель клеток.
Особенности внутриклеточной репродукции. Репродукция РНК-содержащих онко-
генных вирусов может идти 2-мя путями: 1-й характерен только для данной группы вирусов
и происходит через стадию синтеза ДНК; 2-й характерен для инфекционных РНК-
содержащих вирусов и происходит через 2-нитевую РНК. Большинство исследователей счи-
тают, что РНК вирусного потомства синтезируется на материале вирусспецифической ДНК.
Инфекция вызывает резкое увеличение количества ДНК-синтезирующих клеток, так как
ДНК-клетки принимают активное участие в репликации вируса. Транскрипция вирусного
генома саркомы Рауса в стационарных клетках (фибробластах КЭ) начинается только после
вхождения клеток в стадию деления, которая необходима для начала транскрипции вирус-
ного генома, но не для поддержания активности этого процесса. Синтез РНК вируса нахо-
дится в прямой зависимости от деления клеток и синтеза клеточной ДНК. Вирус саркомы
Рауса использует клеточные транспортные РНК как затравку для вирионной обратной
транскриптазы при синтезе ДНК на матрице вирусной РНК. Клеточные транспортные РНК
тесно ассоциированы с вирусным геномом. После синтеза РНК проходит формирование
возбудителя (у вируса саркомы Рауса эту роль выполняет вирус-помощник). Заражённая ви-
русами клетка превращается в злокачественную (трансформация). По существующим пред-
ставлениям трансформационное изменение клетки возникает и поддерживается за счёт
строго определённых вируспродуцирующих белков. Ген, ответственный за синтез белков,
можно обозначить как раковый ген, или онкоген. Для репродукции лейковирусов онкоген не
нужен. Он, вероятно, имеет разную локализацию в геноме вирусов птичьих неоплазий. Он-
коген имеет клеточное происхождение и совершенно случайно включается в состав вируса
при его репликации. Случайность включения онкогена (точнее, РНК-овых копий желточных
генов) в состав вируса согласуется с относительной редкостью высокотрансформирующих
возбудителей в природе. Трансформирующее действие оикорнавирусов - результат транс-
дукции определённых клеточных генов.
Клетки, пораженные онкорнавирусами птиц, можно разделить на 3 типа: вируспродуци-
рующие, вирогенные и вируснепродуцирующие. Вируспродуцирующие клетки регулярно
выделяют вирус во внешнюю среду. В вирогенных клетках зрелые частицы возбудителей
лейкоза обнаружить не удаётся. Однако из таких клеток можно освободить вирус при кон-
такте их с крупными клетками. Механизм “освобожнения” вируса из генома вирогенной
клетки неизвестен. Вируснепродуцирующие клетки - трансформированные, из которых все-
ми известными методами не удаётся активировать инфекционный вирус. Особый случай
представляет “освобождение” вируса из опухоли хомячков, индуцированной шт. Бриан ви-
руса саркомы Рауса. Для “освобождения” вируса из таких клеток требовалась ещё и допол-
нительная супериифекция вирусом-помощником. Активация вируса, находящегося в интег-
рированном состоянии, может быть осуществлена совместным культивированием транс-
формированных клеток со здоровыми, радиационным облучением клеток и добавлением к
клеткам любого вируса-помощника.
В 1974 г. Балтимор предложил простую модель действия оикорнавирусов. Интегриро-
ванный с помощью обратной транскриптазы геном может существовать или в латентном
полностью (продукция вируса клеткой) или частично репрессированном состоянии. Отсут-
ствие точных данных, когда и как интегрируется вирус в геном клетки, позволяет предпо-
ложить несколько вариантов, включающих обычную инфекцию, инфекцию с помощью пе-
реносчика и возможность постоянного персистирования вирусного генома. Выяснение этого
381
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
вопроса позволит успешно бороться с контаминацией онкорнавирусамн эмбрионов, клеточ-
ных культур и самих птиц.
Для штаммов вируса саркомы Рауса характерна дефектность. Оказалось, что вирус для
своего созревания нуждается в вирусе-помощнике. Вирус-помощник ответствен за специ-
фичность PH, определяет чувствительность к интерферирующему действию куриных лей-
козных вирусов, чувствительность генетически различных линий кур, патогенность для
млекопитающих и кинетику образования вируса при индукции. Однако самое интересное н
важное то, что вирус-помощнк оказался типичным представителем группы лейкозов птиц.
Благодаря этому вирус саркомы Рауса из лабораторной модели стал надёжным индикатором
при изучении степени распространения возбудителей лейкоза в птице хозяйствах, индика-
ции их в исследуемом биологическом материале, контроле биопрепаратов на онкогенную
безопасность и выведения устойчивых и чувствительных к неопластическим заболеваниям
линий кур. Вирус саркомы Рауса во всём зависит от своего помощника. В связи с этим
предполагают, что первоначально выделенный Раусом возбудитель был свободен от вируса-
помощника и не нуждался в нём для своего созревания. Однако в процессе многолетних
пассажей на виремических цыплятах вирус саркомы Рауса изменил свои биологические
свойства и стал использовать в качестве помощника лейкозогенных возбудителей. В составе
штаммов вируса саркомы Рауса-Бриан вируса-помощника содержится в 15-20 раз больше,
чем основного “хозяина”. Однако недавно была выделена нулевая форма вируса саркомы
Рауса (RSV-0). Инфицирование куриных фибробластов строго одной частицей вируса RSV-0
трансформирует их. Такие клетки выделяют инфекционный вирус, не нуждающийся в по-
мощнике. Этот вирус резко отличался от представителей 3-х подгрупп (А, В, С) лейкозно-
саркоматозного комплекса птиц: трансформировал клетки типа С/А и, следовательно, не
был членом подгруппы А, превращал клетки эмбрионов японской перепёлки в злокачест-
венные, значит не входил в подгруппу В, к нему обнаружилась низкая чувствительность
клеток С/О и, наконец, он оказался патогенным для млекопитающих. Вирус RSV-0, видимо,
существует в тесной связи с геномом клетки и передаётся по наследству аутосомным доми-
нантным геном. Единственным проявлением его присутствия в клетке служит продукция им
gs-AT, улавливаемого с помощью КОФАЛ-теста.
Недавно геном онкорнавирусов птиц был обнаружен в нормальных клетках КЭ, не про-
дуцирующих частиц онкорнавирусов. В таких клетках содержится специфический генетиче-
ский фактор, сходный с геномом вирусов птичьих лейкозов, получивший название хельпер-
ного фактора, ассоциированного с клетками (chf). Он характеризуется в клеточной хромо-
соме в интегрированной форме и не может созревать в зрелый вирион. В процессе зараже-
ния таких “нормальных” клеток лейковирусом птиц (за исключением типа шт. Брнан - ви-
руса саркомы Рауса) chf может быть выявлен, так как он даёт зрелое инфекционное потом-
ство. И наконец, установлено, что вирусы лейкоза птиц рекомбинируют с высокой частотой
и недефектными вирусами саркомы птиц. Рекомбинанты возникают путём кроссинговера.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служит больная птица.
Существует горизонтальный (через заражённый корм, воду, подстилку, воздух и т.д.) и вер-
тикальный (от больной матери в яйцо, следовательно эмбрионы и цыплят) пути передачи
инфекции. Вирус передаётся по материнской линии. Петухи не передают вирус потомству.
Таким образом, больная птица инфицирует здоровых кур и передаёт вирус потомству.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях вирусы
лейкозно-саркоматозного комплекса часто поражают молодых кур. Болезнь зарегистрирова-
на среди гусей, голубей, индюков, попугаев, канареек и птиц других видов. Реже лейкозом
страдают домашние утки и японские перепёлки.
ДИАГНОСТИКА
382
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Диагностика лейкоза птиц основывается на анализе патологоанатомических, патогнсто-
логических данных и результатов лабораторных исследований. Методы исследований под-
робно изложены (2, 4а, 5, 5а).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Куры, переболевшие лейкозом, вызванным вирусом подгруппы А, восприимчивы к
представителям других подгрупп. Как правило, больные лейкозом куры погибают.
Для борьбы с лимфоидным лейкозом и эритробластозом птиц предложена живая вакци-
на. Её вводят перорально. Однако она прерывает лишь горизонтальный способ передачи
возбудителей. Поэтому, применяя её, можно предохранить от заболевания не всё поголовье.
Учитывая, что больная птица контаминирует большинство яиц вирусами лейкоза, можно
полагать, что иммунизированное вакциной стадо будет представлять постоянно “дремлю-
щий” очаг инфекции.
С профилактической целью при лейкозе птиц следует соблюдать санитарные правила,
строго изолировать и своевременно отбраковывать больных птиц, закладывать эмбрионы
только от старых кур. Борьба с лейкозом может быть успешной лишь при использовании
профилактических препаратов (вакцины против псевдочумы, оспы, ларинготрахеита), не-
контаминированных опухолеродными вирусами птиц. Кроме того, нужно постоянно обнов-
лять маточные стада кур особями, генетически резистентными к лейкозу. Резистентную ли-
нию кур можно вывести в специализированных безлейкозных хозяйствах.
Воронин и сотр. в 1973 г. предложили новый принцип формирования безлейкозного
стада кур и использование эмбрионов и эмбриональной культуры ткани японских перепёлок
для изготовления живых противовирусных вакцин против НБ, инфекционного ларинготра-
хеита, инфекционного бронхита птиц (1).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Воронин Е.С. и др. Сельскохозяйственная биол., 1975, 10, 4 :592. 2. Коровин Р.Н, и
др. Опухолевые бол. птиц., М., Колос, 1984. 3.Сергеев В.А. Вирусные вакцины., Киев, Уро-
жай, 1993. 4.СюринВ.Н., Фомина Н.В. Части, вет. вирусология, Колос, 1979. 4а.СюринВ.Н.
и др. Методы лаб. Диагн. вир. бол. жив. М., Агропромиздат, 1986. 5.Сюрин В.Н. и др. Вет.
вирусол., Агропромиздат, 1991. 5а.Сюрин В.Н. и др. Лаб. диагн. вир. бол. жив. М., Агро-
промиздат, 1991. б.Воег G. et.al. Avian Pathol, 1985, 14, 3 :435. 7.Boer G. et.al. Avian Pathol,
1985, 14, 1 :39. 8.Crittenden L.B. et.al. Poultry Sci, 1985, 64, 3 :454. 9.Garrido M.F. et.al. Avian
Pathol, 1992, 21, 2 :333. lO.Heider G. et.al. Zbomik referatov, 1984, Kosice, 1984 :84. ll.Lee
L.F. et.al. Proc 34th West Poultry dis conf., 1985. 12.Lee Y.M.H. et.al. Mol and Cell Biol, 1991,
11, 3 :1419. 13.Mizuno et.al. Am J Vet Res, 1986, 47, 3 :551. 14.Payne L.N. et.al. Avian
Opathol, 1985, 14, 2 :261. 15. Temin H.M. Mol Carcinogenes, 1990, 3, 4 :183. 16.Young J.A.T.
et.al. Science, 1990, 250, 4986 :1421.
ЛЕЙКОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Leukaemia in cattle, Bovine leukosis (англ.); Enzootische
Rinderleukose (нем.); Leukose bovine (франц.)
Лейкоз КРС - хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, основной при-
знак которой - злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их
созревания, в результате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетка-
ми или появляются опухоли (1). Само определение болезни обязывает выдвинуть проблему
борьбы с этой инфекцией на первое место. И, действительно, после опубликования серий
работ о близком генетическом и АГ-родстве ВБЛ с вирусом Т-клеточного лейкоза человека
383
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
(HTLV-1 и HTLV-2) диагностика и профилактика лейкоза КРС приобретают особую акту-
альность (7, 8, 61, 81, 92,101,102,103,105,106,108).
Лейкозы животных диагностируют почти во всех странах мира. Наиболее широко они
распространены в США, раде стран Центральной Европы, Дании, Швеции и странах Ближ-
него Востока. В довоенной Германии на 10000 молочных коров приходилось 39-150 опухо-
левых форм лейкоза. В Восточной Германии заболеваемость возросла в 1975 г. с 111 случа-
ев на 10000 голов до 248 в 1985 г. (74). Постоянно растет число случаев лимфосаркомы, вы-
явленных на бойнях США. В 1917-1925 г. на 10000 убитых коров приходилось 0,4-0,6 слу-
чаев, а в 1958 и 1964 г. заболеваемость составила 1,8 и 1,7 соответственно. Потери от вы-
браковки туш с опухолевым лейкозом в США в 1978 г. оценивали в 7 млн. долларов. Эта
сумма не отражает реальных потерь, поскольку не учитывает ущерб от падежа и вынужден-
ного убоя заболевших животных непосредственно на фермах. Экономический расчет пока-
зал, что в Великобритании потери от лейкоза за 25 лет могут составить 4,8 млн. фунтов
стерлингов (58). В Турции, куда лейкоз был завезен с племенным скотом из Швейцарии, ко-
личество больных животных составило 4,5%. Лейкоз установлен также в Африке и Австра-
лии. В нашей стране возникновение лейкоза связано с завозом племенного скота в 1940,
1945-1947 гг. из Германии в хозяйства Западной Сибири, Московской, Ленинградской, Ка-
лининградской областей, а также Украины, Латвии и Литвы (31). В дальнейшем лейкоз
распространился в Таджикистан, Псковскую, Новгородскую области. Исследования, прове-
денные в различных регионах страны, показали повсеместное его распространение. По дан-
ным боенской статистики в 1979, 1980 и 1981 гг. опухолевые поражения установлены у
52,4; 56,3; 58,0 туш на 10000 убитых животных. В настоящее время лейкоз рассматривают
как болезнь, которая представляет потенциальную опасность для генофонда племенного мо-
лочного скота, и при отсутствии планомерной борьбы имеет тенденцию к дальнейшему на-
растанию. Экономический ущерб от лейкоза складывается из: - недополучения молока и
приплода из-за выбраковки и убоя; - утилизации лейкозных туш; - сдачи на мясо племенно-
го молодняка от больных коров; - расходов на проведение комплекса мероприятий (6).
Симптомы и патологоанатомические изменения. Различают 2 основные формы лей-
коза КРС: энзоотическую и спорадическую. Последняя форма встречается редко и поражает
молодых животных (до 3-летнего возраста), проявляется клинико-морфологическими разно-
видностями: 1) ювинальный лейкоз (форма лейкоза у телят) - наиболее часто наблюдается у
телят моложе 6-мес возраста; характеризуется увеличением лимфоузлов и часто инфильтра-
цией костного мозга; 2) тимусная форма лейкоза встречается у телят моложе 2-летнего воз-
раста; характеризуется увеличением тимуса; 3) кожная форма встречается у телят от 1 до 3-
летнего возраста; характеризуется узелковой лейкемической инфильтрацией кожи.
Спорадический лейкоз не представляет особого интереса в экономическом плане. Этио-
логический агент при этой форме болезни не выявлен.
Энзоотический лейкоз - контагиозная болезнь с длительным латентным периодом, во
время которого в крови выявляют вирус лейкоза КРС (ВЛКРС) и АТ к нему. В основном
встречается у крупных животных, наиболее часто в возрасте 5-8 лет. Болезнь характеризует-
ся пролиферацией неопластических элементов, в результате чего образуются отдельные
опухолевые массы и (или) диффузная инфильтрация различных тканей и органов. В опухо-
левый процесс вовлекаются лимфоузлы (Рис. 140), часто поражаются селезёнка, сычуг,
сердце, почки и другие органы. Клинические проявления зависят от вовлечённых в патоло-
гический процесс органов, степени опухолевого роста и диссеминации неопластического
процесса (6, 9).
Согласно современным данным, энзоотический лейкоз КРС объединяет две группы бо-
лезней. Опухолевые болезни первой группы характеризуются инфильтрацией лимфоцитами
органов кроветворения с вовлечением в патологический процесс костного мозга (лимфоид-
384
ГлаваХ!. Family Retrovindae Ретровирусные инфекции
ный, миелоидный, слабо дифференцированный и недифференцированный лейкозы с раз-
личными вариантами). Болезни второй группы (лимфо-, ретикулосаркома, лимфогрануле-
матоз) сопровождаются опухолевым ростом, первично проявляющимся в лимфоидной ткани
(лимфоузлах, селезёнке и других органах). Типично протекающий энзоотический лейкоз в
терминальной стадии характеризуется потерей массы, анемией, снижением молочной про-
дуктивности и увеличением одного или нескольких периферических лимфоузлов. Заболева-
ние неизменно заканчивается смертью животного через несколько недель или месяцев после
проявления клинических признаков.
У больных лейкозом животных установлены определённые числовые и структурные из-
менения хромосом клеток гемопоэтических органов. Наиболее часто обнаруживается гипер-
плоидия. В стадах с высокой заболеваемостью лейкозом с помощью гематологических ис-
следований могут выявляться клинически здоровые животные с устойчивым лимфоцитозом
(62). Примерно в 70% случаев развитию опухолевой стадии лейкоза предшествует период
обычно в несколько лет, в котором у животных отмечается устойчивый лимфоцитоз без
клинических признаков болезни. Ассоциация между энзоотическим лейкозом и персистент-
ным лимфоцитозом указывает на то, что оба состояния вызываются одним инфекционым
агентом. Эта гипотеза была подтверждена после того, как был открыт ВЛКРС.
Патогенез. Патогенез при лейкозе коров изучен недостаточно; АГ вируса обнаружива-
ют только в лимфоцитах инфицированных животных после краткосрочного культивирова-
ния in vitro. Считают, что лимфоцитоз - результат поликлональной пролиферации В-
лимфоцитов, постоянно стимулированных АГ ВЛКРС (53). Сравнительный анализ резуль-
татов изучения интерфероногенеза лейкоцитами крови у здорового, свободного от ВЛКРС,
спонтанно инфицированного вирусом лейкоза с картиной крови в пределах физиологиче-
ской нормы, а также больного хроническим лимфоидным лейкозом (ХЛЛ КРС), показал,
что титры лейкоцитарного интерферона в крови спонтанно инфицированных животных
снижены в 1,3-2,9, а у больных ХХЛ- в 3,8-9,4 раза по сравнению с клинически здоровыми,
свободными от ВЛКРС животными. Проведенные исследования показывают, что ВЛКРС
обладает иммунодефицитными свойствами, выраженными в данном случае снижением ин-
терфероногенеза в лейкоцитах крови.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Почти на протяжении века ученые многих стран проводили исследования по изучению
этиологии этого заболевания и лишь 1969 г. вошел в историю как год открытия ВЛКРС (62,
84). В последующих работах детально изучена морфология и морфогенез вируса и установ-
лена его онкогенная активность в прямых опытах по заражению овец и телят с последую-
щей реизоляцией возбудителя (3, 62, 75, 83, 84). На 21 Международном симпозиуме по лей-
козу КРС (Брюссель, 1976) была принята резолюция, в которой отмечено: “Вирус бычьего
? лейкоза следует официально признать определяющим фактором в этиологии энзоотического
лейкоза. В государственных программах, регламентирующих борьбу с лейкозом КРС, сле-
дует предусмотреть использование серологических тестов, направленных на выявление про-
тивовирусных АТ (52, 53).
Вирус является этиологическим агентом бычьего лейкоза и получил название “вирус
лейкоза крупного рогатого скота” (ВЛКРС), или Bovine Leukemia virus (BLV). Эго экзоген-
ный онковирус типа С, отличающийся от всех известных вирусов типа С млекопитающих.
BLV широко распространён в стадах (до 75%). Относится к семейству Retroviridae, подсе-
мейству Oncornaviridae. Вместе с недавно открытым вирусом Т-клеточного лейкоза челове-
ка (HTLV), ВЛКРС относится к особой группе, обозначенной типом Е (40, 41, 62, 84).
Морфология и химический состав. Зрелые вирионы ВЛКРС содержат центральнорас-
положенный электронно-плотный нуклеоид, диаметр которого, в зависимости от методов
фиксации и обработки препарата, варьирует от 40 до 90 нм. Центральная часть нуклеоида
25 Зак. № 171
385
Глава XI. Family Rdroviridae Ретровирусные инфекции
отделена от внешней вирусной оболочки промежуточным слоем. Гексагональное очертание
нуклеоида в ультратонких срезах предполагает икосаэдрическую симметрию. Внешняя ви-
русная оболочка представлена 2-контурной мембраной, которая лабильна, из-за чего диа-
метр вирионов может сильно варьировать - от 73 до 120 нм. На поверхности внешней обо-
лочки выявляют шипики (пепломеры) с пуговкообразным утолщением на конце, длиной 8-
11 нм, которые состоят из субъединиц, образованных двумя гликозилированными вирусны-
ми белками gp51 и gp30, отвечающими за типоспецифичность. Вирионы имеют плавучую
плотность в растворе сахарозы и CsCl, равную 1,15-1,18 г/мл и 1,17-1,33 г/мл соответствен-
но. Химический состав вирионов: протеины 60%, липиды 35, нуклеиновые кислоты 2,2, уг-
леводы 0,5% (6, 55).
В структуре ВЛКРС обнаружено 6 основных белков с мол.м. от 10 до 51 кД (рЮ, р12,
р15, р24, gp30 и gp51) (95,97,116). Четыре негликозилированных белка (рЮ, р12, р15, р24)
составляют сердцевину вириона, причем белок р24 присутствует в наибольшем количестве
(38). Два крупных белка являются гликопротеинами - один из которых (р51) расположен на
поверхности вириона, другой (рЗО) - трансмембранный белок (107). ВЛКРС обладает выра-
женной антигенной активностью и индуцирует синтез ВНА и КСА. Он агглютинирует эрит-
роциты мышей. За инфекционность (94) и ГА активность ответственен gp51 (113). В gp51
выявлено 3 эпитопа, ответственных за нейтрализацию вируса. Поли- и монАТ против gp51
обладают ВН-активностью (70, 71, 72, 73, 76, 82, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 112), подавляют
синцитийобразующую активность вируса, препятствуют выходу из клеток и вызывают ли-
зис инфицированных клеток в присутствии комплемента. Оболочка ВЛ КРС содержит 2
белка gp60 (гликопротеин поверхности вириона) и рЗО (межмембранный белок) (109).
Геном вируса может существовать в 2-х формах, геномной 1-цепочечной РНК или в ви-
де ДНК, синтезированной на геномной РНК как на матрице, и интегрированной в хромосо-
му клетки-хозяина в виде провируса. Геномная РНК содержится только в зрелых вирионах.
В жизненном цикле вируса геномная РНК функционирует лишь 1 раз, когда служит матри-
цей для фермента - обратной транскриптазы при биосинтезе комплементарной ДНК. Весь
объем биохимических процессов, необходимый для полной репликации вируса, выполняет-
ся с участием ДНК-провируса (60, 65). Геном состоит из 8714 нуклеотидных последователь-
ностей и имеет следующую организацию: 5'LTR-gag-pol-env-pX(BL)-3'LTR (56). Геи gag -
кодирует трансляцию группоспецифического белка прдшественника структурных белков, в
частности р24; ген pol- полимеразу, которая транскрибируется с ДНК в составе общего с
геном gag транскрипта “gag-pol”. В результате процессинга получаются следующие продук-
ты: обратная транскриптаза 66-55кД, протеаза ЮкД, эндонуклеаза 15кД; ген env - кодирует
трансляцию белка предшественника гликозилированных белков наружной оболочки вируса;
ген pX(BL) - трансактиватор транскрипции (tat), кодирует регуляторные трансактиваторные
белки. Гены env, gag и pol называют структурными, так как кодируемые ими белки являют-
ся структурными белками зрелого вируса или ферментами.
Длинные концевые повторы (LTR) состоят из 530 пар нуклеотидов с обратным повто-
ром в 6 пар оснований на 5’- и 3’- концах, фланкированных прямыми повторами в 6 пар ос-
нований из ДНК клетки хозяина. При сравнительном исследовании способности LTR
HTLV1, HTLV 2 и ВЛКРС функционировать в качестве усилителя транскрипции установ-
лено: LTR ВЛКРС увеличивает экспрессию гена, направляемого с дистального гетерогенно-
го промотора, причем в отличие от усилителя транскрипции LTR-HTLV-1, который активен
в незараженных клетках лимфоидного и нелимфоидного происхождения, усиливающее дей-
ствие LTR-ВБЛ и LTR-HTLV-2 проявлялось только в инфицированных этими вирусами
клетках (101). Для RTL ВБЛ характерен удлиненный участок R (228 пар оснований), разде-
ляющий сигнал присоединения poly(A) (А-А-Т-А-А) от ро1у(А) сайта на 260 пар оснований.
R-участок образует стабильную шпилечную структуру на молекуле РНК, способствуя соеди-
386
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
нению обоих терминирующих кодонов и обеспечивая нормальную терминацию цепи. Такая
структурная организация LTRBEJI, аналогична организации LTR вируса Т-клеточного лей-
коза человека, а также умеренная гомология последовательностей (более 50%), установлен-
ная между R-участками 2-х ретровирусов, указывает на их эволюционное родство (106).
Первую открытую рамку считывания составляет ген gag из 1179 пар оснований (с 628
по 1806), начинающейся с первого триплета ATG. Он кодирует белок-предшественник со
структурой NH2-pl5-p24-pl2-COOH, соответствующий ранее описанному белку, обозначен-
ному Рг45 (gag) (79). N-концевой белок состоит из 109 аминокислот, главный белок ядра
(р24) состоит из 214 аминокислот и белок pl2, связанный с РНК, из 69 остатков. Непосред-
ственно на 3'-конце начинается новая открытая рамка считывания, которая обнаруживает
высокую степень гомологии с протеазами вирусов птиц и млекопитающих (123). После уча-
стка протеазы имеется еще одна открытая рамка считывания для гена pol, кодирующая 852
аминокислоты (позиция с 2317 по 4875), которая обнаруживает умеренную гомологию по
гену pol вирусов типа С птиц и млекопитающих. Продукт гена pol (95 кД ) превышает мол.м.
ро1-кодируемой обратной транскриптазы ВБЛ (70 кД). Возможно, что этот ген кодирует
также эндонуклеазу ВБЛ (32 кД). Третью рамку составляет ген env (нуклеотиды с 4821 по
6368), кодирующий 515 аминокислот поверхностного гликопротеида (gp51) и трансмем-
бранного белка (gp30) (106). Размер рамки для env составляет 1446 нуклеотидов и позволяет
осуществить синтез 2-х белков gp60 (268 аминокислот) и gp30 (env) (214 аминокислот) (99).
Первичная структура рЗО (env) имеет 36% идентичности в аминокислотной последователь-
ности соответствующего белка р24 (env) вируса Т-клеточного лейкоза человека. Меньший
уровень гомологии установлен с белком р 15 (белок Е) вируса лейкоза мышей и gp36 вируса
саркомы Рауса. Степень родства gp60 ВБЛ и HTLV выражена меньше, чем у рЗО (env) ВБЛ
и р21 (env) РЕ ДМ, но тем не менее является статистически достоверной. Сравнение нуклео-
тидной последовательности генов env и аминокислотной последовательности кодируемых
ими белков-предшественников 7 изолятов ВБЛ позволило идентифицировать 2 подгруппы
вирусов: японо-американскую (штаммы BLV-1, VdM и FLK-BLV) и европейскую (шт. Т15-
2, LB285 и LB59), при этом изменчивость гена env составляла менее 6% (80). В австралий-
ском изоляте ВБЛ (pBLV-Al) выявлены вариации в аминокислотном составе по сравнению
с японскими и бельгийскими изолягами, особенно на уровне гена gag, в которых установле-
но 54 и 24 аминокислотных замещения соответственно. Вместе с тем установлены высоко
консервативные аминокислотные последовательности внутри env и pol генов, включающие
участки с эпитопами, ответственными за инфекционность вируса (57). За терминирующим
кодоном env и началом З'-LTR идентифицирован участок рХ, состоящий из 1817 или 1800
пар оснований (59, 98, 99, 105). Исходя из функциональной активности и по аналогии с
HTLV1 и HTLV2, для продукта участка рХ ВБЛ предложено название tat (трансактиватор-
ные белки) (102). Подтверждена иммунологическая идентичность естественного и рекомби-
нантного гликопротеинных АГ ВЛКРС и установлена принципиальная возможность исполь-
зования рекомбинантного АГ для диагностических целей (12).
Структура провируса BLV. Порядок генов в провирусной ДНК длиной в 8190 пор
нуклеотидов таков: длинный концевый повтор (ДКП) - gag - ген протеазы - pol-evn-tat ДКП.
Регуляторные последовательности для транскрипции трансляции содержатся в ДКП. Обна-
ружена значительная гомология BLV с ретровирусами мышей и птиц, однако наиболее бли-
зок провирус BLV к ретровирусам человека HTZV I и HTZV II. Основные продукты генов
env/gp51 gp30/ и tat/p38/. Два гликопротеина - gp51 и gp30 - находятся на поверхности ви-
риона и клеток, заражённых BLV. ВЛКРС принадлежит к ретровирусам II класса; он не со-
держит нуклеотидных последовательностей клеточных онкогенов, но имеет длинную откры-
тую рамку считывания, часть которой, по-видимому, составляет ген tat. Последний не экс-
прессируется ни в свежих опухолевых клетках, ни даже в неопластических лимфоцитах,
25*
387
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
культивируемых in vitro как постоянная линия клеток. Другие вирусные гены, кодирующие
структурные белки gag и evn, не экспрессируются в опухолевых клетках (7). Этот недефект-
ный ретровирус содержит 3 основных гена: gag, кодирующий белок, предшественник внут-
ренних структурных белков вириона (группоспецифических антигенов); pol, кодирующий
вирионную РНК-зависимую ДНК-полимеразу, и evn, кодирующий гликопротеид вирусной
оболочки (gp51) и трансмембранный белок (gp30). Этих 3-х генов достаточно для обеспече-
ния репликации вируса. ВЛКРС не содержит ген one, кодирующий специфический белок,
трансформирующий клетки (40). Однако, он может трансформировать клетки путем актива-
ции клеточных генов ВНС, что сопровождается высоким уровнем трансформирующего бел-
ка, в результате чего следует пролиферация клеток, ведущая к развитию опухоли.
Устойчивость. Установлено, что ВЛКРС чувствителен к температурным воздействиям,
разрушается при повторных замораживаниях и оттаиваниях и при нагревании до 5 6° С в те-
чение 15 мин. Пастеризация молока (74°С в течение 16 с) разрушает его, и он теряет инфек-
ционность для ягнят. Вирус обнаруживается в молоке после хранения в течение 72 ч при
1°С, при 10 и 14,5°С его не обнаруживают через 48 и 24 ч соответственно. Полная инакти-
вация вируса в молоке или вируссодержащей жидкости установлена при 50°С в течение 70 с
(100), при 70-74 °C в течение 17 с или при 56-63 °C в течение 5-30 мин (11). В цельном мо-
локе, хранившемся при 1,1-5,5°С, происходит постепенное снижение титров ВЛКРС в тече-
ние 72 ч; при 9,9 и 14,4°С вирус не обнаруживался уже через 48 и 24 ч хранения (40). В
сливках, собранных после отстоя цельного молока, при 1,1°С через 24, 48, 72 ч вирус был
выделен только в пробах первых 2-х сроков отстоя. В разбавленном молоке (до 37,5%) ин-
фекционность сохраняется в течение 12 ч. Если при pH 6,5 вирус сохраняется в молоке в те-
чение 72 ч, то при pH 7,1 - только 48 ч (104). Снижение кислотности молозива до pH 4,5 не
разрушает вирус в течение 2 ч, особенно при высоких исходных титрах, а в нативном моло-
зиве вирус сохранялся в течение 18 дн при комнатной температуре (111). Прямой солнеч-
ный свет инактивирует ВЛКРС в течение 4 ч, УФ лучи - в течение 30 мин (120 Вт на рас-
стоянии 1м). ВЛКРС полностью теряет активность в р-рах: натриевого щелока (0,5%, 30
мин, 22°С); этанола (2,0%, 4 ч, 22°С); формальдегида (0,5%, 8 ч, 37°С); фенола (0,5%, 72 ч,
4°С) (48). В жидком азоте лимфоциты, несущие провирусную ДНК, сохраняют инфекцион-
ность в течение нескольких лет. Повторное замораживание и оттаивание разрушает клетки и
устраняет инфекционность.
Антигенная структура. Электрофорез очищенных вирионов ВЛКРС в SDS - ПААТ и
гельфильтрация в присутствии гидрохлорида гуанидина показывают в составе вирионов 4
главных негликозилированных белка (р24, р15, р12, р10) и 2 гликозилированных белка
(gp51 и gp30). Внутренние структурные белки: р24 был первым структурным белком, выде-
ленным из инфицированных клеток или из очищенных вирионов. Белок нейтральный и
умеренно гидрофобный; АГ активность сохраняется после обработки эфиром или после
фиксации ацетоном. Установлена общая АГ детерминанта в главном внутреннем белке
ВЛКРС и вируса лейкоза саркомы птиц, вирусов типа С млекопитающих (мышей, хомяков,
обезьян) и вируса типа D ( вирус обезьян Мейзон-Пфайзера) (43). Между р24 ВБЛ и р24 ви-
руса Т - клеточного лейкоза человека имеется статистически достоверная гомология (29).
Сыворотки крови КРС с АТ против р12, р15 и р24 ВБЛ давали перекрестную реакцию в
иммуноблоке только с р24 HTLV -1 (81). Pl 5 является слабым основным фосфопротеидом,
не содержащим остатки метионина. Совокупность молекул р15 представлена 2-мя разно-
видностями: одни молекулы связаны с липидным слоем 2-слойной мембраны вируса, другие
- с ьирусной РНК (116, 117). Р12- основной белок с высоким содержанием глицина и проли-
на, что определяет низкий уровень вторичной организации белковой молекулы. Вирион тес-
но связан с вирусной РНК и имеет изоэлектрическую точку - 8,0 (117). Изучение аминокис-
лотного состава р12 2-х изолятов ВБЛ выявило различие только в одной аминокислоте. Та-
388
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
кой минимальный дрейф среди независимых изолятов дает дополнительное подтверждение
гомологии, установленной между р12 ВБЛ и р 15 HTLV (92).
РЮ - продукт расщепления одной из фракций р15, обладающей выраженными основ-
ными и гидрофобными свойствами, способными связываться с 1-нитевой ДНК (116). Фер-
мент - обратная транскриптаза, является слабым антигеном. АТ к этому белку выявляют
только у некоторых коров, естественно инфицированных ВЛКРС, независимо от концентра-
ции в их сыворотке АТ против структурных вирусных белков. На структурные АГ ВЛКРС -
белки р 15, р24, gp30 и gp51 в сыворотках крови больных коров обнаруживают КСА (38).
Главные гликопротеины (gp51 и gp30) обладают умеренно гидрофобными свойствами и
входят в состав вирусной оболочки в виде комплекса 1:1, образованного дисульфидными
связями. Они являются производными одного гликозилированного предшественника gpr72
(env) (79). По аналогии с другими представителями ретровирусов, ВЛКРС содержит транс-
мембранный белок, кодируемый геном env. Впервые выявленный рЗО отличается от gp30 и
проявляет высокую гомологию с трансмембранными белками ретровирусов В и С типов, а
так же с 3'-областью гена env вируса Т-клеточного лейкоза человека (109). МонАТ к gp 51
ВЛКРС взаимодействуют с 8 независимыми эпитопами на молекуле белка, из которых 3
эпитопа (F, G, Н) являются биологически активными, определяющими инфекционность ви-
руса и способность вируспродуцирующих клеток формировать синтиций (49, 50, 80). Сайт Н
служит рецептором-мишенью для КСА. Пространственное расположение эпитопов F, G, Н в
молекуле АГ связано с гликозилированным фрагментом (15кД) (51). Удаление углеводных
звеньев gp51 смесью гликозидаз приводит к снижению до минимума реактивности АГ с ан-
тисыворотками, полученными от коров и овец, инфицированных ВБЛ (108).
Антигенная вариабельность и родство. В АГ отношении ВЛКРС отличается от из-
вестных вирусов типа С. Не выявлено с помощью ИФ и иммунодиффузии АГ родства меж-
ду главным внутренним белком ВЛКРС р24 и группоспецифическими АГ вирусов лейкозов
мышей и кошек, опухолей молочных желёз мышей, вирусов бабуинов, Мезон-Пфайзера,
шерстистых обезьян. ВЛКРС, являясь экзогенным ретровирусом КРС, отличается от извест-
ных ретровирусов по АГ свойствам, морфогенезу, способности индуцировать синцитий в
монослойных культурах клеток и по свойствам ревертазы. Кроме того, в отличие от боль-
шинства других лейкемогенных вирусов, он присутствует у инфицированных животных в
непродуктивном состоянии. На основании этих различий, Ferrer считает, что ВЛКРС явля-
ется особым лейкемическим вирусом, принадлежащим к особой группе Oncovirinae, обозна-
ченной как тип Е (54).
Локализация вируса, вирусоносительство, персистенция. ВЛКРС обнаруживается в
клетках молозива и молока естественно заражённых животных. Из слюны, носовых истече-
ний, мочи и спермы инфицированных животных его выделить не удалось. Эксперименталь-
но и спонтанно заражённый до или после рождения теленок остаётся инфицированным всю
жизнь, несмотря на постоянное присутствие ВНА, выявляемых в РДП, РСК и других серо-
логических реакциях (93). Отсутствие экспрессии генома ВЛКРС при наличии транскрип-
ционных провирусов в опухолевых клетках дало возможность предположить, что причиной
опухолевой трансформации клеток ВЛКРС является нарушение структуры клеточного гено-
ма (121). Неспособность АТ элиминировать ВЛКРС объясняется тем, что этот вирус обычно
присутствует в инфицированных лимфоцитах в непродуктивном состоянии и защищён от
действия АТ. Размножение его не является необходимым для распространения в популяции
животных. Инфицированные лимфоидные клетки могут передавать вирусный геном потом-
ству во время размножения клеток. От клетки вирус может передаваться также без продук-
ции вирусных частиц с помощью механизма Cellular Kissing (клеточного прикосновения),
как описано относительно герпесвирусной системы.
389
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Антигенная активность. Инфицированные ВЛКРС животные вырабатывают АТ к не-
скольким вирионным АГ. Впервые для выявления АГ этого вируса в цитоплазме продуци-
рующих вирус лимфоцитов КРС был использован метод непрямой ИФ с использованием
сыворотки больного лейкозом КРС. В дальнейшем было показано, что выявляемый этим
методом АГ является вирионным компонентом, несущим АГ детерминанты, присутствую-
щие в главном внутреннем вирионном белке р24. В сыоротке крови больных лейкозом ко-
ров обнаружены КСА, к 4-м вирусным полипептидам: р15, р24, gp3O, и gp51. В сыворотке
крови телят и ягнят, родившихся от ббльных лейкозом животных, имеется высокий уровень
специфических АТ, сохраняющийся в течение 5-6 мес после рождения у телят и 3 мес у яг-
нят. Наличие высокого титра колостральных АТ способно нейтрализовать инфекцию
ВЛКРС и предотвратить заражение новорожденных телят при условии их содержания раз-
дельно от больных коров (39). АТ вырабатываются преимущественно на структурный белок
gp51 и относятся к IgC, IgA и IgM. Наличие АТ не предотвращает развития опухолей.
Экспериментальная инфекция. Болезнь можно воспроизвести на новорождённых те-
лятах и овцах при введении им различных вируссодержащих материалов. Эксперименталь-
ному лейкозу предшествует бессимптомная онковирусная инфекция, переходящая в после-
дующем в гематологическую стадию болезни с развитием характерной клинической и пато-
морфологической картины. У заражённых животных гематологическая стадия характеризу-
ется постоянным лейкоцитозом и лимфоцитозом. Воспроизведение лейкоза у овец осущест-
вляется с большим постоянством и в более короткие сроки по сравнению с КРС. После
внутриперитонеального, подкожного, внутримышечного введений нативных лейкоцитов,
краткосрочных культур клеток лейкозной коровы и бесклеточных фильтратов культураль-
ной жидкости этих культур у всех заражённых телят и овец через 15-90 дн, в зависимости от
дозы и активности вводимых материалов, развивалась инфекция, выявляемая как серологи-
ческими, так и вирусологическими методами.
В условиях опыта животных можно заразить аэрозольно и интраназально.
Инфекцию ВЛКРС можно также воспроизвести на козах, однако без клинических при-
знаков лейкоза. Введение ВЛКРС в организм шимпанзе сопро-вождалось образованием и
длительной циркуляцией вирусспецифических АТ, однако выделить инфекционный вирус не
удалось. Показана возможность пассирования вируса (шт. FLK) через новорождённых яг-
нят. В 6-и последовательных пассажах прослежено изменение некоторых биологических
свойств вируса: усиление его лейкозогенности и иммуносупрессивного действия, сокраще-
ние сроков индукции синтеза вирусспецифических АТ после инфицирования. Длительное
выявление вирусспецифических АТ без клинических проявлений лейкоза наблюдается так-
же у заражённых ВЛКРС кроликов и свиней. В экспериментальных условиях не установлен
положительный эффект применения миксоферона (смесь антивирусных интерферонов, по-
лученных генно-инженерным путем) (15,16,17).
Инфицирование ВЛКРС мышей, крыс, хомячков, морских свинок, собак, белок, кошек и
птиц (цыплят, голубей) не сопровождается развитием лейкозного процесса или выработкой
вирусспецифических АТ. Изучены свойства ВЛКРС на кроликах, трансгенных по гену анти-
смысловой РНК (асРНК) ВЛКРС. Иммунный ответ на экспериментальное заражение
ВЛКРС, выявляемым в серологических реакциях, наблюдали у одного из 4-х трансгенных и
у 3-х из 4-х контрольных кроликов через 1-3 мес. Реизолировать ВЛКРС удалось от трех
контрольных кроликов, тогда как от трансгенных кроликов вирус не выделяли (46). Кроли-
ки наиболее чувствительны при заражении их внутривенно нативными лейкоцитами (в дозе
50-100-106) от больной лейкозом коровы. (26). Кролики могут служить лабораторной моде-
лью при изучении ВЛКРС. Через 28-35 дней после заражения опытные кролики и овцы про-
дуцировали антивирусные АТ, выявляемые в РИД (13, 14, 15). В клетках нелимфоидного
390
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
происхождения ни ВЛКРС, ни его АГ не обнаруживаются. С помощью молекулярной гиб-
ридизации показано, что в этих клетках отсутствуют последовательности ДНК провируса.
Культивирование. Вирус лейкоза впервые удалось обнаружить в краткосрочных куль-
турах лимфоцитов крови инфицированных животных (84). ВЛКРС репродуцируется в пере-
виваемых хронически инфицированных культурах клеток тканей животных разных видов.
Наибольшее распространение в мире получила перевиваемая линия клеток FLK-BLV, кото-
рую получил в 1974 г. Van der Maaten путём сокультивирования эмбриональных клеток
почки овцы с лимфоцитами лейкозной коровы. Эта линия клеток используется для биохи-
мических, морфологических и серологических исследований (110,119,120,122).
В настоящее время получены и широко используются перевиваемые хронически инфи-
цированные ВЛКРС линии клеток: фибробласты легкого эмбриона коровы (АИД-15), почки
эмбриона коровы (ПЭК); почки эмбриона овцы (FLK-BLV); легкого эмбриона летучей мы-
ши (T61-Lu); легкого макаки-резус (BLV-Simian); селезенки овцы (FLS, J-1228); тимуса эм-
бриона коровы (ТЭК-МВА-766 LmTT) (50, 62, 120). Большинство экспериментальных ра-
бот по изучению структуры ВБЛ и биосинтеза вирусных компонентов выполнены с исполь-
зованием культуры FLK-BLV (119, 120). Эта клеточная линия является лучшим продуцен-
том вируса; на одну клетку FLK-BLV в среднем приходится 600 копий вирусспецифической
РНК. Позднее получена новая линия клеток FRK (fetal Rarnb Kindey) - BRV (почка плода
овцы и лимфоцитов), используемая для изучения морфологии ВЛКРС. В 1991 г получен но-
вый штамм клеток почки эмбриона коровы Ml 18 ВСКК(П) для культивирования ВЛКРС и
накопления вирусной биомассы с целью приготовления иммунодиагностических и профи-
лактических препаратов (37).
Продукция вируса зависит от концентрации эмбриональной сыворотки в ростовой среде
и снижение её с 10 до 5,0 или 2,5% приводит к снижению продукции вируса иа 40 и 80% со-
ответственно. Усиление репродукции вируса наблюдали при добавлении в ростовую среду
20 мкг/мл инсулина. Добавление дексаметазона ингибирует репликацию и снижает выход
вируса на 50%. ФГА, Кон-А и липополисахарид не оказывали заметного действия (108).
Культивирование клеток FLK-BLV на микроносителях типа Цитолар или Cytodex повыша-
ет урожай вируса в 3-4 раза по сравнению с роллерным или стационарным режимами куль-
тивирования. Методом клонирования FLK-BLV получены сублинии, различающиеся по
уровню продукции вируса (78). Репродукция вируса в 3 из 18 клонированных сублиний в
стационарном режиме была на уровне родительской линии в роллерных установках. Рол-
лерный режим позволяет значительно снизить расход среды : 10-кратное увеличение пло-
щади монослоя при 2-кратном увеличении расхода позволяет получить с 1 л культуральной
среды до 2 мг gp51 ВЛКРС. Максимальный урожай вирусного АГ получен в культуре FLK-
BLV, с использованием сыворотки крови лошади. Урожай вирусного АГ в культурах, вы-
ращенных на сыворотке крови безмолозивных телят, плодов коровы и коров был ниже и со-
ставил 0,189, 0,116 и 0,025 мг/мл соответственно (77).
В большинстве случаев с момента установления инфицирования клеток наблюдалось
увеличение продукции вируса на протяжении нескольких начальных пассажей, затем про-
дукция вируса снижалась или исчезала. Однако, клетки FLK и ТЭК-МВА-76 сохраняют ре-
продукцию вируса на высоком уровне на протяжении многих пассажей (свыше 200). АТ
против gp51 вируса, в отличие от АТ к g24, подавляют репликацию вируса в краткосрочных
культурах лимфоцитов. Ингибирование экспрессии вирусного генома происходит только в
том случае, если в ростовую среду добавляют плазму крови инфицированных животных (5).
Именно она содержит фактор, блокирующий экспрессию вирусного генома в культуре лим-
фоцитов (115). Блокирующий фактор выявлен в плазме крови 16 из 23 инфицированных ко-
ров, и 2 из 17 свободных от ВБЛ коров (69). Ингибирующим действием на экспрессию ви-
русного генома обладали лизаты тромбоцитов крови, инфицированных и свободных от ВБЛ
391
Глава XI. Family Rdroviridae Ретровирусные инфекции
коров (114). Репликация ВЛКРС в культурах клеток не сопровождается деструкцией чувст-
вительных клеток и не проявляется разрушением монослоя. Однако, в отличие от других из-
вестных ретровирусов ВЛКРС индуцирует образование синцитиев в монослойных культурах
нетрансформированных клеток КРС, овец, коз, человека, обезьян и летучих мышей. Наибо-
лее чувствительными клетками-мишенями являются монослойные культуры клеток селезен-
ки эмбриона КРС на ранних пассажах. Инфицированные ВЛКРС клетки индуцируют фор-
мирование синцитиев в монослойных культурах клеток крыс, трансформированных вирусом
саркомы Рауса (ХС-клетки), или в культурах клеток кошек, трансформированных вирусом
саркомы мышей (СС81-клетки) (62). Бесклеточные препараты ВЛКРС также индуцируют
образование синцитиев в чувствительных клетках. УФ-облучение, обработка ультразвуком,
прогревание при 5 6° С в течение 30 мин, замораживание и оттаивание полностью инактиви-
руют синцитийобразующую активность препаратов ВЛКРС. Для стимуляции продукции ви-
руса лейкоза и его АГ в перевиваемых культурах клеток (FLK-BLV и ТЭК-МВА-76 ) реко-
мендован инсулин (22).
Способность ВЛКРС индуцировать в монослойных куьтурах клеток образование синци-
тиев (многоядерных клеток) была использована для разработки специфичного, чувствитель-
ного и быстрого диагностического теста для выявления инфекционного вируса и ВНА. Этот
тест обеспечивает количественные результаты и успешно применяется для прямого выявле-
ния ВЛКРС - инфекции у КРС и животных других видов (23, 24, 25, 27, 28, 40, 41, 42, 44,
45, 66, 67).
Особенности репродукции. В краткосрочных культурах вирус накапливается пре-
имущественно во внеклеточных пространствах, но может формировать и внутриклеточные
скопления, заключенные в цитоплазматические вакуоли. Почкующиеся формы вирионов
можно обнаружить через 3-9 ч культивирования. В нативных лимфоцитах крови больных
животных вирионы ВЛКРС, как правило, обнаружить не удается. В перевиваемых культу-
рах клеток почкующиеся формы вирионов встречаются чаще. Почкование вируса сопровож-
дается значительной дистрофией цитоплазмы (8). Инфицированные ВЛКРС клетки индуци-
руют формирование синцития из клеток индикаторных культур. Каждый очаг синцития яв-
ляется результатом действия одной биологически активной инфекционной вирусной части-
цы и представлен поликариоцитом, образованным в результате слияния 5-25 клеток (68).
ГА свойства. ВЛКРС агглютинирует только эритроциты мышей. Максимальная ГА на-
блюдается при pH 6 и температуре 4°С. После обработки вируса тритоном Х100 или ультра-
звуком Г А активность вируса повышается в 6-16 раз. Обработка трипсином, КЮ4 или ней-
раминидазой значительно снижает ГА-активность ВЛКРС. Эти данные указывают на то, что
ГА ВЛКРС является гликопротеином gp51, который после очистки обладает высокой ГА-
активностью. Обработка мышиных эритроцитов нейраминидазой в 4 раза повышает их спо-
собность агглютинироваться.
Г Ад свойства не установлены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные лейкозом жи-
вотные. В естественных условиях инфекция ВЛКРС может передаваться пренатально и по-
стнатально. Механизм пренатальной передачи включает передачу вирусного генома через
гаметы (генетическая и хромосомная трансмиссия) и передачу целого вируса (эпигенети-
ческая или экстрахромосомная трансмиссия). Постнатальная передача включает передачу
вируса через молоко или при контакте. Контактная передача может быть результатом пря-
мого воздействия контаминированных вирусом секретов или экскретов или переноса вируса
насекомыми или контаминированными объектами. ВЛКРС может персистировать в лейко-
цитах клещей и переноситься ими на здоровых животных. Пренатальная передача ВЛКРС
392
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
не превышает 20 случаев. Вирус передается от матери плоду трансплацентарно, во время
последних 6 мес внутриутробной жизни, а не через половые клетки.
Однако основным путем распространения инфекции в естественных условиях является
контактная передача. Так как частицы ВЛКРС не продуцируются in vivo, то логично пред-
положить, что в большинстве случаев вирус передается с инфицированными лимфоцитами.
Для заражения коровы достаточно ввести внутрикожно 2500 лимфоцитов крови. Учитывая
возможность переноса ВЛКРС ничтожным количеством крови, следует иметь в виду, что
при не соблюдении элементарных санитарных правил инфекция может распространяться во
время выполнения ветеринарных процедур со шприцами, иглами и другими хирургически-
ми инструментами, контаминированными кровью. Следовательно, при массовом взятии
крови, вакцинации, туберкулинизации и других мероприятиях для каждого животного необ-
ходимо использовать отдельный стерильный инструмент. Несоблюдение этого правила рез-
ко повышает инфицированность животных неблагополучных хозяйств. Имеются косвенные
доказательства того, что распространение инфекции ВЛКРС может осуществляться насеко-
мыми. В тропических зонах, например в Венесуэле, где распространены кровоссущие насе-
комые, пораженнность лейкозом особенно высока.
ВЛКРС или инфицированные им лимфоциты присутствуют в молоке большинства ин-
фицированных животных. Однако, несмотря на то, что молоко и молозиво инфицированных
коров содержат вирус, инфекция новорожденным телятам в естественных условиях переда-
ется редко по сравнению с контактным заражением (83). Устойчивость телят, вскормлен-
ных инфицированными коровами, к ВЛКРС в течение первых месяцев жизни обусловлена,
вероятно, материнскими ВНА, которые приобретают все телята, получающие молозиво. Ес-
ли теленок заражен ВЛКРС во внутриутробный период, то колостральные АТ не влияют на
персистенцию вируса. В зависимости от уровня АТ в молозиве, материнские АТ исчезают в
течение 4-6 мес после рождения. Внутриутробная передача вируса лейкоза обнаружена у 4
из 50 обследованных новорожденных телят. По мнению авторов, возникновение передачи
вируса лейкоза не оказывает существенного влияния на эпизоотологию данной инфекции,
чем обосновывают нецелесообразность использования серопозитивных коров в системе про-
тиволейкозных мероприятий (32,33).
В сперме инфицированных быков ВЛКРС не выявлен. Однако, у быков с воспалением
генитального тракта могут быть в сперме лимфоциты, инфицированные ВЛКРС. Экспери-
ментально установлено, что коров можно инфицировать путем нанесения таких лимфоцитов
на слизистую оболочку матки. Таким образом, в случае наличия ВЛКРС в сперме инфици-
рованных быков исключена передача вируса от быка корове. Вместе с тем, различий в час-
тоте проявления инфекции среди потомства ВЛ КРС положительных и ВЛ КРС отрицатель-
ных быков не выявлено. Механизм контактной передачи ВЛКРС не ясен, поскольку не уста-
новлено наличие вируса в фекалиях, моче и слюне инфицированных животных. Паренте-
ральное введение подопытным животным слюны, выделений из носа, проб выдыхаемого
воздуха и мочи инфицированных животных не вызывало депрессии. Исследованиями, про-
веденными в динамике опыта, было установлено, что через 60 сут после прекращения вы-
паивания молока у 2-х кроликов в сыворотке крови были выявлены антитела к ВЛКРС в
РИД, а через 90 сут еще 5 кроликов были серопозитивными. На морских свинках нам не
удалось установить факт передачи ВЛКРС через молоко. Опытные животные, которым вы-
паивали молоко, термически обработанное и контрольные были серонегативными на протя-
жении всего срока наблюдения. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о
том, что молоко является фактором передачи ВЛКРС. В основном инфекционный процесс у
КРС ограничивается 2-мя стадиями: инкубационной и бессимптомного вирусоносительства.
Только у небольшого процента (5-7) взрослых животных устанавливают 3-ю и 4-ю стадии:
клинико-гематологическое и опухолевое проявление, характерные для лейкоза.
393
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Одним из центральных аспектов эпизоотического процесса лейкоза, еще не до конца
изученного, является раскрытие механизма путей и способов передачи вируса лейкоза. При
лейкоза КРС рассматривают 2 пути передачи вируса: неонатальный (внутриутробный) и по-
стнатальный (горизонтальный). Сероэпизоотологические исследования, проведенные на 62
тыс. зараженных ВЛКРС и 47 тыс. здоровых коров, показали, что вертикальный путь не
оказывает существенного влияния на эпизоотический процесс. Горизонтальный (контакт-
ный) путь является основным в эпизоотическом процессе. В стадах с зараженностью коров-
матерей ВЛКРС в пределах 11,3-33,1% широкомасштабными сероэпизоотологическими ис-
следованиями 6-мес телят (118 тыс.) в РИД выявляли сравнительно невысокий уровень АТ
носительства (2,1-4,8%). Одновременно установлено, что в оздоровленных от инфекции
ВЛКРС стадах методом постепенной замены зараженных коров серонегативными собствен-
ной репродукции первотелками, у последних более 57% матерей положительно реагировали
на ВЛКРС.
Изучение горизонтального (контактный) пути передачи ВЛКРС включает исследования
непосредственного соприкосновения между зараженными и здоровыми животными; фактор
молока и ятрогенный способ. 6-летние сероэпизоотологические исследования популяции
стада коров (365 голов), содержавшихся на привязи в одном 8-рядном моноблоке при общей
выгульной площадке и комплектующегося первотелками, свободными от ВЛ КРС, показало
следующее. Уровень зараженности коров за этот срок снизился с 20,6 до 11,2%. При этом
среди вводимых животных заражение в течение года варьировало от 2,5 до 5,1%. В другом
хозяйстве в 4-рядный коровник с 63,15%-ной зараженностью коров партиями (по 25 голов)
вводили для привязного содержания серонегативных первотелок, не допуская их совместно-
го содержания с зараженными животными на выгульной площадке и пастбище. Коров этого
коровника оздоровили от инфекции ВЛКРС за 14 мес. За этот же период из 200 введенных
первотелок перезаражение последних отмечали только у 8 (4%) животных. Представленные
данные доказывают, что ВЛКРС отличается низкой заразительностью и, вместе с тем, высо-
кой резистентностью макроорганизма по отношению к вирусу. При этом передача ВЛКРС
происходит только с лимфоцитами, контаминированными вирусом. Молоко серопозитивных
коров, несмотря на то, что из лимфоцитов молока отдельным исследователям удалось вы-
явить ВЛКРС, не является основным фактором передачи вируса. Эго можно объяснить дву-
мя основными положениями: невысокой концентрацией ВЛКРС в сборном молоке заражен-
ного стада и, во-вторых, протективными свойствами молозива. Ятрогенный способ обуслов-
лен нарушениями правил асептики при ветеринарно-зоотехнических манипуляциях с жи-
вотными, он является основным в передаче ВЛКРС. Представленные данные, характери-
зующие особенности эпизоотического процесса, позволили разработать научно обоснован-
ную систему ВИЭВ профилактики и ликвидации лейкоза КРС (6,7).
Спектр патогенности в естественных условиях. В конце 1990 г с симптомами исто-
щения погибло более 1000 шведских лосей Alces alces L. Из лейкоцитов больных животных
был изолирован ретровирус, относящийся к подсемейству Oncovirinae. Серологическая им-
мунная реакция ( по данным ИФА) была слабой при одновременной высокой активности
обратной транскриптазы в сыворотке (85). В естественных условиях ВБЛ распространен
среди КРС, овец, зебу и буйволов. Вирус передается живыми клетками, содержащими про-
вирусную ДНК: трансплацентарно, с молозивом или молоком, но чаще всего при тесном
контакте инфицированных и здоровых животных или посредством контаминированных
кровью игл, инструментов для татуировали, обрезки рогов и копыт, кастрации, влагалищ-
ных зеркал и тому подобным. При определенных климатических условиях не исключается
возможность передачи возбудителя кровососущими насекомыми (6).
394
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на лейкоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических при-
знаков, патанатомических изменений и результатов лабораторных исследований, которые
включают гематологические и гистологические, а также серологические исследования.
Все формы лейкоза характеризуются увеличением в различной степени лимфоузлов.
При лимфолейкозе они увеличены равномерно, не сращены с окружающими тканями, кап-
сула снимается легко, на разрезе узлы серо-белого цвета, сочные и саловидные. Лимфоузлы
при лимфогранулематозе, лимфосаркоме и гистиоцитарной саркоме бугристые, капсула
сращена с паренхимой, на разрезе часто обнаруживают кровоизлияния и некрозы; в органах
брюшной, тазовой полостей, на серозных оболочках отмечают опухолевые разрастания уз-
лов в виде конгломератов серо-белого, желто-серого цвета. Селезенка при лимфоидном,
слабодифференцированном и миелоидном лейкозах увеличена. При первых 2-х формах она
буро-красного цвета с четко выраженной красной и белой пульпой за счет гиперплазии фол-
ликулов. В более поздней стадии болезни граница между белой и красной пульпой стерта.
При миелоидном лейкозе селезенка красно-малинового цвета, фолликулы плохо заметны, а
в отдельных участках отсутствуют, ткань рыхлой консистенции с кровоизлияниями. При
лимфоретикулосаркоме селезенка не увеличена. При всех формах лейкоза отмечают очаго-
вые или диффузные разрастания серо-белого или серо-розового цвета в печени, почках,
толще сердечной мышцы, органах пищеварения, матке, скелетных мышцах, диафрагме и
других органах.
Взятие и подготовка материала. Для гематологического исследования кровь берут из
яремной вены в пробирки с антикоагулянтом - 10 %-ном р-ром динатриевой соли этилен-
диамингетрауксусной кислоты (ЭДТА, трилон В) из расчета 0,02 мл р-ра на 1 мл крови. Не
разрешается брать кровь от животных за 15 дней до отела и 15 дней после него. Для сероло-
гического исследования кровь берут от животных в возрасте 6 мес и старше. В лабораторию
в термосе со льдом направляют 5-6 мл сыворотки. Для гистологического исследования ку-
сочки пораженных органов (селезенки, лимфоузлов, грудной кости, печени, почек, легких,
сердца и правого ушка сердечной мышцы, стенки сычуга, матки и скелетных мышц) посы-
лают в свежем виде в термосе со льдом или в 10%-ном р-ре формалина.
Индикация и идентификация вируса
Для определения вируса в различных материалах используют методы, позволяющие
выявлять инфекционный вирус или вирусные АГ. Являясь типичным ретровирусом, ВЛКРС
находится у инфицированных животных в форме провирусной ДНК, которую можно вы-
явить в лимфоцитах крови с помощью ПЦР или методами гибридизации нуклеиновых ки-
слот. При культивировании инфицированных клеток вирус можно выявить с помощью элек-
тронного микроскопа или по образованию синцития в соответствующих индикаторных
культурах (34).
Электронно-микроскопический метод. Позволяет -выявлять вирусные частицы в крат-
косрочных культурах лейкоцитов крови животных, инфицированных ВЛКРС, и в монослой-
ных культурах клеток, сокультивированных с инфицированными лимфоцитами. По некото-
рым данным, лейкоцитарные культуры (лейкоциты крови больных коров) через 48-72 ч
представлены разнообразными клетками, среди которых находили лимфоциты и лимфобла-
сты, продуцирующие вирусные частицы типа С. Зрелые вирионы имели улыраструктуру,
типичную для онковируса типа С. Вирусные частицы находили, в основном, в межклеточ-
ных пространствах и на внешней мембране лимфоидных клеток. Методом ЭМ у больных
лейкозом животных обнаруживают в лимфоцитах ядерные “карманы” в виде неправильного
кольца и петли. Как правило, они обладают связью с оболочкой ядра и содержат цитоплаз-
матическое вещество клетки. Иногда центральная часть их заполнена электроннолотными
гранулами диаметром 4 нм, расположенными группами и напоминающими гранулы глико-
395
ГлаваХТ. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
гена. Ядерные “карманы” отсутствуют в дифференцированных гранулоцитах, моноцитах и
плазматических клетках; в одном лимфоците их обнаруживают 1-5 и более.
Тест синцитиеобразования. ТСО применяется для выявления инфекционного вируса в
различных материалах и основан на способности ВЛКРС образовывать синцитии в некото-
рых нетрансформироваиных монослойных культурах клеток и в трансформированных пере-
виваемых культурах клеток СС81. Метод предложен для титрования ВЛКРС с использова-
нием кошачьей линии клеток S4!/. Показано, что инокуляция клеток вирусом лейкемии КРС
приводит к образованию крупных многоядерных сиицитиев, которые выявляются при ок-
рашивании монослоя. Метод можно использовать для титрования вируса, так как имеется
прямо пропорциональная зависимость между уменьшением количества сиицитиев и разве-
дением вирусной суспензии. Метод является воспроизводимым, специфическим и чувстви-
тельным. Рекомендуют микромодификацию метода количественной титрации инфекционно-
го ВЛКРС, основанную на определении количества сиицитиев в культуре эмбриональных
клеток теленка, культивированной с лимфоцитами, зараженными вирусами лейкемии КРС,
или в присутствии вируса. Отмечена линейная зависимость между числом инокулированных
в культуре клеток зараженных вирусом лейкоцитов и количеством индуцированных синци-
тиев. При сравнении чувствительности макро- и микрометода титрации число сиицитиев в
микрокультуре статистически не отличалось от числа сиицитиев, индуцированных в макро-
культуре. Метод сокультивирования используется для выявления инфекционного ВЛКРС.
Суть его состоит в сокультивировании лимфоцитов крови и чувствительных клеток моно-
слойной культуры с последующим выявлением АГ ВЛКРС с помощью ТСО, РИД или ИФА.
РДП (РИД). Эго относительно чувствительный тест для выявления гликопротеина
ВЛКРС. Позволяет выявлять гликопротеин вируса в концентрации 0,4 мкг/мл.
Биопроба. Инфицированных животных можно выявлять путем постановки биопробы на
овцах. С этой целью овцам обычно внутрибрюшинно вводят цельную кровь испытуемого
животного. При наличии в пробе крови вируса у овцы развивается инфекция, сопровож-
дающаяся образованием вирусспецифических АТ. АТ у зараженных овец выявляют в РДП с
гликопротеиниым АГ через 3-6 нед. (6).
Реакция бласттрансформации. Хронический лимфоидный лейкоз КРС характеризует-
ся слабой реакцией бласттрансформации (РБТЛ). Поэтому у животных, подозрительных по
заболеванию лейкозом по показателям лейкоцитов крови, проводят РБТЛ в культуре лим-
фоцитов крови. Показатель РБТЛ выражает процент трансформировавшихся лимфоцитов
(переходные клетки, бласты, митозы) и определяется после подсчета не менее 1000 клеток
культуры. У клинически здоровых и с нормальной гемограммой коров, по данным боль-
шинства исследователей, он составляет в среднем 60% (40-90%); у больных лимфолейкозом
РБТЛ значительно снижена уже в субклинической стадии. При повышенном содержании в
крови общего количества лейкоцитов исследуют животных в РБТЛ. Диагноз на лимфолей-
коз считают подтвержденным при показателе РБТЛ не выше 35%. Если он выше, то поста-
новку реакции повторяют с интервалом 3 мес у тех животных, у которых нарастают гемато-
логические изменения.
Гистологические исследования. Срезы готовят после парафиновой или целллоидино-
вой проводки и окрашивают гематоксилин-эозином. При лимфоидном лейкозе наблюдают в
селезенке и лимфоузлах стирание рисунка за счет диффузной инфильтрации клеток лимфо-
идного ряда, среди которых, в основном выявляют зрелые лимфоциты, в меньшем количе-
стве обнаруживают пролимфоциты, лимфобласты. В костном мозге строма сохранена, вы-
является значительное истончение и рассасывание балок, скопления лимфоцитов могут рас-
полагаться в виде очагов или диффузно, заполняя все костно-мозговые пространства
(лимфоидная метаплазия); в почках, печени, сердце, сычуге и других органах обычно выяв-
396
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ляют скопления лимфоцитов в просветах капилляров и инфильтрации лимфоидными клет-
ками интерстициальной ткани.
При недифференцированном и слабо дифференцированном лейкозе (гемо-цитоблазтоз)
в костном мозге, селезенке, лимфоузлах и других органах наблюдают очаговые и диффуз-
ные пролифераты, клеточный состав которых представлен недифференцированными или
слабо дифференцированными клетками типа гемоцитобластов (родоначальная клетка). При
миелоидном лейкозе (встречается редко) обнаруживают в селезенке незрелые элементы гра-
нулоцитарного ряда, мегакариоциты, клетки типа гемоцитобластов, фрагментацию и распад
аргирофильных волокон, в костном мозге - скопления зрелых и незрелых клеток гранулоци-
тарного ряда; в лимфоузлах, печени, почках, легких и других органах - очаговые диффуз-
ные разрастания миелоидных элементов; при лимфосаркоме (слабо дифференцированная
лимфобластическая, лимфоцитарная, гистоцитарная) в лимфоузлах, органах пищеварения,
воспроизведения, сердечной, скелетных мышцах, других органах и тканях отмечают разрас-
тание опухолей из недифференцированных или слабо дифференцированных клеток лимфо-
идного типа. Селезенка и костный мозг не изменены.
При лимфогранулематозе выявляют гиперплазию лимфоидных клеток или полиморф-
ноклеточную пролиферацию, склеротические изменения и некрозы в лимфоузлах, селезенке,
печени и других органах; среди полиморфных клеток выявляют многоядерные гигантские
клетки типа Березовского - Штернберга, плазматические клетки, эозинофилы и нейтрофилы
различной зрелости , а также фибробласты. Для установления причин несоответствия при-
жизненных и посмертных диагнозов на лейкоз патологический процесс при этой болезни
был разделен на 5 стадий: скрытая (инкубационная), предлейкозное состояние, начальная,
развернутая и конечная. Диагноз по картине крови при гистологическом исследовании не
подтверждался лишь на ранних стадиях развития процесса, что не отрицало возможности
нарушения лимфопоэза, при котором отмечалась усиленная пролиферация лимфоцитов и
наводнение ими периферической крови. Отсутствие малигнизированных, лейкемических
лимфоцитов на ранних стадиях болезни подтверждалось не только цитоморфологическими,
но и физико-химическими методами исследований. Изучение тонких морфологических осо-
бенностей клеточных элементов крови и кроветорных органов позволило разделить все
клетки на 4 группы, из которых патогномоничное значение имеют клетки 3-й группы - мо-
лодые и малодифференцированные клетки гемопоэза; и клетки 4-ой группы - атипичные,
малигнизированные клетки, отражающие опухолевый процесс.
Комплексные методы исследования позволили дифференцировать различные формы
гемобластов у КРС. К гемобластозам с системным поражением органов кроветворения от-
несены лейкозы: лимфоидный, недифференцированный (гемоцитобластоз), гистиоцитарный
(системный ретикулез) и миелоидный. К опухолевым гемобластозам (гематосаркомы) авто-
ры относят: лимфосаркому, гистиоцитарную саркому или лимфогранулематоз (13).
Гематологический метод. Основан на обнаружении в периферической крови повы-
шенного количества лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, и слабодифференцирован-
ных клеток (родоначальных, пролимфоцитов, лимфобластов). Количество лейкоцитов под-
считывают с помощью электронного счетчика частиц или в камере Горяева и выводят лей-
коцитарную формулу. Животных, подозрительных по заболеванию лейкозом, подтвергают
дополнительным гематологическим исследоаниям с интервалом 2-3 мес до получения 2-х
подряд качественно одинаковых результатов, по которым их признают здоровыми или
больными лейкозом (табл. XI.2)
Следует иметь в виду, что некоторые острые и хронические болезни КРС (перикардиты,
ретикулиты, гепатохолангиты, циррроз печени, туберкулез, бруцеллез и др.) могут сопрово-
ждаться лейкоцитозом. При этом в отличие от лейкоза увеличение количества лейкоцитов
крови происходит, в основном, за счет нейтрофилов, эозинофилов или моноцитов.
Эти изменения крови имеют временный характер, их дифференцируют от лейкоза по-
397
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Таблица XI.2. Число лейкоцитов и лимфоцитов в 1 мм3 крови здорового,
подозрительного по заболеванию и больного лейкозом КРС
Возраст жи- вотных (лет) Число лейкоци- тов у здоровых Абсолютное число лимфо- цитов у подозрительных Абсолютное число лимфоцитов у больных
От 2 до 4 До 11000 От 8000 до 10000 Свыше 10000
От 4 до 6 До 10000 От 6500 до 9000 Свыше 9000
Старше 6 До 9000 От 5500 до 8000 Свыше 8000
вторными гематологическими исследованиями. Разработана методика выделения мононук-
леарных клеток из периферической крови инфицированного КРС и их культивирования для
репродукции инфекционного вируса лейкоза. Метод позволяет получать максимальный сбор
инфицированных вирусом лейкоза лимфоцитов. Из 10 мл цельной крови получают пример-
но 107 мононуклеарных клеток. Чтобы максимизировать продукцию вирионов и вирусных
АГ, к культуре лимфоцитов добавляют Кон-А в конечной концентрации 5 мг/мл (22).
Конкурентный радиоиммуноанализ (РИА). Наиболее чувствительный метод выявле-
ния р24-АГ в краткосрочных культурах лимфоцитов крови инфицированных животных.
Метод заключается в том, что экстракт, приготовленный из 48-ч культуры лимфоцитов кро-
ви, исследуется на присутствие АГ р24 путем определения его способности предотвращать
связывание меченого изотопом р24 со специфическими АТ. Для диагностики инфекции
ВЛКРС у телят младше 6-мес возраста, которым выпаивали молозиво инфицированных ма-
терей, а также у взрослых животных, иммунизированных убитым вирусом или вирусными
АГ, необходимо использовать методы, основанные на прямом выявлении инфекционного
вируса или вирусных АГ в культурах лимфоцитов крови исследуемых животных.
ПЦР. Дает возможность обнаруживать провирусную ДНК через 2 нед после заражения
животных (16). Для амплификации в ПЦР использовали пары праймеров, соответствующих
определенным участкам генов gog 24, env-gp5 или pol вируса лейкоза. Метод позволяет
идентифицировать одну копию генома вируса лейкоза на 100000 клеток крови (23, 24).
Сконцентрированные также праймеры для амплификации специфических для вируса лейко-
за КРС последовательностей генов pol и рХ. С помощью этого набора праймеров удавалось
амплифицировать и выявлять 10 копий ДНК вируса в присутствии в образце 1 мкг хромо-
сомной ДНК (30). Доказана возможность использования нерадиоактивных зондов для выяв-
ления вируса лейкоза КРС в лимфоцитах периферической крови и клетках лимфосаркомы.
Фрагменты провирусной ДНК метят биотином (26). Разработан метод ПЦР с последующей
нерадиоактивной блот-гибридизацией для тестирования провируса лейкоза КРС в исследуе-
мом материале (19).
Серологическая идентификация
ИФ. Используют прямой и непрямой варианты при исследовании мазков крови и изме-
ненных органов, краткосрочных и перевиваемых культур крови и тканей. Непрямой вариант
испытывали на концентрате с 80% живых лейкоцитов. В качестве АТ применяли сыворотку
больной лейкозом коровы и меченную ФИТЦ кроличью сыворотку против глобулинов быка.
При микроскопии препаратов отмечена флюоресценция на поверхности лимфоцитов в виде
яркого светящегося кольца или кольца из пунктиров. В препаратах из лейкоцитов здоровых
животных подобного свечения не наблюдается или оно слабо выражено в некоторых клет-
ках. Для объективной оценки препаратов рассчитывается индекс флюоресценции (ИФ) по
формуле ИФ = (А - В) : А, где А - процент несветящихся клеток в контроле; В - процент не-
светящихся клеток в опыте. Положительной считается реакция, если ИФ свыше 0,2 ; сомни-
тельной - 0,11-0,2; отрицательной - ниже 0,1.
398
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. У животных, зараженных ВЛ
КРС, вырабатываются АТ к вирусным АГ, которые выявляются с помощью серологических
реакций. Характерной особенностью инфекции ВЛКРС у КРС является, как правило, по-
жизненная персистенция вируса и вирусспецифических АТ у больного животного. Поэтому
серологические методы обнаружения специфических сывороточных АТ являются наиболее
практичными, экономичными и широко используемыми в диагностике онковирусной ин-
фекции у КРС. Серологическими методами ВЛКРС можно выявлять у животных старше 6
мес, так как у телят, выпаиваемых молозивом и молоком инфицированных ВЛКРС матерей,
появляются пассивно приобретенные материнские АТ, которые могут персистировать до 6-
мес возраста. У зараженных животных в крови циркулируют АТ к нескольким структурным
белкам вируса. Однако диагностическое значение имеют АТ против gp51 и р24 ВБЛ (37).
Количественные соотношения АТ анти-р24 и aHTH-gp51 могут коррелировать со стадией
инфекционного процесса (22, 37), но при этом, АТ к gp51 появляются раньше и содержатся
в более высоком титре, чем антитела к р24 и, следовательно, серологические реакции, на-
правленные на выявление aimi-gp51 - АТ по со своей чувствительности будут превосходить
аналоги, в которых используется в качестве АГ р24 (13,14,38).
В научно-исследовательских лабораториях для обнаружения специфических АТ исполь-
зуются PH, подавления раннего и позднего поликариоцитоза, нейтрализации псевдотипов и
радиоиммуноанализ (РИА) (17, 36, 60). Однако, для эпизоотологического обследования,
контроля и борьбы с ВБЛ-инфекцией широко применяют РИД и ИФА, для постановки кото-
рых выпускаются соответствующие коммерческие диагностические наборы. Все вышепере-
численные методы предназначены для выявления АТ в индивидуальных пробах сыворотки.
Для обнаружения АТ в низких титрах, например, в индивидуальных пробах молока или в
сывороточных пулах, или в образцах, полученных из молочного танка, требуется высокая
чувствительность РИА или ИФА (17, 36, 63). Разработан ряд серологических реакций для
диагностики инфекции, таких как РИФ, РСК, РДП в геле, реакция агглютинации латекса
(РАЛ), ELISA РИГА и реакция нейтрализации псевдотипа (РНПТ).
РДП. Благодаря простоте, специфичности и достаточно высокой эффективности эта ре-
акция получила наибольшее применение с гликопротеинным АГ ВЛКРС. Из вируса, осаж-
денного методом ультрацентрифугирования культуральной жидкости краткосрочных куль-
тур лейкоцитов лейкозных животных, очищенного в градиенте плотности сахарозы и обра-
ботанного эфиром, получают АГ, который используют в РДП. С помощью этого АГ в сыво-
ротках крови инфицированных ВЛКРС животных выявляют ПА к внутреннему полипептиду
вируса р24. РДП с гликопротеидным АГ - более чувствительный метод выявления инфици-
рованных ВЛКРС животных, чем РДП с полипептидным АГ. РДП (РИД) в геле агара, на-
правленная на выявление aimi-gp51 АТ, используется в качестве основного диагностическо-
го теста, регламентирующего международную и внутреннюю торговлю племенными живот-
ными, спермой и эмбрионами. При первичном обследовании сывороток крови одной РИД
считается достаточно для объявления стада свободным от ВБЛ-инфекции (14). РИД приме-
няется в системе противолейкозных мероприятий в неблагополучных хозяйствах (1,39).
Специфические ПА к ВЛКРС появляются через 2 мес после инфицирования и сохраня-
ются пожизненно. Для постановки РДП используют диагностический набор, в состав кото-
рого обязательно должны входить специфический АГ ВЛКРС, специфическая положитель-
ная сыворотка крови КРС. Реакцию ставят макро- и микрометодами. Для изготовления АГ
используют клеточную линию FLK-BLV. Из культуральной жидкости вирусный АГ выде-
ляют методом преципитации сульфатом аммония или полиэтиленгликолем. Но наиболее
технологичным методом выделения вирусного АГ считают ультрафильтрацию на полупро-
ницаемых мембранах. На результат реакции иммунодиффузии влияют многие факторы: ка-
чество АГ и контрольных сывороток, количественные соотношения АГ и АТ, качество ага-
399
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
pa, pH и ионная сила буфера, температура, диаметр лунок и расстояние между ними. Для
постановки РИД выпускают диагностические наборы: Государственная Курская биофабрика
(Россия); PITMAN-MOORE INC., Вашингтон (США), BEHRINGWERKE AG., Марбург
(ФРГ), MERIEUX6 Лион (Франция), BIO-VETA NITRAA (Словакия) и др.
Перечисленные диагностикумы представляют собой наборы, состоящие из 2-8 препара-
тов. Обязательными компонентами каждого набора являются препараты тест-системы: ви-
русный АГ и антисыворотка, которые в результате специфического взаимодействия АГ
(gp51 ВБЛ) и АТ в процессе диффузии формируют в геле агара нерастворимый комплекс в
виде опалесцирующей полосы. Дополнительно наборы могут комплектоваться сухой соле-
вой смесью агара, стерильным разбавителем для вирусного АГ и контрольными сыворотка-
ми, которые поставляются в жидком или лиофилизированном виде. В последнем случае на-
боры комплектуют соответствующими разбавителями контрольных сывороток. Наборы рас-
считаны на 90-500 исследований и содержат 3-5 мл вирусного АГ.
РИД проходит в 0,8-1,0% геле агара, который готовят на трис-HCl или боратном буфе-
рах в диапазоне pH 7,2-8,6, содержащим 8-8,5% NaCl. Методика постановки реакции оди-
наковая для всех диагностикумов и предусматривает заполнение лунок АГ, антисывороткой
и испытуемыми сыворотками по схеме 1:2:4 или 1:3:3. Принято 2 стандарта на диаметр лу-
нок и расстояние между ними: 1 вариант в странах ЕЭС, тогда как в США, Канаде и стра-
нах СНГ приняты параметры, соответствующие второму варианту (табл Х1.3.),
Таблица XI.3. Параметры лунок, рекомендуемые для постановки РИД
Показатели 1 вар 2 вар
Диаметр центральной лунки для антигена мм 4 7
Диаметр периферических лунок для сыворотки мм 6 7
Расстояние между центральной и периферической лунками мм 3 3
Минимальные необходимые требования, которым должен удовлетворять диагностиче-
ский набор, заключаются в следующем: АГ должен содержать оболочечный гликопротеин
ВБЛ, стандартизованный по референтной сыворотке Е-1; референтная сыворотка Е-4, раз-
веденная отрицательной сывороткой в соотношении 1:10, должна быть выявлена как поло-
жительная без повторной постановки реакции или предварительной концентрации. Рефе-
рентные сыворотки Е-1 и Е-4 изготовлены в Национальной ветеринарной лаборатории Да-
нии (P.O. Box 373, DK-1503 Copengagen) и предназначены для стандартизации всех диагно-
стических наборов для постановки РИД и ИФА (6),
Реакцию учитывают через 48 ч и при следующих показаниях контролей: наличие четкой
контрольной полосы преципитации между АГ и специфической положительной сывороткой
и отсутствие таковой с отрицательной контрольной сывороткой. Животных, сыворотки кро-
ви которых положительно прореагировали в РДП, считают зараженными ВЛКРС.
Описаны модификация метода иммунодиффузии - усиленная танином непрямая двойная
иммунодифузия в геле (НИД-Р) й её применение для выявления АТ и АГ ВЛКРС (31). Со-
временная диагностика энзоотического лейкоза КРС основана большей частью на тестах
иммунодифузии и ELISA. При использовании РИД необходимо придерживаться рекоменда-
ций производителя очень дорогого АГ. В целях снижения затрат при сохранении надежно-
сти результатов югославские исследователи (19) уменьшили размер отверстий в розетке и
слой агара в чашке Петри, сохраняя прежнюю чувствительность теста.
Предложен метод очистки вируса лейкоза КРС в градиенте плотности перколла. Метод
рекомендован для получения очищенного вируса и специфического АГ (20, 21). Молдав-
скими исследователями показано значительное преимущество РИД при исследовании моло-
400
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
зива: титр АТ был в 8-32 раза выше, чем в пробах сыворотки крови; исследовать необходи-
мо первые порции молозива (29). Аналогичные данные получены сотрудниками ВИЭВ.
Титр AT Kgp51 и р24 ВЛ КРС сразу после отела был наивысшим - 1:2187-1:59049 в ИФА и
1:16-1:512 в РДП. Через 1 сут титр АТ составлял 25% от исходного (10).
РАЛ. В качестве теста для прижизненной диагностики лейкоза КРС можно использо-
вать иммунохимическую реакцию агглютинации с латексом в соответствии с временными
методическими рекомендациями. Животные, сыворотки крови которых дали положитель-
ную реакцию агглютинации с латексом, подлежат тщательному обследованию на лейкоз
другими методами. Данная реакция перспективна для прижизненной диагностики лейкозов.
Испытание этой реакции показало в 67% случаев совпадение результатов с гематологиче-
скими и около 90% с гистологическими методами диагностики гемобластозов КРС.
ИФ. Менее широко применяют для обнаружения АТ в сыворотках крови инфицирован-
ных животных. При этом используют в качестве клеток-мишеней перевиваемые культуры,
хронически инфицированные ВЛКРС.
РИГА. Является чувствительным методом обнаружения АТ в сыворотке крови и моло-
ке. Рекомендуют использовать при экспертизе и санитарной оценке молока. Наибольший
процент совпадений гематологических показателей с результатами серологических исследо-
ваний был отмечен в РИГА.
ELISA. Широко применяют в США, Бельгии с использованием монАТ для широко-
масштабного выявления энзоотического лейкоза в стадах КРС. Чувствительность его выше,
чем РДП. Метод ELISA при диагностике лейкоза КРС может существенно повысить чувст-
вительность серодиагностики по сравнению с РДП. Он удобен для систематического кон-
троля молока коров благополучных хозяйств.
ELISA с монАТ ставят с пулом сывороток крови, объединенных от животных одного
стада. Предложено выявлять инфицированность ВЛКРС по наличию АТ в молозиве коров
ELISA. Все образцы молока, взятые от больных коров, позитивных по АТ к вирусу в сыво-
ротках, оказались положительными. Во ВНИИВиМ получены 6 гибридом, секретирующих
монАТ к ВЛКРС. На основе монАТ к gp51 предложен “сэндвич” вариант ИФА для выявле-
ния вирусного АГ. Установлено, что структура и доступность антигенных детерминант
варьирует в разных системах титрования. Внесение радиоактивной метки может изменять
конфигурацию АГ сайтов, что сказывается на результатах исследования сывороток. Анти
ВЛ КРС АТ конкурировали со специфическим пероксидазным конъюгатом на основе мо-
нАТ за связывание с gp51 (28а).
Первым этапом в постановке “классического “ варианта ИФА для выявления АТ против
ВЛКРС является непосредственное покрытие лунок микропанелей вирусным АГ. При этом
получают большой процент ложноположительных результатов из-за неспецифического
взаимодействия невирусных компонентов АГ с испытуемыми сыворотками. Более того, ис-
пользование очищенных вирусных белков в качестве АГ экономически неоправданно и не
позволяет получать стандартный препарат, что сказывается на воспроизводимости результа-
тов ИФА. Поэтому в настоящее время почти все наборы для постановки ИФА изготавлива-
ются с использованием захвата АГ АТ, сорбированными на стенки лунок микропанелей.
Существующие варианты ИФА включают 5 принципиальных этапов постановки реакции.
Этап I. Реагенты для захвата АГ: а).монАТ против gp51; б).монАТ против р24;
в).Поликлональные AT (gp51+p24) КРС. Этап 2. Антиген: а) надосадочная жидкость после
культивирования клеток FLK-BLV; б) культуральная жидкость, содержащая продукты генов
env или gag ВЛКРС, экспрессируемые рекомбинантными векторами. Этап 3. Испытуемые
сыворотки. Этап 4. Реагенты для обнаружения иммунного комплекса.
Непрямые варианты ИФА: монАТ против бычьего IgG; полиАТ против бычьего IgG.
26 Зак. № 171
401
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Конкурентный или блокирующий варианты ИФА: а) монАТ против gp51
(направленные против других эпитопов нежели использованных на этапе 1а); б) Бычьи по-
ликлональные АТ (такие, как на этапе 1в)
Этап 5. Цветная индикация. Реагенты для индикации иммунного комплекса (этап 4)
можно метить биотином или ферментами, чаще используют пероксидазу хрена. При поста-
новке ИФА каждая микропанель должна содержать лунки, заполненные положительной и
отрицательной контрольными сыворотками.
ИФА позволяет выявлять АТ в титрах в 10-100 раз меньших, чем обнаруживает РИД.
Все коммерческие наборы ИФА должны быть стандартизированы по референтной сыворот-
ке Е-4. Причем, процедура стандартизации предусматривает 3 возможных варианта исполь-
зования наборов ИФА для исследования: 1) индивидуальных проб сыворотки; 2) индивиду-
альных проб молока; 3) пулов сыворотки и молока.
Поскольку в молоке АТ к ВЛКРС в 25 раз больше, чем в сыворотке крови, модифици-
рованный ELISA должен обладать высокой чувствительностью (18). При диагностике лей-
коза КРС качество используемых диагностикумов имеет первостепенное значение. Наиболее
пригодным для ИФА в качестве АГ являются препараты вируса, полученные 2-кратным вы-
сокоскоростным центрифугированием и синтетический пептид. В Швеции разработан
ELISA для исследования молока и сывороток крови. В Бельгии рекомендован конкурент-
ный ELISA с использованием монАТ и меченного пероксидазой конъюгата aimi-gp51 (27).
МонАТ Д9 и F11 против лимфоцитов больных лейкозом животных связываются с АГ лим-
фоцитов крови больного КРС, «не распознают» АГ, ассоциированные с лейкозом (3). ELISA
с использованием монАТ, превосходит непрямой тест ELISA (17).
Параллельно с ИФА АТ, определяли РИД и электрофореза в полиакриламидном геле.
Чувствительность ИФА, испытанного в 5 лабораториях Германии, составляла в среднем
97,6%, что в 4 раза выше РИД. Специфичность ИФА равнялась в среднем 98,1 % (25). При
использовании АГ из культуральных жидкостей клеток почки эмбриона ягнят, персистентно
инфицированных ВЛКРС в положительных сыворотках с помощью иммуноблотинга, обна-
руживали АТ к р24, р15, р12, plO, gp30, и gp51. В иммуноблотинге оказались активными
монАТ к р24 и gp51. Данный метод оказался более чувствительным, чем иммунодиффузия в
агаровом геле и ИФА (15). В ИФА возможно использование синтетических пептидов -
фрагментов структурного гликопротеина gp51, синтезированных во ВНИИЗЖ (36).
Аллергическая реакция. Разработан аллерген для диагностики лейкоза у животных.
Для проведения аллергических реакций наиболее подходящее место хвостовая складка у
овец и КРС и дорсальная поверхность уха у свиней.
Дифференциальный диагноз. Лейкоз необходимо отличать от актиномикоза, туберку-
леза, паратуберкулеза и бруцеллеза. При актиномикозе поражаются, главным образом,
лимфоузлы головы и грудной области (подчелюстные, заглоточные, околоушные и др.). Они
плотной консистенции, с инкапсулированными абсцессами. В центре актиномикозного узла
(гранулемы) гистологически обнаруживают друзы гриба. При туберкулезе чаще поражения
в виде узелков, имеющих специфическое гистологическое строение, находятся в легких,
кишечнике. Для паратуберкулеза характерно наличие изменений в кишечнике и брыжееч-
ных лимфоузлах. В кишечнике развиваются продуктивное воспаление и очаговые инфильт-
раты из эпителиоидных клеток, в результате чего стенка утолщается в 5 и более раз. В лим-
фоузлах отмечают обширные скопления из эпителиоидных элементов с наличием среди них
гистиоцитов и клеток типа Лангерганса. Специфическим методом окраски выявляют бакте-
рии паратуберкулеза, локализующиеся в эпителиоидных и гигантских клетках. Бруцеллез
диагностируют с помощью РСК, РА и аллергической пробы.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
402
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Проблема специфической профилактики лейкоза КРС ие решена, хотя исследования в
этой области продолжаются и по сегодняшний день. Против лейкоза КРС получена реком-
бинантная вирусвакцина, содержащая генетическую информацию, кодирующую gp51 и
gp3O поверхностного АГ (28). Также показана возможность вакцинации КРС против лейко-
за гетерологичными клетками млекопитающих, способными продуцировать оболочечные
АГ ВЛКРС и его внутренний белок р24. Так, штамм клеток овец NP-2 способен продуциро-
вать продукты гена env и вызывать АТ образование против этих белков в организме крыс и
КРС. Вакцина из клеток NP-2 защищала бычков от естественного инфицирования ВЛ (10).
Опубликованы результаты исследований по получению и использованию рекомбинант-
ных вирусов осповакцины, включающих либо полный ген белка оболочки (env), либо толь-
ко фрагмент гена env с последовательностью, кодирующей гликопротеин gp51 env и часть
gp30 ВЛКРС. Вакцинация овец рекомбинантными BLV-вакцинами, содержащими полный
ген env, защищает овец от инфекции ВЛКРС, свидетельством чего служит отсутствие перси-
стенции высоких титров aHTH-gp51-AT по сравнению с невакцинированными ВЛ инфициро-
ванными животными, ярковыраженная пролиферативная реакция клеток СД-4 вакциниро-
ванных овец на специфические синтетические пептиды gp51 ВЛКРС и отсутствие провируса
ВЛКРС у вакцинированных животных спустя 4 мес после заражения диким вирусом. У не-
вакцинированных овец с помощью ПЦР вирус обнаруживался в течение 16 мес наблюдения.
Высказывается предположение о существенной роли клеточных иммунных реакций в разви-
тии защитного иммунитета против ВЛКРС. Наличие протяженных высококонсервативных
аминокислотных последоватльностей в генах env и pol, в вирусных изолятах из разных
стран вселяет надежду на получение вакцин на основе пептидов (64). Препарат, содержащий
gp51 р24, вызывает устойчивость КРС к заражению вирусом лейкоза.
Оценивали перспективность для КРС 2-х вакцин, приготовленных из вирусного мате-
риала, полученного на клетках LK-15 и клетках легкого летучей мыши. Материал инакти-
вировали 0,1%-иым тритоном XI00 или 0,1%-ным формальдегидом. Животных вакциниро-
вали дважды с 2-нед интервалом и заражали через 4 нед после последней вакцинации. Жи-
вотные, у которых после вакцинации обнаруживались АТ в РДП к вирусным гликопротеи-
нам в титрах выше 1:16, оказались устойчивыми к заражению 100 мл крови коровы, перси-
стентно инфицированной вирусом ВЛКРС. Повышение инфицирующей дозы до 500 мл по-
нижало протективный эффект (63).
Для изготовления вакцины использовали стабильную линию клеток FLK, персистентно
инфицированную ВЛКРС. Материал инактивировали формальдегидом или глютаральдеги-
дом и добавляли адъювант. Только препарат, инактивированный формальдегидом, обладал
протективным действием. Вирус, инактивированный 0,05%-ным АЭИ или 0,02%-ным ДЭИ
в течение 8 ч при 37°С, сохранял активность вирусного оболочечного гликопротеина и терял
инфекционность (синтициеобразующую способность). При проверке АГ препаратов, приго-
товленных из ВЛКРС, наиболее активным был препарат «ОВБ», который у привитых телят
индуцировал образование АТ к гликопротеиновому и внутреннему АГ вируса (47).
В РФ созданы конструкции на основе вируса осповакцины (ВОВ), несущие ген env
ВЛКРС (5, 42). Основная цель этой работы - создание живой рекомбинантной вакцины про-
тив ВЛКРС (2). В лабораторных условиях отобраны штаммы, обладающие наиболее выра-
женными АГ- и иммуногенными свойствами. Рекомбинатный белок, полученный в резуль-
тате культивирования поксвирусного вектора в культуре клеток, иммунологически иденти-
чен gp51 ВЛКРС (4).
Для изготовления вакцины против ВЛ КРС использовали рекомбинантный ВОВ на ос-
нове uit.WR, содержащего экспрессирующие нуклеотидные последовательсноти gp51-gp30
ВЛКРС. На протяжении 3 лет вакцину испытывали в производственных условиях в хозяйст-
ве с уровнем инфицированности 30-40%. В результате установлено, что относительное чис-
26*
403
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ло сероположительных животных из числа вакцинированных за время наблюдения не уве-
личивается, тогда как среди невакцинированных оно постоянно возрастает. Более того, все
серопозитивные животные из вакцинированной группы имели нормальные гематологиче-
ские показатели, тогда как у контрольных обнаружены изменения крови, характерные для
гемобластозов (9а, 118). Продолжаются испытания в полевых условиях вакцинного препа-
рата, полученного на основе одного из рекомбинатных штаммов (1). Разные штаммы ВОВ
на основе вектора WR вызывали образование aHTH-gp51 или после первичной иммунизации,
или только после ревакцинации. Рекомбинатный ВОВ шт. WR-BLV-4KTk+ реизолирован
только из образцов кожи, взятых с места введения на 3-16-й день. Вирус не выделялся из
плазмы крови, тканевых гомогенатов сердца, легких, почек, печени, селезенки, лимфоузлов,
головного мозга, скелетных мышц, яичников, что свидетельствует о его безопасности (26). С
обнадеживающим результатом испытывается и инактивированная вакцина против ВЛКРС
(23). По-видимому, в профилактике и борьбе с лейкозом КРС найдут применение различные
методы коррекции иммунологической недостаточности, проявляющейся синтезом АТ с низ-
ким авидитетом (10,11).
МЕРЫ БОРЬБЫ С ЛЕЙКОЗОМ
После того как была доказана вирусная этиология лейкоза, разработаны методы диагно-
стики онкорнавирусной инфекции, появились новые подходы к оздоровлению животновод-
ства от лейкоза, основанные на освобождении популяции скота от животных, инфицирован-
ных ВЛКРС. В зависимости от эпизоотической ситуации (процента инфицированных жи-
вотных в стаде) и хозяйственных возможностей оздоровление стада от лейкоза можно осу-
ществлять двумя путями.
При сравнительно низком проценте инфицированное™ (до 20) экономически обосно-
ванным может быть радикальный способ оздоровления стада, основанный на немедленном
выводе из стада всех инфицированных животных (сдача на мясокомбинат) и замене их здо-
ровыми животными. Однако в неблагополучных по лейкозу хозяйствах уровень инфициро-
ванное™, как правило, значительно превышает 20%. В таких хозяйствах экономически це-
лесообразно проводить поэтапное оздоровление стада, принцип которого основан на сероло-
гической диагностике инфицированных ВЛ (с этой целью используют РИД с гликопротеин-
ным АГ ВЛКРС), на разделении инфицированных и неинфицированных животных, на по-
лучении здорового ремонтного молодняка за счет его изолированного выращивания и на по-
степенной замене инфицированных животных по мере их выбраковки не связанным с ин-
фицированием ВЛКРС молодняком.
Этот принцип оздоровления стада от лейкоза позволяет полностью использовать про-
дуктивный потенциал инфицированных животных, в зависимости от ситуации осуществлять
полное оздоровление хозяйства за 2-4 года (2) и положен в основу действующей в СССР с
1984 г. инструкции о мероприятиях по борьбе с лейкозом КРС. По результатам анализа 66
регионов РФ, инфицированность ВЛКРС колеблется от 10 до 30%. Особенно сложную эпи-
зоотическую ситуацию по лейкозу отмечали в Краснодарском крае, Ростовской, Курганской,
Московской, Новгородской, Пензенской, Тюменской и Псковской областях, Марийской рес-
публике, в которых выявляли 30-40% животных, положительно реагирующих на лейкоз (1).
Апробированные системы мероприятий по борьбе и профилактике лейкоза строятся на по-
луконсервативных методах, в основе которых лежит выделение инфицированных животных
в отдельную (изолированную) группу с постепенным «вытеснением» инфицированных жи-
вотных здоровыми. При этом основной акцент делается на выращивание здорового молод-
няка, за счет которого происходит воспроизводство стада. Молодняк исследуют начиная с 6-
мес возраста и затем в 12, 18 и 24 мес, каждый раз удаляя вновь выявленных зараженных
животных. Экономический аспект проведения такого рода противолейкозных мероприятий
не представляет для хозяйства серьезной проблемы, поскольку: а) в обычных хозяйствах со-
404
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
храняется относительно низкий уровень ежегодного прироста вновь инфицированных жи-
вотных, не превышающий 1-3%; б) уровень инфицированности молодняка в 10-20 раз ни-
же, чем взрослого поголовья; в) эффективность противолейкозных мероприятий во многом
определяется качеством диагностики. Так, статус “животное, свободное от вируса лейкоза”
можно достоверно установить только после получения двух последовательных отрицатель-
ных результатов серологического исследования, проведенного с интервалом 3 мес. Для мо-
лодняка это происходит в естественных условиях в течения 2 лет.
Дальнейшее совершенствование системы противолейкозных мероприятий должно про-
исходить по двум направлениям: а) постепенный переход на более чувствительные и произ-
водительные методы выявления АТ против ВЛКРС, поддающиеся автоматизации и свобод-
ные от субъективного фактора в оценке результатов; б) разработка схем борьбы, предусмат-
ривающих использование специфических средств профилактики, предохраняющих живот-
ных от заражения ВЛКРС (6).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Авилов В.М. и др. Ветеринария, 1995, 11,3. 2.Аминева С.П. и др. Тез. докл. Всерос. конф.
ВНИИЗЖ, Владимир 1995, 36. З.Альтштейн АД. и др. Биотехнология, 1992, 6, 12.
4.Бендукидзе К. А. и др. Кн. Генно-инж. вакц. АН СССР, Пущино, 1990, 37. б.Брацславская
О.И. и др. Изв. АН Латв. ССР. 1986, 11, 69. б.Бурба Л.Г. и др. Курская биоф-ка. К 100 ле-
таю биопром. РФ Курск, 1996. 7.Бурба Л.Г. и др. Arch exp Veterinarmed, 1986, 40, 3 :313.
8.Бурни А. Ж Всес хим о-ва, 1986, 31, 3 :299. 9.Васин А.В. Тезисы докл. Всес. конф.
’’Распознавание и меры борьбы с лейкозом человека и животных”, Белая Церковь 1986 :196.
9а.Валихов А.Ф. и др. Бюлл. ВИЭВ 1996 :48. Ю.Гевондян В.С. Бюл. ВИЭВ, Москва, 1996,
77: 57. И.Гевондяи В.С. Бюл. ВИЭВ, Москва, 1996, 77: 8. 12.Гуленкин В.М. и др. Тез. докл.
н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995: 17. 13.Гулюкии М.И. и др. Бюл. ВНИИЭВ, Москва, 1996, 77:
46. 14.Гулюкин М.И. и др. Бюл. ВНИИЭВ, Москва, 1996, 77: 38. 15.Гулюкин М.И. и др. Па-
тент 4884320/13; Заявл. 23.11.90; Опубл.ЗО. 11.92, 44. 16.3амараева И.В. и др. Бюл. ВИЭВ,
Москва, 1996, 77: 53. 17.3амараева И.В. и др. Бюл. ВИЭВ, 1996, 77: 66. 18.Иванова Л.А. и
др. Бюл. ВНИИЭВ, 1996, 77 :67. 19.Иванова Л.А. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995
:20. 20.Конде Диаре и др. Моск. Гос. Акад. вет. мед и биотех., 1994, 155. 21.Касьян Е.Н.
MBA, 1994, Афтореф. канд. дисс. 22Жондричева Н.Н. Бюл. ВИЭВ, 1996, 77 :55. 23.Крикун
В.А. и др. Бюл. ВНИИЭВ, 1996, 77 :49. 24.Крикун В.А. Сб. н. труд. MBA, 1985, 10. 25. Ку-
кайн Р.А. и др. - Вирус лейкоза КРС, Рига, Зинатне, 1982. 26.Листкова Н.В. и др. Тез. докл.
н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :202. 27.Малоголовкин С.А. и др. Тез. докл. и. конф. ВНИИВ-
ВиМ, 1990 :74. 28.Малоголовкин С.А. и др. Матер, н. конф. ВНИИВВиМ, 1992, 337.
28а.Малоголовкин С.А. и др. Бюлл. ВИЭВ, 1996, 77 :73. 29.Москалик Р.С. и др. Бюл. ВИ-
ЭВ, 1996, 77 :68. ЗО.Нагаева Л.И. и др. Рига; Зинатне, 1988, 220. 31.Нахмансон В.М . Докт.
дис., М, 1987, 28. 32.Нахмансон В.М. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :172.
ЗЗ.Нахмаисон В.М. и др. Ветеринария, 1995 :8. 34.Перов Н.И. Бюл. ВИЭВ, 1996, 77 :86.
35.Попов А.Н. и др. Вопросы вирусологии 1993, 38, 3 :113. Зб.Прохватикова Л.Б. и др. Тез.
докл. н.-пр. коиф. ВНИИЗЖ, 1995, 21. 37.Рачкус Ю.А. и др. Авт.свид.4811056/13
опубл.23.12.91, Бюл.47. 38.Сергеев В.А. и др. Структура биол. вирус, живот., М, 1983.
39.Сандев Н и др. Проблемы иммунитета специфич. профилакт. селескостоп. животни. пти-
ци. София 1988, 2 :287. 40.Сюрин В.Н. и др. Вирус лейкоза КРС, MBA, 1986. 41.Сюрин
В.Н. и др. Частная ветер, вирусолог., Колос, 1979. 42.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол.
жив., Агропромиздат, 1991. 43.Тарасшин АА. и др. Докл. АН СССР, 1980, 250, 4 :980.
44.Фомина Н.В. и др. Вирусы животных, MBA, 1991. 45.Шишков В.П. и др. Ветеринария
1986, 5, 13. 4б.Эрнст Л.К. и др. Бюлл.ВНИИЭВ, 1996, 77 :45. 47.Altstein A. et. al. Abst Mol
biol imm BLV, Worksh Tallin, Estonia 29, 1, 1989. 48.Avram N. et. al. Bull Acad Sc Agr Forest,
1980, 10 :205. 49.Bruck C. et. al. Virology, 1982, 122 :342. 50.Bruck C. et.al. Virology, 1982, 22
405
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
:353. 51.Bruck С. et.al. Mod trends human leukemia.V.(Neth R.,ed.) Berlin 1983 :222. 52.Burny
A. et.al. Cancer Research 1985, 45 :4578. 53.Bumy A. et.al. Veter Microbiol, 1988, 17 :197.
54.Clements J.E. etal. Ann Rev Immunol Palo Alto, Calif, 1988, 6 :139. 55.Calafat J. et.al. Vet
Microbiol., 1976, 1 :193. 56.Copeland T.B. FEBS Lett. 1983,156 :37. 57.Coulston J. et.al. J Gen
Virol, 1990, 71, 8 :1737. 58.Davis G. Bull off Int .Epiz., 1980, 92 :325. 59.Derse D. J Virol,
1987, 61, 8 :2462. 6O.Deschamps J. et. al. J Virol, 1981, 40 :605. 61.Duesberg C. Proc.7th Int
Symp, Norwich, 1986, Cambridge, 1987, 169. 62.Ferrer J.F. Adv veterinary Science and comp
medicine, 1980, 24 :1. 63.Fukuyama Shin-ichi J Vet Med Sci 1993, 55, 1 :99. 64.Gatei M.H.
et.al. Immunol and Cel Biol 1993, 71, 5,:399. 65.Ghysdael J. et.al. Ann Rech Vet., 1978, 9 :627.
66.Grover Y.P. et. al. J Vet Med, 1992, 39, 1 :48. 67.Grundboeck M. et al. Med vet. 1991, 47
:22. 68.Guillemain B. et.al. 5 Int Symp on bovine leukosis, Tubingen 1984, 117. 69.Gupta P. et.
al. Veter Res, 1989, 125, 1 :5. 7O.HassanM. et. al. J Clin Microbiol, 1992, 30, 2, 675. 71.Hilbink
F. et. al. Nz Veter J 1990, 38, 2 :80. 72.Hoff-JogenSen R. Rev scient techn off Intern Epizoot.
1990, 9, 4 :1169. 73.Jazbec.I. et. al. Veter Clasnik 1990, 44, 1 :55. 74.Kautzsch S. et. al. Mh Vet-
Med, 1990, 45, 2 :41. 75.Kenyon S.R. et. al. J Nat Cancer Inst, 1981, 67 :157. 76.Klintevoll K.
et. al. J Virol Meth, 1991, 33, 3 :319. 77.Lesnik F. et. al. Follia veter Kosice 1989, 33, 1 :47.
78.Mamoun R.Z. et. al. J Gen Virol, 1981, 54 :357. 79.Mamoun R.Z. et.al. J Gen Virol, 1983, 64
:2791. 80.Mamoun R.Z. et.al. J Virol, 1990, 64, 9 :4180. 81.Maruyama K. et.al. Vet Immunol
Immunopathol, 1989, 223 :265. 82.Murtanigh M.P. et.al. J Virol Meth, 1991, 33, 1 :73.
83.Miller J.M. J Tissue Cult Methods 1988, 11, 2 :65. 84.Miller J.M. et. al. Nath Cancer Inst.
1969, 43 :1297. 85.MerzaM. et.al. Virology 1994, 202, 2 :956. 86.Naif Hassan M. et.al. J Clin
Microbiol, 1992, 30, 3 :675. 87.0kada K. et.al. J Vet Med. B. 1991, 38, 9 :707. 88.Olechnowitz
A.F. et.al. Arch exper Veter Med, 1990, 44, 2 :279. 89.0numaM. et.al. Jap J Vet Sci, 1990, 52, 5
: 1131. 90.Onuma M. et. al. Am J Vet Res, 1984, 45 :1212. 91.0numa M. et.al. Jap J Vet Sci,
1987, 49 :137. 92.Oroszlan S. et.al. Proc Nat Acad Sci, USA, 1982, 79 :1291. 93.Papier C.E.
et.al. J Nat Cancer Inst, 1979, 62 :165. 94.Portetelle D. et.al. Virology, 1989, 169 :34.
95.Portetelle D. et.al. Ann Med Veter, 1989, 133, 1 :23. 96.Portetelle D. etal. 21 st Congr IABS
Anim Refrav Annecy, 1990 :81. 97.Portetelle D. et.al. J Cell Biochem, 1986, 10a :209. 98.Rice
N.R. etal. J Virol, 987, 61, 5 :1577. 99.Rice N.R. et.al. Virology 1984, 138, 1 :82. lOO.Roberts
D.H. et.al. Br Vet J, 1983, 139 :291. lOl.Rosen C.A. et.al. J Virol, 1986, 57, 3 :738. 102.Rosen
C.A. et.al. EMBO J 1986, 5, 10 :2585. 103.Rossler H. et.al. Arch exp Veterinarmed, 1986, 40, 3
:377. 104.Rubino M. et.al. Amer J Vet, 1984, 45 :1558. 105.Sagata N. et.al. Proc Nat Acad Sci
USA, 1985, 82 :677. 106.Sagata N. et.al. Proc Nat Acad Sci USA, Biol Sci, 1984, 81, 15 :4741.
107.Schmidt I. et.al. Exp Cell Res, 1984, 152 :565. 108.Schmerr M.J. et.al. Virology 1981, 109
:431. 109.Schulz A.M. et.al. Virology 1984, 135, 2 :417. HO.Sherman M. et.al. J Clin Microbiol,
1992, 30, 1 :185. lll.Starick E. et.al. Arch Exp Vet Med, 1987, 41, 3 :398. 112.TanakaM. et.al.
Jap J Veter Sci, 1988, 50 :1136. 113.Tham K.M. et.al. J Arch Virol, 1985, 84 :261.
114.Tsukiyama K. et.al. Arch Virol. 1987, 96, 89. 115.Tsukiyama K. Jap J Vet Res. 1985, 33
: 101. 116.Uckert W. etal. Virus Res. 1986, 4, 4 :343. 117.Uckert W. et.al. Virology 1984, 133
:386. 118.Valikhov A.F. et.al. Commiss of the Europ Comm, Luxembourg, 1984 :269. 119. Van
der Maaten M.J. et.al. Bull Hematol, 1976, 43 :360. 12O.Van der Maaten M.J. et.al. Nath Cancer
Inst, 1974, 52 :491. 121.Van den Broeke A. et.al. Proc Nat Acad Sci USA, 1988, 85, 9263.
122.Voewdin A.F. et.al. Vet Microbiol., 1980, 5, 3 :195. 123.Yoshivaka Y. et.al. J Virol, 1986,
57, 3 :826.
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ИНФЕКЦИОННАЯ АНЕМИЯ ЛОШАДЕЙ
Anemia infectiosa eqvorum (лат.); Eqvine infectious anemia (англ.);
Infectiose Anemie der Einhufer, Anstekcende Blutarmut der Pferde (нем.);
Anemia infectiuse du cheval (франц.)
Инфекционная анемия лошадей (ИНАН, болотная лихорадка) - вирусная болезнь одно-
копытных, характеризующаяся поражением кроветворных органов и в целом мезенхимы,
преимущественно хроническим течением, рецидивирующей лихорадкой (в периоды обост-
рения) и анемий.
До начала XX в ИНАН регистрировалась во многих странах Европы, а также в США,
Японии, Индии в виде эпизоотических вспышек. Наиболее широкое распространение она
получила в период мировой войны, сопровождаясь высокой смертностью (до 80%). В по-
следнее время по данным МЭБ ИНАН встречается в США, Австралии, Японии, Индии, в
странах Северной и Южной Африки, Европы (Болгария, Венгрия, Чехословакия, Россия,
Украина, Белоруссия, ФРГ, Франция и др.).
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Болезнь развивается
после периода инкубации в течение от 15 дн до нескольких недель в природных условиях и
от 10 до 20 дн в эксперименте. Различают сверхострое, или септицемическое, острое, подо-
строе и хроническое или латентное течение анемии. В развитии болезни характерна опреде-
ленная цикличность с чередованием периодов обострения (рецидивов) и затухания (ремис-
сий), что создает в конечном счете большое многообразие ее форм.
При сверхостром течении отмечают быстрый подъем температуры тела, геморрагиче-
ский гастроэнтерит, асфиксию, сердечную слабость, атаксию, параличи задних конечностей
и гибель животных через несколько часов или 1-2 дня.
Острое течение болезни также характеризуется лихорадкой (41-42°С), угнетением или
легким возбуждением, гиперемией и отеком конъюнктивы и слизистой оболочки носовой и
ротовой полостей, нарушением сердечной деятельности, иногда кровавым поносом, исхуда-
нием при сохраненном аппетите, набуханием и бледностью с наличием кровоизлияний обо-
лочек третьего века, отеками в области живота, препуция, конечностей, шаткостью походки,
одышкой, быстрым развитием анемии. Кровь становится водянистой (разжижение), количе-
ство эритроцитов падает до 1 млн в 1 см3. В крови появляются комплексы “инфекционный
вирус - антитело” и отложение их в клубочках почек (35, 36). Количество гемоглобина сни-
жается до 20-30%, СОЭ ускорена (70-80 делений в первые 15 мин), отмечается гипергам-
маглобулинемия и тромбоцитопения. В церебральной жидкости регистрируют увеличение
количества белка и белых клеток крови (37). Продолжительность болезни 1-3 нед, иногда
месяц, и животные погибают (1).
Подострое течение болезни длится 2-3 мес, сопровождается ремиссирующей лихорад-
кой и такими же симптомами в период рецидива, что и при остром течении. В период ре-
миссии указанные признаки постепенно исчезают, и животные выглядят здоровыми. Чем
чаще и продолжительнее приступы лихорадки, тем быстрее истощаются защитные силы ор-
ганизма, и животные в конце концов погибают.
Хроническое течение болезни чаще является продолжением подострого течения. Оно
отличается чередованием лихорадочных периодов (через 1-3 дн) и продолжительными пе-
риодами покоя (ремиссии) - до нескольких месяцев. Во время рецидивов наблюдаются те же
симптомы, что и при остром течении болезни: утомляемость, одышка, сердцебиение, потли-
вость, тремор мышц, исхудание. В период ремиссий они постепенно исчезают.
Латентное течение ИНАН наблюдается обычно в стационарно неблагополучных пунк-
тах у резистентных лошадей. Для него характерны резкие и кратковременные подъемы тем-
407
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
пературы. Такие животные внешне кажутся здоровыми, но являются вирусоносителями и
представляют большую опасность для окружающего поголовья, служат источником возбу-
дителя инфекции. Болезнь может длиться годами, проявляясь иногда лишь заметным исху-
данием, быстрым утомлением и учащенным сердцебиением на работе и при быстрой езде.
Персистенция вируса в организме таких внешне здоровых животных может наблюдаться на
протяжении 18 лет (3).
Патологические изменения варьируют в зависимости от тяжести и продолжительности
течения болезни. Отмечают выраженный геморрагический диатез в виде многочисленных
кровоизлияний на слизистых, серозных оболочках и в паренхиме органов, увеличение селе-
зенки и лимфоузлов, дистрофические изменения в паренхиматозных органах. Картина
вскрытия после острого течения болезни характеризуется септическими явлениями. Наблю-
дают (непостоянно) исхудание животного, желтушные оттенки слизистых оболочек глаз, но-
са, рта, с точечными кровоизлияниями, наиболее часто на третьем веке и слизистых губ.
Подкожная и межмышечная клетчатка желтушна, пронизана кровоизлияниями, местами
имеет студневидные серозно-геморрагические инфильтраты. Лимфоузлы, особенно пор-
тальные и почечные, набухшие, сочны, покрасневшие; окружающая их ткань отечна. Ске-
летные мышцы крестца и крупа кое-где серого или глинистого цвета, на разрезе рисунок
сглажен. Селезенка сильно увеличена (спленомегалия), кровенаполнена, с кровоизлияниями
под капсулой, пульпа дряблая. Печень увеличена, дрябловата, мозаичного цвета. Почки уве-
личены, бледны, усеяны кровоизлияниями, граница слоев стушевана. Сердце увеличено,
миокард серого или серо-глинистого цвета. В ЖКТ геморрагическое воспаление слизистой
оболочки с кровотечением в полость. В легких кровоизлияния под плерву и в паренхиму.
Кровь водянистая, светло-красного (алого) цвета. В головном и спинном мозге иногда нахо-
дят полнокровие, кровоизлияния, отек и дряблость мозгового вещества (1).
Патологоанатомические изменения после хронического течения болезни характеризуют-
ся отсутствием выраженных септических явлений, истощением, бледностью и желтушно-
стью слизистых оболочек, наличием мелких кровоизлияний на серозных покровах кишеч-
ника, сердца и в подкожной клетчатке, студневидных отеков клетчатки конечностей, под-
грудка и брюшных стенок, увеличением селезенки и лимфоузлов, их плотной консистенци-
ей. Печень увеличена, плотная, имеет мускатный рисунок на разрезе. Почки увеличены,
плотны, серо-желтоватого цвета. Миокард в состоянии зернистой и жировой дистрофии с
очагами склероза (серо-белые участки).
После латентного течения болезни в трупах не обнаруживают характерных изменений.
Иногда отмечают изменение цвета селезенки (пульпа её приобретает светло-красное окра-
шивание), следы старых кровоизлияний (пигментные пятна) на эндокарде, под серозными
оболочками и очаговые некрозы миокарда.
Гистологические изменения. Наиболее характерны и постоянны изменения со сторо-
ны мезенхимы в виде пролиферации клеток мононуклеарно-макрофагальной системы и на-
рушения обмена железа (гемосидерина). При остром течении болезни уже через 11-12 дн
после заражения в селезенке отмечают сильное инфильтрирование ткани незрелыми эрит-
роцитами, уменьшение количества гемосидерина и хаотичное его расположение по всей
пульпе (Рис. 141), а не в присинусных зонах (как это бывает в норме), атрофию лимфофол-
ликулов, набухание и пролиферацию ретикулярных клеток, увеличение числа лимфобла-
стов, эозинофильных гранулоцитов (48).
В печени устанавливают набухание купферовских клеток, увеличение в просветах ка-
пилляров числа свободных макрофагов, насыщенных гемосидерином, гиперемию и крово-
излияния, отек стромы, расширение и заполнение желчных капилляров, зернистую и жиро-
вую дистрофию гепатоцитов. В почках регистрируют застойную гиперемию, дистрофию и
некроз канальцевого эпителия, серозный отек и слабую лимфоидно-гистиоцитарную ин-
408
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
фильтрацию межканальцевой ткани (12). В сердце выявляют полнокровие сосудов, кровоиз-
лияния, серозный отек межмышечной соединительной ткани, зернистую, реже жировую
дистрофию мышечных клеток. В лимфоузлах наблюдают серозно-геморрагическое воспале-
ние, умеренную гиперплазию лимфоидных и гистиоцитарных клеток. Аналогичные имму-
нопролиферативные изменения отмечают в тимусе. Изменения в легких выражаются резкой
гиперемией, серозно-геморрагическим отеком, кровоизлияниями в паренхиму, пролифера-
цией гистиоцитов в межальвеолярных перегородках и отложением в альвеолярных макро-
фагах гемосидерина. В костном мозге - отек, увеличение количества эритробластов и мие-
лобластов, миелоцитов, клеток мононуклеарно-фагоцитарной системы, монобластов и кле-
ток плазмоклеточной серии (плазмоцитов, плазмобластов) (49). В головном мозге - негной-
ный менингоэнцефалит, набухание, хроматолиз, вакуольная дистрофия нейронов (21). При
хроническом течении инфекции в селезенке преобладает пролиферация клеток ретикулоэн-
дотелия, сопровождающаяся накоплением большого количества лимфоидных клеток и гис-
тиоцитов, почти полное отсутствие гемосидерина (видны лишь мелкие зерна в единичных
макрофагах), увеличение лимфофолликулов. В печени на первый план выступает пролифе-
рация клеток ретикулоэндотелия, очагово-диффузные скопления лимфоидных и гистоцитар-
ных клеток, гемосидероз, зернистая и жировая дистрофия и некроз гепатоцитов, появление
в клетках зерен липофусцина (23). В период обострения болезни наблюдают тяжелые некро-
дилрофичзжие изменения печеночных клеток центральной и периферических зон долек. В пе-
риод ремиссии отмечают слабую лимфоидную инфильтрацию, почти полное отсутствие гис-
тиоцитарной реакции, небольшие отложения внутриклеточного гемосидерина. В почках на-
ходят гломерулонефрит, склероз сосудистых клубочков и отложение гемосидерина в эндоте-
лии клубочков и клетках пролиферата. В сердце - очаговый миокардит, развитие склероза
на месте погибших мышечных клеток. В лимфоузлах - диффузную лимфоидную гиперпла-
зию и небольшое количество гемосидерина, много митозов в зародышевых центрах лимфо-
фолликулов. В легких превалирует инфильтрация лимфоидными клетками альвеолярной и
междольковой ткани с отложением гемосидерина в макрофагах и альвеолярном эпителии. В
костном мозге - угнетение эритропоэза, гиперплазия миелоцитов и нейтрофилов (1, 5,10).
Патогенез. Патогенез изучен недостаточно (1). Вирус, проникая в организм восприим-
чивого животного парентерально с кровью, широко распространяется по органам и тканям.
Чаще всего он выявляется в селезенке, лимфоузлах и печени. Методом ФА АГ вируса четко
определяется в цитоплазме макрофагов в виде зерен или гранул. Возбудитель размножается
в эритроцитах крови и кроветворных клетках костного мозга, сильно наводняя органы и
ткани больного животного, достигая в крови в период лихорадки концентрации 10 5,5-10 6,5
ТЦДзо/мл (31). В это время он легко выявляется различными методами. В то же время в
период ремиссии вирус можно обнаружить лишь путем заражения здоровой лошади. Наибо-
лее характерный признак болезни - анемия - сопровождается резким уменьшением количе-
ства эритроцитов, гемоглобина, разжижением крови, ухудшением её свертываемости. Со-
гласно современным представлениям, анемия может быть обусловлена двумя механизмами.
Первый механизм связан с непосредственным действием вируса на кроветворный орган -
костный мозг, вызывая угнетение его деятельности, нарушение эритропоэза, лизис эритро-
цитов, снижение (или прекращение) усвоения железа. Второй механизм, который считают
главным в формировании анемии, связан с образованием противовирусных АТ (30,33).
Показано, что 3-я фракция комплемента (СЗ) и АТ, синтезирующиеся в организме в от-
вет на проникновение вируса, покрывают зараженные эритроциты лошади, из-за чего по-
следние становятся хрупкими, быстро и в большом количестве разрушаются и фагоцитиру-
ются макрофагами. Вирус вызывает раздражение клеток ретикулоэндотелия, вследствие
чего происходит интенсивная пролиферация и накопление клеток мононуклеарно-
макрофагальной системы в селезенке, печени, почках и других органах. Селезенка утрачи-
409
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
вает способность перерабатывать погибшие эритроциты, и эту функцию берут на себя дру-
гие органы, в клетках которых откладывается большое количество гемосидерина. Исследо-
вание пунктатов костного мозга показывает, что основной симптом болезни - анемия - воз-
никает вследствие угнетения эритропоэза, а также лизиса эритроцитов, подвергшихся воз-
действию вируса и фагоцитированных клетками РЭС. При остром течении болезни эрит-
робластическая группа клеток уменьшается с 40 до 4,6%, а гистиоцитарная группа, клетки
которой, обладая фагоцитарной функцией, пожирают эритроциты, увеличивается с 31 до
40%. Считают, что в развитии анемии играет роль снижение деятельности костного мозга.
Период полужизни эритроцитов, меченых 51Сг , у здоровых лошадей равнялся 15,5±2,08 дн,
а у больных - 8,98±1,2 дн. Различия между средними значениями 2 групп было статистиче-
ски достоверно (Р<0,01). Компенсаторный гипергемолиз отмечен у лошадей с хроническим
течением болезни.
Раздражение вирусом нервных рецепторов, а также влияние гуморальных факторов, вы-
зывают включение механизмов защиты организма, сильное раздражение всей РЭС, в мак-
рофагах (гистиоцитах) которой образуется большое количество гемосидерина. Последний
обнаруживается не только в селезенке, но и в печени, почках и реже - в других органах. По
мере развития болезни количество гистиоцитов снижается, что свидетельствует об истоще-
нии этой функции РЭС, в то время как в пролиферативной реакции начинает преобладать
размножение лимфоидных клеток, особенно в селезенке, лимфоузлах, которые, не проявляя
свойств микрофагоцитоза и не образуя, следовательно, гемосидерина, обладают, вероятно,
антисептической функцией. При хроническом течении болезни РЭС печени, не будучи в со-
стоянии заменить выпавшую функцию селезенки по переработке отмирающих эритроцитов,
также истощается. В ней размножаются лимфоидные клетки, развиваются сосудистые и
дистрофические изменения с омертвением паренхимы в центре долек, а гемоглобин, осво-
бодившийся при распаде эритроцитов, выводится из организма. Для инфекционной анемии
характерен также негнойный менингоэнцефалит. При хронической анемии описаны эндо-
кардиты, гломерулонефриты, и клеточно-узелковая реакция со стороны интимы сосудов, ко-
торая рассматривается в настоящее время как проявление аллергии.
Анемия - характерный симптом ИНАЯ, обусловленный гемолизом вне и внутри сосу-
дов, вызванным иммунологическим механизмом. Эритроциты зараженных лошадей покры-
ты противовирусными АТ. После заражения животного происходит быстрое повышение
титра вируса практически во всех тканях. Затем он снижается, однако с рецидивами болезни
вновь синхронно повышается. Такая периодическая репродукция вируса ведет к высвобож-
дению пирогенов, АГ и других субстанций, способствующих развитию симптомов болезни.
Все описанные при ИНАЯ поражения, по-видимому, являются иммунологически опосредо-
ванными, и тяжесть их проявления находится в прямой связи с периодическими приступами
репродукции вируса. Наблюдаемые при ИНАЯ воспаления клубочков почек обусловлены
отложением комплекса вирус-АТ (9). По мнению Henson и McCuire (22), анемия, гломеру-
лонефрит, гепатит, гипергаммаглобулинемия, лимфаденопатия и др. патологические про-
цессы являются иммунологически опосредованными и обусловлены уровнем размножения
вируса. Поэтому у лошадей с частыми обострениями почти всегда развиваются тяжелые
некро-дистрофические и воспалительные изменения. Иммунологически опосредованный
механизм патогенеза болезни убедительно показан в опытах с использованием иммуноде-
прессантов. Обработка экспериментально зараженных лошадей циклофосфамидом предот-
вращает развитие характерных поражений (22).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусную природу ИНАЯ лошадей впервые установили Карре и Валле в 1904-1906 гг.
Морфология и химический состав. Вирус имеет внешний оболочечный гликопротеин
gp90 и трансмембранный гликопротеин gp45. В настоящее время консервативные эпитопы
410
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
белков gp90 и gp45 служат основной целью поисков компонентов вакцины против ИНАН.
Гликопротеин gp90 детерминирует с геном env.
Вирус ИНАН имеет конический капсид длиной около 120 нм и шириной 60 и 20 нм со-
ответственно на широком и узком конце (41а). В его структуре обнаружено 6 основных бел-
ков с мол.м. от 9 до 90 кД (см табл.Х1.4.) и 4 минорных полипептида. В состав наружного
слоя оболочки вирионов входит 2 гликопротеина - gp90 и gp45 (26), не связанные между
собой дисульфидными связями (27). Определена полная последовательность нуклеотидов в
геномной РНК вируса ИНАН, имеющей длину 8200 нуклеотидов. У него, как и у ВИЧ, важ-
ную роль в регуляции экспрессии играет ген tat; мРНК tat состоит из 3-х экзонов: первые 2
генома - трансактиваторы tat, а 3-й, вероятно, кодирует белок rev (41а). У изолята МА-1,
характеризующегося отсутствием вирулентности, определена последовательность нуклеоти-
дов в 3'-концевой половине геномной РНК вируса. По сравнению с изолятом Войминг в со-
ставе области z3 у изолята МА-1 имеется последовательность длиной в 66 нуклеотидов (от
нуклеотида 91-го до нуклеотида 25-го). В этой области локализован мощный усилитель
транскрипции. Предполагается, что авирулентность МА-1 связана с этими изменениями в
последовательности области z3 длинного концевого повтора в геномной РНК (13).
Устойчивость. Вирус устойчив к действию трипсина (25), РНК- и ДНК-азы, чувствите-
лен к эфиру; термолабилен, при 60°С теряет вирулентность за 30 мин. Кипячение разрушает
его через 1-2 мин, солнечные лучи инактивируют за 1-3 ч. При 0°С до -2° С сохраняется до
3-х лет, в глицерине - 7 мес, в моче и навозной жиже - до 2,5 мес, в высушенной крови в
комнатных условиях - 7 мес, в стерильной воде - до 160 дн. Инфицированное сено и паст-
бища безопасны через 9 мес после заражения. В осенне-зимний период в овсе вирус теряет
патогенные свойства только через 8,5 мес. Устойчив к высушиванию и гниению. В лиофи-
лизированном состоянии при комнатной температуре сохраняет вирулентность в течение 7
мес. Замораживание на его активность не влияет. При биотермической обработке навоза ви-
рус инактивируется через 30 дн, 2-4%-ный р-р NaOH убивает его за 20 мин, 35%-ный р-р
креалина - через 30 мин, 20%-ная хлорно-известковая смесь, содержащая 29,5% активного
хлора, обезвреживает вирус в сточных водах за 3 сут. Вирус относительно устойчив к воз-
действию химических средств. Глицерин частично инактивирует его в течение 4 нед и пол-
ностью - за 7 мес, 2%-ный р-р формалина инактивирует вирус за 5 мин, но через 5 мин
можно реактивировать его р-ром аммиака (8).
Антигенная структура. У вируса ИНАН описаны 3 группы АГ: р29, р12 и р14, АГ р29
представляет собой белок, обозначенный как G-АГ. Он находится внутри вириона, освобо-
ждается при обработке вируса эфиром, является общим для всех штаммов вируса ИНАН и
обнаруживается в РСК, РДП и РИФ. Помимо общего специфического G-АГ, вирус содержит
поверхностные АГр12ир14, различающиеся в опытах перекрестного заражения гомоло-
гичными и гетерологичными штаммами (23,31).
Таблица XI.4 Основные структурные белки вируса ИНАН (6)
Обозначение и молекуляр- ная масса белка, кД Количество молекул рионе В ВИ- Локализация
gp90 300 Оболочка вирионов
gp45 300 Там же
р26 6000 Сердцевина
р15 7600 «
pH 2000 «
Е2 3300 «
411
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Кроме 2-х негликолизированных вирусных пептидов (р29 и р12), вирионы ИНАН со-
держат гликопротеины gp77/79 (основной гликопротеин вириона) и gplO. АГ вирусной обо-
лочки gp77/79 ответственен за продукцию ВНА и подвержен АГ-изменчивости под влияни-
ем АТ. Установлено, что наиболее АГ- активная область белка gp45 (оболочечного глико-
протеина) располагается на аминном конце и лежит между гидрофобными доменами слия-
ния и трансмембранным доменом (16).
В состав сердцевины вирионов входит 4 негликолизированных белка (р26, pl5, р 11, р9),
однако основная масса состоит из белков р26 и р15. Четыре минорных полипептида (р70,
рб 1, рЗО, р23) присутствуют в вирионах в незначительных количествах (около 1%), природа
и локализация их не выявлены. Известно, что штаммы возбудителя ИНАН различаются в
PH и перекрестной защиты на лошадях. Установлено, что в процессе инфекции происходят
изменения поверхностных АГ вируса, что сопровождается появлением антигенных вариан-
тов, т.е. большое разнообразие вариантов вируса ИНАН может генерироваться в организме
инфицированных животных (38). Установлено быстрое появление новых АГ вариантов ви-
руса в процессе персистентной инфекции. Существенная изменчивость генов поверхностных
гликопротеинов gp20 и gp45 в процессе инфекции у одного и того же животного выявляется
с помощью монАТ.
Антигенная вариабельность и родство. Штаммы вируса ИНАН, выделенные в раз-
личных частях земного шара, в АГ-отношении идентичны. Они различаются в PH, но име-
ют общий АГ, выявляемый в РСК, РЗСК и РДП. Помимо того, вирус ИНАН дает перекрест-
ные серологические реакции с вирусом ВИЧ (СПИД), но не дает таких перекрестов со всеми
другими ретровирусами животных. У лошадей, экспериментально зараженных клонирован-
ным вирусом ИНАН, развивается хронически протекающая болезнь с периодическими ре-
цидивами лихорадки, сопровождающаяся виремией. Изоляты вируса, выделенные во время
приступов лихорадки, были неодинаковы по АГ-свойствам и отличались друг от друга в PH
и ЭФ-ПААГ, но не в РСК и РДП. Существенная изменчивость генов поверхностных глико-
протеинов gp90 и gp45 вируса ИНАН обнаружена в процессе инфекции одного животного.
Изоляты, вводимые с интервалом в 2 нед, АГ различались между собой (24); белки сердце-
вины при этом не изменялись (38). Причины АГ-вариабельности вируса - точечные мута-
ции в гене env и иммуносупрессии (30а), а не только за счет влияния ВНА, как считалось
раньше (14). Изменения в гене env в процессе персистирующей инфекции приводят к изме-
нению АГ-свойств белков вируса ИНАН и его вариабельности (27). Мутантный вирус
ИНАН, утративший способность к нейтрализации, выделен после 13 пассажей в культуре в
присутствии АТ к типо- и группоспецифическим детерминантам gp90. АГ-дрейф вируса
был связан с потерей 2-х эпитопов на gp90 (41). Селекция вариантов этого вируса в орга-
низме животного происходит не за счет влияния ВНА, как считалось ранее. Выделенные от
экспериментально зараженных лошадей 2 штамма вируса ИНАН во время 2-х лихорадоч-
ных циклов имели различия в нуклеотидной последовательности и эти различия устанавли-
вались при исследовании мембран культур клеток периферических лейкоцитов в ИФ.
Локализация вируса. Вирус проникает в организм восприимчивых животных, глав-
ным образом, парентерально и разносится по всем органам и тканям. Особенно интенсивно
размножается в костном мозге и крови, вызывая угнетение эритропоэза и гемолиз части
эритроцитов во время приступа лихорадки. Наиболее высокие титры вируса наблюдают у
зараженных лошадей во время первого подъема температуры. Затем титр вируса снижается,
но в период повышения температуры вновь возрастает. У лошадей без симптомов болезни
титр вируса низкий, иногда его даже невозможно выявить (в культуре лейкоцитов). ИНАН -
лимфопролиферативная болезнь с непрерывной виремией при наличии АТ. Эго можно объ-
яснить повреждением лимфоцитов, вызванным вирусом, в результате чего защитный кле-
точный иммунный процесс нарушается. Возбудитель в крови находится в виде комплекса
412
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные ипфекпии
вирус-АТ. У большинства лошадей наблюдают гипергаммаглобулинемию и снижение в сы-
воротке крови количества комплемента С-3. При изучении локализации вирусного АГ с по-
мощью ИФ у экспериментально зараженных лошадей установлено следующее. Через 6-38
дн после заражения животных АГ обнаруживали в цитоплазме клеток селезенки, лимфоуз-
лов, печени, почек, легких, костного мозга, зобной железы, головного мозга, мозжечка, ги-
пофиза и желудка. Он обычно находился в единичных клетках или в макрофагах в виде не-
больших капелек, включенных в цитоплазму.
Вирусовыделение. Из организма больной лошади вирус выделяется с мочой, калом,
носовой слизью, секретом конъюнктивы, молоком. Загрязненные выделениями больных
корма, навоз и другие субстраты могут быть факторами передачи инфекции.
Антигенная активность. У инфицированных лошадей образуются АТ к гликопротеи-
нам оболочки и мажорному протеину сердцевины (р26) вирионов. Однако гликопротеины
оболочки вирионов очень вариабельны, что является одним из основных механизмов защи-
ты возбудителя от элиминирующего воздействия факторов иммунитета. В организме инфи-
цированных лошадей в процессе персистенции возбудителя образуется большое количество
различающихся по гликопротеину антигенных вариантов вируса. КСА у больных животных
впервые обнаружены в 1966 г. Сыворотка экспериментально зараженных лошадей стано-
вится положительной в РСК с 14-го по 29-й день после инокуляции и удерживается в таком
значении в течение нескольких недель. Величину КС-титра у больных животных можно
разделить на 4 стадии: предшествующую - перед развитием АТ, раннюю - увеличение титра
с высоким плато, снижающую - с уменьшением титра, и позднюю. Комплементфиксирую-
щие ингибиторы находятся в период поздней стадии болезни не только у IgG, но и у других
Ig. Специфические ПА появляются в крови лошадей в течение 45 дн после заражения. Ос-
новные симптомы болезни, включая анемию, тромбоцитоиемию и гломерулит, являются
следствием развития специфического иммунного ответа (15). ПА к группоспецифическому
АГ выявляют РИД, используя АГ из зараженных культур клеток или тканей селезенки или
нз очищенного вируса. ПА обнаруживают на 14-38-й день после заражения; они могут со-
храняться до 7 лет. Преципитины более постоянно обнаруживают в сыворотках крови хро-
нически больных животных. В селезенке больных лошадей выявлен АГ, участвующий в ре-
акции преципитации с АТ сыворотки крови больных животных. Сыворотка крови заражен-
ных лошадей содержит антивирусные АТ, реагирующие как в РСК, так и в РЗСК. Выделен-
ный IgG реагировал в РСК, в то время как иммуноглобулин IgG(T) ингибировал РСК и свя-
зывался в РЗСК. В РЗСК АТ выявляли с 28-го по 120-й день после заражения животного.
АГ детерминанты для индукции ВНА расположены в вариабельной области gp90 (39).
Основная гуморальная реакция направлена против высоко АГ домена, представленного 83
аминокислотами. Низкие титры ВНА и высокий уровень антигликопротеинной активности
сывороток свидетельствует о том, что иммунный ответ направлен прежде всего не на ней-
трализующие эпитопы, а на вирусные гликопротеины. Большинство иммуногенных сайтов
на поверхности вириона не чувствительно к нейтрализации. Нейтрализующей активностью
обладает фракция IgG, которую обнаруживают через 40 дн после заражения животного. У
некоторых лошадей она сохраняется в течение всей болезни и действует на поверхностные
АГ вириона, т.е. реагирует с типо-, но не группоспецифическим компонентом вируса ИНАН.
Опыты показали, что 99% инфекционного вируса циркулирует в сыворотке больных живот-
ных в комплексе с АТ. С помощью метода прямой ИФ изучены локализация и места репли-
кации вируса in vivo в организме экспериментально зараженных лошадей. Получены белки
tat вируса ИНАН, обладающие полной биологической активностью (51).
Экспериментальная инфекция. Подкожное или внутривенное введение 20-50 мл, а
часто даже 0,01 мл крови или сыворотки, вызывает у лошадей, в частности у жеребят, через
9-93 дня остро или хронически протекающую болезнь или только вирусоносительство. За-
413
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ражение per os удается с трудом даже при введении массивных доз вируса. Требуется по-
вторная дача большого количества инфицированных крови или мочи. Возможность зараже-
ния через неповрежденную кожу оспаривается. Ослов и мулов заразить искусственно удает-
ся не всегда. Удавалось заражать свиней, в их организме вирус находился 30-197 дн.
Культивирование. Вирус может развиваться в переживающей ткани селезенки, надпо-
чечников и лимфоузлов жеребят, в культурах эмбриональных тканей лошади, но без при-
знаков ЦПД, в культуре клеток лошадиных лейкоцитов (29), а также клеточной линии кожи
лошади (34). В присутствии 50% сыворотки культуральная жидкость через 3-4 дн после ин-
фицирования содержала вирус, который можно было осадить в течение 1 ч при 100000 g. В
культуре лейкоцитов лошади после заражения вирусом (шт. Wyoming) изменения обнару-
живали на 12-15-й день. После ряда пассажей ЦПД проявлялись на 4-9-й день. При ЦПИ в
культурах в большинстве случаев выявлялся вирусный АГ в РСК с сыворотками больных
лошадей. ЦПИ и КС-активность специфичны. Шт. Wyoming размножается в перевиваемой
линии клеток кожи лошади. Культуральная жидкость в этой системе пригодна для получе-
ния растворимого вирусного АГ, пригодного для диагностики. Следует иметь в виду, что
культивирование вируса ИНАН in vitro сопряжено с существенными трудностями. Вирус
размножается в лейкоцитах лошадей, но при длительном пассировании резко возрастает
опасность контаминации его герпесвирусом лошадей. Латентный период после заражения
культуры лейкоцитов лошади продолжается 18-24 ч, титр вируса достигает наивысшего по-
казателя через 48-72 ч после заражения. Пока еще нет удовлетворительного метода титро-
вания данного вируса, его титруют на пони. Показано размножение вируса в клетках кома-
ра. Вирусный АГ в цитоплазме зараженных клеток обнаруживают с помощью ИФ через 18-
24 ч после инокуляции, а через 72 ч число клеток, содержащих цитоплазменный АГ, дости-
гает 75%. Заражение культуры лейкоцитов устанавливают по ЦПЭ, появлению группоспе-
цифического КС-АГ и ИФ. Адаптированный к культуре клеток вирус ИНАН обычно имеет
титр 106-107 ТЦД 50/мл. Серийное пассирование его в культуре клеток ведет к аттенуации
вируса в отношении лошади. Для серийного пассирования вируса ИНАН успешно применя-
ют культуру лейкоцитов осла. По мере пассирования повышалась вирулентность вируса для
культуры и возрастал титр. Одновременно снижалась его патогенность для лошадей и ослов.
После 100 последовательных пассажей вирус утратил способность вызывать заболевание у
этих животных и не реверсировал при пассировании на лошадях и ослах. Аттенуированный
штамм защищал лошадей (79%) и ослов (100%) от вирулентного вируса. Иммунитет фор-
мировался медленно (до 6 мес). Кроме культуры лейкоцитов лошади и осла, вирус ИНАН
(шт. Р337) адаптирован к культуре почечных клеток лошади (линия V-26). Адаптированный
к перевиваемой линии клеток вирус ИНАН размножался в субкультурах кожно-мышечной
ткани эмбриона лошади. Вирус ИНАН вызывает хроническую инфекцию культуры клеток
собак (CF2Th) и кошек (FEA). При пассировании его в этих культурах клеток обнаружен
высокий уровень активности обратной транскриптазы, которая в 6-20 раз выше в присутст-
вии Mg2+, чем Мп2+ (8).
ГА свойства. Вирус обладает ГА активностью в отношении эритроцитов морской свин-
ки. ГА АГ вируса типоспецифичны и отличаются от АГ, выявляемых в PH. ГА не отделим
от вирусных частиц. Рецепторы эритроцитов разрушаются протеолитическими ферментами
и формальдегидом, но устойчивы к нейраминидазе, дезоксихолату натрия и перйодату ка-
лия. В сыворотке больных лошадей содержатся анти-ГА. В РТГА вирус каждого штамма
ингибируется только гомологичной антисывороткой. Появление в сыворотках крови анти-
ГА предшествует появлению у них ВНА. Вирус ИНАН адсорбируется на лошадиных эрит-
роцитах, гемолиз их происходит после инкубации со свежей сывороткой крови лошади или
морских свинок при 37°С. Эритроциты, обработанные 4 ед. ГА и неразведениой свежей сы-
вороткой лошади, лизируются на 20%, в то время как при обработке 4 ед. комплемента мор-
414
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ской свинки - на 100%. Специфическая сыворотка лошади подавляет способность вируса
агглютинировать эритроциты, но гемолиз не тормозит. Добавление специфической сыво-
ротки к вирусу, уже прикрепившемуся на эритроцитах, усиливает гемолиз.
Гемадсорбирующие свойства. Наблюдали адсорбцию эритроцитов морской свинки на
инфицированной вирусом культуре клеток кожно-мышечной ткани эмбриона лошади.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные лошади. Осо-
бенно опасны животные в период острого течения болезни и хроники в период обострения
болезни, так как в это время вирус в организме лошадей находится в наибольшей концен-
трации. Источниками инфекции могут быть также лошади с латентными формами болезни.
Вирусоносительство у них может продолжаться 7-10 и даже 18 лет (3). Необходимо также
учитывать возможность распространения возбудителя лошадьми при латентном течении
инфекции. Факторами передачи возбудителя могут быть загрязненные выделениями боль-
ной лошади корма, вода, навоз, предметы ухода и т.д. В организме восприимчивого живот-
ного вирус попадает через кожу, слизистые оболочки и ЖКТ. Последний путь заражения, по
наблюдениям многих авторов, не считается ведущим. Заражение ИНАН возможно при
случке и конгенитально - жеребят больными кобылами (28). Передача вируса может про-
изойти при проведении различных манипуляций с кровью, шприцем, при маллеинизации,
искусственном осеменении и т.д. (29). Однако основной путь переноса возбудителя от боль-
ных лошадей к здоровым - кровососущие насекомые: слепни, мухи-жигалки, комары, а так-
же от кобылы к жеребенку - внутриутробно или с молоком (44). Экспериментально установ-
лено заражение при совместном содержании животных.
ИНАН характеризуется выраженной стационарностью, сезонностью и определенным
ареалом. Болезнь чаще встречается в летне-осеннее время, в лесисто-болотистых с кислыми
неполноценными почвами, в период массового размножения и лёта жалящих насекомых
(гнус). Массовое заболевание лошадей наблюдают преимущественно в годы с жарким и су-
хим летом, а зимой и весной и в горных местностях - в виде спорадических случаев. Эпизо-
отия может продолжаться от 3-5 мес до 1-2 лет, протекая остро и подостро. Затем начинает
преобладать хроническое (медленное) и латентное течение. Факторы, ослабляющие рези-
стентность животного организма, - неполноценное кормление и сильное раздражение нерв-
ной системы животного, вызванное укусами кровососущих насекомых ( 1, 4, 8).
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях болеют
лошади всех возрастов и пород, а также ослы и мулы. Заболевшие жеребята часто погиба-
ют. Ослы более устойчивы к вирусу ИНАН, чем лошади. Болезнь у них чаще протекает по-
достро и хронически. В литературе описано несколько случаев ИНАН, кровь которых была
заразна для лошадей.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на ИНАН ставят комплексно. Учитывают эпизоотологические особенности бо-
лезни, результаты клинического, гематологического и лабораторного исследований, патоло-
гоанатомические и гистологические изменения. Эпизоотологические данные собирают непо-
средственно в хозяйстве, учитывая давность и характер болезни, пути заноса инфекции, ди-
намику заболеваемости и падежа лошадей за несколько предшествующих лет. Принимают
во внимание, что массовые вспышки ИНАН наблюдаются исключительно летом и осенью, а
спорадические случаи - в любое время года. Кроме традиционного подсчета эритроцитов,
убедительным диагностическим методом является подсчет числа звездчатых лейкоцитов.
При клиническом обследовании учитывают различия в течении болезни, рецидивирую-
щий тип лихорадки при подострой и хронической анемиях, кровоизлияния на слизистых
оболочках, исхудание при нормальном аппетите, шаткость зада, отеки, повышенную возбу-
; димость сердца (аритмия, учащение пульса). Повышенную возбудимость сердца устанавли-
415
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
вают функциональной пробой: пробег 50 м, подсчет пульса каждые 5 сек в течение 0,5 мин.
Результат от деления первой цифры подсчета на последнюю цифру у больных анемией ло-
шадей должен составлять 2,5-3. Гематологическим исследованием обнаруживают лимфоци-
тоз, анемию (уменьшение числа эритроцитов в 4-8 раз по сравнению с нормой), увеличен-
ную СОЭ. Убедительным диагностическим тестом является подсчет звездчатых лейкоцитов.
Из патоморфологических изменений для острого течения болезни наиболее характерными
являются бледность и желтушность слизистых и серозных покровов и подкожной клетчатки,
точечные геморрагии в конъюнктиву, слизистую оболочку носа, увеличение селезенки, пе-
чени, почек, усиление пролиферации лимфоидных клеток и гистиоцитов в этих органах и
отложение гемосидерина в печени при одновременном уменьшении количества его в селе-
зенке. Указанные изменения наблюдают в период рецидива болезни. В хронических случаях
характерными признаками являются почти полное отсутствие гемосидерина в селезенке и
накопление его в других органах, гломерулонефрит, эндо- и миокардит, интенсивная лим-
фоидно-гистиоцитарная реакция в селезенке, лимфоузлах, печени, почках в сочетании с
некродистрофическими изменениями паренхиматозных клеток. Из серологических реакций
для диагностики ИНАН вначале была предложена РСК, в которой первоначально использо-
вали АТ, полученный из селезенки больной лошади, а затем культуральный. Последний по-
лучен на культуре лейкоцитов лошади японскими исследователями Kono и др.(30а).
Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют для серологического ис-
следования 5-6 мл сыворотки крови лошадей, которую консервируют мертиолятом 1:10000
или путем добавления антибиотиков (пенициллина и стрептомицина по 1000 ЕД/мл) и хра-
нят при температуре 4-8°С. Сыворотки без консерванта хранят в замороженном состоянии.
Для гематологического исследования направляют 10-12 мл крови, стабилизированной 20%-
ным р-ром лимоннокислого натрия. Кровь берут до поения и кормления животного. Для
гистологического исследования берут кусочки печени, селезенки, сердца, легких, лимфоуз-
лов и почек от павших или убитых с диагностической целью лошадей. Материал помещают
в 10%-ный р-р формалина. Толщина кусочков не должна превышать 2 см. Для постановки
биопробы на жеребятах берут по 300-500 мл крови от наиболее подозрительных по заболе-
ванию ИНАН лошадей во время подъема температуры.
Индикация и идентификация вируса
Биопроба. В сомнительных случаях для проверки особо ценных лошадей ставят био-
пробу на жеребятах. При исследованиии сывороток лошадей-продуцентов ставят групповую
биопробу. С этой целью из благополучного хозяйства берут 2-х жеребят в возрасте 6-12 мес,
4-кратно, с интервалом 7 дн, их обследуют клинико-гематологически и серологически. За-
тем жеребят заражают сывороткой крови или плазмой, полученной от больных лошадей.
Сыворотку крови и плазму предварительно проверяют на стерильность (на МПА, МПБ и
МППБ) и безвредность (на 3-х белых мышах, вводя ее подкожно или внутривенно в дозе 1
мл). Сыворотку вводят жеребятам подкожно или внутривенно в дозе 100-200 мл, дефибри-
нированную кровь - только подкожно в той же дозе. За зараженными животными наблю-
дают 90 дн, через каждые 10-15 дн проводят гематологические и серологические (в РДП)
исследования.
Биологическую пробу считают положительной при наличии у зараженных жеребят ха-
рактерных клинических симптомов, рецидивирующей лихорадки, слабости, бледности или
желтушности слизистых оболочек, исхудания и при получении положительных результатов
серологических и гематологических исследований. Жеребят, давших сомнительные резуль-
таты клинико-гематологических и серологических исследований, убивают и исследуют па-
тологоанатомически и гистологически. При положительном результате обнаруживают се-
розно-геморрагическую инфильтрацию подкожной и межмышечной клетчатки, гиперемию
и отек лимфоузлов, зернистую или жировую дистрофию скелетных мышц, миокарда, почек,
множественные кровоизлияния на слизистых, серозных оболочках и под капсулой органов.
416
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Селезенка сильно увеличена вследствие кровенаполнения пульпы. Печень гиперемирована,
увеличена, с выраженной дольчатостью на разрезе, паренхима имеет мускатный рисунок.
Во всех органах появляется реакция ретикулоэндотелиоза. Биопробу считают отрицательной
при отсутствии у подопытных жеребят симптомов болезни, отрицательных результатов се-
рологических и гематологических исследований. Групповую биопробу проводят путем за-
ражения двух жеребят смесью сыворотки (плазмы) крови 10-15 лошадей-продуцентов.
Смесь вводят подкожно по 100-200 мл каждому жеребенку.
Гистологические исследования. Приготовленные срезы органов окрашивают гематок-
силин-эозином общепринятым методом. Срезы для исследования на гемосидерин окраши-
вают по Перлсу. Характер и степень изменений зависят от стадии болезни, количества ре-
цидивов, ремиссий и их продолжительности. Наиболее характерные изменения выражены в
печени и селезенке. При остром течении болезни в капиллярах печени - скопление гистио-
цитов, макрофагов и лимфоидных клеток. В макрофагах и клетках Купфера - гемосидерин.
Печеночные клетки в состоянии жировой или зернистой дистрофии. В селезенке красная
пульпа переполнена кровью, количество гемосидерина резко снижено или, наоборот, крове-
• наполнение слабое, а фолликулы гиперплазированы, количество гемосидерина в норме или
несколько выше. В почках и сердце - гиперемия, кровоизлияния, серозный отек интерсти-
ция, слабые пролифераты гистиоцигарных лимфоидных клеток, жировая или зернистая дис-
трофия, иногда небольшие отложения гемосидерина в эндотелиальных клетках и гистиоци-
тах. Лимфоузлы гиперемированы, с кровоизлияниями. Под плеврой - кровоизлияния.
При хроническом течении болезни могут быть следующие изменения: в печени - диф-
фузные пролифераты лимфоидных клеток и в меньшей степени мелких гистиоцитов, содер-
жащих гемосидерин. У животных, павших в период тяжелого обострения, в печени находят
скопления крупных гистиоцитов, нагруженных гемосидерином. В селезенке - диффузная ги-
перплазия и резкое уменьшение количества гемосидерина или его полное исчезновение. У
лошадей, павших во время приступа, в селезенке отмечают повышенное кровенаполнение
синусов и очаговое скопление эритроцитов в пульпе. В почках - продуктивный гломеруло-
нефрит, сосудистые клубочки увеличены и обогащены ядрами. Между канальцами и вокруг
сосудов скопления лимфоидных клеток. У животных, павших во время тяжелого лихора-
дочного приступа, в полости капсулы сосудистых клубочков находят серозный, а иногда се-
розно-геморрагический экссудат, гемосидерин - в клубочках и гистиоцитах. В сердце - оча-
говый или диффузный интерстициальный миокардит с преимущественным поражением
предсердий (особенно левого). В лимфоузлах - лимфоцитоз и незначительное отложение ге-
мосидерина. В легких - пролифераты лимфоидных клеток и гистиоцитов, нагруженных ге-
мосидерином. В поздних стадиях болезни в почках отмечают цирроз и склероз сосудистых
клубочков. В сердце - миофиброз и склероз миокарда и эндокарда. В период ремиссий из-
менения претерпевают обратное развитие или могут отсутствовать, за исключением стойких
необратимых процессов: лимфоцитоз паренхимы селезенки, хронический гломерулонефрит,
склерозы эндо- и миокарда.
Гематологические исследования. Включают определение количества гемоглобина,
эритроцитов и лейкоцитов, СОЭ, лейкоцитарной формулы. У больных животных отмечается
лимфоцитоз, особенно при подостром и хроническом течениях болезни. СОЭ резко увели-
чена, особенно в первые 15 мин (60-70 делений). Исследование крови проводят через каж-
дые 3 дн во время приступов лихорадки и не реже 1 раза в 10 дн в период ремиссий. Коли-
чество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева (или в электронном счет-
чике) по общепринятой методике. Гемоглобин определяют по общепринятому методу гемо-
метром Сали, полученный результат выражают в процентах. При анализе лейкоцитарной
формулы следует учитывать, что у здоровых жеребят в возрасте до 4-6 мес может иногда
наблюдаться повышенный процент лимфоцитов (до 60 %) (табл.XI.5). В начале болезни
при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и
27 Зак. № 171
417
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных ИНАН животных
эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной. В качестве до-
полнительных методов диагностики ИНАН используют исследование костномозгового
пунктата в динамике болезни - наиболее характерные изменения появляются во время лихо-
радки: резко уменьшается количество клеток эритробластической группы и увеличивается
количество клеток гистиоцитарно-моноцитарной группы. Во время длительных ремиссий
при хроническом течении болезни состояние клеток костного мозга не отличается от таково-
го у здоровых лошадей.
Таблица XI .5, Показатели крови здоровых и больных лошадей
Вид исследований Здоровые лошади нормаль- ной упитанности Больные ИНАН
Эритроциты, млн/мм3 5-9 4,5 и ниже
Гемоглобин, г% 7,6 5,0 и ниже
СОЭ, делений за 1 ч 45-60 66 и более
Лейкоциты, тыс/мм3 7-10 Без изменений
Лимфоциты, % 25-35 60-75
Определяют количество сидероцитов в периферической крови, которое увеличивается
с приступами лихорадки в течение 3-4 дн и часто продолжает нарастать после снижения
температуры тела. При рецидивах количество сидероцитов достигает 2 тыс. и более на 10
тыс. лейкоцитов в 1 мм3 крови, у лошадей с незначительной реакцией повышение числа си-
дероцитов иногда является единственным ранним показателем заболевания ИНАН. Опреде-
ляют количества гамма-глобулина в сыворотке крови, содержание которого у больных ло-
шадей резко возрастает, а отношение между альбуминовой и глобулиновой фракциями по-
нижается. Делают биопсию - прижизненное извлечение кусочков печени с последующим
гистологическим исследованием.
ИФ. В 1970 г. японские исследователи разработали метод непрямой ИФ для идентифи-
кации вируса ИНАН лошадей в культурах лейкоцитов лошади. Для этого используют цель-
ную сыворотку крови лошади или очищенную фракцию иммуноглобулинов. Метод эффек-
тивен только при высокой концентрации вируса. С его помощью можно проследить дина-
мику репродукции вируса в инфицированной клетке.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
РДП. Реакция нашла широкое применение в бывшем СССР. Она выявляет АТ к вирусу
в сыворотке крови при остром, хроническом и латентном течении инфекции. Помимо селе-
зенки от больных животных в качестве АГ можно использовать вирус ИНАН, культивируе-
мый в культуре лейкоцитов лошадей и инактивированный твином-80 и эфиром. В СНГ для
РДП биопромышленность выпускает диагностикум.
РСК. Одна из первых серологических реакций, предложенных для диагностики ИНАН.
Японскими исследователями показано, что вирус, полученный в культуре лейкоцитов, мож-
но использовать в качестве АГ в РСК с сыворотками больных ИНАН лошадей. КСА появ-
лялись у 79,1% экспериментально зараженных лошадей через 17-40 дн после введения им
вируса, у 78,2% - через 7-20 дн после появления первой температурной реакции, у некото-
рых больных лошадей титр АТ возрастал непосредственно перед температурной реакцией
или сразу после нее. АТ в крови больных лошадей обнаруживали от 2 до 60 дн. Вторично в
крови больных они не выявлялись.
РТГА. В отличие от РДП РТГА - более простой метод количественного определения АТ
к вирусу ИНАН. Авторы обнаруживали анти-ГА в крови жеребят одновременно с АТ, выяв-
ляемыми в РДП. РТГА проводили в объеме 0,1 мл с 0,2%-ной взвесью эритроцитов морской
свинки и 4 ГАЕ вируса. Перед постановкой ее сыворотки прогревают и адсорбируют акти-
418
ГлаваХ!. Family R^roviridae Ретровирусные инфекции
вированным углем. В качестве АГ служит концентрированная вируссодержащая культу-
ральная жидкость. Для культивирования вируса используют субкультуру кожно-мышечной
ткани эмбриона лошади.
НИФ. Установлена возможность использовать ее для определения АТ к вирусу ИНАН.
С 5-го дня после заражения монослоя дермальных клеток очаги концентрации АГ в виде яр-
ких пятен флюоресценции располагались внутри цитоплазмы в околоядерной области и
имели диаметр 0,5-3 мкм. Тест ИФ выявляет более низкие уровни АТ, чем РДП.
ELISA. Разработан ELISA с очищенным вирусным протеином Р26 в качестве АГ с
конъюгатом, реагирующим с IgG лошадей. Источником вируса служит сокультура переви-
ваемой линии дермальных клеток лошади, персистентно инфицированная вирусом, и клеток
почки эмбриона лошади. Обработка АГ в аффинной хроматографии позволяет освободиться
от появления неспецифических линий преципитации в РДП и повышает специфичность.
Оказался более чувствительным и эффективным по сравнению с РСК и РДП. Титр АТ, вы-
являемый методом, был в 1-2 тыс. раз выше, чем в РДП, и в 4 раза выше, чем в РСК (19,
43). Наибольшая корреляция между 2-мя тестами отмечена на 21-й день и позднее после
заражения. АТ в ELISA удается обнаружить через 1-4 г после заражения. Этот метод пред-
ложено использовать и для определения вирусного АГ, а также для оценки качества вакцин
(50). С 1983 г. в США диагностика ИНАН осуществляется конкурентным ИФА. Конкурент-
ный метод ELISA для обнаружения АТ оказался в 5-10 раз чувствительнее обычно принято-
го теста РДП (40). Помимо этого, для выявления АТ к вирусу ИНАН в сыворотках предло-
жено использовать в качестве АГ синтетические белки, соответствующие какому-либо анти-
генному сайту вируса. Хорошие результаты были получены с белком, состоящим из амино-
кислотных последовательностей 68-91 или 76-99 белка GP-45 оболочки вируса. АТ можно
также определять различными видами ИФА - прямым методом, конкурентным и методом 1-
2-ступенчатого сэндвича. Рекомендуются повторные серологические исследования лошадей
на ИНАН, поскольку в определенных фазах болезни лошади могут реагировать негативно.
Для идентификации вируса ИНАН в культуре лейкоцитов лошади японскими учеными
предложен и непрямой ИФА. Однако этот метод оказался эффективным лишь при наличии
большой концентрации вируса в клетке. Для выявления вируса в сыворотке крови лошади с
острым и подострым течением болезни можно использовать РГА (2). На ранней стадии бо-
лезни выявить АТ к вирусу ИНАН позволяет ИФ (20). Некоторые авторы (19) наиболее на-
дежным и чувствительным методом индикации вируса ИНАН у лошадей считают метод за-
ражения пони.
Дифференциальная диагностика
При постановке диагноза на ИНАН следует исключить пироплазмоз, нутталиоз, трипа-
носомоз, лептоспироз, грипп, ринопневмонию. Для пироплазмоза характерна сезонность:
апрель-май или август-сентябрь. Болезнь протекает остро, при исследовании крови обнару-
живают пироплазмы. При нутталиозе максимум больных выявляют в июне. Болезнь проте-
кает остро и подостро. В крови находят нутталии. У лошадей, больных гемоспорцдиозами,
наблюдается резкая желтушность слизистых оболочек, имеющая стойкий характер, при
ИНАН она отсутствует. При гемоспоридиозах с первых же дней наблюдается резкое учаще-
ние дыхания - одышка (отек легких); у больных ИНАН со стороны органов дыхания, как
правило, особых отклонений от нормы нет. Наконец, при гемоспоридиозах у жеребят бо-
лезнь протекает латентно, а при ИНАН - тяжело, сопровождаясь высокой смертностью. Леп-
тоспироз исключается на основании исследования сывороток крови больных по реакции
микроагглютинации и лизиса, отсутствия лейкоцитоза и наличию лептоспир в моче. Болез-
ни вирусной этиологии (грипп, ринопневмония) отличаются от ИНАН высокой контагиозно-
стью, быстрым распространением, коротким течением. При диагностике этих болезней
применяют лабораторные методы: выделение вируса на КЭ и культурах клеток и дальней-
27*
419
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
шая их идентификация в серологических реакциях. Характерным симптомом гриппа лоша-
дей является сухой резкий кашель; вирус ринопневмонии вызывает у жеребых кобыл абор-
ты во второй половине жеребости. Однако отличием абортов, вызванных вирусом риноп-
невмонии, является отсутствие повышения температуры тела в день аборта и после него.
Аборты, причиной которых служит ИНАН, происходят во время лихорадки или выражен-
ной анемии и истощения.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет изучен недостаточно. Долгое время затяжной характер течения ИНАН н
длительное переживание (персистенция) возбудителя в организме животных объясняли на-
рушением или снижением иммунной реакции организма на вирус. И лишь исследованиями
последних 2-х десятилетий были обнаружены в сыворотке крови больных лошадей КСА (30,
45), ПА (17,18, 23), ВНА (46) и ИФ (11) АТ. АТ выявляют в период меящу 14-120-м дн по-
сле заражения, а иногда и на протяжении всей жизни животного. Однако связь между АТ и
степенью невосприимчивости лошадей к вирусу выяснена недостаточно. Так, образующиеся
ВНА не способны предотвратить рецидивы болезни или нейтрализовать вирус. Последние,
покрывая эритроциты, способствуют их быстрому разрушению, вызывая анемию. Установ-
лено, что 99% инфекционного вируса ИНАН, циркулирующего в крови, связано с АТ в виде
комплексов “АГ-АТ” (36). Недавно японские исследователи (32), изучая действие иммуно-
депрессантов на лошадей, зараженных вирусом ИНАН, пришли к выводу, что иммунитет
при этой болезни обусловлен функцией лимфоцитов. Показано также, что вирус ИНАН в
процессе длительного персистирования в организме лошади значительно изменяет свои
биологические свойства, что ставит под сомнение возможность эффективной вакцинации
против этой болезни (47). В последнее время в ряде стран (Франция, Япония, США) ученые
ведут интенсивные исследования по созданию вакцинных препаратов.
Профилактика и меры борьбы. До 1977 г. инфицированность поголовья лошадей в
США составляла 8-10%. Организация контроля инфекции на основе серологической диаг-
ностики, ограничений на перемещения и убой инфицированных животных снизили этот по-
казатель до 0,42-1,0 % (15). Поскольку лошади, больные ИНАН, и вирусоносители являются
опасными источниками возбудителя инфекции, при организации профилактики и мер борь-
бы необходимо своевременно выявлять и уничтожать таких животных (28, 33, 42). Для пре-
дупреждения заноса вируса в хозяйство вновь поступающих лошадей содержат изолирован-
но от остального поголовья (карантинируют) и в течение месяца тщательно исследуют. Хо-
зяйство, в котором установлена ИНАН, объявляют неблагополучным, на него накладывают
карантин и выполняют мероприятия согласно инструкции. Проводят тщательный клиниче-.
ский осмотр и исследование кровн лошадей. В зависимости от результатов исследований
животных делят на 3 группы: больных, подозрительных по заболеванию и подозреваемых в
заражении. Явно больных лошадей убивают. Продукты убоя после проварки используют в
корм плотоядным и птицам. Животных 2-й группы изолируют н тщательно исследуют до
уточнения диагноза (не более 45 дн). Больных уничтожают. Лошадей 3-й группы ежедневно
термометрируют и 2 раза в месяц подвергают врачебному осмотру. Животных используют
для работы в пределах неблагополучного хозяйства. Для предохранения лошадей от жаля-
щих насекомых их опрыскивают 3%-ным р-ром креолина, а во время работы используют
ленточные покрывала, пропитанные 10%-ным р-ром креолина. Помещения в неблагополуч-
ном хозяйстве дезинфицируют 4%-ным р-ром едкого натра 2 раза в месяц до снятия каран-
тина, а также после каждого нового случая выявления болезни. Изоляторы дезинфицируют
ежедневно, навоз из них сжигают. Навоз из неблагополучных конюшен обеззараживают
биотермически. Карантин снимают через 3 мес после последнего случая убоя или падежа
животного при условии, что в хозяйстве не осталось больных животных илн вирусоносите-
лей (при исследовании в РДП), для чего целесообразно провести групповую биопробу. Вы-
420
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
воз лошадей в другие хозяйства разрешается через 3 мес после снятия карантина и получе-
ния отрицательных результатов исследования сывороток крови в РДП. Согласно последним
научным и практическим разработкам по лабораторной диагностике болезни предложено
накладывать ограничения на неблагополучный по ИНАН пункт вместо применяемого ранее
карантина, где проводят мероприятия согласно новой инструкции. Запрещают ввод и вывод
лошадей, проводят поголовный клинический осмотр и серологические исследования. После-
дующие мероприятия проводят в зависимости от результатов лабораторных исследований.
Ограничения с хозяйства снимают после удаления всех положительно реагирующих лоша-
дей, получения 2-кратного отрицательного результата в РДП с интервалом между исследо-
ваниями в 45 дн и проведения заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий. Че-
рез 3 мес проводят 1-кратное контрольное исследование всего поголовья в РДП (1,2, 5,10).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Архипов Н.И. и др. Меда. инф. жив. Агропромиздат, 1987 :106. 2.Бычков В.Ф. и др. Тези-
сы докл Всесоюзн. конф. М. 1981 :179. З.Никитин М.Г. В кн. Эпизоотология, М. Колос,
1974 :247. 4.Сосов РФ. и др. Инфекц. и инваз. бол. лошадей, Колос, 1976 :61. б.Сюрин В.Н.
и др. Части, ветер, вирусол., Колос, 1979 :446. б.Сергеев В. А. и др. Структура и биол. вир.
жив. М, 1983. 7.Сергеев В.А. Вир. вакцины, Киев, 1993. 8.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир.
бол. животных, Колос, 1991 :308. 9.Тимаков В.Д. и др. Медицина, М., 1977, 51 :181.
Ю.Фомина Н.В. и др. Кн. Вирусы животных , MBA, 1991 :233. ll.Banks K.L. et.al. Infect
Immunol, 1973,8 .619. ll.Banks K.L. et.al. Lob Invect., 1972, 26 :701. 13.Carpener S. et.al. J
Virol 1991, 65, 3 :1605. 14.Carpener S. et.al. J Virol.,1987, 61 :3783. 15.Chobough D.L. Veter
Med, 1990, 85, 9 :1020. 16.Chong J. et.al. J Virol, 1991, 65, 2 :1013. 17.Coggins L. et.al.
Cornell Vet, 1970, 60 :330. 18.Coggins L. et.al. Am J Vet Res, 1972, 33 :11. 19.Evans K. et.al.
Amer J Vet Res, 1984, 45, 1 :20. 2O.Frenzel В et.al. Gamburg Vet Kongres, 1980 .161. 21.Held
J. et.al. J Amer Vet Med Assoc, 1983, 183, 3 :324. 22.Henson J.B. et.al. Am J Clin Pathol, 1971,
56 :306. 23.Henson J. et.al. Progr Med Virol, 1974, 18 :143. 24.Hussin K.A. et.al. Virol, 1987,
61 :2956, 25.1schii S. Arch Vet Sci 1963, 8 :263. 26.1ssel C.J. et.al. 21 st.Congr IABS Progr
Anim Retroviruses, Annecy, 1989, Proc. Symp. Basel, 1990 :49. 27.1ssel C.I. et.al. Vet
Microbiol, 1988, 17 :251. 28.Jubert L. et.al. Proct Vet eguine, 1981, 13, 3 :5. 29.Kabayaschi K.
Virus 1961b, YII, 249. ЗО.Копо V. Nat Inst Anim., Hlth. Guart., 1966., 9 :1. ЗОа.Копо Y. Arch
Virol, 1988, 98 :91, 31.Kono V. Nat Inst Anim Hlth Guart, 1973, 13 :182. 32.Kono V. Nat Inst
Anim, Hlth. Guart., 1974, 14 .155. 33.Ludwig H. et.al. Med. Microbiol.Immunol., 1973, 158
:275. 34.Malingust W.A. et.al. Arch, ges Virusforsch., 1973, 42 :361. 35.Mc.Guire T.C. et.al.
Am J Pathol, 1971, 62 :283. 36.McGuire T.C. et.al. Immunol Commun,1972, 1 :545.
37.Mc.Clure G.G. et.al. Am Vet Med Assoc, 1982, 180, 3 :279. 38.Payne S.L. et.al. J Virol,
1987, 61 :1266. 39.Payne S.L. et.al. Virology, 1989, 172 :609. 40.Peterson D. Virginia Com-
monhealth University - U391/02287, 1992. 41.Rwambo R.M. et.al. Arch Virol, 1990, 111 :275.
41a.Roberts M.M. et.al. Bioch and Bioph Res Commun, 1989, 160, 486. 42. Shen D.T. et.al. Am
J Vet Res, 1984, 45, 8 :1542. 43.Suzuki T. et.al. Vet Microbiol, 1982, 7, 4 :307. 44.Taschjian
Robert I. J Am Vet Med Assoc, 1984, 184, 3 :282. 45.Tajima et.al. J Virol, 1969, 4 :521.
46.Tanaka K. et.al. Nat Inst Anomol, Hlth, Guart, 1962, 2 :128. 47.Toma B. et.al. Rec Med Vet,
1974, 150, 1037. 48.Valpotic J et.al. Vet Arch, 1984, 54, 75 :97. 49.Voshino T. et.al. Jap J Vet
Sci, 1982, 44, 4 :629. 5O.Vukun D. et.al. Sci agr, 1983, 1 :81. 51.Willbold D et.al. Biol Chem
(Hoppe -Seyler 1993, 374, 9 :685).
421
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ВИСНА-МАЭДИ
Progressive intestinalle pneumonie, Montana progressive pneumonia, Marsch's
pneumonia, Graaf Reinet disease, Laikipia lung diseaese (англ.); Maedi und
Visna (нем.); Bouhite (франц.); Zwoegerziekte (нидерл.)
Висна-маэди - составное название 2-х медленно развивающихся инфекционных болез-
ней овец, имеющих общую вирусную этиологию. Висна-маэди - термин, обозначающий 2
симптомокомплекса, связанных с патологией ЦНС (менингоэнцефалита), либо с хрониче-
ской прогрессирующей интерстициальной пневмонией.
С 1935 по 1951 гг. на многих фермах южной и юго-западной частях Исландии регист-
рировались периодические случаи неизвестного ранее заболевания овец с явлениями пара-
личей. Болезнь получила название “висна”, что в переводе с древнескандинавского означало
“съёживание” или “чахицерей”, отражая развитие характерных симптомов у парализован-
ных овец. Позднее в этих же районах появились случаи заболевания овец хронической про-
грессирующей пневмонией, которое получило название “маэди”, что означает одышку -
наиболее характерный признак болезни (1,2,4, 5,11).
Разделение 2-х заболеваний продолжалось до тех пор, пока в течение 1957-1958 гг.
группой исландских исследователей не был выделен вирус из культур клеток, приготовлен-
ных из мозга овец, поражённых висной. Выделенный вирус воспроизводил картину висны
после внутримозгового его введения здоровым овцам. В США прогрессирующая форма
пневмонии овец была зарегистрирована в штате Монтана в 1915 г. В штате Айдахо среди
овец, выбракованных для убоя, положительно реагирующих в серологических реакциях бы-
ло 67,5%, в штате Юта - 45 %, в штате Колорадо - 41,7 %, в штате Калифорния - 37%, шта-
тах Северо-Запада - 30,2 %, штата Аризона - 29 %, Техас и Оклахома по 1 %. В отдельных
стадах штата Айдахо поражённость поголовья достигла 58-90 %. У годовиков заболевае-
мость составляла в среднем 25 %, у 7-летних - 85 % (58). Специалисты считали, что про-
грессирующей пневмонией поражены почти все стада страны. Предполагают, что в мире
инфицировано 20-30 % всего поголовья овец (99). Поражённость овец разных пород неоди-
накова. В порядке возрастания показателя они располагаются так: гемпшир, суффольк, рам-
булье, колумбия, шевиот (71). С 1970 г. висна-маэди регистрируется в Канаде (124).
В Исландии впервые сообщили о маэди в 1939 г. Позднее зарегистрировали висну. Бо-
лезнь быстро распространилась, принося ежегодные потери, которые на некоторых фермах
достигали 20-30% поголовья (27). В 1944 г. была внедрена “убойная” программа. Она бьиа
завершена в 1952 г., но в 1954 г. началась новая вспышка маэди и “убойную” программу
возобновили. Примерно 105000 овец пали в результате заболевания и 650000 было убито.
Висну-маэди не регистрировали в Исландии до 1965 г., хотя наблюдения и эксперименталь-
ная работа продолжались. Истоки этого заболевания в Исландии связаны с импортом кара-
кульских овец из Германии весной 1933 г. Инфекция была завезена по крайней мере с двумя
баранами. Вирус висны был выделен при экспериментальном заражении, а маэди - при
спонтанном в период вспышки заболевания с 1954 по 1965 г. (69).
Первые признаки заболевания у овец проявлялись в 4-5-летнем возрасте (59). В Нидер-
ландах прогрессирующую форму пневмонии у овец начали регистрировать с 1918 г. При се-
рологическом обследовании поголовья овец в некоторых районах с использованием РИД и
РСК было выявлено инфицирование 80 % животных из 3000 отар, причём положительно
реагировало до 30 % овец в возрасте 1 г. В этой стране висной-маэди поражены все стада,
включая 3/4 поголовья племенных животных. В некоторых племенных стадах отход поголо-
вья достигал 15 %. Великобритания прекратила импорт овец породы тексель из Нидерлан-
дов, т.к. они были наиболее восприимчивы к висне-маэди. Во Франции идентифицировали
422
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
висну-маэди в департаменте Мозель у импортированных из Голландии овец тексель (27). В
1978 г. был поставлен серологический диагноз, а в 1979 г. выделены животные с клиниче-
скими признаками болезни (16). На основе данных гистологических и серологических ис-
следований во Франции выявлено 9 очагов неблагополучия овец по висне-маэди (96). В де-
партаменте Верхние Альпы положительно реагировали все стада овец (17). В 1981 г. маэди
впервые выявлена у овец в Швейцарии. Болезнь протекала с характерными клиническими
симптомами и диагноз подтверждён патоморфологическими исследованиями (129). Ущерб
овцеводству наносит висна-маэди в Дании (14). В Испании вспышка маэди среди овец
впервые зарегистрирована в 1930 г. после ввоза каракульских овец из Германии (ПО). В
ФРГ выявлены серологически реагирующие овцы породы тексель. Несколько случаев забо-
левания зарегистрировано у овец остфризской породы. У серопозитивных мериносовых
овец анатомических нарушений во внутренних органах не обнаруживали (118) от несколь-
ких месяцев до нескольких лет. Исход всегда летальный.
В РФ и странах СНГ висна-маэди регистрируется с 1980 г. (3, 4,7).
Клинические признаки. Если заболевание развивается в виде хронической прогресси-
рующей пневмонии (форма маэди) у взрослых овец в возрасте 3-4 лет и старше, первым
симптомом часто является низкая масса животных. Затем появляется одышка при нагрузке,
позднее в состоянии покоя, а также сухой кашель. Характерно отсутствие симптомов остро-
го заболевания. Количество лейкоцитов при этой форме заболевания чаще выше, чем при
менинголейкоэнцефалите. Начало болезни незаметное. Появлению клинических симптомов
часто предшествует лейкоцитоз, который может обнаруживаться за год до проявления бо-
лезни. Первыми симптомами болезни обычно бывают медленно прогрессирующая слабость
и потеря массы. Слабость становится особенно заметной после физической нагрузки, на-
пример, после длительных перегонов, а также при ухудшении погодных условий. Дыхание
может быть нормальным в покое и учащаться при нагрузке. Больные животные отстают от
стада. С развитием болезни нарастает одышка, дыхание становится затруднённым, частота
его достигает 80-20 движений в 1 мин в покое. Дыхательные движения часто сопровожда-
ются ритмичными движениями головы и боков. Могут наблюдаться истечения из носа. В
некоторых случаях выражен кашель. Температура тела повышается выше нормы только в
том случае, если присоединяется вторичная инфекция. При перкуссии определяют расши-
рение границ нормального лёгочного звука, при аускультации прослушивается бронхиаль-
ное дыхание и усиление бронхофонии (97).
С развитием болезни прогрессирует истощение животных, развивается гипохромная
анемия. Отмечается снижение количества общего белка в плазме за счёт альбуминовой
фракции. Количество лейкоцитов обычно повышено. Клиническая стадия болезни длится 4-
7 мес, в отдельных случаях болезнь может продолжаться несколько лет. Все животные, у
которых выявляются симптомы болезни, неизменно погибают в результате удушья. Ноздри
могут быть воспалены, отмечается сухой кашель. Дыхание становится затруднённым даже в
покое, большую часть времени животное лежит. Если болезнь не осложняется вторичной
бактериальной пневмонией лихорадка отсутствует и гибель наступает в результате удушья.
Клиническая фаза обычно продолжается от 3 до 8 мес, но при неблагоприятных услови-
ях она может сократиться, или наоборот, в хороших условиях содержания - увеличиться. На
начало проявления клинических признаков могут влиять также стрессовые факторы - бере-
менность, лактация, плохая погода. Суягные овцы могут абортировать. В стаде маэди вна-
чале распространяется медленно и обычно в течение первых 5-6 лет после проникновения
инфекции потерь не наблюдают. В последующие 3-4 года падёж быстро возрастает, дости-
гая 20-30% в год. Часто овцы погибают от вторичной бактериальной инфекции, которая за-
трудняет диагностику маэди (69, 89, 124). В Шотландии зарегистрированы хозяйства, не-
423
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
благополучные по маэди в течение 10 лет (по результатам серологии) без случаев клиниче-
ского проявления болезни.
Клинические признаки маэди у овец во Франции не проявляются (88). При обследова-
нии 80 тексельских и помесных серопозитивных овец выявлено лишь учащение дыхания
(55-60 в 1 мин) и сильное исхудание при хорошем аппетите. Кашля, истечений из носа не
наблюдали. Перкуссионная поверхность была увеличена, при аускультации отмечали шум-
ный вдох и громкий выдох. В стаде серопозитивные животные составляли 43% (97, 98).
Маэди проявляется чаще чем висна. Клиника висны наблюдается редко. Исключение -
данные из Исландии (26). В этой стране в нескольких отарах потери от висны были больше,
чем от маэди. Гибель поражённых животных - 100% (56, 65). В 1968 г. в штате Монтана
(США) от овец с хронической прогрессирующей пневмонией был выделен вирус (66,67), ко-
торый первоначально расценили как возбудитель самостоятельного заболевания, именовав-
шегося “хрони-ческой прогрессирующей пневмонией овец Монтана”. Однако вскоре было
доказано, что этот, якобы новый, вирус оказался весьма близок вирусу висны (121).
Патологические изменения. При висне первичные признаки поражения ЦНС прояв-
ляются в виде менингиальных и субэпидермальных инфильтратов или пролиферации клеток
РЭС, а также лимфоцитов и микроглии. В белом и сером веществе развиваются воспали-
тельные процессы с периваскулярными инфильтратами круглых клеток. Затем отмечают
диффузное разрушение и демиелинизацию белого вещества головного мозга, мозжечка, ко-
стного мозга, продолговатого и спинного мозга. Серое вещество обычно задето незначи-
тельно. Повреждения чаще расположены вблизи желудочков и канальцев мозга. В спинном
мозге можно найти повреждения в любой части белого вещества. Часто обнаруживают по-
ражения боковых столбов вблизи задних рогов. Повреждения спинного мозга достигают
обычно мозговых оболочек.
При лёгочной форме висны лёгкие овец макроскопически имеют особый серый цвет.
Изменения при маэди локализуются в лёгких и лимфоузлах грудной полости. Показатель-
ным признаком болезни является масса лёгких, в тяжёлых случаях она возрастает в 2-4 раза
по сравнению с нормой. Увеличивается объём лёгких, при вскрытии грудной полости они
лишь слегка опадают. Однако увеличение размера не так значительно, как увеличение мас-
сы. Форма увеличенных лёгких сохраняется нормальной, ткань лёгкого диффузно уплотня-
ется и по консистенции напоминает губчатую резину. Цвет лёгких изменяется и варьирует
от серо-голубоватого до серовато-бежевого. Наиболее выраженные изменения обычно лока-
лизуются в диафрагмальных долях и менее поражены кардиальные и апикальные доли, но
отчётливая граница между поражёнными и здоровыми участками тканей лёгкого при маэди
не определяется. На разрезе ткани лёгкого суховаты. Трахеобронхиальные и медиастиналь-
ные лимфоузлы увеличиваются часто в 3-5 раз по сравнению с нормой за счёт гиперплазии
кортикальных элементов, поверхность разреза узлов гомогенна.
Гистологические изменения. Основным патоморфологическим изменением при маэди
является хроническая интерстициальная пневмония с диффузным утолщением межальвео-
лярных перегородок, иногда ведущим к полной облитерации альвеол (Рис. 63). Перегородки
утолщаются, главным образом, за счёт инфильтрации большими мононуклеарными клетка-
ми и в меньшей степени - за счёт лимфоцитов. Часто наблюдается гиперплазия гладких
мышечных волокон альвеолярных стенок, и всегда заметна пролиферация лимфоидной тка-
ни. В мелких бронхиолах часто находят гиперплазию эпителия, которая может сопровож-
даться дезорганизацией и эпителизацией прилежащих альвеол (7,41, 42, 49).
Лимфоидная гиперплазия распространяется на всю поражённую паренхиму лёгких или
концентрируется в периваскулярных и перибронхиальвеолярных пространствах; может на-
блюдаться комбинация диффузной и локализованной гиперплазии. Пролиферативные лим-
фоидные узлы могут содержать герминативные центры. Эту лимфоидную пролиферацию
424
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
особенно подчёркивал во Франции F.Lucam (73), который описал её даже как злокачествен-
ную. При неосложненном течении маэди полиморфноядерные лейкоциты не найдены. В от-
сутствие бактериальной инфекции не обнаруживаются признаки экссудативного или некро-
тического бронхита или бронхиолита. Наблюдается реакция на параваскулярную лимфоид-
ную гиперплазию и пролиферацию эпителия в малых бронхах и бронхиолах, сопровож-
дающаяся в далеко зашедших случаях эпителизацией. Наблюдают также значительное уве-
личение регионарных лимфоузлов в области верхушек лёгких (104,105).
Патогенез. Патогенез болезни изучен недостаточно. Изучение патогенеза висны прак-
тически стало возможным после открытия способности вируса репродуцироваться в клеточ-
ных культурах. У овец с лёгочной формой висны развивались обе формы заболевания неза-
висимо от способа заражения (46, 47, 48). Эго системное инфекционное заболевание с по-
ражением селезёнки и лимфоузлов. Лёгкие и ЦНС являются органами - мишениями, в кото-
рых наблюдаются патологические изменения. Вначале обнаруживают небольшие инфильт-
рации лейкоцитами и моноцитами. По-видимому, они являются носителями вируса (8). На-
рушения при болезни висна-маэди связаны с иммунологической системой хозяина. Данные
о развитии мутантов вируса могут частично объяснить его персистенцию у инфицированно-
го животного (83). Существенным является и присутствие в большинстве инфицированных
клеток латентной провирусной ДНК. Вирусная репликация на время (до благоприятных ус-
ловий) может блокироваться. Таким образом, заражённая овца обычно несёт в себе более
одного штамма вируса и способна к реинфекции штаммов, к которому её имунная система
несенсибилизирована (34,107).
Болезнь прогрессирует медленно. Известно, что вирус персистирует в организме инфи-
цированных овец 8 и более лет, вызывает поражения в ЦНС или лёгких, которые могут при-
водить к развитию симптомов, или они так и не развиваются в течение жизни животного.
При экспериментальном заражении вирусом маэди обычно необходимо 2-4 года, прежде
чем могут быть обнаружены макроскопические поражения в лёгких, но в течение этого пе-
риода происходят изменения, обнаруживаемые при микроскопическом исследовании, а так-
же постепенно увеличивается масса лёгких.
Роль АТ в патогенезе инфекции неясна. При экспериментальном инфицировании овец
вирусом висна-маэди через несколько недель АТ могут быть обнаружены в сыворотке крови
непрямым методом РИФ или РСК (31). Вирусспецифическая стимуляция лимфоцитов выяв-
ляется через 2-7 нед, а КСА обнаруживаются в период от 7 нед до 3 мес после заражения
(112,114), ВНА выявляются позднее. Серьёзные поражения лёгких и мозга, проявляющиеся
клиническими симптомами болезни, могут наблюдаться как при высоком титре АТ в сыво-
ротке, так и в отсутствие АТ (48, 127). Отличительной особенностью болезни является пер-
систенция возбудителя, несмотря на ранний иммунный ответ, в противоположность другим
инфекциям наблюдается не только персистенция возбудителя, но и прогрессирование болез-
ни, а присутствие АТ говорит скорее о том, что животное остаётся инфицированным, а не о
том, что оно выздоровело и приобрело невосприимчивость (109).
Из лейкоцитарной массы крови вирус выделяют при наличии в сыворотке крови специ-
фических АТ, в том числе ВНА. Высказано предложение, что лимфоциты являются не толь-
ко носителями вируса, но и местом, где он репродуцируется. Как отмечалось, вирус присут-
ствует во многих тканях, однако характерные гистопатологические изменения локализуется
в тканях мозга при висне и в лёгких при маэди, что говорит об особенностях взаимодейст-
вия системы вирус - клетка. При висне вирус с большим успехом может быть выделен из
сосудистого сплетения, чем из других тканей. Тяжесть гистопатологических изменений не
зависит от длительности инкубационного периода и возраста хозяина. Работами ряда авто-
ров было показано, что патология при висне скорее опосредована иммунопатологией и не
является результатом прямого ЦПД вируса. Изменения усиливаются у инфицированных
425
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
животных после введения инактивированной вакцины с адъювантом Фрейнда, а введение
иммуносупрессоров (антисыворотки против тимоцитов овцы и циклофосфамида) в боль-
шинстве случаев предотвращало развитие гистопатологии. Демиелинизация при висне мо-
жет быть результатом воздействия на поверхность инфицированных клеток глии комплекса
антиген - антитело или иммунопатологическим процессом того же типа, что наблюдается
при экспериментальном аллергическом энцефаломиелите (120). Высказано также предпо-
ложение, что патология при висне возникает в результате воздействия клеточного иммуни-
тета на АГ изменённые клетки хозяина (44).
D. Griffin и др. (44) показали, что при экспериментальной инфекции висны наблюдается
вирусспецифический клеточный иммунитет, но он непродолжителен и через несколько не-
дель после инфицирования снижается. Полученные экспериментальные данные позволяют
считать, что у овец, инфицированных вирусом висны, развивается ранний иммунный ответ,
подобный иммунному ответу при острых вирусных инфекциях, но элиминация вируса не
происходит, и он персистирует в присутствии гуморального и клеточного иммунного ответа.
Обычно вирус в тканях обнаруживается в невысоких титрах, что говорит о медленной его
репликации. Механизм персистенции вируса неясен. G.Petursson и др. (91) высказали пред-
ложение, что в основе персистенции вируса при наличии иммунного ответа хозяина лежит
носительство лейкоцитами крови латентного вируса генома или провируса. А.Т. Haase и др.
(51) показали, что провирусная ДНК может быть обнаружена методом гибридизации в яд-
рах клеток сосудистого сплетения мозга ягнят.
Вирус, почкуясь от поверхности инфицированных клеток, приобретает оболочку, кото-
рая включает материал клеточной мембраны, обладающий антигенной специфичностью
клетки-хозяина, что возможно, снижает эффективность воздействия иммунных механизмов
на вирус (90). Возможно также, что вирус сам вызывает какую-то модификацию предшест-
венников клеток, которые играют активную роль в иммунном ответе животных. Последнее
приводит к формированию АТ с низкой способностью к связыванию вируса и к его нейтра-
лизации (87). В сыворотке и цереброспинальной жидкости здоровых овец были обнаруже-
ны факторы, ингибирующие вирус висны (128). Предполагают, что ингибирующие факторы,
которые, возможно, являются лимфопротеинами, могут сдерживать распространение вируса
в организме инфицированных овец. Вирус, хотя и относится к РНК-содержащим опухоле-
вым, как правило, не является онкогенным для подопытных животных. Почти в каждом
случае висны-маэди обнаруживается лимфоидная пролиферация в лёгких и в ЦНС, а также
лимфоидная гиперплазия лимфоузлов и селезёнки. Общепринятая точка зрения - лимфоид-
ная реакция представляет собой ответ на инфекцию и по своей природе не является злока-
чественной.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Вирус впервые выделен в 1957 г. (39). Он отно-
сится к семейству Retroviridae, роду Lentivirus. Вирион гексагональной формы со стороной в
50 мм и общим диаметром от 90-100 до 107,5-123,3 нм, снаружи покрыт отростками длиной
8-10 нм (125). Вирион содержит электронноплотный сферический нуклеоид диаметром око-
ло 80 нм, который содержит волокнистые структуры диаметром 2,5 нм, свёрнутые в нуклео-
капсидную спираль диаметром 7-8 нм и шагом спирали в 5 нм (Рис. 64). Нуклеоид распо-
ложен эксцентрично и окружён двухслойной мембраной, внутренний слой толщиной в 1 нм
более компактный, чем наружный (72). По морфологии вирус висны-маэди напоминает С-
тип онкорнавирусов (12). От последних имеются два основных отличия: нуклеокапсула вис-
на-маэди формируется сразу при отделении от заражённых клеток; вирус висны-маэди теря-
ет вторую мембрану (27, 118). Особенностью вируса является способность образовывать
стабильные связи с клетками хозяина, что обеспечивает его устойчивость. Иногда, помимо
описанных выше, в культурах клеток встречаются более крупные частицы, которые предпо-
426
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ложительно рассматривают как Д-частицы. Агенты отличаются малыми размерами (15-40
нм), устойчивостью к теплу, ультразвуковому и ионизирующему облучению (93). Плавучая
плотность вирионов в градиенте концентрации сахарозы равняется 1,148 г/см3 (72).
Характеристика генома. Вирион содержит молекулу 1-нитевой РНК с мол.м. 3,5-106,
константой седиментации 70S и общей длиной 9,3 мкм. Негативные молекулы состоят из
нескольких ковалентно несвязанных фрагментов, которые в ходе упаковки в вирион прини-
мают структуру кольца. Вирионная РНК содержит длинные (по 50-200 нуклеотидов) участки
полиадениловой кислоты. В реакции конкурентной гибридизации РНК вирусы висны и ма-
эди обладают взаимной способностью полностью конкурировать с ДНК, и в этой реакции
они проявляют себя как гомологичные. Однако с РНК вируса прогрессирующей пневмонии
овец (ППО) система гомологии первых 2-х вирусов достигла всего лишь 25%. Изучение
температурной стабильности гомологичных и гетерологичных гибридов РНК-к-ДНК полно-
стью подтвердили результаты конкурентной гибридизации (13б). Вирус ППО, по-видимому,
родствен вирусу висна, но не идентичен ему.
Изучены регуляторные гены вируса висны (132). Различают два варианта вируса висны-
маэди. Штаммы маэди характеризуются высоким тропизмом к тканям легких и вызывают
пневмонию овец, а штаммы висна с высоким тропизмом к нервной ткани вызывают энце-
фаломиелит. Однако эти различия не абсолютные. При секвенировании сегментов генов env
(500 п.н.) и gag (3450 п.н.) у этих вариантов вируса найдено небольшое различие нуклео-
тидных последовательностей (7-8% в гене env и 6% в gag) (10). Вирус висны-маэди содер-
жит 4 основных белка - gpl35, рЗО, pl6, р14 и белок rev (94). Суммарная мол.м. вирусных
белков составляет 66-104, что соответствует 2/3 “кодирующей ёмкости” генома вируса.
Белок rev вируса висны напоминает белок ВИЧ типа 2 обезьян. Он не накапливается в
ядре, а расположен в цитоплазме, не транспортируется к клеточной мембране и является
ранним белком. На поздней стадии заражения (через 72 ч) остающийся белок rev упаковы-
вается во внеклеточные частицы вируса висны. Заражённые клетки, экспрессирующие белок
rev, морфологически изменяются через 24 ч так, что rev может изменять клеточный метабо-
лизм. Белок rev трансактивирует экспрессию генов вируса, действуя на последовательность
LTR и стабилизирует и-РНК вируса в цитоплазме. Помимо того, данный белок в мембра-
нах заражённой клетки может проявлять свойства передающих белков, подобного белку Net
у ВИЧ (132, 72). В составе вирионов висны выявлена РНК-зависимая ДНК-полимераза
(обратная транскриптаза).
Вирус реплицируется в цитоплазме клеток хозяина и почкуется при выходе через кле-
точные мембраны. Он покрыт оболочкой (77, 88), которая участвует в механизме интегра-
ции с геном клетки (16, 113). С использованием метода гибридизации в настоящее время
проводят анализ синтеза вирусных нуклеиновых кислот в отдельных клетках культуры тка-
ни (51, 52).
Устойчивость. Вирус висны чувствителен к эфиру, хлороформу, этанолу, фенолу, фор-
мальдегиду, трипсину и метаперйодату (127). Он полностью утрачивает инфекционность
при 10-мин нагревании при 56°С, в среде с pH 4,2, но устойчив к действию щелочных зна-
чений pH, ДНК-азы, РНК-азы (107). Вирус в 10 раз устойчивее к инактивирующему дейст-
вию УФ-лучей, чем, например, вирусы полиомиелита, простого герпеса и НБ (125). Выра-
женное ингибирующее действие на вирус оказывают тиосемикарбазаны.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная вариабельность и родство. Возбудители висны-маэди в антигенном от-
ношении родственны, однако в Исландии циркулируют 2 варианта вируса висна-маэди;
штамм маэди с высоким тропизмом к лёгким - вызывает пневмонию овец, штаммы висны -
с высоким тропизмом к ЦНС и являются возбудителями энцефаломиелита. Однако эти раз-
личия не абсолютны. Рестрикционный анализ не обнаружил вариаций РНК среди штаммов
427
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
маэди и висны, ио различие рестрикционных сайтов между штаммами висны и маэди дос-
тигало 50%, образование генетических вариантов вирусов висна-маэди не является решаю-
щим для развития заболевания по крайней мере в случае висна (10). При инфицировании
овец вирусом отмечают, что 10% изолятов отличаются от типичного серотипа (90, 91, 92).
При персистировании в организме хозяина вирус висны претерпевает АГ-мутации. Измене-
ния связаны с геномной РНК. Этим можно объяснить, что виремия и выделение вируса в
окружающую среду не прекращается, несмотря на длительно сохраняющийся высокий уро-
вень содержания АТ у инфицированного животного (20, 110). В культурах клеток, содер-
жащих ВНА, наблюдают постоянную мутацию вируса (52). Мутанты с минимальными АГ-
изменениями связывались в организме животного или культуре клеток с “ранней” сыворот-
кой, а мутанты с большими изменениями - с “поздней” сывороткой, обладающей широким
спектром ВНА вследствие длительного течения болезни (80, 81). У инфицированного жи-
вотного максимальная нейтрализующая активность АТ отмечена при инкубировании в те-
чение 48 часов при 4°С, В цереброспинальной жидкости ВНА появляются позже. Клеточ-
ный иммунитет выявляют через 1 нед. После заражения он исчезает через 6 нед (78). Вирус
висна-маэди в клетках существует как провирус (вирусный геном связан с хромосомным
аппаратом клетки хозяина). АТ к ядерному протеину вируса появляются только у части ин-
фицированных овец через 3-24 мес, а к оболочечным гликопротеинам у 40-60% взрослых
овец - через 1-6 мес. (109). Референтным штаммом вируса является BR-151, выделенный
от овцы с Zworgerziegte, культивируемый в клетках хориоидного сплетения.
Локализация вируса. Вирус висны найден в лейкоцитах крови, лёгких, различных
лимфоидных органах и костном мозге. Весьма примечательно, что у части овец (около
14%), несмотря на выделение вируса и выявление специфических АТ, не развивалось кли-
нически выраженное заболевание (латентная инфекция) (37).
Вирусовыделение. Вирус выделяется с молоком, выдыхаемым воздухом, фекалиями.
Во время лактации до окота и после исскуственной индукции лактации гормонами в моло-
зиве и молоке природно-инфицированной овцы и сероположительиой по АГ висны-маэди
обнаруживали инфицированные клетки. Вирус был выделен в 12 из 14 исследованных об-
разцов молока. Продукция инфицированых клеток начиналась за 10 дн до окота и продол-
жалась в течение 2-х мес. Для профилактики рекомендуют при рождении отделять ягнят от
их матерей и снабжать неинфицированным молозивом (70). Уже через 2-3 нед после зара-
жения овец вирус висны обнаруживают в крови. В некоторых случаях его можно выделять в
течение нескольких лет, несмотря на присутствие в крови высоких титров ВНА. Обнаруже-
ние вируса после заражения в селезёнке, лёгких, лимфоузлах, хориоидном сплетении, поч-
ках, слюнных железах даёт основание предполагать гематогенный путь его распространения
в организме. Можно говорить о тропизме вируса висны к ретикулоэндотелиальной ткани,
так как вирус всегда находят не только в селезёнке и лимфоузлах, но и в лимфоцитах, и в
макрофагах (2, 82).
Антигенная активность. Заражения овец вирусом висна-маэди вызывает образование
АТ спустя различные сроки. По-видимому, они могут быть обнаружены на протяжении всей
жизни животного. В экспериментах ВНА выявляют через 2-3 мес после заражения, КСА -
через 3-4 нед АТ, выявляемые РИД, обнаруживаются на 2-8-й нед. В стаде, насчитывающем
свыше 50% сероположительных по маэди взрослых овец, этим методом выявляют АТ у яг-
нят 8-мес возраста (28, 87, 88). Задолго до появления ВНА обнаруживают флюоресцирую-
щие АТ (107). С помощью реакции пассивной гемагглютинации некоторая активность АТ
определяется во фракции IgM, в то время как остальные АТ были сконцентрированы во
фракции IgG. В сыворотке гипериммунизированных кроликов обнаруживали высокие титры
АТ с помощью реакции пассивной гемагглютинации, в более низких титрах определяли
КСА и флуоресцирующие АТ и не определяли ВНА (127). Позднее у овец были обнаруже-
428
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекдин
ны и ПА против вируса висны, которые, как оказалось, появляются в сыворотке уже через 2-
8 нед после заражения и находятся в ней, по крайней мере, 5,5 лет (срок наблюдения) (2).
ВНА появляются в сыворотке крови заражённых овец спустя 1,5-2 мес, титр их достигает
максимума через 2 года, а затем постепенно снижается, но не исчезает полностью. Невысо-
кие титры АТ могут быть обнаружены в спинномозговой жидкости (49).
Весьма примечательно, что PH с вирусом висны отличается большим своеобразием:
процесс нейтрализации протекает замедленно и требует для своего осуществления около 48
ч инкубации при 4°С, в то время как экспозиция смеси при 37°С в течение 1-2 ч оказывает-
ся недостаточной (126). Указанные особенности взаимодействия вируса с АТ (или некото-
рые из них) в системе in vitro являются отражением существующего своеобразия иммуните-
та при висне, что в большей степени обусловливается персистенцией инфекционного вируса
в лимфоцитах и особенно в макрофагах (82). Недавно это положение было уточнено (99).
Авторы показали, что в культурах макрофагов вирус висны, инкубирующийся вместе с АТ,
фагоцитируется быстрее, при этом происходит раздевание вируса, но транскрипции вирус-
ной РНК не происходит. Оказалось, что кинетика связывания АТ с вирусом ниже кинетики
связывания вируса с макрофагами. В подобных условиях персистенция вируса в организме
может обеспечиваться распространением его от макрофага к макрофагу до его нейтрализа-
ции. Поражения при висне являются результатом иммунопатологии, о чём свидетельствует
подавление клеточного иммунного ответа без подавления репродукции вируса в ЦНС (83).
Вирус висны характеризируется иммуносупрессирующим действием на организм заражён-
ных овец, что не исключает синтеза иммуноглобулинов разных классов.
Экспериментальная инфекция. Болезнь воспроизводится после интрацеребрального,
интрапульмонального, интратрахеального и интраназального введения вируса (101, 102,
103, 104, 105, 108). При заражении вирусом висна-маэди беременных овцематок в амнити-
ческую полость до 80-дн суягности происходила резорбция плодов. Все новорожденные яг-
нята были серонегативными, но к 18 мес возрасту стали серопозитивными (22). Во время
субклинического периода у овец основным симптомом является увеличение числа клеток в
спинномозговой жидкости, через 1-2 мес после внутримозгового заражения. Эти сдвиги со-
провождаются увеличением содержания у-глобулина в спинномозговой жидкости, крови и
слюне. Обнаружение у части заражённых интрацеребрально овец, не проявлявших клиниче-
ских симптомов, в мозговой ткани типичных для висны патогистологических изменений,
прямо свидетельствует о способности вируса висны формировать и поддерживать в орга-
низме заражённых животных латентную инфекцию (2).
Считают, что инфекция овец вирусом висны-маэди является ценной модельной систе-
мой для анализа клеточного состава, индуцированного лентивирусами и ведущего к повре-
ждению ткани. У заражённых внутритрахеально животных наблюдали лимфоцитарный
альвеолит с содержанием СД4 и СД8 лимфоцитов (21).
Интеграция генома вируса висны с геномом клеток заражённых животных. Молеку-
лярный механизм персистенции вируса висны в организме заражённого животного контро-
лируется путём ограничения транскрипции в клетке внехромосомной ДНК. Именно блока-
дой генов на уровне транскрипции объясняются низкие титры вируса висны у овец, в орга-
низме которых поддерживается процесс персистенции (40). По-видимому, в генезе этой
медленной вирусной инфекции участвуют различные механизмы. К их числу следует отне-
сти, кроме того, АГ дрейф.
Культивирование. Культивирование вируса висны может проводиться на естественно
восприимчивых овцах путем интрацеребральной инокуляции суспензии мозга, а вируса ма-
эди - путем введения вируссодержащего материала (главным образом суспензии тканей лег-
; кого) интратрахеально, интрапульмонально и внутривенно. К вирусу висны-маэди чувстви-
i тельны культуры клеток селезенки, сердца, мозжечка, тестикул, надпочечников, почек овец,
429
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
сосудистого сплетения телят, а также перевиваемые культуры клеток трахеи эмбриона телят,
быка и почки свиньи (9, 54, 55, 117). Ни в одной из культур клеток мышей вирус висны не
вызывает острой формы инфекционного процесса и для определения его репродукции в ка-
честве индикатора систем используют культуры клеток овец. Клетки хомячков, напротив,
оказались весьма чувствительными и в них развивалось четкое ЦПД вируса. Для продук-
тивного заражения клеток вирусом висны необходим функциональный ген rev (130).
Через 3 ч после заражения с высокой множественностью культур клеток BSC-1, Vero,
МК2, СVI и мышиных нейронов наступает слияние клеток, а через 8 ч клеточный пласт
полностью разрушается. Репродукция вируса при этом не происходит или она может быть
незначительной. Слияние клеток может наблюдаться и без разрушения клеточного пласта
при непродуктивной инфекции, как это наблюдали, например, при заражении вирусом вис-
ны культуры мышиных нейронов. Длительное культивирование вируса висны в культуре
клеток эритроцитов человека также приводит к его модификации. Предполагают, что это
происходит путем селекции под воздействием условий культивирования (79). Вирус облада-
ет способностью изменять клеточные мембраны, что приводит к слиянию клеток и образо-
ванию гигантского симпласта, содержащего группы ядер. В большинстве случаев инфекция
приводит к полному разрушению клеточного монослоя (106, 107). Быстро реплицирующие
штаммы вируса висны раньше всего выявляются в зараженных клеточных культурах с по-
мощью идентификации фокусов вирусной репликации in situ (через 2 дня после заражения).
С помощью стандартного ИФА на плашках вирус выявляется в культуральной жидкости че-
рез 6 дн после заражения. При заражении культуры клеток быстро реплицирующими штам-
мами обнаружение фокусов вирусной репликации на слюдинках или покровных стеклах
происходит через 6 дн после заражения (75). При культивировании адаптированного к куль-
туре клеток шт. вновь образованный вирус обнаруживается после латентного периода про-
должительностью 16-20 ч; в течение следующих 16 ч титр быстро возрастает. Репродукция
его продолжается до 96-120 ч пока не наступит полная дегенерация монослоя (33,120).
Пассируемый в культурах клеток вирус сохраняет способность вызывать инфекцию у
овец после интрацеребрального и интрапульмонального введения. Подобно другим ретрови-
русам типа С вирус висны-маэди почкуется от плазменных мембран инфицированных кле-
ток. Морфологически почка характеризуется электронно-плотной внутренней структурой в
форме полумесяца (25). Диаметр почкующихся частиц составляет приблизительно 100-120
нм. По мере созревания почки выступают в межклеточное пространство (1). Это наблюдает-
ся даже в тех случаях, когда вирус в клетке размножается, образуются также однородные,
преломляющие свет веретенообразные клетки. В системе in vitro подробно изучены ком-
плексы рибонуклеопротеидов (РНП) вируса висны, которые выделяли из инфицированных
клеток хориоидного сплетения. Выделенные РНП были инфекционны для клеток хориоид-
ного сплетения с выраженным цитопатогенным эффектом и продукцией инфекционных час-
тиц вируса (35, 36). Общим для всех клеточных культур является стимуляция репродукции
вируса висны в условиях поддерживающей среды. Репродукция инфекционного вируса, как
правило, происходит в небольшой части культуры, и после гибели этих клеток нередко в
системе формируется персистентная инфекция с очень незначительным выходом в пита-
тельную среду инфекционного вируса (2).
ГА- и ГАд свойства не установлены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Опубликованы сообщения о регистрации болезни у коз. В Индии описана гистопатоло-
гия маэди в легких больных коз (131) и выделен вирус из гомогенатов легких (53). Сероло-
гические исследования на висну-маэди среди коз были положительными в ФРГ и Норвегии
(68, 134). Отсутствуют прямые доказательства патогенности вируса для человека и КРС, но
вирус размножается в культурах клеток этих видов (127).
430
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекпии
Спектр патогенности в естественных условиях. Висна-маэди является, в основном,
заболеванием овец, но имеются сведения о заболевании коз. Вирус выделяли из лёгких за-
болевших коз в Индии и ФРГ. Серологическое доказательство наличия заболевания у коз
получено в Норвегии и Франции (27, 37). При культивировании клеток сосудистого сплете-
ния коз с симптомами висны выделен вирус, при ЭМ морфологически не отличимый от ви-
руса висны овец. Мол.м. РНК обоих вирусов была идентичной (119).
Источники и пути заражения. Источником инфекции служат инфицированные живот-
ные как с клиническими проявлениями болезни, так и на стадии инкубации. Считают, одна-
ко, что во время инкубационного периода инфицированные овцы нечасто являются источ-
ником вируса для окружающих здоровых овец, исключение представляет ситуация, когда
инфицированные овцематки заражают ягнят. В условиях пастбищного содержания контаги-
озность маэди явно значительно ниже, даже в клинической стадии болезни; содержание
овец в закрытых помещениях в зимнее время способствует распространению инфекции (43).
Полагают, что в естественных условиях вирус маэди передаётся воздушно-капельным путём
с инфицированным кормом, а входными воротами является респираторный тракт. Заболе-
вание не отличается высокой заразительностью: случаи заражения наблюдают при совмест-
ном содержании больных и здоровых овец в закрытых помещениях, тогда как в пастбищ-
ных условиях случаи заражения редки (1, 4, 6). Ягнята от инфицированных самок могут за-
ражаться при непосредственном контакте, с молозивом и молоком. Так, у овцематки, экспе-
риментально инфицированной за 3 г до опыта, при 1-м окоте поражённых ягнят выявили в
9-мес возрасте, при 2-ом в 7-12-нед возрасте. Таким образом, чем более длительный период
инфицировано животное, тем большее количество вируса оно содержит и тем выше уровень
заражения полученного приплода при совместном содержании (28,38).
Специфические для вируса висны-маэди АТ присутствуют в молозиве серопозитивных
самок и выявляются у подсосных ягнят (12, 38). В молозиве поражённых овец определено 4
класса иммуноглобулинов: IgGl, IgG2, IgA, IglOS и в сыворотке 3 класса - IgGl, IgG2, IgM
(122). С молозивом и молоком ягнята получают пассивные АТ до 2-мес возраста. Через 12
нед после рождения АТ у ягнят не обнаруживают. Собственные АТ к вирусу висна-маэди
появляются у ягнят с 12-мес возраста (74,111). При проверке 310 овец из стад с 58-90% се-
ропозитивных у 120 выявлен острый клинический мастит. При маститных поражениях в
молоке был изолирован вирус висны-маэди, который ассоциировал с лимфоцитами (59).
Особую опасность, как при многих других вирусных инфекциях, представляют бессим-
птомные формы висны. По данным экспериментальных исследований процент бессимптом-
ных случаев висны достаточно высок. Так, G.F.Boer (32) наблюдал у 86% клинически вы-
раженное заболевание у экспериментально заражённых овец. У 14% заражённых животных
этого не отмечалось, несмотря на выделение вируса и накопление АТ. Недавно в Италии из
хориоидного сплетения внешне здоровых овец был выделен вирус висны, на основании чего
было сделано заключение о распространении этого вируса среди поголовья овец в этой
стране (18,19). Свойственная болезни большая продолжительность предклинической стадии
приводит к тому, что скрытые источники вируса длительное время присутствуют в стаде. К
моменту выявления первых клинических случаев значительная часть поголовья может быть
поражена возбудителем. Так, имеются сообщения, что примерно через 10 лет после заноса
возбудителя овцы в стаде оставались клинически здоровыми, между тем как по результатам
серологических исследований более половины поголовья было инфицировано (123).
Как оказалось, пол и возраст не оказывают прямого влияния на чувствительность к
возбудителю инфекции. Ягнята, рождённые от инфицированных овцематок почти всегда
инфицируются, но это объясняется не физиологически обусловленной возрастной чувстви-
тельностью, а тем, что ягнята действительно содержатся в тесном контакте с источником
вируса. Так, серологическое обследование овец в Северной Дакоте (США) в РДП показало,
431
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
что среди 1-летних овец 23% составляли инфицированные, тогда как среди 7-летних про-
цент их достигал 80 (79). Сходные результаты о преимущественном поражении старых овец
получены при серологическом обследовании 3-х неблагополучных стад в штате Айдахо, со-
держащих 2310 взрослых овец (39). Обнаружили 60% серопозитивных среди однолетних и
83% среди 7-летних овец. При серологическом обследовании овец неблагополучного по ма-
эди хозяйства обнаружили среди 2-летних 7% инфицированных, среди 3-летних - 50, 4-
летних - 70, 5-летних - 82 и 7-летних - 100%. В Великобритании в неблагополучных хозяй-
ствах среди ягнят до 1 г. обнаружено 10% серопозитивных, у 2-5-летних овец - 70%. Эти
наблюдения доказывают, что инфицирование происходит при совместном содержании ин-
фицированных и неинфицированных взрослых овец, и чем длиннее срок совместного со-
держания, тем выше уровень заражения (1,4, 5).
Ограниченная информация имеется о возможном участии генетических факторов в оп-
ределении чувствительности к возбудителю. W. Gates и др. (39) исследовали поражённость
висна-маэди овец 6 пород в 3-х стадах, где условия содержания животных и практика веде-
ния хозяйства были примерно одинаковыми. Значительно более высокая поражённость
(77%) была обнаружена среди овец породы фан и значительно ниже (45%) - среди пароды
рамбулье. M.R.A.Light и др. (71), изучавшие поражённость маэди овец разных пород, уста-
новили, что она неодинакова, и по возрастанию этого показателя их можно расположить в
следующем порядке, гемпшир, рамбулье, Колумбия и шевиот. Известно, что с овцами кара-
кульской породы возбудитель висны-маэди занесён в Исландию (1939 г.), однако болезнь не
была обнаружена в том хозяйстве Германии, откуда поступили эти овцы. Во время эпизо-
отии в Исландии среди местных овец не было обнаружено резистентной к возбудителю ли-
нии, но позднее было выяснено, что наиболее резистентными являются гибриды, получен-
ные при скрещивании овец исландской породы и баранов англо-шотландских бордер-
лейстеров (71). Высокая инцидентность наблюдалась у овец породы тексель. В некоторых
племенных стадах в Голландии потери поголовья достигали 15%, в связи с чем Англия пре-
кратила импорт овец этой породы с 1976 г. Во Франции на фермах, где применялось про-
мышленное скрещивание с овцами породы тексель, падёж от маэди составил 10%. Исследо-
вания, проведённые в Шотландии и Нидерландах, показали, что вирус вертикальным путём
потомству не передаётся (14, 100). Передаётся ли вирус со спермой барана - неизвестно.
Висна-маэди может передаваться при попадании в корм здоровым овцам фекалий от боль-
ных животных. К распространению болезни приводит содержание заражённых овец вместе
со здоровыми даже в течение короткого периода. В Исландии поголовье стад от этой инфек-
ции сокращается наиболее быстро, так как овцы большую часть года проводят в закрытых
помещениях (14, 88). Пути распространения инфекции изучены недостаточно, однако не вы-
зывает сомнения факт инфицирования здоровых животных при совмесном содержании с
больными как в естественных условиях, так и в условиях эксперимента (103). P.A.Palsson
(86) считает весьма вероятным, что в естественных условиях болезнь распространяется воз-
душно-капельным путём. Экспериментально вирус передаётся также путём выпаивания здо-
ровым овцам воды, загрязнённой фекалиями больных овец. Непрямой путь распространения
возбудителя инфекции через инфицированные предметы, вероятно, происходит нечасто, о
чем свидетельствуют наблюдения, проведённые во время вспышки в Исландии, где через 1-
2 нед после убоя инфицированного поголовья в те же помещения завозили здоровых живот-
ных из благополучных районов. Несмотря на то, что заключительную дезинфекцию часто не
проводили, случаи болезни нового поголовья не регистрировали (86).
При изучении возможности участия в распространении возбудителя лёгочных гельмин-
тов Muellerus capillaris и овечьей кровососки Melophagus ovinus получены отрицательные
результаты (33, 102). Не получено прямых доказательств существования переносчиков ин-
фекции, но, учитывая тот факт, что вирус реплицируется в лимфоцитах и сохраняется в иих
432
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
как провирус, считается возможным участие членистоногих в эпизоотическом процессе.
Механическим средством распространения вируса могут служить необработанные иглы при
проведении массовых инъекций и отбора проб в неблагополучных стадах (27). Ягнята зара-
жаются от овцематок при совместном содержании, угроза заражения увеличивается при ос-
ложнённых окотах; вирус передаётся также через молозиво и молоко. Имеются сообщения о
выделении вируса из молока больных овец (30, 111). АТ, получаемые с молозивом от боль-
ных овец, не оказывают защитного действия. Распространение возбудителя через сперму не
доказано, хотя считают, что источником возбудителя во время вспышки в Исландии (103) и
Норвегии (68) были бараны. Попытки произвести трансплацентарную передачу инфекции в
Исландии и Нидерландах были безуспешными (33, 49), в ФРГ, однако, вирус был выделен
от 3-х ягнят, полученных при кесаревом сечении заражённых овец и содержащихся в изоля-
ции в течение 8-9 мес (57).
ДИАГНОСТИКА
Висна-маэди диагностируют на основании эпизоотологических, клинических, патомор-
фологических данных и результатов лабораторного исследования. Биопроба на овцах не
имеет практического значения ввиду длительности инкубационного периода. Лабораторные
методы диагностики включают выделение вируса в культурах клеток и его идентификацию
в серологических реакциях, а также обнаружение вирусспецифических АТ в сыворотках
больных и подозреваемых в заражении животных.
Выделение вируса. Вирус может быть выделен при жизни животного путём сокульти-
вирования лейкоцитов крови с культурами клеток овечьего происхождения. Более надёж-
ным является метод выделения вируса из тканей, взятых после смерти животного. Вирус
выделяют из лимфоидной ткани, лёгких, мозга и сосудистого сплетения. К вирусу чувстви-
тельны культуры клеток сосудистого сплетения мозга овец и телят, почек, селезёнки, тести-
кул и надпочечников овец, а также перевиваемые культуры клеток трахеи эмбриона телят и
почки свиньи (55,117).
При выделении вируса необходимо провести несколько последовательных слепых пас-
сажей материала или перевивок инфицированной ткани, прежде чем обнаружится ЦПД.
Продолжительность каждого пассажа 14-21 день, всего опыта - до 8 нед (111). ЦПД вируса
очень специфично и характеризуется образованием многоядерных клеток. Идентификацию
изолятов проводят методом флюоресцирующих АТ в культурах клеток и исследованием под
электронным микроскопом.
Серологическая диагностика. Для выявления скрытых вирусоносителей и подтвер-
ждения диагноза у клинически больных применяют серологические реакции. Определяемый
реакциями уровень АТ отдельных овец может быть обнаружен в разные сроки после инфи-
цирования. Как правило, АТ выявляют через несколько месяцев после заражения, но в ис-
ключительных случаях - через 2 года и более (62). У овец, инфицированных в естественных
условиях, АТ, вероятно, продуцируются позднее, чем при экспериментальном заражении.
Разработано несколько серологических методов для определения АТ к вирусу. PH описал
B.Sigurdsson (102). В настоящее время этот метод редко находит практическое применение.
Для обнаружения АТ у естественно инфицированных и экспериментально зараженных овец
разработана РСК (47).
G.F.de Boer (30) изучал образование АТ у экспериментально зараженных овец в PH, не-
прямым методом флюоресцирующих АТ (НМФА) и РСК. C.Terpstra и др. (123) предложили
РДП в агаре. Описаны модификации РДП (23, 24,79, 135). Большинство естественно инфи-
цированных животных имеют ПА к поверхностному АГ вируса gp 115, некоторые также со-
держат АТ к основным структурным полипептидам. В Российской Федерации в качестве
метода серологической диагностики использовали РДП с тест-системой, изготовленной на
Ставропольской биофабрике. Реакцию проводили в 0,95%-ном агаровом геле, приготовлен-
28 Зак. № 171
433
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ном на трис-(оксиметил)-аминометановом буферном р-ре (pH 7,3) с добавлением 6% NaCl.
Учет результатов реакции (при проведении её при 20-23°С) осуществляли 3-кратно с ин-
тервалом 24 ч (4). P.Biront и др. (15) сообщали о результатах использования НМФА. По-
следнее время широко применяют непрямой ИФА (62). ELISA превосходит по чувстви-
тельности РДП, позволяя выявить иа 15,5% больше серопозитивных овец. Промышленное
производство АГ для ELISA с целью диагностики висны-маэди овец ведется с использова-
нием детергента -додецилсульфата натрия. Этот метод дал лучший результат по специфич-
ности и чувствительности и с позитивными и с негативными сыворотками (115, 116). Было
проведено сравнительное изучение пригодности для выявления АТ у естественно инфициро-
ванных овец непрямого ИФА, РСК и РДП (133). Изучена в сравнительном аспекте чувстви-
тельность и специфичность 3-х методов, используемых в лабораториях 3-х стран: НИФА
(Дания), НМФА (Бельгия) и РДП в агаре (Великобритания). Показано, что все они облада-
ют одинаковой чувствительностью и специфичностью, совпадающие результаты зарегист-
рированы в 91 образце из 100 (29). Наиболее полная корреляция отмечена между результа-
тами непрямого ИФА и РДП, здесь совпадение результатов было 94 из 100. Показатели
совпадений результатов НМФА и РДП составляли 92 из 100, а непрямого ИФА и НМФА -
91 из 100. Ложноположительные результаты не были отмечены в непрямом ИФА и РДП;
результаты исследования одного образца НМФА вызывали сомнения.
Макроскопическое и гистологическое исследования легких также могут быть рекомен-
дованы для выявления инфицированных животных (29,45,46, 47, 50,64,125,127,128).
Экспресс-диагностика. Для экспресс-диагностики разработан метод гибридизации in
situ для выявления вируса висны-маэди в клеточных культурах (фибробластов, полученных
из кожи телят при использовании ДНК-зондов меченых (35S). РНК вируса висны-маэди об-
наруживали в препаратах культур, фиксированных формалином (95).
Дифференциальный диагноз. Маэди необходимо дифференцировать от бронхопнев-
моний, связанных с паразитированием в легких Dictiocaulus filaria, и аденоматозом легких.
D.filaria вызывают бронхопневмонию у молодых овец. Болезнь характеризуется постоянным
кашлем в результате раздражения бронхов, в фекалиях обнаруживают личинки паразита.
Аденоматоз может проявляться клинически у более молодых овец, так как инкубационный
период при этой болезни короче, чем при маэди. Влажные хрипы и обильные слизистые вы-
деления из носа, характерные для аденоматоза, отсутствуют при маэди. Ранние симптомы
висны схожи с симптомами других болезней, сопровождающихся поражением ЦНС. Когда
висну впервые обнаружили в Исландии, её приняли за скрепи. При висне отсутствует зуд, а
характерны для нее парезы и параличи задних конечностей.
Висна-маэди коз принципиально отличается от артрита-энцефалита коз и не сопровож-
дается ни артритом, ни энцефалитом, ни развитием уплотнений молочной железы (37).
ПРОФИЛАКТИКА И МЕРЫ БОРЬБЫ
Специфические средства профилактики болезни отсутствуют, и надо считать маловеро-
ятной возможность создания вакцины в ближайшем будущем; нет специфических средств
лечения. Основные профилактические мероприятия - предупреждение заноса возбудителя
инфекции с инфицированными овцами в предклинической стадии болезни. Ввиду длитель-
ности инкубационного периода первые признаки болезни у таких животных могут быть об-
наружены через несколько лет после поступления в стадо. За время скрытого вирусоноси-
тельства инфекция может распространиться на значительную часть поголовья. В идеале,
чтобы предупредить занос возбудителя в хозяйство, необходимо пополнять поголовье толь-
ко из тех стад, в которых в течение последних нескольких лет не было зарегистрировано
клинических случаев висны-маэди, не выявлены серопозитивные животные и не было по-
ступления новых овец. Многие страны, импортирующие племенных овец, требуют сероло-
гического подтверждения благополучия по висны-маэди, экспортирующих хозяйств страны-
434
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
поставщика. Великобритания в целях предупреждения ввоза в страну пораженных живот-
ных ввела с 1979 г. новые карантинные требования к импортируемому поголовью. Импорт
овец разрешен только из хозяйств, где клинические случаи болезни не регистрировались в
течение последних 3-х лет и получены отрицательные результаты у 100% поголовья.
Возможности борьбы с болезнью после заноса возбудителя весьма ограничены. Если в
стаде обнаружены клинические случаи болезни, потери можно уменьшить, снизив возрас-
тной предел содержащихся в стаде овец, т.е. выбраковывать 4-5-летних овец, у которых с
большей частотой регистрируются клинически симптомы болезни. С уменьшением числа
больных овец уменьшается угроза инфицирования здорового поголовья, так как наиболее
опасными источниками возбудителя инфекции являются больные животные. Подобная про-
грамма укорачивает продуктивный период жизни овец, однако принятая в Швеции с сере-
дины 70-х годов, принесла определенные положительные результаты: частота клинических
случаев болезни стала незначительной. В Норвегии на неблагополучные хозяйства наклады-
вают ограничения: запрещают продавать овец и экспонировать их на выставках, не позво-
ляют выпасать животных на общих пастбищах, вступать в экономические связи с другими
фермами. Владельцам рекомендуют проводить выбраковку серопозитивных овец. Как ока-
залось, некоторый успех в сдерживании инфекции в стране достигнут к 1970 г. (68, 76).
В Нидерландах экспериментально апробирована следующая схема: серологическое об-
следование поголовья с интервалом в 6 мес, убой животных с клиническими проявлениями
болезни, серопозитивных и их потомства. Схема с успехом применяется на практике. Так,
до проведения мероприятий при серологическом обследовании животных в 16 хозяйствах
ИФА было выявлено 25,4% положительно реагирующих; после выбраковки животных через
6 мес АТ обнаружены лишь у 11,7%, а через 12 мес - у 3% поголовья (60, 61). По мнению
G.F.de Boer (33), в неблагополучном стаде довольно быстро можно создать ядро для форми-
рования нового стада из свободных от возбудителя животных. Для этого необходимо изоли-
ровать ягнят от инфицированных овцематок. Чтобы уменьшить риск инфицирования, ягнят
необходимо изолировать немедленно после окота. В сезон окота 1979 г. были проведены
полевые испытания по изучению практической пригодности и эффективности метода. Ягнят
отделяли от овцематок при окоте, им не давали ни молока, ни молозива овец, а вскармлива-
ли молозивом и молоком КРС. Мероприятия проведены на 12 фермах. Полученные резуль-
таты позволили сделать вывод, что искусственное вскармливание ягнят является эффектив-
ным методом борьбы с инфекцией (63). При искусственном вскармливании в возрасте 6 мес
АТ к вирусу обнаружены у 0,5% ягнят по сравнению с 30%, выявленными среди ягнят в
отарах, где практикуется совместное содержание с матками (61). Во Франции ветеринарной
службой разработана программа борьбы, согласно которой в племенных хозяйствах все по-
головье проверяют серологически на пораженность маэди одновременно с исследованиями
на бруцеллез; положительно реагирующих выбраковывают, ягнят от серопозитивных овце-
маток изолируют сразу после рождения (12).
Аналогичные программы борьбы с инфекцией проводятся в США (84), Дании, Велико-
британии. В Великобритании, в частности, первичное серологическое исследование поголо-
вья делают за счет владельца хозяйства, от которого требуется сбор образцов крови от овец
старше 9 мес. Последующие исследования проводят за счет государства. Серопозитивных
овец выбраковывают и отправляют на убой. Потомство до 2-летнего возраста от овцематок,
положительно реагирующих в РДП, также отправляют на убой или содержат отдельно от
других овец и коз. С интервалом в 6-9 мес от изолированных овец берут пробы сывороток
для исследования, пока все животные от каждого сезона достигнут возраста 3-х лет и будут
иметь 3 последовательных отрицательных результата исследования (133).
Радикальная программа искоренения болезни была осуществлена в Исландии. В небла-
гополучных районах страны было убито все поголовье овец. Программа оказалась весьма
28*
435
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
эффективной, но потребовала больших усилий и экономических затрат. Когда она проводи-
лась, еще не были известны надежные методы прижизненной диагностики болезни. В на-
стоящее время в принципе может быть избрана одна из двух схем борьбы.
Периодическое серологическое исследование с выбраковкой положительно реагирую-
щих может быть эффективным только в тех случаях, когда процент пораженных в стаде не
велик. Считают, что стадо может быть санировано, если поражено не более 30% поголовья.
Метод отъема и изолированного содержания ягнят не позволяет создавать неинфицирован-
ное ядро будущей отары, независимо от исходной пораженности хозяйства. Этому методу
должно быть отдано предпочтение при проведении мероприятий в племенных хозяйствах,
когда необходимо сохранить ценный генетический материал (1).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Архипов Н.И. и др. Медл. вир. инф., Агропромиздат,1987. 2.3уев В.А. Медл. вир. инф.
человека и животных.,Медицина,1988 :85. З.Исаев В.В. и др. Бюлл. ВИЭВ, 1996, 77 :27.
4.Коромыслов Г.Ф. и др. Бюлл. ВИЭВ, 1996, 77 :15. б.Коромыслов Г.Ф. Бюлл. ВИЭВ, 1996,
77:3. б.Сюрин В.Н. и др. Част. Вет. вирусол., Колос, 1979. 7.Титов В.В. и др. Бюлл. ВИЭВ,
1996, 77 :29. З.Шишков В.П. и др. Медленные вир. инфекции овец. М., 1984. 9.Шуляк Б.Ф.
и др. Бюлл. ВИЭВ, 1996, 77 :21. lO.Andresdoffir V et.al. Hereditos, 1991, 115, 1 :79.
ll.Armstrong С et.al. Public Helth Rep (Wash), 1934, 49 :1019. ll.Bandoik J. La France
Agricjl, 1981, 37, 1891 :29. 13.Beemon K.Z. et.al. J Virol, 1977, 17 :525. 14.Bell P. British
farmer and Stockbreeder, 1980, 9, 220 :48, 52. 15.Biront P. et.al. Vlaams Diergeneeskunding
Tijdschrift 1981, 50 :269. 16.Bonchard N, et.al Bull Soc Vet Prat de France, 1980, 64, 9 :755.
17.Boudoin J.C. La France Agricole 1981, 37, 1891 :29. 18.Caporale V.P. et.al. Vet Res
Commun, 1983, 6, 1 :31. 19.Coporale V.P. et.al. Vet Res Commun. 1985, 9 :115. 2O.Clements
J.E. et.al. Y th Int cong of vir, Strasburg, France, 1981, 114. 21.Cordier G et.al. Clin and Exp
Immunol, 1992, 90, 1, 18. 22.Cutlip R.C. et.al. Am J Vet Res, 1982, 43, 12 :2108. 23,Cutlip P.C.
et.al. Am J Vet Res, 1977, 38 :1081. 24.Cutlip R.C. et.al. Am J Vet Res, 1982, 43, 1, 82.
25.Dalton A.J. et.al. Boner, Intervirology, 1974, 4 :201. 26.Dawson M. The Vet Rec, 1981, 109,
9 :187. 27.Dawson M. The Vet Res. 1980, 106, 10 :212. 28.Dawson M. et.al. Vet Animal, 1982,
22 :122. 29.Dawson M. et.al. The Vet Rec, 1982, 111, 19 :432. 30.De Boer G.F.
Diergeneeskunde 1970, 95, 14 :725. 31.De Boer G.F. J Immunol, 1970, 104, 414. 32.De Boer
G.F. Res Vet Sci, 1975, 18, 15. 33,DengP.H. Chenese J of Vet Med, 1981, 7, 11, 4. 34.Eguiluz
C. et.al. Vet Mex. 1981, 12,4 :235. 35.Filippi P. et.al. J Virol, 1979, 31 :25. 36.Fillippi P. et.al.
J Virol, 1982, 42 :1057. 37.Fiocre B. et.al. Bull Acod Vet France, 1991, 64, 3 :317. 38.Forte B.
et.al. An Escola Super Med Vet, 1979, 21 :47. 39.Gates W. et.al. J Amer Vet Med Ass, 1978, 173
:1573. 4O.Geballe A.P. et.al. Virology, 1985, 141: 148. 41.Georgsson G. et.al. In: Slow virus Dis
of An and Man, Amsterdam, 1976 :61. 42.Georgsson G. et.al. Vet Pathol, 1971, 8 :63.
43.Gislason G. Igeland Departm of Agricalt Publ Reykjavik, 1947 :235. 44.Griffin D. et. al.
Infect Dis, 1978, 138 :614. 45.Gondnadottiz M. et.al. J Infect Dis, 1965, 115 :217.
46.Gundnadottizr M. et.al. J Infect Dis, 1967, 117 :1. 47.Cudnadottir M. et.al. J Immunol, 1967,
98 :663. 48.Cudnadotiir M. et.al. Res Vet Scs, 1968, 9 :65. 49.Gudnadottir M. Progr Med Virol,
1974, 18 :336. 5O.Guizzardi F Inform agr (Verona) 1981, 37, 26 :16303. 51.Haase A.T. Science
1977, 195 :175. 52.Haase A. et.al. Virology 1982, 119, 2 :399. 53,Hajela S. K. et.al. Indian J
Annim Sci, 1975, 45 :350. 54.Harter D.H. et.al. Virology 1967, 31 :279. 55.Hedon A. Contr a
letude de la visna-maedinee, Boeguet, 1981, 101, 8 :45. 56.Harter D.H. et.al. Proc Soc Exp Biol
and Med, 1968, 129, 1 :295. 57.Hoff-Jorgensen R. Vet Sci Comm, 1977, 1 :251. 58.Huffman
E.M. et.al. J Am Vet Med Assn, 1981, 178, 7 :708. 59.Huffman E.M. et.al. J Am Vet Med Ass
1981, 178, 7 :708. 60.Houwers D.J. et.al. Vet.Res. 1995, 104 :61. 61.Houwers D.J. Tijd Schr die
Genesk 1980, 105, 16 :661. 62.Houwers D.J. et.al. Vet Assc Res, 1981, 109 :125. 63.Houwers
D.J. et.al. Vet Microbiol 1983, 8, 2 :179. 64.Hoff-Jorgensen B. Vet Sci Comm, 1977, 1 :251.
436
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
65.Hunter A.R. et.al. Britisch Vet J, 1983, 139, 2 :153. 66.Kennedy R.C. Virology, 1968, 35
:483. 67.Kennedy -Stoskopf S. et.al. J Virol, 1986, 59 :37. 68.Krog Sgrund J. et.al. Bull del
Office Inter des Epiz, 1978, 89 :431. 69.Lehr. Ch. Die Fraberkrankheit der Schafe: eine Literatur.
1980, 7. 70.Lerondello C. et.al. 21-st Cong 1ABS Progr Anim Ret Annecy, 4-6 oct. 1989,
Proc.Synp.Bosel ete 1990 :223. 71.Light M.R.A. J Anim Scien, 1979, 49, 5 :1157. 72.Lin F.H.
etal. J Virol, 1970, 6 :702. 73.Lucam F. Rec Med Vet, 1942, 118 :273. 74.Maedi-visna-the slow
virus disease-Farming Leader, 1980, 24 :24. 75.Morcom K.A. etal. J Clin Microbiol, 1992, 30,
11 :2852. 76.Markson L.M. et.al. The Vet Rec, 1983, 112, 12 :267. 77.Martin W.B. et.al. Brit
Vet J, 1980, 136, 3 :290. 78.Mohanty S.B. et.al. Vet Virology, Philadelphia, 1981 :301.
79.Molitor T.W. etal. Am J Vet Res, 179, 40 :69. 8O.Narayan O. et.al. Gen Vir, 1980, 50 :69.
81.Narayan О et.al. Infec and Immun, 1981, 32, 3 :1045. 82.Narayan O. et.al. Rev Infect Dis,
1985, 7 :89. 83.Nathanson N. et.al. In: Slow virus Dis of Anim. and Man 1976 :115. 84.01iver
R.S. etal. Am J Vet Res, 1981, 412, 9 :1554. 85.Packaging deficient lentivirus. Eur Biotechnol
Newclett-1995, 210, 6, патент выдан Syngenix LTD (Великобритания). 86.Palsson P.A. In:
Slow virus dis. of Annim.and Man, Amsterdam 1976 :17. 87.Palsson P.A. J of Clin. Pathology
1972, 25, 6 :115. 88.Palsson P.A. Bull Off Intern Epizootisc, 1978, 89, 78 All. 89.Palsson P.A.
In: Slow transn.dis of the nerv sistem, 1979, 1:1. 90.Petursson G. In: Proc of the YI th Inter
Cong of Neuropath, Paris, 1970 :831. 91.Petursson G et.al. Laboratory Investigation, 1976, 5
:402. 92.Petursson G etal. Y th Intem/cong/of virol., Strasbur, France, 1981 :121.
93.Virol.Aspects Safety Biol.Prod.:Proc. Symp London 89, 1990, Basel 1991 .55. 94.Guerat G
etal. Vrol 1987 :158. 95.Roy D.L. et.al. J Virol Meth, 1992, 36, 1 :1. 96.Russo P. et.al. Bull
Acod Vet de France, 1980, 53 :129. 97.Savey,M et.al. Vet Rec, 1981, 109, 3 :65. 98.Scottish
Farmer 1983, 90, 4724, 51. 99.Schipper I.A. Agriculture de los Americas 1982, 31, 4 :6.
lOO.Sharp J. The Veterinary rec. 1979, 109, 9 :190. lOl.Sigurdardottir В et.al. J Infect Dis, 1964,
114 :55. 102.Sigurdsson B. et.al. J Infect Dis, 1953, 93 :166. 103.Sigurdsson В Brit Vet J, 1954,
110 :341. 104.Sigurdsson B. Brit Vet J, 1954, 107 :106. 105.Sigurdsson B. et.al. J Neurop exp
Neurol, 1957, 16 :389. 106.Sigurdsson B. Arch des Nirusforsch, 1958, 8 :115. 107.Sigurdsson B.
et.al. Arch Cesamte Virusforsch, 1960, 10 :368. 108.Sigurdsson B. etal. Acta neuropath Scand.
1962, 1 :343. 109.Sharp J.M. Vet Rec, 1981, 108 :321. HO.Sheffild W.D. et.al. Vet Pathol, 1980,
17, 5 :544. lll.Sihvonen L. Acta Vet Scond, 1980, 21 :689. 112.Sihvonen L. Res Vet Sci, 19081,
30 :217. 113.Sihvonen L. et.al. Veterinary Microb, 1981, 6:1. 114.Sihvonen L. Vet Asc Microb,
1984, 9, 3 :205. 115.Simard C.L. et.al. Conad J Vet Res, 1990, 54, 4 :451. 116.Simard C.L. et.al.
Canad J Vet Res, 1990, 54, 4 :446. 117.Straub O.C. Tierarzte Umschau 1970, 25, 28 :373.
118.Straub O.C. Tierarztl Umschau 1980, 35, 11 :756. 119.Sundgeust В Arch Virol, 1981, 68, 2
.115. 120.Suttion R.N. Postgradnafe Med J, 1979, 55 :143. 121.Takemoto K.K. et.al. J Virol,
1971, 7, 3 :301. 122.Taylor T.B. et.al. Canad J Comp Med 1982, 46,12 :123. 123.Terpstra C
et.al. Arch fur die Gesammte Virusforsch., 1973, 13 :53. 124.Thiry E. etal. Ann Med Vet, 1981,
125, 2 :147. 125.Thormar H Res Vet Sci, 1965, 6:117. 126.Thormar H. Virology 1963, 19 :273.
127.Thormar H. In: Proc of the Int Conf.on Lung Tumorsin Animals, 1960 :91. 128.Thormar H.
et.al. Nature, 1979, 279 :245. 129.Tontis A. Schweiz Arch Tier, 1981, 123, 12 :639. 130.Toohey
K. et.al. Virology, 1994, 200, 1 :276. 131.Trauntwein G etal. Am J Vet Res, 1962, 23 :1280.
132.Vigne R. et.al. 21st Cong 1 ABS Progr, Anim, Retr, Annecy, 4-6 oct; 1989, Proc Symp Bos,
1990 :213. 133.Vitu C. et.al. Comp Immun Microb Dis, 1982, 5, 4 :469. 134.Weinhold I.A. etal.
Zentralblat fur Veterinarmed, 1978, 25 :525. 135.Windward L.D. etal. Am J Vet Rec, 1979, 40
:564. 136.Weiss M.J. et.al. Vet Med Smoll Anim Clin, 1979, 74 :9.
437
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ИММУНОДЕФИЦИТ КОШЕК
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. На одной из ферм
США по разведению кошек был изолирован Т-лимфотропный лентивирус, обозначенный
FTLV, вызывающий иммунодефицит (ИДК) с различной симптоматикой - абортами, алопе-
цией, анемией, хроническим ринитом, конъюнктивитом, диареей, энтеритом, гингивитом,
неврологическими нарушениями, периоденитом и себорейным дерматитом. У многих ин-
фицированных животных наблюдались стоматиты, хронические энтериты, инфекции верх-
них дыхательных путей, поражения кожи, нефропатии, гепатопатии, заболевания нервной
системы. Исход летальный. Ранние признаки, такие как генерализованная лимфоаденопатия
и лихорадка, зачастую проходят нераспознанными. Лимфоаденопатия может длиться не-
сколько месяцев. В большинстве случаев заболевание выявляется по причине возникнове-
ния хронических неспецифических инфекций. Это напоминает ситуацию, известную для
синдрома иммунодефицита, связанного с инфекцией ВЛК. Этот синдром, обозначенный
также как FAIDS (feline AIDS - кошачий СПИД) (12). Действительно, инфекции вирусом
иммунодефицита кошек (ИДК) и вирусом лейкоза кошек могут сопутствовать друг другу
(22). Имеются отдельные свидетельства того, что с такими комбинированными инфекциями
ассоциированы более тяжелые клинические проявления. Клинические признаки, ассоцииро-
ванные с инфекцией вирусом ИДК (приблизительно в порядке убывающей частоты):
- Хроническое поражение ротовой полости (гингивиты, периодонтиты, стоматиты,
тонзилиты)
- Анемия (различной степени тяжести)
- Хронические заболевания верхних дыхательных путей (главным образом риниты)
- Желудочно-кишечные заболевания (хронические энтериты и энтероколиты)
- Истощение
- Хронические раневые абсцессы
- Хроническое воспаление наружного уха
- Хронические кожные заболевания (включая демодекоз)
- Хронические инфекции мочеполового тракта
- Персистирующая лимфоаденопатия
- Неоплазии (в частности, лимфосаркома, миелопролиферативные заболевания,
обычно ассоциированные с сопутствующей инфекцией вирусом лейкоза кошек)
- Неврологические нарушения (неопределенные изменения поведения,истерия,
приступы ярости, судороги и др.)
При иммунодефиците кошек, помимо лейкоза, сопутствующими могут быть демодекоз и
токсоплазмоз (6). Прогрессирующие все более частые болезненные проявления и все более
тяжелые инфекции приводят к истощению и гибели животных. Этот процесс может длиться
многие месяцы (См,табл.Х1.6,7.).
Распространение. ВИДК впервые был выделен в Калифорнии в 1987 г. от домашней
кошки с различными симптомами иммунодефицита. В дальнейшем было показано, что 1-
12% «здоровых» и 10-20% больных кошек во всем мире являются носителями этого вируса.
ВИДК встречается у долгоживущих кошачьих. Серологические исследования продемонст-
рировали широкое распространение этой инфекции. Она, видимо, существовала в популя-
ции кошек многие годы, но оставалась неопознанной (7). Помимо США, Франции, Канады
и Японии показано широкое распространение вируса среди кошек в Нидерландах, частота
которого составляет порядка 1% среди здоровых и около 3% среди больных новорожденных
(8). В Баварии (ФРГ) было выявлено 23% инфицированных кошек.
438
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Таблица XI.6. Частота инфекции ВИДК (по данным серологических
обследований)
Страна Число больных кошек Число се- ропозити вных % Число здоро- вых кошек Число серопози- тивных %
США 2212 310 14,0 511 6 1,2
Канада 42 8 19,0
Онтарио 233 8 3,43 32 0 0
С. Каролина 40 6 15,0 83 3 3,6
Сиетл, Вашинг тон 226 23 10,2 361 5 1,4
Япония 1739 764 43,9 1584 196 12,4
Швейцария 775 29 3,7 178 5 2,8
Франция 208 46 22,1
Англия 431 55 12,8 98 1 1,0
Голландия 98 3 3,1 123 1 0,8
Патогенез. Детально не изучен. Персистентная инфекция Т-лимфоцитов приводит, оче-
видно к прогрессивному поражению иммунной системы. Считают, что этот вирус активиру-
ет мононуклеарные клетки периферической крови in vivo в результате, чего Т-клетки пере-
стают реагировать (17). Показано, что разные кодирующие белки оболочки ВИДК позволя-
ют вирусу спасаться от нейтрализации АТ сыворотки кошек (25, 25а). В 1992 г. было также
показано, что ИДК может быть индуцирован вирусом лейкемии кошек (2).
Таблица XI.7. Возрастная степень инфицированности ВИДК
Процент инфицированных кошек
Возрастная группа США и Канада Япония
До 1 года 2 4
От 1 до 5 лет 9 29
От 6 до 10 лет 22 54
От 11 до 15 лет 23 34
Свыше 15 лет 14 47
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
ВИДК (FIdV, ВИК), обозначаемый также как Т-лимфотропный лентивирус кошек
(FTLV), является кошачьим эквивалентом ВИДЧ (ВИЧ), вызывающего СПИД. Он был
впервые выделен Педерсеном с соавт. (18), когда они исследовали питомники кошек, в ко-
торых была повышена частота хронических или возрастных инфекций с синдромом исто-
щения. ВИДК во многих случаях может быть использован в качестве модельного вируса
при исследовании ВИЧ. В дальнейшем было показано, что 1-12% “здоровых” и 10-20%
больных кошек во всем мире являются носителями этого вируса. ИДК встречается также у
дикоживущих животных семейства кошачьих. По своим биологическим свойствам ВИДК
ближе к лентивирусам неприматов, чем к ВИДЧ. Для сравнительной медицины вирус инте-
ресен с точки зрения изменений последовательностей в гене env, которые позволяют разде-
лить изоляты ВИДК на 3 группы, географически локализующиеся в разных регионах (3). По
своим биологическим свойствам ВИК ближе к лентовирусам неприматов, чем к ВИЧ. Для
439
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
сравнительной медицины этот вирус интересен с точки зрения изменений последовательно-
стей в гене env, которые позволяют разделить изоляты ВИК на 3 группы, генографически
локализующиеся в разных регионах. Наиболее вероятная область использования ВИДК как
модели для изучения ВИЧ и СПИДа является антивирусная терапия и вакцинопрофилакти-
ка. Кроме, того ВИДК может быть использован для изучения ранней стадии патогенеза
ВИЧ-инфекции, а также вариабельности вируса при взаимодействии с организмом (3).
Функция гена vif ВИДК изучена у молекулярного клона pF34. Ген vif является детерминан-
том репликации и инфекционности вируса ИДК в 2-х типах клеток CrFK и К355-5 (24). Ген
gag вируса ИДК уже удалось экспрессировать в E.coli. (1).
Наиболее вероятная область использования ВИДК как модели для изучения ВИЧ и
СПИДа является антивирусная терапия и вакцинация. Кроме того, ВИДК может быть ис-
пользован для изучения ранней стадии патогенеза ВИЧ-инфекции, а также вариабельности
вируса при взаимодействии с организмом.
Лентивирус иммунодефицита кошек морфологически отличается от других представи-
телей рода ретровирусов. Он обладает плотным конусовидным нуклеидом, устойчив к ней-
трализации, поэтому виремия персистирует несмотря на присутствие сывороточных АТ
(Табл. XI. 8).
Устойчивость. Вирус неустойчив, большинство обычных дезинфицирующих средств его
быстро инактивирует.
Таблица XI.8. Взаимоотношение ВИДК с другими
лентивирусами и ретровирусами
Вид животных Онкорнавирусы (опухолеродные) Лентивирусы (“медленные”) Спумавирусы (“пенящие”)
Кошки -Вир. лейкоза кошек (РеЬУ);подтипы А,В,С. -Вирус фибросаркомы. -Эндогенный онкорна- вирус (RD114). Иммунодефицита кошек (FIV, FTLV) Синцитийобразующий вирус кошек (FeSPV)
Другие виды жи- вотных Лейкоз птиц Лейкоз мышей Лейкоз человека HTLV-1 Лейкоз КРС (BLV) Иммунодефицита челове- ка (HIV-1). Вир. ИНАН, Маеди- Висна. Вирус ИД КРС (В IV) Пенящие вирусы других видов животных, не вы- зываю щие заболеваний
Локализация вируса. У инфицированных бессимптомных кошек ВИДК обнаружива-
ли в большом числе мононуклеарных клеток периферической крови, но не выявили в плазме
животных. Стимуляция клеток в культуре приводила к появлению полноразмерной МРНК и
быстрой индукции синтеза инфекционного вируса (27).
Культивирование. ВИДК, так же как вирус иммунодефицита человека, избирательно
реплицируется в Т-лимфоцитах, а Т-клетки служат центральным звеном системы клеточно-
го иммунитета, инфекция этим лентивирусом приводит к иммунодефициту. Однако, шт. Пе-
талюна в культуре клеток кошачьей Т-4-тимус-лимфаты 3101 вызывал ЦПЭ через 22 дня
после заражения (26).
Антигенная активность. Уровни АТ, выявляемые к FeLV в ИФА и PH, не коррелиру-
ют. Вакцинация кошек вирусом не всегда индуцировала удовлетворительный иммунный от-
вет (в иммуноблотинге). Резистентность к реинфекции коррелировала с уровнем АТ, выяв-
ляемых в иммуноблотинге (5).
440
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Экспериментальная инфекция. Котят удается заразить при помощи внутрибрюшин-
ной инокуляции цельной крови или фильтрованной плазмы. От экспериментально инфици-
рованных кошек выделен лентивирус. Заражение ВЛК приводит к развитию глубокого им-
мунодефицита, сопровождающегося регенеративной анемией, лимфоидной, миелоидной и
эритроидной неоплазиями. Иммунодепрессия ассоциирована с действием оболочечного рет-
ровирусного белка pl5. 17-членный пептид, имитирующий гидрофильную высококонсерва-
тивную часть трансмембранного оболочечного белка вируса способен подавлять поликло-
нальную активацию В-клеток, нарушать продукцию интерферонов и интерлейкинов и сни-
жать экспрессию рецепторов к интерлейцину 2. Сходной активностью обладают фрагменты
и очищенный нативный белок gpl20 HSV-1 (10). Доказана возможность стимуляции клини-
ческого проявления ИДК, если им внутривенно вводить ВИДК (FJV) шт. А-7 и вирус лейко-
за кошек (FeLV) шт. EL-74. При этом кровь экспериментально инфицированных бессим-
птомных кошек вызывала при введении здоровым кошкам тяжелое заболевание, которое в
ряде случаев кончалось летально (14). К ВИДК чувствительны СД4+, СД8+, В-лимфоциты,
макрофаги и астроциты. Недавно показано, что специфическим рецептором для ВИДК мо-
жет быть СД9 АГ, присутствие СД4 не обязательно. Период от инфицирования до развитие
спидоподобного состояния у кошек равен 4-5 г. (2).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Естественная эпидемиология ИДК у домаш-
них кошек существенно отличается от эпидемиологии ВИЧ у людей. ВИДК передается в ос-
новном со слюной, а главный механизм трансмиссии - укусы. Коты обычно инфицированы
в 2 раза чаще, чем кошки, наибольшая степень инфицированное™ среди животных старше
5 лет. Незначительную роль имеет передача ВИДК через молоко и контактно (2).
ВИДК, по-видимому, специфичен для кошек и людей не поражает. Его широкое распро-
странение в популяции кошек показано в Канаде, Швейцарии и Франции. Частота инфекции
кошек ВИДК по данным серологического обследования приведена в табл. XL 6 и XL 7. Вы-
сокая частота инфекции в Японии объясняется более высоким уровнем свободы бродяжни-
чества (15), чем у животных в питомниках или при других формах содержания. Причиной
этого служит то, что вирус присутствует в слюне животных, и основным способом передачи
вируса служат укусы. В питомниках передача ВИДК может происходить при длительном и
тесном контакте, но она осуществляется с гораздо меньшей частотой, чем передача ВЛК в
инфицированных хозяйствах (19, 20, 29,30).
Как и для других “медленных” вирусов, после инфекции перед проявлением клиниче-
ских признаков может наблюдаться длительный продромальный период. Поэтому синдром
иммунодефицита обнаруживается по большей части у кошек в возрасте 5 лет или старше.
Однако заболевание может поражать кошек в любом возрасте. Сконструирована детерми-
нистическая модель циркуляции ВИДК. Модель испытана в естественных условиях среди
популяций домашних кошек. Ретровирус циркулирует и накапливается внутри популяции,
достигая титра, достаточного для инфицирования животных, причем скорость распростра-
нения инфекции низкая и зависит от структуры популяции (9,11,16, 28).
ДИАГНОСТИКА
Выделение вируса удается в лаборатории путем сокультивирования образцов лейкоци-
тов периферической крови инфицированных кошек с лимфоцитами здоровых или с клетка-
ми определенных перевиваемых линий в присутствии АГ. ЦПД проявляется в виде пузырь-
ковой дегенерации, повышенной гибели клеток и образования гигантских клеток и опреде-
ляется спустя несколько недель после заражения. Инфицированные культуры обнаруживают
повышенный уровень активности обратной транскриптазы (18,19, 20,29,30).
Разработан метод ИФА в модификации иммунного захватывания для определения АГ.
Метод позволяет определить АГ вируса в культуре клеток (25). У серопозитивных кошек ус-
441
Глава XI. Family Rdroviridae Ретровирусные инфекции
тановлено увеличение IgG в слюне. АТ в слюне устанавливают с помощью непрямого ИФА
и иммуноблота. Наличие АТ в слюне может быть использовано для диагностических и эпи-
зоотологических исследований (21). Для исследования полевых изолятов вируса рекомендо-
ван ELISA (1). Для обнаружения генома использовали гибридизационный зонд (20).
Клиническая гематология практически бесполезна, хотя почти в половине случаев обна-
руживается анемия различной тяжести, а примерно в одной трети случаев - лейкопения, в
типичных случаях - лимфопения. Лейкопения может быть хронической (22, 23). На послед-
них стадиях болезнь может проявляться панцитопенией.
Вирус присутствует в крови, плазме и обычно в слюне, но методы его выделения слож-
ны и недоступны в широкой диагностической практике, поэтому методы лабораторной ди-
агностики основаны на обнаружении специфических АТ. Их присутствие коррелирует с ак-
тивной инфекцией, поскольку виремия имеет место в присутствии АТ. Последние появля-
ются в сыворотке спустя примерно 2 нед после инфицирования и обычно сохраняются в те-
чение всей жизни животного.
Наиболее широкодоступная тест-система представлена набором для постановки быстрой
реакции точечного ИФА Cite FTLV (производитель - фирма IDEXX). Эта тест-система
улавливает и концентрирует АТ к ВИДК из крови или плазмы на мембране, где в виде пят-
на иммобилизованы АГ ВИДК. Связавшиеся АТ выявляются с помощью цветной фермент-
ной реакции. Если у животного выявляется слабо положительная реакция, следует повторно
провести тестирование через 4-6 нед. По типу тест-системы Cite приготовлены также и на-
боры для комбинированного выявления АТ к ВИДК и ВЛК. В США используется также
тест-система для выявления АТ к ВЛК на основе непрямой ИФ (Hansen Veterinary
Immunology, Dixon,California).
Разработан ИФА для обнаружения АТ к вирусу ИДК с использованием рекомбинант-
ных поверхностного (SU), трансмембранного (ТМ) и капсидного (СА) АГ. Сыворотки экс-
периментально инфицированных кошек тестируют тремя АГ для оценки сероконверсии и
определяют уровень АТ. АТ к ТМ АГ обнаруживают в ранние сроки и на протяжении всего
периода наблюдения их регистрируют на высоком уровне. Иммунный ответ на АГ SU и СА
был менее выражен; у некоторых кошек уровни АТ к SU и СА снижались через 6 мес после
заражения. Специфичность метода с использованием АГ ТМ составляла 97%, а чувстви-
тельность - 98%. Таким образом, рекомбинантный ТМ можно рассматривать как очень вы-
сокий при выявлении ВИДК в ИФА (4).
ЛЕЧЕНИЕ, ПРОГНОЗ И ПРОФИЛАКТИКА
Лечение болезни направлено на подавление вторичных инфекций и поддерживающую
терапию. Хотя первоначальная реакция может быть обнадеживающей, спустя некоторое
время лечение становится все менее успешным. Прогрессивные и возвратные хронические
инфекции медленно приводят к смерти через месяц или годы. Кошачий СПИД во многих
аспектах сходен со СПИДом человека. Кошки подвержены секундарным инфекциям, опи-
санным выше, а также наблюдается развитие опухолей и нейрологические расстройства.
Зарегистрированы лимфосаркомы, аденомы, олигодендроглиомы, менингиомы, карци-
номы. Инфекции часто множественны, поддерживаются оппортунистическими агентами и
устойчивы к лечению. Несмотря на интенсивное лечение, кошки погибают в течение не-
скольких месяцев. Некоторые способы лечения, которые использованы на людях при СПИ-
Де, пытались применять и для кошек.
Разработка вакцины против иммунодефицита кошек будет медленным и сложным про-
цессом. Тем не менее, необходимо выявлять зараженных кошек с помощью широкого тес-
тирования и затем отделять, с тем чтобы обрывать цикл передачи инфекции. Поскольку пе-
редача вируса происходит, по всей очевидности, только при тесном контакте, в особенности
442
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Таблица XI.9. Сравнительная характеристика лейкемии
и иммунодефицита кошек
Показатели Feline leukemia virus Feline Immunodiiiciency virus
Открытие вируса Вирус лейкоза кошек (FeLV) W. Sarrett /Шотландия/ в 1964 г. в группе кошек с разви- вающейся лимфосаркомой. Вирус Иммунодифицита кошек (FIV) N. Pedersen в 1987 г выделил от домашнего кота в Калифор- нии, с клинической СПИДа.
Локализация вируса Периферическая кровь, костный мозг, слюнные железы, слизистая респираторных органов. Периферическая кровь, лимфоидная ткань организма.
Морфология под элек- тронным микроско- пом. Типичная для С-типа ретровирусов млеко- питающих: зрелые вирионы сферической фор- мы, 110 нм в диаметре, округлая сердцевина отделена от внешней оболочки промежуточным слоем. Типичная для леитивирусов: зрелые вирио- ны или элипсовидной формы, 100-125 нм в диа- метре, электронноплотная сердцевина /кор/ имеет характерную конусовидную форму.
Патогенез инфекции при экспере- ментальном заражении. Вирус передаётся через слюну и пенетри- рует через окулярные, назальные или респира- торные слизистые мембраны, попадает в лим- фоидные клетки региональных лимфоузлов го- ловы и шеи. За это время вырабатываются ВНА и развивается иммунитет. Если этого не проис- ходит, то животное становится персистентно инфицированным, а вирус распространяется в клетки костного мозга, где реплицируется во всех ядерных клетках /лимфоциты, нейтрофилы, мегакариоциты, эритробласты/; базальную мембрану кишечника, клетки слюнных желез и поджелудочной железы, слизистую оболочку респираторный системы. При рекомбинации FeLV и клеточного онкогена образуется вирус саркомы кошек /FeLV/жоторый вызывает Т- клеточные фибросаркомы и лимфосаркомы. Ре- комбинантный вирус для своей репликации требует наличия избыточного количества FeLV как вируса-’помошника” /т.к. ген src вставляет- ся вместо гена pol и части гена ет/. В первую неделю после заражения наиболее высокая концентрация вирусных ДНК иРНК об- наруживается в костном мозге, тимусе и л/у. Лимфоузлы содержат вирус, главным образом, в зародышевых центрах, позднее он обнаруживает- ся и в экстрафолликулярных зонах. Довольно ско- ро после заражения вирус изолируется из моно- нуклеарных клеток периферической крови и плазмы экспериментально инфицированных жи- вотных. По мере развития инфекции расширяется круг клеток, где обнаруживается вирус: в крове- носных сосудах, интерстиции, воспалительных очагах, в слюнных железах.
Тропизм, из- бирательная локализация. Быстроделящиеся клетки - лимфоциты, грану- лярные лейкоциты, клетки предшественники эритроцитов, Т-лимфоциты. В первую очередь CD4 + Т-клетки, с разви- тием инфекции вирус обнаруживается и в других лейкоцитах.
Длительност ь персистен- ции Зависит от иммунного ответа организма. У примерно 45% животных не происходит выра- ботки приемлемого уровня антител и они ста- новятся персистентно инфицированным, 55% приобретают иммунитет. Персистирует FIV в течение всей жизни, несмотря на иммунный ответ заражённых кошек. Причины: вирус “прячется” в иммунокомпетентных клетках, низкая чувствительность к ВНА и мутации.
Клинические признаки. Наличие се- кундарных и др. Инфек- ций. FeLV может индуцировать лимфосаркомы различного размера под кожей, на плевре, лёг- ких часто с наличием метастазов. Кошки явля- ются более чувствительными, т.к. жизненный цикл их эритроцитов /70-80 дней/ короче, чем у большинства других млекопитающих /120 дней/. FeLV - главная причина анемий у до- машних кошек. При заражении в перинаталь- ный период или после рождения наблюдается тимусная атрофия /с разрушением Т- лимфоцитов во всех лимфоидных тканях/. В те- чение двух недель котята погибают от различ- ных секундарных инфекций. Половина кошек с инфицированными перитонитами, хронически- ми стоматитами, хроническими язвами рта, абсцессами, незаживающими ранами, хрониче- скими инфекциями верхних дыхательных пу- тей, септицемиями инфицирована FeLV. FIV - инфекция обычно протекает постепенно. При первой стадии (первичная инфекция) у не- которых особей появляются временные клиниче- ские признаки: депрессия, анарексия, нейтропе- ния, а также диарея, конъюнктивиты, дерматиты и т.д. Далее следует довольно продолжительный период (ста- дня бессимптомного носительст- ва), когда нет явного клинического проявления. Для стадии генерализованной лимфоденопа- тин характерно увеличение лимфоузлов, анорек- сия, потеря веса, необычное поведение животных. Стадия “ARC” / “преСПИД” /: хронические инфекции ротовой полости, верхних дыхательных путей и другие, вызывающие их: синцитиальный вирус, калицевирус, вирус инфекционного пери- тонита, герпесвирус, папилломавирус, бактерии, грибы.
| Гематология |
Снижение абсолютного количества лейко- ]
Уменьшение количества CD4 + Т-1
443
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
еские показа- тели. цитов, эритроцитов, появление незрелых, ядер- ных форм эритроцитов. лимфоцитов /менее 200 в кл при норме 1000 - 3500 в мкл/, изменения соотноше- ния ста +/со8 + /норма >2/. В первичной стадии наблюдают временную лейкопе- нию. При развитии СПИДа уменьшается количеств лимфоцитов /менее 1 500 в мкл/ и нейтрофилов /менее 2500 в мкл/..
Количество сероположи- телъных жи- вотных, % летальности. При развитии опухолевой формы возмож- на регрессия сарком у 25% животных. Наличие FeLV у кошек: бродячие кошки - 1%, в демах, где имеется только одна кошка -1 %, владельцы, держащие несколько кошек - 27% Наличие серопозитивных животных: Европа, США -1 %, Япония, Австралия - до 30%.
Пути выде- ления, пере- дача вируса. Главный вирус содержится в большой концен- трации /5-103 - 2-106 инф. частиц /мл/. Кошки заражаются при взаимном облизывании, проку- сывании, а также через предметы обихода. Воз- можна также передача кровососущими насеко- мыми, аэрогенным путём, через молоко и моло- зиво и прохождение вируса через плаценту. Через укусы /особенно во время агрес- сивного поведения котов в брачный пе- риод/. Доказано присутствие вируса в слюне, но возможность заражения таким способом вызывает сомнения. Передача вируса через плаценту, с молоком и моло- зивом требует дальнейших исследований.
Лабораторна я диагности- ка. Ранее применялись - РДП, РСК и элек- тронная микроскопия. Сейчас используется не- прямой ИФ для определения антигена FeLV/достаточно несколько капель крови на предметном стекле/. Для массовых исследова- нии широко применяется ELISA, с помощью этого метода выявляются антитела в сыворотке крови. ELISA - выявление антител к FTV. Используется 3 источника антигена: 1) культуральный 2) очищенный вирус 3) рекомбинантный протеин
Штаммы, изоляты. Имеется 8 изолятов FeSV, наиболее изучены три: Snyder-Sheilen (ST), Gardner-Amstein (GA), S.McDonough (SM). Имеется три автигенно раз- личимые подгруппы - А, В и С. FeLV-A обна- ружен у 100% инфицированных кошек, FeLV-B у 50%, FeLV-C -1%. Наиболее часто встречаю- щийся шт. - Kawakami-Sheilen. Японский - ТМ-2 итальянский -М-1, М-2, М-3, М-4 США - А-14, Petaluma. Дания-4, 6,19К1, ИЗ Великобритания - 2, 8,14 Швейцария -z2
Культивиро- вание Самая распространённая культура клеток - фибробласты кошки. Клетки видов, чувствительных к FeLV: FeLV-A FeLV-В FeLV-С кошка + + + собака - + + МЫШЬ - - норка - + + хомячок - + - морск. Св. - - + свинья - + - КРС - + + обезьяна - + + человек - + + In vitro вирус имеет тропизм к ко- шачьим Т-лимфоцитам, а также клеткам моноцитомакрофагальной линии и аст- роцитам. Наиболее распространена куль- тура клеток CrFK /фибробластоидные кошачье клетки/, а также МВМ - культура лимфоидных клеток.
при укусах, такое разделение зараженных и незараженных животных может быть высоко-
эффективным. Кастрирование самцов снижает число драк и общее ограничение бродяжни-
чества может быть весьма полезным (13).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
l.Annu Rept Inst. Virus Res Kyoto Univers., 1991, 34 :83. 2.Beebe A.M. et.al. J Cell Biochim,
1992, Suppl 16a, :45. 3.Bennett M. et.al. J Med Microbiol., 1995, 42, 4 :233. 4,Calzolari M. et.al.
Vet Immunol and Immunopathol., 1995, 46, 1-2 :83. S.Chatherine E. et.al. 21 st Congr IABS
Progr Anim Retroviruses, Annecy, Bazel, 1990 :197. 6.Chalmers S. et.al. J Am Vet Med Assoc,
1989, 194 :256. 7.Charles R. et.al. Can Vet J,1989, 30 :559. 8.Egberink H.F. et.al. Tijdschr
Diergeneesk 1993, 118, Suppl 1 :43. 9. Frank C. et.al. J Theor Biol, 1995, 175 :553. 10. Good
R.A. etal. Int J Immunopharmakol, 1991, 13, 1 .1. ll.Grindem C.B. et.al. J Vet Med Assoc,
1989, 194 .226. 12.Hardy W.D. et.al. Am Anim Hosp Assoc, 1988, 24 :241. 13.Hartmann K. Boer
444
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Landwirt Johrn., 1992, 69, 1 :19. 14.1garashi T. Jap J Vet Res, 1991, 39, 1 :59. 15.Ishida T. et.al.
J Am Vet Med Assoc, 1989, 194 :221. 16.Lutz H. Feline T-lymphotropic lentivirus Feline
Advisary Burean Bulletin, 1988, 25, :25. 17.OhnoK. et.al. J Vet Med Sci, 1992, 54, 3, :517. 18.
Pedersen N.C. et.al. Science, 1987, 235 :790. 19.Pedersen N.C. et.al. Fel Inf Disease.
Goleta,Calif Am Vet Publ., 1988 :115. 2O.Pedersen N.C. et.al. пат. 507753, США, опубл
06.8.91. 21.Poli A. et.al. J Clin Microbiol., 1992, 20, 8 :2038. 22.Shelton G.H. et.al. J Am Vet
Med Assoc, 1989, 194, :253. 23.Shelton G.H. et.al. J Am Anim Hosp Assoc, 1989, 25 :7.
24.Shacklett B.L. et.al. Virology, 1994, 204, 2 :860. 25.Siebelink K.H.J. et.al. 21 st Congr IABS
Progr Anim Retroviruses, Annecy, 4-6 oct, 1989 : Proc Symp.,Bazel tc.,1990 :189. 25a.Siebelink
K.H.J.et.al. Vet Immunol and Immuno-pathol., 1995, 46, 1-2 :51. 26.Toshikura T.S. et.al. Virol.,
1990, 179 :492. 27.Tomonaga K. et.al. J Gen Virol, 1995, 76, 9 :2193. 28.Witt C.J. et.al. J Am
Vet Med ssoc, 1989, 194 :229. 29.Yamamoto J.K. et.al. J Am Vet Med Assoc, 1989, 194 :213.
30. Yamamoto J.K. et.al. Am J Vet Res, 1988, 49 :1246.
ИММУНОДЕФИЦИТ КРУПНОГО
РОГАТОГО СКОТА
При серологическом обследовании КРС в разных странах установлено, что иммуноде-
фицит (ИД) довольно широко распространен. Так, в США серопозитивных животных было
4%, в Нидерландах - 1,4, в Канаде - 5,5, в Германии - 6,6, во Франции - 4%. ИД КРС также
зарегистрировали в Англии, Швеции, Коста-Рике, Венесуэле, Новой Зеландии и Австралии.
Количество серопозитивных животных от здорового КРС составляло 1-7%. Однако в от-
дельных стадах у животных с хроническими болезнями оно достигало 50%. Из 64% ИД-
серопози-тивных животных с лимфосаркомой, лимфоаденопатией и другими нарушениями -
74% были инфицированы ВЛКРС.
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Кроме данных о про-
явлении клинических признаков болезни у коров, инфицированных ИД совместно с ВЛКРС,
в настоящее время нет документального подтверждения об инфекции, вызываемой вирусом
ИД (ВИД) у естественно инфицированных животных (21,22).
Патогенез. При определении отдельных видов лейкоцитов отмечали повышение уровня
лимфоцитов, снижение нейтрофилов и частично моноцитов. В течение первых 2-х лет после
экспериментального заражения ВИД наблюдали незначительное изменение количества и
функциональных свойств моноцитов (16). Результаты этих опытов поддерживают гипотезу о
способности BIV изменять функцию моноцитов in vitro при его достаточной концентрации и
совпадают с выводами других авторов о том, что как и другие лентивирусы, может инфи-
цировать макрофаги. Авторы установили тенденцию к угнетению фагоцитарной активности
через 4-8 мес после введения АГ. ВИД активирует экспрессию BIV in vitro и может служить
вирусным кофактором, способным усиливать репликацию BIV in vitro и, возможно, увели-
чивать патогенность последнего (9).
ХАРАКТРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
ВИД КРС впервые изолировали в США в 1969 г. от коров с персистентным моноцито-
зом, прогрессирующей слабостью и истощением. Этот изолят был обозначен как R29 (20).
Интерес к данному возбудителю возрос после выделения вируса иммунодефицита человека
(ВИЧ, HIV). Название “иммунодефицитоподобный вирус КРС” предложил в 1987 г.
М. A.Gonda (11,12). В настоящее время, согласно рекомендациям международного комитета
по таксономии вирусов, возбудитель носит название “вирус иммунодефицита КРС” (8).
Данные секвенирования и серологического анализа показали, что BIV принадлежит к се-
445
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
мейству Retroviridae и роду Lentivirus. К последнему, помимо BIV и HIV, относятся вирусы
инфекционной анемии лошадей (EIAV), висны и маэди овец (MW), артрита-энцефалита
коз (CAEV), иммунодефицита кошек (FIV) и иммунодефицита обезьян (SIV). С помощью
клонирования определена нуклеотидная последовательность провируса (10). Молекулярная
биология вируса ИД КРС обладала многочисленными параллелями с ВИЧ (11).
Морфология и химический состав. По структуре генома, АГ- и эволюционным аспек-
там BIV занимает место в филогенетическом древе среди других лентивирусов (И).
Антигенная вариабельность и родство. Молекулярное клонирование R-29 и 2-х его кло-
нов - R-29-127 и R-29-106 показало значительную структурную и генетическую гомологию
между ВИД КРС и ВИЧ. Показано значительное генетическое сходство между BIV и виру-
сом болезни Джембрана (IDV) недавно открытого и относящегося к ретровирусам, вызы-
вающего болезнь с острым летальным синдромом (4, 13). Степень гомологии нуклеотидных
последовательностей и набора аминокислот между BIV и IDV составляет соответственно 74
и 76%, что обусловливает высокий уровень перекрестной активности между возбудителями.
Антигенная активность. В процессе инфекции, в основном, синтезируются АТ к 2
наиболее важным иммунодоминантным белкам BIV: основному белку нуклеокапсида с
мол.м. 26 кД (р26) и поверхностному гликопротеину НО кД (gpllO). У коров, эксперимен-
тально инфицированных BIV, АТ к р26 выявляли к 14-му дню после заражения, уровень их
достигал максимума через 6-8 нед. АТ к gpllO выявляли значительно позднее, максималь-
ный уровень их регистрировали через много месяцев после заражения (21, 22).
Антисыворотка к р26 BIV перекрестно реагировала с р24 HJV-1, а антисыворотка к
EJAV (анемия лошадей) обладала перекрестной активностью с р24 и р26 BIV (12, 21). BIV-
специфические АТ реагировали с рекомбинантным белком вируса с мол.м. 53 кД (гр53). В
препаратах нативного BIV содержание р26 значительно выше, чем gpl 10 (17,18,19).
Культивирование. Вирус HIV реплицируется в культуре клеток селезенки плода КРС,
легких, тимуса, тестикул, почки с образованием синцития (2, 12). Он может инфицировать
диплоидные и анеуплоидные клетки собаки, хорька и овцы. После 1969 г. R-29 многократно
пассировали и легко адаптировали к росту в клеточной культуре тимуса собаки. Этот изолят
многие ученые широко используют в качестве референтного штамма BIV.
Два новых изолята вируса выделили от BIV/BLV-серопозитивных коров во Флориде.
Они отличались от референтного R-29 по репликации и степени формирования синцития в
культуре клеток легких эмбриона КРС. Они имели 92,6-93,6% гомологии с нуклеотидной
последовательностью клона R-29-127 (17,18,19).
Экспериментальная инфекция. У телят, зараженных R-29, вирус выделялся через 8
нед и в 2-х случаях спустя 12 нед после заражения. У всех животных регистрировали лим-
фопролиферативную реакцию, которая выражалась в значительном увеличении лимфоузлов
и умеренном лимфоцитозе, включая лимфопролиферацию и нейтропению без развития яв-
ных признаков болезни в течение короткого промежутка времени (6, 7). Эти же авторы при
определении степени воздействия BIV на клетки иммунной системы in vivo с использовани-
ем различных тестов показали, что BIV ие вызывает иммуносупрессию и гистопатологиче-
ские изменения в организме. При экспериментальном заражении коров полевыми изолята-
ми BIV, выделенными во Флориде, регистрировали только незначительный лимфоцитоз
(19). Аналогичные результаты получили Y. Browlie и др. (3). Ни у одного животного, в ор-
ганизме которых более 3-х лет присутствовал BIV, авторы не наблюдали развития клиниче-
ских признаков болезни после их экспериментального заражения. Они сделали вывод о
том, что невозможно ожидать проявления патогенного действия BIV до окончания инкуба-
ционного периода, который может составлять 3-5 лет.
В настоящее время нельзя считать BIV патогенным агентом для человека. Он не инфи-
цирует клетки С8166 (наиболее чувствительные для HIV-1, HIV-2, SIV) и не вызывает ЦПД.
446
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Попытки инфицировать вирусом первичные клеточные культуры человека оказались не-
удачными. При исследовании сыворотки крови от HIV-инфицированных пациентов пере-
крестная активность АТ к HIV с BIV-специфическими АГ отсутствовала. У сотрудников ла-
бораторий, имевших повреждения кожи при работе с BIV-материалом, АТ не обнаружили.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Механизм передачи BIV не изучен, возможно
он подобен таковому у HIV, который передается горизонтально и вертикально. Установле-
но, что BIV, как и HIV сохранялся в сперме инфицированных быков-производителей при
криоконсервации и, вероятно, поражает коров при искусственном осеменении (14,15). Эти
же авторы, используя ПЦР, выявили BIV в лимфоцитах крови и молока, что, возможно,
способствует инфицированию телят секретами молочной железы (1).
У молочных коров в Миссисипи зарегистрировали взаимосвязь между возрастом и про-
центом серопозитивных животных (5). 20% коров исследованного молочного стада в воз-
расте 3-4 лет являлись BIV-серопозитивными, причем, с возрастом количество их увеличи-
валось и достигало 50% (в группе до 6 лет), 60% (старше 6 лет) и 70% (7-10 лет) от числа
обследованных. При этом у серопозитивных животных 3-4-летнего возраста общее количе-
ство лейкоцитов было в норме и уменьшалось у аналогичных коров в возрасте 7-10 лет.
ДИАГНОСТИКА
В настоящее время широко используют высокочувствительные и специфические диагности-
ческие тесты, направленные на идентификацию BIV или выявление АТ к нему. К первым
относится ПЦР, ко вторым - иммуноблоттинг, непрямые варианты ИФА и ИФ. BIV-
антигены, в отличие от антигенов других представителей лентивирусов, не взаимодействуют
со специфическими АТ в реакции преципитации. Выделение BIV, его структурное и генети-
ческое сходство с HIV затрагивает вопрос о его роли в патологии животных и человека.
Считать BIV патогенным пока преждевременно, хотя возможно, что BIV, подобно HIV
и другим лентивирусам, может вызывать заболевание у инфицированных животных. В то
же время BIV может играть и незначительную роль в патологии КРС или быть сопутствую-
щим фактором, усиливающим клиническое проявление других болезней, например лейкоза
(табл. XI. 10.).
С помощью ПЦР амплифицирован фрагмент в 235 пар оснований высококонсерватив-
ного участка гена pol вируса ИД КРС при использовании ДНК лейкоцитов крови и молока
серопозитивных коров. Амплификации этого фрагмента не отмечали у серонегативных ко-
ров. Эти данные подтверждают наличие и возможность идентификации ВИД КРС в молоке
и указывает на потенциальную возможность лактогенной его передачи (15).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Не изучены.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Федоров Ю.Н. и др. Ветеринария, 1996, 10 :17. 2.Boulant А.М.Р. et.al. Res Virol, 1989
:140. 3.Brownlie J. et.al. Vet Rec., 1994, 134 :12. 4.Chadwick B.J. et.al. J Gen Virol, 1995
:76. 5.CyrCoast K. St. et.al. Vet Microbiol., 1994, 42 :2. 6.Carpenter S. et.al. J Virol, 1992
:66. 7.Flaming K. et.al. Vet Imm Imm path, 1993 :36. 8.Francki R.I.B. et.al. Arch Virol.,
1991 :2. 9.Geng Y. et.al. Virol, 1992 :187. lO.Corvey K.J. et.al. Virol., 1990 :175. ll.Gonda
M.A. et.al. Food Microbiol, 1994, 2 :149. 12.Gonda M.A. et.al. Nature, 1987, 330.
13.Kertayandya G. et.al. J Gen Virol., 1993 :74. 14.Nash J.W. et.al. Am J Vet Res, 1995, 56 :
5. 15.Nash J.W. et.al. Am J Vet Res, 1995, 56, 4 :445. 16.Rovid A.H. et.al. Vet Imm
Immunopath, 1995, 45 :1. 17.Suares D.L. etal. J Virol, 1993, 67 :8. 18.Suares D.L. et.al. Am
J Vet Res, 1995, 56 :55. 19.Suares D.L. etal. Am J Vet Res, 1995, 56 :5. 2O.VanDer Maaten
M.J. et.al. J Nath Cancer Inst, 1972 :49. 21.Whetstone C.A. et.al. Arch Virol, 1991 :116.
22.Whetstone C.A. et.al. J Virol, 1990 :64.
447
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Таблицах!. 10. Сравнительная характеристика лейкоза и
иммунодефицитоподобного заболеваний КРС
Показатели Bovnie leukemia virus - Вирус лейкоза КРС (BLV) Bovine immunodeficiency like virus Иммунодефицитоподоб- ный вирус КРС (BIV)
Открытие вируса Имеются сообщения нескольких авторов в 50-60-е гг., а в первые убедительно показа- ли Miller S. М. с соавт. (1969,США) с по- мощью электронной микроскопии Van Der Maaten M. S. (1970,CHIA) изолировал вирус от 8-летней коровы с персистентным лимфоцитозом и про- грессирующим истощением
Локализация вируса Переферическая кровь, лимфоидная ткань по всему организму Периферическая кровь, лимфоид- ная ткань по всему организму
Патогенез инфекции при экспериментальном заражении Геном BLV в виде ДНК-копии инкор- порируется в клеточный геном, при перси- стирующим лимфацитозе такая интеграция наблюдается в 25-40% случаях популяции лимфоцитов крови; при опухолевой форме заболевания - вовлекается большинство лейкоцитов и клеток лимфатических узлов. Большинство животных остаются вирусе- и АТ- носителями, у трети развивается пер- систентный лимфоцитоз. У 0,1-1% живот- ных развивается опухолевый процесс с ха- рактерными признаками BIV вызывает персистентную ин- фекцию с различным уровнем АТ- ответа, начиная с 2-4 нед после зара- жения. Вирус изолируется из перифе- рической крови и некоторых паренхи- матозных органов. При эксперемен- тальном заражении наблюдается уве- личение количества лейкоцитов, фол- ликулярная гиперплазия в лимфоузлах и селезёнке. Ряд авторов показывает на снижение показателей клеточного им- мунитета.
Морфология под электронным микроско- пом Зрелый вирион BLV имеет центрально расположенный э лектор онио-плотный нук- леотид диаметром 40-90 нм. Внешняя ви- русная оболочка представлена 2-ковпурной мембраной, отделённой от сердцевины просветлённым пространством. В среднем диаметр BLV составляет 100 нм. Незрелые экстрацеллюлярные частицы размером 80-130 им, с электронно- светлым центром и двойной электрон- ной мембраной 17-22 нм. В процессе созревания, вирус BIV КРС конденси- руется и оделяется от оболочки элек- тронно-светлым пространством
Тропизм, локализация В-лимфоциты Лимфоциты, возможно макрофаги
Длительн. персистенции Пожизненная Пожизненная
Клинические при- знаки Различают: 1) предлейкозное состоянме; 2) начальную (доклиническую) стадию; 3) развёрнутую (клинико-гаматологическую) стадию; 4) конечную или терминальную (опухолевую) стадию. Гиперплазия лимфоузлов, значи- тельная лимфоцитарная инфильтрация в тканях головного мозга, лимфодено- патия, слабость, истощение.
Г ематологические признаки - абсолютное количество лимфоцитов возраст 2-4 4-6 от 6 Подозр. 8-10 6,5-9 5,5-8 Полож. 10 9 8 Повышенное количество лейко- цитов. (12 -18 тыс/мкл)
Количество серопо- ложительных животных, % легальности 13-52% сероположительных живот- ных в неблагополучных по лейкозу стадах. У 0,5-5% развивается опухолевая форма 4-16% сероположительных жи- вотных в странах с развитым животно- водством.
Пути выделения, пе- редача вируса Присутствует в лейкоцитах молока и молозива инфицированных коров. Основ- ной путь передачи - ятрогенный. Имеет ме- сто передача вируса через плаценту, а так- же с молоком и молозивом. Предположительно во многих па- раметрах сходны с BLV.
Лабораторная диаг- ностика РСК, РИФ, РИП, ELISA и др. Но наиболее распространённой в практике стала РИД ELISA с различными видами ан- тигена, иммуноблот, РИФ.
Штаммы, изоляты Клеточно-ассоциированный шт. FLK- BLV (США) R-29 (США, штат Айова) FL-491 (США, штат Флорида)
Культивирование BLV может инфицировать in vitro клетки КРС и мелкого рогатого скота, че- ловека, обезьяны, лошади, летучей мыши, пинию клеток FLK-BLV и ТЭК-МВА, 76 (тимус эмбриона коровы) Первичные культуры клеток эм- бриона коровы - лёгкого, селезёнки, роговицы, клеточные линии других животных - тимус собаки, эпидермаль- ные клетки плода кролика
448
ГлаваХ! Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ЛЕГОЧНЫЙ АДЕНОМАТОЗ ОВЕЦ
Adenomatosis pulmonum (лат); Sheep Pulmonary Adenomarosis, SPA,
jaagsiekte, pulmonary carcinoma of sheep (англ.); Lungenadenomatose des Schafes
(нем.); Jaagziekte (нидерл.)
Легочный аденоматоз (ЛАО) или легочная аденокарцинома, энзоотический прогресси-
рующий аденоматоз - контагиозная трансмиссивная метастазирующая опухоль легких овец,
возникающая в терминальных бронхиолах из пневмоцитов типа II (типа В) и клеток Клара и
неизбежно ведущая к гибели животного. В зарубежной литературе эту болезнь зачастую
обозначают как iaagtierte ( голл. “iaakt” - гнать, “ Ziekte” - ослабление) - термином, исполь-
зованным впервые Hutcheon в 1891 г. при подробном описании им симптоматики и макро-
скопической патологии заболевания в Южной Африке. ЛАО известно фермерам ЮАР с се-
редины XIX в. среди овец, завезённых ещё в начале прошлого века из Испании. Исходя из
злокачественного характера болезни ряд исследователей в настоящее время предлагают
вместо термина “лёгочный аденоматоз” пользоваться термином “карцинома лёгких” или
“бронхиолоальвеолярноклеточная карцинома лёгких” (1).
К настоящему времени ЛАО диагностирован в большинстве стран с развитым овцевод-
ством и наносит большой экономический ущерб (4, 20, 21, 31). Наличие этой болезни в
США окончательно доказано в 1979 г., в Канаде она впервые диагностирована в 1979 г. у
потомства овец, импортированных из Великобритании. В Нидерландах ЛАО впервые заре-
гистрировали в 1978 г. у овец, импортированных за 11 мес до этого из Шотландии (11). В
Мексике анденоматоз лёгких был диагностирован у 1% взрослых овец (37). В Иране ЛАО
был выявлен в 1975 г. у 15 овец породы авваси (39). Это заболевание диагностировано у
овец в Южной Африке, Кении, Израиле, Индии, Турции, Перу, Чили, а из европейских
стран - в ФРГ, Великобритании, Испании, Греции, Португалии, Франции (1).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод болезни с момента контакта здоровых животных с больными овцами колеблется от не-
скольких месяцев до нескольких лет (14, 18, 19, 30). В результате клинические признаки об-
наруживаются лишь у взрослых животных 2-4-летнего возраста. Клинические признаки за-
болевания начинают проявляться у овец при достижении опухоли размером, приводящим к
нарушению нормальной физиологической деятельности лёгких (9, 14, 22, 29). Отмечают
различные расстройства дыхания, животное постепенно теряет массу при хорошем аппетите
и обильном кормлении. При аускультации регистрируют ярко выраженные респираторные
шумы на вдохе и выдохе, а в более застарелых случаях - свистящие звуки и влажные хрипы,
слышимые иногда без стетоскопа. Наблюдается прогрессирующая одышка, особенно замет-
ная при движении животного. Часто отмечаемый спазматический кашель не является харак-
терным признаком. Из носовых отверстий больной овцы вытекает пенистая мукоидная жид-
кость ( от 25 до 500 мл за день) (16, 31). Температура тела колеблется в пределах нормы. С
развитием болезни истощение животного прогрессирует, при длительных перегонах боль-
ные животные отстают от стада.
Патогномоническим признаком ЛАО является истечение пенистой мукоидной жидкости
из носовых отверстий животного при поднятии задней части туловища и одновременном
опускании головы ниже грудной клетки. Неизбежным исходом болезни является гибель жи-
вотного, которая нередко ускоряется в результате бурного развития пневмонии, вызываемой
секундарной микрофлорой (обычно Pasteurella haemolitica).
Патоморфологические изменения. При вскрытии в лёгких обнаруживают различной
величины опухолевые узлы (33). В зависимости от степени развития болезни встречаются
29 Зак. № 171
449
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
мелкие светлые узелки до 1 см в диаметре или крупные серо-белые, выступающие над по-
верхностью лёгких (25). Лёгкие увеличены, особенно по периферии долей, в 2-5 раз тяжелее
нормальных. Поражённые участки имеют плотную опухолевидную консистенцию, светло-
серый или серо-белый цвет (Рис. 64, 65). Опухолевая ткань кажется слегка прозрачной, по-
верхность разреза влажная. Наиболее часто в процесс вовлечены центральные части диа-
фрагмальных и кардинальных долей, хотя на поздних стадиях болезни поражения могут за-
трагивать любые доли лёгких (3, 15). Трахея и бронхи заполнены светлой пенистой жидко-
стью, однако паренхима лёгких выделяет жидкость редко. Часто встречаются утолщения
плевры и фиброзные спайки с грудной клеткой. Мелкие сероватые узелки, обнаруживаемые
в начальных стадиях болезни, могут быть разбросаны по всем долям лёгкого, слегка возвы-
шаясь над нормальной лёгочной тканью. Они окружены эмфизематозными зонами с не-
большими прозрачными очагами сероватого цвета диаметром в несколько миллиметров.
Опухоль характеризуется, в основном, экспансивным ростом, но встречаются метастазы как
внутри грудной клетки, так и вне её (8, 26, 7). Медиастенальные трахеобронхеальные лим-
фоузлы увеличены, имеют плотную консистенцию и серовато-белый цвет. Болезнь часто ос-
ложняется бактериальными инфекциями, и в поражённых лёгких наблюдаются признаки
лёгочного пастереллеза и различных пневмоний инфекционной природы (3,18,30а, 32,11).
С первых научных публикаций по ЛАО возникла трудность в его дифференциальной
гистологической диагностике с висной-маэди вследствие значительных вариаций в описа-
нии микроскопических изменений лёгочной паренхимы. Ошибки в гистопатологической ди-
агностике ЛАО происходят при не учёте стадии болезни, в также изменений от вторичных
бактериальных инфекций (4, 26, 25). Первичные поражения ткани лёгкого аденоматозом
характеризуются наличием одиночных кубических или цилиндрических неопластических
клеток или небольших их рядов, расположенных между нормальными клетками альвеоляр-
ного эпителия. Затем такие кубические клетки пролиферируют, выстилая собой стенки аль-
веол и бронхиол. Процесс пролиферации идёт постоянно на протяжении всей болезни и
приводит к многорядному, папилломатозного вида выстиланию альвеол, что зачастую вы-
зывает их полную облитерацию (15, 22, 29). Пролиферируюшие клетки относят к неопла-
стическим на основании их морфологии, внешнего окружения, наличия гликогеновых гра-
нул, а также образования метастазов в других органах (26). Перебронхиальная соедини-
тельная ткань инфильтрована клетками, среди которых преобладают лимфоциты. Мышеч-
ная стенка бронхиол гипертрофирована, слизистая утолщена, в бронхиолах отмечается уси-
ленное выделение секрета и пролиферация кубического эпителия.
На поздних стадиях ЛАО вокруг аденоматозных очагов пролиферирующие альвеоляр-
ные клетки формируют карциномные структуры с саркоматозной стромой (3,10,11, 22, 26).
Саркоматозные элементы далее дифференцируются, придавая поражённым областям фиб-
розный вид. В одной лёгочной опухоли у клинически больных животных можно наблюдать
различные стадии развития неопластического процесса - от злокачественной альвеолярной
эпителизации до плохо дифференцированной аденокарциномы. В отличие от обычной аль-
веолярной эпителизации при злокачественном процессе стенки альвеол обычно выстланы
одним слоем относительно хорошо дифференцированных кубических и цилиндрических
клеток, богатых гликогеновыми гранулами (25). В просвете многих поражённых альвеол
обнаруживается слизистый экссудат с десквамированным кубическим эпителием и часто
встречающимися макрофагами (16, 22,39).
Средостенные и трахебронхиальные лимфоузлы, как правило, увеличены в размере. В
них отмечают явления продуктивного лимфодеиита с пролиферацией элементов РЭС и об-
разованием лимфоидных, плазматических клеток, а иногда клеток миелоидного рядя (27,
28). Плевра, покрывающая аденоматозные очаги, утолщена, её коллагеновые волокна огру-
бевшие, соединительнотканные пучки местами отечны и разрыхлены (39). По гистологиче-
450
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
скому строению метастатические очаги в средостенных лимфоузлах и висцеральных орга-
нах подобны аденоматозным очагам в лёгких (9). Сравнительное исследование патоморфо-
логических изменений в лёгких у овец при лёгочном аденоматозе с изменениями в лёгких у
других животных (собак, морских свинок, мышей) и человека, при поражении их аденома-
тозом, не выявило существенных отличий (22,25,27).
По ультраструктуре лёгочной ткани овцы идентичны другим видам млекопитающих. Её
изменения при ЛАО соответствуют (Рис. 66) субмикроскопическим изменениям лёгких дру-
гих животных, поражённых лёгочным аденоматозом, а также человека при бронхиальвео-
лярноклеточной карциноме (22, 33, 26). Опухолевая ткань при ЛАО напоминает по своей
субмикроструктуре эмбриональную лёгочную ткань. При развитом ЛАО доминирующие
эпителиальные клетки обладают характеристиками, указывающими на наиболее вероятное
происхождение опухоли из клеток типа В (типа II) альвеолярного эпителия или клеток
бронхиол Клара (4,12,23а, 26,25,29,33).
Большинство опухолевых клеток и пневмоциты типа В здоровых овец характеризуются
плотными осмиофильными, часто многослойными цитоплазматическими тельцами, назы-
ваемыми цитосомами (12, 26, 29, 33). Размер телец колеблется от 0,1 до 1,5 ангстрем. В
опухолевых клетках цитосомы крупнее и более многочисленны, чем в нормальных клетках
типа В. По ультраструктуре цитосомы представляют собой концентрические или параллель-
ные пластинки, а иногда и аморфную структуру, окружённую мембраной. Яркой отличи-
тельной чертой опухолевых клеток, придающей им сходство с фетальным альвеолярным
эпителием (4,23а, 26,33), является наличие в них гликогеновых гранул. Гликогеновые гра-
нулы варьируют в клетках по плотности, размерам и форме, неравномерно располагаясь в
цитоплазме и не обладая мембранной оболочкой. Присутствие гранул гликогена может быть
определёно ещё на гистологическом уровне. В альвеолярных клетках типа В здоровых
взрослых животных гликоген не встречается. Цитоплазма опухолевых клеток содержит
многочисленные рибосомы, часто в форме полисом. Встречаются рибосомы, связанные с
эндоплазматическим ретикулюмом, сильно развитым в большинстве опухолевых клеток. В
ассоциации с комплексом Гольджи встречаются многочисленные, покрытые оболочкой пу-
зырьки. Митохондрии варьируют в размере и по структуре от нормальных до гипертрофи-
рованных и сморщенных (23 а). Только в опухолевых клетках встречаются так называемые
полые трещины, покрытые 1-слойной мембраной, а также филаменты, варьирующие в раз-
личных клетках от нескольких коротких (диаметром 80-100 ангстрем) до целых областей
чётко выраженной филаментозной цитоплазмы (2, 22). Описываемые клетки обладают
обычно большим патологическим ядром (23) с несколькими крупными углублениями и пе-
риферически расположенным хроматином. Зачастую различается ядрышко. В некоторых
опухолевых клетках ядро содержит двойную концентрическую мембранную структуру с
расположенными центрально гранулами (24). Свободная поверхность многих опухолевых
клеток обладает микроворсинками (23, 24, 29, 33), иногда имеющими изменённую морфо-
логию (4). Между опухолевыми клетками выявляются десмосомы. Нуклеолярная маргина-
ция, множество свободных полисом и наличие центриолей в опухолевых клетках свидетель-
ствуют о митозе и интенсивно происходящем белковом синтезе. Хорошо дифференцирован-
ные клетки обычно располагаются по периферии поражения, а слабо дифференцированные -
заполняют центр очага (23а, 24).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
К настоящему времени наиболее вероятную роль в этиологии лёгочного аденоматоза
овец отводят герпес- и ретровирусам. Однако, несмотря на многочисленные попытки, не
удалось выделить вирус на альвеолярных макрофагах овец и других клетках. При ЭМ-
исследовании вирус также не был обнаружен. Международный комитет по таксономии ви-
русов обозначил описываемый вирус как Bfrid herpesvirus 4 (Herpesvirus ovis).
29*
451
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Морфология и химический состав. Вирус, выделенный в Великобритании, состоял из
полых капсомеров, представляет икосаэдр правильной формы и окружен оболочкой, размер
нуклеокапсида 99-115 нм (18).
Устойчивость. Не изучена.
Антигенная структура. Аналогична структуре ретровируса и герпесвируса. Углублен-
ных детальных исследований не проводилось.
Антигенная вариабельность и родство. Вирус герпеса, выделенный в Великобрита-
нии, не нейтрализовался антисывороткой к вирусу простого герпеса (18), но проявлял АГ-
родство с южно-африканским изолятом (34,36,38).
Референтные штаммы вируса неизвестны.
Локализация вируса. Не изучена; судя по выделению его из аденокарциномы легких
больных животных локализация вируса ограничивается, видимо, пораженными легкими.
Вирусовыделение. Не изучено.
Экспериментальная инфекция. Экспериментальное воспроизведение ЛАО с помо-
щью суспензии опухолевой ткани естественно заболевших легочным аденоматозом овец не
всегда давало положительные результаты. Клинические признаки у овец проявлялись уже
через 5-12 мес (18, 19). При серийном пассировании возбудителя ЛАО на новорожденных
ягнятах инкубационный период сокращался до 3-5 нед (7а). Имеется также сообщение о
том, что это заболевание успешно воспроизводится (21) интратрахеальным введением ягня-
там суспензии легочной ткани от больных животных, а также культуральной жидкости из
культур, зараженных суспензий пораженной ткани. Интересные результаты также были по-
лучены при экспериментальном воспроизведении ЛАО посредством ассоциации Herpesvirus
ovis in retroviridae.
К настоящему времени у большинства исследователей отсутствуют достоверные данные
о продуцировании специфических опухолей у мелких лабораторных животных посредством
Herpesvirus ovis (6, 18). Попытки экспериментального заражения овец и ягнят очищенным
изолятом Herpisvirus ovis окончились безуспешно (35). Поэтому сложилось обоснованное
мнение об исключении Herpisvirus ovis как возможного этиологического агента ЛАО.
В 1974 г. C.Perk и др. (26) сделали вывод о наличии в легких овец, больных легочным
аденоматозом, ретровируса. Усовершенствование методики фракционирования опухолевых
клеток с последующей очисткой фтористым углеводородом позволили выделить и охаракте-
ризовать ретровирус из аденоматозного очага легких больной овцы.
Культивирование. Удается с трудом. При сокультивировании инфицированных мак-
рофагов и бесклеточного вируса в ряде первичных культур клеток от овец и макрофагах
легких от телят и кроликов размножения вируса не наблюдали. Однако полевые изоляты
удавалось размножать только в клетках почек эмбриона овцы и клеточной линии, получен-
ной из легких больной ЛАО овцы. В обеих культурах наблюдали ЦПИ (5). Имеется сообще-
ние о том, что культивирование опухолевых клеток от больных ЛАО позволило получить
опухолевую клеточную линию, перевиваемую в течение 2 лет, которую обозначили 1 S -15,4
(37). Оказалось, что трансплантация мужских клеток реципиентам мужского пола вызывала
быстро растущие опухоли с обширными поражениями, часто вовлекающими более трети
легких уже через 6-12 мес. Эти же клетки у реципиентов женского пола в аналогичный пе-
риод вызывали лишь начальные поражения. На основании полученных данных авторы де-
лаю вывод о более высокой трансплантационной эффективности мужских клеток у гомоло-
гичного пола по сравнению с гетерологичным (35).
Показано полное участие вируса висны-маэди в этиологии ЛАО, а также отсутствие ан-
тигенных связей между Ьирусами висны-маэди и ретровирусом ЛАО (26,25,30а).
ГА и ГАд свойства. Не установлены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
452
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
Аденоматоз легких поражает значительное количество овец в Шотландии (4а). Потери
от ЛАО обычно составляют 1-2% поголовья, однако недавние исследования показали, что в
пораженных стадах количество овец на субклинической стадии болезни может колебаться
от 6 до13%. Поражения ЛАО отмечали у овец 3-5-летнего возраста (13, 30а). При первич-
ном заносе болезни в поголовье восприимчивых овец потери могут достигать 50-80% (14,
18). Специфической породной чувствительности к ЛАО не наблюдается (13, 14,19). Заболе-
ванию подвержены оба пола, хотя у овцематок диагностируют аденоматоз чаще (22,25).
Источники заражения и пути передачи. Болезнь передается воздушно-капельным пу-
тем, и при отсутствии серологических методов прижизненной диагностики скученность по-
головья способствует распространению инфекции (16).
Спектр патогенности в естественных условиях. Чувствительны только овцы.
ДИАГНОСТИКА
Клиническая диагностика болезни заключается в обнаружении характерных симптомов,
проявляющихся у овец 2-4-летнего возраста (1). В начальных стадиях болезни, когда узелки
неопластических клеток еще малы и малочисленны, у животного не наблюдается симптомов
и лишь с развитием болезни и прекращением функционирования достаточно больших уча-
стков легочной ткани начинают проявляться дыхательные расстройства, сопровождающиеся
прогрессирующим исхуданием и ослаблением животного (11,13,16). Расстройства дыхания
включают кашель, усиливающуюся одышку, обильные (от 25 до 500 мл в день) выделения
из носа, влажные хрипы в легких при аускультации. Наиболее характерным диагностиче-
ским признаком является истечение серо-белой мукоидной жидкости из ноздрей при подня-
тии задних конечностей животного и опускания его головы. (18,19,22,23,30а).
Патоморфологическая диагностика. Включает выявление макро- и микропоражений
в тканях животного. Локализация опухолей при ЛАО ограничена легкими. Пораженные
участки на поздних и средних стадиях болезни легко различимы по очень плотной конси-
стенции, светло-серой окраске и четкой границе от окружающей легочной паренхимы. Чаще
всего в процесс вовлечены вентральные части диафрагмальной и кардиальной долей легких
(19, 30а). На поздних стадиях отмечается поражение легочной паренхимы всех долей. В
трахее и бронхах обычно обнаруживают пенистую жидкость (16, 18, 22), а в плевральной
полости в ряде случаев - плевральные спайки (19) и абсцессы (39). Окончательный диагноз
на ЛАО ставится гистологически (13, 18, 30а). В затронутых опухолевым процессом участ-
ках выявляют узелки, состоящие из альвеол, альвеолярных ходов и бронхиол, выстланных
кубическим и цилиндрическим эпителием, зачастую образующим папилломатозные вырос-
ты в их просветы. Эти папилломатозные выросты, а также муцин, выявляемый в них гисто-
химическими реакциями, придают пораженным участкам легких железистый вид, что и
служит основой для признания их аденоматозными (28, 31). На поздних стадиях болезни
описываемые поражения сочетаются с прогрессирующим развитием интерстициального
фиброза (22, 24, 25). Медиастенальные и трахеобронхиальные лимфоузлы увеличены, плот-
ной консистенции, серовато-белого цвета. В них, а также в некоторых органах (почки, пе-
чень, селезенка) иногда обнаруживают метастазы (13, 33, 39), характеризующиеся той же
морфологией, что и первичные опухолевые узелки. Пригодного для практического исполь-
зования серологического теста, с помощью которого возможно прижизненное выявление
пораженных ЛАО животных, до сих пор не разработано (18,35,30а).
Дифференциальная диагностика. Дифференцировать ЛАО в первую очередь необхо-
димо от висны-маэди, часто встречающихся в одном стаде и даже у одного и того же жи-
вотного (27, 38, 11). Клиническим признаком, по которому можно дифференцировать эти
две медленные инфекции, является отсутствие обильных слизистых истечений из носовой
полости овец при висны-маэди при наличии - некоординированных движений, пареза и па-
ралича конечностей.
453
ГлаваХ!. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
При гистологическом исследовании легких животных, пораженных ЛАО, выявляют же-
лезистоподобные структуры, при висны-маэди - фолликулярное сплетение лимфоидных кле-
ток в перибронхиальной ткани и утолщение межальвеолярных перегородок вследствие ин-
фильтрации лимфоцитами, плазматическими клетками и гиперплазии миофибринозной
ткани (2). Висны-маэди можно подтвердить с помощью серологических реакций и выделе-
ния вируса на культуре клеток. Необходимо также исключить и другие инфекционные и па-
разитарные поражения легких. Так, при катаральной бронхопневмонии в альвеолах и брон-
хах обнаруживают серозно-катаральный, а при гнойной пневмонии - гнойный экссудат.
Хроническую бронхопневмонию можно отличить по общей гистологической картине легоч-
ной паренхимы, в которой встречаются некротические очаги и микроабсцессы, а также уча-
стки из соединительной ткани, окружающей адвентицию бронхов и кровеносные сосуды.
Дифференцировка между ЛАО и поражениями легких туберкулезного, микозного и парази-
тарного характера проводится на основании клинико-морфологических особенностей дан-
ных болезней.
МЕРЫ БОРЬБЫ И ПРОФИЛАКТИКИ
С учетом отсутствия точных методов прижизненной диагностики, значительной про-
должительности инкубационного периода до проявления клинических симптомов болезни
(22, 30), профилактику ЛАО в стаде основывают на соблюдении санитарно-гигиенических
требований, недопущении скученности животных и раннем выявлении и выбраковке стра-
дающих хроническими дыхательными расстройствами и прогрессирующим истощением
овец старше 2-летнего возраста (18, 27, 29). Важным фактором является также непримене-
ние в стадах такой технологии содержания овец, которая ускоряет распространение болезни
респираторным путем (31).
Выбраковка будет наиболее эффективной, если больное животное выявлено и выведено
из стада на стадии потери массы и общего ослабления, до появления носовых истечений
(30а), поскольку к настоящему времени нет данных о других путях передачи ЛАО, кроме
респираторного. Единственным методом борьбы с данной контагиозной болезнью является
немедленный убой всех подозрительных животных (17, 31). Сохранение потомства от боль-
ных матерей допустимо лишь при изолированном выращивании и выкармливании их моло-
зивом от здоровых овец (30). Итальянские специалисты предлагают жесткую выбраковку
подозрительных животных с исключением из употребления полученного от них мяса (29).
Для искоренения ЛАО в стаде специалисты США и Канады предлагают (23, 31) убой всех
животных пораженной фермы с заменой поголовья здоровыми овцами после тщательно
проведенных санитарно-гигиенических и дезинфекционных мероприятий.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Шишков В.П. и др. Медленные вирусн. инфекции овец. Обзорн. инф., М, 1984. 2.Analyse
the ration ofyoufud straw to jour ewe flock. The farmer, 1981, 99, 4 :55. 3.Ceretto F. et.al. Ann
Fac Med Vet Torino, 1979, 26 :255. 4.Cutlip R.C. et.al. Am J Vet Res, 1982, 43, 12 :2108.
5.Cutlip R. et.al. Am J Vet Res, 1982, 43, 12 :2108. 6.De Villers E.M. Dissert acts Intemazional
B,1981, 42, 4 :1319. 7.Deng P.H. J Chenese J of Vet Med 1981, 7, 11 :4. 7a.Dickinson A.G.
et.al. Gen Res, 1969, 13, 2 :213. 8.Galina H.A.H. et.al. Vet Mex, 1981, 12, 3 :123. 9.Geisel 0.
Prakt Tierarzte, 1978, Bd 59, 10 .111. lO.Hermann W. et.al. Deutsche Tierarztl Wochen. 1981,
Bd 88, 9 :349. ILHerwejer C. Tijdschrift dierschrift 19786, 103, 6 :326. 12.Hod J. et.al. Amer J
Pathol, 1977, 86, 3 :545. 13.Hunter A.R. etal. Britisch Veter J, 1983, 139, 2 :153. 14.Jenson R.
Dieseases of sheep, 1982 :224. 15.Julini M. Ann Fac Med Veter, Torino, 1980, 27 :217.
16.Koperewski A. et.al. Medycyna Weterynayina 1979, 35, 6 :347. 17.Lane M. Wisconsin
Agriculturist 1980, 107, 14 :18. 18.Martin W.B. et.al. Comp Immun Microbiol Infect, 1979, 2
:313. 19.Martin W.B. et.al. Britisch Veterinary J, 1980, 136, 3 :290. 2O.Maxhain R. Australien
Poll Dorset J, 19812, 11, 3 :8. 21.Nevjestic A. et.al. Veterinaria (Sarajevo) 1981, 30, 1 :383.
454
Глава XL Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
22.Nobel T.A. et.al. Am J Pathol, 1978, 90 :783. 23.On Practice 1982, 4, 4 :111. 23a.Payne A.L.
et.al. Prac.21 Ann Conf Electron Microsc Soc South Afr Johannesburg, 1982 :81. 24.Perk K.
et.al. Res Vet Sci, 12977, 245, 1 :46. 25.Perk K. J Nathl Cancer Inst, 1982, 69, 4 :747. 26.Perk
K. Ach Vet Sc Comp Med, 1982, 26 :267. 27.Rampichini L. et.al. Art S.G.S.Vet,1979, 33 :239.
28.Severin M. Volume in memor dell prof E.Barboni Univ. Porugia, Fac.Med.Veter. 1978-1979,
14 :227. 29.Severin M. Arch Veter Ital,1980, 31, 6 :29. 3O.Sharp J.M. The Veterinary Record
1981, 108, 18 :391. 30a.Sharp J.M. The Veterinary record 1981, 108, 18 :391. 31. Stevenson R
et.al. Canad Veter J, 1982, 23, 5 :147. 32.Stevenson R. et.al. Canad Veter J, 1980, 21, 9 :67.
33.Tontis A. Schweiz Arch Tierheilk, 1979, 121, 5 :251. 34.Verwoerd D.W. Onderstepoort J Vet
Res 1979, 46, 1 :61. 35.Vetwoerd D.W. et.al. J South Afr Vet Assoc, 1980, 51, 2 :71.
36.Vetwoerd D.W. Onderst J Vet Res, 1980, 47, 4 :275. 37.Verword D.W. et.al. Onderst J Vet
Res, 1980, 47, 1 .13. 38.Verword D.W. et.al. V-th Int cong of Virol., Strasbourg, France, 1981
:440. 39.Ziani Cherif T. Scole Nationale Vetcrinar. de Toulose 1980, 82 :1.
ПРОГРЕССИРУЮЩАЯ ПНЕВМОНИЯ ОВЕЦ
Chronic Progressive Pneumonia, CPP, lunger diaese, maedi,
Graaft-Reint disaese, atypical pneumpnia, laikipia lung disaese (англ.);
la bouhite (франц.); Zwoegerziekte (нем.)
Прогрессирующая пневмония овец (ППО), (аденоматозная хроническая бронхопневмо-
ния овец) - хронически протекающая вирусная болезнь овец.
В 1904 г. впервые описал Робертсон хроническую катаральную пневмонию овец, а в
1923 г. Марш обнаружил её в Монтане и назвал прогрессирующей пневмонией. Болели в
основном взрослые животные. Болезнь проявлялась прогрессирующей потерей массы, на-
растающими симптомами нарушения дыхания и смертью через 3-12 мес после заражения. С
1939 по 1952 г. прогрессирующая пневмония овец была распространена в Исландии. Впо-
следствии она была описана у овец Южной Африки, Франции, Нидерландов и Исландии.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Симптомы прогрес-
сирующей пневмонии очень сходны с таковыми при болезни маэди и zwogerzigter - хрони-
ческой лёгочной инфекции, обычно поражающей овец 4-летнего возраста и старше. Болезнь
контагиозна, инкубационный период продолжается от 1 г. до 3 лет.
Патологоанатомические изменения при ППО были впервые изучены Каудри (1925) и Де
Кокком (1929). Каудри обнаружил утолщенную межальвеолярную ткань с включениями и
лимфоцитами, многочисленные величиной с горошину узелки в лёгочной ткани. Старые
узелки прорастали фиброзной тканью. Вокруг поражённого участка развивались ателектаз и
компенсаторная эмфизема. Бронхиальные и медиастенальные лимфоузлы увеличены в 3-4
раза, однородны, серого цвета.
Как видно, патологоанатомические изменения отличаются от таковых при болезни ма-
эди. Они представляют собой широко распространённый аденоматоз, при котором лёгочная
ткань постепенно заменяется. Лёгкие тяжелее, чем в норме. Верхушечные и нижние участки
их уплотнены, красного или серого цвета. Гистологически обнаруживают лимфоидные узел-
ки и инфильтрацию лимфоидными клетками лёгочной ткани, воспалительные явления и
фиброз, а также пролиферацию эпителия в бронхах.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус ППО выделили Кеннеди и др. (1968) в Монтане из лёгочной ткани овцы с хрони-
ческим заболеванием лёгких.
Морфология и химический состав. РНК-содержащий вирус прогрессирующей пнев-
монии овец проходит через миллипоровый фильтр с диаметром пор 220 нм, но задержива-
455
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ется фильтрами с порами 110 нм. РНК этого вируса 1-нитиевая. Вирионы разнообразны по
размеру и морфологии и содержат эксцентрически расположенные нуклеоиды. Диаметр
внеклеточных частиц 90-110 нм. Процесс созревания, размножения вируса и морфология
аналогичны таковым вируса висны и сходны с онкогенными РНК-содержащими вирусами.
Устойчивость. Вирус ППО термолабилен, инактивируется при 56°С за 10 мин, чувст-
вителен к эфиру. Антигенная структура и антигенная активность не изучена.
Антигенная вариабельность и родство. Вирус ППО родствен возбудителям висны и
маэди. Поскольку в вирионах возбудителя ППО обнаружена обратная транскриптаза, он
может быть отнесён в группу онкорнавирусов.
ГА свойства. Вирус ППО не обладает ГА активностью.
Экспериментальная инфекция. Типичную болезнь удаётся воспроизвести внутрилё-
гочным и внутривенным введением подопытным животным вируссодержащей суспензии
лёгких или лимфоузлов.
Культивирование. Вирус ППО культивируется в 1-слойной культуре тестикулярной
ткани молодых ягнят. Через 24 ч после инокуляции в заражённой культуре клеток наблю-
даются цитопатические изменения, выражающиеся округлением клеток, повышением их
светопреломляемости с последующим формированием поликариоцитов и многоядерных
клеток. Через 4 дня большинство инфицированных клеток сливаются в гигантские синци-
тии. В 1958 г. Сигурдссон культивировал данный вирус в перевиваемой культуре клеток
плаценты овцы. При инфицировании культуры клеток в дозе 2 ТЦД50 на клетку ЦПИ разви-
ваются на 4-й день. Типичные полиокариоциты становятся видимыми в 1-й дн заражения.
Число их возрастало соответственно повышению титра вируса. Заражение культуры клеток
большими дозами вируса ППО вызывает слияние клеток в течение первых 3 ч.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Инфекция передаётся посредством контакта
Спектр патогенности в естественных условиях. Заболевают только овцы. Локализа-
ция вируса, вирусемия, вирусоносительство и вирусовыделение не изучены.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен, специфическая профилактика не разработана.
АРТРИТ-ЭНЦЕФАЛИТ КОЗ
Артрит-энцефалит коз - (АЭК), симптомокомплекс, характеризующийся развитием де- .
миелинизирующего энцефалита, прогрессирующего артрита и интерстициальной пневмо-
нии. Болезнь, известная также как лейкоэнцефаломиелит-артрит коз - (9,10).
Предполагается, что болезнь распространена широко (17), так как симптомокомплекс
поражения 3-х систем органов (ЦНС, суставов, лёгких) у коз уже описан в некоторых стра-
нах (6, 7,12, 24,27, 26, 28). Инфекция широко известна во Франции. Чаще вирус встречает-
ся в районах интенсивного козоводства - Европе, Австралии, США. При этом только у 1-2%
инфицированных животных поражается ЦНС и до 30-40% (в последствии) - суставы.
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Болезнь широко пора-
жает козлят в возрасте 1-5 мес. По клиническим признакам АЭК похож на синдром висны-
маэди у овец (7, 8, 9). В ранних сообщениях эта болезнь была представлена как маэди или
ППО по аналогии с аденоматозом овец (25а), проявляется атаксией, гиперстезией, иногда
лихорадкой, прогрессирующими парезами конечностей, перерастающими в параличи. Про-
цесс чаще начинается с задних конечностей и распространяется на передние. Животные час-
то погибают с картиной тетраплазии. Присоединяются явления пневмонии и воспаления
суставов. Яркий клинический признак - увеличение объёма путового сустава. Картина кро-
ви, как правило, без изменений, иногда может наблюдаться лимфопения. В цереброспи-
456
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные иттфектгии
нальной жидкости отмечается плеоцитоз, в основном за счёт мононуклеарных клеток, и уве-
личение количества белка (8). Течение болезни - несколько недель, исход - летальный.
Патоморфологические изменения у естественно и экспериментально инфицированных
животных локализуются в ЦНС, суставах и лёгких (9). В ЦНС изменения выявляют в белом
веществе головного и спинного мозга и мозжечке. Наиболее выраженные поражения чаще
обнаруживаются в шейных и грудных отделах спинного мозга. Микроскопически пораже-
ния характеризуются образованием плотных периваскулярных муфт из мононуклеарных
клеток, формированием лимфоцитарных инфильтратов, пролиферации глии и выраженной
первичной демиелинизацией. В тяжёлых случаях участки нервных клеток замещаются гли-
альными рубцами. В суставах обнаруживается гиперплазия синовиальных клеток, лимфоци-
тарная и плазмоклеточная инфильтрация. При прогрессировании болезни нарастают дегене-
ративные изменения, такие как фиброз, некроз, и минерализация синовильных оболочек,
появляются периартикулярные коллагенозные структуры. В лёгких - изменения, аналогич-
ные наблюдаемым при маэди у овец: интерстициальная пневмония, гиперплазия периброн-
хиальной лимфоидной ткани (1).
Патогенез. Вирус пребывает в латентном состоянии в предшественниках макрофагов и
начинает реплицироваться в период их дифференциации. На процесс репликации вируса
влияют вирусные АТ и цитокины. АТ к гликопротеинам одних лентивирусов нейтрализуют
вирус, в то время как АТ к гликопротеину других вирусов соединяются с вирионами, но не
нейтрализуют их. Образовавшиеся в таких случаях комплексы вирус-АТ связываются с Fc-
рецепторами макрофагов и способствуют проникновению вирусов в клетки. После проник-
новения в ткани инфицированные макрофаги взаимодействуют с лимфоцитами и индуци-
руют воспалительный каскад с дальнейшей продукцией цитокинов, которые усиливают экс-
прессию АТ класса II - главного комплекса гистосовместимости и пролиферацию лимфоци-
тов В и CY. Патологический процесс, по-видимому, усиливается образованными комплек-
сами: вирусный гликопротеин - 1g (21).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус относится к семейству Retroviridae, близок, но не идентичен вирусу висны-маэди.
По многим свойствам сходен с вирусом висны-маэди овец (11, 12, 20). Вирус, изолирован-
ный от больных коз, обладает свойствами, характерными для ретровирусов.
Морфологический и химический состав. Вирус содержит 60-70S РНК и РНК-
зависимую ДНК-полимеразу, а в инфицированных вирусом культурах клеток обычно обна-
руживают вирусные частицы, морфологически характерные для ретровирусов. В градиенте
сахарозы его плотность составляет 1,15 г/см3, т.е. идентична плотности вируса висны-маэди.
Морфогенез вируса АЭК идентичен морфогенезу вируса висны-маэди: частицы типа С
ретровируса диаметром 100-120 нм почкуются на плазменных мембранах инфицированных
клеток. Почкующаяся частица содержит электронноплотную внутреннюю структуру, имею-
щую форму полумесяца. После созревания частицы отпочковываются в межклеточное про-
странство; зрелые экстрацеллюлярные вирионы имеют отчетливый промежуточный слой,
электронно-плотное центрально расположенное ядро.
Структурные белки АЭК очень похожи на белки вируса висны-маэди овец, а их АГ де-
терминанты перекрестно реагируют со структурным полипептидом рЗО вируса висны-маэди
(1а). Эти вирусы в РИД неразличимы, поэтому некоторые исследователи считают, что вирус
АЭК является вариантом вируса висны-маэди овец, хотя, как установлено, они различаются
по критерию гомологичности нуклеотидных последовательностей генома (14, 18, 25) и яв-
ляются 2-мя различными представителями семейства ретровирусов. Гомологичные участки
[геномов этих вирусов, были выявлены в районах gag и pol и небольшой области гена env,
[контролирующих групповую специфичность, определяемую близкими в АГ-отношении
[внутренними белками 2-х вирусов. Негомологичные участки, такие как большая область ге-
457
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
на env, могут представлять уникальные последовательности нуклеотидов, определяющие
штаммовую специфичность и клеточный тропизм. Таким образом, полученные данные хо-
рошо коррелируют с результатами сравнительного изучения биологических свойств, указан-
ных вирусов (24 а).
Устойчивость. Не изучена. Прототипные шт. - К 1514, 1736-81, 2150-81
Антигенная вариабельность и родство. Вышеприведенные данные о родстве вируса
АЭК с возбудителем висны-маеди, вызывающим у козлят в возрасте 2-4 мес пневмонию и
поражение ЦНС, а у взрослых особей - артрит, чаще путового сустава, подтверждаются ря-
дом исследователей. Данный вирус более связан с вирусом висны, чем с вирусом ВИЧ. Ви-
рус кодирует белок Rev, необходимый для эффективной репликации его в культуре клеток
(29). Поверхностный гликопротеин gpl35 вируса АЭК формируется в результате посттранс-
ляционной модификации гликозилированного gp 155 (6а). Установлена частичная гомоло-
гия генома ВИЧ с геномами лентивирусов домашних животных: висны-маэди, АЭЕ и
ИНАН. Наиболее выраженная гомология обнаружена с геномом вируса висны-маеди (14а).
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на ягнятах 1,5-мес возраста, у кото-
рых развиваются артриты и продуцируются вирус-специфические АТ. С этой целью кровь
от молодых серонегативных коз центрифугируют в р-ре фикола с последующей адгезией в
лунках пластиковых плашек, выделяют моноциты. Последние инфицируют in vitro вирусом
и инокулируют козам в дозе по 105 клеток/животное. Спустя 3 мес инфицированных живот-
ных обрабатывают гексаметазоном. Обработка обостряет течение инфекции. После ее про-
явления у всех коз, инфицированных чужими моноцитами, обычно развиваются артриты и в
крови появляются инфицированные моноциты; в группе коз, зараженных собственными мо-
ноцитами, только у одной из 3 отмечали обострение инфекции. Таким образом, реакция хо-
зяина на инфицированные вирусом клетки является основным фактором, определяющим
экспрессию вируса АЭК (15).
Культивирование. Вирус АЭК размножается in vitro в культурах клеток козьего про-
исхождения, а также, как и изоляты вируса висны-маеди, в культурах клеток овец (12).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Предполагают, что козлята заражаются внутриутробно или немедленно после рождения
(7). Вирус АЭК обнаружен в молоке и молозиве инфицированных коз (3, 23). Совместное
содержание ягнят со взрослыми козами, инфицированными вирусом АЭК, не вело к разви-
тию болезни у ягнят в течение 15 мес наблюдения (16, 22, 23). Однако вирус АЭК передает-
ся с молоком не только козлятам, но и ягнятам.
ДИАГНОСТИКА
АЭК - это медленная ретровирусная инфекция. Возбудитель ее способен длительно
(многие годы) персистировать в организме коз. У взрослых животных развиваются артри-
ты, а у молодняка - энцефалиты. Персистенция возбудителя сопровождается интенсивным
гуморальным иммунным ответом. Для обнаружения вирусспецифических АТ наибольшее
распространение получили РДП и ИФА. Часть инфицированных коз остаются серонегатив-
ными. Пик заболеваемости взрослых коз наблюдают на 4-й лактации. Наиболее часто пора-
жаются запястные суставы, реже - другие суставы (полиартрит).
Выделение вируса. Его изолируют путем культивирования в культурах запястной си-
новиальной мембраны, вымени, лимфоузлов и легких. Вирус также удается изолировать из
молока гепаризированной крови и запястной синовиальной жидкости с использованием вто-
ричных культур козьих синовиальных мембранных клеток (4). С этой целью от больных
артритом-энцефалитом коз выделяют лейкоциты, серийные разведения которых сокульти-
вируют с культурой клеток синовиальной оболочки коз. Минимальное количество лейкоци-
тов крови, необходимое для выделения вируса методом сокультивирования, варьирует от
105 до 5107. Не установлено зависимости уровня инфицированное™ лейкоцитов перифери-
458
Глава XI. Family Retroviridae Ретровирусные инфекции
ческой крови с титром их сывороточных преципитинов к протеину р28 и гликопротеину
gpl35 возбудителя. Гуморальный иммунный ответ не является фактором, регулирующим
персистентную инфекцию моноцитов крови клинически больных коз (13).
Серологическая диагностика. Для серологической диагностики АЭК с помощью РДП
готовят АГ из вируса АЭК. Этой реакцией определяют уровень серопозитивности стад. Од-
нако имеется сообщение о том, что серологическая диагностика не всегда гарантирует выяв-
ление инфицированных животных. Непрямой ELISA с использованием в качестве АГ очи-
щенных вирионов вируса АЭК в 85% совпадали с данными РДП в агаровом геле при ис-
пользовании АГ вируса висны-маэди. Разработан и успешно испытан метод биотин-овидин
ELISA для выявления специфических АТ и рекомендован для диагностики данной инфек-
ции (5). АТ к вирусу АЭК определяют с помощью ИФА в молоке и сыворотке коз. Средний
геометрический титр АТ в сыворотке составлял 1:898, в молоке - 1:91. По результатам тит-
рования молока можно приблизительно судить об уровне инфицированности стада. Охлаж-
дение молока и консервирование с помощью 0,05%-ного мертиолята не влияет на результа-
ты исследования (16а).
В дифференциальной диагностике необходимо АЭК отличить от висны-маэди у коз и
овец, поскольку оба вируса содержат перекрестно реагирующий внутренний протеин, т.е.
АГ, реагирующий в используемых реакциях определения АТ, РСК, РИД и ELISA (23). Как
известно, PH при висны-маэди овец является штаммоспецифической и выявляет АГ- вари-
анты вируса (16,19).
ПРОФИЛАКТИКА И МЕРЫ БОРЬБЫ
Средства специфической профилактики АЭК не разработаны. Поэтому меры борьбы
сводятся к проведению ветеринарно-санитарных мероприятий, выявлению и выбраковке
больных и серопозитнвнях животных. Рекомендуется изолированное содержание потомства
инфицированных коз и вскармливание козлят молоком КРС или молоком коз из благопо-
лучных хозяйств. Совместное содержание коз и овец может неблагоприятно влиять на по-
пытки искоренения 2-х болезней, вызываемых ретровирусами, т.е. артрита-энцефалита коз
и висны-маэди овец (1).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Архипов Н.И. и др. Медленные инф. животных. М. Агропромизд,1987. 1а.Феннер Ф. и др.
Биология вирусов жив. М. Мир, 1977, 2 :175. l.Adams D.S. et.al. Am J Pathol, 1980, 199
.257. 3.Adams D.S. et.al. Am J Vet Res, 1983, 44 :1670. 4.Agrini P. et.al. Microbiologica, 1987,
10, 4 :353. 5.Archambault D. J Clin Microbiol, 1988, 26, 5 :971. 6.Banks K.L. et.al. Am J Vet
Res, 1983, 44 :2307. 6a.Cheevers W.P. etal. J Gen Virol, 1988, 69 :675. 7.Corck L.C. et.al. Acta
Neuropathol, 1974, 29 :281. 8.Cork L.C. JAVMA 1976, 169 :1303. 9.Cork L.C. et.al. Lab
Invest,1980, 42 :596. 10.Crawford T V. et.al. Sience, 1980a, 207 :997. 11.Crawford T.B. et.al.
Am J Pathol, 1980b, 100 :443. ll.Dahlberg J.E. et.al. Virol., 1981, 39 :914. 13.Ellis T.M.
Austrveter J, 1990, 67, 8 :302. 14.Gazit A. et.al. J Virol, 1983, 124 :192. 14a.Gonda M.A. et.al.
Proc Nat Acad Sci, USA, 1986 :4007. 15.Grigen F. et.al. Ann Rech veter, 1990, 21, 3 :179.
16,Gudnattur M. Prog Med Virol, 1974, 18 :336. 16a.Julian M.M.X. etal. Vet Microbiol, 1994,
38, 4 :359. 17.Luttly R. et.al. J Gen Virol, 1983, 64, 7 :1433. 18.Marsh R. et.al. J Infect Dis,
1969, 120, 6 :713. 19.Narayan O. et.al. Science, 1977, 197 .376. 2O.Narayan O. et.al. J Gen Vir,
1980, 50 :69. 21.NarayanO. et.al. JReumathol, 1992, 32 :25. 22.Oliver R. et.al. NewZeland Vet
J, 1982, 30 :158. 23.Oliver R.E. et.al. Vet Rec, 1985, 116, 3 :83. 24.0'Sullivav B.M. et.al. Aust
Vet J, 1978, 54 :479. 24a.Pyper J.M. et.al. J Virol, 1984, 51, 3 :713. 25.Roberson S.M. et.al. J
Virol, 1982, 44, 2 :755. 25a.Rajya B.S. et.al. Am J Vet Res, 1964, 25 :61. 26,Stavron D. et.al.
Comp Pathol, 1969, 79 :393. 27.Sherman D.N. VM/SAC. Vet Med Smoll Anim Clin, 1978, 73
:1439. 28.Williams C.S. VM/SAC-Vet Med Small Anim Clin, 1979, 74 :9. 29.Schoborg R.V.
et.al. Virol, 1994, 202, 1 :1.
459
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные инфекции
Глава XII. КАЛИЦИВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА CALICIVIRIDAE
Семейство калицивирусов объединяет несколько видов вирусов, вирионы которых име-
ют характерную морфологию с чашеобразными углублениями на сферической поверхности
капсида, откуда происходит их название (Calex, или cholice - чаша). Выделены в самостоя-
тельное семейство, поскольку в структуре вириона поскольку имеют только один главный
полипептид (60-70 кД). При заражении клеток калицивирусами помимо геномной РНК син-
тезируются субгеномные РНК (6). Семейство включает только один род Calicivirus. В состав
рода входят вирус везикулярной экзантемы свиней (прототипный вирус) (13 серотипов), ви-
рус Сан-Мигуель морских львов (13 серотипов), калицивирусы собак и кошек. Возможными
представителями рода являются вирусы с типичной калицивирусной морфологией, выде-
ленные от человека, обезьян, КРС, свиней, кроликов, норок, цыплят, морских животных,
амфибий и насекомых. В последнее время появились сообщения об обнаружении калициви-
русов в содержимом кишечника младенцев при гастроэнтерите (вирионы, напоминающие
“звезду Давида” с плавучей плотностью в CsCl 1,38-1,40 г/см3). Частицы, напоминающие
калицивирусы, обнаружены в фекалиях поросят, страдающих диареей. Причастность кали-
цивирусов к указанным заболеваниям требует дальнейшего изучения (1,2).
Структура и состав вирионов. Вирионы имеют мол.м. 15 кД, коэффициент седимен-
тации 170-183 S, плавучую плотность в CsCl 1,33-1,39 г/см3 в зависимости от штамма виру-
са. Вирион представляет собой лишенный суперкапсидной оболочки сферический нуклео-
капсид икосаэдрической симметрии диаметром 35-39 нм. На поверхности вирионов в нега-
тивно окрашенных препаратах различают 32 чашеобразных углубления - “ямки”. Поверх-
ность образована 60 структурными единицами, каждая из которых, вероятно, представляет
собой полипептидный тример. В центре вириона находится РНК, которая связана с минор-
ным полипептидом. На проекции вириона - 10 выступов, представляющих собой края чаше-
образных углублений. В составе вириона липиды и углеводы не обнаружены, присутствие
ферментов неизвестно (3). Капсид состоит из 180 молекул белка. Калицивирусы устойчивы
к жирорастворителям и мягким детергентам, стабильны при pH 5,6-10 (4). Стабильность
при pH 5 может быть не одинакова у различных штаммов. Некоторые калицивирусы инак-
тивируются трипсином. Вирус быстро инактивируется при 50° С даже в присутствии ионов
магния. При 37° за 8 ч инфекционность его в культуральной среде снижается на 90%. Инак-
тивируется додецилсульфатом натрия, фенолом, альдегидами, но устойчив к многим йодсо-
держащим дезинфектантам. Некоторые штаммы снижают активность при воздействии про-
теолитических ферментов. Вирус инактивируется
Получение очищенных препаратов калицивирусов не вызывает особых трудностей. Для
этого используют комбинации различных методов: обработку дезоксихолатом, фреоном или
хлороформом; преципитацию ПЭГ, спиртом или сернокислым аммонием; дифференциаль-
ное центрифугирование. Очищенный вирус более лабилен по сравнению с неочищенным.
Структура генома. Геном калицивирусов представлен единой 1-спиральной линейной
плюс-РНК с мол.м. 2,6-2,8 кД (8,2 тыс. нуклеотидов) и коэффициентом седиментации 36-
38S. На долю РНК приходится 18% массы вириона. З’-конец геномной РНК полиаденили-
рован, а 5’-конец - блокирован ковалентно связанным белком с мол. м. 10-15 кД (Vpg -
virion protein genom). Вирусная РНК обладает инфекционностью. В вирионах калицивиру-
сов обнаружены кроме Vpg, главный (60-71 кД) и минорный (15-19 кД) белки. На долю
минорного белка приходится около 2% массы всех белков. Вероятно он ассоциирован с
РНК. Белок Vpg, ковалентно связанный с 36S РНК, обнаружен как в инфицированных
460
Глава XU. Family Caliciviridae Калицивирусные инфекции
клетках, так и в очищенных вирионах вируса Сан-Мигуель морских львов (СММЛ). Этот
белок (15 кД) оставался связанным с РНК после депротеинизации. Методом РНК-РНК-
гибридизации показана высокая степень гомологии оснований у 4 серотипов вируса ВЭС
(70-80%), двух серотипов вируса СММЛ (80-90%) и между вирусами ВЭС и СММЛ (60-
70%). В РНК вируса ВЭС и РНК калицивируса кошек обнаружена слабая гомология основа-
ний (10-15%). Инфекционность вирионной РНК указывает на то, что она выполняет функ-
ции иРНК и обладает присущими ей свойствами. Установлена инфекционность препаратов
с 36 и 18-22S РНК. 36S РНК чувствительна к РНК-азе, тогда как более медленно седимен-
тирующие РНК устойчивы к ней. При экстракции РНК из инфицированных клеток в рас-
творе с высокой ионной силой обнаруживается 42S РНК, которая в денатурирующих усло-
виях превращается в 36S РНК и, вероятно, является ее конформационным вариантом. Схема
репликации РНК калицивирусов не выяснена. Имеются данные, что она подобна схеме син-
теза РНК альфавирусов. Главным продуктом белкового синтеза в клетках, зараженных ка-
лицивирусом, является структурный белок капсида. Сколько ещё синтезируется вирусспе-
цифических полипептидов, неизвестно. Продуктом трансляции 22S РНК in vitro является
белок, подобный капсидному белку; 37S и 18S РНК в аналогичных условиях не транслиро-
вались. Два неструктурных полипептида с мол.м. 80 и 100 кД (gp8O и gplOO) и его струк-
турный полипептид не имеют общих предшественников. Возможно, что предшественником
gplOO является gpl20. Другие авторы обнаружили в инфицированных клетках 5 неструк-
турных полипептидов: gpH5, gp86, gp40, gp36 и gp29. Полученные данные свидетельству-
ют о том, что gp86, вероятно, кодируется 22S РНК и является предшественником главного
структурного полипептида. Вирионный полипептид в клетках обнаруживали через 2 ч, не-
структурные - через 30-60 мин после заражения. Синтез этих полипептидов в основном за-
канчивался через 4 ч после заражения. Вирусиндуцированные ферменты и, в частности,
РНК-репликаза не идентифицированы. Размножение калицивирусов происходит в цито-
плазме клеток. Вирионная плюс-РНК транскрибируется в комплементарную минус-РНК, ко-
торая служит матрицей для синтеза РНК потомства и субгеномных РНК. Вирионная РНК
обеспечивает синтез неструктурных белков, а субгеномные РНК транслируются с образова-
нием структурных белков. Калицивирусы созревают в цитоплазме и могут образовывать
кристаллоподобные структуры (5).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
КГайдамович С.Я., Жданов В.М. Класс, и номенкл. вирусов. М, 1980. 2,Сюрин В.Н. и др.
Вет. вирусол. М, 1992.3.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М Колос, 1979. 4.Carter M.J.
Arch Virol, 1990, 114, 3-4:143. S.Francki R.I.B. et.al. Arch Virol, 1991:2. Suppl 6.Wildy P.
Class and nomencl of virus. First Report of the Int Cong on Nomenclature of viruses, Monosr
Virol, Karger, Basell, 1971.
ВЕЗИКУЛЯРНАЯ ЭКЗАНТЕМА СВИНЕЙ
Vesicular exanthema of swine (англ.); Blaschenausschlag des Schweines ,
Blaschenexanthem, Vesikulares Exanthem ( нем.); Exanthema vesiculex ( франц. )
Везикулярная экзантема свиней (ВЭС) - остро протекающая, контагиозная болезнь сви-
ней, характеризующаяся лихорадкой и образованием везикул на пятачке, губах, языке, сли-
зистой оболочке ротовой полости и на нижних частях конечностей (венчике, межпальцевой
области). Иногда поражения локализуются на коже вымени, особенно у кормящих маток.
Болезнь была широко распространена в США (по официальным данным в 1950-1952
гг.) и наносила большой экономический ущерб. Возбудитель ВЭС - наиболее известный
представитель семейства калицивирусов, которые широко распространены в природе.
461
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивярусные инфекции
Предполагают, что морские млекопитающие могут инфицироваться вследствие поедания
рыб различных видов, так как у отдельных их представителей, которыми питаются ластоно-
гие удавалось выделять калицивирусы, патогенные для свиней (12, 22). Учитывая возмож-
ность использования рыбы и мясопродуктов от морских млекопитающих в корм свиньям,
вирус сравнительно легко заносится на фермы и вызывать вспышки заболевания (11,15,16).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения При типичном тече-
нии симптомы болезни развиваются в 2 фазы. 1-я фаза продолжительностью от 48 до 72 ч
характеризуется гипертермией и появлением первичных везикул на слизистой оболочке но-
са и полости рта, обычно связанных с анорексией. Первичные везикулы представляют собой
бледные припухлые участки эпителия от 5 до 30 мм в диаметре и от 10 до 20 мм в высоту,
заполненные серозной жидкостью, содержащей вирус. Эпителиальная оболочка их при лег-
ком надавливании может лопнуть, обнажая кровоточащую и чрезвычайно чувствительную
дерму, которая в дальнейшем покрывается желтоватой фибринозной пленкой (Рис. 142, 143).
Первичные поражения, появляющиеся на морде, распространяются на слизистые обо-
лочки губ, щек и языка. Они обусловлены вирусом, освободившимся из первичных везикул,
так как новые поражения часто появляются на участках кожи, куда попадала жидкость из
лопнувших везикул. Ткани морды и языка гиперемированы, отечны, напоминают “булаву”,
а распухший язык вызывает обильное слюновыделение. В 1-ю фазу болезни почти всегда
повышается температура тела. Снижение температуры и разрыв первичных везикул свиде-
тельствует о конце 1-й фазы болезни.
Вторичные везикулы, 2-я фаза обычно длится 24-72 ч, на подошве, на коже области
межкопытной щели и венчика вызывают хромоту По прошествии этого срока вторичные
везикулы лопаются, боль стихает. Во время 1-й и 2-й фаз болезни животные отказываются
от корма, что приводит к истощению. В неосложненных случаях больные быстро выздорав-
ливают. Патогенная микрофлора, проникшая через пораженные участки эпителия, может
вызывать тяжело протекающую секундарную инфекцию. У некоторых животных роговой
башмак спадает, и восстановление его продолжается от 1 до 3 мес. Иногда болезнь может
сопровождаться диареей или протекать незаметно.
При хроническом течении болезнь длится 2-3 нед, и везикулы появляются на конечно-
стях. Морфологические изменения кожи сходны с изменениями при ящуре и везикулярном
стоматите. Вирус в основном размножается в мальпигиевом слое эпидермиса. В клетках
многослойного плоского эпителия происходит заметное набухание цитоплазмы, пикноз ядер
и распад хроматина. В результате некроза и последующего лизиса зараженных клеток в
эпителиальном слое появляются “отверстия”. В клетках, расположенных по краям пораже-
ний, обнаруживают ранние признаки дегенерации, межклеточные мостики удлиняются, а
межклеточное вещество отечно. Подкожные ткани гиперемированы, отечны, а иногда с кро-
воизлияниями. По всей дерме в участках пораженного мальпигиевою слоя наблюдаются
инфильтраты полиморфнонуклеарных лейкоцитов (6).
Патогенез. Течение везикулярной экзантемы у подсвинков характеризуется нейтро-
фильным лейкоцитозом и существенно не влияет на картину красной крови (1).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
В 1952 г. болезнь распространилась на большей части территории США. Вирус ВЭС
впервые открыли и описали Мэдин и Траум (1953).
Морфология и химический состав. Диаметр вирионов 30-32 нм у типа Н-54 и 27 нм у
типа А-48. Все исследованные типы вирионов имеют кубическую симметрию, форму икоса-
эдра с шипоподобными структурами на поверхности капсида, который составляет 32 капсо-
мера (Рис. 67). Вирус содержит 1-нитевую РНК с мол.м. около 2-106Д. Коэффициент седи-
ментации - около 37S, плавучая плотность в CsCl 1,36-1,38 г/см3, в вирионе ее содержится
20-24%. Инфекционная РНК содержит примерно 29% адениловой, 25,1% цитидиловой,
462
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные инфекции
20,6% гуаниновой и 25,3% уридиловой кислот. Она получена из штаммов А-48, Д-53, Е-54.
Типы А-48, Н-54 и 1-55 не стабилизируются MgCl2, NaCl, КС1, СаС12 в противоположность
большинству пикорнавирусов человека, к которым ранее относили вирус ВЭС. Частицы ви-
руса ВЭС имеют шаровидную форму с нитевидными структурами на поверхности. На плот-
ном фоне контрастирующего вещества вирионы приобретают звездчатую форму с наличием
позитивно и негативно окрашенных участков поверхности. При диаметре частиц вируса
ВЭС 40 им негативно окрашенный участок занимает 15-20% от всей поверхности вириона.
Феномен дипольной структуры оказался характерным признаком для представителей энте-
ровирусов (вирус ящура) и калицивирусов (вирус ВЭС), что подтверждает общую законо-
мерность строения данных вирусов. Сравнительная характеристика свойств вирусов, вызы-
вающих везикулярные болезни животных представлена в табл. XII. 1.
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, стабильность при pH 5 варьирует, не ста-
билен при pH 3. Устойчив при 50°С с добавлением 1 М MgCl2. Стенки везикул, снятые с
больных животных, сохраняют патогенность в течение 2 V2 лет, в 1%-ном пептоне в услови-
ях комнатной температуры - в течение 6 нед. Для лабораторных исследований вирус обычно
сохраняют при -70°С. При 62°С он инактивируется за 60 мин., при 64°С - за 30 мин. Вирус-
содержащие кусочки мяса в условиях 7°С сохраняют инфекционность в течение четырех не-
дель, а при -70°С - 18 нед. При pH свыше 12 вирус разрушается за 15 мин. Инактивирован-
ный теплом вирус удавалось реактивировать добавлением к вирусной суспензии моногидро-
хлорида цистеина. Минимальный период, необходимый для реактивации равен 8 дн. Для
обезвреживания вируса рекомендуют 2%-ный р-р NaOH.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. В организме переболевших свиней образуются ВНА и КСА,
сроки появления и продолжительность обнаружения которых не изучены. ВНА в крови вы-
являются раньше, и в более высоких титрах у свиней, зараженных внутрикожно. Макси-
мальные титры АТ выявляли в крови, легких, сердце, мезентериальных лимфоузлах, селе-
зенке, семенниках (яичниках) (4).
Антигенная вариабельность и родство. Известны 13 серотипов вируса, различаю-
щихся в PH и РСК. В тесте перекрестной иммунизации вначале было установлено 4 имму-
нологических типа вируса, названных А, В, С и D. Типы В и D патогенны лишь для свиней,
тогда как А и С, патогенны еще и для лошадей. В последующие годы (1950-1956) выделен
целый ряд иммунологически и антигенно отличных штаммов: А-48, В-51, С-52 и D-53. В
РСК эти штаммы оказались антигенно различными. Далее были изолированы и идентифи-
цированы штаммы Е-54, С-55, Н-54 и 1-55. Затем выделены новые типы - D-56, К-54, F-55,
G-55. Последние 2 шт. обладали очень низкой патогенностью для свиней. Все 13 антиген-
ных типов вируса ВЭС различаются в РСК. Показано, что 11 серотипов вируса можно диф-
ференцировать с помощью PH и подтвердить методом перекрестного иммунитета на свинь-
ях. Роль различных антигенных типов в эпизоотологии болезни не совсем ясна. Простота
выделения различных антигенных типов вируса свидетельствует о чрезвычайной лабильно-
сти его антигенной структуры. При исследовании 88 полевых изолятов вируса, выделен се-
ротип В-51 в 43%, С-52 в 27 %, D-53 в 23%, Е-54 в 70% случаев, серотип А-48 вообще не
выделен. Замечено, что один иммунологический тип, преобладавший в определенный пери-
од, вскоре заменялся другим. Так, в 1951 г. в Калифорнии преобладал тип В-51, в 1952 г.
его сменил тип С-52, в 1953 г. вновь появился тип В-51, а в начале 1954 г. снова выявлен
тип С-52. Такой “антигенный дрейф” свидетельствует об отсутствии иммунологического
родства, т.е. активный иммунитет к одному типу вируса не предохраняет от заражения дру-
гим типом вируса. Недавно из содержимого кишечника поросят с признаками диареи выде-
лили вирус, сходный с калицивирусами. Клетками-мишенями был эпителий ворсинок тон-
кого кишечника. Тем не менее “поросячий” вирус отличался от возбудителя ВЭС (Па).
463
Глава ХП. Family Calidviridae Калицивирусные инфекции
За последние годы появились сообщения относительно некоторого сходства в антиген-
ной структуре вируса везикулярной экзантемы с калицивирусами морских львов, ^первые
вирус Сан Мигуеля (SMSV) изолирован от морских львов в 1972 г. вблизи Калифорнии (15).
В 1969-1971 гг. в этом районе наблюдали заболевание морских львов, сопровождавшееся
абортами. ВНА к вирусу обнаружили у других видов ластоногих млекопитающих, а также у
диких свиней, обитающих в прибрежной зоне Калифорнии. В антигенном отношении вирус
морского льва неоднороден. Серотипы калицивируса Сан Мигуеля нумеруются последова-
тельно в соответствии с открытием за исключением SMSV3. Сейчас описано 12 серотипов
вируса Сан Мигуеля, как и 5 других калицивирусов, связанных с морскими животными (8,
9, 20). Морские животные (рыбы, морские львы, пушные тюлени, слоновые тюлени н др.)
являются естественными хозяевами указанных 12 серотипов SMSV и по крайней мере 5
других калицивирусов (14). Серотипы, тесно связанные с вирусом Сан Мигуеля инфициру-
ют различных морских млекопитающих Тихоокеанского побережья; антитела находили н у
наземных млекопитающих (свиньи, лисицы, буйволы, ослы, КРС) на западном побережье и
Исландском канале в районе Санта Барбары (21), но их связь с естественным заболеванием
не ясна. Аминокислотный состав белков оболочки 3-х серотипов этого вируса (IMP - 1-й
тип; 15FT - 4-й тип; 205 - 5-й тип) и белков оболочки вируса везикулярной экзантемы сви-
ней сходен. Вероятно, вирус морских львов Сан Мигнуеля является антигенным вариантом
вируса ВЭС. Таким образом, морские львы и, возможно, другие ластоногие могут служить
естественным резервуаром этого вируса (2, 5). Выделение вируса серотипа МЛСМ от кли-
нически здоровых свиней и наличие АТ к антигенным вариантам вируса (ВЭС и МЛСМ) у
морских млекопитающих, диких и домашних свиней указывает на то, что ВЭС как вирусная
болезнь не может быть искоренена, даже если она не встречалась у свиней более 20 лет.
ГА свойства. Вирус ВЭС не агглютинирует эритроциты овцы, кролика, морской свин-
ки, хорька, хомячка, крысы, свиньи н человека группы 0.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. В первые пять дней
вирус содержится в мышцах и внутренних органах больных животных. Выделение его на-
чинается через 12 ч после внутривенного заражения и длится 84-108 ч. После интрадер-
мального заражения свиней вирус выделяли из крови через 24 и 48 ч; через 72-96 ч изоли-
ровать его уже не удавалось. При интравенозном заражении виремия начиналась за 48 ч до
появления везикул и заканчивалась через 36 ч после их высыпания. Ткани больных свиней
остаются вирулентными не менее пяти дней после заражения. Установлено, что в период
острого переболевания вирус содержится в моче н фекалиях. В больших титрах вирус нахо-
дится в стенках везикул н везикулярной жидкости. Независимо от метода инфицирования
свиней вирус в крови удается обнаружить до появления клинических признаков и вирусе-
мия продолжается в течение 3-х суток. Наиболее высокие титры вируса в органах и тканях
выявляли в период генерализации патологического процесса - через 36-48 ч после зараже-
ния. Максимальные титры вируса установлены в крови, коже и лимфоузлах передних ко-
нечностей, слизистой оболочке языка. Наиболее продолжительное время (до 5 сут) вирус
выделяли из слизистой оболочки языка (4).
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на свиньях. При внутрикож-
ном заражении их в области пятачка или в слизистую оболочку ротовой полости; развивает-
ся классическая реакция: через 12-18 ч на месте введения вируса появляются первичные по-
ражения, а через 48-72 ч - вторичные. При подкожном, внутримышечном или интравеноз-
ном заражении везикулы на пятачке, языке, губах, слизистой оболочке ротовой полости и
других чувствительных тканях появляются в течение 24-96 ч. В типичных случаях наблю-
дают 2-х фазное течение болезни. Помимо свиней, в экспериментальных условиях типами А
464
Рис.1. Схема строения реовируса.
1:а-наружный и б-внутренний капсиды с сердцевиной.
2: вирус представлен в виде икосаэдра (Мейер и др.,
1965)
Рис. 2. Группа субъединиц
реовируса с расположенным
в центре гексоном, состоя-
щим из 6 клиновидных субъ-
единиц (Пальмер, Мартин,
1977)
Рис. 3. Ультраструктура вируса КЛО,
х200000; внизу слева 2 вириона,
х44ОООО (Хоуэлл и Ферворд, 1971)
Рис. 4. Ультраструктура эпителиальных кле-
ток свиней, зараженных ротавирусом (содер-
жат плотные гранулярные вироплазмы пока-
заны стрелками).Вирионы с двойной оболоч-
кой в цистернах эндоплазматического рети-
кулума (большая стрелка) х23800.
Рис. 5. Иммунофлуоресценция
клеток МА-104, зараженных рота-
вирусом свиней группы А. Накоп-
ление АГ в цитоплазме клеток,
х400.
Рис. 6. Кишечник 3-х дн поросят-гнотобион-
тов. A-нормальные сосочки контрольного по-
росенка; В-сильно выраженная атрофия со-
сочков через 18 часов после заражения.
465
Рис. 7. Фотография кишечника 3-дн поросят-гно-
тобиотов. А нормальные сосочки, х70; В-пораже-
ния через 18 час после заражения, х165; С-вер-
хушки атрофированных сосочков покрыты дегене-
рированными эпителиальными клетками (24 час
после заражения), х230. (Сканирующая ЭМ).
Рис. 8. КЛО (блютанг). Кровоиз-
лияния и некрозы на сосочках
рубца овцы, х0,6.
Рис. 9. КЛО (Блютанг). Поражение языка.
Рис. 10. Culicoides, х29.
Рис. 11. КЛО (Блютанг). Поражение
дистальной части конечности, х0,8.
Рис. 12. Вирус африканской чумы
однокопытных. Скопление вирионов
в супернатанте.
466
Рис. 13. Инфекционная бурсальная
болезнь.4 7-й день болезни.
Рис. 14. Вирус лихорадки долины Рифт
(Левитт и др., 1963).
Рис. 15. Динамика гибели цыплят при
ИББ.
Рис. 16. Вирус классической чумы сви-
ней, Х195000 (Ушимин, 1969).
Рис. 17. Альфа-вирус. Структура ви-
риона Синдбис. Схема. Взаиморас-
положение белка, липидов и РНК. 1
продолговатые гликопротеидные су-
бъединицы; 2-бислой липидов; 3-
субъединицы нуклеокапсида; 4
РНК (Хэррисон и др., 1972).
Рис. 18. Схема строения вируса ИБК: 1-по-
верхностный ГА, выделяемый на ДЭАЕ цел-
люлозе; 2-ГА. обнажаемый под воздействи-
ем трипсина; 3-рибонуклеопротеид; 4-бе-
лок; 5-липопротеид (Николаева и др., 1973).
467
Рис. 19. Вирус ИВК. Негативное контра-
стирование (Берри и Алмейда, 1973).
Рис. 20 Вирус-антитело агрегаты, наблю-
даемые при ИЭМ вируса ИГС и анти-ИГС
сыворотки (полоска около 100 нм).
Рис. 21. ИФ клеток поросят, зараженных
вирусом ИГС (мазки-отпечатки слизис-
той тощей кишки, х35О).
Рис. 22. Диффузный лептоменингит моз-
говых пластинок (гематоксилин-эозин),
хЮО.
Рис. 23. Репродукция вируса в нервном
стволе поросенка, зараженного гемагглю-
тинирующим вирусом энцефаломиелита.
ИФ в аксонах и перикарионах нейронов,
х500.
Рис. 24. Некрозы нейронов в гипоталаму-
се. Гематоксилин-эозин, хЮО.
468
Рис. 26. Вирус ИГС: 1-отдельная интакт-
Рис. 25. Атрофия ворсинок слизистой
оболочки кишечника свиньи при ИГС
(продольный срез).
ная частица вируса, покрытая поверхност-
ными выступами, х210000: 2-две частицы,
покрытые поверхностными выступами
(Таима, 1970).
Рис. 27. Вирус ИГС. А-х84000; 6x130000
(Андердал и др., 1974).
Рис. 28. Признаки поражения КЭ при
ИБК (слева-нормальный КЭ, справа-за-
раженный).
Рис. 29. Сосочки тонкого кишечника нор-
мального и зараженного вирусом ТГС поро-
сенка; вид под сканирующим микроскопом,
хЮ.
469
Рис. 30.
Рис. 31. Мумифицированные и мертво-
рожденные плоды свиньи, зараженной
низковирулентным ВКЧС на 43 й дн супо-
ростности (Стюарт, 1994).
Рис. 32. Коронаподобный вирус КРС. Ви-
русные частицы: 1-имеющие выражен
ную корону; 2-дезинтегрированные и 3
отдельные нуклеокапсиды.
Рис. 33. Компоненты частиц ВИБ: a-раз-
рыв оболочки, через который входит ви-
рус; б-фрагменты внутреннего компонен-
та, хЗОО.
Рис. 34. Вирион ВНБ и фрагменты рибо-
нуклеопротеидного тяжа вне вириона
(Пантелеев, 1971).
Рис. 35. Формирование и отделение ВНБ от
поверхности клетки, Х150000.
470
Рис. 36. Вирус ПГ 3 КРС (Кон и др.,
1968).
Рис. 37. Модель вириона вируса Сендай.
Рис. 39. Вирус чумы КРС.
Рис. 41. Репродукция вируса чумы плотоядных
в легких и печени хорьков: а-почкование вируса
в клетках покровного эпителия бронхов
(х16000); б-в эпителиоците слизистой железы
бронха (хбОООО); в-размножение вируса в клет-
ках желчных протоков (12000); г-почкование
вируса в клетках К',пфера (хЮООО). ВП-виро-
пласты. Вирионы указаны стрелкой (Колесни-
кова и др., 1996).
Рис. 38. Укладка большого фрагмента ри-
бонуклеопротеидного тяжа внутри вирио-
но вируса Сендай.
Рис. 40. Вирус парагриппа собак.
a-слой поверхностных выступов; б-час-
тицы после окраски (Чен и др., 1971).
Рис. 42. Респираторно-синцити-
альный вирус (а), хЗООООО. Скопле-
ние рибонуклеопротеидных тяжей
(б), х400000 (Закстельская, 1967).
471
Рис. 43. Респираторно-синцитиальный
вирус КРС, х200000 (Ито и др., 1973).
Рис. 44. Вирус свинки: А-интактный вири-
он, снизу видна кромка пепломеров; Б-час-
тично разрушенный вирион (виден нуклео-
капсид); В-увеличение участка нуклеокап-
сида (продольное и поперечное сечение).
Рис. 45. Модель вируса везикулярного
стоматита. В 3 измерениях видно соот-
ношение между протеинами и липид-
ным слоем; 1-отдельная частица РНП;
2-виток РНП; 3-белок матрикса; 4-по-
верхность выступа; 5-липидный слой.
Рис. 46. Признаки бешенства собаки
(Вохрингер, 1955).
Рис. 47. Бутонные язвы в толстом
кишечнике при КЧС (Миллер, 1994).
Рис. 48. Антиген ВКЧС в клетках гло-
точных крипт. ИФ (терпстра, 1994).
472
Рис. 49. Схематическая модель вируса
бешенства: а-уменьшающиеся витки
нуклеокапсида; б-позиция шипов и под-
лежащего мицеллярного белка; в-шипы;
г-мицеллярный белок; д-внутренний
мембраноподобный слой; е-участок, по-
казывающий отношение липидов к ми
целлярному слою (Вернон и др., 1972).
Рис. 51. Вирус бешенства. Негативное
контрастирование. Гексагональная струк-
тура частиц: а и б-видны шипы; в-интакт-
ный вирион (Куверт, Бом и др.. 1972),
(Арачиа, Архет'и, Розати, Стейв, 1974).
Рис. 53. Структура вируса гриппа.
1. Схема по Лайвер (1973). А. 1 - мем-
бранный белок; 2-липиды; 3-гидро-
фобная поверхность; 4-ГА; 5-НА; 6-
нуклеопротеид; 7 РНК; 8-полимера-
за; Б. Участок рибонуклеопротеида
(Компанс и др.. 1972). 2. Вирионы
вируса гриппа А до воздействия про-
теазами, х 140000 (Шульц, 1972).
Рис. 50. Схема строения вириона вируса
бешенства, напоминающая таковую для
ВВС: а-капсид: б-рибонуклеопротеид; в-
РНК (Аранчиа и др., 1974).
Рис. 52. Вирус эфемерной лихорадки: а-
типичные вирионы, отпочковавшиеся от
инфицированных клеток. Конусовидная
форма частиц (Мэрфи, Тейлор, Милее и
Уфйтфилд, 1972).
Рис. 54. Аренавирусы.
473
Рис. 55. Структура вириона вируса
лейкоза мышей. 1-нуклеокапсид; 2-
тонкая оболочка ядра: 2а- ядерная мем-
брана толщиной около 3 нм, 26-слой
глобулярных или кольцеобразных еди-
ниц диаметром 6 нм образует гексаго-
нальную структуру. «Вирусное ядро»
покрыто вирусной конвертной оболоч-
кой (3), состоящей из вирусной мембра-
ны (За) (толщиной около 8 нм) и высту-
пов (36) (диаметром около 8 нм) (Нер
мут и др., 1972).
Рис. 56. Вирус лейкоза мышей. Созревание ви-
рионов путем почкования на поверхности куль-
туры клеток эмбрионов мышей.
Рис. 57. Вирус рака молочной железы мы-
шей. Оболочка покрыта выступами.
хЗООООО (Саркар, Новинский, Мур, 1971).
Рис. 58. Очищенные вирионы вируса ра-
ка молочной железы мышей, х90000
(Саркар и др., 1971).
Рис. 59. Схема строения вириона
типа С вирусов лейкозно-сарко-
матозной группы птиц.
Рис. 60. Вирус миелобластоза птиц, х40000.
A-отдельные вирионы, Х144000: 1-перифе-
рические шипы на капсиде; 2-ядро.
474
Рис. 61. Частицы вируса лейкоза-сар-
коматоза птиц, х46000. V-вакуоли с
вирусными частицами; М-цитоплаз-
матическая мембрана; N-ядро (Шуль-
це и Фогель, 1967).
Рис. 62. Очищенный вирус висна. А-концен-
трированный культуральный вирус; Б и В-
одиночные вирионы, внешняя оболочка ко-
торых покрыта шипами длиной около 10 нм,
х250000 (Хаас и Барингер. 1974, Тормор и
др., 1965).
Рис. 63. Интерстициальная пневмо-
ния, клеточная инфильтрация и ги-
перплазия лимфофолликулов при вис-
на-маэди.
Рис. 64. Множественный аденоматоз
легких овцы.
Рис. 65. Часть легкого овцы при аде-
номатозе, х0,8.
Рис. 66. Гистопатология при аденома-
тозе легких овцы. Гематоксилин-эо-
зин, х120.
475
Рис. 67. Вирус везикулярной экзантемы
(тип Н54). 1 вирионы кубической симме-
трии с шиповидными структурами на по-
верхности, х80000 (Зи и др., 1968).
Рис. 68. Энтеровирусы КРС (Джонстон
и Мартин, 1971).
Рис. 69. Энтеровирусы свиней (шт.
Италия 1 66), (Ньюмен, 1973).
Рис. 70. Энтеровирусы свиней,
х20000 (Либерман, 1971).
Рис. 71. ЦПЭ вируса болезни Теше-
на, 24ч после заражения (Шарф,
1974).
Рис. 72. Болезнь Тешена-Тальфана.
476
Рис. 73. Признаки везикулярной болезни свиней. А-везикулы на пятачке при везикуляр-
ном стоматите; В-везикулы на пятачке при везикулярной экзантеме свиней; С-лопающие-
ся везикулы при везикулярной экзантеме свиней; D везикулы на языке при ящуре: Е и F-
ранние поражения конечностей при везикулярной экзантеме свиней (D.A. Gregg, 1994).
477
А В
C D
Рис. 74. Везикулярные поражения конечностей свиней.
А-лопнувшие везикулы на конечности и подошве при везикулярной болезни свиней; В-
лопнувшие везикулы при ящуре; С-спадание копытец при ящуре; D-целлюлит с хроничес-
кими поражениями сосудистой зоны при везикулярной экзантеме свиней; Е-грануляция
поражений конечностей при везикулярной экзантеме свиней.
478
Рис. 75.Модель вируса энцефало-
миелита птиц (Краус, Убершар,
1966).
Рис. 76. Признаки энцефаломиелита
цыплят (Айсенгартен, 1974).
Рис. 77. Признаки пораже-
ния КЭ, зараженных вирусом
ЭМП (Айсенгартен, 1974).
Рис. 78. Вирус гепатита утят: а-кристаллическое
расположение вирусных частиц, х40000; б-вирус-
ные частицы внутри везикул. х45000; в-вирусные
частицы и плотные аморфные дебрисы, (х32000)
(Ричар и др., 1964).
Рис. 79. Клинические признаки ге-
патита утят (Беер, 1974).
Рис. 79а. Мумифицированные и
мертворожденные плоды свиньи,
инфицированной вирусом японского
энцефалита.
479
Рис. 80. Вирус ящура (А22):
а-1408-частицы, х350000;
б-758-частицы, хЗООООО
(В. Л. Узюмов, А. П. Пономарева).
Рис. 81. Ящур у теленка (Шарф, 1974).
Рис. 82. Поражения копыт КРС при
ящуре.
Рис. 83. Ящурные поражения вымени
свиньи.
Рис. 84. Вирус артериита лошадей.
Нуклеокапсид после обработки вириона
нейраминидазой (Хорзинек и др., 1971).
Рис. 85. Парвовирус (вирус панлейкопе-
нии) кошек (Студерт и Петерсон, 1973).
480
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
и С удается заразить лошадей. Человек, овцы, козы, КРС, кролики, морские свинки, белые
крысы, мыши, ежи к данному вирусу нечувствительны. Штаммами, относящимся к сероти-
пам А и В, удавалось заразить хомячков интрадермально и внутрибрюшинно. К экспери-
ментальному заражению чувствительны обезьяны, лошади, хомяки, собаки.
Культивирование. Спектр чувствительности культур клеток оказался ограниченным.
Наиболее чувствительны первичные и перевивамые культуры клеток свиного происхожде-
ния. Все типы вируса репродуцируются в монослойной культуре почки свиньи, индуцируют
ЦПД и накапливаются в титрах 107-109 ТЦДзо/мл- При культивировании на свиньях титр ви-
руса не превышает 104-10б ИД 5о/мл. К моменту максимального образования вируса (8 ч по-
сле заражения) ядро дегенерирует и в цитоплазме накапливаются плотные агрегаты вирусо-
подобных частиц. Через 14 ч образуются кристаллоподобные скопления типичных вирус-
ных частиц (диаметр 27 нм, расстояние между центрами 38 нм).
Таблица XIII. 1. Сравнительная характеристика возбудителей
везикулярных болезней животных
Вирус Классификация Тип HK Размер/устой- чивостъ Серотипы Особенности
Ящур Picomaviridae, Aphtovirus Одно цеп. РНК 22 нм., чувстви- тельная при pH ниже 6,5, эфироустойчив 7 серотипов. Количество субтипов варьирует Имеет 4 вирусных протеина н групповой, связанный с инфек- ционной активностью антиген (VIA)
Везикулярная болезнь свиней Picomaviridae, Enterovirus 28 нм, кислото- эфиро устойчив 1 Связан с Coxsacki В5
Везикулярная экзанте- ма/санмитуель Caliciviridae Calid virus 35-40 нм, чувсв. крНнижеЗ, эфироустойчив 25 и более 1 полипептид в ядре, имеет групповой антиген
Везикулярный стоматит Rhabdoviridae, Vesiculovirus 70-170 нм, пуле- образный, эфи- рокислото- чувствителен 2 важных для свиней 1 иммуногенный гликопротеин
Таблица XIII. 2. Хронология и география распространения
везикулярных болезней (14)
Возбудитель Первое со- общ., год Идентифиц., агент, год Распространение Свободные зоны
Ящур 1514 1897 Спорадически Европа, эндемически Южная Амери ка. Азия. Афри- ка Северная и Центральная Аме- рика. Австралия. Новая Зелан- дия. Панама. Скандинавия, Япония. Страны Карибского бассейна
Сан Мигуель ВД 1973 Побережье Тихого океана Северной Аме- рики Остальная часть мира
Везикулярной болезни свиней 1966 1968 Европа, Япония, Гон- конг, Тайвань Северная, Центральная и Юж- ная Америка, Африка, Велико- британия
Везикулярной эк- зантемы свиней 1932 1933 Л (стоногие Северной Америки в 1956 г. Благополучна вся территория мира
Везикулярного стоматита ВД 1927 Северная, Централь- ная, Южная Америка Остальная территория мира
31 Зак. № 171
481
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Болезнь распространяется путем прямого и
непрямого контактов. Вирус, выделенный больными животными, инфицируя воду, корм и
окружающие предметы, попадает здоровым животным. Больные животные начинают выде-
лять его через 24 ч после инфицирования, а подтвердить вирусовыделение, которое продол-
жается до 96 ч, удается лишь через сутки. В США в распространении болезни большую роль
играли зараженные вирусом продукты убоя и кухонные отходы, скармливаемые свиньям.
Роль вируса различных АГ типов в эпизоотологии болезни не изучена. Доказано, что в про-
цессе эпизоотии вирусы ВЭС разных типов довольно быстро сменяют друг друга. Так, в Ка-
лифорнии преобладающий тип В-51 сменился типом С-52. В штате Нью-Джерси вспышка
болезни в 1956 г. была вызвана неизвестным типом вируса. Борьбу с ВЭС вели путем жест-
ких карантинных мероприятий и повсеместной термической обработки субпродуктов. По-
следние вспышки болезни в США регистрировали в 1956 г. в Нью-Джерси (табл. XII.2).
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к вирусу
восприимчивы только свиньи.
ДИАГНОСТИКА
Для диагностики используют PH вируса иммунной сывороткой в тканевой культуре и
РП в агаровом геле. Мэдин и corp. (1958) показали, что с помощью PH в культуре клеток
можно дифференцировать ВЭС от везикулярного стоматита при наличии гипериммунных
сывороток кроликов. Кроме того, PH с типоспецифическими сыворотками позволяет диф-
ференцировать типы вируса. Их можно различить также методом РП в геле и с помощью
РСК (7). Для дифференциации образцы везикулярной жидкости немедленно исследуют в
РСК или ELISA на присутствие АГ вирусов ящура, ВБС, ВЭС и везикулярного стоматита с
соответствующими диагностическими наборами (18, 19, 23). Вирус выделяют в культуре
клеток мышат-сосунов (13) с последующей электронной микроскопией или биопробой. С
помощью ELISA и РСК получают окончательный результат через 6 ч. Использование РНК-
зондов позволяет также быстро дифференцировать везикулярные болезни (10, 17). В на-
стоящее время разрабатывается ПЦР в сочетании с нуклеотидным секвенированием и гиб-
ридизацией (14). Разработан метод идентификации 3-х вирусных инфекций (ящура, везику-
лярной болезни свиней и везикулярной экзантемы свиней) в ранний период заболевания с
помощью PH с использованием мононуклеарных клеток (3).
Таблица XII.3. Характеристика везикулярных болезней животных
Возбудитель Основные виды ж-ых Передача Заболева- емость Носители Контаминация мяса и субпродуктов
Ящур Везикулярная бо- лезнь свиней Везикулярной эк- зантемы/Сан Ми- гуеля Везикулярного сто- матита КРС, свиньи, овцы, козы Свиньи, люди Свиньи, раз- личные мор- ские живот- ные Свиньи, ло- шади, КРС, люди Аэрогенно, контактно Контактно, аэрогенно, орально Орально, контактно Контактно, возможно жа- лящие насе- комые Высокая Умеренная Умеренная Умеренная до низкой летом КРС, овцы, козы, афри- канские би- зоны Свивьн Нет Нет Мороженное мясо, лимфо- узлы, головной мозг, мо- лочные продукты ГлаипАг низкий уровень ви- руса в обескровленном мясе Мясо Нет сведений
482
Глава XU. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
Дифференцировать ВЭС, ящур, везикулярный стоматит и ВЕС очень трудно, так как
они во многом сходны. Следует учитывать сравнительный спектр патогенности возбудите-
лей указанных болезней (табл. XII.3).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные приобретают иммунитет к гомологичному типу вируса не ме-
нее чем на 6 мес. ВНА обнаруживали через 10-12 дн после заражения. К 21-28-му дню они
достигали максимального титра. Иммунная сыворотка эффективна против возбудителя ти-
пов А-48 и В-51 в течение 2-х нед для 100% животных. Супоросные свиноматки, вакцини-
рованные за 3 нед до опороса, передают потомству с молозивом ВНА. Длительность мате-
ринского иммунитета не превышает 21 дня.
Для специфической профилактики применяется инактивированная вакцина, которая по-
сле однократного внутримышечного введения в дозе 2 мл вызывает иммунитет продолжи-
тельностью 6 мес. Однако считается, что применение вакцин против ВЭС нецелесообразно,
поскольку предпочтительным методом борьбы является уничтожение больных животных.
Если калицивирус ВЭС станет проблемой, вакцину достаточной эффективности невозможно
применить, пока не разовьется вспышка заболевания (14).
КАЛИЦИВИРУСЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine Calivirus, Tillamook virus
В штате Орегона от трех молочных телят выделили серотип калицивируса, который не
вызывал заметного заболевания у экспериментально инокулированных телят, но при экспе-
риментальном заражении вызывал везикулярные поражения у свиней. АТ к BCV находили
у различных морских животных, что позволяет сделать вывод о том, что этот вирус проис-
ходит от морских млекопитающих (8, 9).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Долганова Е.К. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995:89. 2.Дроздов С.Г. ЖМЭИ, 1983, 7, 13.
З.Мищенко В.А. и др. Сб. н. тр. ВНИЗЖ, Владимир, 1995 :140. 4.Микулич Л.Н. и др. Сб. н. тр.
ВНИИЗЖ, Владимир, 1995:118. 5.Сергеев В.А. и др. Структура и биология вир. жив. М., 1983.
б.СюринВ.Н. и др. Части вет. вирусол, М, Колос, 1979. 7.СюринВ.Н. и др. Диагн Вир. бол. жив. М,
Агропромизд, 1991. 8. В ar lough J.E. et.al. J Wildl Dis, 1987, 23 :45. 9.Barlough J.E. et.al. The marine
calicyvirus story. P. П. Compend Ed. Proc Vet 1986, 8, F75-F82. lO.Beck E. et.al. J Virol, 1987, 61:1621.
ll.Edwards J.F. et. al. Can J Vet Res, 1987, 3 :358. lla.Flynn W.T. et.al. Am J Vet Res, 1988, 49 :819.
12.Gellerg H.B. et.al. Vet Pathol, 1982, 19, 4 :413. 13.House J.A et.al. Vet Mier, 1989, 20 :99. 14.House
J. A etal. Dis of Swine.,1994 :387.15.Madin S.H. Dis of Swine, Ames Iowa, 1975 :286. 16.Madin S.H.
Virus Inf of Porcines - Amsterdam etc, 1989, 267.17.Marquart O. et.al. Vet Mier,1990, 23 :175.
18.Montgomery J.F. etal. NZ Vet J, 1987, 25 :21. 19.Roeder P.L. et.al. Res Vet Sci, 1987, 43 :225.
2O.Smith A.W. et.al. Nature,1973, 244 .108. 21.Smith A.W. et.al. Am J Vet Res, 1978, 39 .291. 22.Smith
A.W. et.al. Science, 1980, 209, 4459:940. 23.Westbury H.A. et.al. Vet Microb, 1988, 17 :21.
КАЛИЦИВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ КОШЕК
Калицивирусная (пикорнавирусная) инфекция кошек - респираторная болезнь, проте-
кающая у молодых кошек остро, у взрослых - хронически (латентно). Распространена по-
всеместно. Калицивирусы были выделены от кошек с заболеванием органов дыхания.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Пикорнавирусы ко-
шек слабовирулентны, и болезнь обычно протекает латентно. Однако в сочетании с другими
агентами бактериальной, вирусной и микоплазмозной природы пикорнаинфекция может
вызывать гибель кошек (86%). Болезнь характеризуется поражением верхних дыхательных
путей. У больных отмечают серозный конъюнктивит, ринит, одышку, кашель, депрессию,
лихорадку, пневмонию, изъязвление слизистой оболочки языка, нёба, ноздрей (1,2,3).
31*
483
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные пфекции
Патологоанатомические изменения ограничиваются верхними дыхательными путями и
проявляются неспецифическим катаральным воспалением.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделил и описал Фостьер в 1957 г. в США.
Морфология и химический состав. Диаметр вириона 45 нм, сердцевины - 20 нм, име-
ет 32 капсомера кубической симметрии. У калицивирусов кошек выявлено 7 эпитопов ней-
трализации, 4 из которых располагаются на капсидном белке мол.м. ~67 кД. Полные вирио-
ны и 156S частицы содержат основной капсидный белок, а также общие эпнтопы нейтрали-
зации. Как вирионы, так и 156S частицы индуцируют ВНА (5, 6).
Устойчивость. Вирус устойчив к эфиру, хлороформу, гуанидину, дезоксихолату натрия,
гидроксибензил-бензимидазолу (НВВ), а также к pH 4 - 5, что отличает его от рино- и энте-
ровирусов; чувствителен к нагреванию - инактивируется при 50°С в течение 30 мин; MgSO4
и MgCl2 не стабилизируют его. Однако имеется сообщение, что соли натрия частично ста-
билизируют калицивирусы кошек против термо- и pH инактивации, причем стабилизирую-
щее действие солей по отношению к разным типам этого вируса не одинаково. Выделенная
из вируса РНК инфекционна и более устойчива, чем сам вирус (последний в условиях 60°С
теряет патогенность через 10 мин, препарат РНК разрушается в тот же срок при 65°С).
Антигенная структура не изучена.
АГ активность, вариабельность и родство. У переболевших кошек обнаруживают
ВНА. Штаммы калицивируса кошек в АГ отношении родственны. Они не имеют антигенно-
го родства с пикорнавирусами человека, хотя по некоторым биологическим свойствам сход-
ны с пикорнавирусами групп Коксаки и ECHO (3). ГАд свойства вируса не выявлены.
Культивирование. Вирус размножается в культуре клеток почки котят, где через 24-36
ч вызывает ЦПИ. В первичных, перевиваемых и диплоидных культурах клеток Fc3Tg титр
вируса достигает 106-108 ТЦД50/мл. Он не размножается в культурах клеток почки КРС, в
фибробластах КЭ и перевиваемых клетках HeLa. Особенности внутриклеточной репродук-
ции изучены недостаточно. В культуре клеток эмбриона кошек вирус выявляется в цито-
плазме пораженных клеток - связан с микрофибриллами цитоплазмы. В зараженных клет-
ках характерно присутствие телец-включений.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источником болезни служат больные животные. Инфекция передается при непосредст-
венном контакте.
ДИАГНОСТИКА
Диагностика заболевания основана иа постановке биопробы (зараженные котята поги-
бают через 20 дн), PH (для идентификации выделенного агента или специфических антител
у животных-реконвалесцентов) и ИФ препаратов, приготовленных из верхних дыхательных
путей больной кошки.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие кошки приобретают иммунитет продолжительностью до 6 мес. В США
для профилактики болезни применяют живые инактивированные вакцины. Для изготовле-
ния инактивированной вакцины вирус инактивировали глицинальдегидом и готовили водно-
масляную эмульсию. 2-3 - кратное внутримышечное введение вакцины сопровождалось об-
разованием специфических гуморальных AT (IgM и IgG), а также секреторных (IgA) АТ в
респираторном тракте. По иммуногенности инактивированные вакцины не уступали живым,
полученным из аттенуированных штаммов (4).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев. Урожай, 1993. 2.Сергеев В.А. и др. Структура и биология
вирусов жив. М. 1983. З.СюринВ.Н. и др. Частная вет. вирусол. М. Колос, 1993. 4.Chappuis К. et.al.
Comp Imm Microb and Infect Dis, 1979, 1 .221. 5.Flynn W.T. et.al. Am J Vet Res, 1986, 49:819. 6.Tohya
Y. etal. Arch Virol, 1991, 117 :173.
484
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
ГЕМОРРАГИЧЕСКАЯ БОЛЕЗНЬ КРОЛИКОВ
Вирусная геморрагическая болезнь кроликов - ГБК, некротический гепатит, геморраги-
ческая пневмония кроликов - остропротекающая высококонтагиозная болезнь, характери-
зующаяся явлениями геморрагического диатеза во всех органах, в особенности в легких и
печени. Поражаются кролики старше 1,5-мес возраста. О заболевании животных других ви-
дов и человека не сообщалось.
Распространение. Болезнь в 1984-1985 гг. была широко распространена в Китае. В
бывшем СССР болезнь впервые зарегистрирована в 1986 г. среди кроликов приграничного
с Китаем совхоза. Диагноз не был поставлен, кроликов убили, а шкурки отправили на фаб-
рику Московской области. Вскоре болезнь широко распространилась по Московской облас-
ти, затем была зарегистрирована в Воронежской, Липецкой, Саратовской областях, в Мол-
давии, на Украине. С 1988 г. ГБК регистрировали в Германии (ГДР и ФРГ), Чехословакии,
Швейцарии, Франции, Болгарии (22,24).
В январе 1989 г. МЭБ приняло её официальное название “вирусная геморрагическая
болезнь кроликов”. ГБК появилась в Мексике, Австралии, Польше, Испании, Югославии, в
дальнейшем - в Португалии, Бельгии, Дании, Греции, Люксембурге, Нидерландах, Велико-
британии и других странах. В 1993 г. ГБК зарегистрирована на Кубе, в Ливане, Израиле. С
1990 г. ГБК регистрировали в Камеруне, Тунисе, Реюньоле, Ливии (1,2,3, За, 17а).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Вначале заболевание
описывали как заболевание зайцев - “синдром зайцев-русаков”, которое регистрируется в
Европе с 1985 г. Обе инфекции очень похожи, однако между их возбудителями есть некото-
рые отличия. По данным европейских ученых, возбудитель ГБК относится к семейству
Caliciviridae, однако ученые Китая и США считают его парвовирусом. Первое сообщение о
вспышке геморрагической лихорадки кроликов поступило в 1987 г. из Словакии. Изучение
ранее собранных сывороток кроликов показало, что подобный вирус циркулировал в стране
уже давно, однако он обладал слабой патогенностью (35,36,39).
У кроликов инкубационный период болезни обычно продолжается 48-72 ч, иногда до
120 ч, при экспериментальном заражении (внутримышечно, подкожно) он может составлять
18-24 ч. Клинически болезнь почти не проявляется. Обычно внешне здоровые кролики де-
лают несколько судорожных движений конечностями и погибают. Лишь у отдельных особей
отмечали легкое угнетение, отсутствие аппетита и за 1-2 ч до гибели истечения из носа
(желтые или кровянистые). Установлено, что за 32 ч до гибели у кроликов повышается тем-
пература тела до 40,8°С. Обычно при внешнем осмотре даже за несколько минут до гибели,
трудно отличить больного ГБК кролика от других клинически здоровых. Бессимптомное те-
чение болезни преобладало и у естественно инфицированных кроликов. Угнетение чаще
всего наблюдали у беременных самок, которые иногда абортировали. Бессимптомное, мол-
ниеносное течение в естественных условиях преобладало, как правило, в начале эпизоотии,
далее продолжительность болезни возрастала, процент гибели животных снижался.
Макроскопически наиболее значительные изменения отмечали в органах дыхания. Лег-
кие кровенаполнены, интенсивно отечны и неравномерно окрашены, у естественно больных
кроликов имели серовато-розоватый цвет с единичными или множественными точечными и
пятнистыми кровоизлияниями под плеврой. С поверхности разреза стекала красная или
почти бесцветная жидкость, из бронхов при надавливании выделялся пенистый экссудат.
Закономерностей в локализации патоморфологических изменений в какой-либо доле легко-
го (верхушечная, сердечная, диафрагмальная) не установили: поражались все доли сразу,
либо та или иная часть. Стенки трахеи, носовых полостей, в меньшей степени гортани, были
резко геморрагичны. Их красный цвет чаще был обусловлен венозной гиперемией, а не ред-
485
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
кими кровоизлияниями. Просвет трахеи и гортани заполнен красноватой или бесцветной
пенистой жидкостью. Шерсть вокруг носа у отдельных особей загрязнена кровянистыми
истечениями.
Изменения в печени постоянны, но не всегда однотипны и обусловлены степенью ее
кровенаполнения, что вызывало изменение цвета, объема и консистенции. В первые часы
после гибели животного печень резко кровенаполнена, увеличена, легко рвется, имеет крас-
новато-коричневый цвет с желтоватым оттенком в центральных участках долей. Капилляр-
ная сеть органа резко инъецирована, особенно отчетлива на периферии, имеет вид красных
черточек и точек неправильной формы. Поверхность разреза печени зернистая, но рисунок
быстро изменяется за счет выступающей и быстро стекающей крови. Иногда под капсулой
органа находят точечные геморрагии. Через несколько часов после гибели животного печень
обычно светло-коричневого цвета, плотной консистенции, края заостренные. С поверхности
разреза, представлявшего собой гомогенную массу, кровь не стекает, а в виде сгустков за-
метна лишь в крупных сосудах, орган напоминает вареную печень. Желчный пузырь содер-
жит немного желчи, его слизистая шероховатой, иногда отслаивается. Селезёнка в 1,5-3
раза увеличена в объеме, набухшая, темно-вишневого цвета с характерным лиловым оттен-
ком. Почки резко кровонаполнены, красно-коричневого цвета и увеличены в несколько раз
по сравнению с нормой. Многочисленные диапедезные геморрагии встречаются довольно
часто. У отдельных особей почечная артерия, вена и мочеточник в месте выхода из органа
выглядят как единый темно-красный жгут, при повреждении которого изливается значи-
тельное количество крови. Иногда геморрагический акцент отсутствует, при этом почки ка-
жутся неизмененными, светло-коричневого цвета с нечетко очерченными желтыми очажка-
ми, капсула легко снимается. Тимус слегка покрасневший, нередко с множественными то-
чечными иди пятнистыми кровоизлияниями в грудной части. Лимфоузлы сочные, серовато-
розоватого, реже красного цвета, размер их существенно не изменен (за исключением ре-
гионарных мест введения вируса у экспериментальных животных). Сердце (особенно его
правая половина) заполнено большим количеством черно-красной крови, увеличено в объ-
еме, стенки желудочков растянуты, истончены, дряблой консистенции. Множественные то-
чечные и пятнистые кровоизлияния под эпи- и эндокардом часто встречаются у естественно
больных кроликов и очень редко в эксперименте. Изменения в ЖКТ характеризовались как
катаральное (реже катарально-геморрагическое) воспаление, иногда - кровоизлияния в 12-
перстной и прямой кишках, отслоение слизистой желудка.
Патологоанатомические изменения в других органах выражены слабее и менее постоян-
ны. В форме геморрагий их иногда находят в матке и надпочечниках, в половых органах,
зобной железе, головном мозге. При патологоанатомическом исследовании погибших кро-
ликов выявляли некротизирующий гепатит и геморрагический диатез (31).
Г истологически на первый план выступали нарушения гемоциркуляции, а в некоторых
органах и некродистрофические изменения. По тяжести, постоянству и диагностической
значимости гистологических изменений органы можно расположить следующим образом:
печень, органы дыхания, почки, селезенка, сердце, головной мозг, тимус, другие органы.
У павших животных печень поражалась в 100% случаев. Первичные изменения
(дистрофия и некроз отдельных клеток) появлялись в отличие от остальных органов уже че-
рез 12 ч после экспериментального заражения. Далее основным патологическим процессом
в органе становился тотальный некроз и некробиоз гепатоцитов, они сморщивались, округ-
лялись, теряли связь друг с другом, балочная структура нарушалась, либо полностью исче-
зала (дискомплектация). Ядра гепотацитов подвергались пикнозу или рексису, на их месте
оставались практически утратившие базофильные свойства слабоокрашенные округлые об-
разования. Часть печеночных клеток полностью теряла ядерную субстанцию и имела вид
полиморфных эозинофильных глыбок. На фоне некротических изменений четко виднелись
сравнительно малоизмененные желчные протоки. Их покровный эпителий сохранялся, но
486
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
обычно отслаивался от окружающей его соединительной ткани, эпителий желчного пузыря
обычно был некротизирован. Иногда, в основном у кроликов, павших в течение первых су-
ток после заражения, некротические изменения были более выражены в перипортальной
ткани почечных долек. Эти участки состояли из бесформенной эозинофильной массы, со-
державшей множество фрагментов ядер разрушенных гепатитов и нейтрофилов (псевдо-
эозинофилов). Гепатоциты, окружавшие центральные вены, находились в состоянии зерни-
стой дистрофии; степень кровенаполнения органа варьировала: иногда печень была нафар-
ширована эритроцитами, располагавшимися в значительно расширенных синусоидных ка-
пиллярах, либо содержала небольшое число красных кровяных телец преимущественно в
крупных сосудах. Изменения в легких характеризовались отеком и диффузными, реже оча-
говыми кровоизлияниями. Большая часть альвеол, а иногда и бронхиолы с окружавшей их
соединительной тканью, частично или полностью заполнены экссудатом, часто с примесью
эритроцитов и макрофагов. Межальвеолярные перегородки набухшие, а в местах интенсив-
ного отека и массовых геморрагий разрушены. Сосуды органа кровонаполнены, их стенки
разрыхлены, иногда некротизированы. В просвете сосудов вместе с эритроцитами присутст-
вовала оптически плотная, резко эозинофильная масса, тесно прилегавшая к эндотелию.
Патология почек состояла из нарушения микроциркуляции и процессов некродистрофи-
ческого характера и затрагивала корковый и мозговой слои. Сосудистые клубочки обычно
разрушены и представляли собой скопления эритроцитов с примесью ядер эндотелия и мо-
ноцитов, ограниченных капсулой Шумлянского-Боумена. Геморрагии разной интенсивности
имелись в интерстиции и просвете почечных канальцев, эпителий последних находился в
состоянии зернистой дистрофии и некроза, иногда полностью лизирован, расширенный про-
свет канальцев заполняли оксифильные цилиндры. В селезенке наблюдали практически
полное отсутствие форменных элементов крови, отек ретикулярного каркаса ярко выражен.
Ретикулярная ткань обнажена, набухшая, многочисленные синусоиды заполняла отечная
жидкость, содержавшая лизированные эритроциты, единичные плазмоциты и лимфоциты
(последние в относительно больших количествах сохранялись лишь в белой пульпе). Мио-
кард находился в состоянии зернистой дистрофии, сердечные сосуды кровонаполнены, со-
единительная ткань отечна, иногда пронизана эритроцитами. Идентичные нарушения гемо-
динамики возникали в тимусе и лимфоузлах (1). Изменения в других органах, кроме голов-
ного мозга, где довольно часто отмечали негнойный энцефалит, не были стабильны и суще-
ственного значения в патологии болезни не имели.
Патогенез. Исследования позволили сделать вывод, что тяжелые поражения печени -
основной момент в патогенезе ГБК, чем и объясняется её скоротечность и летальный исход.
В данном органе раньше, чем в других, и в наибольшем титре (1:4096) накапливался возбу-
дитель и развивался патологический процесс. Появлявшиеся в других органах на заключи-
тельном этапе развития болезни патологические изменения (расстройства гемодинамики,
некродистрофические процессы) - результат резкого нарушения функции печени. Развивав-
шиеся в предагональном состоянии глубокие нарушения микроциркуляции в легких в форме
отека - главная причина гибели животных. Через 30 ч после заражения кроликов вирусом
ГБК обнаружены признаки диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови
(ДВС-синдром) - удлинение одностороннего протромбинового времени, понижение факто-
ров V, VII и X, и увеличения уровней растворимых фибрин-мономерных комплексов и Д-
димеров. Обнаружено снижение числа тромбоцитов, гетерофилов и лимфоцитов. Тесная
связь ДВС-синдрома и некротического гепатита подтверждает, что повреждение печени
может быть наиболее важным “запускающим” фактором ДВС-синдрома (34).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Возбудитель ГБК - РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству калицивирусов.
Размер вириона 28-33 нм. Вирус кубической симметрии, имеет форму икосаэдра, электрон-
ноплотное ядро (20 нм). Величина вирусной РНК составляет примерно 8000 оснований (32).
487
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
Вирулентность возбудителя ГБК чрезвычайно высока. В печени и шкурках кроликов,
погибших при экспериментальном заражении, вирус накапливается в титрах Ю4,5'5,0 ЛД50, а
в почках, лёгких, мышцах, лимфоузлах - Ю1,0'2,0 ЛД50.
Морфология и химический состав. Плавучая плотность полных вирионов составляет
1,36, полупустых - 1,32 и пустых - 1,31 г/мл. Вирионы содержат 17+4% РНК ехЕ2бо™ =
4,3+0,7 см2/мг. Выявлен основной белок с мол.м. 65 кД и небольшое количество белка с
мол.м. 67 кД, который взаимодействует с поли-АТ кролика. Мол.м. вируса 15 + 4 МД (28).
При фракционировании очищенных препаратов вируса в SDS-PAGE найдено 14 вирусных
протеинов, из которых 3 (61к, 38к и 52к) являются мажорными протеинами (33). Вирионы
представляют собой полые икосаэдральные частицы диаметром 30 нм, не имеющие оболоч-
ки. Геном представлен полиаденилированной РНК, синтезирующей in vitro вирусный поли-
пептид с мол.м. 60 кД. С помощью кДНК клонировано по крайней мере половина вирусного
генома (37). В капсидах вируса 180 субъединиц, формирующих пентамер-гексамеры, 4 ви-
рионных белка - VP1, VP2, VP3 и VP4 мол.м. 60-61, 54,7, 52 и 26-28кД соответственно.
VP1 - основной капсидный белок, на долю которого приходится 54,7% массы капсидных
белков (24,32). Синтезирован белок VP60. Эго уникальный компонент капсида ВГБК.
В 1992 г. Zecheng и соавт. (42) высказали предположение о том, что ВГБК относится к
семейству парвовирусов. Однако в настоящее время общепризнано, что возбудитель ГБК
относится к семейству калицивируов. Вирус лишен оболочки, обладает триангуляционным
числом равным 3. Диаметр вирионов 33-37 нм. Капсид состоит из 32 капсомеров с наруж-
ным диаметром около 9 нм. После центрифугирования в градиенте сахарозы идентифици-
ровано 2 типа вирусных частиц с разными коэффициентами седиментации - 130 и 160S.
Выявлено 4 вирионных белка с мол.м. 66,4 65, 63,5 и 41кД. Геном вируса ГБК обладает 1-
нитевой РНК с мол.м. 2,1 кД (42). Он содержит приблизительно 7,6 тыс. нуклеотидов. С
помощью компьютерной программы “RNA Fald” проанализировали 3' концевые некоди-
рующие последовательности пяти калицивирусов кошек (FCV), вируса ГБК (RYDV) и двух
вирусов морского льва San miguel (SMSV). Оказалось, что 3' конце вые последовательности
FCV содержали 40-46 нуклеотидов и имеют гомологию 72-91%. Сходство между двумя изо-
лятами SMSV составило 75% (39). Капсидный белок вируса ГБК экспрессируется в клетках
насекомых либо в виде отдельного белка, либо как часть липопротеина, включающего ви-
русную ЗС-подобную протеазу и РНК-полимеразу. Оба способа экспрессии приводят к сбор-
ке частиц, которые морфологически и АГ-подобны очищенным вирионам (38).
Устойчивость. Вирус ГБК устойчив к обработке эфиром, хлороформом, к pH 3 и 50°С
в течение 60 мин. Он сохраняется в суспензии инфицированной печени при температуре 4°С
в течение года, инактивируется 0,1%-ным р-ром формалина или теотропина при температу-
рах 4°, 27°, 37°С в течение суток. Сохраняется без снижения вирулентности при - 40-50°С
более 5 лет. Оказался чувствительным к формалину, глутаровому альдегиду. С учетом этих
данных Шевченко и соавт. (15, 17, 17а) разработали методы дезинфекции шкурок кролика
при ГБК. Препарат глианол или глутаровый альдегид в процессе отмочки шкурок с добав-
лением поверхностно активных веществ (в частности неонола) и уксусной кислоты по опре-
деленным режимам инактивирует вирус ГБК, содержащийся в инфицированных или конта-
минированных шкурках кроликов. Рекомендован в практику и метод дезинфекции шкурок
формалином в процессе пикелевания.
Культивирование. Вирус ГБК по свойствам напоминает калицивирусов, но имеет и
отличия. Вирус реплицируется в клетках кроликов только in vivo (7). По данным других ис-
следователей, он так же репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки кролика.
Культуральный вирус 5-, 10- и 16-го пассажей вызывал у кроликов типичную ГБК. На
поздней стадии инфекции как зрелые, так и незрелые вирионы обнаруживались в цитоплаз-
ме и часто долго ассоциировались с клеткой; выделение вируса происходит после лизиса по-
488
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
следней. Специфический АГ сначала появлялся в ядрах инфицированных клеток, а затем
часто в цитоплазме (25). Полевой изолят вируса ГБК размножался в перевиваемой линии
клеток почки кролика (DJRK) и вызывал ЦПД после 2-х пассажей (23).
Гемагглютинирующие свойства. ГА-активность вируса ГБК связана с цельными ви-
рионами (9). Суспензия из печени, селезенки, легких инфицированных животных агглюти-
нирует эритроциты овец, птиц и человека. Наилучшие результаты получены с эритроцитами
человека 0 (1) группы. Возбудитель болезни зайцев агглютинирует эритроциты группы О
человека (30). У больных кроликов вирусный ГА-антиген выявлялся в моче и конъюнкти-
вальных смывах, а у погибших - в крови, печени, селезенке, тимусе, сердце, а иногда также
в мозге, скелетных мышцах и подчелюстных лимфоузлах. Наличие гемагглютинации кор-
релировало с присутствием вирусной РНК.
Антигенная вариабельность и родство. Вирус способен вызвать образование АТ в ор-
ганизме животного: ВНА, КСА, анти-ГА и др., которые можно выявлять с помощью соот-
ветствующих реакций через 4-5 дн после вакцинации кроликов. Методом гибридизации у
вируса ГБК выявлена определенная гомология с вирусом Н-1, мелким вирусом мышей, пар-
вовирусом свиней и парвовирусом гусей (24). Между ВГБК и возбудителем “синдрома ев-
ропейских зайцев” установлено антигенное родство, подтверждением которого служат сле-
дующие факторы: контакт суспензии печени зайцев с антисывороткой к ВГБК четко снижал
патогенность инокулята.
Экспериментальная инфекция. Суспензией из печени павших кроликов заражали
внутримышечно и интраназально здоровых кроликов. В результате развивались характер-
ные поражения (30). В ряде случаев кровь не свертывалась в течение нескольких часов, а
при вскрытии органов (сердце, легкие, печень, почки) изливалась в больших объемах в по-
лости (17а). При экспериментальном заражении инкубационный период составлял 12-72 ч.
Накопление вируса в кишечнике через 48 ч составляло 4-4,51g ЛДзо/г- Наибольшее накопле-
ние вируса происходит в печени экспериментально зараженных кроликов через 48-72 ч по-
сле заражения (титр ГА 1:512-1:8192) (4). Изучено сочетанное действие на кроликов гамма-
лучей и вируса ГБК (10).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи возбудителя. Способов передачи возбудителя инфекции
известно несколько. В данном случае можно исключить трансмиссивный, так как сезонность
болезни преимущественно осенне-зимняя. Насекомые при этом не играют роли. Аналогич-
ная сезонность отмечена и в Китае, и в ряде других зарубежных стран. Передача возбудите-
ля с кормами имеет место, но она не сопровождается таким быстрым распространением бо-
лезни по всей стране. Респираторный способ передачи, несомненно, имеет значение при
распространении возбудителя внутри хозяйства, способствуя быстрому перезаражению всех
животных, но мало вероятен перенос возбудителя по воздуху на тысячи километров для пе-
редачи из одного хозяйства в другое. Внутриутробный способ передачи вируса не изучен.
Эпизоотологии ГБК присущи характерные особенности. К возбудителю оказались чув-
ствительными только кролики независимо от породы и пола. Наиболее чувствительны
взрослые, массой 3-3,5 кг. Отмечено, что в начале эпизоотии ГБК первыми начинают бо-
леть взрослые особи, затем поражаются кролики всех возрастных групп, за исключением
подсосного молодняка. Летальность достигает практически 100%, в дальнейшем она не-
сколько снижается и составляет 75-80%. Источник возбудителя - больные и переболевшие
кролики. Факторами передачи могут быть корма, подстилка, навоз, почва, вода, инфициро-
ванные больными кроликами, а также пух и шкурки от больных животных и изделия из ме-
хового сырья, поступившие из неблагополучных по ГБК пунктов. При этом вирус может со-
489
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
храниться в шкурках в течение 3-х мес (17а). Выдвинут проект использования калицивиру-
са кроликов для снижения численности европейских кроликов, которые вызывают эрозию
почвы и представляют опасность для местных видов растений и животных. Вирус не пред-
ставляет опасности для домашних животных и других видов местной фауны (18).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на ГБК ставят на основании эпизоотологических, клинических, патоморфоло-
гических данных и результатов лабораторных исследований. При эпизоотологическом об-
следовании обращают внимание на общую эпизоотическую обстановку в хозяйстве, районе,
состояние вакцииопрофилактики, условий содержания и кормления кроликов. Из специфи-
ческих факторов учитывают следующее, массовую внезапную гибель кроликов, в основном
взрослых; невосприимчивость крольчат; быстрое распространение болезни и широкий охват
поголовья; животные других видов не болеют. На первых этапах эпизоотии болезнь обычно
протекает молниеносно, без клинического проявления.
Лабораторную диагностику ГБК проводят в специализированных лабораториях. Поря-
док диагностических исследований и постановка окончательного диагноза выполняют по
следующей схеме: ЭПИЗООТИЧЕСКИЙ ОЧАГ : ОТБОР ПРОБ И ИХ ДОСТАВКА (2-
3 ч) - ПОДГОТОВКА ПРОБ К ИССЛЕДОВАНИЮ И ПОСТАНОВКА РЕАКЦИЙ
(РДСК, РГА, ИФА) ( 3-5 ч) - ОКОНЧАТЕЛЬНЫЙ ДИАГНОЗ.
Отбор и подготовка проб. При подозрении на ГБК в лабораторию посылают свежие
трупы кроликов или паренхиматозные органы, (лучше печень). Вскрытие трупов проводят
не позже чем через 2-3 ч после гибели животного.
Экспресс-методы диагностики. Разработан двойной антительный “сэндвич” ИФА
(ДАС-ИФА) для выявления АТ в сыворотке крови кроликов. Чувствительность ИФА значи-
тельно превышает чувствительность РГА и РЗГА. Высокая чувствительность и специфич-
ность предложенного метода на основе монАТ позволяет рекомендовать его как для обна-
ружения вирусного АГ, так и для ретроспективной диагностики болезни (8). Серологически
(при электронной микроскопии) установлено сходство вируса ГБК с калицивирусом (40). В
Китае испытывались в сравнительном аспекте 3 метода экспресс-диагностики гемораггиче-
ской болезни кроликов: иммунопероксидазного окрашивания (I), точечного ИФА (II) и не-
прямой ИФ (III). При тестировании образцов печени у 17 экспериментально инфицирован-
ных кроликов установили, что чувствительность I - составляла 88,2%, II - 88,2 и III- 93,3 %..
При этом все 3 метода характеризовались 100%-ной специфичностью (29).
Индикация антигена вируса ГБК
РДСК. РДСК, разработанную во ВНИИВВиМ для диагностики ГБК, можно применять
в 2-х вариантах: макровариант в пробирках и микровариант в панелях из оргстекла или по-
листерола. В качестве компонентов диагностического набора используют сыворотки крови
гипериммунизированных кроликов. Титры сывороток в РДСК должны быть не ниже 1:32 -
1:64. В качестве контроля используют сыворотку крови клинически здорового кролика,
нормальный АГ (суспензия печени клинически здорового кролика). Постановку РДСК про-
водят при температуре 4-6 °C в течение 16-18 ч, а затем добавляют гемолитическую систему
и помещают в водяную баню при температуре 37-38 °C на 15 - 20 мин. Результаты реакции
считают положительными на ГБК при задержке гемолиза на 3 креста при разведении испы-
туемой сыворотки или АГ не менее чем 1:8.
РГА и РЗГА. Постановка этих реакций возможна с использованием набора ВНИИВ-
ВиМ микрометодом в пластинах с V- или U-образными лунками. Диагностическим титром
испытуемой сыворотки считается разведение её ие ниже 1:64. В положительных сыворотках
он достигает величин 1:128 и выше.
ИФА. В состав набора входят: специфические к вирусу ГБК IgG; специфический имму-
нопероксидазный конъюгат; специфический органный неинфекционный АГ; контрольный
490
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
> (нормальный) АГ; 10-кратный концентрат стандартизованного физиологического раствора;
> 10-кратный концентрат трнсбуфера; 4-кратный концентрат цитратно-фосфатного буфера;
J ортофенилендиамин; 30%-ная перекись водорода; казеин. Реакцию проводят в 96-луночных
i пластинах, которые предварительно сенсибилизируют специфическими IgG 2 ч при 37°С
или в течение 18 ч при 4°С. Сенсибилизированные пластины можно готовить заранее и хра-
нить при 4-6°С в течение 2-х недель. Постановка ИФА занимает не более 3-3,5 ч. Положи-
тельный диагноз на ГБК ставят на основании результатов исследования патматериала в
двух реакциях : РГА и РДСК, или РГА и ИФА. Обнаружение специфического АГ в одной из
указанных пар реакций является достоверным доказательством для постановки диагноза на
ГБК (3, За, 5,17а,). Получены и использованы в непрямой ИФА монАТ. Разработана имму-
ногистологическая диагностика ГБК (41).
Дифференциальный диагноз. ГБК необходимо дифференцировать от пастереллеза,
сальмонеллеза, колибактериоза, оспы, миксоматоза, эймерноза, отравления, солнечного и
теплового удара (17а).
С помощью РГА и иммуноэлектронной микроскопии удается дифференцировать ГБК и
синдром европейских коричневых зайцев. С применением монАТ, специфичных к вирусу
ГБК, разработан метод дифференциальной диагностики 2-х вирусов (21).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Для специфической профилактики ГБК во ВНИИВВиМ разработана инактивированная
тканевая гидроокисьалюминиевая формолвакцина, представляющая собой суспензию пече-
ни, полученную от кроликов, инфицированных вирусом ГБК, светло-желтого цвета с осад-
ком серого цвета, инактивированную 0,1-0,14%-ным р-ром формалина, смешанную с адъю-
вантом. После однократного применения препарат обеспечивает 100%-ную защиту (3); при
внутримышечной инъекции в дозе 0,5 см3 формируется напряженный иммунитет у приви-
тых кроликов с 1,5-мес возраста на 3 сут продолжительностью не менее 12 мес. Срок годно-
сти такой вакцины 24 мес при хранении в условиях 8°С.
В дальнейшем во ВНИИВВиМ разработаны 3 варианта тканевой лиофилизированной
вакцины против ГБК : формолвакцина, теотропинвакцина, термовакцина. Такие вакцины
представляют собой суспензию печени кроликов, инфицированных вирусом ГБК, на физио-
логическом растворе, инактивированную формалином, теотропином или теплом, подвергну-
тую лиофильному высушиванию с защитной средой. Вакцина представляет собой пористую
сухую массу серо-белого или бледно-розового цвета, не рассыпающуюся при встряхивании,
хорошо растворимую в стерильной дистиллированной или кипяченой воде, или физиологи-
ческом растворе (независимо от варианта). Вакцину выпускают по 1-120 иммунизирующих
доз в стеклянных герметически закрытых флаконах или в ампулах. Препарат применяют
для иммунизации в благополучных и неблагополучных по ГБК хозяйствах и населенных
пунктах. Кроликов иммунизируют с 1,5-мес возраста внутримышечно или подкожно (в об-
ласть внутренней поверхности бедер) однократно в дозе 0,5 см3. Иммунитет наступает на 3-
й день и продолжается не менее 12 мес. В неблагополучных хозяйствах вакцинируют только
клинически здоровых кроликов, находящихся в помещениях (шедах), в которых не было
случаев заболевания или гибели кроликов от ГБК. Вакцины сохраняют свои иммунобиоло-
гические свойства 24 мес хранения при 2-8°С (2,3, За, 9, И, 12,13,14,15,16,17,17а).
Культуральный вирус, инактивированной формальдегидом, стимулирует образование
анти-ГА и защищает кроликов от заражения вирулентным вирусом (23). Вирус, размножен-
ный в культуре клеток почки кролика (линия DIRK) и инактивированный формальдегидом,
также обладает выраженным протективным эффектом (23). На инактивированную р-
пропилактоном ГОА-вакцину, анти-ГА содержались более 18 мес в титре 1:320 (19). Поми-
мо формалина вирус ГБК инактивируется теотропином (11)
491
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
В Российской Федерации широко применяется тканевая гидроокисьалюминиевая фор-
молвакцина, которая создает выраженный иммунитет продолжительностью до 12 мес. В
крови привитых кроликов обнаружены КСА в титрах 1:16-1:64. Описано получение и при-
менение новой ассоциированной вакцины против миксоматоза и ГБК (12). Масляно-
эмульсионная тканевая вакцина также обладает выраженной иммуногенностью. В Чехосло-
вакии производится 2 инактивированные вакцины: - адсорбированная на гидроокись алю-
миния и с масляным адъювантом (35). Резистентность после вакцинации связана и с кле-
точными факторами защиты. Установлена корреляция между степенью поствакцинального
иммунитета и титром анти-ГА (26, 27). Приготовлена вакцина из культурального вируса,
инактивированного p-пропиолактоном, содержащая ГОА. Вакцина обладает выраженной
антигенной активностью и иммуногенностью. Быстро наступающая невосприимчивость жи-
вотных и продолжительный иммунитет делает ее необычной в ряду инактивированных вак-
цин (19, 20). Изучена динамика формирования иммунитета к вирусу ГБК на кроликах, под-
вергнутых сочетанному воздействию микотоксина Т-2 и общего /-облучения. Однократное
введение микотоксина Т-2 снижало выработку АТ в 2 раза. При облучении животных у-
лучами уровень АТ в период их максимального накопления был в 3 (доза облучения 4 Гр) и
5 (доза облучения 6 Гр) раз ниже, чем в контроле. Сочетанное воздействие микотоксина Т-2
и у-лучей существенно не угнетало выработку АТ по сравнению с раздельным воздействием
каждого фактора. При проведении профилактических (в т.ч. и специфических) мероприяти-
ях необходимо учитывать вышеприведенные данные (6).
Эпизоотологический анализ показал, что в кролиководческих хозяйствах страны часто
встречается смешанное течение ВГБК и миксоматоза, ВГБК и пастереллеза. В связи с этим
большое значение придается применению ассоциированных вакцин. Разработана безвред-
ная, высокоиммуногенная ассоциированная инактивированная вакцина против пастереллеза
и ГБК. Препарат рекомендован для производственных испытаний (14).
Оценка поствакцинального иммунитета. Эффективность многих вакцин можно оце-
нивать сравнивая титры специфических АТ в сыворотке крови до и после иммунизации. В
настоящее время РЗГА наглядно показывает динамическое изменение продуцирования АТ.
Установлено, что у кроликов, привитых в эксперименте ГОА- тканевой формолвакциной и
лиофилизированными формол-, - теотропин - и термовакцинами на 5-е сут выявляли АТ в
РЗГА в титре 1:160 - 1:2560, в РДСК - Г.32 - Г. 128. Такие животные были устойчивы к за-
ражению вирулентным вирусом ГБК. В условиях хозяйства было показано, что у кроликов,
привитых лиофилизированной вакциной, титр АТ в РЗГА был в пределах 1:32 - 1:2048 в те-
чение 9 мес наблюдения. Такие животные были устойчивы к заражению вирулентным виру-
сом ГБК. Кролики, имеющие титр АТ в РЗГА ниже 1:16, как правило, после заражения ви-
русом погибали. Изучен пассивный иммунитет у крольчат, полученных от крольчих, имму-
низированных жидкой и лиофилизированной вакцинами. В эксперименте установлено, что
пассивный иммунитет у крольчат 30-дн возраста обеспечивал 100%-ную защиту, в 50-60-дн
возрасте - 75-80%-ную после заражения вирулентным ВГБК. В условиях хозяйства показа-
но, что у 75-80% крольчат титр АТ в РЗГА в течение 6 мес после рождения колебался в пре-
делах 1:32 - 1:1024, а у 20-25% животных тигр АТ был до 1:16. Определена степень корре-
ляции между уровнем АТ и устойчивость кроликов к вирусу ГБК. Крольчата в 1,5-2-мес
возрасте с титром АТ в сыворотке крови 1:2-1:16(16 голов) погибали через 48 час после за-
ражения вирулентным ВГБК. Среди 2,5-4-мес кроликов, титр АТ у которых составлял 1:2-
1:8, 36 голов погибли через 48 ч, а 196 голов - на 5-6-е сут. Среди 4,5-6-мес животных, титр
АТ среди которых составлял 1:8-1:16, 9 голов пали через 48 ч, а 89 - на 5-6-е сут после за-
ражения. У 111 кроликов 10-12-мес возраста в сыворотке крови выявляли АТ в титре 1:32-
1:64; после контрольного заражения все остались живы. Т.е., гарантией устойчивости кро-
ликов к заражению вирулентным ВГБК является наличие ВНА в титре не менее 1:32 (16).
492
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
Серопрофилактика. Во ВНИИВВиМ разработана специфическая сыворотка против
ГБК, обладающая защитным 30-дн действием в дозе 0,5 см3 через 2 ч после однократного
подкожного или внутримышечного введения, а также лечебным действием после 1-кратного
введения в период развития первичных клинических признаков. Сыворотка против ГБК
представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость светло-желтого цвета с
красноватым оттенком. На дне флакона (ампулы) при длительном хранении выпадает оса-
док, который при встряхивании легко разбивается, образуя равномерную взвесь. Перед
применением флаконы (ампулы) с сывороткой необходимо подогреть в водяной бане до 36-
37 °C и тщательно встряхнуть. Сыворотка сохраняет свои лечебно-профилактические свой-
ства в течение 2-х лет со дня изготовления при хранении в сухом, темном помещении 5 лет
- при - 8-10°С. Эффективность лечебного действия сыворотки в производственных условиях
в период эпизоотии ГБК составляла от 90-97%. Она применялась на 10-е сут с начала гибе-
ли животных в дозе 0,5 см31-кратно подкожно. Через 6 сут после введения сыворотки была
проведена вакцинация оставшегося поголовья лиофилизированной инактивированной вак-
циной согласно наставлению по ее применению. В последующие дни гибель кроликов с
клиническими признаками и патологоанатомическими изменениями, характерными для
ГБК, полностью прекратились. Показана эффективность такого метода обрыва эпизоотии
ГБК и ее ликвидации. Удалось сохранить 97% кроликов (17а).
СИНДРОМ КОРИЧНЕВОЙ ПЕЧЕНИ У ЕВРОПЕЙСКИХ
ЗАЙЦЕВ (НЕКРОТИЧЕСКИЙ ГЕПАТИТ)
Эго контагиозное заболевание зайцев, клинически проявляющееся сходно с геморраги-
ческой болезнью кроликов (ГБК). Вопрос о происхождении вируса ГБК можно интерпрети-
ровать двояко: болезнь впервые зарегистрирована в Китае, и, по утверждению китайских
специалистов, занесена с ангорскими кроликами, импортированными из Германии. Не ис-
ключено, что болезнь изначально существовала в Китае, а европейские кролики оказались
более чувствительными, чем местные породы, и явились как бы индикаторами, способст-
вующими ее проявлению. Однако возможное европейское происхождение вируса подтвер-
ждается данными о заболеваемости ближайшего по отряду родственника кроликов - евро-
пейского зайца. Эпизоотии болезни у зайцев, сходные по клиническим признакам и пато-
морфологическим изменениям с таковыми у больных ГБК, были зарегистрированы в Евро-
пе на несколько лет раньше заболевания кроликов в Китае.
Первые сообщения о массовой гибели зайцев появились в Швеции в 1983-1984 гг. Од-
нако Морисе убежден (30), что подобное заболевание зайцев было в стране ранее, в 1980 г.
В последующие годы болезнь охватила зайцев в странах Центральной Европы - Германии,
Франции, Италии, Дании, Швейцарии, Венгрии, Бельгии, Португалии, с 1988 г. регистриру-
ется в Мексике и Аргентине, с 1989 г. - Великобритании. Болезнь у зайцев названа
“синдромом коричневой печени”, другое название “некротический гепатит”. Установлено,
что к вирусу чувствительны взрослые зайцы, молодняк (старше 35 дн, а по другим данным,
старше 90 дн). Сезонность болезни не отмечена, хотя во многих странах Европы наиболь-
шее число погибших зайцев приходится на осенне-зимний период и на время вспышек ГБК
у кроликов. Совпадали и территории. В Италии с 1989 г. по 1990 г. зарегистрировано около
55 000 вспышек заболеваний кроликов и зайцев, в основном с октября по март. Гибель зай-
цев продолжалась 8-10 нед. Больные зайцы малоподвижны, не боялись людей, у них отме-
чали нарушение координации движений. При вскрытии постоянно обнаруживали гипере-
мию трахеи и легких, кровонаполненность печени и дегенеративные изменения в гепатоци-
тах, спленомегалию, наличие в полостях несвернувшейся крови. Электронной микроскопией
в печени обнаружены вирусные частицы, по размерам и морфологии сходные с таковыми
493
Глава ХП. Family Caliciviridae Калицивирусные нфекции
вируса ГБК, установлено также их антигенное родство, но не идентичность. С использова-
нием монАТ показано, что из 6 полипептидов, общими были 4.
Французские исследователи при введении вируссодержащей суспензии из печени 2-х
погибших зайцев воспроизвели болезнь на кроликах, по клиническим и патоморфологиче-
ским свойствам идентичную ГБК. После обширной эпизоотии ГБК в 1987 г. на территории
бывшего СССР, на Украине в Черновицкой области наблюдали массовый падеж зайцев.
При исследовании проб патологического материала от зайцев, которые были направлены во
ВНИИВВиМ, в печени, селезенке, почках, легких обнаружили специфический АГ в титрах
1:4-1:16 в РСК и 1:25-1:625 в ИФА. АГ-содержащий материал ввели взрослым кроликам, не
иммунным к вирусу ГБК. В течение 15 дней наблюдений они не заболели. Однако в сыво-
ротках крови обнаружены специфические КСА в титрах 1:8-1:16. Аналогичный результат
получен и некоторыми зарубежными исследователями (17а).
С 1989 г. по 1991 г. во ВНИИВВиМ проведены исследования с помощью РСК и ИФА
284 проб сывороток крови зайцев в одном из районов Ростовской области, из них в 1991 г.
позитивных к вирусу ГБК выявлено до 11%, хотя не было сообщений о каких-либо заболе-
ваниях зайцев. В 1992 г из этой же области были исследованы 2372 зайца. Больных среди
них не обнаружили, но при исследовании 86 проб сывороток крови до 18% содержали спе-
цифические АТ в РСК, 20% в ИФА по этой же группе. По-видимому, в популяциях зайцев
некоторых регионов ближнего зарубежья и России циркулирует слабовирулентный вирус,
АГ- родственный вирусу геморрагической болезни кроликов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Аверин С.А. и др. Ветеринария,1992, 7-8 :32. 2.Бакулов И.А. и др. М. Центр н. техн информ, про-
паганды и рекламы, 1994: 38. З.Бакулов И.А. и др. Ветеринария, 1992, 7-8:30. За.Вишняков И.Ф. и др.
Вирусн бол. кроликов. Покров, 1997. 4.ДыминМ.А. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. ВНИИЗЖ,
Владимир, 1995:150. 5.Евтушенко А.Ф. Болезни Кроликов. Киев, Урожай, 1992,156. б.Купцова К.В. и
др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995:131. 7.Макаров В.В. и др. Вести Рос.
акад с.-х. наук, 1992, 4:49. 8.Малоголовкин С.А. и др. Тез. Всеросс. н-пр, конф. ВНИИЗЖ, Влади-
мир, 1995 :71. 9.Малахова М.С. и др. Тез. докл. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1990:79. Ю.Сургучев
Л.М. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 .196. 11.Шевченко А.А. и др.
Тез. докл. н конф. ВНИИВВиМ, Покров,1990 :194. П.Шевченко А.А. Кролиководство и звероводст-
во. 1994, 2 :24. 13.Шевченко А.А. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995
:154. 14.Шевченко А.А. и др. Тез. докл. Всеросс. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :130.
15.1Певченко А.А. Докл. Росс. акад. с.-х. наук. 1995, 3 :41. 16.Шевченко А.А. и др. Тез. докл. Все-
росс. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 .197. 17. Шевченко А. А. Докг. дисс. Покров, 1994, 285.
17а.Шевченко А. А. и др. Вирусная геморраг. болезнь кроликов. М.1996. 18.Anderson I. New Sci 1995,
148, 200, 4. 19.Arguello V.J.L. Rev Sci techn of int epizoot, 1991, 10 :459. 20,Arguello Villares I.L. Of
outem epizoot 1991, 10, 2:471. 21.Capucci L. et.al. Oxian Epizoot. 1991, 10, 2 :347. 22.Deptulo Wieslan.
Post microbiol. 1991, 30, 3 :329. 23.Chuan -Yi et.al. Rev Sci et techn off int epizoot 1991, 10, 2 :337.
24.Du Nian-Xing Off int epizoot 1991, 10, 2 :325. 25.Gong Xiao Ming et. al. Off int epizoot 1991, 10,
2:494. 26.Haung H.B. Rev Sci et techn off int epizoot, 1991, 10 :481.27.Huang H. Off int epizoot 1991, 10,
2 :481. 28.Liebermann Ht. et.al. J Vet Med В 1992, 39, 5 :317. 29.Lin Yougde et.al. Acta vet et zootetech
Sin 1992, 23, 4 :361.30.Marisse I.P. et. al. J appl Rabbit Res 1990, 13, 1 :24.31.Nowotny N. et.al. Wien
Tierarzt Monats Schr. 1993, 80, 3 :65.32.Ohlinger V.F. et.al. Of int epizoot 1991, 10, 2 :311.33.Onzout R
et.al. Ann Rech Veter 1990, 21 :69.34.Pessiart G et.al. J Vet Med B. 1992, 39, 6 :443. 35.Rodak L. et.al.
Proc int Symp Ivintly IAEA and FAO, Vienna 1991, 589. 36. Rodak L. et.al. Rev Sci et tech lifif int Epizoot
1991, 10, 2 :513. 37.Rossi C . et.al. Atti /Assoc gent ital 1990, 36 :229. 38.Sabina M. et.al. J Virol 1995,
69, 9, 5 :812. 39.Seal B.S. et.al. Virus Genes 1994, 8, 3 :243. 40.Soike D. et.al. Mh Veter Med 1989, 44,
11 :376. 41.Stoerckle B.N. et.al. J Vet Med В 1992, 39, 4 :237. 42.Zheng H. et.al. Acta Microbiol Sci
1992, 32, 3 :98.
494
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
Глава XIII. ПИКОРНАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА PICORNAVHUDAE
Семейство пикорнавирусов (от англ, pico - маленький, гпа - рибонуклеиновая кислота)
- большая группа вирусов, поражающая позвоночных.
Вирионы пикорнавирусов представляют собой лишенные суперкапсидной оболочки час-
тицы кубической симметрии диаметром 22-30 нм. Капсид состоит из 60 структурных еди-
ниц. Липидов и углеводов в составе вирионов не обнаружено. Мол.м. вирионов 8-9 МД,
плавучая плотность в CsCl 1,33-1,45 г/см3, коэффициент седиментации 140-165S. Вирионы
устойчивы к жирорастворителям и неионным детергентам.
Геном пикорнавирусов представлен 1-спиральной линейной плюс-РНК с мол.м. 2,4-
2,7 МД. На З'-конце геномной РНК имеется поли-А последовательность различной длины, а
5-конец блокирован ковалентно связанным белком VPg (2,4 кД). РНК пикорнавирусов об-
ладает ннфекционносгью.
В вирионах пикорнавирусов обнаружены 4 полипептида, которые обозначены как VP1,
VP2, VP3 и VP4 в порядке уменьшения мол.м. В вирион входит по 60 молекул каждого по-
липептида и 1-2 молекулы полипептида VP0 - предшественника полипептидов VP2 н VP4.
Размножение пикорнавирусов происходит в цитоплазме клеток. Вирионная РНК транс-
лируется непрерывно с образованием гигантского полипептида (240-250 кД), который под-
вергается последовательному расщеплению до функционально активных структурных и не-
структурных белков. После трансляции вирионная РНК служит матрицей для образования
минус-РНК, последняя в свою очередь служит матрицей для синтеза плюс-РНК. Сборка ви-
рионов происходит в цитоплазме клетки в несколько этапов. В процессе морфогенеза обра-
зуются различные морфологические структуры с последовательно возрастающими коэффи-
циентами седиментации.
Семейство Picornaviridae состоит из пяти родов: Enterovirus, Hepatovirus, Cardiovirus,
Rhinovirus, Aphthovirus.
Род Enterovirus (от греч. enteron - кишечник) включает полиовирусы человека типов 1
(прототипный вирус), 2 и 3, вирусы Коксаки А1-А22, А24 (А23 - вирус ЕСНО9), Коксаки
В1-В6, вирусы ECHO (enteric cytopatogenic human orphans - кишечные цитопатогенные ви-
русы-сироты человека) 1-9, (ЕСНО10 - реовирус типа 1), 11-27 (ЕСНО28 - риновирус чело-
века типа 1А), 29-34, энтеровирусы человека 68-71, полиовирус мышей (вирус энцефало-
миелита мышей Тейлора), вилюйский вирус, энтеровирусы обезьян 1-18, свиней 1-11, КРС
1-7. Вирус ВВС имеет очень близкое родство с вирусами Коксаки В5.
Энтеровирусы устойчивы в кислой среде (pH 3,0), плавучая плотность их в CsCl со-
ставляет 1,30-1,34 г/см3. Очень небольшая часть вирионов (около 1%) имеет высокую пла-
вучую плотность (1,43 г/см3). Энтеровирусы являются этиологическими агентами желудоч-
но-кишечных заболеваний, менингитов, энцефаломиелитов, конъюнктивитов и везикуляр-
ных поражений. Широко распространены среди здоровых людей и животных.
Род Hepatovirus включает вирусы гепатита А человека (прототипный вирус) и обезьян.
Диаметр вирионов составляет 25-27 нм, плавучая плотность в CsCl 1,32-1,34 г/см3, коэффи-
циент седиментации 160S. Гепатовирусы стабильны при pH 3-6 и прогревании при 60°С в
течение 10 мин. Передаются они главным образом фекально-оральным путем и вызывают
поражения печени у человека и обезьян.
Род Cardiovirus (от греч. cardio - сердце) включает вирусы энцефаломиокардита
(прототипный вирус), Менго, Колумбия SK, энцефаломиелита мышей и ММ. Кардиовирусы
495
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
идентичны в PH и рассматриваются как штаммы вируса ЭМК. Кардиовирусы выделены от
человека, обезьян, свиней, слонов, енотов, крыс, мангустов, белок, хомячков и мышей.
Диаметр вирионов составляет 24-30 нм, мол.м. 8,3 мД, плавучая плотность в CsCl 1,33-
1,34 г/см3, коэффициент седиментации 156S. Кардиовирусы стабильны при pH 3-10, однако
инактивируются при pH 5-6 в присутствии ионов С11' и Вт1’. Вирионная РНК состоит из 8000
нуклеотидов. Примерно на расстоянии 150 нуклеотидов от 5'-конца расположен участок по-
лицитидиловой кислоты (полиЦ-последовательность) длиной 80-150 нуклеотидов. Вызыва-
ют у животных поражение сердца, головного и спинного мозга.
Род Rhinovirus (от греч. rhis, rhinos - нос) включает риновирусы человека (более 100
серотипов) и КРС (2 серотипа). Типичным представителем рода - риновирус человека 1А.
Риновирусы инактивируются при pH 5,0-6,0, плавучая плотность в CsCl 1,38-1,42 г/см3. Вы-
зывают поражение верхних дыхательных путей, распространяются аэрогенно.
Род Aphthovirus (от греч. aphtha - везикулы во рту) включает вирусы ящура типов О
(прототипный вирус), А, С, SAT1, SAT2, SAT3 и Азия1. Афитовирусы инактивируются при
pH 5-6, плавучая плотность в CsCl 1,43-1,45 г/см3. Длина вирионной РНК около 8450 нук-
леотидов. Примерно на расстоянии 400 нуклеотидов от 5' -конца РНК имеется участок по-
лицитидиловой кислоты длиной 100-170 нуклеотидов. На З'-концевой части генома распо-
ложены тандемно 3 гена, кодирующие 3 белка Vpg. Афтовирусы вызывают поражение сли-
зистой оболочки ротовой полости и бесшерстных участков кожи головы, вымени, венчика и
области межкопытной щели у парнокопытных животных.
В состав семейства Picomaviridae входят еще риновирусы лошадей типов 1 и 2 , вирус
паралича сверчков, вирус С дрозофилы и вирус Gonometa. Они недостаточно изучены и по-
ка не отнесены ни к одному из вышеперечисленных родов. Следует также отметить, что от
насекомых и растений выделено еще около 30 мелких РНК-содержащих вирусов, таксоно-
мическое положение которых не определено.
ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТ МЫШЕЙ
Murine encephalomyelitis
Энцефаломиелит мышей - инфекция лабораторных мышей, проявляющаяся вялыми па-
раличами преимущественно задних конечностей. Заболевание вызывают несколько вирусов:
оригинальный шт. ТО-Тейлора, а также шт. FA, GD-VII и родственные им штаммы. Встре-
чается повсеместно.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Вирус ТО обычно вы-
зывает латентную инфекцию у лабораторных мышей. Аналогичные вирусы выделяли от ди-
ких мышей, хлопковых крыс и мешотчатых грызунов. Патологические изменения в ЦНС от
шт. ТО сходны с поражениями, вызываемыми вирусом полиомиелита у человека. Отмечает-
ся деструкция клеток передних рогов, особенно спинного мозга, и связанная с ней воспали-
тельная реакция. Изменения, обусловленные шт. FA и GD-VII, характеризуются диффузным
энцефалитом и не совсем сходны с изменениями при полиомиелите у человека, как в случа-
ях с вирусом ТО (1).
Штаммы вируса энцефаломиелита мышей Тейлора распределены в 2 группы: нейрови-
рулентная группа, которая быстро убивает мышей, и демиелинизирующая группа, которая
вызывает нелетальную инфекцию двигательных нервов с последующей персистентной ин-
фекцией белого вещества с демиелинизирующими повреждениями, сходными с множест-
венным склерозом. На основании исследования 3-мерной структуры вируса предполагают,
что различия в патогенезе 2-х групп вируса Тейлера являются результатом различий в про-
цессах иммунологического или рецептор опосредованного узнавания (2).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
496
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
Штамм ТО впервые выделил в 1933 г. Тейлор из головного мозга белых мышей у кото-
рых наблюдал клинические признаки энцефалита. Аналогичный вирус Тейлора можно
легко выделить из организма клинически здоровых белых мышей, что свидетельствует о
широком вирусоносительстве. Референтные шт. GDVII и DA. (4).
Морфология, химический состав и устойчивость. РНК-содержащий вирус Тейлора
имеет размеры 20-25 нм, устойчив в диапазоне pH 3-10, а также к эфиру, хлороформу, фе-
нолу, гипертоническому р-ру NaCl, глицерину, алюминиевым квасцам. Разрушается под
воздействием 20%-ного р-ра этилового спирта, 50%-ного ацетона, 2%-ного р-ра КМпО4,
1,5%-ного р-ра формалина. Длительно сохраняется при низких температурах (-40° - 70°С),
неустойчив к прогреванию (50°-70°С) и высокочувствителен к лиофильному высушиванию.
АГ структура не изучена. У больных мышей старше года обнаруживают ВНА, ПА, анти-ГА.
Штаммы ТО, FA и GD-VII родственны, но не идентичны.
Гемагглютинирующие свойства. Шт. GD-VII в отличии от других (FA и ТО) агглю-
тинирует эритроциты человека группы 0 при температуре 4°С до разведения выше 1:2000.
После обработки трипсином ГА-активность штамма повышается и проходит при температу-
ре 20°С с эритроцитами человека и 4°С с эритроцитами обезьяны. После обработки трипси-
ном 2 других штамма (FA и ТО) также приобретают ГА-свойства при температуре 20°С.
Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство. Латентно инфицированные
мыши выделяют вирус с фекалиями в течение 53 дн.
Экспериментальная инфекция. Экспериментальная инфекция шт. ТО воспроизводит-
ся на мышах 3-4-нед возраста при интрацеребральном, интраназальном, интраперитонеаль-
ном и внутримышечном введениях (гибель при первом методе введения в 100% случаев).
Взрослые мыши не заболевают или легко переболевают и становятся вирусоносителями.
Вирус проникает в ЦНС и другие органы через 2-5 дн после заражения. Он локализуется ,в
основном, в стенке кишечника и оттуда проникает в мезентериальные лимфоузлы и далее в
ЦНС. У заражённых мышей старшего возраста может развиваться прогрессирующий вялый
паралич, у ещё более старших - латентная инфекция. После первичного выделения шт. GD-
VII обычно вызывает вялый паралич, после пассирования на мышах - генерализованный
энцефалит. Шт. FA также постоянно вызывает только диффузный энцефалит. Вялые пара-
личи отмечают только после интраперитонеальной инокуляции. Внутримышечная инокуля-
ция любого из 3-х штаммов вызывает локальный миозит, по крайней мере шт. GD-VII, ви-
димо, размножается в мышцах. (4)
Культивирование. Вирус FA размножается в КЭ, заражённых на ХАО, в желточный
мешок или в аллантоисную полость. Кроме эмбрионов, вирус размножается в культуре фиб-
робластов КЭ, в культуре клеток печени и почек мышей, а также в ВНК-21. Особенности
внутриклеточной репродукции не изучены. Шт. DA вызывает в клетках L929 персистенцию,
которая обусловлена продукцией интерферона (3). Синтез РНК в клетках ВНК-21, заражен-
ных шт. GDVII или DA снижается через 3 ч после заражения, достигает максимального
уровня через 6 ч, затем снижается. (4).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции при спонтанном энце-
фалите служат больные мыши, выделяющие вирус во внешнюю среду с калом и мочой, а
также мыши-вирусоиосители. Они являются основным резервуаром вирусов в природе. За-
ражаются мыши в основном алиментарным путём, через инфицированный экскрементами
корм. Передавать вирус здоровым животным могут кровососущие насекомые.
Спектр патогенности в естественных условиях. Кроме белых мышей, восприимчивы
серые дикие мыши, хлопковые крысы. У морских свинок удавалось вызвать латентную ин-
фекцию. Кролики, белые и водяные крысы, лесные мыши и обезьяны к вирусу резистентны.
ДИАГНОСТИКА
32 Зак. № 171
497
Глава ХШ. Family Picomavinda Пиксрнавирусные инфекции
Для серологической диагностики применяют PH на белых мышатах-сосунках 3-6-дн
возраста, вводя им смесь сыворотки и вируса интраперитонеально. Нейтрализующую сыво-
ротку готовят на хлопковых крысах.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен, специфическая профилактика не разработана. Новорождённые
мышата и мышата-сосунки приобретают пассивный иммунитет с материнскими АТ. Вскоре
после отъёма они становятся вирусоносителями и обладают повышенной резистентностью к
инфекции. С возрастом процент вирусоносителей уменьшается: в 7,5 мес он составлял всего
50% н в дальнейшем понижался.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н.,Фомина Н.В. Части, вет. вирусология., М., Колос.,1979. 2.GrantR.A. et.al.
Proc Nat Acad Sci., 1992, 89, 6 :2061. 3.Roos R.P. et.al. J Virol, 1982, 43, 3 :1118. 4.Rozhon
E. J. et.al. J Gen Virol, 1982, 61, 2 :157.
ЭНТЕРОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine enterovirus infection
Патогенное значение энтеровирусов у КРС неясно. Их часто выделяют с бактериями,
вирусами и грибами. За последнее время в странах Европы, Азии, Америки, в Австралии,
СНГ, Болгарии и в других странах выделены различные энтеровирусы как от больных, так и
от клинически здоровых животных.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Неспецифичны. Чаще
болезнь протекает бессимптомно. Наиболее достоверные данные о роли энтеровирусов в
возникновении вспышек пневмоэнтеритов имеются в опубликованных работах американ-
ских, немецких и польских исследователей. Авторы отмечали заболевание телят, проте-
кающее с респираторным синдромом и поражением ЖКТ. В Египте выделены 2 штамма эн-
теровирусов от телят, буйволов с заболеванием органов дыхания и пищеварения. В Болга-
рии изолировано несколько энтеровирусов от подсосных телят, больных энтеритом, и вос-
произведено заболевание в условиях эксперимента. В бывшем СССР также выделены энте-
ровирусы от новорождённых телят, больных гастроэнтеритом. Много факторов свидетель-
ствуют об участии энтеровирусов и нарушениях воспроизводительной функции быков. Эн-
теровирусы изолировали из тестикул и семенных пузырьков быков с симптомами орхита и
везикулита . Несколько штаммов выделено из полового аппарата коров стада, в котором от-
мечалась высокая яловость и аборты.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Кунин и Майнус (1958, 1964) впервые выделили энтеровирусы КРС в Мичигане, описа-
ли некоторые свойства (прототипного шт. LCR-4) и предложили их обозначение - ЕСВО.
Морфология и химический состав. В препаратах, подвергнутых негативному контра-
стированию, можно наблюдать скопление полных и пустых вирионов. Энтеровирусы 8-ми
серотипов проходят через мембранные фильтры диаметром 50 нм (Рис. 68).
Устойчивость. Большинство выделяемых штаммов энтеровирусов КРС устойчивы при
37°С и при комнатной температуре (22-23°С), а также при обработке эфиром и хлорофор-
мом, 0,1% сапонином и 0,5%-ным формалином.
Вирусы чувствительны к высушиванию, устойчивы к действию желчи, кислой среды
(pH 3) и к прогреванию при 50°С в растворе, содержащем Mg2+ и Са2+. Они способны раз-
множаться в присутствии 5-йод-2-дезоксиуридина, но чувствительны к ингибирующему
498
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорпавирусные инфекции
действию гуанидина и 2-(а-гидроксил-бензил)-бензимидозола. Энтеровирусы КРС 8-ми се-
ротипов устойчивы к фотодинамическому действию тулоидинового синего, метиленового
синего и галогенопроизводных дезоксиуридина.
АГ активность. Относительно сроков появления ВНА и высоты титра их у заражённых
телят имеются обширные и весьма противоречивые данные. У коров 2,5-4-мес стельности
обнаруживали АТ в титрах 1:40-1:160, однако в последние 3 мес стельности титр их сни-
жался. Это авторы объясняют возможной депрессией иммунной реакции вследствие повы-
шения продукции специфических гормонов. После отёла титры АТ в сыворотках крови сно-
ва повышались. На день отъёма телят АТ в молоке соответствовали титру АТ в сыворотке
крови (Г. 10-Г. 160), а иногда титр молозивных АТ превосходил титр сывороточных (1:320).
АГ вариабельность и родство. Общепринятой международной классификации энтеро-
вирусов КРС до сих пор нет. В настоящее время в различных странах выделено и описано
более 50 “прототипных” энтеровирусов КРС. Существует не менее 8-ми серотипов энтеро-
вирусов. В перекрёстной PH титры гетерологичных ВНА не превышают 5% гомологичного.
ГА свойства. Некоторые штаммы ЕСВО агглютинируют эритроциты крыс, КРС, мор-
ских свинок, обезьян, лошадей, овец. Показана связь ГА-акгивности энтеровирусов в отно-
шении эритроцитов обезьян макака-резус и АГ родством. Вирусы 1-й серологической груп-
пы агглютинируют эритроциты обезьян, а 2-й - нет.
Вариабельность ГА-свойств энтеровирусов некоторые авторы относят за счёт процесса
селекции в смешанной популяции ГА+ и ГА” вирионов.
Локализация вируса, вирусовыделение и вирусоносительство. Из медицинской
практики известно, что более 50% здорового населения - носителем энтеровирусов. Некото-
рые исследователи объясняют это тем, что вирусы Коксаки и ECHO, по-видимому, относят-
ся к симбиотической кишечной вирусофлоре организма. Вирусы Коксаки группы В вызы-
вают самые разнообразные заболевания - от тяжёлых эпидемических вспышек до группо-
вых и спорадических инфекций.
Энтеровирусы КРС почти постоянно обнаруживают в фекалиях у животных преимуще-
ственно моложе 2-летнего возраста. Их выделяли также из половых путей КРС, из аборти-
рованных плодов, носоглоточного секрета и из крови.
Экспериментальная инфекция. Данные по воспроизведению клинически выраженной
болезни у КРС противоречивы. Многим исследователям не удавалось этого сделать. Между
тем серологические реакции свидетельствовали о бессимптомно протекающей инфекции.
При экспериментальном заражении телят вирусы ЕСВО вызывают лёгкое расстройство
кишечного тракта или насморк. Введение некоторых штаммов per os и подкожно телятам в
возрасте от 1-го дня до 8 нед сопровождается повышением температуры и лейкопенией.
Внутриутробное заражение плодов, по-видимому, обычное явление.
По данным большинства исследователей, лабораторные животные и КЭ не восприимчи-
вы к заражению энтеровирусами КРС. Между тем некоторым авторам удалось показать па-
тогенность отдельных штаммов энтеровирусов для белых мышей, морских свинок и КЭ.
Например, вирус 525-В патогенен для белых мышей массой 7-14 г, он вызывал заболевание
и гибель их при различных методах заражения, а вирус F-46, близкий в АГ-отношении эн-
теровирусам КРС LCR и VG5/27, оказался апатогенным для мышей и кроликов. Шт. Н-786
для беременных морских свинок не патогенен.
Культивирование. Культура клеток позволила выделить большое число энтеровирусов
животных вообще, в том числе энтеровирусы КРС. Последние хорошо размножаются в пер-
вичных культурах клеток почечной ткани хозяина, вызывая характерные ЦПИ. Некоторые
штаммы размножаются с появлением ЦПД в культурах клеток почек обезьян макака-резус,
почек свиней, коз, морских свинок, белых мышей и человека. Вирусы 7-го типа индуцируют
в поражённых клетках цитоплазматические включения. Шт. ЕСВО - Н-786 удавалось куль-
32*
499
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
тивировать на КЭ 8-11-дн возраста при заражении в амниотическую полость и ХАО. Для
КЭ патогенны также штаммы 3, 6 и 8-го серотипов.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат клинически
больные животные и вирусоносители. Предполагают, что распространение болезни проис-
ходит по типу кишечных инфекций. Предполагают, что распространение болезни происхо-
дит по типу кишечных инфекций. Капельный путь передачи инфекции имеет ограниченное
значение. Некоторые штаммы энтеровирусов передаются со спермой.
Спектр патогенности в естественных условиях. Большинство энтеровирусов КРС,
даже выделенных от животных с различными заболеваниями, не патогенны для своего есте-
ственного хозяина или вызывает заболевание, но только при определённых условиях
(например, заражение телят, не получающих молозива). Энтеровирусы КРС часто выделяют
от животных с респираторными или респираторно-кишечными заболеваниями, при различ-
ных формах бесплодия, абортах и т.п.(1,2).
ДИАГНОСТИКА
В связи с тем, что из кишечника животных кроме энтеровирусов можно выделить адено,
рео, миксовирусы и т. д., в диагностике энтеровирусных инфекций КРС следует предусмот-
реть: - выделение вируса из проб, взятых от больных и клинически здоровых вирусоносите-
лей. Часто в наиболее высокой концентрации энтеровирусы содержатся в фекалиях; иден-
тификацию вируса по устойчивости к физико-химическим факторам с последующим типи-
рованием в PH с эталонными диагностическими сыворотками. В данном случае имеется в
виду: определение устойчивости вируса к эфиру, ингибирующему действию галогенопроиз-
водных дезоксиуридина или определение устойчивости к фотодинамическому действию не-
которых синих красителей; определение терморезистентности при обработке катионами Mg
или Са; определение размера вирионов вируса; определение устойчивости к кислой среде
(pH 3,0). Выделение и идентификацию энтеровирусов проводят на культуре клеток почек
эмбриона КРС; - выявление динамики титра АТ в парных пробах, взятых в острый и ретро-
спективный периоды болезни с интервалом в 21 дн.
При анализе полученных результатов диагностических исследований большое значение
имеет сопоставление лабораторных, клинических и эпизоотологических данных. Энтерови-
русы КРС можно типировать методом латекс/агглютинации. Для нагрузки латекса исполь-
зуют IgG гипериммунных сывороток, соответствующих определённому штамму вируса.
Подлежащие идентификации антигены должны содержать одну комплементсвязывающую
единицу. Преимуществом метода является быстрота определения (всего 2 ч) и возможность
идентификации в одном препарате 2 и более штаммов. Стабилизированные частицы латекса
можно долго (до 10 мес) хранить при комнатной температуре (3).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет изучен недостаточно. Показано, что телята до 2-мес возраста устойчивы к
вирусу, распространённому в стаде, так как приобретают колостральный иммунитет. Спе-
цифические методы профилактики энтеровирусной инфекции КРС не разработаны.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., М., Колос. 1979. 2.Сюрин В.Н. и др. Вет. виру-
сол., М. Агропромиздат, 1991. З.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив. М., Агропромиз-
дат. 1992.
500
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
ЭНТЕРОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ СВИНЕЙ
Porcne enterovirus infections
Энтеровирусная инфекция свиней, вызываемая различными представителями группы
ECSO, клинически проявляется гипертермией, судорогами, параличами, локомоторными
расстройствами (полиэнцефаломиелитами), нарушением репродуктивных функций свино-
маток, диареей, кожными поражениями, похожими на везикулярную болезнь свиней, угне-
тением и т.п. Болезни передаются по типу кишечных инфекций (1, 5).
ECSO распространены повсеместно. Иногда они вызывают тешеноподобные болезни, не
поддаются эпизоотологической классификации и составляют гетерогенную в антигенном и
патогенном отношениях группу. Первое проявление энтеровирусной инфекции свиней в ви-
де болезни Тешена - полиэнцефаломиелитов с высокой смертностью зарегистрировано в
Чехословакции около 60 лет назад. Это тяжелое заболевание спорадически встречается
главным образом в Центральной Европе, а также Африке; более “мягкая” форма полиэнце-
фаломиелитов, вызываемая серологически родственными, но менее вирулентными шт. сви-
ных энтеровирусов, встречается более чем в 35 странах Европы, Северной Америки и Авст-
ралии. Во Франции энцефаломиелиты у свиней по тяжести занимают промежуточное поло-
жение между болезнью Тешена и болезнью Тальфана (6а). Впервые энтеровирусы свиней
стали выделять и классифицировать в Англии, США, Франции, Швеции, Болгарии. В на-
стоящее время невозможно определить четкие нозогеографические зоны энтеровирусных
болезней свиней. Штаммы, которые не проявляют патогенности, относятся к ECSO (enteric
citopathogenic svine orphan) или ECPO (enteric citopathogenic porcine orphan) вирусам.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Они разнообразны,
однако при 3 инфекциях (болезни Тешена, ВБС и СМЭДИ) установлены довольно четкие
патологоанатомические изменения. Клинические признаки заболеваний свиней, вызывае-
мых энтеровирусами свиней разных серогрупп следующие:
Синдром Серодзуппа
Полиэнцефаломиелит 1, 2, 3, 5
Расстройство репродуктивной функции 1, 3, 6, 8
Диарея 1, 2, 3, 5, 8
Пневмония 1,2, 3, 8
Перикардиты и миокардиты 2, 3
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Антигенные свойства. Группа энтеровирусов свиней в антигенном отношении гетеро-
генна. В 1967 г. Александр и Бете с помощью перекрестной PH разделили изученные ими
энтеровирусы свиней на 10 серологических типов: 1-й тип - Kontratice, Reporyje, Talfan,
F39,F65, F70, V176, U6, El, FS55, Dal, СМЭДИ А, В и С (шт. PS34); 2-й - T80, T52, F52,
F17, S18014, E4, Da2; 3-й - F7; 4-й тип - F12, F26; 5-й - F34; 6-й - F78; 7-й - F43; 8-й - F59;
9-й - V13; 10-й тип - А1. В настоящее время данная классификация общепризнана. Для ти-
пирования энтеровнрусов применяют PH в культуре клеток почки поросенка. Специфиче-
ские антисыворотки получают на безмолозивных поросятах. В группе энтеровирусов свиней
не таксономирован вирус ВБС (1).
В 1978 г. было показано (7), что подобно другим пикорнавирусам, энтеровирусы свиней
содержат С и D антигены. Термостабильный, не нейтрализующийся антиген С является об-
щий для многих штаммов энтеровнрусов свиней и ответствен за перекрестные реакции ме-
жду энтеровирусами свиней, а также другими пикорнавирусами (риновирус лошадей, Кок-
саки, полиовирус), которые выявляются в РДП. РСК оказалась приемлемой для быстрого
501
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
скрининга и типирования энтеровирусов свиней (4). Позднее (6) были выделены ранее не-
описанные серогруппы энтеровирусов свиней.(табл. XIII.1.)
Таблица ХШ. 1. Серологическая классификация энтеровирусов свиней (3,4)
N гру п- пы Тип ЦПД Референс- штаммы Другие штаммы
1 I Teshen Talfan, PS34, (SMEDI С), PS35, F65, Л, WR1, Т1,
ЕСРО-3, El, РЕ6
2 I Т80 Т52А, ОЗЬ, F17, F59, Е4, J2, ТЗ
3 I О2Ь PS2-PS13,PS14 (SMEDI B),PS15-PS20,F34,PEl,3,10
4 I PS36 PS38,F78,DE8,
5 I F26 F12, J3
6 I PS37 T4, WR4, F7,ECPO-2,J5
7 I SMEDIE WR2
8 п F43 PS27 PS23,PS25,PS26,PS28-PS30,PS32 SMEDI D,V13,A1,
WR3,WR5, WR6, ECPO-1,ECPO-5,CHICO,PE4,5,7
9 ш SMEDIA UKG139/3,UKG194/73,UKG298/73(c),UKG380/73,Pd2
10 ш UKG410/73 GF50
11 I LP54 MV1-76
UKG173/74
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., Колос, 1979. 2.Derbyshire J. В. Dis of swine. Ed.
Leman A.D. et.al. Iowa St Univ. Pr, Ames Iowa USA, 1994. 3.Dunne H.W. etal. Inf Imm,
1971, 4 :619. 4.Knowles N.J. et.al. Arch Virol, 1979, 62 :201. 5. Knowles N.J. etal. Vet Rec,
1988, 122 :441. 6.Knowles N.J Br Vet J 1983, 139 :19. 6a.Metianu T. Bull Acad Vet Fr, 1986,
59 :291. 7.Sulochana S et.al. Vet Microbiol, 1978, 2 :205.
БОЛЕЗНЬ ТЕШЕНА
Encephalomyelitis enzootica suum (nar.);Teschen disease, Infectious porcine en-
cephalomyelitis, Tesin disease, Talphan disease (англ.); Teschener Schweinelahmung, An-
steckende Schweinelahme (нем.); Maladie de Teschen (франц.)
Болезнь Тешена - вирусная болезнь свиней, характеризующаяся развитием негнойного
энцефаломиелита и появлением параличей. Болезнь проявляется клиническими признаками
поражения центральной нервной системы (гнпер-стезия, мышечный тремор, нистагм, опи-
стотонус, тонико-клонические судороги, “ходульная походка”, параличи конечностей мышц
шеи, глотки). Очень часто данную болезнь свиней описывали под различными самостоя-
тельными названиями: полиомиелит лошадей, болезнь Талфана, энцефаломиелит поросят,
болезнь Клобука и др. Болезнь Талфана была описана Хардингом (1958) в Англии как по-
лиэнцефалит, поражающий молодых поросят.
Болезнь Тешена впервые диагностировал Трефни (1930, 1931) в Чехословакии, в округе
Тешен. Основательно её изучил Клобук (1931, 1933). Инфекция быстро распространилась в
Чехословакии, проникла в Германию (1940), Австралию (1939), Югославию и Венгрию
502
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
(1945). В настоящее время она встречается в Польше, Болгарии, Франции, Италии. Обнару-
жение антител к вирусам группы болезни Тешена - Тал фана в сыворотках крови свиней
свидетельствует о широком распространении этих вирусов. В СНГ болезнь впервые была
установлена в хозяйствах Закарпатской области (1,3,16).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод продолжается 1-4 нед. В продромальном периоде, редко превышающем 72 ч, отмечают
невысокую температуру, потерю аппетита, иногда рвоту, острый ринит, расстройство коор-
динации движения. Часто эти нарушения остаются незамеченными. Затем появляются кли-
нические признаки поражения ЦНС. При энцефаломиелите наблюдают гиперстезию кожи,
судорожные сокращения различных групп мышц, непроизвольные движения, регидность
мышц конечностей, нистагм и т. п. Затем развиваются симптомы поражения спинного мозга
- шатающаяся напряжённая походка, слабость конечностей, неполное их опирание на зем-
лю, прогрессирующий паралич, постепенно захватывающий конечности, шею и голову. Из-
за паралича глотки отмечают частичную или полную утрату голоса. В тяжёлых случаях бо-
лезнь обычно заканчивается комой и гибелью животных. При более лёгком течении отме-
чают затруднённую походку, развитие полупараличей и параличей без явлений возбужде-
ния. Животные, в основном, заражаются алиментарно. Затем вирус репродуцируется в эпи-
телиоцитах слизистой оболочки толстого кишечника, а оттуда проникает в лимфоузлы, кро-
вяное русло и разносится по всему организму, в том числе попадает в ЦНС. Клинически бо-
лезнь протекает с явлениями острого энцефаломиелита и менингита, наиболее выражена
депрессия, повышенная кожная чувствительность, спастическое состояние губных, глазных
и жевательных мышц, а также мышц конечностей, сопровождающееся плавательными дви-
жениями; часто наблюдают рвоту, афонию, хрипоту, косоглазие, скрежетание зубами, за-
трудненное жесткое дыхание. После наступления стадии паралича температура тела снижа-
ется до нормальной и перед смертью достигает 32-34 °C (Рис. 72, 144).
Существенные патологоанатомические изменения находят только в ЦНС. Они характе-
ризуются гиперемией мозговых оболочек и серозной инфильтрацией. На срезах мозга в раз-
личных местах отмечают кровоизлияния, периваскулярную круглоклеточную инфильтра-
цию с образованием очагов нейронофагии, причём поражается лишь серое вещество мозга.
В мозжечке изменения обнаруживают в клетках Пуркинье. Наиболее характерные измене-
ния находят в ганглиозных клетках. Поражаются моторные центры вентральных рогов
(“разжижение” ядер клеток, образование вакуолей, наличие кариорексиса). Значительная
нейронофагия преобладает в вентральных рогах поясничной области спинного мозга. Диаг-
ностическую ценность представляют гистологические изменения. Они наиболее выражены в
средней и каудальной частях головного мозга (особенно на его основании - ножках мозга и
четверохолмии), а также в шейной и поясничной частях спинного мозга.
При патологоанатомическом исследовании наблюдают гиперемию мягких оболочек,
явления отека серого вещества (преимущественно ромбовидного и среднего мозга), шейного
и поясничного утолщений спинного мозга, катаральный ринит, бронхит и отек легких, то-
чечные и пятнистые кровоизлияния под эпи- и эндокардом. Желудок обычно наполнен кор-
мовыми массами, слизистые его и толстого отдела кишечника складчатые, очагово гипере-
мированы и покрыты густой прозрачной слизью. Мочевой пузырь всегда переполнен.
При микроскопическом исследовании ЦНС всегда определяют негнойный, лимфоци-
тарного типа полиэнцефаломиелит и менингит. При исследовании животных, павших в пер-
вые дни болезни, в сером веществе головного и спинного мозга наблюдают разные по вели-
чине очаговые и диффузные клеточные инфильтраты из глиальных элементов, гистиоцитов
и лимфоцитов. Среди клеток инфильтрата иногда обнаруживают небольшие скопления
эритроцитов. Полиморфноядерные и нейтрофильные лейкоциты встречаются редко и только
у животных, павших (или убитых) в первые часы и дни клинического проявления болезни.
Многие клетки инфильтрата находятся в состоянии пикноза и рексиса. В очагах поражения
503
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
очень часто регистрируют дезинтеграцию нервной ткани, дистрофические и некробиотиче-
ские изменения нервных элементов, распад и исчезновение фосфолипидов. По периферии
диффузных и крупнофокусных поражений паренхимы.отмечают активизацию микроглии,
местами - мелкоочаговые скопления мононуклеарных клеток.
Электронно-микроскопическим исследованием в клетках инфильтрата установили набу-
хание и дезинтеграцию канальцев гладкой эндоплазматической сети, образование большого
количества пузырьков и вакуолей, набухание митохондрий с разным числом фрагментиро-
ванных крист. При более длительном течении болезни в инфильтратах появляются плазма-
тические клетки, зернистые шары, идет разрастание астроцитарной глии. Для сосудистых
нарушений в начале болезни характерно расширение и переполнение капилляров, мелких
вен и артерий ( эндотелий их набухший с признаками пролиферации). Вокруг сосудов воз-
никают клеточные муфты из лимфо- и гистиоцитов, единичных нейтрофильных лейкоцитов,
а при более продолжительном течении болезни появляются плазматические клетки, и пери-
васкулярные инфильтраты уже приобретают вид обширных муфт. В очагах поражения и во-
круг них почти всегда выявляют в той или иной степени выраженные изменения нервных
клеток и волокон. Чаще наблюдают хроматолиз, острое набухание и вакуолизацию нервных
клеток, “тяжелое заболевание по Нисслю”, кариоцитолиз с явлениями частичного или пол-
ного нейрофибролиза и нейронофагии. В ганглиозных клетках с выраженными дистрофиче-
скими изменениями в начале болезни отмечают усиление реакции на кислую фосфатазу, то-
гда как на 5-7-12-е сут активность последней постепенно падала, одновременно в клетках
повышалась интенсивность реакции на щелочную фосфатазу. Содержание гликогена в ней-
ронах было понижено, отмечали также уменьшение или полное исчезновение пиронинофи-
лии в нейроплазме и ядрышке.
Установили изменения в эндоплазматической сети, митохондриях и других ультра-
структурах. В некоторых нервных клетках набухание митохондрий и фрагментация их крист
были настолько выражены, что они принимали вид крупных прозрачных вакуолей. В от-
дельных нейронах, кроме того, часто наблюдали значитальный рост числа первичных и
вторичных лизосом. Нарушение внутриклеточных мембранных систем коррелировало с на-
личием в цитоплазме клеток большого количества вирусных частиц: единичные вирионы
(или их небольшие скопления) обнаруживали в перинуклеарном пространстве или в местах
его перехода в канальцы гладкой эндоплазматической сети (отдельные вирусные частицы
находились внутри пузырьков и вакуолей). В части нейронов отмечали гипертрофию и ги-
перплазию комплекса Гольджи с вакуолизацией цистерн. В нервных волокнах выявляли на-
бухание, аргентофилию и варикозные утолщения аксонов, местами - фрагментацию и глыб-
чатый распад. На 5-7 сут болезни часто встречали дезинтеграцию миелиновых волокон с
явлениями демиелинизации.
При выздоровлении животных в очагах поражения ЦНС были выражены восстанови-
тельные процессы, менялся состав инфильтрата, количество клеток в нем постепенно
уменьшалось, появлялись макрофаги и зернистые шары. Вокруг сосудов скапливалось мно-
го плазматических клеток, в последующем и фибробластов. В мягких мозговых оболочках
изменения проявлялись циркуляторными нарушениями, разрыхлением и инфильтрацией
оболочек круглоклеточными элементами (лимфо- и гистиоцитами, в последующем - плазма-
тическими клетками и фибробластами) (2).
Патогенез. Первичная репродукция вируса отмечается в заглоточных лимфоузлах и
кишечнике (11). Во время болезни отмечают лейкоцитоз, резко меняется количество клеток
в ликворе; уже на 2-е сут оно возрастает до 44 (при норме 10-12); на 3-и до 247-395 в 109/л
(р<0,001); причем преобладают полиморфные ядерные нейтрофильные лейкоциты и лим-
фоциты. В 3-4 раза возрастает содержание общего белка спинномозговой жидкости, органи-
ческого фосфора - в 2-3 раза, что свидетельствует об интенсивной воспалительной реакции в
мозговом веществе и оболочках.
504
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые вирус болезни Тешена выделил Трефни (1930) в Чехословакии в округе Тешен.
Морфология и химический состав. Вирионы сферической формы, диаметр их 25-30
нм. Вирионы безоболочечиые, с плавучей плотностью в CsCl 1,34 г/ см3, содержат ядро из
1-нитчатой РНК, окруженное кубическим капсидом (Рис. 69, 70). Липопротеины отсутству-
ют и вирус устойчив к жирорастворителям.
Устойчивость. Вирус устойчив к эфиру, хлороформу и трипсину, не изменяется в ши-
роком диапазоне pH (2,8-9,5). При pH 11,8 инфекционность его быстро снижается на 50%.
Трипсин в концентрации 125-1250 мкг/мл повышает вирулентность вируса болезни Тешена
в 10 раз и способствует его реактивации после тепловой (при 37 и 56°С) обработки. Вирус
выдерживает нагревание при 60°С в течение 15 мин, но инактивируется за 20 мин. При на-
гревании до 70°С теряет активность через 10 минут. После частичной очистки протамин-
сульфатом инактивируется при 50°С за 20 мин. При 37°С вирус может переживать до 17
дней, но быстро гибнет при развитии гнилостных процессов. Поэтому вируссодержащие ма-
териалы следует сразу же консервировать глицерином или р-ром Хенкса с антибиотиками и
ставить в термос со льдом. Вирус сохраняется при 4°С и при - 79°С, а также в 50%-ном
глицерине при 0°С до 20 месяцев, в замороженном виде - годами. Выдерживает высушива-
ние на солнце до 3 нед. В соленых и копченых продуктах он сохраняется активным более 3
нед. Вирус нечувствителен к действию пенициллина, стрептомицина, нистатина и быстро
инактивируется 0,15%-ным формальдегидом. Размножение и ЦПД его частично ингибиру-
ется 2- (а-гидрокси-бензил) - бензимидозалоном. Из 10 изученных дезинфектантов только
гипохлорид натрия и 70%-ный этанол полностью инактивируют вирус Тальфаиа. Вирус бо-
лезни Тешена выживает при 15°С более 168 дн. Оба вируса сохраняются длительный пери-
од в жидких материалах (12), в которых быстрее инактивируются при активной аэрации;
инактивация вирусов также быстро происходит под воздействием ионизирующей радиации
(14) и в процессе пищеварения (5,6).
Антигенная активность. В крови больных и переболевших животных появляются спе-
цифические ВНА и КСА.
Антигенная вариабельность и родство. В PH и РСК показано антигенное родство ме-
жду вирусами болезни Тешеиа и болезни Талфана. В иммунологическом отношении вирусы
болезни Тешена являются единым типом, внутри которого различают два подтипа: в первый
входят шт. Bozen, Konratice, Repo-ryie, во второй - шт. Tyrol, Sweden Ug, Talfan.
ГА свойства не установлены.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. В крови и в органах
вирус обнаруживается кратковременно и в небольшом количестве. Виремию в течение 48 ч
отмечают между 4-6 днями после заражения, титры вируса в крови обычно бывают невысо-
кими. В организме свиней вирус локализуется и размножается в тканях ЖКТ, в которых он
появляется через 24-72 ч после заражения и обнаруживается в течение 5-7 нед. Наивысшие
титры вируса (106 ТЦДзо/г) в пробах фекалий обнаруживают через 9 дн после заражения. В
миндалинах, мезентериальных и брыжеечных лимфоузлах вирус появляется через 48 ч по-
сле заражения и выявляется в течение 6-8 дн. В головном и спинном мозге он выявляется
после виремии. В максимальных титрах ( 105,5 - 10 6,6 ТЦД 50/г он содержится там еще до
проявления признаков болезни и в течение первых дней паралитической стадии. В наиболее
высоких концентрациях вирус содержится в шейном и грудном отделах спинного мозга и в
мозжечке, что делает эти ткани наиболее пригодным материалом для выделения вируса. К
5-му дню после появления симптомов болезни содержание вируса в тканях ЦНС снижается,
и к моменту гибели животного можно наблюдать так называемую аутостерилизацию. Менее
регулярно вирус обнаруживают в секретах и экскретах (носовые истечения), иногда - в кале.
505
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
Вирус выделяется во внешнюю среду, главным образом, в продромальной стадии и в пер-
вые 2 дня болезни.
Экспериментальная инфекция. К экспериментальному заражению восприимчивы по-
росята до 1-2 мес возраста. Поросята 2-нед возраста, не получающие молозиво, переболе-
вают тяжелее, чем поросята 3-нед возраста. Иногда болезнь удается воспроизвести только у
поросят-сосунов 3-5- дн. возраста, не получающих молозива. Экспериментальная инфекция
легче удается при интрацеребральном илн субдуральном введении вируссодержащего мате-
риала. Менее эффективно интраназальное или оральное заражение. Иногда практикуют ин-
трацеребральное и интраназальное заражение. Лабораторные животные к вирусу болезни
Тешена - Талфана и возбудителям других полиэнцефаломиелитов свиней нечувствительны.
У экспериментально инфицированных беременных морских свинок отмечались поражения
плаценты (10). Предполагается, что в беременную матку вирус также проникает при вире-
мии, поскольку показано инфицирование эмбрионов после орального или интраназального
инфицирования свиноматок (7). Даже при парентеральном инфицировании поросят энтеро-
вирусом он очень быстро обнаруживается в кишечнике. При этом заболевание быстро про-
ходит, тогда как вирус персистирует в толстом кишечнике несколько недель (5).
Культивирование. Вирус размножается в культурах клеток почек, легкого, сердца, се-
менников, яичников и др. поросят 3-8 нед возраста и эмбрионов свиньи. Размножение со-
провождается образованием бляшек. ЦПИ, не отличаются от изменений, вызываемых дру-
гими энтеровирусами свиней (Рис. 71). Они характеризуются скоплением округлившихся
клеток с повышенной рефрактильностью, которые становятся заметными на 3-5-й день по-
сле заражения. При использовании адаптированных “культуральных” штаммов вируса пер-
вые признаки ЦПД появляются значительно раньше (иногда уже через 2-16 ч). Пораженные
клетки отделяются от поверхности стекла; помимо очагов дегенерации, появляются участки,
лишенные клеток. При исследовании окрашенных препаратов инфицированной культуры
обнаруживают зернистость и ацидофилию протоплазмы, конденсацию хроматина и эксцен-
тричное положение ядра. Развитие ЦПИ соответствует нарастанию титра вируса. При рабо-
те с адаптированными штаммами вновь образованный вирус появляется в культуре между 9
и 12 ч после инокуляции. Максимальные титры его (10 7,5-10 8 ТЦД 50/мл) обычно бывают
прн дегенерации монослоя на 75% (+++), что чаще всего происходит в период между 18 и
24 ч после заражения. К моменту полного разрушения монослоя титр вируса начинает сни-
жаться. На КЭ вирус болезни Тешена и возбудители тешеноподобных заболеваний не раз-
множаются.
Размножение энтеровирусов свиней (вируса болезни Тешена - Тальфана) удается в пе-
ревиваемых линиях клеток почек (IBRS-2) и других органов (SST). Некоторые штаммы ре-
продуцируются в клетках HeLa, ВНК-21. Различные штаммы вызывают 1 из 3 видов ЦПД в
культуре клеток почек поросят и по характеристике ЦПД в клетках ВНК-21, HeLa и Vero
штаммы относят к одной из 4-х групп (9).
ЭПИЗООТОЛОГИЯЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные жи-
вотные. Чаще заражение происходит при потреблении корма, воды, мясных отходов или бо-
енских отбросов, загрязненных выделениями больных животных, а также помоев. Возмож-
но и контактное заражение. Инфекцию могут распространять свиньи-реконвалесценты или
животные, переболевающие бессимптомно. Воротами инфекции служит, по-видимому, обо-
нятельная область слизистой оболочки носовой полости.
Спектр патогенности в естественных условиях. Восприимчивы только свиньи. Бо-
лезнь встречается также в Европе у диких свиней, на Мадагаскаре у водяных свиней
(Potamochoerus larvatus). Наиболее восприимчивы поросята-отъемыши и подсвинки.
ДИАГНОСТИКА
506
Глава ХШ. Family Picomavinda Пиксрнавирусные инфекции
Для выделения вируса из ЦНС необходимо отбирать пробы тканей от свиней с нервным
синдромом на ранней стадии его проявления. У животных с признаками параличей уже че-
рез несколько дней вирус не обнаруживается в ЦНС (13). Вирус может быть выделен в куль-
турах клеток из спинного мозга, коры головного мозга или мозжечка. Идентификацию ви-
руса проводят на основе физико-химических характеристик, ИФ или ИФА (15). Для выяв-
ления АТ широко используется ELISA (8).
При дифференциальной диагностике следует исключить БА, бешенство, КЧС, отравле-
ния хлоридами и соланином. Диагноз на прошедшую инфекцию, а также латентное вирусо-
носительство ставят на основании определения титров АТ в сыворотках крови реконвалес-
центов в PH в культуре клеток почки свиньи с использованием лабораторных штаммов ви-
русов болезни Тешена, Талфана и Т-80.
Для ускоренной диагностики болезни, а также выявления концентрации вируса в орга-
нах и тканях используют ИФ (2). В первые 3 дня болезни наблюдают специфическое свече-
ние цитоплазмы нейронов всех исследованных отделов ЦНС, клеток межпозвоночных уз-
лов, отдельных клеточных элементов селезенки, мезентериальных лимфоузлов, слизистой
толстого кишечника. Но начиная с 4 сут свечение в нервных элементах и других тканях рез-
ко снижается, а на 5-7-е сут энтеровирусный АГ выявляют лишь в эпителии слизистой ки-
шечника. Вот почему для диагностики энзоотического энцефаломиелита свиней кроме тка-
ней ( мозжечок, продолговатый и спинной мозг), рекомендуемых инструкцией для ИФ, не-
обходимо отбирать и кусочки слизистой ободочной кишки. При прижизненной диагностике
и определения у животных вирусоносительства разработан и внедрен в производство пря-
мой метод флюоресцирующих АТ в мазках - отпечатках со слизистой прямой кишки и фе-
калий. Положительную ИФ в мазках наблюдают в эпителиоцитах и их обломках в течение
всей болезни, а у переболевших (вирусоносителей) - до 2 мес (2)
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Для специфической профилактики болезни Тешена используют ГОА формолвакцину,
приготовленную из головного и спинного мозга зараженных поросят, и живую вакцину из
культурального мутанта «Тюбинген», представляющего собой шт. Konratice вируса болезни
Тешена, аттенуированного серийным пассированием в культуре клеток почки свиньи (3,4).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Романенко В.Ф. и др. Ветеринария 1982 :4. 2.Романенко В.Ф. и др. Ветеринария 1991, 7
:27. З.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., Колос, 1979 :367. 4.Сергеев В.А. Карант. и
малоиз. бол. жив., Колос, 1983. 5.Dertnyshire J.B. In Dis of Swine. Ed Leman A.D. et.al., 1994,
USA, Iowa Un.. 6.Derbyschire J.B. etal. Agri Wastes 1986, 18, :309. 7.Huang J. et. al. Am J Vet
Res, 1980, 41 :469. 8.Hubschle O.J.B. et.al. DTW 1983, 90 :86. 9.Knowles N.J. et.al. Arch Virol,
1979, 62 :201. lO.Lieu C.I. Taiwan J Vet Med Anim Husb 1976, 28 :1. ll.Long J.F. Crc Press
Inc, 1985 :179. 12.Lund E. et.al. Agri Wasters 1983, 7 :221. 13.Lynch J.A. et.al. Can J Comp
Med 1984, 48 :233. 14.Simon J. et.al. Int J Appl Radioisot, 34 :793. 15.Sulochana S. et.al. Kerala
J Wet Sci, 1978, 9:111. 16.Thoren I. et.al. Suond J Infect Diseases, 1992, 24, 2 :137.
СИНДРОМ СМЕДИ
Infectionen durch Smedi-Viren beim Schwein (нем.)
В 1965 г. в США Дан и сотр. описали своеобразную болезнь свиней, характеризующую-
ся рождением мёртвых или нежизнеспособных поросят, мумификацией плодов, гибелью,
рассасыванием эмбрионов и бесплодием свиноматок. Термин SMEDI был введен для опре-
деления группы энтеровнрусов поросят, изолированных при мертворождениях (Stillbirth),
мумификации плодов (Mummifield fetuses), гибели эмбрионов (Embrionic Death) и беспло-
507
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
дии (Intertility). Этот синдром воспроизводится экспериментально. Однако следует учиты-
вать, что подобный симптомокомплекс могут давать парвовирусы свиней (2).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. В период супоросно-
сти клинических признаков болезни обычно не бывает. Авторы выделили 5 штаммов энте-
ровирусов свиней, назвав их вирусами СМЭДИ, которые относятся к энтеровирусам свиней
1-го типа. У взрослых животных болезнь клинически не проявляется, но опасна для плода,
если материнский организм не ммунен. У больных свиней помет малочисленный, поросята
нежизнеспособны и вскоре гибнут. Подобная болезнь зарегистрирована в Венгрии. Из пла-
центы мертвых плодов и нежизнеспособных поросят удавалось изолировать вирус, который
нейтрализовался сывороткой переболевших свиней в разведении Г. 64 и более. Плоды наи-
более чувствительны к заражению в первые 30 дн внутриутробной жизни.
Помимо СМЭДИ, выделены штаммы энтеровирусов, среди которых особое значение
приобрели возбудители везикулярной болезни свиней. Общепризнано, что возбудителями
полиомиелита свиней и энцефаломиелита поросят являются вирусы, родственные в анти-
генном отношении вирусу болезни Тешена. Однако иногда вспышки энцефаломиелита по-
росят могут быть вызваны энтеровирусами свиней (ECSO), а также ГА вирусными агента-
ми, таксономическое положение которых еще точно не определено. Все это позволяет гово-
рить о группе клинически сходных вирусных полиэнцефаломиелитов свиней, среди которых
преобладают болезнь Тешена и тешеноподобные болезни.
При синдроме СМЭДИ мумифицированные плоды содержат инфекционный вирус, но
могут содержать только вирусспецифический АГ, выявляемый в ИФ. Вирус выделяется в
культуре клеток почки поросят из тканей абортированных или мертвороященных плодов.
Легочная ткань наиболее приемлема для изоляции энтеровирусов свиней из плодов (3).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Он принадлежит к 1-й серогруппе 10 энтеровирусов свиней и, видимо, идентичен виру-
сам PS-34 (СМЭДИ) и вирусам, которые вызывают гибель зародышей у беременных свино-
маток. Этим вирусом легко воспроизводится инфекция у супоросных свиней. Его выделяют
от плодов с признаками посмертного аутолиза.
Морфология и химический состав. Вирусы имеют диаметр около 27-30 нм, симмет-
рия капсида 5:3:2 с 42 капсомерами, расположенными в форме икосаэдра, константа седи-
ментации 150-170S. Общепринятой международной классификации энтеровирусов свиней
по аналогии с классификацией энтеровирусов человека, которая могла бы создать основу
для сравнения прототипов, выявленных различными исследователями, пока нет.
Устойчивость. Энтеровирусы группы ECSO устойчивы к действию хлороформа, к pH в
широком диапазоне, относительно терморезистентны, причем это свойство усиливается при
обработке катионами Mg2+ и Са2+, устойчивы к действию трипсина, (0,5%), и сапонина
(0,5%), которые соответственно при 37 и 20°С не нактивируют энтеровирусы в течение года.
Штаммы энтеровирусов свиней, разделенные Золетто (1965) по типу ЦПД на три группы,
легко удается различить и по их устойчивости в физиологическом р-ре NaCl в течение 1са
при 0 или 37°С . Вирусы 1-й группы теряют при этом более 4 1g инфекционности, в то время
как вирусы 2-й и 3-й групп практически не инактивируются. Однако вирусы всех трех групп
стабилизируются IM MgCl2 при 50°С. Энтеровирус Т-80 не инактивируется при 56°С в те-
чение 9 ч, устойчив к эфиру, хлороформу и к кислым (2,0) и щелочным (10) значениям pH
среды, длительное время сохраняется при низких температурах. Энтеровирусы инактиви-
руются 0,25%-ным раствором формалина при 37°С в течение 24 ч, в условиях же 4°С титр
их снижается незначительно. Некоторые штаммы энтеровирусов чувствительны к Ь-
пропиолактону, формалину, УФ лучам; все - к фотодинамическому действию красок.
Антигенная структура не изучена.
508
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
Антигенная активность. В сыворотке крови реконвалесцентов выявляются АТ в PH,
: РСК и РДП. Однако динамика накопления и последовательность угасания их неизвестны.
Антигенная вариабельность и родство. Выявлено 8 серологических групп СМЭДИ.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Энтеровирусы сви-
ней постоянно обнаруживают в пищеварительном тракте. Нерегулярное выделение их из
! других органов, кратковременная вирусемия - все это позволяет считать, что они вызывают
, лркальную инфекцию.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится не всегда. Удается заразить бере-
менных свиноматок. С 60-го дня супоросности у плодов образуются АТ, что затрудняет изо-
ляцию вируса. При заражении эмбрионов свиней вирусом СМЭДИ (шт. PS-34) в возрасте
68-98 дн. и последующей гистерэктомии через 1, 2, 4 и 6 нед после этого регистрировали
преждевременные опоросы и рождение мертвых поросят. Вирус выделяли у 60-100% эм-
брионов одного помета, АТ обнаруживали у 83-100% эмбрионов. Кроме того, вирус и АТ
находили у новорожденных поросят. У эмбрионов иммунологическая компетентность раз-
вивалась во все сроки введения вируса.
Культивирование. Все выделенные до сих пор энтеровирусы свиней вызывают ЦПИ в
первичных и диплоидных культурах почечных клеток свиней. Однако все изменения можно
разделить на два различных типа. Вирусы одной группы вызывают изолированное округле-
ние пораженных клеток, которые сморщиваются, постепенно уменьшаются в размерах и от-
деляются от стекла. Такая форма ЦПИ характерна для ВБТ. Вирусы второй группы вызы-
вают пикноз ядер, образование плотных темных зернышек, распад цитоплазмы на каплепо-
добные образования. Все штаммы энтеровирусов свиней, обладающие ЦПД, образуют
бляшки, форма и размер которых зависят от характера штамма.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ.
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные, пере-
болевшие, а также латентно инфицированные свиньи. Заражение свиней происходит через
субпродукты, полученные от больных и недавно переболевших свиней, через охлажденное
до 3-5° мясо переболевших животных, корма, воду, транспорт и инвентарь, инфицирован-
ные возбудителем. Широкое носительство энтеровирусов среди свинопоголовья способству-
ет раннему контакту с ними поросят. Однако полученные вместе с молозивом матери АТ
создают у новорожденных поросят пассивный иммунитет, это на несколько недель сдержи-
вает размножение и распространение вируса в организме. Но через 3-6 нед молозивные АТ
в организме поросят угасают, и в это время большинство поросят становится вирусоносите-
лями. Интенсивное размножение вируса ведет к повышению титров специфических АТ и к
формированию активного иммунитета.
Спектр патогенности в естественных условиях. К энтеровирусам свиней восприим-
чивы только домашние и дикие свиньи. Различные серологически родственные штаммы
ECSO вызывают различные симптомы болезни.
ДИАГНОСТИКА
Основана на выделении вирусов в культурах клеток почки свиньи и идентификации его
с эталонными сыворотками группы ECSO в PH в культуре клеток. Ретроспективная диагно-
стика основана на постановке PH с пробами сывороток крови свиней-реконвалесцентов н
эталонных штаммов вирусов группы ECSO.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет к энтеровиру СМЭДИ свиней, кроме возбудителей болезни Тешена-
Талфана, не изучен, специфическая профилактика не разработана.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н.,Фомина Н.В. Части, вет. вирус., Колос,1979. 2.Darbyshire J.A. In Dis of
Swine. Ed KLeman et.al., USA, Iowa Un. 1994. 3.Huang J. et.al. Am J Vet Res, 1980, 41 :469.
509
Глава ХШ. Family Picomavirida Пиксрнавирусные инфекции
ВЕЗИКУЛЯРНАЯ БОЛЕЗНЬ СВИНЕЙ
Morbis vesicularis suum (JIaT.);Vesikulare Scshwinekrankheit, Blaschenkrankheit des
Schweines (Нем.); Swine vesicular disease (Англ.); Maladie vesiculeuse du pore (Франц.).
Везикулярная болезнь свиней (ВБС) - контагиозное заболевание, клинически прояв-
ляющееся высокой температурой, везикулярным поражением венчика, эпителия области
межкопытной щели, рыла, плюсны и пясти.
Впервые ВБС появилась в Ломбардии (Италия) в 1966 г. В 1972 г. подобную болезнь
обнаружили в Гонконге. В этом же году три очага инфекции были зарегистрированы в Ита-
лии. В 1973 г. в Англии было выявлено 83 очага болезни. В те же годы инфекцию обнару-
жили в Австралии, Польше, Франции.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. По клиническим при-
знакам ВБС трудно отличить от ящура. Протекает она доброкачественно и лишь иногда вы-
зывает незначительную смертность среди поросят-сосунов.
Различают острое, подострое и субклиническое течение болезни. Везикулы, появляю-
щиеся при остром течении болезни, трудно отличить от таковых при ящуре. Подострое те-
чение сопровождается широкой диссиминацией вируса во внешней среде. Инкубационный
период при остром течении продолжается 3-7 дн., иногда дольше. В это время у животных
ухудшается аппетит, заметна вялость. С развитием везикул температура тела повышается до
40-41° и за 1-2 дня снижается до нормальной. Для болезни характерно появление везикул на
ногах в области венчика копыт и реже на морде и языке. Чаше поражаются обе конечности,
вследствие чего появляется хромота, которая через 3-4 дня исчезает. В это время может на-
чаться отделяться копытный рог, а у отдельных животных - спадение рогового башмака
(Рис.73, 74, 145-147).
Иногда болезнь протекает легко, охватывет большое число животных и характеризуется
слабозаметной хромотой. На месте лопнувших везикул остаются неглубокие, с геморрагиче-
ским дном язвы, содержащие экссудат соломенного цвета. Область межкопытной щели по-
ражается редко. У 5-10% свиней везикулы появляются на пятачке и в ротовой полости.
Подострое течение болезни характеризуется медленным распространением. Заболевают
несколько свиней, у них обнаруживают единичные везикулы. Все заболевшие довольно бы-
стро выздоравливают.
Хроническое течение болезни слабо выражено. Можно наблюдать хромоту, обусловлен-
ную развитием отдельных везикул, появлением трещин копытного рога и отслоением баш-
мака. Имеются данные, что по мере распространения болезни усиливается тяжесть перебо-
левания. Болезнь, казавшаяся в очагах появления безобидной, становится опасной.
В местах образования везикул и эрозий гистологически различают изменение двух ти-
пов. Изменение первого типа характеризуется вакуолизацией клеток шиловидного слоя,
пикнозом ядер, разобщением клетки формированием мелких везикул, которые, сливаясь,
образуют крупные везикулы. Их края плотно соединены с непоражённым эпителием. Ба-
зальный слой вначале сохраняется, а затем инфильтрируется нейтрофильными гранулоци-
тами, эозинофильными и мононуклеарными клетками. Изменения второго типа состоят в
дегенерации клеток шиповидного слоя. Распавшиеся участки эпителия сильно инфильтрова-
ны нейтрофильными гранулоцитами с примесью большого количества остатков ядер и дет-
ритных масс. Везикулы не образуются. На основании морфологических изменений разли-
чить везикулярную болезнь свиней и ящур не удаётся. При везикулярной болезни микроско-
пические изменения обнаружены в ЦНС. Поражения головного мозга обнаруживались на 2-
й день после инокуляции вируса; на 6-й день они были более тяжёлыми, а на 12-й имели
510
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
: резко выраженный характер и проявлялись образованием периваскулярных муфт, состоя-
щих из лимфоцитов и фокусов нейроглиальных клеток.
Патогенез. Поражения развиваются через 3-11 дн. после поедания контаминированного
: корма (9) и через 2-4 дня после экспериментального заражения (8). Лихорадка продолжает-
ся 5 дн. Пик виремии наблюдался на 2-4 день после заражения. Гиперемия продолжается 6
дн. Вирус персистирует по крайней мере 10 дн в тканях рыльца, языка, венчика копыт, за-
глоточных лимфоузлов, мышце сердца, в ЦНС.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые принадлежность вируса везикулярной болезни свиней к энтеровирусам показа-
ли Ньюман, Ровланде и Браун (1968). Позднее их данные подтвердили Моват, Дарбишер и
Хантли (1972). Вирус был изучен Нардели и др. (1968) и Моватом с сотр. (1972), на основа-
нии чего было предложено назвать его энтеровирусом свиней Англия/72.
Морфология и химический состав. Полипептидный состав изолятов, выделенных в
Англии, Австралии и Италии в 1972 - 1973 гг., различен. Вирус содержит три белка: VP1,
VP2 и VP3 с мол.м. 33, 29 и 32 кД соответственно. Белки VP1 и VP2 ответственны за ин-
дукцию ВНА (12). РНК вируса можно обнаружить с помощью ПЦР в зараженных первич-
ных клетках почки свиней. Очищенные препараты вирусной РНК подвергают обратной
транскрипции. Амплификацию полученной кДНК проводят праймерами, амплифицирую-
щими фрагменты капсидного белка и неструктурного белка LA, а также некодирующий
фрагмент генома. РНК, выделенная из незараженных клеток дает отрицательные результаты
в ПЦР (10). РНК генома вируса типа 11 (ЭВ-11) имеет длину 7438 н и кодирует полипро-
теины из 2195 остатков. По организации 5’-конца некодирующей области ЭВ-11 похож на
другие энтеровирусы, но имеет уникальный участок поли(У) длиной 12 н (5). Установлено,
что нуклеотидная последовательность патогенного шт. 27/72 сложена из последовательно-
стей 148 отдельных клонов. Геном этого шт. представляет 7400 нуклеотидов. Установлено
98 различий из 7400 нуклеотидов, 14 нуклеотидных различий между патогенным и непато-
генным штаммами вируса ВЕС (11).
Устойчивость. Во внешней среде вирус высокоустойчив: в инфицированном навозе и
мусоре сохраняет свою активность 8 недель, в искусственно инфицированном жидком наво-
зе при 5°С - в течение 38 дн. Устойчив к эфиру и pH в широком диапазоне (от 2,0 до 12,5).
В навозе, находящемся в пластиковых мешках при 12-17°С, вирус оставался жизнеспо-
собным в течение 138 дн. хранения, в образцах материала инфицированных туш, хранив-
шихся при минус 20°С, выживал в течение 11 месяцев. Молочная кислота, образующаяся в
мышцах павшего животного в результате трупного окоченения, на жизнеспособность вируса
не влияет. Поэтому мясо больных животных может быть причиной вспышки болезни.
Вирус термолабилен, разрушается при 60°С в течение 30 мин. Гонконгский и итальян-
ский штаммы более резистентны к термоинактивации, чем вирус ящура; оба стабилизиру-
ются IM MgCl2, тогда как последний способствует инактивации вируса ящура. Из дезинфи-
цирующих средств эффективны гипохлорид натрия (0,5 %) и йодозол (0,2%), NaOH и фор-
малин не эффективны.
Антигенная структура. При ультрацентрифугировании в градиенте сахарозы выделено
два типа комплементсвязывающих частиц с константой седиментации 150 S и 80 S. Плот-
ность тяжёлых частиц 1,34 г/см3, лёгких - 1,30 г/см3. Диаметр более лёгких частиц 30-32 нм.
Антигенная активность. У поросят появляются ВНА, которые выявляются в течение
четырёх месяцев после переболевания. Ранние ВНА обнаруживаются на 4-й день. Антисы-
воротки к вирусу получают на морских свинках.
Антигенная вариабельность и родство. Вирус имеет подтиповые варианты, подобные
таковым у вируса ящура (величина достигает 0,2-0,3). В РДП с сывороткой свиней-
реконвалесцентов найдены антигенные различия между шт. Италия/72, Англия/72, Австра-
511
Глава ХШ. Family Picomavirida Пиксрнавирусные инфекции
лия/73 и Польша/73. Антигенная структура штаммов, выделенных в Италии в 1972-1973 гг.,
отличалась от таковой штамма, выделенного в 1966 г. Антисыворотка, приготовленная на
штаммы, выделенные в 1972-1973 гг., давала четкую РСК со штаммом, полученным в 1966
г., но не наоборот. PH дала аналогичные результаты. Известны штаммы вируса: Англия/72
(эталон ИКД 27/72), Италия 1/66 и 3/73, Австрия 1/73, Франция 1/73, Польша 1/73.
Между вирусом ВБС и вирусом Коксаки типа В 5 (КВ5) существует тесное серологиче-
ское родство. Вирус ВБС легко нейтрализуется антисывороткой к вирусу Коксаки В5, а сы-
воротка свиней-реконвалесцентов нейтрализует шт. Коксаки В5, выделенные от человека.
Однако, в прямых опытах перекрестного иммунитета иммунологического родства между
этими вирусами не установлено.
Известно, что вирус Коксаки А16 вызывает ящуроподобное изменение у детей. Возмож-
но, энгеровирус свиней Англия/72 (возбудитель ВБС) является вариантом штамма вируса,
который не вызывает таких поражений у человека.
Гемагглютинирующие свойства не установлены.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Из органов и тканей
свиней-реконвалесцентов вирус везикулярной болезни выделить не удается. Однако он дол-
го сохраняется на поверхности тела животных и в навозе. Даже в латентном периоде он на-
капливается в коже, мышцах, лимфоузлах (титр до 4 lg/г ткани) и сохраняется в течение
двух недель после убоя животного. В наивысшей концентрации вирус находят в секретах
животных в первую неделю болезни. В течение 14-16 дн. после заражения его можно выде-
лить из экскрементов. В высокой концентрации он содержится в эпителии пораженных уча-
стков кожи, выявлен в лимфоузлах и костном мозге туш через 13 дн. после убоя больных
животных. По другим данным, вирус постоянно в течение 45 сут. выявляется в фекалиях и
нерегулярно обнаруживается до 110 сут. Из мочи, выделений носовой полости и глоточной
жидкости его можно изолировать нерегулярно в течение 90, 80 и 65 сут. соответственно. Та-
ким образом, пораженные животные могут контаминировать внешнюю среду и заражать
интактных свиней в течение более трех месяцев.
Экспериментальная инфекция. Заболевание легко воспроизводится при оральном,
подкожном, внутрикожном и контактном способах заражения. Однако не все штаммы виру-
са, выделенные в разных странах, обладают одинаковой способностью вызывать везикулы
на месте введения (внутрикожно в мякиш). У свиньи, зараженной в пятачок, везикулярные
поражения на месте введения вируса развиваются уже через 36 ч. Болезнь прогрессирует,
охватывая кожу, суставы конечностей, морду и язык. Однако заживление дефектов кожи
происходит быстрее, чем при ящуре. При интрацеребральном заражении 10-дн. поросят шт,
UKG 27/72 симптомы болезни развивались на 7-8-й день и отмечались до 16 дня. Вирус вы-
деляли из коры головного мозга на 2-4-й день после заражения, АТ появлялись на 8-й день.
У подсаженных овец явных признаков болезни не обнаружено, однако через 4-7 дн. в
глотке обнаружили большое количество вируса, что указывало на размножение его в орга-
низме овец, у шести из восьми овец были выявлены ВНА в значительном титре, у четырех
животных они удерживались 6 недель. Кроме поросят, экспериментально можно заразить
однодневных мышат, которые заболевают через 24-30 ч с признаками поражения ЦНС
(тремор, нарушение координации движений, к 7-у дню - параличи и смерть). Вирус активно
размножается в головном мозге и поражает мозговую ткань (деструкция нейронов в гангли-
озном слое аммонова рога, дегенерация и распад нервных клеток). Вирус удалось реизоли-
ровать из мозга инфицированных мышей. Максимален титр его на четвертые сутки. После
заражения вирусом ящура у мышат также развиваются параличи, однако мозговая ткань не
поражается. Метод биопробы на мышах рекомендуется для дифференциальной диагностики
ВБС от ящура.
Культивирование. Вирус ВБС размножается без адаптации в первичной культуре кле-
ток почки свиньи и перевиваемых линиях свиного происхождения РК-15 и IB-RS-2. Он вы-
512
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
зывает ЦПИ и бляшки. Первые изменения в инфицированной вирусом культуре клеток поч-
ки свиньи появляются через 3 ч после заражения и характеризуются вакуольной дистрофией
цитоплазмы и интенсивной базофилией ядра. Через 8 ч в цитоплазме наблюдаются пикно-
зированные диски или кариорексис. Полная дегенерация клеточного слоя обычно наступает
через 24-36 ч после заражения. Наряду с ЦПИ изменяется энзиматическая активность кле-
ток: увеличивается содержание сукциндегидрогеназы и уменьшается количество лактатде-
гидрогеназы. У адаптированного к перевиваемым клеткам IB-RS-2 вируса цикл размноже-
ния равен 4 ч, а титр его достигал 2x109 БОЕ/мл. Шт. Н/3’76 успешно культивировали в
клетках IBRS-2. С помощью монАТ было выявлено 5 сайтов нейтрализации (7)
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Свиньи с субклиническим течением болезни
могут быть источником заражения здоровых животных. В отличие от возбудителя ящура,
ВБС не распространяется по воздуху на большие расстояния. Инфекция передается при кон-
такте с больными животными или через инфицированные корма и субпродукты.
Спектр патогенности в естественных условиях. Вирус поражает только свиней. До-
казана восприимчивость к нему кабанов. Лабораторные работники, имевшие контакт со
свиньями, зараженными британским полевым штаммом вируса, имели специфические ВНА.
Позднее было показано, что при работе с вирусом или уходе за больными животными воз-
можно заражение людей. Предполагают, что возбудитель произошел от энтеровнрусов, цир-
кулировавших у людей, поскольку он может вызывать у человека болезнь, сходную с Кокса-
ки-инфекцией. В сыворотках крови здоровых свиней АТ к вирусу нет, но они появляются
после заражения животных вирусом Коксаки В5.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз основан на использовании серологических реакций (РСК, РДСК, РДП, PH) и
биопробы на свиньях. Для выделения вируса эпителий промывают, измельчают и центри-
фугируют. Надосадочной жидкостью заражают перевиваемую линию клеток почек свиней
(IB-RS-2) и клетки щитовидной железы теленка. Появление ЦПИ только в клетках теленка
свидетельствует о ящурной инфекции. Для серологической дифференциации в РСК исполь-
зуют специфическую сыворотку крови свиней и АГ из стенок везикул или везикулярную
жидкость. Параллельно ставят реакцию непрямой ИФА (через 12, 24 и 48 ч после инокуля-
ции клеточного монослоя 1 IB-RS-2). Чаще используют PH (микрометод) и ИФА. Применя-
ют также двойную и радиальную ИД и РСК. Техника постановки ее предусматривает ис-
пользование радиоактивного меченого АГ, который более чувствителен, чем АГ для PH.
Разработан химический метод очистки синцитинов, позволяющий получить активные, вы-
сокоспецифические АГ антительные препараты для диагностики везикулярных болезней
животных (ящура, ВБС, ВЭС, ВС) в РПГА. Носителями синцитинов в диагностикумах слу-
жат формалинизированные и танизированные эритроциты барана (3-5%), лиофилизирован-
ные после сенсибилизации. Использование сухих эритроцитарных антигенных и моно- по-
ливалентных (7-11-валентных) антительных диагностикумов значительно упрощает поста-
новку РПГА и обеспечивает возможность дифференциации как антигенов возбудителей ве-
зикулярных болезней, так и их серотипов (1). Разработана методика получения высокоочи-
щенных препаратов вируса ВЭС и ВБС, пригодных для иммунизации животных и получе-
ния высокоспецифических АТ. Кроме того, препараты, полученные этим способом, пригод-
ны для изучения физико-химических свойств вирусов ВЭС и ВБС (4). Предложена непрямая
ИФ для выявления специфических АТ к вирусам ящура, ВС, ВБС и ВЭС в сыворотке крови
от разных видов животных (13). Однако, для дифференциации поствакцинальных и постин-
фекционных АТ в НИФ практически неприемлема. В то же время для выяснения эпизооти-
ческой ситуации, особенно при подозрении на ящур, часто возникает необходимость опера-
тивно выявить наличие переболевших животных в стаде. Многолетнее использование НИФ
33 Зак. № 171
513
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
показало, что она позволяет выявлять постинфекционные АТ не только у явно переболев-
ших животных, но и у тех, которые не имели клинических признаков болезни (13).
Для дифференциальной диагностики ВБС от ящура необходимо учитывать следующие
данные: - вирусы, вызывающие везикулярную болезнь, растут в тканевых культурах только
свиного происхождения (RS-клеточной линии почки свиньи); - вирусы везикулярной болез-
ни устойчивы при pH 5,0 и стабилизируются MgCl2 при нагревании до 50°С; - наличие об-
щего КСА или ВНА у вновь выделенных штаммов с референс-штаммами вируса ВБС. До-
полнительными критериями являются: невозможность экспериментально инфицировать
КРС, меньшая плотность вирусных частиц везикулярной болезни (1,32-1,34) по сравнению с
таковой у вируса ящура (1,43-1,44). Заражение однодневных мышат позволяет отличить
ВБС от вируса ВЭС, но не от ящура.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
В Англии применяют культуральную инактивированную вакцину. Вирус (шт. ИК-27)
выращивают в монослое или в суспензионных культурах клеток IB-RS-2, концентрируют,
инактивируют ацетилэтиленимином, добавляют масляный адъювант. Во Франции приме-
няют инактивированную масляную вакцину, которая сообщает иммунитет 73-100% живот-
ным. Вирус накапливается в высоком титре (8,0-9,0 1g ТЦД 5q/ мл), что дает возможность
получать эффективные вакцинные препараты без предварительного концентрирования ви-
русного АГ. Технологии изготовления достаточно эффективных вакцин, разработанных в
различных странах: во Франции (лаборатория Роне Беллон) - эмульгированная формолвак-
цина; в Англии (Пирбрайт) - ацетилэтилениминовая ГОА вакцина; в Румынии -
эмульгированная вакцина типа “масло в воде” с использованием суспензионной культуры
клеток IBRS- 2 ; в Германии (о. Римс)- формолвакцина с использованием первичной куль-
туры клеток почки поросят и ГОА. Иммунизация свиней инактивированными препаратами
создает достаточно высокий уровень защиты поголовья, обеспечивающий ограничение в
распространении ВБС. Эмульгированная формолвакцина, которую применяют однократно
внутримышечно в дозе 2 мл, обеспечивает иммунитет продолжительностью 8 мес. Вакцина
сохраняет иммуногенность не менее года в условиях хранения при 2-6 °C (2,3).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Кочергина М.Ф. Ветеринария, 1991, 11 :59. 13.Рахманов А.М. и др. Тез. докл. н.-пр.
конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995. 2. Сергеев В.А. Вирусные вакцины., Киев, Урожай, 1993.
3. Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусология, Колос, 1979, 370. 4.Фоменко В.Ю. Тез. докл.
н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995, 147. S.Dahllund L. et.al. Virus Res, 1995, 35, 2 :215.
6. Jubb K.V.F. et.al. New York, Academic Press, 1985, 90. 7.Kanno T. et.al. J Gen Virol, 1995,
76, 12 :3099. 8.Lai S. S. et.al. Am J Vet Res, 1979, 40 :463. 9.McKercher et.al. CRC, 1981, 161.
10. Niedbalski W. et.al. Bull Vet Rst Polaay, 1995, 39, 2 :85. 11. Seecharn P. et.al. Virus Res,
1990, 16, 3 :255. 12.Tsuda T. et.al. J Vet Sci, 1987, 49 :129.
ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТ ПТИЦ
Epidemic tremor, Infectious avian encephalomyelitis, Avian encephalomyelitis (Англ.);
Aviare Enzephalomyelitis, Ansteckende Gehurn-Ruckenmarck-Entzundung des Geflugels
(Нем.); Encephalo-myelite aviare (Франц.); Encephalomyelitis aviar (Исп.)
Инфекционный энцефаломиелит птиц (ИЭП) (эпидемический тремор) - остро проте-
кающая вирусная болезнь цыплят, характеризующаяся дрожанием головы и шеи, расстрой-
ством координации движений, парезом конечностей, а также высокой заболеваемостью и
смертностью. Впервые болезнь диагностировал в 1930 г. в США Джонс, а затем её зареги-
стрировали в Новой Зеландии, Австралии, Англии, Швеции, ФРГ и в других странах. В на-
514
Глава ХТТТ Family Picomavirida Пиксрнавирусные инфекции
стоящее время ИЭП встречается на всех континентах земного шара в странах с развитым
промышленным птицеводством. Экономический ущерб, наносимый инфекцией, включает
убытки от падежа птицы, снижения продуктивности, уменьшения выводимости цыплят и за-
трат на профилактику и ликвидацию болезни (1,7,8). Заболевание птиц ИЭП сопровождает-
ся значительным снижением яйценоскости и выводимости инкубированных яиц. Инфекция
распространяется в стадах пероральным путем, т.е. вирус, выделяемый с пометом, доста-
точно устойчив и сохраняется в окружающей среде длительное время (10,11). В Польше во
многих стадах птиц наблюдалась интенсивная циркуляция вируса ИЭП (6)
По данным отдельных авторов, смертность цыплят от этой болезни составляет в сред-
нем 20-25% (7), но может достигать 60-90% (8).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У цыплят, инфициро-
ванных в эмбриональный период, инкубационный период продолжается 1-7 дн, у суточных
цыплят, зараженных контактно или per os - 11 дн. К вирусу восприимчивы цыплята до 6-нед
возраста, но чаще болеют в возрасте от 6 до 20 дн. У больных наблюдают сонливость, вя-
лость, слабость, шатание при ходьбе, тремор головы, шеи или хвостовых перьев, парез
крыльев и ног, а затем паралич (Рис. 76). Цыплята погибают от истощения. У цыплят ИЭП
проявляется клинически, у взрослых кур протекает как инаппарантная инфекция и характе-
ризуется снижением яйценоскости. При вскрытии трупов видимых поражений не отмечают.
Единственным патологоанатомическим поражением, свидетельствующим об энцефаломие-
лите, являются беловатые очаги, обнаруживаемые в мышечном желудке цыплят. Микроско-
пические изменения, характерные для болезни, находят в головном и спинном мозге, же-
лудке и поджелудочной железе - это дегенерация нейронов, особенно клеток Пуркинье, ско-
пление одноядерных клеток вокруг кровеносных сосудов и гиперплазия лимфоидной ткани.
Периферическая нервная система никогда не повреждается, что необходимо учитывать при
дифференциальной диагностике. При гистологическом исследовании пораженных глаз ус-
тановлено воспаление радужной и сосудистой оболочек и сетчатки, иридоциклит, эндоф-
тальмит, катаракта, дегенерация и некроз зрительного нерва, фрагментация внешних сег-
ментов фоторецепторов, кератит.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус ИЭП впервые выделил и описал в 1934 г. Джонс. (США). Вирус отнесен к одно-
нитевым РНК-содержащим энтеровирусам.
Морфология и химический состав. Диаметр частиц вируса 20-30 нм, не содержит ли-
пидов, состоит из нуклеокапсида без наружной оболочки. Капсид имеет кубическую сим-
метрию, количество капсомеров, по-видимому, 60 (Рис. 75).
Устойчивость. Вирус устойчив к хлороформу, кислоте, трипсину, пепсину и ДНК-азе и
противостоит действию тепла ; хорошо сохраняется при минус 20°С (от 9 до 428 дней), а
также в 50%-ном глицерине на холоде (до 69 дн.), сохраняется в лиофилизированном виде и
стабилен при pH 3,0.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. У переболевших кур-несушек вирус индуцирует образование
ВНА, которые, помимо сыворотки крови, обнаруживаются в желтке яиц. Серологический
ответ на вирус ИЭП развивается медленно, примерно в течение четырех недель после зара-
жения цыплят. Индекс нейтрализации сыворотки крови незараженных цыплят, как правило,
менее чем 1,1, ау зараженных птиц он равен 1,8-3,4. Присутствие ДТ в сыворотке крови за-
раженных птиц и в желтке яиц устанавливают с помощью теста чувствительности КЭ.
Антигенная вариабельность и родство. Среди различных штаммов вируса и антиген-
ных вариантов не обнаружено. Изучено антигенное родство между штаммами энтеровиру-
сов, которые представлены: шт. нефрита птиц G-4260, энтеровирусами PV2 и PV3 и тремя
другими энтеровирусоподобными агентами в ИФ и PH. Между вирусами нефрита и энце-
зз*
515
Глава ХШ. Family Picomavinda Пиксрнавирусные инфекции
фаломиелита антигенного родства не установлено (5). Однако, имеется и противоположное
суждение. Так, например, показано перекрестное родство между вирусом нефрита и энце-
фаломиелита птиц в реакциях ИФА и PH. Корреляция этих методов с вирусом нефрита со-
ставляла 94% (4).
Различия между полевыми штаммами и штаммами, адаптированными к КЭ, касаются
патогенности и тропизма. Патогенность полевых штаммов различна; одни энтеротропны,
другие нейротропны и поражают главным образом нервную систему цыплят. Полевые изо-
ляты вируса не патогенны для КЭ, но в течение нескольких пассажей могут быть адаптиро-
ваны к ним. Среди штаммов, адаптированных к КЭ, наиболее известен шт. Ван Рекел-
37020. Он обладает нейротропными свойствами и вызывает признаки болезни у цыплят
всех возрастов при парентеральном заражении. Для орального заражения цыплят требуется
очень высокая доза вируса. Референтные штаммы этого вируса: Ван Рекел -37020, Калнек -
1143,Тейлор-3014(3).
Локализация вируса, вирусоносительство, вирусовыделение. Виремия при энцефа-
ломиелите не установлена. Вирус может быть нейротропным или энтеротропным. Он раз-
множается или в ЦНС, или в ЖКТ, вызывая поражение клеток. У бальных птиц вирус к 6-
му дню после заражения накапливается в головном мозге, поджелудочной железе, двена-
дцатиперстной кишке, желудке, печени в титрах 10 1,4 - 10 3,0 ЭИД 50/мл. Его выделяли из
герминативных органов взрослой птицы, из яиц, куриного помета, а также из остатков яй-
цевых оболочек, желтка и со скорлупы вылупившихся цыплят. Вирусный АГ, определяемый
с помощью флюоресцирующих антител, распределяется в различных органах больных цып-
лят. У однодневных цыплят его обнаруживали в печени, сердце, селезенке, скелетной мус-
кулатуре и мышечных слоях ЖКТ. У 10-30 дневных цыплят большое количество антигена
обнаруживали в ЦНС и поджелудочной железе, меньше - в сердце и почках; в печени, селе-
зенке и легких его не было совсем. С увеличением возраста цыплят АГ из тканей кишечника
исчезал и постоянно обнаруживался в ЦНС и поджелудочной железе. При заражении 6-
дневных КЭ в желточный мешок частично адаптировали штаммом № 717 (AEV), АГ выяв-
ляли в белом веществе спинного мозга и в спинальных ганглиях. При использовании полно-
стью адаптированного штамма (Van Roekel) АГ уже на 10 дн появлялся в спинальных ганг-
лиях и в спинном мозге, затем в продолговатом мозге, в мозжечке и в полушариях головно-
го мозга. После 15-го дня его находили в печени, ЖКТ и в других внутренних органах КЭ.
Экспериментальная инфекция. Экспериментальная инфекция легко воспроизводится
при любом методе заражения. Установлена возрастная резистентность птицы к эксперимен-
тальному заражению. При интрацеребральном заражении цыплят суточного возраста на 4-
ый день наблюдалась непродолжительная сонливость. Падеж среди них составлял 72,2%. У
цыплят, зараженных в возрасте 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 90 и 120 дн., болезнь сопровожда-
лась сонливостью, угнетением, частым приседанием. Позднее развивались атаксия, парез и
паралич крыльев, тремор мышц головы, шеи и хвоста, а иногда конечностей. Наибольший
падеж отмечался в группах 10-, 20- и 30-дн. цыплят. Птицы, зараженные в возрасте 150,
180, 200, 240 дн., не погибали, и болезнь у них характеризовалась незначительным угнете-
нием и снижением яйцекладки. При подкожном заражении суточных цыплят уже через день
вирус обнаруживался в печени, селезенке, поджелудочной железе и мышцах ноги в месте
введения. До 14-го дня вирус находили во всех исследованных образцах, а на 21 день толь-
ко в отдельных органах. При пероральном заражении вирус был впервые выделен из селе-
зенки, а несколько позже - из поджелудочной железы. Экспериментальную инфекцию уда-
ется вызвать у индюшат, перепелят, утят, гусят, фазанят, цесарок, голубей. Симптомы бо-
лезни (двухсторонняя атаксия, слабость конечностей, дрожание головы) развиваются через
6-10 дн. после заражения. Падеж достигает 10-20%.
516
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
Культивирование. Культивируют на суточных цыплятах при заражении в мозг. Сим-
птомы экспериментальной инфекции появляются у них через 2-4 (реже 7) дня. В КЭ, зара-
женных в амнион, аллантоисную полость или в желточный мешок, наблюдается атрофия
мышц и дегенерация нейронов, часто водянка головного мозга (Рис. 77). У 5-дн КЭ, зара-
женных вирусом ИЭП, вирус находили в головном мозге на 12, 16 и 20-й день инкубации.
Шт. Ван Рекел патогенен для КЭ, полученных от кур, благополучных по болезни, вызывает
у них мышечную дистрофию. КЭ, достигая 18-дн инкубации, частично или полностью пара-
лизованы. В мозге вирус обнаруживают через 3-4 дня после инокуляции, в наивысших тит-
рах - через 6-9 дней. Гистопатологические изменения у КЭ, зараженных адаптированным к
КЭ вирусом, постоянны и специфичны, но различны по интенсивности и локализации. Ви-
рус также культивируется в монослойной культуре ФЭК, почки цыплят недельного возраста,
в клеточной культуре нейроглиальных клеток. Предложен усовершенствованный тест опре-
деления инфекционности вируса ИЭП. Для этого 7 дн. КЭ заражают разведениями вируса и
через 12 сут инкубации выявляют наличие вирусного АГ в мозге эмбрионов с помощью
ИФА (9). Разработан метод титрования вируса ИЭП в культуре клеток мозга КЭ. Для выяв-
ления АГ в инфицированных клетках используют метод непрямой ИФ (3)
Особенности внутриклеточной репродукции не изучены. Вирус синтезируется в цито-
плазме клетки.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Болезнь встречается во все времена года. Цы-
плятам болезнь передается от родителей-реконвалесцентов. Вирус накапливается в помете,
который и является источником заражения чувствительных цыплят. Наблюдения показыва-
ют, что цыплята, содержащиеся вместе со взрослой птицей, обыкновенно иммунны к началу
яйцекладки. Цыплята, выращенные изолировано от птиц других возрастных групп, часто
чувствительны к вирусу в период яйцекладку. Цыплята всех возрастных групп, не имеющих
в сыворотке крови АТ к вирусу энцефаломиелита, чувствительны к инфекции при экспери-
ментальном заражении. ИЭП относится к группе болезней, для которых специфичен верти-
кальный путь передачи инфекции. Аэрогенный способ передачи инфекции не установлен.
Спектр патогенности в естественных условиях. Энцефаломиелит описан у цыплят,
фазанов и цесарок. Млекопитающие невосприимчивы.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании результатов лабораторных исследований патологического
материала, взятого от павших цыплят и теста резистентности эмбрионов. Для выделения
вируса заражают интрацеребрально цыплят суточного возраста или КЭ суспензией головно-
го мозга или экстрактом из фекалий павших цыплят, используя метод перемежающихся
пассажей на цыплятах н КЭ. Для определения АТ к вирусу ИЭП обычно используют PH, ре-
акцию чувствительности эмбрионов и РДП. Первые два серологических теста довольно про-
должительны, требуется иногда 10-12 дн и большое количество эмбрионов, свободных от
патогенной микрофлоры. РДП относительно дешева и быстро дает результаты, но недоста-
точно чувствительна. Предложен модифицированный ИФА, отличающийся от известного
тем, что включает негативный АГ, изменяющий степень адгезии сыворотки цыплят на по-
верхность пластиковых плашек. Методика хорошо воспроизводится и результаты определе-
ния уровня АТ в модифицированной реакции коррелирует с результатами их определения в
PH. Данная реакция может быть использована для мониторинга распространения вируса в
стадах птиц (10,11)
Кроме выделения вируса, латентную инфекцию в племенных стадах можно выявить с
помощью теста чувствительности куриных эмбрионов к вирусу и PH. Чувствительность обу-
словлена специфическими пассивными АТ. Для этого 5-6 дн КЭ заражают в ЖМ адаптиро-
ванным к ним штаммом вируса ИЭП и вскрывают на 17-й день инкубации, учитывая их
517
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
подвижность и степень атрофии мышц. Яйца от иммунных несушек при заражении вирусом,
как правило, не имеют патологически измененных эмбрионов. Несушки, имеющие слабый
иммунитет, несут как иммунные, так и не иммунные яйца. На основании процентного соот-
ношения измененных и неизмененных яиц можно судить об иммунитете стада в целом. Для
диагностики болезни у цыплят можно применять прямой метод ИФА. Наиболее пригодны
для выявления вирусного АГ с помощью ИФ поджелудочная железа, желудок и клетки Пур-
кинье. Флюоресцирующие АТ выявляют АГ так же, как и в культуре инфицированных фиб-
робластов. С помощью непрямой ИФ можно выявить специфические АТ в экстрактах желт-
ка. Метод высокоспецифичен, может заменить PH и реакцию чувствительности эмбрионов.
Разработана методика приготовления вируса ИЭП из ЖКТ инфицированных КЭ. РПГА
оказалась чувствительнее РДП (2). В Австралии предложен ИФА для обнаружения АГ в го-
ловном мозге зараженных КЭ. Использование мозгового АГ для ИФА имеет то преимуще-
ство, что он не требует приготовления культуры клеток и размножения в ней вируса (9). АГ
для ИФА можно приготовить путем осаждения его ПЭГ из гомогената инфицированных ви-
русом КЭ, освобожденных от клеточного детрита центрифугированием при 2000 g. Субстра-
том при постановке ИФА является ортофенилдиамин.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У переболевших птиц выявляются ВНА. Их обнаруживают и в желтке яиц, полученных
от иммунных кур, что обусловливает резистентность эмбрионов. Цыплята от иммунных кур
с пассивным иммунитетом малочувствительны к оральному заражению вирусом энцефало-
миелита до 8-10-нед. возраста. Цыплята с положительным индексом нейтрализации в сыво-
ротке крови способны противостоять интрацеребральному заражению 104 ЭИД50 вируса эн-
цефаломиелита. Птицы, переболевшие ИЭП, повторно не заболевают. Перспективна систе-
матическая вакцинация до яйцекладки. Она предохраняет от вспышек болезни и от переда-
чи вируса потомству через яйца. Цыплят иммунизируют (метод выпаивания) живыми вак-
цинами. Защита цыплят материнскими АТ наблюдается в течение 8-9 нед после прививки
кур-несушек живой вакциной “Dessau” и сохраняется не менее 6 нед жизни цыпленка.
Так как цыплята, полученные из яиц от вакцинированных или естественно инфициро-
ванных птиц, сохраняют пассивные АТ примерно 8 нед, их целесообразно вакцинировать не
раньше 10-и нед возраста. Существующая вакцина из аттенуированного штамма применяет-
ся перорально или уколом в крыло (10).
Применяют живую вакцину Калнека из шт. 1143, который выделен из мозга естествен-
но больных цыплят. Указанный штамм размножают в КЭ 4-дн возраста (при заражении в
желток). Вакцинация молодняка в возрасте от 8 нед до начала яйцекладки безвредна. У не-
сушек между 8 и 20 дн. после вакцинации возможно временное снижение яйценоскости.
Кроме живых вакцин за рубежом используют инактивированную 0-пропиолакгоновую вак-
цину. Её применяют в зонах, где ИЭП еще не носит энзоотического характера. Показателем
поствакцинального иммунитета является уровень ВНА до вакцинации и через 10, 20 и 30
нед после неё, устойчивость КЭ к заражению вирусом и напряженность пассивно передан-
ного через яйцо иммунитета у однодневных цыплят. Установлено, что в период яйцекладки
уровень АТ у кур-несушек значительно возрастает, вероятно, в результате бессимптомной
инфекции вирусом ИЭП.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Части, вет. вирусология, Колос, 1979. Z.Ahmed А.А. et.al.
Avian Pathol, 1982, 11, 2 :253. 3.Berger R.G. Avian Diseases, 1982, 26, 3 :534. 4.Decaesstecker
M. et.al. Avian Pathol.,1991, 20, 3 :523. S.Decaesstecker M. et.al. Avian Pathol.,1989,18, 4
:715. 6.Kancicki A.Zesznank AR Wroclavin Wet, 1992, 52 :61. 7.Marita M. etal. Avian Pathol.,
1990, 19, 3 :497. 8.Muller H. Arch. Exp. Veterinarmed., 1980, 34, 1 :127. 9.Shafren D.R. et.al.
518
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
Vaccine, 1990, 8, 3 :283. lO.Shafren D.R. et.al. Res in Vet Sci., 1989, 46, 1 :95. ll.Shafren D.R
et.al. Austr Vet J, 1986, 66, 7 :224.
ГЕПАТИТ УТЯТ
Duck viral hepatitis (англ.), Virushepatitis der Ente (нем.),
Ganeton I hepatite virale (франц.)
Вирусный гепатит утят - контагиозная, сравнительно малоизученная болезнь, поражаю-
щая утят, в основном до 4-нед возраста. Она протекает остро и хронически с преимущест-
венным поражением печени. В некоторых хозяйствах погибает до 95 % утят (1, 2). В на-
стоящее время вирусный гепатит утят регистрируют в США, Англии, ОАР, ГДР, ФРГ, Ита-
лии, Бельгии, Голландии и в бывшем СССР. Большинство вспышек в различных странах
обусловлено вирусом типа I (8).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Острое течение бо-
лезни характеризуется бурным проявлением и высокой смертностью утят в возрасте от трех
дней до трех недель. Утята могут погибать в течение 1 ч после появления симптомов. Кли-
нически болезнь проявляется вялостью, отказом от корма, нервными явлениями. Утята па-
дают на бок или на спину и с явлениями судорог погибают в характерной позе
“запрокинутой головы” (Рис. 79). Сезонности в проявлении болезни не наблюдается. Однако
при переводе цыплят из теплых помещений в холодные и влажные число заболевших и
павших быстро возрастает. При вскрытии павших обнаруживают геморрагии, некроз пече-
ни и отек. Печень обычно увеличена, дряблой консистенции; паренхима легко рвется, гли-
нистого или желтовато-охряного цвета с множеством кровоизлияний на поверхности (Рис.
148). Желчный пузырь переполнен желчью, селезенка иногда увеличена. При гистологиче-
ских исследованиях наблюдают некроз печени, пролиферацию желчных протоков с клеточ-
ной инфильтрацией, гиперемию сосудов и межбалочных капилляров. Печеночные клетки
сдавлены, протоплазма их сильно вакуолизирована. Ядро в состоянии пикноза и кариорек-
сиса. В центральной нервной системе можно наблюдать периваскулярное скопление лейко-
цитов. При электронной микроскопии клеток печени от зараженных утят установлено, что
через 1 ч в единичных клетках печени появляется гликоген, а к 24 ч - дегенеративные изме-
нения. Вирусные частицы обнаруживали через 1 ч, а также через 18 и 24 ч после заражения.
Тяжесть течения болезни зависит не только от возраста утят, но и от патогенности вируса и
состояния клеток печени в момент заражения.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус открыт в 1949 г. Левиным и Фабрикантом.
Морфология и химический состав. Вирус сферической формы (Рис. 78). Диаметр ви-
рионов 20-40 нм. Они проходят через фильтры Зейтца ЕК и Беркельфельда.
Устойчивость. Вирус устойчив к эфиру, трипсину, pH 3,0. При комнатной температуре
сохраняется жизнеспособным в течение четырех дней, при температуре 2-4 °C - в течение
700 дн; выдерживает нагревание при 56°С в течение 60 мин, но сравнительно быстро (за 30
мин) инактивируется при температуре 62°С и воздействии 0,2% раствора формалина при
37° С (за 8 ч). В культуральной бесклеточной среде при 37° С сохраняется 21 день.
Антигенная активность. У переболевших и экспериментально зараженных утят и уток
образуются КСА, ВНА и ПА, которые передаются через яйцо потомству. У двукратно при-
витых вирус-вакциной уток титр ВНА уже через 2 нед достигает 1:64 - 1:256 и сохраняется
до семи месяцев от начала заболевания. Желточный иммунитет практически достаточен для
защиты потомства от болезни в естественных условиях. Выявлена гомология поверхностных
АГ вируса гепатита уток и вируса гепатита В человека с помощью ИФА (5). Во Вьетнаме
519
Глава ХШ. Family Hcomavirida Пикорнавирусные инфекции
выделен вирулентный штамм ТВ 84 по мере пассирования на чувствительных утятах виру-
лентность его и венгерского штамма возрастала (8а).
Антигенная структура не изучена.
Антигенная вариабельность и родство. Вероятно, в антигенном отношении полевые
штаммы вируса гепатита родственны. Сыворотки переболевших уток нейтрализовали в
одинаковой степени штаммы вируса, выделенные в Канаде в штате Нью-Йорк (США), Од-
нако в 1965 г. Эсплин и Тош изолировали в США второй серотип вируса гепатита утят. Вы-
явлена гомология перекрестных АГ вируса гепатита уток (DHV) и вируса гепатита В (HBV)
человека с помощью ELISA (5).
Г А и Г Ад свойствами вирус не обладает.
Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство. Вирус содержится во всех ор-
ганах и тканях больного утенка. В наиболее высоком титре его обнаруживают в печени, се-
лезенке и головном мозге. Вирусоносительство установлено в течение 8-10 нед.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится только у молодняка утят до 10-12 дн
возраста. Взрослая птица переболевает бессимптомно. Удавалось заразить цесарят, гусят,
фазанят, перепелят и индюшат.
Культивирование. Проводят на КЭ 7-9 дн возраста и на 12-13 дн утиных эмбрионах
при заражении в аллантоисную полость. Погибают эмбрионы на 3-6 день. У них обнаружи-
вают отек, гиперемию и кровоизлияния на теле и голове. Печень набухшая, желто-зеленого
и темно-зеленого цвета, с очагами некроза в виде точек или тонких переплетающихся тя-
жей. Иногда печень и аллантоисная жидкость зеленого цвета. При многократном (более 10)
пассировании вируса на КЭ патогенность его для утят утрачивается. В максимальном коли-
честве вирус концентрируется в печени эмбрионов. Вирус удается репродуцировать также в
культуре клеток ФКЭ с коллагеназой. Измельченную ткань 8-и дн КЭ обрабатывают трип-
сином и коллагеназой. Из полученной взвеси готовят однослойную культуру клеток, выра-
щенную на среде 199 с сывороткой крови телят. Через 3-7 дн вирус вызывает образование
симпластов и вакуолизацию пораженных клеток, зернистость и отставание клеток от стекла.
Разработан метод титрования инфекционное™ вируса гепатита уток в первичной культуре
клеток почки эмбрионов уток (9). Особенности внутриклеточной репродукции не изучены,
известно лишь, что вирус синтезируется в протоплазме клетки.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Основным резервуаром инфекции служит
больная птица и вирусоносители. Во внешнюю среду вирус выделяется с калом и носовыми
выделениями, инфицируя корм, воду, подстилку, инвентарь и воздух помещения. Возможна
передача вируса с инфицированными яйцами и дикими утками. Вирус может поступать в
кишечник червей-навозников, в организме которых он сохраняется до 18 дн. В тканях червя
вирус не репродуцируется.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях болеют
утята до 4-нед возраста. Описаны случаи заражения гусят вирусом гепатита утят.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патоло-
гоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Вирус легко изоли-
ровать из тканей утят в течение первых 5-7 дн после инфицирования. Суспензию печени и
головного мозга павших утят вводят внутримышечно и интраназально здоровым утятам 1-3
дн возраста, которые при наличии вируса в исследуемом материале заболевают через 1-8
дн. Кроме утят, для этого можно заражать 9-10 дн КЭ и 14-15 дн утиные эмбрионы. Обычно
проводят несколько слепых пассажей. Утиные эмбрионы особенно чувствительны и обычно
погибают в течение 24 ч. Идентификацию вируса проводят с помощью PH на 8-9 дн с сы-
вороткой уток-реконвалесцентов. Вспомогательным методом диагностики является обнару-
520
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
жение телец-включений в клетках печени, в макрофагальных клетках эндотелия, эндотели-
альных клетках селезенки, а также выявление АГ в тканях больных утят ИФ. С помощью
данного метода удается обнаружить вирус гепатита в цитоплазме клеток через 3 ч после за-
ражения эмбрионов. Наилучшим объектом исследований является инфицированная культу-
ра клеток. Для постановки РДП используют вируссодержащую суспензию печени, мозга
утят или эмбрионов. Предварительный результат реакции можно учитывать через 18 ч. В
качестве позитивных сывороток используют сыворотки уток-реконвалесцентов или гипе-
риммунные сыворотки крови кроликов.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Утята старше четырех недель устойчивы к заражению вирусом гепатита. У переболев-
ших утят появляются ВНА, и они становятся устойчивыми к реинфекции. У 4-5 нед утят
обнаруживается возрастная невосприимчивость. Для профилактики применяют живые и
инактивированные вакцины, иммунизируют племенных уток или 1-3 дн утят. Передаваемые
трансовариально АТ защищают утят в течение трех недель жизни. Утят с первых дней жиз-
ни прививают живыми вакцинами, а племенных уток - живыми и инактивированными.
Аттенуированные штаммы вируса получают путем серийного пассирования вирулент-
ных штаммов (КЭ) или эмбрионах утиных (УЭ). Обычно выраженная аттенуация наступа-
ет через 50-80 пассажей. Вирус, в основном, накапливается в теле и ХАО эмбриона. Вак-
цинный шт. Р-50 выделяли из печени селезенки й фекалий утят в течение 8-9 дн после при-
вивки. Аттенуированные штаммы могут передаваться горизонтально (3). ИмД100 соответст-
вует примерно 1000-10000 ЭИД50 (3). В практических условиях не отмечено разницы в эф-
фективности иммунизации утят при подкожном введении вакцины и выпаивании с питье-
вой водой (4). Аттенуированные штаммы О50 и Н55 при подкожном введении в дозе 200
ЭЛД5о двухдневным утятам вызывали выраженную устойчивость к заражению вирулент-
ным штаммом через 24 ч. Однако такие штаммы восстанавливали вирулентность после 2-4
пассажей на утятах (6). Более выраженная аттенуация вируса оказалась возможной после 85
пассажей на УЭ, однако при этом ослаблялась иммуногенность. Такая вакцина, введенная
2-дн утятам в аналогичной дозировке защищала их от заражения только спустя 96 ч (9). У
утят, привитых в возрасте 2-3 дн живой вакциной, образовывались ВНА в высоком титре,
которые удерживались до 30 нед. При ревакцинации уток в возрасте 22 нед инактивирован-
ной вакциной иммунный ответ усиливался, а полученные от них утята были иммунными в
течение трех недель жизни (7). В неблагополучных хозяйствах племенным уткам живую
вакцину первый раз вводят в возрасте 3 мес, во второй раз - за 4-2 нед до яйцекладки, а
спустя 8 нед можно сделать третью прививку.
Инактивированную эмульгированную вакцину готовят из вируса, размноженного на УЭ
и КЭ. Иммунный ответ оценивают по титру ВНА у взрослых уток и иммунитету, передан-
ному трансовариально утятам. Вирус, размноженный в УЭ и инактивированный БПЛ ока-
зался более иммуногенным, чем инактивированный из КЭ. Удовлетворительный иммунный
ответ наблюдался при трехкратной вакцинации уток в возрасте 8,16 и 22 нед. Уровень АТ у
племенных уток был достаточным для защиты потомства в течение первых 3 нед жизни
утенка. Однократная вакцинация уток в 16-нед возрасте инактивированной или живой вак-
цинами не обеспечивала надежной защиты потомства. Взрослые утки клинически не боле-
ют. У вакцинированных живой вирус-вакциной утят ВНА сохраняются до 9 мес и более.
Поэтому, помимо вакцин, в качестве профилактического средства гепатита утят рекоменду-
ют использовать сыворотку реконвалесцентов и гипериммунную сыворотку. Применяют
вакцину УНИиП из шт. ЗМ. Прививают утят и уток-несушек, после 2-3 - кратной прививки
утки-несушки передают утятам иммунитет через яйцо. Вакцина эффективна. Препарат при-
годен для вакцинации утят в суточном возрасте и взрослых уток.
521
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
1.Сюрин В.Н. и др. Частная вет. вирусология М., 1979,Колос. 380. 2. Сюрин В.Н. и др. Ла-
бор. диагн. вир. бол. жив. М, 1991, Агропромиздат. 3.BallaL et.al. Mogy ollotow lapja 1984,
39, 7 :395. 4.Balla L. et.al. Mogy ollotow lapja 1984, 39 :401. 5.Dai Duy Ban et.al. J Allergy
and Clin Immun 1992, 89, 1 :409. 6,Davis D. Rs in Veter Sc 1987, 43 :44. 7.Gough R E. et.al.
Avian Pathol., 1981,10 :471. 8.Gough R.E. et.al. Avian Pathol., 1985, 4 :227. 8a.Le Tanh Hoa
Agr.and Food Ind., 1992, 8 :312. 9.Woolcock P R. et.al. Avian Pathol, 1982, 11, 4 :607.
ЭНЦЕФАЛОМИОКАРДИТ
Encerhalomyocarditis of swine (англ.),
Enzephalomyokarditisvirus-Infektion ( нем.)
Энцефаломиокардит (болезнь Колумбия SK-Col-SK, энцефалит Менго, параполиомие-
лит, полиэнцефалит грызунов) - хроническая болезнь грызунов и свиней, характеризующая-
ся миокардитом и энцефаломиелитом. Болеют также норки и хорьки. Относится к числу
медленных инфекций, для которых характерны длительный инкубационный и бессимптом-
ный периоды, медленное развитие симптомов и морфологических изменений и возможность
латентного течения. ЭМК - контагиозная вирусная болезнь, проявляющаяся энцефалитом и
миокардитом у поросят и нарушением репродуктивной функции у свиноматок. Болезнь чаще
поражает поросят 1-4 мес возраста, причём летальность достигает 50-80%. У свиноматок
наблюдаются гибель и мумификация плодов, аборты, рождение мёртвых и слабых поросят.
Большинство слабых поросят погибают в течение первых 2-3 нед после рождения. У взрос-
лых небеременных свиней заболевание чаще протекает в субклинической форме.
Впервые эта болезнь, сопровождающаяся поражением сердца и летальным исходом,
была зарегистрирована в Панаме в 1958 году. В настоящее время ЭМК свиней выявлен в
США, Великобритании, Италии, Греции, Швейцарии, Канаде, Австралии, Южной Африке,
Новой Зеландии и на Кубе. В последние годы новые вспышки ЭМК зарегистрированы в Ав-
стралии и на Кубе (19, 23). Заболевание причиняет значительный экономический ущерб, ко-
торый связан с высокой летальностью поросят, снижением количеством опоросившихся
свиноматок до 50-60%, и расходами на проведение ветенарно-санитарных мероприятий.
Вирус ЭМК является причиной фатального заболевания с развитием энцефалита и миокар-
дита у свиней. При обследовании проб сыворотки крови на 65 фермах Японии 84,6% оказа-
лись положительными на вирус ЭМК (1-6).
Клинические признаки и анатомические изменения. В естественных условиях ЭМК
у 3-16-недельных поросят часто протекает без развития клинических признаков: животных
обычно обнаруживают мёртвыми. Иногда перед гибелью у них отмечают депрессию, Циа-
ноз, одышку, потерю аппетита, мышечную дрожь и шаткость при движении (Рис. 149, 150).
Вспышка заболевания обычно продолжается 2-3 мес. При эксперементальном заражении
поросят инкубационный период 2-4 дн. У заболевших животных температура тела поднима-
ется до 41° С и удерживается не более 24 ч. Гибель поросят часто происходит внезапно при
кормлении на 2-5 сут после заражения. Взрослые животные погибают редко. У свиноматок
при заболевании наблюдаются аборты на поздней стадии супоросности, увеличение мёргво-
рождённости поросят до 35-45% и высокая летальность (30-50%) слабых новорождённых
поросят в первые 3 нед жизни (7,9,10,11,14,15,22).
При вскрытии у большинства павших поросят обнаруживаются очаги дегенерации мио-
карда (Рис. 151) в виде серовато-белых участков диаметром 2-10 мм или обширных зон. В
перикардиальной, грудной и брюшной полостях отмечены скопления светло-коричневой или
желтоватой жидкости. У животных, перенёсших острую стадию болезни, выявленные ост-
522
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
рые округлые или звёздчатые фиброзные рубцы диаметром 0,5-1,5 см и небольшие кальци-
фицированные очаги. Описаны гистологические изменения в виде локального или диффуз-
ного миокардита с сильной инфильтрацией гистиоцитами, лимфоцитами и плазматическими
клетками, а также дегенерации и некроза клеток миокарда. Иногда у поросят наблюдают не-
гнойный менингоэнцефалит многоочаговую интерстициальную пневмонию.
При ЭМ исследованиях установлены отёк ядра и митохондрий, дезорганизация мио-
фибрилл, наличие кристаллоподобных вирусных структур между митохондриями. Отдель-
ные вирусные частицы и их скопления обнаружены также в цитоплазме клеток эндотелия
капилляров. У инфицированных плодов отмечены отёк подкожных тканей, скопление се-
розно-кровянистой жидкости в полостях, гранулярная дегенерация миокарда с инфильтра-
цией мононуклеарными лейкоцитами.
Патогенез. Эксперементально болезнь у поросят может быть вызвана внутримышеч-
ным, пероральным или интраназальным введением патогенного штамма вируса. Виремию
обнаруживали через 34-48 ч после заражения; пик её отмечали спустя 24 ч, а затем титр ви-
руса в крови быстро снижался. Вирус размножается в различных органах и тканях инфици-
рованных поросят, однако преимущественно поражаются клетки сердца. Гибель поросят 6-
8-нед возраста происходит в основном на 2-6 сут после заражения, и вирус обнаруживают
во многих органах в различных титрах: сердце - до 1О7’5, селезёнка, печень, лёгкие, почки и
поджелудочная железа - до 104’8 - 105’5, головной мозг - до 104 ТЦД50 на 1 г ткани. В крови
содержание вируса обычно в 10-100 раз ниже, чем в сердце. Из мочи вирус практически не
выделяется, фекалии содержат вирус в небольшом количестве (до 103’5 ТЦД50/г). Вирус, как
правило, не удаётся выделить у поросят через 7 сут после заражения. Вероятно, это связано
с тем, что в тканевой жидкости поросят уже имеются специфические АТ, которые при при-
готовлении суспензии нейтрализуют вирус и препятствуют его выявлению; ВНА обнаруже-
ны через 5 сут после введения вируса. Патогенетическими факторами, обусловливающими
развитие болезни, служат массовое разрушение клеток сердца в результате размножения
вируса и выделение при этом токсичных веществ. Не исключается также возможность лизи-
са инфицированных мышечных волокон сердца цитотоксическими Т-лимфоцитами. Если
животное выживает, то разрушенные мышечные волокна заменяются фиброзной тканью.
У инфицированных свиноматок вирус проходит через плаценту и поражает эмбрионы,
которые после гибели резорбируются, а плоды мумифицируются. Для трансплацентарной
передачи вируса, вероятно, необходима вирусемия у свиноматок. Можно предположить, что
эмбрионы и плоды погибают в результате размножения вируса во многих органах и тканях
и в эндотелии кровеносных сосудов. В результате нарушается развитие сосудистой сети у
плода и это приводит к отёку, геморрагиям и накоплениям серозно-кровянистой жидкости в
полостях тела плода. В большинстве случаев не все плоды поражаются вирусом одновре-
менно, поэтому при опоросе обнаруживают мумифицированные плоды различной величи-
ны, мёртвых, слабых и нормально развитых поросят. Внутриматочное распространение ви-
руса от одного плода к другому происходит медленно, в связи с этим они гибнут в различ-
ные сроки развития.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Возбудитель заболевания - РНК-содержащий вирус, который входит в состав рода
Cardiovirus (от греч. kardia - сердце), семейства Picornaviridae. К кардиовирусам относятся
следующие вирусы: ЭМК , Колумбия SK, Менго, ME (Maus-Elberfeld) и ММ. Все кардиови-
русы идентичны в PH и рассматриваются как штаммы вируса ЭМК.
Морфология и химический состав. Вирионы кардиовирусов представляют собой без-
оболочечные частицы кубической симметрии диаметром 24-30 им. Капсид состоит из 60
структурных единиц. Липидов и углеводов в составе вирионов не обнаружено. Кардиовиру-
сы содержат единую односпиральную плюс-РНК с мол.м. 2,5 МД, которая составляет 31%
массы вириона. РНК обладает инфекционностью, то есть вызывает образование вируса по-
523
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
еле проникновения в клетку. Мол.м. вирионов кардиовирусов составляет 8,3 МД, плавучая
плотность в хлористом цезии 1,33-1,34 г/см3, коэффициент седиментации 156 S.
Белки кардиовирусов составляют 69% массы вириона. В зрелом вирионе содержится че-
тыре главных полипептида, которые обозначают как VP1, VP2, VP3 и VP4 в порядке
уменьшения молекулярной массы (33, 31, 26, 7 кД). Суммарная молекулярная масса струк-
турных полипептидов составляет 97 кД; на их кодирование приходится около 35% инфор-
мации, содержащейся в геноме вируса. В каждый вирион входит по 60 молекул каждого по-
липептида и одна-две молекулы полипептида VP0 - предшественника полипептидов VP2 и
VP4. Кроме того, в состав вирионов входит белок (ЮкД), который ковалентно связан с 5 -
концом геномной РНК. Этот полипептид обозначают как VPg (virion protein genome). Он
состоит из 20 аминокислот и играет важную роль в репликации вирусной РНК.
Геномная РНК кардиовирусов содержит 26% аденина, 25% урацила, 24% гуанина и 25%
цитозина. У всех изученных кардиовирусов на 3'-конце геномной РНК имеется поли (А)-
последовательность длиной в среднем 35 нуклеотидов, а 5'-конец РНК блокирован кова-
лентно связанным белком VPg. Примерно на расстоянии 150 нуклеотидов от 5'-конца ге-
номной РНК расположен участок полицитидиловой кислоты (поли (Ц) последовательность)
длиной 130-140 нуклеотидов.
В последнее время определена полная нуклеотидная последовательность генома недиа-
бетогенного (В) и диабетогенного (Д) вариантов вируса ЭМК. Варианты В и Д селекциони-
рованы из штамма М-вируса ЭМК по их способности индуцировать диабет у мышей. Уста-
новлено, что геномы вариантов В и Д состоят собственно из 7825 и 7829 нуклеотидов. Оба
генома имеют длинную открытую рамку считывания из 6876 нуклеотидов, которая начина-
ется с 830 нуклеотида и заканчивается 7705 нуклеотидом. Считываемая часть генома коди-
рует полипротеин из 2292 аминокислот. Геном варианта В отличается от генома варианта Д
двумя делениями (три и два нуклеоида) и одной вставкой (один нуклеоид) в некодирующей
области и восемью мутациями в белоккодирующей области. Пять мутаций локализованы в
участке геноме кодирующем белок VP1. Полагают, что диабетогенность вариантов вируса
энцефаломиокардита связана с наличием в полипротеине аминокислот фенилаланина и ала-
нина в 16-м и 776-м положении соответственно. Вероятно основную роль играет аланин
776, входящий в состав белка и участвующий в формировании активных участков
(рецепторов) поверхности вирионов, взаимодействующих с инсулин-продуцирующими ост-
ровковыми клетками поджелудочной железы. Геномная РНК кардиовирусов транслируется
непрерывно с образованием гигантского полипептида, который подвергается последова-
тельному расщеплению клеточными и вирусспецифическми протеазами с образованием ви-
русных полипептидов. В результате первичного протеолитического расщепления полипро-
теина образуются полипептиды L (лидерный), Pl, Р2 и РЗ (предшественники белков). Поли-
пептид Р1 является предшественником четырёх капсидных белков: VP4, VP2, VP3, VP1.
Полипептид РЗ расщепляется с образованием протеазы, необходимой для расщепления ви-
русных белков, полимеразы и VPg. Продукты расщепления полипептида Р2 - неструктурные
белки, функции которых пока не выяснены.
Устойчивость. Кардиовирусы устойчивы к действию различных физико-химических
факторов. Они сохраняют инфекционность при pH 3-10, однако инактивируются при pH 5-6
в присутствии ионов хлора и брома. Устойчивы к хлороформу, эфиру, фреону и прогрева-
нию. Нечувствительны к действию трипсина в конечной концентрации 0,5%. Эффективны-
ми дезинфектантами для кардиовирусов являются 0,5%-ный раствор фенола, 2%-ный рас-
твор формалина, 2%-ный раствор едкого натра, 5%-ный раствор хлорамина.
Антигенная вариабельность и родство. В PH, РТГА, ИФ и ИЭМ установлено близкое
антигенное родство между всеми изученными штаммами.
Антигенная активность. Вирус ЭМК обладает выраженной антигенной активностью и
индуцирует у лабораторных животных и свиней образование ВНА, ПА и анти-ГА
524
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
Гемагглютинирующие свойства. Вирус хорошо агглютинирует эритроциты морской
свинки, крысы и лошади (1:512-1:1024), плохо агглютинируют эритроциты барана и собаки
(1:16-1:64) и не агглютинирует эритроциты мыши, цыплёнка, кошки, свиньи и КРС. Неко-
торые штаммы вируса проявляют ГА-активность в различных буферных растворах
(физиологический раствор, боратный буфер, вероналовый буфер), так как другие - только в
KCl-боратном буфере. Полагают, что в присутствии калия и бора усиливается прикрепление
вируса к эритроцитам. Так nrr.MN-25 и NVSL-MOV агглютинировали эритроциты морских
свиной, однако hit.MN-30, NVSL-RP и VR-129 агглютинировали в буфере борат-KCl (титр
ГА 1:512-1:2048) с эритроцитами морских свинок, крыс и лошадей (13).
Культивирование. Вирус ЭМК свиней хорошо размножается в перевиваемых культу-
рах клеток почек поросят (Ps), ВНК-21, африканской зелёной мартышки (Vero), фибробла-
стов мышей (h), карциномы шейки матки человека (Hela) и накапливается в титре 107°-108’5
ТЦДзо/мл. (2). Размножение вируса в перевиваемых культурах клеток сопровождается раз-
витием ЦПЭ, который характеризуется округлением и пикнозом клеток и отделением их от
стекла. Исследование ультратонких срезов показало, что в цитоплазме инфицированных
клеток содержатся вирусные частицы, которые образуют кристаллоподобные структуры.
Экспериментальная инфекция. В экспериментальных условиях к вирусу ЭМК свиней
чувствительны лабораторные животные и свиньи. Патогенность различных штаммов вируса
ЭМК зависит от природы штамма, количества проведённых пассажей в культуре клеток,
метода и дозы заражения. Выяснение роли вируса ЭМК в нарушении воспроизводства сви-
номаток, инфицированных в первой половине супоросости показало, что проникновения ви-
руса ЭМК через плаценту и гибели плодов не наблюдалось. (2).
Патогенные свойства нескольких культуральных штаммов вируса ЭМК были изучены
американскими исследователями при внутримышечном заражении плодов. Шт. АТСС и
NVSL вводили в аллантоисную полость четырёх плодов 72-сут возраста двух свиноматок в
дозе 106,2 ТЦДзо- Через 26 сут свиноматок убивали и исследовали сыворотку крови от инфи-
цированных и контрольных плодов на наличие АТ к вирусу ЭМК свиней в PH и РТГА. У
плодов не обнаружили каких-либо патологических изменений, однако в сыворотке крови
были выявлены ВНА и анти-ГА в титрах 1:128-1:512 и 1:256-1024 соответственно. В сыво-
ротке крови незаражённых плодов специфические АТ отсутствовали.
В последнее время в США проведены исследования по сравнительной оценке патоген-
ности пяти культуральных штаммов вируса ЭМК: ATCC-VR 129 (изолирован из тканей
обезьяны), NVSL-MDV (источник выделения неизвестен), NVSL-PR, MN-25 и MN-30 (все
выделены из тканей абортированных плодов). Все штаммы культивировали в перевиваемой
культуре клеток ВНК-21. Штаммы вируса ЭМК вводили в амниотическую полость 49 пло-
дов восьми свиноматок в дозе 105’4 и 10 '2 ТЦД50 на 39-40-е (период иммунологической ак-
тивности) и 70-72-е сут (период иммунокомпетентнсти) их развития. Контролем служили
неинфицированные плоды. Свиноматок убивали на 11-26-е сут после заражения и проводи-
ли серологические, вирусологические и патологоанатомические исследования.
Из 22 инфицированных плодов трёх свиноматок на 39-40-е сут супоросности 16 были
мумифицированы, у двух отмечены геморрагии и четыре были нормальными. Вирус ЭМК
был выделен из тканей сердца и мозга 18 и 28 исследованных инфицированных плодов.
ВНА в титре 1:16-1:1024 выявлены у всех 14 плодов, инфицированных на 70-72-е сут их
развития и исследованных через 11-26 сут после заражения. Все контрольные плоды не со-
держали в сыворотке крови специфических АТ.
Патогенность штаммов вируса ЭМК оказалась различной и зависела от штамма и воз-
раста плода во время инфицирования. Шт. ATCC-VR129 не вызывал гибели плодов. Шт.
NVSL-PR, MN-25 и MN-30 были высокопатогенными для плодов как в период их иммуно-
логической ареактивности, так и в период иммунокомпетентности. Шт. NSVL-MDV оказал-
525
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
ся патогенным для плодов только в период иммунологической ареактивности. Иммуноком-
петентность у плодов формировалась примерно на 70-е сут их развития (7, 8,12,16).
.Патогенность штамма 9301 Н вируса ЭМК, выделенного от поросят в Новой Зеландии,
выявляли на четырёх поросятах пятинедельного возраста, не содержащих специфических
антител. Вирус (третий пассаж в перевиваемой культуре клеток PS) вводили внутримышеч-
но в дозе Ю6,2 ТЦДзо- Два поросёнка внезапно погибли на шестые-седьмые сутки после за-
ражения. В сыворотке крови поросят, убитых на 20-е сутки после инфицирования, обнару-
жены анти-ГА в высоком титре (1:8192). У всех инфицированных поросят в мышце сердца
наблюдались характерные изменения (12,13,17,18, 20,21, 24, 25, 26).
Различные штаммы вируса ЭМК, изолированные из тканей плодов и поросят, патоген-
ны для мышей при интрацеребральном, интраназальном и внутрибрюшном способах зара-
жения. В зависимости от штамма вируса и дозы инфицирования гибель мышей может дос-
тигать 100% в первые 2-3-е сут после заражения. Чаще мыши погибали на 4-7-е сутки вне-
запно или после развития клинических признаков : взъерошенность шерсти, короткие под-
прыгивающие движения, судороги и параличи задних конечностей. Хомячки и морские
свинки оказались менее чувствительными к вирусу ЭМК, чем белые мыши. Эксперимен-
тальная инфекция успешно воспроизводится на морских свинках при интраназальном (105
ТЦД50) и внутрибрюшинном методе (10х ТЦД50)заражения У зараженных животных через
3-5 дн наблюдалось снижение аппетита, взъерошенность шерстного покрова, парез задних
конечностей. Патоморфологически инфекция проявлялась негнойным менингоэнцефалитом,
дистрофией почек, гемодинамическими расстройствами в печени, легких и др. органах, оча-
говыми некрозами.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Спектр патогенности в естественных условиях. Изучен недостаточно, в США от
ЭМК погибли четыре африканских слона в двух зоопарках. Ингрцеребральное и внутри-
брюшное введение 10%-ной суспензии тканей погибших слонов новорождённым мышам
привело их к гибели через 54 ч после заражения, причём наблюдалось развитие энцефалита
и паралича задних конечностей. Кардиовирусы выделены от человека, обезьян, свиней, сло-
нов, енотов, крыс, мангустов, белок, хомяков и мышей.
Источники и пути передачи инфекции. Вирус ЭМК широко распространён в свино-
водческих хозяйствах ряда стран и в зависимости от патогенности циркулирующего штамма
отмечены вспышки заболевания с различным исходом. В Австралии заболеваемость поро-
сят 2-16-недельного возраста в различных хозяйствах составляет от 2 до 50%, а летальность
достигает 50-100%. В некоторых хозяйствах погибают 5-6 мес подсвинки.
Бессимптомное течение болезни отмечено в Великобритании и Канаде. В крови обсле-
дованных свиней выявлены ВНА соответственно в 28 и 10% случаев. Вероятно, в свиновод-
ческих хозяйствах этих стран циркулируют авирулентные штаммы вируса ЭМК свиней. В
последнее время в Канаде отмечена вспышка ЭМК у поросят-сцсунов 2-3 нед возраста.
Австралийскими и американскими исследователями установлено, что в естественных
условиях вирус ЭМК свиней вызывает нарушение репродуктивной функции свиноматок. В
репродуктивных хозяйствах заболевание сопровождается увеличением числа мумифициро-
ванных плодов и мёртворождённых поросят, рождением слабых поросят и гибелью их в те-
чение первых 2-3 нед после рождения. Вирус был изолирован из тканей нормальных и му-
мифицированных плодов и тканей мёртворождённых поросят. АТ к вирусу ЭМК обнаруже-
ны в сыворотке крови плодов и новорождённых поросят до приёма молозива.
В ряде свиноводческих хозяйств установлена взаимосвязь между увеличением числа
грызунов и вспышкой заболевания. Поросята заражаются, вероятно, при поедании трупов
грызунов, которые являются источником вируса, и контаминированных вирусом комаров.
Для возникновения заболевания и гибели поросят доза вируса должна составлять не менее
526
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
106 ТЦДзо. Возможность передачи вируса от заражённого поросёнка здоровому окончатель-
но не выяснена, однако такой путь инфицирования исключить нельзя.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, па-
тологоанатомических изменений и лабораторных исследований. По эпизоотологическим
данным, диагностическое значение имеет заболеваемость 3-16-нед поросят. Характерным
клиническим признаком является внезапная гибель поросят без видимых изменений физио-
логического состояния. Из патоморфологических изменений следует выделить очаги дегене-
рации миокарда в виде серовато-белых участков или обширных зон. Окончательный диаг-
ноз ставят по результатам лабораторных исследований.
Выделение вируса. В лабораторию доставляют сыворотку крови свиноматок и ново-
рожденных поросят до приема молозива, и ткани внутренних органов (сердце, легкие селе-
зенка, почки, печень, головной мозг) плодов, мертворожденных и больных поросят. Из тка-
ней внутренних органов готовят 10%-ю суспензию на фосфатно-буферном растворе или рас-
творе Хенкса, трижды ее замораживают, оттаивают и затем осветляют центрифугированием
при 3000 мин'1 в течение 30 мин. Надосадочную жидкость отбирают, обрабатывают анти-
биотиками (пенициллин - 1000 ЕД/мл, стрептомицин и канамицин - по 1000 мкг/мл) и ис-
пользуют для заражения культур клеток или мышей.
Для выделения вируса часто используют перевиваемые культуры клеток почек сирий-
ского хомячка (ВНК-21), обезьяны (Veto) и поросят (PS). В первых 2-3 пассажах ЦПЭ мо-
жет отсутствовать, в связи с этим материал каждого испытуемого образца пассируют не ме-
нее 3-4 раз. ЦПИ, вызываемые вирусом в различных культурах клеток, аналогичны и харак-
теризуются округлением и пикнозом клеток и отделением их от стекла. Мышат заражают
интрацеребрально, внутрибрюшинно или интраназально 10%-й тканевой суспензией. Инфи-
цированные мыши погибают внезапно на 4-7 сут после заражения, или же у них развивается
паралич задних конечностей. Вирус ЭМК неоднократно выделяли из ткани погибших поро-
сят, имеющих признаки ЭМК, нормальных и мумифицированных плодов и мёртворождён-
. ных поросят.
J Идентификация вируса. Идентифицируют выделенный вирус в PH, ИФ, ИЭМ с ис-
пользованием сыворотки крови к референтному штамму вируса ЭМК. На основе экспресс-
: ного способа определения вирусов и антител по выявлению с помощью флуоресцентных
зондов (ФЗ) на ранних этапах взаимодействия вирус-клетка показана возможность индика-
ции инактивированого вируса ЭМК и идентификация его в модифицированной PH с помо-
' щью специфической к нему сыворотки в суспензии клеток СП ЭВ.
Серодиагностика. АТ в сыворотке крови свиней появляются на 5-7 сут после инфици-
рования и достигают максимальной концентрации спустя 1,5-2 нед. Для обнаружения АТ
часто используют PH и РТГА, которые ставят макро- и микрометодами. Выявление в сыво-
ротке крови свиней АТ класса М (ранние иммуноглобулины) позволяет диагностировать на-
чальную стадию заболевания. Снижение титра АТ в 4 раза и более после обработки сыво-
ротки 2-меркаптоэтанолом свидетельствует о присутствии АТ класса М. При этом 2-
меркаптоэтанол разрушает дисульфидные связи в молекулах иммуноглобулинов М; они
распадаются на отдельные полипептидные цепи, которые не выявляются в реакциях. Имму-
ноглобулины класса G устойчивы к действию реагента.
Титры АТ, выявляемые в PH и РТГА, практически одинаковы. Для постановки РТГА
используют KCl-боратный буфер (pH 8,0) и эритроциты морской свинки. Перед постанов-
: кой реакции АТ трижды замораживают и оттаивают и освобождают от разрушенных клеток
; низкоскоростным центрифугированием.
Реакция проходит более четко при 4° С. При постановке РТГА для обнаружения АТ к
вирусу ЭМК в качестве антигена используют эпизоотический шт. 1029 вируса ЭМК.
527
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
Серологическим обследованием свиноматок с нарушением репродуктивной функции из
20 хозяйств на наличие АТ к вирусу ЭМК 14 обнаружены положительно реагирующие жи-
вотные (24%, титр анти-ГА 1:8-1:64). Обнаружение ВНА к вирусу ЭМК в сыворотке крови
плодов после 70-и дн возраста и новорожденных поросят до приема молозива свидетельст-
вует о заражении их в матке, т.к. материнские АТ не проходят через плаценту. У мертворо-
жденных поросят для выявления специфических АТ используют транссудат из грудной и
брюшной полостей.
РДП для определения специфических антител используют реже. Она не требует специ-
альной обработки испытуемых сывороток для удаления термолабильных и термостабильных
ингибиторов гемагглютинации гетероагглютининов, однако для её постановки необходим
концентрированный вирусный АГ.
В последнее время в Швейцарии для выявления АТ к вирусу ЭМК разработан ИФА на
основе монАТ. Из 436 проб сывороток крови свиней положительными оказались 70 (16%).
Дифференциальная диагностика. ЭМК следует дифференцировать от других инфек-
ционных (ящур, болезнь Тешена, отёчная болезнь) и незаразных болезней (недостаток ви-
тамина Е и селена), сопровождающихся развитием сходных клинических признаков и пато-
логоанатомических изменений. Описанные выше лабораторные методы исследований по-
зволяют поставить точный диагноз на ЭМК свиней.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Профилактика болезни в свиноводческих хозяйствах, свободных от ЭМК свиней, осно-
вывается на охране их от заноса возбудителя инфекции. Комплектуют такие хозяйства
свиньями их благополучных хозяйств с обязательным серологическим обследованием жи-
вотных в период 30-сут карантина. Поскольку источником распространения вируса ЭМК
являются мыши и крысы, то в хозяйствах принимают меры по их уничтожению.
В США разработана инактивированная вакцина против ЭМК свиней, которую с января
1990 г. широко используют в тех хозяйствах, где нарушена воспроизводительная функция
свиноматок. Свиноматок, хряков-производителей и поросят вакцинируют внутримышечно
двукратно. Свиноматкам и ремонтным свинкам первую прививку делают за 4-6 нед до осе-
менения, вторую - через 2-4 нед после первой (доза 2 мл). Хряков-производителей вакцини-
руют дважды с 2-3 нед интервалом, а затем через каждые 6 мес (доза 2 мл). Поросят от не-
вакцинированных свиноматок впервые иммунизируют в 7-10-сут возрасте, а затем перед
отъёмом (доза 0,5-1 мл). Поросят от вакцинированных свиноматок прививают первый раз
перед отъёмом, второй раз - через 2-3 нед после первой иммунизации (доза 1 мл). За 60 сут
до убоя свиней не вакцинируют (10а).
Содержание специфических АТ в сыворотке крови определяли в реакции торможения
гемагглютинации с использованием КС 1-боратного буфера и эритроцитов морской свинки.
Инактивированные препараты вируса ЭМК свиней обладал выраженной АГ-активностью и
индуцировали у поросят гуморальный иммунный ответ.
В нашей стране разработаны инактивированные препараты вируса ЭМК, которые при 2-
кратном внутримышечном введении индуцировали у морских свинок выраженный гумо-
ральный ответ и предохраняли их от заражения патогенным штаммов вируса ЭМК (1). При
изучении АГ-активности инактивированных препаратов вируса ЭМК с масляным адъюван-
том на поросятах двухмесячного возраста препараты вводили внутримышечно (доза 2 мл).
Запатентована вакцина, полученная из инактивированного EMCV (штамм EMCV-25)
вируса (титр вируса до инактивации составлял 5x10б - 1x109 ТЦД50 на дозу), которая защи-
щала свиней от клинического заболевания ЭМК. Вакцина вводится внутримышечно с адъю-
вантом из масляной эмульсии и гидроокиси алюминия.
528
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Орлянкин Б.Г. и др. С. х. биология. 1991, 2 :131. 2.Орлянкин Б.Г. и др. С. х биология.
1992, 6. З.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусология. М. Колос, 1979. 4.Сюрин В.Н. и др.
Вет. вирусол. М. Агропромиздат, 1991. б.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив., М., Агро-
промиздат, 1992. б.Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев, Урожай, 1993. 7.Christianson
et.al. Vet Res,1990, 126 :54. 8.Christianson et.al. Am J Vet Res, 1991. 9. Gomes L. Et.al. Rvta
Cub Cienc Vet, 1982, 13 :21. IO.J00 H.S. et.al. Arch Virol, 1988, 100 :131. lOa.Joo H.S. In Dis.
Of Swine. Ed. Lemann et.al. Aime U., 1994. ILKim H.S. et. al. J Vet Diagn Invest, 1989, 1
: 101. ll.Kim H.S. et.al. Arch Virol, 1989, 109 :51. 13.Kim H.S. et.al. Am J Vet Res. In press.
1991. 14.Links I.J. et al. Aust Vet J, 1986, 63 :150. 15.Littlejohns I.R. Aust Vet, 1984, 61 :93.
16.Love R.J. et.al. Aust Vet Res J, 1986, 63 .128. 17.Matthews R.E. et.al. Intervirology, 1979, 11
: 133. 18.Mumane T. G. et.al., 1981. Boca Raton, Fla: CRC Press, 137. 19.Ramos J.R. et.al. Rvta
Cub Ciens Vet, 1983, 14 :71. 20. Roene P.M. et.al. Rev Microbiol (Sao Paolo), 1985, 16 :117.
21.Rueckert R. R. Virol, New Iork:Raven Press, 1985, 705. 22. Sanford S.E. et.al. Can Vet J,
1989, 30 :757. 23.Seaman J.T. et.al. Aust Vet J, 1986, 63 :292. 24.Sidoli L. et.al. Proc Ital Soc
Swine Pathol, 1988, 249. 25.Tinslei T.W. et.al. Intervirologi, 1984, 21 :181. 26.Williams M.S. J
S Afr Vet Assoc, 1981, 52 :76.
РИНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine rhinoviral infections
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Клинически болезнь
проявляется не всегда. В одних случаях вирус можно выделить от клинически здоровых те-
лят, в других - от телят с симптомами респираторной болезни.
В настоящее время известно 5 штаммов риновирусов КРС. Два выделены в ФРГ, два - в
Англии и один - в США. Сообщилось о выделении риновирусов КРС на фермах в Италии.
ХАРАЕКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. По структуре и химическому составу риновирусы
КРС скота неотличимы от риновирусов человека.
Устойчивость. Риновирусы КРС термолабильны, сохраняют инфекционность при 4°,
22° и 56°С соответственно 40, 20 дн и 30 мин. За 8 ч инкубации при 37°С инфекционность
вируса снижается на 90%. Одномолярный р-р MgCl2 действует на вирусы неодинаково. Од-
ни штаммы (RS-Зх) р-р не стабилизирует, другие (С-07) стабилизируют. Риновирусы наибо-
лее стабильны при pH 7,0, быстро инактивируются при pH менее 5,0 и более 10,5; чувстви-
тельны к трипсину - при 15-мин. обработке в дозе 0,25 мг/мл инфекционность шт. RS-Зх
снижается на 95%. Инфекционность вируса снижается и при часовом воздействии на него
1%-го р-ра додецильсульфата натрия.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. У жнвотных-реконвалесцентов риновирусы вызывают обра-
зование ВНА в титрах от 1:2 до 1:100 против 100 ТЦД50, которые.регулярно выявляются по-
сле экспериментальной инфекции на 14-й день позже. Около 48% КРС в штате Мериленд
США имеют ВНА к шт. С-07, выделенному от клинически здорового животного. Гиперим-
мунную сыворотку к риновирусам удаётся получить только на курах.
Антигенная вариабельность и родство. Среди описанных в литературе пяти штаммов
риновирусов КРС в перекрёстной PH установлено 2 серотипа. Шт. RS-Зх, выделенный в
Англии, SD-1 и 181/V, выделенные в ФРГ, и С-07, изолированный в США, относятся к 1-му
34 Зак. № 171
529
Глава ХШ. Family Picomavirida Пиксрнавирусные инфекции
серотипу, шт. ЕС-11 - ко 2-му. В 1974 г. на острове Хоккайдо от телят с респираторным за-
болеванием выделено 5 штаммов риновируса в культуре клеток почки телят. Они оказались
антигенно родственны шт. С-07 и RS-3. Кроме того, от КРС выделены штаммы риновирусов
(VC-78, VC-79, VC-81, VC-96). Риновирусы КРС обладают ГА способностью.
Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство и вирусовыделение. В есте-
ственных условиях непатогенные штаммы вируса можно выделить из носовой полости кли-
нически здоровых животных. Изолировать вирус из трахеи, бронхов, лимфоузлов и лёгких
не удавалось. При экспериментальной инфекции патогенным шт. ЕС-11 его удавалось реи-
золировать из лёгких, трахеи, миндалин и носовых раковин на 4-6-й день после заражения.
Экспериментальная инфекция шт. RS-Зх не удавалась. Однако у всех заражённых телят
на 14-й день в сыворотке крови были обнаружены ВНА. В опытах заражения (интра-
трахеально) 6-8-недельных телят шт. С-07 наблюдали слабо- выраженные признаки респи-
раторного расстройства: эмфизему, слабую интерстициальную пневмонию и эозинофильный
экссудат, содержащий обломки клеток. Из носовых выделений заражённых животных реи-
золирован тот же штамм. Очаги воспаления часто были очень мелкие. Некоторые изменения
были в лимфоузлах. У телят, заражённых интраназально, вирус был выделен из носового
секрета, а у заражённых в трахею вирус не выделялся. При заражением интраназально шт.
ЕС-11 телят-гнотобиотов 1-, 3- и 10-дн. возраста наблюдалось клинически выраженное ост-
рое респираторное заболевание.
Культивирование. Риновирусы КРС довольно трудно культивируются в монослойных
культурах. Для их выделения лучше использовать культуры трахеи и носовых раковин. Эти
вирусы хорошо растут при 33° во вращающемся барабане. На 4-й день вирус образует
бляшки. В качестве ростовой среды применяют сыворотку эмбрионов КРС, так как при ис-
пользовании сыворотки взрослых животных титр вируса снижается даже после 5-кратного
отмывания культуры. В органных культурах титр риновирусов на 7-14-й день инкубации
достигает 3-4 1g ТЦДзо/0,1 мл. Риновирусы можно культивировать также в первичных клет-
ках ПЭК, ВТК и щитовидной железы. В первых пассажах ЦПД вируса, как правило, нет.
Шт. ЕС-11 успешно пассировался в культуре клеток ПЭК, после восьми пассажей - в орган-
ной культуре трахеи телят. Титр вируса не превышал 104 ТЦ Дзо/мл.
В первичных культурах ЦПИ развивались очень медленно (7-14-й день) и часто непо-
стоянно. При наличии в среде 0,07% NaHCOa изменения появлялись быстрее. Риновирусы
повреждают клетки органных культур трахеи и носовых раковин, поэтому их считают по-
тенциально патогенными для КРС. Степень ЦПИ зависит от метода инкубации. Бляшки,
индуцированные шт. С-07, в первичной культуре клеток почек КРС чёткие, диаметром 2-6
мм; шт. 181/V - мелкие (1-4) и SD-1 - диаметром 1-2 мм, с нечёткими краями и неполным
разрушением клеток в зоне бляшек.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные жи-
вотные, передача инфекции происходит воздушно-капельным путём.
Спектр патогенности в естественных условиях. Патогенность всех выделяемых ри-
новирусов для КРС точно не доказана. Болеет только КРС. Вирулентность штаммов КРС
различна. Очевидно, патогенен только один шт. ЕС-11.
ДИАГНОСТИКА
Диагностика основана на выделении и идентификации вируса. Выделение вируса лучше
удаётся в органных культурах клеток. PH в культуре клеток ставят с адаптированным к дан-
ной системе вирусом в случаях обнаружения и титрования специфических АТ у животных-
реконвалесцентов. В PH можно идентифицировать вновь выделенный вирус при наличии
заведомо позитивных сывороток.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФАЛАКТИКА
Не разработаны.
530
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
РИНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ЛОШАДЕЙ
Equine rhinoviral infections
Риновирусная инфекция лошадей проявляется нарушениями функции органов дыхания
(риниты, кашель) и кратковременным повышением температуры.
Риновирусная инфекция зарегистрирована в США, Канаде, Западной Европе (Англия,
ФРГ) и в Африке.
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Риниты, вызванные
риновирусами - тяжёлое заболевание верхних дыхательных путей, сопровождающееся ли-
хорадкой, анорексией и появлением истечений из носовых путей, вначале серозных, затем
слизисто-гнойных. В начале заболевания отмечают фарингиты и лёгкий кашель. Возможна
субклиническая и инаппаратная инфекция. Патологоанатомические изменения не изучены.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Риновирусы лошадей впервые выделены Пламмером (1962) в Англии, Дитчфильдом и
Мак-Ферсоном (1965) в Канаде, Уилсоном и др. (1965) в США и Бомом (1964) в ФРГ.
Морфология и химический состав. Это мелкие РНК-содержащие вирусы, диаметром
25-30 нм, константа седиментации в градиенте сахарозы ~ 160S, плавучая плотность в хло-
ристом цезии 1,40 г/см3.
Устойчивость. Вирус устойчив к эфиру, хлороформу, относительно устойчив к прогре-
ванию при 50°С, хотя данных по термостабильности для многих штаммов нет. Устойчи-
вость к нагреванию не стабилизируется IM MgCl2. Быстро инактивируется при pH 3,0 - 5,0.
Антигенная структура не изучена.
Антигенная активность. Вирусы способны вызывать образование ВНА, которые появ-
ляются через 7-14 дн после заражения и могут достигать высоких титров (1:1000-1:10 000).
Антигенная вариабельность и родство. Обнаружены вирусы двух серотипов - Equine
rhinovirus I и Equine rhinovirus IL Гемагглютинирующие свойства не установлены.
Локализация вируса, вирусемия, и вирусовыделение. В течение месяца после инфи-
цирования вирус персистирует в слизистой оболочке верхних дыхательных путей, особенно
глотки, и в региональных лимфоузлах при наличии сывороточных ВНА. Виремия появляет-
ся через 3-7 дн. после заражения, регистрируется 4-5 дн и заканчивается с появлением ВНА.
Длительность вирусоносительства неизвестна. Инфекция может протекать субклинически и
инаппарантно. Из организма больного животного вирус выделяется с истечениями из носа и
с фекалиями. В кишечнике вирус не размножается.
Эксперемеитальная инфекция. Легко воспроизводится у лошадей при контактном за-
ражении или при инокуляции культурального вируссодержащего материала в носовую по-
лость. У большинства чувствительных животных через 3-7 дн. после заражения развивается
виремия, продолжающаяся 4-5 дн и сопровождающаяся лихорадкой. Вирус выделяют из
тканей верхних дыхательных путей и связанных с ними лимфоузлов в течение 10 дн после
заражения. Иногда вирус обнаруживали в почках и моче. Примерно через 7 дн после зара-
жения у всех чувствительных лабораторных животных появляются ВНА.
Культивирование. Риновирусы размножаются в первичных культурах клеток почек
лошадей, обезьян, кроликов, собак и хомячков, в диплоидных культурах клеток лошади, в
перевиваемых культурах клеток человека НЕР-2 и HeLa, клеток обезьян, кроликов и вызы-
вают ЦПИ. Характер этих изменений аналогичен таковым многих других пикорнавирусов.
При соответствующих условиях могут быть получены макро- и микробляшки.
Особенности внутриклеточной репродукции не изучены. В отличие от других риновиру-
сов для оптимального роста риновирусов лошадей не нужно соблюдать пониженную кон-
центрацию бикарбоната натрия и пониженную температуру.
34*
531
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные жи-
вотные, а также животные, находящиеся в инкубационном периоде болезни или в состоянии
субклинической и инаппарантной инфекции. Эпизоотологическое значение вирусоносителей
не изучено. Предполагают, что болезнь может передаваться при контакте с носовыми секре-
тами и истечениями на ранних стадиях заболевания, а также при ингаляции аэрозолей на
близком расстоянии.
Спектр патогенности в естественных условиях. Болеют только лошади. Эксперимен-
тально (интраназально) удаётся заразить кроликов, морских свинок, обезьян и человека.
ДИАГНСОТИКА
Диагноз основан на выделении и идентификации вируса в культуре клеток. Для выделе-
ния риновирусов используют первичную культуру клеток почки лошади, обезьяны и переви-
ваемой линии HeLa. PH проводят в культуре клеток.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
ВНА появляются в крови больных лошадей через 7-14 дн после выхода их в инфициро-
ванное стадо или после интраназальной инокуляции возбудителя. Высокий уровень АТ от-
мечен у животных-реконвалесцентов после клинического и субклинического переболевания.
Индекс нейтрализации их достигал 1,5-4,0 1g. ВНА в высоком титре сохраняются у боль-
шинства животных на протяжении 1'/2-2 лет (срок наблюдения), хотя в этом случае и не
может быть исключена возможность реинфекции. Связь между уровнем АТ и защитой от
заражения не установлена. Специфическая профилактика не разработана.
РИНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ КОШЕК
От кошек с клиническими признаками малой респираторной болезни и язвенным воспа-
лением языка в 1969 г. выделено несколько штаммов вируса. Все они, кроме одного, кото-
рый отличался характером цитопатогенного действия, были отнесены к группе вирусов гер-
песа. Он размножался в культуре клеток почек кошки и зелёной мартышки, был непатоге-
нен для новорождённых хомячков и мышей, при эксперементальном заражении кошек вы-
зывал тяжёлые нарушения органов дыхания, слизисто-гнойные выделения и язвы на дор-
сальной поверхности языка. Возбудитель классифицирован как риновирус 1-го типа.
ЯЩУР
Food-and-mouth disease, Aphthous fever, Epizootic aphthae (англ.);
Fievre aphthouse (Франц.); Maul-und Klauenseuche (Нгем.);
Fiebre aphthosa (Нем.)
Ящур - остро протекающая высококонтагиозная болезнь парнокопытных, проявляющая-
ся лихорадкой, везикулярным поражением слизистых оболочек рта, кожи венчика и выме-
ни; у молодых животных - поражением миокарда и скелетных мышц.
Болезнь регистрируется во многих странах мира. Серотипы А, О, С распространены
широко; тип Азия 1 выявлен только в азиатских странах; серотипы SAT 1, SAT 2, SAT 3 ре-
гистрировались в странах Африки, однако в 1961-1962 гг. SAT 1 появился в странах Сред-
него Востока и Турции (77, 78, 82).
532
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
Клинические признаки заболевания. У КРС и свиней в естественных условиях бо-
лезнь протекает остро и, как правило (у взрослых животных), доброкачественно. У КРС ин-
кубационный период длится 1-3 дня, но может быть до 7-10 дн. Вначале отмечается ухуд-
шение аппетита, вялая жвачка, повышенная саливация. Затем повышается температура тела
(до 40,5-41,5°С), наступает угнетение, животное отказывается от корма, жвачка прекраща-
ется. На 2-3 день на внутренней поверхности верхней и нижней губ, на беззубом крае ниж-
ней челюсти, на языке и слизистой оболочке щек появляются афты. У некоторых животных
афты образуются в области межкопытной щели (Рис. 82) и на вымени. Иногда поражаются
все четыре конечности. Через 12-24 ч стенки афт разрываются и образуются свежие эрозии.
В это время температура тела понижается до нормальной, наступает обильное слюнотече-
ние. В результате чмокающих движений в углах рта появляется пенистая масса. Через 2-3
нед эрозии заживают. При поражении конечностей животные хромают и часто ложатся, а
при поражении вымени отмечается болезненность при доении, иногда возникает мастит. На
фоне острых респираторных инфекций, присущих многим комплексам по доращиванию мо-
лодняка КРС, развитие ящура протекает медленно с недостаточно выраженными клиниче-
скими признаками заболевания (61)
Необходимо отметить, что при массовом перезаражении коров при ручной дойке у жи-
вотных наблюдается появление первичных афт сначала на сосках вымени, а затем в ротовой
полости. При пастбищном содержании скота отмечено массовое поражение (афты и эрозии)
венчика копыт, области межкопытной щели при единичных случаях поражения ротовой по-
лости. Видимо, развитие клинического проявления болезни зависит от ворот инфекции. На-
блюдаемые у коров аборты, тяжелые роды, задержание последа и различные послеродовые
осложнения являются следствием размножения вируса в плаценте. (См. Рис. 152-157).
У телят ящур протекает в безафтозной форме с явлениями острого гастроэнтерита. При
злокачественной форме ящур вначале протекает типично, но в стадии выздоровления, на 7-
10-й день, внезапно наступает резкое ухудшение состояния животного, учащение пульса до
120-140 ударов/мин и 20-25% животных погибают от паралича сердца (Рис. 81).
У свиней болезнь проявляется лихорадкой, угнетением, ухудшением аппетита. На коже
конечностей, в области межкопытной щели, венчика и мякишей появляются красные болез-
ненные припухлости, затем афты, которые, разрываясь, образуют эрозии. Заболевание ко-
нечностей сопровождается хромотой, иногда спадением копытец. Чаще афты появляются на
пятачке, сосках и редко - на слизистой ротовой полости. У взрослых свиней ящур длится 8-
25 дн. У поросят-сосунов протекает в септической форме и в первые 2-3 дня болезни вызы-
вает гибель 60-80% животных (Рис. 83).
У овец инкубационный период продолжается 2-3 дня. Поражаются конечности в облас-
ти венчика и межкопытной щели, реже - слизистая оболочка ротовой полости. У больных
отмечают лихорадку, отказ от корма, прекращение жвачки, хромоту, угнетение. Больные
животные отстают от стада, ложатся. Болезнь длится около 2 нед. У ягнят болезнь чаще
проявляется гастроэнтеритом и нередко обусловливает гибель животных.
У коз клинические признаки болезни такие же, как и у овец. Довольно часто у них по-
ражается вымя. Выздоровление наступает через 10-14 дн.
У оленей наблюдается понос, поражение слизистой оболочки ротовой полости и конеч-
ностей, часто осложняемое некробактериозом. Если не развиваются осложнения, животные
выздоравливают через 10-12 дн.
При вскрытии обнаруживают изменения (афты и эрозии) в ротовой полости, иногда на
слизистой оболочке пищевода и преджелудков. У телят, ягнят, поросят отмечают геморра-
гический энтерит и дегенеративные изменения в мышце сердца (“тигровое сердце”).
При злокачественном ящуре поражения находят в сердечной мышце. Она бледная и
дряблая, на разрезе выступают серовато-красноватые пятна и казеозно перерожденные фо-
533
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
кусы серо-белого цвета различной величины. Под эпикардом и эндокардом кровоизлияния.
Подобные изменения находят также в скелетных мышцах.
Патологоанатомические изменения. При доброкачественном течении ящура смер-
тельные случаи среди больных животных крайне редки. У КРС характерными признаками
являются афтозно-эрозионные поражения на слизистых оболочках ротовой полости и рубца,
безволосых местах кожи носового зеркальца, губ, сосков вымени, венчика и области межко-
пытной щели. Крайне редко афты и эрозии образуются на коже вокруг ануса.
При злокачественном течении болезни наряду с афтозно-эрозионными поражениями
изменения обнаруживают в сердечной и скелетной мускулатуре. Поражение миокарда -
главная причина летальных исходов. При внешнем осмотре сердца и на разрезе миокарда,
особенно желудочков и межжелудочковой перегородки, находят множественные желто-
серые очажки, пятна и полоски разной формы и величины. В скелетной мускулатуре спины,
передних и задних конечностей (сгибатели и разгибатели пальцев, тазобедренная группа
мышц), массетерах, мышцах языка, ножках диафрагмы и межреберных мышцах обнаружи-
вают диффузные или очаговые дегенеративные поражения мышечных волокон, пропитан-
ные студневидными желтоватыми инфильтратами.
Для тяжелого течения ящура характерно наличие геморрагического диатеза в виде кро-
воизлияний, которые локализуются на слизистых оболочках пищеварительного тракта, се-
розных оболочках, в паренхиме легких, почек, печени, головного и спинного мозга. В под-
кожной клетчатке, особенно в области подгрудка, межмышечной соединительной ткани,
подслизистом слое стенки кишечника, средостении, выявляются ограниченные или диффуз-
ные серозные инфильтраты желтоватого цвета студневидного характера.
У других видов животных картина вскрытия, в основном, та же, что и у КРС, только у
нее свои особенности в зависимости от места локализации инфекционного процесса (1,17).
Гистологические изменения. Афта на слизистых оболочках представляет собой пузы-
рек различной формы и величины. Гистогенез ее начинается с дегенеративных поражения
клеток шиповидного слоя. Клетки набухают, округляются, а ядра пикнотизируются. В со-
сочковом слое подлежащей соединительной ткани в ответ на дистрофию клеток происходит
расширение капилляров, отек и клеточная инфильтрация. Проникновение в толщу поражен-
ных клеток и возникновению мелких внутриэпителиальных пузырьков.
По мере продолжения репродукции вируса в клетках шиповидного слоя и накопления
серозного экссудата отмечают более обширные разрушения клеток и их дискомплексацию,
слияние мелких пузырьков в один крупный и формирование афты. В связи с нарастающими
воспалительными явлениями в сосочковом слое афта заполняется нейтрофильными лейко-
цитами. Экссудат становится серозно-гнойным, а затем гнойным. Из-за механических при-
чин и воспалительных процессов стенки афты надрываются и обнаруживается эрозия.
Очищение дефекта эпителия от продуктов некротического распада происходит на 5-7-е
сут, а эрозионная поверхность полностью покрывается эпителием на 12-е сут. Восстанавли-
вается дефект за счет размножения клеток базального слоя.
При осложнении пролиферативных процессов в местах эрозии вторичной микрофлорой
развивается гнойное воспаление подлежащих тканей с образованием язвенных поражений.
Они заживают посредством натяжения с формированием соединительнотканного рубца.
Афтозно-эрозионные поражения на коже протекают по тому же типу, что и на слизи-
стых оболочках. Из-за более частых осложнений вторичной микрофлорой на конечностях в
области межкопытной щели нередко развивается пододерматит с последующим отпадением
рогового башмака, а в молочной железе - серозно-катаральный или гнойный мастит.
При злокачественном течении наряду с афтозно-эрозионными поражениями обнаружи-
вают тяжелые дегенеративные изменения в сердечной и скелетной мускулатуре. Они разви-
ваются одновременно с появлением афтозно-эрозионных поражений на слизистых оболоч-
ках. В пораженных участках миокарда гистологически отмечают дистрофическо-
534
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
некротические процессы в мышечных волокнах (белковая дистрофия, восковидный некроз,
лизис, зернисто-глыбчатый распад), клеточно-пролиферативную реакцию со стороны интер-
стициальной ткани и явления расстройства кровообращения. Часто наблюдают отложение
солей извести в пораженных мышечных волокнах. В начале развития воспалительного про-
цесса в миокарде более выражен альтернативный, а в дальнейшем - пролиферативный ком-
понент. Очаги некроза мышечных волокон сочетаются с участками частичного или полного
замещения пораженных волокон клеточным инфильтратом и грануляционной тканью.
В скелетной мускулатуре встречаются дистрофические и некротические изменения мы-
шечных волокон с реактивно-клеточными процессами в интерстиции. Поражения носят
обычно очаговый характер.
Глубокие изменения при злокачественном течении могут развиваться в паренхиматоз-
ных органах, железах внутренней секреции и в нервной системе. В печени выявляют белко-
вую дистрофию паренхиматозных клеток, а в почках - серозный гломерулонефрит. Пораже-
ния в надпочечниках характеризуются дистрофией клеток коркового слоя, некрозом хрома-
финных клеток и развитием клеточного пролиферата в местах дегенеративных явлений. В
гипофизе выявляют клеточные пролифераты, в щитовидной железе - гипофункциональиое
состояние. В различных отделах головного и спинного мозга иногда развивается негнойный
энцефаломиелит. В летальных случаях встречается острый десквамативный гастроэнтерит.
Органы иммунной системы (селезенка, тимус, лимфоузлы) гипертрофированы.
В местах первичного проникновения и размножения вируса в чувствительных клетках
слизистых оболочек кутанного типа и безволосых местах кожи формируются первичные аф-
ты. В этих очагах беспрерывно протекает процесс репродукции вируса, сопровождающийся
расширением участка пораженных клеток. Из первичных мест ВЯ проникает в кровь и
лимфу, разносится по органам, тканям и фиксируется в чувствительных клетках, размножа-
ется в них, вызывая образование вторичных афт. Вирус размножается в цитоплазме клеток
шиловидного слоя эпителия слизистых оболочек и эпидермиса кожи. В клетках прекращает-
ся митотическая активность, т.е. необратимо приостановлены процессы синтеза клеточной
ДНК. Некоторые штаммы вируса наряду с эпителиотропными могут проявлять и миотроп-
ные свойства, размножаясь в саркоплазме мышечных волокон миокарда и скелетной муску-
латуры. В мышечных волокнах, так же как и в клетках шиловидного слоя эпителия, не про-
является митотическая активность ядер и отсутствуют процессы синтеза клеточной ДНК.
По-видимому, субстрат цитоплазмы клеток шиповидного слоя эпителия и саркоплазмы мы-
шечных волокон однотипен в биохимическом отношении, что обусловливает возможность
размножения вируса в данных органах (1,19).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус открыт Леффлером и др. в 1898 г (80). Он относится к семейству Picomaviridae,
роду Aphtovirus. История изучения возбудителя подробно описана А. А Бойко и соавт. (82).
Морфология и химический состав. ВЯ представляет собой небольшую частицу, со-
стоящую из одноцепочной линейной молекулы РНК (мол.м. 2,8-108), заключенную в белко-
вую оболочку (Рис. 80), состоящую, главным образом, из четырех белков VP1, 2, 3 и 4. Ви-
рионная РНК является инфекционной и имеет ту же полярность, что и РНК в инфицирован-
ной клетке. По аналогии с другими пикорновирусами считается, что с нее транслируется
один крупный белок. Этот полипротеин затем быстро расщепляется с образованием четырех
полипептидов-предшественников, которые являются первичными полипептидами, обнару-
живаемыми в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с
образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. В ви-
русинфицированных клетках накапливается 6 неструктурных полипептидов. Только для од-
ного из них - VP56a - определена функция, а именно - он является РНК-зависимой РНК-
полимеразой. РНК реплицируется с помощью этой полимеразы, по-видимому, сначала син-
тезируется комплементарная РНК, с которой затем копируется новая вирионная РНК. Ви-
535
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
рионы представляют собой мелкие частицы икосаэдрической формы диаметром 23-25 нм,
мол.м. 7-106 Д. Они состоят из внутренней части, представленной РНК, и белковой оболочки
(капсида), которая состоит из 32 структурных компонентов (капсомеров), расположенных в
кубической симметрии. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка.
Он обладает суммарным отрицательным зарядом различной величины.
ВЯ состоит из однонитевой (+1 РНК), заключенной в белковый капсид, который состоит
из 4-х структурных белков: VP1, VP2, VP3 и VP4. Основным антигенным белком является
VP1 (51). Оптимизированы условия кристаллизации ВЯ типов А22, О и Азия1. Получены
совершенные монокристаллы, пригодные для установления пространственной структуры
вируса разрешением 3,5А (11). Выражены кристаллы ВЯ серотипов О, А и С (шт. О, К,
А1061, А221 rag 24/64, А24 и С). Полученные кристаллы оказались пригодны для рентгено-
структурного анализа с разрешением 2,6-3,5А (52).
Изменение вирулентности штаммов различных вспышек хорошо известно, но также со-
общалось и о различиях между изолятами из одной и той же вспышки. Легкость, с которой
вирулентные вирусы могут быть аттенуированы путем пассажей на лабораторных животных
(мыши, кролики, КЭ) или в культуре клеток или путем обработки in vitro также рассматри-
вается как отражение изменчивости вируса (29).
Различают 7 АГ типов вируса, которые раньше определяли путем теста перекрестной
защиты, а сейчас с помощью серологических реакций. АГ изменчивость происходит внутри
типов, главным образом, в результате процесса ступенчатого “дрейфа”, часто приводящего
к непрерывному спектру без четкого разделения на отдельные подтипы. Вначале с помощью
КС теста было идентифицировано 60 подтипов, но с проверкой новых штаммов проблема
дифференциации изолятов стала настолько сложной, что от субтипирования новых изолятов
фактически отказались. Показано, что миотропный №4 и аттенуированный №645 варианты
ВЯ отличаются от исходного вакцинного штамма по первичной структуре капсидных бел-
ков. Не исключена возможность того, что изменение биологических свойств вируса связано
с этими структурными особенностями (62,65).
Вирионные полипептиды (VP1, 2, 3 и 4) изменяются с различной скоростью: VP1 и 3
изменяются очень быстро, тогда как VP4 почти не изменяется. В отобранных 70 изолятах,
представляющих все 7 серотипов, 69 имели один и тот же VP4. Промежуточное положение
занимает и является наиболее удобным для получения эволюционных взаимосвязей - VP2.
Устойчивость. ВЯ устойчив к эфиру, хлороформу, 4-хлористому углероду, фреону, аце-
тону, но быстро инактивируется при pH 6 и ниже. Вирус наиболее стабилен при pH 7-7,5.
Сдвиги его, как в кислую, так и в щелочную стороны, ведут к изменению свойств вируса.
Известь, хлорная известь, креолин, крезол, фенол, сулема убивают вирус лишь через не-
сколько часов воздействия; р-ры щелочей (2%-ные) - за 10 мин.; формальдегид в концен-
трации 0,009% инактивирует 90% вируса при 4°С за 1 сут. Устойчивость вируса при раз-
личных температурах зависит от штамма, субстрата, степени очистки и других факторов.
Высокая температура губительно действует на вирус: 90% вируса теряют активность при
64°С и pH 7,5 в течение 3 с; при 49°С - за 1 ч; при 37°С - за 21 ч. Он сравнительно устойчив
к влиянию факторов внешней среды. В обрывках эпителиальных стенок афт сохраняет ви-
рулентность 67 дн. Афтозная лимфа, содержащая ВЯ, инактивируется при 31 °C за 24 ч.
Полную инактивацию вируса тала О в молоке наблюдали при температуре от 66 до 78°С
через 40 с. Некоторые штаммы вируса более терморезистентностны. Так, в Пакистане выде-
лен полевой изолят, который даже при прогревании до 80°С в течение 30 мин сохранял ин-
фекционность (18). ВЯ в определенных условиях обладает устойчивостью к многократному
воздействию низких температур. Устойчивость значительно возрастает при внесении в ви-
русную суспензию компонентов защитной среды (12).
536
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
Низкие температуры консервируют вирус, при -70° С он сохраняет свои биологические
свойства в течение нескольких лет, в навозной жиже - 39 дн, в сточных водах - до 103 дн.
На поверхности стогов сена вирус выживает летом один день, в сентябре - 3-6, в октябре -
10 дн; внутри стогов погибает через месяц, зимой же только через 7 мес. Лучшими дезин-
фицирующими средствами являются 2%-е или 3%-е горячие р-ры NaOH и 1%-й р-р фор-
мальдегида. В 50%-м р-ре глицерина на фосфатном буфере (pH 7,2) при 4-8°С вируссодер-
жащий материал сохраняет инфекционность 40 дн. Данный консервант широко используют
при пересылке материала в лабораторию. Вирус хорошо сохраняется в лиофилизированном
виде. В непроваренных изделиях, приготовленных из мяса свиней, убитых в период генера-
лизации инфекции, вирус разрушался: в окороках в течение 112-119 дн, в лопаточном жире
- 155-169, в костном мозге - 169-179, в жире окорока - 176-183, в беконе - 183-190 дн. Вы-
живание вируса в различных колбасах не превышает 56 дн. Вирус сохранялся более дли-
тельно в жире, чем в мясе. Некоторые штаммы вируса чувствительны к действию протеаз. К
веществам, инактивирующим вирус с сохранением его АГ-свойств, относятся формальде-
гид, этиленимин, глицилальдегид. Трипсин вызывает избирательное расщепление структу-
ры полипептида VP1.
Взаимодействие ВЯ с гомологичными АТ сопровождается образованием агрегатов, что
приводит к уменьшению титра вируса на 3-4 порядка против исходного значения без види-
мых деструктивных изменений в структуре вирусных частиц. Устойчивость вируса зависит
от сохранения его электрического заряда как базового свойства вируса. Разработан ком-
плексный метод получения из суспензий нативного и инактивированного ВЯ концентриро-
ванных препаратов в обезвоженном порошкообразном состоянии, в составе которых вирус
сохраняет свои биологические свойства несколько лет (12).
Антигенная структура. Капсид построен из 4 основных полипептидов (VP1, VP2, VP3,
VP4). В зрелом вирионе содержится около 60 молекул каждого полипептида. Кроме 4-х
главных полипептидов, обычно обнаруживают один минорный капсидный полипептид
(одна или несколько молекул или вирион) и небольшой полипептид VPg. На поверхности
ВЯ обнаружено 3 участка нейтрализации. Один выявлен только на интактных вирионах
(140S), 2-й - на инактивированных вирионах и субъединицах (12S) и 3-й - на 140S и 12S-
структурах и полипептиде VP1. Один из участков нейтрализации, по-видимому, ответстве-
нен за взаимодействие вируса с клеточными рецепторами (27). Главный антигенный сайт
ВЯ это участок, соответствующий 141-160 аминокислотным остаткам белка VP1, образую-
щий петлю G-Н, выступающую на поверхности (38).
Кроме 140S (полные вирионы), обнаружены 758-капсиды, по размеру и форме подоб-
ные вирионам, но не содержащие РНК; белковые субъединицы 12S-14S и Via-антиген (4S)
(Virus infection associoted) - термолабильный КС антиген, образующийся в тканях инфици-
рованного организма или культуре клеток, но не является составной частью вируса. Он
представляет собой РНК-репликазу. Via-антиген пригоден для контроля сывороток КРС и
свиней. Он появляется в культуре ВНК-21 на 8-й день после заражения (5).
Последовательность в участке 134-1158 ответственна за подтиповую специфичность, то-
гда как последняя определяется структурой обоих вариабельных участков (29а). В PH могут
участвовать 7 (48) или даже 12 эпитопов (40). Все названные компоненты обладают анти-
генными свойствами, но иммуногенными являются лишь 140S и 75S. Структурные частицы
12S содержат высококонсервативный белок, который выявляется монАТ одной специфич-
ности. У 6 из 7 известных типов вируса (49) за АГ специфичность ответственны 2 вариа-
бельных участка, включающие аминокислотные остатки 42-60 и 134-158. Инфекционностью
обладают лишь полные вирионы 140S.
Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время известно 7 АГ типов ВЯ:
А, О, С, SAT 1, SAT 2, SAT 3, и Азия 1. Внутри основных типов существуют варианты, или
537
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
подтипы, отличающиеся друг от друга. Тип А имеет 32 варианта, тип 0-11, тип С - 5, тип
SAT 1-7, тип SAT 2-3. тип SAT 3-4, тип Азия 1 - 2 варианта. Известны и другие штаммы
вируса, отличающиеся от установленных вариантов. Вначале с помощью РСК было иденти-
фицировано 60 подтипов, но с проверкой новых штаммов проблема дифференциации изоля-
тов стала настолько сложной, что от субтипирования новых изолятов фактически отказались
(29), хотя и предложен тест постановки РСК для типнрования вируса (30).
Антигенное разнообразие ВЯ обусловлено аминокислотными заменами вие главного АГ
сайта. АГ сайты А и С, соответствующие петле G-Н и кортикостероидному участку, являют-
ся иммунодоминантными VP1 ВЯ и, как полагают, индуцируют защитный эффект. Иден-
тичность сайтов В и С может быть недостаточна для индукции перекрестной защиты (33).
АГ типы и варианты, установленные в РСК, различаются и иммунологически. Гомологич-
ные полипептиды в большинстве серотипов ВЯ оказались АГ родственны между собой и
практически отличались от аналогичных полипептидов других пикорнавирусов (31,31а, 37).
Эпитопы, расположенные в VP1, в отличие от эпитопов, расположенных в VP2, чувстви-
тельны к трипсину. Методом одномерного фингерпринтного анализа установлено сходство
геномов эпизоотических шт. N1467, N1492, 1N496 и NO, 194. Обнаружены некоторые отли-
чия в длине наиболее крупного олигонуклеотида, устойчивого к расщеплению РНК-азой (2).
Локализация вируса. В инкубационный период от КРС вирус можно выделять из мо-
лока 7 дн и из спермы 4 дня до появления симптомов болезни. В период, когда болезнь вы-
ражена клинически, эпителий и жидкость везикул содержат большое количество вируса
(более 108 И Д/г ткани или 1 мл афтозной жидкости). Аналогичные результаты получены и
при исследовании больных свиней и овец. В слюне в слюне можно обнаружить еще до по-
явления симптомов болезни в количестве 102-103,7 ЛД50/мл, а в период проявления их - 104,5-
10б ЛД50/мл для мышат-сосунов. Большинство секретов и экскретов инфекционны 4-5 дн, а
слюна - 11 дн. Независимо от способа экспериментального заражения (интраназально, внут-
римышечно) овец ВЯ обнаруживали в органах дыхания и региональных лимфоузлах, при
этом у больных животных наблюдали выделение вируса с пищеводно-глоточной и носовой
слизью до 10 дн (срок наблюдения). В неблагополучном стаде всегда могут быть животные
без признаков болезни, но выделяющие вирус со слюной.
Особенно опасны в этом отношении овцы, у которых ящур может протекать без сим-
птомов болезни. Около 50% выздоровевшего КРС выделяют вирус 8 мес, некоторые - до 2
лет. Среди клинически выздоровевших овец 50% животных могут быть носителями вируса
в течение 7 мес. У свиней персистентного носительства вируса не установлено. В стадах
буйволов инфекцию в течение многих лет поддерживают вирусоносители и животные со
скрытым течением инфекции.
Удалось показать, что ВЯ в хронически инфицированных культурах клеток (ПТ, ПО,
СПЭВ) может длительно персистировать, не вызывая ЦПД, причем культивирование клеток
в течение ряда пассажей в присутствие гомологичной ящурной сыворотки не освобождает ее
от персистенции. Латентную инфекцию удавалось обострить с помощью вируса герпеса.
Антигенная активность. В значительной степени варьирует в зависимости от типовой
и вариантной принадлежности вируса. При испытании 3-валентной инактивированной вак-
цины было установлено, что АГ А22 в 30 раз более иммуногенен, чем АГ 01. АГ типа СЗ
занимал промежуточное положение (28). Для создания одинакового защитного эффекта тре-
бовалось 220 нг АГ типа А (43, 45). Область 140-160 капсидного белка VP1 ВЯ способна
вызывать образование ВНА у КРС. Однако иммунизация животных синтетическими пепти-
дами из этой области практически не защищает от заражения гомологичным вирусом (63).
В организме естественно восприимчивых животных вирус индуцирует образование типос-
пецифических ВНА, КСА и ПА. Поверхностный структурный белок VP1 ответственен за
образование ВНА, тогда как 3 других структурных белка (VP2, VP3, VP4) такой акгивно-
538
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
стью не обладают. С помощью монАТ с различной эпитопной направленностью в конку-
рентном ИФА определяется удаленность эпитопов относительно друг друга (2а).
В сыворотках естественно заболевших животных антитела можно обнаружить на 8-10-й
день после появления клинических признаков с максимальным подъемом их титра на 16-21-
й день. Затем титр КСА снижается, и к 3 мес их присутствие не устанавливают, в то время
как ВНА сохраняются в крови реконвалесцентов до 24 мес. Резистентность переболевших
животных к повторному заражению связана (коррелирует) с титром ВНА.
ВЯ обладает свойствами преципитиногена, поэтому РДП можно использовать для опре-
деления его типов и вариантов, изучения АГ структуры. Сыворотки крови животных-
реконвалесцентов не теряют свою преципитирующую активность в течение 3 лет при 4°С.
Антигенный спектр отдельных вариантов ВЯ в пределах одного и того же типа различа-
ется по широте. Например, вариант 02 индуцирует АТ, эффективные как против гомоло-
гичного вируса 02, так и против О1. При этом АТ против О1 образуется больше, чем про-
тив варианта 02. Все варианты, относящиеся к типу А, индуцируют в значительной степени
образование АТ н против гетерологичного варианта. При сравнительном изучении АГ ак-
тивности 7 шт. ВЯ типа САТ1 установлено различия между ними как по общему уровню
образования АТ, так и по вируснейтрализующей эффективности (по данным сероредукцин
бляшек). Наибольшую иммунную индукцию проявили шт. SR, N96, N389 (13).
Экспериментальная инфекция. К экспериментальному заражению чувствительны как
естественно восприимчивые, так и лабораторные животные, морские свинки, мышата-
сосуны, новорожденные крольчата, котята и хомяки до 60-дн возраста. Адаптационные
свойства эпизоотического ВЯ зависят от особенности штамма и системы культивирования.
Наиболее быстро он адаптируется к однослойной культуре клеток почек телят, организму
мышат и крольчат и более медленно - к переживающей ткани эпителия языка КРС. Культи-
вирование вируса в развивающихся КЭ удается с большим трудом и лишь в отношении не-
которых штаммов и после серии перемежающихся пассажей. У летучих мышей проявляют-
ся клинические признаки заболевания не ранее 7 дн, сходные с таковыми у белых мышей, с
особенностями, присущими их строению. Гибель наступала на 9-11-й день (55).
Культивирование. ВЯ можно поддерживать серийными пассажами на естественно-
восприимчивых животных (КРС, свиньях, овцах, козах), однако данный метод дорог и свя-
зан с опасностью выноса вируса за пределы учреждения. Поэтому чаще в лабораторных ус-
ловиях стандартные и полевые штаммы вируса поддерживают на морских свинках, белых
мышатах-сосунах, крольчатах и культуре ткани. Наиболее чувствительны к вирусу культура
клеток первично-трипсинизированной почки коровы, овцы, свиньи и перевиваемой линии
ВНК-21. ЦПД проявляется через 6 ч и достигает максимума к 18-24 ч после заражения. Из-
менения клеток сопровождаются нарушением межклеточных связей, конденсацией субстра-
та цитоплазмы, округлением клеток и распадом цитоплазмы. Вирус размножается в цито-
плазме. В ядрах происходит укрупнение глыбок хроматина, расположение его вдоль ядер-
ной мембраны, а затем пикноз или рексис ядра. ЦПД ВЯ развивается без образования
включений и сим пластов. ВЯ относится к вирусам с коротким циклом репродукции, поэтому
клеточный монослой быстро разрушается и обычно через 24 ч клетки отторгаются от стекла.
Следует иметь в виду, что длительное пассирование ВЯ на лабораторных (естественно-
восприимчивых) животных, а также в культуре ткани ведет к аттенуации вируса (при сохра-
нении исходной типовой принадлежности) и непригодности такого вируса в качестве произ-
водственного штамма при изготовлении инактивированной вакцины. Экспозиция клеток
ВНК-21 в суспензии с pH 7,6-7,7 стандартизует их исходное состояние перед инфицирова-
нием ВЯ, но и повышает чувствительность клеток к различным типам вируса (53, 54).
Вирус хорошо размножается в культуре клеток почек чувствительных животных, в
культуре эксплантатов эпителия языка н рубца КРС и в некоторых перевиваемых линиях
539
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
клеток: ВНК-21, JBRS-2, JFFA-3, СПЭВ и др. В культуре клеток вирус размножается, как
правило, с выраженным ЦПД и накапливается в титре 107-108 ТЦДзо/мл. Соотношение ин-
фекционных и физических частиц в культуральных препаратах вируса достигает 1:100-
1:1000, что при высокой множественности заражения может обусловливать аутоинтерфе-
ренцию. Присутствие глютамина (0,03%) и глюкозы (0,2%) в сбалансированном солевом р-
ре обеспечивало высокое накопление ВЯ в клетках ВНК-21 (Ю8БОЕ/мл).
Размножение ВЯ в культуре клеток - наиболее перспективный и широко применяющий-
ся метод получения больших количеств вируса, необходимых при изготовлении диагности-
кумов, инактивированных и живых вакцин. При изготовлении инактивированной противо-
ящурной вакцины вирус также культивируют в переживающей ткани эпителия языка здоро-
вых животных по методу Френкеля.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Основным источником инфекции являются :
животные в острой стадии болезни, выделяющие в окружающую среду заразное начало со •
слюной, лимфой из лопнувших афт, молоком, мочой и каловыми массами. С момента зара-
жения и до появления первых симптомов болезни обычно проходит от 1-го до 7, а иногда и
до 14 дн. За это короткое время больное животное успевает контаминировать вокруг себя
корм, подстилку, кормушки, воду, поилки, молочную посуду, инвентарь (лопаты, вилы,
скребницы, метлы), стены и полы помещения, одежду и обувь обслуживающего персонала.
Выделяется вирус и с выдыхаемым воздухом.
Наиболее часто заражение происходит вследствие непосредственного контакта больных \
животных со здоровыми в скотных дворах, на рынках, пастбищах, трассах перегона скота
на пастбища и т.д. В распространении ящура серьезную роль играют продукты и сырье жи- :
вотного происхождения: молоко, мясо, субпродукты, кровь, кости, кожа, шерсть, копыта и
рога от убитого скота. Навоз, подстилочный материал, сено, солома, отруби, загрязненные
выделениями больного скота, - источник ящурной инфекции. При несоблюдении правил са-
нитарной и личной гигиены люди, ухаживающие за больными животными, могут перено-
сить ящур на руках, одежде и обуви, а также на предметах ухода за скотом. Переносчиками
инфекции могут быть и невосприимчивые к ящуру животные, например собаки, кошки, ло-
шади, а иногда и куры, утки, гуси, воробьи и другие птицы.(77,78,83).
Спектр патогенности в естественных условиях. К ВЯ восприимчивы КРС, свиньи,
овцы, козы, верблюды, буйволы, яки, олени, косули, джейраны, сайгаки, туры, лоси, каба-
ны, антилопы и другие парнокопытные. В естественных условиях могут заражаться и бес-
симптомно переболевать собаки и кошки. Вирулентность полевых штаммов варьирует: одни
из них чаще инфицируют свиней, чем рогатый скот, другие - наоборот. Есть сведения, что
ящуром болеют слоны, медведи и зебры. Человек поражается редко при употреблении не-
обезвреженного молока от больных животных.
О механизме естественной изменчивости вируса ящура. Накопившиеся по данному
вопросу факты свидетельствуют о неразрывной связи персистенции вируса и его эволюции.
Существует мнение, что ВЯ изменяется исключительно по двум свойствам вирулентности и
антигенности (29). Во время персистентной инфекции наблюдается быстрая эволюция этого
вида. Точечные миграции происходят со скоростью 0,910‘2-7,4-10‘2 замещений на один нук-
леотид в год. Мутации сопровождаются изменениями антигенности (34а). Проведенный
анализ последовательности нуклеотидов РНК 5-и штаммов ВЯ показал вероятность измене-
ний в аминокислотной последовательности белков в результате точечных мутаций в соот-
ветствующих участках геномной РНК. На основании полученных данных построено генеа-
логическое древо 5 исследованных изолятов ВЯ, которое оказалось достаточно близким к
таковому, построенному другими способами (34).
540
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
Основным результатом “иммунологических” мутаций ВЯ во время эпизотических
вспышек (антигенный дрейф) являются изменения аминокислотной последовательностей
VP1 (42а). Аминокислотные замены, вероятно, наиболее часто происходят в неструктуриро-
ванных антигенных участках, расположенных вне а-спиральных и b-структур (38а).
ДИАГНОСТИКА
Диагностика ящура основана на эпизоотологических данных, клинических признаках
болезни, патологических изменениях и лабораторных исследованиях. Подозрение на ящур
вызывает любое заболевание восприимчивых животных, характеризующееся появлением
везикулярной сыпи в ротовой полости, на конечностях и вымени, повышенной саливацией,
чмоканьем, затрудненным приемом и пережевыванием корма, а при осмотре ротовой полос-
ти - обнаружением афт и эрозий. Кроме того, обращают внимание на продолжительную
хромоту, афты на венчике и в области межкопытной щели, иногда спадение рогового баш-
мака, афты на сосках и болезненность последних при доении и сосании с сильно выражен-
ным защитным рефлексом.
Эпизоотологический диагноз - высокая контагиозность, избирательное поражение толь-
ко парнокопытных. Методы лабораторной диагностики ящура варьируют в зависимости от
того, необходимы ли раннее обнаружение и типовая (вариантная) идентификация вируса
(ранняя диагностика) или обнаружение и идентификация специфических противоящурных
АТ у животных-реконвалесцентов (ретроспективная диагностика).
Выделение вируса. Эффективность выделения вируса из патологического материала
повышается при использовании методов очистки и концентрирования вируссодержащих
суспензий. Благодаря удобству выполнения, экономичности, а главное, возможности быст-
рого получения результатов, позволяющих одновременно определить типовую и вариантную
принадлежность эпизоотического вируса, чаще всего применяют РСК или РДСК. Однако,
когда доставленное количество вирусного материала недостаточно для исследования или
РСК дает отрицательный результат или неспецифическую задержку гемолиза, то ставят
биопробу на КРС (не менее 2 голов) в возрасте 18 мес, вводя 0,1 мл суспензии полученного
материала в несколько точек слизистой оболочки языка и мякишей конечностей; общий
объем испытуемого материала 2-3 мл. Появление афт на месте введения материала с после-
дующим подтверждением в РСК свидетельствует о наличии ВЯ. Однако метод дорог и свя-
зан с опасностью выноса вируса за пределы учреждения. Поэтому в диагностической прак-
тике он применяется очень редко. Чаще для биопробы используют мышат-сосунков 4-6-дн
возраста, морских свинок массой не менее 500 г и первичную культуру клеток почек телят,
поросят, ягнят, щитовидной железы КРС и перевиваемые клетки - ВНК-21, IB-RS-2. Био-
проба на мышах удобна и экономична. ИДзо испытуемого штамма на мышатах-сосунах и
крупном рогатом скоте одинаковы. Мышата-сосуны более чувствительны к вирусу ящура,
чем морские свинки. Однако необходимо иметь в виду, что оценка результатов титрования
на мышатах-сосунках нередко затруднительна.
Морские свинки легко заражаются при интрадермальном введении вируссодержащего
материала в плантарную поверхность задних лапок методом тунелирования в дозе 0,2-0,5
мл. Заражают не менее 5 голов. Первичные поражения обычно появляются через 2-5 дн (по
мере созревания). Вторичные поражения - везикулы в ротовой полости - обычно развивают-
ся при заражении штаммами, адаптированными к морским свинкам.
Для выделения вируса чаще всего используют культуру первично-трипсинизированных
клеток почек свиней или телят. Наблюдение за инфицированными культурами клеток ведут
7 дн, микроскопируя их ежедневно. Специфическая дегенерация клеток при подтверждении
её специфичности в РСК свидетельствует о наличии ВЯ в испытуемом материале.
Индикация и идентификация вируса
541
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
В качестве экспресс-метода в настоящее время широко применяется ПЦР. Эго быстрый
и чувствительный метод обнаружения ВЯ в тканях путем энзиматической амплификации
РНК гена полимеразы (42, 64, 79, 62).
РСК по 100%-ному гемолизу. Применяется для определения типов и подтипов
(вариантов) ВЯ, вызвавших заболевание животных, а также для проверки производствен-
ных штаммов ВЯ при изготовлении вакцин и лабораторных штаммов в научно-
исследовательской работе (см.“Методы лабораторной диагностики вирусных болезней жи-
вотных” (М. Агропромиздат,1986 :250-258).
Антигенное родство (R) более 70% свидетельствует о том, что штаммы по антигенным
свойствам идентичны друг другу и относятся к одному и тому же варианту, от 10 до 70% - к
различным вариантам (подтипам) и менее 10%- к различным типам.
РСК по 50%-ному гемолизу. Успешно применяют в работе научно-исследовательских
лабораторий и учреждений биологической промышленности. Разработан способ изучения
иммунного статуса вакцинированных против ящура животных в РСК. Он позволяет спе-
циалистам на уровне областных ветлабораторий проводить мониторинг за иммунным со-
стоянием стад в простой и достоверной реакции (60).
РПГА. Это простой, ускоренный, чувствительный метод идентификации ВЯ. По чувст-
вительности реакция превосходит общепринятый метод типировання ВЯ в РСК в 8-16 раз.
Сущность её заключается в том, что нагруженные АТ эритроциты агглютинируются при
контакте с ящурным АГ гомологичного типа.
Типирование ВЯ
Определение типа ВЯ методом перекрестного иммунитета. Испытание перекрестно-
го иммунитета на КРС с целью определения типовой принадлежности полевого штамма ВЯ
проводится лишь в том случае, если по лабораторным тестам обнаруживается новый тип
ВЯ, ранее не встречавшийся в стране. Определение типа ВЯ методом перекрестного имму-
нитета возможно и на морских свинках.
Штаммы считают идентичными, если вакцина предохраняет животных от развития ге-
нерализованного процесса при заражении используемыми штаммами. В случае иммуноло-
гического отличия штаммов вакцинированные животные, инфицированные гетерологичным
штаммом, заболевают генерализованной формой ящура.
При определении в культуре леток типа ВЯ его относят к тому типу, сыворотка против
которого предотвращает ЦПД. Разработан вариант универсальный эритроиммуноадсорбции
(УЭИА), позволяющий определять АГ ВЯ в более высоких титрах, чем в РСК и РПГА.
ИФА. Высокоэффективен для выявления как 146S-, так и 128-компонентов ВЯ. Этот
метод в 500 раз чувствительнее РСК при исследовании проб афтозного эпителия. Установ-
лена высокая степень специфичности и чувствительности ELISA для идентификации и ти-
пирования ВЯ всех 7 серотипов в эпителиальных тканях. Установлена высокая чувстви-
тельность сэндвич-варианта ИФА (на основе щелочной фосфатазы), который по эффектив-
ности превосходит в 207-219 раз, а с хромогенными субстратами - в 4-64 раза (7).
ИФА может быть пригодной в системе лабораторной диагностики ящура при исследо-
вании диагностических штаммов. Для выявления АТ к ВЯ в ИФА можно использовать про-
бы крови, высушенной на фильтровальной бумаге. Первоначальный объем гепаринизиро-
ванной крови равен 7,65 мкл. (25).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Ретроспективная диагностика с целью определения типа и варианта ВЯ, вызвавшего в
прошлом заболевание животных, основана на идентификации АТ в РПСК, РДП и РРИД,
НРИФ, реакции серозащиты на мышатах и PH в культуре клеток.
Для достоверного выявления АТ и определения их типовой специфичности пробы сыво-
ротки крови должны быть взяты не ранее 7 дн с момента появления у животных признаков
542
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
везикулярного заболевания или проведения вакцинации. На исследование следует направ-
лять 5-10 проб сыворотки от каждой возрастной группы. На партию проб сыворотки, на-
правляемой для исследования, оформляют сопроводительный документ.
Выявление, идентификация типовой специфичности и количественное определение АТ к
ВЯ в РРИД, РПСК, РНСК и НИФ могут проводиться в условиях обычных ветеринарно-
диагностических лабораторий и не требует создания более строгого санитарного режима,
поскольку проводятся с неинфекционными материалами.
Для обнаружения ингибиторных (неполных) АТ применяют РНСК (или РПСК). Эти АТ
отличаются высокой авидностью. Они формируют комплекс АГ-АТ, не адсорбирующий
комплемент. Связываясь с АГ быстрее полных АТ, они блокируют его, но не связанный при
этом комплемент в присутствии гемолитической сыворотки вызывает лизис эритроцитов.
Ингибиторные АТ обнаружены сейчас при многих инфекциях, в том числе при ящуре. Дан-
ная реакция применяется для определения типов ВЯ по сывороткам переболевших живот-
ных, а также для обнаружения постинфекционных и поствакцинальных АТ.
Типироваиие ВЯ по сывороткам переболевших животных в РДП. В реакции ис-
пользуют: АГ из очищенного и концентрированного лапинизированного ВЯ типов 0, А, С и
др.; сыворотки от переболевших ящуром животных (не пригодны для исследования в РДП
сыворотки крови животных, дважды переболевших ВЯ различных типов), типоспецифиче-
ские сыворотки; агаровая среда.
Постановка реакции: в центральные лунки 7-ми 6-угольных систем на агаровых пла-
стинках помещают соответствующие АГ типов 0, А, С и др. В периферические лунки поме-
щают пробы испытуемых и контрольных сывороток. Затем пластинки выдерживают во
влажной камере при 37°С. Реакцию учитывают через 16, 24, 48 и 72 ч после постановки.
Положительная реакция характеризуется образованием одной или двух четких линий пре-
ципитации между лункой с АГ и сывороткой. ВЯ относят к тому типу, с АГ которого испы-
туемая сыворотка дает положительную реакцию. В случае обнаружения в сыворотках пре-
ципитирующих АТ к 2 и более типам вирус относят к тому типу, с АГ которого испытуемые
сыворотки дают наибольший процент положительных реакций.
РРИД. Сущность её заключается в формировании зоны специфической преципитации
вирусных антигенов антителами, включенными в состав агарового геля. Реакция является
типоспецифичной, позволяет провести исследования по типированию и количественному
определению постинфекционных и поствакцинальных АТ.
Компоненты реакции: 1) антигены эталонные 7 типов ВЯ и других везикулярных болез-
ней (ВБС 0-72 и Т-75, ВЭС А-48 и С-72, ВС Индиана и Нью-Джерси); 2) сыворотки эталон-
ные 7 типов ВЯ и других везикулярных болезней (ВБС 0-72 и Т-75, ВЭС А-48 и С-72, ВС
Индиана и Нью-Джерси); 3) агар белый или импортный фирм “Серва” или “Дифко”, азид
натрия или кислота карболовая, вода дистиллированная, БФР с pH 7,2-7,4. АТ, обнаружен-
ные в испытуемой пробе сыворотки, относят к тому серотипу, с АГ которого они дали поло-
жительную реакцию. Их предельным титром считают максимальное разведение испытуемой
сыворотки, с которым наблюдается положительная реакция. Титры сыворотки, полученные
от вакцинированных животных, зависят от активности использованной вакцины, кратности
и сроков ее применения и физиологических характеристик животного (возраст, вид). У 1-
кратно вакцинированного против ящура взрослого КРС обычно титры через 30-90 дн после
введения вакцины находятся в диапазоне 1:20-1:80, а после 2-кратной иммунизации в эти
же сроки титр возрастает до 1:80-1:160. Титр у молодняка, как правило, в 2-3 раза ниже,
чем у взрослых животных. У свиней и овец титры ниже, чем у КРС. После переболевания
животных титры значительно выше, чем после вакцинации, и обычно превышают 1:160.
Встречный ИЭФ. Может быть с успехом использован для серотипирования ВЯ. Чувст-
вительность его такая же, как и РДП, но учет результатов производится через 1,5 ч, тогда
как реакция иммунодиффузии требует не менее 24 ч.
543
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
НИФ. При ящуре позволяет проводить дифференциацию АТ переболевших животных
от вакцинированных. В справочнике “Диагностика вирусных болезней животных”, 1992 г.
приводится подробная методика постановки данной реакции при ящуре. Выявление в НИФ
специфического свечения свидетельствует о наличии в испытуемой сыворотке постинфекци-
онных антител, т.е. о переболевании животного ящуром.
С помощью РИГА определяют напряженность поствакцинального иммунитета у КРС.
Установлена корреляция результатов, полученных при РПГА и PH. С помощью монАТ в PH
или ELISA определяют не нейтрализуемые варианты ВЯ. В зависимости от чувствительно-
сти к монАТ все варианты ВЯ разделены на 3 группы. Варианты 1-й группы имели мутации
преимущественно в области 140-160 VP1; варианты 2-й и 3-й групп мутируют в области 204
VP1 и 70, 139, 195 VP3 соответственно. Определены две большие АГ зоны вируса: чувстви-
тельная и нечувствительная к трипсину (VP1 140-160 и VP3 соответственно) (8,31).
Реакция серозащиты на мышатах-сосунах. Используется для определение типа ВЯ по
сывороткам животных-реконвалесцентов. Для постановки реакции используют эталонные
(адаптированные к организму 4-7-дн мышат-сосунов) штаммы ВЯ различных типов. Штам-
мы должны быть типоспецифическими и иметь титр на мышатах-сосунах не ниже 7 1g в 1 г.
ВЯ, вызвавший заболевание животных, относят к тому типу, при заражении которым
привитые сывороткой мышата остались живы. Необходимым условием достоверной оценки
реакции серозащиты является обязательная гибель контрольных мышат, которым введен
вирус, в то время как контрольные мышата, которым вводили только испытуемую сыворот-
ку, должны выжить.
PH в культуре клеток. Для постановки PH необходимо иметь 24 пробирки культур
клеток. Отсутствие ЦПД в пробирках, в которые внесена смесь вируса с сывороткой, при
четко выраженном ЦПД в контрольных пробирках, указывает на наличие в исследуемой
сыворотке АТ против данного типа ВЯ. Специфичность ЦПД можно установить путем ис-
следования в РСК культуральной жидкости, полученной из пробирок с выраженным ЦПД.
Дифференциальная диагностика. При дифференциальной диагностике ящура необхо-
димо исключить ВС, ВБС, ВЭС, катаральную лихорадку овец. Для дифференциальной ди-
агностики в лабораториях используют диагностические наборы, выпускаемые биологиче-
ской промышленностью, для ящура и ВБС.
Иногда в материале от людей, подозреваемых в заболевании яшуром, выделяли возбу-
дителя энтеровирусной инфекции человека - вирус Коксаки серотипа В. Вирус вызывал ви-
димое ЦПД в перевиваемых культурах клеток в течение 24 ч, имея икосаэдрическую форму,
размером 20-30 нм и вызывал гибель мышат при интрацеребральном заражении (22).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Продолжительность иммунитета у животных, переболевших ящуром, составляет 8-12
мес, у свиней - 10-12, у овец - около 18 мес. Отдельные животные-реконвалесценты приоб-
ретают некоторую устойчивость против гетерологических типов вируса. При ящуре возни-
кает тканевый и гуморальный иммунитет. Местный иммунитет формируется раньше, чем
гуморальный, но он короче. Поэтому при реинфекции через 4-7 мес на месте введения виру-
са образуются афты, но генерализации процесса не происходит. Установлено, что при ящуре
комплекс защитных реакций организма начинает действовать с момента контакта возбуди-
теля со слизистыми оболочками, обусловливая определенную закономерность в развитии
специфического местного иммунитета. На белых мышах BALB/c и морских свинках, имму-
низированных одинаковыми дозами антигена ВЯ нескольких штаммов типа SAT-1, проде-
монстрирована связь показателей тестов бласттрансформации, ИФА и сероредукции, кото-
рая определялась статистически значимыми коэффициентами корреляции. Эффективность
первичной иммунной реакции организма на клеточном уровне может количественно детер-
минировать развитие гуморального фактора иммунитета (14).
544
Глава ХШ. Family Picomavirida Пиксрнавирусвые инфекции
Для обеспечения устойчивого благополучия страны по ящуру в РФ реализуется система
мероприятий, приоритетными в которой являются предупреждение заноса ВЯ на террито-
рию, а в районах высокой степени риска - вакцинопрофилактика с централизованным обес-
печением регионов вакцинами за счет федеральных противоэпизоотических средств (56, 57,
57а, 66, 67, 71,72,22,23, 84, 85).
При парентеральной вакцинации КРС противоящурной вакциной уровень местного им-
мунитета в большей степени, чем гуморального, зависит от концентрации иммунизирующе-
го антигена вируса и количества адъюванта в прививной дозе. Ревакцинация животных да-
же меньшим, чем прививаемая доза, объемом вакцины способствует усилению местного
иммунитета, в то время как уровень ВНА остается неизменным. Эго, видимо, указывает на
относительную автономность местного иммунитета у КРС при профилактической вакцина-
ции. К концу 1-й нед вырабатываются ВНА, а спустя еще несколько дней - КСА и затем ПА.
ВНА сохраняются в течение нескольких месяцев, а КСА и ПА - 2-3 мес.
У животных-реконвалесцентов в отличие от привитых инактивированной вакциной от-
сутствуют АТ к вирусиндуцированной полимеразе.
Иммунитет обычно длится около года и даже дольше. Он еще сохраняется после исчез-
новения ВНА и зависит от свойств инфицирующего штамма вируса, а также от реактивно-
сти животного и всегда направлен против гомологичного типа вируса.
Доказана возможность пассивной передачи поствакцинального клеточного иммунитета.
Показано участие цитотоксических лимфоцитов в ранние сроки формирования противо-
ящурного иммунитета. Клеточный иммунитет связан с функционированием лимфоцитов,
рецепторного аппарата и соединения их с антигеном. За клеточный иммунитет отвечают Т-
клетки (50, 58, 73, 74).
В Российской Федерации и странах СНГ для специфической профилактики ящура при-
меняют гидроокисьалюминиевую вакцину, которую готовят из инактивированного вируса,
культивируемого в переживающей ткани слизистой оболочки языка не иммунного к ящуру
КРС (метод Френкеля), а также из вируса, полученного в суспензионной культуре клеток
ВНК-21/13. Вакцины содержат инактивированный формалином вирус и сообщают иммуни-
тет взрослым животным до 4 мес.
Вирус в производственных условиях концентрируют ультрафильтрацией, полиэтиленг-
ликолем или полиэтиленоксидом, что дает возможность повысить концентрацию антигена в
десятки и сотни раз (44).
Первая инактивированная вакцина была предложена Вальдманом и Кобе в 1938 г. В
дальнейшем эта вакцина была модифицирована в различных вариантах (81). В настоящее
время для крупного и мелкого рогатого скота, как правило, применяют сорбированные, а
для свиней - эмульгированные вакцины. Трехвалентная ГОА-формолвакцина из ВЯ типа А
№550, О №1618 и С №564 авирулентна, безвредна, стерильна и отличается выраженной
иммуногенной активностью (74, 75, 76).
Выраженный иммунитет у привитых животных наступает на 10-14-й день и достигает
максимума через 3-4 нед. Иммунитет у взрослых животных длится 6-12 мес. КРС обычно
ревакцинируют 1 раз, свиней - 2 раза в год. ВНА в сыворотке крови появляются уже к концу
1-й нед, достигают максимального титра в 3-5 нед, затем их концентрация постепенно сни-
жается. При систематической иммунизации взрослых животных против ящура инактивиро-
ванными моновакцинами у них поддерживается стабильный уровень АТ не ниже 4,5 log2 на
протяжении 6 мес. В течение последующих 3 мес идет медленное снижение титров АТ до
3,5-3,7 log2 к концу 6-го мес, что может служить основанием для уточнения схемы вакцина-
ции молодняка этого возраста (56).
Колостральный иммунитет хорошо выражен, однако телята, не получавшие молозиво,
не имеют сывороточных АТ, несмотря на то, что коровы были иммунизированы. После
35 Зак. № 171
545
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
приема молозива титр АТ в сыворотке телят больше, чем в сыворотке матерей. АТ у телят
сохраняются в течение 5 мес (39), хотя пассивная защита продолжается до 3-х мес (16).
Продолжительность колострального иммунитета также зависит от типа вируса. Материн-
ские АТ могут мешать образованию иммунитета у потомства.
Механизм протективного иммунитета к ВЯ in vivo отличается от механизма нейтрали-
зации вируса in vitro (38). Образование ВНА у животных-реконвалесцентов вызывают толь-
ко полные вирионы, (1405-частицы), а не их компоненты. На этом основании об иммуно-
генности инактивированных вакцин можно судить по концентрации 140S антигена (32).
Опубликован ряд сообщений по усовершенствованию препаратов для профилактики
ящура. Разработаны методы оценки производственных штаммов ВЯ для инактивированных
вакцин. Примененный принцип оценки штаммов и метод их отбора рекомендован авторами
для штаммов любого назначения при условии корректировки критериев оценки и коэффи-
циентов их значимости (21).
Замена традиционных моновалентных инактивированных вакцин на би- и трехвалент-
ные вакцины, приготовленные из очищенного концентрированного и инактивированного
вируса типов А22, О1 и Азия1, формирует у привитых животных напряженный и продол-
жительный иммунитет более 12 мес после однократной прививки, в т. ч. у молодняка КРС
на фоне колострального иммунитета (9,70).
Универсальная эмульсионная вакцина создает достаточно, напряженный иммунитет у
супоросных свиноматок и обеспечивает их защиту от экспериментального ящура в первые
дни после опороса при двукратной прививке. Поросята, родившиеся от 2-кратно привитых
свиноматок, в большинстве своем не заболевали и оставались живы при контакте с зара-
женными матками. Введение таким поросятам инактивированной вакцины в 3-дневном воз-
расте сопровождается накоплением активных противоящурных АТ (20).
Молодняк, родившийся от иммунных животных, получает пассивно антитела с молози-
вом. Молодняк, полученный от многократно вакцинированных коров, имеет достаточно на-
пряженный иммунитет в течение 4 мес.
В настоящее время вакцинология переживает этап своего бурного развития. Так, для
борьбы с ящуром на смену традиционным инактивированным вакцинам, отличающимся
высокой профилактической эффективностью при их систематическом и массовом примене-
нии, разрабатываются новые препараты. Главная проблема при этом состоит в том, что со-
временная технология изготовления вакцин не обеспечивает иммунного ответа адекватного
по напряженности с иммунным ответом при естественной ящурной инфекции (9).
Быстрая защита от ящура супоросных и подсосных свиноматок обеспечивается препара-
том из культурального ВЯ, инактивированного димером ЭИ, очищенного и концентриро-
ванного ПЭГ. Стерильный антиген вводили животным внутримышечно за ухом. Контроль-
ное заражение проводили свиным афтозным вирусом в дозе 104 ИДзо/0,2 мл под слизистую
языка или венчик (59).
В настоящее время в качестве инакгивантов используют ацетилэтиленимин (АЭИ) и би-
нарный этиленимин (Б ЭИ, диэтиленимин), поскольку они в отличие от формалина позволя-
ют готовить более авирулентные вакцины, а АЭИ менее токсичен, чем БЭИ.
Кроме обычно применяемых методов инактивации ВЯ формальдегидом, предложен
оригинальный метод инактивации его собственной эндонуклеазой. Для этого вирусную сус-
пензию смешивают с 0,5М и 0,1М трис-буферным р-ром, pH смеси доводят до 8,5, после че-
го ее фильтруют через мембранный фильтр (0,45 мкм) и инкубируют при температуре 26
или 37°С. Через 4-5 ч инкубации при 37°С инфекционная активность вируса полностью по-
давляется. Для такой инактивации вируса при меньшей температуре необходимо более дли-
тельное время инкубации. РНК вируса в этих условиях полностью разрушается. В отличие
от формолвакцины в инактивированной эндонуклеазой вакцине полностью сохраняются
546
Глава ХШ. Family Picomavinda Пикорнавирусные инфекции
эпитопы протективного АГ вируса (16). Установлено, что иммуногенность инактивирован-
ной вакцины в значительной степени зависит от наличия и вида адъюванта. Включение
ГОА в состав вакцины увеличивает ее активность в десятки раз (26). Для крупного и мелко-
го рогатого скота в качестве адъюванта применяют ГОА с сапонином (41).
Для свиней применяют инактивированные вакцины. Естественный иммунодефицит у
свиней удалось преодолеть благодаря применению масляных адъювантов. Напряженный и
продолжительный иммунитет у свиней наступал после 2-кратной вакцинации. Свиней при-
вивают начиная с 2-мес возраста и ревакцинируют спустя 4 мес. Колостральные АТ подав-
ляют вакцинальный иммунитет, особенно если поросят прививают в первые 30 дн жизни.
Вакцины с масляным адъювантом создавали и у телят более выраженный и продолжитель-
ный иммунитет, чем ГОА-вакцина (46, 47, 47а). Оказалась возможной одновременная вак-
цинация КРС против ящура и чумы. Если инактивированную поливалентную ГОА-вакцину
против ящура и живую - против чумы вводить одновременно подкожно в область шеи с раз-
ных сторон, то образуется такой же иммунитет, как и при раздельной вакцинации против
каждого заболевания (36). Живые вакцины против ящура не разработаны. Многочисленные
попытки в этой области не дали положительных результатов. Аттенуированные штаммы,
как правило, оказывались или слабоиммуногенными или же реверсибельными.
Разработан метод оценки активности противоящурной вакцины по уровню ВНА. Уста-
новлена зависимость от активности вакцины уровня ВНА которая выражена графически. На
основании этой зависимости составлены вспомогательные таблицы, позволяющие по уста-
новленному уровню ВНА определить иммуногенную активность вакцины (57, 57а, 58).
Генно-инженерные и синтетические вакцины. Сконструирован гибридный белок,
содержащий две АГ детерминанты структурного белка VP1 ВЯ, встроенный белок pho Е,
экспонированный на наружной мембране Е. coli. Иммунизация морских свинок таким бел-
ком индуцировала высокий уровень антител и полностью защищала их от вирулентного ви-
руса (24). Эти белки инициируют образование ВНА и обеспечивают защиту животных (15).
Находит реальное воплощение идея создания синтетической противоящурной вакцины.
Об этом свидетельствуют результаты поисков последних лет. Так, синтезирован пептид
VP1-(142-158)-MAP (Multiple Antigen Peptide Sistem) состоящий из 2-х частей - лизиновой
матрицы, включающей три уровня остатков лизина , следующих друг за другом, и 8 фраг-
ментов последовательности аминокислот VP1-(142-158) ВЯ А2255о. Введение морским
свинкам 20 мкг пептида с адъювантом Фрейнда защищало их от заболевания ящуром при
заражении гомологичным вирусом в дозе 500 ИД50. Овец иммунизировали 1-кратно в дозе 1
мг. Прн 2-кратном введении пептида КРС в дозе 1,5 мг с неполным адъювантом на основе
синтетического масла индуцировался высокий уровень ВНА. Как после первой (титр ВНА
5,3-11,0 log2 НД50/0Д мл), так и после второй иммунизации (титр ВНА 10,2-11,0 log2
НДдо/одМл) заражение гомологичным вирусом не вызывало заболевания животных (6).
Изучены АГ свойства более 40 синтетических пептидов и на основании проведенных
исследований для разработки противоящурной вакцины рекомендованы пептиды - 142-155
и 136-159. Разработаны критерии выбора синтетических антигенов-аналогов аминокислот-
ных последовательностей различных фрагментов VP1 ВЯ А22, предложена схема оценки их
иммуногенных свойств (10). Описано конструирование рекомбинантных плазмид, в которых
единичные или тандемные, АГ детерминанты ВЯ соединены с С-концевым фрагментом
фактора некроза опухолей человека (69).
Оценка поствакцинального иммунитета. Максимальные титры (в PH) поствакци-
нальных АТ обычно отмечаются на 28-й день после вакцинации; их уровень не зависит от
разведения вакцины (в диапазоне 1:1-1:16) и прямо коррелирует со специфическим протек-
тнвным иммунитетом (35).
35*
547
Глава ХШ. Family Picomavirida Пикорнавирусные инфекции
На модели морских свинок показано, что иммуногенность противоящурной вакцины
может быть оценена в реакции сероредукции бляшек без контрольного заражения живот-
ных. Эта оценка позволяет определить необходимую дозу испытуемой вакцины для обеспе-
чения гарантированного иммунитета (3).
Показана коррелятивная связь между первичным иммунным ответом на клеточном
уровне (тест бласттрансформации) и степенью развития гуморальной иммунной реакции
(тесты иммуноферментной сероредукции) (13). Реакция гиперчувствительности замедленно-
го типа позволяет изучить in vivo развитие противоящурного иммунитета в ранний период
после вакцинации (68). Показано, что у взрослого КРС в зоне высокого радиоактивного за-
ражения после иммунизации концентрированной противоящурной вакциной образуются
специфические АТ, однако иммунитет при этом менее напряженный и более короткий по
сравнению с необлученными животными (4).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПАрхипов Н.И. Патологоанат. диагн. вир. бол. жив. М Колос,1984. 2.Быкова ЛА. н др. Матер, н. конф. ВНИВВИМ,
Покров,1992 :177. 2а.Глобенко ЛА. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, Владимир,! 995. З.Гневашев В.М. и др. Сб. н. тр.
ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :73. 4.ДороговцевАА и др. Мат. н. конф. ВНИВВИМ, 1995, 4, 2 :357. 5.Дудников Е.К. и
др. Мат. н. конф.ВНИВВИМ,1992 :186. б.Луговский А.А. н др. Биоорганическая химия, 1992,18, 7 :942. 7.Мищенко
В.А. и др. Вопр. вирусол., 1991, 36,4 :341. 8.Мищенко В.А. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, 1995 :152. 9.Михалшпин В.В. и
др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ 1995 :217. Ю.Мудрак Н.С. Автореф. канд. днсс., ВНИИЗЖ, 1993. П.Перевозчиков В.А. н др.
Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :3. 12.Пономарев А.П. и др. Автсреф. кавд. дисс., ВНИИВВиМ, Покров, 1994.
13.Рахмангулов М.Т. н др. Матер, н. конф., Покров, 1992 :182. 14.Рахмангулов МТ. и др. Сб. н. тр., ВНИИЗЖ, 1995
:77. 15.Сатина Т.А и др. Сб. н. тр., ВНИИЗЖ, 1995 :52. 16.Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, Урожай.1993.
17.Сюрин В.Н. н др. Метод, лаб. диагн., М., Атропромиздат, 1986. 18.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол жив., М. ВО
Агропромиздат, 1991. 19.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М, Колос, 1979. 20.Толокнов АС. н др. Труды
ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :69. 21.Черняев Ю.А и др. Сб. н. тр., ВНИИЗЖ, 1995 :236. 22.Шажко Ж.А. и др. Сб. н.
тр. ВНИИЗЖ, 1995 :94. 23.ШажкоЖА и др. Сб. н. труд. ВНИИЗЖ, 1995 ТОО. 24.Akterberg М. et.al. Vaccine, 1990, 8,
5 :438. 25.Armstrong R.M et.al. J Virol Meth, 1991, 34, 2 :181. 26.Bauer K.et.al. Berl munch tierar Wschr, 1985, 98 :247.
27.Baxt et.al. J Virol, 1984, 51 :298. 28.BladcL.et.al. Resin Veter Sc, 1986, 40 :303. 29.Cahon D. Me. Arch of Virol, 1981,
69 :23. 29a.Cheung A et.al. J Virol, 1983, 48 :451. 30.Choudhuru B. et.al. Med J anim Health, 1990, 29, 2 :175. 31.Crowtter
J.R. et.al. Session Bresta, Staly, 1984 :26. 31.Grubman M.J. etal. Virology, 1987,158 :133. 32.Fleming P. J Gen Virol, 1971,
13 :385. 33. Feifelstock D. etal. J Gen Virol, 1992, 73, 12 :3307. 34.Franco R. et.al. Int J Biochem, 1992, 24, 2 :325.
34a.Gebaner F. etal. J Virol, 1988, 62 :20. 35.Gugin L.et.al. Lucr Inst cer vet si bioprepr Posteuer, 1991, 19 :13. 36.Hedger
R.S. et.al. Trop Anim Heath and Prod, 1986, 18 :21. 37.Hamblin C. etal. Veter Microb, 1984, 9, 5 :435. 38.Kitson J.D. et.al.
Virology, 1990, 179 :26. 38a.Krebs et.al. Arch Virol, 1991, 120 :135. 39.Lauemandie B. et.al. Buoffise int epizoot, 1975, 83
:337. 4O.Matenn M. et.al. Virology, 1988, 167: 113. 41.Mongeot H. et.al. Bull Office int epizoot, 1979, 91 :3. 42.Meyer R.F.
et.al. J Virol Meth, 1991, 34, 2 :161. 42a.Murhammer D. Biotechnol., Progr., 1990, 6, 5 :391. 43.Onldridge E. etal. J Biol
Standardiz, 1984,12 :4. 44.Oostrum J. et.al. J Virol, 1985, 56, 439. 45.Paranjape S. etal. Curr Sd, 1987, 56 :23. 46.Parry N.
<l.al. Nature, 1990, 347, 6293, 569. 47.Raul C.O. Bull Off int epizoot, 1978, 89 :1015. 47a.Rawlands D et.al. Nature, 1983,
306,59,44 :694, 48.Saiz J.C. et.al. Virus Res, 1989,13 :45. 49.Smitsaart E.N. etal. Vet Immun and Immunpathol., 1990, 26
:251. SO.Stave J.W. et.al. J Cell Biochem, 1986, 10D :229. 51.Suryanarayanaav. J Indian Inst Sd, 1993, 1 :151. 52.Curry
Stechen d.al. J Med Biol, 1992, 228, 4 :1263. 53.Пономарев А.П. и др. Тез. докл Всерос. н.-пр. конф., Владимир, 1995
-.137. 54.Пономарев АП. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995. 55.Рахмантгулов МТ. и др. Сб. н. тр.
ВНИИЗЖ, 1995 :77. 56.Байбиков Т.З. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир, 1995 :112. 57.Салажов Е Л. и
др. Там же, 1995 .115. 57а.Салажов Е.Л. и др. Труды ВГНКИ, 1990 :49. 58.Толокнов А.С. и др. Тез. докл. н.-пр. конф.
ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :118. 59.Улупов Н.Д. и др. Там же. 1995 :135. 60.Крученков Б А. и др. -«-:111. 61.Сухарев
О.И и др.-«-:161. 62.Щербаков АВ. н др. -«- :3. 63.Van Lierip M.J.C. et.al. J Virol, 1995, 69, 7 :4511. бЗ.Кругликов Б.А
н др. Тез. докл н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :186. 64.Ломакина Н.Ф. и др. Там же. :29. 65.Щербаков АВ.
и др. Там же. :28. бб.Захаров В.М. и др. Там же. :231. 67.Байбиков Т.З. и др. Там же. :160. 68.Толокнов АС. и др.
Там же. :114. 69.Андреев В.Г. и др. Вестн. РАСХН 1995, 3 :55. 70.Мамков Н.С. и др. Авт. св. 1743027, Опубл
27.11.95. 71.Кругликов Б.А и др. Ветеринария,1991, 10 :38. 72.Кругликов Б.А и др. Ветеринария., 1993 -.56.
73.Самуйленко АЯ и др. Ветеринария, 1982, 1 :40. 74.Самуйленко АЯ Ветеринария, 1983, 5 :46. 75.Самуйленко
АЯ Ветеринария, 1987, 3 :52. 76.Самуйленко АЯ и др. Тез. докл конф. ВНИЯИ, 1986 :108. 77.Бурдов АН. и др.
Ящур. М 1990. 78.Бурдов А.Н. и др. Ящур. Владимир. Часть 1 :5. 79.Mever R. Etal. J Virol Meth, 1991,34, 2:161.
80.Loeffler F., Frosch P., Ublemhut P. Dtschmed Wschr. 1898. 81.Frenkel H.S., BoiE. Bull Off Int Epiz, 1947,28, 1-2 :155.
82.Бойко AA. и др. Матер, к 100-лет. биопромышл., Курск, 1996. 83.Бойко А.А и др. Ветеринария, 1994. 5 :11.
84.Дръпин В.В. и др. Ветеринария., 1995, 4 :31. 85.Drygin V.V. etal. Europ Commiss FMD, ViennaAustna, Rome, 1995,
:45;61.
548
Family Arteriviridae Артеривирусные инфекции
Глава XIV. АРТЕРИВИРУСНЫЕ
ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА ARTERIVIRIDAE
Возбудитель артериита лошадей (от англ, equne arteriitis) исключен из семейства
Togoviridae и представляет теперь отдельную группу вирусов. Род Arterivinis включает
вирус артериита лошадей (прототипный вирус), репродуктивного и респираторного синдрома
свиней, геморрагической лихорадки обезьян и лакгатдегидрогеназы мышей.
Вирионы имеют диаметр 60 нм. Состоят из нуклеокапсида и наружной липосодержащей
оболочки, на поверхности которой имеются выступы длиной 12-15 нм. Геном состоит при-
мерно из 12,7 тыс. нуклеотидов (4 МД). Идентифицировано 6 открытых рамок считывания.
Ген капсидного белка расположен на 3-концевой рамке генома. В составе наружной обо-
лочки вирионов обнаружено 2 белка: Е1 с мол.м. 21 кД (гликозилирован) и Е2 с мол.м. 14
кД. Нуклеокапсид построен из РНК и одного белка С (12 кД).
Созревание вирионов происходит почкованием нуклеокапсидов через внутриплазмати-
ческие мембраны в клеточные вакуоли. В инфицированных клетках синтезируются 6 субге-
номных РНК, содержащих общую линейную последовательность около 200 нуклеотидов.
Каждая субгеномная РНК обеспечивает синтез только одного белка.
АРТЕРИИТ ЛОШАДЕЙ
Equine viral arteriitis (англ.); Infectiose Arteriitis des Pferdes (нем.);
Fievretypholde du cheval (франц.)
Вирусный артериит лошадей (ВАЛ- эпизоотический целлюлит, острая септицемия, ост-
рое воспаление легких, инфекционный артрит, "розовый глаз") - остропротекающая инфек-
ционная болезнь, характеризующаяся повышенной температурой тела, лейкопенией, конъ-
юнктивитом, отечностью век, светобоязнью, гиперемией слизистых оболочек, отеками живота
н конечностей, некротическими поражениями малых артерий и вен, у кобыл абортами.
Распространение. Впервые болезнь описал Долл (1957) на конеферме в США. Болезнь
была названа вирусным артериитом лошадей. Авторы выделили штамм вируса - Bucyrus.
До 1965 г. эту инфекцию регистрировали только на территории США. В 1965 г. Бюрки
выделил подобный вирус (штамм Bibuna) во время вспышки в Швейцарии, а в 1968-1969 гг.
автор выделил другой штамм вируса - Vienna в Австралии. В 1965 г. Мацумото и др. обна-
ружили ВНА к вирусу артрита у лошадей, полученных из Индии. Антитела к вирусу арте-
риита лошадей навдены в среднем у 15% лошадей во Франции. В Великобритании впервые
ВАЛ был зарегистрирован в 1993 г. (7).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. В естественных условиях
болезнь протекает остро и поражает лошадей независимо от возраста и пола. Она харак-
теризуется повышением температуры тела, гиперемией слизистых оболочек носа и конъюнк-
тивы, слезотечением, серозными выделениями из носа, отёками век, конечностей и живота,
мышечной слабостью, абортами и высокой летальностью. Основным клиническим призна-
ком болезни является септицемия. Инкубационный период продолжается 1-5 дн, аборт ре-
гистрируют через 10-33 дня после экспериментального заражения. Околоплодные оболочки из-
гоняются вместе с плодом. Примерно у трети больных лошадей наблюдается светобоязнь,
помутнение роговицы, кашель, затруднённое дыхание, беспокойство, слабость, шаткая по-
ходка. Заболевают лошади разных пород, с возрастом число больных среди животных уве-
личивается.
549
Глава XIV. Genus Aiterivirus Артеривирусные инфекции
Недавно описанные случаи болезни клинически проявлялись лихорадкой, депрессией, конъ-
юнктивитом с отеком вокруг глаз, выделениями из носа. Менее выраженными признаками
были отек крайней плоти, грудных желез и дистального отдела конечностей (7).
При вскрытии павших животных обнаруживают кровоизлияния на плевре и слизистых
оболочках полостей, отёк лёгких, катаральный и катарально-геморрагический энтерит и ко-
лит, кровоизлияния и инфаркты селезёнки, дегенеративные изменения в печени и почках.
При гистологическом исследовании в мелких артериях находят некротические очаги, ло-
кализованные в мышечном слое сосудов. Адвентиция отёчна. В подслизистой оболочке ки-
шечника обнаруживают тромбозы сосудов и инфаркты. У абортированных плодов заметны
геморрагии на конъюнктиве, слизистой оболочке носовой и ротовой полостей, зева, трахеи,
ЖКТ, на плевре и брюшине мелкие петехии. Ткани средостения часто отёчны и содержат от
50 до 300 мл серозной прозрачной жидкости. Микроскопические изменения находят в мелких
артериях почти всех органов, но главным образом в слепой и ободочной кишках, капсуле
надпочечников, селезёнке, лимфатических узлах. У животных, убитых на 5-6-й день после
заражения бывают поражены вены (панваскулиты). Типичные изменения стенок артерий на-
ступают на 10-й день. Вены поражаются раньше, это обусловлено интенсивным размножени-
ем вируса в селезёнке, тогда как изменения в артериях совпадают со временем развития АТ и,
следовательно, связаны с иммунной реакцией организма.
ХАРАКТРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделили в 1957 г. в США Долл, Брайне, Мак Коллум и Кроу.
Морфология и химический состав. По данным фильтрации, размер вирионов от 50 до
100 нм, а электронной микроскопии - 50-70 нм. Форма вирионов сферическая, некоторые из
них имеют хвостоподобные выступы. Толщина оболочки 3-5 нм. Внутренняя структура ви-
рионов не различается (Рис. 84). Константа сидиментации инфекционной РНК 48S, мол.м.
4,Т106 Д, плавучая плотность в Cs2SO4 - 1,65 г/см3, а в CsCl - 1,66 г/см3. В вирусе идентифи-
цировано 9 белков (VP1 - VP9). Геном представлен 10 фрагментами 2-нитевой РНК, белко-
вый капсид его состоит из 7 структурных белков (36-120 кД) (6). Мол.м. 3-х вирусспецифиче-
ских белков - VP1, VP2, VP3 - 12000, 14000, 21000 Д соответственно. В наибольшем количе-
стве содержатся белки VP7 и VP8. Белки VP1 - VP6 представляют собой гликопротеины, VP1
является фосфорилированным белком сердцевины вируса. В составе ядра обнаружены РНК и
белок VP8.
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, высокой концентрации трипсина, низкому
pH и нагреванию, особенно в присутствии 1М р-ра MgCl2 при 52°С. В инфицированных тка-
нях при -20° вирус сохраняется в течении 6 лет, при 4°С - 75 дн, быстро погибает при более
высоких температурах - в течение 48 ч при 37°С и 20 мин при 57°С.
Антигенная активность. У животных-реконвалесцентов обнаруживают ВНА и КСА.
Титр первых у экспериментально заражённых лошадей равен примерно 1:128 и удерживается
на этом уровне 4-5 нед, мало снижаясь в течение 3*/2 лет. Нейтрализующая активность сыво-
ротки возрастает в присутствии нормальной сыворотки морской свинки. Для PH используют
шт. Bucrus. АГ структура не изучена. Гемагглютинирующие свойства не установлены.
Антигенная вариабельность и родство. Известен 1 АГ/тип вируса. В настоящее время
различают 6 серотипов вируса, установлено его родство с вирусами КЛО и ЭГЛО (6).
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Продолжительность
вирусоносительства и патогенез болезни не изучены. Вирус содержится в тканях мозга, селе-
зёнки, почек, печени, лёгких, бронхиальных и мезентериальных лимфоузлов и в сыворотке
крови в течение 18 дн с момента заражения. У плодов он содержится в лёгких и селезёнке.
Вирус выделяют из спермы и гепаринизированной крови (7).
Экспериментальная инфекция. Мелкие лабораторные животные и куриные эмбрионы
не чувствительны к данному вирусу. Инфекция воспроизводится на жеребятах при внугри-
550
Глава XIV. Genus Arterivirus Артеривирусные инфекции
венном подкожном, интраназальном, интратрахельном введениях крови, плазмы, суспензии
лёгких или селезёнки больных лошадей. Через 1-5 дн у экспериментально заражённых жи-
вотных наблюдается лихорадка, потеря аппетита, слёзотечение, конъюнктивит, отёк век, се-
розные выделения из носовой полости (катаральный ринит), затруднённое дыхание, отёчность
ног и живота, болезненность суставов, поносы и общая депрессия. Через 5-10 дн развиваются
выраженная панлейкопения, васкулиты, некроз медиальной оболочки мелких артерий. Через
10, а иногда через 33 дня у жерёбых конематок происходили аборты. Примерно у 1/3 живот-
ных наблюдали светобоязнь, помутнение роговицы, кашель, затруднённое дыхание, беспо-
койство, слабость, шаткую походку. Микроскопические изменения находят в мелких артериях
и артериолах почти всех органов, но чаще в артериях ободочной кишки, капсуле надпочечни-
ков, селезёнке, лимфоузлах. Избирательно поражался медиальный слой артериальных стенок.
Доказана генетическая передача ВАЛ со спермой жеребца (3).
Культивирование. Первичное выделение вируса возможно только на культуре клеток
почки и лёгких лошади. Адаптированные штаммы размножаются в культуре клеток и других
животных: почки кролика, обезьяны макака-резус, хомяка. В чувствительных культурах кле-
ток вирус, размножаясь, вызывает ЦПИ и накапливается в достаточно высоких титрах. Для
культивирования его используют среду Игла, содержащую 1-2% сыворотки ягнят. Штаммы
ВАЛ различаются между собой по способности размножаться в культуре клеток. Так, шт.
Bucyrus по сравнению со шт. Bibuna и Vienna лучше размножался в культуре клеток. В куль-
туре клеток ВНК-21/С13, почки 2-7-дн крольчат или тестикулярных клеток лошадей вирус
вызывал образование бляшек. Вирус не образует внутриклеточных включений. Через 24 ч по-
сле инфицирования в клетках ВНК-21 обнаруживали вирусные частицы, которые отпочковы-
ваются во внутриплазматических вакуолях вблизи аппарата Гольджи.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Больные лошади - единственный резервуар ви-
руса. В естественных условиях заражение происходит аэрогенным и контактным путём, воз-
можно и алиментарное заражение.
Спектр патогенности в естественных условиях. Восприимчивы однокопытные.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании выделения возбудителя в культурах клеток, исследования
парных проб сыворотки от переболевших животных в PH и РСК проведения гистологических
исследований. В отдельных случаях ставят биопробу на лошадях. Вирус удаётся изолировать
из носоглотки лошадей с 3-4-го по 13-й день, из сыворотки крови с 1-го по 4-й день. Для вы-
деления вируса используют суспензию лёгких, селезёнки, почек, лимфоузлов и смывы из но-
совой полости и конъюнктивального мешка больных или павших лошадей. Вирус выделяют в
культуре клеток почки лошади и идентифицируют в PH. Сыворотку получают от лошадей или
пони. Следует иметь в виду, что PH ВАЛ поздними АТ является комплементзависимой и
осуществляется IgG сывороток. Ранние сыворотки не эффективны. АГ для РСК готовят нз
экстракта лёгких или печени абортированных плодов. В качестве АГ используют вируссо-
держащую культуральную жидкость, обработанную ультразвуком. Разработана РСК для ди-
агностики ВАЛ, которую можно безопасно использовать в странах, свободных от болезни.
Для этого АГ инактивируют соответственно 0,1%-ным формалином, 50%-ным эфиром, УФ
лучами и прогреванием при 70°С (4). В Великобритании разработан ELISA - метод для опре-
деления АТ (2).
Вирусный артериит необходимо дифференцировать от рннопневмонии лошадей (аборта
кобыл) и африканской чумы лошадей (в PH н РСК). Ринопневмония протекает легко, как рес-
пираторная инфекция. Часто единственным симптомом болезни является массовый аборт, на-
ступающий спонтанно в последней стадии жеребости.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
551
Глава XIV. Genus Aiterivirus Артеривирусные инфекции
У переболевших животных развивается иммунитет, продолжительность которого не изу-
чена. Для специфической профилактики предложена живая вакцина, представляющая собой
аттенуированный вирус 131-го пассажа в культуре клеток почки лошади и затем почки кроли-
ков и конечной адаптацией вируса к клеточной линии лошадиного дермиса (NBL-6). Иноку-
ляция вакцины не вызывает клинического проявления болезни (5). Лошадей можно прививать
в любом возрасте, кобыл не рекомендуют вакцинировать в последней стадии жеребости. Вак-
цинный вирус не передаётся контактно здоровым лошадям. Формолвакцина против ВАЛ ока-
залась достаточно эффективным препаратом.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., М, Колос, 1979. 2.Cook R.F. et.al. Vet Microb,
1989, 20, 2 :181. 3.Golnik W. et.al. Ned Vet,1991, 47, 10 :459. 4.Fukunaga Y. et.al. Bull Equine
Res Inst, 1993, 30 :33. 5.McCollum W.H. etal. Amer J Vet Res, 1988, 42, 7 :1218. 6.Viljoen G.J.
et.al. Gen Virol, 1989, 70 :2007. 7. Wood J.L. et.al. Vet Rec 1995, 136, 15 :381.
РЕПРОДУКТИВНЫЙ И РЕСПИРАТОРНЫЙ
СИНДРОМ СВИНЕЙ
Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС, “синее ухо, голубой аборт”,
эпизоотический поздний аборт свиней) - вирусное контагиозное заболевание главным обра-
зом свиноматок, характеризующееся абортами, наличием мертворожденных поросят, прежде-
временными опоросами или задержкой опороса, респираторными нарушениями, появлением
окрашивания кожи ушей и других органов.
С 1987 г. во многих свиноводческих хозяйствах США и Канады регистрируется патоло-
гия воспроизводства свиней, характеризующаяся поздними абортами, рождением мертвых,
нежизнеспособных или уродливых поросят и поражением органов дыхания (24, 28, 31). РРСС
вызывается артеривирусом, близким по свойствам вирусу лактатдегидрогеназы мышей. Забо-
левание появилось в конце 1980-х гг. в Северной Америке, затем в Европе. В настоящее вре-
мя РРСС является эндемичным для многих регионов мира. Болезнь отличается большим раз-
нообразием признаков, определяемых во многом общим состоянием здоровья животного. При
интродукции в неинфицированное стадо инфекция причиняет большой экономический ущерб,
но скоро переходит в умеренную или даже инаппарантную форму. В эндемичной форме вирус
продолжает долгое время циркулировать в стаде. В течение многих недель персистирует ви-
ремия. Вирус предрасположен к макрофагам и не размножается в большинстве клеточных
линий, отличается чрезвычайной генетической и АГ- вариабельностью (6, 9).
Первоначально это заболевание получило название “таинственная болезнь свиней”. В
1991 г. были опубликованы сообщения о появлении аналогичного заболевания свиней в стра-
нах Европы (48). При этом ученым из Центрального ветеринарного института в Нидерландах
был выделен новый вирус, который назвали «вирус Лелейстад» (20, 48). Вирус Лелейстад -
это РНК-содержащий, оболочечный вирус, отнесен к роду артеривирусов. Для исключения
разночтения этой болезни в различных странах мира, сессия МЭБ (апрель 1991 г.) и 2-й Ме-
ждународный симпозиум в США (1992 г.) приняли единое название - репродуктивный респи-
раторный синдром свиней (РРСС), или PRRS в латинской транскрипции.
Распространение болезни. В настоящее время можно говорить о панзоотии РРСС, хотя
многое еще не известно о ее мировом распространении. Многие страны не могут лабораторно
диагностировать болезнь или не хотят сообщать о ее появлении.
На американском континенте о болезни сообщали США и Канада. В США существуют четкие
статистические,данные по болезни. Имеются данные о ее наличии в 19 штатах. Моррисон и
552
Глава XIV. Genus Arterivirus Артеривирусные инфекции
corp. (35) сообщили о ретроспективном выявлении 364 стад животных , положительно реаги-
рующих на РРСС на основании серологических исследований только в 7-ми свиноводческих
штатах (Айова, Иллинойс, Индиана, Мичиган, Небраска и Северная Каролина). В Канаде со-
общения подтверждены серологически в 2-х штатах: Онтарио и Квебек (14, 16, 37, 38, 39). В
Европе наибольшее распространение болезни отмечали в свиноводческом поясе, охватываю-
щем западные земли Германии, Нидерланды и Бельгию. В Бельгии наибольшее количество
вспышек болезни регистрировали в апреле 1991 г. В свиноводческих хозяйствах Франции
РРСС - новое заболевание, вызываемое у свиней новым вирусом. Проявляется разнообразной
симтоматологией и сопровождается абортами, мертворождением и гибелью поросят, а также
гриппоподобными проявлениями (И, 12). Во Франции РРСС регистрировали на 169 племен-
ных фермах в период с ноября 1991 г. по май 1992 г., главным образом, в провинции Бретань
(13, 14). В Англии болезнь появилась в мае 1991 г. и широко распространилась в графствах
Хамберсайд и Северном Йоркшире, а в последующем и в Шотландии. Болезнь регистрирова-
лась также в Дании, Испании, Голландии (19, 41) и на о. Мальта. Обнаружены специфиче-
ские АТ к возбудителю в пробах крови свиней, поступившей в диагностические центры Евро-
пы из Италии и Польши (5). Серологически болезнь подтверждена на Филиппинах (34, 46).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У свиноматок болезнь
начинается с временного отказа от корма или худшей его поедаемости. В период абортов от-
мечают как повышенную до 41,5°С, так и пониженную температуру тела. У отдельных жи-
вотных наблюдают респираторные нарушения и у 1-5% - голубовато-красное окрашивание
кожи ушей, пятачка и вульвы. Существенным признаком заболевания супоросных свиноматок
периода, близкого к опоросу, являются аборты и преждевременные опоросы, возникающие
через 2-3 нед после обнаружения первых симптомов болезни. По данным английских ученых,
пораженные свиньи на первой стадии болезни проявляют признаки инфлюэнцы, в частности,
высокую температуру тела и тяжелое дыхание. Позднее ярко-красные пятна появляются по
всему телу свиньи. Спустя некоторое время окраска пятен изменяется, и они приобретают си-
ний цвет. В первые 2 нед болезни аборты могут составлять 60-70%, через 3 нед - 50 и через
18 нед - 10%. В естественных условиях клинические признаки могут значительно варьировать
от стада к стаду и не коррелировать с основной тяжестью репродуктивных нарушений. В от-
дельных хозяйствах количество абортировавших свиней на последней стадии супоросности
достигает 100% (29,30,38,39,47).
При анализе 214 пораженных хозяйств в округе Мюнстерленд в Германии установлено,
что 37% абортов произошло на 100-112 дн, 49% - на 113-116 и 14% - на 117-120 дн супорос-
ности (18). Если рассматривать крайние пределы нормальной супоросности в 113-117 дн, то
запоздалые опоросы до 120 дн могут свидетельствовать о гибели плодов в более раннем пе-
риоде, обусловленных другими инфекциями свиней с репродуктивным синдромом, такими
как парвовирусная или энтеровирусная. Однако, как правило, мумификации плодов при ост-
ром течении РРСС не наблюдается. В отдельных случаях у свиноматок наблюдали залежива-
ние, шаткую походку, паралич задних конечностей или косую постановку головы. Гибель
свиноматок не превышает 2%. После абортов свиноматки довольно быстро выздоравливают и
только у отдельных из них отмечали “послеродовые схватки”. Свиноматки повторно приходят
в охоту, однако сообщается об удлиненном сроке холостого периода. У свиноматок, опоро-
сившихся в оптимальные сроки супоросности (114,7±1,7 дн) в остром периоде болезни до
100% поросят могут быть мертворожденными.
Немецкие авторы, обработав большое количество статистических показателей поражен-
ных хозяйств, установили, что от больных свиноматок в пометах насчитывали 30-40% мер-
творожденных, 30% слабых и 30% внешне здоровых поросят. У мертворожденных поросят
наблюдали выпуклообразную форму головы, конъюнктивиты и поражение роговицы глаз,
подкожные отеки. Слабые поросята массой до 1 кг издают ужасающий визг и стенания, зад-
553
Глава XIV. Genus Aiterivirus Артеривирусные инфекции
ние конечности их часто вытянутые, и они не могут нормально встать на ноги (32, 33, 44).
При хроническом течении наблюдают относительное благополучие супоросных маток. Спустя
1-1,5 мес возможно рождение на неблагополучной ферме здоровых поросят, но через некото-
рое время вновь отмечают аборты. В откормочных хозяйствах болезнь протекает с рядом
особенностей: основные клинические признаки связаны с поражением органов дыхания.
При вскрытии наблюдают кровоизлияния и отеки подкожной клетчатки, увеличенное со-
держание жидкости в перикардиальной и брюшной полостях, дистрофию печени и изменения
в легких. Они кровенаполнены и чаще имеют мозаичную окраску. Слаборазвитые поросята,
как правило, гибнут в первые недели жизни. Через 4-6 нед заболевание начинает приобретает
хроническое течение; наблюдается задержка роста и развития, а также повышенная чувстви-
тельность к секундарным инфекциям. У отдельных животных отмечали негнойные энцефали-
ты и миокардиты. Правда, у большинства поросят их не обнаруживали. В целом патологоана-
томические признаки не характерны и напоминают таковые при бактериальных инфекциях. У
маток с поражением ушей признаков миокардита не отмечали. У больных животных в США
процент поражения сердечной мышцы значительно выше, чем в Германии. Нередко болезнь
протекала в смешанной форме, одновременно с гриппом, БА, парвовирусной инфекцией.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Голландским ученым Wensvoort и Terpstra (Центральный ветеринарного института
г.Лелистад) удалось установить истинную этиологическую природу этой болезни, выделив
вирус, названный ими “агент Лелистад”, в культурах легочных макрофагов свиней (48). В на-
стоящее время установлено, что возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, ко-
торый входит в род артеривирусов.
Морфология и химический состав. Возбудитель болезни - РНК-содержащий вирус раз-
мером 45-65 нм. Он имеет наружную оболочку и чувствителен к липидным растворителям.
По физико-химическим свойствам напоминает представителей семейства тогавирусов, рода
артеривирусов (вирус артериита лошадей) (15).
Вирусы РРСС, выделенные в Европе (агент Лелистад) и в США (VR-2332), несколько от-
личаются по биологическим свойствам, хотя и имеют перекрестные серологические связи.
Так, единственной системой культивирования вируса Лелистад являются альвеолярные мак-
рофаги свиней. Вирус РРСС в США культивируют в клеточной системе перевиваемой линии
клеток Borhrin gerlh 2621, хотя и с лучшим успехом культивируются в легочных макрофагах.
Возбудитель РРСС морфологически схож с вирусом лактатдегидрогеназы мышей, но не имеет
перекрестных серологических связей.
В культурах легочных макрофагов вирус РРСС вызывает ЦПИ в виде округления клеток с
последующим пикнозом и отделением от монослоя в течение 2-4 сут (34,36). Вирус содержит
РНК и оболочку, способен реплицироваться в макрофагах и йроходить через плаценту, зара-
жая плод, может длительно персистировать в организме животного и вызывать повторно им-
муносупрессию. Передается при прямом контакте и респираторно. Быстро распространялся на
фермах Франции (12, 43).
Вирус РРСС проникает трансплацентарно, на что указывает обнаружение возбудителя и
специфических АТ у мертворожденных плодов и живых ослабленных поросят до первого
приема молозива (45). Plagemann (40) предполагает, что вирус РРСС относится к новой груп-
пе вирусов, напоминающих тоговирусы, но имеющую положительно закрученную РНК и по
структуре сходных с корона- н торовирусами.
Устойчивость. Вирус чувствителен к изменению pH среды. Оптимум pH от 5 до 7.
Benfield et Welson (15) сообщали, что вирус SIRS, выделенный в США, сохраняет инфекци-
онность в гомогенатах пораженных легких при -70°С в течение 1,5 лет, при +4°С - 1 мес, при
37°С - 2-х сут. При температуре 55°С он инактивируется в течение 45 мин. Friey et.al. (22)
выделили вирус из патматериала, хранившегося в течение 3-х лет в замороженном состоянии.
554
Глава XIV. Genus Arterivirus Артеривирусные инфекции
АГ свойства. Обследовано 4 свиноводческие фермы на наличие АТ к вирусу РРСС с по-
мощью ИФА в течение 12 нед после опороса. Титр АТ у свиноматок сопоставляли с титром
материнских АТ у поросят в возрасте 2 нед. Материнские АТ, выявляли у поросят в течение
4-10 нед, ВНА обнаружили через 12 дн после заражения или 18 дн после контакта с больны-
ми животными. Максимальных титров (индекс нейтрализации >3,5 1g) они достигали на 40-
50-е сут после заражения и сохранялись до 120 дн (срок наблюдений) (1). Изучен характер
инфекции, вызванной вирусом репродуктивного и респираторного синдрома на свиноводче-
ских фермах в Бельгии (26).
Экспериментальная инфекция. Terpstra и др.. (1991) проводили опыты по заражению
культуральным вирусом РРСС 8-ми свиноматок на 84-й дн супоросности (45). Только у 2-х
свиноматок наблюдали 1-дн повышение температуры тела до 39,6°С. У 2-х - покраснение ко-
жи ушей и учащенное дыхание. Одна свиноматка абортировала на 10-й дн супоросности и
принесла 7 мертвых и 4 живых слаборазвитых поросят. Две другие опоросились на 116-й и
117-й дн супоросности и в пометах обнаружили 10 живых и 19 мертворожденных поросят, из
которых 5 были мумифицированными. Оставшиеся 5 свиноматок опоросились на 113-115-й
дн супоросности без репродуктивных нарушений. В пометах было 58 поросят, многие из ко-
торых были слаборазвитыми и 26 из них (40%) пали в течение 1-й нед жизни. Вирус РРСС
был выделен от 31 поросенка (30% инфицированностн).
При интратрахеальном и внутримышечном заражениях на 2-5-е сут у инфицированных
подсвинков отмечалось незначительное (на 0,5-1,5°С) повышение температуры тела. У 2-х
животных на 10-12-й день после заражения отмечен кашель. Других клинических признаков
болезни не выявлено. Повышение количества лейкоцитов в крови было установлено через су-
тки после заражения животных и к 4-му дню их уровень достигал 28-30 тыс/мл и сохранялся
в течение 2-3 нед. У подсвинка, находившегося в контакте с зараженными животными, по-
вышение температуры тела отмечено на 18-19-е, а увеличение числа лейкоцитов на 6-е сутки
после совместного содержания (42). На 5 и 14 день после заражения было убито по одному
животному. При патологоанатомическом исследовании у них отмечали единичные очажки
острой бронхопневмонии. В обоих случаях из легких и легочных альвеолярных макрофагов
выделен вирус РРСС. В остальных внутренних органах подопытных животных видимых из-
менений не обнаружено (1).
При интраназальном заражении вируссодержащей суспензией поросят 4-нед возраста
температура тела их повышалась до 40,5°С, удерживаясь на этом уровне 3 дн; отмечалось
учащенное дыхание, отказ от корма и общее угнетение. Подкожное и внутримышечное введе-
ние вируссодержащего материала не вызывало у взрослых белых мышей никакой видимой
реакции. Однако та же суспензия после внутримозгового введения белым мышам вызывала
появление нервнопаралитических признаков и их гибель. С 3-го пассажа гибель мышей на-
ступала через 24 ч. Вирус № 9-181-93, адаптированный к белым мышам, вызывал специфи-
ческое ЦПД. В 1995 г. в Курской области был выделен вирус РРСС (шт. № 9-181-93), кото-
рый не вызывал ГА эритроцитов и ГАд. У животных, зараженных европейским стандартным
шт. “Лелистад” вируса РРСС клинических признаков не отмечалось (1).
Культивирование. Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных
макрофагах (АМФ) поросят. Для получения АМФ используют 4-6-нед поросят, свободных от
патогенной микрофлоры ферм. АМФ выделяли 2-кратным промыванием отпрепарированных
и изолированных легких забуференным физраствором, содержащим антибиотики (пеницил-
лин, стрептомицин, неомицин и амфотерицин), который нагнетали через трахею с помощью
автоматического шприца с иглой (около 500 мл). Выбор жидкости из легких, содержащей
АМФ, проводят обычно шприцами через то же отверстие. Суспензию клеток из легких цен-
трифугировали при 1500 мин’1 15 мин. При наличии эритроцитов к осадку добавляли 0,83%-
ный р-р хлорида аммония и после 5-мин инкубации при комнатной температуре клетки вновь
555
Глава XIV. Genus Arterivirus Артеривирусные инфекции
центрифугируют при тех же условиях. Заражение вирусом РРСС проводили через 2-24 ч по-
сле 2-кратной отмывки питательной средой и антибиотиками. Учет цитотоксического дейст-
вия вируса проводят через 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Культуральную жидкость используют в ка-
честве АГ ELISA. Титр макрофагального вируса составлял 1:8-1:16. Таким образом, АМФ
могут быть использованы для препаративной наработки вируса в исследовательских целях,
изготовления диагностикумов и обнаружения вируса в патологических материалах (3, 4). По
данным Е.А. Балашовой и соавт. (2) чувствительными к вирусу РРСС являются первичная
культура АМФ свиней и клон клеток MARC-145 (клоновый вариант, полученный из переви-
ваемой культуры клеток МА-104 почки африканской зеленой мартышки). Максимальное на-
копление вируса отмечали при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток/1 мл с использо-
ванием фетальной сыворотки, множественностью заражения 0,02 ЦПД50/клетка и снятия мо-
нослоя не позднее 3-4-х сут. Наиболее чувствительной системой для культивирования вируса
РРСС являются также АМФ, взятые у 6-10-нед поросят, и некоторые перевиваемые линии
клеток, в том числе MARC-145 (5,50).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
С эпизоотической точки зрения важен путь распространения инфекции. В частности, в де-
кабре 1990 г. болезнь зарегистрирована в Нидерландах. Свиноводство в этой стране - одно из
наиболее концентрированных в мире, и естественно, болезнь очень быстро распространилась
респираторным путём, весьма возможно, в потоках воздуха. Предположительно, факторами
передачи возбудителя могли быть и птицы, а также люди и автомобили (если эти объекты
были в контакте с инфекционным агентом) (23).
Большинство сельскохозяйственных выставок и ярмарок по продаже свинопоголовья в
1991 г. в Великобритании были запрещены. По данным госветслужбы этой страны в настоя-
щее время нет доказательств распространения болезни воздушным путём, и все случаи заноса
возбудителя связаны с передвижением поросят. Вирус может персистировать в заражённых
стадах свиней до полугода (48, 49). Это может быть связано с отсутствием сероконверсии у
отдельных явно инфицированных животных. Отдельные заражённые свиноматки могут быть
источником заражения для здоровых животных в течение 99 дн (51, 52). Английские исследо-
ватели считают, что стада свиней остаются заражёнными в течение 2-х мес после прекраще-
ния появления явных клинических признаков болезни.
Отмеченное прямо связанно с производственными показателями поражённых РРСС пле-
менных ферм свиней. На небольших фермах на 50-200 свиноматок в период острого течения
болезни недополучают более 50% поросят. При этом потери на одну свиноматку составляли
около 250 долларов, а в Англии - 102 фунта стерлингов (42). В последующем потери на ре-
продукции могут снижаться, но у животных на откорме отмечается замедление роста и сни-
жение продуктивности. Хозяйства несут экономические потери в течение нескольких лет.
В нашей стране в 1991-1993 гг. в ряде хозяйств обнаружены массовые случаи абортов,
рождение мёртвых и слабых поросят, респираторные расстройства. В 1993 г. в Голландию
были направлены 40 проб сывороток крови от свиноматок с нарушениями репродуктивной
функции из 10 хозяйств для исследования на наличие АТ к вирусу репродуктивного и респи-
раторного синдрома. Во всех 10 обследованных хозяйствах обнаружены положительно реаги-
рующие свиноматки. Из 40 исследованных проб сывороток крови 38 оказались положитель-
ными, причём большая часть сывороток (72,5%) содержала специфические АТ в высоких
титрах (1:640 и выше). Высокий процент положительных сывороток свидетельствует о широ-
кой циркуляции вируса в исследуемых свиноводческих хозяйствах.
Вирус РРСС, вероятно, обладает иммунодепрессивными свойствами. Американскими ис-
следователями установлено уменьшение числа альвеолярных макрофагов и нарушение их
функции у инфицированных поросят. Макрофаги играют важную роль в индукции АТ обра-
зования - они передают агент Т- и В-лимфоцитам. Развитие респираторного синдрома, по-
556
Глава XIV. Genus Arterivirus Артеривирусные инфекции
видимому, обусловлено вторичными бактериальными инфекциями после размножения вируса
в альвеолярных макрофагах и нарушения иммунной системы лёгких.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на РРСС ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов
лабораторных исследований. Для выделения вируса используют сыворотку или плазму крови
больных и павших поросят, пробы лёгких, селезёнки, плевральной и перикардиальной жидко-
сти. Выделение вируса проводят в культурах альвеолярных макрофагов, полученных от мо-
лодых (6-8 нед) СПФ-поросят. Успех голландских учёных и объясняется прежде всего тем,
что они использовали эту культуру, в то время как культуры клеток РК-2, РК-15 н К-6 оказа-
лись не чувствительными для выделения возбудителя. Идентификацию возбудителя проводят
по физико-химическим и серологическим свойствам. Из серологических методов используют
вначале непрямой метод ИФ и прямой метод ИФА. В США для идентификации возбудителя
использовали PH, разработанную с этим вирусом в университете штата Миннесота, а также
ИФ и ИФА, разработанные в национальной лаборатории Ames в шт. Айова. Во Франции
разработан непрямой метод ИФА для обнаружения специфических АТ. Сероконверсия в ди-
агностических титрах (1:20 и выше) развивается к 14-му дн после экспериментального инфи-
цирования, а к 28-му дн титры антител накапливаются до Г. 1280 (11). Разработана методика
очистки и концентрирования культурального вируса РРСС, репродуцированного в культуре
клеток МАРС-145 и FL. Предварительно вируссодержащая суспензия очищается от балласт-
ных белков низкоскоростным центрифугированием, затем концентрируется 2-кратным осаж-
дением ПЭГ мол.м. 6000 и очищается высокоскоростным центрифугированием (7000 мин’1 в
течение 6 ч). В градиенте плотности CsCl-сахарозы материал концентрировали в 100 раз.
Очистка составляла 96,5%. Все этапы подготовки препаратов контролировали по активности
в ИФА. Высокоспецифичные активные препараты АГ вируса РРСС используют для изготов-
ления АТ диагностикумов для ИФА (6а). Метод непрямой ИФА более простой и его можно
использовать в полевых условиях. Достаточно исследовать из стада 10 проб сывороток,
(лучше парных), чтобы с уверенностью поставить лабораторный диагноз (25).
В Англии практикуется сбор из 12-15 пар сывороток от подозреваемого стада (34, 40).
Служба диагностики на РРСС в этой стране действует с апреля 1992 г. Исследовано уже 118
стад н было выявлено 31 стадо, положительно реагирующее на РРСС (40). При серологиче-
ском исследовании ложноположительные реакции, как правило, отсутствуют, хотя ложноот-
рицательные являются обычными и достигают 25% (34). Benfield et. al. (15) сообщали об ис-
пользовании монАТ в ИФ при идентификации европейских, американских и канадских
штаммов возбудителя РРСС. В РФ разработан твердофазный ИФА, для проведения диагно-
стики РРСС (7, 8), составлены наборы диагностикумов для выявления РРСС и специфических
АТ (6а). МонАТ к вирусу РРСС могут быть использованы как для выявления АГ вируса
РРСС в патологическом материале, так и для определения АТ в сыворотках крови свиней, так
как они дают более специфическую реакцию по сравнению с полиАТ (4).
При дифференциальной диагностике необходимо исключить вирусные и бактериальные
болезни, протекающие с нарушениями в репродуктивных системах, а также отравления. Ис-
ключают прежде всего АЧС, КЧС, БА, грипп свиней, ЭМК, парвовирусную болезнь, ТГЭ,
лептоспироз и хламидиоз. Характерной особенностью этой болезни является обострение вто-
ричных и хронически протекающих инфекций, возбудители которых могут скрытно циркули-
ровать в пораженных стадах свиней. Эго ещё более усложняет проведение лабораторной
дифференциальной диагностики.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
После переболевания большая часть свиноматок оказываются иммунными к повторному
инфицированию. АТ к вирусу РРСС, выявляемые в ИФА, могут персистировать в течение го-
да. При достаточно пессимистичном отношении к созданию средств специфической профи-
557
Глава XIV. Genus Arterivirus Артеривирусные инфекции
лактики РРСС появляются предпосылки решения данного вопроса. Так выдан патент ЕРА
95200877.9 Akzo Nobel (Нидерланды) на европейские штаммы вируса репродуктивного рес-
пираторного синдрома свиней, используемые для создания вакцин (10). О механизме разви-
тия иммунитета известно крайне мало. В Англии также ведется разработка вакцин.
Меры борьбы. Специфических средств лечения при РРСС нет. Отсутствуют также сред-
ства специфической профилактики (21). Лабораторная диагностика болезни затруднена преж-
де всего из-за необходимости проведения большого спектра дифференциальных диагности-
ческих исследований. Поэтому при возникновении болезни в ранее благополучной стране не-
обходимо принятие решений проблемы в национальном масштабе: полностью запретить вы-
воз свиней, туш и навоза из подозрительных ферм и свинохозяйств; наложить ограничения по
передвижению свинопоголовья в течение 8 нед после последнего случая выздоровления.
Свинопоголовье, предназначенное на экспорт, надо перевозить в специально оборудован-
ных транспортных средствах. Подозрительный инфицированный материал (плаценту, плоды
и мертворождённых поросят) необходимо уничтожать. Убирать, дезинфицировать помещения
и места опороса свиноматок. Обязательно должны быть дезинфицированы коврики на входе
свиноводческих помещений.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.БайбиковТ.З и др. Тез. Всерос. н-пр. конф, ВНИИЗЖ, Владимир,1995 :185. 2.Балашова
Е.А. и др. Тез. докл. Всерос. н-пр. конф, Владимир, 1995 :96. З.Глобенко Л.А. и др. Тез. докл.
Всерос. н.-пр. конф, Владимир, 1995 :52. 4,Глобенко Л.А. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. Вла-
димир, 1995 :133. 5.Гусев А.А. и др. Тез. докл. н.-пр. конф, Владимир, 1995 :95. б.Касюк В.И.
и др. Ветеринария, 1991, 7 :7. ба.КомаловаН.Е. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. Владимир, 1995.
7.Мищенко В.А. и др. Тез. докл. н.-пр. конф, Владимир, 1995 :53. 8. Мищенко В.А. и др. Сб.
н. труд, ВНИИЗЖ, Владимир, 1995. 9.Сухарев О.И. и др. Вет. газета, 1992. 10.Патент Eur
Biotech Newslett, 1995, 210 :5. 11.Albina Е. et.al. Ann Rech 199, 33, 2 :67. 12.Albina E. et.al.
Bull Acad vet Fr, 1993, 66, 2 :193. 13.Baron T. et.al. Ann.Rech.1991, 23, 2 :161. 14.Beilage E.
et.al. Prakt Tierarzt, 1992, 73 :62. 15,Benfield D.A. et.al. J Vet Diagn Invest, 1992, 4 .127.
16.Bautista E.M. et.al. J Vet Diagn Invest, 1993. 17.Cannon R.M. et al. Canberra, Australia, 1982,
.14. 18.Collins J.E. et.al. J Vet Diagn Invest, 1992, 4 :117. 19.Cronwijk W.A.J. EEC Seminar Rep
New Pig Dis, Brussel, 1991 :20. 20.DeJong M.F. et.al. :9. 21.Egbering O. Prakt Tierarztl, 1991,
72, 10 :851. 22.Frey M. et.al. Am Ass Swine Pract News, 1992, 4:31. 23.Hellwig E. Schweinzucht
u Schweinemast, 1991, 39, 12 :396. 24.Hellwig E. - “ - 1991, 38, 9 :206. 25.НП1 T.L. et.al. Proc
Ann Meeth Am Assoc Swine Pract, 1993 :717. 26.Houben S. et.al. J Vet Med B,1995, 42, 4 :209.
27.Jensen J. Bull OIE, 1991,103, 10 :733. 28.Keffaber K.K.. Am Ass.Swine Pract Newsl, 1989, 1, 2
:1. 29.Lindhaus W. et.al. Pract Tierarztl, 1991, 72, 5 :423. 3O.Leyk W. Sem of new Pig Dis,
Brussels, 1991. 31.Loula T. et.al. Practice, 1991, 12, 1 :23. 32.Loula T. Am Ass Swine Pract
Newsl, 1992, 4 :45. 33,Mengeling W.L. et.al. Proc.George A. Young Swine Conf., Lincoln, NE,
1992 :66. 34,Meulenberg J.J.M. et.al. Virol, 1993, 192 :62. 35.Morrison R.B. et.al. J Vet Diagn
Invest, 1992, 4 :186. 36.Opedal A. Hog Farm Managment, 1991, 28, 10 :16. 37.Owen Wj. et.al.
Proc Annu Mtd Livestock Concervation Inst, Peoria, IL, 1992. 38.Patjn D.J. et.al. Vet Rec, 1991,
29. 39.Paton D.J. et.al. Rev Med Microbiol, 1995, 6, 2 :119. 4O.Plagemann P.J.W. et.al. Ad Vir
Res, 1992, 41 :99. 41.Plana Duran J. et.al. Abstr 2th Congr Eur Soc Vet Virol.,Uppsala Sweden,
92. 42.Pol J.M.A. et.al. Vet Q, 12991, 13 ; 137. 43.Stevenson G.W. et.al. Proc Ann Mtd Livestock
Cons Ins Peoria IL, 1992. 44.Stevenson G.W. et.al. Am Ass Swine Pract Newsl, 1992, 4 :31.
45.Terpstra C. et.al. Vet. Q. 1991, 13 :131. 46,Thornton K. et.al. Hog Farm Management, 1991,
28, 8 :24. 47.Tubbs R.S. et.al. Swine Helth and Prod, 1993, 1 .21. 48.Wensvoort G. et.al. Vet Q,
1991, 13 .121. 49,Wensvoort G. et.al. J Vet Diagn Invest, 1992, 4 :134. 50. Yoon I.Y. et.al. J Vet
Diagn Invest,1992, 4 :144. 51,Zimmerman J. Proc Ann Mtg Livest Cons Inst, 1991 :121.
52.Zimmerman J. Proc Anim Meat, Livestock Convers Inst, Bloominton, MN, USA, 1991 :9
558
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
ЧАСТЬ II. ИНФЕКЦИИ, ВЫЗЫВАЕМЫЕ
ДНК-СОДЕРЖАЩИМИ ВИРУСАМИ
Глава XV. ПАРВОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕМЕЙСТВА PARVOVIRIDAE
Интерес к парвовирусам как объектам исследования обусловлен рядом причин. В есте-
ственных условиях парвовирусы патогенны для млекопитающих, птиц, а также для челове-
ка. Болезни, вызываемые этими вирусами, наносят существенный экономический ущерб
животноводству многих стран. Парвовирусы (ПВ) имеют уникальную структурную и функ-
циональную организацию генома и являются хорошей моделью для изучения репликации 1-
спиральной ДНК.
Парвовирусы (от лат. parvus - маленький) - группа вирусов, поражающая позвоночных
и насекомых. Вирионы парвовирусов представляют собой лишенные суперкапсидной обо-
лочки изометрические частицы кубической симметрии диаметром 18-22 нм. Капсид состоит
из 32 капсомеров диаметром 3-4 нм. Липиды и углеводы в составе вирионов не обнаруже-
ны. Мол.м. вирионов составляет 5,5-6,2 МД, плавучая плотность в CsCl 1,39-1,42 г/см3, ко-
эффициент седиментации 110-122S. Парвовирусы устойчивы к растворителям липидов, ста-
бильны при pH 3-9, а также к прогреванию при 56°С в течение 1 ч. Геном парвовирусов
представлен 1-спиральной линейной молекулой ДНК с мол.м. 1,5-2 МД, доля Г+Ц составля-
ет 41-53%. ДНК парвовирусов обладает инфекционностью. В вирионах автономных и де-
фектных парвовирусов обнаружено 3 полипептида с мол.м. 60-90 кД, тогда как в вирионах
денсовирусов - 4 полипептида. Репликация вирусной ДНК и сборка вирионов происходит в
ядре клетки. Для репликации автономных парвовирусов требуются компоненты ДНК-
синтезирующего аппарата клетки-хозяина, в частности, а- и g-ДНК-полимеразы, синтези-
руемые в S-фазе клеточного цикла. Депендовирусы активно размножаются в присутствии
вирусов “помощников” (аденовирусов, герпесвирусов).
В семействе Parvoviridae 3 рода: Parvovirus, Dependovirus, Densovirus.
1. Род Parvovirus. В состав рода входят: мелкий вирус мышей (прото-типный вирус),
парвовирусы человека (В 19), свиней, КРС, собак, кроликов, енотов, гусей, крыс, вирусы эн-
терита и алеутской болезни норок, панлейкопении кошек, а также вирусы Hl, RT, TVX и Lu
III, происхождение которых неясно. Возможным представителем рода являются парвовирус
цыплят, мелкий вирус собак, НВ и RA1 (табл. XV. 1.). 1-спиральная геномная ДНК состоит
примерно из 5 тыс. нуклеотидов и кодирует 4 белка - 3 структурных и 1 неструктурный. На
обоих концах ДНК имеются неидентичные, самокомплементарные последовательности нук-
леотидов (палиндромы), образующие 2-спиральные шпильки, резистентные к нуклеазе S1;
3'-концевая шпилька состоит из 115-116 нуклеотидов, а 5'-концевая - из 200-242. Шпилеч-
ные структуры играют важную роль в репликации ДНК. Гены, кодирующие структурные
белки, расположены в 5'-концевой половине, а ген, кодирующий неструктурный белок - в
3'-концевой половине ДНК. В вирионах большинства представителей рода содержится ми-
нус-ДНК. Однако у части вирионов (1-50%) парвовирусов КРС, крыс, Hl, Lu III и В19 со-
держится плюс-ДНК. Все вирусы рода Parvovirus автономны (недефекны). Они вызывают у
животных энтериты, гепатиты, миокардиты, геморрагическую энцефалопатию, панлейкопе-
нию, гибель эмбрионов и плодов, отставание в росте, подавляют гемато- и лимфопоэз, им-
мунный ответ.
559
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Таблица XV.I. Характеристика парвовирусов животных
Название Источник выделения Естествен- ный хозяин Размножение в перв. культ, кл. Размножение в линиях клеток АГ эритро- цитов
Парвовирус свиней Первичная культура клеток почек поросят Свиньи Почек, тестикул, щитовидн- ной железы поросят РК-15, почек, тести- кул поросят Морской СВИНКИ и человека
Парвовирус КРС Фекалии телят КРС Почек, легких, селезенки эмбрионов коров Легкие буйволов Морск. св. и человека
Парвовирус лошадей Легкие плода Лошади ВД РЕТ (кл. Яйцевода свиньи) Морской свинки
Вирус АБН Ткани норок Норки Почек норок, кошек, хорь- ков ССС-81 (почки ко- шек) Не агглю- тинирует
Вирус энте- рита норок Ткани норок Норки Почек кошек, норок, хорь- ков Почек кошек Свиней
Парвовирус кроликов Фекалии кроли- ков Кролики Почки кроликов Почки кроликов Морской свинки
Мелкий** вирус собак Фекалии собак Собаки НД Тканей собак Обезьян
Парвовирус собак * Фекалии собак Собаки Почек собак МДСК, почки ко- шек, А-72 Свиней и обезьян
Вирус ПЛК Ткани кошек Кошки Почек кошек Почек кошек Свиней
Вирус энте- рита гусей Ткани гусей Гуси Эмбрионов гусей, уток НД Не агглю- тинирует
ПВ кур Киш. Цыплят Куры НД НД НД
Вирус Кил- хема Мелкий ви- рус мышей В19 Опухолевые ткани крыс Сток аденовир мышей. Линия клеток человека Сыворотка Крысы Мыши Неизвес тен. Человек Эмбрионов крыс Эмбрионов мышей, крыс НД Лифромы крыс А-9 Опухоль почки че- ловека НД *** Морск. св., человека Морской св. Не агглют.
Примечания: ** Мелкий вирус собак - парвовирус типа 1 собак;
Парвовирус собак - парвовирус собак типа 2; *** НД - нет данных
2. Род Dependovirus (от лат. dependere - зависимый). В род входят аденоассоциирован-
ные вирусы (ААВ) человека и обезьян (5 серотипов), КРС, собак и птиц. Типичный пред-
ставитель рода - ААВ1, возможные представители - ААВ лошадей и овец. В вирионах де-
пендовирусов содержится либо плюс-, либо минус-ДНК. Эти типы ДНК комплементарны
друг другу и in vitro объединяются с образованием 2-спиральных молекул. ДНК имеет кон-
цевые инвертированные повторы длиной 145 нуклеотидов, формирующие шпильки. Первые
125 нуклеотидов образуют полиндромные последовательности. Эффективная репликация
депендовирусов происходит в присутствии адено- и герпесвирусов. Однако в определенных
условиях (присутсвие мутагенов, синхронизация клеток в S-фазе) репликация осуществляет-
ся и без вирусов-“помощников”.
3. Род Densovirus (от лат. densus - плотный). В род входят парвовирусы, поражающие
насекомых отряда двукрылых (Diptera), чешуекрылых (Lepidoptera) и прямокрылых
(Orthoptera). Типичный представитель рода - вирус денсонуклеоза личинок большой вощин-
ной моли. В вирионах содержится либо плюс-, либо минус-ДНК. Денсовирусы размножают-
ся в большинстве тканей личинок, нимф и взрослых животных без вируса-“помошника” с
образованием крупных и плотных кристаллических внутриядерных включений.
560
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
ПАРВОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ СОБАК
Парвовирусная инфекция собак (ПВИСоб парвовирусный энтерит собак) контагиозная
болезнь, проявляющаяся рвотой, геморрагическим гастроэнтеритом, миокардитом, лейкопе-
нией, дегидратацией и гибелью щенков моложе 5-мес возраста. Поражения локализуются в
тонком кишечнике, лимфоидных тканях.
ПВИСоб впервые зарегистрирован в Бельгии в 1976 г., далее в США, Канаде, Австра-
лии, Франции, ФРГ, Великобритании, Швейцарии (1979). В настоящее время это одна из
наиболее широко распространенных инфекционных болезней. Высказана концепция, что
ПВИСоб принимает массовый характер при плотности популяции собак 12 и более на 1 км2.
При снижении плотности до 6 и менее особей инфекция практически прекращается (63). В
настоящее время ПВИСоб достаточно часто встречается в Российской Федерации и странах
СНГ (37, 54).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Чувствительность со-
бак к парвовирусу зависит не от породы и пола, а от возраста. При естественном заражении
инкубационный период длится до 10 дн, а при экспериментальном - 3-4 дн. Смертность ко-
леблется в пределах 5-50% (28,36). Летальность щенков в возрасте 4-5 мес обьино 25-30%,
но может достигать и 80% (16). Выделяют 3 формы болезни: сердечную - наблюдается у со-
бак в возрасте от 3 до 8 нед, кишечную - чаще регистрируется у животных от 8-нед до 9-мес
и комбинированную - преимущественно отмечается в возрасте от 6 до 16 нед (13). Развитие
того или иного синдрома, основанное на способности размножаться в активно делящихся
клетках, связано с возрастом щенков : до 3-нед возраста у них активно делятся клетки мио-
карда, после достижения этого - клетки кишечника (28). При первой форме клиническими
признаками являются вялость, лихорадка, отсутствие аппетита, тошнота, рвота с примесью
крови, жидкие, кровянистые с гнилостным запахом испражнения, обезвоживание, слабый
пульс, тахикардия. Заболевание сопровождается кровоизлияниями, число лейкоцитов в
среднем составляет 4000 мм3. В случаях энтерита первыми клиническими признаками яв-
ляются легкое недомогание, с последующим развитием в течение 24 ч тяжелой рвоты, диа-
реи, дегидратации и гибелью большинства животных. Кал вначале серый или желтоватый,
часто имеет полоски крови, а иногда геморрагический со слизью или водянистый с сильным
зловонным запахом. Некоторые случаи заболевания напоминают чуму плотоядных или ин-
фекционный гепатит. У отдельных животных после появления рвоты и энтерита развивают-
ся признаки поражения респираторной системы. Температура тела повышается до 39,5-
41°С. Рвота и диарея быстро приводят к дегидратации организма, затем наступает развитие
шокового состояния. Животные, особенно молодые, могут погибнуть через 24-96 ч после
появления клинических признаков заболевания. Болезнь поражает собак всех возрастов и
вызывает летальность до 16%. Миокардит у щенков может развиваться после тяжело пере-
несенного энтерита. Наиболее часто он регистрируется у щенков 38-40-дн возраста. Смерт-
ность от парвовирусного миокардита при молниеносном течении болезни достигает 96%.
Миокардит и кишечная форма заболевания вызываются одним и тем же вирусом. ПВИСоб
клинически напоминает панлейкопению кошек и клинически характеризуется геморрагиче-
ским энтеритом, сопровождающимся гипорегенеративной атрофией ворсинок тонкого ки-
шечника, некрозом лимфоидной ткани пейеровых бляшек, лимфоузлов, селезенки и щито-
видной железы (1, 2, 5).
Патологоанатомические изменения сходны с таковыми при панлейкопении кошек. На-
блюдаются различные макроскопические изменения. Они могут быть неуловимыми, сопро-
вождаются геморрагическим воспалением слизистой оболочки тонкого и толстого отделов
кишечника. Иногда на слизистой кишечника отмечают эрозии. Внутренние органы геморра-
гичиы, в некоторых случаях констатируют васкулярное воспаление. У отдельных животных
36 Зак. Ns 171
561
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
поражается, в основном, проксимальная часть ободочной кишки, наблюдается отек легких,
миокардит. При микроскопических исследованиях поражения в кишечнике характеризуются
некрозом эпителия крипт и лимфоидной ткани в пейеровых бляшках, лимфоузлах, тимусе.
Нередко в эпителиальных клетках обнаруживаются внутриядерные включения. У щенков в
4-6-нед возрасте наблюдается подострый фибринозный миокардит, а в мышечных волокнах
сердца внутриядерные включения. В ядрах клеток сердечной мышцы под электронным
микроскопом в большом количестве выявляли парвовирус собак (ПВСоб). Подобные изме-
нения обнаружены при изучении парвовирусного энтерита в эксперименте. При вскрытии
трупов 7-14-дн щенков, погибших через 1-2 дн после начала заболевания, обнаруживают
геморрагический энтерит, а при наличии носовых истечений - интерстициальную пневмо-
нию. Основным поражением является острый некроз эпителия тонкого кишечника, распро-
страняющийся от концов верхушек ворсинок к основанию крипт, у дна которых остаются
лишь немногочисленные набухшие эпителиальные клетки. Некроз отмечали, главным об-
разом, в тонком кишечнике (19). Наиболее тяжелые поражения обнаруживали в подвздош-
ной и тощей кишках. Иногда в эпителии крипт выявляли внутриядерные тельца-включения.
Наблюдали также изменения лимфоидной ткани кишечника (лимфоидный некроз), анало-
гичные таковым при панлейкемии кошек. Костно-мозговые изменения проявляются сильно
выраженной недостаточностью гранулоцитов (49,55). В миокардных клетках обнаруживают
внутриядерные тельца-включения (27).
Патогенез. Заболевание у собак изучено слабо. При клиническом проявлении болезни
вирус репродуцируется в криптах кишечника, вызывая их лизис. Наряду с кишечной фор-
мой ПВИС имеется миокардиальная (36). Патогенез при этой форме проявляется исходя из
физиологического состояния собаки. Как правило, миокардит у щенков бывает в 4-нед воз-
расте, когда наблюдается интенсивное деление клеток миокарда, а деление клеток кишечно-
го тракта в этот период замедлено. После отъема щенков деление эпителиальных клеток
кишечника быстро увеличивается, а клеток мышцы сердца замедляется. Видимо, в этом
возрасте у щенят чаще поражается кишечник, чем миокард (6). Характерной при ПВИС яв-
ляется лейкопения, которая отмечается в первые 4-5 дн после возникновения болезни. Ко-
личество лейкоцитов значительно понижается и достигает 300-2500 в 1 мм3. Лейкопения
часто сопровождается подъемом температуры тела. При гистологическом исследовании
видны десквамация клеток эпителия тощей и подвздошной кишок, атрофия ворсинок и рас-
ширение крипт. В гиперплазированном эпителии крипт отмечают высокий митотический
индекс. В лимфоузлах, тимусе и селезенке обнаруживают разрушенные лимфоидные клетки
(16). Отмечено сходство этих повреждений с наблюдаемыми при ПВ-панлейкопении кошек.
Предполагают, что в эпителии крипт слизистой тонкого кишечника с высокой митотической
активностью клеток обеспечиваются благоприятные условия для репликации ДНК-генома
ПВСоб, что отличает его от других энтеропатогенных вирусов, поражающих эпителий (8).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Первый представитель этой группы вирусов был выделен L.Kilham от крыс в 1959 г.
Парвовирус собак (ПВСоб) впервые выделил и описал Siegl в 1976 г. Он показал широкое
распространение болезни в США. ПВ-эпизоотии в 1978-1981 гг. были зарегистрированы во
многих странах: в Австралии, Канаде, Англии, Нидерландах, Италии, Франции и др. За по-
следние годы наблюдается эволюция возбудителя ПВИСоб. Считают, что ПВСоб (CPV-2)
реже циркулирует в странах Европы, США и Японии и, после!980 г. в основном, замещен
АГ вариантом (CPV-2a). Оба вируса различаются минимум по 6-и нуклеотидам генома и
соответствующим аминокислотам капсидного белка. Однако иммунизация собак против
ПВИСоб-2 защищала их от заболевания при последующем инфицировании ПВИСоб-2а.
Несмотря на это последний продолжает распространяться в популяции вакцинированных
собак (32, 45, 45а).
562
Г лава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Устойчивость. Вирус обладает высокой устойчивостью к нагреванию (стабилен при
прогревании при 60°С в течение 1 ч), pH среды 3, дезинфектантам (28), воздействию фак-
торов внешней среды. Он устойчив к действию эфира, хлороформа, спирта и чувствителен к
гипохлориду натрия, соде.
Антигенная структура. Различные шт. ПВСоб сходны по АГ структуре и имеют 3
белка (А, В, С). Канадскими учеными в составе вирионов ПВИСоб, энтерита норок и пан-
лейкопении кошек выявлен 4-й белок Д, который, вероятно, является продуктом фермента-
тивного расщепления более крупного белка. Составлена специфическая эпитопная карта с
вариантом последовательностей гена каждого белка у ПВСоб, кошек, норок и енотов.
Антигенная вариабельность и родство. Возбудитель ПВИСоб близок по своим свой-
ствам вирусу панлейкопении кошек. Предполагается, что он может быть мутантной формой
этого вируса. Вирусу энтерита норок вирус панлейкопении кошек близок, но не идентичен,
как и ПВСоб - вирусу энтерита норок, отличаясь от них по АГ структуре, ГА свойствам,
спектру патогенности для животных и строению генома (45, 52а). ПВСоб и вирус панлейко-
пении кошек различаются менее чем на 1% по нуклеотидной последовательности ДНК, но
поражают разных хозяев. ПВСоб имеет родство с парвовирусами крыс, свиней и мышей.
При ЭМ ПВСоб и панлейкопении кошек (шт. Olihero) не различимы, однако первый из них
размножался в культурах клеток FLF-3 и МДСК, а второй лишь в культуре FLF-3, но не в
культурах МДВК, МА-104 и HeLa (24). Обнаружена АГ общность всех парвовирусов, одна-
ко ПВСоб четко дифференцируется от парвовирусов кошек (панлейкопении) и норок
(энтерита). Два последних вируса полностью идентичны. При сравнении ПВСоб и группы
ВПК/ВЭН (панлейкопения кошек/энтерит норок) выявлено до 80% гомологии рестрикцион-
ных участков, однако по 8 сайтам рестрикции они различались (27,57 ).
АГ родство ПВСоб с вирусом панлейкопении кошек было подтверждено в PH, РТГА и
МФА. Ряд исследователей, изучая антигенное родство ПВСоб и панлейкопении кошек в
РДП, РГА, РТГА с использованием метода истощения сывороток, установили, что эти виру-
сы имеют общие специфические АГ. Некоторые из них являются ГА. Обнаружение в сыво-
ротках крови собак АТ, активных против ПВСоб и неактивных против вируса панлейкопе-
нии кошек, подтверждает наличие специфического АТ. Выявлено слабовыражеиное АГ род-
ство между парвовирусами свиней и собак (38). Заболевание собак рота-, корона- и ПВ-
инфекциями для людей небезопасно, так как. эти вирусы в серологическом отношении име-
ют родство с аналогичными вирусами человека (46). Между ПВСоб и возбудителем панлей-
копении кошек нет физико-химических различий, однако они отличаются по чувствительно-
сти к ним клеточных систем и по ГА активности. Установлено также и различие физической
карты геномов этих вирусов (25). Заражение первичных и перевиваемых культур клеток
кошек и собак показало, что FPV размножается в кошачьих, но не в собачьих клеточных
культурах, a CPV - в культуре клеток собак и кошек. При заражении кошек и собак выявле-
на репродукция FPV в тимусе, но не в других органах собак, в которых размножается CPV.
FPV вызывает у собак виремию, связанную со стимулированием мутагенов крови. Исполь-
зуя генетическую рекомбинацию вирусов для определения круга хозяев, выявлены специфи-
ческие для кошек детерминанты.
Локализация вируса, вирусоносительство, и вирусовыделение. Появление измене-
ний в слизистой оболочке тесно связано с локализацией вируса в эпителии крипт. Реплика-
ция вируса в тонком кишечнике ограничивается пролиферацией зоны крипт. Первичное ме-
сто репликации вируса - тимус (33). Наличие АГ ПВСоб иммунологическими методами
(ИФ, ИФА) впервые выявили в тимусе в 1-й дн, в остальных лимфоидных тканях - на 2-й
дн, в эпителии тонкого кишечника - на 4-й дн после заражения. Экскреция вируса с фека-
лиями впервые наблюдалась на 3-й дн, далее с 4-го по 7-й день после заражения, после чего
резко снижалась. Выделить вирус из крови удавалось на 3-4-й дн (11, 28). По данным
36*
563
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Wissenbok и др. (62), выявление ПВ АГ в органах зараженных собак и соответствующего
АГ в органах при энтерите кошек (панлейкопении) аналогично. ПВ-АГ обнаружен в дор-
сальной поверхности языка (96,3%), глотки (81%), пищевода (50%), в слизистой оболочке
кишечника (85,2%), в костном мозге (81,6%), селезенке (79,7%), тимусе (66,7%), мезентери-
альных лимфоузлах (60,4%), миндалинах (58,5%) и не выявлен в эпителии кожи и слизи-
стых мужских и женских гениталий. Переболевшие собаки выделяют вирус в течение 3-х
нед и более. Вирусоносительство наблюдали до 6 мес (3,11,28,37,38).
Антигенная активность. На 5-7-й день после заражения вирус индуцирует образование
КСА, ВНА и анти-ГА. Последние представляют наибольший интерес в аспекте серодиагно-
стики и оценки поствакцинального иммунитета. После достижения максимума титр их не
снижается в течение 2-х лет.
Культивирование. ПВСоб культивируется в культурах клеток почки котенка, собаки,
легких норки, не вызывая ЦПД. Для выявления АГ в клетках была использована флюорес-
цирующая сыворотка против вируса панлейкопении кошек. Установлена чувствительность к
ПВСоб различных культур клеток: почки эмбриона собаки, перевиваемые линии Vero, ме-
ланомы собаки, почки кошки, первично-трипсинизированные клетки плода собаки, сердца,
легкого, печени. Из всех культур внутриядерные включения были выявлены на 8-15-е сут
после заражения только в клетках легкого эмбриона собаки и почки кошки (28).
Aubert и др. провели исследования по обнаружению ПВСоб в различных перевиваемых
линиях культур клеток (почки собаки, кошки, эмбриона кошки, МДСК и А22). Для выяв-
ления АГ были использованы прямой метод ИФ, окрашивание препаратов по Майн - Грюн-
вальду и РГА. С помощью ИФ вирус обнаруживался во всех культурах, за исключением
МДСК. В культуре клеток почки кошки титр ГА активности ПВСоб с эритроцитами свиньи
через 5 сут после заражения был 1:1024. ПВСоб размножается в тканях, в которых происхо-
дит быстрая пролиферация клеток - костном мозге, эпителиальных клетках, выстилающих
крипты тонкого кишечника, и миокарде очень молодых щенков. Репликация ПВСоб в пере-
виваемых клетках CRFK (почки кошки Crandel) зависит от физиологического состояния
клеток, т.е. репликация вируса происходит в поздней S-фазе перевиваемых клеток (26). Шт.
Kuchiro пассируется в перевиваемой культуре клеток легкого кошки (FLF-3). К ПВСоб вы-
сокочувствительна также перевиваемая культура клеток А-72.
ГА свойства. ПВСоб ГА эритроциты свиньи и кошки при 4°С и pH 5,8-8,2, но не дает
гемагглютинации с эритроцитами лошади, КРС и морских свинок. РГА используется для
диагностики новых случаев панлейкопении кошек. Суспензия из фекалий больных собак по-
стоянно обладала ГА активностью с эритроцитами африканской зеленой мартышки при 4 и
22°С и никогда при 37°С. Титр ГА-акгивности был не выше 1:256. Негемагглютинирующий
мутант ПВСоб отличался от исходного "дикого" штамма структурой генов, кодирующих
поверхностные белки VP1 и VP2 (22). Вирус, выделенный в культуре клеток, также облада-
ет ГА активностью. ПВСоб после культивирования в первично-трипсинизированной культу-
ре клеток почки и легкого эмбриона собаки, котенка и перевиваемой линии клеток почки
котенка вызывал агглютинацию эритроцитов.
ГАд свойства не установлены.
Экспериментальная инфекция. Удается у щенков и котят. При экспериментальном
заражении собак, не имеющих АТ к ПВСоб, первым и основным признаком болезни явля-
ется диарея, развивающаяся в течение 24 ч после инокуляции вируса. С этого момента не-
ст о jKO дней в кале собак обнаруживается большое количество вируса. Через несколько He-
Д' v в сывороке крови появляются специфические АТ. Для перорального эксперименталь-
ного заражения щенков собаки необходимы определенные условия, в частности, предвари-
тельное голодание. В качестве инфекционного материала используют соскобы слизистой
оболочки кишечника больных ПВИСоб. Вируссодержащий материал вводят перорально в
564
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
объеме 10 мл. При заражении щенков 8-10-нед возраста per os на 5-й день развивались
клинические признаки болезни: угнетение, анорексия, рвота, диарея, гибель (34, 40). Кошки
менее чувствительны к ПВИСоб по сравнению с вирусом панлейкопении (24).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные соба-
ки, которые выделяют вирус во внешнюю среду с фекалиями в количестве до 109 ТЦДзо/г
фекалий в первые 4-7 дн после заболевания, а также вирусоносители. Заражение происходит
алиментарным и аэрогенным путями.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях ПВИСоб
может наблюдаться у собак всех возрастов, однако чаще у щенков до 6-мес возраста, уста-
новлен у куниц и енотовидных собак. У 2-15-нед щенков куниц и енотовидных собак забо-
левание появляется чаще и летальность достигает 30%. Норки, красные лисицы, еноты,
скунсы нечувствительны.
ДИАГНОСТИКА
Предположительный диагноз на ПВИСоб ставят на основании клинических, патолого-
анатомических и эпизоотологических данных. Для подтверждения диагноза проводят лабо-
раторные исследования. Наличие вируса может быть установлено с помощью ЭМ в свежих
фекалиях от больных животных. Непрямым методом диагностики может служить постанов-
ка РГА вируссодержащего материала с эритроцитами свиньи или африканской зеленой мар-
тышки. Кроме указанных методов перспективным может оказаться РТГА.
Выделение вируса.
Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют пробы фекалий от боль-
ных животных в первые дни заболевания и сыворотку крови (при возможности парные сы-
воротки крови). От погибших животных - сердечные мышцы и тонкий кишечник. Подготов-
ку материала проводят общепринятыми методами.
Заражение культур клеток. Для выделения вируса используют высокочувствительную
перевиваемую культуру клеток А-72, полученную из подкожной опухоли собаки. Вирусный
АГ в культуре клеток выявляют в ИФ. Помимо того, в инфицированной клеточной культуре
через 4-5 дн вирус образует бляшки диаметром 0,4-1,5 см (12). По данным других исследо-
вателей, испытуемым материалом (гомогенат ткани кишечника, селезенки, почек и печени)
заражают культуру клеток CrFK. Наиболее часто вирус изолируют из гомогенатов тощей
кишки (84,5%) и селезенки (79,2%). 3-сут культуры клеток CrFK обеспечивают оптималь-
ный уровень ИФ в прямом варианте. Метод гибридизации in situ позволяет выявлять гене-
тический материал, содержащий ПВС, в ткани миокарда, где обнаруживаются тельца-
включения. Для постановки реакции гибридизации используют биотипированый зонд (59).
Считают, что хорошей моделью для изучения ПВИС служат собаки породы "Bigl".
Индикация вируса ЭМ и ИЭМ. Наиболее быстрое подтверждение клинического диаг-
ноза получают при исследовании проб фекалий под электронным микроскопом или методом
ИЭМ. Пробы фекалий получают при остром течении болезни. Вирус обнаруживают в 48,3%
случаев. Также обнаруживали многочисленные частицы вируса в ядрах эпителиальных кле-
ток крипт кишечника. В препаратах наблюдали или несколько вирусных частиц, или боль-
шие группы вируса характерной морфологии и размера. Методом ИЭМ выявлены большие
агрегаты частиц, окруженных АТ (30). В прямой и ИЭМ референс-сыворотку разводят 1:10
и 1:50. При ИЭМ используют антисыворотку к ПВ кошек. Методом негативного контрасти-
рования также удается быстро диагностировать ПВ-миокардит собак, исследуя суспензию
гомогената сердечной мышцы (18).
Серологическая идентификация вируса
РГА. Наиболее часто используется в диагностической практике. Для этой цели берут
фекалии в первые дни заболевания (1-4-й дн), так как позднее уже образуются АТ; готовят
565
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
гомогенат на забуференном физрастворе с pH 6,6-6,8 в соотношении 1:5, центрифугируют
при 3-5 тыс. мин1 (лучше 8-10 тыс. мин'1). Надосадочную жидкость используют в РГА. По-
следнюю ставят на том же забуференном р-ре с эритроцитами свиней (0,5-1%-ная взвесь)
при 2-4°С. Учет производят через 1-1,5 ч. Необходимо выбрать донора эритроцитов, так как
около 30% эритроцитов свиней обладают спонтанной агглютинацией (6). Для выявления
ПВС предложена гемагглютинация с формалинизированными эритроцитами свиней (35). Во i
время пика болезни в РГА исследуют пробы фекалий и сыворотки крови. Фекалии разводят '
1:64 фосфатным буферным р-ром с добавлением солей MgCl2 и СаСЪ. Воспроизводимые
результаты РГА получают, если вместо ФБР или барбитурового буфера использовать для
разведения АГ боратный солевой буфер, а для эритроцитов свиньи - 0,15М NaCl на 0,ЗМ !
фосфатном буфере. Наиболее высокие титры ПВС регистрируются при pH 6 (53). ГА агент j
идентифицируют с помощью РТГ A. j
ИФ. В качестве высокоточного и специфичного теста предложена ИФ мазков-;
отпечатков слизистой оболочке кишечника (8). Описана методика ускоренной диагностики !
на основе НИФ (39). В ИФ идентифицируют ПВС, выделенный в культуре клеток.
РТГА. Ее ставят общепринятым методом в микро- и макровариантах с 4-8 ГАЕ вируса j
при 4°С. Используемые сыворотки инактивируют 1 ч при 56°С и обрабатывают эритроци- j
тами свиней (на 1 мл сыворотки 2-3 капли осадка эритроцитов, выдерживают при периоди- ;
ческом встряхивании 2 ч при 4°С, затем центрифугируют 10 мин при 1000 мин'1). Далее j
сыворотки обрабатывают каолином (25%-ную суспензию каолина на забуференном р-ре pH ।
6,6-6,8 добавляют в равном объеме к сыворотке, выдерживают 30 мин при комнатной тем-j
пературе, периодически встряхивая, затем центрифугируют), после чего их используют в j
РТГА. Если стандартная гипериммунная сыворотка нейтрализует ГА-активность вируса в
разведении 1:8 или 1:16, результат считают положительным (6). РГА с последующей РТГА '
дают возможность быстро и точно поставить диагноз.
РИГА. РИГА предложена для выявления и идентификации вируса в фекалиях больных
собак. Пробы фекалий, суспендированных в 10%-м барбиталовом буфере, центрифугирова-
ли 15 мин при 2000 мин'1, а надосадочную жидкость - при 4000 мин'1 также 15 мин (14).
ИФА. Чувствителен и специфичен при диагностике ПВИС (56). С помощью метода
сэндвич-ELISA удается обнаруживать парвовирусный антиген в фекалиях собак (41).
Идентификация с помощью монАТ. Применяя их C.Parrish и др. получили доказа-
тельства небольшого АГ различия между ПВС, вирусами энтерита норок и панлейкопении
кошек, а также между 2-мя последними вирусами (45). Для выявления специфического АГ в
пробах фекалий используют ELISA с применением монАТ к 2-м эпитопам ГА-белка ПВС.
Метод позволяет выявлять 1,5 нг вируса в течение 15 мин инкубирования. Результаты учи-
тывают визуально (41). Сочетание метода монАТ с ELISA в 87,9% случаев коррелировало с
результатами PH и РТГА. Для проведения исследований ELISA требуется всего лишь 10-15
мин. ИФА основан на использовании специфических к ПВС монАТ, узнающих различные
эпитопы ГА ПВС и нейтрализующих вирус. При сравнении с РГА сэндвич-вариант ИФА
оказался более специфичным, чувствительным и легким в выполнении (51). Разработан
простой и специфический метод идентификации вируса в фекалиях, основанный на ПЦР.
Для удаления веществ, ингибирующих ПЦР, экстракты фекалий подвергают гельфильтра-
ции. Чувствительность ПЦР составляет 103 БОЕ/г свежих фекалий, тогда как чувствитель-
ность ИФА и выделения вируса в культуре клеток - 106 БОЕ/г (58).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. В сыворотке крови щенков через
4 дня после появления клинической картины болезни титры анти-ГА колебались от 1:5000
до 1:16000, что свидетельствовало о наличии быстрого АТ ответа на ПВИС (60). По дан-
ным Klingeborn и др. (30) при остром течении болезни титр анги-ГА составлял 1:320-
1:20480. Обычно сыворотки крови в РТГА считают положительными начиная с разведения
566
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
1:160 и выше. Через 4-7 дн после заражения у инфицированных собак в сыворотке крови в
высоком титре обнаруживали ВНА и тормозящие гемагглютинацию АТ, уровень которых
практически не снижается в течение 2 лет (3). Для серологической диагностики ПВИСоб
используют шт. SP-80, размноженный в культуре легочных клеток кошки. В реакции обыч-
но используют эритроциты свиней, фиксированные 3%-ным р-ром формальдегида. Разбави-
телем для эритроцитов, АГ и сыворотки служит 0,01 М р-р фосфатного буфера, pH 6,8, со-
держащий 0,1% бычьего сывороточного альбумина. Неспецифические анти-ГА удаляют
прогреванием сыворотки 30 мин при 56°С и адсорбируют свиными эритроцитами (42). У
реконвалесцентов титр анти-ГА 1:1280-1:2560 обычно держится около года и такие живот-
ные иммунны к повторному заражению.
РИГА. В 70% случаев уровень титров АТ составлял 1:256-1:4098 (14).
PH. Ее чаще ставят в культуре клеток почки котенка, результаты учитывают ИФ, по-
скольку вирус не проявляет ЦПД. Чувствительности и воспроизводимости достигают, ис-
пользуя для постановки стандартный ПВСоб, имеющий низкое отношение ГА единиц к ин-
фекционным (флюоресцирующим) единицам (61).
ВИЭФ. Применяют для выявления АТ. Линии преципитации образуют все сыворотки с
титром в РТГА 1:40 и выше, причем с помощью ВИЭФ АТ обнаруживают чаще, чем в
РТГА. Метод оказался ценным тем, что позволил выявить ПВСоб АТ в экстрактах фекалий,
причем дополнительной обработки экстрактов, необходимой при постановке РТГА, в этом
случае не требуется (52).
Твердофазный ИФА (ELISA). С его помощью у щенков можно выявлять материнские
АТ и определять уровень поствакцинальных АТ (21).
Дифференциальная диагностика. ПВИСоб следует дифференцировать от алиментар-
ного и паразитарного гастроэнтеритов, чумы, при которой бывает очень высокая температу-
ра тела, конъюнктивитов, ринитов и поражений ЦНС. Кроме того, ее следует отличать от
вирусного гепатита и коронавирусной инфекции собак.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Для профилактики ПВИС успешно используются гетерологические, аттенуированные
или инактивированные вакцины против панлейкопении кошек (48).
Инактивированные вакцины. Применяют вакцину из ПВ-штамма кошек. В Канаде
применяют формолвакцину с двойным адъювантом (гидроокись алюминия и адъювант L-
80), с вирусом, выращенным в культуре перевиваемых клеток почки кошки (50). Формол-
вакцину готовят из шт. CPV-916, репродуцированного в любой чувствительной культуре
клеток (почек собак, кошек, легких норок). Показано, что иаилучшая защита щенков обес-
печивается 3-кратной иммунизацией инактивированной вакциной. Предложены ГОА фор-
молвакцина из аттенуированных штаммов инфекционного энтерита кошек и геморрагиче-
ского энтерита собак, а также метод проверки ее активности на курах (15). В Англии при-
меняют инактивированную комбинированную вакцину CPV-2, содержащую ПВС.
Живые вакцины. Применяют живые модифицированные вакцины, приготовленные из
аттенуированного штамма ПВСоб или вируса панлейкопении кошек. Живые вакцины на-
дежнее. После 2-кратиого применения у 92% привитых собак иммунитета обеспечивается
до года. Их можно применять на щенках, имеющих высокий уровень колостральных АТ
(43). Гетерологичная вакцина представляет собой препарат, приготовленный из вируса пан-
лейкопении кошек шт. Леопард, хорошо размножающегося в культуре клеток собак ССЛ-64.
Живая вакцина из модифицированного вируса панлейкопении кошек обеспечивает у собак
устойчивый иммунитет продолжительностью не менее 1,5 года. Живая аттенуированная
вакцина (73) была получена в результате 80 серийных пассажей ПВСоб в культуре клеток
почек собак (шт. С-780916). Аттенуированный крупнобляшечный вариант этого штамма
оказался апатогенным для щенков, не вызывал инфекцию плодов и в настоящее время ус-
567
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
пешно используется в США в качестве живой вакцины. В Австралии ПВС-2, выделенный
при ПВИС, был аттенуирован путем культивирования в почечных клетках кошки (FK) и со-
баки (МДСК). Вирус клонировали методом конечных разведений и на уровне 69-го пассажа
депонировали в коллекции клеточных культур как № 890426016, а также как шт. CPV-2
Р69, и использовали для приготовления вакцины в культуре клеток FK. Вакцина слабопато-
генна и индуцировала иммунный ответ у щенков, имеющих материнские АТ (10).
В настоящее время фирма Смит Кляйн выпускает вакцину Foil-cell для иммунизации
собак против ПВИСоб. Вакцина содержит ослабленный вирус панлейкопении (энтерита)
кошек. В Англии выпускается ассоциированная вакцина "Calaxy IV", предохраняющая со-
бак от чумы, аденовируса I (гепатита), II типов и параинфлюэнцы. В основе этого препарата
используют высокоиммуногенный вирус кошачьей панлейкопении. Во Франции успешно
применяется 5-валентная вакцина против лептоспироза, чумы, контагиозного гепатита,
бешенства и ПВИСоб (17). В Венгрии используют живую вакцину Parvoven из апатогенного
вируса. Препарат ареактогенен для щенков любого возраста. У щенков старше 3 мес по-
ствакцинальный иммунитет сохраняется не менее года. Рекомендуется вакцинировать щен-
ков в городах в возрасте 9-12 нед, а в собаководческих хозяйствах - в возрасте 6 и 9-12 нед,
в инфицированном поголовье еще и в возрасте 16 нед. При наличии у щенков материнского
иммунитета предпочтительнее применять вначале убитую вакцину, а затем живую. Имму-
нитет начинает выявляться через неделю после вакцинации и достигает максимума на 10-
14-й дн (7). Получена субъединичная вакцина, которая содержит белок VP2, продуцируемый
при репликации рекомбинантного бакуловируса в клеточной культуре насекомых или насе-
комых, которые являются пермиссивными хозяевами для размножения соответствующих
бакуловирусов (54, 64).
Разработан метод интраназальной вакцинации щенков с материнскими АТ живым мо-
дифицированным ПВС шт. CPV-17-80 jss. Щенков от вакцинированных матерей прививали
1-й раз в 4-нед возрасте и далее каждые 2 нед до достижения 11-нед возраста. Иммунологи-
ческую эффективность вакцинации определяли в РТГА в сыворотках крови, полученных пе-
ред каждой вакцинацией. Показано, что иммунный ответ зависел от исходного уровня мате-
ринских АТ: при исходном уровне в 40 ед. иммунологическая эффективность составляла
100%, при титре 80 ед. - 72,2 и при титре 160 ед. - 17,6% (10).
Эффективно применение специфической иммунной сыворотки при лечении ПВИСоб у
щенков (27). Для получения такой сыворотки клинически здоровой собаке, имевшей в крови
анти-ГА против ПВС в титре 1:512, дважды с 2-нед интервалом вводят внутривенно по
2105 ТЦД50 ПВСоб. Кровь для приготовления сыворотки берут через неделю после 2-й инъ-
екции ПВС, когда титр АТ в РТГА в крови собак достигает 1:8192. Полученную сыворотку
инактивировали при 56°С 30 мин, фильтровали через фильтр с диаметром пор 450 им и
контролировали на авирулентность с использованием культуры клеток. У всех щенков, экс-
периментально инфицированных ПВС и проявивших признаки ПВИС после инъекции 2 мл
иммунной сыворотки, наблюдали лишь легкую форму болезни с последующим полным вы-
здоровлением. Среди инфицированных щенков, которым сыворотку не вводили, отмечено
тяжелое течение ПВИСоб с геморрагической диареей, сопровождающейся гибелью полови-
ны больных щенков. Прн естественном течении ПВИСоб у щенков после применения им-
мунной сыворотки наблюдали, как правило, быстрое выздоровление.
Разработана субъединичная вакцина против ПВИСоб и других родственных вирусов
(EPL, MEV). Для этого получают рекомбинантный белок VP2 ПВСоб посредством реплика-
ции рекомбинантного бакуловируса, содержащего ген этого белка. Полученный таким обра-
зом белок VP2 способен образовывать пустые химерные капсиды с высокой иммуногенно-
стью. Кроме того, в белки можно вводить эпитопы других вирусных белков (методами хи-
мической или генетической инженерии) и использовать их для приготовления поливалент-
568
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
ных вакцин (20). Синтетическая пептидная вакцина также защищала собак против виру-
лентного ПВСоб (31).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Основными реакциями для
обнаружения поствакцинальных АТ являются РТГА и PH.
Длительность циркуляции поствакцинальных АТ. После применения аттенуирован-
ной вакцины у собак со 2-го дня появлялись анти-ГА, уровень которых достигал максимума
к концу 1-й нед (13). После вакцинации живой вакциной ВНА обнаруживали в максималь-
ном титре в течение 6 мес (29). Спустя 3 дн в крови вакцинированных щенков титр ВНА
был 1:20, к 21-му дню он достигал максимума (1:1042) и спустя 114 дн средний титр со-
ставлял Г. 64 (23).
Связь титров АТ с резистентностью. Установлена прямая корреляция между титрами
АТ и устойчивостью щенков к экспериментальному заражению. Невосприимчивость их к
ПВС, имевших после вакцинации титр анти-ГА >1:80, сохранялась более 1 г (47). Иммуни-
тет обусловлен наличием анти-ГА в титре >1:80, которые сохранялись не менее 2-х лет (13).
Однако наличие, колостральных специфических АТ, которые сохраняются в крови до 13 нед,
снижает эффективность вакцинации щенков живыми вакцинами (9). Так, вакцина у сероне-
гативных щенков индуцировала иммунитет более чем у 90%, при наличии титров 1:10 - бо-
лее 95%, при титрах 1:20 - только у 50%, а при титрах перед вакцинацией >1:80 ни одно из
животных не приобрело активного иммунитета (9). Защиту щенят от ПВИСоб до 4-мес воз-
раста обеспечивает материнский иммунитет. Щенки получают АТ с молозивом, колост-
ральные АТ подавляют репродукцию вакцинного вируса, в связи с чем щенков рекоменду-
ется вакцинировать не ранее 4-х мес после рождения (12).
Связь титров АТ с вирусоносительством и вирусовыделением. Обстоятельно этот
вопрос не изучен, однако известно, что собаки с титром АТ 1:80 и выше после перорального
введения им вируса в количестве 10б ТЦЦ50 не заболевают и не выделяют его с фекалиями.
Сообщалось о наличии у собак, выделяющих ПВСоб, состояния иммунодепрессии (4). Им-
мунная реакция на ПВСоб включает и секреторный компонент слизистой оболочки кишеч-
ника и системный компонент периферической лимфоидной ткани. Поэтому эффективная
вакцина должна стимулировать как местный, так и системный иммунитет (44).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Анохина Ю. Ветеринария 1982, 6. 2.Демкин Г.П. и др. Диагн. и проф. бол. животных, Са-
ратов,1992 :67. З.Орлянкин и др. Репродукция вирусов жив., 1985. 4.Петров В.Ф. и др. Ком-
плексная вакцинация, Кировобад,1983 :179. 5.Симонович В.Н. и др. Ветеринария, 1991, 2
:65. б.Сулимов А. А. и др. ПВ энтерит собак, 1984. 7.Bartha A. Allotow Kozl, 1990, 26, 7, 4, 8
:97. 8.Bergmann V. et.al. Arch exper Vet Med, 1983, 1 :127. 9.Buonavoglia C. et.al. Clin Veter
1985, 108, Г. 19. lO.Bounavolgia C. et.al. J Vet Med, 1994, 41, 1 :3. 11. Carmichael L.E. et.al.
Cornel Vet, 1981, 71, 4: 408. 12.Carmichael L.E. et.al. Adv Vet Sci and Comp. Med. 1981, 25,
1:37. 13.Burtsober H. Wien tierarztl Monatsschr, 1983, 70, 3: 93. 14.Celer V. et.al. Vet Med
,1984, 29, 6 :373. 15.Churchell A. J. Biol. Scand 1982, 10, 1:1. 16.Compagnucci M. et.al. M Bull
Assoc Ital vet picollianim, 1985, 24 :215. 17.Davoust B. et.al. Rev Med Veter, 1985, 136, 5: 363.
18.Enihan P. et. al. Vet Res 1980, 107, 9 :201, 19.Engster A.K. et.al. J Am Vet Med Assoc,
1978, 173, 10 :1340. 20.Европ. патент EPO 554414A1, 1994, 15 :8. 21.Fascus S.A. et.al. Am J
Vet Res 1985, 46, 4 :859. 22.Flehmig B. et.al. J Med Virol 1987, 22 :7. 23.Fulker R.H. et. al.
Med vet Pract 1982, 63, 2 :155. 24.Goto H. et.al. Jap J Vet Sci, 1984, 46, 5 :729. 25.Goto H.
et.al. Jap J Vet Sci, 1984, 46, 4: 519. 26.Hirosava T. et.al. Jap J Vet Sci 1985, 47, 1 :89.
27.1shibeshi K. et.al. Jap J Vet Sci 1983, 45, 1: 59. 28.Johnson R.H. et.al. Vet Quart, 1983, 5, 2
:86. 29.Kahn D.E. et.al. Vet Med smoll Animal Clin. 1983, 78, 11 :1739. 30.Klingeborn B. et.al.
Zbl Vet Med Reihe B, 1980, 27 :483. 31. Langeveld J.B.M. et.al. J Virol 1994, 88, 7 :4506.
32.Lenghans C. et.al. Austral Vet J 1980, 56, 10 :465. 33.Macartney L. et. al. Vet Res 1984, 115,
569
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
9 :201. 34.Macartney L. et.al. Vet Res 1984, 115, 18: 453. 35.Mathys A. et.al. Am J Vet Res
1983, 44, 1 :150. 36.McCarthy G. Irish Vet J 1980, 34, 2 :15. 37.Mcgavin D.R. et.al. Pat
633349, Австралия, № 61523/90, заявл. 08. 08. 92. 38.Mengeling W.L. Amer J Vet Res, 1983,
44, 5: 865. 39.Mess J. Tierarztl Praxis 1984, 12, 3 :427. 4O.MeunierP. C. et.al. Vet Pathol 1984,
21, 5 :509. 41.Mildbraid M.M. et.al. Amer J Vet Res 1984, 45, 11: 228. 42.Mohry Sh. et.al. Jap J
Vet Sci 1982, 44, 3 :354. 43.Moore D.J. J S Afr Vet Assoc 1983, 54, 4 :259. 44.Nara P.L. etal.
Amer J Vet Res 1983, 44, 11: 1989. 45.Parrish C.R. et.al. Arch Virol, 1982, 72, 4 :267.
45a.Parrish C.R. et.al. Virology, 1988, 166, 2 :293. 46.Pastoret P.P. Ann Med Vet, 1984, 128, 6
:473. 47.Pollock Roy V. etal. Am J Vet Res 1983, 44, 2 :169. 48.Postoret P. et.al. Ann Med Vet
1980, 24, 2 :89. 49. Potgieter L. N. D. et.al. Can J Comp Med, 1981, 45, 3: 212. 50.Povey C. Can
Vet J 1982, 23, 1: 15. 51.Rimmetzwaan G.F. et.al. Vet Quart 1990, 12, 1 :14. 52.Sehwers A.
et.al. Ann Med Vet 1980, 124 :255. 52a.Siegl G. Parvoviruses., New York, London, 1984 :362.
53.Senda M. etal. Vet Microbiol 1986, 12, 1 :1. 54.Soliki J.T. et.al. J Gen Virol, 1992, 73, 2
:369. 55.StannS.E.et.al. J Amer Med Assoc, 1984, 185, 6 :651. 56.Teramoto Y.A. J Clin
Microbiol 1984, 20, 3 :373. 57.Tratschin Jon-Duri etal. J Gen Vinl, 1982, 61,1 :33. 58.Uvatoko
K. et.al. Vet Microbiol, 1995, 43, 4 :315. 59. Waldvogel A.S. et.al. J Vet Med В 1991, 38, 5:
353. 6O.Walker S.T. et.al. Austral Vet Pract 1979, 9, 3 :151. 61.Wallace B.L. et.al. Cornel Vet
1983, 73, 1 :52. 62.Weissenbock H. et.al. J Vet Med 13. 1991, 38, 7 :481. 63.Wierput M.
Proccelings, 1983 :560. 64.Wood H.A. et.al. Boyce-Thompson Inst, for Plant Res inc; Cornell
Res. Foundation, Inc. N 191684, 09. 05. 1988, опубл 20.11.1990. НКИ 424/88.
ПАНЛЕЙКОПЕНИЯ КОШЕК
Panleucopenia infectiosa (лат.); Infectiose Enteritis, Agranulozytose, Katzenseuche,
Katzenpest, Aleucozytose, Panleukopenie der Katze (нем.); Feline panleucopenia, Infec-
tious feline enteritis (англ.); Leucopenie infectiose des chats (франц.)
Панлейкопения кошек (ПЛК, парвовирусная инфекция кошачьих, агранулоцитоз кошек,
чума кошек, кошачья лихорадка, инфекционный энтерит кошек, кошачья атаксия, инфекци-
онный ларинготрахеит кошек) - высококонтагиозная и обычно смертельно протекающая бо-
лезнь домашних кошек, клинически проявляющаяся панлейкопенией, лихорадкой, рвотой,
сильной диареей и крайним обезвоживанием организма. При клинически выраженной бо-
лезни погибает 65-90% кошек.
Болезнь распространена повсеместно (Франция, США, Англия, Канада, Бразилия, Ин-
дия и др страны). Болеют, главным образом, молодые кошки, а там, где вирус занесён по-
вторно, - кошки всех возрастов. Восприимчивы все представители семейства Felidae, львы,
тигры. В Лондонском зоопарке описаны смертельные случаи болезни тигров, леопардов,
львов, гиен и других представителей семейства кошачьих. Наблюдалось заболевание диких
кошек, енотов из семейства Procyonidae. Из семейства Mustelidae заражаются только норки.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. В США лейкопению
среди кошек регистрируют, главным образом, в июле-сентябре. Около 70% заболевших со-
ставляют животные моложе 1 г. Чаще болеют кошки в возрасте 7-12 мес. Болезнь протекает
остро и сопровождается высокой температурой (до 42°С), рвотой и лейкопенией (100-50
лейкоцитов в 1 мм3). Преобладающее число лейкопений, вызванных вирусом ПЛК, встреча-
ется среди кошек до 3-летнего возраста. Принято считать, что все случаи лейкопений, когда
лейкоцитов меньше 1000 в 1 мм3 крови, вызваны вирусом. При контактном заражении ин-
кубационный период не более 6 дн. Начало болезни характеризуется резким повышением
температуры, которая повышается дважды: первый раз удерживается в течение 24 ч, затем
570
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
снижается и вновь повышается через 48 ч. Одновременно ухудшается общее состояние жи-
вотного - оно слабеет и худеет. В результате частой рвоты и обильной, иногда стойкой кро-
вянистой диареи, обезвоживается организм. Наблюдаются истечения из носа и глаз. Тяжё-
лая лейкопения охватывает все гранулоциты (агранулоцитоз) и другие лейкоциты. С 3-го по
5-й день болезни особенно выражены нейтропения и лимфопения. Активность ферментных
систем лимфоидной ткани и тонкого кишечника изменяется. Вначале она снижается, затем
возрастает. Высокий уровень активности отмечен в ретикулярных клетках и макрофагах.
Изменения активности ферментов прямо пропорциональны деструкции лимфоцитов и ги-
перплазии ретикулярных клеток с последующей пролиферацией лимфобластов. Для хрони-
ческого течения болезни характерны устойчивый катар кишечника, анемия н кахексия. У
многих кошек болезнь, вероятно, протекает в субклинически и не диагностируется, сопро-
вождаясь формированием иммунитета.
Патологоанатомические изменения не характерны. При вскрытии павших животных на-
ходят слизисто-гнойный экссудат на слизистой оболочке носа и глаз, острый энтерит, осо-
бенно нижней части подвздошной кишки, увеличение селезёнки, набухание мезентериаль-
ных лимфоузлов и “полужидкий” апластический костный мозг. В клетках эпителия кишеч-
ника, а также в лимфоузлах обнаруживают внутриядерные эозинофильные включения. И1
отличают от включений типа А Каудри, встречающихся в виде гроздевидно скопившихся
или рассеянных гранул, которые со временем становятся базофильными. В костном мозге
павших животных гистопатологические изменения проявляются гранулопоэзом.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые идентифицирован во Франции Верж и Христофором в 1928 г., в Англин
его выделили в 1933г. (Хиндл н Файнли), а в США - в 1938 г. (Лоуренс н Сайвертон).
Морфология и химический состав. Вирус имеет 1-спиральную ДНК, мол.м. которой
не определена. Диаметр вириона 20-24 нм, он имеет 32 капсомера, 20 нз них гексоны и 12
пентоны. Встречаются вирионы вытянутой формы диаметром 9,5-12 нм. Плавучая плот-
ность в CsCl 1,33 г/см3 (Рис. 85).
Устойчивость. Вирус высокоустойчив к фенолу, эфиру, хлороформу, кислотам, трипси-
ну, 0,2%-ному р-ру дезоксихолата натрия, pH 3,0. При 56°С активен в течение 60 мин. Хо-
рошо сохраняется в 50%-ном глицерине, забуференном до pH 7,2. В культуральной вируссо-
держащей жидкости сохраняется активным при 4 и 25°C в течение 13 мес без снижения
титра. Чувствителен к 2-бром-5-дезоксиуридину. Добавление этого препарата в культураль-
ную среду в количестве 20 мгк/мл тормозит репродукцию вируса в 500 раз. Вирус чувстви-
телен к нагреванию в 1 М р-ре MgCl2.
Антигенная структура не изучена.
АГ активность. Вирус индуцирует у кошек образование ВНА и анти-ГА. Первые выяв-
ляются на 3-й день после клинического выздоровления и сохраняются несколько лет. Гипе-
риммунные сыворотки титруют в PH и РТГА. Выявлена корреляция титров в РТГА и PH.
АГ вариабельность и родство. Вирус панлейкопении кошек представлен, видимо, од-
ним АГ серотипом (эталонный шт. 193/70). Все штаммы вируса, выявленные в различных
географических зонах, не имеют АГ родства с парвовирусами других животных. Однако в
1967 г. Джонсон и др. показали серологическую связь этого вируса с вирусами атаксии ко-
шек и энтерита норок. В тесте перекрёстной PH штаммы вируса панлейкопении кошек ока-
зались родственны стандартному вакцинному шт. FPV-TVL. Эталонным штаммом вируса
ПЛК является шт. Philips Raxane.
ГА свойства. Вирус обладает ГА активностью, причём она у различных штаммов не-
одинакова. Вирус, выращенный в культуре клеток свиней, также обладает ГА-свойствами.
Специфическая ГА проявляется после 2 ч инкубации при 4°С и использовании 0,01 М фос-
фатного буфера pH 6,8. РГА тормозится антисывороткой. ГА FePV выдерживает обработку
571
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
эфиром и повышенную температуру. Элюция вируса происходит при 37°С в течение 4 ч.
Обработка эритроцитов RJDE предотвращала наступление РГА.
Локализация вируса, вирусовыделение и вирусоносительство. Изучены недоста-
точно. Переболевшие кошки и норки могут некоторое время выделять вирус.
Экспериментальная инфекция. Кошки и норки заболевают при различных способах
заражения. Котята поражаются типичной диарейной формой панлейкопении и погибают иа
6-9-й день после заражения. Инкубационный период продолжается 48 ч. Животные других
семейств невосприимчивы.
Культивирование. Вирус размножается в культуре клеток почки, селезёнки, лимфоуз-
лов и надпочечников котят и вызывает утончение и шероховатость клеточного монослоя. Он
избирательно поражает клетки в состоянии активного митоза через 2-3 ч после клеточного
деления. Максимальное развитие ЦПИ наступает на 4-5-й день после заражения клеточного
монослоя. Через несколько дней вид заражённой культуры обычно не отличается от кон-
трольной. На окрашенных препаратах отмечали увеличение ядрышек, маргинацию хрома-
тина и появление внутриядерных эозинофильных включений типа А Каудри, окружённых
ореолом. Позднее эти включения становятся гомогенными и базофильными. Титры культу-
рального вируса колеблются в пределах 102-104 ТЦД50/0,1мл. Помимо первичных культур
клеток, вирус размножается в диплоидных клетках слизистой оболочки языка кошек, дип-
лоидных клетках тимуса и почек кошек, львов, кошачьей фибросаркомы.
Особенности внутриклеточной репродукции. На 3-й день после инфицирования куль-
туры клеток почки котят поражённое ядро увеличивалось, ядерный хроматин становился
более тёмным и зернистым. Внутриядерные включения увеличивались в размере, уплотня-
лись и были окружены резко очередным ореолом. Ядрышки окрашены темнее, напоминали
включения, но окружены более светлым ореолом. Края включения относительно ровные,
хотя на более поздних стадиях становились сморщенными и зубчатыми. Образование вклю-
чений зависело от титра вируса в культуре. Цитоплазма поражённых клеток огторжена и
перекручена, заметен пикноз.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные жи-
вотные. Инфекция может передаваться через инфицированные домашние вещи. Предпола-
гают возможность естественной передачи болезни инфицированными членистоногими
(особенно блохами) или гельминтами.
Спектр патогенности в естественных условиях. Панлейкопенией болеют домашние
кошки, но могут поражаться дикие кошки, леопарды, рыси и еноты.
ДИАГНОСТИКА
Предварительный диагноз ставят на основании симптомов болезни и агранулоцитоза.
Для выделения вируса из трупов берут кусочки селезёнки, мозга и 12-перстной кишки. Час-
то вирус выделяют от здоровых на вид котят. Внутриядерные включения обычно выявляют-
ся на 4-й день во вторичных культурах инфицированных почек котят. Обнаружить внутри-
ядерные включения в эпителиальных клетках тонкого кишечника удаётся лишь у павших
животных. Выделенный вирус идентифицируют в PH и РТГА. Ретроспективную диагности-
ку проводят на основании серологических реакций (PH и РТГА) и ИФ.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные приобретают стойкий иммунитет, а материнские АТ могут не-
которое время защищать котят от заболевания. Если в этот период котята контактируют с
вирусом, у них может развиться субклиническая иммунизирующая инфекция.
Активную иммунизацию кошек проводят живым аттенуированным или инактивирован-
ным вирусом. В США применяют живую вакцину Felido vac L из аттенуированного штамма
(вирус, прошедший 10-13 пассажей в культуре ткани хорька). Животные хорошо переносят
572
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
вакцинацию. Вакцина проявила хорошие защитные свойства. В Англии применяют живую
вакцину, полученную путём серийного пассирования вируса в культуре клеток эмбриона
кошки. Вакцина обладает хорошими АГ- и иммуногенными свойствами. Через 72 ч посде Т-
кратного введения кошки становились устойчивыми к экспериментальному заражению.
ВНА у животных сохранялись в высоком титре (до 1:512) в течение 23 мес послешммуниза-
ции. Практикуется также аэрозольная вакцинация кошек культуральной живой/вакциной.
В Англии успешно применяют инактивированную вакцину, предложенную Слатер и
Кисеча. Прививать этой вакциной рекомендуют молодняк в возрасте 16 неддвукратно с 3-8-
нед интервалом, что обеспечивает невосприимчивость до 16 мес. Живая вакцина создаёт
более напряжённый иммунитет.
ПАРВОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ СВШПП
Парвовирусная инфекция свиней - (ПВИС), контагиозная вирусная болезнь, проявляю-
щаяся клинически только у супоросных свиноматок и характеризующаяся прохолостами,
малочисленными пометами, рождением мумифицированных плодов, мертвых и слабых по-
росят и реже абортами.
Связь парвовируса свиней с нарушением воспроизводительной функции свиноматок в
естественных условиях впервые была установлена в 1967 г. в Великобритании, однако экс-
периментально болезнь была воспроизведена только через 10 лет. Необходимо учитывать,
что в патологии воспроизводительной системы свиноматок существенное значение имеют
вирусы чумы свиней, болезни Ауески, японского энцефалита, энтеровирусы, ротавирусы и
парвовирусы. Причём последние причиняют наибольший экономический ущерб, который
проявляется, в основном, за счёт гибели и мумификации эмбрионов. При возникновении бо-
лезни в ранее благополучных хозяйствах рождение живых поросят на одну свиноматку в год
снижается на 50-60%, в стационарно-неблагополучных хозяйствах - на 10-20%.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Парвовирус свиней -
наиболее частый возбудитель болезни, известный как СМЕДИ (мёртворождаемость, муми-
фикация, смерть эмбриона, бесплодие). До недавнего времени считалось, что возбудителем
СМЕДИ являются только энтеровирусы пяти типов. В настоящее время доказано, что в
этиологии синдрома СМЕДИ участвует парвовирус одного серотипа. Парвовирусная и энте-
ровирусная инфекции клинически проявляются одинаково.
Болезнь у свиноматок протекает, как правило, без видимых симптомов. Наблюдается
лишь нарушение репродуктивной функции. В первую неделю после заражения отмечают
лёгкую лейкопению и иногда кратковременное повышение температуры. В этот период ви-
рус может быть выделен из крови и тканей с резко выраженной пролиферативной активно-
стью. В период виремии вирус проходит через плаценту и инфицирует эмбрионы или пло-
ды. Патогенное действие его распространяется до 70-го дн супоросности только на эмбрио-
ны и плоды, после чего они становятся иммунокомпетентными и на заражение отвечают
синтезом АТ. Поросята рождаются нормальными, но являются носителями одновременно
вируса и АТ.
В оплодотворённые яйцеклетки и ранние эмбрионы, содержащие “прозрачную” оболоч-
ку, вирус не проникает. Ранние эмбрионы, вероятно, инфицируются после удаления
“прозрачной” оболочки и имплантации в слизистую оболочку матки (через 9-12 дн после
оплодотворения). Заражение всех эмбрионов в этот период приводит к их гибели и полному
рассасыванию с последующим возвратом свиноматок в охоту. При заражении и гибели час-
ти эмбрионов беременность протекает нормально, но уменьшается число поросят в помёте.
Полное рассасывание эмбрионов происходит в том случае, если они погибли в первые 30-36
573
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
дн беременности, т. е. в эмбриональную фазу развития. После этого срока начинается плод-
ная фаза развития, характеризующаяся кальцификацией скелета и невозможностью полного
рассасывания плода. Заражение и гибель всех плодов в этот период приводит к их мумифи-
кации и отсутствию родов. Введение такой свиноматке после предполагаемой даты опороса
простаглантидов обьино приводит к опоросу. Передача вируса от одного плода к другому
происходит медленно, в связи с этим они погибают на различных стадиях развития. Обычно
не все плоды поражаются вирусом, и при опоросе рождаются мумифицированные плоды
различной величины, мёртвые, слабые и нормальные поросята. Заражение 75-дн плодов не
даёт результатов. Материнские АТ защищают молодых свинок в течение 6 мес. У несупо-
росных свиней вирус не вызывает симптомов болезни. Инфицированные свиньи экскрети-
руют вирус с калом 3-7, иногда 14 дн (7, 9,10, И, 21,50,57).
Свиньи, инфицированные в постнатальный период практически не проявляют клиниче-
ских признаков заболевания, хотя в течение 7-14 дн выделяют вирус с мочой, фекалиями и
слюной, после чего сохраняют иммунитет пожизненно. Трансплацентарная передача вируса
плодам и эмбрионам происходит во время виремии у неиммунных свиноматок после пер-
вичного инфицирования. Вирус размножается, в основном, в пролиферативных тканях и в
первую очередь в плаценте и плодах. Эмбрионы, инфицированные в возрасте до 36 дн, по-
гибают и рассасываются. Заражение плодов между 36 и 70-м дн ведет к их гибели и муми-
фикации, а иногда у них развивается иммунотолерантность с пожизненным выделением ви-
руса без продукции монАТ. Когда плоды инфицируются в более поздней стадии беременно-
сти, большинство из них реагирует лишь образованием АТ. Эмбрионы, заражённые в пер-
вые 35 дн развития, погибают и рассасываются.
У хряков-производителей болезнь протекает бессимптомно, но они выделяют вирус со
спермой в течение 2-3 нед после заражения. Вирус не оказывает непосредственного дейст-
вия на сперматозоиды. Однако парвовирусная инфекция в гениталиях у хряков является од-
ной из причин мумификации плодов и мёртворождений у свиноматок. У иммунных свино-
маток беременность, как правило, проходит нормально. В последнее время парвовирус сви-
ней выделен из содержимого тонкого кишечника поросят 2-3-нед возраста с диарейным
синдромом и везикулярными поражениями. У поросят терялся аппетит, повышалась темпе-
ратура тела, появлялись понос и рвота. У небеременных свиноматок макро- и микроскопи-
ческих изменений в тканях и органах не обнаружено. Макроскопические изменения отсутст-
вовали у супоросных свиноматок, заражённых в различные сроки беременности, однако
микроскопически у них обнаружены фокальные скопления мононуклеарных клеток в эндо- и
миометрии и периваскулярные муфты из лимфоидных и плазматических клеток в головном
и спинном мозге.
Макроскопически у плодов, инфицированных до периода иммунокомпетентности, обна-
руживают различные уровни задержки роста, рельефность кровеносных сосудов в результа-
те переполнения кровью, отёк, геморрагии, скопление серозно-кровянистой жидкости в по-
лостях и дегидратацию (мумификацию). Многие из этих изменений встречаются в плаценте,
микроскопически отмечают обширные зоны некроза во многих тканях и органах и внутри-
клеточные включения. У плодов, заражённых после наступления иммунокомпетентности,
обнаруживают только микроскопические изменения (инфильтрацию мононуклеарными
клетками), свидетельствующие об иммунном ответе на введение вируса. У мёртворождён-
ных поросят и живых плодов, полученных на поздних стадиях супоросности, отмечали ме-
нингоэнцефалиты (5, 6).
Патогенез. Заболевание свиноматок протекает бессимптомно, вирус проникает через
плаценту, поражает плоды, вызывая их мумификацию и гибель. Воздействие на функцию
яичников проявляется в появлении абортов и преждевременных родов.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
574
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Вирус впервые выделили из плода обортировавшей свиноматки Мауег и др. в 1966 г. в
хозяйстве, где было отмечено нарушение репродукции свиней (преждевременные роды,
аборты, мумификация плодов).
Морфология и химический состав. Зрелый вирион имеет кубическую симметрию,
включает 32 капсомера, 2 или 3 капсидных белка, диаметр вириона около 20 нм, не содер-
жит оболочки и липиды, мол.м. составляет 5,3-106 Д. Вирусный геном представлен 1-
нитевой ДНК с мол.м. 1,4 кД, т.е. около 26,5% массы полного вириона. Плавучая плотность
в CsCl полного инфекционного вируса, неполного (“пустого”) вириона и экстрагированной
вирионной ДНК составляет 1,38-1,395, 1,30-1,315 и 1,724 г/см3 соответственно (11,13,41).
Устойчивость. Парвовирус свиней (ПС) устойчив к действию различных физико-
химических факторов. Сохраняет инфекционность при pH 3-9 и 37°С 1,5 ч. однако полно-
стью инактивируется при pH 2 в тех же условиях. Инфекционность его не снижается при pH
2,8 и 4°С в течение 18 ч. Вирус стабилен при 56°С в течение 2 Сут, прн 70°С - 2 ч и при
80°С инактивируется за 5 мин. Не теряет инфекционность в культуральной жидкости с 20%
фетальной сыворотки коров при 35-37°С в течение 15 нед. Устойчив при обработке хлоро-
формом, эфирам и фреоном в 10-50%-ной концентрации в течение 10-30 мин при комнат-
ной температуре, дезоксихолатом натрия (0,01-0,1%-ным) -1ч при 37°С, этанолом (10-
40%-ным) - 0,5-2 ч при 4-20°С (16,17).
Вирус резистентен к действию РНК- и ДНК-азы и протеаз (папаина, химотрипсина,
трипсина, пепсина), что позволяет использовать эти ферменты для удаления клеточных нук-
леиновых кислот и белков при очистке вируса. Обработка трипсином в конечной концен-
трации 0,05% в течение 1 ч при 37°С приводит к увеличению его инфекционности в ре-
зультате расщепления вирусных агрегатов. Трипсин в большей концентрации (0,1-0,5%) вы-
зывает незначительное снижение инфекционности вируса. Он устойчив к действию ультра-
звука, что может быть использовано для очистки вируса от клеточного детрита, инактивиру-
ется УФ лучами, формалином, этиленимином и его производными, p-пропиолактоном, глу-
таральдегидом. В качестве среды для хранения предпочтительней использовать трис-буфер
(pH 7,6), а не фосфатный буферный р-р (pH 7,4). Вирус обладает высокой чувствительно-
стью к высушиванию и способен длительно выживать в широком диапазоне кислых и ще-
лочных pH сред. В помещениях вирус сохраняет активность более 4 мес (37). Эффективны-
ми дезинфектантами являются 3%-ный р-р гипохлорита натрия, 8%-ный р-р формальдегида
и 5%-ный р-р гидрооксида натрия, которые инактивируют вирус за 5-20 мин в условиях
комнатной температуры. ПВ высокоустойчивы во внешней среде и сохраняются в свинар-
нике до 4-6 мес. В лабораторных условиях ПВ представляют большую опасность как конта-
минанты клеточных культур, препаратов, вирусов и вакцин (2,3,5, 6,8, 40).
АГ структура. Вирус содержит 3 больших полипептида: А, В, С.
АГ вариабельность и родство. Все сравнивавшиеся изоляты ПС оказались в АГ-
отношении похожими, если не полностью идентичными (48). ПС АГ связаны также с неко-
торыми членами рода (19, 37,38). Однако, их идентичность может быть установлена наибо-
лее специфичными серологическими реакциями, такими как PH и РТГА (40).
Локализация вируса. Наибольшее количество вируса обнаруживается в лимфоидных
тканях. Ко времени гибели плода вирусный АГ накапливается в цитоплазме большинства
s клеток эмбриона и в плаценте. У всех экспериментально заражённых ие иммунизированных
поросят развивается виремия, и они выделяют вирус со слюной и фекалиями. Выжившие
поросята из инфицированного помёта могут оставаться всю жизнь вирусоносителями и пе-
риодически выделять его во внешнюю среду. У поросят, рождённых от первоопоросок, ко-
торых инфицировали парвовирусом в первые 55 да супоросности, АТ отсутствуют. Вирус
Выделяется из почек, тестикулов и семейной жидкости до 8 мес после рождения. Заражён-
ные парвовирусом хряки выделяют вирус со спермой. Не удалось экспериментально под-
575
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
твердить, что ПС вызывает диарею, как ротавирусы, и их интенсивную репликацию в сли-
зистой крипт эпителия кишечника (14, 15, 17, 18). ПС также выделяли из поражений, напо-
минающих везикулярные, однако этиологическая роль их в этом случае не определена (30).
АГ активность. Вирус обладает выраженной АГ активностью и индуцирует синтез
ВНА, КСА, ПА и анти-ГА. Изучение АГ свойств изолированных индивидуальных вирион-
ных полипептидов возбудителя показало, что антисыворотка к каждому структурному белку
нейтрализует инфекционную активность полных вирионов и взаимодействует со всеми 3-мя
структурными белками вируса. Каждый индивидуальный белок вируса взаимодействует с
ВНА, полученными на введение полного вируса. Предполагают, что вирусспецифические
АГ детерминанты имеются на всех вирионных белках ПВСв. Получение монАТ к каждому
белку позволит выяснить количество АГ детерминант и их распределение. Биологический
полураспад АТ к ПВСв у поросят зависит от их массы, в среднем он составляет от 18 до 20
дн. Для обнаружения и количественного определения гуморальных АТ чаще применяют
РТГА. Перед постановкой реакции сыворотки инактивируют 30 мин при 56°С, затем обра-
батывают эритроцитами и каолином. PH для обнаружения и количественного определения
гуморальных АТ к ПС используют реже, так как вирус вызывает недостаточно чёткий ЦПЭ,
однако PH более чувствительна, чем РТГА. Разработан микрометод постановки PH.
Экспериментальная инфекция. ПВСв оказался патогенным для этого вида животных
и апатогенным дая хомячков и мышей. У всех заражённых поросят симптомы болезни и па-
томорфологические изменения обычно отсутствуют, однако обнаруживаются специфические
АТ. Вирус выделяют из семенных пузырьков на 7-9-й день после заражения. С 12-го дня у
животных выявляют анти-ГА. Вирулентный шт. 90HS вызывал у поросят виремию через
день после заражения, продолжавшуюся до убоя (через 2, 4, 6 дн после заражения). Вирус
выделяли в титрах от 2 до 6 1g ТЦД 50/мл из крови, мозга, легких, печени, селезенки, под-
желудочной железы, тонкого кишечника, лимфоузлов всех инфицированных поросят. Титр
его в крови после перорального и подкожного заражения был 101,75-102’25 и 104,25-106’2
ТЦД50/мл соответственно. Анти-ГА были обнаружены на 6-й день после заражения (31).
У поросят, находившихся в контакте с заражёнными животными, так же обнаружива-
лись специфические АТ, что свидетельствует о контагнозности инфекции. После внутримоз-
гового, орального и интраназального заражения поросят каких-либо определённых и вос-
производимых клинических симптомов не наблюдалось. Однако у таких животных удава-
лось выделить вирус из испражнений, крови и большинства тканей. К 7-му дню выявляли
специфические АТ. При заражении свиней парвовирусом на разных стадиях беременности
наблюдали трансплацентарное инфицирование поросят.
Культивирование. ПВСв хорошо размножается в первичных культурах клеток почек,
щитовидной железы и тестикул поросят и накапливается в тигре 107-108 ТЦД 50/мл. К ви-
русу чувствительны некоторые перевиваемые культуры клеток свиней. В перевиваемых
культурах клеток почек (РК-15) и тестикул (ST) поросят он накапливается в титре 106-107
ТЦДзо/мл. Перевиваемая культура клеток СПЭВ нечувствительна к вирусу.
Репликация ПВСв лучше всего происходит в культурах клеток свиного происхождения,
а именно в первичных клетках и МРК (почки мини свиньи) и ESK (клетки эмбриональной
почки свиньи). Он хорошо культивируется в чувствительных культурах клеток. Особенно-
стью культивирования и накопления ПС является его зависимость от клеточного деления.
Кривая размножения вируса зависит от количества митозов. Он хорошо размножается в де-
лящихся клетках почки плода свиньи при заражении через 24 ч после посадки культуры.
Наивысшая концентрация вируса достигается на 3-4-й дн культивирования. ЦПЭ характери-
зуется вакуолизацией и округлением клеток, диффузной грануляцией. При изучении цикла
размножения методом ИФ было установлено, что АГ обнаруживается в ядре клеток через 6
ч после заражения и накапливается в максимальных количествах к 18-24 ч.
576
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Перевиваемые культуры клеток человека (HeLa, Hep-2, КВ, FL-Amnion) оказались кон-
таминированными ПВСв. Вероятно, в эти культуры клеток он был занесён с трипсином, по-
лученным из поджелудочной железы инфицированных свиней. Выделение ПВСв из ком-
мерческой партии трипсина подтверждает эту гипотезу и свидетельствует о высокой устой-
чивости вируса к действию различных факторов в процессе изготовления препарата. Конта-
минированные культуры клеток можно освободить от вируса путём серийного пассирования
в присутствии специфической антисыворотки (1%) в ростовой среде. ПВСв интенсивно раз-
множается в делящихся клетках, в связи с этим заражение проводят в период пересева куль-
туры клеток или в период её логарифмического роста (30-50% монослоя), когда большинст-
во клеток находится в S-фазе клеточного цикла, т.е. в фазе синтеза ДНК, когда в клетках
имеются ДНК-полимеразы, необходимые для репликации вируса.
Размножение ПВСв в первичных и перевиваемых культурах клеток сопровождается
развитием ЦПЭ, который характеризуется диффузной зернистостью и округлением клеток,
отделением их от стекла и частичным или полным разрушением монослоя. Полный ЦПЭ
наблюдается в том случае, если делящиеся клетки были инфицированы вирусом с высокой
множественностью заражения. При низкой множественности заражения он не развивается и
для обнаружения вируса необходимо субкультивирование инфицированных клеток. В зара-
жённых клетках через 18-24 ч после инокуляции развиваются внутриядерные тельца-
включения типа А, которые состоят из вирусного АГ (1). Шт 90/HS/1 ПС образует бляшки в
культе клеток ESK. Включение в покрытие ДЭАЭ декстрана в концентрациях 50-200 мкг/мл
способствует увеличению размера бляшек, ио не влияет иа инфекционные титры. Одним из
характерных свойств ПВСв является способность вызывать латентную инфекцию клеточ-
ных культур (23). ПВСв был обнаружен как контаминант первичных и перевиваемых кле-
точных культур. Пути загрязнения культур ПВСв могут быть различными, включая исполь-
зование контаминированного трипсина. Перед использованием культуры рекомендуют ис-
следовать её с целью исключения парвовирусной контаминации. Предложен метод опреде-
ления иифекциоиности вируса в тканевой культуре с использованием панелей для микро-
титрования, в которых конечное разведение определяется по РГА и Г Ад эритроцитов мор-
ской свинки. Разработана методика титрования иифекциоиности ПВСв методом бляшек под
агаровым покрытием в культуре перевиваемой линии клеток ST тестикулов поросёнка.
ГА свойства. ПВСв агглютинирует эритроциты морской свинки, цыплёнка, кошки,
крысы, мыши, обезьяны, человека и не агглютинирует эритроциты барана, лошади, свиньи,
КРС, собаки, кролика, хомячка и утки. Для определения его гемагглютинирующей активно-
сти чаще используют эритроциты морской свинки, реакцию проводят при температуре 4°С,
а в качестве разбавителя применяют фосфатно-буферный р-р (pH 7,2). Наибольшим титр ГА
наблюдается при использовании вероналового буфера. Титры ГА ПВСв могут значительно
варьировать в зависимости от донора эритроцитов. Вирус не освобождается с эритроцитов
при 37-40°С в течение 1 ч, однако в щелочном буфере (pH 9) он полностью элюирует с них
за 30 мин при комнатной температуре.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник возбудителя инфекции - больные и
переболевшие свиноматки, которые выделяют вирус с фекалиями, мочой, носовыми и ваги-
нальными секретами, плацентой, абортированными и мёртворождёнными плодами. Здоро-
вые животные заражаются пероральным и аэрогенным путями, а также при случке и искус-
ственном осеменении инфицированной спермой. Вирус выделяется с фекалиями до 2 нед
после заражения свиней per os и в помещениях сохраняет инфекционность до 135-140 дн.
Обнаружение его в вагинальной слизи свиноматок с нарушением воспроизводительной
функции и семени хряков-производителей свидетельствует о важности полового пути в пе-
37 Зак. № 171
577
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
редане вируса. Установлено, что ПВСв выделяется через половой тракт экспериментально
зараженных хряков (20,22,26).
В благополучные хозяйства ПВСв заносится, главным образом, с ремонтными свинками
и хряками, которые являются вирусоносителями, и инфицированной спермой. Трансплацен-
тарное заражение плодов может привести к развитию иммунотолерантности, такие живот-
ные периодически выделяют вирус до 8-мес возраста. Поскольку вирус длительно сохраняет
активность во внешней среде, не исключена возможность его механического заноса. Зане-
сённый в благополучное хозяйство, он в течение 2-3 мес поражает всех животных.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях болеют
только свиноматки. У них вирус проходит через плаценту и в зависимости от срока супо-
росности приводит к различной патологии. У зараженных на ранней стадии супоросности
(до 36 дн) эмбрионы погибают и рассасываются. Такие свиноматки, как правило, вновь
приходят в охоту, и последующая супоросность протекает нормально. У зараженных на 35-
56-й дн супоросности часть или реже все плоды погибают и мумифицируются, что приводит
к уменьшению числа жизнеспособных поросят. Мертворождение, в основном, происходит
при инфицировании свиноматок на 56-70 день супоросности. После этого срока плоды в
большинстве случаев становятся устойчивыми к летальному действию вируса, но после ро-
ждения могут оставаться вирусоносителями, отставать в росте.
ДИАГНОСТИКА
На наличие в хозяйстве парвовирусной инфекции свиней указывают признаки наруше-
ния воспроизводительной способности свиноматок. Однако окончательный диагноз ставят
на основании результатов лабораторных исследований. Джо и др. (1979) предложили экс-
пресс-метод диагностики ПВ инфекции. Из суспензии органов мумифицированного плода,
обработанной УЗ, получали материал, пригодный для использования в качествве АГ в РГА.
Этот метод может быть использован для постановки предварительного диагноза.
Выделение вируса. Его изолируют в культуре клеток почек и щитовидной железы сви-
ней. ПВСв выделяют из висцеральных органов больных поросят, глотки, носа, головного
мозга, сыворотки крови, кожных поражений. С помощью ИФА парвовирусный АГ выявля-
ют во внешних слоях волосяных фолликулов в коже, прилегающей к поражениям края вен-
чика. Однако, выделение ПВСв считается менее пригодным и надёжным диагностическим
тестом, чем РИФ и РГА для выявления вирусного АГ. Во-первых, выделить вирус из по-
гибших или мумифицированных плодов удаётся далеко не всегда, во-вторых, из-за устойчи-
вости ПВСв существует постоянная угроза лабораторного заражения исследуемого материа-
ла и клеточных культур. Кроме того, первичные культуры, используемые для выделения ви-
руса, могут быть приготовлены из тканей плодов и поросят, инфицированных ПВСв. Ткани
почек поросят чаще контаминированы ПВСв, чем ткани почек плодов. ПВСв обнаружен в
культурах клеток, приготовленных из почек 2-3-нед. поросят и плодов, соответственно в
12,5 и 3% случаев. Поэтому при диагностике парвовирусной инфекции свиней используют
МФА, РГА для обнаружения вирусного АГ в тканях плодов и РТГА, РДП, PH и ELISA для
выявления и титрования АТ в сыворотке крови свиноматок, а также в сыворотке мёртворо-
ждённых плодов и новорождённых поросят до приёма молозива.
Взятие и подготовка материала. На исследование должны быть направлены мумифи-
цированные плоды длиной менее 16 см или лёгкие таких плодов. Более крупные мумифици-
рованные плоды (более 70 дн супоросности) и мёртворождённые поросята для выделения
вируса не пригодны, так как, будучи инфицированными, содержат АТ, что мешает выявле-
нию вируса и вирусного АГ. Для серологического исследования в лабораторию направляют
10-15 проб сыворотки крови (по 2-3 мл) свиноматок с нарушением воспроизводительной
функции. Кроме того, рекомендуют направлять сыворотку крови от плодов, мёртворождён-
ных и новорождённых поросят до приёма молозива. Если у плодов нельзя взять сыворотку
578
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
крови, берут жидкость из полостей плода после хранения их при 4°С в течение ночи, мате-
риал доставляют в лабораторию в термосе со льдом.
Выделение вируса в культуре клеток. Считается менее удобным и надёжным диагно-
стическим тестом из-за вышеуказанных причин. При необходимости для этой цели наибо-
лее часто используют первичные культуры клеток почки эмбриона свиньи, клетки щитовид-
ной железы свиней, перевиваемую культуру клеток тестикул свиньи и почки поросёнка.
Культуры клеток, используемые для выделения вируса, предварительно исследуют на кон-
таминацию им. Культуру клеток заражают в период посева или некоторое время спустя, ко-
гда они ещё находятся в стадии логарифмического роста. Индикацию вируса клеток прово-
дят по ЦПД, но чаще в ИФ, РГА или по выявлению внутриядерных телец-включений при
окраске инфицированных клеток гематоксилин-эозином или титрованием методом бляшек
(29, 58). При низкой множественности заражения ЦПД не проявляется и для обнаружения
вируса необходимо субкультивирование инфицированных клеток. При культивировании ви-
руса обычно используют сывороточные среды (до 7-10% сыворотки).
ЭМ и ИЭМ. Они более чувствительны, чем ИФ, РГА и выделение вируса.
Обнаружение специфических телец-включений. При окраске инфицированных куль-
тур клеток почки поросят гематоксилин-эозином выявляют внутриядерные тельца-
включения типа А, которые состоят из вирусного АГ.
Индикация с помощью гибридизационного зонда. В настоящее время осуществимо
после картирования ДНК ПВСв. Биопроба в диагностической практике применяется редко.
Серологическая идентификация
ИФ. Надежный и чувствительный диагностический тест идентификации вирусного АГ.
При отсутствии у плодов антител АГ выявляется во всех тканях, а в присутствии АТ - глав-
ным образом в клетках легкого плода. Этот же метод используют и для идентификации ви-
руса в инфицированных культурах клеток.
РГА. Используется для обнаружения вирусного АГ в тканях плода, для чего из внутрен-
них органов абортированных плодов (длиной менее 16 см) готовят 20-30%-ную суспензию,
осветляют центрифугированием при 1000 мин1 20 мин; надосадочную жидкость исследуют
в РГА с эритроцитами морской свинки (0,6%-ная взвесь на фосфатном буфере).
Для индикации вируса в культуре клеток в РГА используют культуральную вируссодер-
жащую суспензию. Так как ПС тесно связан с клетками, для освобождения вируса клетки
разрушают тремя циклами замораживания при -20°С и быстрого оттаивания при 37°С. РГА
ставят общепринятым методом при 4°С . В первичной культуре клеток почки эмбриона сви-
ньи вирус накапливается в титре 108 ТЦД 50/мл и имеет ГА активность 512 ед./0,5 мл и на 1-
2 порядка ниже в культуре клеток. О разработке и внедрении вариантной идентификации
вируса с помощью монАТ данных пока нет.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
РТГА. Наиболее широко применяется для обнаружения специфических АТ в сыворотке
крови свиноматок и плодов. С успехом может быть использована для широкого эпизоотоло-
гического обследования хозяйств. В ВИЭВ и ВГНКИ ветпрепаратов разработан диагности-
ческий набор. Ставят РТГА по общепринятой методике в макро- и микровариантах. Перед
постановкой реакции сыворотки крови освобождают от термолабильных и термостабильных
ингибиторов гемагглютинации и неспецифических гемагглютининов. От термолабильных
ингибиторов сыворотки освобождают прогреванием в водяной бане при 56°С 30 мин, от
термостабильных - обработкой каолином. К 0,2 мл инактивированной сыворотки добавляют
0,6 мл 25%-ной суспензии каолина. Смесь выдерживают 20 мин при комнатной температу-
ре, периодически встряхивая, и центрифугируют 20 мин при 2000 мин’1. Сыворотки отсасы-
вают и для удаления неспецифических гемагглютининов добавляют по 0,1 мл осадка эрит-
роцитов морской свинки. После 1 ч контакта при комнатной температуре эритроциты осаж-
37*
579
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
дают центрифугированием (2 тыс. об/мин, 20 мин) и сыворотки используют для постановки
РТГА с эритроцитами морской свинки (0,6%-ную суспензию). Каждое разведение испытуе-
мых сывороток (от 1:8 до 1.16384) смешивают с 4 ГАЕ антигена и инкубируют 1 ч при ком-
натной температуре, после чего к смеси добавляют эритроциты. Реакцию ставят при 4°С в
течение 2-3 ч. В качестве разбавителя используют фосфатно-буферный р-р (pH 7,2).
Диагноз считают установленным, если в двух и более пробах сывороток крови свинома-
ток будут обнаружены специфические АТ в разведении 1:64 и выше. Выявление в РТГА ан-
тител в сыворотке крови плодов после 70-го дня супоросности и новорожденных поросят до
приема молозива свидетельствует о заражении их в матке, поскольку АТ не проходят через
плаценту. У мертворожденных поросят для обнаружения антител используют транссудат из
грудной и брюшной полостей.
Обработка сывороток крови 2 М 2-меркаптоэтанолом приводит к разрушению IgM и не
влияет на IgG. Разрушенные IgM не выявляются в РТГА. Снижение титра АТ в сыворотке
крови в 16 раз и более после обработки их 2-меркаптоэтанолом свидетельствует о том, что
после заражения животного парвовирусом прошло не более 20-40 дн.
РГА используют для выявления антигена ПВСв, а РТГА - антигена и антител. Установ-
лены хорошее совпадение результатов РТГА и РДП и корреляция между титрами ПА и ан-
ти-ГА. РДП в отличие от РТГА не требует специальной обработки испытуемых сывороток
для удаления термолабильных и термостабильных ингибиторов гемагглютинации и неспе-
цифических гемагглютининов, однако для ее постановки необходим концентрированный
антиген ПВСв. В качестве АГ для РТГА обычно используют вируссодержащую культураль-
ную жидкость.
PH. Считается более чувствительной, чем РТГА. Разработана реакция микроиейтрали-
зации в пластиковых панелях с круглодонными лунками. В лунки вносят по 0,2 мл суспен-
зии перевиваемых клеток почки свиньи в ростовой среде, содержащей 1-2105 клеток/мл.
Лунки герметично закрывают липкой лентой и панели инкубируют 18-24 ч при 37°С. Ис-
следуемую инактивированную сыворотку разводят серийно поддерживающей средой и вно-
сят в нее равный объем (50-100 ТЦД jo/0,2 мл). Смесь вируса с сывороткой инкубируют при
37° С 2 ч. Из ячеек с культурой клеток удаляют ростовую среду и вносят по 0,2 мл смеси ви-
рус-сыворотка. Одну и ту же сыворотку проверяют в 3-4 повторностях. Лунки закрывают
липкой клейкой лентой и инкубируют при 37°С 7 дн. Вначале ставят ориентировочную ре-
акцию на нейтрализацию вируса с одним серийным разведением каждой сыворотки путем
добавления в каждую лунку по одной капле 0,6%-ной суспензии отмытых эритроцитов мор-
ской свинки. Если в лунках с самыми низкими разведениями сывороток гемагглютинация
не произошла, значит, в них имелись ВНА и не содержалось естественных ГА. В этом слу-
чае остальные серийные разведения тех же сывороток тестируют аналогичным способом.
Если в низких разведениях сывороток имелась гемагглютинация, то остальные повторы се-
рийных разведений тестируют так: из лунок удаляют питательную среду, клетки обрабаты-
вают глициновым буфером 30 мин, получаемый экстракт испытывают на ГА активность.
Результаты РГА учитывают через 2 ч после добавления эритроцитов. ВНА аналогично вы-
являют пробирочным методом. Оба метода высокочувствительны и воспроизводимы.
РДП. Простой, высокоспецифичный и достаточно чувствительный метод для обнаруже-
ния и количественной оценки АТ к ПС. Сравнительное изучение диагностической ценности
РДП и РТГА показало хорошее совпадение результатов этих двух методов, хотя титры АТ в
РДП были значительно ниже. Использовали 0,7%-ный агаровый гель на боратном буфере
(pH 8,6), содержащем 7% NaCl, 0,9% борной кислоты и 0,2% NaOH. В качестве АГ приме-
няли концентрированную вируссодержащую жидкость с ГА-активностью в разведении не
ниже 1:15 000. В РДП используют АГ, обладающий гемагглютинирующей активностью в
разведении Г. 15000 - Г.30000. АГ с меньшей ГА активностью не активен. В качестве АГ
можно использовать 10%-ную суспензию тканей мумифицированных плодов, содержащих
580
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
антиген ПВСв. ПВСв тесно связан с клеточным детритом, в связи с чем концентрированные
препараты вируса перед использованием обрабатывают трипсином и хлороформом.
Гипериммунные сыворотки к вирусу получают на 6-мес ремонтных свинках, которым
вводят концентрированный препарат вируса внутримышечно в смеси с равным количеством
полного адъюванта Фрейнда в дозе 3 мл. Через 30 дн вирус вводят повторно без адъюванта,
н через 7 дн животных обескровливают. Полученная сыворотка обычно имеет титр преци-
питирующих АТ 1:1024 (титр в РТГА 1:16384).
ИФ, ВИЭФ и РСК используются значительно реже, чем РТГА. Для постановки РСК,
как и РДП, необходим концентрированный антиген ПВСв. РСК менее чувствительна, чем
РТГА, и выявляет АТ в половине сывороток, имеющих титр АТ в РТГА от 1:40 до 1:1280.
Все сыворотки с титром АТ в РТГА 1:2560 и выше положительны в РСК, однако титр КСА
составляет только 1:80-1:160.
Обнаружение АТ к ПВСв в жидкости грудной полости абортированных плодов с по-
мощью РТГА, ИФ и ВИЭФ показало, что ИФ является наиболее чувствительным тестом, а
непрямая ИФ для обнаружения АТ в плодных водах оказалась наиболее чувствительной.
Для определения серологического статуса в отношении парвовирусной инфекции свиней ре-
комендуется исследовать в РТГА сыворотки крови или фолликулярную жидкость яичников,
получаемых при убое свиноматок на мясокомбинатах, что исключает необходимость полу-
чения проб крови перед убоем. Титры АТ в сыворотке крови и фолликулярной жидкости
яичников различались более чем на 1-2-кратное разведение. Основную роль в защите про-
тив ПВИСв играет гуморальный иммунитет, и для полной защиты требуется довольно вы-
сокий уровень АТ (3). При инактивации ПС формальдегидом ГА активность практически
исчезает, тогда как при инактивации ДЭИ снижается незначительно. Однако, по антигенно-
сти препараты в обоих случаях практически не различались между собой. Поскольку ПВСв
могут передаваться спермой и вызывать у свиноматок нарушение репродуктивной функции,
на станциях искусственного осеменения хряков подвергают исследованию в РТГА (52).
ИФА. При выявлении АТ к ПВСв обладает более высокой чувствительностью, чем в
РТГА. Титры АТ были в 50-100 раз выше, чем в РТГА, при этом отмечалась корреляция ре-
зультатов обеих реакций (27, 56).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
ПС является сильным АГ, вызывая у инфицированных животных высокий уровень АТ в
молозиве - свыше 1:4000. Основную роль в защите против ПС играет гуморальный иммуни-
тет и для полной защиты требуется довольно высокий уровень АТ (3, 4). Свиноматки пере-
дают иммунитет потомству с молозивом, поросята приобретают пассивной иммунитет, вы-
сокого уровня который у отдельных особей может сохраняться 5-9 мес (43, 47, 54, 55). Од-
нако пассивный иммунитет препятствует выработке активного иммунитета. У значительной
части подсвинков (до 50%), отобранных для воспроизводства, пассивный иммунитет закан-
чивается к моменту осеменения, и они в этот период становятся чувствительными к естест-
венному и экспериментальному заражению. В стационарно-неблагополучных по ПВИСв хо-
зяйствах нарушение воспроизводительной функции наблюдается, в основном, у ремонтных
свинок Основные свиноматки в результате неоднократного естественного инфицирования
становятся иммунными, и беременность у них протекает нормально. В первично инфициро-
ванных хозяйствах нарушение воспроизводительной функции происходит у ремонтных и
основных свиноматок. Для специфической профилактики ПВИСв применяются как инакти-
вированные, так и живые вакцины. В ВИЭВ и ВГНКИ разработана инактивированная
эмульгированная вакцина для применения в неблагополучных хозяйствах.
Применение инактивированных вакцин. В настоящее время основное средство борь-
бы с ПВИСв - специфическая профилактика, проводимая, главным образом, с помощью
инактивированных вакцин, которыми иммунизируют молодых свиноматок не позже 30-го
581
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
дня до первого оплодотворения. В России инактивированную эмульгированную вакцину го-
товят из высокоантигенного сырья (> 1024 ЕД ГА(мл), полученного в культуре постоянной
линии клеток свиньи с использованием простой питательной среды и коммерческой сыво-
ротки КРС. Вакцину вводят свиноматкам однократно внутримышечно в дозе 3 мл за 3-4 нед
до осеменения. Ревакцинацию проводят перед каждым осеменением. Вакцинация создает у
свиноматок выраженный иммунитет н предупреждает передачу вируса эмбрионам и плодам.
Антигенная активность вакцины не уступала аналогичной вакцине фирмы “Нарвак”. По-
вторная вакцинация через 4 мес более целесообразна, чем через 2-3 нед. Эмульгированная
вакцина оказалась более активна, чем сорбированная. При 2-4°С вакцина сохраняла анти-
генность в течение 2-х лет (12). Свиноматки, привитые инактивированной эмульгированной
вакциной, имели высокий уровень колострального иммунитета у поросят в 3 последователь-
но полученных пометах. Материнские антитела несколько подавляли образование антител в
ответ на введение вакцины, но практически не влияли на выработку иммунитета (51, 52,
53). Высокий уровень АТ отмечали при вакцинации свинок, начиная с 6-мес. возраста (4).
В США при изготовлении инактивированной вакцины для получения вирусного АГ ис-
пользуют первичную культуру клеток почек эмбриона свиньи, инактивацию вируса произ-
водят ацетилэтиленимином. Вакцинация молодых супоросных свиноматок такой вакциной
создавала выраженный иммунитет и предохраняла от трансплацентарной передачи вируса
плодам и нарушения репродукции после заражения (33,34,35,39, 42, 43).
В 12 репродукторах свиноводческих хозяйств Франции исследовали клиническую эф-
фективность 4 схем вакцинации против ПВИСв. Использовалась комбинированная вакцина
парвовак против ПВИСв и рожи свиней фирмы Rhone Merieux. по следующим схемам: 1)
вакцинация всего поголовья племенных свиноматок 2 раза в год; 2) первичная иммунизация
всех племенных свиноматок за неделю до отъема поросят; 3) вакцинация всех племенных
свиноматок за неделю до отъема поросят и свиноматок перед первым осеменением; 4) одно-
кратная вакцинация свиноматок перед первым осеменением. Оценивали следующие клини-
ческие параметры: интервал между двумя опоросами, количество рожденных живых поро-
сят в каждом помете и титр АТ при различных схемах вакцинации. Наиболее эффективны-
ми оказались первичная иммунизация всех свиноматок и их ревакцинация дважды в год,
что соблюдается при первой и второй схемах иммунизации, которые и рекомендованы для
практического применения. Решение об использовании той или иной схемы должно зави-
сеть от величины стада и состояния организации работ в соответствующем хозяйстве (25). В
Дании готовят инактивированную вакцину путем экстракции связанного с клетками АГ в
глицериновом буфере и инактивации этиленимином (26°С, 48 ч). Антигенность вакцины
была обусловлена, главным образом, пустыми вирулентными частицами. Молодых свино-
маток прививали дважды в дозах 2 и 1 мл с интервалом в 3 нед. В Великобритании приме-
няют инактивированную культуральную вакцину фирмы “Дюфар”, которой прививают сви-
номаток и молодых свиней за 2-8 нед перед осеменением. Хряков вакцинируют в 6-7 мес
возрасте, а затем два раза в год. Вакцину вводят в дозе 2 мл внутримышечно (49).
Кроме культуральных вакцин инактивированную вакцину готовили из тканей мумифи-
цированных плодов. На 45-й день беременности плоды инфицировали вирулентным штам-
мом вируса, вводя его в амниотическую полость. Вирус инактивировали ДЭИ. Тканевая
эмульсионная вакцина обладала высокой антигенной и иммуногенной активностью (4).
Применение живых вакцин. Американские исследователи серийно пассировали пар-
вовирус в первичной культуре клеток ПЭС (36 пассажей), а затем в культуре постоянной
линии клеток тестикулярной ткани свиньи (18 пассажей). Вирус 54-го пассажа (6 1g
ТЦДзо/мл и ГА=1:64) использовали в качестве живой вакцины. Вакцинный вирус не прохо-
дил через плаценту, поскольку эмбрионы были живыми и не содержали вируса. Лишь при
очень высоких дозах вакцинного вируса происходила трансплацентариая передача его, но
582
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
без существенных патологических последствий (36). Вакцину вводили по 1-2 мл внутримы-
шечно (43, 44, 45, 46, 47). Титр АТ в РТГА у привитых животных составлял, в основном,
1:320-1:640. Наиболее высокий иммунный ответ свиней отмечали при прививке их аттенуи-
рованным шт. NADL.
Для получения аттенуированного штамма японские исследователи применяли серийные
пассажи неразведенного вируса в перевиваемой культуре клеток почки эмбриона свиней с
постепенным снижением температуры выращивания с 37 до 30°С. С 50-го до 55-го пассажа
вирусную популяцию 4 раза клонировали методом предельных разведений при 32°С. Каж-
дый пассаж длился 7-41 дн при общей продолжительности культивирования 492 дн. В итоге
авторами был получен шт. HT-SK, хорошо адаптированный к размножению при 32°С, но
практически потерявший эту способность при 37 и 40°С (24). Аттенуированный шт. HT-SK
накапливался в культуре клеток в титре 4,9 1g ТЦДзо/мл и агглютинировал эритроциты в
разведении 1:128. Он не вызывал виремии и не выделялся из организма привитых свиней,
не передавался горизонтально и вертикально, но вызывал образование ГА в течение дли-
тельного периода после прививки. Показана возможность использования живой вакцины
против ПВИСв из шт. HT-SK (28).
Поскольку ПВСв безвреден до тех пор, пока не инфицирует супоросных свиноматок,
живые вакцины даже с остаточной вирулентностью можно вводить подсвинкам с 4-мес воз-
раста или за месяц до осеменения. Трудность применения живой вакцины в неблагополуч-
ном хозяйстве состоит в том, что вакцинный вирус нейтрализуется в организме свиней с
низким уровнем пассивного иммунитета (4).
В США применяют живую и инактивированную вакцины. Обе они эффективны и безо-
пасны. Живую вакцину вводят в дозе 2 мл за 2-8 нед до осеменения, инактивированную - в
дозе 5 мл двукратно за 7 и 9 нед до осеменения. Ревакцинацию обеими вакцинами проводят
однократно перед каждым осеменением (3). Кроме моновалентных вакцин готовят и приме-
няют комбинированные. Это моно- и бивалентные вакцины против парвовирусной инфек-
ции, болезни Ауески и лептоспироза.
Приведенные данные по вакцинопрофилакгике ПВИСв дают возможность сделать сле-
дующее заключение. Так как первоопороски наиболее чувствительны к инфицированию, их
рекомендуют вакцинировать перед осеменением (при необходимости дважды с 2-4 нед ин-
тервалом). Ревакцинацию проводят через каждые 6-12 мес (в зависимости от продолжи-
тельности поствакцинального иммунитета). Желательно вакцинировать также серонегатив-
ных свиноматок и хряков. При систематической вакцинации можно снизить ущерб и в ко-
нечном итоге освободить хозяйство от инфекции.
В 1992 г. в Китае выделен слабовирулентный шт. N ПВСв. Иммунизированные им под-
свинки или супоросные матки оказались устойчивы к заражению патогенным парвовирусом.
При этом в тканях плода ни вирус, ни АТ не обнаруживались. Рожденные от иммунизиро-
ванных свиней поросята не имели каких-либо отклонений в развитии. Авторы рекомендова-
ли шт. N для предупреждения тератогенного воздействия патогенного парвовируса (32).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Гуморальный иммунитет,
по-видимому, основной способ защиты против парвовирусной инфекции свиней. Как вакци-
ны, так и пассивно переданные АТ обеспечивают её, так как вакцинированные поросята с
титром анти-ГА 1:160-1:640, так и пассивно иммунизированные с титрами анти-ГА 1:80-
1:160 оказались резистентными к парвовирусной инфекции.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Мельникова Л.А. и др. Труды ВГНКИ 1992 : 36. 2.Орлянкин В.Г. и др. Бюлл ВИЭВ ,
1985, 59 :41. З.Орлянкин Б.Г. С-х биология 1986, 11 :104. 4.Сергеев В.А. Вирусные вакци-
ны, Киев Урожай, 1983. 5.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. живот., М. Агропромиздат
1991 :500. б.Сюрин В.Н. и др. Частная вет. вирус., М. Колос, 1979. 7.Феактистова Т.А. и др.
583
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Бюлл. ВИЭВ, 1985, 60 :26. 8.Фомина Н.В. и др. Вирус, жив, MBA, 1991. 9.Anon Роге Ind
Gaz, 1984, 9 :24. lO.Bajrovic Т. et.al. Vet glas, 1982, 36, 4 :313. ILBachmann P.A. et.al.
Intervirology 1979,11 :248. 12.Bengelsdorf H.J. Berlin und Munch tierarztle Wochen Schr 1987,
100 :162. 13,Berns K.I. New York : Plenum 1984. 14.Biront P. etal. Zbl Vet 1983, 3 :541.
15.Bonte P. et.al. Zbl Vet Med Reihe B„ 1984, 31, 5 :391. 16.Brown T. Am J Vet Res, 1981, 42
: 1033. 17.Brown T. Am J Vet Res ,1980, 41 :1221. 18.Chot C.S. et.al. Vet Microbiol 1987, 15
:19. 19.Cotmorf S.F. et.al. Virology 1983, 129 :333. 2O.Cvelic V. Veterinaria (Sarajevo), 1982,
31, 1 :77. 21.Dea S. etal. Can J Comp Med 1985, 49 :343. 22.Edwards K.R. Vet Rec 1984, 115,
5 :108. 23.Fikrig M.K. etal. Int Symp Contin Cell Lines : Int Workshap Curr Issnes Bethesda
Md March, 1991 :20. 24.Fujisaki Y. et.al. Natl Inst Anim Health (Tokyo), 1982, 22 :36.
25.Gassdorf M. et.al. Terartz Umsch ,1995, 50, 9 :574. 26.Gradil C. et.al. Am J Vet Res 1990,
51, 3 :359. 27.Hondatsu T. et.al. Vet Microb, 1988, 17 :11. 28.Jusumida A et.al. Jap J Vet Sci
1986, 48 :293. 29.Kawamura H. et.al. Jap J Vet Sci 1988, 50 :803. 3O.Kresse J.L etal. Vet
Microbiol 1985, 10 :525. 31.Kubota M. et.al. Jap Sci 1990, 52, 6 :1229. 32.Jang Y. et.al. Acta
Vet entzoot Sin. 1992, 23, 1 :73. 33.Mengeling W.L. et.al. J Vet Res 1980, 41, 10 :1569.
34.Mengeling W.L. et.al. Arch Virol 1980, 65 :55. 35.Mengeling W.L. et.al. Proc 6th Int Congr
Pig Vet Soc Copenhagen 1980. 36.Mengeling W.L. et.al. Am J Vet Res 1984, 45 : 2403.
37.Mengeling W.L. et.al. J Gen Virol, 1986, 67 :2839. 38.Mengeling W.L. et.al. J Gen Virol
1988, 69 : 825. 39.Mengeling W.L. et.al. J Vet Diagn Invest 1991, 3 :33. 4O.Mengeling W.L.
Diseases of swine USA, 1994 : 352. 41.Molitor T.W. et.al. J Virol 1983, 45 :842. 42.Morrison
R.B. et.al. Puv Vet Med 1984, 2, 5 :699. 43.Paul P.S. etal. Am J Vet Res 1980, 41 :2007. 44.Paul
P.S. et.al. J Vet Res 1984, 45 :2481. 45.Paul P.S. et.al. J Am Vet Med Assoc 1986, 188 :410.
46.Paul P.S. et.al. Am J Vet Res 1980, 41 :1368. 47.Paul P.S. etal. J Vet Res 1982, 43 :1376.
48.Ruckerbauer G.M. et.al. Can J Comp Medl978,42 :278. 49.Sorensen K. et.al. Acta Vet Scond
1980, 21, 3 :312. 5O.Thacker B.J. etal. Am J Vet Res 1987, 48 :763. 51.Truyen U. et.al. J Cell
Biochem 1992, 16 :146. 52.Ulbrich F. et.al. Monath Vet 1992, 47, 2 :67. 53.Ursache R. etal. Rev
Med Vet 1984, 135, 2 :63. 54.Van Leengoed L. et.al. Vet Quart 1983, 5, 3:131. 55.Vannier P.
et.al. Zbl Vet 1984, 1 :1331. 56.Westenbrink F. et.al. J Virol Methods 1989, 23 :169.
57.Yasuhara H. et.al. Jap J Vet Sci 1989, 51 :337. 58.Zanoni R.G. etal. Zbl Vet Med 1984, 31,
10 :729.
ПАРВОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Парвовирусная инфекция телят, обусловленная гемагглютинирующим вирусом
(HADEN-вирусом), развивается в виде остропротекающего поражения кишечника. В 1961
г. Абинанти и Уордфилд, а в 1970 г. Сторц и Уорен выделили вирус из содержимого ки-
шечника КРС, который в отличие от других энтеровирусов КРС обладал ГАд свойствами.
До этого, как известно, ГАД свойства были выявлены у миксовирусов и у некоторых пред-
ставителей арбовирусов. В 1962 г. Мак Ферран описал некоторые свойства HADEN-вируса,
которые позволили отнести его в группу энтеровирусов КРС.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Поражения, обуслов-
ленные HADEN-вирусом. изучены недостаточно. Известно лишь, что данный вирус спосо-
бен вызывать у телят остропротекающее заболевание кишечника. При интраназальном за-
ражении вирусом в сочетании с апатогенной пастереллой у телят появлялись признаки ярко
выраженного поражения органов дыхания и диарея. Вирус удавалось реизолировать из но-
совых смывов и проб фекалий. Кроме того, для этой инфекции характерны церебральная
584
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
гипоплазия, кортикоцеребральный некроз, аборты, мертворождение. В США при обследо-
вании КРС в 83% стад обнаружены животные, содержащие АТ к парвовирусам. По данным
Сторца (1972 г.) частота парвовирусной инфекции в инфицированных стадах варьировала
от 14 до 100%. У телят, из фекалий которых выделяли парвовирусы в течение 1-й нед после
рождения, наблюдалась диарея. Инфекция была установлена также методом прямой ИФ
клеточных срезов тонкого кишечника павших телят.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые о выделении парвовируса типа 1 КРС сообщили Бэтес, в 1959 г. В 1973 г. в
Японии выделен новый тип ПВ КРС. В 1973 г. в штате Колорадо ПВ от телят, страдающих
диареей, выделены в 29 стадах из 35 обследованных. Их часто выделяли с энтеровирусами.
В отличии от последних ПВ размножаются в ядре, образуют внутриклеточные включения,
имеют 1-нитевую ДНК. Раньше их описывали в одной группе с энтеровирусами.
Морфология и химический состав. Вирион размером 23 нм представляет собой изо-
метрическую голую частицу без оболочки, содержит 32 капсомера диаметром 2-4 нм, уло-
женные по икосаэдральному типу симметрии. Удельная плотность вириона в CsCl 1,38
г/см3. Вместо оболочки имеются небольшие, похожие на кольцо, образования размером 7-8
нм. Размножаются вирусы в ядре. В вирионах HADEN-вируса идентифицировано 3 белка, с
мол.м. 66,8кД (75,6-82,7%), 76,15кД (10,6-7,7%) и 85,5кД (13,8-9,6%). Белковый состав ви-
руса сходен с таковым аденоассоциированного вируса типа 3, но его белки отличаются от
белков аденосателнта по подвижности при электрофорезе.
HADEN-вирус содержит 1-спиральную ДНК подгруппы В с мол.м. от 1,2 • 106 до 1,8 •
106 Д, которая in vitro становится 2-спиральной, ГЦ 39%.
Устойчивость. Вирус термо- и кислотоустойчив, резистентен к эфиру, хлороформу,
трипсину и дезоксихолату, не разрушается при 50°С в течение 60 мин в присутствии 1М
MgCl2. Обработка хлороформом и додецилхлоратом натрия, нагревание при 56°С в течение
60 мин и воздействие средой с pH 3 в течение 60 мин не влияют на инфекционную и ГА ак-
тивность вируса. Инфекционность вируса не подавляется при воздействии 54°С в течение 4
ч. ГА активность вируса при термическом воздействии снижается параллельно с инфекци-
онной. HADEN-вирус устойчив в диапазоне pH от 3 до 9. Лишь после 2-ч воздействия pH 2
вирулентность его значительно снижается. 5-йод-2-дезоксиуридин ие влияет на репродук-
цию вируса, а гуанидин гидрохлорид подавляет её.
Антигенная активность. У всех экспериментально заражённых телят появляются ан-
ти-ГА и ВНА (1:20 и выше).
Антигенная вариабельность и родство. Все парвовирусы КРС идентичны между со-
бой, но отличаются от парвовирусов других видов и человека.
ГА свойства. Парвовирус КРС агглютинирует эритроциты лошади, барана, козы, мор-
ской свинки, хомячка, утки, гуся, собаки и человека и не агглютинирует эритроциты КРС,
кроликов, мышей и кур. Агглютинация проходит при pH от 5 до 8. После адсорбции вирус
не элюирует, что указывает на отсутствие в его структуре нейраминидазы. Шт. 87 (FS) 1 и 90
(WS)1, выделенные Моримого в 1972 г., кроме того, агглютинируют эритроциты мышей и
лошадей и не реагируют с эритроцитами уток, гусей и КРС. Уровень ГА, связанных с клет-
ками, достигает максимального титра через 48 ч. В экстрацеллюлярной среде ГА обнаружи-
ваются через 36 ч, а максимального титра 1:512 достигают только к 60-му часу после зара-
жения. ГА даёт супернатант культуральной жидкости, собранной на второй день после за-
ражения культуры клеток, пик ГА активности проявляется на 3-4-й день культивирования и
достигает титра 1:512. Максимальная инфекционность вируса проявляется на сутки раньше.
Экспериментальная инфекция. При экспериментальном заражении телят, как у полу-
чавших молозиво с АТ, так и у контрольных через 24-48 ч развивается диарея. Тяжелее бо-
леют телята, заражённые внутривенно. При заражении per os уже через 48 ч из лейкоцитов
585
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
выделяли вирус. Самый высокий уровень его обнаруживали в лимфатической ткани и над-
почечниках.
Культивирование. Репродукция ПВ происходит быстрее в синхронизированных клет-
ках, инфицированных в ранней S-фазе. Вирус хорошо размножается в первичной культуре
клеток лёгких, селезёнке, тестикул, надпочечников и почек эмбрионов КРС. Титр вируса,
связанного с клетками, выше титра внеклеточного вируса. ЦПИ появляются лишь после не-
скольких пассажей. ЦПД наблюдается через 3-4 дн после заражения и приводит к полному
лизису клеток. Эозинофильные ядерные включения появляются через 18-24 ч. При этом ин-
фекционный титр был 1О4,5-1О5,0 ТЦДзо/ОД мл. В культуре клеток ПЭК ПВ КРС образует
фельгенположительные внутриядерные включения. Установлена корреляция между дина-
микой накопления ПВ в культуре клеток и интенсивностью цитоплазматических изменений.
Особенности внутриклеточной репродукции. В течение первых 3 ч после заражения
монослоя культуры клеток 90% вируса адсорбируется. Период эклипсфазы длится 16 ч. Но-
вый вирус в культуральной жидкости появляется через 24 ч после заражения. Максималь-
ный титр в ТЦД50 равен 105,5/мл. Титры внутриклеточного вируса выше титра внеклеточно-
го вируса. ГА выявляются параллельно инфекционному вирусу. Количество клеток с цито-
плазматической флюоресценцией увеличивается после поражения ядра к 48 ч или за 24 ч до
появления телец-включений. Вирусный АГ в цитоплазме можно обнаружить ИФ через 6 ч
после заражения, через 48 ч происходит поражение ядра и к 72 ч формируются внутриядер-
ные включения типа А Коудри. Большинство вируса освобождается из клеток к началу про-
явления ЦПД. У ПВ существует адаптация к животным определённых видов, вследствие
этого в литературе описана парвовирусная инфекция у отдельных животных. Так, парвови-
рус КРС был впервые выделен Абинанти (1961 г.) из пищеварительного тракта этих живот-
ных как небольшой Г Ад вирус, а в 1971 г. Винсент выделил его в Алжире из фекалий коров.
У инфицированных телят парвовирус размножается в клетках слизистой оболочки кишеч-
ника и вызывает виремию. ПВ ассоциированы с лейкоцитами. В срезах из кишечника боль-
ных телят обнаруживают специфические внутриядерные включения. Установлено, что пар-
вовирус может проникать через плаценту в плод беременной коровы.
ДИАГНОСТИКА
Идентификацию ПВ проводят на основе РГА и РГАд эритроцитов морских свинок и
эритроцитов группы О человека, образования ядерных фельгенположительных включений
типа А Коудри, а также подавляющего действия бычьей антисыворотки на ГА и инфекци-
онную активность вируса. Помимо того, 5-БДУ ингибирует его репликацию в культуре кле-
ток.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Не изучены.
ЭНТЕРИТ НОРОК
Fort William disease, Mink virus enteritis (англ.); Virusenteritis des Nerzes (нем.)
Энтерит норок (болезнь форта Вилиам, инфекционный энтерит норок) - острая контаги-
озная болезнь, характеризующаяся угнетением животных и фибринозно-геморрагическим
энтеритом. Болезнь распространена в Канаде (провинция Онтарио), США и в Скандинав-
ских странах. В СССР впервые зарегистрирована в 1965 г. на Сахалине (5,6).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Чаще болеют норки
начиная с 8-мес возраста. Летом и ранней осенью число заболевших животных увеличива-
ется. Инкубационный период продолжается около 9 дн. Заболевшие животные не выходят
из домиков, не принимают корм. Часто появляется диарея. Каловые массы серовато-белого
586
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
или желтовато-кремового цвета, с тошнотворным запахом. Болезнь быстро распространяет-
ся на зверей соседних клеток и далее на другие павильоны. До 75% животных гибнет через
2-3 дня. Если за это время норки не пали, наступает выздоровление. При вскрытии трупов
находят фибринозно-геморрагическое воспаление тонкого кишечника. Толстый кишечника
поражён в меньшей степени, нет поражений в желудке и в прямой кишке. При гистологиче-
ском исследовании в слизистой оболочке тонкого кишечника находят некроз и слущивание
эпителия кишечных ворсинок (5,6).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые вирус выделил и описал Шефилд в 1949 г. (Канада).
Морфология и химический состав. Детально не изучены. Вирионы содержат 1-
нитчатую ДНК подгруппы В, in vitro она становится 2-нитчатой. Размножается вирус в ядре.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям слабо изучена. Устойчив к хлороформу,
эфиру и нагреванию. Вирус индуцирует образование КСА. В качестве антигена используют
вируссодержащие суспензии печени, селезёнки, почки и стенки кишечника больного живот-
ного. Вирус предварительно очищают и концентрируют. Антигенная вариабельность и род-
ство не изучены. Вирус энтерита норок родствен вирусу панлейкопении кошек (Feline
parvovirus 1). Спектр патогенной активности в естественных условиях ие изучен. Болеют, в
основном, щенки и молодняк старшего возраста (5).
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. В организме больной
норки вирус накапливается в печени, головном мозге, селезёнке и кишечнике. В головном
мозге титр его достигает 105’5, а в кишечнике 104’3 ЭИДзо/г ткани. Переболевшие норки мо-
гут быть носителями вируса.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится легко на норках при подкожном
введении вируссодержащего материала (шт. Висконсин). Симптомы болезни появляются на
4-й день после заражения и наблюдаются до Ю-20-ro дня. Патологические изменения раз-
виваются на 7-й день. Мезентериальные лимфоузлы и селезёнка увеличены. На печени, се-
лезёнке и кишечнике видны тяжи фибрина, гистологически отмечается некротический энте-
рит и распад лимфоцитов в лимфоузлах. В эпителии кишечника имеются внутриядерные
включения, они отмечаются там в течение 3-4 дн после появления клинических признаков.
Культивирование. Вирус размножается в первичной культуре клеток почки молодых
норок и котят. Особенности внутриклеточной репродукции не изучены.
В последние годы в РФ проведены исследования по подбору чувствительной культуры
клеток, пригодной для наработки вируса энтерита норок в промышленных объемах. Из ис-
пытанных клеточных культур (почки эмбриона норок - ЭН, почки сибирского горного козе-
рога -ПСГК, почки сайги - ПС, ВНК-21, СПЭВ, почки кролика - RK-13, Vero, почки собаки
- МДСК, первичные культуры клеток почки котенка - ПК и почки щенка -ПЩ) наиболее вы-
сокой чувствительностью к вирусу энтерита норок (шт. “Родники”) обладают первичная
культура клеток почки котят и перевиваемая линия клеток эмбрионов норок. В этих культу-
рах ГА накапливались в титрах 1:128-1:1024. Материал обладает высокой антигенной ак-
тивностью и может быть использован для изготовления вакцин и диагностикумов (1).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источником инфекции служат больные или переболевшие иорки. Заражение происходит
через пищеварительный тракт. Болезнь распространяется при контакте и через инфициро-
ванные предметы. Чаще вспышка болезни возникает после появления в стаде нового живот-
ного (больного, находящегося в инкубационном периоде, или вирусоносителя).
ДИАГНОСТИКА
Постановка диагноза основана на выделении и идентификации вируса в культуре кле-
ток. Помимо того, в клетках покровного эпителия слизистой оболочки крипт проксимальной
587
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
части тонкого кишечника больных норок обнаруживаются внутриядерные и цитоплазмати-
ческие включения, что также служит основанием для постановки диагноза.
Диагностическую гипериммунную сыворотку к вирусу энтерита норок получают на кро-
ликах. При использовании очищенного концентрированного культурального вируса (титр в
РГА 1:1024-1:2048) в эмульсионном виде с адъювантом ВНИЯИ получали гипериммунные
сыворотки, активность которых составляла в PH - 1:32-1:64, в РДП -1:8-1:16, в РТГА -
1:1024-1:2048(7).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАТИКА
Постинфекционный иммунитет не изучен. С профилактической целью применяют инак-
тивированную и живую вакцины. Для получения первой берут культуру клеток почки котят.
Культуральный вирус инактивируют 0,3%-ным р-ром формалина с добавлением в качестве
адъюванта алюмокалиевых квасцов. Препарат вводят подкожно (4). Экспериментальные се-
рии инактивированной димером этиленимина вакцины против энтерита норок из вируса,
выращенного в культуре клеток, оказались авирулентными и высокоэффективными. У при-
витых норок вакцина индуцировала образование анти-ГА в титрах 1.128-1:2048, у привитых
кроликов и собак титры анти-ГА были несколько ниже (1:32-1:64) (2). Разработана и испы-
тана ассоциированная вакцина против чумы, энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок на
базе существующих моновакцин. Норок вакцинировали в возрасте 55-60 ди. Вакцина обес-
печивала напряженный иммунитет к вирусу энтерита и ботулиническому токсину в течение
15 мес, к вирусу чумы плотоядных и псевдомонозу - не менее 12 мес (3).
В качестве живой вакцины применяют гетерологический вирус панлейкопении кошек,
родственный в антигенном и иммунологическом отношениях вирусу энтерита норок. Вакци-
на создаёт иммунитет до 1 г. В январе вакцинируют взрослое поголовье, в июне - молодняк.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Борисов А.В. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :79. 2.Борисов А.В. и др. Там
же : 157. З.Селиванов А.В. и др. Там же : 182. 4.Сергеев В.А Вирусные вакцины. Киев,
Урожай, 1993. б.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., М, Колос, 1979. б.Сюрин В.Н. и
др. Вет. вирусол., Агропромиздат, 1991. 7.Хлыбова Т.В. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИ-
ИЗЖ, 1995 :66.
ЭНТЕРИТ ГУСЕЙ
Энтерит гусей - летальная болезнь гусят первых дней жизни, неоднородной этиологии,
так как различают энтерит, вызванный парво- и реовирусами. Болезнь распространена во
всех европейских странах, в том числе и бывшем СССР. Болезнь вызывает гибель 30-90%
заболевших гусят. Её впервые описал Поланд в 1962 г. Шетлер (1971 г.) выделил вирус от
гусят. Впоследствии достаточно подробно описали вирус и заболевание Держи и др. (1975).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Основные признаки
заболевания - отказ от корма, малоподвижность, водянистая диарея и быстрое истощение.
Наблюдают слизистые истечения из ротовой полости и носа, дрожь, клонические судороги,
конвульсии, поворачивание головы, паралич ног и респираторные явления, асцит, выпаде-
ние пуха. В начале энзоотии наблюдаются различные по степени застойные и дистрофиче-
ские изменения печени, почек, миокарда и катарально-геморрагический или фибринозный
энтерит (7). При инфекции, вызванной парвовирусами, отмечена возрастная резистентность.
Однодневные гусята высокочувствительны к вирусу. На 4-й день после заражения исчезает
аппетит, многие перестают пить, слабеют и в течение нескольких дней (чаще на 6-7-й день
после заражения) погибают. Восьмидневные гусята реагируют на заражение так же. 4-нед
гусята при внутримышечном или контактном заражении, как правило, не заболевают. У
многих больных гусят на шее, крыльях и спине отмечают посинение кожи, выпадает пух. В
588
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
дальнейшем развивается конъюнктивит, появляются истечения из носа. Фибринозный на-
лёт, образующийся в области хоан, закупоривает носовые отверстия. Такой же налёт можно
обнаружить на языке. Испражнения белые, слизистые.
При вскрытии отмечают резкое увеличение печени, в брюшной полости находят янтар-
но-жёлтую мутную жидкость, сильное поражение органов дыхания грибами: воздухоносные
мешки и лёгкие усеяны тёмными узелками величиной с горошину. На поверхности печени
находят небольшие геморрагии, вакуолизирующую дегенерацию гепатоцитов; ткань вокруг
капиляров печени некротизирована, в ядрах клеток Купфера видно скопление хроматина,
представляющее картину ядерных телец-включений (1,2,3).
Болезнь, вызванная вирусом beta из группы парвовирусов поражает молодняк и проте-
кает в виде септицемии. У гусят в возрасте 1-4 нед она характеризуется печёночно-
почечным синдромом. У гусят в возрасте от 4 нед до 3 мес болезнь протекает остро и подо-
стро. Из печени гусят в культуре клеток гусиного эмбриона удаётся выделить вирус (8,9).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
В ФРГ парвовирус гусей, вызывающий инфекционный гепатит, выделил Шетлер (1971
г). В настоящее время известно более 20 штаммов, которые по биологическим свойствам иа
КЭ и гусиных эмбрионах разделены на 2 группы. Физико-химические свойства штаммов
изучены недостаточно, что затрудняет разработку средств специфической профилактики (4).
Морфология и химический состав. Вирнон диаметром около 50 нм содержит однони-
тевую ДНК, резистентен к жирорастворителям. Репродукция вируса подавляется 5-йод-
дезоксиуридином. Размер вирионов вируса beta 30-50 нм, частицы имеют кубическую сим-
метрию. Вирус beta отнесён к парвовирусам. В градиенте CsCl формировалось два пика.
Первый пик располагался на верхней границе нижней трети градиента в зоне плотности
1,398 г/см3, а второй - у верхней границы средней трети градиента в зоне плотности 1,260
г/см3. Инфекционная активность вируса локализовалась в первом пике и достигала титра 6
1g. Во второй зоне и в средней зоне между пиками титр вируса был ниже 1 1g. При элек-
тронной микроскопии вируса в его популяции выявляются полные и пустые вирионы. Су-
перкапсидная оболочка у всех вирионов отсутствует. Очертания вируса круглые или 6-
угольные, что свидетельствует о кубическом типе симметрии. Толщина капсомерного слоя
пустых вирионов равна 2 нм. Диаметр вирионов 20±2 нм (4).
Устойчивость. Вирус устойчив к эфиру, хлороформу, фреону 113, фенолу, гидроксила-
мину, трипсину, додецилсульфату натрия и пентану; инактивируется при 50° С в течение 30
мин. Влияние некоторых физико-химических факторов на выживание вируса энтенрита гу-
сят представлено в табл. XV. 2 .
Таблица XV. 2. Влияние физико-химических факторов на
выживание вируса энтерита гусят (4).
Метод Титр вируса до обработки ТЦДзо/мл после обработки
Прогревание при 56° С 60 мин 5,4 5,1
Обработка хлороформом 1 ч 5,4 5,6
Обработка дезоксихолатом натрия 5,4 5,5
Антигенная активность. Преципитирующие АТ обнаружить не удаётся. Заражённые
птицы содержат вирусспецифические АТ, определяемые в непрямом тесте ИФ.
Антигенная вариабельность и родство. Вирус не имеет общего группоспецифического
АГ с вирусами инфекционного бронхита, НБ и другими вирусами и не нейтрализуется гипе-
риммунными сыворотками к чуме уток.
Экспериментальная инфекция. Удаётся на гусятах 1-7-дн возраста.
589
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Культивирование. Вирус хорошо размножается в гусиных эмбрионах, которые поги-
бают при любом способе заражения (в желточный мешок, в аллантоисную полость) в тече-
ние 15 дн после заражения. Специфический АГ можно обнаружить прямым методом ИФ у
ограниченного количества выживших эмбрионов. Эмбрионы, заражённые на ХАО, погиба-
ют через 5-7 дн. Изменений в оболочке не бывает. В УЭ и КЭ вирус не размножается. Куль-
туральный вирус патогенен для гусят при внутримышечном способе заражения.
Вирус beta выделен от больной птицы в культуре гусиных фибробластов, где он на 4-5-й
день вызывал появление гранулярных зон и детрита. Его удавалось пассировать в культуре
эмбриональных клеток других домашних птиц.
Для размножения и титрования вируса используют культуру клеток фибробластов гуси-
ных эмбрионов (ГФ). Клеточный монослой состоит из фибробластоподобных клеток, кото-
рые имеют крупное ядро и многоугольную цитоплазму. ЦПД вируса энтерита гусей стано-
вится отчетливо выраженным через 72-120 ч после заражения. Оно воспроизводится как
при пассировании вируса, так и при его титровании. Первые признаки ЦПД появляются че-
рез 48-72 ч после адсорбции вируса. Зараженные клетки становятся набухшими и как бы
приподнимаются над монослоем. Постепенно этот эффект усиливается и еще через 12-24 ч
клетки сильно преломляют свет, становятся звездчатыми, а затем округлыми. С этого мо-
мента клетки начинают отделяться в культуральную среду (4).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Вирус легко распространяется контактным путём. Доказана его вертикальная передача
(Шетлер, 1972). Заражение происходит, в основном, алиментарным или аэрогенным путя-
ми. Возможна трансовариальная передача вируса. Переболевшие птицы могут оставаться
вирусоносителями в течение нескольких лет. В естественных условиях болеют гусята и мус-
кусные утки в возрасте от 1 до 30 дн.
ДИАГНОСТИКА
Для лабораторной диагностики используют непрямой метод ИФ.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У реконвалесцентов ВНА обнаруживали в течение 80 мес. В желтке яиц, снесенных гу-
сынями через 68-70 мес после переболевания, обнаруживали ВНА. Иммунизированные гу-
сыни-матери сообщают потомству пассивный иммунитет продолжительностью до 15 дн.
После этого наступает возрастная резистентность. Проводят серопрофилактику. Для этого
гусятам 1-5-сут возраста подкожно вводят кровь или сыворотку взрослых гипериммунных
птиц в дозе 2-3 мл или сыворотку в желточный мешок 8-дн гусиных эмбрионов. Иммуно-
профилактика вирусного гепатита гусят впервые разработана в Болгарии. Для активной им-
мунизации разработаны живые и инактивированные вакцины. Аттенуированный штамм по-
лучен после 22 пассажей на 9 дн утиных эмбрионах. Он оказался авирулентным для гусят,
но создавал у них иммунитет. Вакцинный вирус выделяется с фекалиями вакцинированных
гусят в течение 3-х нед. Подкожная прививка гусят сообщала иммунитет уже через 48 часов.
Вакцинный штамм способен передаваться трансовариально потомству (6,10,11).
Инактивированную вакцину готовят из тканей зараженных гусиных эмбрионов или гу-
сят, либо культурального вируса, выращенного в культуре клеток гусиных или утиных эм-
брионов. Вирус инактивировали p-пропиолактоном и в качестве адъюванта добавляли ГОА
(13, 14, 15, 22). В Венгрии разработана вакцина из аттенуированного штамма вируса энте-
рита гусей. В результате широкого применения данной вакцины штамм интенсивно цирку-
лирует на поголовье гусей практически во всех хозяйствах. От взрослых гусынь вирус про-
никает в яйца и инфицирует эмбрионы, вызывая изменения дегенеративного характера в
сердце и печени на 17-22-й дн инкубации. У вылупившихся гусят имелись ВНА без каких-
либо клинических признаков болезни в первые 2 нед жизни (12, 16, 17, 18, 19, 20, 21). Жи-
выми и инактивированными вакцинами прививают взрослых гусей и мускусных уток перед
590
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
началом каждого периода яйцекладки. Эти вакцины вызывают образование гуморальных
АТ у взрослых птиц и обеспечивают трансовариальную передачу потомству материнских
АТ, защищающих их от болезни в течение 3-4 нед. Молодняк от вакцинированных родите-
лей иммунизируют в возрасте 21-28 дн (5).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Иващенко В.Г. Тез докл н.-пр. конф Л., 1982 :116. 2.Кишари Я. и др. Докл XIX Всем. Вет
конф. М, 1979, 6, XIII :25. З.Контримавичус Л.М. и др. Ветеринария 1976, 8 :50. 4.Надточий
ГА. и др. Тез. конф., Канев, Киев Госуниверситет 1982, :28. б.Орлянкин Б.Г. С.-х. биология
1986, 11 :104. 6. Сергеев В.Л. Вирусные вакцины, Киев ,Урожай, 1993. 7. Стойкое Д. Общая
сравнит, патол. София, 1989, :26. 8.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирус., Колос, 1979.
9.Сюрин В.Н. и др. Вет. вирусол., Агропромиздат, 1991. lO.Bougnet J.E. Rhone Merieux 1981
:2. ll.DvorakB. etal. Veterinarstv 1980, 30, 8 :365. 12.Glavits R. et.al. Acta vet hung 1991, 39,
1-2 :39. 13.Gough R.E. et.al. Avian Pathol 1982, 11, 3 :503. 14.Hansen H.C. Derzsy’s disease
Dansk Erhervsfjiervra 1979, 8, 24 :423. IS.Hansen H.C. Derzsy’s Dansk Vet Tieds 1980, 63, 5
: 191. 16.Hoekstra J et al. Avian Pathol 1973, 2, 3 :169. 17. Kisaiy J. et.al. Mogiar allotow lapja
1977, 32, 12 .788. IS.Kisary J. et.al. Mogiar allotow lapja 1975, 30, 3 :199. 19.Kisary J. Acta Vet
Acad Sci Hung 1974, 24, 3 :329. 2O.Marins V. L'aviculteur 1982, 424 :87. 21.Snoflak J. et.al.
Veterinarstvi 1982, 31, 1 :33. 22.Uckert W. etal. ViruseRes 1986, 4 :343.
КИЛХЕМ-ВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ КРЫС
Латентная инфекция крыс Килхема характеризуется, как правило, бессимптомным но-
сительством вируса (RV). Болезнь распространена повсеместно среди диких и лабораторных
белых крыс.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Обычно RV у инфи-
цированных хомячков вызывает нарушения остеолитического типа. Основным клиническим
симптомом у молодых хомячков является поражение зубов и костей (Далдорф), причем
ранние изменения начинаются в зубной пульпе дегенерацией одонтобластов и некрозом
поддерживающей стромы. За 10 дн зубы либо полностью разрушаются, или идет разруше-
ние дентина. В перидонтальной ткани инфицированных хомячков через 24 ч после инфици-
рования были найдены внутриядерные включения. У зараженных хомячков развивается
монголоидность. Килхем (1964) отмечал, что некоторые шт. RV ие вызывали остеолитиче-
ских поражений у новорожденных хомячков, но при интрацеребральном заражении обу-
словливали церебральную гипоплазию и атаксию. При интраперитональном введении ново-
рожденным хомячкам вирус вызывает энтериты. Зараженные хомячки худеют, а через 7-8
дн гибнут. Почечные клетки стромы и цитоплазмы макрофагов павших животных содержат
внутриядерные включения.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус RV впервые выделил и описал в 1959 г. Килхем. Он обнаружен в опухолевой
ткани крыс. Первоначально хомячковые остеолитические вирусы были выделены из транс-
плантируемых опухолей эмбрионов и плацент человека. В 1962 г. Меркалова и Жданов опи-
сали вирус 59-КВ, выделенный из соединительной ткани крыс, обработанных канцерогеном
в предсаркоматозной стадии, таксономия которого точно не установлена.
Морфология и химический состав. Диаметр очищенных вирионов 18 нм, они имеют
32 капсомера, константа седиментации 122S. Плавучая плотность 1,31 г/см3- 1,43 г/см3. Ви-
рионы содержат 25,6% ДНК. Нуклеотидный состав ДНК: А - 26,7%; Т - 30,8; Г - 20 и Ц -
22,5%. Мол.м. ее, определенная центрифугированием в градиенте сахарозы 2-10 6Д, кон-
станта седиментации 16,1 S. Поскольку частицы вируса Килхема содержат односпиральную
591
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
ДНК (дайна молекулы которой 1,505±0,206 мкм), Предполагается, что часть родительской
1-спиральной ДНК переходит в 2-спиральную, которая, как и 1-ая, имеет линейную струк-
туру. По физико-химическим свойствам вирус RV сходен с мелким вирусом мышей и бак-
териофагом ФХ 174. В присутствии экзогенной ДНК он способен вызывать полимеризацию
дезоксирибонуклеозидгрифосфатов, но не рибонуклеозидтрифосфатов.
Устойчивость. Очищенный вирус сохраняет инфекционность в условиях хранения при -
4°С или при -60°С, не снижая титра. Термостабилен и выдерживает прогревание при 80°С в
течение 2 ч, чувствителен к эфиру, хлороформу и другим жирорастворителям. Облученный
вирус не подвергается реактивации в клетках хозяина.
Антигенная структура. Показано различие в антигенной структуре шт. H-RV и RE-
RV: в состав H-RV входит 4 компонента, а в состав RE-RV - только 3. Обнаружен АГ вируса
и динамика его накопления в культуре кожно-мышечной ткани эмбриона крыс.
Антигенная активность. Поскольку вирус RV у крыс вызывает латентную инфекцию,
то в сыворотках некоторых здоровых лабораторных и диких крыс есть анти-ГА и ВНА
(выявляемые в культуре ткани). Шт. RV-13 выявляется в РТГА- наиболее чувствительной
реакции для обнаружения АТ к вирусу. В сыворотках крыс линий Wistar и August обнару-
жены анти-ГА в значительных титрах, что свидетельствует о широком распространении ви-
руса Килхема в бывшем СССР.
Антигенная вариабельность и родство. Крысиный вирус Килхема по серологическим
свойствам отличается от вирусов полиомы, энцефаломиокардита и других крысиных виру-
сов. Последние, выделенные из разных источников, в иммунологическом отношении родст-
венны, но в серологическом отношении неидентичны. Описаны 3 серотипа вируса Килхема
(Н-1 и НТ, RV и Н-3 и НВ), которые различаются между собой в перекрестной РТГА.
ГА свойства. Вирус RV обладает ГА активностью. ГА его ассоциированы с инфекци-
онной частицей. Все 5 шт. Н-вируса дают РГА с эритроцитами морской свинки и хомячка, в
то время как RV агглютинирует предпочтительно эритроциты морской свинки и человека.
Штаммы различаются по АГ способности эритроцитов крыс н человека. Вирус не элюирует
спонтанно с эритроцитов морской свинки, рецепторы которых разрушает RDE.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Если у эксперимен-
тально заражённых и погибших крысят инфекционный вирус и ГА удаётся обнаружить в
мозге, лёгких, печени, почках, селезёнке, крови и моче, то крысята и матери, конгакгирущие
с заражёнными животными, не заболевают, но инфицируются - у них появляются АТ.
Экспериментальная инфекция. Крысиный вирус Килхема при внутримозговом, внут-
ривенном и подкожном введении вызывает гибель новорождённых крысят на 4-14-й день
после заражения. При подкожном введении беременным крысам вирус RV проникает в эм-
брионы, инфекция развивается у родившихся крысят и проявляется поражением зубов. При
заражении крыс непосредственно в плод за 5-6 дн до родов ткани эмбриона содержали ви-
рус независимо от титра специфических АТ у матери.
Вирус RV не вызывает клинически выраженной болезни у взрослых хомячков, мышей и
швейцарских альбиносов. Однако новорождённые хомячки до 24-ч возраста особенно чув-
ствительны к малым дозам вируса. Большими дозами можно инфицировать хомячков даже
в 4-6-дн возрасте, а у хомячков-сосунков развивается быстро протекающая инфекция, обу-
словливающая гибель. В меньших дозах вирус RV вызывает карликовость животных и так
называемый монголоидный вид. На основании внешних изменений у инфицированных хо-
мяков вирус характеризуется как остеолитический.
При изучении лёгочных заболеваний у мышей обнаружены изменения в эндотелии, ха-
рактерные для вируса Килхема. Серологически инфекцию подтвердить не удалось, но при
длительном пассировании (слепые пассажи) была доказана скрытая инфекция вирусом RV.
RV является латентным агентом и передаётся вертикально от матери потомству.
592
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Культивирование. Вирус Килхема культивируется в первичной культуре - эмбрио-
нальной ткани крыс (ПКЭК), эмбриональной ткани золотистых сирийских хомячков и в
культуре мышиных фибробластов. ЦПИ в ПКЭК появляются через 24 ч после заражения.
ГА появляется через 16 ч после заражения и достигает максимального титра через 26 ч. Шт.
RV13 культивируется в организме новорождённых хомячков в субкультуре клеток кожно-
мышечной ткани эмбрионов крыс.
Особенности внутриклеточной репродукции. Вирус RV реплицируется лишь в тех
клетках, в которых синтезируется клеточная ДНК в момент заражения. У вируса Килхема
ДНК-зависимая ДНК-полимераза входит в состав вириона в качестве субструктурного ком-
понента и осуществляет репликацию 1-спиральной ДНК. Последняя синтезируется по прин-
ципу комплементарности с образованием промежуточной репликативной формы.
Вирус RV вызывает изменения в ядрах, там появляются множественные базофильные
включения округлой или овальной формы, которые не имеют тенденции к слиянию. Фено-
мен маргинации хроматина в пораженных ядрах слабо выражен. Вирусный АГ в поражён-
ных клетках выявляется с помощью ИФ через 24-48 ч после заражения в виде многочислен-
ных очагов свечения, соответствующих фельгенположительным зонам. В более поздней
стадии (через 4 дн) светящиеся гранулы появляются также и в цитоплазме.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. В естественных условиях, видимо, происхо-
дит горизонтальная и вертикальная передача вируса RV. Уровень АТ к вирусу RV у матери
определяет восприимчивость или резистентность крысят. От матери вирус передаётся по-
томству, при введении его беременным крысам за 1-5 дн до родов крысята погибают через
7-9 дн после рождения. Передача вируса происходит транспланцентарно, но не через моло-
ко, так как крысята, рождённые нормальной самкой и вскармливаемые заражённой самкой,
не заболевают. Крысята, рождённые заражённой самкой, и вскармливаемые нормальной
самкой погибают от инфекции.
Спектр патогенности в естественных условиях. Крысиные вирусы не вызывают за-
болевания у крыс, от которых они выделены, но вызывают «монголоидность» новорожден-
ных хомячков с летальным исходом.
ДИАГНОСТИКА
Вирус Килхема, по-видимому, широко распространён, так как у значительного числа
здоровых крыс, как лабораторных (линия Spraque), так и диких (вид Ratturs norvegicus,
Ratturs ratturs), обнаружены ГА к вирусу. Трудность выделения вируса Килхема объясняется
низкой концентрацией его в организме, существованием вирусного ингибитора и, возможно,
существованием вируса в виде комплекса вирус-антитело, который разрушается при пасси-
ровании вируссодержащей ткани в культуре клеток.
АЛЕУТСКАЯ БОЛЕЗНЬ НОРОК
Morbus Aleutica lutreolarum (лат.); Aleutian disease of mink (англ.);
Aleutenkrankheit der Nerze (нем.)
Алеутская болезнь (вирусный плазмоцитоз норок, АБН) - контагиозная, медленно раз-
вивающаяся инфекционная болезнь, характеризующаяся распространённой плазмоклеточ-
ной пролиферацией (плазмоцитозом), гипергамма-глобулинемией, явлениями геморрагиче-
ского диатеза, артериитом, гепатитом, анемией и прогрессирующим истощением зверей; это
иммунологическая болезнь норок, возникающая вседствие персистентной вирусной инфек-
ции. Для АБН свойственно медленное неизбежное прогрессирующее развитие с летальным
исходом в течение 2-24 мес. Инкубационный период колеблется от 30 дн до 2 лет.
38 Зак. № 171
593
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Впервые АБН описали Хартзауг и Горем в Северной Америке в 1956 г. Авторы наблю-
дали её с 1946 г. у иорок алеутской мутации вскоре после ее выведения. В последующие го-
ды болезнь диагностировали в Англии, ГДР, Дании, Голландии, Скандинавских и др. стра-
нах. Её обнаружили также в некоторых зверосовхозах нашей страны (1-7), куда болезнь за-
везена с импортными цветными норками. Высокая восприимчивость норок к болезни и ус-
тойчивость возбудителя во внешней среде, а также завоз зверей в разведенческих целях обу-
словили быстрое распространение болезни во всех странах, где занимаются разведением
норок. Болезнь причиняет колоссальный экономический ущерб зверосовхозам в связи с вы-
сокой смертностью (70-80%), ухудшением качества пушнины, снижением плодовитости са-
мок, повышенной стерильностью самцов и падежом молодняка. Превалентность (процент
серопозитивных норок) АБН на отдельных фермах Нидерландов превышала 75%, Канады -
90 (31, 32), Дании - 40%. По йодно-агглютинационному тесту (ЙАТ) в Норвегии было вы-
явлено 17% положительно реагирующих норок, в США - 75%. В РФ АБН встречается по-
всеместно, поражая в отдельных хозяйствах до 34-52% поголовья.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. АБН протекает остро,
подостро, хронически (чаще) и латентно. Звери заболевают, главным образом, в августе.
Вторую волну заболевания отмечают в мае и июне. Инфекция обычно затягивается на мно-
гие годы, имея склонность к энзоотическому течению. Сначала регистрируют спорадические
случаи среди алеутских и сапфировых норок. У больных животных угасают воспроизводи-
тельные функции. У большинства зверьков первым признаком заболевания служит сниже-
ние прироста массы, апатия, исхудание, хотя аппетит может сохраняться; в фекалиях появ-
ляются непереваренные частицы корма. Далее отмечается вялость, угнетение, повышение
температуры тела. В прогрессирующей стадии болезни могут возникать кровотечения из ро-
товой и носовой полостей, признаки вторичных или смешанных инфекций. В кале появляет-
ся кровь, или каловые массы становятся дегтеобразными (понос); могут развиваться явле-
ния анемии, менингита (нарушение равновесия, координации, вращение туловища, искрив-
ление шеи и т.д.), парезы и параличи. Болезнь заканчивается кахексией и гибелью зверей в
коматозном состоянии. У беременных самок могут наблюдаться аборты, мертворождения
или рождение нежизнеспособных щенят. Биохимические и морфологические исследования
крови свидетельствуют о диспротеинемии, гипергаммаглобулинемнн н соответственно ги-
поальбуминемии, а также тромбоцитопении и у сильно пораженных норок об уменьшении
клеточного объема крови. Наряду с протеинурией (белок Бенс-Джонса и др.) в моче появ-
ляются кровь н билирубин. Для АБН характерны пожизненная виремия, системная проли-
ферация лимфоидных клеток и генерализованный плазмоцитоз, сильно выраженная гипер-
гаммаглобулинемия, гломерулонефрит, артериит и гепатит.
При вскрытии наблюдается генерализованное опухание лимфоузлов тела и органов,
увеличение селезенки, печени и почек. Лимфоузлы увеличены, поверхность разреза серо-
белого или серо-коричневого цвета, влажная. Почки увеличены, набухшие, бледно-
коричневого цвета. Внешний вид их пестрый, корковый слой усеян множественными серо-
белыми милиарными очажками и петехиальными кровоизлияниями. В хронических случаях
почки могут быть сморщенными. Печень увеличена, полнокровна. Иногда при диффузном
ожирении она приобретает мускатный рисунок. Селезенка увеличена, с признаками гипер-
плазии. В желудке, так же как на слизистой ротовой полости, видны мелкие кровоточащие
эрозии, в содержимом кишечника - кровь. Слизистые оболочки бледны. В результате хро-
нического течения болезни трупы истощены, с признаками кахексии.
Важное значение в течении и исходе болезни имеют поражения почек, характеризую-
щиеся, в основном, прогрессирующим склеротическим гломерулонефритом. Гистологиче-
ские изменения характерны, они выражаются системной генерализованной плазмоцитарной
гиперплазией с доброкачественной тенденцией к преимущественному образованию зрелых
плазматических клеток в органах, богатых ретикулоэндотелиальной тканью. В раннюю ста-
594
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
дию болезни в костном мозге, в почках, печени, селезенке и лимфоузлах заметны отдельные
плазмоцитарные инфильтраты, затем они становятся генерализованными. Поражаются все
кроветворные органы. Развивается прогрессирующий пролиферативный и склерозирующий
гломерулонефрит, характеризующийся клеточной пролиферацией и утолщением мезенхимы
вследствие отложения, как и в стенках сосудов других органов, аморфного ШИК-
положительного материала. В печени наблюдают также пролиферацию и расширение желч-
ных протоков. Кроме неспецифических изменений, в головном мозге, клетках Пуркинье и
клетках аппарата Гольджи, а также в эпителии почечных канальцев встречаются нежные
ШИК-положительные цитоплазматические, а в головном мозге - базофильные внутриядер-
ные включения.
Патогенез. В патогенезе АБН сочетаются элементы онкологии, вирусологии, генетики,
иммунологии и ревматологии, так как выявлено большое сходство в патологии алеутской
болезни с ревматоидными болезнями человека. Первичный инфекционный цикл начинается
после внедрения вируса в организм. Во многом он соответствует общепринятому понима-
нию патогенеза обычных вирусных болезней: вирус стимулирует пролиферацию плазмати-
ческих клеток, которые вырабатывают АТ, вступающие с ним в реакцию; так в организме
образуется иммунный комплекс АГ-АТ. Но отличие патогенеза АБН состоит том, что пер-
вичный цикл, однажды начавшись, будет продолжаться до конца жизни больной норки из-за
неспособности сформировавшихся АТ нейтрализовать внедрившийся вирус. Таким образом,
препятствий для репликации вируса нет, происходит персистенция вируса и непрекращаю-
щееся формирование иммунных комплексов. Вирус АБН циркулирует в организме иммун-
ных больных норок в комплексе с сывороточными иммуноглобулинами. В состав комплекса
входит и комплемент - 3 (С-3). Инфекционность вируса, находящегося в составе иммунного
комплекса, не нейтрализуется, поэтому данный комплекс иногда называют инфекционным.
Помимо комплексов вирус-АТ в организме норок, очевидно, формируются комплексы дру-
гого рода, в состав которых входят ДНК и АТ к ДНК, денатурированные белки и АТ к ним.
У всех норок обнаружены АТ к ядерным АГ. В патогенезе болезни определенную роль иг-
рают ДНК и АТ к ней. Вопрос о происхождении ДНК (вируса или хозяина) не решен (12,
19, 27). Аналогичное одновременное существование вируса и АТ выявлено при болезни
висна, лейкозе птиц, африканской чуме свиней, ИНАН лошадей и других медленных ин-
фекциях животных и человека (3, 6, 8).
Вторичный аутоиммунный цикл начинается с момента повреждения лизосом вследствие
захватывания клетками РЭС большого количества иммунных комплексов. Лизосомные эн-
зимы, высвобождаясь, денатурируют белки цитоплазмы клеток РЭС и делают их ауто АГ.
Последние стимулируют дальнейшую пролиферацию плазматических клеток. К аутоАГ вы-
рабатываются аутоАТ. Следовательно, вторичный инфекционный цикл характеризуется об-
разованием АГ из денатурированных тканей хозяина, дополнительной стимуляцией плаз-
моклеточной пролиферации (плазмоцитоз), формированием АТ к аутоАГ, образованием но-
вых иммунных комплексов (аутоАГ-аутоАТ). Как первичный, так и вторичный циклы пато-
генеза неотделимы друг от друга и обусловливают прогрессирующее развитие болезни с не-
избежным летальным исходом.
Патогенез патологических процессов при АБН состоит в следующем.
Плазмоцитоз - это системная (распространенная) пролиферация плазматических кле-
ток, причем плазмоклеточная пролиферация происходит как в обычных участках - лимфо-
узлах, костном мозге, так и в печени (в портальной зоне) и почках; у тяжелобольных норок
периваскулярные плазмоклеточные инфильтраты можно найти в любом органе или ткани.
Предполагается, что вирус или непосредственно стимулирует определенные предшествен-
ники плазматических клеток, или блокирует локусы, регулирующие скорость пролиферации
(9,10,14,17,18).
38*
595
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Гипергаммаглобулинемия (гаммапатия) - вслед за нарастанием интенсивности плазмо-
цитоза повышается уровень гаммаглобулина (1g) в сыворотке крови больных норок, причем
особенно быстро в течение 8-нед периода. Иммуноглобулины, встречающиеся у норок,
представлены тремя основными химическими классами - IgG, IgA и IgM. Причем IgG могут
состоять из 2-х разновидностей. Гельфильтрацией через сефадекс G-200 обнаружены 1g у2а,
у2Ь, у2с, у и уА. Знание классов и подклассов 1g при АБН помогает лучше понять патогенез
болезни и характер плазмоклеточной пролиферации. Гипергаммаглобулинемия происходит
за счет сверхпродукции IgG, специфического для АГ вируса АБН. Уровень гаммаглобулина
составляет 34-48% от общего сывороточного белка (в норме до заражения он колеблется от
5 до 20%).Гипергаммаглобулинемия возникает в ответ не на любое антигенное раздраже-
ние, а лишь на введение инфицированного вирусом АБН материала.
Согласно существующей гипотезе, персистенция вируса у больных норок объясняется
тем, что макрофаги в процессе фагоцитирования иммунных комплексов реактивируют вирус
и тем самым способствуют его размножению в фагоцитирующих клетках. Отсюда вирус по-
ступает в циркуляцию, соединяется с гуморальными АТ, снова образуя иммунные комплек-
сы, которые также будут затем захвачены макрофагами. Эту гипотезу подтверждает отсут-
ствие нейтрализующей активности АТ. Из гистологических изменений при АБН более ха-
рактерен плазмацитоз - системная пролиферация плазматических клеток. Плазмоклеточная
пролиферация происходит в лимфоузлах, костном мозге, печени (в портальной зоне), поч-
ках. У тяжелобольных норок периваскулярные плазмоклеточные инфильтраты можно найти
в любом органе или ткани. Каждая плазматическая клетка способна образовывать один или,
возможно, два типа специфических АТ, которые могут относиться к любому классу имму-
ноглобулинов (3). Через 7 дн после заражения основное количество АТ представлено IgM,
через 15 дн - IgM и IgG, а через 30 - только IgG. Гипергаммаглобунемия у норок негомоген-
на (не моноклональна) даже у животных одного генотипа. Преимущественное увеличение
какой-нибудь одной разновидности указывает лишь на гиперплазию клеток ограниченного
числа клонов, образующих иммуноглобулин.
Иммунный комплекс. Вирус АБН циркулирует в организме больных норок в связанном
состоянии (комплексе) с сывороточными иммуноглобулинами. Несмотря на то, что вирус
находится в составе иммунного комплекса, инфекционность его не нейтрализуется. Сущест-
вование иммунного комплекса при АБН теперь общепризнано. Величина комплексов колеб-
лется от 19S до размеров, достаточных для спонтанной преципитации. Аналитическим
ультрацентрифугированием установлено, что комплексы характеризуются как 22-25 S.
Гломерулонефрит и периартериит. В течении и исходе АБН важное значение имеет
поражение почек, проявляющееся, в основном, прогрессирующим склерозирующим гломе-
рулонефритом и обусловленное в определенной мере, по мнению ряда авторов, иммуноло-
гическими факторами (11, 13, 25, 26, 28). Гломерулонефрит характеризуется зернистыми
отложениями 1g и комплемента на базальной мембране клубочковых капилляров и в мезен-
химе и обусловлен формированием инфекционных комплексов вирус-антитело-комплемент.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
В 1962 г. независимо друг от друга Каргсэд и Придаем, Рассел, Траутвейн и Гембольдт
успешно воспроизвели АБН как тканевой суспензией, так и ультрафильтратом из органов
больных зверей. Этими опытами было доказано, что этиологический фактор АБН - вирус.
Возбудитель АБН до сих пор изучен слабо.
Морфология и химический состав. Размер вирионов от 10 до 23 нм, капсид имеет
форму икосаэдра. Вирус проходит через мембранные фильтры с порами в 50 нм и осаждает-
ся центрифугированием при 95000 g. По морфологии сходен с ПВ, содержит ДНК, капсид
без оболочки. Плавучая плотность в CsCl 1,36±0,02 г/см3, а в градианте плотности сахаро-
зы 1,21. ДНК, экстрагированная из селезенки больной норки, при введении здоровой вызы-
596
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
вала типичную АБН. Вирус связан с ядрами клеток и различными органеллами цитоплазмы,
после центрифугирования при 170000 или 100000 мин1 обнаруживается в клеточном соке.
Устойчивость. Вирус устойчив к формалину и высокой температуре, эфиру, дезоксихо-
лату, протеазе, нуклеазе. Инфекционность не снижается и после обработки фреоном или
эфиром. В необработанных тканях больных норок вирус более устойчив к неблагоприятным
факторам вследствие стабилизирующего действия белковых примесей.
Антигенная активность. Положительная прямая реакция Кумбса у норок обусловлена
персистенцией вируса и фагоцитированием комплексов АГ (вирус) - АТ - комплемент, осе-
дающих на поверхности эритроцитов и клубочковых капилляров.
Локализация, вирусемия, вирусоносительство и вирусовыделение. В организме
больных норок вирус находится в сыворотке крови, головном мозге, мезентериальных лим-
фоузлах, почках, селезенке, печени, слюнных железах и кишечнике. Он связан с клеточны-
ми ядрами и различными органеллами, в частности, с рибосомами. В тяжелой микросомной
фракции обнаружены небольшие плотные тельца, сходные с вирусными частицами. Сыво-
ротка крови, внутренние органы и моча инфекционны в течение всей жизни больных жи-
вотных, несмотря на то, что вирус находится в составе иммунного комплекса. В клубочках
почек аморфные эозинофильные отложения, содержащие глобулин и комплемент, также,
вероятно, представляют комплекс АГ-АТ. Длительный инкубационный период, редкие слу-
чаи выздоровления, прогрессирование болезни свидетельствуют о размножении вируса в
организме пораженных зверей с нарастанием инфекционного титра. Из организма вирус
выделяется со слюной, мочой и фекалиями.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится у норок путем интраперитонеально-
го введения сыворотки, а также ультрафильтратов из пораженных тканей норок. Особенно
быстро вирус размножается в организме экспериментально зараженных алеутских норок.
Инкубационный период у них колеблется от 30 дн до 2 лет (у норок других окрасок), а при
серийных пассажах он снижался до 1-2 нед. В 1967 г. Кенион и др. сообщили о восприим-
чивости к плазмоцитозу хорьков, которых можно использовать в качестве модели для изу-
чения этой болезни. Удалось вызвать АБН у сосунков белых мышей и хлопковых крыс вве-
дением суспензии из внутренних органов в мозг н внутрибрюшинно, а также у норок вирус-
ной чувствительности к эндотоксину, который образуется в процессе жизнедеятельности ви-
руса в организме (7, 15, 22). При экспериментальном заражении у норок, помимо отчетли-
вой внутриклеточной инфильтрации тканей и тяжелого гломерулонефрита, в результате от-
ложения иммунных комплексов в сосудистой системе, развивается артериит. Наиболее вы-
раженные изменения - в коронарных, печеночных, мозговых и почечных артериях.
Интраперитонеальное заражение норок изолятом SL-3 вируса АБН сопровождается по-
явлением у фиолетовых норок вирусспецифических АТ и развитием гипергаммаглобулине-
мни. Вирусный АГ обнаруживался в лимфоузлах, селезенке, почках (16). В иммуноблотинге
и с помощью гибридизационных зондов РНК установлена репликация вируса АБН в мезен-
териальных лимфоузлах и селезенке, а также в клетках костного мозга и мононуклеарных
лейкоцитах крови (16).
Референтные шг. вируса АБН - шт. SL-3 и Utha I.
Культивирование. В лабораторных условиях вирус поддерживают на норках. У фиоле-
товых норок его обнаруживали в селезенке через 6 дн после экспериментального заражения
в титре 2105 ИД 50/г ткани; у пастельных норок выявляли через 9 сут в титре ЗЮ6 ИД50/Г.
Первые симптомы болезни (летаргия, анорексия) проявлялись через 40 дн после заражения.
Вирус впервые вырастил в культуре клеток куриной почки Траутвейн (1974). На 6-м пасса-
же вирус вызывал ЦПИ и накапливался в этой системе. Культуральный материал 1-го пас-
сажа оказался инфекционным для норок, в то время как материалом 10-го пассажа удалось
заразить немногих зверьков. По мере адаптации вируса к КЭ он утрачивал патогенность для
597
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
норок. В 1966 г. Бесрар и Карстед использовали экстрагированный из селезенки бальной
норки препарат ДНК для заражения культуры клеток семенников норок и наблюдали свое-
образные морфологические изменения клеток. Наблюдались аналогичные изменения пер-
вичной культуры клеток почки зеленой мартышки, инфицированной вируссодержащей сус-
пензией почки, поджелудочной железы и стенки кишечника больных норок. В последние го-
ды установлена способность вируса АБН репродуцироваться в перевиваемой линии клеток
почки кошек (линия ССС, клон 81). Разрешающей температурой при культивировании явля-
ется 32°С, а при 37°С (неразрешающая температура) в клетках накапливается мономерная
ковалентно-замкнутая репликативная форма ДНК вируса АБН. Такая же репликативная
форма обнаружена и в клетках костного мозга естественно зараженных норок (30). Кроме
того, вирус АБН реплицировался в макрофагах и фолликулярных клетках начиная с 10-го
дня после заражения. Через 60 дн он присутствует только в макрофагах (23).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные звери.
В благополучные хозяйства болезнь заносится поступающими латентно бальными норками,
рассеивающими вирус со слюной, мочой и фекалиями. Вертикальную передачу впервые до-
казали в 1963 г. Довольно часто наблюдается горизонтальный путь передачи инфекции
(посредством прямого и непрямого контакта). Заражение возможно алиментарным путем
через пищеварительный тракт, кожу (во время гона зверей, при проведении массовых при-
вивок и т.д.), а также через дыхательные пути в виде капельно-аэрозольной инфекции. Ви-
рус может быть перенесен с предметами ухода, одеждой, мухами и кровососущими насеко-
мыми. Придается большое значение контактному способу заражения зверей, в частности,
при спаривании. Имеются наблюдения энзоотических вспышек АБН при рассадке молодня-
ка и при проведении других массовых мероприятий. Предполагают, что репликация вируса
может происходить и в организме комаров Aedes fitchii, где он сохранялся 35 дн.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к вирусу
АБН восприимчивы норки всех окрасок, однако норки с гомозиготным рецессивным геном
аа (алеутские, сапфировые, голубые) заболевают чаще, быстрее и тяжелее переносят бо-
лезнь (генетическая предрасположенность), чем стандартные. Однако правильнее будет го-
ворить, что генетические факторы влияют на тяжесть болезни, а не на восприимчивость.
Подтверждением этому служит тот факт, что на ранней стадии экспериментальной инфек-
ции титры АТ были одинаковыми как у фиолетовых норок (аа\ так и у пастельных (аА или
АА). У всех без исключения норок с геном аа проявлялся наследственный синдром Чедик-
Хигашит. Чувствительность таких норок к вирусу АБН выше (47%), чем у норок без сии-,
дрома. Описана спонтанная гипергаммаглобулинемия у хорьков с типичными для АБН при-
знаками. Хорьки, зараженные вируссодержащим материалом от норок, содержали вирус в
течение 136 дн, не проявляя клинических признаков. Преципитирующие АТ к вирусу АБН
имелись и у скунсов. Наблюдали АБН и у человека.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на АБН ставят комплексно с учетом эпизоотических, вирусологических, клини-
ческих и патоморфологических данных. Однако, отсутствие методов дезагрегации иммун-
ных комплексов, равно как и неудачные попытки культивирования вируса в пробирочной
системе, долго сдерживало разработку специфических методов диагностики болезни. Для
лабораторной диагностики АБН Маллен предложил неспецифический метод йодно-
агглютинационный тест (реакция йодной агглютинации, йодная проба, йодный тест, сокра-
щенно ЙАТ). Он основан на свойстве р-ра йода осаждать гаммаглобулины при повышении
их концентрации в сыворотке крови. Метод прост в постановке, но недостаточно чувствите-
лен - выявляет лишь 40 - 60% инфицированных норок. У взрослых норок положительная
реакция проявляется через 21-56 дн после заражения, а у молодняка - в 2-3-мес возрасте.
598
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекции
Ранние стадии болезни (через 3-5 нед после заражения) с помощью ИАТ выявить не удает-
ся. Тяжелобольные норки при сильном поражении почек также не всегда реагируют по это-
му тесту вследствие снижения уровня гаммаглобулина. Положительный результат реакции
в большинстве случаев совпадает с патологоанатомическим диагнозом на АБН (51-96%)
или с патоморфологическим диагнозом (92-95%). Показания ИАТ хорошо коррелируют с
гипергаммаглобулинемией, считающейся постоянным признаком при АБН. Тесная зависи-
мость между положительным ЙАТ и клиникоэпизоотологическим и другими проявлениями
АБН свидетельствуют о несомненной диагностической ценности ИАТ как метода, предна-
значенного для массовых исследований в производственных условиях. Важным подтвер-
ждением диагностической ценности ИАТ служат примеры успешной борьбы с АБН, когда
мероприятия основывались на показаниях этой реакции. Таким образом, несмотря на не
специфичность и недостаточную чувствительность, ИАТ является одним из наиболее при-
знанных массовых тестов, однако применение его для установления диагноза у отдельно
взятого животного не аргументировано.
Методом ИФ в 1969 г. было доказано, что АГ вируса АБН присутствует в цитоплазме
макрофагов печени, селезенки и лимфоузлов в высокой концентрации в течение первых 10
дн после заражения и что у норок вырабатываются АТ, реагирующие с этим АГ. Затем ви-
рус, экстрагированный из инфицированных тканей норок, был использован для приготовле-
ния АГ и успешно применен в РСК, встречном электрофорезе, РДП. Методом хроматогра-
фии и опытами in vivo установлено, что АГ и иммунный преципитат, сформированный во
встречном электрофорезе, оказались инфекционными. Следовательно, АГ вируса АБН, со-
державшийся в линиях преципитации, был ничем иным, как вирусом. Дальнейшие исследо-
вания иммунного преципитата с помощью ЭМ подтвердили, что АГ представлен вирусными
частицами. Таким образом, была показана возможность как специфической, так и неспеци-
фической диагностики заболевания. До недавнего времени считалось, что вирус АБН не
нейтрализуется специфическими АТ естественного хозяина in vitro и in vivo. Однако, после
обработки вируса Н-бутанолом при фильтрации через мелкопористые мембраны (диаметр
пор 0,005 мкм) основная масса его (>95%), быстро нейтрализовался АТ при 37°С, хотя ре-
зистентная фракция вируса сохраняла инфекционность. С помощью монАТ эпитопы ней-
трализации вируса обнаружены на вирионных белках 75 и 85 кД (29).
Предложен второй тест неспецифической лабораторной диагностики АБН - тимоловая
проба. Она основана на том, что при поражении печени изменяются белки и их соотноше-
ние, вследствие чего нарушается физико-химическое состояние коллоидных р-ров. В тимо-
ловом буфере они выпадают в осадок и вызывают его помутнение. Результаты теста выра-
жают в ед. экстинции, умноженных на 100. У здоровых норок величины тимоловой пробы
колеблются от 0 до 4 ед.; показатели в пределах 4,1 -7 считаются сомнительными (звери
подлежат вторичной проверке); величины выше 7 ед. свидетельствуют о заболевании. Для
диагностики болезни используется также глютаровый альдегид - глютаральдегидный тест
(ГАТ). Сущность метода заключается в том, что глютаральдегид взаимодействует с амино-
группами 1g и вследствие полимерализацин образует ввдимый невооруженным глазом гель.
Этот тест еще не нашел широкого практического применения. В прижизненной диагностике
имеет значение обнаружение в моче низкомолекулярных белков Бенс-Джонса. Одним из не-
специфических методов служит также простая радиальная иммунодиффузия у-глобулина в
агаровом геле. Для постановки реакции требуется гомогенный норковый сывороточный IgG,
кроличья антисыворотка против него и кровь норок. Принцип реакции заключается в диф-
фузии испытуемого материала в агаровой пластинке, содержащей АТ к тому или иному бел-
ковому компоненту. Надежность теста можно повысить проведением повторного исследова-
ния через определенное время. Наиболее достоверным тестом в диагностике АБН являются
патоморфологические исследования. Патогномоничными признаками служат системная, ге-
599
Глава XV. Family Parvoviridae Парвовирусные инфекция
нерализованная гиперплазия с тенденцией к образованию зрелых плазматических клеток,
расширение и пролиферация желчных протоков и периартериит. В этом случае наряду с
секцией можно исследовать мазки-отпечатки из лимфоузлов для обнаружения в них плаз-
моцитарной реакции.
Специфические методы диагностики. При АБН это НИФ. Метод вполне применим в
лабораторных условиях. Иммуноферментный метод - дотИФА иа нитроцеллюлозе оказался
в 1000 раз чувствительнее, чем встречный иммуноэлектрофорез. Он выявлял на 19% боль-
ше положительных результатов и требует меньше времени и затрат. Основан метод на ис-
пользовании монАТ и штамма Uthal (24).
Полимеразная цепная реакция оказалась пригодной как метод индикации вируса АБН
на ранних этапах инфекции (20). Метод ИЭОФ, предложенный Cho и Ingrem в 1972-1973
гг. для прижизненной диагностики АБН, основан на том, что в поле электрического тока АГ
перемещается к положительному полюсу, а АТ - к отрицательному, образуя в месте сопри-
косновения полосу преципитации. В качестве АГ используют фреоновые экстракты печени,
селезенки и лимфоузлов экспериментально зараженных норок. ИЭОФ отличается высокой
специфичностью и позволяет выявить больных норок через 1 нед после заражения.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Все заболевшие норки гибнут, поэтому вопрос о естественном иммунитете отпадает (3).
В США испытывали инактивированную вакцину (10%-ный гомогенат селезенки и печени
экспериментально зараженных норок, подвергнутый термоинактивации и смешанной с
адъювантом Фрейнда в равных объемах). Вакцина оказалась не иммуногенной, повышала
восприимчивость норок к последующему заражению и усиливала степень поражения орга-
нов. В 1964 г. Рассел и Максфельд запатентовали инактивированную формолвакцину. Её
вводят подкожно, внутрибрюшинно, внутримышечно или внутрикожно по 1-2 мл. Вакцина
создает непрочный иммунитет, но позволяет повысить резистентность животных и прервать
распространение инфекции. Китайские ученые впервые установили существование долго-
временной отрицательной реакции на антиген АБ у большого числа норок, что, вероятно,
может быть основой иммунизации и предотвращения болезни (21).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Болотников И.А. и др. Ветеринария, 1982, 12 :70. 2.Голикова Е.М. и др. Сб .н. тр. ЛВИ,
1979, 56 :28. З.Слугин В.С. Алеутская болезнь норок. М., 1975. 4,Слугин В.С. Сб. н. тр.
НИИПЗК. 1980, 21 :14. 5.Слутин В.С. Автореф. дисс., М., MBA 1982. б.Слугин В.С. и др.
Ветеринария, 1986, 3 :31. 7.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусология, Колос, 1979.
8.AastedB. et.al. J Virol, 1984, 51, 1 :7. 9.Aasted В. etal. J Clin Microbiol., 1983, 18, 3 :637.
lO.Alexandersen S. Acta pathol microbiol immunol, Scand.,1985, 1393, 3 :195. 11.An S.H. et.al.
Scientifur, 1980, 4, 1 :39. 12.Bokhaut B.A. Pelsdirenfokke, 1985, 35, 8 :239. 13.Bloom M. et.al.
J Virol., 1982, 43, 2 :608. 14.Cho H.J. et.al. Can J Comp Med, 1979, 37, 3 :217. 15.Dawen
Sabine van Kaaden O.R. Zbl Bakteriol 1982, Abt IA, 253, 1 :25. 16.Haas L. et.al. J Vet Med Ser
B, 1990, 37, 2 :106. 17.Hahn E.S. et.al. Inf Immunol, 1980, 29, 2 :452. 18.Hahn E.S. Vet
Immunol Immunopathol., 1984, 5, 4 :313. 19.Kaaden O.R. etal. Zbl Bakteriol, Microbiol, Hyg,
1984, A57, 1 :140. 20.Jacksan M. et.al. Norw J Agr Sci, 1992, 9 :383. 21.Ji Ynlin Acta Vet et
zootech Sin,1995, 26, 1 :42. 22.Lengyel A. etal. MTA Orv tud aszt kozl, 1979-1980, 30, 3 :419.
23.Mori Shiro etal. J Virol, 1991, 65, 2, :952. 24.Miroshnichenko S.M. et.al. Norv J Agr Sci,
1992, 9 :388. 25.Muller-Peddinghons R. et.al. Zbl Veterinarmed, 1980, 27, 1 :1. 26.Neubert A.
Tadunsber Akad Landvirtschaftswiss, 1984, 228 :83. 27.Porter D.D. etal. J Exp Med,1969, 130,
3 :575. 28.Roth S. et.al. Zbl Bakteriol, Microbiol, Hyg, 1984, A258, 4 ;528. 29.Stolze B. et.al.
Virology, 1987, 158 :174. 3O.TrugenU. etal. J Vet Med B, 1993, 40, 1 :66. 31.Wright P. et.al. 2-
nd Int Sci Cong Anim Prod Denmark, 1980, Helleroed, S. a. 31/1-38/8. 32.Wright P.F. Am J Vet
Res, 1982, 43,5:865
600
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Глава XVI. ГЕРПЕСВИРУСНЫЕ
ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕМЕЙСТВА
HERPESVIRIDAE
Герпесвирусная (от греч. herpes, herpetos - ползучий) инфекция - самая распространен-
ная среди людей и животных. В семейство включены вирусы, поражающие ЦНС
(энцефалит, миелит, энцефаломиелит), глаза (кератит, кератоконъюнктивит), слизистые
оболочки (стоматит, афтозные язвы, поражение гениталий) и* кожные покровы (экзема, ве-
зикулярные воспаления). У человека герпесинфекция периодически обостряется, но это не
сопровождается развитием длительного иммунитета. При слабости гуморального ответа
(АТ) имеют место факторы, характеризующие неспецифическую резистентность организма.
Вирус простого герпеса типа 2 (ВГП-2) вызывает появление в инфицированных им клетках
АГ, отличающихся от антигенов вируса и незараженной клетки. Эти вирусиндуцированные
АГ интересны тем, что они были найдены в тканях рака шейки матки человека.
Из патогенных для животных вирусов в состав семейства Herpesviridae входят вирусы
болезни Ауески, ринотрахеита КРС, ринопневмонии лошадей, герпеса лошадей (LK N2),
злокачественной катаральной горячки КРС, язвенного маммиллита, ринотрахеита кошек,
герпеса собак, болезни Марека, инфекционного ларинготрахеита птиц, чумы уток, герпеса
птиц и др. В семействе насчитывается около 80 представителей.
Герпесвирусы состоят из линейной 2-нитчатой ДНК с мол.м. 92-102 кД. Вирионы - час-
тицы округлой формы состоят из 4-х структурных компонентов: нуклеоида, капсида диа-
метром 120-150 нм, окруженного содержащей липиды оболочкой, (мембрана, (тегумент)} и
наружной оболочки (Рис. 86). Плавучая плотность вирионов в градиенте CsCl 1,27-1,29
г/см3. Нуклеоид тороидальной формы, содержит ДНК и окружен икосаэдрическим капсидом
диаметром 100-110 нм, содержащим 162 частично полых капсомера (150 гекса- и 12 пента-
меров). Капсид окружает ядро вириона, состоящее из ДНК, покрытой белком. Мембрана из
глобулярного материала окружает капсид. В составе вириона определено до 32 белков с
мол.м. до 290 кД. Вирионы имеют сложную организацию, включая не менее 4 компонентов:
core, капсид, суперкапсидную структуру и оболочку. Наружная оболочка вирионов имеет
типичное строение и содержит многочисленные выступы (шипы) длиной около 8 нм. Мол.м.
вирионов составляет более 1000 МД. Герпесвирусы формируют характерные внутриядерные
включения. Вирионы при прохождении через внутренний листок ядерной мембраны в эн-
доплазматический ретикулум покрываются дополнительной оболочкой, содержащей глико-
протеиды и липиды.
Наиболее типичным представителем семейства Herpesviridae является вирус простого
герпеса - Herpes simplex. Геном вирусов герпеса представлен единой 2-спиральной линей-
ной молекулой ДНК, состоящей из 120-220 тыс. п. нуклеотидов, доля Г+Ц составляет 35-
75%. ДНК обладает инфекционностью. Характерная особенность генома герпесвирусов -
наличие уникальных и повторяющихся последовательностей нуклеотидов, причем послед-
ние могут находиться на концах и внутри генома. Геномы изученных герпесвирусов разде-
лены на 5 типов: А, В, С, Д, Е. В вирионах герпесвирусов обнаружено более 20 белков с
мол. м. 12-222 кД. В состав наружной оболочки входят липиды и углеводы. Герпесвирусы
размножаются в ядре клетки. Вирусная ДНК транскрибируется в ядре, синтезированные и
РНК транспортируются в цитоплазму и транслируются. Белки поступают в ядро, объединя-
ются с вновь синтезированной ДНК с образованием нуклеокапсидов. Последние, проходя
через модифицированные участки внутреннего слоя ядерной мембраны, приобретают на-
601
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ружную оболочку. Сформировавшиеся вирионы транспортируются к поверхности клетки в
везикулах, которые сливаются с плазматической мембраной.
Представители семейства Herpesviridae по биологическим свойствам разделены на 3
подсемейства: Alphaherpesvirinae, Bethaherpesvirinae, Gamma herpesvirinae. Вирусы,
выделенные от хозяина одного вида, обозначают названием хозяина, а типовую принадлеж-
ность - арабскими цифрами.
Подсемейство Alphaherpesvirinae включает группу вирусов простого герпеса. ДНК
вирусов состоит из 120-180 тыс. пар нуклеотидов. Последовательности одного или обоих
концов ДНК находятся внутри молекулы в инвертированной форме (D и Е типы генома).
Поэтому вирионная ДНК представлена 2-мя или 4-мя изомерными формами. Спектр хо-
зяев у разных представителей подсемейства варьирует в широких пределах. Вирусы подсе-
мейства характеризуются относительно коротким репликативным циклом (менее 24 ч), бы-
стрым разрушением зараженных клеток и способностью существовать в латентной форме
преимущественно в нервных ганглиях.
Подсемейство Alphaherpesvirus состоит из двух родов:
1. Род Simplexvirus. В состав рода входят : герпесвирусы человека 1 (вирус простого
герпеса 1 - прототипный вирус) и 2 (вирус простого герпеса 2), герпесвирус КРС 2 (вирус
маммиллита КРС). ДНК состоит из 152 тыс. пар нуклеотидов, доля Г+Ц составляет 67%.
Последовательности обоих концов находятся внутри молекулы ДНК в инвертированной
форме (Е-тип генома). Вирионная ДНК представлена 4 изомерными формами. В составе
вириоиов обнаружено более 30 белков, включая 8 гликопротеинов, из которых по крайней
мере три индуцируют синтез ВНА.
2. Род Varicellavirus. В состав рода входят: герпесвирусы человека 3 (вирусы ветряной
оспы, опоясывающего лищая - прототипный вирус), свиней 1 (вирус псевдобешенства - бо-
лезни Ауески), КРС 1 (вирус инфекционного ринотрахеита), лошадей 1 (вирус ринопиевмо-
иии, вирус аборта лошадей) и 4 (вирус респираторной болезни). К возможным представите-
лям рода относятся герпесвирус циркопитек 1 (вирус В), герпесвирусы лошадей 3 (вирус по-
ловой экзантемы), кошек 1, собак 1. ДНК состоит из 125 тыс. пар нуклеотидов. Последова-
тельности одного конца ДНК находятся внутри молекулы в инвертированной форме (D-тип
генома). Вирионная ДНК представлена 2-мя изомерными формами.
Подсемейство Bethaherpesvirinae включает группу цитомегаловирусов. ДНК состоит
из 180-250 тыс. пар нуклеотидов, доля Г+Ц составляет 56%. Последовательности одного или
обоих концов ДНК находятся внутри молекулы в инвертированной форме (D- и Е-типы ге-
нома). Спектр естественных хозяев узкий. Репродуктивный цикл продолжительный (более
24 ч). Зараженные клетки часто увеличиваются в размере (цитомегалия). Тельца-
включения, содержащие ДНК, образуются в ядре и цитоплазме клеток на поздней стадии
инфекции. Вирус поддерживается в латентной форме в секреторных железах, лимфорети-
кулярных клетках, почках и других тканях. Подсемейство состоит из двух родов:
1. Род Cytomegalovirus. В состав рода входит только один представитель - герпесвирус
человека 5 (цитомегаловирус человека). ДНК состоит из 200 тыс. пар нуклеотидов. Хорошо
размножается в фибробластоподобных клетках.
2. Род Muromegalovirus. В состав рода входят герпесвирус мышей 1 (цитомегаловирус
мышей). ДНК состоит из 200 тыс. пар нуклеотидов. Возможными представителями рода
являются герпесвирус свиней 2 (цитомегаловирус свиней), лошадей 2, семейства мышиных
2 (цитомегаловирус крыс), морских свинок 1 (цитомегаловирус).
Подсемейство Gammaherpesvirinae группа лимфопролиферативных вирусов. ДНК со-
стоит из 170 тыс. пар нуклеотидов, оба конца молекулы содержат тандемно повторяющиеся
последовательности (В-тип генома). Спектр естественных хозяев узкий и не изменяется при
экспериментальном заражении. Все вирусы подсемейства размножаются в лимфобластоид-
ных клетках и некоторые из них вызывают литическую инфекцию. Вирусы обладают тро-
пизмом к В- или Т-лимфоцитам. В лимфоцитах инфекция часто останавливается на предли-
602
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
тической стадии или завершается гибелью и лизисом клеток, но без образования полных
вирионов. Латентную инфекцию часто обнаруживают в лимфоидной ткани. Подсемейство
состоит из двух родов:
1 .Род Lymphocryptovirus. В состав рода входят герпесвирусы человека 4 (вирус Эп-
штейна - Барр - прототипный вирус); подтип 1 (герпесвирус шимпанзе); церкопитек 2
(герпесвирус павианов). Вирусы специфичны для В-лимфоцитов. ДНК состоит из 170 тыс.
нуклеотидов.
2 .Род Rhadinovirus. В состав рода входят: герпесвирусы ателе 4 (прототипный вирус) и
саймири 1. ДНК состоит из 105 тыс. пар нуклеотидов. Уникальная последовательность мо-
лекулы с обоих концов фланкирована повторяющимися последовательностями с высоким
содержанием Г и Ц.
Многие герпесвирусы животных изучены недостаточно и пока не классифицированы по
подсемействам и родам.
БОЛЕЗНЬ АУЕСКИ
Pseudorabies, Aujeszky’s Disease (англ.), Aujeskysche
Krankheit, Morbus Aujeszkyi, Herpesvirus-suis-Infektion,
Pseudowut, Infektiose Bulbarparalyse (нем.), Pseudorage (франц.)
Болезнь Ауески (БА), - псевдобешенство, инфекционный бульбарный паралич, зудящая
чума, бешеная чесотка) - остро протекающая болезнь сельскохозяйственных животных всех
видов, пушных зверей и грызунов. Характеризуется признаками поражения головного и
спинного мозга, сильным зудом и расчесами (у всех животных, кроме свиней).
Информация об истории БА обобщена в обзорах (31, 107). БА впервые описана в США
в 1813 г. среди телят, страдающих экстремальным зудом и в итоге погибших, соответствен-
но заболевание было названо “Maditch ” - бешеная чесотка. Термин “псевдобешенство” был
впервые использован в 1849 г. в Швейцарии, так как клинические признаки у телят были
подобны таковым при бешенстве.
В 1902 г. А. Ауески установил этиологический агент как небактериальный и в последст-
вии Шмайдхоффер подтвердил экспериментальной фильтрацией, что агент был вирусом. В
1934 г. Sabin и Wright идентифицировали его как герпесвирус, который был иммунологиче-
ски связан с ВГП и герпесом В (69b). Болезнь встречается во всех европейских странах,
Южной и Северной Америке, Африке и Азии в виде энзоотий и наносит большой экономи-
ческий ущерб. Несмотря на единую этиологию, патогенез болезни и ее клиническое прояв-
ление зависят от вида, возраста и способа заражения. Наиболее высокий экономический
ущерб болезнь, наряду со свиноводством, приносит пушному звероводству. У пушных зве-
рей БА - острая кормовая инфекция. Основным источником ее являются боенские отходы и
субпродукты, полученные от больных свиней или животных-вирусоносителей (4).
Клинические признаки. Инкубационный период от 1,5 сут до 15-20 дн и зависит от
метода заражения, вирулентности вируса и устойчивости животного.
У свиней БА протекает без признаков зуда. Особенно тяжело болеют поросята-сосуны и
отъемыши. У поросят, зараженных внутриутробно или в первые 10 дн после рождения, бо-
лезнь носит септический характер, такие поросята нежизнеспособны, не могут сосать, по-
стоянно лежат, у них наблюдаются спазмы глотки, икота, слюнотечение. Через 4-12 ч, а
иногда через сутки после появления признаков болезни такие поросята обычно погибают. У
новорожденных поросят бывает и аполексическая форма болезни: внешне здоровый поро-
сенок падает и в припадке судорог погибает. У поросят от 10 дн до 3-х мес первые признаки
болезни - лихорадка (до 40-42° С) угнетение, слизистое истечение из носа. Затем появляют-
ся признаки поражения ЦНС: беспокойство, манежные движения. Больные поросята стре-
603
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
мятся вперед, натыкаются на препятствия, упираются головой в стену или кормушку. По-
являются судороги шейных и жевательных мышц, мышц позвоночника - прогибается спина.
Нередко возникают припадки судорог. Поросенок падает и, лежа на боку, судорожно двига-
ет конечностями; голова запрокинута, саливация усилена. У некоторых более выражено уг-
нетение. Далее развиваются параличи глотки, гортани, конечностей. Наступает афония, из
ротовой полости течет пенистая слюна, появляется одышка - следствие отека легких. Бо-
лезнь длится от нескольких часов до 3-х сут. Погибают 70-100% заболевших.
Болезнь у свиноматок и подсвинков старше 5-мес возраста проявляется в форме добро-
качественного гриппоподобного синдрома, сопровождающегося обильным слюнотечением.
Иногда выделяют вирус от свиней, страдающих различными формами пневмонии (кашель,
признаки ринита и конъюнктивита). Через 3-4 дн животные выздоравливают. Признаки по-
ражения ЦНС проявляются редко. Супоросные матки могут абортировать (61). В Китае опи-
саны поражения плаценты у супоросных свиней, естественно зараженных вирусом БА (89,
90, 91). В природе циркулируют слабовирулентные штаммы, обладающие относительно
низким нейротропизмом. В таких случаях свиньи могут быть вирусоносителями до 12 мес и
более. Острое течение БА проявляется лишь в случае циркуляции возбудителя на поросятах
до 5 мес и особенно новорожденных от интактных свиноматок. ВБА патогенен для плодов в
период иммунологической ареакгивности, и в период иммунокомпетентности (21а).
У крупного рогатого скота повышается температура тела до 41,9°С, прекращается
жвачка, появляется сильный зуд в области ноздрей, губ, щек или глаз, реже - в других уча-
стках тела. Животные вялые, отказываются от корма, беспокоятся, непрерывно лижут зудя-
щие места, трутся об окружающие предметы, а если это не удается, грызут кожу. Возбуж-
дение нарастает, глаза выражают испуг, животное мычит, стонет, рвется с привязи, но аг-
рессивности не проявляет, пульс и дыхание учащены. Иногда больные животные падают на
землю. Расчесанные до крови зудящие места отекают. Нередко наблюдаются судорожные
сокращения жевательных и шейных мышц. Частые позывы к мочеиспусканию, сильное
слюнотечение, потливость, нервная дрожь. Через 1-2 сут с момента появления первых при-
знаков болезни наступает смерть. Случаи выздоровления исключительно редки. Иногда зуда
и расчесов не бывает, в таких случаях наблюдаются усиленное отделение пота, слюны, ато-
ния рубца, жажда. Приступы беспокойства чередуются с периодами оцепенения, сонливо-
сти. Описывается болезнь среди КРС, находящегося в прямом контакте со свиньями, проте-
кающая остро и характеризующаяся тимпанней. Смерть обычно наступает при явлении на-
растающей слабости (Рис. 159).
У овец и коз БА проявляется такими же клиническими признаками, что и у КРС, однако
возбуждение бывает редко. Тяжело болеют и часто погибают в 1-е сут ягнята (24, 25 ).
У плотоядных животных (пушные звери, кошки, собаки) наблюдается отказ от кор-
ма, они становятся пугливыми, беспокойными. Характерный признак - сильный зуд. Он от-
мечается у большинства больных собак, у кошек зуд бывает реже. У больных собак и кошек
иногда появляется возбуждение, напоминающее бешенство: животные грызут палки и раз-
личные предметы, нападают на других животных, но агрессивности к людям не проявляют.
Вскоре парализуется глотка, в связи с чем повышается саливация (Рис. 158). Животные
обычно погибают в течение первых 2-3-х сут (24, 25). Патогенез болезни у плотоядных,
проявляется локализацией и распространением вируса невральным путем по аналогии с бе-
шенством; животные не выделяют вирус во внешнюю среду, не являются источником ин-
фекции и служат его экологическим тупиком.
У лошадей болезнь может протекать доброкачественно. У больных незначительно по-
вышается температура тела, снижается аппетит и отмечается некоторое угнетение. Через 2-4
дня эти признаки исчезают (24,25).
У верблюдов взрослых одногорбых БА характеризуется угнетением, отказом от корма,
атонией преджелудков, искривлением шеи, парезом задних конечностей, мышечной дро-
жью. Температура тела удерживается в пределах физиологической нормы. Гибель происхо-
604
Г лава XVI. Family Hetpesvirida Г ерпесвирусные инфекции
дит в течение суток после появления клинических признаков заболевания. Спустя несколько
дней в стаде верблюдов появляется заболевание среди молодых животных с преобладанием
сильного зуда на боковых поверхностях задней части туловища. Все клинически больные
животные погибают (14).
Разнообразие клинического проявления БА объясняется видовой и возрастной чувстви-
тельностью, уровнем иммунореактивности животных, а также пантропностью возбудителя,
его способностью поражать клетки иммунной системы, вызывать в организме состояние
иммунодефицита (12).
Патологоанатомические изменения. При внешнем осмотре трупов крупного и мелко-
го рогатого скота, пушных зверей, собак и кошек обращают на себя внимание расчесы и ра-
ны кожи в области морды, головы или других частей тела. Шерсть на этих участках отсут-
ствует, кожа покрасневшая, покрыта трещинами, ссадинами, разорвана. Подкожная клет-
чатка отечна, красного или темно-красного цвета. Слизистая оболочка носовой полости,
гортани, глотки застойно гиперемирована. В бронхах пенистая, красного цвета жидкость.
Легкие темно-вишневого цвета, тестоватые, с поверхности разреза стекает пенистая красно-
ватая жидкость. Иногда обнаруживают очаговое или разлитое воспаление. Слизистая ЖКТ
покрасневшая, набухшая, по складкам покрыта кровоизлияниями и дифтерическими плен-
ками. Под серозными покровами паренхиматозных органов видны мелкие точечные крово-
излияния. Кровеносные сосуды мозга и его оболочек расширены, полнокровны, мозговое
вещество отечно. В мозговых желудочках находят большое количество красноватой жидко-
сти (53, 73).
У свиней, поросят-отъемышей и сосунов расчесы и другие повреждения кожи, как пра-
вило, отсутствуют. В миндалинах, на слизистой оболочке надгортанника, глотки часто об-
наруживают крупозные дифтерические пленки, некротические фокусы, язвы и эрозии. Резко
выражен отек легких. Слизистая ЖКТ диффузно воспалена, отечна, с кровоизлияниями и
покрыта дифтерическими пленками. Брыжеечные лимфоузлы увеличены, отечны. У поро-
сят-отъемышей и сосунов в печени, селезенке, почках обнаруживают множественные мел-
. кие некротические очажки. Головной мозг и его оболочки застойно гиперемированы, отеч-
ны, иногда покрыты кровоизлияниями. В мозговых желудочках содержится большое коли-
чество желтоватой жидкости (2). У молодых поросят встречается некротический энтерит.
, Основные видимые изменения обнаруживаются в грудной полости. Сердечная мышца дряб-
; лая, с сильными дистрофическими изменениями под эпи-, эндокардом и в миокарде. Легкие
: застойно гиперемированы и отечны с обильным выделением транссудата. В печени крово-
; излияния, лимфоузлы грудной и брюшной полостей вишневого цвета,' сочные на разрезе.
: Сосуды головного мозга кровенаполнены (11,13,15, 69а).
Гистологические изменения. При гистологическом исследовании в миндалинах, глот-
I ке, печени, селезенке обнаруживают очаговый некроз клеток с выраженным кариорексисом,
| при этом реакция со стороны окружающей ткани отсутствует (90, 91). В легких альвеолы
расширены, просветы их заполнены серозной, иногда с примесью фибрина, лейкоцитов и
эритроцитов и десквамированного эпителия жидкостью. В головном и спинном мозге раз-
вивается картина негнойного менингоэнцефалита. Он характеризуется образованием диф-
фузной и очаговой пролиферации клеток глии, периваскулярной инфильтрацией, клетками
ретикулоэндотелиального типа, вакуолизацией и пикнозом ганглиозных нервных клеток,
иейронофагией, многорядовой пролиферацией клеток мозговых оболочек и боковых желу-
дочков. Воспалительные процессы в головном и спинном мозге наиболее резко проявляются
у поросят-сосунов и отъемышей (2).
Патогенез. При попадании на слизистую глотки, гортани, трахеи, легких или через по-
врежденную кожу вирус проникает в периферическую нервную систему и достигает голов-
ного мозга, легких, где размножается. Через 24 ч после заражения вирус обнаруживается в
легких; здесь он поражает клетки эпителия, фибробласты, лимфоциты, макрофаги. Позднее
в ядрах и цитоплазме этих клеток выявляют капсиды вируса, а в межклеточном пространст-
605
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ве - вирусные частицы. Через 48 ч вирус находят в головном, а затем в спинном мозге, селе-
зенке, печени, в лимфоузлах, мышцах и коже. Во вторичной фазе болезни вирус распро-
страняется лейкоцитами через кровеносную и лимфатическую системы по всему организму.
Генерализация длится примерно 7 дн. У некоторых свиноматок ВБ А по кровяному руслу
проникает в матку и плод. Проявление БА у свиней сильно различается в зависимости от
возраста и вирулентности вируса. В течение последних 30 лет в Европе отмечают выражен-
ный пневмотропизм болезни (20, 21, 22).
Вирусемия способствует развитию лихорадки, сосудистых нарушений. У больных жи-
вотных в месте внедрения вируса нарушается содержание ацетилхолина, гистамина и дру-
гих веществ, что способствует развитию зуда, расчесов и различных повреждений кожи. В
ЦНС и внутренних органах вирус вызывает тяжелые патологические изменения, приводя-
щие к гибели животного (43, 45). Для изучения передачи вируса по нейронам мышам линии
BALB/c вводили ВБА в камеру глаза. Клетки радужной оболочки, хороидной мембраны,
внутреннего слоя сетчатки, верхних шейных ганглиев содержали антиген ВБА. Все они уча-
ствуют в распространении ВБА (104а).
В результате делеционных мутаций вирус мог полностью утратить вирулентность для
свиней и овец, но оставаться высоковирулентным для кроликов и пушных зверей. Следова-
тельно, вирус утратил способность поражать клетки-мишени в организме овец и свиней, но
сохранил способность размножаться и создавать иммунитет. В этом случае в процессе атте-
нуации вируса имеет место изменение клеточного тропизма, но не просто изменение его во-
обще, а для животных конкретных видов (69а).
Патогенез варьирует в зависимости от вирусного штамма, возраста свиней, величины
инокулята, пути заражения. Наблюдается повышение устойчивости в развитии клинической
картины с возрастом: штаммы с низкой патогенностью не могут вызывать клинические при-
знаки у взрослых животных, причем репродукция вируса ограничивается местом его вне-
дрения (89). Экспериментальная инфекция при интразальном заражении требует около 10
ТЦИД50 на поросенка до 2-нед возраста, 1000 ТЦИД50 -до 6-нед возраста, 10 000 ТЦИД50 -
для свиней 2-мес возраста и старше (75). Наблюдаемое в ряде случаев снижение качества
спермы является, по-видимому, результатом лихорадки н системного заболевания Ауески.
Эмбрионы устойчивы к инфицированию до тех пор, пока плацентарная зона интактна
Трансплантация эмбрионов может использоваться для спасения генетического материала из
инфицированного стада (34,35,36).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Впервые установил и описал болезнь в Европе
венгерский ученый А. Ауески в 1902 г. Вирионы содержат 2-спиральную линейную ДНК с
мол.м. 90-106 МД (Рис. 90). Установлено, что генетическая карта этого вируса циркулярна
(65). Показано влияние пассирования этого вируса. Идентифицировано 2 клона, различаю-
щихся по картам рестрикции по сравнению с исходным штаммом ВБА (98). При анализе
шт. ВБА методами рестрикционного картирования их принято разделять на 4 типа и соот-
ветствующие подтипы, что основано на структуре генома. Шт. коллекции ВНИИЗЖ [Арский
(полевой изолят, Татария 1967), “Верблюжий” (полевой изолят, Туркменистан, 1989 г.) Ма-
раштанский (полевой изолят), УНИИЭВ (шт., используемый для изготовления инактивиро-
ванной вакцины), МК-25 (Болгария,1983 г), Бран и Женевский] по первым 4-м рестрикци-
онным фрагментам генома не отличаются друг от друга и, вероятно, их можно отнести к 3-й
группе по принятой европейской классификации генома вируса. По остальным фрагментам
шт. разделились на 3 подгруппы : 1 - Арский, Мараштанский и УНИИЭВ; 2 - Бран и Же-
невский (отличаются от первой подгруппы уменьшением 5-го и исчезновением 10-го фраг-,
ментов генома); 3 - МК-25 (отличается от 1-й подгруппы отсутствием 10-го фрагмента) (1).
ВБА состоит из одетого нуклеокапсида, который окружает линейный геном из ДНК
мол.м. 145 кД. Геном вируса составляет 30-кратный размер самого маленького известного
ДНК-содержащего патогена свиней (например, парвовируса свиней) и является настолько
606
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
большим, чтобы быть достаточным для кодирования около 100 протеинов. Размер вириона
150-180 нм в диаметре, нуклеокапсида 105-ПО нм. Нуклеокапсид состоит по крайней мере
из 8 белков от 22,5 до 142 кД. Белки с мол.м. 142, 34 и 32 кД являются преобладающими
(103а). Вирусная оболочка имеет из 9 структурных белков с мол.м. от 50 до 130 кД (54,
107). Восемь из них имеют сахар, прикрепленный к ним, и относятся к гликопротеинам. Эти
гликопротеины включают gl, gll, которые являются комплексом протеинов - Па, ПЬ, Пс;
gill, gl V, gp50 и gp63. Оставшийся протеин негликозилирован и имеет мол.м. 115 кД. Дру-
гие важные белки, которые кодируются вирусным геномом, включают gX и тимидинкиназу
(ТК). Гены, которые кодируют главные из вышеперечисленных белков, не являются необ-
ходимыми для вирусной репликации. Например, вакцинный шт. ВБА, созданный генно-
инженерным путем дефицитен по одному или нескольким белкам gl, gill, gX и ТК.
Роль, которую играют индивидуальные вирусные белки в вирулентности и индукции
иммунного ответа, частично охарактеризована. Вирулентность ВБА контролируется гена-
ми, кодирующими гликопротеинами gl, gill, gp63 и ТК (107), gll, gill и gp50 являются са-
мыми главными в отношении индукции иммунитета. Это заключение основывается на на-
блюдении, что монАТ, которые представляют множественные эпитопы gll, нейтрализуют
ВБА in vitro, а также активируют антителозависимую клеточно-медиаторную цитотоксич-
ность. Специфичные gll монАТ также сравнивали с протективным иммунитетом у мышей,
которых экспериментально заражали ВБА. МонАТ к gill также нейтрализуют ВБА in vitro и
обеспечивают иммунитет у мышей и свиней. Протективный иммунитет обеспечивается у
мышей и свиней, которым вводили gpSO-специфичные монАТ (79) или иммунизировали ре-
комбинантно полученными gp50 и gp63 (48, 49, 71, 78).
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, быстро инактивируется жел-
чью, устойчив к широким колебаниям pH (5-9), 1-2%-ный раствор формальдегида инакти-
вирует вирус в течение 15-20 мин. Он устойчив к прогреванию, сохраняет активность при
60°С 40-50 мин, инактивируется через 3 мин при 80°С. Однако замораживание при -20°С
способствует его инактивации. Прямые солнечные лучи обезвреживают его в течение 6 ч,
рассеянные солнечные лучи - за 12-48 ч, ультрафиолетовые - за 1 мин. Холод консервирует
вирус, при 1-4°С он активен от 130 дн до 4 лет. В 40%-ном растворе глицерина и глицерин-
фосфатном буфере с нейтральным pH сохраняется в течение 2-3 лет, в насыщенном раство-
ре NaCl - не менее 3 мес. В тканях высохших трупов грызунов вирус сохраняется до 6 мес, в
гниющих трупах - до 1 мес. В моче летом вирус сохраняет активность 3 нед и 8-15 нед в
зимнее время, в навозной жиже - летом в течение 1 мес, зимой - около 3 мес. При биотер-
мическом обеззараживании навоза инактивируется в течение 8-15 дн. Горячий 3%-ный рас-
твор NaOH, 20%-ная взвесь свежегашеной извести, 1%-ный раствор формальдегида убива-
ют вирус за 5-20 мин, однако растворы креолина и карболовой кислоты слабоэффективны.
Антигенная структура. В оболочке ВБА различают 3 основных гликопротеина: Д1,
Д2, ДЗ, кодируемых U-сегментом вирусного генома. При инъекции свиньям АТ формиру-
ются ко всем гликопротеинам. Гликопротеин Д1 состоит из 2 субъединиц с мол.м. около 80
кД - концевой фрагмент Д1 содержит высокоантигенный домен, способный вызывать обра-
зование ВНА и защитный эффект. Гликопротеины Д2 и ДЗ имеют соответственно мол.м.
НО и 60 кД (22). Эпитопное картирование вирусных АГ и изучение роли отдельных эпито-
пов в индукции иммунного ответа имеет важное значение при разработке маркированной
вакцины и дискриминирующей диагностической тест-системы. Гликопротеин gl ВБА слу-
жит маркерным белком в вакцинах и соответствующих тест-системах. При использовании
13 монАТ к gl ВБА все они реагировали с gl-позитивными штаммами (К, Арский, ВГНКИ,
БУК, Ка) в ИФА и в методе иммунопероксидазного окрашивания бляшек, но не реагирова-
ли с gl-негативными штаммами (Bartha, N1A-4). Установлено по крайней мере 8 эпитопов
gl и выявлено их взаимное расположение. В дальнейшем возможно выявление иммунодо-
минантных консервативных эпитопов для создания новых отечественных маркированных
вакцин и дискриминирующих тест-систем (20а).
607
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
АГ активность. Вирус продуцирует образование ВНА, КСА и ПА, которые можно об-
наружить с помощью PH, РСК и РДП. Специфические КСА появляются в сыворотке крови
через 3 дн после заражения, и титр их не снижается в течение 30-40 дн. ВНА появляются на
5-7 дн, достигают максимума через 3-4 нед и титр их сохраняется от 1 г. до 1,5 лет.
Вирусные гликопротеины Д1, ДЗ и gp50 индуцируют развитие ВН активности сыворо-
точных АТ. Вакцинированные свиньи и животные-рековалесценты, с титром ВНА 1-80 и
выше, противостоят экспериментальному заражению. Динамика АТ в период с 5-го по 27
день после заражения 6-нед поросят характеризовалась следующими показателями. На 5-7-
е сут после заражения появлялись преимуществнно АТ класса М, которые обнаруживали
только в РИГА. ВНА начинали появляться только с 12-го дня. Таким образом, РИГА -более
чувствительный метод диагностики инфекции, особенно на ранних сроках при наличии АТ
класса М (56). ТК вируса и его гликопротеины важны для персистенции вируса в макрофа-
гах и клетках нервной системы.
АГ вариабельность и родство. АГ вариантов у ВБА не установлено. Методом перекре-
стной ИФ установлено АГ родство ВБА и простого герпеса. Последовательности нуклеоти-
дов ВБА гомологичны геному гликопротеинов дВ, дС, дД и дЕ вируса простого герпеса
Изоляты вируса, выделенные в различных географических зонах США, существенно отли-
чаются по АГ свойствам гликопротеинов, особенно Д1 и ДЗ. Наибольшее значение для раз-
работки эффективных субъединичных вакцин имеет гликопротеин ДЗ. При отсутствии АГ
вариантов ВБА различия между некоторыми штаммами все же были показаны с использо-
ванием монАТ. Штаммы ВБА могут быть дифференцированы с высокой степенью досто-
верности по биологическим и физическим маркерам. Вакцинные, как и полевые штаммы,
могут быть дифференцированы с использованием маркеров температуро- и трипсининакти-
вации в комбинации с маркерами вирулентности для мышей и кроликов. Геномные разли-
чия, показанные рестрикционным эндонуклеазным анализом также могут использоваться
для подтверждения различия штаммов ВБА. Большинство генетических характеристик
штаммов стабилизируются после нескольких пассажей на поросятах, что играет определен-
ную роль в эпизоотологических исследованиях (10-16,80,84).
Предложен метод дифференциации разных штаммов ВБА, основанный на разделении
рестрикгазных фрагментов ДНК. Полученные фрагменты разделяют электрофорезом или
гели окрашивают серебром. Данный метод позволяет достаточно четко идентифицировать
штаммы ВБА по подвижности полученных фрагментов (47, 62, 95). Известны аттенуиро-
ванные шт. Bartha БА, БУК-ТК/650А, МК-25, В-КА68 и вирулентный шт. NIA. С помощью
рестрикционного анализа показано, что каждый из этих шт. имеет свой характерный фраг-
ментарный профиль и по этому признаку каждый из них может быть легко дифференциро-
ван от других вакцинных и вирулентных штаммов. Учитываются признаки: вирулентость
штаммов для мышей (М), способность индуцировать образование ТК в инфицированных
клетках, фрагментарный профиль вирусной ДНК (93, 96). Между тем имеется сообщение об
отсутсвии корреляции между вирулентностью шт. и их изоэлектрическими точками (112).
Локализация и выделение вируса. Вирус пантропен и может быть обнаружен у есте-
ственно восприимчивых животных в верхних дыхательных путях, легких и через 48 ч в го-
ловном мозге, селезенке, печени, почках, слюнных железах, миндалинах, коже, лимфоуз-
лах. У свиней его можно обнаружить на 1-6-й день болезни в носовой слизи. На 8-й день
вирус исчезает из ЦНС, в это время в крови появляются ВНА. Первично вирус попадает в
носоглотку, откуда его можно выделять в течение 2-х нед, а затем распространяется прямым
нейролимфогенным путем по обонятельному, тройничному и языкоглоточному нервам, дос-
тигая ЦНС. При проникновении через кожу вирус быстро размножается в месте внедрения в
жировой, соединительной, мышечной тканях и затем лимфогенным и гематогенным путями
распространяется по всему организму, обнаруживаясь во всех внутренних органах. Из орга-
низма вирус экскретируется с носовыми истечениями и слюной, но может присутствовать и
в эякуляте. В крови его обычно можно обнаружить лишь в начале болезни, вирусемия крат-
608
Глава XVI. Family Herpesvinda Герпесвирусные инфекции
ковременна. В миндалинах естественно переболевших и экспериментально зараженных
подсвинков вирус находится 120 дн, выделение его продолжается не меиее 60 дн (до 18
мес)после инфицирования (24, 25). Вакцинация не прекращает репродукцию вирулентного
вируса, который обнаружен в миндалинах всех животных, убитых на 3-6-й день, и в мозге
большинства свиней. При подкожной вакцинации свиней шт. БУК он регулярно в течение 2-
8 дн выявляется в подкожной клетчатке на месте введения, в региональных лимфоузлах и в
18% случаев в ЦНС. Также распределяется вирус вакцинного шт. ТК-200.
Кроме указанных органов его часто обнаруживают в надпочечниках. Доказана возмож-
ность проникновения в плоды вирулентного и вакцинного штаммов вируса через плаценту.
У павших поросят наивысшая концентрация вируса обнаружена в миндалинах, лимфоузлах
области головы и легких. Описано невральное распространение вируса у телят, после смер-
ти которых его обнаруживали в ЦНС. У кроликов и свиней он распространяется по крове-
носным сосудам (24, 25). Инфицированные свиньи выделяют ВБА на 24 ч раньше проявле-
ния клинических признаков. Свиньи с титром ВНА 3,0-4,5 logz, вакцинированные инграна-
зально, также выделяют во внешнюю среду возбудитель, но в значительно меньших количе-
ствах. От инфицированных свиней с титром поствакцинальных ВНА 6,8-8,5 logz ВБА выде-
лить не удалось (16, 18). Вирус выделялся от клинически больных или инаппарантно боль-
ных в период 2-5 дн после инкубационного периода. ВБА может выделяться из носового
экссудата в титрах 1О7-1О8ТЦД5о в течение 1-2 нед и в меньшем количестве из глоточных
соскобов, вагинального секрета, препуция, молока и, иногда, мочи (68,69,107,108).
Персистенция вируса. Доказана реактивация in vivo и in vitro латентного вируса у по-
росят от вакцинированных свиноматок. В первичной культуре клеток почки свиньи, зара-
женной шт. БУК и АБ, удавалось получить латентную инфекцию, шт. АБ персистировал в
инфицированной культуре клеток в течение 193 дн. Переболевшие бессимптомно серые
крысы и мыши остаются вирусоносителями 130-140 дн. Длительность вирусоносительства у
свиней колеблется в зависимости от возраста переболевших животных: у свиноматок и хря-
ков - свыше 180 дн, у подсвинков моложе 6 мес - более 130 дн, и даже считают, что у вы-
здоровевших свиней БА переходит в латентную форму, при которой вирус может пожиз-
ненно персистировать в ЦНС, миндалинах и лимфоузлах, и животные также могут быть ис-
точником инфекции. Поэтому трудности искоренения болезни связаны с тем, что выздоро-
вевшие животные остаются носителями вируса и могут его выделять после стрессовых воз-
действий. Поскольку вирусоносительство при БА широко распространено, то для исключе-
ния его необходимо обязательно исследовать сыворотки крови в PH от всех вновь посту-
пающих в хозяйство животных (21,25).
Аттенуированные, имеющие генную делецию мутанты ВБА были исследованы на спо-
собность вызывать реактивированную латентную реакцию у свиней. Вирусы ( обозначенные
А, В и С) были выделены из трех коммерческих вакцин, разрешенных к использованию в
США. Вирусы А и С были сходны в том, что имели генно-инженерные делеции генов для
ТК и гликопротеина X (gx). Однако они были изготовлены из генетически различных роди-
тельских штаммов. Каждым вирусом инфицировали ора-назально по 4 свиньи, и 10 нед
спустя все они получили дексаметазон. Все вирусы реплицировались, что подтверждалось
изоляцией их из носовых мазков и наличием иммунного ответа. Реактивация вируса в даль-
нейшем была индуцирована дексаметазоном у 2-х из 4-х свиней, зараженных ВБА. Однако
реактивированный вирус был сходным, но не идентичным ВБА, использованному для уста-
новления латентной инфекции. Таким образом, результаты показали, что аттенуированный
ТК-негативный вирус может обусловливать реактивированную латентную инфекцию у сви-
ней (44, 60, 83, 99). В 1960 г. в Польше были отмечены многочисленные спорадические
случаи и вспышки БА среди КРС. Источником заражения служили больные или латентно
инфицированные свиньи. Однако как больные, так и здоровые животные оставались серо-
негативными (101).
39 Зак. № 171
609
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Рестрикционный эндонуклеазный анализ (Bam Н1) генома вируса, реактивированного и
выделенного от латентно инфицированных свиней, показал, что состояние вирусного генома
при становлении и поддержании латентной фазы не связано со структурным изменением
вирусной ДНК (50, 51). О широте распространения латентной инфекции БА можно судить
хотя бы по тому, что 50% поголовья свиней Северной Ирландии инфицированы вирусом,
хотя признаки болезни наблюдаются редко (59).
Молекулярные основы патогенности. Молекулярные основы патогенности оболочеч-
ных ДНК-содержащих вирусов изучены недостаточно. Установлено, что вакцинный шт.
Барта имеет делецию в Gc-участке генома (ед. карты 0,855-0,882), который кодирует глико-
протеины gpl и gp63 (85). Восстановление в геноме шт. Барта интактной области при по-
мощи Gc-участка нз дикого вируса псевдобешенства (новый шт. Барта 43/25а) приводит к
усилению способности вируса выходить из зараженных клеток почки кролика и формиро-
вать большие бляшки. Рекомбинацию аттенуированных штаммов ВБА отмечали в организ-
ме вакцинированных животных с возникновением новых вирулентных штаммов вируса,
представляющих практическую опасность (96, 67а).
Методом рестрикционного анализа ДНК полевых изолятов и вакцинных шт. ВБА уста-
новлена генетическая гетерогенность: изменения в подвижности фрагментов и получение
фрагментов разных размеров в результате утраты или приобретения сайтов расщепления
рестрикционной эндонуклеазой (50). Обнаружен новый вирулентный гликопротеин, детер-
минирующий фактор вирулентности ВБА (85). Помимо того, известно, что гликопротеин III
(ДЗ) ВБА связывается с 3-им компонентом копмлемента свиней. Специфичность вирусного
белка в отношении комплемента С3 свиней коррелирует с тропизмом ВБА по отношению к
хозяину. Полагают, что взаимодействие вируса с комплементом С3 свиней может быть фак-
тором вирулентности ВБА (60). В США заболевают БА не только молодняк но и взрослые
свиньи, что объясняют повышением вирулентности местных шт. вируса.
Экспериментальная инфекция. При интраназальном заражении гибель молодых су-
поросных свиноматок составляет около 40% . Кроме свиней, кроликов, норок, кошек бо-
лезнь можно легко воспроизвести на крысах при заражении их подкожно или интраназаль-
но. Лабораторные крысы более чувствительны, чем дикие. Заболевшие животные погибают;
у крыс-реконвалесцентов АТ не обнаруживают. Здоровые крысы, находившиеся в одной
клетке с больными крысами или свиньями, как правило, не заболевают, и АТ у них нет. Это
наблюдение дало основание отрицать возможную роль крыс в переносе и резервации ин-
фекции. Мыши в 1 мес возрасте чувствительны к ВБА прн внутримозговом и подкожном
заражениях. Кортизон повышает их чувствительность. Цыплята 1 сут возраста восприимчи-
вы к вирусу при различных способах заражения. Однако с возрастом смертность заражен-
ных снижается. У больных кроликов с яркой клинической картиной расчесов через 41-75 ч
после заражения (Рис. 91), установлено размножение вируса в ядрах ганглиозных, оболо-
чечных, реже шванновских и эндотелиальных клеток капилляров (24).
Заражение всех чувствительных животных смертельно, хотя имеется одно сообщение,
которое подтверждает выздоровление зараженной коровы. Некоторые дикие животные так-
же чувствительны к ВБА со смертельным исходом - это опоссумы, еноты, крысы, мыши;
практически все животные, окружающие свиноферму. Из приматов чувствительны обезья-
ны- резусы и мармозетки, устойчивы шимпанзе и Barbary. Сообщения о заражении людей
ограничены н недостаточно документированы - не основывались на выделении вируса. В
1987 г. сообщалось о трех больных в Дании и Франции, у которых развивалась низкого
уровня сероконверсия к ВБА после заболевания, которое возможно было передано от ко-
шек. Возможно, что в данном случае имела место перекрестная реакция с АТ, индуцирован-
ными другими герпесвирусами (69а).
Заражение вирулентным ВБА вакцинированных серонегативных свиноматок приводит к
снижению их репродуктивности, трансплацентарной передаче вируса плодам и персистен-
ции вируса у полученных от них поросят (22).
610
Г лава XVI. Family Herpesvirida Г ерпесвирусиые инфекции
Культивирование. ВБА пассируется на кроликах, белых мышах (предварительно обра-
ботанных гидрокортизоном), в первичных культурах клеток КЭ, почек КРС, обезьян, ягнят,
свиней, перевиваемых клетках HeLa, КЭМ-Ла, L, ПЭС, СОЦ, Нер, Ят-82, ППК-666, ППК-Д,
ФЛ, ПЭКр, ПСГК, ПСГК-60 и др., вызывая образование некротических фокусов - бляшек,
число которых пропорционально титру вируса (6а). Клетки КЭМ-Ла неодинаково чувстви-
тельны к различным шт. ВБА, а фибробласты КЭ более чуствительны, чем первичная куль-
тура клеток мышиного эмбриона. В культуре ФКЭ вирус образует бляшки с агаровым по-
крытием через 48 ч после заражения. Помимо культур клеток, вирус удается культивировать
в КЭ при инокуляции на ХАО после некоторого периода адаптации альтернативными пас-
сажами. На ХАО наблюдаются специфические фокусы поражения и генерализованная ин-
фекция. Эмбрионы гибнут через 24-96 ч (в зависимости от степени адаптации).
Все выделенные штаммы ВБА вызывают идентичные морфологические изменения кле-
ток, кроме клеток КЭ, где не всегда можно обнаружить синтиций и тельца-включения. Ви-
рус вызывает округление отдельных клеток и образование гигантских клеток (с 2-10 ядра-
ми). Способность образовывать симпласты - это генетический признак вируса, фенотипиче-
ски проявляется он только в определенных условиях. Установлена связь между ЦПД, мор-
фологией бляшек и вирулентностью штамма. Штаммы, высоковирулентиые для свиней и
КРС, обладают способностью вызывать образование синцития в культуре клеток. За слия-
ние вирусной и клеточной оболочек и проникновение вируса в клетку ответственен gll. При-
крепление вируса к клеткам in vitro опосредовано его главными гликопротеинами, которые
в этом отношении можно расположить в ряду gill >gI>gIV (22). При получении инактиви-
рованных вакцин вирус выращивают в 1слойных и суспензионных культурах различного
происхождения. Суспензионные культуры постоянных линий клеток оказались весьма про-
дуктивными для промышленного получения вирусного сырья. Вирус в этих системах накап-
ливался в титре 10 8-10 9ТЦ Д5о (22).
Синтез ДНК ВБА делится на 2 фазы: раннюю, которая инициируется через 2 ч 20 мин
после заражения и заканчивается к 3 ч, и позднюю, которая инициируется через 3 ч после
заражения. В течение ранней фазы ДНК вируса локализовано по периферии ядра около
ядерной мембраны, тогда как в позднюю - в центральной части ядра. В раннюю фазу не бо-
лее 12% ДНК связано с ядерным матриксом, тогда как в позднюю - 40%. С ядерным мат-
риксом связаны, в основном, 2 белка: основной ДНК-связывающий белок 136К и 23 К.
Ядерный матрикс содержит нормальное количество клеточных белков 63К - 45К (29). ЦПЭ
аттенуированных вариантов обусловлен длиной генома маркера вирулентности. У мутантов
он располагается как в короткой (US) так и в длинной (UL) уникальных областях генома.
Деления в короткой уникальной области, как правило, ведет к снижению вирулентности для
свиней и защищает их при последующем заражении патогенным штаммом вируса (96b).
ГА свойства. Показано, что гемагглютинин ВБА легко сорбируется на мышиных эрит-
роцитах при температуре 4, 22 и 37°С. Но не сорбируется на эритроцитах КРС. При этом
связавшийся с эритроцитами ГА не элюируется с них в присутствии нейраминидазы. Спе-
цифичные для ГА рецепторы мышиных эритроцитов инактивируются трипсином, а-
амилазой, пепсином, КЮ4и ЭДГА, но не папаином, р-глюкозидазой, фосфолипазой С, ней-
раминидазой, этиловым эфиром, хлороформом и др., что указывает на гликопротеидную
природу активного компонента ГА. ГА стабилен при 37°С, разрушается при 60°С. При зо-
нальном центрифугировании вирусных препаратов в градиенте плотности сахарозы пик ГА
активности совпадает с пиком инфекционности (67). ГА - активность ВБА КРС связана с
мажорным g97, расположенным в шипиках вириона. Главные нейтрализующие эпитопы
расположены на ГА домене, что свидетельствует о перспективности использования ГА - ан-
тигена ВБА КРС для изготовления субъединичной вакцины. ВБА кошек агглютинирует
эритроциты мышей, хотя ГА домены этих вирусов неидентичны (22).
611
39*
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источник и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные. Дм
БА характерна и горизонтальная передача инфекции от бессимптомного носителя к здоро-
вому животному. Взрослые свиньи, переболевшие легко, являются опасными носителями
вируса не только для свиней, но и для животных других видов. Вирусный геном персистиру-
ет в латентном состоянии пожизненно и может реактивироваться при стрессах с последую-
щей экскрецией вируса. В США (штат Северная Каролина) из миндалин, носового секрета и
слюны выделены изоляты ВБА от серопозитивных свиноматок, вакцинированных живыми
или инактивированными вакцинами. Изоляты принадлежали к 4-м субтипам, что указывает
на множественность типов вируса. В итоге авторы пришли к выводу о том, что вакцинация
не предотвращает инфекции и установление латентного состояния (41).
В естественных условиях заражение животных происходит респираторным путем, а
также через корм, воду, загрязненные выделениями больных животных или вирусоносите-
лей. Распространение ВБА в стаде может происходить прямым путем при контакте нос-в-
нос, в процессе осеменения через инфицированные вагинальную слизь или сперму или при
трансплацентарной передаче. Более общим путем передачи возбудителя является вдыхание
аэрозольного ВБА или выпойка воды, содержащей ВБА. Инфицирующий уровень его может
сохраняться до 7 ч в воздухе с влажностью 55% и выше (104). Инфекционность ВБА также
сохраняется в необработанной хлорированием воде и закрытых водных лагунах в период до
7 ч и до 2-х дн соответственно (33). Инвентарь, контаминированый ВБА, является потенци-
альным источником ВБА для орального заражения чувствительных свиней, однако в усло-
виях ферм пути распространения вируса обычно трудно проследить. ВБА обычно имеет
низкую выживаемость в окружающей среде. Опасны необезвреженные боенские отходы.
Из организма вирус выделяется с секретами носовой и ротовой полостей, у подсосных
маток - с молоком. В таких случаях поросята-сосуны заражаются через инфицированное
молоко. Возможно внутриутробное заражение плода. При прямом контакте бального со
здоровым животным может произойти заражение через поврежденную кожу, слизистые
оболочки носовой полости, глаз, половых органов. Факторами распространения возбудителя
могут быть инфицированные корма, подстилка, помещения, территория лагерей, трупы, в
особенности грызунов. Мыши и крысы также играют определенную роль в заносе и распро-
странении инфекции, являясь одним из резервуаров вируса в природе. Возможна передача
инфекции по воздуху на большие расстояния (38). Так, описана вспышка БА в Южной Да-
нии зимой 1990-1991 гг. Заболевание распространялось в направлении ветра. Авторы счи-
тают, что БА распространяется воздушным путем, а не является результатом реактивации
вируса у латентно инфицированных свиней (88). Основной источник заноса инфекции в хо-
зяйство - свиньи-вирусоносители из неблагополучных хозяйств. КРС, овцы, козы заражают-
ся при контакте с больными свиньями. Инфицированные свиньи выделяют ВБА на 24 ч
раньше проявления клинических признаков болезни (19а).
Вирус стабилен при pH 6-8 при низкой неизменяющейся температуре. Он инактивирует-
ся через 1-7 дн при pH 4-3 или 9-7, при температуре между 37 и 4°С (42а). Инактивация его
почти мгновенна при высушивании вируса под прямыми солнечными лучами. В таблице
XVI. 1 представлено время, необходимое, чтобы инактивировать ВБА при 25°С, если вирус
суспендировали в свиной слюне, носовых смывах или глюкозо-солевом растворе и наноси-
ли на инвентарь (33).
Собаки, кошки, еноты, кроты, мыши чувствительны и могут играть роль в распростра-
нении БА в стадах. Заражение у этих животных происходит при прямом или непрямом кон-
такте с зараженными свиньями. Заболевание обычно скоротечно - гибель большинства за-
раженных животных наступает на 2-3-й дн болезни. Клинические признаки появляются че-
рез 2-3 дн после заражения. Передача животными этими видов ВБА свиньям обычно огра-
ничено единичной фермой.
612
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Нет достоверных данных, подтверждающих, что птицы играют роль в эпизоотологии
БА. Некоторые виды птиц заражаются ВБА парентерально. Попытки заражения оральным
Таблица XVI. 1. Сохранение ВБА на контаминированных материалах
Инсо- ляция при 25°С Срок сохранения инфекцион- ности вируса (дни) В р-ре В слюне В нос. Глюкозы смывах Инсоляция при 25°С Срок сохранения инфекцион- ности вируса (дни) В р-ре В слюне В нос. глюкозы смывах
Контроль 58 4 2 Сталь 18 4 2
Бетон <1 4 <1 Пластик 8 3 3
Резина 7 2 2 Ткань <1 <1 <1
Глин, почва 4 7 2 Зел. трава <1 2 <1
Ракушечник 36 4 2 Комбикорм 3 3 3
М/кост.мука 5 2 2 Люцерна <1 <1 <1
Солома (подстилка) 3 4 4 Опилки (подстилка) <1 2 <1
Кал свиней 2 2 2 Скелетные мышцы св. при 4° С 19 нд НД
[путем оказались безуспешными. Было подтверждено, что птицы могут транспортировать
(вирус на перьях или с кормом, однако ВБА быстро теряет свою инфекционность при внесе-
нии его на корм для птиц (103). Роль насекомых в передаче ВБА не определена. Домашние
(мухи, получавшие ВБА с сахарным раствором в течение 5 дней, не обнаруживали заражен-
ности. Однако “период полужизни” вируса в кишечнике варьирует от 13 ч при 10° С до 3 ч
при 30°С. Попытки экспериментальной передачи ВБА мухами через роговую оболочку гла-
за, слизистые оболочки, или поврежденную кожу чувствительных свиней дали различные
(результаты (113). Очевидно, что распространение ВБА по воздуху составляет более 2 км.
(Наибольшее количество вируса у зараженных норок накапливается в печени, почках, лим-
фоузлах и головном мозге (1g ТЦД50 2,2; 1,83; 1,8; 1,9 соответственно). Для диагностики
(целесообразно отбирать головной мозг, печень и лимфоузлы грудной полости (4,8а).
[ Спектр патогенности в естественных условиях. Он широкий: восприимчивы все
сельскохозяйственные животные, пушные звери, дикие плотоядные и грызуны. Рогатый скот
(и пушные звери болеют реже, чем свиньи, собаки, кошки, лошади - еще реже. Из млекопи-
(тающих устойчивы приматы. Молодые животные восприимчивее взрослых. Птицы не
чувствительны. Во Франции считают плотоядных и, в частности котят, настоящими
Рисовыми” БА, так как по количеству случаев заболевания среди кошек можно судить об
Истинном распространения вируса в природе. Предложен метод получения трансгенных жи-
вотных, устойчивых к ВБА (104а). Имеются данные о распространении инфекции среди
(енотов. Все вспышки болезни у енотов ассоциировали с аналогичными заболеваниями среди
(свиней. Показано, что еноты - естественный резервуар ВБА в природе.
j Описан случай заражения ВБА маленьких цыплят в хозяйстве, где применялась живая
(вакцина из вируса, аттенуированного на КЭ (42). Изоляты ВБА характеризуются гетероло-
гичностью популяции. Так, получены два варианта полевого изолята вируса: клоны ZS-1,
ZS-2. Первый из них вызывал острую, тяжело протекающую болезнь длительностью от 9 до
14 дн; другой - только слабую или бессимптомную инфекцию. Титры ВНА у животных, за-
раженных клоном ZS-1, были выше 1; 100, а титры к клону ZS-2 не превышали 1:16 (10,11).
613
Глава XVI. Family Herpesvinda Герпесвирусные инфекции
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патоло-
гоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Основными мето-
дами лабораторной диагностики являются: выделение вируса, прямая и непрямая ИФ, РДП,
радиоиммунологический метод, кожная проба, PH, РСК, ELISA и биопроба. Для БА нужна
крупномасштабная диагностика в виде серологического обследования свинопоголовья хо-1
зяйств - поставщиков (племенных и репродуктивных ферм) на уровне области или респуб-
лики по аналогии с исследованиями на бруцеллез и туберкулез. Указанные категории хо-’
зяйств должны иметь характеристику эпизоотологического статуса по данной инфекции.
Современные методы позволяют это осуществлять исследуя пробы почек, селезенки, пече-
ни и лимфоузлов на наличие антигена ВБА с помощью РИД, РСК, ИФ, ИФА (11,13,15). i
Вирус БА выделяется в культуре клеток ВНК-21 и ПСГК-30 и идентифицируется в РСК,-
ИФ и РРИД. Предложен метод получения высокоактивной специфической сыворотки для;
диагностики БА (17,19). Создан полноразмерный ДНК-зонд ВБА, характеризующийся вы-)
сокой чувствительностью. Зонд использовали как при проведении реакции молекулярной)
гибридизации, так и для повышения чувствительности рестрикционного анализа (74). Раз-)
работай диагностический тест, позволяющий дифференцировать инфицированных и вакци-!
нированных gl-вакциной животных. Эта тест-система в совокупности с высокоэффективной?
маркированной gl-вакциной может быть использована для разработки программы искоре-
нения БА в хозяйствах и регионах (20). МонАТ можно использовать для обнаружения ВБА
в различных материалах.
Работы последних лет (20, 21, 70, 74, 76, 105а, 114) свидетельствуют о возможности
разработки и внедрения высокоэффективных экспресс-методов диагностики БА, оценки»
эпизоотической ситуации в хозяйстве, регионе, прогнозирования эпизоотического и эколо-
гического состояния. В стаде, в котором взрослые свиньи заражались, ВБА мог длительно
циркулировать на свиньях старше 3-4-х мес. Он может быть выделен даже при использова-
нии системы (технологии свиноводства) пусто-полно (100).
Экспресс-диагностика. Методика получения высокоочищенной ДНК ВБА для диагно-
стики с использованием методов рестрикционного картирования, ПЦР и секвенирования
разработана во ВНИИЗЖ (1а1). Можно проводить детекцию ВБА при помощи ПЦР и твер-
дофазной гибридизации в плашках для микротитрования по методу детекции простого гер-
песа ВПГ-1 и ВПГ-2, поскольку разработан вариант ПЦР, позволяющий проводить одно-
временную детекцию и генотипирование ВПГ из клинических образцов при использовании
меченных флюоресцирующих праймеров, способных амплифицировать полимеразные гены
ВПГ-1 и ВПГ-2. При сопоставлении разработанного метода со стандартным культуральным
методом индикации вируса показана его 100%-ная чувствительность и 94,2%-ная специ-
фичность (41а).
Выделение вируса
Взятие и подготовка материала. Для выделения ВБА используют головной мозг, ку-
сочки легких, селезенки, печени, лимфоузлов, миндалин, полученные при вскрытии трупов.
Миндалины - наилучший материал для выделения вируса (41). При жизни от больных сви-
ней вирус можно выделить из носовых секретов, в которых он появляется на 4-6-й день по-
сле болезни и сохраняется в течение 5 -11 ди после выздоровления. Показана возможность
выделения ВБА из ганглиев тройничного нерва латентно инфицированных свиней (52). От
абортировавших животных используют плоды и плаценту.
При сборе материалов для вирусологического исследования следует помнить о неравно-»
мерном распределении вируса в разных участках мозга, поэтому, чтобы избежать ошибок •
при постановке диагноза, следует брать минимум 2-3 пробы из разных участков мозга, рас-
положенных на некотором расстоянии друг от друга. Обычно при вскрытии отбирают ку-)
сочки мозжечка, продолговатого мозга, больших полушарий головного мозга. В лаборато-
рии материалы обрабатывают обычными методами. Для большей вероятности выделения
614
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
вируса и уменьшения количества исследуемых образцов кусочки из различных отделов моз-
га от одного животного объединяют в общую пробу, которую затем измельчают и обраба-
тывают антибиотиками.
Выделение вируса на лабораторных животных. В качестве лабораторной модели для
выделения ВБА обычно используют кроликов массой 2-2,5 кг, которым внутримышечно или
подкожно вводят по 1 мл 10%-ной суспензии исследуемого материала. Инкубационный пе-
риод в этом случае продолжается 36-48 ч, иногда он может длиться 4-6 дн, а в некоторых
случаях - даже до 12 дн. Различают энцефалитическую, менингиальную, паралитическую,
зудневую и стертую формы болезни. Течение экспериментальной инфекции во многом зави-
сит от способа заражения. Биопробу считают положительной, если кролики погибают с кли-
ническими признаками БА ( нервная форма, зуд, расчесы) через 2-10 дн после инокуляции
суспензии из патологического материала. Если кролики погибают без признаков БА, био-
пробу повторяют, используя патологический материал первого пассажа. Считают, что ино-
куляция материала в переднюю камеру глаза кролика приводит к характерной зудневой
форме болезни. Материалом для выделения вируса от погибших кроликов служат ткани го-
ловного и спинного мозга, а также паренхиматозные органы ( легкие, печень). Гибель кро-
ликов после введения материала от свиней или пушных зверей без признаков зуда и расче-
сов может свидетельствовать о выделении вакцинных штаммов ВБА.
Выделение вируса в культурах клеток. Показано, что культуры клеток так же чувст-
вительны к ВБА, как и кролики, к тому же они могут быть использованы для лабораторной
диагностики атипичного течения болезни, при котором опыты по выявлению вируса в мозге
свиней путем заражения кроликов дают отрицательные или нетипичные результаты (25).
Обычно используют первичнотрипсинизированные культуры клеток почек и щитовидной
железы свиней, семенников телят, фибробластов КЭ, перевиваемые клетки РК-15, ВНК-21.
К вирусу высокочувствительны субкультуры первого пассажа клеток почки поросенка и
КРС. При первичном выделении вируса признаки ЦПД появляются на 4-5-й день после
инокуляции культуры. В последующих пассажах сроки появления ЦПД сокращаются до 15-
20 ч, причем оно становится более выраженным. Характер ЦПИ в различных культурах
может быть неодинаковым, что обусловлено различным действием вируса на клетки эпите-
лиального и фибробластического типов. В культуре клеток почки поросенка, эмбриона сви-
ньи или крольченка ЦПД вируса выражается в образовании синцития. Сначала в культуре
появляются очаги круглых клеток, границы между которыми исчезают, а ядра перемещают-
ся к центру и образуют конгломераты, окруженные общей оболочкой. Через несколько часов
группы этих клеток принимают шарообразную форму, в цитоплазме их появляется зерни-
стость. Затем происходит обильное отслаивание клеток с поверхности стекла (25). В культу-
ре фибробластов КЭ цитопатогенное действие вируса проявляется в округлении клеток, по-
явлении зернистости и вакуолизации цитоплазмы с последующим отслоением клеток от по-
верхности стекла Титры вируса в период максимального развития ЦПД достигают 10е’5 -
1О7,5 ТЦДзо/мл. Диагноз на БА ставят в том случае, если видовая принадлежность вируса,
выделенного в культуре клеток, подтверждена в PH. Вирулентные штаммы вируса образуют
типичные симпласты. Штаммы, многократно пассированные в фибробластах КЭ, вызывают
менее выраженное симпластообразование и пролиферацию клеток. Штаммы, пассирован-
ные в фибробластах КЭ, в 10-50 раз снижает свою вирулентность (24,25).
Метод электронной микроскопии. Позволяет обнаружить ВБА через сутки после экс-
периментального заражения в мазках-отпечатках, которые готовят непосредственно на ЭМ
сеточках со слизистой оболочки глаза, носа, ротовой полости и из мочи.
Серологическая идентификация
Для идентификации ВБА используют в, основном, PH в культуре клеток или на кроли-
ках, ИФ, РДП, РИГА и др. Кроме того, для этой цели можно использовать РСК, однако из-
за нестандартности АГ и непостоянства результатов самой реакции она не нашла широкого
применения.
615
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
PH. Удобный и надежный метод индентификации выделенного вируса. Используют
культуру клеток того же вида, на которой был изолирован вирус. Реакцию ставят по обще-
принятой методике, чаще используют вариант: различные разведения вируса (10'1 - 10’7) и
постоянную дозу сыворотки. Результаты PH учитывают по ЦПД через 2-5 сут. Вирус счита-
ют идентифицированным, если индекс нейтрализации составляет 2 и выше (25).
ИФ. Используют для быстрой индикации и идентификации АГ ВБА в клеточных куль-
турах, инфицированных материалом, содержащим вирус, а также в замороженных срезах
ткани мозга кроликов, зараженных суспензией патологического материала, или поросят, за-
болевших в естественных условиях. Препараты готовят и окрашивают по общепринятой ме-
тодике. В положительных случаях в срезах мозга обнаруживают специфическую флюорес-
ценцию. В головном мозге поражаются, главным образом, нейроны коры. При малом уве-
личении можно видеть широкие полоски флюоресцирующих нейронов, в которых заметны
только отдельные флюоресцирующие клетки. В срезах мозжечка пораженные клетки рас-
пределены более беспорядочно. Часто они видны как флюоресцирующие фокусы в зерни-
стом слое. Иногда в них оказываются вовлеченными единичные клетки Пуркинье, но особо-
го аффинитета вируса к этим клеткам обычно не наблюдают.
Распределение флюоресценции внутри клеток может варьировать в широких пределах.
Иногда вирусный АГ обнаруживают как в цитоплазме, так и в ядре, но обычно свечение
ядра выражено сильнее. Часто флюоресцирующие массы имеют вид светящейся пыли или
мелких гранул. В отдельных случаях удается обнаружить внутриядерные включения типа А
Коудри, однако более неправильной формы, чем в препаратах, фиксированных и окрашен-
ных обычными методами. Иногда светится только цитоплазма, причем степень свечения и
характер распределения также варьируют. Часто обнаруживают скопление светящихся гра-
нул вокруг ядер. В некоторых районах можно заметить мелкие светящиеся частицы вдоль
аксонов. Для выделения вируса инфекционный материал, полученный из мозговой ткани,
миндалин и селезенки животных, наносят непосредственно на монослой чувствительных к
вирусу клеток и центрифугируют 40-60 мин при 1500g. Затем инокулят заменяют питатель-
ной средой, а инфицированные клетки инкубируют в термостате в течение 12-14 ч. После
фиксации препараты обрабатывают конъюгатом монАТ с ФИТЦ и исследуют в люминес-
центном микроскопе. Результаты ИФ хорошо согласуются с данными биопробы на кроликах
и результатами выделения вируса в культуре клеток.
Предложен метод диагностики БА посредством обнаружения вируса в срезах головного
и спинного мозга, миндалин, легких, селезенки и бронхиальных лимфоузлов. Точный диаг-
ноз удается поставить в 75-81% случаев. Специфическую ИФ в мазках-отпечатках слизи-
стой глотки поросят наблюдают с 1-го по 12-й дн после экспериментального заражения ви-
рулентным шт., а в препаратах из мозга на 4-й дн. При отсутствии клинических признаков
АГ обнаруживают в мазках из глотки и мозга соответственно на 2-10-й и 2-6-й день.
Вирусный АГ в ИФ выявляют в первичных культурах клеток и КЭ через 18-24 ч после
заражения. При исследовании в ИФ отпечатков головного, спинного мозга, легких и селе-
зенки больных животных АГ обнаруживают с 3-4-го дн после заражения. С помощью ИФ
специфический АГ в культуре клеток тестикул бычка выявляется в оптимальные сроки по-
сле заражения (24-40 ч) в титре 5 - 10 1g ТЦДзо/о^мд.
РИГА. Антиген ВБА с помощью иммуноглобулинового варианта РИГА и РТНГА мож-
но выявлять за 1-3 дн до появления клинических признаков болезни, в период болезни и по-
сле переболевания. При приготовлении эритроцитарного иммуноглобулинового диагности-
кума используют гипериммунную сыворотку свиней и крыс с титром ВНА 11,5 и 11,0 log2,
соответственно. Данные реакции имеют преимущества перед PH (25).
РДП. Реакцию с успехом применяют для идентификации вируса, репродуцированного в
культуре клеток. Получены обнадеживающие результаты при исследовании полевого мате-
риала микрометодом РДП.
616
Глава XVI. Family Heipesvirida Герпесвирусные инфекции
РИЭФ. Эго ускоренный метод распознования АГ. Антиген ВБА в электрополе движется
к аноду, АТ - к катоду, и на месте их встречи образуется линия преципитации. Время появ-
ления полос зависит от напряжения тока. РИЭФ значительно чувствительнее и протекает в
10-15 раз быстрее, чем обычная РДП.
РСК. Данная реакция не нашла широкого применения, так как положительные резуль-
таты получаются при использовании специального метода изготовления АГ. Однако РСК
рекомендуется как диагностический метод при индикации ВБА в инфицированных культу-
рах клеток и патологическом материале в условиях биопредприятий, производящих вакцину
против этой болезни, и для практических ветеринарных лабораторий (11).
ИФА. Можно быстро идентифицировать вирус прямым ИФА. Антисыворотку к вирусу
для мечения ферментом получают на поросятах 6-мес возраста. ИФА по чувствительности
равен ИФ и превосходит метод выделения вируса в культуре клеток (25).
При окрашивании прямым иммунопероксидазным методом в мазках-отпечатках обна-
руживали клетки, содержащие АГ вируса в виде красно-коричневых гранул в цитоплазме и
ядре нейронов мозга и в эпителии слизистой оболочки фаренгиальной области.
Метод рестрикционного анализа и гибридизации. С помощью специфических гибри-
дизационных зондов разработана экспресс-диагностика БА у свиней. Предложен метод то-
чечной гибридизации (ДНК-зонда) для выявления вируса в материалах из органов свиней.
Чувствительность зондов р ТМ 11 для выявления ДНК ВБА составляла 20 пг вирусной
ДНК. Метод дот-блог гибридизации коррелирует с методами выделения вируса из тканей
животных, павших при остром течении болезни. Он позволит выявлять геном вируса при
латентной инфекции. Гибридизационные зонды, основанные на применении рекомбинант-
ной ДНК, позволяют обнаруживать вирусный геном в костном мозге (50%), макрофагах,
лимфоцитах и тимусе (20%) зараженных поросят. Предложен метод быстрой диагностики с
помощью усовершенствованной гибридизации с использованием биотинилированных ДНК-
зондов на фиксированных формалином парафинированных срезах тканей (27,28).
ВБА может сохраняться в организме переболевших свиней в латентной форме и спосо-
бен реактивироваться спонтанно или после экзогенной стимуляции. Разработан метод диаг-
ностики латентной инфекции. Для этого были сконструированы соответствующие экспрес-
сирующие векторы н получены специфические АГ, которые могут быть использованы в ка-
честве зондов для выявления латентного ВБА в клинических пробах. Выявлены участки
ДНК вируса, которые могут быть использованы в качестве проб нуклеиновой кислоты, диф-
ференцирующих монослойную и продуктивную инфекцию. Предложенный метод авторы
рекомендуют для диагностики. Приведена физическая карта ДНК ВБА, указана локализация
генов групп А и В при латентной инфекции и генов групп С и Д и самого раннего гена при
продуктивной инфекции (37).
Обнаружен и изучен домен латентности ВБА методом амплификации в ПЦР. Установ-
лена ответственность сегмента этого домена - гликопротеина gp50. Если в образцах тканей
из различных органов латентно зараженных свиней ВБА не обнаруживался, то с помощью
амплификации в ПЦР он был обнаружен в тканях ствола мозга, тригеминальных ганглий и
слезных железах почти у всех латентно инфицированных свиней (111).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. При диагностике ВБА к сероло-
гическим данным необходимо относиться осторожно, поскольку не исключено, что часть
положительных результатов может быть обусловлена другими ГВ КРС или другими штам-
мами ВБА с низкой вирулентностью (92). Диагноз на прошедшую инфекцию ставят обычно
при помощи PH в культуре клеток, определяя титры ВНА к ВБА в сыворотках крови рекон-
валесцентов. Для более точной диагностики лучше исследовать парные сыворотки, взятые с
интервалом в 3-4 нед. Титры АТ у переболевших животных могут колебаться в широких
пределах - от 1:32 до 1:256. У поросят и подсвинков, зараженных ВБА, специфические ВНА
появляются к 6-8-му дню после заражения, достигая максимума через 3-4 нед. Через 100 дн
после заражения титры ВНА начинают снижаться, а через 135 дн АТ уже обычно не иахо-
617
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
дят. У естественно больных и переболевших подсвинков ВНА удается установить примерно
в те же сроки, хотя в сыворотках переболевших свиней их иногда удается обнаружить в те-
чение 4,5 лет. АТ также находят и у свиней, перенесших бессимптомную инфекцию. Дина-
мика ВНА у животных других видов недостаточно изучена. Характерным является увеличе-
ние титра АТ у свиноматок непосредственно перед опоросом: новорожденные поросята по-
лучают АТ от матерей. Для обнаружения и титрования АТ, кроме PH, применяют РНГА,
РДП, РСК, ELISA и ряд других реакций.
PH. ставят с постоянной дозой вируса (1000 ТЦД50/01 и разными разведениями сы-
воротки (от 1:2 до 1:16) по общепринятой методике. Для выявления животных, инфициро-
ванных ВБА в естественных условиях, PH более надежна, чем вирусологическое исследова-
ние смывов полости рта и глотки. Наибольшей чувствительностью обладает метод поста-
новки PH в культуре клеток Vero со шт. Filaxia.
РИГА. Сообщалось об успешном применении РИГА для выявления специфических ан-
тител в молозиве, молоке и сыворотках крови животных. Пробы молока и молозива берут в
течение недели после опороса свиноматок н консервируют их 1% р-ром борной кислоты.
Сыворотку молока и молозива перед реакцией инактивируют при 56°С 30 мин. Для изго-
товления эритроцитарного диагностикума наиболее пригоден концентрированный культу-
ральный вирус с титром 8,5 ТЦД5о/мл- Некоторые авторы считают, что PH менее чувстви-
тельная, чем РИГА; с помощью PH АТ на ранней стадии болезни не выявлялись, их обна-
руживали лишь с 12-го дн, тогда как РИГА - на 5-й дн(24).
ВИЭФ. Рекомендуют для выявления АТ к данному вирусу. АГ для ВИЭФ готовят, вы-
ращивая вирус на первичной культуре клеток почек свиней. Результаты ВИЭФ полностью
коррелировали с данными PH. Для проведения ВИЭФ были пригодны как нативные, так и
инактивированные АГ ВБА в 1%-ной агарозе при напряжении 10 В/см в течение 60 мин. В
сыворотках всех больных животных с 7-10-го дня выявляли АТ.
РДП. Для ориентировочных диагностических исследований РДП оказалась вполне при-
годной в программе борьбы с БА. Для получения АГ после концентрации и очистки вируса
применяют химические детергенты (20%-ный дезоксихалат натрия, 20%-ный тритон X, 1%-
ный 0-меркаптоэтанол) и добиваются АГ фракции такой чувствительности, которая в РДП с
сывороткой титра 1:4 дает в 100 и 85-90% случаев четкую положительную реакцию (81, 82).
Разработан метод концентрирования вируса БА с помощью ПЭГ (1а).
ELISA. Он в 60-100 раз более чувствителен, чем PH. АТ в ELISA обнаруживают на 5-6-
й дн после заражения, в PH - на 9-10-й. Иммуноглобулины классов IgG и IgM определяют в
ELISA с 5-го дня после инокуляции вируса, причем максимум титров IgM приходился на 9-
10-е сут, a IgG - на 10-15 сут. ELISA вполне может быть использован вместо PH для диагно-
стики болезни при условии наличия соответствующего оборудования и высококачественных
диагностических наборов. С помощью данного теста можно проводить регулярные обследо-
вания больших групп животных. Для определения у свиней АТ к ВБА рекомендуется ис-
пользовать микрометод. АГ готовят из культуры клеток РК-15, зараженной полевым штам-
мом вируса. Через 48 ч инкубирования зараженные клетки культуры разрушают заморажи-
ванием, оттаиванием и дополнительно ультразвуком, а затем концентрируют в 30 раз ульт-
рацентрифугированием. АГ в трисбуфере pH 9,6 адсорбируют в течение ночи при 4°С в лу-
ночках микропанели. После этого луночки промывают, вносят пробы испытуемых сыворо-
ток в разведении 1:160 в твин-20-фосфатно-буферном р-ре и инкубируют 2 ч при комнатной
температуре. Фиксацию АТ на АГ определяют добавлением антисвиных кроличьих глобу-
линов, меченных пероксидазой, разведенной в твин-20-фосфатном буферном р-ре 1:10000.
Количество связанной пероксидазы определяют в реакции с ортофенилендиамином в при-
сутствии перекиси водорода в цитрат-фосфатном буфере с pH 5 при комнатной температуре.
Реакцию прекращают через 15 мин добавлением 50 мкл NH2S О4. ELISA оказался более
чувствительным, быстро выполнимым производительным тестом, чем PH в культуре клеток.
После УФ облучения луночки с иммуносорбентом хранить при 4°С длительное время.
618
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Разработан и применяется в странах Европы метод быстрой ретроспективной диагно-
стики БА с помощью MAC-ELISA, основанного на захвате специфических к вирусу IgM
АТ мышиными монАТ против IgM свиньи, и используя антивирусный кроличий гиперим-
мунный у-глобулин в качестве индикатора (77).
В ФРГ имеются национальные стандарты для оценки сывороток свиней при БА (97).
Для упрощения определения АТ к ВБ А предложено использовать бумажные фильтры, кото-
рые пропитывают испытуемым образцом крови, высушивают и хранят до проведения инди-
кации. Последняя проводится стандартным иммуноферментным методом. Специфичность
данного метода составляет 100%, чувствительность - 90-96%.
РРИД. АТ к ВБА могут быть определены в течение одной ночи в реакции радиальной
иммунодиффузии. Титры АТ определяют визуально по окрашенным круговым зонам, диа-
метр которых (в мм) пересчитывается на соответствующие значения титров. Описана тех-
ника исполнения теста (46).
Латексагглютинация. Для ускоренной серологической диагностики предложен метод
агглютинации частиц латекса, покрытых антигеном ВБА. Наличие в исследуемой сыворотке
специфических АТ вызывает агглютинацию частиц, регистрируемую визуально. Реакция с
латексом отличается высокой чувствительностью. Ее применение особенно эффективно в
ранних фазах инфекции, когда в сыворотке больных животных содержится значительное
количество IgM с высокой агглютинирующей активностью.
РИА. Для определения специфичных сывороточных АТ превосходит по чувствительно-
сти PH и широко применяется в виде непрямого твердофазного микрорадиоиммунологиче-
ского теста. Обладая высокой чувствительностью, он не зависит от культуры клеток и явля-
ется быстрым, точным и пригодным для массовых анализов. С использованием монАТ раз-
работаны модифицированные реакции радиальной иммунодиффузии ферментного и микро-
иммуноферментного определения АТ к данному вирусу. Оба вируса пригодны для проведе-
ния сероэпизоотологического обследования на БА в полевых условиях. Предложен новый
метод определения АТ к ВБА в сыворотках свиней с помощью непрямого иммуноперокси-
дазного окрашивания бляшек. По чувствительности, специфичности он превышает ИФА.
Аллергическая проба. Разработан кожный аллергический метод диагностики БА. Он
позволяет в короткий срок ставить диагноз непосредственно в хозяйствах. Метод основан на
феномене гиперчувствительности замедленного типа у латентно больных животных. При
введении убитого нагреванием АГ в нижнее веко, внутреннюю и дорсолатеральную часть
грудной клетки, а у поросят в медиальную поверхность бедра, реакция наблюдается через
24-48 ч и выражается образованием отечной припухлости тестоватой консистенции от 2 до 4
см в диаметре с покраснением в центре (место введения АГ). Чувствительность реакции
достаточно высокая: 72% переболевших животных реагируют положительно. Из числа пе-
реболевших без клинических признаков реагируют положительно 47% животных. Реакция
проявляется в более поздней стадии болезни, которая сохраняется после прекращения эпи-
зоотии. Ее можно использовать для выявления стационарных очагов инфекции. Высокий
титр ВНА и процент положительных кожноаллергических реакций обнаруживали у перебо-
левших животных через 14 и 30 дн после заражения. Аллергическая проба позволяет выяв-
лять инфицированных животных с 7-го по 20-й дн болезни.
Дифференциальная диагностика
БА следует дифференцировать у свиней от болезни Тешена, чумы, бешенства, гриппа,
сальмонеллеза, отечной болезни, листериоза, дипло, стрептококкоза, гипогликемии, солево-
го отравления, аскаридоза, авитаминоза; у крупного и мелкого рогатого скота - от бешенст-
ва, листериоза, кормового отравления, ценуроза; у лошадей - от менингоэнцефалита, бешен-
ства, отравления; у пушных зверей - от чумы и энцефаломиелита лисиц; у собак - от бешен-
ства, чумы плотоядных; у кошек - от бешенства.
Для дифференциации от бешенства проводят биопробу на мышатах и ИФ, а также мик-
роскопию для выявления телец Бабеша - Негри. Для исключения чумы, болезни Тешена
619
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
ставят биопробу на кроликах, гриппа свиней - проводят биопробу и исследуют выделенный
вирус в РГА, РТГА. Листериоз, сальмонеллез, отечную болезнь и другие бактериальные ин-
фекции исключают бактериологическим исследованием, отравления - по данным лабора-
торного химического анализа и биопробы. Существует схема дифференциальной диагности-
ки БА по Пегге и Манелю с использованием культуры клеток.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
За гуморальный и клеточный иммунитет ответственны гликопротеины оболочки gl и
особенно gIV. Максимальную защиту телят в экспериментальных условиях обеспечивает
gIV, а также безвирусный лизат инфицированных клеток. Гуморальный и клеточный имму-
нитет проявляется на 7-10-й дн после инфицирования или вакцинации, достигает пика через
30 дн и сохраняется в течение 5-6 мес (22). Переболевшие свиньи приобретают напряжен-
ный иммунитет, сыворотки их содержат ВНА в титре 1:32 - 1:256, начиная с 3-го мес, кото-
рые иногда сохраняются до 4,5 лет. АТ иммунных свиноматок не проникают через плаценту
в плод, поэтому у поросят АТ к ВБА нет. У поросят, родившихся от иммунных свиноматок,
в течение 24 ч после сосания молозива формируется колостральный иммунитет с наличием
в сыворотке крови высокого титра ВНА. При оптимальном потреблении молозива через су-
тки после опороса устанавливается прямая пропорциональность между титром ВНА в сыво-
ротке и молозиве свиноматок, а также крови поросят-сосунов. Затем концентрация антител в
молозиве и в молоке быстро снижается и к 7-10-му дн составляет 50% от первоначального
уровня. Выраженный колостральный иммунитет продолжается, как правило, не менее 3-х
нед после рождения (22). У животных, имевших на момент прививок колостральные АТ,
выработка активного иммунитета подавляется. Активная иммунизация свиноматок за 2 нед
до опороса способствует защите подсосных поросят от заражения ВБА.
В последние годы выражена тенденция к разработке и широкому внедрению вакцин но-
вого поколения как инактивированных, так и синтетических. Такого рода вакцины по срав-
нению с традиционными обладают следующими преимуществами: 1) индуцируют биологи-
чески полноценный иммунитет, не уступающий постинфекционному; 2) лишены инфекци-
онного начала и тем самым снимается вопрос о генетическом загрязнении биосферы при
массовом их применении (66). Для специфической профилактики БА применяются инакти-
вированые, цельновирионные живые (из аттенуированных штаммов) вакцины: субъединич-
ные и генно-инженерные (целетинированные).
Живые вакцины. Для приготовления живых вакцин используют аттенуированные
штаммы вируса различного происхождения. Их получали серийным пассированием в пер-
вичных и перевиваемых культурах при различных температурах (37 и 28°С) или в присут-
ствии мутагенов. Полученные аттенуированные штаммы различаются между собой многими
признаками и в том числе патогенностью для лабораторных животных. Так, в Болгарии
применяют живую вакцину из шт. Русс, а также из вируса, адаптированного к организму
морских свинок (МК-25), в Югославии - из вируса, адаптированного к КЭ и дополнительно
ослабленного пассажами на крысах. В Чехословакии получен вакцинный шт. BUK в резуль-
тате длительных пассажей на КЭ (366 пассажей). Вирус не патогенен для телят при перифе-
рическом заражении, при внутримышечном заражении кроликов вызывает смерть без при-
знаков зуда. Утрата способности вызывать у кроликов зуд, образовывать крупные бляшки в
культуре клеток КЭ - важный генетический признак шт. БУК. В Венгрии применяют живую
вакцину из штамма Барта, который получен отбором мелкобляшечного клона в культуре
клеток почки свиньи с последующей аттенуацией в клетках линии Vero.
В России и странах СНГ применяют живую вирусвакцину ВГНКИ из штамма, аттенуи-
рованного в фибробластах КЭ, а также вакцину из штамма БУК628. Препарат из производ-
ственного шт. УНИИЭВ-18 вс оказался универсальным и рекомендован для иммунизации
животных многих видов(свиней, КРС, овец, верблюдов и пушных зверей - норка, кролик).
Последний является высокоиммуногенным для КРС, овец, верблюдов (14,16,18,19).
620
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
Молозивные АТ препятствуют приживлению вакцинного вируса и снижают эффектив-
ность живой вакцины у поросят. Интерференцию между пассивными материнскими АТ и
вакцинным вирусом в значительной мере можно преодолеть интраназальным введением
живой вакцины. У поросят с низким уровнем материнских АТ интраназальная вакцинация
живой вакциной оказалась более эффективной, чем парентеральное введение инактивиро-
ванной вакцины. Живая вакцина не предотвращала проникновение патогенного штамма ви-
руса в мозг поросят при интраназальном заражении. Не установлено корреляции между
уровнем АТ и устойчивостью вакцинированных животных к заражению. Все используемые
вакцинные штаммы авирулентны для свиней различного возраста, КРС и овец. Мутантный
шт. М-25 не патогенен для кроликов и мышей. Аттенуация вируса связана с делецией в ко-
роткой уникальной области генома. У таких штаммов ие синтезируется один из основных
вирионных гликопротеинов gl. При применении вирус-вакцины ВГНКИ искоренение БА в
неблагополучных хозяйствах часто не удается и они остаются стационарно неблагополуч-
ными. Основной причиной этого является невозможность дифференциации постинфекцион-
ной и поствакцинальной серопозитивности, вызванной многократной иммунизацией свиней
вирус-вакциной, что практикуется в наших хозяйствах, и наличие в неблагополучных стадах
свиней-вирусоносителей, как основного резервуара ВБА (8).
Вакцинный штамм ВБА отличается от вирулентного тем, что в нем экспрессирован гли-
копротеин gl. Сравнительный анализ многих аттенуированных и “диких” штаммов вируса
показал, что первые имеют множественные дефекты в трех участках генома, которые, одна-
ко, не влияют на уровень их репродукции в культуре клеток (74а, 74b).
Инактивированные вакцины. С 1980 г. в Российской Федерации и странах СНГ при-
меняется инактивированная культуральная вакцина против БА пушных зверей, свиней,
овец. Вакцина безвредна, сообщает иммунитет с 8-10-го дн после прививки, у пушных зве-
рей он сохраняется не менее 6 мес, у свиней и овец - 10 мес. Разработана новая высокоим-
муногенная инактивированная культуральная вакцина против БА поросят, овец и пушных
зверей из вируса, репродуцированного на перевиваемых клетках СПЭВ (26ав). Вакцина не
содержит живого вируса, экологически безопасна, не уступает по профилактической актив-
ности вирус вакцине и не искажает эпизоотический фои в хозяйствах. Технология изготов-
ления вакцины заключается в использовании высоковирулентного культурального ВБА
(шт. 18-Е), выращенного в монослое перевиваемых клеток СПЭВ, адсорбированного на
ГОА, инактивированного с помощью формалина и тепла. Вакцина предохраняет до 84% по-
росят 2-4-мес возраста, иммунизированных в дозе 2,5-5 мл, до 95% овец. Иммунитет у вак-
цинированных животных наступает через 7 дн и продолжается до 9 мес (срок испытания).
Препарат сохраняет высокие иммуногенные свойства в течение 16 мес со дня изготовления.
Автором разработана система серологического контроля иммунологического и эпизоотоло-
гического состояния свиноводческих хозяйств на основе дифференциации поствакцинальной
и постинфекционной серопозитивности (8).
Инактивированные вакцины обеспечивают создание в крови высоких концентраций ан-
тител. Эти антитела через молозиво передаются потомству. Однако клеточный иммунитет
от инактивированных вакцин активируется в меньшей степени, чем от живых. Напротив,
живые вакцины обеспечивают напряженный клеточный иммунитет и относительно слабый
гуморальный иммунитет. Таким образом, иммунизация супоросных свиноматок инактиви-
рованные вакцинами обеспечивает защиту поросят раннего возраста, а для поросят-
огьемышей и откормочных свиней лучшая защита обеспечивается живыми вакцинами (30).
Разработано современное представление об иммуногенезе БА, роли вирусоносительства
у свиней и доказана возможность промышленного культивирования вируса на перевивае-
мых линиях клеток. Созданы качественный метод контроля вакцин на сельскохозяйствен-
ных животных и пушных зверях и новые представления о принципах, которые должны учи-
тываться при определении вирулентности ВБА (9,14,16,18,19,110а).
621
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Инактивированные вакцины, приготовленные на основе маркированных шт. Bartha и
77/3, обладали выраженной иммуногенностью и не уступали вакцинам на основе gl шт. ВБА
БУК, ВГНКИ и К (23). Разработана и испытана на разных животных инактивированная
эмульсионная вакцина против БА из вируса, репродуцированного в суспензии клеток ВНК
21/2-17 (14, 16, 18, 19). Живая вирус-вакцина не создавала напряженного иммунитета про-
тив БА у верблюдов, хотя была эффективной для свиней. Поэтому для верблюдов использо-
вали эмульсионнную инактивированную вакцину ВНИЯИ-УНИИЭВ, что позволило локали-
зовать БА (3, 7, 6, 14, 16, 18, 19). Обе инактивированные вакцины против БА (ВНИЯИ и
УНИИЭВ) отличаются высокой иммуногенностью, титр ВНА в сыворотке крови привитых
свиней составлял 5,68 -6,45 log2. В органах и тканях от всех 25 иммунных свиней после ин-
трацеребрального заражения или их контакта с больными животными патогенный ВБА вы-
делить не удалось (9, 10, 11). Эмульсионная инактивированная концентрированная вакцина
ВНИИЗЖ и УНИИЭВ (Харьков) против БА обспечивает противоэпизоотический эффект по
защите свиней от БА на протяжении 1 г (16).
Субъединичные вакцины. Во Франции разработана и успешно применяется субъеди-
ничная вакцина (109). Её готовят из 2-х шт.: вирулентного, без делеций (+) и мутанта с де-
лениями структурных гликопротеинов gl и gp63(gl-). Очищенные гликопротеины дисперги-
руют в водно-масляной эмульсии и применяют внутримышечно. Обе вакцины оказались
безопасными и высокоиммуногенными. Защита потомства, рояоденного от свиноматок, вак-
цинированных препаратами (+) или (-), составляла 93 и 92% соответственно. В группе поро-
сят, рояоденных от невакцинированных свиней, гибель после заражения вирусом составляла
98%. Отсутствие в вакцине gl и gp 63 не влияет на иммуногенность препарата.
В Венгрии предложена субъединичная вакцина в виде иммуностимулирующего ком-
плекса (ИСКОМ), содержащего белки оболочки ВБА. Применение её позволяет дифферен-
цировать вакцинированных ИСКОМ-ом животных от животных, естественно инфицирован-
ных ВБА (87). Первую в России экспериментальную субъединичную вакцину против БА го-
товили из инфицированных клеток, обрабатываемых 0,5%-ным трилоном Х-100 (1:4) при
4°С в течение 90 мин. К гликопротеину надосадочной жидкости после центрифугирования
(100000g, 60 мин) добавляли неполный адъювант Фрейнда и использовали как субъединич-
ную вакцину. Вакцинация индуцировала развитие клеточного иммунитета. Эффективную
вакцину против БА готовили из инфицированных клеток РК-15 (1,1а1 18,20).
Рекомбинантные вакцины. Сконструированы аттенуированные варианты ВБА, сохра-
нившие способность к репликации, но имеющие делеции в некоторых несущественных об-
ластях генома: гене ТК, гене гликопротеина gpX или в повторяющейся области. Некоторые
из сконструированных рекомбинантов ВБА содержат вставки чужеродных генов: гена ТК
вируса простого герпеса под контролем промотора ICP4, гена капсидного белка парвовируса
свиней типа В или гена p-галактозидазы E.coli (1). В качестве вакцины предложен и запа-
тентован полученный генно-инженерным путем ВБА, обозначенный как S-PRV-155 (40а), а
также делеционный мутант ВБА, обладающий сниженной способностью к реактивации из
состояния латенции. В одном варианте имела место геномная модификация в гене раннего
белка О (ЕРО), мутанты характеризовались неспособностью к экспрессии раннего белка О;
во втором варианте - модификация гена большого латентного транскрипта (LLT) - нарушал-
ся синтез LLT и, наконец, были получены мутанты с делениями в обоих генах (37а).
Методом генной инженерии из шт. Бухарест ВБА получен штамм, лишенный генов, ко-
торый регулирует синтез тимидинкиназы главного гликопротеина gill и минорного глико-
протеина gl. Полученный штамм репродуцировался в культуре фибробластов кожи кроли-
ков при 30-39°С, обладал аттенуированным фенотипом, сохранял иммуногенные свойства.
Делеции в генах тимидинкиназы и гликопротеинов gill, gl и gX (90 кД) сопровояодался
снижением иммунопатологических реакций и персистированием вируса (69а). Получены
мутанты ВБА, в составе которых отсутствуют 3 (gl, gp63, gill) или 4 (gl, gp63, gill, gX) не-
622
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
существенных гликопротеина, не влияющих на его репродукцию в культуре (85а). Делеги-
рованный по гену gX вакцинный штамм ВБА имел преимущества по сравнению со штам-
мами, имеющими делецию в гене gl. Гены gp50 b gp63 ВБА шт. Индиана-Фунихаузер под
контролем промотора р7,5 вируса осповакцины были рекомбинированы в ген тимидинкина-
зы вируса оспы свиней шт. Казца путем трансфекции, инактивирующей ген ТК. Получен-
ную вакцину вводили свиньям путем скарификации или внутримышечно. Спустя 3 нед у 90-
100% обнаруживались АТ к ВБА. В течение 150 дн выявлялись ВНА (73а).
Рекомбинацию аттенуированных штаммов ВБА отмечали в организме вакцинирован-
ных животных с возникновением новых вирулентных штаммов, представляющих практиче-
скую опасность (67а). Лучшим кандидатом на роль вакцинного штамма оказался рекомби-
нат S-PRV-013, имеющий 3 делеции (в генах ТК, gpX и в повторяющейся области) и несу-
щий ген Р-галактозидазы. Свиней, иммунизированных аттенуированными вирусами БА,
можно отличить от животных, зараженных природным вирусом, используя 2 критерия: 1)
отсутствие антигена gpX при наличии некоторых других АГ вируса и 2) экспрессию АГ р-
галактозидазы (39,40,102). Запатентовано получение рекомбииатной ДНК, содержащей по-
следовательности, кодирующие гликопротеины ВБА gl,gp50, gp63, которая может быть ис-
пользована для получения субьединичных вакцин, разработки метода защиты животных и
метода дифференциации вакцинированных и инфицированных животных (95а). С анало-
гичной целью можно использовать субъединичную вакцину из шт. Bartha (96а).
Применение живых и инактивированных вакцин. При вакцинации животных про-
тив БА необходимо учитывать следующее. Во-первых, календарь прививок зависит от бла-
гополучия стада и технологии ведения свиноводства в хозяйстве. При возникновении болез-
ни или угрозе заражения необходимо вакцинировать всех животных. Во-вторых, инактиви-
рованными вакцинами прививают свиноматок 2-кратно с таким расчетом, чтобы добиться
максимального уровня колостральной защиты потомства, т.е. в средней и последней третях
беременности. В последующем вакцинируют однократно в каждую беременность. В-
третьих, весь ремонтный молодняк к 3-3,5-мес возрасту должен быть привит 2-кратио.
Инактивированными вакцинами можно прививать поросят и от иммунных матерей.
Интраназальная и парентеральная вакцинация не предотвращает латентного носитель-
ства вирулентного штамма вируса в миндалинах, хотя сокращает сроки его выделения во
внешнюю среду, особенно после двукратной или интраназальной иммунизации. В стацио-
нарно неблагополучных по БА зонах основной проблемой применения живых вакцин явля-
ется материнский иммунитет. У поросят, полученных от 2-кратно вакцинированных мате-
рей, выраженный пассивный иммунитет длится не менее 4-5 нед и препятствует выработке
поствакцинальиого иммунитета. С другой стороны, введение в этот период вакцинного ви-
руса может ослабить пассивный (материнский) иммунитет. Поросята с низким и высоким
уровнями материнских АТ оказываются лучше защищенными после интраназальной вакци-
нации, чем после 1- или 2-кратной парентеральной вакцинации (22). Свиноматок обычно
прививают за месяц до осеменения, а поросят, полученных от них, в 3-12-иед возрасте. По-
вторно поросят вакцинируют через 3-6 мес. Результаты вакцинации зависят от дозы вакци-
ны и кратности введения. Многократная вакцинация поросят в стационарно неблагополуч-
ных хозяйствах в сочетании с изолированным их содержанием после отъема может способ-
ствовать приостановлению персистенции вируса.
Живая вакцина оказалась недостаточно эффективной при применении на КРС. Показа-
но, что внутрикожная безыгольная вакцинация свиней более удобна по сравнению с внут-
римышечной: животные могут быть вакцинированы во время кормления, и подтверждением
вакцинации служит наличие папулы на месте инокуляции (110), кроме того, приемлемой
может быть аэрозольная вакцинация поголовья (38а).
В настоящее время имеется много сообщений о разработке нового типа вакцин против
БА, совместимых с программой искоренения инфекции (32, 43, 66). Необходимость в разра-
623
Г лава XVI. Family Herpesvirida Г ерпесвирусные инфекции
ботке более совершенных вакцин против БА велика. Это связано с тем, что с помощью тра-
диционных вакцин нельзя искоренить названную инфекцию. Можно лишь снизить эконо-'
мические потери от острой формы болезни. Это подтверждает многолетний опыт ряда евро-
пейских стран, где, несмотря на вакцинацию свиней, увеличилось число вспышек и расши-
рилась, а не уменьшилась территория, пораженная БА. Главная сложность борьбы с болез-
нью состоит в том, что она часто протекает в латентной, скрытой форме, при которой вирус
находится в клетках ЦНС и отсутствует в крови. Вследствие этого он недоступен для АТ и
не обнаруживается обычными серологическими методами. Вирус может находиться в ла-
тентном состоянии в течение всей жизни животного. При снижении защитных сил организ-
ма, под действием стресс факторов (опорос, транспортировка, переохлаяодение и т.п.) вирус
реактивируется, размножается и вызывает клиническую форму болезни. Основные недос-
татки традиционных вакцин заключаются в том, что использование живых вакцин способ-
ствует развитию латентной формы болезни, так как они стимулируют образование не сте-
рильного иммунитета (животные не освобождаются от вируса). Страны, неблагополучные
по БА, терпят значительный экономический ущерб. Специалисты развитых стран считают,
что освободить хозяйство или страну от болезни можно только путем искоренения, уничто-
жения вирусоносителей или всего поголовья пораженного стада в зависимости от условий. В
настоящее время странами ЕЭС и США принято решение об искоренении БА. Однако в
сильно пораженных хозяйствах, где нет условий для одновременного убоя всего стада, для
предотвращения вспышек болезни владельцы животных вынуждены использовать вакцины.
Традиционные живые вакцины не совместимы с искоренением инфекции по названной вы-
ше причине и потому, что серологическими методами нельзя отличить вакцинированное
животное от естественно зараженного полевым вирусом.
За последние 10 лет учеными получены вакцины нового типа, которые совместимы с
программой искоренения, так как лишены недостатков традиционных вакцин. Был опреде-
лен ген латентности вируса, т.е. ген, кодирующий синтез фермента ТК. Этот фермент необ-
ходим вирусу для размножения в ЦНС. Поэтому у вируса генно-инженерными методами
удалили ген ТК, тем самым лишив его способности размножаться и, следовательно, быть
латентным. Для того, чтобы серологически отличать вакцинированных от естественно зара-
женных животных, у вакцинного вируса удаляют еще один ген, ответственный за синтез ка-
кого-либо из гликопротеинов оболочки вируса (у данного вида вируса их приблизительно
30). Гены иммуногенных гликопротеинов, стимулирующих выработку ВНА, не удаляют. С
помощью тест наборов, диагностикумов, работающих по принципу ИФА, не обнаруживают
АТ к гликопротеину удаленного гена. Отсутствие таких АТ в сыворотке крови свидетельст-
вует о том, что животное вакцинировано, наличие - инфицировано полевым вирусом. Пер-
вая вакцина против БА из вируса с удаленными генами разработана в медицинском кол-
ледже в Хьюстоне (США) и произведена для продажи фирмой Nova Gena Inc. под названи-
ем Omnivac-PRV. С 1986 г. в этой стране использовано более 10 млн. доз вакцины без ка-
ких-либо отрицательных последствий. Вакцина содержит живой ВБА, у которого удален ген
ТК и маркерный (для серологической дифференциации) ген g-I. Названный гликопротеин
имеется у всех штаммов ВБА, по крайней мере у 250 исследованных на 3-х континентах.
Ученые предполагают, что он способствует проникновению вируса в клетки животного и
распространению его из места попадания в ЦНС, т.е. связан с инфекционностью. Главные
преимущества этой и других вакцин без ТК-гена перед традиционными заключаются в том,
что их вирус, вследствие неспособности к размножению, не становится латентным и не при-
обретает патогенных свойств. Вакцина настолько безопасна, что её можно вводить живот-
ным на любой стадии супоросности. Вероятно патогенность частично обусловлена отсутст-
вием гена g-I. Эффективность вакцины также высока. Примером её эффективности являют-
ся результаты опытов, в которых использовали 100 мл инфекционных доз вакцины на одно-
го поросенка. Вакцинированных животных заражали патогенным ВБА более чем 500 млн
инфекционных доз. Ни в одном случае не развивались клинические признаки болезни. В то
624
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
время как обычно введение 10 тыс. инфекционных доз патогенного штамма вируса вызыва-
ет падеж поросят в течение 3-5 дн. Вакцину Omnivac-PRV без адъюванта применяют внут-
римышечно (57). После одной инъекции иммунитет сохраняется, как минимум, в течение
248 дн. Животных вакцинируют 1 раз, (без повтора через 3 нед, как это требуется при ис-
пользовании традиционных вакцин). Уже в 1984 г. в США было получено 5 вариантов тако-
го типа вакцин. В частности, Nova Gene Inc. разработала вакцину Omnivac-II, вирус которой
лишен 2 генов: ТК и g-92. Фирмой Fermenta Animal Health Со получена вакцина Omni Mark
без трех генов-ТК, gl и gill. Недавно установлено, что gill выполняет несколько функций,
связанных с адсорбцией и освобождением вируса от клеток. Фирма Upjon Со в Каламазу,
штат Мичиган, разработала, а фирма Diamond Scientific Со, штат Айова, производит и про-
дает разрешенную к использованию вакцину под названием Tolvid. Она так же, как и пере-
численные dsit, содержит живой непатогенный вирус, без ТК-гена. Кроме того, у вируса
вакцины Tolvid удален ген, кодирующий синтез гликопротеина х (gx), функция которого по-
ка не выяснена. К gx образуются высокие титры АТ, не обладающих нейтрализующей ак-
тивностью в отношении вируса БА. По отсутствию АТ в сыворотке крови отличают живот-
ных, вакцинированных данной вакциной, от животных, зараженных вирусом любого друго-
го штамма. Результаты испытаний, проведенных в Нидерландах, свидетельствуют о высо-
кой её эффективности. После однократной инъекции поросятам, имеющим родительские
АТ, вакцина защищала их в течение всего периода откорма.
Аналогичную вакцину, названную PRV-Marke, без ТК и X генов выпускает фирма Sytro
Vet Inc, штат Канзас. Американская вакцина PRV-Marker - первая из одобренных к приме-
нению вакцин, которая выпускается в комплексе с диагностическим набором Herd Chek, со-
держащим монАТ к gx. С помощью этого тест набора можно дифференцировать животных,
вакцинированных PRV-Marker и Tolvid вакцинами от естественно зараженных. Однако уз-
нать, какая из этих 2 вакцин введена тому или иному животному, невозможно, поскольку
обе вакцины имеют одинаковый маркер (метку), т.е. их вирусы не имеют gx, так как удален
ген, “отвечающий” за синтез этого протеина. Названный диагностический набор выявляет
только тех животных, в крови которых есть АТ к вирусу с gx. Фирма Sytro Vet выпускает
вторую, тоже разрешенную к использованию вакцину, у вируса которой удалены три гена и
один добавлен (“встроен”). Удален ТК-ген, “перевернут” в обратном направлении другой
ген для большого ослабления вируса, удален ген, кодирующий синтез gx для дифференциа-
ции вакцинированных и зараженных полевым вирусом животных. “Встроен”, т.е. включен в
вирус, маркерный ген, кодирующий образование лактазы. По АТ к этому ферменту разли-
чают животных, вакцинированных данной вакциной, от животных, инъецированных анало-
гичного типа вакцинами с удаленным другим маркерным геном. Кроме перечисленных
имеются 2 вакцины из вирусов с удаленными генами только гликопротеинов оболочки: gl и
gl+g63. Вакцина gl-негативная получена и в Нидерландах в ветеринарном институте в Ле-
листаде. Их использование, в отличие от традиционных, также позволяет дифференцировать
вакцинированных и естественно зараженных животных. Однако вакцины из вируса без ТК-
гена в настоящее время являются лучшими против БА. Они имеют значительные преиму-
щества как перед традиционными и субъединичными, так и перед генетически измененны-
ми, без генов гликопротеинов оболочки, но имеющими ТК-ген. О достоинствах вакцин без
ТК-гена в сравнении с традиционными уже сказано. ТК-негативные вакцины абсолютно
безопасны в отличие от ТК-позитивных (55). В Болгарии используется вакцина против БА
МК-35 G(-) ТК(-) (5). Недавно запатентован метод получения рекомбинантной ДНК, содер-
жащей последовательности, кодирующие гликопротеин gpl, gp50, gp63 (115).
Таким образом, полученные в США и других странах вакцины нового типа позволяют
радикально повысить надежность и эффективность искоренения БА. В случае необходимо-
сти, в угрожаемой зоне, их можно применять в благополучных по этой болезни хозяйствах
на животных любого возраста и всех стадий супоросности, не опасаясь за состояние их здо-
ровья и возможность распространить вирус. Принципиальная разница между вакцинами но-
40 Зак. № 171
625
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
вого типа и традиционными в том, что они содержат вирус, у которого удален ген фермента
ТК. Без этого фермента, специфичного для ВБА, вирус не может размножаться. Вследствие
чего он не достигает клеток ЦНС и не образует латентную (скрытую) форму болезни. Неспо-
собность к латентности таких вакцин является важнейшим преимуществом их перед живы-
ми традиционными и вирус вакцинами без генов оболочечных гликопротеинов.
Для дифференциации животных, вакцинированных и естественно зараженных, у вируса,
кроме гена ТК, удаляют ген гликопротеина оболочки. По отсутствию в сыворотке крови АТ
к гликопротеину удаленного гена определяют вакцинированное, по наличию АТ - естест-
венно зараженное животное. В результате введения традиционных вакцин различить серо-
логически эти 2 категории животных невозможно (58).
ТК-негативные вакцины эффективнее и несравнимо дешевле субъединичных. Они не-
значительно дороже традиционных вакцин. В настоящее время такие вакцины являются
наилучшими против БА. В США из 5 полученных вакцин нового типа 4 разрешены Мини-
стерством сельского хозяйства к использованию. В программах ЕЭС и США по искорене-
нию БА будут использованы только ТК-негативные вакцины.
Оценка поствакцинального иммунитета
Сроки обнаружения поствакцинальных антител. Выявлена четкая зависимость меж-
ду клиническими проявлениями заболевания у свиноматки и титром АТ в сыворотке крови
и молозиве ее (63, 64). У поросят 7-дн возраста, вакцинированных аттенуированным штам-
мом вируса, ВНА появляются на 14-й день, повышение титра их наблюдается на 21-28-й
день после прививки. ВНА после прививок живыми вакцинами и ревакцинации появляются
на 7-е сут, накапливаются в достаточно высоких титрах и уже к 14-м сут достигают опти-
мального уровня. Показано, что только при 2-х этапной вакцинации, вначале инактивиро-
ванной, а затем живой вакцинами, происходит резкое возрастание титра ВНА с 1,5-2 до
11,3-12 log2. После однократной иммунизации свиней инактивированной вакциной через 3
нед титры ВНА достигали 11 log2. Уровень титров поствакцинальных антител не коррелиро-
вал с защитой от инфекции. При БА необходимо больше внимания уделять определению
местного иммунного ответа, в частности слизистых оболочек респираторного тракта.
ИФА можно выявить АТ против гликопротеина I (gl) ВБА (gl-ELISA) и дифференциро-
вать зараженных псевдобешенством свиней от животных, иммунизированных маркерной
вакциной (gl). Полагают, что регулярное (и повсеместное) применение ИФА может способ-
ствовать эффективности программы по искоренению БА на свинофермах (86). PH и НИФА
можно использовать для определения иммунного и эпизоотического статуса по БА и ретро-
спективного подтверждения циркуляции среди свиней вирулентного вируса. При обнаруже-
нии в крови свиней АТ в титрах 3 loga и более по данным PH (или непрямой ИФА) хозяйст-
во считают неблагополучным по БА и проводят комплекс мероприятий по ликвидации этой
болезни (7). Специфические КСА и ПА против БА обнаруживаются у вакцинированных ви-
русвакциной из шт. ВГНКИ животных (свиней) на 7-10-й день после иммунизации. Наи-
большие титры КСА - 1:16-1:32 были на 21-30-е сут. У поросят-сосунов, полученных от им-
мунизированных свиноматок, АТ в РСК и РДП обнаруживаются на 5-7-й день их жизни в
титре 1:2-1:4. Результаты выявления АТ в РДП коррелируют с таковыми в РСК, однако
титры их ниже. Таким образом, показана возможность использования РСК и РДП для на-
лаживания системы иммунологического мониторинга при БА свиней (26).
Длительность циркуляции поствакцинальных антител. Однократная иммунизация
поросят инактивированной эмульгированной масляной вакциной вызывала напряженный
гуморальный иммунитет (титр до 1:512 в PH) продолжительностью 29 нед и более. Наличие
остаточных колостральных АТ у 8-нед поросят не снижало уровень поствакцинальиого им-
мунитета. В сыворотке крови поросят, родившихся от свиноматок, привитых живой вакци-
ной, колостральные АТ не выявляли после 5 нед, в То же время в сыворотке поросят от сви-
номаток, вакцинированных инактивированной вакциной, их обнаруживали после 10 нед.
Наиболее существенные различия гуморального иммунитета у вакцинированных и заражен-
626
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ных животных отмечали на 18-й день после введения вируса; у инфицированных свиней как
в сыворотке крови, так и в мазках выявляли специфические иммуноглобулины всех классов,
в то время как у вакцинированных животных только IgG. Различия в выработке АТ классов
IgG, IgM, IgA к ВБА установлены с помощью 4-слойного ИФА.
Колостральный иммунитет. Колостральный иммунитет при БА имеет огромное зна-
чение. У вакцинированных свиней титр молозивных АТ в день опороса составлял 1:128 -
1:256, хотя в сыворотке крови их титр (в PH) не превышал 1:64. У их потомков на 2-й день
после рождения титр АТ в сыворотке крови достигал уровня 1:16- 1:128.
Связь титров антител с резистентностью. Между напряженностью иммунитета и вы-
сотой титров ВНА корреляции не установлено. Экспериментально определено, что титр
ВНА не коррелирует с устойчивостью к вирулентному вирусу. Устойчивость может быть у
животных, не имеющих АТ. Все поросята с титром материнских АТ 1:387 и выше оказались
устойчивы к иитраиазальному заражению большой дозой вируса, тогда как АТ в титре 1:264
- 1:344 предохраняли лишь 2/3 потомства. Однократная иммунизация серонегативных поро-
сят вызывала напряженный гуморальный иммунный ответ (титр АТ до 1:5120 в ELISA)
продолжительностью 29 нед и более. Через 18 нед 80% иммунизированных поросят были
устойчивы к контрольному внутримозговому заражению вирулентным штаммом вируса, а
устойчивость к контрольному интраназальному заражению сохранялась свыше 20 нед.
Связь титров антител с вирусоиосительством и вирусовыделением. Вирулентный
вирус может персистировать у клинически здоровых свиней даже после вакцинации и при
наличии специфических АТ до 10 мес. После контрольного заражения у вакцинированных
подсвинков с максимальными титрами АТ выделяли вирус в титре до 2,5 1g ТЦД50/МЛ. АТ
не препятствуют длительному сохранению вируса в ганглиях тройничного нерва при отсут-
ствии клиники. Следует иметь в виду, что устойчивость вакцинированных свиней вовсе не
означает отсутствие вирусоносительства и приживляемости дикого вируса - это обстоятель-
ство является важнейшей эпизоотологической особенностью БА.
Клеточный иммунитет. При БА, помимо гуморального, имеет место и клеточный им-
мунитет. Факторы его развиваются на несколько дней раньше гуморальных, стимуляция
лимфоцитов и появление ингибиции миграции макрофагов отмечены уже на 4-е сут. Вирус-
специфический клеточный иммунитет наблюдается на 4-й день после заражения, а гумо-
ральные АТ обнаруживаются только на 7-й день. Инактивированные вакцины в отличие от
живых индуцируют слабый клеточный иммунитет. Положительную кожноаллергическую
реакцию у вакцинированных животных обнаруживали в течение 3 мес при содержании в
сыворотке крови АТ в титре 3-8 1о&.
Меры борьбы
Очень трудно искоренить инфекцию с помощью прививок вакцинными препаратами.
Такие прививки затрудняют, но не предотвращают инфицирование поголовья и распростра-
нение вируса среди свиней. Однако сокращаются экономические потери. Ликвидация БА
возможна лишь путем уничтожения серопозитивных животных, что в свою очередь исклю-
чает профилактические прививки традиционными живыми или инактивированными вакци-
нами, поскольку в этом случае серопозитивность у привитых и переболевших животных не
дифференцируется (22). Однако создание новых нетрадиционных вакцин открывает новые
возможности преодолеть трудности. Вакцины (живые и инактивированные) из штаммов,
дефектных по gpl, имеют преимущества, поскольку позволяют серологически отличать
вакцинированных и инфицированных животных (93,94).
Вопрос о ликвидации БА в крупных свиноводческих хозяйствах РФ приобрел для вете-
ринарной службы актуальное значение и в этом отношении немецкий опыт может явиться
прецидеитом для подражания. Так, в частности, в земельном округе Оснабрюк с сентября
1989 г. 5000 свиноводческих хозяйств включились в программу ликвидации этой инфекции.
Поголовье округа насчитывало 90 тыс. племенных свиноматок, 420 тыс. откормочных сви-
ней и 225 тыс. поросят. Программа включала пункты вакцинации всех животных и вывоз из
40» 627
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
хозяйств серопозитивных племенных свиней. Успех программы обеспечивался регистраци-
ей всех поросят в хозяйствах и созданием временного табло вакцинации с помощью компь-
ютера. Вакцинировано 95% регистрированного поголовья, и число новых вспышек БА бы-
стро сокращалось. Ликвидация болезни возможна лишь при ежегодной 100%-ной вакцина-
ции поголовья свиней (47).
В Швеции описан успешный опыт искоренения БА в стаде по получению поросят-
отъемышей путем использования gl-негативной инактивированной вакцины против БА в
сочетании с ELISA, позволяющим осуществлять дифференциацию между вакцинированны-
ми и инфицированными животными при условии применения такой вакцины.
В последнее время 43 страны сообщили о регистрации БА (FAO, WHO, OIE 1990).
Англия, Дания, ГДР сообщили об успехе программы оздоровления. Программа оздо-
ровления в Англии начата в 1983 г. и финансирование её осуществлялось за счет удержания
с владельцев скота 30 фунтов (около 0,55$) на убойную голову (26а, 72, 105, 106). Наблю-
дения в этих странах продолжаются и основываются на мониторинге племенных хряков. В
стадах свиней штата Илинойс (США), квалифицированных как свободные от ВБА, выявля-
лись отдельные особи с низким титром АТ к вирусу “дикого” типа, причем клинически вы-
раженных случаев заболевания ни у этих животных, ни у остальных в том же стаде не реги-
стрировалось. В течение 2,5 лет в этом штате было выявлено 12 таких животных. Выделить
вирус не удалось (100). Об активизации программ оздоровления в настоящее время сообщи-
ли 14 стран: Болгария, Куба, Чехия, Словакия, Ямайка, Япония, Мексика, Нидерланды,
Норвегия, Румыния, США, Россия, Вьетнам и Югославия(РАО, WHO, OIE, 1990). Об ак-
тивном планировании программ контроля БА сообщили Германия, Франция и Венгрия.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Аминева С. П. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир, 1995 :47. 1а1. Аминев
А.Г. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир, 1995 :219. 1а.Белоконь В.С. и др. Мат.
н. конф. ВНИИВВИМ, 1992 :195. 1б.Белоконь В.С. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф.,
Владимир, 1995 :146. 2.Брагин Г.И. “Пат. анат. диагн. вир. бол. жив., М., Колос, 1984.
З.Дудников А.И. и др. Ветеринария, 1993, 10 :54. 4.Камалова Н.Е. и др. Тез. докл. Всерос.
н.-пр. конф., Владимир, 1995 :64. б.Величкова М. и др. Селектостоп. и произв., 1995, 33, 4
:44. б.Дудников А.И. и др. Ветеринария, 1995, 7:28. ба.Жестерев В.И. и др. Тез. докл. Все-
рос. н.-пр. конф., Владимир, 1995 :127. бб.Захаров В.М. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр.
конф., Владимир, 1995 :168. 7.Коломыцев В.А. и др. Ветеринария, 1991, 1 :31. 8.Конар-
жевский К.Е. Инакт. вак. против БА. Докт. дисс. Харьков, 1992. 8а.Карпенко Л.Н. и др. Тез.
докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир, 1995. 9.Мищенко В.А. др. Матер, н. конф. ВНИИВ-
ВИМ, 1992 :191. 10.Мищенко В.А. и др. Матер, н. конф. ВНИИВВИМ, 1992 :194. П.Ми-
щенкоВ.А. и др. Ветеринария, 1993, 8 :54. 12.Мищенко В.А. и др. Ветеринария, 1995, 1:11.
13.Мищенко В.А. и др. Ветеринария, 1994, 3 :32. 14. Мищенко В.А. и др. Тез. докл. Всерос.
н.-пр. конф., Владимир, 1995 :113. 15.Мищенко В.А. и др. Ветеринария, 1994, 11 :23. 16.
Мищенко В.А. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир, 1995 :205. 17.Мищенко В.А.
и др. Пат. России, 2044548, 1995. 18.Мищенко В.А. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф.,
Владимир, 1995 :51. 19.Мищенко В.А. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, 1995, 101. 19а.Мищенко
В.А. и др. Тр. ВНИИЗЖ, 1995 :108. 20.Моренков О.С. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф.,
Владимир, 1995 :211. 20а.Моренков О.С. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир,
1995 :16. 21.Мотовски А и др. Вет. мед. Науки, 1980, 17, 4 :23. 21а. Орлянкин Б.Г. Тез. Все-
рос. н.-пр. конф., Владимир, 1995 :220. 22. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев, Урожай,
1993. 23.Собко Ю.А. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир, 1995 :126. 24.Сюрин
В.Н. и др. Част. вет. вирусология., Колос, 1979. 25.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жи-
вотных, Колос, 1991. 26.Хайрулов Г.А. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир,
1995 :128. 26аб.Цымбал А.М. и др. Тез докл. III Всесоюзн. конф. ВНИиТИБП, 1987 .49.
26а. Anderson J.B. et.al. In Vac and Contr of AD. Ed.J.T.VanOirshot, 1989. 27.Belik K. et.al. J
628
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Vet Med Reihe В, 1989, 36, 1 .10. 28.Ben-PoratT.et.al. Seminar in the CEC progr of Cord of
Res on animal pathol. Tubingen, 1982, 21 :09 29. Ben Porat.T.et.al. Virology, 1984, 139, 2 :205.
ЗО.Апоп Londw Wochenbl Wectfalen-Lippe, 1989, 43 :2. 31,Baskerville. A.et.al. Vet Bull
(London) 1973, 43 :465. 32. Biotechnology News 1988, 8 :5. ЗЗ.Вегап G.W. et. al. Proc U S
Anim Health Assoc, Denver, 1990. 34.Bolin.S.R. et.al. Theriogenol., 1984, 22 :101.
35.Bolin.S.R. etal. J Vet Res, 1983, 44 (6) :1036. 36.Bolin.C.A.et.al. J Vet Res, 1985, 46 :1039.
37.Cheung A.K. USA Seer of Agr №537855, Опубл. 01.06.93; НКИ 435. 37a.Cheung A.K.
et.al. USA Secretary of Agr, 948283, заявл. 04.10.92. 38.Christen L.S. et.al. Vet Rec 1990, 127,
19 :471. 38a.Chong Y.C. Vet Microbiol, 1994, 39, 1 :117. 39.Cochran Mark.D. Пат. 5068192,
США, опубл. 26.11.1991. 40.Cochran Mark.D. Пат.192866, опубл. 10.09.91 НКИ 424/89.
40а.Cochran M.D. Патент 53240730, опубл. 31.08.93. 41.Cowen Р. et.al. Vet Res, 1990, 51, 3
:354. 41a.Cuan J.F. et.al. Clin Chem, 1994, 40, 6 :1090. 42.Davies E.B. et.al. Vet Med Assoc,
1980, 176 :1345. 42a.Davies E.B. et.al. Res Vet Sci., 1981, 31 :32. 43.DVM the news magazine
of veterinary medicine. 1988, 19, 3 :4. 44.Feldman L. etal. Abstrs 79th Ann Meet Amer Soc
Mickr, Los-Angeles, Calif, 1979, Waschington D.S. 1979 :284. 45.Fenwick M.L. et.al. Gen
Virol, 1984, 65, 9 :1449. 46.Eloit M. Vet Rec, 1989, 124, 4 :91. 47. Friedel K. et.al. Tierarztl
Umsch, 1990, 45, ON11 :783. 48.Geck P et.al. Magyar allatow Lapja, 1982, 37, 10 :65.
49.Cenetic Engineering News. 1988, 8, 3 :38. 50. Gielkens A.L. etal. J gener Virol, 1985, 66, 1
:69. 51.Gueguen B. et.al. Rec Med Vet 1980, 156 :307. 52.Gutecunst D.E. etal. Vet Res, 1980,
41, 8 :1315. 53.Hali L.B. et.al. Comp Med, 1984, 48 :192. 54.Hampl H. et.al. J Virol, 1984, 52
:583. 55.Henderson L.M. et.al. 15th Int HV Workshop (Abstr) 1990, Wasch. :453. 56.Heffer
Keith etal. Vet Res, 1980, 41, 8 .317. 57.Hasobe H. et.al. Vet Med Sci. 1992, 54, 4 :693.
58.Hender Son L.M. et.al. Vet Res, 1990, 51, 10 :1656. 59.Horward R. Agr North irel 1992, 6, 13
:6. 6O.Hulmer Hatwig P. etal. Virus Res, 1992, 23, 3 :271. 61.Hsu E.S. etal. Vet Med Assoc,
1980, 177 :636. 62. Jesten A. et.al. Biologicals, 1990, 18, 4 :295. 63.1glesias G. et.al. Vet Med.
Reihe B., 1989, 36, 1 :57. 64.1glesias G. et.al. J Leukocyte Biol. 1989, 45 :410. 65.Jhara S. et.al.
Virology, 1982, 122, 2 :268. 66.Joumal of Virology 1988, 62, 7 :2251. 67.Kataoka J. et.al. Vet
Med Sci. 1991, 53, 6 :981. 67a.Katz J.B. et.al. Vaccine, 1990, 8 :228. 68.Kit S. etal. Arch Virol.
1985, 86 :63. 69.Kit S. et.al. J Vet Res. 1987, 48 :780. 69a.Kluge J.P. et.al. In Dis of Swine, Ed
Mengeling, 1994. 69b.Kluge J.P et.al. Proc &th Int Cong Pig Vet Soc, Ames, 1976.
70.Konwenhoven B. et.al. Vet Guart 1982, 4, 4:145. 71.Kost T. et.al. Virology 1989, 171(2)
.365. 72.Kretzchmar C. et.al. Brussels, Luxembourg: ECSC, EEC, EAEC, 1989 :239. 73.Larsen
R. et.al. J Vet Res, 1980, 41:733. 73a.Leen M.L. et.al. Vet Rec, 1994, 134, 1 :13. 74.Lipowski A.
et.al. Med Vet 1944, 50, 1 :14. 74a.Lomniczi B. et.al. Virol, 1987, 161 :181. 74b.Lomniczi B.
et.al. Virol, 1987, 61 :796. 75.McCullough S. In Vac and Contr of AD. Ed.J.T. Van. Oirschot
Boston, Kluwer Academic Publischers, 1989 :231. 76. Molitor T.W. Vet Immun and Immunopat,
1994, 43, 1-3 .107. 77.Me Caw Monte, et.al. J Clin Microbiol, 1992, 30, 2 :346. 78.Marchioli
C.C. et.al. J Virol, 1987, 61 :3977. 79.Marchioli C.C. et.al. J Vet Res. 1988, 49 :86. 8O.McGre-
gor S. etal. J Vet Res, 1985, 46 :1494. 81.Medveczky I. et.al. Magy allatorv lapja, 1980, 35, 8
:540. 82.Medveczky I. et.al. Acta Vet Acad Sci Hung 1981, 29 :29. 83.Mengeling W.L. Arch
Virolog. 1991, 120 :57. 84.Mengeling W.L. et.al. Arch Virolog, 1983, 78 :213. 85. Mettenletter
T. Conp Immunol, Mier and Infect Diseases, 1991, 14, 2 :151. 85a.MettenIetter T. et.al. J Virol,
1990, 178, :498. 86.Mocsari E. et.al. Auotow Kozl, 1991, 27, 1 :81. 87.Morein B. et.al. Vet
Microbiol, 1989, 20, 2 :143. 88.Morten Sen. S. et.al. Don Veterinaeriidsskr, 1993, 76, 4 :133,
135. 89.Narita M. et.al. Jap J Vet Sci, 1984, 46 :119. 9O.Narita M. etal. Vet Pathol, 1984, 21
:450. 91.Narita M. et.al. Vet Res, 1984, 45 :247. 92.O.Connor M. Irisch Veter, 1990, 43, 3 :81.
93.Oirschot J. Tvan et.al. Vet Guart, 1984, 6, 4 :225. 94.Oirschot J. Tvan et.al. Vet Guart, 1987,
9, 1 :37. 95.Paul P.S. et.al. Arch Virol, 1982, 73, 2 :193. 95a.Petrovskis E. et.al. The Upjoin Co-
№513282, заявл. 20.4.90, опубл. 4.10.94. 96.PlattK.B, Vet. Microbiol., 1981, 6: 225. 96a.Rich-
tzenhain L.J. et.al. Rev Microbiol, 1995, 26, 4 :284. 96b.Qwint W. etal. J Gen Virol, 1987, 68
629
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
:525. 97.Rustleben W.P. Mang Dies Hannover, 1988 :110. 98. Rziha H.J. etal. Zbl Bakteriol
Mickrobiol und Hug, 1984, A 257, 1 :59. 99.Rziha H.J. et.al. In Current Topics in Veter Med and
Animal Sin Ed G.Wittman and S. A. Hall, 1982, 17, 205 :211. lOO.Scherba Gail etal. Vet
Microbiol, 1994, 40, :3 :335. 101. Szweda W. et.al. Med Vet, 1993, 49, 4 :175. 102.USDA
Licensing of a gen altered Vet Vaccine. Waschington, 1986, :1. 103.Schoenbaum M. et.al.
Laboratory data, Iowa State Uniy, 1988. 103a.Stevely W.S. J Virol, 1975, 16 : 944. 104.Schoen-
baum M. etal. Vet Res, 1990, 51 :331. 104a.Springer W. etal. Заявка 4208107, ФРГ, за-
явл. 13.03.92 опубл. 16.9.95. 105.Taylor К.С. In Vac and cont AD Ed J T Van Oirschot Brussels,
Luxemburg: ECSC, EEC, EAEC, 1989 :185. 105a.Takahashi H. et.al. Comp Immunol and Inf
Diseases, 1995, 18, 4 :275. 106.Thawley D.G. etal. Livest Conserv Inst South St Paul Minn,
1982:1. 107.Wittmann G. etal. In Devel in Vet Virology, Boston: Klower. Academic Publiscyers,
1989, 230. 108.Wittmann G. et.al. Arch Virol, 1980, 66 :227. 109.Vandeputte J. etal. Am J Vet
Res, 1990, 51, 7 :1100. HO.Vannier P. et.al. Vet Microbiol, 1991, 26, 1 :11. 110a. Vidor T. et.al.
Ard bras med vet e zootech, 1991, 43, 5 :387. lll.Wheeler J. etal. Am J Vet Res, 1991, 52, 11
: 1799. 112. Willians P.W. et.al. Can J Comp Med, 1982, 46, 1 :66. 113.Zimmermann J.J. etal.
Am J Vet Res, 1989, 50 :1471. 114.Yamada S. etal. Vet Microbiol, 1995, 45, 2 :233. 115. The
Upjohn C°, пат. CHIA 5352575, опубл. 04.10.94, (Petrovskis E.A. et.al.).
ИНФЕКЦИОННЫЙ РИНОТРАХЕИТ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Exanthema coitale vesiculosum bovis (лат.); Infectious bovine rhinotracheitis
(англ.); Infectiose bovine Rhinotracheitis/Infectiose pustulose Vulvovaginitis
des Rindes, Blaschenausschlag, Koitaiexanthem (нем.)
Инфекционный ринотрахеит (ИРТ, пузырьковая сыпь, инфекционный вульвовагинит,
инфекционный некротический ринотрахеит, инфекционный ринит,, «красный нос», контаги-
озная бронхопневмония, инфекционный катар верхних дыхательных путей) - остропроте-
кающая контагиозная болезнь КРС, характеризующаяся преимущественно катарально-
некротическими поражениями дыхательного тракта, лихорадкой, общим угнетением и
конъюнктивитом, а также развитием пустулезного вульвовагинита, при попадании вируса в
половые органы животного и абортами.
Болезнь распространена повсеместно. В бывшем СССР впервые диагностирована в 1968
г. и подтверждена вирусологически в 1969 г. (5а). Экономический ущерб слагается из сни-
жения удоя в период болезни (до 50-60%), значительного процента яловости при вагиналь-
ной форме болезни, слабого развития и выбраковки телят из-за слепоты.
Клинические признаки. У КРС болезнь проявляется 5-ю формами: поражением верх-
них дыхательных путей, вагинитами, энцефалитами, конъюнктивитами и артритами. Кроме
того, у телят возможна пневмония. При хронической серозно-гнойной пневмонии погибают
до 20% телят. В зависимости от способа передачи возбудителя болезнь может проявляться с
преимущественным поражением верхних дыхательных путей или половых органов, аборта-
ми, энцефалитами и у телят кератоконъюнктивитами. При генитальной форме поражаются
наружные половые органы, иногда у коров развивается эндометрит, а у быков - орхит, что
может стать причиной бесплодия. У быков, используемых для искуственного осеменения,
ИРТ проявляется рецивирующим дерматитом (облысением, образованием струпьев) про-
межности, вокруг ануса, иногда на хвосте, ягодичной области и мошонке. Инфицированная
вирусом сперма может быть причиной эндометритов и бесплодия коров (Рис. 89).
Аборты и гибель плода в утробе матери отмечались через 3 нед после заражения, что
совпадает с повышением титра специфических АТ в крови матери. Присутствие АТ в высо-
630
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ком титре у стельных коров-реконвалесцентов не предупреждает аборты и смерть плода в
утробе матери. Возможно, с этим свойством вируса связаны его длительная персистенция в
тканях н склонность ИРТ к латентному течению при генитальной форме в эпителии слизи-
стой влагалища, его преддверии н вульве образуются многочисленные разной величины
пустулы (пустулезный вульвовагинит). На их месте появляются эрозии и язвочки. После за-
живления язвенных поражений на слизистой оболочке длительное время остаются гипере-
мированные узелки (Рис. 175). У больных быков процесс локализуется на препуции и поло-
вом члене. Характерным является образование пустул и пузырьков. У незначительной части
стельных коров наблюдают аборты, рассасывание плода или преждевременный отел. Абор-
тировавшие животные, как правило, ранее переболевали ринотрахентом или конъюнктиви-
том. Нередко аборты бывают после прививки живой вакциной против ИРТ. Среди аборти-
ровавших коров возможны летальные исходы из-за метритов и разложения плода. Однако,
нередки случаи абортов при полном отсутствии воспалительных процессов на слизистой
оболочке матки коровы. При ИРТ встречаются случаи острого мастита. Вымя резко воспа-
лено н увеличено, при пальпации становится болезненным. Сильно снижаются надои.
При менингоэнцефалитах наряду с угнетением отмечают расстройство двигательных
функций и нарушение равновесия. Болезнь сопровождается мышечным тремором, мычани-
ем, скрежетом зубов, конвульсиями, слюнотечением. Такой формой болезни, в основном,
заболевают телята 2-6-мес возраста (11).
Респираторная форма инфекции характеризуется внезапным повышением температуры
тела до 41-42 °C, гиперемией слизистой оболочки носа, носоглотки и трахеи, угнетением, су-
хим болезненным кашлем, обильным серозно-слизистым истечением из носа (ринитом) и
пенистым слюноотделением. По мере развития болезни слизь становится густой, в дыха-
тельных путях образуются слизистые пробки и очаги некроза. При тяжелом течении болезни
отмечают признаки асфиксии. Гиперемия распространяется на носовое зеркальце («красный
нос»). Доказана этнологическая роль вируса ИРТ при массовом кератоконъюнктивите мо-
лодняка КРС. У молодняка болезнь проявляется иногда в виде энцефалита. Начинается она
внезапным возбуждением, буйством и агрессией, нарушением координации движений. Тем-
пература тела нормальная. У телят раннего возраста некоторые штаммы вируса ИРТ вызы-
вают остро протекающее заболевание ЖКТ, которое трудно дифференцировать от диспеп-
сии и энтеротоксемии.
У больных животных клинически четко выражена респираторная форма; генитальная
форма часто протекает незаметно. Резкая физическая нагрузка как стресс может вызывать
сдвиги в иммунном состоянии н размножении вируса, влиять на функцию лимфоцитов.
Патологоанатомические изменения. При вскрытии животных, убитых или павших
при острой респираторной форме, обычно обнаруживают признаки серозного конъюнктиви-
та, катарально-гнойного ринита, ларингита и трахеита, а также поражения слизистых обо-
лочек придаточных полостей. Слизистая оболочка носовых раковнн отечна и гиперемирова-
на, покрыта слизисто-гнойными наложениями. Местами выявляют разной формы и величи-
ны эрозийные поражения. Гнойный экссудат скапливается в носовой н придаточной полос-
тях. На слизистых оболочках гортани и трахеи - точечные кровоизлияния н эрозии. В тяже-
лых случаях слизистая трахеи подвергается очаговому некрозу. В летальных случаях воз-
можна бронхопневмония. В легких встречаются очаговые участки ателектаза. Просветы
альвеол и бронхов в пораженных участках заполнены серозно-гнойным экссудатом. Интер-
стициальная ткань сильно отечна. При поражении глаз конъюнктива века сильно гипереми-
ровала, с явлениями отека, который распространяется и на конъюнктиву глазного яблока.
Конъюнктива покрыта саловидным налетом. Часто в ней образуются сосочкообразные бу-
горки размером около 2 мм. Местами на ней выявляют небольшие эрозии и язвочки.
При генитальной форме на сильно воспаленной слизистой оболочке влагалища и вульвы
видны пустулы, эрозии н язвочки на разных стадиях развития. Кроме вульвовагинита, мож-
но обнаружить серозно-катаральный или гнойный цервицит, эндометрит н значительно ре-
631
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
же проктит. У быков-производителей в тяжелых случаях к пустулезному баланопоститу
присоединяются фимоз и парафимоз.
Свежие абортированные плоды обычно отечны, с незначительными аутолитическими
явлениями. На слизистых и серозных оболочках небольшие кровоизлияния. По прошествии
более длительного срока после гибели плода изменения имеют более тяжелый характер; в
межмышечной соединительной ткани и полостях тела скапливается темно-красная жид-
кость, в паранхиматозных органах - очаги некроза.
При поражении вымени обнаруживают серозно-гнойный диффузный мастит. Поверх-
ность разреза отечна, отчетливо гранулирована вследствие увеличения пораженных долек.
При надавливании с неё стекает мутный гноеподобный секрет. Слизистая оболочка цистер-
ны гиперемировала, набухшая и пронизана кровоизлияниями. Местами встречаются эро-
зийные поражения слизистой с фибринозными наложениями. При энцефалитах в головном
мозге гиперемия сосудов, отечность тканей и мелкие кровоизлияния (11).
Гистологические изменения. При респираторном синдроме выявляют острое ката-
ральное воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей, ярко выраженный
клеточный инфильтрат в её толще и подлежащей соединительной ткани, состоящий из ней-
трофильных лейкоцитов и лимфоцитов. Мерцательный однослойный эпителий в поражен-
ных участках разрушается до базальной мембраны. В первые 2 сут болезни в эпителиаль-
ных клетках слизистой оболочки носовой полости, находящихся иа границе с очагом пора-
жения, можно обнаружить внутриядерные включения. В легких при бронхопневмонии на-
блюдают межлобулярные отеки интерстициальной ткани, иногда кровоизлияния. Просветы
альвеол и бронхов пораженных участков заполнены серозным экссудатом с примесью ней-
трофильных лейкоцитов. В перибронхиальной интерстициальной ткани находят обильные
лимфоцитарные инфильтраты.
В конъюнктиве век микроскопически наблюдают инъекцию кровеносных сосудов, ост-
рый катаральный конъюнктивит, ярко выраженную гиперплазию лимфатических фоллику-
лов. Многослойный призматический эпителий слизистой инфильтрирован лимфоцитами и
нейтрофильными лейкоцитами, а в пораженных участках дегенерирован и слущеи вплоть до
базальной мембраны. В некоторых клетках выявляют внутриядерные включения.
Гистологические изменения в слизистой оболочке вульвы, преддверия влагалища и вла-
галища характеризуются явлениями острого пустулезного вульвовагинита. В плоском мно-
гослойном эпителии наблюдают мелкие очаговые дегенеративные изменения клеток глубо-
ких слоев и образование на их месте пустул и пузырьков. Участки пораженной слизистой и
её соединительно тканной основы сильно инфильтрированы нейтрофильными лейкоцитами
и лимфоцитами, на месте лопнувших пустул эрозийные поверхности, покрытые гнойным
экссудатом. В пораженных клетках эпителия внутриядерные включения. При благоприят-
ных условиях заживление дефектов эпителия наступает на 14-е сут. Мелкие гиперемирован-
ные узелки на эпителии слизистой оболочки, остающиеся после заживления дефектов, пред-
ставляют собой лимфатические фолликулы. В абортированных плодах гистопатология ха-
рактеризуется мелкими очаговыми некрозами и кровоизлияниями в почках, легких, печени,
головном мозге, желчном пузыре, матке, влагалище. Матка самки чаще почти совсем не по-
ражена. В вымени находят резкое перерождение и десквамацию эпителия в просвет прото-
ков и цистерны. Просветы альвеол заполнены экссудатом с примесью нейтрофильных лей-
коцитов и клеток спущенного эпителия. В интерстиции органа обнаруживают отек и ин-
фильтрацию клетками крови. В клетках плоского многослойного эпителия - внутриядерные
тельца-включения. В головном мозге обнаруживают хорошо выраженный лимфоцитарный
менингоэнцефалит. Ему сопутствуют периваскулярная лимфоцитарная инфильтрация в раз-
личных- отделах полушарий и мозжечка, сильная инъекция сосудов и отечность вещества
мозга. У животных, которые погибают, в веществе мозга преобладают кровоизлияния, а при
затяжном характере болезни - дегенеративные изменения нервных клеток и клеточно-
пролиферативные процессы глиальных элементов.
632
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус ИРТ впервые выделили в культуре клеток Медин, Йорк и Мак-Керчер в 1956 г.,
Ли и Бейкер - в 1957г (Рис. 87).
Устойчивость. При -60-70°С вирус выживает 7-9 мес, при 56°С инактивируется через
20 мин, при 37°С - через 4-10 сут, при 22°С- через 50 сут. При 4°С активность вируса сни-
жается через 30-40 сут всего лишь на 1 1g. Лиофилизация почти не влияет на его активность,
однако замораживание и оттаивание снижают вирулентность и иммуногенность вируса.
Р-ры формалина 1:500 инактивируют вирус через 24 ч, 1:4000 - через 46, 1:5000 - через
96 ч. Ацетон, эфир, хлороформ и этиловый спирт инактивируют его немедленно. Предпола-
гают, что под воздействием эфира деградирует наружная липосодержащая мембрана вирио-
на или экстрагируется вирусная нуклеиновая кислота. В кислой среде вирус быстро теряет
активность, длительно (до 9 мес) сохраняется при pH 6-9 и в условиях 4°С. Имеются сооб-
щения о выживании вируса в сперме быков, хранящейся при температуре сухого льда, в те-
чение 4-12 мес, а в жидком азоте - в течение года (6, 8,33).
Показана возможность инактивации вируса в свежей сперме быков при обработке её
0,3%-ным р-ром трипсина (14). Активность вируса, хранящегося в лиофилизированном со-
стоянии в течение 3 лет, снижалось на 0,5 1g ТЦД ;о/мл и составляла 6,5 1g ТЦД5о/мл Хране-
ние вируса при -5°С даже в присутствии сыворотки, через год снижало титр вируса на 0,65-
1,21g ТЦД so/мл (66).
АГ структура. В деталях не изучена. Выделено и охарактеризовано 9 структурных бел-
ков вируса ИРТ: VP105, VP90 (гемагглютинин), VP74, VP64, VP54, VP50, VP47, VP40,
VP31. Гликопротеины gl, gill, glY участвуют в формировании гуморального и клеточного
иммунитета. Наиболее эффективным- в этом отношении является gIV (12). По данным PH
наибольшей иммуногенностью обладают VP74 и VP90. Белок, маркированный как VP8 с
мол.м. 96 кД, является одним из главных белков ГВ-1 КРС. Для идентификации его в ви-
рионах и зараженных клетках использовали ИЭМ. Белок VP8 О-гликозилирован, подобно
гомологичному белку VP13/14 ВПГ типа 1. Белок VP8 участвует в модуляции экспрессии
генов класса А. У телят он стимулирует пролиферацию Т-клеток и образование АТ как по-
сле заражения ВГ-1 КРС, так и после иммунизации очищенным белком (65). За индукцию
ВНА ГВ-1 КРС ответственны 4 оболочечные гликопротеина (42, 43). Главными из них яв-
ляются g70 и g97. Эти гликопротеины содержат основные эпитопы нейтрализации вируса
(44). ГА-активность вируса ИРТ КРС ГА-1 КРС связана с мажорным g97, расположенным в
шипиках вириона. Главные нейтрализующие эпитопы расположены на ГА-домене, что сви-
детельствует о перспективности использования ГА-антигена для приготовления субъеди-
ничной вакцины (42,43).
В структуре gIV вируса ИРТ идентифицированы новые 3 нейтрализующие домена. До-
мен 1 содержит 2 перекрывющихся эпитопа, домен 2-1 эпитоп. Домен 1 имеет отношение к
проникновению вируса в клетки-мишени (45). Очищенный gill полностью блокирует аб-
сорбцию полевого штамма ИРТ (47). Максимальную защиту телят в экспериментальных ус-
ловиях обеспечивает gIV. ВНА к 3 оболочечным гликопротеинам (gl, gill, gIV) вируса ИРТ
у экспериментально зараженных телят обнаруживались в носовом секрете и смывах с конъ-
юнктивы. Однако АТ не предотвращали размножение вируса в слизистой оболочке носа и
глаз, а также не сокращали его экскрецию (48).
АГ вариабельность и родство. В настоящее время известно 5 типов герпесвируса КРС:
герпесвирус-1 - возбудитель ИРТ; герпесвирус-2 - возбудитель герпетического маммиллита,
генерализованного поражения кожи, стоматита; герпесвирус-3 - является причиной злокаче-
ственной катаральной лихорадки; герпесвирус-4 - обнаруживается у здоровых животных, а
также у особей с субфибрильной температурой и гнойным дерматитом, при послеродовом
мастите и респираторной инфекции (группа Movar, референтные шт. Movar 33/63 и DN599).
По размеру негативных колоний шт. ГВ-4 КРС классифицированы на 3 класса :1-й- Movar
633
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
33/63, 2-й - LTR РЮ; 3-й - V test и DN599. Рестрикционно-эндонуклеазный анализ ДНК -
лучший способ дифференциации указанных штаммов); герпесвирус-5 выделен от особей,
страдающих лимфосаркомой (синцитийобразующий вирус шт. Пенсильвания 47) (57).
Установлено, что вирусы, выделенные при респираторном (ринотрахеит - 1-й тип) и ге-
нитальном (пустулезный вульвовагинит - 2-й тип) синдромах, в АГ отношении идентичны,
однако имеют различную электрофоретическую подвижность. Показано АГ отличие новозе-
ландских шт. от американских и австралийских шт. (8, 29, 60). В АГ отношении вирус ИРТ
отличается от вирусов простого герпеса, бычьих герпесвирусов типа Allerton, ЗКЛ, БА но
проявляет некоторое родство с вирусом РПЛ в РСК и РДП. По данным Deptula W.et.al.
(17а), существует 3 типа вируса ИРТ КРС: 1, 2 (подтипы 2а, 2Ь) и 3 (подтипы За и ЗЬ). Ус-
тановлено существование АГ вариантов герпесвируса 1 КРС, выявляемых в следующих ре-
акциях: 1) перекрестной PH с сыворотками кролика; 2) гель-электрофорезе меченных ра-
диоизотопами вирусиндуцированных полипептидов и гликопротеинов; 3) взаимодействия с
наборами монАТ, что выявляется реакцией непрямой ИФ, а также при анализе вирусной
ДНК с помощью рестрикционной эндонуклеазы (6, 58, 59). Получены мутанты вируса ИРТ
по ТК (49, 50). Такие делеционные мутанты не способны кодировать синтез этого фермента
в клетках инфицированного организма. Нарушение этой функции генома сопровождается
аттенуацией его при сохранении АГ свойств.
Между тем флюорографический анализ очищенных протеинов показал, что герепесви-
рус -1 (ИРТ) содержит 29 протеинов с мол.м. от 11 до 224 кД, а вирус БА - 25 протеинов с
мол.м.от 21 до 250 кД. Таким образом, между вирусами ИРТ и БА существует АГ родство
(15а). Относительно родства вируса ИРТ и ВПГ (Herpes Simplex) также имеется сообщение
(25). Белок 94К родствен главному белку Р8 внешней оболочки Р13/14 ВГП.
В Танзании АТ к вирусу ИРТ КРС обнаруживались животных у других видов: у 76%
взрослых буйволов, у 33% телят буйволов, у 24% свиней-бородавочников. Лабораторные
животные к экспериментальному заражению вирусом ИРТ невосприимчивы (8).
Локализация вируса. Вирус ИРТ обладает тропизмом к клеткам органов дыхания и
размножения. У телят при ИРТ его находят в носовых истечениях уже через день после по-
явления первых признаков болезни и выделяют в течение 14 дн. Наибольшая концентрация
его в носовой слизи и содержимом конъюнктивального мешка бывает на 5-6-й дн после за-
ражения (4,5-4,75 1g ТЦД 50/мл). Вирус можно выделить также нз слизи, взятой из трахеи,
носовой перегородки, крови, слюны и мочи больного животного. Видимо, существует тро-
пизм вируса ИРТ и к клеткам пищеварительного тракта. В наибольших титрах он обнару-
жен в прямой кишке больных телят (8).
Вирус ИРТ может мигрировать со слизистых оболочек в ЦНС через аксоны нервных
клеток внутри нервных волокон. ЦНС поражается вследствие центростремительного рас-
пространения вируса через тройничный нерв и его гассеров узел, а менингомиелит возника-
ет при проникновении вируса по нервным окончаниям, ганглиям и корешкам в спинной
мозг. Вирус внедряется в нейроны спинномозговых ганглиев и сохраняется там в период ла-
тентной инфекции. Латенция вируса ИРТ порождает ряд проблем, создающих большие
трудности в борьбе с этой болезнью. Оказалось, что после заражения КРС вирулентным
штаммом все животные становятся латентными носителями вируса точно так же, как и все
вакцинные (аттенуированные) штаммы вируса остаются в организме в латентном состоя-
нии. Диссеминация аттенуированных шт. в окружающую среду практически не контролиру-
ется. Вакцинация не предотвращает в организме вакцинированных животных латенции ви-
рулентного вируса. Иммунный статус латентно инфицированных животных влияет на ха-
рактер выделения вируса. Не выяснено, происходит ли рекомбинация аттенуированного и
полевого вирусов в организме латентно инфицированного обоими шт. животного (8, 5).
Относительно сроков вирусоносительства серонегативными животными-реконвалесцен-
тами данные противоречивы. У некоторых они продолжались 6-12 и даже 19 мес. Эпизо-
отологическая роль латентного вирусоносительства при ИРТ не изучена. Описано выделе-
634
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвируспые инфекции
ние вируса герпеса из культур клеток селезенки плода КРС после длительного культивиро-
вания его in vitro (30-67 дн). Вирус ИРТ выделен из тканевых эксплантатов тройничного
нерва клинически здоровых коров (20). Переболевшие животные могут быть серонегатив-
ными, но выделять вирус со спермой (5, 8). Доказано постоянное выделение вируса от ла-
тентно инфицированных телят после введения им синтетических кортикостероидов. В этом
случае вирус выделялся из тканей верхних дыхательных путей и реже - из культур клеток
других органов. От животных, не получавших кортикостероиды, вирус выделить не удава-
лось (5, 8). Показано, что кортикостероиды могут реактивировать персистирующий вирус
даже через 5 лет после первичного заражения. У таких животных уровень АТ, как правило,
остается прежним или же несколько увеличивается; клинически такая провокация сопрово-
ждается поражением эпителия респираторного тракта и слизистой оболочки носоглотки.
При обследовании быков-производителей в 1992-1994 гг. в племхозяйствах Сибири с
использованием гибридизационной тест-системы, содержащей нерадиоактивный (биотини
лированный) ДНК-зонд, показана высокая степень латентной инфекции и эффективность
тест-системы для её выявления (69).
Высказано предположение, что сенсорные ганглии являются местом латентной перси-
стенции вируса и что реактивация его в иммуносупрессированном организме (с помощью
дексаметазона) может привести к распространению вируса от ганглиев через нервные клет-
ки к слизистым оболочкам, при этом он оказывается недоступным воздействию гумораль-
ных АТ. У животных, привитых живой вакциной после провокации кортикостероидом, так-
же могут появиться клинические признаки болезни. Вирус у быков-производителей может
выделяться после переболевания до 6 мес, и они могут заражать коров при случке. Вирусо-
носительство не связано с присутствием АТ, однако с появлением их вирус из влагалищных
выделений выделить не удавалось (8).
Влияние вируса на плод. Плод КРС очень чувствителен к вирусу ИРТ. Заражение его
возможно как во второй половине утробного развития, так и в конце первого периода эм-
бриогенеза. Виремия в постнатальном периоде наблюдается в течение короткого времени и
бывает слабо выражена. Аборты у животных, заболевших во время беременности, как пра-
вило, являются следствием гибели плода. Самый высокий титр вируса обнаруживают в ко-
тиледонах, даже когда в самом плоде вируса уже нет. В плаценте также обычно содержится
много вируса, даже когда нет ее видимых поражений. Изолировать вирус из плаценты впер-
вые удается через 8 дн после заражения беременного животного. Аборт может наступить не
ранее чем через 3 мес после прививки живой вакциной (8,10).
Экспериментальная инфекция. Телят чаще заражают культуральным вирусом, при-
чем в зависимости от метода введения и возраста животных болезнь протекает различно.
При интратрахеальном, интраназальном, алиментарном и интравенозном методах зараже-
ния болезнь протекает в виде ринотрахеита с конъюнктивитом. Для интраназального введе-
ния достаточно 1 мл культуральной жидкости с активностью вируса 105 ТЦД 5о/мл. При ин-
тратрахеальном введении вирус вначале размножается в легких и лишь на 5-й день появля-
ется в носовом секрете. Выделить его удается уже через 3 дня из пораженных тканей трахеи
и гортани. У интраназально зараженных животных находят гипертрофию эпителия с ней-
трофильной инфильтрацией. Основным показателем изменений является потеря ресничек
эпителия трахеи. Это способствует быстрому распространению инфекции, так как разруша-
ется основная линия неспецифической защиты (8, 10). При вульвовагините и конъюнктиви-
те вирус выделяют из экссудата или носовых истечений. При внутривенном, алиментарном
или контактном заражении вирус в наибольшей концентрации обнаруживают в паренхима-
тозных органах, пищеводе, желудке, крови и мышцах на 7-й день после заболевания телят.
Вовлечение в патологический процесс тройничного ганглия является результатом центрост-
ремительного распространения вируса ИРТ вдоль периферического нерва из слизистой обо-
лочки носа. При введении вируса в половые органы появляется локальная
(вульвовагинальная) инфекция, которую обычно диагностируют как инфекционный пусту-
635
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
лезный вульвовагинит. Она характеризуется покраснением, припуханием, болезненностью
слизистой оболочки половых органов. У некоторых животных к 72 ч образовывались пусту-
лы, а затем развивались эрозии и появлялись гнойные выделения.
У нетелей, зараженных в вымя, развивался некроз эпителиальных клеток альвеол и мо-
лочных протоков, который сопровождался инфильтрацией полиморфнонуклеарных клеток.
Экспериментально зараженные телята выздоравливали и, как правило, освобождались от
вируса через 22-60 дн после заражения. В сыворотке их крови через 2-3 нед можно обнару-
жить ВНА в максимальном титре (1:8 - 1:32) (8).
Экспериментально вирусом ИРТ заражаются и козы. Свиней, лошадей, морских свинок,
мышей, новорожденных мышат и КЭ заразить не удавалось. На кроликах удается воспроиз-
вести латентную инфекцию ИРТ. С этой целью кроликов заражали в конъюнктивальный
мешок одного глаза. Вирус выделялся из конъюнктивы в течение 9-14 дн. Кролики получа-
ли 4-дн курс дексаметазона на 2, 3 и 6-й мес после заражения. У всех через 72 ч удавалось
реизолировать вирус, который выделялся в течение 5-7 дн. Возвратная инфекция сопровож-
далась конъюнктивитом (6, 8).
Иногда полевые шт. вируса ИРТ, выделенные от телят с клинической картиной менин-
гоэнцефалита, при интраназальном введении здоровым телятам вызывали заболевание с та-
кой же клинической картиной: вирус проникал по верхне- и нижнечелюстным ветвям трой-
ничного нерва. Установлено обострение ИРТ после заражения телят вирусом ПГ-3 (6,10).
АГ активность. Гликопротеины gl, gill и gIV являются основными АГ вируса ИРТ,
связанными с нейтрализацией вируса; gl и gIV экспрессируются как р-белки, тогда как гли-
копротеин gLU - как у-белок. Поэтому гликопротеины gl и gIV наиболее предпочтительны
при создании вакцины против ИРТ, чем gLU (27).
При раздельной иммунизации телят очищенными гликопротеинами вируса ИРТ - gl и
gIV максимально иммуногенными оказался гликопротеин gIV, а также безвирусный лизат
инфицированных клеток. Предполагается, что гликопептид мол.м. 71,5 кД является АГ, ин-
дуцирующим синтез АТ, участвующих в цитотоксичности, а полипептид VP8 (мол.м. 73 кД)
индуцирует синтез ВНА (17а).
При естественном и экспериментальном заражениях вирус индуцирует образование
ВНА, КСА и ПА. В сыворотке крови переболевших или иммунных животных присутствуют
АТ, которые выявляются РИГА. Нет корреляции между титром АТ и сроками выделения
вируса от больных животных. Показано, что 19S - раннем 7S - поздние АТ быстрее нейтра-
лизуют гомологичные, чем гетерологичные штаммы. ВНА могут быть комплементзависи-
мые и комплементнезависимые. В ответ на первичную естественную инфекцию происходит
накопление первых АТ, титр их быстро снижается и через 6 мес приближается к титру ком-
плементнезависимых АТ. Эти различия можно использовать в ретроспективной диагности-
ке для суждения о давности переболевания животного (8).
В индукции сывороточных ВНА при ИРТ участвуют 4 гликопротеина мол.м. 69-75, 77-
81, 82-92 и 108-115 кД. Поскольку в организме КРС могут персистировать как полевые, так
и аттенуированные (вакцинные) штаммы, метод селективного разрушения АГ при различ-
ных инактивирующих воздействиях (p-пропиолактон, формалин, Уф лучи) открывает воз-
можность антиген специфического серологического тестирования вакцинированных и есте-
ственно инфицированных животных (5, 8).
Установлен переход специфических молозивных АТ против ИРТ у новорожденных те-
лят в секреты дыхательных путей уже в 1 дн после потребления молозива. Титры АТ в сек-
ретах носовой полости в большинстве случаев не превышали 1:8 (в молозиве, сыворотке ма-
терей и сыворотке телят они достигали 1:128 - 1:256) и их устанавливали лишь до 15-20 сут.
после рождения. В носовых секретах Ig М оказывает защитное действие при эксперимен-
тальном инфицировании.
636
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Культивирование. Вирус ИРТ легко культивируется в монослое клеток почки телят
или в эмбрионах коров. При низких титрах вируса его ЦПД в культуре клеток наступает че-
рез 48-96 ч. Это действие легко нейтрализуется специфической сывороткой. Для культиви-
рования пригодны перевиваемые линии клеток почек и тестикулов телят. Изменения в них
развиваются позднее - на 4-6-е сут. Репродукция вируса сопровождается подавлением мито-
тической активности клеток и образованием внутриядерных включений. Сначала появляется
большое число включений, которые, сливаясь между собой, образуют одно крупное включе-
ние с выраженным светлым ободком. Оно занимает почти все пространство ядра. Хроматин
сохраняется в виде узкого ободка, непосредственно прилегающего к ядерной оболочке, це-
лостность которой, как правило, не нарушается. Вместе с включениями выявляются не-
большие симпласты. Клетки пикнотизируются, округляются и отторгаются от стекла (11).
Вирус, выращенный в монослое клеток МДВК, обладает стабильной активностью 6,75-
7,25 1g ТЦД50 (4а, 5). Клетки МДВК эффективно синхронизируются лавастадином - лекар-
ством для лечения гиперхолистеринемии у людей (67). Помимо первичных и перевиваемых
культур клеток используют органные культуры слизистых оболочек верхних дыхательных
путей, ротовой полости, ЖКТ, конъюнктивы, влагалища телят и эмбрионы коров. В культу-
рах из органов вирус обнаруживали через 29 дн после заражения. ЦПД развивалось фокус-
но, сначала по периферии эксплантатов. В органных культурах слизистой оболочки носа и
трахеи телят, убитых на 2-й и 7-й дн после заражения, вирус находили в течение 1-2 мес. В
культуре клеток под агаровым покрытием на 4-6-й дн инкубации вирус ИРТ образует округ-
лые, с ровными краями бляшки, диаметром 1-2 мм (8). В изменчивости вируса ИРТ следует
иметь в виду, что некоторые мутанты (например, gill) с делецией гена гликопротеина могут
реплицироваться в культуре клеток, но они функционально дефектны (26).
Выход вируса ИРТ в системе с микроносителем был в 10 раз выше, чем в стационарной
клеточной культуре и составлял 8,33-8,5 1g ЦПД50/МЛ. Цитопатическое действие вируса пол-
ностью завершалось через 3 дн после инфицирования и его можно было непосредственно
наблюдать в культуре с микроносителем. Суспензионную культуру клеток МДВК на микро-
носителе Gelaspher М используют для крупномасштабного получения вируса ИРТ (40).
ГА свойства. ГА свойства вируса ИРТ связаны с мажерным гликопротеином g97, рас-
положенном в шипиках вирионов. Главные нейтрализующие эпитопы расположены на ГА
домене, что свидетельствует о перспективности использования ГА-антигена для изготовле-
ния субъединичной вакцины (35, 42, 43). Все штаммы ИРТ, выделенные в США, Канаде,
Великобритании, Дании и Малайзии, проявляют ГА-активность в отношении мышиных
эритроцитов. Герпесвирус-1 кошек также агглютинирует мышиные эритроциты, ГА-домены
у бычьего герпесвируса (ИРТ) и герпесвируса-1 кошек, не идентичны. ГА вируса ИРТ явля-
ется структурным протеином вириона и располагаются на вирусных шипиках. Герпесвирус-
1 кошек обладает мажорным (110 кД) и двумя минорными (73 и 67 кД), гликопротеинами,
отличающимися от гликопротеинов вируса ИРТ. У всех штаммов вируса ИРТ очень важный
эпитоп нейтрализации высокой специфичности располагается на ГА. РГА позволяет выяв-
лять вирус ИРТ в материале, концентрация вируса в котором не ниже 107 ТЦД50/мл(5а).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные и
латентные вирусоносители. Особенно опасны быки-производители. Восприимчивые живот-
ные обычно заболевают через 10-15 сут после поступления в неблагополучное хозяйство.
Установлена возможность контактного, интраназального, воздушно-капельного заражения
животных, а также через инфицированные корма, транспортные средства, работников жи-
вотноводства, птиц, насекомых и т.д. Особенно опасна абортивная форма болезни, так как
она трудно выявляется и может быть причиной эпизоотий (6, 8).
Предполагают, что в странах Африки антилопа гну является латентным носителем ви-
руса ИРТ. Помимо того, вирус может реплицироваться в клещах, которые играют важную
роль в возникновении заболевания среди КРС.
637
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ДИАГНОСТИКА
ИРТ диагностируют на основании клинико-эпизоотологических данных, патологоанато-
мических изменений в органах и тканях с обязательным подтверждением лабораторными
методами. Латентную инфекцию устанавливают только лабораторными исследованиями.
Лабораторная диагностика включает: 1) выделение вируса из патологического материала в
культуре клеток и его идентификацию в PH или РИФ; 2) обнаружение АГ вируса ИРТ в па-
тологическом материале с помощью РИФ; 3) выявление АТ в сыворотке крови больных и
переболевших животных (ретроспективная диагностика) в PH или РИГА. Для лабораторной
диагностики ИРТ используют набор диагностикумов ИРТ КРС и набор эритроцитарного ди-
агн ости кума для серодиагностики инфекции в РИГА.
Диагностику ИРТ проводят параллельно с исследованием материала на ПГ-3, аденови-
русную (1 и 2), PC-инфекции и ВД-БС. Схема проведения лабораторной диагностики ИРТ
аналогична применяемой при диагностике аденовирусной инфекции. Предварительный ди-
агноз на ИРТ КРС ставят на основании положительных результатов обнаружения АГ в па-
тологическом материале РИФ с учетом эпизоотологических и клинических данных, а также
патологических изменений. Окончательный диагноз ставят на основании совпадения ре-
зультатов РИФ с выделением и идентификацией вируса; совпадение результатов РИФ с об-
наружением АТ в 30% и более вторых проб сывороток в титрах не ниже 1:2 в PH и 1:26 в
РИГА и обнаружением 4-кратного и более увеличения титра АТ в парных пробах сыворо-
ток. Предварительный диагноз ставят в ветеринарных лабораториях в течение 2-3 дн, окон-
чательный - в течение 15-30 ди.
Выделить вирус из носовой полости, влагалища и с конъюнктивы удается с 5-го по 10-й
дн, а ВНА - с 5-8-го дня после заражения. Более высокий титр АТ наблюдается после 35 дн,
затем начинается медленное снижение. Для выделения вируса ИРТ из бразильской спермы
использовали 2 линии перевиваемых клеток МДВК и метод непрямой ИФ (67). Установле-
но, что максимальное количество вируса выделяется во время подъема температуры тела на
4-7-й дн болезни и продолжался до 10-14 дн (8).
Индикация вируса
Обнаружение специфических телец-включений. В ядрах клеток эпителия поражен-
ных слизистых оболочек носовой полости, вульвы, вагины и конъюнктивы находят специ-
фические тельца-включения. Через 18-20 ч после заражения их можно обнаружить в клет-
ках культуры, окрашенной гематоксилин-эозином.
Выделение вируса. Вирус выделяют в культурах клеток почек телят, почек эмбрионов
телят, тестикул бычков. В настоящее время для выделения вируса ИРТ используют 2 линии
клеток МДВК. Эти клетки активно синхронизируются ловастатином (лекарство для лечения
гиперхолинестерии у людей). У синхронизированных клеток экспрессия генов ГВ-1 КРС не
зависит от фазы клеточного роста (70). В этой линии клеток выделяли вирус из бразильской
коммерческой спермы с признаками ЦПЭ и подтверждением методом прямой ИФ (67).
Экспресс-методы индикации. В ранее опубликованных работах (72, 73) для обнару-
жения вируса ИРТ применен метод молекулярной гибридизации с использованием радиоак-
тивно меченых ДНК-зондов. Однако более перспективным является применение нерадиоак-
тивного метода детекции вирусной ДНК. Описаны выявленные последовательности BHV-1
гибридизацией in situ с помощью меченного биотином ДНК-зонда, сконструированного пу-
тем клонирования Hind-III фрагмента вирусного генома в плазмиду (74). Предложенный
зонд также имел существенный недостаток, поскольку неспецифически связывался с ДНК
вируса БА. Поэтому разработан нерадиоакгивный метод детекции вируса ИРТ на основе
высокочувствительного зонда, меченного биотином. Время тестирования биотинилирован-
ного зонда составляет около суток, что существенно меньше по сравнению с вирусологиче-
ским тестированием (до 40 дн). Наиболее важным представляется использование биотини-
лированного ДНК-зонда в случае выявления вируса в период карантинирования вновь заве-
зенных животных, а также для обнаружения заболевания на ранних стадиях и диагностики
638
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
латентной формы ИРТ для выявления возможного содержания вируса ИРТ в сперме быков
(71). Разработана также ГЩР для обнаружения герпесвируса типа 1 КРС, PC-вируса КРС и
пестивирусов (71). ГЩР на основе праймеров из гена gl вируса КРС позволяет обнаруживать
3 пг чистой вирусной ДНК, 0,1-1,0 ТЦДз0/мл или единственную зараженную клетку. Вирус
ИРТ успешно выявляли в назальных смывах зараженных телят, сыворотке и сперме (68).
Серологическая идентификация
ИФ. Техника постановки её такая же, как и при диагностике аденовирусной инфекции
КРС. Обращают внимание на свечение АГ в цитоплазме и перинуклеарной зоне неповреж-
денных клеток. Ярко-зеленая флюоресценция в виде гранул или диффузного свечения цито-
плазмы не менее чем в 10% клеток позволяет оценить препарат как положительный. Пред-
варительный диагноз ставят при наличии не менее 30% положительных препаратов от об-
щего количества исследованных проб. В мазках из влагалища и конъюнктивы специфиче-
скую флюоресценцию отмечали через 24 ч, из препуция - через 48, из носа и трахеи - через
72 ч после заражения. Присутствие специфического АГ удается подтвердить заражением
культуры клеток почки телят, в которой обнаруживается специфическая перинуклеарная и
диффузная цитоплазматическая флюоресценция, свойственная ИРТ. Использование культу-
ры клеток почки кролика позволяет освободиться от неспецифического свечения.
Совпадаемость результатов ИФ и патологоанатомических изменений составляет 87%, а
ИФ н вирусологических исследований - 44%. При параллельном исследовании сывороток в
PH и РИГА результаты совпадали в 94% случаев. В полевых условиях РИФ оказалась поло-
жительной в 18,5%, а метод вирусовыделения - в 15,9% случаев. РИФ можно использовать
для экспресс-диагностики ИРТ с последующим подтверждением диагноза вирусологически-
ми методами (6, 8).
PH. При наличии ЦПД в культурах клеток, зараженных изолятом, и положительной ИФ
проводят окончательное типирование вируса в PH, которую ставят общепринятым методом
в первичной культуре ПЭК или перевиваемой линии клеток МДВК. Результаты PH учиты-
вают по ЦПД вируса, для чего определяют титр типируемого изолята в присутствии специ-
фической и отрицательной контрольной сывороток. Титр рассчитывают по методу Рида и
Менча и выражают в ТЦДзо/мл. Затем вычисляют индекс нейтрализации. Видовую принад-
лежность изолята устанавливают при разности в титрах вируса не менее 2 1g; при разности
нейтрализации от 1 до 2 реакцию считают сомнительной, в этом случае её повторяют; при
разности нейтрализации менее 1 реакцию считают отрицательной. При положительных ре-
зультатах PH изолят считают полностью идентифицированным (37).
РТГА. Ставят её микрометодом при 4°С с 0,5-1%-ной взвесью эритроцитов белых мы-
шей, разбавитель - трис-буферный р-р с 0,2% БСА. В качестве АГ используют культураль-
ную жидкость, которую концентрируют ПЭГ-6000 или ультрацентрифугированием (7).
ELISA. Иммунопероксидазный метод можно использовать для исследования прижиз-
ненно взятых нозофарингиальных мазков-отпечатков в клетках, полученных из носовых
смывов. Кроме того, для лабораторной идентификации вируса ИРГ рекомендован непрямой
антикомплементарный иммунопероксидазный метод НАИП (7). При световой микроскопии
он обеспечивает четкое выявление вирусного АГ в цитоплазме инфицированных клеток в
виде окрашенных в коричневый цвет образований, которые видны при увеличении в 140
раз. Специфичность показателей, полученных этим методом, подтверждается постановкой
специальных иммунологических контролей. При постановке перекрестной иммуноперокси-
дазной реакции с гетерологичными АГ эта реакция имеет выраженный видоспецифический
характер: АГ реагирует только с гомологичной сывороткой. Эндогенная пероксидаза в куль-
туре клеток ПЭК и LF не выявляется.
Таким образом, НАИП является перспективным при диагностике острых респиратор-
ных вирусных инфекций КРС (7, 8). При использовании его для индикации вируса ИРТ в
культуре клеток ПЭК АГ выявляется через 18-22 ч после заражения. Три прямых серологи-
639
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ческих метода быстрого обнаружения вирусных АГ (ИФ, ИФА и ELISA) одинаково приме-
нимы для обнаружения вируса во время лихорадки, но не на поздних стадиях болезни.
Идентификация с помощью монАТ антител. Иммунопероксидазный метод с исполь-
зованием монАТ является более чувствительным и специфичным по сравнению с обычными
методами выделения вируса. Помимо того, данный метод имеет преимущество в быстроте
получения результатов (32). Быстрое подтверждение вируса ИРТ (инфекции) возможно ме-
тодом культивирования его с последующим ИФА зараженной культуры с использованием
монАТ (51). Проведена молекулярная характеристика южноамериканских изолятов герпес-
вируса-1 (ИРТ) КРС с помощью монАТ и электрофореза в полиакриламидном геле с доде-
цилсульфатом натрия (52).
Идентификация посредством рестрикционного анализа ДНК. Описаны методы
клонирования фрагментов генома вируса ИРТ, выделение и характеристика рекомбинантно-
го ДНК-зонда, которые позволяют определять вирус в клинических пробах. Усовершенство-
вана гибридизационная тест-система, основным компонентом которой является биотинили-
рованный 1-нитевый ДНК-зонд (1). С помощью метода дот-блот-гибридизации выявлена
ДНК вируса ИРТ в пробах спермы, полученной от серопозитивных животных, когда выде-
ление вируса в культуре клеток давало отрицательный результат. Хороший результат также
получен при использовании инфицированных культур клеток.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. АТ к вирусу ИРТ можно обнару-
жить в сыворотках крови больных и переболевших животных в PH, РИГА и др. Для поста-
новки ретроспективного диагноза используют парные пробы сывороток, взятые с интерва-
лом в 3 нед. Результат серодиагностики учитывают по возрастанию титра АТ в парных про-
бах сыворотки, а также числа серопозитивных животных через указанный интервал (62).
PH. Ставят методом разведения испытуемых сывороток с постоянной дозой вируса в
культуре клеток ПЭК или ТБ. Вирус предварительно титруют в культуре клеток. Заражен-
ные и контрольные культуры инкубируют при 37°С, ежедневно учитывая ЦПД вируса,
окончательный учет проводят на 5-7-е сут. Наибольшей чувствительностью обладает PH,
основанная на 24-ч инкубации смеси вирус-сыворотка (7, 36). Титром вируса считают об-
ратную величину его наибольшего разведения, вызывающего ЦПД в 50% культур, который
высчитывают по методу Рида и Менча, или Кербера и выражают в ТЦДз0/мл. Тигры 1:32,
1:64 обнаруживаются редко. В неблагополучных по данной болезни стадах ВНА выявляют-
ся у 12% клинически здорового скота. Ретроспективный диагноз на ИРТ ставят при 4-
кратном и более приросте АТ в пробах сывороток реконвалесцентов. В настоящее время
широко используют микрометод PH (7).
РИГА. Биологическая промышленность нашей страны выпускает эритроцитарный ди-
агностикум. РИГА ставят согласно методическим указаниям в микропанелях с U-образными
лунками наборов микротитрования Такачи или Титертек по общепринятой методике. Ре-
зультаты РИГА с используемыми сыворотками оценивают по титрам; положительные -1:16
и выше, сомнительные - 1:8, отрицательные - 1:4, 1:2 и нулевые. Увеличение титров АТ в
парных сыворотках в 2-4 раза свидетельствует о наличии инфекции (61). Применяя РИГА,
можно обнаружить АТ в более ранний период инфекции, чем с помощью PH. Установлено
соответствие результатов РИГА и PH в 95% случаев. Высокие титры чаще выявляли в
РНГ А. С помощью данной реакции легче и быстрее, чем PH проводить типирование АТ к
вирусу ИРТ. Титры АТ были в 7-10 раз выше выявляемых в PH (7).
РДП. Не нашла широкого применения в диагностической практике, хотя многие иссле-
дователи рекомендуют её использовать для серодиагностики ИРТ. Marchang (1982) считает,
что диагностика по наличию ПА имеет ряд преимуществ по сравнению с PH: она проще и
быстрее в постановке, чем PH. ПА обнаруживают вскоре после введения вируса в организм,
но они быстро исчезают. По наличию ПА можно уловить недавно прошедшую инфекцию, в
то время как ВНА длительно циркулируют в организме, и заболевание можно уловить толь-
640
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ко по парным сывороткам (7). При выявлении ПА лучше всего брать пробы крови на 8-й и
последующие дн болезни.
РТГА. Может использоваться для выявления и количественной оценки АТ к вирусу
ИРТ. Титр анти-ГА коррелирует с титром ВНА (7). Положительный результат РТГА уже в
1-ом разведении сыворотки (1:4) указывает на наличие АТ к вирусу ИРТ в данной пробе
сыворотки. 4-кратный и более прирост титров анти-ГА в парных пробах сыворотки является
показателем активной инфекции.
ELISA. Широко применяют в Нидерландах, США, Великобритании, Швеции, странах
бывшего СССР. Он оказался пригодным для обнаружения АТ к вирусу ИРТ в молоке. Для
этого достаточно получения проб смешанного молока от 5-10 коров. АТ определяют после
предварительного концентрирования в них 1g. Совпадаемость данных серологических реак-
ций в пробах сыворотки крови и молока составляла 92,8%. С помощью данного метода
можно оперативно определять иммунологический статус поголовья лактирующих коров це-
лого региона, а также проводить обследование экспортируемых и импортируемых животных
(24). В ФРГ разработан и применяется метод ТРАХИТЕСТ для ИФА проб сборного молока
коров с целью диагностики скрытого вирусоносительства (7).
Предложен непрямой метод IgM-ELISA для определения недавней инфекции ИРТ. Ран-
ние AT IgM выделены на 6-й дн после заражения, к 9-му дн происходил рост титра AT 1g, а
к 13-му дн - ВНА. У телят, привитых инактивированной вакциной, раннего иммунного от-
вета не происходило - AT IgM не выявлялись, a IgM и ВНА появлялись позже, чем после
заражения. Однако при этом следует иметь в виду, что наличие в сыворотке КРС ревмато-
идного фактора может привести к ложноположительным результатам диагностики в IgM-
ELISA. В этом случае предварительная обработка проб сыворотки антибычьими IgM позво-
ляет избежать ложноположительных результатов. Тест IgM-ELISA имеет большую ценность
в диагностике ИРТ, особенно у молодых животных. В группе позитивных сывороточных
проб корреляция между ELISA и РИГА составляла 98,3%, a ELISA с ИФ - 95,7% (17).
ELISA с использованием монАТ. Основан на конкуренции между АТ сыворотки кро-
ви КРС и нейтрализующими мышиными монАТ. Для его проведения лунки микротитраци-
онных панелей обрабатывают очищенным вирусом ИРТ, и после высушивания их можно
использовать немедленно или хранить при - 20° С. В обработанные вирусом лунки панелей
последовательно вносят неразведенную испытуемую сыворотку, специфические к вирусу
ИРТ монАТ, конъюгированные пероксидазой, субстрат пероксидазы. Результаты реакции
учитывают в спектрофотометре при А405. В случае положительной реакции связывание мо-
нАТ ингибируется АТ сыворотки крови. Метод оказался намного чувствительнее и специ-
фичнее PH.
Аллергическая проба. Установлено, что при экспериментальном заражении наступает
аллергизация организма, проявляющаяся положительной кожной аллергической реакцией
уже на 7-й день после заражения, а при вакцинации живой вакциной это происходит через 2
нед после вакцинации, при естественном заражении (спонтанные аборты) аллергизация
также наступает быстрее. В Болгарии и ФРГ применяют кожно-аллергическую реакцию для
выявления переболевших и вакцинированных животных (8).
С целью унификации методов дифференциальной диагностики болезней, проявляющих-
ся с везикулярным синдромом, получены высокоактивные препараты для идентификации
возбудителей ИРТ и ВД КРС. Использование этих праймеров при вирусологической экспер-
тизе патологических материалов оказалось особенно полезным при смешанном течении
ящура и указанных болезней. Применение ранее разработанных для диагностики ящура ме-
тодов изготовления специфических АГ и антительных препаратов дает возможность изго-
товления аналогичных по качеству диагностикумов при идентификации вирусов ИРТ и В Д и
унификации для схемы дифференциальной диагностики основных болезней, протекающих с
везикулярным синдромом и наиболее часто осложняющих диагностику ящура (41).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
41 Зак, № 171 641
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Переболевание сопровождается стойким и длительным иммунитетом, который может
передаваться потомству с АТ молозива. Иммунитет у переболевших животных длится не
менее 1,5-2 лет, однако у животных-реконвалесцентов, имеющих АТ, состояние абсолютной
иммунности бывает редко, и их следует рассматривать как потенциальный источник инфи-
цирования других животных. Даже выраженный гуморальный иммунитет не предотвращает
персистенции вируса. В случае реинфекции вновь происходит размножение и выделение ви-
руса, хотя болезнь протекает без видимых клинических признаков. При возникновении по-
вторного заболевания трудно бывает отличить реинфекцию от реактивации персистирующе-
го вируса. Поэтому всех животных, имеющих АТ к ИРТ, следует считать носителями виру-
са, находящегося в состоянии латенции (5).
Слизистые оболочки респираторного и генитального трактов больных животных проду-
цируют IgA и интерферон. АТ в сочетании с комплементом ограничивают, но не исключают
распространения вируса ИРТ в организме. В подавлении инфекции клеточный иммунитет
при ИРТ более эффективный, чем гуморальный и в основном связан с Т-лимфоцитами и
макрофагами. Инактивация ТК-гена снижает способность вируса (1-го типа) вызывать
аборты у привитого КРС (31).
Живые вакцины. Живые вакцины при ИРТ отличаются большим разнообразием.
Только в США применяют 14 вариантов живых вакцин (51). Большинство из них - штаммы
вируса, аттенуированные длительным пассированием в первичных культурах и перевивае-
мых линиях клеток. В Бельгии и Японии применяют ts-мутанты. Живые вакцины при ин-
траназально-внутримышечном применении обусловливают хороший локальный иммунитет
и защиту животных от клинического проявления инфекции. При вакцинации живыми вак-
цинами необходимо использовать такие штаммы, которые не способны к персистенции, ибо
не исключается возможность возникновения рекомбинантных вариантов при взаимодейст-
вии аттенуированного и вирулентного штаммов вируса. В качестве живой вакцины предло-
жен дефектный по ТК иммуногенный мутант, способный персистировать в организме при-
витых телят не менее 3-х мес и передаваться телятам без перехода в ТК-генотип (22).
В РФ и странах СНГ для профилактики ИРТ применяют живую вакцину ТК-А (ВИЭВ).
Её вводят подкожно в дозе 2105 ТЦДз0/мл. Иммунитет у привитых животных наступает на
5-7-й день после вакцинации и сохраняется не менее одного года. Широко применяют также
живую бивалентную вакцину “Бивак”, содержащую 2 вакцинных штамма: ПГ-3 и ИРГ.
Вакцина “Бивак” производится биофабрикой, она безвредна, иммуногенна (7,10).
Персистенция и экскреция аттенуированного штамма вируса обнаружены также при
применении других живых вакцин. Особенно часто и длительно вакцинный штамм вируса
ИРТ выделяется со спермой привитых быков (19). Введение живой вакцины во время аст-
рального периода может сопровождаться поражением яичников (28), а вакцинация в ранний
период стельности прерыванием беременности (30).
Считается, что интраназальная вакцинация более эффективна, чем подкожная или внут-
римышечная. При интраназальном введении вакцинный вирус быстро - в клетки верхних
дыхательных путей и глоточного кольца, а при генитальном введении проникает в эпители-
альные клетки влагалища или препуция. Размножаясь в указанных клетках, вирус может
выделяться во внешнюю среду в течение 2-х нед. Преимущество интраназальной вакцина-
ции состоит в том, что при этом усиливается синтез IgA и локальное образование интерфе-
рона. Считается, что сухая вакцина для парентерального или интраназального (гениталь-
ного) применений должна содержать не менее 105 и 104 ТЦД50/мл (15).
Патентуется живая поливалентная вирус-вакцина из 5 типов аттенуированных вирусов
наиболее широко распространенных в Японии и других странах: вирус ИРТ, ВД-БС, ПГ-3,
PC-вирус и бычий аденовирус 7-го типа. Все компоненты приготовлены в клеточных куль-
турах. Поливалентность препарата усиливает эффективность вакцинации КРС (73).
Рекомбинантные вакцины. В ген gill аттенуированного вакцинного штамма ИРТ
(NY) dltk была встроена мономерная вставка эпитопов белка Р1 вируса ящура. Полученная
642
Г лава XVI. Family Hapesvirida Г ерпесвирусные инфекции
модифицированная живая вакцина защищала телят от ИРТ и ящура. Получен также реком-
бинант вируса ИРТ, экспрессирующий димерную (голова - к хвосту) вставку эпитопов виру-
са ящура. Возможно получение рекомбинантов с 3-валентными вставками эпитопов вируса
ящура серотипов О, А и С (23). Получена генно-инженерная вакцина из мутанта вируса ИРТ
с делециями в генах минорных гликопротеинов (55).
Инактивированные вакцины. По степени разрушения АГ детерминант инакгиванты
располагаются следующим образом: Уф облучение, нагревание (56°С), р-пропилакгон,
формальдегид и димерэтиленинин. В РФ применяется инактивированная димерэтиленими-
новая вакцина из эпизоотического шт. 4016, в которой в качестве адъюванта используется
аэросил. В Чехословакии используется формолвакцнна с масляным адъювантом из вируса с
исходным титром 108 ТЦД50/МЛ. Препарат применяется двукратно в дозе 2 мл с 4-нед ин-
тервалом. У вакцинированных животных формируются гуморальные (1:128 - 1:256) и сек-
реторные (1:2-1:8) АТ. Наблюдалась корреляция между уровнем сывороточных АТ и устой-
чивостью телят к заражению. Однако вакцинация серонегативных телят не предупреждала у
них постинфекционной латенции вируса, но препятствовала ей у ранее перенесших спон-
танную инфекцию (39). Колостральный иммунитет длился 4-5 мес. Вакцинация телят инду-
цировала сероконверсию лишь тогда, когда уровень материнских АТ у них был очень низ-
ким (15). Применение инактивированной вакцины против ИРТ среди 100% серопозитивных
коров способствовало снижению числа случаев патологических состояний, ассоциирован-
ных с инфекцией этим вирусом. Отмечено также и улучшение некоторых показателей вос-
производства: повышение процента рождаемости, снижение количества случек, необходи-
мых для оплодотворения, уменьшение числа спонтанных абортов. Уже после однократной
вакцинации у коров и стельных нетелей обнаружено повышение титра АТ к ИРТ (6-9 1о&)
независимо от тира АТ до вакцинации (16). Инактивированные вакцины, как и живые, при-
меняют двукратно с 2-3-нед интервалом. Эффективность инактивированных вакцин против
ИРТ зависит от концентрации АГ н природы адъюванта (5). Для оценки иммуногенности
вакцины против ИРТ можно использовать кроликов в качестве лабораторной модели. По
титрам накопления ВНА у привитых внутримышечно кроликов судят о качестве вакцины (4,
53). Высокоиммуногенной оказалась инактивированная вакцина против ИРТ с двухкомпо-
нентным масляным адъювантом ВНИЯИ и ГОА-сапоннновым адъювантом (2).
Субъединичные вакцины. Показано минимальное размножение вируса ИРТ в орга-
низме животных, иммунизированных гликопротеином gIV, который может быть использо-
ван в качестве субъединичной вакцины в сочетании со свободным от вируса лизатом инфи-
цированных клеток (38). Субъединичную вакцину готовили в виде иммуностимулирующего
комплекса (ИСКОМ) нз вирулентного штамма вируса герпеса типа 4 КРС. Очищенный ви-
рус обрабатывали 1%-ным l-o-h-октил-глюкопиранозидом в течение нескольких часов при
4°С, затем центрифугировали в ступенчатом градиенте сахарозы. После диализа осадок рас-
творяли в фосфатном буфере. Препарат в дозе 50 и 100 мкг вирусных компонентов дважды
вводили внутримышечно 4-мес телятам с интервалом в 4 нед. Через 2 нед после второй вак-
цинации животных заражали интраназально вирулентным вирусом ИРТ. Все животные,
иммунизированные ИСКОМ вакциной не заболели, вирус в носовом секрете не обнаружи-
вался, титр ВНА составлял 1:3500 и выше. У телят, иммунизированных коммерческой вак-
циной, наблюдали подъём температуры и наличие вируса в носовом секрете (56). При испы-
тании на телятах не было выявлено корреляции между титром сывороточных ВНА и устой-
чивостью к заражению. Запатентован метод получения субъединичной вакцины на основе
полипептидов герпесвируса КРС 1-го типа (54). В качестве кандидата в вакцину использо-
вали мажорный гликопротеин gIV вируса ИРТ КРС. Опытных животных вакцинировали
дважды с 3 нед интервалом. Препарат индуцировал ВНА в сыворотке крови и в слизистой
носовых путей. Иммунизация приводила к предупреждению развития клинических призна-
ков заболевания при экспериментальном заражении разрешающей дозой вируса (63,75).
41*
643
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Сравнение иммуногенности субъединичной и инактивированной вакцины с масляным
адъювантом дало сходные результаты. Титр гуморальных АТ у КРС после 1- и 2 кратного
применения субъединичной вакцины был выше, чем при прививке инактивированной вак-
циной. Секреторные АТ формировались лишь после 2 кратной вакцинации и были равно-
значными у животных, привитых обоими препаратами. В ФРГ имеется хороший опыт соче-
танного применения живой и инактивированной вакцины против ИРТ. Живую вакцину вво-
дили двукратно с интервалом в 6 нед сразу после установления диагноза. Спустя 7 мес 2
кратно с тем же интервалом вводили инактивированную вакцину. В результате такой вак-
цинопрофилактики новых случаев заболевания не регистрировали. Спустя 4 г. после пре-
кращения вакцинации животные оказались серонегативными. Авторы (13) оценили предло-
женную ими схему применения живой и инактивированной вакцин как эффективную для
оздоровления поголовья от ИРТ.
Поскольку вирус ИРТ может приживляться и длительно персистировать в организме
вакцинированных животных, трудно однозначно ответить на вопрос о значении специфиче-
ской профилактики в оздоровлении хозяйств от ИРТ или точнее - можно ли путем система-
тического применения вакцин освободить хозяйство от носительства полевых штаммов ви-
руса. Имеются сообщения о том, что полного оздоровления можно достичь лишь в результа-
те систематического (4-летнего) применения в хозяйстве инактивированной эмульгирован-
ной вакцины (18).
Связь уровня антител с резистентностью животных. Полной связи меяоду титрами
гуморальных АТ и невосприимчивостью к вирусу нет. Даже низкий уровень АТ может за-
щитить животное от заражения. Эго кажущееся противоречие можно объяснить тем, что в
устойчивости организма к инфекции большое значение имеют местные (секреторные) АТ и
другие факторы иммунитета. Вирус ИРТ в организме индуцирует синтез интерферона, кото-
рый препятствует размножению вируса в клетках. Интерферон в высоких титрах обнаружи-
вается в течение 7 дн при внутривенном введении вируса. Установлено н локальное образо-
вание интерферона в дыхательных путях при интраназальном и интратрахеальном зараже-
ниях. Вакцинный вирус также обладает высокой интерфероногенной активностью. Наступ-
ление ранней невосприимчивости у вакцинированных телят связано с появлением интерфе-
рона. Видимо, выявление специфических АТ в сыворотке крови не является точным инди-
катором иммунитета, хотя остается критерием при иммунологической оценке. Большинство
авторов считают, что ВНА в титре 1:2-1:4 защищают животных от заражения. Телята,
имеющие индекс нейтрализации сыворотки крови 2,4 и 2,83±0,9 н титр АТ в РИГА 1:232,
клинически не реагировали на введение вирулентного вируса (6,8).
Связь титров антител с вирусоносительством и вирусовыделением. Иммунизация
животных живыми вакцинами против ИРТ снижает, но не предотвращает латентной инфек-
ции у КРС. Со временем титр поствакцинальных АТ при ИРТ снижается, но так как вирус в
организме переболевшего и вакцинированного животного может реактивироваться из ком-
плекса вирус-антитело, то содержание АТ колеблется. По-видимому, этим и обусловлено
выделение персистирующего вируса. Даже у животных с высоким титром АТ вирус ИРТ
был выделен из миндалин и лимфоузлов. В качестве профилакгичских мер рекомендуют ре-
гулярное исследование проб сыворотки крови от быков-производителей на наличие АТ, а
материала из препуция - вируса.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Изучением иммуногенных
свойств вирус вакцины против ИРТ на коровах установлено, что при 1 кратном введении
препарата максимальный уровень АТ отмечали через 1-2 мес после вакцинации. Через 6
мес титр АТ в РИГА снижался вдвое, а через 9 мес он был на уровне иммунного фона. Ди-
намика ВНА имела такую же закономерность. Однако ВНА на высоком уровне удержива-
лись дольше. Повторная иммунизация приводила к повышению титра гуморальных АТ. У
телят, полученных от вакцинированных коров, титр гуморальных АТ был выше, чем у их
матерей. Пассивно передающиеся АТ в сыворотке крови телят и секретах из носовой полос-
644
Г лава XVI. Family Hetpesvirida Г ерпесвирусные инфекции
ти появлялись уже в 1 дн после потребления молозива. Титр их в секретах носовой полости
в большинстве случаев не превышал 1:8 в первые 15-20 сут после рождения (6,7).
Длительность циркуляции поствакцинальных антител. У коров через 9 мес после
прививки живой вакциной в РИГА с сывороткой крови АТ не выявлялись. Колостральные
АТ сохранялись в крови телят в достаточно высоком титре до 30 дн с последующим сниже-
нием к 60-му дн. Эффективность вакцины против ИРТ в Венгрии долгое время определяли в
тесте нейтрализации с сывороткой вакцинированных телят. В настоящее время предложен
более чувствительный метод (21). Коэффициент корреляции между титром в PH и ELISA
составлял 0,789.
Серопрофилактика. Для серопрофилактики ИРТ, ПГ-3 и аденовирусной инфекции ги-
периммунные поливалентные сыворотки удается получать на лошадях, которых иммунизи-
руют АГ, инактивированными электрическим полем или лазерным излучением. АГ приме-
няют с масляными адъювантами (3). Поливалентные сыворотки до настоящего времени
применяют в промышленных комплексах по доращиванию и откорму молодняка КРС (9).
Меры борьбы. Меры борьбы обстоятельно изложены в нормативно-технической доку-
ментации, утвержденной Департаментом ветеринарии МСХП Российской Федерации. Про-
ведение мероприятий, изложенных в наставлении по борьбе с ИРТ, где предусмотрены на-
дежная, систематически проводимая диагностика (включая исследование спермы быков-
производителей на племенных станциях), строгий контроль за перемещением скота и актив-
ная профилактика обеспечивает создание устойчивого благополучия хозяйства в отношении
ИРТ. Это подтверждается фактами из зарубежной ветеринарной практики. Так, первая
вспышка ИРТ в Швейцарии была искоренена полностью. Для обеспечения безинфекционно-
го стада КРС в Венгрии проводится регулярное серологическое тестирование и удаление из
стада инфицированных животных, вакцинация, дезинфекция и борьба с грызунами (34).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Глотов А.Г. и др. Матер, н. конф. ВНИВВИМ, 1992 :192. 2.Жестерев В.И. и др. Тез. докл.
и.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :124. З.Жерносян И. А. и др. Совр. аспекты проф. бол. молодня-
ка, 1989 :55. 4.3акутский Н.И. и др. Матер, н. конф. ВНИВВИМ, 1992 :142. 4а.3акутский
Н.И. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :90. б.Закутский Н.И. и др. Матер, н.
конф. ВНИВВИМ, 1992 :143. 5.Сергеев В.А. - Вирусные вакцины. Киев, Колос, 1994.
5а.Крюков Н.Н. и др. Ветеринария, 1982, 9 :16. б.Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Част. вет. виру-
сология. М., Колос. 1979. 7.Сюрин В.Н. и др. - Мет. лаб. диагн. вир. бол. жив. М., Колос,
1986. Я.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив. М., Агропромизд, 1991. 9.Сюрин В.Н. и др.
Вет. вирусол., М., Колос, 1991. Ю.Фомина Н.В. и др. Вирусы животных. Уч. пособие, MBA,
1991 :319. П.Чевелев С.Ф. Пат. анат. диагн. вир. бол. жив., М., Колос, 1984 :66. H.Babinik
L.A. Acta microbiol, 1991, 38, 3:163. 13.Bolle Н. et.al. Tierarztl Umsch, 1986, 3 :167.
14.Bielanski A. et.al. Theriogen. 1988, 30, 4 :649. 15.Bognar K. et.al. Magy allatow lapja 1986,
41 :647. 16.Gistet I. et.al. Lucrlnst Cere Vet si bioprepr Posteur 1991, 19 :23. 17.Deak J. et.al.
Acta micr. 1991, 38, 3 :186. IS.Durand M.P.et.al. Bull Acad Veter FR. 1984, 57 :455.
19.Gregersen J.P. et.al. Zbl Vet med. 1985, 32 :354. 20.Homan E.J. et.al. Am J Vet Res. 1980, 41,
8 :1212. ll.JuhaszT. et.al. Actamicr hung. 1991, 38 :3. 22.Kit S. et.al. Arch Virol. 1985, 86:63.
23.Kit Molon etal. Prev AIDS: Conf Cold Spring Harbor N.Y. Gold 1991 :327. 24.Kita Jerzy
et.al. Med Vet, 1991, 47, 10 :457. 25.Lasassiere S. et.al. J Gen Virol, 1992, 73, 11 :2941.
26.Liang X. et.al.. J Virol. 1991, 65, 3 :1124. 27.Ludwig G. et.al.. J Virol. 1987, 6110 :3292.
28.Maaten M.J. et.al.. Amer J Vet Res. 1985, 46 :1996. 29.Miller J.M. et.al.. Am J Vet Res.
1988, 49, 10 :1653. 3O.Miller J.M. et.al.. Amer J Vet Res, 1989, 50 :551. 31.Miller J.M. et.al..
Amer J Vet Res, 1991, 52, 7 :1038. 32.Rodriguez M. et.al. Am J Vet Res, 1989, 50, 5 :619.
34.Tanyi J. etal. Acta Vwt hung. 1992, 40, 3 :165. 35.Trepanier P. et.al. Veter Microb, 1988, 18,
3/4 :219. 36.TrybotaE. et.al. Med Vet, 1992, 48, 8 :345. 37.Ungar-Waron H. et.al. Vet Microb,
1991, 28, 1/2 :53. 38.Van Drunen L. et.al.. Vaccine 1990, 8, 4 :358. 39.Zuffa F. et.al. Veterinar-
645
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
med. 1985, 32 :724. 40.Lesko J. et.al.. Acta Virol. 1993, 37, 1 :73. 41.Шажко Ж.А. и др. Тез.
докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :115. 42.Scott N.A. et.al. Vet Microbiol, 1988, 16 :109,
43.Trepanier P. et.al.. Vet Microbiol, 1988, 18 :219. 44.Taylor H.R. etal. J Virus Res, 1985, 3,1
: 115. 45.Yughes G. et.al.. Arch Virol, 1988, 103 :47. 46.VanDrunen L.H. et.al. Vaccine, 1990, 8
:358. 47.Liang et.al.. J Virol, 1991, 65 :1124. 48.Marschall R.L. et.al.. Vaccine, 1988, 6 :343.
49.Moormann R.I. et.al. Gen Virol, 1990, 71 :1591. 5O.Kit M. et.al. Патент 116197,
опубл. 12.02.91; МКИ; 435/235-1. 51.Potel H. et.al.. J Clin Microbiol, 1990, 29, 2 :410.i
52.Saurez H.A. et.al.. J Vet Med, 1993, 40, 2 :125. 53.3акутский Н.И. и др. Матер, н. конф<
ВНИИВиМ, 1992 :145. 54.Baliuk L. et.al. Пат. 5151267 США МКИ5, А61, К39/12, с07 Kj
7/06. 55.Leung Tack Р. et.al. Пат. Франция 9207930, 1994, опубл.01.14.94. 56.MerzaM. et.al.j
J Vet Med, 1991, 38, :306. 57.Thity E. et.al.. Am Med Vet, 1992, 136, 8 :617. 58.Морозов И.А^
и др. Мол. генет., микроб., вирус. 1991, 4 :29. 59.Морозов И.А. и др. Мат. и. конф, с-х био*
техн., Целиноград, 1991 :134. бО.Колосов Ю.В. и др. Физ. химия, 1991-65, 10 :20. 61.Ba«j
сильев А.В. и др. MBA, 1989 :53. 62.Tekes L. et.al. Magy allatorv Lap, 1991, 46, 4 :215jj
63.VanDrunen L. et.al.. Virology 1996, 206, 1 :413. 64.Rocha etal. Agr brxs med vet zootecnj
1994, 6 :737. 65.Van Drunen L. et.al. Virol., 1995, 206, 1 :413. 66.3акугский Н.И. и др. Texi
докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :140. 77.Vanderplasschev A. et.al. Vet Res, 1994, 25, 6j
:555. 78.Vilcek S. Vet Med, 1994, 39, 11 :687. 79.Глотов A.T. и др. Тр. ИЭВ Сибири и ДВ,
Новосибирск, 1995 :172. 7O.Fukuyama S. et.al. Div Mier Kyoto Biken Lab Ivc-№93117518,6.’
71,Орешков С.Ф. и др. Вопр. вирусол., 1995, 40, 6 :279. 72.Andino R.H. et.al. Amer J Vet ResJ
1987, 48 :984. 76.Giavedoni L.D. et.al. J Vet Med, 1988, 35 :280. 77.Dann D.C. et.al. Amer J
Vet Res, 1987, 47 :740. 78.Van Drunen L. et.al. Vaccines'94, Cold Spring Harbor, 1994 :321. ’
ГЕРПЕСВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ЛОШАДЕЙ
Equine herpesvirus infections
Герпесвирус лошадей представлен следующими типами: Equine herpes virus type 1
(ринопневмония), herpesvirus type 2 (коитальная экзантема (Рис. 162, 163) и Equine
herpesvirus type 3 (цитомегалоподобная инфекция лошадей).
По клиническому проявлению герпетической инфекции указанное разделение герпесви-
русов лошадей несколько условно, так как иногда, например, Herpesvirus equi-2, помимо!
коитальной экзантемы, вызывает у жеребят кератоконъюнктивит. Помимо того, из костного
мозга, лейкоцитов крови и культуры почечных клеток клинически здоровых лошадей удава-!
лось выделить ряд латентных герпетических вирусов, роль которых в патологии этих жи-
вотных неясна. В 1973 г. К. П. Юров и В. К. Сологуб изолировали 4 штамма латентного
герпесвируса лошадей из культуры почечных клеток жеребят. Установлена высокая выде-
ляемость (89%) герпесвирусов лошадей второго типа 2 из лейкоцитов крови лошадей. От
лошадей, имевших лихорадку, выделен вирус, классифицированный как Herpesvirus equi-2.
В Нью-Маркете 90% лошадей имели АТ к вирусу герпеса лошадей типов 1 и 2. Впоследст-
вии был выделен вирус, отличный от возбудителя РПЛ и обозначен как Equine herpesvirus-
3. Выделен и Herpesvirus egui-4, который вначале рассматривали как лошадиный цитомега- ;
ловирус. Герпесвирусы лошадей 2-го, 3-го и 4-го типов в АГ отношении оказались между:
собой более родственны, чем с вирусом РПЛ. Вирусы коитальной экзантемы лошадей (HV- -
Eq-2) выделяли из лейкоцитов внешне здоровых кобыл и от кобыл с клиническими призна-
ками пузырьковой сыпи. Однако при интраназальном заражении этим вирусом у жеребых '
кобыл происходили аборты. Выделено 26 штаммов из различных органов абортированных
плодов и носовых истечений лошадей, больных ринитом. Все штаммы принадлежали к од-
646
Глава XVI. Family Heipesvirida Герпесвирусные инфекции
ному типу EA/S kovbinde, который в PH оказался идентичным американскому штамму Ку-
13. В дальнейшем было выделено много подобных шт. от клинически здоровых лошадей.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Не отличается от HV-Eq-1.
Устойчивость. Вирусы термолабильны, инактивируются при 56°С в течение 30 мин,
чувствительны к pH 3 и к эфиру. Сохраняют инфекционность в среде, свободной от сыво-
ротки в течение 3 мес; при - 40°С - 1,5 г. Действие трипсина на различные штаммы вируса
герпеса лошадей оказалось неодинаковым. АГ структура не изучена.
АГ активность. Детально не изучена; у кроликов вирусы индуцируют образование
ВНА. Специфические ВНА обнаружены в сыворотке клинически здоровых лошадей.
АГ вариабельность и родство. Вирусы герпеса лошадей в АГ отношении отличаются
от вируса РПЛ (вирусного аборта) лошадей 1-го и 2-го подтипов. Поэтому их предложено
отнести к типу 3 герпесвирусов лошадей. Среди множества выделенных штаммов этого типа
антипенных различий в PH не обнаружено. Однако штаммы, относящиеся к типу HV-Eq-З в
PH, отличались от герпесвирусов лошадей 1-го и 2-го типов. Среди 3 штаммов вируса гер-
песа лошадей типа -3, выделенных из культуры лейкоцитов от здоровых лошадей, один об-
наружил АГ родство с цитомегаловирусом. В исследованиях Пламмера и др., (1973) из 19
изученных штаммов 9 оказались идентичны вирусу ринопневмонии, 10 медленно размно-
жающихся вирусов были АГ неоднородны и не имели серологического родства с 9 штамма-
ми вируса ринопневмонии лошадей.
Спектр патогенности, экспериментальная инфекция. Спектр патогенности в естест-
венных условиях не изучен. Многие выделенные штаммы HV-Eq3-Bbi3biBanH латентную ин-
фекцию. Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство, вирусовыделение детально
не изучены. Известно, что вирус герпеса лошадей 3-го типа удавалось выделить из лейкоци-
тов клинически здоровых лошадей. Экспериментальная инфекция воспроизводилась на кро-
ликах, заражаемых в спииной мозг. У животных развивалась хроническая инфекция без
клинических проявлений. При гистологическом исследовании у них обнаруживали менин-
гомиелит в области шейного, грудного и поясничного отделов спинного мозга. Нервные
клетки оставались неповрежденными. Вирус герпеса лошадей типа 3 оказался непатогенным
для КЭ, новорожденных мышат, хомячков, молодых морских свинок и кроликов при раз-
ных методах заражения.
Культивирование. Многие штаммы, относящиеся к HV-Eq-З, размножаются в первич-
ной культуре клеток почки жеребят, обезьян, коровьих и овечьих эмбрионов, вызывая деге-
нерацию клеточного монослоя и образование эозинофильных внутриядерных включений
типа А. Инфекционность культуральной жидкости достигала 105 ТЦЦ}о/мл. Герпесвирусы
лошадей типа 3 культивируются и образовывают бляшки в клетках РК-15 и Z. Для получе-
ния бляшек использовали сложное покрытие с метилцеллюлозой. Размер бляшек 0,85-1,5
мм в значительной степени зависел от числа пассажей вируса в культуре клеток РК-15.
Культуры клеток почек эмбриона свиней, HeLa, КВ, почечных фибробластов кроликов ока-
зались нечувствительными. Особенности внутриклеточной репродукции не изучены. Эпизо-
отологические особенности, источники и пути передачи инфекции не описаны.
Специальные методы диагностики не разработаны. Диагностика может производиться в
научно-исследовательских учреждениях.
Иммунитет не изучен, специфическая профилактика не разработана.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусол. М, Колос, 1979. 2. Petzold К. Veb Hustav Fisher
I Ferlag, Jena, 1974.
647
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
РИНОПНЕВМОНИЯ ЛОШАДЕЙ
The eqvine rhinopneumonitis - mare abortion complex, Equine herpesvirus (Equid
herpesvirus 1) infection, Mare abortion, Epizootic abortion of mares, Equine «influenza»,
Equine virus abortion (англ.); Rhinopneumonitis des Pferdes, Virusabort des Studen (нем.)
Ринопневмония лошадей (РПЛ, вирусный аборт кобыл, половая экзантема лошадей, ри-
нотрахеит лошадей) - остро протекающая контагиозная болезнь, характеризующаяся острым
респираторным заболеванием жеребят и абортами у кобыл во второй половине жеребости,
которые часто проходят без заметных симптомов и предвестников родов (1, 2). Болезнь
впервые описали в США. Затем ее диагностировали в Германии, Франции, Италии, Юго-
славии, Австрии, Венгрии, в последние годы - в Румынии, Чехословакии, Польше, странах
СНГ и России.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Вирус ринопневмонии
(герпесвирус 1-го типа) вызывает острое респираторное заболевание жеребят в возрасте 6-9
мес, аборты у жеребых кобыл и паралитический синдром. В естественных условиях инкуба-
ционный период в среднем 3-4 нед. Болезнь протекает в респираторной форме и может со-
провождаться абортами. Первая форма встречается чаще, поражает животных осенью и в
начале зимы. Она характеризуется повышением температуры тела, депрессией, отсутствием
аппетита, конъюнктивитом и воспалением слизистой оболочки носа, иногда ринофаринги-
том. Ринит сопровождается истечением из носа, увеличением подчелюстных лимфоузлов.
Легкие поражаются редко. Через 10-15 дн больные выздоравливают. У некоторых живот-
ных бывают кашель и затрудненное дыхание вследствие развившейся перипневмонии. В та-
ких случаях болезнь нередко осложняется бактериальной инфекцией, что обычно приводит к
летальному исходу.
При наличии в хозяйстве жеребых кобыл ринопневмония может вызывать аборты,
причем абортируют как кобылы с респираторной формой болезни, так и не имеющие
видимых симптомов болезни. Аборт происходит на 8-10-м мес жеребости, хотя у некоторых
может быть и на 6-м мес. Абортируют до 90% больных животных. При вирусном аборте ро-
довые пути приходят в норму так же быстро, как и у здоровых кобыл после родов. Общее
состояние кобыл заметно не нарушается. Очень редко бывают осложнения в виде парали-
чей, заканчивающихся гибелью животного. Вирусный аборт редко наблюдают дважды у од-
ной и той же кобылы. Эго свидетельствует о наличии иммунитета. Однако описаны случаи
повторного аборта через несколько лет.
Для ринопневмонии характерны изменения, обнаруживаемые в органах абортирован-
ных плодов или павших вскоре после рождения жеребят. У плодов развивается острый или
хронический гепатит, вызывающий их гибель. В печени появляются многочисленные серо-
вато-белые очажки некроза, в грудной полости - серозно-геморрагическая жидкость, отек
легких и выпот фибрина. В мышцах, под капсулой селезенки и печени, на плевре, брюшиие,
перикарде и эпикарде видны точечные кровоизлияния. Слизистые оболочки плода, особенно
конъюнктива, желтушны. При гистологическом исследовании срезов печени, мышцы серд-
ца, эндотелия сосудов, легочных альвеол, эпителия щитовидной железы абортированных
плодов очень часто по периферии очагов некроза обнаруживают внутриядерные включения
типа А Коудри. Включения окрашиваются ацидофильно в виде гомогенной массы, но ино-
гда в виде нежно-зернистой структуры. Включения считают тельцами вирусной природы.
Они имеют важное диагностическое значение.
Помимо абортов, у кобыл вирус вызывает рассеянный менингоэнцефаломиелит. Он ха-
рактеризуется некротизирующим васкулитом, очаговыми размягчениями в головном и
спинном мозге, скоплением лимфоцитов и нейтрофилов в околопозвоночных ганглиях. Ино-
гда наблюдается парез. Описана вспышка атаксии и параличей на конном заводе у чисто-
кровных лошадей, вызванная герпесвирусом лошадей типа 1.
648
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
Патогенез. Вирус размножается и накапливается в слизистых оболочках верхних дыха-
тельных путей и в легких, вызывая ринопневмонию. У беременных кобыл вирус проникает
в матку, плод и околоплодные оболочки, вызывая патологический процесс и аборт во второй
половине беременности.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Заболевание лошадей вызывают герпесвирусы трех типов: Equine herpesvirus type 1 -
вирус классической ринопневмонии лошадей (вирус Долла), шт. Kentucky D; Equine
herpesvirus type 2 - возбудитель коитальной экзантемы (Equine coital exanthema) представ-
лен шт. EHV-2, HKV-2, HBM-7, HKV-4; Equne herpesvirus type 3 - возбудитель цитомегало-
подобной инфекции лошадей (Equine cytomegalolike virus) представлен шт. LK-Plummer-2.
Вирусы типов 2 и 3 клеточно связанные, вызывают ЦПД в культуре клеток почки эм-
бриона лошади, ягненка и кролика с образованием внутриядерных включений. Шт. EHV-2,
HKV-2 и HKV-4 образуют синцитий. Equvine herpesvirus type 1 впервые выделили Димок и
Эдвардс (13). Вирус РПЛ (EHV-1) имеет 2 подтипа: ПТ-1 и ПТ-2. Вирус ПТ-1 выделяли из
абортированных плодов и новорожденных жеребят, а ПТ-2 - при респираторном заболева-
нии. ПТ-2 в отличие от ПТ-1 не репродуцируется в культуре клеток эмбриона кошек и мор-
ских свинок, почки кролика и теленка, не выявлялся в лейкоцитах крови лошадей, слабо
размножается и не выделяется из носоглотки, не вызывал аборта у жеребых кобыл после
интраназального введения.
Морфология и химический состав. Вирион содержит центральное ядро размером 60
нм, светлую зону и пограничную мембрану; диаметр вириона около 100 нм (Рис. 88). В
культуре клеток почки хомяка через 15-18 ч после заражения обнаруживаются вирусные
частицы 3-х типов: мелкие (40 нм), средние (до 100 нм), крупные (до 160 нм); в цитоплазме
и вне клеток бывают частицы до 220 нм.
Вирионы могут быть с оболочкой и без оболочки. Используя "мягкие" детергенты
(например, нонидент Р-40) или обрабатывая ультразвуком удавалось отделить оболочку ви-
риона. Вирионы, лишенные оболочки, отличаются от частиц с оболочками размерами и
плавучей плотностью. Крупные вирусные частицы с оболочкой встречаются в ядре единич-
но, в цитоплазме чаще, а вне клеток в большом количестве.
Вирионы, очищенные центрифугированием и обработкой нуклеазой, имеют константу
‘ седиментации в градиенте сахарозы около 200S. Количество ДНК на одну частицу равно
; 4,75Ю10Д, что составляет свыше 9,2%. Основания ДНК спарены: аденин приблизительно с
i равным количеством тимина, гуанин с цитозином. Отношение (А+Т)/(Г+Ц) = 0,78, в то
время как для ДНК клетки хозяина оно равно 1,4.
С помощью электрофореза изучен полипептидный состав оболочечных и безоболочеч-
• ных вирионов, а также их оболочек. В вирионах с оболочками идентифицировано 20 поли-
; пептидов с мол.м. от 115 до 13000 Д. Безоболочечные вирионы содержали 14 полипепти-
i дов, а сами оболочки 3 полипептида. При электрофорезе полных вирионов обнаружено 3
зоны, содержащие липопротеид, и 4 зоны - гликопротеин. По-видимому, все они имеют
оболочечное происхояодение, так как в безоболочечых вирионах не выявлялись.
Установлено, что последовательность гликопротеинного гена ГВ Л типа 1 гомологична
последовательности гена вируса herpes simplex для гликопротеина ДВ (3). В геномах де-
фектных вирионов герпесвируса лошадей типа 1, участвующих в онкогенной трансформа-
ции и персистентной инфекции, имеется одна открытая рамка считывания. Она кодирует
белок с мол.м. 30000 Д (10). Ген 28 ГВЛ типа 1 кодирует гликопротеины с мол.м.300 Д (9).
Устойчивость. Вирус чувствителен к изменению концентрации водородных ионов. Од-
нако инфекционность его сохраняется при сравнительно широких колебаниях pH. Опти-
мальный для его хранения pH 6-6,7; при pH ниже 4 и выше 10 вирус быстро инактивирует-
ся. Он лучше сохраняется при 4-6°С, хуже - при 20°С. В культуральной жидкости остается
вирулентным при 56°С до 10 мин, при 50°С - 20-30 мин, при 37°С - от 1,5 до 7 сут, при 4°С
- 7-8 мес, при -10-18°С - 12-14 мес. В инфицированной ткани, замороженной при -18-20°С,
649
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
сохраняет активность до 2 лет. В тканевых суспензиях, приготовленных на солевых р-рах
(pH 7-7,4) с 20% нормальной лошадиной сыворотки, он активен при 4°С не менее 2 нед, в
буферном р-ре без добавления сыворотки вирус быстро инактивируется.
Вирус хорошо консервируется 50%-ным р-ром глицерина, оставаясь активным при
4°С 5 мес. Дезоксихолат натрия в разведениях 1:100 и 1:1000 при 22-24°С инактивирует его
в течение 45-60 мин; 1%-ный этанол, метиловый спирт, гепарин или ЕДТА не влияют на
инфекционность культурального вируса. Он чувствителен к действию трипсина, эфира и
хлороформа.
АГ структура детально не изучена. КС АГ можно разделить на S (растворимый) и V
(вирусный).
АГ вариабельность и родство. Известны вирусы РПЛ 1-го типа: американский эта-
лонный шт. Kentucky (иммунологически идентичны ему шт. К-69 и С-69) и японский Н-45
(иммунологически идентичны ему шт. Racarmy 183, Hannover 1835 и VI00 (64). Обнаруже-
ны субтипы вируса Н-45 и Kentucky.
Спектр патогенности в естественных условиях. Болеют лошади всех возрастов и
пород независимо от пола, а также ослы, мулы и пони. Человек, КРС, мелкий рогатый скот
и свиньи к вирусу не восприимчивы.
Локализация вируса. Вирус проникает в организм главным образом через органы ды-
хания и локализуется в верхних дыхательных путях и легких, вызывая симптомы ринита
или ринопневмонии. Из первичного места размножения (слизистых оболочек дыхательных
путей и конъюнктивы) после фазы вирусемии, соответствующей периоду лихорадки и лей-
копении, вирус попадает в матку, плод и околоплодные оболочки, где размножается, вызы-
вая патологический процесс, приводящий к аборту. Заражение плода происходит медленно,
поскольку аборт наступает через 1-4 мес после респираторной формы болезни. Вирус обла-
дает тропизмом к эпителиальной и эндотелиальной тканям.
Переболевшие ринопневмонией животные могут выделять вирус во внешнюю среду с
истечениями из носа и половых органов до 2 мес. ГВЛ типа1 экскретируется с выделе-
ниями из носа, являясь источником заражения для других лошадей (8).
АГ активность. Вирус обладает выраженной АГ активностью. У реконвалесцентов об-
наруживают КСА и ВНА. У переболевших кобыл через 10-14 дн после заболевания индекс
нейтрализации сывороток колебался от 3 до 5 1g. У экспериментально зараженных лошадей
ВНА образовывались медленнее, но сохранялись дольше, чем КСА. ПА иа обнаружено. Для
получения АГ в РСК используют очищенный методом бляшек шт. Р-19-Toowoomba (8-10-
го пассажа).
Экспериментальная инфекция. Может быть воспроизведена на молодых жеребятах,
жеребых кобылах, беременных крольчихах и морских свинках. При внутривенном, интра-
назальном и интратрахеальном введениях вируссодержащего материала у молодых жеребят
появляется типичная картина ринопневмонии (гипертермия, поражение верхних дыхатель-
ных путей, лейкопения) и КСА. У экспериментально зараженных лошадей количество лей-
коцитов, Т-, В-лимфоци-тов снижается. Вирулентный штамм оказывает иммунодепрессив-
ное действие, что позволяет дифференцировать реакцию организма на вакцинный и виру-
лентный вирусы. У зараженных вирусом кобыл за 7-10 дн, реже за 15-20 дн до аборта, по-
вышается температура тела, удерживающаяся 2-3 дн. Иногда температурная реакция может
быть и во время аборта. При внутривенном введении вируса инкубационный период колеб-
лется от 4 до 76 дн (в среднем 22 дн), при инокуляции вируса непосредственно в матку - от
3 до 9 дн, при спонтанном заражении - от 1 до 4 мес. Предшествующая аборту стадия ин-
флюэнцы при легком ее течении может пройти незамеченной. Кобылы, зараженные после 9
мес жеребости, могут принести мертвого или нежизнеспособного жеребенка. У зараженных
кобыл появление симптомов болезни коррелирует с выделением вируса с носовыми секре-
тами. Виремия обычно связана с лейкоцитами крови, проявляется как непродуктивная ла-
тентная инфекция этих клеток и длится в течение 9 дн.
650
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Латентная вирусная инфекция выявлялась также и в моноцитах. Замораживание и от-
таивание лейкоцитов разрушало их инфекционность, но добавление к лейкоцитам ДМСО до
замораживания предотвращало инактивацию вируса. Беременные морские свинки аборти-
руют через 3-8, а иногда и через 15-20 дн после интраперитонеального заражения. Удается
заразить хомячков 3-4-дн возраста, новорожденных котят, мышей и воспроизвести клиниче-
скую картину энцефаломиелита с характерными внутриядерными включениями в клетках
нейроглии. Наиболее чувствительны к ринопневмонии новорожденные хомячки. Они по-
гибают через 2-6 дн после внутрибрюшинного или интраназального заражения вируссодер-
жащей суспензией, приготовленной из легких или печени абортированных плодов. Вирио-
ны, лишенные оболочки, патогенны только для хомячков и в больших дозах.
Культивирование. Для культивирования и пассирования вируса используют мышат-
сосунков и хомячков (внутрибрюшинное заражение), КЭ 8-12-дн возраста (в желточный
мешок, аллантоисную полость или амнион), а также культуры клеток почечной ткани раз-
личных животных (лошади, теленка, поросенка, собаки, овцы), тестикулов бычков или их
эмбрионов. Наиболее чувствительна культура клеток почки лошади, особенно молодого же-
ребенка. Вирус размножается также в культурах некоторых перевиваемых линий клеток
(HeLa, КВ, Детройт-6, РК-15). Оба типа Т-I (НН-1) и II (ТН-20) удалось адаптировать к
культуре клеток почки свиней. По чувствительности к вирусу РПЛ первичные и перевивае-
мые линии клеток можно разделить на 5 групп в сторону ее снижения: 1) почка свиньи (ПС)
и почка лошади (ПЛ); 2) почка теленка (ПТ), тестикулы теленка (ТТ), почка хомячка (ПХ),
ВНК-211; 3) перевиваемые линии клеток: HeLa, TL (амнион человека), Lu 106 (легкие чело-
века), AND (почка обезьяны), КЛ (клетки роговицы кролика); 4) фибропласты КЭ; 5) ML
(мышиные фибропласты).
Клетки первой группы пригодны для выделения, накопления и пассажей всех изучен-
ных штаммов вируса РПЛ. В этих культурах на 3-5-е сут после заражения вирус уже с пер-
вого пассажа проявляет ЦПД; образуются очаги округлых клеток с последующим разруше-
нием всего клеточного пласта. Развитие ЦПД в культуре клеток ПС и ПЛ завершается их
полным лизисом. В клетках 2-й группы вирус размножается, но ЦПД наступает медленно,
без полного лизиса культуры. По мере адаптации титр вируса повышается и к 4-5 пассажу
достигает 104’75- 1О5,0 ТЦД30/мл.
В культурах клеток 3-ей группы размножаются ие все штаммы вируса РПЛ. В клетках
4-й группы вирус размножается слабо и не вызывает ЦПД. В культуре клеток печени КЭ и
почечного эпителия морских свинок хорошо развивается болгарский шт. 1605. И наконец,
культура клеток мышиных фибробластов, относящаяся к пятой группе, вообще не пригодна
для размножения вируса. Однако в клетках почки мышей вирус герпеса лошадей типа 1
может размножаться и лучше репродуцироваться при 33,7°С, чем при 36 или 38°С. В клет-
ках паренхимы печени КЭ, в культурах клеток, в которых хорошо репродуцируется вирус
РПЛ, находят ацидофильные внутриядерные включения типа А Коудри, не отличимые от
тех, какие обнаруживаются у больных лошадей. Вирус, прошедший несколько пассажей в
культуре клеток ПЭК, размножается в перевиваемых линиях клеток почки телят и овец, вы-
зывая характерное ЦПД. Вирус, пассированный в культуре клеток почки кролика, козы и
свиньи, не пассировался в культурах клеток почки морской свинки, хомячков и фибробла-
стов КЭ. Получены дефектные интерферирующие частицы (ДИЧ) вируса в серийных пасса-
жах его в культуре фибробластов мыши (линии ML) с высокой множественностью инфек-
ции. При выделении вируса многие штаммы требуют предварительной адаптации к той или
иной системе культивирования, особенно это относится к культивированию вируса на хо-
мячках, мышатах-сосунках и КЭ. В 1966 г. предложен метод получения бляшек в субкуль-
туре клеток почки коровы с жидким покрытием. Метод применяют для титрования ВНА.
ГА и ГАд свойства. Вирус агглютинирует эритроциты лошади и морской свинки при 4
и 37°С. Активность ГА не связана с липидами, ои является интегральной частью вирусной
оболочки, а не растворимым АГ, как предполагалось раньше. Он не инактивируется при
651
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
56°С, сохраняется при 4 и 37°С, а также при воздействии нейраминидазы холерного виб-
риона, не нейтрализуется сыворотками лошадей-реконвалесцентов, но нейтрализуется гипе-
риммунными сыворотками крови кроликов. ГА-активность, обусловленная участием ди-
сульфидных групп, разрушается протеолитическими ферментами (трипсином, альфа-
хемотрипсином и проказой), резистентна к действию растворителей липидов (хлороформу,
эфиру) и фосфолипазе С.
В свежих препаратах вируса титры ГА прямо пропорциональны инфекционности, и
1ГАЕ приравнивается к 107 БОЕ в клетках РК-15. В очищенных препаратах вируса 1 ГАЕ
эквивалентна 0,65 мг белка. При внесении в инфицированную культуру клеток с выражен-
ным ЦПД отмытых эритроцитов лошади наблюдается очаговая ГАд. Однако этот феномен
проявляется недостаточно четко и не может служить надежным диагностическим тестом.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больное животное,
выделяющее вирус через дыхательные пути и особенно с абортированным плодом. В естест-
венных условиях вирус передается воздушно-капельным путем. Факторами передачи ин-
фекции служат загрязненные вирусом корма, вода, подстилка и т.п. Жеребцы могут стать
переносчиками вируса при коитусе. Вероятно, собаки, лисицы и птицы могут разносить ви-
рус вместе с кусками абортированных плодов из одного хозяйства в другое. Основные
вспышки эпизоотических абортов у лошадей связаны с ГВЛ-4 (19). ГПЛ-4 удается выделить
после гибели животного из тканей, взятых в участке пораженных нервов (20).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на РПЛ ставят на основании результатов лабораторных исследований с учетом
эпизоотических, клинических данных и патологоанатомических изменений. Если аборты
происходят сразу у нескольких кобыл на 7-11-м мес жеребости, следует подозревать РПЛ.
Контагиозность болезни, аборты и отсутствие выраженных признаков приближающегося
аборта, быстрое возвращение к нормальному состоянию полового тракта - все это характер-
но для РПЛ. Диагноз уточняют на основании патологоанатомических изменений и результа-
тов гистологического исследования (плевропневмония, перипневмо ния, очаги некроза в пе-
чени абортированных плодов, ацидофильные включения в 50-80% печеночных клеток), вы-
деления вируса путем заражения культуры клеток новорожденных хомячков и беременных
морских свинок, его идентификация в РИФ, РТГАд, PH, РСК и выявления АТ в сыворотке
крови больных и переболевших животных в PH, РСК.
Выделение вируса. Первичное выделение вируса из органов абортированного плода
можно проводить на 1-дневных хомячках и культурах клеток, относящихся к группам 1-3.
Взятие и подготовка материала. Наиболее подходящим материалом для выделения
вируса являются легкие, печень, селезенка и тимус абортированных плодов или погибших
новорожденных жеребят. При рините от больных животных ватным тампоном берут пробы
выделений из носовой полости. При наличии у взрослых лошадей параличей для исследова-
ния берут кусочки головного и спинного мозга. Вирус легко изолируется из лейкоцитов экс-
периментально зараженных лошадей в течение 20 дн. Вскрытие абортированных плодов и
павших животных производят в возможно ранние сроки. Кусочки органов и тканей массой
30-50 г вырезают с соблюдением правил асептики и сохраняют до исследования при 4°С
или консервируют 50%-ным забуференным р-ром глицерина с pH 7,4. Ватные тампоны с
пробками носовых выделений сразу помещают в пробирки с 2 мл р-ра Хенкса или Эрла с
20%-ной нормальной лошадиной сывороткой и антибиотиками. Кусочки органов и тканей
от павших животных или абортированных плодов для гистологических исследований поме-
щают в 10%-ный р-р формалина. Патологический материал направляют в лабораторию в
термосе со льдом.
Для вирусологического исследования готовят 10%-ную суспензию мате риала на р-ре
Хенкса или Эрла; надосадочную жидкость после предварительной обработки антибиотика-
ми (пенициллин и стрептомицин по 500 ЕД/мл) используют для исследования. Носовые
652
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
тампоны отжимают, а жидкость обрабатывают по той же методике. Все материалы до ис-
пользования хранят в замороженном виде при температуре- 20-40°С.
Для выделения вируса из патологических материалов используют культуры клеток, 8-
12-дн КЭ, хомячков и мышат-сосунов 3-4-дн возраста. Чаще применяют культуры клеток,
используя для их заражения суспензию из образцов легких и печени или материал смывов.
Заражение культуры клеток. При первичном выделении вирус РПЛ хорошо репроду-
цируется в культурах клеток почечной ткани животных различных видов и особенно в пер-
вичной монослойной культуре клеток почки лошади. Если этих клеток нет, для выделения
вируса можно использовать культуры клеток почки эмбриона коровы (ПЭК), почки эм-
бриона свиньи (ПЭС), почки кролика (ПК). Вирус обнаруживается в наиболее высокой кон-
центрации в легких, и именно их взвесью лучше заражать культуры клеток. В связи с тем,
что при первичном выделении вируса ринопневмонии специфическое ЦПД может прояв-
ляться на 5-6-й дн после инокуляции, пробирки лучше помещать во вращающийся барабан
для культур клеток, культивирование в котором сокращает сроки проявления ЦПД. Для
предотвращения неспецифического токсического действия инокулируемого материала, ино-
гда имеющего место при первичном выделении вируса, через 2 ч после заражения меняют
среду. ЦПИ обычно проявляются на 3-5-й дн. Первоначальные изменения выражаются по-
явлением округлых клеток, обладающих повышенной рефрактильностью, особенно по кра-
ям монослоя, а в более поздней стадии - гигантских многоядерных клеток, после чего насту-
пает деструкция клеточного монослоя. При отсутствии ЦПД в первом пассаже или слабом
его проявлении проводят последовательных пассажа. Каждый пассаж проверяют в РГАд с
эритроцитами лошади. Контрольные культуры остаются без изменений на протяжении все-
го периода наблюдения. При проведении пассажа ЦПИ появляются быстрее, через 24-72 ч.
Масимальные титры вируса в культурах клеток (105 - 107’5 ТЦД50/м;1) обычно обнаруживают
через 3 дня после инокуляции материала. Максимальная КС активность (1:4-1:8) культу-
рального вируса обычно проявляется на 4-5-й дн культивирования. Для повышения резуль-
тативности выделения вируса рекомендуется одновременно заражать несколько видов кле-
ток, так как дикие штаммы, даже серологически идентичные, могут обладать разной спо-
собностью к репродукции в разных клетках.
Заражение куриных эмбрионов. Используют 8-12-дн КЭ. Испытуемый материал
(лучше смесь легочного и печеночного материалов от абортированных плодов) вводят по 0,2
мл в желточный мешок, аллантоисную полость или амнион. Зараженные эмбрионы инку-
бируют при 37°С 4 дн, ежедневно проводя овоскопию. Гибель эмбрионов в 1-е сут после за-
ражения считается неспецифической. На 4-й дн культивирования эмбрионы вскрывают. Для
последующих пассажей используют печень, сердце и мозг эмбриона.
Некоторые штаммы вируса РПЛ требуют для адаптации к эмбрионам нескольких пере-
межающихся пассажей: хомячки или мышата-сосуны - КЭ. После 3-4 альтернативных пас-
сажей вирус обычно легко пассируется при серийных пересевах на ХАО. Размножение ви-
руса в КЭ сопровождается развитием внутриядерных телец-включений в клетках эктодермы
и мезодермы. Эти включения могут быть обнаружены при гистологическом исследовании
препаратов, приготовленных из пораженных тканей, после фиксации их абсолютным мети-
ловым спиртом или жидкостью Буэна и окраски гематоксилин-эозином. На ХАО часто
видны макроскопически воспалительные "оспинки".
Адаптированный к КЭ вирус может нейтрализоваться иммунной сывороткой, что по-
зволяет использовать их для постановки PH.
Заражение лабораторных животных. Беременных морских свинок заражают интрапе-
ритонеально, вводя 0,5-1 мл исследуемого материала. В период меяоду 2-20 дн. после зара-
жения свинки абортируют или погибают. При вскрытии обычно обнаруживают некрозы в
печени, петехии в легких, гастроэнтерит. Вирус легко удается выделить из абортированного
плода и печени. Хомячков 3-4-дн возраста заражают интрацеребрально (доза заражения
0,03 мл), подкожно или внутрибрюшинно (доза заражения 0,1-0,2 мл). Через 12-24 ч после
653
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
интрацеребрального заражения хомячки погибают. При гистологическом исследовании у
них обнаруживают энцефаломиелит и характерные тельца-включения. После подкожного и
внутрибрюшинного заражения хомячки заболевают через 5-8 дн, причем гибнут не все жи-
вотные. При вскрытии находят гепатит. При гистологическом исследовании в клетках ткани
видны характерные тельца-включения. Вирус удается выделить из печени и легких. Многие
штаммы вируса требуют предварительной адаптации, для чего следует проводить 2-3
"слепых" пассажа. Это особенно необходимо делать при адаптации вируса к хомячкам 4-6-
нед возраста. Мышата-сосуны заболевают при различных методах инфицирования (интра-
церебрально, интраназально, внутрибрюшинно). Каргина заболевания у них аналогична на-
блюдаемой у хомячков 3-4-дн возраста, однако не все штаммы вируса удается адаптировать
к мышатам, несмотря на длительные "слепые" пассажи. Метод выделения вируса на лабо-
раторных животных требует больших затрат времени и средств и не всегда дает положи-
тельные результаты.
Заражение естественно восприимчивых животных. Проводят очень редко. Исполь-
зуют кобыл на 7-10 мес жеребости и молодых жеребят. Материалы вводят внутривенно, ин-
траназально. У кобыл через 20-22 дня после заражения наблюдают признаки поражения
верхних дыхательных путей и затем аборт. У жеребят через 2-3 дн развивается катаральная
ринопневмония.
Индикация и идентификация вируса
Обнаружение специфических телец-включений. Это наиболее простой, предпочти-
тельный и легко осуществимый в практических условиях метод микроскопии мазков-
отпечатков или гистосрезов, приготовленных из пораженных участков плаценты, паренхи-
матозных органов плода, влагалищных выделений и крови, так как вирус РПЛ вызывает об-
разование характерных внутриядерных эозинофильных телец-включений в тканях и органах
абортированных плодов (печени, легких, селезенке, слизистой оболочке носовой полости), в
клетках печени хомячков, мышат-сосунов или морских свинок, зараженных материалом от
больных животных, а также в клетках инфицированных культур тканей и КЭ. Наиболее
подходящий для гистологического исследования материал - ткань печени. При микроскопии
в положительных случаях в препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, обнаруживают
многочисленные некротические фокусы и эозинофильные внутриядерные тельца-включения
в клетках печени, бронхиол и альвеол.
Аналогичные тельца-включения можно обнаружить при исследовании ХАО инфициро-
ванных КЭ и культур клеток. Появление телец-включений в культуре клеток и КЭ предот-
вращается специфической антисывороткой. Обнаружение характерных ацидофильных внут-
риядерных телец-включений имеет важное диагностическое значение.
Биопроба. (См. экспериментальная инфекция и заражение лабораторных и естественно
восприимчивых животных).
РГАд. Применяют для индикации вируса в культуре клеток, инфицированных испытуе-
мой суспензией. Для этого из 4 пробирок с выраженным ЦПД сливают питательную среду,
вносят по 1 мл 2%-ной взвеси эритроцитов лошади, оставляют на контакт (30-40 мин) при
37°С. Эритроциты сливают, культуру отмывают физиологическим р-ром и просматривают
под микроскопом. При положительной РГАд идентификацию вируса проводят в РТГАд.
Идентификация в ИФА. Предложено выявление АГ в фиксированных формалином
парафиновых срезах ткани печени абортированных плодов с использованием метода перок-
сидаза - антипероксидаза (ПАП). Данный метод подходит для выявления вируса в инфици-
рованных тканевых культурах. Метод дот-блот-гибридизации перспективен для быстрой ди-
агностики РПЛ и изучения патогенеза герпесвирусной инфекции лошадей (4).
Для дифференциации герпесвирусов серотипов 1-4, вызывающих заболевание со сход-
ным симптомокомплексом, используют рестрикционный анализ ДНК вирусом по методу
"отпечатков пальцев".
Серологическая идентификация
654
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ИФ. Ею пользуются для быстрого обнаружения специфического АГ возбудителя РПЛ. В
мазках-отпечатках из носовой полости вирусный АГ обнаруживается в течение 3-10 дн по-
сле заражения, а в культуре клеток - в течение 4-10 дн. Рекомендуется использовать препа-
раты, приготовленные из легких и тимуса. Результаты ИФ коррелируют с данными вирусо-
логических и гистологических исследований. Для идентификации вируса культуру клеток
выращивают на покровных стеклах и через 2-3 дн после заражения стекла с инфицирован-
ными клетками извлекают из пробирок, фиксируют в охлажденном ацетоне и окрашивают
прямым методом по общепринятой методике. В положительных случаях вирусный АГ вы-
является в виде ярко-зеленого свечения в перинуклеарной зоне не менее 50% клеток при от-
сутствии флюоресценции в контрольных незаряженных препаратах.
РТГАд. Применяют для идентификации вируса, который в культуре клеток вызвал по-
ложительную РГАд. Для ее постановки в 4 пробирки с зараженной культурой клеток вносят
по 0,5 мл неразведенной специфической сыворотки, контакт в течение 30-40 мин при 37°С.
После удаления сыворотки в пробирки вносят по 1 мл 2% взвеси эритроцитов лошади.
Спустя 30 мин эритроциты сливают, культуру промывают физиологическим р-ром и про-
сматривают под микроскопом. Контрольные пробирки (зараженные) параллельно обраба-
тывают нормальной сывороткой. При наличии вируса РПЛ в пробирках, обработанных спе-
цифической сывороткой, ГАд отсутствует, а в контрольных пробирках её наблюдают.
РСК. Используют для обнаружения КС АГ в патологическом материале. Для индикации
вирусного АГ используют ткани абортированного плода, которые замораживают и хранят
при -20°С до гистологического подтверждения диагноза. АГ для РСК готовят из легкого
или печени абортированного плода, образцы которого в замороженном состоянии сохраня-
ют активность до 18 мес. Для приготовления АГ замороженный материал разрезают на ку-
сочки 3-5 мм3 и несколько раз промывают холодным физиологическим р-ром для удаления
гемоглобина. Берут 3-5-кратные объемы раствора. Далее материал гомогенизируют с фи-
зиологическим р-ром 1:5 и для более полной элюции вирусного АГ подвергают 3-6-крат-
ному замораживанию-оттаиванию. Материал до использования хранят при -20°С. Непо-
средственно перед постановкой РСК суспензию размораживают, центрифугируют 30 мин
при ЗОООмин’1, надосадочную жидкость собирают и используют в качестве АГ.
РСК ставят на холоде по методу Колмера. Для этого готовят 2-кратные разведения АГ.
Сыворотку используют в разведении 1:5. Для определения единицы АГ положительные сы-
воротки берут в разведении 1:10. Все компоненты берут в объеме 0,5 мл. Связывание про-
изводят в течение ночи при 4°С, после чего добавляют 1 мл сенсибилизированной суспензии
эритроцитов и инкубируют 30 мин в водяной бане при 37°С. Единица АГ в значительной
степени зависит от титра сыворотки. Материал из легких абортированного плода обычно
реагирует в РСК в разведении 1:8 -1:16, из печени 1:2.
PH. Ставят по общепринятой методике в культуре клеток, используя тот же вид клеток,
на которых был выделен вирус. Специфическую и контрольную (отрицательную) сыворотки
инактивируют при 56°С в течение 30 мин. Для идентификации выделенного вируса реакцию
ставят с постоянной дозой гипериммунной сыворотки (обычно в разведении 1:20) и серий-
ными 10-кратными разведениями вируса. В контроле вирус титруют в присутствии разведе-
ний 1:20 нормальной кроличьей сыворотки. Результаты реакции учитывают на 2, 3 и 6-е сут
по ЦПД, определяя индекс нейтрализации по разнице титров вируса с гипериммунной и
нормальными сыворотками и вычисляя его по методу Рида и Менча или Кербера. Вирус
считают идентифицированным, если индекс нейтрализации более 2 1g. PH можно ставить и
по варианту: разведение сыворотки и постоянная доза вируса. В этом случае используют 100
ТЦДзо/мл вируса, предварительно оттитрованного в культуре клеток. Титр выделенного ви-
руса должен быть не менее 103 ТЦД50/МЛ. Возбудитель считают идентифицированным при
наличии нейтрализации не менее чем 1/3 титра положительной сыворотки с гомологичным,
заведомо известным вирусом. Можно PH проводить в виде микрометода, используюя пере-
виваемую линию клеток почки свиньи РК-15.
655
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
РДП. Ставят общепринятым методом в агаровом геле с АГ из печени инфицированных
хомячков с заведомо позитивной и нормальными кроличьими сыворотками. В положитель-
ных случаях РДП проявляется через 48 ч после аборта.
РТГА. Ставят в макро- и микромодификации. В реакции используют свежеприготов-
ленные или формалинизированные эритроциты лошади. Методика постановки общеприня-
тая. Специфические гипериммунные сыворотки для РТГА те же, что и для PH и РСК. Иден-
тификация вируса - наиболее простой, доступный и быстро выполнимый метод.
ELISA Выявляют АГ через 12 ч после заражения культуры клеток (почки кролика),
титр которого достигает пика к 24 ч. Титры АГ в ELISA несколько ниже титра его инфекци-
онности. Разработан непрямой метод ELISA для выявления активности. Титр активности в
ELISA превышал титры PH в 300-500 раз. Коэффициент корреляции между ELISA и PH со-
ставлял 0,815.
Рестрикционный метод индикации вируса. Был успешно испытан на 297 изолятах, из
которых 272 были получены от абортированных плодов и 25 - от животных с поражением
респираторного тракта, отличались по типу рестрикции ДНК от изолятов, выделенных от
абортированных плодов, что явилось основанием для выделения 2-х подтипов вируса. В
пределах каждого из подтипов выделено по 13-16 различающихся по рестрикции образцов.
ПЦР. Высокочувствительный метод диагностики, с помощью которого удается обнару-
жить ГВ Л в патологическом материале даже когда в 105-106 клеток было не более одного
генома вируса. ГВЛ типа 1 способен длительное время находиться в лейкоцитах в латент-
ном состоянии (6).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
Диагноз на прошедшую инфекцию обычно ставят при помощи PH в культуре клеток, на
КЭ, хомячках или мышатах-сосунах, определяя титры АТ в сыворотках крови лошадей или
индексы нейтрализации. Для ретроспективной диагностики используют РСК. Лучше иссле-
довать парные сыворотки: одну, взятую в начале болезни, другую - через 3-6 нед. PH обыч-
но дает более высокий процент положительных результатов, чем РСК. При проведении ре-
гулярных обследований отмечают значительные колебания титров АТ, несмотря на отсут-
ствие у животных клинических признаков болезни.
Появление КСА отмечают на 7-10-й день после заражения, титры их нарастают и дости-
гают максимума к 14-20-му дню, удерживаются на этом уровне до 30-го дня, а затем посте-
пенно снижаются. Через 3-6 мес после заражения большинство взрослых животных реаги-
руют отрицательно. У жеребят КСА сохраняются в течение 1-4 мес после перенесенной бо-
лезни. Титры их могут колебаться от 1:4 до 1:64 и выше, но наиболее часто не превышают
1:8-1:16; титры КСА 1:4 и выше, а также ВНА 1:100 и выше указывают на длительное те-
чение болезни. Титры АТ в РСК 1:16 и выше свидетельствуют о недавней инфекции. Ре-
зультаты PH при оценке недавно перенесенной инфекции менее точны, чем результаты РСК.
ВНА появляются позднее и удерживаются на одном уровне более длительно. На протяжении
2-3 нед после инфицирования они могут с нулевого уровня достигнуть титра 1:100 и выше и
удерживаться без существенных колебаний на протяжении 6-12 мес.
Кроме диагностической ценности, массовые серологические исследования позволяют
получить данные о степени инфицированное™ данной популяции лошадей. В этих целях
чаще всего используют РСК и PH в клеточных культурах. Следует иметь в виду, что серо-
логические методы не имеют диагностической ценности при исследовании сывороток абор-
тировавших кобыл. Объясняется это тем, что аборт наступает обычно спустя 1-3 мес после
инфицирования дыхательных путей кобылы и к этому времени титр КСА уже снижается, а
титр ВНА остается примерно на том же уровне. Присутствие вируса в плоде не вызывает у
кобылы увеличения титра АТ.
PH. При наличии адаптированных штаммов вируса она может быть поставлена в куль-
туре клеток, на КЭ, хомячках или мышатах-сосунах (в зави симости от адаптации вируса).
Наиболее часто реакцию ставят в культуре клеток почки лошади или теленка.
656
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Для постановки PH в культуре клеток используют вирус, хорошо адаптированный к ней.
Перед постановкой реакции культуральный вирус центрифугируют 30 мин при 2500-3000
мин1. Для стабилизации активности его хранят до использования в замороженном состоя-
нии при -30-40°С. Для проведения PH на хомячках или мышатах-сосунах используют гомо-
генат печени хомячков или мышат, погибших через 14-24 ч после заражения вирусом. Сус-
пензию гомогентата печени (20%-ную) на забуференном физиологическом растворе pH 7-
7,2 центрифугируют 20 мин при 3000 мин'1, надосадочную жидкость отсасывают и добав-
ляют к ней 20% нормальной сыворотки лошади. Полученный вирус хранят при 4°С. При
этих условиях он активен без снижения титра в течение 2 нед.
При постановке PH на хомячках или мышатах-сосунах используют штаммы вируса,
адаптированные к этим животным. Реакцию ставят с серийными 10-кратными разведения-
ми вирусного материала и неразведенной сывороткой, в равных объемах. После контакта в
течение 1 ч при комнатной температуре смесь в дозе 0,2 мл вводят мышатам или хомячкам
внутрибрюшинно. Контрольным животным вводят смесь вируса с нормальной сывороткой
лошади. За животными наблюдают в течение 7 дн. Если в испытуемых сыворотках есть АТ,
животные выживают, а контрольные погибают через 3-5 дн после инокуляции при наличии
характерных изменений в печени. Аналогичным образом ставят PH на КЭ, используя
штаммы вируса, адаптированные к КЭ. Смесь вируса с сывороткой после предварительной
инкубации в течение 1 ч при 37°С вводят на ХАО КЭ 8-12-дн возраста в дозе 0,2 мл и ин-
кубируют их при 37°С 4 дня. О защитном действии сыворотки судят по сохранению жизне-
способности эмбрионов.
РСК. При определении КСА в качестве антигена используют печень хомячков, зара-
женных адаптированным к ним штаммом вируса и погибших через 18-24 ч после зараже-
ния. Сыворотки крови лошадей инактивируют неразведенными, прогревая их 30 мин в во-
дяной бане при 60°С.
При постановке РСК для определения титра АТ в сыворотках используют 3-4 ед. АГ.
РСК ставят на холоде по общепринятой методике. В качестве антигена для РСК также ис-
пользуют культуральный внутриклеточный вирус, концентрированный уменьшением объема
питательной среды при культивировании и обработкой карбоваксом.
РТГА. Исследуемые парные сыворотки перед исследованием инактивируют при 56°С
30 мин. Реакцию ставят микрометодом с применением аппарата Такачи. В качестве АН ис-
пользуют вакцинный штамм вируса, который размножают в культуре клеток. РТГА ставят с
4-ед. ГА, с 0,2%-ной взвесью эритроцитов лошади по общепринятой методике. Результаты
учитывают через 2 ч. Титром АТ в сыворотке считают наибольшее разведение ее, при ко-
тором отсутствует агглютинация эритроцитов. Ретроспективный диагноз на РПЛ ставят при
4-кратном приросте АТ в парных пробах сывороток животных-реконвалесцентов. Обычно
АТ к ГА вируса РПЛ у переболевших лошадей выявляются в высоком титре - 1:128-1:512.
ELISA.Титры АТ в экспериментально зараженных кроликов достигали 1:120000 и
1:.665000, а у пони 1:60000. При этом титры ВНА в тех же пробах сыворотки были ниже и
лишь незначительно повышались при постановке PH с добавлением комплемента. Различие
титров в ELISA и PH объясняется тем, что в первой реакции выявляются и ВНА, и АТ, на-
правленные против внутренних компонентов самого вируса.
Дифференциальная диагностика
Проводится по данным исследования вируссодержащего материала (биопробы, сероло-
гические реакции с типоспецифическими сыворотками). Необходимо исключить инфекци-
онный аборт паратифозной природы и аборт, вызываемый вирусом артериита лошадей.
Возбудители РПЛ и артериита вызывают сходные клинические симптомы аборта, но се-
рологически они различны: нет АГ родства. Кроме того, артериит протекает тяжелее, чем
РПЛ, и вызывает более глубокие изменения во внутренних органах, отеки живота, конечно-
стей и часто гибель животных. При нем не образуются характерные внутриядерные тельца-
включения. Грипп лошадей отличается высокой контагиозностью, быстрым распростране-
42 Зак. Ne 171
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
нием, наличием сухого, часто болезненного кашля, при этом у жеребых кобыл, как правило,
отсутствуют аборты. Инфекция, вызванная аденовирусом, регистрируется обычно у жеребят
раннего возраста. В связи со сходством клинического проявления эти болезни дифференци-
руют на основании лабораторных исследований. При дифференциации от абортов бактери-
альной этиологии, которую оценивают на основании бактериологических исследований,
следует иметь в виду, что при вирусной ринопневмонии в 25-45% случаев выделяют раз-
личную сопутствующую и секундарную микрофлору.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У переболевших животных развивается краткосрочный иммунитет, причем против
абортивной формы он бывает продолжительнее, чем против респираторной (обычно не бо-
лее 4 мес) (16). Для профилактики РПЛ применяют инактивированные и живые вакцины.
Живые вакцины. В РФ используют живую вакцину из шт. СВ/69. вируса РПЛ. Вакци-
нацию кобыл проводят внутримышечно на 3-4 мес жеребости и ревакцинируют спустя 3
мес. Прививка жеребых кобыл против РПЛ вакциной из шт. СВ/69 вызывает у них умерен-
ную поствакцинальную реакцию н не влияет отрицательно на состояние жеребости (15).
Способ введения вакцины существенно не влияет на титр гуморальных АТ, тогда как тигр
секреторных АТ был выше при интраназальном применении. Жеребята, имеющие посгвак-
цинальные ВНА в титре 1:8-1:16 и анти-ГА в титре 1:16-1:32, устойчивы к контрольному
заражению вирулентным вирусом РПЛ. У лошадей образуются секреторные и гуморальные
АТ и стимуляция В- и Т-лимфоцитов. Генетическое изменение вируса особенно быстро про-
исходит при культивировании его в клетках неестественного хозяина (18). Преимуществен-
но применяют вакцину из шт. RAC-Н, полученного адаптацией вируса к сирийским хомяч-
кам, а затем длительно пассированным (360 раз) в первичной культуре клеток почки телят.
В Австрии используют вакцину из шт. ВС, прошедшего 53-56 пассажей в первичной куль-
туре клеток тестикул поросят (1, 2). Помимо того получен аттенуированный штамм вируса
(ГВЛ-4) (14), репродуцированный в первичной культуре клеток поросенка в присутствии
мутагена 5-йод-2-дизоксиуридина). Живая вакцина, приготовленная из мелкобляшечного
варианта ГВЛ-4, при подкожном введении по 0,5 жеребятам и 1,0 мл взрослым лошадям
создавала напряженный иммунитет до 1 г. Мутант ГВЛ-4 оказался нереверсибельным. Слу-
чаев абортов, заболевания или вирусоносительства у привитых животных не наблюдали.
Лиофилизированная вакцина сохраняла свои свойства в течение 2-х лет (14). Более выраже-
ны протекгивные свойства при использовании бивалентной вакцины, содержащей оба виру-
са : ГВЛ-1 и ГВЛ-4 (17).
Инактивированные вакцины. Иммуногенные препараты получены с глютаральдеги-
дом и адъювантов СТС. Вакцина обладала защитным эффектом для новорожденных жере-
бят, особенно если лошадей реиммунизировали на 6-7 мес жеребости (21).
Во Франции применяют инактивированную 3-х валентную вакцину - резекван, приго-
товленную из вирусов гриппа, РПЛ и реовирусов с использованием ГОА в качестве адъю-
ванта. Одно- и многократное внутримышечное введение инактивированной очищенной вак-
цины против гриппа и РПЛ, хорошо переносилось животными. Высокий уровень посгвак-
цинальных АТ сохранялся в течение 6 мес (5,11).
В Польше для вакцинации лошадей используют вакцинные препараты Equivac RP,
Prevaccinol и RPK. Иммунизация успешна в случаях, когда кобыл вакцинируют до развития
беременности по следующей схеме: до беременности 1-я инъекция вакцины, а 2-я и 3-я - на
3-4 и 7-9 мес беременности соответственно (7, 12). Для получения иммуногенного стимули-
рующего комплекса (ИСКОМ) использовали очищенный ВГЛ, стабилизированный детер-
гентом п-деканоил-п-метилгликозидом. Препарат содержал все основные вирусные глико-
протеины в соотношении, аналогичном их содержанию в интактном неразрушенном вирусе.
Иммунизация ИСКОМ индуцировала у хомяков антительный ответ к индивидуальным ви-
русным гликопротеинам и полипептидам. Хомячки, вакцинированные 2-кратно с интерва-
лом в 6 нед были полностью защищены от заражения 100 ЛДз0 ГВЛ-1 (22).
658
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Иммуногенность вакцин,
динамика появления и исчезновения КСА у вакцинированных животных и связь между
титрами АТ и иммунитетом изучены недостаточно. Методы серологической оценки по-
ствакцинального иммунитета не разработаны. У зараженных вирусом РПЛ установлено
снижение количества Т- и В-лимфоцитов. Иммунодепрессивное действие свойственно толь-
ко вирулентному штамму. Этот признак позволяет дифференцировать реакцию организма
на вакцинный и вирулентный вирусы РПЛ. Установлено, что при подкожном или внутри-
кожном введении живой вакцины СВ/69 появляются КСА, максимальные титры которых
отмечали через 2-4 нед после прививки. Культуральная вирус вакцина индуцирует ВНА, ко-
торые обнаруживаются на 14-й день после иммунизации. Уровень их у привитых живой
вакциной СВ/69 лошадей повышался до 30-40 дн и далее, незначительно снижаясь, выяв-
лялся до 6 мес. Колостральный иммунитет у жеребят до 3 нед соответствовал уровню ма-
теринского, затем титр АТ снижался, но еще сохранялся до 2-3 мес. В отношении связи тит-
ров АТ с резистентностью животного к экспериментальному заражению, известно лишь, что
титр КСА коррелирует с устойчивостью животных к заражению, а ВНА оказались слабым
индикатором устойчивости.
Что касается связи титров АТ с вирусоносительством и вирусовыделением, то известно
лишь, что выделение вируса после заражения не связано с уровнем АТ до инфицирования.
Двукратно привитые жеребята были чувствительны к экспериментальному заражению: тем-
пературная реакция и продолжительность экскреции вируса у них не отличались от таковой
в группе контрольных животных, но количество экскретируемого вируса было меньшим.
Виремия в присутствии ВНА в крови указывает на то, что вирус не нейтрализуется АТ, так
как он связан с лейкоцитами и вместе с ними попадает в плод, поражая его. Аборты насту-
пают в одни и те же сроки, независимо от содержания в крови ВНА. После аборта титр АТ
может повышаться.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусология. М. Колос, 1979. 2.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир.
бол. жив. М., 1991. 3.Misra V. et.al. Virology, 1988, 166 :2. 4.Morris С.М., Field H.J. Equine
veter J, 1988, 20 :5. 5.MacKowiak Metal. Bull Soc Veter Prakt Fr. 1990, 74 :4. 6.0nions D.
Equine veter J 1991, 23 :1. 7.Paweska J. et al. Med Vet 1991, 47 :4. 8.Adeuefa C.A.O. J Vet Med
B. 1992, 39 :8. 9.Wittaker G.R. etal. J Jen Virol. 1992, 73 :11. 10.Harty R.N. etal. J Virus Res
1992, 25 :1. ll.Burki F. et.al. J Vet Med B1991, 38, 6 :432. IZ.Paweska J. etal. Med vet 1991,
47, 4 :154. 13. Dimock W.W.et.al. Bull 333, Ky Agr Exp Sta.1933 :297. 14.Татаров Г., Дилов-
ски М. Вет. мед. науки, 1986, 7 :33. 15.Юров К.П. и др. Тр. ВИЭВ, 1984, 61 :72. 16.Morail-
lon A. et.al. Ann Med Vet. 1983, 328 :625. 17.Fitzpatrick A. etal. Am J Vet Res 1984, 45 :1947.
18.Studdert M.J. et.al. Arch Virol. 1986, 91 .375. 19.Studdert M.J. et.al. Arch Virol 1983, 77, 2-
4 :248. ZO.Work M.C. etal. J Biol Stand. 1979, 7 :73. П.Татаров Г. и др. Вет. Мед. науки,
1984 :4. 22.CookR.F. Vaccine, 1990, 8 :491.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННАЯ
КАТАРАЛЬНАЯ ЛИХОРАДКА
Coruza gangraenosa, Rhitis gangraenosa ( лат.), Malignat catarrhal fever, Bovine ca-
tarrhal fevet ( англ.), Coruza gangreneux, Mai de tete de contagion, Flevre catarrhale
magigne ( итал.), Bosartige Kopfkrankheit, Bosartiges Katarrhalfieber des Rindes ( нем. )
Злокачественная катаральная лихорадка (ЗКЛ) - острая инфекционная болезнь КРС и
буйволов, характеризующаяся крупозным воспалением слизитых оболочек головы, пораже-
42*
659
Г лава XVI. Family Herpesvirida Г ерпесвирусные инфекции
нием глаз и нервной системы. Болезнь встречается повсеместно. В 1972 г. тяжёлая эпизо-
отия ЗКЛ наблюдалась в штате Колорадо. Из 235 заболевших животных 87 (37%) пало.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. После высокой тем-
пературы в течение 1-2 дн развивается острое воспаление слизистых оболочек ротовой и но-
совой полостей. Из носа появляется истечение сначала слизистого, а затем гиойно-кровяного
секрета (Рис. 160). Иногда изъязвляется слизистая оболочка и происходит сужение носовых
ходов. Могут поражаться также глотка, язык и глаза. Наблюдается угнетение, иногда воз-
буждение. Смерть может наступить через 24 ч. Иногда болезнь длится до 2 нед и больше.
Летальность достигает 90%. Спорадические случаи болезни заканчиваются гибелью живот-
ного. У телят болезнь чаще протекает тяжело. У овец - инаппарантио.
Подобную болезнь наблюдали и среди оленей. Инфекционный агент передавался от од-
ного оленя к другому, телятам и кроликам. У 66 обследованных полосатых антилоп-гну, от-
ловленных в Кении, обнаружены антитела к вирусу ЗКЛ. Вирус выделен из носового секрета
6 животных и в одном случае из тканей миндалин путём заражения культуры клеток щито-
видной железы телят. Наблюдался случай заражения быка при совместном содержании с
антилопами. Очевидно, распространение вируса среди антилоп и заражение домашнего КРС
происходит через носовой секрет.
Патологоанатомические изменения характеризуются деструктивными нарушениями
респираторного и верхнего интестинального трактов. Иногда можно наблюдать бронхоп-
невмонию, а в головном мозге признаки менингоэнцефалита. Цитоплазматические включе-
ния обнаруживают в различных тканях инфицированных животных, а внутриядерные - в
клетках культуры.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ.
Возбудитель болезни (герпесвирус КРС 3) широко распространен среди жвачных
животных. Так, в Африке латентная инфекция зарегистрирована у голубого гну, коровьей
антилопы и др. видов, которые являются резервуаром вируса. Вирус ЗКЛ впервые был вы-
делен Пирси в 1953 г. В 1964 г. Армстронг описал его и отнёс к герпесвирусам. Аналогич-
ный вирус выделил Плоурайт с corp. (1963) в Кении из лейкоцитов и ткани селезёнки анти-
лопы-гну. В 1967 г. от животного с клиникой ЗКЛ выделен шт. Rims.
Морфология и химический состав. Детально не изучены. При электронной микроско-
пии вируссодержащих культур клеток обнаруживают внутриядерные, цитоплазматические и
экстрацеллюлярные герпесподобные частицы. Вируссодержащая бесклеточная суспензия
содержит частицы 2 типов: вирионы диаметром 140-220 нм с внешней оболочкой и цен-
тральным капсидом и вирионы диаметром 100 нм, состоящие из сетчатого капсида.
Устойчивость. Вирус не стабилен к физико-химическим воздействиям. В гепаринизи-
рованной крови при 4°С он сохраняется 10-12 дн. Чувствителен к эфиру и хлороформу.
АГ структура. Известны 2 штамма вируса ЗКЛ - WC-11 и 707К, которые нейтрализу-
ются с различной скоростью с гомологичными и гетерологичными АТ (4).
АГ активность. У животных-реконвалесцентов образуются ВНА, титр которых колеб-
лется в пределах 1:6-1:60. Вероятно, образуются КСА и ПА. В двух стадах антилоп иссле-
довали распространение ВНА к герпесвирусу-возбудителю ЗКЛ (лимфопролиферативного и
некротизирующего заболевания КРС). ВНА к вирусу ЗКЛ были обнаружены в сыворотках
крови 50 обследованных антилоп со средним геометрическим титром 101,23 у 42 взрослых
особей и 10154 у 2-х телят 2-иед возраста. Когда последние достигали возраста 2 мес, сред-
ний титр ВНА начал снижаться до достижения животными возраста 9 мес, после чего на-
блюдалось постепенное повышение уровня ВНА. Однако, несмотря на широкое распростра-
нение ВНА к вирусу ЗКЛ, он не был выделен из крови или носового секрета животных в
культуре клеток щитовидной железы телят и после инокуляции кроликам (5,6).
ВНА к вирусу ЗКЛ частично чувствительны к 2-меркаптоэтанолу и, вероятно, имеют
полупериод жизни 7-8 дн, тогда как АТ к вирусу чумы КРС вырабатываются в 3-5 раз мед-
660
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ленее, чем к возбудителю ЗКЛ, и нечувствительны к 2-меркаптоэтанолу. По-видимому, ви-
рус ЗКЛ КРС индуцирует образование глобулинов класса IgG.
Антигенная вариабельность и родство. Детально не изучены. Считают, что данный
вирус обладает некоторым сходством с подгруппой вирусов ветряной оспы Herpes zoster и
цитомегаловирусами.
Гемагглютинирующими свойствами не обладает.
Локализация, вирусемия, вирусоносительство и вирусовыделение. После внутри-
венного заражения вирус обнаруживают в тканях через 8-17 дн, а у некоторых телят в тече-
ние 31-36 нед. В наибольшем количестве его (больше, чем в крови) находили в лимфоузлах.
Трансплацентарная инфекция не доказана. Вопрос о длительности вирусоносительства
при ЗКЛ не решен. Описан случай, когда корова, страдающая инаппарантной инфекцией,
через 44 мес (от начала инфицирования) родила телёнка, в щитовидной железе которого (в
клеточном монослое) выявлено большое количество патогенного вируса ЗКГ.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на телятах, овцах и кроликах. В ка-
честве инокулята берут кровь больных животных. Клеточносвязанный вирус удавалось вы-
делить из крови КРС и естественно больных мулов. У телят вирус вызывал заболевание на
протяжении 5 последовательных пассажей. Инкубационный период у заражённых телят
продолжался 15-49 дн. Через 4-5 дн от начала заболевания заражённое животное погибало.
К экспериментальному заражению чувствительны кролики, морские свинки, кошки. Клини-
чески экспериментальная инфекция у телят проявлялась лихорадкой, помутнением рогови-
цы, нарушением лимфатической системы и панофтальмией. У некоторых животных наблю-
дались диарея и нервные явления. Вируссодержащая кровь больных мулов не вызывала за-
болевания ни у телят, ни у кроликов.
При парентеральном введении телятам вирус вызывал ЗКЛ. При введении телятам
культурального вируса 30-го пассажа (не связанного с клетками) животные не заболевали,
однако у них появились ВНА. По данным Плоурайта (1953), вирус ЗКЛ вызывал лихорадку
у заражённых кроликов и оставался патогенным для телят после 9 серийных пассажей жи-
вотных этого вида. Впервые описаны данные о трансмисснбельности, патогенезе, клинике
ЗЛК, вызванной африканской формой вируса ЗКЛ у белохвостых оленей (Odocoileus
viginianus) в Северной Америке. Животных заражали внутривенно кровью от заражённых
антилоп Tragelaphus stepsiceros по 50 мл или вирусом, изолированным из культуры клеток
почек эмбрионов КРС. Инкубационный период болезни у оленей равнялся 13-18 дн. Болезнь
заканчивалась смертью. Инфекция не распространялась контактным путём - незаражённые
животные, находившиеся в тесном контакте с больными остались здоровыми (7).
Культивирование. Вирус ЗКЛ можно непродолжительное время культивировать на
КЭ. Он размножается в культуре клеток щитовидной железы или надпочечников телят,
формируя синцитий и тельца-включения типа А Коудри. По мере созревания включения
становились всё более базофильными. ЦПД в заражённой культуре развивалось через 5-9 дн
и ингибировалось 5-йод-2 дезоксиуридином. Данный вирус можно культивировать в культу-
ре клеток щитовидной железы овцы, бычьих тестикул и почки кроликов. Вирус хорошо раз-
множается в культурах клеток почки, селезенки, легких, тимуса и надпочечников эмбрио-
нов коровы, овцы, в клетках Vero, вызывая образование синцитиев, постепенное уменьше-
ние н округление клеток.
Штаммы вируса ЗКЛ в культуре клеток щитовидной железы, почек и лёгкого КРС вы-
зывают разное по характеру ЦПД. Так, шт. К-30 образовывал синцитий и внутриядерные
включения во всех клеточных системах, а шт. WC11 - внутриядерные включения. Однако
синцитий формировался только в клетках щитовидной железы. В качестве вируссодержаще-
го материала брали лейкоциты. Клеточносвязанный вирус в культуре клеток образовывал
поликарионы. Вирус размножался в культуре клеток щитовидной железы, в которых он ос-
тавался связанным с клетками до 19-го пассажа. После 26 пассажей выявляли вирус, уже не
связанный с клетками.
661
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Особенности внутриклеточной репродукции не изучены. Вероятно, механизм вирус кле-
точной ассоциации аналогичен таковому при болезни Марека. В поражённых клетках появ-
ляются ДНК-содержащие внутриклеточные включения и развивается синцитий. При созре-
вания базофильность включений возрастает. ЦПД ингибируется 5-йод-2-дезокси-уридином.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Не определены. При непосредственном кон-
такте болезнь не передаётся. Предполагают, что главными носителями возбудителя ЗКЛ
служат животные других видов (главным образом овцы), а КРС - эпизоотологическим тупи-
ком. Отсутствие сезонности заболевания исключает участие кровососущих насекомых в ка-
честве переносчиков. Передача вируса происходит аэрогенным путем, с кормом, питьевой
водой. Перезаражение КРС между собой бывает редко. От больных животных выделяют
вирус, как правило, клеточносвязанный. В 1967 г. Гордон и Плоурайт обнаружили вирус
ЗКЛ в крови телят ( у 40%) 1-2-мес возраста и косуль в период виремни. Некоторые живот-
ные были заражены внутриутробно. Онн могут передавать инфекцию КРС при контакте.
Важной характеристикой ЗКЛ является отсутствие контагиозной инфекции среди КРС
при общности жилищных и пастбищных условий. Тот же феномен обнаружен в экспери-
менте на кроликах. В то же время среди дикоживущих гну ВЗКЛ легко распространяется и
даже случайно переносится на КРС, что объясняется наличием свободного от клеток вируса
в секретах этих животных. Исследовали причину отсутствия контагиозное™ ВЗКЛ у КРС. 5
быков-производителей были инокулированы внутривенно тироидными клетками быка (Bth),
культивируемыми в ассоциации с вирусом ЗКЛ, изолированными из носового секрета гну. В
результате из неосветлённых назальных и окулярных секретов всех быков в культуре клеток
щитовидной железы был изолирован ВЗКЛ. Средний инфекционный титр вируса в назаль-
ных и окулярных секретах быков был 10113-101,65, соответственно. Слюна инфицированных
быков вируса не содержала. Из надосадочной жидкости секретов выделить вирус не удава-
лось, он весь осаждался вместе с эпителиальными клетками при лёгком центрифугировании.
Отсутствие свободного от клеток вируса в носовых и окулярных секретах у инфицирован-
ного КРС является главной причиной неспособности вируса ЗКЛ распространяться путём
контакта среди этих животных. Полосатые гну Cannochaetes taurinus являются носителями
герпетического вируса, вызывающего ЗКЛ. Инфекция распространяется среди гну горизон-
тально и вертикально. Если коровы или буйволы заражаются ЗКЛ от овец, то они могут ин-
фицировать плоды, однако контактная передача вируса происходит очень редко (2).
Спектр патогенности в естественных условиях. В США во время эпизоотии ЗКЛ,
кроме КРС, болели мулы и бизоны. В Африке встречается ЗКЛ, возбудитель которой пара-
зитирует у диких коров; болезнь клинически не проявляется. От этого скота был изолирован
клеточносвязанный герпесвирус. Домашний скот заболевает при контакте с диким скотом.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патоло-
гоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Для постановки
РСК в качестве АГ берут культуральный вирус, размноженный в культуре клеток щитовид-
ной железы КРС и концентрированный. У экспериментально заражённых животных специ-
фические АТ выявляют начиная с 3-й нед после инокуляции вируса. Метод разведения ком-
племента выявляет в 2 раза больше позитивных сывороток, чем обычно используемый ме-
тод разведения сывороток. С помощью ПЦР вирусный геном может быть определен в не-
очищенном клеточном лизате. Этот генетический зонд позволяет провести скрининг боль-
шого количества животных на присутствие герпесвируса в лейкоцитах периферической кро-
ви, а также в пробах тканей животных, подозреваемых в заболевании ЗКЛ (3).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен. Телята-реконвалесценты после экспериментальной инфекции
приобретают иммунитет продолжительностью не менее 4 лет. У телят обнаружен пассивный
иммунитет, полученный через молозиво. Однако колостральные антитела не защищают жи-
662
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
вотного от экспериментального заражения, особенно в первые 3 мес жизни телёнка. Дли-
тельная персистенция вируса ЗКЛ КРС на фоне специфических АТ объясняется недоступно-
стью действия последних на вирус, находящийся в клеточносвязанном состоянии. Попытки
создания живой и инактивированной вакцин против ЗКЛ КРС оказались безуспешными. Не-
эффективность вакцины объясняют тем, что гуморальные факторы иммунитета не обеспе-
чивают устойчивости к данному вирусу (1).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусология., М., Колос, 1979. 2.Bernard B.J.H. et.al. J Vet
Res,1990, 57, 3 :201. 3.Hsu D. et.al. Arch Virol 1990, 114, 3/4 :259. 4.Mirangy P.K.. Bull Anim
Helth Prochect in Afr,1990, 38, 2 :163. 5.Mushi E.S. et.al. J Wildlife Diseases, 1981,17, 3 :467.
6.Mushi E.S. et.al. Bull Anim Health and Prod Afr,1981, 29, 1 :111. 7.Whitenack D.L. et.al. J
Wildlife dis. 1981, 17, 3 :443.
ГЕРПЕСВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine herpesvirus infections
Помимо вирусов инфекционного ринотрахеита, маммиллита и злокачественной ката-
ральной лихорадки КРС из трахеи, заглоточных лимфоузлов и других органов животных
этого вида удавалось выделить герпесвирусы КРС, не имеющие четкого таксономического
положения. Идентичные герпесподобные вирусы были выделены от коров, больных лимфо-
саркомой, однако этиологическая роль их в появлении лимфосарком и герпетического мам-
миллита не выяснена. В 1969 г. Боулинг, Гудхерд и Пламмер выделили 6 герпесподобных
вирусов из ротовой полости и гениталий КРС, идентичных между собой в АГ отношении.
Предполагают, что генитальный вирус герпеса вызывает рак шейки матки у коров. В 1971 г.
Лутер и др. выделили из спонтанно дегенерировавшей почки клинически здорового теленка
вирус, характерный для группы герпетических вирусов. Бычьи вирусы герпеса (BHV-1) им-
мунологически отличны от герпесвируса коз, который является новым членом рода герпес-
вирусов.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезни КРС, вызы-
ваемые малоизученными герпесвирусами, проявляются довольно разнообразно, однако ча-
ще характеризуются поражением органов дыхания.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. По физико-химическим свойствам и ультраструк-
туре “латентные” герпесвирусы не отличаются от вируса ИРТ. Разница в ультраструктуре
этих вирусов и вируса ИРТ состоит в том, что у первых встречается мало частиц с суперкап-
сидными оболочками (около 9 на 100), а у вируса ИРТ это соотношение составляет 1:1. Нет
особых различий и в локализации вирусного АГ в зараженных культурах клеток, хотя в ди-
намике его образования различия заметны. Среди вирусов герпеса КРС обнаружены вирус-
ные частицы 4-х типов: полные и пустые оболочечные, полные и пустые безоболочечиые.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям различных вирусов герпеса КРС не
изучена. Все они чувствительны к нагреванию, хлороформу, эфиру, трипсину, дезоксихола-
ту натрия и к кислой среде (pH 3).
АГ структура не изучена.
АГ активность. В организме КРС, кроликов и морских свинок вирус герпеса КРС обра-
зует ВНА. Однако имеется сообщение, что телята, зараженные экспериментально, ие дают
положительных серологических реакций. Попытки получить антисыворотки к nrr.DN-599 на
кроликах, цыплятах и крысах оказались безуспешными даже при использовании концентри-
рованного вируса с адъювантом.
663
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
АГ вариабельность и родство. В АГ отношении вирусы герпеса КРС (что установлено
в перекрестной PH) идентичны, но не родственны вирусам герпеса простого, ринотрахеита,
маммиллита - Allerton, болезни Ауески, шт. Мовар 33/63, ЗКЛ, герпеса собак, лошадей и
птиц. В перекрестной PH установлено родство шт. СТ-66 с вирусами бычьего герпеса Мовар
33/63, Оксфорд, ТК, ТНЛ и Ну/67, однако все они не имели родства с вирусом ИРТ. Два
штамма-изолята ГВ КРС, выделенные в 1972 г. Смитом и др., а также шг. DN 599, FTC и
SS, АГ родственные между собой в серологических реакциях, отличались от вируса ИРТ.
Штамм, выделенный Луге ром и др. (1971), родствен шт. Reims (возбудителю ЗКЛ КРС).
Несмотря на то, что штаммы ГВ КРС могут различаться по тропизму (оральные, респи-
раторные, генитальные), они идентичны в АГ отношении, по плотности ДНК и характеру
ЦПД. Поэтому их нельзя разделить на типы 1 и 2, что принято для вирусов герпеса челове-
ка. Высказано предположение о родстве вируса герпеса коров к вирусу герпеса типа Allerton
- возбудителю кожной бугорчатки КРС в Африке. В других сообщениях это отрицается.
ГА свойства. ГА активностью вирусы герпеса КРС не обладают.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. У больных живот-
ных вирус выделяется с истечениями из носа в течение 10 дн, в смывах из глаз - 3 дн, из
легких, бронхов и трахеи - в различные сроки. ГВ КРС (шт. СТ-66) реизолируют из суспен-
зии лейкоцитов крови, носоглоточной слнзи, бронхиальных и средостенных лимфоузлов.
Экспериментальная инфекция. Заболевание воспроизводится у 1-дн хомячков, крыс и
мышей, у которых в течение 10 дн после внутрибрюшинного заражения развивается кахек-
сия, появляются кожные поражения, и животные гибнут. Все другие штаммы вируса герпеса
КРС патогенны для новорожденных крыс. При экспериментальном заражении телят шт.
СТ-66 в нос, трахею и внутривенно наблюдают повышение температуры тела, выделения из
носа, кашель, одышку. Клинические признаки болезни появляются на 5-й дн после зараже-
ния и остаются заметными в течение 10 дн. Данный штамм патогенен для телят при внутри-
кожном заражении в область морды. Большие заражающие дозы вызывают генерализиро-
ванные поражения кожи. При заражении в слизистую оболочку рта образуются язвы, а в
язык - эритема.
Два штамма герпеса КРС, выделенные в 1972 г. Смитом и др., при введении телятам
вызывали острый некротизирующий лимфоцитарный фарингит и трахеит. У телят, зара-
женных интраназально или в трахею герпесвирусом КРС (штамм ДН-599, выделенный Ма-
хонти и др., 1972), появлялись признаки поражения респираторного тракта, у 50% больных
животных отмечался конъюнктивит, 43% телят тяжело болели и погибли. Шт. Лутера ока-
зался апатогенным.
Культивирование. Многие выделенные от КРС штаммы бычьего герпеса размножают-
ся в культуре клеток тестикул и почек телят, овец, кроликов, щитовидной железы телят. В
пораженных клетках формируются ДНК-содержащие включения. В культуре клеток эм-
брионов коров они вызывают характерные однотипные ЦПИ и многочисленные внутри-
ядерные включения типа А Коудри. Через 3 дн после заражения в инфицированном моно-
слое обычно обнаруживают округлые бляшки с неровными краями диаметром 1-3 мм. В
1969 г. герпесподобные вирусы выделены от коров, больных лимфосаркомой. В культуре
клеток селезенки эмбриона коров они индуцировали образование синцития.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи. Предполагают, что, помимо прямого контакта больных и
здоровых животных, в передаче инфекции принимают участие мухи.
Спектр патогенности в естественных условиях . Штаммы герпесподобных вирусов,
выделенные в 1969 г. от коров, больных лимфосаркомой, непатогенны для морских свинок,
кроликов, мышей, хомячков и телят. Патогенность шт. СТ-66 изучена на телятах. Виру-
лентный шт. Neethling, выращенный в культуре клеток почек ягнят и телят, патогенен для
жирафов и антилоп и непатогенен для буйволов и черных антилоп гну. Вспышку болезни со
значительным летальным исходом среди буйволов наблюдали в декабре 1969 г. в Нацио-
664
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
нальном парке Танзании и в прилегающих районах Кении. От заболевших животных выде-
лили при заражении культуры клеток почки и тестикул теленка шт. ВА вируса типа Allerton.
При исследовании 17 видов диких животных в Танзании, Кении, Уганде обнаружили АТ у
всех буйволов старше 2-х лет, у многих жирафов, гиппопотамов, сернобыков, у нескольких
антилоп канна, чернопятнистых и лесных гну. В некоторых районах этих стран инфициро-
ванность домашнего КРС старше 2-х лет достигала 85-95%; титры АТ были ниже, чем у
буйволов. Клинически болезнь у домашних животных не проявлялась. У овец и коз АТ
встречаются редко. Очевидно, вирус Allerton широко распространен среди буйволов, но ин-
фекция протекает легко.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз основан на результатах лабораторного исследования. Для выделения вируса
берут смывы из носа и заражают культуру клеток почки эмбриона КРС. Выделенный вирус
идентифицируют в PH в культуре клеток с иммунными специфическими сыворотками к ви-
русам герпеса КРС (ИРТ, герпеса типа Allerton, ЗКЛ и др.).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет ие изучен, специфическая профилактика не разработана.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.СюринВ.Н. и др. Части, вт. вирусол., М., Колос,1979.
РИНОТРАХЕИТ КОШЕК
Feline viral rhinotracheitis ( англ. ), Katzenschnupfen,
Infektioser Katzenschnupfen, Katzenstaube (нем.)
Ринотрахеит кошек (PTK вирусный инфекционный ринит кошек, эпидемическая вирус-
ная кориза кошек, герпес кошек) - заразная вирусная болезнь, характеризующаяся пораже-
нием органов дыхания. Заболевание распространено широко в мире и характеризуется по-
вышением температуры тела, развитием ринита, конъюнктивита, бронхита, трахеита и реже
пневмонии. Летальность достигает 30%. В неосложненных случаях заболевание длится 3 -5
дн. Реконвалесценты являются длительными носителями и выделителями вируса. Состояние
носительства может продолжаться несколько лет (1).
Болезнь встречается в США, Канаде, Швейцарии, Венгрии, Англии, Франции, Австра-
лии, Новой Зеландии. Эпизоотии инфекционного РТК носят сезонный характер, достигая
максимума в июле-августе (5). РТК, вызываемый герпесвирусом кошек (ГВК-1) типа 1 -
основное респираторное заболевание кошек, встречающееся у 50-75% животных.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод продолжается 3-8 дн. При остром течении ринотрахеит характеризуется серозным
конъюнктивитом, ринитом, чиханием, слюнотечением, отказом от корма, питья; температу-
ра тела повышается до 39,5-40°С. Через 2 дня слюнотечение прекращается, истечения из
носовой полости становятся гнойными, конъюнктивит становится гнойным или исчезает.
Чаще при остром течении болезни в первые 2 дн наблюдают отсутствие аппетита, повыше-
ние температуры тела, повышенную чувствительность при надавливании в области гортани
и трахеи. Несколько позже появляется ринит и конъюнктивит, вначале серозный, затем
гнойный. Выздоровление при таком течении болезни наступает через 10-14 дн. Если бо-
лезнь затягивается, развивается атония кишечника, появляется сильный запор, слабитель-
ные неэффективны. Функция кишечника восстанавливается лишь после улучшения общего
состояния организма. Иногда ринит принимает хроническое течение и диагностируется го-
дами, развивается бронхопневмония, язвенный кератит, возможно прободение роговицы,
некрозы кончика языка и расстройство ЦНС, выражающееся дрожанием конечностей, атак-
сией и манежными движениями. Повышение температуры тела, истечения из глаз и носа,
сильный кашель, затрудненное дыхание, одышка, пневмония и изъязвления в ротовой по-
665
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
лости при РТК наблюдали Сулимов и др. (4). Вирус РТК вызывает различные поражения
глаз. Чаще наблюдают язвенный кератит. Кроме ринита, конъюнктивита, депрессии, у
больных котят часто появляется серозное, катарально-гнойное или фибринозное воспаление
верхних дыхательных путей.
Гистологически изменения обнаруживают в свежих случаях в мерцательном эпителии
слизистой носовой полости, раковин, гортани, при более затяжном течении болезни - в
плоском эпителии носоглоточного кольца, в тканях трахеи, бронхов и частично бронхиол. У
многих кошек в эпителии носовой полости и ороговевшем эпителии глотки находят эозино-
фильные тельца-включения типа А Коудри, оттесняющие хроматин ядра к периферии.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделили в США и идентифицировали как вирус группы герпес Крэн-
делл и Маурер (1957), Кранделл и др. (1960). В Европе аналогичный вирус был изолирован
Бюрке в 1963 г. Болезнь описал Кранделл в 1971 г. Помимо вируса ринотрахеита кошек,
описан новый вирус герпеса кошек, который, будучи ассоциирован с клетками, сходен с ци-
томегаловирусом и в инфицированных клетках индуцирует кристаллические образования.
Морфология и химический состав. Диаметр вирионов 151-225 нм, число капсомеров
162, они продолговатой формы, полые, имеют липопротеидную оболочку. В ядрах инфици-
рованных клеток видны многочисленные вирусные частицы с одинарной электронно-
плотной оболочкой. Известно, что геномная ДНК имеет плавучую плотность 1,709 г/см3, что
соответствует 48% ГЦ пар. Мол.м. ДНК составляет 70-85-106 МД(12).
Устойчивость. Вирус чувствителен к хлороформу и кислым значениям pH. Размноже-
ние его подавляется 5-бром-дезоксиуридином. При 4°С и pH 7,2 вирус инактивировался че-
рез 154 дн, при 25°С - через 33 дн, при 37°С - 36 ч, 56°С - 4-5 мин. При pH 4 вирус инакти-
вировался через 24 ч, при pH 5 - через 39 дн., при pH 6 - через 171, при pH 7 - через 154,
при pH 8,0 - через 58 дн, при pH 9 - через 17 дн В 0,2%-ном р-ре формальдегида вирус
инактивировался в течение суток, в 0,018%-ном - за 13 дн, а в 0,009%-ном - за 15 дн. При
воздействии этилового спирта в течение 16 сут титр вируса снижался с 1О5’3 до 102 ТЦД
so/мл. Лиофилизация способствует длительному сохранению вируса.
Антигенная структура не изучена.
АГ активность. У животных-реконвалесцентов образуются ВНА. Этот вирус успешно
размножается в обычных Т-лимфоцитах, стимулированных конконавалином А, и в кошачь-
их Т-лимфобластоидных линиях МУА-I и FL74 до титров 104, 103,23 и 104’3 ТЦД 50/мл соот-
ветственно. Максимальные инфекционные титры культурального вируса отмечали через 36-
48 ч после заражения (13).
АГ вариабельность и родство. Вирус РТК отличается от других кошачих вирусов в PH
и РСК. В АГ отношении различные штаммы ГВК-1 идентичны. В PH он не проявляет род-
ства с вирусами панлейкемии кошек, Herpes simplex и герпеса КРС. Эталонный штамм ви-
руса РТК- с-27. С помощью поливалентных и монАТ установлено АГ родство ГВК-1 и гер-
песвируса собак. Для этого использованы PH, ИФ, ИФА, иммуноблотинг, проводимые с ис-
пользованием монАТ. Основными белками, дававшими в перечисленных тестах перекрест-
ные реакции с гомологичными и гетерологичными АТ, оказались протеин 143/108 кД и гли-
копротеид 60 кД ГВК-1 и протеид 145/112 и гликопротеин 41 кД герпесвируса собак (ГВС).
Гликопротеиды, дававшие перекрестные реакции, обладали Г А-активностью (14).
Детально Г А свойства не изучены.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. В дыхательных пу-
тях выздоровевших кошек возбудитель обнаруживается до 50 дн. Возможно латентное носи-
тельство, так как иногда его удавалось выделить от клинически здоровых кошек.
Экспериментальная инфекция. При внутримышечном заражении беременных кошек
происходят аборты или рождаются мертвые котята, содержащие вирус. Клинических при-
знаков болезни у инфицированных кошек-матерей нет. У абортировавших животных встре-
чаются множественные инфаркты плацентарных лабиринтов, тромбоз сосудов, эндометрия
666
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
некоторых зон плаценты, состоящих из клеток с эозинофильными внутриядерными включе-
ниями. При внутривенном введении вируса котятам во всех исследованных костях отмеча-
ются остеомиелические поражения, ограничивающиеся местом остеогенеза. В местах пора-
жения выявляются внутриядерные включения, вирусный антиген и инфекционный вирус.
Удавалось заражение короткошерстных кошек в возрасте от 4 до 6 мес шт. В927 в дозе 107,
105,103 и 101 ККИД. У кошек развивается типичный респираторный синдром верхнего ды-
хательного тракта и появлялись ВНА (11).
Культивирование. Вирус ринотрахеита кошек размножается в культуре клеток эм-
брионов котят и почки кошек. ЦПИ в зараженной культуре развиваются уже через 1 сут.
Они характеризуются образованием больших, округлых рефрактильных клеток и синцития
(гигантских клеток, содержащих 10-20 ядер) с внутриядерными тельцами-включениями.
Титр вируса в таких культурах к 3-4-му дню инкубации составлял 105’5 ТЦЩо/од мл. В куль-
туре клеток почки, тестикул и легких кошки вирус вызывает фокусные поражения через 40-
48 ч, максимальной ЦПЭ наблюдается через 98 ч, а через 120 ч инкубирования клеточный
монослой обычно полностью отделяется от стекла. ГВК репродуцируется в культуре клеток
почки котят в титре до 6,5-7,5 1g ТЦДзо/мл и образует бляшки(4). Кроме того, ГВК шт.
G2620 хорошо репродуцируется в фибробластах эмбриона кошек. Для аттенуации ГВК тре-
бовалось 17 пассажей в культуре клеток Vero (17). Только 1 из 4-х штаммов гибридомных
клеток к ГВК (nrr.UBF2) продуцировал строго специфические монАТ против гомологичного
штамма ГВК “Линкольн” (7). Кроме культуры клеток кошки, вирус репродуцируется в
клетках КРС, человека и обезьяны, образуя гигантские клетки и внутриклеточные включе-
ния. В культуре клеток почки эмбриона человека вирус вызывал абортивную инфекцию, а
репродуцированный вирус оказался неинфекционным (5). В инфицированной культуре кле-
ток при окраске их гематоксилин-эозином выявляются внутриядерные включения. Реплика-
ция данного вируса может происходить и в клетках естественно резистентных животных,
если вирус преодолевает клеточную стенку. Так, он сорбируется естественно резистентными
клетками легкого эмбриона человека после обработки их инактивированным вирусом Сен-
дай и вызывает ЦПД, но инфекционного вируса из таких клеток выделить не удается.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные кошки. Зара-
жение происходит через респираторный тракт. Выздоровевшие животные остаются носите-
лями вируса и при контакте со здоровыми котятами могут вызывать их заболевание.
Спектр патогенности в естественных условиях. Болеют кошки всех возрастов. Забо-
леваемость достигает 50%, а смертность - 5-20%.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз основан на выделении и идентификации вируса. У кошек при насморке, конъ-
юнктивите и рините помимо вируса ринотрахеита могут быть выделены пикориавирусы, ре-
овирусы, микоплазмы и агент кошачей пневмонии. При дифференциации этих болезней
важное значение имеет микроскопическое исследование соскобов конъюнктивы глаза, ок-
рашенных по методу Гимза. Возбудитель кошачьей пневмонии (хламидии) вызывает обра-
зование многочисленных цитоплазматических включений в эпителиальных клетках в пер-
вые 2 нед болезни. При РТК специфических внутриядерных включений в эпителиальных
клетках конъюнктивы нет. Для уточнения диагноза ставят PH в культуре клеток почки или
легкого котят, а также учитывают избирательную сохраняемость вируса при разных темпе-
ратурах. Для PH используют стандартный вирус и инактивированную сыворотку. Учитыва-
ют PH на 3-й дн.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные приобретают кратковременную невосприимчивость. АТ обра-
зуются в низких титрах. Для профилактики РТК используют 3 типа вакцин: 1) живую атте-
нуированную для парентерального введения; 2) живую вакцину для интраназального введе-
ния; 3) инактивированную вакцину с адъювантом для парентерального введения (9). Вак-
667
Глава XVI. Family Herpesviiida Герпесвирусные инфекции
цинний шт. F-2, выделенный из слез кошки с симптомами ринотрахеита, прошел 37 пасса-
жей в культуре клеток почки котят при 35-37° С, затем 44 пассажа при температуре 31-33°
С и 17 пассажей в культуре клеток перевиваемых клеток языка котенка. Кошек вакциниру-
ют в возрасте от 3 мес до 3 лет. Через 3 нед вакцинацию повторяют. Иммунитет от вакцины
- не менее 1 г. Для проверки иммунитета используют вирулентный шт. 10 FVR (С-27), про-
шедший 10 пассажей в культуре клеток почки котенка.
Живые вакцины готовят из аттенуированных штаммов, размноженных в культуре кле-
ток почки котят. Для аттенуации вирулентного штамма вируса требовалось не менее 50 пас-
сажей при температуре 33-25°С. Живая сухая вакцина, полученная из такого штамма, безо-
пасна и высокоэффективна. Аттенуированный штамм сохранял выраженную АГ активность
и был пригоден в качестве вакцинного после 300 и более пассажей в культуре (6). Кошки,
привитые интраназально живой вакциной (Katavac-CH) из термочувствительного штамма (5
1g ТЦД5о), становились устойчивыми к интраназальному заражению вирулентным штаммом
(7 1g ТЦД50). Вакцинация сопровождалась незначительной реакцией и выделением вакцин-
ного вируса в течение 6 дн. Устойчивость вакцинированных кошек к эксперименталльному
заражению установлена через 4 дн. Экскреция вирулентного вируса была низкой (10).
Инактивированную вакцину получают из культурального ГВК-1 при инактивации виру-
са р-пропиолактоном. Напряженный иммунитет и высокий титр гуморальных АТ отмечали
после 2-кратного введения вакцины. ВНА сохранялись в течение 10 мес и в то же время
имел место бустерный эффект на повторную вакцинацию, а также обнаружена антителоза-
висимая цитотоксичность, обусловленная лейкоцитами (16).
Помимо этого применяют живые вакцины из естественно или искусственно аттенуиро-
ванных штаммов ГВК (2, 8). В 1991 г. предложена вакцина против РТК, представляющая
собой смесь модифицированных живых и инактивированных вирионов. Вакцина эффектив-
но снижает частоту респираторных заболеваний у кошек. Полностью безопасна. В настоя-
щее время изучается возможность использования её в качестве рекомбинантного вектора
для вакцинации кошек против ретровирусов кошек (лейкоза кошек - FeLV, иммунодефицита
кошек FIV). Сконструированы рекомбинатные варианты герпесвирус ринотрахеита кошек,
экспрессирующие в иммуногенной форме АГ env и gag вируса лейкоза кошек (15).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Дроздов С.Г. и др. ЖМЭИ, 1983, 7 :13. 2.3езеров В.Г. и др. ЖМЭИ, 1983, 10 :82. 3.
Сергеев В.А. Вирус, вакцины. Киев.Урожай.,1993. 4.Сулимов А.А. и др. Тез. докл. Всеросс.
н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995, 223. б.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., М., Уро-
жай,1979. б.Татаров Г. и др. Вет.мед.науки.,1984 :4. 7.Ashour Ab et.al .Agr bros med vet e
zootech., 1990, 42, 6 :499. 8.Bittle J.L. et.al. J Am Vet Resl976, 37 :275. 9.Chappuis G. et.al.
Develoup Biol, Stand.,1982, 52 :458. lO.Cocker F.M. et.al. Vet Rec,1984,114 :353. ll.Gaskell
R.M. et.al. J Comp Pathol , 1979, 89, 2 :179. 12.Harrman S. et.al. Dtsch Ges Hyg und Mier,
Heidelberg, 1982 :19. 13.Hirimoto P. et.al. J Vet Med Sci.,1991, 53, 3 :503. 14.Lumcumpao J.A.
et.al. Arch Virol,1990 :165. 15.Nunberg J.H. et.al. Conf Cold Spring Horbor, N.Y., 1990 :191.
16.Tham K..M. et.al. J Vet Med ,1987, 34, 585 :701. 17.Williams R.A. et.al. Avian Pathol.,1991,
20 :585.
ГЕРПЕС СОБАК
Herpesvirus-canis-Infektion des Hundes ( нем.),
Herpesvirus infection of puppies , Canine tracheobronchitis ( англ.)
Герпесвирусы собак вызывают остропротекающую безлихорадочную виремическую
болезнь новорождённых щенков, которые могут заражаться трансплацентарно. Болеют в ос-
новном щенки до 3-нед возраста.
668
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Первые клинические
признаки появляются у щенков 7-10-дн возраста и характеризуются отсутствием аппетита,
ознобом, поскуливанием, одышкой, слабыми истечениями из носа, болезненным и мягким
животом, потерей обоняния, желтовато-зелёным калом. Температура тела нормальная. Ин-
кубационный период продолжается несколько дней, а болезнь длится около 9 дн. За 1-2 дн
до гибели щенки отказываются от корма, дыхание становится затруднённым, координация
нарушается. Щенки погибают через несколько часов после появления симптомов болезни.
У взрослых собак герпетическая инфекция протекает чаще инаппаратно, сопровождаясь
лёгким поражением респираторных органов и половых путей.
При вскрытии трупов животных находят геморрагии на слизистых оболочках и некрозы
паренхиматозных органов. Постоянно встречается спленомегалия; лимфоузлы увеличены.
Стенки мелких кровеносных сосудов некротизированы. Некротические поражения и гемор-
рагии обнаруживают в почках, селезёнке, печени, лёгких, надпочечниках, тонком кишечни-
ке и мозге. Менее выражены поражения в желудке, поджелудочной железе, сальнике, сет-
чатке глаз, миокарде. В междольковых артериях и их ветвях отмечались типичные измене-
ния в виде фибриноидного некроза, скопления фибрина в виде неправильных по форме аг-
регатов в цитоплазме некротизированных клеток средней оболочки и эндотелии (5).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус герпеса собак имеет типичную для рода морфологию. В составе вирионов выяв-
лено 3 гликопротеина, индуцирующих образование гомо- и гетерологичных ВНА (2). Наи-
большей АГ обладает гликопротеин gl45/l 12, содержащий нейтрализующий домен из 3 пе-
рекрывающихся эпитопов (3). Главными перекрестно реагирующими белками вируса герпе-
са кошек и собак оказались соответственно gl43/108, gp60, gl45/l 12, g41 (4). Через 3 дн по-
сле заражения вирус обнаруживается ИФ во всех органах и клетках ЦНС.
ДИАГНОСТИКА И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Не разработаны. Этиологическим фактором трахеобронхита является большая группа
вирусов, поражающих респираторные пути собак (адено- и реовирусы), парагрипп, а также
микробы (вторичная инфекция) (1).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусол., М., Колос,1979. 2.Сергеев В.А. Вирусн. вакци-
ны,Киев,У рожай, 1993. 3.Limcumpao J.A. et.al. Jap J Vet Sci, 1990, 52 :352. 4.Rota P.A. et.al.
Arch Virol ,1990, 115 :139. 5.Yamamura T. et.al. J Vet Med Sci, 1992, 54, 4 : 779.
МАММИЛЛИТ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine ulzerative Mamillitis (нем.), Bovine mammilitis,
Herpesvirus mammilitis, Bovine herpes таттПШя(англ.)
Язвенный маммиллит КРС (герпетический мамиллит) характеризуется появлением
больших пузырьков главным образом у основания соска. Везикулы прорываются, на их мес-
те образуются струпья и развивается гангрена. Болезнь зарегистрирована в Англии, Италии.
В Великобритании впервые отмечена в 1963 г., Монголии - 1980 г.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Описано несколько
форм клинического проявления маммиллита. Симптомы болезни, вызванной герпесвирусом
типа Allerton, характеризуются изъязвлением кожи сосков и реже кожи вымени и других
частей тела, некротизированием эпителия кожи в области сосков, появлением больших пу-
зырьков. Везикулы прорываются, на их месте образуются струпья и развивается гангрена
или образуются болезненные, медленно заживающие язвы (Рис. 161). Инкубационный пе-
669
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
риод продолжается 5-10 дн. Может поражаться до 50% коров стада. У 10% животных пора-
жается кожа вымени, у 22% больных развивается мастит. Заболевание продолжается 10-12
нед, протекает доброкачественно.
Герпетический маммиллит - болезнь сезонная, распространяется с конца июня по но-
ябрь. Чаще отмечается в годы, благоприятные для появления больших популяций насеко-
мых - потенциальных носителей вируса.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус Allerton изолировак в 1957 г. в Южной Африке Александер от КРС, больного но-
дуллярным дерматитом (бугорчатой). В 1960 г. Хьюгелен выделил его от телят с эрозиями.
Вирус был отнесен к группе герпесвирусов КРС (Herpesvirus bovine 2/ Allerton). В 1964 г.
Мартин и Лаудер показали, что язвенный мамиллит КРС вызывается самостоятельным ви-
русом Bovine mammillitis virus (BMV). Он был изолирован от КРС, имевшего язвы на со-
сках и вымени. Позднее аналогичный вирус обнаружен в язвах ротовой полости погибшего
теленка. При вскрытии у него найдены язвенные поражения пищеварительного тракта. Ви-
рус язвенного маммиллита выделяли при поражении ротовой полости у телят-сосунов.
Морфология и химический состав. В морфологическом отношении штаммы возбуди-
теля маммиллита (69/110 и 69/1) идентичны. Вирионы размером 85-95 нм окружены не-
плотной внешней оболочкой с полыми капсомерами, расположенными вокруг по принципу
кубической симметрии. Это ДНК-овый липовирус, по структуре и свойствам сходный с ви-
русом Allerton. Впервые вирус 69/1LO был идентифицирован в Италии.
Устойчивость. В 20%-ном растворе эфира, в 10%-ном растворе хлороформа и в среде с
pH 3 при температуре 50° С вирус погибает в течение 30 мин. Размножение его замедляется
добавлением в среду 5-БДУ и угнетается добавлением тимидина, что подтверждает его
ДНК-овую природу.
АГ структура и активность. Не изучена. Вирус индуцирует образование ВНА.
АГ вариабельность и родство. Язвенный мамиллит могут вызывать 4 шт. вируса:
Allerton, 69/110, 69/1LO и TV, АГ родство которых и вариабельность не изучены. Изолят,
содержащий вирус 69/1LO, проявил АГ родство к вирусам Allerton.
ГА свойства не изучены.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. При заражении КРС
мамиллитом в естественных условиях вирус выделяется с мочой и калом. Он содержится
только в жидкости везикул и почти не выделяется из струпьев и язв. Необходимо жидкость
везикул (имеющих кислую реакцию) исследовать как можно быстрее, так как вирус герпеса
неустойчив в кислой среде. При экспериментальном заражении вирус Allerton выделяли из
крови, смывов зева и из клещей, собранных с больных животных в период виремии.
Экспериментальная инфекция. Штамм 69/1LO возбудителя маммиллита КРС непа-
тогенен для взрослых кроликов, крыс, мышей. Чувствительными оказались только 1-
дневные хомячки, крысы, мыши и морские свинки. У телят и коров вирус вызывает диссе-
минированное поражение кожи, а при внутрикожной инокуляции - местную реакцию, ха-
рактеризующуюся появлением на месте инъекции узелков, которые до 8-10-го дн увеличи-
вались в размере. Ткань вокруг них становилась отечной. При введении вируса внутривенно
на 6-й дн на коже появлялись многочисленные узелки. С 9-10-го дн у животных наблюда-
лась лихорадка, а на 6-17-й дн из развившихся узелков регулярно удавалось выделить вирус
при любом методе заражения. Введение в толщу эпителия языка вируса типа Allerton вызы-
вало некроз эпителия и эрозии. У инфицированных буйволов отмечались общая тяжелая ре-
акция и генерализованное поражение кожи и слизистых оболочек, а в смывах из носа обна-
руживался вирус. Вирус удавалось выделить из смывов из зева и из клещей, собранных с
животных в состоянии виремии.
При внутрикожном заражении телят шт. 69/1LO наблюдают ограниченную кожную ре-
акцию, лейкопению, снижение количества эритроцитов и гемоглобина. При респираторном
заражении телят отмечают температурную реакцию и лейкопению. При внутривенной инъ-
670
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
екции указанных вирусов на 6-7-й дн образуются многочисленные кожные поражения,
главным образом на морде, щеках, подгрудке, спине, груди, мошонке. У телят отмечают
лейкопению и температурную реакцию, у коров при заражении в кожу сосков через 2-4 дн
развиваются ограниченные поражения на месте введения вируса.
При экспериментальном заражении недавно отелившихся животных вирусом маммил-
лита поражения появлялись вначале на вымени, далее развивался вульвовагинит в виде
микровезикуляции эпителия вагины, затем следовала сильная воспалительная инфильтра-
ция слизистой полиморфноядерными лейкоцитами. Иногда в мезинхимальных и эпидер-
мальных клетках обнаруживались внутриядерные тельца-включения. Из биопсированных в
этот период тканей удавалось выделить активный вирус. У телят, заражённых вирусом
Allerton, развивался поверхностный некроз кожи. Для кроликов вирус патогенен только в
первых пассажах. Морские свинки более восприимчивы к вирусу, новорождённые - высоко-
чувствительны. Интрацеребральное их заражение приводит к образованию кожных пораже-
ний, в которых при гистологическом исследовании обнаруживали гигантские многоядерные
клетки такого же типа, какой наблюдается в инфицированных монослойных культурах кле-
ток тестикул быка и барана. Вирус Allerton удавалось пассировать на мышатах сосунах при
интрацеребральном заражении; в ходе пассажей наблюдалась регулярная гибель животных.
Культивирование. Шт.69/1ЬО, 69/110 и TV размножаются в культуре клеток ПЭК,
кожи плода коровы, а также в диплоидных клетках ВНК-21. В культуре ПЭК вирус вызыва-
ет через 72 ч ЦПИ типа крупного синцития в виде сетчатого монослоя с большим числом
ядер, многие из которых содержат одно и больше эозинофильных телец-включений типа А
Коудри, отделенных от краевого хроматина ясной зоной. В культурах клеток бычьего про-
исхождения через 3 дн после инфицирования вирус образует бляшки диаметром 1-3 мм. В
культурах, заражённых вирусом в разведении 10'1, к 4-му дн бляшки сливаются, а в культу-
рах, соответствующих более высоким разведениям, остаются ясно различимыми. Лучшее
бляшкообразование наблюдают с гидролизованным крахмалом и агарозой. Вирус также
размножается в культуре клеток почек ягнят. Через 4 дня после заражения в ядрах эпидер-
мальных клеток ЭМ выявляются многочисленные вирусные частицы размером 85-95 нм.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Герпетический мамиллит имеет сезонный ха-
рактер и распространяется в период с конца июня по ноябрь, причём чаще в годы, благо-
приятные для появления больших популяций насекомых - потенциальных носителей вируса.
Болезнь распространяется мухами и птицами, чаще цаплями, а также через доильные аппа-
раты и руками доярок. Распространение маммиллита от стада к стаду, по-видимому, соот-
ветствует направлению господствующих ветров. Доказано, что вирус Allerton может меха-
нически переноситься насекомыми.
Спектр патогенности в естественных условиях. Помимо КРС, вирус Allerton вызы-
вает заболевание у овец и, вероятно, у коз.
ДИАГНОСТИКА
Для выделения вируса используют первичные однослойные культуры почек ягнят. В
клетках культуры ткани, в интерстициальных, эндотелиальных клетках и в макрофагах ко-
жи и подкожной клетчатки больных животных обнаруживают цитоплазматические и внут-
риядерные включения. При серологическом исследовании в последние дии болезни выяв-
ляются специфические ВНА.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен. Для профилактики герпетического маммиллита КРС применяют
формолвакцину и живую аттенуированную вакцину из вируса Allerton. Живую вакцину из
аттенуированного шт. TV вводят внутримышечно. Она сообщает иммунитет продолжитель-
ностью до 8 мес. Вакцина безопасна для стельных коров, привитые животные не перезара-
жают иепривитых при контакте.
671
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ИНФЕКЦИОННЫЙ
ЛАРИНГОТРАХЕИТ ПТИЦ
Infectiose Laryngotracheitis des Huhnes(neM.), Infections
laryngotracheitis(aHrn.), Laryngotracheite infectieuse (франц.)
Инфекционный ларинготрахеит (ИЛТ) - вирусная контагиозаная респираторная болезнь,
поражающая кур, индеек, фазанов. Впервые описан в 1925 г. Мей и Титслер под названием
инфекционный бронхит. С 1931г ее стали именовать инфекционным ларинготрахеитом. Ре-
гистрируется во всех странах мира, где развито промышленное птицеводство (10).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод колеблется от 2 до 30 дней. Длительность его зависит от вирулентности, дозы вируса,
метода введения в организм и физиологического состояния птицы. Наиболее короткий ин-
кубационный период , равный 40 ч , отмечен при интратрахеальном заражении. Болезнь
протекает сверхостро, остро и хронически. Различают легкую и атипичную формы болезни,
а по локализации поражений - ларингограхеальную и конъюнктивальную формы. Первая
обычно протекает остро и сопровождается кашлем, удушьем, хрипом при дыхании (рис. 93).
Катаральное или фибринозное воспаление слизистых оболочек можно наблюдать в носовой
полости и инфраорбитальных синусах. Слизистая оболочка в этих случаях гиперемирована,
набухшая, иногда пронизана мелкими точечными кровоизлияниями. В ротовой полости на
слизистой оболочке можно находить легко отделяемые налеты беловатого цвета, локали-
зующиеся у корня языка, в углах клюва, окружности неба и у входа в гортань и глотку. В
ряде случаев отмечают катаральный фарингит. На вскрытии изменения находят главным
образом в гортани и трахее. В просвете гортани обнаруживают казеозную пробку. После ее
удаления слизистая оболочка гортани неровная, красноватая, отечная, утолщенная. Конъ-
юнктивальная форма чаще наблюдается у цыплят и характеризуется катаральным или фиб-
ринозным конъюнктивитом. Эта форма может протекать только с поражением конъюнкти-
вы или в сочетании с ларингограхеальной формой болезни. У части птиц отмечают отек
век, особенно нижнего. У некоторых кур и цыплят развивается фибринозное воспаление
конъюнктивы с отложением в конъюнктивальный мешок фибринозно-казеозных масс,
склеиванием век, помутнением роговицы, иногда с развитием панофтальмита. Изменения в
легких при ИЛТ находят обычно у небольшого количества птиц. В некоторых случаях они
ограничиваются только бронхами, в которых развивается катаральное, реже фибринозное
воспаление, иногда в просвете бронхов обнаруживают сгустки крови или фибринозно-
казеозные пробки (3,11).
Более характерные признаки ИЛТ отмечаются у цыплят-бройлеров в возрасте 4-7 нед и
у кур-несушек в возрасте 18-76 нед. В ряде случаев одновременно с бронхитом выявляют
катаральную пневмонию в виде небольших сероватых уплотненных участков, иногда с мел-
кими очагами некроза желтоватого цвета. Поражение воздухоносных мешков встречается
сравнительно редко. Однако при экспериментальном воспроизведении инфекции, особенно
при интратрахеальном методе заражения, аэросаккулит часто находят у значительного ко-
личества птиц. Стенка воздухоносных мешков при очаговом или диффузном поражении
утолщена, частично или полностью непрозрачные сосуды ее переполнены кровью. В полос-
ти воздухоносных мешков находят серозный пенистый экссудат со сгустками фибрина или
зернами фибринозно-казеозных масс. В эпителиальных клетках трахеи уже через 12 ч после
заражения находят внутриядерные включения типа А. При обычном окрашивании они
представляются однородными, а при серебрении выявляются аргининофильные гранулы.
При ларингограхеальной форме болезни характерные изменения отмечают в гортани и
трахее (Рис. 164). Слизистая оболочка этих органов гиперемирована, отечна, эрозирована, с
кровоизлияниями, а просвет их часто бывает заполнен катаральным или катарально-гемор-
рагическим экссудатом. В большинстве случаев в гортани находят фибринозно-казеозные
672
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
массы, закупоривающие просвет. При некоторых энзоотиях обнаруживают катаральное вос-
паление слизистых оболочек носовой и ротовой полостей, а на корне и уздечке языка фиб-
ринозные наложения. У некоторых кур наблюдают увеличение селезенки, катаральное вос-
паление тонкого кишечника, фабрициевой сумки и клоаки. В бронхах и легких поражения
встречаются редко, в виде катаральной бронхопневмонии. При коиъюктивальной форме от-
мечают серозный или фибринозный конъюнктивит с отложением в конъюнктивальный ме-
шок казеозных масс, помутнение роговицы и поражение глазного яблока.
Гистологические изменения. Соответствуют картине вскрытия. В гортани и трахее
находят серозно-катаральное или фибринозно-геморрагическое воспаление слизистой обо-
лочки. В начале болезни выявляют гиперемию сосудов, дистрофию покровного эпителия и
отек слизистой оболочки, в более поздние сроки некроз и десквамацию респираторного эпи-
телия, инфильтрацию слизистой оболочки лимфоидно-гистиоцитарными элементами и пе-
риваскулярные кровоизлияния. В отдельных участках слизистая бывает некротизирована до
хрящевого кольца. Вирус размножается в эпителиальных клетках слизистой оболочки гор-
тани, трахеи, конъюнктивы, легких, воздухоносных мешков, клоаки и наряду с воспали
тельной реакцией образует внутриядерные включения. Включения обнаруживают до насту-
пления некроза эпителия между 1-5-м дн после заражения. Форма их округлая, овальная
или продолговатая, количество в ядре 1-4 , окружены светлым ободком. Описано спонтан-
ное массовое некротическое поражение тимуса, фабрициевой сумки и селезенки у 40-дн цы-
плят-бройлеров с признаками анемии. При вскрытии обнаружено уменьшение размера ти-
муса и фабрициевой сумки, которые имели темно-желтый или коричневый цвет, отмечалась
также диффузная аденоэктазия железистого желудка. При гистологическом исследовании
наблюдали очаги фибрино-гнойного воспаления и некроза в тимусе, фабрициевой сумке и
селезенке. В гистиоцитах и лимфоцитах этих органов обнаружены одиночные крупные
внутриядерные тельца-включения. С помощью трансмиссионной электронной микроскопии
в набухших ядрах с периферическим расположением хроматина гистиоцитов тимуса зафик-
сировано наличие герпесвирусных частиц (31). При остром течении болезни вирус ИЛТ в
85-86% случаев обнаруживали в инфицированных клетках трахеи и гортани, в 80-88 % - в
инфицированных клетках крупных бронхов и лишь в 60 - 62 % - в инфицированных клетках
мелких бронхов и бронхиол. Вирус ИЛТ в 76-84 % случаев удается выделить из смывов но-
соглотки, гортани и трахеи. При подостром и хроническом течениях положительные ре-
зультаты получали при исследовании инфицированных клеток гортани и трахеи (96 %),
бронхов и бронхиол (85 %), смывов носоглотки, гортани, трахеи (72-86 %), ЖКТ (до 60%) и
печени (8-12%). Таким образом при хроническом течении болезни положительные резуль-
таты по выделению вируса ИЛТ выше, чем при его остром течении, исключая печень. Тем
самым диагностическая надежность метода вирусовыделения при исследовании органов
птиц с разной степенью выраженности патологических изменений составляет от 85% (при
остром течении) до 96% ( при подостром и хроническом течении заболевания). Однако ме-
тод вирусовыделения, обладая высокой специфичностью имеет существенный недостаток -
значительную продолжительность во времени (до 45-52 дн) ( 2 ).
Патогенез. Вирус проникает в организм через конъюнктиву, носовую или ротовую
полости и репродуцируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки гортани и трахеи,
вызывая серозно-катаральное воспаление и образование внутриядерных включений. В по-
раженных эпителиальных клетках происходит быстрое размножение ядер без деления цито-
плазмы. Через 24 ч из мест поражения вирус поступает в кровеносную систему. На этой ста-
дии заболевания обнаруживают дистрофию, некроз и десквамацию эпителия слизистой обо-
лочки респираторного тракта, а в просвете трахеи слизистой экссудат с примесью крови.
При дальнейшем течении болезни поражения слизистой гортани и трахеи усиливаются не
только самим действием вируса, но и в результате происходящих в ней дистрофических из-
менений. Отмечают сужение просвета дыхательных путей, а часто и образование казеозных
пробок, что приводит к полной их закупорке и птица погибает от асфиксии.
43 Зак. № 171 ЫЗ
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделил Бичь в 1930 г. в США.
Морфология и химический состав. Морфологические характеристики представлены
на рис. 92. Геном вируса ИЛТ имеет длину 155 тыс. п.н. и состоит из длинной уникальной
последовательности U1 (120 тыс. п.н.) и короткой уникальной последовательности Us (17
тыс. п.н.) (25). Гликопротеины вируса ИЛТ были выделены нз экстрактов вирусинфициро-
ванных клеток и очищены с помощью лектин-аффинной хроматографии. Гликопротеины
(205, 160, 115, 90, 85, 74, 60 и 50 кД) предохраняли 83 %птиц от заражения их патогенным
вирусом (33). Гликопротеин В (gB) является первым структурным белком вируса ИЛТ
птиц. Клонирован, секвенирован ген этого белка ( 27 ).
Устойчивость. Вирус чувствителен к липолитическим агентам, теплу н различным де-
зинфектантам. Он длительно сохраняет свою активность в лиофилизированном состоянии
или при - 20-60°С. Температура 55°С разрушает вирус в течение 10-15 мин, а 38°С - за 48 ч.
В вируссодержащей трахеальной слизи больного цыпленка вирус разрушается в течение 44
ч при температуре 37°С, а в ХАО при 25°С в течение 5 ч. В патологическом материале
(трахее от больных кур) при температуре - 8-10°С он сохранялся более 370 дн. В заморо-
женных тушках больных и вынуждено убитых кур, хранившихся при температуре - 10, 18,
28°С , вирус оставался активным более 19 мес, на поверхности скорлупы в условиях термо-
стата инактивируется через 12 ч, а в зараженных птичниках сохраняется не более 9 дн. Пол-
ностью инактивируется в 1 %-ном растворе креола в течение 30 с.
Предложена система получения рекомбинантного вируса ИЛТ (22).
Препараты очищенного в градиенте плотности глицерин-тартрата вируса ИЛТ оказа-
лись более пригодными для выделения вирионной ДНК, тогда как препараты, очищенные в
перколле лучше использовать в качестве специфического АГ для ИФА и получения специ-
фических сывороток. По данным электрон ной микроскопии препараты вируса ИЛТ, очи-
щенные в перколле, практически не содержат примесей клеточных компонентов (8).
АГ вариабельность и родство. Все птичьи герпесвирусы на основании перекрестной
PH сгруппированы в 11 разных групп (26). Штаммы вируса ИЛТ различаются по вирулент-
ности для птиц и КЭ, тропизму, скорости выделения из клеток в тканевой культуре, устой-
чивости при хранении, авидности, молекулярно-структурными особенностями. Иммуноло-
гических различий среди штаммов вируса ларинготрахеита не обнаружено, хотя некоторые
отклонения в способности нейтрализоваться гипериммунными сыворотками описаны у
штаммов различной вирулентности (20, 21, 22).
Локализация вируса. Вирус обнаруживают главным образом в дыхательных путях, в
меньшем количестве в печени и селезенке. При интратрахеальном заражении 30 дн цыплят
его выделяли из трахеи и носовых ходов 7 дн., при ректальном заражении находили в фаб-
рициевой сумке и трахее в течение 3 дн. У птиц-реконвалесцентов установлено длительное
вирусоносительство. Из трахеи переболевших птиц вирус выделяли 2 г. После острой фазы
ИЛТ может наступить латентный период с сохранением генетического материала вируса в
ДНК клеток ганглия тройничного нерва. При различных воздействиях может произойти ре-
активация инфекции с выделением вируса во внешнюю среду (15,16,17,18).
АГ активность. ВНА у зараженных кур появляются со 2-3 нед после заражения, титр
их достигает максимума к 5-му дн и сохраняется до 8-21 мес.
Экспериментальная инфекция. Заразить восприимчивую птицу легко путем апплика-
ции вируссодержащего материала на слизистую оболочку гортани, трахеи, глаз, носа, под-
глазничного синуса и клоаки. На 6-12 дн у зараженных цыплят развиваются типичные сим-
птомы болезни. На 3-10 дн после внутритрахеальной инокуляции вируса у кур-несушек от-
мечаются признаки умеренного респираторного заболевания. На 4-й дн в ткани трахеи и но-
совой полости обнаруживается вирус. В период между 19 и 59 дн после заражения с помо-
щью ЦПР периодически выявляется вирус. Ганглии тройничного иерва являются основным
674
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
местом локализации вируса (35). У экспериментально зараженных СПФ-цыплят вакцин-
ным шт. SA-2 вируса ИЛТ вирусный АГ в трахеальных смывах определялся до 7-го дн по-
сле заражения, а АТ против вируса в трахеальных смывах с 5-го дн после заражения. Им-
муноглобулины класса А появлялись на 6-й день после заражения, а ВНА - только на 14
день (32). Вирус вызывал заболевания у индеек в возрасте 3-4 нед и 2-10 мес. Больные ин-
дейки могут быть источником заражения кур. Данные о восприимчивости голубей к вирусу
противоречивы. Павлины и фазаны оказались чувствительными к вирусу, причем чувстви-
тельность фазанов была выше. Кролики, морские свинки и белые крысы резистентны.
Вирусовыделение. В экспериментальных условиях инфицированные птицы начинают
экскретировать вирус через 8 дн после заражения. Прединфекционный период может длить-
ся 2 дн, а выделение вируса наблюдалось в течение 6 дн. Клинические признаки у заражен-
ной птицы обычно появляются на 6 дн (18). В организме переболевших птиц вирус ИЛТ
,как и многие другие герпесвирусы, может находиться в латентной форме. Полевые штаммы
,как и вакцинные обладают свойством персистировать в нервной системе. Вакцинный вирус
легко передается горизонтально. Поэтому при применении вакцины лучше иммунизировать
всех цыплят птицефермы (20).
Культивирование. Вирус культивируется на ХАО эмбрионов кур, уток, индеек, неко-
торых первичных и перевиваемых культурах клеток, не развивается в эмбрионах голубей и
морских птиц. На ХАО образуются фокусные поражения 2 типов: крупноузелковые с непро-
зрачной белой периферией и некротическим центром и мелкоузелковые - без некроза. Узел-
ковые поражения появляются на всей поверхности ХАО, а очаговые только на месте иноку-
ляции вируса (Рис. 94). В зараженных клетках ХАО образуются внутриядерные включения,
а иногда гигантские клетки. В культурах линий СПЭВ, FJ, клеток фибробластов куриных
эмбрионов, почки цыплят, утят, эмбрионов свиньи, новорожденных крольчат вирус вызыва-
ет к 3-4 дн ЦПИ, характеризующиеся округлением и зернистостью клеток, лизисом их с по-
следующим отторжением. В клетках СПЭВ формируются цитоплазматические включения и
образуются многоядерные клетки. Внутриклеточные включения обнаруживаются через 12 ч
и к 30-36 ч после заражения достигают наивысшей концентрации. В инфицированных куль-
турах клеток вирус вызывает образование бляшек (За).
ГА свойства. Вирус, репродуцированный в КЭ, не обладает ГА активностью. Она про-
является иногда в случае культивирования вируса в первичной культуре почки цыплят.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больная и переболев-
шая ИЛТ птица, которая длительное время (свыше 2 лег) остается вирусоносителем. Вирус
от больных птиц можно выделить в течение 7 дн после появления симптомов болезни, после
чего отдельные переболевшие птицы остаются вирусоносителями и периодически выделяют
вирус, не обязательно при этом с переходом болезни в клиническую форму. Инфицирование
может происходить и половым путем. Возможна передача вируса через зараженную скорлу-
пу яйца. В условиях инкубатора вирус сохраняет инфекционность до 96 ч. После обработки
яиц парами формальдегида он погибает через 40 мин. После острой фазы инфекции может
наступить латентный период с сохранением генетического материала вируса в ДНК клеток
ганглия тройничного нерва. При различных воздействиях может произойти реактивация
инфекции с выделением вируса во внешнюю среду. Благоприятным фактором в плане иско-
ренения инфекции в птицеводческих хозяйствах являются высокая степень видоспецифич-
ности вируса, необходимость тесного контакта кур для распространения инфекции, быстрая
инактивация вируса вне организма птиц, генетическая стабильность вируса, отсутствие раз-
множения вируса в трахее при наличии местного специфического клеточно-опосредованного
иммунитета (15а, 23 а).
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях вирус по-
ражает кур всех возрастов. Фазаны и индейки также чувствительны к вирусу ИЛТ.
43*
675
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков бо-
лезни, и результатов лабораторных исследований. Часто болезнь протекает атипично, ха-
рактерные признаки ее слабо выражены или их нет. В таких случаях решающее значение в
диагностике приобретают лабораторные методы исследования.
Выделение вируса
Взятие и подготовка материала. Для вирусологического исследования от больных
птиц берут экссудат из трахеи, от павших или вынужденно убитых в начальной фазе болез-
ни между 2-7 дн) - слизистые оболочки гортани, трахеи, конъюнктивы, носовых ходов и ку-
сочки легких. Материал замораживают и сохраняют при - 20°С и ниже. Для гистологиче-
ских исследований материал помещают в 10%-ный раствор нейтрального формалина. Из
патологического материала готовят суспензию 1:5 на растворе Хенкса или изотоническом
растворе NaCl, центрифугируют при 1500-2000 мин'1 в течение 15 мин, к надосадочной
жидкости добавляют по 1000 ЕД пенициллина и 500 мкг стрептомицина в расчете на 1 мл,
выдерживают в течение 3-8 ч при 2-4°С. Затем используют для инокуляции КЭ, культуры
клеток или молодых не иммунных к ИЛТ цыплят.
Заражение КЭ. Для каждой пробы используют по 10 эмбрионов в 9-12 дн возраста. За-
ражают на ХАО. Погибших в первые 24 ч после инокуляции эмбрионов не учитывают. Ос-
тавшихся живых эмбрионов на 6-8-й дн убивают. Макроскопические изменения ХАО появ-
ляются через 2,5-3 сут и достигают максимума к 5-6 дн. Штаммы вируса ИЛТ вызывают
мелкоузелковые и очаговые поражения ХАО. Узелковые поражения обнаруживаются по
всей поверхности ХАО, очаговые -только на месте инокуляции вируса. Необходимо учиты-
вать, что не все штаммы вызывают гибель куриных эмбрионов на 4-6- дн. Для выявления
специфических поражений необходимо провести не менее 3 пассажей, используя ХАО, сус-
пендированную в аллантоисной жидкости предыдущего пассажа.
Выделение вируса надо подтвердить обнаружением телец-включений Зейфрида, PH,
РДП, биопробой, а также ИФ и ЭМ.
Заражение культур клеток. Наиболее пригодны в данном случае культуры клеток по-
чек эмбриона и цыплят, в которых первые изменения наблюдаются иногда уже через 24 ч
после заражения, а через 48-72 ч в клеточной культуре обнаруживаются многоядерные ги-
гантские клетки, в которых можно обнаружить внутриядерные включения. Специфичность
этих изменений доказывают ИФ или PH. Наблюдение за культурой клеток проводят до 6-7
дн. Для первичного выделения вируса так же пригодны клетки Vero.
Индикация и идентификация вируса
Обнаружение специфических телец-включений. Вирус ИЛТ размножается в эпите-
лиальных клетках слизистой оболочки гортани, трахеи, клоаки, вызывая острое воспаление
этих оболочек с образованием внутриядерных включений. Включения обнаруживаются до
наступления некроза эпителия между 1-м и 5-м дн после интратрахеального заражения цы-
плят. В мазках из конъюнктивы включения находят через 48 ч после заражения. Ядро, со-
держащее включение, обьино увеличено, отмечается гиперхроматия ядерной оболочки.
Включения имеют округлую форму, иногда форму диплококков и занимают 1/2 -1/3 кле-
точного ядра. Вокруг включения видна неокрашенная зона, что считается характерным. Бо-
лезнь можно диагностировать на основании обнаружения внутри ядерных включений. Для
этого на предметных стеклах готовят мазки из соскобов эпителия слизистой оболочки, фик-
сируют в абсолютном метиловом спирте в течение 3-5 мин окрашивают раствором краски
Гимза (1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды) в течение 2 ч при 37°С, затем мазки
промывают, обрабатывают абсолютным метиловым спиртом, снова промывают, высуши-
вают и просматривают. В положительных случаях цитоплазма эпителиальных клеток окра-
шивается в бледно-голубой цвет, ядерные оболочки таких клеток более темные, внутриядер-
ные включения четко видны, светло- красного цвета, по форме варьируют (шарообразные
или колбасовидные), окружены ясно видимыми светлыми ободками. Количество их в ядре
676
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
от 1 до 4. Указанный метод позволяет иногда в течение 3-4 ч диагностировать ИЛТ даже
при атипичном проявлении. Вероятность обнаружения телец-включений в патологическом
материале существует только в начальной фазе болезни - между 2-7 дн(11).
ИФ. Позволяет обнаружить вирусный АГ при помощи специфической флюоресцирую-
щей сыворотки в мазках из слизистой оболочки трахеи, конъюнктивы от больных цыплят (в
период острого течения болезни), из пораженной ХАО и инфицированных культур клеток.
Реакцию ставят по общепринятой методике. Чаще используют прямой метод. Положитель-
ную ИФ в мазках от больной птицы наблюдают в период острого течения болезни, когда
обнаруживаются внутриядерные включения и можно выделить вирус на КЭ.
Биопроба. Ставят ее на цыплятах 30-90- дн возраста путем аппликации вируссодержа-
щего материала на слизистую оболочку гортани, трахеи, глаз, носа, подглазничного синуса,
клоаки. При наличии вируса в исследуемом материале у зараженных цыплят на 6-12 дн раз-
виваются типичные клинические признаки экспериментальной инфекции. При инокуляции
материала в подглазничный синус в положительных случаях развивается синусит с отеком,
выделениями из носовых ходов и слезотечением. Положительная реакция на клоачную про-
бу проявляется с 3-го по 8-й дн, но чаще на 4-5 дн в виде отечности слизистой оболочки
фабрициевой сумки и катарального, геморрагического или фибринозного воспаления.
Наблюдение за зараженными цыплятами ведут до 14 дн. Чаще всего заражение прово-
дят иа слизистую оболочку трахеи и клоаки, так как этот метод позволяет определить виру-
лентность штамма, а также провести дифференциацию от вирусов, вызывающих сходное
поражение ХАО у инфицированных КЭ. При интратрахеальном заражении 4-нед цыплят
вирулентным штаммом CS-1 вируса ИЛТ. Наибольший титр вируса в тканях трахеи (106
БОЕ/г) установлен на 2-4-е сут. Позднее количество вируса резко снижалось и на 7 дн его не
обнаруживали, хотя антиген вируса в эпителии трахеи и в большом количестве выявляли
еще на 7-8 сут с помощью ИФ.
Последнее время естественные инфекции все чаще протекают нетипично, абортивно,
хронически или даже бессимптомно. Выделяемые штаммы также менее патогенны для КЭ,
не всегда приводят к их гибели и даже не всегда вызывают патологические изменения на
слизистых оболочках при непосредственном введении исследуемого материала.
PH. Реакцию ставят по общепринятой методике. Чаще всего в диагностической практи-
ке используют метод: - разведение вируса и постоянная доза сыворотки. Результаты PH вы-
ражают в индексах нейтрализации. Принято индексы нейтрализации от 1 до 9 считать отри-
цательными, от 10 до 49 - сомнительными, от 50 и выше - положительными. PH можно про-
водить и в культуре клеток ПЭК и 3-8 дн цыплятах.
РДП. Для идентификации возбудителя в РДП используют набор куриных антисыворо-
ток, полученных к различным вирусам птиц. РДП ставят по общепринятой методике. Для
РДП при диагностике ИЛТ птиц 1,5%-ный агаровый гель готовят на верональном буферном
растворе с pH 7,2 следующим образом: в 100 мл горячей дистиллированной воды растворя-
ют 1,84 г веронала, после охлаждения доливают дистиллированной водой до 1000 мл и рас-
творяют в полученном растворе 10,3 г мединала. Раствор хранят при 4°С. Реакция проста по
технике выполнения и позволяет выявлять примерно 75% положительных случаев, установ-
ленных при помощи заражения эмбрионов. РДП специфична, но недостаточно чувствитель-
на, ее используют главным образом для ретроспективной диагностики среди взрослых кур.
Приготовление гипериммунных сывороток и антигенов. Гипериммунные вирус-
нейтрализующие сыворотки получают на кроликах по следующей схеме. Вирус (суспензии
ХАО 1:10 после центрифугирования при 2500 мин’1 в течение 30 мин) вводят кроликам
внутривенно в течение 3 нед по 3 раза в неделю (через 1 дн): в первую нед - по 2 мл, во вто-
рую - по 3, в третью - по 4 мл. Через 7 нед после первичной иммунизации кролику внутри-
брюшинно инъецируют 10 мл вируса, а на следующий день - 15 мл внутривенно. Через 7 дн
после последнего введения АГ кроликов обескровливают. Гипериммунные кроличьи сыво-
ротки используют в PH для типнрования вируса ИЛТ.
677
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Получение гипериммунных преципитирующих сывороток на птице. Центрифуги-
рованную суспензию вируссодержащей ХАО в разведении 1:10 вводят взрослым петухам в
подкрыльцовую вену в объеме 1-2 мл по схеме: 4 инъекции с промежутками в 1 день, 7 да
отдыха; 4 инъекции с промежутками в 1 день. На 6-й дн после последней инъекции пробно
берут кровь из сердца, в случае не активности сыворотки проводят трехкратное введение
вируса с суточными интервалами, на 6-ой день вторично берут пробу крови. Установлено,
что препараты очищенного вируса ИЛТ, полученные в градиенте плотности глицерин-
тартрата, более пригодны для выделения вирионной ДНК, тогда как препараты, очищенные
в перколе, лучше использовать в качестве специфического АГ для ИФА и получения специ-
фических сывороток. По данным ЭМ препараты вируса ИЛТ, очищенные в перколе, прак-
тически не содержат примесей клеточных компонентов (везикул) (8).
Идентификация вируса с помощью монАТ. По чувствительности ИФА с монАТ со-
поставим с методом выделения вируса, но более быстрым и более чувствительным по срав-
нению с ИФ. В ИФА используют кроличьи поликлональные АТ и мышиные монАТ (28).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. В нетипичных случаях, особенно
при хроническом течении инфекции, провести диагностику позволяет установление роста
титра антител при исследовании парных сывороток. Однако такого рода исследования про-
водятся главным образом с целью получения данных, свидетельствующих о перенесении
заболевания данной популяцией и указывающих на степень распространенности возбудите-
ля на определенной территории. Пробы сыворотки от птицы исследуют дважды - через 14-
28 дн интервал. Повышение титра антител к вирусу и числа положительно реагирующих
птиц в стаде свидетельствует о наличии и распространении инфекции в хозяйстве, а сохра-
нение или снижение уровня АТ - о прошедшей инфекции. Для серологического исследова-
ния кровь берут иа 14-28-й дн от начала болезни не менее чем от 5-10 птиц по 5 мл от каж-
дой. До начала исследования сыворотку сохраняют в замороженном состоянии при минус
20-70°С. Сыворотки больных и переболевших птиц, а также контрольные инактивируют
при 56°С 30 мин.
Приготовление антигенов для PH и РДП. ХАО КЭ с характерными для данного ви-
руса поражениями гомогенизируют с равным количеством буферного изотонического рас-
твора с pH 7,2-7,4, к которому добавлены антибиотики из расчета по 100 ЕД пенициллина и
стрептомицина на 1 мл раствора. Суспензию центрифугируют при 3000 мин'1 20 мин. Надо-
садочную жидкость сливают и используют в качестве антигена, если она содержит вируса ие
менее 105 ЭИДзо/МЛ. АГ сохраняют в замороженном состоянии. Предложена следующая ме-
тодика концентрации и очистки вируса: вируссодержащий материал концентрируют поли-
этиленгликолем с мол.м. 6000; конечная концентрация его в вируссодержащей суспензии
должна быть равна 7%. Концентрирование ведут при 4°С в течение 3 ч, центрифугируют
концентрированный вирус при 3000 мин’1 30 мин. Инфекционная активность полученного
вируса - 106-107ЭИД 50/мл.
PH. Наиболее чувствительна по сравнению с РДП и РРИД. Она выявляет специфиче-
ские АТ у 96-98% инфицированных птиц независимо от формы течения заболевания. Одна-
ко эта реакция трудоемка и требует значительного количества КЭ (1). На КЭ или культурах
клеток реакцию ставят по общепринятой методике, чаще используют модификацию: посто-
янная доза сыворотки и различные разведения вируса. Число рядов соответствует числу ис-
пытуемых сывороток плюс 2 ряда контроля (с нормальной и иммунной сыворотками), а
число пробирок в ряду - числу разведений вируса. После контакта (1ч при комнатной тем-
пературе) смесь сыворотки с каждым разведением вируса инокулируют не менее чем 4 КЭ
на ХАО по 0,2 мл. Эмбрионы инкубируют при 37°С в течение 6 дн. При вскрытии выявля-
ют специфические изменения на ХАО. В PH рекомендуется использовать неразведенные
сыворотки. Оценку результатов проводят по индексу нейтрализации. Сыворотку с ИН 10
или меньше считают отрицательной, а с индексом больше 10 - положительной.
РДП. Проводят по общепринятой методике, используя стандартный АГ. Эта реакция
678
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
может выявить 25-50% переболевших птиц. Однако простая техника постановки ее и бы-
строе получение результатов дают возможность с минимальными затратами средств и вре-
мени обследовать большое количество птицы. Специфический антиген готовят из вакцинно-
го вируса ИЛТ клона НТ. Вируссодержашую суспензию - центрифугат гомогенизированных
ХАО - концентрируют, используя 1%-ный раствор полиэтиленгликоля на дистиллированной
воде, либо полиэтиленгликоль (ПЭГ-6000) при добавлении в суспензию из расчета 7%.
Антисыворотку к вирусу ИЛТ получают гипериммунизацией морских свинок и птиц. В
первом случае используют концентрированный вирус ИЛТ с титром не ниже 1О8,оЭИД5О/мл’
которым иммунизируют морских свинок по следующей схеме: первая иммунизация в объе-
ме 0,1 мл внутрикожно в плантарную поверхность обеих лапок, вторая иммунизация - через
7-9 дн в объеме 1 мл подкожно в область верхней губы; последующие 2 инъекции - через
14-16 и 21-23 дн после второй проводят аналогично. Через 10 дн после последнего введения
АГ морских свинок тотально обескровливают. Уровень АТ в РДП составлял, как правило,
1:16 и выше, в лиофилизированном состоянии сыворотки сохраняли свою активность 2 г.
Птиц (молодок и петухов в возрасте 90-120 дн) гипериммунизируют по схеме: первый и
второй раз (через 2 дн) иммунизируют специфическим АГ внутривенно в объеме 1 мл, тре-
тий раз через 16 дн и четвертый раз через 30 дн -проводят интратрахеально в таком же объ-
еме. Через 15 дн после последней иммунизации берут пробу крови и исследуют на актив-
ность и специфичность. Если активность сыворотки в РДП со специфическим АГ 1:32 и
выше, то у такой птицы тотально (из сердца) берут кровь, сыворотку от которой лиофилизи-
руют и используют для выявления АТ в органах и тканях больных и погибших птиц.
Если титр специфических ПА в пробе сыворотки окажется ниже чем 1:32, то птицу им-
мунизируют еще раз вирулентным вирусом ИЛТ в разведении 1:100 интратрахеально в объ-
еме 0,5 мл. Через 10-12 дн птиц тотально обескровливают и сыворотку лиофилизируют.
В качестве растворителя для приготовления геля используют 0,1М забуференный физ-
раствор NaCl pH 7,2-7,4; забуференный фосфатный раствор состоит из 9 частей 0,15М рас-
твора NaCl и 1 ной части 0,15М фосфатного буфера с pH 7,2 по Сервису, веронал-ацетатный
буфер с pH 8,6 с ионной силой 0,1 и боратный буфер pH 8,4-8,6. Гель на этих буферных рас-
творах готовят из расчета: 1,5 г агара на 100 мл растворителя. Растворяют агар в течение
1,5-2 ч в кипящей водяной бане, добавляя в расплавленный агар консервант (риванол, азид
натрия и др ). Горячий агар разливают по 3 мл на предметные стенки или по 35 мл в чашки
Петри, расположенные строго горизонтально. Как только агар затвердеет, пластинки можно
использовать в РДП (2). Таким образом, для диагностики ИЛТ рекомендуется РДП на ага-
ровом геле, приготовленном на боратном, либо фосфатном буферных растворах. РДП при-
годно для выявления специфических АТ в крови больных и переболевших птиц, а также ви-
русного АГ ИЛТ в органах погибших птиц. Разработаны условия получения специфического
вируса ИЛТ, активность его РДП 1:4-1:32, а в твердофазном ИФА 1:265-1:4000 ( 8,13).
ELISA. Оказался более чувствительным, чем PH, по чувствительности приближается к
ИФ. У отдельных экспериментально зараженных цыплят с помощью ELISA и РИФ удава-
лось выявить АТ в более ранние сроки, чем в PH. Разработан твердофазный ИФА для выяв-
ления специфических АТ к вирусу ИЛТ в сыворотках крови вакцинированных птиц. Мето-
дом шахматного титрования была выработана сенсибилизирующая доза антигенов и разве-
дения иммунопероксидазного конъюгата. В ИФА можно выявлять специфические антитела
в титрах 1:100-1:200 в сыворотках крови вакцинированных птиц. Аналогичные титры в PH
и РДП соответственно составляли 1:8-1:32 и 1:2-1:16 (12). ELISA и PH (микрометод) ус-
пешно применяли для обнаружения АТ в стадах с субклиническим течением ИЛТ. Обнару-
жить поствакцинальные АТ к вирусу болезни в сыворотках цыплят с помощью ELISA уда-
ется через неделю после вакцинации. Также предложен усовершенствованный метод ELISA
путем введения в реакцию авидин-биотин-ферментного комплекса. Он пригоден и для оцен-
ки поствакцинального иммунитета (29).
Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на ИЛТ необходимо ис-
679
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
ключить НБ, оспу, ИБК, заразный насморк, хронический пастереллез, респираторный мико-
плазмоз и др. (табл.ХУ1.2.).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Заболевание сопровождается длительным или пожизненным вирусоносительством. Из
трахеи переболевших птиц вирус выделяли в течение 2 лет. Смывы с трахеи обладали ви-
руснейтрализующей активностью на 7-8-й дн после заражения (14). При ИЛТ установлено
важное значение клеточного иммунитета Иммуногенность вакцины зависит от ее реакто-.
генности, отмечена тесная корреляция между напряженностью иммунитета и титром ВНА (в
культуре клеток почки КЭ). В ряде случаев иммунитет наступал раньше, чем появлялись
гуморальные АТ (19, 23, 34). Формирование ВНА и гиперчувствительность замедленного
типа не коррелирует с напряженностью иммунитета у вакцинированной птицы (9).
В Российской Федерации и странах СНГ применяют сухую вирусвакцину из шт. ЦНИ-
ИПП, разработанную С.П.Щенниковым и Е.А.Петровской. Ими предложен метод иммуни-
зации - втирание вакцины в слизистую оболочку верхнего свода клоаки. Иммунитет насту-
пает через 7-10 дн и сохраняется у большинства птиц в течение всего срока их использова-
ния. Разработан и аэрозольный метод вакцинации данным препаратом.
Предложена также живая вирус вакцина из природно-ослабленного шт. ВНИИБП, кото-
рую можно применять путем втирания в слизистую оболочку клоаки и аэрозольно. При ис-
пользовании этого штамма с Г А активностью 1:128-1:512 нанесением его на конъюнктиву в
дозе 1000 ЭИДзо достигался высокий эффект, который оценивался по уровню антиГА в
Таблица XVI.2. Дифференциальная диагностика респиратор-
ных болезней птиц (по А.А. Ибрагимову, 1981)
Болезнь Эпизоотологичес кие особенности Патологоанатомич еские изменения Гистологические изменения Основания диагноза
Инфек- TTHCffi н кТИ бронхит Острая высоко- контагиозиая ин- фекция, клиниче- си проявляющаяся у цыплят до 60 дней. Продолжи- тельность болезни 8-10 дн. Гиперемия и отек легких, скопление слизи и точечные кровоизл. в слизнет, трахеи, сер. - слиз эксудат в просвете бронхов и полости возд. мешков Гиперемия, диффузный серозный отек и диапе- дезные кровоизлияния, сопровождающиеся лим- фоидно-гистиоцитарной инфильтрацией, гипер- плазией и метаплазией респират. эпителия Диффузный серозный отек , гиперплазия и ме- таплазия респираторного эпителия слизистой обо- лочки трахеи и бронхов
Респира- торный микоплаз МОЗ Хроническая, ча- ще латентная ин- фекция, клиниче- ски проявляющая- ся при неблаго- приятных услови- ях. Болеют птицы пр еимущесгв енно в возрасте 30-180 дн Сер озно-катаральн. Ринит, синусит, ско- пление слизи и зер- нистость слизистой трахеи, помутнение воздухоносных мешков Гиперсекреция и гипер- трофия слизисг. желез, лимфофоликулярная ре- акция и диффузная лим- фоцитарная инфильтра- ция, удлинение желез, аэросаккулиг, эндо- и перибронхит, утолщение и разрастание слизситой трахеи Лимфоцитарная инфиль- трация и лимфоретику- лярная реакция, обус- ловливающие аэросакку- лит, эндо- и пернброн- хит, неравномерное угол щение, полипообразное разрастание слизистой трахеи
Аденови- русная инфек- ция Острая контагиоз- ная инфекция, проявляющаяся у шиц до 15-и дневного возраста. Продолжит. Бо- лезни 8-10 дн. Серозно - катараль- ный ринит, синусит, трахеит, катаральная пневмония, некро- тический панкрео- тиг, гепатит Гиперемия, псевдоэози- нофильиая инфильтра- ция, пролиферация рес- пираторного и желези- стого эпителия, полная или частичная обтура- ция просветов бронхов Гиперплазия и метапла- зия респираторного и железистого эпителия, содержащего внутриядер ные базофильные вклю- чения
Инфекци Он ньТИ ларинго- трахеит Острая контагиоз- ная болезнь пре- имущественно цыплят в возрасте 60-180 дн. Про- должит. 10-15 дней Фибринозно-гемора- гически ларинготра- хеит Гиперемия, геморрагии, псевдоэозинофильиая инфильтрация и выпот фибринозного экссудата с десквамацией и про- лиферацией эпителия Фибринозно - геморр. ларинготрахеит, десква- мация и пролиферация эпителия, содержащего внутриядерные ацидо- фильные включения
680
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Продолжение таблицы XVI. 2
Бактериальные инфекции, сопровождающиеся респираторным синдромом
Аспергил лез Острая, реже хро- ническая болезнь, вспышке которой способствуют не- благоприятные условия. Болеет птица в возрасте 1-150 дн Фибринозная пнев- мония, аэросакулит н некрозы (грану лемы) размером 1-5 мм с характерной концентрической слоистостью Гиперемия, отек, псевдо- эозинофильная н эпите- лиоидно-клеточная ин- фильтрация,совров ожда ющаяся развитием нек- роза с гигантоклеточной и гранулематозной реак- цией по периферии Обнаружение мицелия гриба в зоне невроза
Колисепт ицемия Острая септ, бо- лезнь, развитию её способствуют не- благоприятные условия и респ. инф. Продолж. 8- 15 дн. Болеет пти- ца преимущест- венно в 30-140 дн Фибринозный аэро- саккулит, пневмо- ния, перикардит, сальпингит Гиперемия, псевдоэозн- нофильная инфильтра- ция, выпот фибринозно- го эксудата н микробная тромбоэмболия с некро- зами с гигантоклеточной н гравуломатозной реак- цией по периферии
РЗГА. Сероконверсия не менее 80% и среднегеометрический титр АТ более 4 1о& свиде-
тельствуют о напряженном иммунитете (6).
Помимо живых культуральных вакцин, в Японии применяется клеточно-ассоцииро-
ванная живая вакцина из вируса ларинготрахеита СЕ. В вирусинфи цированных клетках ко-
торой содержится значительно больше вирусспецифичес ких белков, чем в свободных ви-
рионах (30). Иммунитет у привитой птицы разви вался на 6-й день после иммунизации. Да-
же в 10-кратной дозе вакцина оказалась безопасной для цыплят (31).
Предложена также живая вакцина против ИЛТ и болезни Марека, которая индуцирова-
ла иммунитет к обоим вирусам при подкожном и внутримышечном введениях (24). Показа-
на эффективность одновременной вакцинации цыплят против НБ и ИЛТ. Оказалось, что
вакцинный шт. Ла-Сота не оказывает тормозящего влияния на репродукцию шт. ВНИИБП
вируса ИЛТ в КЭ (6, 8). Биологическая активность и иммуногенность вирусвакцины против
ИЛТ кур из клона НТ не изменялась при хранении ее в течение 12 мес при температуре 2-
6°С (13а).
Предпочтительный метод иммунизации - закапывание вакцины на конъюнктиву или
применение ее в виде аэрозоля. Вакцинация аэрозолем, содержащим вакцинный вирус, мо-
жет сопровождаться нежелательными последствиями особенно при наличии в хозяйстве ми-
коплазменной инфекции. При аэрозольной вакцинации иммунитет развивается через 4-5 дн
и сохраняется до года.
В настоящее время в СНГ и РФ применяют вакцины ВНИИБП и ВНИИВВиМ. Первая
после двукратного аэрозольного применения (5-7,5 1g ЭИД50) создавала иммунитет у всех 5-
6 - нед цыплят яичных стад и у 80% цыплят мясных пород кур. Через 4,5 мес после вакци-
нации у 90% кур сохранялся напряженный иммунитет. Вакцину ВНИИВВиМ готовят из ат-
тенуированного шт. НТ, она менее реактогенна при аэрозольном применении (4). Несмотря
на высокую биологическую активность и ареакгогенность вакцины против ИЛТ из клона
НТ, не рекомендуется использовать её для вакцинации разновозрастных цыплят и там, где
нет необходимых условий для создания нужной её концентрации в птичнике. Вакцина про-
тив ИЛТ из клона НТ при клоачном методе применения в дозе 11240 ЭИД50 и выше форми-
рует у 30-40 дн цыплят напряженный иммунитет после однократной вакцинации (5).
Относительно эффективности инактивированной вакцины в литературе имеются проти-
воречивые данные. Для изготовления инактивированного препарата используют р-
пропилактон, этилэнимин, формалин. Однократная иммунизация цыплят инактивированной
эмульсин-вакциной сообщает устойчивость цыплят к заражению в течение 12 мес. Таким
образом, получена эффективная инактивированная вакцина, которую рекомендовано при-
681
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
менять в хозяйствах с частыми вспышками ИЛТ ( 17 ).
Генно-инженерные вакцины. Независимо от методов аппликации живой вирусвакцины
у птицы наблюдается довольно длительное носительство вакцинного вируса. Аттенуирован-
ные вакцины могут быть причиной возникновения латентной формы инфекции. Разрабаты-
ваемые генно-инженерные вакцины лишены этого недостатка. В сочетании с гигиенически-
ми мероприятиями такие вакцины могли бы привести к искоренению ИЛТ к 2000г. в пти-
цеводческих хозяйствах (14, 15, 21). Описаны методы конструирования мутантов вируса
ИЛТ, у которых ген ТК (тимидинкиназы) инактивирован мутациями разного типа: деления-
ми (например участка ДНК между 2 сайтами Narl), вставками чужеродной ДНК или деле-
цией и вставкой. Эти мутанты не продуцируют функциональную ТК и являются аттенуиро-
ванными. В ген ТК вируса ИЛТ можно встраивать гетерологичные гены, кодирующие АГ
патогенов птиц: вирусов БМ, НБ, ИБК, ретровирусов и т.д. Такие варианты вируса ИЛТ
можно использовать в качестве вакцинных векторов, индуцирующих иммунный ответ (7,
24, 27). Получен положительный результат при использовании для специфической профи-
лактики ИЛТ очищенного афинной хроматографией гликопротеина (32,33).
Оценка поствакцинального иммунитета. Куры, переболевшие инфекционным ларин-
готрахеитом, в естественных условиях приобретают практически пожизненный иммунитет.
Установлено, что двукратная ассоциированная аэрозольная иммунизация птиц против НБ,
ИЛТ и оспы не угнетает клеточных и гуморальных показателей иммунитета. Большинство
исследователей поствакцннальный иммунитет оценивают по уровню ВНА, а напряженность
- путем контрольного заражения. Установлена тесная корреляция между напряженностью
иммунитета и титром в первые 2 нед после вакцинации. В ряде случаев цыплята могут быть
устойчивы к заражению, но серонегативны, что свидетельствует о том, что иммунное со-
стояние наступает раньше, чем появляются АТ в крови.
В сыворотках крови вакцинированных кур на 10-14-й дн обнаруживают ВНА. В не-
больших титрах они у птиц выявлялись в PH через 55 нед после вакцинации. Установлена
прямая зависимость между уровнем защиты кур после вакцинации и титрами ВНА. При
титре поствакцинальных антител 1:76, 1:16, 1:10 и 1:8 процент заболеваемости птицы после
экспериментального заражения составлял 0, 45, 55 и 100% соответственно. Птица, иммуни-
зированная клоачно, не заболевает при интратрахеальном заражении, а выжившая после
интратрахеальной вакцинации остается невосприимчивой при заражении в клоаку. В связи с
этим поствакцинальный иммунитет оценивают по наличию ВНА в сыворотке крови вакци-
нированных кур, а также по результатам биопробы (клоачная реакция). Для ориентировоч-
ной оценки напряженности иммунитета птиц после вакцинации против ИЛТ можно исполь-
зовать РДП и РИЭФ, но они менее показательны. Связь титров АТ с вирусоносительством и
вирусовыделением не изучена.
Пассивный иммунитет. Заражение 1-дневных цыплят, полученных от вакцинирован-
ных птиц, приводило к 40%-ной заболеваемости и смертности; гибель цыплят, полученных
от не иммунных родителей, составляла 100%. Куры, содержащие ВНА в титре 1:76 и ниже
не защищают потомство цыплят и в организме их возможна репродукция вируса в раннем
возрасте.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Дудко Ю.С. Тез. докл. н. конф. ВНИИВИМ, Покров,1990 :85. 2.Дудко Ю. С. Тез.
докл.нконф.ВНИИВИМ, Покров,1990 :88. 3. Ерохина Л.М. Пат. анат. диагн. вир. бол. жи-
вотных, М. Колос, 1984. За.Зуев Ю.В. и др. Матер, н. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992
: 159. 4.Слободенюк М.И. и др. Ветеринария 1994, 1 :30. 5. Шевченко А.А. и др. Тез. докл.
н. конф. ВНИИВИМ, Покров 1990 :113. б.Макогон В.Ф. и др.Ветеринария,1991, 6 :24.
7.Пат.США 5279965, Keeler C.L.№681704. 8.Перзашкевич В.С. и др. Тез. докл. Всеросс. н.-
пр. конф. ВН ИИЗЖ, 1995 :267. 9.Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, Урожай, 1993.
Ю.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вир., М. Колос, 1979. П.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол.
682
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
жив., М. 1991. 12.Цыбанова Т.С. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир,1995
:265. 13.Цыбанова Т.С. и др. Тез . докл. н.-пр. конф., ВНИИЗЖ, Владимир,1995 :264.
14.BagustT.G. et.al. Avian diseas, 1986, 30, 1 :176. 15.Bagust T.J. et.al. Avian Pathol ,1995, 24,
3 :373. 16.Bains B.S. A manuel of poultry disaeses Ed Roche Basle,1979. 17.Barhoom S. et.al.
Avian Pathol, 1986, 15, 2 :213. 18.Davison S. et.al. Avian Dis 1989, 33, 1 :18. 19.Fahey K..J.
et.al. Avian Pathol, 1983, 12, 4 :505. 2O.Glissen J.R. Proceedings, 1988 :137. ll.Goodwin M.A.
et.al. Avian Diseas, 1995, 39, 2 :444. 22.Guo Peixuan. et.al. Virology, 1994, 202, 2 :771.
23a.Haghes C.S. et.al. Arch Virol, 1991, 121, 1-4 .213. 23.Hilbink F.W. et.al. Veter Q 1987, 9
:215. 24.Honda T. et.al. Заявка 74148 16. 07. 87 г. опубл. 25. 12. 90. 25.Johnson M.A. et.al.
Arch Virol ,1991, 119, 3-4.181. 26.Kaleta E.F. Avian Pathol ,1990, 19, 2 :193. 27.Keler L. J
Cell Bioteh, 1992, Suppl 16 :130. 28.Lercio B. et.al. Proceedings 1988 :132. 29,Ohkubo Y. et.al.
Avian Dis 1988, 32 ,1 :24. ЗО.Тапепо A. et.al. Jap J Vet Sci ,1990, 52, 4 :827. 31.Taneno A.
et.al. J Vet Med Sci, 1991, 53, 4 :671. 32.York J.J. et.al. Avian Path, 1989, 18, 4 :643. 33.York
J.J. etal. Avian Path 1991, 20, 4 : 693. 34.Vodopija J. Rev. Infec Diseores, 1988, 10, Suppl 4
:758. 35.Wiliams RD.et.al. J Metod Gen virol, 1992, 73, 9 :2415.
ЧУМА УТОК
Duck plague , Duck virus enteritis (англ.), Eendepest (дат.),
Peste du canarde (франц.), Entepest ( нем.)
Чума уток (вирусный энтерит уток, голландская утиная чума) - острая инфекционная
вирусная болезнь водоплавающих птиц (уток, гусей и лебедей), характеризующаяся депрес-
сией, кровоизлияниями в паренхиматозных органах, поражением ЖКТ, диареей, истощени-
ем и высоким процентом гибели больных птиц.
Впервые болезнь диагностирована в США в 1923 г. Смертность утят тогда достигала
90-100%. Болезнь была зарегистрирована также в Нидерландах, Франции, Китае, Бельгии,
Индии. В США чуму белых пекинских уток наблюдали сначала в штате Нью-Йорк, затем в
штатах Мэриленд, Висконсин, Калифорния, Миннесота и Южная Дакота в 1968-1974 гг.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь можно на-
блюдать в любое время года. Эпизоотия возникает внезапно, падеж бывает без проявления
симптомов. Иногда гибели предшествуют депрессия и слабость. Инкубационный период со-
ставляет в основном 3-7 дн. Если заболевание проявляется в хозяйстве впервые, то оно
очень быстро распространяется в стаде и сопровождается высокой смертностью птицы и
резким снижением продуктивности. Наблюдается отказ от корма, жажда, залеживание, вя-
лая медленная походка, конъюнктивит, нарушается координация движения, нередко отме-
чаются полупараличи крыльев. Птица лежит на боку или на спине с вытянутыми вдоль ту-
ловища ногами. Наиболее характерным клиническим признаком является водянистый по-
нос. Острое течение развивается примерно через 10 дн после заражения и проявляется за-
медленной ходьбой, конъюнктивитом, ринитом, диареей, быстрым исхуданием, дрожью.
Больные утки апатичны, у них исчезает аппетит, появляется сильная жажда, иногда воспа-
ляются веки, свисают крылья, расстраивается движение. Через некоторое время симптомы
могут исчезнуть, но затем появляются вновь, и через 4-15 дн птица погибает. Выздоровле-
ние наблюдают редко, и протекает оно медленно. Погибает почти вся заболевшая птица. Ре-
цидивы не наблюдаются. У выздоровевших птиц постепенно восстанавливается яйценос-
кость. В стационарно неблагополучных хозяйствах при наличии частично невосприимчивых
к заболеванию особей клинические признаки стертые. Отмечается депрессия, слабость и
скачкообразная смертность. В таких хозяйствах наибольший отход наблюдается среди мо-
лодняка. Смертность колеблется в зависимости от характера хозяйства от 30 до 100%.
683
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
При вскрытии обнаруживают множественные разлитые и точечные кровоизлияния в
сердце, печени, серозных оболочках, яичниках и слизистой пищеварительного тракта. Реже
наблюдают отек подкожной клетчатки и выпот в перикарде, некротические очаги в печени,
дифтерические налеты на слизистой оболочке кишечника. При микроскопии отмечают ци-
топлазматические включения в эндотелии мелких кровеносных сосудов и клетках печени,
внутриядерные включения в клетках почек и слизистой оболочки пищевода.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус детально изучен Хессом и др. (1968).
Морфология и химический состав. Вирус содержит 2-нитчатую ДНК и относится к
роду герпесвирусов. По данным Снайдера, Фокса и Кэмпебла (1973) вирусные частицы
имеют 75-80 нм в диаметре, внутри их содержится либо кольцеобразный, либо плотный
центральный нуклеотид. Размеры вирионов 91 нм в ядре и 181 нм в цитоплазме.
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину, хемотрипсину и
пайкреотической липазе. Разрушается нагреванием при 50°С в течение 2 ч и 56°С или 60°С
в течение 10 мин, устойчив при pH 5-10, но быстро инактивируется при pH 11 или более и
при pH 3 и меньше. Оптимум pH для сохранения вируса составляет 7-9 различие в уровне
инактивации отмечено при pH 10 и 10,5. Вирус хорошо сохраняется при -20°С.
АГ структура не изучена.
АГ активность, вариабельность и родство. У переболевшей птицы обнаруживают
ВНА. Вирус представлен одним серотипом (в PH и перекрестного иммунитета).
ГА свойства. Вирус обладает Г А эритроциты кур, уток, лошадей и баранов.
Локализация, вирусоносительство, вирусовыделение. Данные о локализации виру-
са, вирусоносительстве и вирусовыделении в литературе не описаны. С появлением депрес-
сии вирус обнаруживается в крови и внутренних органах. Наибольший титр его отмечен в
печени. Экспериментальная инфекция воспроизводится инокуляцией в слизистые оболочки
и контактом с больной птицей.
Культивирование. Вирус культивируется на ХАО 12 дн утиных эмбрионах, которые
погибают через 4 дн с ярко выраженным геморрагическим диатезом. Заражение в алланто-
исную полость обусловливает гибель эмбрионов. В КЭ вирус культивируется плохо. Адап-
тация к ним вируса, как правило, сопровождается аттенуацией для утят с сохранением им-
муногенных свойств. Вирус хорошо размножается в культуре фибробластов утиных эмбрио-
нов и вызывает образование бляшек. Через 48 ч после заражения клеточных культур вирус
обнаруживали в ядре и цитоплазме клеток. В деталях изучено развитие этого вируса в куль-
туре клеток. Максимальный титр вируса в культуре достигал к 48 ч. Внеклеточный вирус
обнаруживали уже через 6-8 ч после заражения, и титр его достигал максимума к 60 ч.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служит больная птица.
Во внешнюю среду вирус выделяется с экскрементами, в организм проникает с инфициро-
ванной водой и кормом через нос, клоаку и повревдения кожи. Полагают, что вирус могут
разносить кошки, собаки, крысы, чайки, вши, клещи, москиты и обслуживающий персонал.
Не исключена возможность участия перелетных птиц. Заболевание возникает в любое время
года, но чаще связано с резким изменением погоды. Возросшая чувствительность к заболе-
ванию отсутствует. Источником инфекции является также переболевшая птица. Наиболее
часто возбудитель проникает в организм алиментарным, ингаляционным путем и через по-
врежденную кожу.
Спектр патогенности в естественных условиях. К вирусу восприимчивы утки многих
пород: пекинские, хаки-кембелл, индийские бегуны, чирки-трескунки, утки-пеганки, утки-
свиязи обыкновенные, чернеть хохлатая, утки-широконоски, гаги обыкновенные, нырки
обыкновенные, утки серые, утки южноамериканские, мускатные, утки каралинские, утки
древесные и др. Восприимчивы также лебеди шипуны, гуси гуменники и казарки белоло-
684
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
бые. Восприимчивость у птиц разных пород неодинакова, взрослые и молодые утки одной
породы поражаются с одинаковой частотой.
ДИАГНОСТИКА
Клинически диагноз поставить трудно. Ориентирует внезапный падеж птиц. Симптомы
болезни напоминают интоксикацию, холеру и НБ. Легче диагностировать болезнь на вскры-
тии, так как геморрагические изменения выражены отчетливо. Лабораторная диагностика
позволяет исключить холеру и НБ. Предварительный диагноз ставят на основании эпизо-
отологических данных, клинических признаков и патологоанатомических изменений.
Окончательный диагноз ставят после проведения лабораторных исследований - выделения
возбудителя, определения его патогенности и серологической идентификации результатам
PH на утиных эмбрионах или культуре фибробластов утиных эмбрионов с использованием
гипериммунных сывороток.
Для выделения вируса используют кусочки печени и селезенки, для гистологического
исследования - кусочки печени, селезенки, пищевода и других органов. Выделение вируса
проводят путем заражения утят, утиных эмбрионов, культур клеток. Серологическую иден-
тификацию вируса проводят в PH и ИФ. Для ретроспективной диагностики в PH исследуют
пробы сыворотки крови (лучше парные) от переболевших птиц. Индекс нейтрализации 1,75
и выше указывает на то, что ранее птица переболела чумой. Заболевание необходимо диф-
ференцировать от НБ. гриппа, пастереллеза, кокцидиоза и др.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Птицы-реконвалесценты иммунны и передают потомству с яйцами пассивную защиту
(за счет материнских АТ). Профилактика заключается в иммунизации вакциной, приготов-
ленной из аттенуированного вируса. Последний сообщает активный иммунитет продолжи-
тельностью от 3 до 4 мес и индуцирует защиту по принципу интерференции, что позволяет
быстро оборвать начавшуюся инфекцию. Большинство привитых уток не имеет ВНА. Вак-
цинный шт. Дженсена не контагиозен и, вероятно, не риверсибелен.
Для профилактики заболевания во Франции и Венгрии применяют приготовленную на
куриных фибробластах сухую вакцину из аттенуированного шт. Янсен. Вакцинацию прово-
дят начиная с 3-х нед возраста птицы. Вакцину вводят дважды - на 3-й и 7-й нед жизни. Ре-
вакцинация проводится перед началом яйцекладки. Фирма “Интервет” предлагает культу-
ральную вакцину из лиофилизированного ослабленного шт. Утрехт. Первая вакцинация
этим препаратом производится в возрасте 4-х нед. В случае необходимости можно иммуни-
зировать утят в суточном возрасте. Во ВНИИВВиМ создана и проходит испытания анало-
гичная вакцина.
Мероприятия по профилактике заболевания должны быть направлены на охрану хозяй-
ства от заноса инфекции. В случае возникновения заболевания больную и подозрительную
по заболевании птицу убивают. Проводят комплекс мероприятий, направленных на обез-
вреживание очага. Карантин снимают через 3 мес после проведения мероприятий.
ЦИТОМЕГАЛИЯ ПОРОСЯТ
Cytomegaloviral infection
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Цитомегалоинфекция
поросят вызывается цитомегаловирусом, относящимся к роду Muromegalovirus (Herpesvirus
suis-2). Клинически болезнь проявляется параличами с летальным исходом. Вирус культи-
вируется в культуре клеток лёгочной ткани поросёнка, вызывая поражения в период от 11
до 18 дн после инокуляции. В клетках образуются внутриядерные включения (1).
Крупные базофильные включения в цитомегалических клетках в слизистых железах
слизистой оболочки носа свиней впервые описал Done в 1955 г (3). Их появление у свиней с
685
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ринитом придало название болезни “ринит с тельцами-включениями”. Было показано, что
герпесвирусподобные вирионы являются причиной образования телец-включений, инфек-
ционный процесс также часто вовлекаются слезные и слюнные железы, как и эпителий но-
совых ходов. В последующем характерные гистологические поражения слизистой оболочки
носа были описаны в различных странах. Наличие и распределение поражений подтвержда-
ет, что вирус относится к группе герпесвирусов, поражающих людей и животных, описан-
ных как “вирус слюнных желез” затем как цитомегаловирус и, наконец, как р-герпесвирус
(10). Вирусы этой группы формируют субгруппу герпесвирусов, поскольку слабо росли и
образовывали цитомегалию с различными внутриядерными включениями; имеют тенден-
цию быть видоспецифическими; обычно индуцируют клинически скрытую инфекцию у
взрослых, но часто смертельную генерализованную инфекцию у молодняка; способны пре-
одолевать плацентарный барьер и инфицировать плод. Как только все эти признаки были
обнаружены у вируса “ринита с тельцами-включениями”, его стали называть цитомегалови-
русом поросят (PCMV, ЦМВП). ЦМВП, как и другие члены семейства герпесвирусов, спо-
собен индуцировать латентную инфекцию и выделяться во внешнюю среду в присутствии
циркулирующих АТ. В чувствительных стадах вирус может вызывать гибель плодов и по-
росят, карликовость (недоразвитие), риниты и пневмонии, а также снижение жизнеспособ-
ности. Однако при хороших условиях инфекция может быть эндемичной и не причинять
экономических потерь. Не осложненная цитомегалия поросят (ЦМП), обычно клинически
слабо проявляющаяся у поросят старше 3 нед возраста, может быть смертельна для плодов
и новорожденных животных. У некоторых взрослых животных, зараженных вирусом ЦМП
в первый раз могут развиваться поражения, характерные для генерализованной инфекции,
что характеризуется анорексией, угнетением в период виремии без температурной реакции
(т.е. 14-21 дн после инфекции), тогда как у некоторых поросят менее 3 нед возраста разви-
ваются поражения рассеянной эпителиальной инфекции, после чего они выздоравливают.
Вирус ЦМП не индуцирует развитие атрофических ринитов, но может вызывать легкие ри-
ниты у молодых поросят. При краткосрочном переболевании не установлен синергетический
эффект Bordetella bronchiseptica, но длительная экспозиция гарантирует её развитие в поле-
вых условиях. У беременных свиноматок отсутствует аппетит в период виремии, но отсутст-
вует температурная реакция и другие клинические признаки. Поросята могут рождаться
мертвыми или умирать вскоре после рождения без каких-либо клинических признаков. Дру-
гие отстают в росте, бледные вследствие анемии, с различными отеками вокруг челюстей и
суставов. Естественная вспышка болезни сопровождается признаками дрожания, чиханием
и респираторными расстройствами (Рис. 96). Потери могут составлять до 25% помета. У
выздоравливающих поросят возможно формирование персистентной инфекции.
Наиболее характерными макроскопическими изменениями у поросят являются распро-
страненные петехии и отеки. Отечность наиболее заметна в области грудной полости и в
подкожных тканях. В грудной полости видны перикардиальные и плевральные кровоизлия-
ния, отек легкого отмечают во всех его долях. Все лимфоузлы увеличены, отечны, с петехи-
альными кровоизлияниями. Отечность выражена также в почках, особенно под капсулой. В
тонком кишечнике кровоизлияния встречаются реже, размер их варьирует до 1 см. Зараже-
ние плодов не сопровождается макроскопическими изменениями. Мумификации могут под-
вергаться эмбрионы разного возраста без какой-либо закономерности.
Гистологические изменения характеризуются наличием базофильных транснуклеарных
телец-включений и цитомегалией в эпителии носовой полости, слезных железах и др. В этих
тканях поражается множество клеток. Изолированные тельца-включения чаще находят в
слизистой оболочке глотки, а также в эпителии протоков (слезного, семенного), кишечника.
Вокруг пораженных эпителиальных клеток обнаруживается скопление лимфоцитов, плазма-
тических клеток и макрофагов (9). При остром смертельном синдроме тельца-включения
бывают в эпителиальных клетках капилляров и во всех лимфоидных и паренхиматозных
тканях. Мононуклеарные клетки находят в кровеносных сосудах и селезенке, инфицирован-
686
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ные макрофаги - в альвеолярной ткани. Репликация вируса в гепатоцитах приводит к некро-
зам. В почках включения наиболее часто встречаются в зоне раздела почечной ткани и в эн-
дотелии капилляров гломерул. Геморрагии и глиозис встречаются в ЦНС (13).
Патогенез. При экспериментальной интраназальной инфекции вирус выделяется из но-
совых и конъюнктивальных смывов до начала виремии, что подтверждает первичную реп-
ликацию вируса в железах слизистой оболочки носа, в слезных железах и др. Виремия об-
наруживается через 14-16 дн после внутримышечного заражения у 3-х нед поросят, и в пе-
риод 5-19 дн у новорожденных поросят. Вирус разносится лейкоцитами и может быть выде-
лен из носовых смывов в течение 32 дн, из фарингиальных и конъюнктивальных смывов -
более короткий срок, тогда как персистенцию вируса показать весьма сложно. С возрастом
животных место вирусной репликации меняется. При экспериментальном заражении в воз-
расте 3 мес вирус диссиминируется в эпителиальных тканях, особенно в железах слизистой
оболочки носа, а также слезных железах, почках, реже - в придатках и железах слизистой
глотки, гепатоцитах, эпителии кишечника. У эмбрионов и новорожденных поросят - в клет-
ках РЭС, особенно в эндотелии капилляров и синусах лимфоидной ткани, что обеспечивает
генерализацию инфекции. Вирус может персистировать в легочных макрофагах, его выде-
ление можно активизировать обработкой животных кортикостероидами (11). АТ в непрямой
ИФ выявляются через 3 нед после заражения ВЦМП и достигают пика через 6 нед.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. ЦМВП имеет электронно-плотное ядро диаметром
45-70 нм, окруженное икосаэдральным капсидом 80-100 нм диаметром и наружной одно-
слойной или более чем 2-слойной мембраной 120-150 нм в поперечнике. Ядро обычно вы-
тянутой формы (овальное, прямоугольное, гантелевидное). Ядро нуклеокапсида имеет элек-
тронно-плотную оболочку, которая отделяется прозрачным ободком от оболочки. Оболочка
внеклеточных и внутриклеточных вирионов имеет наружную проекцию и чистую 1-
мембранную структуру. Как и другие герпесвирусы, частицы без ядра или с прозрачным
ядром часто встречаются in vivo и in vitro.
Экспериментальная инфекция. При экспериментальном заражении ингибирующие
ИФ АТ обнаруживаются через 3 нед, достигают максимального количества на 6-й нед и
персистируют до убоя. Однако, в случаях эндемичной инфекции вирус ЦМП персистирует в
присутствии материнских АТ. От супоросных свиноматок, у которых вирус сохраняется 14-
21 дн, что совпадает с периодом виремии, выделяют вирус из носовых смывов. Из смывов
шейки матки вирус выделяли на 3-5-й дн после заражения. Радиографические исследования
показали, что основная смертность плодов наблюдается именно в этот период после зараже-
ния свиноматок. Эти данные подтверждают, что вирус реплицируется в плодах в течение
14-20 дн. В плодах он появляется раньше, чем в тканях свиноматки. На этой стадии инфек-
ции тельца-включения не обнаруживаются ни в эндометрии, ни в шейке матки. У неболь-
шого количества плодов вирус обнаруживается через 50-80 дн после заражения, однако пока
не установлено, является ли этот вирус контактно распространенным внутриматочным ви-
русом, реплицированным в этом органе, или вирусом, проникшим через плацентарный
барьер. И плоды и конгенитально инфицированные новорожденные поросята серонегатив-
ны. Суперинфекция свиноматок с низким титром циркулирующих АТ связана с транспла-
центарной передачей вируса. Вирус находили в купферовых клетках и перитонеальных мак-
рофагах (4,5,6,7,8, 9).
Культивирование. Размножение ЦМВП in vitro весьма проблематично. По сообщени-
ям одних авторов оно возможно в культуре клеток легких поросят, других - только в культу-
ре клеток легочных макрофагов от поросят 3-5 нед возраста. Последняя культура использу-
ется как для пассирования, так и для выделения вируса из материала. Цитомегалия и обра-
зование внутриядерных и редко встречающихся мелких цитопламатических включений от-
мечается на 3-14-й дн после заражения в зависимости от титра вируса, используемого для
заражения с максимальным накоплением на 11-14-й дн до 5,5 1g ТЦД ;о/мл (Рис. 95).
687
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
По сообщениям Bouillant et.al. (2) вирус репродуцируется в культуре клеток фалопиевых
труб свиней, тогда как Shirai et. al. (12) изолировали вирус из культуры клеток тестикул по-
росят. Инфицированные клетки культуры увеличиваются примерно в 6 раз с увеличением
митохондрий, эндопламатического ретикулума, аппарата Гольджи. Крупные внутриядерные
базофильные тельца-включения окружаются светлым ободком, отделяющим их от ядерной
мембраны. Однако это может быть артефактом фиксации.
Включения окрашиваются в зеленый цвет акридиновым оранжевым. Множество мелких
ацидофильных включений иногда встречается в ядрах, но более часто в цитоплазме.
В ультратонких срезах обнаруживаются крупные внутриядерные включения, коррели-
рующие с образованием нуклеокапсидов. Капсиды окружены электронно-плотной оболоч-
кой в ядре. Она имеет происхождение из внутренней ядерной мембраны. На поздней стадии
репликации, когда клетки разрушаются, кристаллоподобные скопления вируса могут быть
видны также в цитоплазме.
АГ активность. В непрямой ИФ на культуре клеток легочных макрофагов, в сыворот-
ках крови больных животных обнаруживаются АТ в титре Г.64 - 1:128. Эта реакция чувст-
вительнее, чем PH. АГ различий между различными изолятами вируса не установлено.
ЦМВП строго хозяиноспецифичен как in vivo, так и in vitro. Вирус не продуцируется на КЭ,
кроликах, хомячках, мышах.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Вирус широко распространен. Установлено более 90 % серопозитивных стад в Англии
и доказана возможность трансплацентарного заражения эмбрионов. Вирус может выделять-
ся с истечениями из носа и глаз, с мочой, из спиномозговой жидкости взрослых свиней, за-
раженных ЦМВП первый раз, иногда его изолируют из семенников и придатков (12), что
подтверждает возможность заражения хряков. Распространяется инфекция обычно назаль-
ным путем. Изучение длительности выделения вируса в зимний и летний периоды показало,
что вирус выделяется поросятами 3-8 нед возраста. Уровень АТ увеличивается в течение
периода вирусовыделения, но вновь снижается к 8-11-й нед и содержится в минимальных
титрах до 23 нед. В некоторых случаях вирус выделяется от поросят 3-х нед возраста и за-
канчивается в 5-нед возрасте. Это подтверждает раннее постнатальное или конгенитальное
заражение поросят, которое может быть связано с мумификацией плодов, мертворождения-
ми, неонатальной смертью и наличием поросят с ринитами и пневмонией. Реактивация вы-
деления ЦМВП может наблюдаться при применении кортикостероидов (И). Выделение ви-
руса из макрофагов легких показывает, что макрофаги являются резервуаром инфекции.
Цитомегалия поросят протекает подобно цитомегалии мышей.
ДИАГНОСТИКА
Наличие вируса ЦМП в стаде наиболее легко подтверждается с использованием непря-
мой ИФ или ИФА при обнаружении в пробах сыворотки специфических АТ. У свиноматок
наблюдаются нарушения репродуктивной системы, которые могут быть обусловлены также
провирусами и БА (аборты при цитомегаловирусной инфекции не наблюдаются). Вирус
можно выделить от зараженных животных из носовых смывов, проб легкого, почек в куль-
туре клеток макрофагов легких свиней. Вирусспецифический АГ можно обнаружить в не-
прямой ИФ криосрезов тканей. Гистологические исследования позволяют обнаружить тель-
ца-включения (8, 9).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
В хозяйствах, даже неблагополучных по ЦМП, инфекция не является проблемой при
хорошо организованной системе свиноводства. Однако ввод нового чувствительного пого-
ловья может обострить латентное течение вируса в присутствии АТ. Возможность транс-
плацентарной передачи вируса обусловливает необходимость серологического мониторинга
в течение по крайней мере 70 дн после вспышки заболевания, чтобы определить стадо как
свободное от ЦМП. Специфических средств лечения ЦМП не предложено, хотя могут ис-
пользоваться при вспышках ринитов антибактериальные медикаменты.
688
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М., Колос, 1979. Z.Bouillant А.М. et.al. Can J Comp
Med 1975, 39 :450. 3.Done J.T. Vet Rec 1955, 67 :525. 4.Edington N. et.al. J Hyg (Camb) 1976,
77 :283. 5.EdimgtonN. et.al. J Comp Path 1976, 86 :191. 6.Edington N. et.al. Vet Rec 1976, 98
:42. 7.Edington N. et.al. J Hyg (Camb) 1977, 78 :243. 8.Edington N. et.al. Vet Microbiol 1988,
16 :89. 9.Edington N. et.al. Vet Microbiol 1988, 17 :17. lO.Matthews R.E.F. Klassific and
nomenkl of Viruses. 1982 Basel, London, N.Y.:S. Karger, :49. ll.Narita M. et.al. Am J Vet Res
1985, 46 :1506. IZ.Shirai J. et.al. Jpn J Vet Sci 1985, 47 :697. 13.Stephano-Homedo A. et.al.
Vet Mex 1987, 18 :189.
БОЛЕЗНЬ МАРЕКА
Polinevritis interstinalis chronica, Polinevritis gallinarum (лат.); Fowl or range paral-
isis, neural, okular, (grey or paerly eye) and vaskular lymphomatosis, Marek’s leukosis,
Marek’s disease, Polynevritis, Neurolymphomatosis galinarum (англ.); Seuchenhafte Hirn-
Ruckenmark-Nervenentzundung der Huhner Infectiose, Anstecende Oder Mareksche
Huhnerlahme Oder Huhnerlahmung, Herpesvirus-B-infektion des Huhnes (Marek) (нем.);
La maladie de Marek classique et aigue (франц.); Enfermedad de Marek (исп.).
Болезнь Марека (БМ, нейролимфоматоз птиц, паралич птиц, энзоотический нейроэнце-
фаломиелит птиц) - высококонтагиозная вирусная болезнь кур и индеек, проявляющаяся в
2-х формах: классической (поражение периферической и центральной нервной системы) и
острой (лимфоидный лейкоз). Заболевание впервые описал в 1907 г Ж. Марек, венгерский
ветеринарный патолог, профессор Королевского Венгерского университета.
Распространен повсеместно. Болеют куры, индейки, фазаны, утки, гуси, лебеди, кана-
рейки, куропатки. Наиболее восприимчивы куры и особенно цыплята в первые 2 недели
жизни. БМ известна очень давно, а истинный возбудитель ее - только с 1970 г. С открытием
и описанием возбудителя БМ и герпеса индеек по иному представились пути передачи ин-
фекции, иммунитет и перспективы специфической профилактики.
БМ получила свое название в 1961 г. в США на конференции Всемирной ветеринарной
ассоциации птицеводства. До этого ее смешивали с лимфоидным лейкозом из-за сходства
поражений в висцеральных органах. Чаще всего явные опухоли, состоящие почти исключи-
тельно из лимфоидных клеток, находили в печени и гонадах. В 1950 г. эта инфекция, еще
точно не дифференцированная от лимфоидного лейкоза, сильно распространилась в США.
Она наблюдалась у молодых птиц, проявляясь ярко выраженными висцеральными пораже-
ниями. В 1965 г. аналогичная болезнь появилась в Англии. До тех пор, пока не были пред-
ложены вакцины, фермеры не могли вести борьбу с болезнью, масштабы распространения
которой все возрастали. БМ распространена по всему миру, но, в основном, в районах про-
мышленного птицеводства, хотя стада птицы поражаются ею в разной степени. Заболевание
под названием «нейролимфоматоз птиц» впервые зарегистрировано в России в 30-40-е г. о
чем сообщалось в работе А.В. Коронного (1941). Возникшую тяжелую ситуацию по БМ в
США, Англии и Европе охарактеризовали как эпизоотию. В это время было предложено на-
звание «острая форма БМ» в противоположность форме с доминирующими нервными из-
менениями, которая затем была обозначена как «классическая форма БМ». Острую форму
БМ в СССР впервые установили в 1970 г. (7). До применения средств специфической про-
филактики БМ наносила огромный экономический ущерб во всех странах мира.
Клинические признаки. БМ проявляется в возрасте от 6 нед, но чаще от 12 до 24 нед.
Инкубационный период длится от 3-4 нед до нескольких месяцев. Смертность колеблется от
44 Зак. Ns 171
689
Г лава XVI. Family Hapesvirida Г ерпесвирусные инфекция
единичных случаев до 70-80 %. При классической форме поражается небольшой процент
стада ( до 10), а при острой - 20-30% (51). Среди птиц, оставленных для воспроизводства,
болезнь особенно распространена у птиц тяжелых пород (белые рокки) и приводит к леталь-
ному исходу в среднем в 23,7% случаев; были зарегистрированы случаи с летальностью,
превышающей 50%. В естественных условиях от БМ средн бройлеров наблюдается неболь-
шая смертность, так как их убивают в 2 мес возрасте. Смертность часто начинается в 8-нед
возрасте у несушек, хотя пик её обычно наступает к 5 мес (Рис. 99). При искусственном за-
ражении суточных цыплят без материнских АТ они могут погибнуть через 3 нед и даже че-
рез 10-17 дн после периода депрессии и остановки роста (51).
При БМ наблюдаются три фазы: острая цитолитическая инфекция, латентная инфекция
с иммуносупрессией и развитие опухолей. Во время латентной инфекции наблюдается су-
прессия Т-клеток. Очевидно иммуносупрессия происходит за счет анаптоза Т-клеток СД4+ и
нарушения транскрипции генов СД8+ (137).
БМ протекает классически и остро. Первая характеризуется поражением нервов и раз-
витием параличей, вторая - образованием множественных лимфоидных опухолей в висце-
ральных органах. Классическое течение проявляется обычно хромотой, парезами, атаксией,
параличами 1-й или 2-х конечностей, крыльев, шеи и хвоста. С 1903 г. болезнь обычно на-
зывалась “птичьим параличом”. Больная птица погибает от дегидратации и истощения. При
классическом течении болезни выявляют невральную и окулярную формы, которые могут
встречаться раздельно или в сочетании. Невральная форма протекает подостро и характери-
зуется двигательными расстройствами: беспорядочным перемещением, шаткой походкой,
хромотой. В дальнейшем возникают парезы и параличи ног, крыльев, хвоста, шеи и зоба.
Окулярная форма протекает хронически: заболевает птица чаще в 5-16 мес возрасте. При
некоторых вспышках в процесс вовлекается радужная оболочка глаза, которая становится
бледной (белесой), зрачок имеет неправильное очертание и не реагирует на свет. Этот син-
дром называется “глазным лейкозом”. Смертность при поражении глаз наблюдается редко,
с признаками нервных явлений она составляет 2-5% (10). При некоторых вспышках преоб-
ладают поражения кожи, называемые “кожным лейкозом”.
Острое течение БМ проявляется внезапно, быстро, характеризуется массовыми
“транзитными” параличами, внутренние органы поражаются лимфоидными опухолями. У
больных птиц наблюдаются депрессия, атаксия, удушье. Перед гибелью развиваются пара-
личи, дегидратация и истощение (32). В обследованных А.Ф.Федотовым (36) птицеводче-
ских хозяйствах при опухолевых болезнях кур на острое течение БМ приходится 51,6±1,4%,
на лимфоидный лейкоз - 19,2±1,3%. У вакцинированных цыплят в возрасте от 5,5 до 19 мес
остро протекающая БМ составляет 30,6%. Заболевание у птиц старших возрастных групп
преимущественно связано с возрастным ослаблением иммунитета по разным причинам.
В Венгрии в течение 27 лет наблюдалось спорадическое появление классической (с по-
ражением нервной системы) БМ, ни разу не выявили острое течение болезни с образовани-
ем опухолей. Можно заключить, что классическая и остропротекающая БМ вызываются
двумя разновидностями вируса БМ. При этом речь идет о герпесвирусах, которые локали-
зуются в разных органах. Но иногда и при классической БМ образуются опухоли, а пораже-
ния периферических нервов могут наблюдаться и при остром течении БМ. Герпесвирусы в
зараженных стадах образуют почти апатогенные разновидности. Поэтому остро протекаю-
щая БМ у птиц старшего возраста сопровождается смертностью. В переболевших стадах
птиц, включая потомство, развивается специфическая резистентность и, как результат, ос-
лабляется течение болезни (134).
На возникновение и тяжесть течения БМ влияют по меньшей мере 7 факторов (113): 1)
патогенность вируса - одни шт. индуцируют образование опухолей, другие - нервную или
классическую формы; 2) генетическая предрасположенность и возраст цыплят; 3) пол цып-
лят - курочки болеют чаще, чем петушки; 4) наличие материнских АТ, которые снижают
развитие виремии, но не предотвращает ее полностью. Снижение виремии зависит от коли-
690
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
чества материнских АТ и степени их серологического родства с инфицирующим вирусом; 5)
интерференция между шт. Инфицирование цыплят слабыми и апатогенными шт. приводит к
интерференции с реинфицирующим вирусом, в результате чего его высокая патогенность не
проявляется; 6) заражение посторонними вирусами и др. агентами - вирусом ИББ, рео- и
аденовирусами, из бактерий - сальмонеллами; дополнительный стресс-фактор - кокцидии; 7)
состояние окружающей среды: качество кормов, вода, зоогигиеиические условия содержа-
ния (воздухообмен, световой режим и др.).
Патологоанатомические и гистологические изменения. Еще в 1968 г. Eidson et.al.
(86) изучили БМ, вызванную полевым вирусом YA, посредством контакта здоровых цыплят
с зараженными птицами. Контактно заражали цыплят 1-дн возраста, затем отдельными
партиями с 1 до 8 нед их убивали с недельным интервалом. Исследовали на наличие макро-
и микропоражений. Вирус БМ вызывает лимфопролиферативное заболевание, характери-
зующееся клеточной инфильтрацией нервной системы, а также опухолями в паренхиматоз-
ных органах (127).
Заслуживают внимания изменения ЦНС. По данным Fletcher и др. (92), в головном моз-
ге появляются многоядерные клеточные периваскулярные инфильтраци, определяемые как
негнойный диффузный энцефалит. Ранние изменения в ЦНС наступают к началу 2-й нед и
особенно интенсивно на 4, 5, 6, 7 нед после заражения (193). Наблюдаются односторонние
поражения белого вещества спинного мозга (134).
Нервы поражаются, в основном, при классическом течении БМ. Нервные волокна отеч-
ны, исчезает полосчатость, они становятся сероватыми. Иногда степень увеличения их раз-
лична (Рис. 165), иногда поражения сопровождаются опухолями в гонадах. В головном и
спинном мозге отмечают гиперемию сосудов и участки размягчения.
При остром течении БМ неопластический процесс характеризуется образованием лим-
фом в тканях и органах. Лимфомы могут поражать гонады, печень, легкие, мышцы, кожу,
селезенку, почки, фабрициеву бурсу или тимус. Опухоли могу быть в виде фокусов, ограни-
ченные или диффузные (10). Пораженный орган увеличен и бледен, так как инфильтруется
лимфоидной опухолевой тканью. Обычно при этом происходит атрофия бурсы Фабрициуса,
однако, когда она поражена опухолью, стенки и складки ее диффузно утолщаются. Установ-
лены отличительные изменения в фабрициевой бурсе: фолликулы в атрофическом состоя-
нии, нередко кистозного строения, межфолликулярная ткань инвазирована новообразован-
ными клетками. В других органах - разные по обширности очагово-диффузные скопления
лимфоидных клеток. При значительном поражении органов нормальная архитектоника их
значительно нарушена. Лимфомы при БМ состоят преимущественно из малых, средних и
больших лимфоцитов, одиночных гистиоцитов, плазматических клеток и гранулоцитов, ре-
же встречается мономорфноклеточный состав лимфоидных опухолей (Рис. 100 A- G).
В 20-30% случаев встречают образование опухолей в яичниках и семенниках., которые
увеличиваются в размерах, имеют бугристую поверхность и плотную консистенцию. При
остром течении болезни трупы истощены, слизистые оболочки анемичны, редко отмечают
поражение глаз. У птиц обнаруживают опухоли в сердце, легких, поджелудочной железе,
тимусе, фабрициевой сумке, яичниках, семенниках, мышцах, коже и относительно редко - в
периферических нервных стволах в виде диффузных или ограниченных образований. В
процесс вовлекается один или несколько внутренних органов, а иногда опухолевые образо-
вания находят только в нервных стволах, что связывают с тропизмом шт. к различным тка-
ням. Печень, селезенка, почки увеличены, с гладкой или бугристой поверхностью, усеяны
диффузными или очаговыми узелками светло-серого цвета, придающими органам пестрый
вид. В железистом желудке, на всем протяжении кишечника и брыжейки имеются серовато-
белые узелки новообразованной ткани.
Иммуноморфологическим методом установлено, что при острой БМ лимфомы состоят
преимущественно из популяций Т-лимфоцитов. В зависимости от локализации лимфы в
различных органах содержание Т-лимфоцитов колеблется от 50,2±2,0% до 94,5±2,8%; В-
44*
691
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
лимфоцитов - от 3,5+0,65 до 31,0+1,97, а 0-лимфоцитов - от 1,5±0,49% до 22,8±1,08%. Ин-
декс митотической активности клеток лимфом при БМ достоверно выше (1,09+0,15%), чем
клеток интактной лимфоидной ткаии (0,57+0,1%). В лимфомах обнаружено значительно
больше патологических митозов (0,024+0,004%). При экспериментальной инфекции через 3-
4 нед после заражения образуются первые пролифераты (I фаза), преимущественно в яични-
ках, а также в печени, селезенке и других органах, локализуясь, в основном, около крове-
носных сосудов. Патологические изменения при БМ иногда носят отчетливо выраженный
воспалительный характер, а в других случаях - неопластический (135). У высокочувстви-
тельных цыплят, инфицированных после вылупления, при отсутствии материнских АТ от-
мечаются изменения в виде дегенераций и некрозов, с появлением внутриядерных включе-
ний в тимусе, фабрициевой сумке, костном мозге, почках, печени, поджелудочной железе,
преджелудке, селезенке, сердце. Изменения обнаруживаются в начале болезни и через 10-17
дн после заражения приводят цыплят к гибели (51). Вторая пролиферативная фаза характе-
ризуется тем, иго в процесс вовлекаются ретикулярные и лимфоидные клетки, что ведет к
гибели цыплят, начиная с 21-го дн до нескольких мес после заражения. Пролиферативные
изменения сопровождаются иногда энцефаломиелитами.
Третья фаза болезни - это хроническое воспаление периферических нервов и поражения
типа В. При исследовании 3 тыс. птиц разного возраста на наличие посмертных изменений
в 294 пробах из различных органов были обнаружены изменения, характерные для БМ. При
классической форме заболевания микроскопически обнаруживали утолщение и отек нервов.
Особенно резкие изменения были отмечены в седалищном нерве и плечевом сплетении
(182). Однако наиболее ранние поражения находили в бедренном нерве (103). При висце-
ральной или острой форме течения болезни изменения чаще наблюдали в печени, почках,
селезенке, сердце и преджелудке.
При классическом течении болезни в головном и спинном мозге отмечают периваску-
лярные и перицеллюлярные отеки, пикноз нервных клеток, пролиферацию глиальных и
лимфоидных элементов. В нервных стволах выявляют гиперемию сосудов, диапедезные
кровоизлияния, отек и инфильтрацию интраневральной соединительной ткани лимфоидно-
гистиоцитарными клетками разной степени зрелости. Лимфоидные инфильтраты обнаружи-
вают в зрительных нервах, мышцах и оболочках глаз. При осложнении секундарной инфек-
цией выявляют фибринозное воспаление радужной оболочки, слезных желез и протоков.
Часто в процесс вовлекаются семенники и яичники, где устанавливают образование лимфом
из лимфоцитов, гистиоцитов и плазматических клеток. При исследовании внутренних орга-
нов, чаще поражающихся при остром течении болезни, устанавливают расстройство гемо-
динамики, дистрофию и некроз паренхимных клеток, пролиферацию и инфильтрацию лим-
фоидными, гистиоцитарными и плазматическими клетками периваскулярной соединитель-
ной ткани и постепенное вытеснение паренхимы. В случае поражения головного и спинного
мозга обнаруживают изменения, соответствующие негнойному энцефалиту и миелиту. В пе-
риферических нервах вначале отмечают инфильтрацию нервных волокон лимфоидными,
шванновскими клетками, в последующем наблюдают отек и лимфоидную инфильтрацию
интраневральной соединительной ткани. В зависимости от клеточного состава различают 3
типа лимфом: 1) лимфатические, состоящие из лимфоцитов, лимфобластов и пролимфоци-
тов, или они могут образовываться из лимфоцитов одного вида; 2) гистиоцитарно-
плазматические, образованные из зрелых и незрелых гистиоцитов, ретикулярных и плазма-
тических клеток; 3) смешанно-клеточные, состоящие из лимфоцитов, гистиоцитов и фиб-
робластов разной степени зрелости.
У птиц чаще регистрируют смешанно-клеточные образования. У цыплят раньше других
органов поражаются тимус, фабрициева сумка и кожа. В эпителии перьевых фолликулов
обнаруживают внутриядерные и цитоплазматические включения, окрашивающиеся по
Фольгену. Развитие БМ изучалось посредством исследования периферических нервов и дру-
гих органов в различные сроки после заражения молодых кур шт. НРР В14 БМ. Было обна-
692
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ружено 3 типа нервных поражений: 1) тип А, характеризующийся пролиферацией лимфоид-
ных клеток, иногда демиелинизацией и пролиферацией шванновских клеток; 2) тип В, ха-
рактеризующийся диффузной инфильтрацией малыми лимфоцитами, плазматическими
клетками, отеками, иногда демиелинизацией и пролиферацией шванновских клеток; 3) тип
С, характеризующийся незначительной легкой инфильтрацией, плазматическими клетками
и малыми лимфоцитами. Были также обнаружены поражения смешанного типа А и В (152).
Характерные для БМ поражения наблюдаются в нервах, где происходит инфильтрация
лимфоидными клетками. Иногда поражения похожи на неврит. Лимфоидные опухоли вис-
церальных органов и кожи состоят преимущественно из трансформированных Т-лимфо-
цитов (6). Поражения печени заключаются в инфильтрации лимфоидными клетками, вокруг
портальных вен. Эти инфильтраты увеличиваются, соединяются и в некоторых случаях
большие области печени инфильтруются лимфоидной тканью. Обычно при этом поврежда-
ются гепатоциты. Лимфоидной инфильтрации может подвергаться сердце и соматические
мышцы, что вызывает дегенерацию и некроз мышечных волокон. Поражение кожи начина-
ется с увеличения лимфоидных фокусов рядом с перьевыми фолликулами.
Патологические изменения фабрициевой бурсы при БМ характеризуются либо дегене-
рацией, либо пролиферацией лимфоидных органов. Дегенеративный процесс заключается в
атрофии органа, образовании кист, очаговом некрозе. Пролиферативный процесс связан с
обильной лимфоидной инфильтрацией. Наблюдается дегенерация эпителия, выстилающего
перьевые фолликулы. Процесс прогрессирует до тех пор, пока базальная мембрана клеток
не инфильтрируется массой лимфоцитов. При ЭМ пространство между оболочкой пера и
эпителием перьевого фолликула заполнено детритом и большим количеством развиваю-
щихся вирусных частиц (38). У японских мелкопородистых кур, имеющих клинические,
морфологические и микроскопические доказательства БМ, выявлен артериосклероз аорты и
большой артерии, характеризующийся крайне утолщенной интимой и заметным замыкани-
ем просвета. Иммуноокрашивание пролиферирующего клеточного ядерного АГ выявило
много меченых ядер в утолщенной интиме и реже вне ядра (115).
Патогенез. Схематически представляется следующим образом. Вирус с лейкоцитами
крови проникает во внутренние органы и размножается в клетках лимфоидной ткани фаб-
рициевой сумки, тимуса, селезенки, в местах лимфоидной инфильтрации органов и нервных
стволов. В лимфоидных органах отмечают некроз лимфоцитов и гиперплазию ретикуляр-
ных и эпителиальных клеток. Вследствие гибели лимфоцитов нарушается нормальное
функционирование иммунной системы, что способствует генерализации инфекции и образо-
ванию опухолей во многих органах. В клетках лимфоидных органов, а также в эпителии по-
чек, надпочечников, поджелудочной железы наблюдали репликацию вируса, где он нахо-
дится в тесной ассоциации с клеткой и выявляется в виде внутриядерных и цитоплазматиче-
ских включений. И только в перьевых фолликулах вирус, размножаясь в эпителиальных
клетках герменативного слоя, созревает и выделяется в виде свободных вирионов.
В данном случае рассматривается патогенез БМ у цыплят, вызванный вирусом БМ и
вирусом герпеса индеек, а также патогенез герпетической инфекции у индюшат, вызванной
естественным возбудителем - вирусом герпеса индеек и гетерологичным - вирусом БМ.
Влияние вируса на кровь и кроветворные органы. У экспериментально зараженных
цыплят инфекция достигает пика на 2-й нед, когда накапливается вирусный АГ и в тканях
присутствует клеточно-связанный вирус. Затем виремия постепенно затухает, но поддержи-
вается вплоть до гибели птицы. При исследовании крови (с недельным интервалом) цыплят,
зараженных в суточном возрасте вирусом БМ, отмечено снижение количества эритроцитов
н уменьшение их размеров, т.е. вирус БМ вызывал анемичное состояние (203).
Имеются сообщения о влиянии вируса БМ на кроветворные органы. Отмечены деструк-
тивные поражения Фабрициевой сумки и тимуса у цыплят, зараженных вирусом БМ (107).
Причину предположительно объясняют так: возбудитель стимулирует стержневые клетки
производить лимфоциты (как при лейкемиях). Второе мнение - данный вирус влияет на кро-
693
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ветворные органы, вызывая не только их деструкцию, но также интерферирует с кроветво-
рением, что приводит к задержке и снижению синтеза новых эритроцитов; анемия проявля-
ется раньше появления поражений в кроветворных органах (145).
Цитолитические изменения лимфоидных органах - критерий патогенности шт. и одна из
возможных причин иммуносупрессивного действия вируса (96).
Влияние селезенки на патогенез БМ. Селезенка влияет на ранний патогенез БМ.
Внутренний вирусный АГ в бурсе и тимусе обнаруживали на 2-3 дн раньше у интактных
птиц, чем у спленэктомированных. Но селезенка не предотвращает инфицирования других
органов. У цыплят после спленэктомии инфицированные лимфоциты выявлялись в тимусе,
бурсе через 6-7 дн после интратрахеального заражения вирусом БМ. Спленэктомия не пре-
дотвращает образование АТ против БМ.
Влияние фабрициевой бурсы на течение БМ. Недавно было обнаружено, что бурсо-
эктомия, проведенная у 17-дн эмбрионов, повышает резистентность цыплят к заражению их
вирусом БМ или трансплантации опухолевых клеток. У бурсоэктомированных цыплят на 4,
7, 11-й дн после инокуляции им онкогенного вируса БМ (шт.А-5) отсутствовали внутренние
вирусные антигены в тимусе и селезенке. У интактных же цыплят после инокуляции им это-
го вируса на 4-й дн выявляли внутренние вирусные АГ и на 7, 11-й дн - некроз селезенки у
бурсоэктомированных цыплят был более низкий уровень виремии по сравнению с интакт-
ными. Между 2 и 6 нед после инокуляции шт.А-5 БМ интактные цыплята погибали с мас-
сивными лимфомами, а бурсоэктомированные цыплята не заболевали, т.е. у бурсоэктомиро-
ванных цыплят клеточный иммунитет сохранялся (177). Куры, зараженные патогенным шт.
ВБМ после хирургического удаления у них в 1-дневном возрасте фабрициевой сумки, оказа-
лись неспособными продуцировать антитела на убитую культуру S.pullorum, хотя в распро-
странении поражений после заражения ВБМ заметных реакций не обнаружено.
Изучен механизм иммуносупрессии при латентной инфекции БМ с помощью критерия
аноптоза мононуклеарных клеток периферической крови у цыплят (137). После ранней ли-
тической стадии ВБМ индуцирует лимфомы Т-клеток, которые латентно инфицируются
ВБМ и почти не продуцируют белки и транскрипты ВБМ. Главную роль в вызываемом ВБМ
онкогенезе играет белок meg. Для латентности и трансформации нужен также белок ICP4.
Кроме кодируемых ВБМ белков в индукции опухолей участвуют различные клеточные
функции. Возможна роль опухолевого супрессорного белка р53, блокирующего аноптоз
протоонкогена Вс1-2 и полимераз в индукции лимфом.
Описаны 3 типа взаимодействия вируса с клеткой: продуктивная (полупродуктивная)
инфекция, латентная (непродуктивная) инфекция и онкогенная трансформация, которые, по
предложению Calnek, (68) определяются различными клетками-мишенями, вовлеченными в
инфекционный процесс. Так, продуктивная инфекция выявлена только в эпителии перьевых
фолликулов (ЭПФ), где ВБМ, репродуцируясь, завершает цикл развития и выделяется в ви-
де зрелых вирионов, не связанных с клеточной структурой (68, 179). Полупродукгивную
инфекцию, вызывающую гибель (цитолиз) клеток, обнаруживают в лимфоидных органах,
эпителиальных клетках и крайне редко в опухолях. Основными клетками-мишенями для
данного типа взаимодействия вируса с клеткой являются В-лимфоциты (68, 155). Инфекция
характеризуется тем, что вирусные частицы, пройдя полный цикл морфогенеза, не освобож-
даются из клетки, а находятся с ней в тесной связи (68). Клетки, подверженные этому типу
инфекции, продуцируют вирусные АГ и могут быть идентифицированы ИФ и ИФА. Полу-
продуктивная инфекция протекает однотипно in vitro и in vivo. ВБА может персистировать в
лимфоцитах пожизненно (68, 93).
, Поскольку латентно инфицированные клетки не продуцируют ВБМ, определить их
очень трудно - только после сокультивирования с чувствительными клетками. Основными
клетками-мишенями для латентной инфекции являются la-несущие Т-клетки (Т-хелперы и
Т-супрессоры). Т-лимфоциты цыплят вовлекаются в латентное инфицирование ВБМ только
после полупродуктивного заражения В-клеток. На трансформированных клетках находят
694
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
опухолеспецифический АГ MATSA. Таким образом, патогенез БМ на клеточном уровне
представляется следующим образом. ВБМ вызывает раннее инфицирование В-лимфоцитов,
которые являются главными клетками-мишенями для полупродуктивной инфекции, затем
активируются Т-клетки через макрофаги и Т-хелперы (помощники), распознающие одну де-
терминанту антигена, обеспечивая тем самым подачу антигенного сигнала В-лимфоциту,
распознающему другую детерминанту того же антигена. Происходит Т-В-кооперация с уча-
стием макрофага (59, 68, 93, 94, 155, 179,185, 214). Инфицированные Т-клетки трансфор-
мируются. Причем, в трансформированных клетках, как правило, не обнаруживают вирус-
ных ДНК. Учитывая то, что вирус передается контактным путем, патогенез БМ на уровне
организма можно разделить на ряд последовательных этапов. Первоначально инфицируется
респираторный тракт (после ингаляции ВБМ). На 3-4 дн после инфекции возникает первая
(ранняя) цитолитическая фаза ведущая к деструкции лимфоидной ткани (временная имму-
нодепрессия). За 1-й цитолитической фазой следует латентный период, когда ВА не обнару-
живается. В зависимости от различных факторов инфекция либо не развивается, либо раз-
вивается 2-я цитолитическая фаза, сопровождающаяся длительной иммуносупрессией, ин-
фильтрацией трансформированными Т-лимфоцитами нормальных тканей, периферических
нервов и висцеральных органов. Одновременно происходит распространение вируса по все-
му организму зараженными лейкоцитами.
Особенностью БМ является иммуносупрессия (ослабление иммунного ответа). Иммуно-
супрессия приводит к повышенной предрасположенности к инфекционным заболеваниям и
возникновению Т-клеточных лимформ (179). Тимусзависимая лимфоидная система играет
при БМ двоякую роль: у чувствительных особей является мишенью для вируса, а у рези-
стентных - обусловливает клеточный иммунный ответ на трансформированные вирусом
клетки (179). Степень развития иммуносупрессии зависит от множества факторов, перечис-
ленных выше, но в большей мере от генетических особенностей организма хозяина. К про-
явлению генетической резистентности причастны 2 различных генетических локуса (155):
связанный и не связанный с главным комплексом гистосовместимости (ГСК). Резистент-
ность, отнесенная к ГКС, ассоциирована с локусом гена, ответственного за группу крови
(группа крови В), а именно с В 21-аллелем эритроцитов (93, 179). Этот аллель, определяе-
мый по анализу крови, широко распространен среди популяций птицы. Причем установле-
но, что устойчивые ( N-линия) и чувствительные птицы (Р-линия) не различаются по степе-
ни инфицированности ВБМ в период ранней цитолитической фазы патогенеза, но они резко
различаются по интенсивности развития лимфом (179). Недавно Calnek (68) предположил,
что генетическая резистентность, связанная с ГСК, проявляется на стадии превращения ак-
тивированных Т-лимфоцитов в бласты, которые являются основными клетками-мишенями
для злокачественного перерождения под влиянием ВБМ. Чем их больше, как это отмечено у
чувствительных особей, тем больше клеток-мишеней для инфицирования и малигнизации,
тем тяжелее иммуносупрессия. БМ относится к заболеваниям, при которых выявлена гене-
тическая предрасположенность к резистентности или восприимчивости.
Факторы, влияющие на патогенез БМ. Таких факторов 4: 1) материнские АТ, кото-
рые интерферируют с заражением и ранним распространением вируса, подавляют острую
цитологическую инфекцию в лимфоидной ткани; 2) генетическая конституция - у цыплят
резистентных пород виремия и уровень вируса в тканях ниже, чем у чувствительных. У ре-
зистентных животных лимфопролиферативные поражения не развиваются. Генетическая
резистентность может быть связана с возрастной; 3) возрастная резистентность, когда сни-
жается уровень внремии н повышается уровень ВНА; 4) патогенность вируса. Некоторые
шт. ВБМ при инокуляции чувствительным цыплятам вызывают острое течение БМ, другие
- классическую, третьи - вообще не вызывают клинической болезни. Так, из лейкоцитов
крови здоровых (невакцннированных) кур-несушек, имеющих АТ к ВБМ, выделены поле-
вые штаммы ВБМ VUB-M и VUB-K. После адаптации вируса штаммы приобрели цитопато-
генную активность в отношении к ФЭК (112). При изучении 2-х онкогенных и 2-х неонко-
695
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
генных шт. ВБМ, были получены сходные характеристики по их локализации в органах
птицы. Неонкогенные варианты ВБМ резко снижали репликативную способность лимфоид-
ных органов, не вызывали гистопатологические изменения в селезенке и образование опу-
холей (67). Экспериментально ослабленный ВБМ утрачивал онкогенные свойства (77, 139),
но защищал цыплят, зараженных затем вирулентным ВБМ. Аттенуированные, ио не при-
родноослабленные пгт. ВБМ не созревают в эпителии перьевых фолликулов (139). Возмож-
но, этим объясняется их неспособность передаваться контактно от вакцинированной к не-
вакцинированной птице (76,100). БМ относится к болезням, при которых выявлена генети-
ческая предрасположенность к резистентности или восприимчивости.
По наличию специфических поражений установлена различная чувствительность к
этому вирусу БМ 3-х генетических линий кур: А - 22,8%, В - 79,6, С - 51,8%. В 1989 г. в Се-
негале наблюдали различные клинические проявления БМ в зависимости от породы. Так, у
пород с коричневой окраской болезнь протекала классически с гипертрофией нервных ство-
лов. У кур породы белый леггорн наблюдалось атипичное течение болезни с поражением
гребня (инфильтрация и некроз), атрофией грудных мышц, дегенерацией яичников и лим-
фоцитарной инфильтрацией органов, особенно фолликулов перьев и нервных стволов (42).
Резистентность кур к БМ бывает 2-х типов. Первый тип определяется аллелями крови
группы В, в особенности аллелями В21, которые ответственны за повышение потенциала
иммунной защиты и возрастную резистентность. Второй тип резистентности связан с повы-
шением резистентности лимфоидных клеток к вирусной инфекции и трансформации и кон-
тролируется аллелями Т-1, HOI, у-4. Установлен факт влияния основного комплекса гисто-
совместимости на резистентность цыплят к БМ (130).
При селекции кур, резистентных к этой болезни, наиболее эффективно в качестве мар-
кера проводить идентификацию гаплотипов В МНС (тканевой гистосовместимости) (53).
Показано, что гибридные цыплята белый леггорн генетически паралич резистентны (линия
В1), имеют генотип В12В13 главного комплекса гистосовместимости, а цыплята линии В2
(генотип В6В6) паралич-чувствительны (192). В иммунологически индуцированной рези-
стентности главную роль играет антивирусный Т-клеточно-ассоциироваиный иммунитет.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Хотя вирусная природа этой болезни предполагалась давно, до 1967 г вирус ие был от-
крыт. В 1967 г. Згруппы ученых, в Англии (74), и в США (138,189) одновременно и незави-
симо друг от друга выделили от больных в культуре клеток герпесвирус цыплят и предоста-
вили доказательства, указывающие на этиологическую роль этого агента. В настоящее вре-
мя определенно установлено, что ВБМ относится к роду Herpesvirus группы В и является
клеточно-связанным вирусом.
Многочисленные безуспешные попытки обнаружить и выделить его в инфекционной
форме из опухоли или из органов больных птиц находились в противоречии с данными о
высокой контагиозное™ этого заболевания. В 1969 г Calnek и др. (61) выявили вирусспеци-
фический ИФ АГ в эпителии перьевых фолликул зараженных цыплят. Оказалось, что перь-
евые фолликулы - постоянное место локализации АГ в высокой концентрации. Одиако дер-
ма и эпидермис кожи инфицированной птацы всегда свободны от вирусспецифического АГ.
Пораженные клетки эпителия фолликулов, представляющие часть многослойного плоского
эпителия, в результате слущивания отделяются в окружающую среду вместе с линяющими
перьями и являются источником инфекции. В 1970 г. (63) выделили из этого источника ин-
фекционный внеклеточный вирус и вызвали с его помощью заболевание у цыплят. Эта ра-
боту продолжили Nazerian и Witter (140). Они вызвали заболевание внеклеточными экс-
трактами перьевых фолликулов и доказали, что местом репликации полного инфекционного
вируса является эпителий перьевых фолликулов. Позднее (46) для передачи инфекции ис-
пользовали перхоть, собранную от инфицированных птиц.
Морфология и химический состав. Вирноны имеют кубический тип симметрии и
форму икосаэдра. Вирус содержит 7% 2-нитевой ДНК. В ультратонких срезах культур зара-
696
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
женных клеток вирусные частицы под электронным микроскопом имеют диаметр 85-100 нм
(Рис. 97), но иногда встречаются более крупные вирионы с оболочкой размером 150-170 нм.
Они могут содержать электронно-плотный нуклеоид и располагаться большей частью в яд-
ре. Различия в размерах комплексов обусловлено различием в углеводном компоненте
(215). В отличие от развивающихся вирусных частиц, которые образуются в культуре кле-
ток, вирусные частицы в клетках эпителия перьевых фолликулов являются осмиофильными
включениями в цитоплазме клеток и состоят из электронноплотного материала (61, 170,
109). Число капсомеров 162, они представляют собой полые цилиндры длиной 9-12 нм.
Кольцеобразный нуклеокапсид с подковообразной сердцевиной расположен между 2-мя
частицами, сердцевина нуклеокапсида с палочкообразными структурами представлена 2-мя
круглыми пересекающимися пластинками, края которых электронноплотиые, а центр свет-
лый. Морфогенез ВБМ в клетках перьевых фолликулов описаны И.П.Тыщенко (33,34,35).
Геном ВБМ представлен 2-мя уникальными последовательностями (Ц и Us) и целым
набором прямых и инвертированных повторов (118). Секвенирован сегмент ДНК длиной
11286 п.и. вирулентного шт. С А ВБМ, содержащий всю область Us длиной 11160 п.н. Иден-
тифицированы 11 открытых рамок считывания (ОРС), 7 из которых гомологичны генам
альфагерпесвирусов (АГВ). Область Us шт. GA на 99% идентична ранее секвентированному
сегменту (5255 п.и.) Us очень вирулентного шт. RBIB ВБМ. Полученные данные согласуют-
ся с предположением, что ВБМ относится к АГВ, а не к гамма-герпесвирусам. (55а). С ис-
пользованием полиаденилированной РНК из стабильно трансформированной ВБМ линии
клеток МКТ-1 сконструирована библиотека кДНК и выделены кДНК, специфичные для об-
ласти короткого внутреннего повтора фрагмента ВатН1-А генома ВБМ. Секвенирование 5'-
и 3'-концов выделенных клоиов позволило идентифицировать 4 класса к ДНК. Секвениро-
вание и картирование этих к ДНК обнаружило семейство З'-котерминальных перекрываю-
щихся транскриптов; некоторые из них сильно сплайсированы. Методом ПЦР амплифици-
роваиы специфические области каждого класса к ДНК, клонированы и использованы для
получения рибозондов, которые гибридизируются с различными транскриптами во фракци-
ях РНК, выделенных из литически или латентно инфицированных ВБМ клеток (133).
Изучены нуклеотидные последовательности генов тимидинкиназы 2-х герпесвирусов
птиц: высокоонкогенного шт. БМ-RBJB и вакцинного - герпеса индеек FC-126. Кодирую-
щие регионы представлены в 2-х генах 1029 и 1050 нуклеотидными последовательностями,
что соответствовало полипептидам с 343 и 350 остатками аминокислот (178).
С помощью ПЦР из генома ВБМ были амплифицированы и клонированы ген gA, коди-
рующий предшественник секретируемого гликопротеина gp57-65 (А-АГ) и ген gB, коди-
рующий белок-предшественник гликопротеинового комплекса gplOO, gp60, gp48 (В-АГ).
Установлена нуклеотидная последовательность обоих генов, предсказана и проанализирова-
на первичная структура белков, кодируемых этими генами (2,106).
Устойчивость. Устойчивость клеточно-свободного вируса к физическим и химическим
факторам характеризуется следующими данными. Центрифугирование при 50 тыс. мин’1
осаждает вирус в течение 1 ч. В пределах pH 4-10 вирус чувствителен к эфиру. Многие ме-
сяцы он сохраняет вирулентность при -65°С, но при -20°С вирулентность его снижается че-
рез 4 мес хранения. В чешуйках кожи (перхоти) и размельченных сухих перьях больных
птиц, хранившихся в условиях 28,5 - 41,5°С вирус, был активен в течение 55 дн. При кон-
такте с этим вируссодержащим материалом у 40% здоровых цыплят уже через 8 иед. обна-
руживались гистологические изменения, свойственные БМ. Следовательно, чешуйки кожи
(перхоть) и сухие перья больных птиц могут быть источником инфекции в птицеводческих
фермах. Schudel и др. (186) успешно заражали цыплят суспензией кожи кур, павших от БМ.
Пыль, собранная в помещении, где содержались больные цыплята, сохраняла инфекцион-
ность в условиях комнатной температуры не менее 44 дн. Клеточно-свободный вирус, со-
держащийся в пыли курятника, патогенен для культуры клеток почек цыпленка и способен
индуцировать опухоли в течение 1г. Клеточно-свободный, экстрагированный из пыли вирус
697
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
остается патогенным при хранении в условиях -70°С, однако при -20°С 60% его инактиви-
руется через 20 дн, а в условиях комнатной температуры - в течение 5 дн (99). Вирус вы-
держивает неоднократное замораживание, оттаивание и воздействие ультразвука в течение
10 мин. Полная термоинактивация клеточно-свободного вируса происходит при 4°С через 2
нед., при 20-25°С - через 4 дн, при 37°С - через 18 ч и при 60°С - за 10 мин. Птичий помет
сохраняет инфекционность в течение 16 нед (198).
Хранение и консервирование вируса. Вирус сохраняется в клетках опухоли и культу-
ры ткани при концентрации 50-106 кл./мл в контейнере, погруженном в жидкий азот. Кожу
и эпителий перьевых фолликулов, содержащих клеточно-свободный вирус, сохраняют при
температуре -20-60°С или лиофилизируют. Кровь больных цыплят при хранении в услови-
ях 4°С остается вирулентной в течение 7 дн. При лиофилизации вируссодержащей крови ее
патогенность падает. Надежное сохранение патогенных свойств вируссодержащей крови
обеспечивается при добавлении к ней 5%-ного ДМСО в жидком азоте (-196°С) (119).
АГ структура. Она сложна. Основными гликопротеинами ВБМ являются А- АГ- (gp57-
65) и В- АГ- комплекс (gplOO, gp60 и gp49). В составе вируса БМ выявлено 6 АГ, из кото-
рых наиболее важные А, В, С. АГ А содержится во всех патогенных штаммах и при атте-
нуации утрачивается ими (78, 83, 217). АГ ВБМ содержит секретируемый гликопротеин с
мол.м. от 57 до 65 кД в полностью гликозилированной форме. Этот АГ обнаружен в культу-
ральной жидкости и экстрактах зараженных клеток, а В и С АГ - только в экстрактах зара-
женных клеток. Известно, что первоначально предшественник gA синтезируется как белок с
мол.м. 47 кД, который после отщепления сигнального пептида дает белок-предшественник с
мол.м. 44 кД (105). Функция gA до сих пор неясна. Показано, что он не является существен-
ным для репликации в культуре клеток, однако может иметь важное значение для развития
вируса в организме птицы. Выдвинута гипотеза о том, что gA является иммуносупрессором
на ранних стадиях инфекции (102, 106). АГ В представляет собой связанный с поверхност-
ной мембраной комплекс, состоящий из 3-х гликопротеинов - gplOO, gp60, gp48, причем по-
следние 2 представляют собой части первого. Полагают, что В -АГ- комплекс играет цен-
тральную роль в нейтрализации вируса иммунной системой хозяина и может вызвать час-
тичную защиту против БМ (143,148). Помимо АГ А, В и С, ВБМ содержит мембранный АГ
(связанный с клеточной мембраной), общий для ВБМ и ВГИ. Его обнаруживают в ИФ на
поверхности клетки. Полагают, что мембранный АГ связан с А АГ, так как оба они исчеза-
ют при аттенуации вируса (117). АГ В также общий для ВБМ и ВГИ и выявляется в РДП.
Метод ИФ, в котором использовали сыворотки от переболевших или гипериммунизиро-
ванных птиц, оказался недостаточным, чтобы показать наличие АГ в опухолевых клетках
(38). Однако аналогичная методика, в которой используют АТ, полученные от цыплят или
кроликов, иммунизированных трансплантатом опухолевых клеток, позволяет выявить нали-
чие специфического АГ на поверхности опухолевых клеток (67). Этот АГ получил название
опухоле-ассоциированного поверхностного АГ (MATSA). Он обнаруживается в большинст-
ве опухолевых клеток, трансплантируемых опухолях и трансформируемых клеточных лини-
ях, но его нет в культуре фибробластов, инфицированной ВБМ либо ВГИ (131, 198, 157,
205, 142, 144). В опытах J.M. Sharm (183) большинство клеток-носителей MATSA осажда-
лось со скоростью, превышающей 3 мм/ч, тогда как клетки, осаждающиеся при более низ-
кой скорости, не содержали этот АГ. Клетки-носители MATSA составляли 11,7% клеток
опухоли. Инфекционны были и клетки-носители опухолевого АГ и клетки, лишенные его.
Таким образом, клетки, содержащие вирусный геном, не обязательно являются носителями
MATSA и не всегда трансформируются.
В 1972 г. Biggs (49) сообщили о выделении в птицехозяйстве непатогенного
(неонкогенного) шт. ВБМ от здоровых цыплят и впервые предложили разделить имеющиеся
изоляты на 3 родственные группы. К 1-й были отнесены вирусы, вызывающие острую БМ,
ко 2-й - классическую, а к 3-й - апатогенные изоляты. Разделение вирусов на группы по па-
698
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
тогенносги совпало с серологической их классификацией, основанной на РИФ и РДП, с по-
мощью которых Bulow и др. (58, 59) определили 3 серотипа. Серотип 1 включает все онко-
генные вирусы и аттенуированные варианты, серотип 2 - все неонкогенные вирусы, серотип
3 - АГ родственные ВБМ вирусы герпеса индеек. Наличие 3-х серотипов в дальнейшем
подтверждено PH вирусов, двумерным гель-электрофорезом и РИФ с применением монАТ
(123). Серологическая классификация подтверждена сравнительными исследованиями
фрагментов вирусных ДНК при обработке нуклеиновых кислот рестриктазами (44).
Вирусы серотипа 1 включают штаммы ВБМ, различающиеся по патогенности (онко-
генности) для птиц. Высоковирулентные изоляты М.5, Ala-8, RB-IB выделены от цыплят
вакцинированного поголовья во время вспышки БМ(76). Эти вирусы вызывают значитель-
ный отход при БМ у генетически резистентной невакцинированной птицы или у генетически
чувствительной вакцинированной ВГИ птицы. Witter (212) предложил называть очень виру-
лентными штаммы ВБМ (ОВВБМ), которые вызывают, характерные поражения в стадах
птиц, длительное время вакцинированных препаратами на основе ВГИ. Вирулентные шт.
серотипа 1 (GA, HPRS-16, JM) - вызывают значительный отход с коротким инкубационным
периодом у генетически чувствительной, но не резистентной птицы (64). Умеренно патоген-
ные классические шт. HPRS-17, Сопп-1 индуцируют опухоли только у незначительной части
цыплят (39, 64). Они имеют тенденцию вызывать нервные явления. Наименьшую онкоген-
ность среди шт. серотипа 1 имеют шт., подобные Си-1 или CVI988 (67, 76), которые вызы-
вают только нервные изменения. Вирусы серотипа 2 изолируются довольно часто. По-
видимому они неонкогенны и не патогенны для цыплят (37, 76). Вирусы серотипа 3 вклю-
чают апатогенные, неонкогенные вирусы герпеса, выделенные от индеек. Впервые ВГИ вы-
делили в США Witter и др. (76) и Kawamura и др. (55) при исследовании индеек как воз-
можного промежуточного хозяина и резервуара вируса БМ в природе. ВГИ широко распро-
странен в коммерческих индюшиных стадах.
Серотипы ВБМ характеризуются сложной АГ структурой, изучение которой важно для
дифференциации шт., выявления значения отдельных вирусспецифических (оболочечных
антигенов) и вирусиндуцированных (гА) белков в иммунитете при БМ, проведения сероло-
гических исследований, интерпретации АГ родства ВГИ и ВБМ, а также для конструирова-
ния эффективных вакцин. Высокоспецифичным и чувствительным экспресс-методом, с по-
мощью которого возможно изучение перечисленных вопросов, является ИФА. Решением
Международного эпизоотического бюро ИФА признан официальным референс тестом. (15).
В Российской Федерации впервые разработаны методы ИФА индикации антигенов раз-
ных серотипов ВБМ и АТ к ним. В общем гликопротецдном АГ (гА), индуцированном ВГИ,
содержатся 2 АГ детерминанты, одна из которых перекрестно реагирует со структурными
компонентами вирулентных штаммов ВБМ, не имеет общих АГ связей с мелкофокусным
вариантом ВГИ и аттенуированным ВБМ. Помимо теоретического, это открытие имеет и
прикладное значение и побуждает пересмотреть существующее представление о роли от-
дельных АГ детерминант общего гликопротеидного А АГ ВГИ и ВБМ (15).
АГ вариабельность и родство. Благодаря общему А-АГ различий в АГ характеристике
штаммов данного вируса нет. Однако вирусы болезни Марека и герпеса индеек имеют АГ
различия (200, 57). Такое различие было показано при использовании РИФ, преципитации с
двойной диффузией в агаровом геле и PH (199). Так, в клетках, инфицированных ВГИ, АГ
выявляется с помощью гомологичной сыворотки и в ядре, и в цитоплазме, тогда как в клет-
ках, инфицированных ВБМ, он выявлялся антисывороткой к ВБМ только в ядре. Аналогич-
ные результаты были получены С.В Лавровым, и др.(12). При заражении культуры клеток
куриных фибробластов ВГИ (шт. М-24) через 24 и 48 ч после заражения наблюдалась
флюоресценция ядра и цитоплазмы. Свечение ядер было диффузным, в цитоплазме были
видны тонкогранулярные глыбчатые светящиеся участки. Однако попытки продемонстриро-
699
Глава XVI. Family Hetpesvirida Герпесвирусные инфекции
вать перекрестную РДП ВГИ и ВБМ оказались неудачными (28,162). Поскольку ВБМ явля-
ется клеточно-ассоциированным, постановка PH с ним затруднена.
Nazarian и др.(143) ЭМ охарактеризовали ультраструктуру вирионов ВГИ, которая ока-
залась чрезвычайно сходной с вирионом ВБМ.
Герпесвирусы голубей, сов, соколов, больших бакланов, человека (типов 1 и 2), вирусы
болезни Ауески и инфекционного ларинготрахеита не имеют серологического и иммуноло-
гического родства с ВБМ. По А-АГ ВБМ и ВГИ родственны, но не идентичны.
Референтные шт. вируса JM, HPRS-24, Fc-126 относятся к серотипам 1 и 2 и 3.
Патогенные свойства. Показано, что тяжесть острой цитолитической инфекции БМ за-
висит от штамма вируса, например, шт. Md-5 и Md-11 оказались сходными с прототипным
штаммом БМ по оикогенности для чувствительных цыплят, иммунодепрессивной активно-
сти и антигенности. Другие же штаммы (JM/102 и JA-22) с большой частотой индуцировали
острую цитолитическую инфекцию с атрофией бурсы и тимуса и ранней гибелью цыплят без
развития лимфом, высокую онкогенность как для привитых ВГИ, так и непривитых.
В 1972 г. (50) описаны изоляты ВБМ различной патогенности. Они впервые разделены
на 3 категории: 1 - вызывают остро протекающую БМ; 2 - вызывают классическое течение
болезни; к 3-й относятся авирулентные изоляты. Высоковирулентные изоляты обычно
встречались в 3 раза чаще в неблагополучных фермах, а авирулентные - у птиц из благопо-
лучных хозяйств. Так, изоляты Е-107/81 и Е-129/81 более вирулентны, чем вариант МД-S.
В Северной Италии выделено 2 высоковирулентных изолята вируса, обладающих им-
мунодепрессивным эффектом. Наиболее восприимчивы цыплята в первые 2 нед жизни. Пе-
тухи породы корниш более устойчивы к БМ и восприимчивее к лимфоидному лейкозу, а не-
сушки породы белый плимутрок - наоборот. Относительная частота обнаружения вируса БМ
в определенной популяции кур обратно пропорциональна его вирулентности. С увеличением
возраста птиц наличие менее патогенных вирусов возрастает. Иногда из одного и того же
стада выделяли вирусы 2-х типов. Следовательно, один и тот же цыпленок в полевых усло-
виях может быть заражен вирусами более, чем одного типа. В 1972 г. Cho и Септу (70) ре-
шили проверить эту мысль, вызывая двойное заражение острым и слабым штаммами ВБМ
цыплят, выращиваемых на подстилке из стружек, контаминированных штаммами, вызы-
вающими острое заболевание. Этим, по существу, моделировано естественное двойное за-
ражение в полевых условиях. В результате авторы установили интересный факт: птицы, за-
раженные одним штаммом (острым илн слабым), были защищены от заражения другим шт.
У отдельных цыплят виремия не была постоянной по титру, у некоторых птиц состояния ви-
ремии и невиремии чередовались. Различные типы цыплят реагировали на заражение по-
разному (при одновременном заражении одной и той же окружающей среды); не ясно, явля-
лось ли это результатом действия материнских АТ и фактом наличия у цыплят ВГИ. Вире-
мия, вызванная шт. острой формы БМ (ID-1), наблюдалась у белых леггорнов уже на 1-й
нед после заражения, а у птнц мясного типа - на 2-й нед. Реакция птиц разных генетических
линий прн содержании их в одной и той же инфицированной среде оказалась различной.
Churchill и Biggs (74) работали с 2-мя шт. ВБМ (JM и JA), которые поддерживались на
1-дн цыплятах. Последних заражали кровью с интервалом 4-6 нед. В результате авторы по-
казали, что шт. JM вызывал высокую смертность цыплят с большими поражениями перифе-
рических нервов и половых желез, тогда как смертность цыплят от шт. JA была непостоян-
ной, с более продолжительным латентным периодом. Присутствие шт. JA в организме за-
раженных цыплят характеризовалось следующими сроками: в почках вирус обнаруживали
через 2 нед, в яичниках - к 7-й нед, в печени и селезенке - к 8-й нед и в головном мозге - к 4-
й нед после заражения (92). Шт. JA оказался более внсцеротропным, так как прн заражении
им антигены выделялись на 9 дн раньше в печени и на 4 дня раньше в 12-перстной кишке и
легких, чем при заражении шт. JM. Только при инфицировании шт. JA у птиц развивались
опухоли в печени, сердце и селезенке, тогда как шт. JM был более нейротропным и обладал
700
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
большим тропизмом для гонад, чем шт. JA, что подтверждалось более ранним выявлением
вирусного АГ и более тяжелыми поражениями периферических нервов и гонад (38).
Sohet К. and Calnek В. (177) описали новый изолят ВБМ: - вирус SB клон SB-1, который
отличался от патогенных изолятов характеристиками роста in vitro, как описано для других
апатогенных изолятов. Он не вызывал поражений, характерных для БМ, в течение 11-нед
экспериментального периода и оказался неонкогенным. Однако при определенных условиях
он может являться причиной воспалительного типа инфекции. Поэтому для классификации
этого и похожих изолятов был предложен термин “неонкогенный” и “апатогенный”. Клон
SB-1 защищал цыплят от вирулентного ВБМ и опухолевой трансплантации. Авторы при
помощи гистологических исследований выявили различие между изолятами SB и HN-1, с
одной стороны, и изолятом CU-2 с другой. Цыплята, зараженные CU-2, имели значительные
поражения нервов, характеризующиеся обильной инфильтрацией большого количества
лимфобластов, либо слабой лимфоцитарной инфильтрацией. В других органах, особенно в
головном мозге и печени, наблюдались типичные для БМ поражения.
Purchase (167) привел ряд биологических маркеров, которые можно использовать для
распознавания различий между вирулентными и аттенуированными шт. ВБМ и ВГИ. Таки-
ми маркерами являются: 1) патогенность; 2) морфология бляшек и цикл репродукции; 3) АГ
различия; 4) круг хозяев (спектр патогенности); 5) патогенность для клеточных систем.
Онкогенные свойства. Проявляются не у всех штаммов ВБМ. По механизму онкоген-
ного действия этот вирус значительно отличается от других онкогенных вирусов. Считают,
что ВБМ трансформирует только Т-лимфоциты. В одной трансформированной клетке выяв-
ляют до 20 эквивалентов генома ВБМ (85). Онкогенные варианты вируса, по-видимому, ко-
дируют характерные для них АГ детерминанты, отсутствующие у неонкогенных вариантов.
Наиболее четкие различия наблюдаются в характеристике гликопротеида (gp5), позволяю-
щие разграничить среди штаммов вируса варианты с высоко- и низкоонкогенными свойст-
вами, а также отличить ВБМ от ВГИ. По этому критерию выделены 2 варианта ВГИ.
Все опухолевые клетки содержат от 3 до 12 геномов ВГМ иа клетку, причем 90% вирус-
ного генома транскрибируется с кодирующей нити 2-нитевой ДНК. Транскрибированная
вирусспецифическая РНК в разных клетках кодируется одним и тем же фрагментом ДНК.
Локализация вируса. У птицы с признаками болезни вирус обнаруживают в крови.
По организму он разносится лейкоцитами крови и размножается в клетках лимфоидных ор-
ганов (фабрициевой сумке, селезенке, тимусе, миндалинах, слепой кишке), лимфоидных
очагов инфильтрации, эпителиальных клетках почечных канальцев и особенно перьевых
фолликул, где найдены зрелые вирионы, покрытые оболочкой. Вирус также содержится в
лимфоретикулярных клетках гребня, сережек и голени. В первую нед его обнаруживают в
тимусе, селезенке и бурсе, в результате чего развивается персистирующая инфекция клеток
белой крови. Выделить вирус в свободном состоянии не удается. В перьевых фолликулах
вирус находится у инфицированных птиц всех возрастов независимо от метода заражения.
Он содержится в слущивающихся клетках.
Вирусоносительство и вирусовыделение. Патогенез и иммунитет при болезни Марека
имеют исключительные особенности, накладывающие отпечаток на эпизоотологию и про-
филактику инфекции. Вирусоносительство, виремия и вирусовыделение после переболева-
ния сохраняются практически всю жизнь, несмотря на устойчивость и присутствие ПА и
ВНА. Даже вакцинация не предотвращает вирусоносительство и способность к контактному
заражению. Более того, частота виремии на неблагополучных фермах выше у здоровых цы-
плят, чем у больных. Иными словами, переболевание или иммунизация практически не
влияют на циркуляцию эпизоотического вируса. Высоковирулентные шт. вызывают гибель
1 -дневных цыплят. При заражении их слабо вирулентными штаммами они остаются носи-
телями вируса в течение всей жизни, несмотря на устойчивость и присутствие ПА и ВНА.
Больная птица выделяет вирус через органы дыхания и пищеварения, а также с десква-
мированным эпителием кожно-перьевых фолликул, эпителий которых служит местом раз-
701
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
множения вируса. Установлена прямая связь между созреванием вируса в клетках фолликул
и контагиозностью болезни. Вирусоносительство отмечено у клинически здоровой птицы не
только во время инкубационного периода, клинического проявления болезни, но в течение
16-24 мес после переболевания, практически пожизненно, при наличии у такой птицы спе-
цифических (PH, РДП) АТ в 80-90% случаев.
Из эпителиальных клеток перьевых фолликул удалось получить очищенный вирус. Вы-
сушенные эпителиальные клетки перьевых фолликул сохраняют инфекционность для цып-
лят при аэрогенном заражении. Присутствие клеточио-свободного ВБМ в перьевых фолли-
кулах зараженных 1-сут цыплят впервые обнаружено в 1970 г. (140). Вирус обнаруживался
в фолликулах через 2 иед после заражения, концентрация его там нарастала с 3-й по 5-ю нед
и снижалась к 6 и 7-й нед после заражения, 90-100% цыплят, зараженных вирулентным ви-
русом БМ в возрасте 0-2 иед, спустя 2 нед имели генерализованную инфекцию в перьевых
фолликулах, вирусный АГ персистирует в них несколько месяцев (62).
У экспериментально зараженных суточных цыплят появление ИФ АГ в коже отмеча-
лось с 56-го ди. В этот срок в коже наблюдали специфическую ИФ в 50%, в очинах пера - в
90% случаев, в то время, как преципитирующий АГ в этот срок и от тех же цыплят был ус-
тановлен у 70,5% зараженных цыплят. Выделение вируса из кожи и очин пера в культуре
клеток удавалось в 87,5% случаев. Клеточно-ассоциированный ВБМ выявляется в легких,
лимфоидных органах через 1-4 дн после заражения, в лейкоцитах - позже. Затем он выявля-
ется в нервах, головном мозге, печени, почках, гонадах. Титр вируса достигал пика в тече-
ние 2-х нед после заражения. Далее инфекционность снижалась, но улавливалась ещё 55 дн
(51). Однако, в этих органах ие происходит созревания полного инфекционного вируса.
Что касается клеточно-свободного ВБМ в организме зараженных цыплят, то помимо
эпителия перьевых фолликулов (63) он формируется в фабрициевой сумке в среднем в 52-
55% случаев. Выявить вирус в других органах (иервы, селезенка), а также в опухолях в этот
период не удавалось. Это свидетельствует о том, что в других тканях и органах изменения
являются вторичными и находятся под влиянием иммунологических процессов (58).
Аналогичные данные получил Purchase (164). Он отметил, что вирусный АГ может дли-
тельно выявляться в перьевых фолликулах (несколько месяцев), в то время как в висцераль-
ных органах или невральных вирусиндуцированных опухолях он в поздние сроки либо от-
сутствовал вовсе, либо обнаруживался в небольшом количестве клеток.
Не ясно, почему выделение вируса происходит лишь через перьевые фолликулы; между
тем вирусный геном присутствует и в других клетках больных кур, поскольку заболевание
может быть искусственно передано свободными от вируса интактными клетками. Пока не-
известно, что мешает полной экспрессии вируса в этих клетках.
АГ активность. АГ ВБМ содержатся у больной птицы в эпителии перьевых фолликул.
По содержанию их у экспериментально зараженных цыплят установлены значительные раз-
личия между онкогенным и неонкогенным ВБМ. В перьевых фолликулах, соответствующих
онкогенному вирусу, содержалось достаточно АГ, реагировавшего в РДП через 3-6 иед по-
сле заражения. Материал из фолликул, инокулированных неонкогеиным вирусом в РДП, за
редким исключением реагировал отрицательно. Таким образом, исследование экстракта из
перьевых фолликул в РДП может служить простым тестом для обнаружения онкогенной
инфекции цыплят, а обнаружение ИФ и преципитирующих АГ в очииах перьев представля-
ет собой надежный метод лабораторной диагностики.
У зараженной птицы образуются гуморальные АТ, способные нейтрализовать вирус in
vitro. Чрез 1-3 нед после заражения или вакцинации в крови цыплят обнаруживают ВНА и
ПА. в 85% случаев вирусный АГ выявляют в фолликулах кожи. У цыплят, зараженных ви-
рулентным вирусом, АТ чаще обнаруживают в тех случаях, когда птицы остаются здоровы-
ми, и значительно реже у больных птиц или в случаях персистирующей инфекции. Инфици-
рованные несушки передают потомству через яйцо ПА, которые обычно сохраняются до 3-
нед возраста и ие защищают против экспериментального заражения цыплят в 1-дн возрасте.
702
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Экспериментальная инфекция. Ранее предпринимали много попыток эксперимен-
тальной передачи БМ. Однако впервые болезнь была успешно и неоднократно передана
лишь в начале 60-х гг. (218). Оказалось, что кровь или опухолевый материал, содержащий
живые интактные клетки, могут передавать заболевание чувствительным 1-дн цыплятам.
Любые обработки инокулята, которые убивают клетки или разрушают их целостность, раз-
рушают и инфекционность вируса.
Цыплят удавалось заражать внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, подкож-
но, интрацеребрально, интранефрально. Чувствительность к экспериментальному зараже-
нию выше у цыплят суточного возраста, чем у 2-3 и 10 нед. Суточные экспериментально за-
раженные цыплята после инокуляции вируса выделяют его со 2-й до 3-й нед. Микроскопи-
ческие поражения развиваются уже на 2-й нед, а макропоражения и симптомы болезни про-
являются не раньше, чем на 4-й нед или даже позднее. При заражении 1-сут цыплят в нос
апатогенным шт. ML-6 вирусные внутриклеточные АГ были обнаружены на 3-й дн в легких,
на 5-14 дн - в лимфоидных органах и на 14-30 дн - в фолликулах перьев. Вирус изолирован
из селезенки на 14-30-й дн. После 10-го дн в сыворотке методом ИФ выявлялись АТ (125).
Смертность экспериментально зараженной птицы от 0,2 до 79,9% при наблюдении в те-
чение 65-210 дн. Все цыплята, зараженные в 1-сут возрасте, как правило, погибают, в то
время как гибель 2, 3 и 10-нед цыплят составляет соответственно 60, 30 и 10%. Возрастная
устойчивость обусловлена различной способностью организма цыплят продуцировать спе-
цифические АТ. Наличие у цыплят материнских пассивных АТ к ВБМ защищает их от за-
ражения. Введение 1-сут цыплятам лимфоцитов от больных цыплят после предварительного
их культивирования in vitro ведет к развитию болезни. Полагают, что возможна интеграция
ВБМ с геном клеток кур (лимфоцитоз).
При остром течении экспериментальной инфекции клиническое проявление болезни от-
мечено через 20-85 дн, первоначальные патоморфологические признаки - через 21-60, гис-
тологические изменения - через 12-21 дн. Специфические АТ в сыворотке крови и вирус-
специфический АГ в эпителии перьевых фолликулов выявлены соответственно через 21-28
и 28-60 дн. При экспериментальном заражении вакцинированных 3-нед цыплят вирусный
АГ в перьевых фолликулах появляется через 1-5 нед и при смертельном исходе выявляется
до момента гибели, а у выздоровевших птиц постепенно исчезает.
При экспериментальном заражении 1-дн SPF-цыплят непатогенным вирусом ML-6 БМ
серотипа 2 внутриклеточные вирусные АГ (VJAS) обнаруживали в селезенке и фабрициевой
сумке 5-14 дн, в легких - через 3 дн и в перьевых фолликулах - спустя 14-30 дн после зара-
жения, но не обнаруживали в этих органах (кроме перьевых фолликулов) через 21 дн после
заражения. Показано, что в период через 5-14 дн после инфицирования наиболее часто были
инфицированы ВБМ делящиеся В-клетки фабрициевой сумки и селезенки. Таким образом,
при инокуляции цыплятам вируса ML-6 его репликация происходила в лимфатических ор-
ганах первоначально в b-клетках бурсы и селезенки (125).
Чувствительность к экспериментальному заражению у птиц разных пород и линий не-
одинакова; чаще болеют куры мясных пород и особенно белые плиму троки. В 1969 г. Сик-
корди высказал мысль, что БМ - инфекция лимфоцитов, поэтому заразить птиц до начала
функционирования у них лимфоцитов не удается. Инфекция лимфоидных клеток приводит к
трансформации и образованию специфического опухолевого АГ, пролиферации и образова-
нию опухолей. После инъекции небольшого количества неповрежденных опухолевых клеток
ВБМ здоровым, но восприимчивым к заболеванию цыплятам не удается снова выделить из
этих клеток вирус. И только в редких случаях удавалось получить вирусные частицы из опу-
холевых тканей зараженных птиц (41,138).
Экспериментальная инфекция суточных цыплят изучена при различных методах зара-
жения: интраперитонеальном, интраназальном, внутриглазном, в переднюю камеру глаза. В
качестве инокулята использовали цельную кровь, суспензию клеток яичников, нервов и эпи-
телия фолликулов. Авторы показали, что частота заболеваемости зависела от вида инокуля-
703
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
та и метода заражения. Экспериментально вызванное заболевание было сходно с классиче-
ской формой (175). Первое микроскопическое изменение - адвентициальная клеточная про-
лиферация головного мозга. Она наблюдалась во всех случаях с 1 по 8 нед после заражения.
Следовательно, ткань головного мозга первой отвечает на заражение ВБМ. Вирус, введен-
ный в глаз экспериментальным цыплятам, вызывал 3 формы БМ. Наблюдались изменения в
глазу, конъюнктиве, хрусталике, целлюлярном теле и сетчатке, которые ранее не были опи-
саны. Рецидивов иридоциклитов не отмечали. Выделенный вирус по его патогенным харак-
теристикам относится к группе велогенных агентов (132).
Экспериментальная инфекция шт. HPRS-B14 характеризуется поражениями перифери-
ческих нервов. У некоторых цыплят развивались лимфоидные опухоли, главным образом, в
яичниках. Экспериментально вызванная БМ практически почти не отличается от естествен-
ной, разница лишь в длительности латентного периода. Куры оказались более чувствитель-
ными к шт. HPRS-B14, чем петухи.
Цыплята без материнских АТ, зараженные экспериментально, гибли через 10-17 ди по-
сле периода депрессии и остановки роста. Вирус всегда присутствовал в крови цыплят с
клиническими симптомами болезни. Титр вируса в крови составлял 10-3,6 - 10-4,2 ИД 50/мл.
Плазма цитратной крови после центрифугирования её при 2000 мин’1 была также инфекци-
онка, но содержала меньше вируса, чем цельная кровь (51). Около 95% инфекционности
цельной крови связано с её клеточной фракцией. Быстрое замораживание до -70°С сильно
снижало инфекционность опухолевой суспензии и цельной крови.
БМ была воспроизведена экспериментально на 10-11-дн КЭ и 1-7-дн цыплятах при ино-
куляции им крови и взвеси опухолевых клеток, смывов со скорлупы яйца и суспензии из
перьевых фолликулов. Инфекционность суспензии из перьевых фолликулов была самой вы-
сокой и вызывала заболевание 52% зараженных цыплят и 57,5% КЭ. Патогенность изолятов
ВБМ установлена для цыплят 1-7-дн возраста и 10-11-дн КЭ независимо от способа введе-
ния инокулята. Возбудитель, выделенный из крови, перьевых фолликулов от домашних кур
и диких птиц, оказался идентичным (3).
При внутривенном заражении эмбрионов в 10- или 17-дн возрасте цыплята вылупля-
лись нормально, но заболевали БМ после инкубационного периода такой же продолжитель-
ности, как цыплят, зараженных в 1-дн возрасте. Заражение 10-дн КЭ в аллантоисную по-
лость вызывает БМ у вылупившихся цыплят. При заражении КЭ в желточный мешок виру-
сом, вызывающим классическую форму БМ, отмечали перикардиты, спленомегалию и на-
личие бляшек в селезенке (38).
У экспериментально зараженных цыплят первые клинические проявления болезни от-
мечались через 5 нед после заражения. Течение болезни имело 3 периода: с 5 по 15 нед от-
мечалась вялость, атаксия, потеря координации движения, диарея, бледность сережек и
гребня, далее с 15 по 30 нед - постепенное ослабление нервных симптомов, исчезновение
диареи, появление позы пингвина и, наконец, с 30 по 56 нед часть птиц находилась в позе
пингвина. С 34-й нед клинические проявления болезни исчезали, но птица была очень ос-
лаблена по сравнению с контрольной. Цыплята, выжившие после экспериментального зара-
жения ВБМ в 2-3-нед возрасте, являлись носителями вируса до 16-24-мес возраста. Вирус у
таких птиц содержался в крови до 24-мес возраста (90).
Контактный способ заражения птицы в экспериментальных условиях оказался таким же
эффективным, как и внутрибрюшинный - введение вируссодержащей крови больных птиц-
доноров. Контактно зараженные ВБМ цыплята погибали от БМ через 4 мес.
Индюки оказались менее чувствительны к культуральному ВГИ, чем куры, но более
чувствительны к заражению лейкоцитарной кровью, содержащей ВГИ (202).
Инфекция у индюшат, вызванная ВБМ. Вопрос о чувствительности индюшат к ВБМ
имеет противоречивое толкование. По одним данным у 3-х из 7 зараженных индюшат раз-
вились лимфоидные опухоли, причем 2 из них пали на 43-й и 50-й дн после заражения. Ни
704
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
один из зараженных индюшат не имел ПА и реизолировать от них ВБМ не удалось. В итоге
сделали вывод о нечувствительности индюков к экспериментальной инфекции БМ.
Однако в 1977 г. (151) показана высокая чувствительность индюшат к шт. Джорджия
ВБМ. Заражали ВБМ 1-сут цыплят и индюшат путем введения инфекционной плазмы или
гомогената опухоли и выращивали их в изоляции в течение 29 нед. Инокуляты оказались
патогенными для цыплят и индюшат и вызывали высокую смертность (100% у цыплят и
70% у индюшат). Изменения наблюдали в печени, селезенке, легких и других висцеральных
органах. Микроскопически пораженные ткани инфильтрированы плеоморфной популяцией
неопластических лимфоцитов. Авторы не выявили изменений воспалительного характера.
От экспериментально инфицированных цыплят и индюшат был реизолирован ВБМ и у этих
птиц обнаружены ПА. Данная работа показала, что индюшата высоко чувствительны к экс-
периментальному заражению шт. ВМБ. Эти данные (151) были подтверждены (5).
Однако в индюшиных стадах БМ не проблема. Возможное объяснение этого - присутст-
вие у индеек ВГИ, который будучи АГ родственным ВБМ защищает индюшат от болезни.
Культивирование. ВБМ удается культивировать в организме 1-дневных цыплят и в КЭ
(10-12- и 4-дн возраста при заражении на ХАО и в желточный мешок, соответственно в
культуре фибробластов и почечных клеток куриных и утиных эмбрионов, в культуре клеток
почки 2-8 нед цыплят малочувствительной к БМ линии. Заражение КЭ в желточный мешок
ведет к образованию характерных бляшек на ХАО (Рис. 98), поэтому некоторые исследова-
тели считают использование эмбрионов эффективным методом выделения БМ (196).
Шт. В-14 ВБМ поддерживали внутрибрюшинной инокуляцией 1-2 дн цыплят разных
линий с интервалом 3-10 нед кровью, взятой от птиц с клиническими симптомами БМ. В
течение 70-100дн наблюдения за цыплятами на протяжении 40 последовательных пассажей
заболевание у них колебалось в пределах 29-87% у RIR,12-40 у EBrL и 27-58% у HPRS-BrL
В культуре клеток почек цыплят и фибробластов утиных эмбрионов ВБМ образует ха-
рактерные бляшки (138, 189). Хотя в первых пассажах этот вирус не вызывает образования
бляшек в культуре клеток куриных фибробластов, но при дальнейшем пассировании в чув-
ствительных культурах он приобретал эту способность которая возрастала с увеличением
количества пассажей (165). ЦПЭ характеризовался образованием округлых рефрактильных
клеток и поликариоцитов. Размер и число последних варьировалось в зависимости от типа
культуры клеток и пассажа вируса. Зараженные клетки погибали, продуцируя большое ко-
личество вирусного АГ и голых вариантов, которые можно наблюдать в тельцах-включе-
ниях и ядрах большинства зараженных клеток.
Штаммы различаются по активности репродукции в культуре клеток, характеру ЦПД,
морфологии бляшек и количеству клеточно-свободного инфекционного вируса. По морфо-
логии бляшек можно дифференцировать вирулентные штаммы от слабо вирулентных. Так,
шт. CPRL-11 ВБМ утрачивал патогенность (онкогенность) для цыплят после его серийного
пассирования in vitro в клетках куриных эмбрионов. При длительных пассажах вируса в
культуре клеток А-АГ исчезал, поэтому при изучении АГ структуры вируса он не должен
пассироваться более 10 раз. По бляшкообразованию в культуре клеток штаммы ВБМ делят
на 3 группы : высокоонкогенные, вызывающие в клеточных культурах образование бляшек
средних размеров, и неонкогенные изоляты, вызывающие образование мелких бляшек; ВГИ
и аттенуированный ВБМ, вызывающий образование крупных бляшек. Высказана мысль о
возможной связи между бляшкообразованием и патогенностью полевых штаммов ВБМ (21).
ВБМ удавалось размножать в органных культурах почек, селезенки, гонад и легких цыплят
3-4-нед возраста. Вирус не репродуцировался в культуре клеток млекопитающих, и все по-
пытки в этом отношении оказались безуспешными.
Титрование ВБМ в культуре клеток основано на его свойстве образовывать бляшки без
агарового покрытия, так как возбудитель является клеточносвязанным. Его также удавалось
серийно пассировать и на 1-сут цыплятах, свободных от материнских АТ, заражая их ин-
траперитонеально в дозе по 500 БОЕ на цыпленка. С увеличением числа пассажей виру-
45 Зак. Na 171
705
Глава XVI. Family Hopesvirida Герпесвирусные инфекции
лентность вируса снижалась. Неспособность ВБМ в клеточной культуре выделяться во вне-
клеточную среду связана с его внутрицитоплазматической деструкцией. Данный вирус мо-
жет быть в 2-х формах: тесно вязанным с клеткой н свободным от интеграции с какими-то
клеточными структурами. В организме инфицированной птицы вирус размножается и со-
зревает только в эпителиальных клетках перьевых фолликул, где инфекционные вирионы
связаны с большим количеством цитоплазменных клеточных включений. Эти включения,
вероятно, связаны с синтезом бесклеточного инфекционного вируса. В то же время было за-
мечено, что вирус можно выделять из зараженных культур клеток, используя специальные
методики их обработки (ультразвук, хелаты, бикарбонат-диамин - тетраацетат).
Аттенуированные шт. ВБМ, а также прнродноослабленные вакцинные шт. ВГИ не со-
зревают в эпителии перьевых фолнкулов цыплят, и поэтому вакцинированная вирусом этих
штаммов птнца не передает возбудителя посредством контакта.
Предложен простой способ дифференцирования in vitro ГВИ и ВБМ с использованием
клеток линии Т35 (нз опухоли японской перепелки). ГВИ образует в этой культуре мелкие
бляшки, отсутствующие прн заражении ВБМ. В настоящее время клетки Т35 успешно при-
меняют для избирательного выделения н накопления ГВИ. Установлено, что гены US1,
US10 (US2) не нужны для роста ВБМ в ФЭК. Делегированные гены не нужны для зараже-
ния цыплят (149). Проведен анализ распределения позитивных по АГ 1а -дентритных кле-
ток, В-клеток и позитивных по ВБМ АГ клеток в лимфоидных органах и ХАО 13 дн КЭ,
инфицированных ВБМ серотипа 1, ВБМ изолята В и 3-мя вакцинными штаммами (CVI 988,
SB1, HVT - 1 - 2 и 3-го серотипов соответственно) (85а).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Главный источник болезни - больная птнца.
Входные ворота - респираторные пути. Больная птнца выделяет вирус через дыхательный и
пищеварительный тракты, с шелушащимся эпителием перьевых фолликулов и перхотью
(клеточно-свободный вирус). Прн остром течении болезни процент гибели птицы варьирует
в широких пределах и иногда превышает 10-15%. При классическом заболевании поражает-
ся обьино 10-30% поголовья, а смертность, как правило, ниже. Вирус БМ среди цыплят
распространяется путем прямого и косвенного контакта, а также по воздуху (51,181). Зара-
жение происходит путем вдыхания инфекционного материала (перья, перхоть и пыль поме-
щения). Пыль и перо длительное время остаются инфицированными. Прн температуре 17,
22 и 4°С инфекционность вируса сохраняется по меньшей мере 10 мес (срок наблюдения). В
условиях термостата (37°С) он выживает 5 мес (9). Кожные чешуйки и сухие перья сохра-
няют инфекционность 55 дн (188). В пыли птицеводческих помещений вирус в высушенном
состоянии сохраняется до 1,5 лет (99). Инфекционны также подстилка и помет инфициро-
ванных цыплят. Обратная связь между содержанием влаги и инфекционностью подстилки
(198) может указывать на то, что инфекционный материал переходит в аэрозоль и вызывает
инфекцию, либо на большую устойчивость вируса в сухом состоянии. Обе гипотезы прием-
лемы, поскольку пыль птичников, которая содержит легко аэрозолирующие частицы н очень
мало влаги, также является источником инфекции (46, 111). Экспериментальное примене-
ние выпадающих при линьке перьев или пыли путем ингаляции и трахеального введения
вызывало заболевание птиц (63). Помимо подстилки и помета инфекционной оказалась
пыль, собранная с вентиляционной системы, поверхности электрооборудования и подокон-
ников. Начиная со 2 или 3-й нед после заражения, цыплята выделяют вирус во внешнюю
среду. Десквамированные клетки кожи, н перхоть птичников оболочек пера, являясь основ-
ными компонентами пыли, служат основным средством передачи вируса (62,109,170).
Сохранение вируса в окружающей среде н его передача аэрогенным путем - причина
высокой контагнозностн заболевания. Цыплята в основном заражаются через респиратор-
ный путь. Описана овариальная передача, но есть сведения, отрицающие это. Наблюдалось,
что большие группы коммерческих цыплят, выращенных в изоляторе, не заражаются. Эго
указывает, очевидно, на то, что передача через яйцо - редкий феномен (81). Таким образом,
706
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
эпителий респираторного тракта - ворота для проникновения вируса. Наличие вирусспеци-
фического ИФ АГ в эпителии легких подтверждает эту возможность. Передача инфекцион-
ного вируса по воздуху вызвана с 1-й нед жизни цыпленка-донора и продолжается в течение
3-х нед пребывания в контакте со здоровой птицей. Наибольшее число случаев респиратор-
ного заражения отмечено на 2-3-й иед жизни цыплят-доноров (81).
Птицы, выращенные в новых помещениях, часто тяжело заболевали. Эго явление из-
вестно как “синдром нового помещения”. Иногда результаты выращивания птиц были луч-
ше при весьма негигиенических условиях: на старом помете или небольших количествах
его. Эго называлось “контролируемым воздействием”. Обычно отход среди кур-несушек в
период роста составлял 10-15%, иногда до 50%. Среди молодок, начинающих нестись, от-
ход был небольшой, около 1% в мес, но к концу 18-мес, только половина птиц несла яйца.
Птицы-носители непатогенного (природноослабленного) ВБМ пожизненно остаются
источником инфекции. Интересно, что наличие патогенных шт. ВБМ возрастает с увеличе-
нием возраста популяции птиц. Исход БМ зависит от вирулентности эпизоотического
штамма, возраста зараженной птицы и её генетически обусловленной резистентности.
В последние годы было обнаружено изменение в распространении БМ. Происходит оп-
ределенная эволюция этой болезни: с 1968 г. процент стад с зарегистрированным заболева-
нием был стабильным -от 5,8 до 8,0% в разные годы. Хотя заболевание распространено и в
некоторых хозяйствах носило эндемический характер, наблюдается заметное снижение ле-
тальности и потерь. У бройлеров БМ диагностируется редко. У ремонтного поголовья сред-
ний процент летальности от этой болезни в инфицированных стадах достигает 3-6 и только
в некоторых случаях наблюдались потери до 20-25(8).
Поскольку вирус содержится в пыли помещений где содержится больная птица, этот ма-
териал долго остается инфекционным: перхоть - 4 нед, пыль - 6 и подстилка - до 16 нед. Ви-
рус также может передаваться жуком-чернотелкой Alphiobrus diaperinus, имаго и личинки
которого обнаружены не только в соломенной подстилке помещений бройлеров, но и в под-
кожной клетчатке больной птицы (88). Свободно летающие дикие птицы - возможные пере-
носчики вируса. Из суспензии органов (печень, почки, селезенка) 164-х исследованных
птиц, относящихся к 12 видам, вирус выделен у 4: от 3-х ворон обыкновенных и 1-го сквор-
ца рода майна. При внутрибрюшинной инокуляции суточным цыплятам суспензии из на-
пившихся кровью комаров через 4 нед обнаружили БМ у (9 из 14 и у 1 из 16)(55).
Что касается вертикальной передачи БМ, то есть сведения, что цыплята, полученные из
яиц неблагополучных хозяйств и выращенные в изоляции, не заболевали (101). При зара-
жении у них появились антитела и многие цыплята погибали. Эти результаты свидетельст-
вуют об отсутствии передачи с яйцом от матери потомству.
Спектр патогенности вируса в естественных условиях. В естественных условиях БМ
диагностирована у кур, индеек, перепелов, фазанов, уток, лебедей и куропаток. Вирус изо-
лирован от птиц 10 видов, относящихся к роду Gallus. Установлена также и чувствитель-
ность японских перепелов (117, 104). Однако данных о распространении инфекции у этого
вида и о том, каково эпизоотологическое значение этого естественного резервуара вируса
нет. Вылупившиеся японские перепела (Cotumix cotumix Japonica) устойчивы к вирулент-
ному ВБМ (64). Изменения, сходные с поражениями при БМ, отмечены у фазанов (98, 110),
уток (82), сов (97), перепелов (167), лебедей (54), куропаток (108), но этиологическая спе-
цифичность этих изменений осталась не установленной. Вирус выявлен в тканевых гемоге-
натах от 3 ворон и 1 скворца (176). К видам, устойчивым к лабораторному заражению ВБМ,
относятся воробьи (117), голуби (149) и различные млекопитающие (64, 75), однако у уток
имеются АТ к вирусу. (45). Не выявлены ПА к ВБМ у цесарок, уток и городских голубей
(28). Только куры являются основным, хотя и не единственным, резервуаром инфекции.
Опубликованы интересные экспериментальные данные о проявлении феномена клеточ-
ной связанности степени патогенности шт. ВБМ, вида ткани в зависимости от метода зара-
жения и сроков исследования птицы после её инфицирования. Изучали сравнительный пато-
45* 707
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
генез БМ у цыплят, экспериментально зараженных высокопатогенным шт. HPRS-16, атте-
нуированным YHRS-16 и природноослабленным (апатогенным) HPRS-26 (156). Было уста-
новлено в мозге, нервных сплетениях, легких, печени, почках, гонадах, тимусе, селезенке,
бурсе, коже, эпителии перьевых фолликулов, что пик накопления клеточно-ассоцииро-
ванного вируса приходился на первые 2 нед после заражения. Наибольшая концентрация
всех 3-х штаммов ВБМ обнаружена в легких, селезенке, печени. Первоначально клеточно-
ассоциированный вирус выделяли через 1 дн после заражения в селезенке (патогенный шт.
НРР-16), через 4 дня - в легких, тимусе, селезенке, печени (аттенуированный шт. НРР-16). В
наиболее высокой концентрации обнаруживался патогенный шт. НРР-16, тогда как для ана-
логичного аттенуированного она была самой низкой. Интересно, что перьевые фолликулы и
бурса становились позитивными в отношении ВБМ только после того, как последний был
выявлен в легких, селезенке и тимусе (62). В отличие от этих результатов выявлена наи-
большая концентрация клеточно-связанного вируса в эпителии перьевых фолликулов у
птиц, инфицированных контактно или внутрибрюшинно. Изучены сроки созревания в перь-
евых фолликулах патогенного (Jd-1) и апатогенного (HN) штаммов ВБМ при двойной ин-
фекции цыплят. Оба штамма одновременно вводили 2-нед цыплятам (породы белый лег-
горн C-WH и высокочувствительной к данному вирусу линии WSU-VS) подкожно и путем
контакта. В результате подкожного заражения оба штамма были обнаружены через 2, 4, 6
нед в крови всех кур линии WSU-VS и 50% кур линии C-WH. Через 2 нед после заражения
оба вируса были обнаружены в перьевых фолликулах птиц обеих линий. Куры могут не
только одновременно инфицироваться двумя вирусами различной степени патогенности, но
иметь виремию в сроки, зависящие от генетической чувствительности их к ВБМ.
Факторы резистентности птицы
Влияние возраста. Возраст птицы - важный фактор природной резистентности. Не-
смотря на то, что опухоли у кур возникают незадолго до зрелого возраста, наиболее чувст-
вительными птицы не в этот период. Только что вылупившиеся из яйца цыплята более чув-
ствительны к экспериментальному заражению, чем цыплята 4 или 12 нед. При изучении
распространения БМ в Индии показали, что наибольшая заболеваемость наблюдалась в
группе кур 26-нед возраста (80,08%), к 71-й нед заболеваемость составляла 11,7% (172). Не
у всех пород кур чувствительность к ВБМ снижается с возрастом одинаково; у некоторых
она сохраняется в течение 8 нед, а затем резко падает. Возрастная резистентность не зависит
от бурсоэктомии, не исчезает она и при тимэктомии. Эго подтверждает, что возрастная ре-
зистентность не обусловлена Т-клетками (154).
Влияние условий содержания. Условия, в которых выращиваются птицы, могут иг-
рать определенную роль в уровне природной резистентности: любые случаи стресса могут
считаться причиной эпизоотических форм опухоли. Переезды на дальние расстояния, изме-
нения режима питания, принудительное воздействие искусственным светом, подрезка клюва
с целью избежания несчастных случаев и даже перемещения в другие клетки относятся к
факторам, снижающим резистентность птицы к ВБМ.
Естественная вакцинация природноослабленными штаммами. Наряду со “спонтан-
ным” иммунитетом, который может передаваться птицам по родительской линии, существу-
ет и природноприобретенный иммунитет. В некоторых стадах, где процент смертности от
БМ низок, можно выделить вирус герпеса более низкой патогенности по сравнению с родо-
начальным вирусом, вызывающим 100%-ную смертность. Куры из подобных стад, благода-
ря их естественному заражению природноослабленным эпизоотическим вирусом приобре-
тают резистентность к повторному заражению патогенным вирусом. Некоторые больные
птицы, зараженные вирусом со средней патогенной способностью (30-60% смертности), мо-
гут выздороветь клинически. Такая возможность редка и обычно птицы, пораженные кли-
ническими формами болезни, погибают. Но среди птиц со слабыми гистологическими изме-
нениями определенное число выздоравливает полностью, без дальнейшего проявления кли-
нических признаков. Эго утверждение основывается на высокой частоте выявления гистоло-
708
Глава XVI. Family Herpesvirida Гериесвирусные инфекции
гических изменений во время убоя партий зараженной птицы, взятых наугад. Частота таких
изменений с возрастом уменьшается. Таким образом, купирование гистологических измене-
ний является возможно после заражения слабопатогенным вирусом, что позволяет предпо-
лагать наличие постинфекционного иммунитета к БМ.
Генетически обусловленная устойчивость. Изучение такой устойчивости начали с ау-
тобредных стад цыплят промежуточной чувствительности. Удалось в 2-х генерациях путем
селекции чувствительных и устойчивых пород получить стада птиц, различающихся по чув-
ствительности к БМ (80). Средний падеж от БМ у генетически устойчивых, или N-линии,
составлял 6%, а у генетически чувствительной или Р-линии, - 94%. Этот метод селекции
был быстро заимствован птицеводческой промышленностью.
Изучали сравнительную чувствительность некоторых инбредных кур (CW, CXW, F1) в
ВБМ(47). В итоге установлено различие в чувствительности к БМ и в способности продуци-
рования специфических антител. Среди птиц линии Ц наблюдалась наибольшая выживае-
мость после заражения. Леггорны, по-видимому, более устойчивы (летальность 6,1%), тогда
как у помесей леггорн и родайленд более высокий процент (12) летальных исходов (38).
Интересные результаты были получены при изучении влияния различных доз ВБМ на
развитие виремии, время выживания и смертность у цыплят 2-х линий: высокочувствитель-
ной (красный родайленд) и умеренно-резистентной (светлый Суссекс). У цыплят чувстви-
тельной линии доза вируса не влияла на частоту заболевания, но падеж быстрее наступал у
птиц, которые получили более высокую дозу вируса (159). При изучении механизма генети-
ческой резистентности выяснилось, что у резистентных птиц ниже уровень виремии, и
больше уровень ВНА, чем у чувствительных. Однако АТ, очевидно, не ответственны за ре-
зистентность, поскольку бурсэктомия не влияла на развитие резистентности (154). ВБМ мо-
жет вызывать прогрессирующие опухоли на месте введения. Рост или регрессия трансплан-
тируемых опухолей не зависит от генетической чувствительности птиц к БМ. Частота воз-
никновения опухолей у хозяина зависит от генетической чувствительности его к БМ (91).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз основан на клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомических, гис-
тологических изменениях н результатах вирусологических исследований. Предварительный
диагноз обычно ставят по признакам поражения нервной системы: односторонний или дву-
сторонний паралич ног или крыльев, утрата рефлекса насеста, скрючивание пальцев, кривая
шея, расширение зоба, диффузное серое помутнение радужной оболочки глаза и неправиль-
ное очертание зрачка. У молодых птиц острое течение болезни характеризуется быстрым
распространением тяжелой депрессии, истощением и гибелью. При вскрытии БМ от лимфо-
идного лейкоза можно отличить, если птицы с лимфоидными опухолями моложе 18 нед, у
более старших птиц сумка Фабрициуса не вовлечена. В большинстве случаев при БМ име-
ются диффузные или узелковые отечные разбухания седалищного нерва и плечевого,
брюшного и поясничного сплетений. Природу инфильтраций в пораженных тканях иденти-
фицируют гистологически, что имеет значительную диагностическую ценность (40). В на-
стоящее время разработана диагностика БМ с использованием ДНК-зондов (4).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
БМ - единственная поддающаяся вакцинопрофилакгике опухолевая болезнь. Предложе-
на гипотеза о 2-х стадийной иммунологически индуцированной резистентности при БМ (63).
На первой стадии решающая роль отводится противовирусному иммунитету. Эта стадия ха-
рактеризуется продукцией ВНА, снижением виремии и ингибицией репликации вируса. Тем
самым предотвращается деструкция лимфоидной ткани (124, 161а). Kato и Hirai предполо-
жили наличие трех основных объектов-мишеней, против которых направлены противови-
русные и противоопухолевые иммунологические реакции: вирион ВБМ, инфицированная
клетка и клетка лимфомы БМ (179). Против первой мишени направлены ВНА (13, 32, 55,
79) ; они подавляют его репликацию и снижают уровень виремии (41, 43, 44). Вторая ми-
шень представлена клетками, инфицированными ВБМ, на которых образуются поверхност-
709
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ные АГ, реагирующие с АГ, локализованными на поверхности клеток, инфицированных
вакцинными штаммами (37, 49, 60, 62). Предполагают, что индуцированные вакцинным
вирусом иммунные реакции направлены против антигенов-мишеней, образующихся на
клетках, инфицированных онкогенным ВБМ (37, 55). Антителозависимый лизис клеток-
мишеней осуществляют лифоциты-киллеры (К-клетки). Наличие АТ даже в небольших ко-
личествах обеспечивает условия для цитотоксического действия К- клеток (44, 69). Незави-
симый от АТ и комплемента лизис клеток-мишеней осуществляют непосредственным кон-
тактом натуральные киллеры (НК-клетки). Определенную роль в иммунитете на его ранней
стадии играют макрофаги. В кооперации с В-клеткамн иммунизированных цыплят они мо-
гут инактивировать свободный ВБМ. Факторы клеточного иммунитета (лимфокины), выде-
ляемые иммунными Т-лимфоцитами, активируют макрофаги (65, 69). Третья мишень вак-
цинального иммунитета - клетки лимфомы Марека, которые содержат опухолеспецифиче-
ский поверхностный АГ MATSA (55, 69). Против этой мишени проявляют прямую цитоток-
сичность клетки-киллеры и макрофаги от цыплят вакцинированных ВБМ или ВГИ (мишень
лимфобластоидные клетки MSB-1). Иммунитет при БМ заключается в противоопухолевой
защите с помощью клеточных факторов, длительно сохраняющих свою активность за счет
постоянного стимулирования персистирующим вирусом и уничтожения пораженных клеток.
Это подтверждается иммуногенностью препаратов плазматических мембран клеток, зара-
женных in vitro вирусом БМ.
Иммунную систему птицы можно разделить на бурса- (В-клетки) и тимус зависимые (Т-
клетки) систему. Клеточный иммунитет включает также АГ неспецифическую активацию
различных клеточных популяций и, в частности, естественных киллеров (219). Иммунитет
против БМ является тимус-зависимым процессом, поскольку вакцинация ВГИ не защищала
бестимусных цыплят от БМ (95). Иммунизация цыплят авирулентными шт. ВБМ или при-
родными шт. ГВИ надежно (в 90% случаев) защищает их от последующей спонтанной ин-
фекции вирулентным шт. ВБМ, клиническое проявление болезни отсутствует, хотя виремия
имеет место. Механизм такого защитного действия неизвестен. Возможно, что в основе эф-
фективности применения гетерологичной вакцины из ГВИ при БМ лежит не только АГ
общность этих вирусов, а также и интерференция между ними. У цыплят, привитых ГВИ,
иммунитет был более выражен при контактном, чем при подкожном заражении ВБМ (87). С
помощью монАТ установлено, что гетероиммунитет обусловлен общими антигенными де-
терминантами 3 гликопротеинов ВБМ (gpll5- 100, 63 и 50 кД) и ГВИ (gp 150-62 и 52 кД).
Иммунизация кур и кроликов этими гликопротеинами индуцировала выработку АТ, подав-
ляющих репродукцию обоих вирусов (104).
В настоящее время имеется 5 вакцин против БМ, в том числе 3 живых, изготавливае-
мых онкогенных штаммов ВБМ серотипа 1 (аттенуированные шт. HRS-B16, Md-5), из есте-
ственно ослабленных неонкогенных штаммов серотипа 2 (CVI988, SB-1, С-80) и гетероло-
гичных ВГИ серотипа 3 (FC-126 НУТ), а также две инактивированные вакцины из клеток
или клеточных мембран культур клеток, зараженных вирусом.
Вакцины из природноослабленного (полевого) вируса. Протекгивная способность
ВБМ серотипа 2 впервые установлена в 1972 г. Shat, Calnek (177) сообщили в 1978 г о вы-
делении от клинически здоровых кур штамма SB-1 (124). К ним относятся также шт. СVI
988, С-80. Вакцинный вирус, распространяется горизонтально. Rispens и др.(173) впервые
выделили природноослабленный ВБМ (CVI988) птицы от внешне здорового стада. После 20
пассажей в культуре клеток, этот вирус не вызывал даже незначительных поражений. Он
сохранил А АГ. Вакцина “Риспенс” из шт. CVI988 (Голландия) пассируется на цыплятах. У
вакцинированных цыплят виремия сохраняется более 2-х лет (по тесту выделения вируса из
перьевых фолликулов). АТ у вакцинированной птицы вырабатывались в такой же степени,
как у естественно переболевшей. Вакцинный вирус CVI988 от вакцинированных птиц не пе-
редается вертикально через яйцо. Вакцина клеточно-связанная и хранится в жидком азоте.
По данным изготовителей, степень защиты привитых цыплят от вакцины CVI988 100%, от
710
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
вакцины из ВГИ 88,6% (66,181). Аналогичные вирусы выделили Zaunder и др.(штамм ХН)
(216), Biggs и др. (50); в Китае выделен природно апатогенный шт. 4z, который рассматри-
вается в качестве кандидата в вакцинные шт.
Вакцинные шт. CVI988 (серотип 1) и SB-1 (серотип 2) хорошо размножаются в орга-
низме привитой птицы и в культуре клеток и легко передаются горизонтально (159). Уста-
новлена корреляция между способностью аттенуированных шт. ВБМ передаваться горизон-
тально и их иммуногенностью (194). Способность к такой передаче вероятно связана с вы-
раженной репродукцией вакцинного штамма в эпителии фолликулов.
Поствакцинальная виремия, особенно уровень размножения вируса в эпителиальных
клетках перьевых фолликул привитых цыплят, является хорошим тестом иммуногенности
вакцин. Штаммы длительно пассированные в культуре клеток, снижают способность к при-
живлению в организме привитых цыплят, а вместе с ней и иммуногенность (207).
Как уже указывалось, материнские антитела передаются потомству через желток, обес-
печивая снижение заболеваемости и смертности, но не абсолютную защиту от ВБМ. Эти ан-
титела обнаруживают у цыплят в течение 2-3 нед жизни. Если цыплята еще в период эм-
брионального развития были инфицированы авирулентным шт. БМ или ВГИ, то приобре-
тают выраженную защиту от БМ при последующем инфицировании патогенным штаммом.
Защитное действие проявляется примерно в 90% случаев, клиническая картина БМ отсутст-
вует, хотя виремия имеет место, а в крови вылупившихся цыплят содержатся антитела. Ме-
ханизм этого явления не установлен (29).
Материнские антитела не влияют на вакцинальный процесс, если в инокулируемом пре-
парате превалируют зрелые формы вирионов мелкофокусного ВГИ и отсутствует или нахо-
дится в незначительном количестве гликопротеидный антиген А (15). БМ у цыплят с мате-
ринскими антителами к ВБМ характеризуется однофазным течением (128). Первые измене-
ния у таких цыплят появлялись через 14 дн после заражения в печени, почках, сердце и се-
далищном нервном сплетении. Наиболее ярко они были выражены с 56-го по 70-й дн после
заражения. Пассивно приобретенные (материнские) антитела сообщают некоторую защиту
цыплятам от патогенного ВБМ (73, 32, 44, 65), уменьшают уровень вируса у зараженных
цыплят и задерживают развитие поражений. Видимо, можно допустить нейтрализующую
активность циркулирующих пассивно приобретенных антител, in vivo воздействующих как
на вирусные частицы, так и цитолитически на зараженные клетки. Эта мысль подтверждена
наблюдениями Calnek, показавшего в 1972 году более тесную связь резистентности вакци-
нированных цыплят с присутствием ВНА, чем ПА. Не исключено, что быстро наступающая
поствакцинальная защита цыплят обусловлена интерфероном (114).
Однако в 1974 г Else (89) не выявил связи мевду защитой привитых цыплят и присутст-
вием у них ПА или ВНА. Автор полагает, что клеточно-опосредованный иммунитет являет-
ся главным механизмом защиты, создаваемой вакцинацией, не отрицая при этом роли цир-
кулирующих гуморальных антител. Вероятно правильной будет точка зрения, высказанная
П. Пауэл и др. (21), что при иммунизации против БМ и клеточно-опосредованный иммуни-
тет и гуморальный ответ могут быть адекватными и в отдельности они ие могут обеспечить
защиту. Вакцинация предохраняет от развития лимфом путем уменьшения числа клеток
(122). В настоящее время накопилось много данных, свидетельствующих в пользу гипотезы
2-ступенчатого вакцинального иммунитета при БМ. На первой ступени он направлен против
вирусных антигенов, на второй - против опухолевых клеток-носителей поверхностного опу-
холеассоциированного АГ (153,158,159,183,205,190).
Вакцины из модифицированных (аттенуированных) штаммов. Большинство изме-
ненных (аттенуированных) штаммов, за исключением выделенного Churchill и др. (77), не
распространяется горизонтально. В 1969 г (77) показано, что при пассировании ВБМ
(штамма HPRS-B16) в культуре ФЭК свойства вируса менялись: он быстрее репропупирл-
вался, образовывал макробляшки, утрачивал способность образовывать А АГ и аттенуиро-
711
Глава XVI. Family Hetpesvirida Гериссвирусныс инфекции
вался. Опасности реверсии у экспериментально аттенуированных штаммов нет, поскольку
вакцинный вирус в фолликулах привитой птицы не проходит полного цикла созревания. Ат-
тенуированные вакцины куриного происхождения не инфицируют окружающую среду, и нет
опасности их реверсии в патогенные. Коммерческую живую вакцину на основе шт. HPRS-
16 ВБМ широко использовали в Европе, но впоследствии она была вытеснена другими вак-
цинами (76). Аттенуировали также другие шт. (JM и JA), но применение их было ограниче-
но (211). Получены также вакцины на основе аттенуированных умеренно вирулентных шт.
ВБМ. Так, в 1971 г разработана вакцина на основе штамма CVI988 (классический штамм)
(67,76). Вирус пассировали на культуре клеток утиных эмбрионов (20 и 35 пассажей). Он
легко передается контактным путем, обсеменяя окружающую среду с 10-го дн после вакци-
нации. Недостаток вакцины - ее умеренная вирулентность для высокочувствительных линий
цыплят. Вакцина из аттенуированного высоко вирулентного шт. Md 11/75С ВБМ длитель-
ное время проходит испытания (78).
В отношении иммунной активности вакцины обоих типов оцениваются положительно,
но аттенуированные штаммы могут утратить иммуногенность в случаях продолжительного
пассирования их в культуре клеток. Помимо указанного штамма, для аттенуации использо-
вали и полевой изолят вируса болезни Марека, вызывающий классическую форму БМ; этот
штамм аттенуировался методом серийных пассажей в КЭ. Наиболее известными аттенуиро-
ванными вакцинными шт. являются HPRS-B16, JM, GA, ВК, Md-5, Кекава-55. Кроме того,
известны шт. Md 11/75C/R2 и CV 1988/С (серотип 1), 301В/1, SB-1 (серотип II).
В программе борьбы с БМ в США официально используют три типа вакцин: HVT, SB-I
и CVI986/C. Новый серотип ВБМ 30IB/1 непатогенен, но более эффективен, чем SB-1. Раз-
работан новый аттенуированный серотип ВБМ - MdII/75C/R2, который более эффективен,
чем каждый из 3-х указанных в отдельности. Вакцины из этих шт. клеточно-связаны и так
же хранятся в жидком азоте. У цыплят, привитых вакциной из этих шт., быстро развивается
виремия и через 1-2 нед создается иммунитет. Вакцинный вирус не созревает до инфекци-
онной формы, поэтому не передается горизонтально.
Мазуренко и др. (19, 20) провели сравнительное изучение репродукции патогенного
штамма ВБМ у цыплят, вакцинированных аттенуированным ВБМ (шт. Кекава-55) и ВГИ.
Они показали, что аттенуированный штамм, в отличие от ВГИ, значительно подавляет ре-
продукцию патогенного вируса в перьевых фолликулах цыплят.
Гетерологичные вакцины из ГВИ
Наиболее широкое распространение во всем мире получила вакцина на основе ГВИ (шт.
FC-126), поскольку вирус не требовал аттенуации, не опасен в плане риверсии и подвергает-
ся стабилизации во внеклеточном состоянии. Вакцина из ВГИ предотвращает заболевание и
развитие опухолей, но не препятствует инфицированию патогенного вируса, персистирова-
нию патогенного и вакцинного вируса и выделению вирулентного вируса во внешнюю среду
(14, 25,39, 45, 52, 56, 64, 65). Ряд исследователей не установили статистически достоверной
разницы между эффективностью сухой и нативной вакцины (64, 65, 76).3ащита привитых
цыплят обусловлена сохранением поствакцинальной виремии (150). Цыплята, у которых об-
наруживалась поствакцинальная виремия в ранние сроки, имели более низкий уровень ви-
ремии от эпизоотического ВБМ. Cho (70) изучал уровень виремии у цыплят породы белый
леггорн линии WSU-VS и C-WH. В 1 сут возрасте подкожно вводили клеточно-связанную
вакцину из ВГИ в дозах 240, 1480, 6600 БОЕ. Кур исследовали на наличие вируса с интер-
валом 3 нед в течении 21 нед. Виремию обнаруживали у всех цыплят линии WSU-VS через
21 нед, независимо от дозы. У цыплят линии C-WH с 9-й нед после вакцинации виремия не
выявлялась. При введении 6600 БОЕ средний титр виремии был неизменный в течение 21
недели у цыплят линии WSU-VC с выделением вируса герпеса (204). Подобные данные со
шт. FC-126 получены с использованием теста ВГИ в эпителии перьевых очин (27).
Кроме того, считают, что ВГИ внедряется в лимфоидные клетки и препятствует внедре-
нию в них патогенного ВБМ. Таким образом, защита кур от ВБМ, обусловленная ВГИ, за-
712
Глава XVI. Family Heipesvirida Герпесвирусные инфекции
ключается в снижении уровня виремии от полевого штамма и в предотвращении тем самым
гибели птицы (76,49).
ВГИ и ВБМ обладают прочной как природной, так и in vitro ассоциацией с клеткой.
Сформированные вирионы не покидают клетку, а сохраняют свою биологическую актив-
ность при условии структурной целостности вируссодержащих клеток - основы клеточной
(нативной жидкой) вакцины. Основа сухой вакцины - стабилизированный внеклеточный ви-
рус ВГИ. Вирионы, высвобожденные от клеток, различаются по уровню морфологической
зрелости. ГВИ не способен к горизонтальной передаче в популяции кур. По некоторым дан-
ным он слабо эффективен в отношении высоковирулентных вирусов БМ (121, 160). Предпо-
лагается, что многолетняя вакцинация препаратами на основе ВГИ способствует селекции
полевых штаммов и выявлению в природе очень вирулентных штаммов БМ, против кото-
рых ВГИ неэффективен (211). В дальнейшем оказалось, что иммуногенность вакцины на
основе ВГИ обеспечивается сформированными вирионами и полноценными нуклеокапси-
дами с максимально плотной упаковкой нуклеоида. В процессе перемежающегося культиви-
рования ВГИ (в культуре клеток и на цыплятах) происходило усиление его репродукции в
клетках эпителия перьевых фолликул цыплят при внутримышечном и аэрогенном способах
внедрения. На основе реизолятов ВГИ создана новая вакцина против БМ (15). В последую-
щем она усовершенствована. Как сухая, так и клеточно-ассоциированная вакцина из шт.
ВГИ ВНИТИБП в экспериментальных условиях обеспечивала 100%-ную защиту от большой
дозы высокопатогенного штамма ВБМ. В производственных условиях при соблюдении всех
правил применения вакцины достигался эффект, близкий к экспериментальному (31). По
морфологии фокусов ЦПД (S-признак) выявлено 2 группы шт. ВГИ. S-признак коррелирует
с иммуногенностью (17). Иммуногенную активность вакцины из ГВИ определяют на цыпля-
тах-бройлерах различных пород по методике, разработанной во ВНИТИБП (15).
Наряду с такими методами, как применение экспериментально и естественно аттенуиро-
ванных штаммов с повышенной иммуногенностью в противоэпизоотическую практику вве-
дены 2 новые категории мероприятий: 1) вакцинация 18-дневных эмбрионов для защиты
цыплят от раннего заражения, применение поливалентных вакцин с целью противодействия
естественному заражению вариантными шт. ВБМ (209, 161), а также использование аэро-
зольной иммунизации цыплят (26, 27); 2) применение комплексных (ассоциированных)
вакцин против БМ, ИБ и других инфекций (30, 31). Аэрозольная вакцинация кур ГВИ ока-
залась также эффективной, как и внутримышечное введение препарата (22, 87). Вакцино-
профилактика кур против БМ может быть эффективной только при отсутствии вторичных
иммунодефицитов. В этом отношении особую ценность представляет инфекционный бурсит
птиц, а также инфекционная анемия цыплят. Оказалось, что при одновременном примене-
нии живых вакцин против БМ (ВГИ) и ИБ (шт. Люкерта) получен такой же результат, как и
при раздельном использовании указанных моновакцин (69).
При заражении КЭ на 16-28-й дн инкубации онкогенные и неонкогенные шт. ВБМ не
проявляли значительной репликации в тканях эмбрионов; вирус оставался неактивным в
эмбриональный период до вывода цыплят. Вакцинация эмбрионов ВГИ одновременно с за-
ражением ВБМ дала высокий защитный эффект против БМ, который значительно снижался
в случае вакцинации 1-дневных цыплят (184). У 17-дн КЭ, вакцинированных ВГИ, вирус в
высоких титрах накапливался только в тканях легкого и практически не обнаруживался в
других лимфоидных органах. Клетками-мишенями были фибробластоподобные или эпите-
лиоподобные клетки легких эмбриона, но не лимфоидные или макрофагальные клетки, как
это имеет место у цыплят в постэмбриональный период развития.
Поливалентные вакцины против БМ. Установлено, что наиболее высокие защитные
свойства имеют поливалентные вакцины, включающие шт. группы ВБМ - ВГИ серотипов 1,
2 и 3 (178,195). Моно-, би- и поливалентная вакцины защищали соответственно 54,5, 74,5 и
91,5% цыплят (160). Бивалентные и трехвалентные вакцины, включающие вакцинные шт.
713
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ВБМ и ВГИ, оказались значительно эффективнее моновакциных (211, 212), особенно про-
тив очень вирулентных полевых шт., которые становятся преобладающими в зонах интен-
сивного птицеводства (120). In vivo штаммы не интерференцию проявляли, а протективный
синергизм: эффективность одного вакцинного компонента возрастала от очень низкой дозы
другого и даже частичные дозы 2-х шт. были эффективнее полной дозы 1 шт. (211).
Представлены данные о синергизме между шт. FC-126 (серотип 3) и SB-I (серотип 2),
между HVT (серотип 3) и 301 В/I (серотип 2). Использование вакцин, содержащих смесь се-
ротипов 1 и 3 или 1 и 2, обеспечивает меньший уровень синергизма, чем сочетание сероти-
пов 2 и 3. Возникновение в природе высоковирулентных штаммов ВБМ обусловлено спо-
собностью герпесвирусов к мутации (212).
Разработан новый способ производства живой вакцины против БМ. Для этого предло-
жено выращивать ВГИ и ВБМ в перевиваемых культурах клеток рыб, амфибий или репти-
лий при комнатной температуре в течение 24-48 ч. В этот период вирус в основном нахо-
дится в клетках, разрушение которых наступает лишь через 72-96 ч. Это позволяет получать
вирус в высоком титре и использовать его для получения вакцины. В качестве примера опи-
сано культивирование вируса в клеточной линии FHV при 28-32°С в среде ДД 265424 с
уменьшенным содержанием аминокислот и сыворотки. Заметное накопление вируса наблю-
далось уже через 18-24 ч, цитолиз наступал на 6-7 дн. Смены среды не требовалось. Сбор
вируса проводили на 3-4-й дн путем трипсииизации культуры. ВБМ шт. CVI988 серотипа 1
выращивают в культуре клеток RTI-2 радужной форели при температуре 19-24°С (48).
Обобщены широкие опыты применения живых вакцин против БМ и сделаны следую-
щие выводы (59): вакцинация значительно снижает распространение БМ в птицехозяйствах,
однако заболевание продолжает регистрироваться, так как с помощью вакцинации не удает-
ся предотвращать возникновение персистентной суперинфекции и рассеивания вируса. От-
мечены также случаи, когда вакцинация не предотвращала вспышек заболевания.
Таким образом, для борьбы с БМ в качестве вакцин используют: 1). Аттенуированный
вирус серотипа I (HPRS-16). Вакцинированные им птицы не рассеивают его во внешней
среде; 2. Авирулентный частично аттенуированный вирус серотипа I CVI988, штамм
Rispenc). Он имеет остаточную патогенность для генетически восприимчивых цыплят, реп-
лицируется in vivo и быстро распространяется; 3. Природные неоикогенные вирусы сероти-
пов 2 (SB-I, 30/В). Используются в бивалентных вакцинах; 4. Авирулентный вирус серотипа
3, известный как ВГИ. Это единственный вакцинный вирус, который удается отделить от
культуральных клеток и подвергнуть лиофилизации; 5. Бивалентные вакцины ВГИ +10-
20% серотипа 2 штамм СVI 988. Обычно рекомендуют дозу, соответствующую 2000 БОЕ;
она обеспечивает достаточный эффект даже в присутствии материнских антител. При внут-
римышечном введении препарата эффект более выражен, чем при подкожном. Наличие ви-
ремии вакцинного штамма - свидетельство эффективности вакцинации. Однако корреляция
этого признака со степенью защищенности от БМ недостаточно выражена (201). Исследо-
вания последних лет показали, что наряду с усилением протективного эффекта вакцины из
ВГИ серотип 2 ВБМ также увеличивает частоту развития лимфоидного лейкоза у птиц, ин-
фицированных ретровирусами. Показано, что все 7 исследованных штаммов ВБМ серотипа
2 обладали способностью усиливать частоту возникновения лейкоза, лишь некоторые из них
теряли эту способность при длительном пассировании в ФЭК (143а). Для повышения эф-
фективности профилактики БМ применяли иммуномодулятор тимолин (23).
Все известные вакцинные штаммы стимулируют образование различных АТ, перекре-
стно реагирующих с ВБМ в РДП, PH , ИФ (45, 56, 65, 72, 76). Появление ПА имеет диагно-
стическое значение (32, 45, 69). Предполагают что ведущую роль в защите цыплят от БМ
играют ВНА против оболочечных антигенов ВБМ и мембранных вирусспецифических АГ
инфицированных клеток (13, 37, 32, 55, 63, 79). Функциональная роль антивирусных АТ
может заключаться в нейтрализации свободного от клеток вирулентного ВБМ, и в коопера-
ции с нормальными лимфомами хозяина в лизисе клеток, инфицированных вирусом (65, 69,
714
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
76). Формируются и клеточные иммунные реакции - РГЗТ, цитотоксичность, обусловленная
клетками, и антителозависимая цитотоксичность (51). Функциональная роль клеточных ре-
акций направлена на распознавание и устранение из организма клеток с чужеродной по-
верхностной структурой за счет вирусных и опухолевых АГ (18).
Инактивированные вакцины. Получены инактивированные вакцины из цельного ви-
руса различной степени очистки и с добавлением разных инактивантов и адъювантов. Пока-
зана возможность получения иммуногенных препаратов, не содержащих нуклеиновую ки-
слоту, но имеющих соответствующие протеины. Препараты клеточных мембран, заражен-
ных ВГИ клеток, эмульгированных с адъювантом Фрейнда, оказались высокоиммуноген-
ными в отношении патогенных шт. ВБМ. Иммунизация кур растворимыми АГ, экстрагиро-
ванными из клеток, зараженных аттенуированным шт. ВБМ, снижала заболеваемость птицы
в 2-5 раз. Видимо, гликопротеины, экстрагированные из клеточных мембран зараженных
клеток, могут быть эффективными препаратами (126).
БМ примечательна тем, что является первым примером опухолеродного заболевания
вирусной этиологии, против которого успешно применяется вакцинация. Однако трудности
практического применения аттенуированных клеточносвязанных вакцин против этой ин-
фекции привели к необходимости разработки новых средств профилактики. Одним из наи-
более перспективных направлений является создание рекомбинантных вирусных вакцин,
экспрессирующих антиген ВБМ. Уже в 1992 г Nazerian. и др. (143) создали рекомбинант-
ный вирус оспы кур (rFPV) который экспрессировал gB-ген ВБМ. Посттрансляционная мо-
дификация продукта этого гена (gB) в клетках, инфицированных rFPV, сходна с посттранс-
ляционной модификацией в инфицированных клетках. Выявлена способность rFPV-gB ин-
дуцировать ВНА АТ к ВБМ, уменьшать уровень клеточноассоциированной ВБМ-виремии у
вакцинированных цыплят, предотвращать развитие опухолей и смерть от БМ при зараже-
нии высокопатогенным штаммом ВБМ. Выявлена область ДНК ВБМ типа 1, в которую мо-
гут быть встроены гибридные гены без влияния на репликацию вируса. Создан рекомбинант
ВБМ на основе иммуногена другого возбудителя болезни домашней птицы. При вакцинации
здоровых птиц они приобретали иммунитет к двум возбудителям (136). Сконструирован де-
леционный мутант GAD4,8 lac ВБМ, у которого 4,8 тыс. п.н. в области US заменены геном
lacZ E.coli. Эта делеция удалила гены ВБМ, аналогичные генам US1, US10 и US2 ВГИ, и
специфичные для ВБМ короткие открытые рамки считывания Sorfl, Sorf2, Sorf3. Изучены
также мутанты ВБМ со вставками lacZ в гены US1, US10 или US2. Жизнеспособность скон-
струированных мутантов показала, что эти гены не нужны для роста ВБМ в фибробластах
КЭ. На ранней стадии заражения кинетика роста этих мутантов такая же как и у ВБМ дико-
го типа, но через 5-7 дн рост мутантов замедляется в 5-10 раз. На монослоях перевиваемых
ФЭК эффективность посева ниже, чем на монослоях первичных ФЭК. После инокуляции
цыплятам мутант может быть реизолирован, так что делегированные гены не нужны для за-
ражения цыплят (149). Сконструирован также рекомбинантный бакуловирус, геном которо-
го содержит ДНК, кодирующую гликопротеины Д ВБМ 1-го серотипа (147). Патентуется
использование рекомбинантного вируса оспы птиц в качестве вакцины против БМ. Он со-
держит гены, соответствующие 1 или нескольким антигенам ВБМ, таким как гликопротеи-
ды В, С, Д и Н, а также оболочечным белкам. Патентуется и другой способ создания новых
вакцин против БМ, который основан на изучении последовательностей нуклеиновой кисло-
ты , кодирующей иммуногенные полипептиды 18 и 20 ВБМ (136).
Серологическая оценка поствакцинальнго иммунитета. В настоящее время накопи-
лось много данных, свидетельствующих в пользу гипотезы 2-х ступенчатого вакцинального
иммунитета при БМ. На 1-й ступени он направлен против вирусных АГ, на 2-й - против
опухолевых клеток - носителей поверхностного опухолеассоцинрованного АГ. Для оценки
иммунного ответа при БМ в лабораторных условиях может быть широко использован тест
задержки миграции лейкоцитов.
715
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
Связи титров антител с резистентностью птицы к экспериментальному зараже-
нию. Отмечена тесная корреляция между наличием вирусспецифических преципитинов у
вакцинированных птиц и их смертностью после интраперитонеального заражения виру-
лентным niT.Md-11. Однако высказано и противоположное мнение: наличие специфических
АТ не коррелирует с восприимчивостью птицы, не препятствует развитию вирусемии и не
обеспечивает устойчивости к заражению, а пассивно приобретенные материнские антитела
практически не защищают цыплят от заражения и заболевания и даже препятствуют им-
мунному ответу на вакцинацию цыплят. Так, у цыплят с высоким исходным уровнем мате-
ринских АТ титр ВНА начинает нарастать спустя 4-5 нед после вакцинации, в то время, как
вакцинация у цыплят, негативных в отношении материнских АТ, ведет к прогрессирующему
нарастанию уровня ВНА, начиная с 2 нед (средний уровень АТ 6,4 к 35-дн возрасту) (171).
Клеточно-свободный вирус более чувствителен к материнским АТ, чем клеточно-
связанный. В настоящее время общеизвестно, что клеточный иммунитет играет основную
роль в резистентности к БМ. Он является клеточным противоопухолевым иммунитетом и
обусловлен накоплением в крови инфицированных птиц Т-лимфоцитов, токсичных для
лимфобластоидных клеток. Напряженность Т-клеточного иммунитета организма можно
оценивать по кожнореактивному фактору (КРФ), индуцируемому фитогемаглютинином
(ФГА), который вызывает трансформацию и деление лимфоцитов, причем, ФГА индуцирует
различную степень выраженности КРФ в зависимости от напряженности клеточного имму-
нитета у вакцинированной птицы. КРФ - простая, удобная и достаточно информативная мо-
дель для оценки клеточного иммунитета (11 24).
Возрастная резистентность к БМ развивается в период 4-8-й нед жизни и её уровень
примерно в 104 выше в этом возрасте, чем у суточных цыплят. Переболевшие птицы оста-
ются носителями вируса на всю жизнь. Они вырабатывают АТ и передают их через желток
цыплятам. Присутствие материнских АТ у новорожденных цыплят не предотвращает зара-
жения, но слегка задерживает последующее развитие поражений.
Частота заболеваемости тесно коррелирует с динамикой образования ядерных включе-
ний. Образование же последних тесно связано с поражением нервов. У цыплят, вакциниро-
ванных вирусом ВГИ (FC-126), при последующем заражении их ВБМ отмечается заметное
ограничение появления ядерных включений и самой БМ в стаде. Эти данные могут быть
ценными при быстрой и простой оценке вакцины против БМ. Наличие вакцинальной вире-
мии является одним из показателей иммуногенности живых вирусвакцин, интенсивность и
длительность проявления виремии свидетельствуют о жизнеспособности вируса в вакцине.
Вирус и активно приобретенные антитела персистируют в течение 18 мес.
ГЕРПЕСВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ИНДЕЕК
Witter и др. (199), исследуя индеек как возможного промежуточного хозяина и резерву-
ар ВБМ в природе, выделил непатогенный вирус. И еще один непатогенный герпесвирус
был выделен от индеек (116). ВГИ широко распространен в коммерческих индюшиных ста-
дах (84, 116). Помимо США (116, 199) он был выделен во многих странах Европы, в Авст-
ралии и в бывшем СССР.
Передача и распространение вируса. Вирус герпеса индеек (iirr.FC-126) способен пе-
редаваться горизонтально от индюшонка к индюшонку, благодаря выделению его из перье-
вых фолликулов (199). Инфекция среди индюшат легко передается по воздуху (201). Дока-
зана передача вируса аэрогенно между индюшками и курами, а также от кур индюшкам
(202). В течение 5-6 нед этот вирус может распространяться по всему стаду и с 7-10-й нед
после заражения у всех индюшат обнаруживались и вирус, и АТ, однако опухоли наблюда-
лись очень редко. Лимфопролиферативные изменения у индеек отмечали многие исследова-
тели. При заражении их вирулентным ВБМ образуются опухоли (180, 181,199). Однако не
установили вирусологического или серологического доказательства инфекции у индеек, ин-
фицированных ВБМ, даже при наличии у них опухолей (200). Вирулентный вирус БМ был
716
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
однажды выделен от незараженных индеек (201), но он, вероятно, не распространен широ-
ко. Индюшата, зараженные ВГИ при вылуплении, через 1 нед имели виремию и начинали
выделять вирус с 12-го по 16-й дн в клеточно-свободном виде из наружных покровов, по-
добно выделению ВБМ у цыплят, а к 3-й нед содержали АТ. Материнские АТ не предот-
вращают виремию и выработку активных АТ при экспериментальном заражении (202).
Патогенные свойства. Для индеек ВГИ не патогенен, но быстро распространяется и
персистирует в их организме подобно ВБМ. Титр его в крови не превышает 1000 ТЦД 50/мл.
Он не выделяется у естественно зараженных невакцинированных кур, поэтому, если послед-
ние заражаются при контакте с инфицированными индюшками, инфекция самоограничива-
ется. Передача ВГИ от кур к индейкам теоретически возможна, особенно когда много кур
заражается ВГИ. Однако практически это сведено к минимуму, так как ВГИ распространен
повсеместно и хорошо известна его апатогенность для кур. Передача ВГИ от привитых кур
непривитым весьма ограничена (202). Вертикальная передача вируса у индеек (через эм-
брионы) маловероятна, так как индейки в зараженных стадах обычно свободны от инфек-
ции, если они выращиваются в изолированных условиях. Инфекционка может быть окру-
жающая среда, следовательно, ВГИ, так же как ВБМ, распространяется через экзогенные
источники инфекции, а не через эндогенные (через яйцо).
Относительно патогенности для цыплят ВГИ мнение ученых однозначно: этот вирус не-
онкогенен как для индеек (естественного хозяина), так и для цыплят (204). Эмбрионы, за-
раженные ВГИ, развивались нормально до вылупления. При наблюдении за такими цыпля-
тами в течение 12 мес у них опухоли не развивались. Цыплята, выращенные в изоляторе и
зараженные ВГИ в большой дозе, не заболевали (163). ВГИ не оказывал отрицательного
влияния на привитую птицу и в полевых условиях (168).
Что касается контагиозности ВГИ для цыплят, мнения расходятся. Nazerian и Witter
(140, 141) сообщали о контактной передаче этого вируса 1-мес цыплятами, зараженными в
больших дозах. Многократные попытки выделить ВГИ у потомства кур, зараженных ВГИ,
оказались безуспешными. Инфекция у цыплят, зараженных ВГИ, ограничивается только ор-
ганизмом зараженного цыпленка и вертикальной передачи его потомству не происходит.
АГ активность. У индюшат, зараженных ВГИ при вылуплении, к 24-му дн появлялись
АТ. Индюшата, зараженные в возрасте 16 дн, имели АТ к 24-32-му дн, к началу 7-й нед
титр их достигал пика - 1:160-1:640.
Патогенез. ВГИ размножается в организме индюшат и выделяется из перьевых фолли-
кулов и очин пера (199, 202). Экспериментальная инфекция (проявляющаяся лимфопроли-
феративной болезнью) от индюшки к индюшке передавалась путем инокуляции вируссо-
держащей суспензии селезенки естественно больных индеек. У вылупившихся индюшат, за-
раженных ВГИ, развивалась виремия в пределах 8 дн.
Патогенез в организме вакцинированных цыплят. Вакцинный ВГИ (шт. FC-126) не
созревает в эпителии перьевых фолликулов вакцинированных цыплят, что, очевидно, ис-
ключает возможность его контактной передачи (146,168, 200, 208, 210, 213), но он созрева-
ет в фолликулах пера индеек и заражает окружающую среду. Индюшата быстро заражаются
в раннем возрасте. После вакцинации цыплят ВГИ виремия у них развивается быстро, в те-
чение 4-5 дн с момента заражения (165, 166), пик виремии наступает приблизительно на 12-
й дн после инокуляции (79, 220). С возрастом происходит постепенное снижение титра ви-
руса в крови. Так, ВГИ удавалось выделить из крови цыплят через 10 нед после вакцинации
в 86% случаев, тогда как через 76 нед его выделяли только в 58% случаев (168, 169). Пола-
гают, что в лейкоцитах и плазме крови привитых цыплят ВГИ может персистировать до 18
мес и даже в течение всей жизни птицы (146,168).
В 1978 г. Riddel и др..(174) показали наличие виремии у цыплят, вакцинированных в
полевых и экспериментальных условиях вакциной из ВГИ против БМ. При 1-кратной вак-
цинации в суточном возрасте отмечена высокая частота виремии, и степень защиты равня-
717
Глава XVI. Family Heipesvirida Герпесвирусные инфекции
лась 84,6%. Ревакцинация в 21-дн возрасте была неэффективной, т.е. не установлено значи-
тельных различий в виремии ВГИ у цыплят, вакцинированных 1-кратно и 2-кратно. Пока-
заны генетические различия по чувствительности и характеру виремии у 2-х лиинй цыплят
при введении ВГИ, а также зависимость виремии от дозы вируса. ВГИ (FC-126), инокули-
рованный цыплятам в суточном возрасте, обнаруживается в течение 2 нед после инокуляции
в клеточно-ассоциированной форме в большинстве органов: мозге, печени, почках, гонадах,
тимусе, селезенке, бурсе, коже. В легких привитых цыплят его выявляли через 2 дн после
инокуляции (156,146,199).
При индикации ВГИ в препаратах из органов вакцинированных цыплят в ИФ показано,
что наибольшая частота выявления его отмечалась в препаратах из фабрициевой сумки (в
100% случаев), меньше - в препаратах из селезенки, почек и тимуса (в 66,7-100%) и еще
реже - в препаратах из печени (в 33,7%). ВГИ можно обнаружить в срок от 6 до 90 дн. В ИФ
АГ выявлялся у цыплят, вакцинированных вирусом герпеса индеек шт. Карбовакс в сле-
дующие сроки: в селезенке и почках - с 10-го по 30-й дн, в печени - с 19-го по 30-й день, в
тимусе и фабрициевой сумке - с 19 по 60 день после заражения. Высказано предположение о
том, что ВГИ, возможно, тесно связан с клетками всех тканей птиц (привитых цыплят),
кроме эпителия перьевых фолликулов.
Nazerian и Witter (140), Purchase и Okazaki (165) не смогли выделить вириоиы из эпите-
лия перьевых фолликулов цыплят, зараженных. По данным Мазуренко и др. (20) у цыплят,
вакцинированных вирусом герпеса индеек, ПА не был обнаружен в эпителии перьевых фол-
ликулов через 5, 9, 13, 16 недель после заражения. Однако Cho (71), Zygraich и др. (220,
221) показали, что цыплята, зараженные этим вирусом в 1 и 8-нед возрасте клеточно-
свободным ВГИ, содержат последний в перьевых фолликулах непродолжительное время - 2-
4 нед. Попытки выявить ВГИ у потомства кур, зараженных этим вирусом, оказались безус-
пешными. Таким образом, инфекция вируса герпеса индеек у цыплят ограничивается только
организмом зараженного цыпленка (вертикальной передачи нет).
На основе ВГИ готовят 2 типа вакцин: свободную от клеток (сухую) и клеточно-
ассоциированную (нативную). Отечественные вакцины, приготовленные из ВГИ, широко
используются в странах СНГ с 1973 г. Разработан метод оценки активности вакцины против
БМ на основе ВГИ с помощью твердофазного ИФА (16). Следует иметь в виду, что вакци-
ны, хранящиеся в жидком азоте, или лиофилизированные, при восстановлении одинаково
чувствительны к теплу, и поэтому, должны быть использованы в кратчайший срок.
При изготовлении клеточно-свободной вакцины ВГИ шт. FC-126 репродуцируют в
культуре ФЭК; зараженную вирусом культуру снимают раствором трипсина и помещают в
среду, содержащую 10% сыворотки телят и 10% диметилсульфоксида (ДМСО); вируссо-
держащие клетки хранят в жидком азоте. Инфицированную культуру ФЭК помещают в ста-
билизатор - буфер СПГА(содержащий сахарозу, фосфат, глютамин и альбумин), подвергают
ультразвуковой обработке, замораживают и лиофилизируют. Преимущество клеточно-
свободной вакцины - возможность продолжительного хранения в условиях 4°С (61,187).
Культивирование ВГИ. ВГИ легко размножается в культурах клеток эмбрионов раз-
личных видов птиц и характеризуется крайне высокой степенью клеточной ассоциации. Ин-
фекционную активность ВГИ определяют методом количественного подсчета фокусов
(бляшек), формирующихся при его размножении в культуре клеток (Рис. 101).
Лабораторное поддержание вакцинных штаммов. Видимо, условия поддержания
вакцинных шт. (и ВГИ, и аттенуированного шт. ВБМ) отражаются на иммуногенности жи-
вых вакцин. Например, Witter (205, 206), Maas и др. (129), изучая 2 вакцинных шт. различ-
ного происхождения (ВГИ и аттенуированный ВБМ), прошедшие более 100 пассажей in
vitro, установили отсутствие полной патогенности для кур и утрату защитной активности
при инфицировании вакцинированных цыплят патогенным ВБМ. Оба шт. обладали очень
низкой способностью к репликации в организме цыплят, их реизоляция между 3 и 22 дн по-
сле инокуляции приближалась к нулевым значениям. Методом НИФ практически не выяви-
718
Глава XVI. Family Herpesvirida Герпесвирусные инфекции
ли образования антител против вариантных вирусов в организме птиц. Характерным свой-
ством варианта БМ был температуро-зависимый дефект репликации, выражавшийся в рез-
кой ингибиции при 41 °C. Кроме того шт. ВБМ оказался крайне гетерогенным в отношении
температурной зависимости (206).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
l.Eappoc Палома Е.В. и др. 100-летию Курской биофабрики. 1996 :40. 2.Бедристов А.И. и др. Мол.
генетика, микробиол. И вирусология. 1996, 3. :6. З.Горева И.П. и др. Тр. НИВИ Тадж ССР, 1987, 8,
:51. 4.Гробовицкая М. Птицеводство. 1996, 2 :27. б.Демкин Т.П. Ветеринария, 1981, 1 :48.
б.Касьяненко И. и др. Патоморфология, патогенез и диагн. бол с-х жив. М., 1980 :205. 7.Коровин
Р.Н. и др. Тез. докл. Всес. Конф. Мол. ученых., 1971 :90. 8.Коровин Р.Н. Докт.дисс.1989.
9.Кононенко А.Б. Труды ВНИИВС, 1979 :115. Ю.Королев А. и др. Сб. н. тр. ВНИВИП, 1978, 46 :84.
И.Королев А.М. и др. Ветеринария, 1991, 3 :27. И.Лавров С.В. и др. “Физико-хим биол св-ва неко-
торых онкогенных вирусов”, Рига, 1975 :186. 13.Лукина В.А. и др. Акт. вопросы вет вирус. М., 1980
: 125 14.Лукина В.А. и др. Научи основы произв. вет. препаратов, М., 1989 :55. 15.Лукина В.А. и др.
Автореф. докт дисс М, ВИЭВ, 1992. 16.Лукина В.А. и др. Тез. докл. н-пр. конф. ВНИИЗЖ, Влади-
мир, 1995 :256. 17.Лукина В.А. и др. Тез. докл. н. конф. ВНИТИБП. 1989 :55. 18.Лукина В.А. и др.
Курская биофабрика. К 100-летию биол. пром. России, 1996 :422. 19.Мазуренко Н.П. Вирусы рака и
лейкоза, М., 1974 :67. 20.Мазуренко Н.П. Вируса рака и лейкоза, М., 1978 :144. 21.Пауэл П. и др. XI
Междунар. Симп по сравн изучению лейкоза и ...Тез докл (Пицунда), 1979, 200. 22.Придыбайло
Н.Д. и др. Ветеринария, 1986, 7 :36. 23.Придыбайло Н.Д. и др. Вестник с-х науки, 1991, 7 :136.
24.Ропонич В.Г. Канд дисс. С-Петербург, 1993. 25.Севоиан М., и др. IX Междун симп по сравн изу-
чению лейкоза и ...Тез докл Пицунда), 1979, 205. 26.Слепенко Т.Б. Автореф. канд. дисс., 1987.
27.Слепенко Т.Б. и др. Тез. докл. н. конф. ВНИТИБП, 1987 :22. 28.Степина В.Н. и др. Вирусы рака и
лейкоза, М., 1974 :71. 29.Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, Урожай, 1993, 253-261. ЗО.Соловьев
Б.В. и др. Тез. докл. н. конф. ВНИТИБП, Москва, 1996 :13. 31.Соловьёв Б.В. и др. Тез. докл. н. конф.
ВНИТИБП, Москва, 1996 :14. 32.Сюрин В.Н. и др. Част. Вет. вирус. М., Колос, 1979 :89.
ЗЗ.Тьпценко И.П. Ветеринария, 1991, 5 :25.34. Тыщенко И.П. и др. Ветеринария, 1991, 9 :33.
35.Тьпцен-ко И.П. Ветеринария, 1992, 3 :22. Зб.Федотов А.В. Автореф канд диссер М., 1979.
37.Фомина Н.В. и др. Вирусы живот М., MBA, 1993. 38.Фомина Н.В. и др. М., MBA, 1983. 39.Энчев
С. Вет-мед науки, 1977, 14, 7, : 23. 4О.Энчев С. Патоморфол. патогенез и диагн бол с-х жив. М.,
1980, 174. 41.Ahmed М. et.al. J Virol, 1968, 2 :1443. 42.Akakpo A. J. et.al. Ann Med Vet, 1992, 136, 3
:195. 43.Ball R.F. et.al. Poultry Sci., 1971b, 50 :1084. 44.Ball R.F. et.al. Poultry Sci, 1971a, 50 :648.
45.Baxendale W. Vet Rec, 1969, 85 :341. 46..Beasley J. M. et.al. Am J Vet Res, 1970, 31 :339. 47.Von
V.Benda Wien. Tierarzrl Mschr., 1978, 65, 3 :91. 48.Beregman Sven et.al. Патент № 3343504, опуб
26.03.92. 49.Biggs P. M. et.al. Oncogenesis and Herpes viruses Lyon, 1972, 88. 5O.Biggs P.M. et.al. XY
Всемир конгресс по птиц, 1972. 51.Biggs P.M. Herpes viruses, London-New-York, 1973 :557. 52.Biggs
P.M. et.al. Vet Rec, 1970, 87 :704. 53.Blankert J.J. et.al. Avian dis, 1990, 34 , 4 :818. 54.Blomberg H.
Nord. Vet Med, 1949, 1 :719. 55.Brewer R.N. etal. Avian Dis, 1969, 13 :83. 55a.Brunovskis P. et.al. Vi-
rology. 1995, 206, 1 :324. 56.Von Bulow V. Am J Vet Res, 32, 1971 :1275. 57.Von Bulow V. Avian Path,
1975, 4 :133. 58.Von Bulow V. Zbl Vet Med, B, 1970, 17 :460. 59.Bulow V. Von et.al. Proc 19-th World’s
Poultry Cong Amsterdam, Netherlands, 1992, :286. 60.Burgoyne G.H. et.al. Avian Dis, 1973, 17 :82.
61.Calnek B.W. et.al. Appl Microbiol, 1970, 20 :723. 62.Calnek B.W. et.al. J of the National Cancer Inst
1970, 45 :341. 63.Calnek B.W. et.al. Avian Dis, 1970, 14 :211. 64.Calnek B.W. et.al. In Diseases of
Poultry, Iowa, 1972 :470. 65.Calnek B.W. Infect Immunity, 1972, 6 :193. 66.Calnek B.W. etal. Avian Dis,
1977, 21, 3 :346. 67.Calnek B.W. et.al. Amer J Vet Res, 1979, 40, 4 :541. 68.Calnek B.W. Proc 19-th
Poultry World’s Congr Amsterdam, Netherlands. 1992 :220. 69.Chang J.D.T. et.al. Poultry Sci, 1985, 64
:78. 70.Cho B.R. et.al. Appl Microbiol, 1972, 24 :299. 71Cho B.R. Avian Dis., 1975, 19 :136. 72.Cyj B.R.
Avian Dis, 1977, 21, 3 :394. 73.Chubb R.C. et.al. Vet Rec,1968, 82 :4. 74.Churchill A.E. etal. Nature,
1967, 215 :510. 75.Churchill F.E. etal. J Nat Cancer Inst,1968, 41 :951. 76.Churchill A.E. etal. Nature,
1969, 221 :744. 77.Churchill A.E. et.al. J Gen Virol, 1969, 4 :557. 78.Churchill A.E. Ph D Thesis,
University of London, 1969. 79.Churchill A.E. et.al. Vet Rec, 1973, 92 :327. SO.Cole R.K. Avian Dis,
1968, 12 :9. 81.Colwell W.M. et.al. Avian Dis, 1968, 12, 4 :716. 82.Cottral G. E. Poult Sci, 1953, 32 :585.
83. Glaubiger C. et.al. J Virol. 1983, 45 :1228. 84.Grittenden L.B. et.al. Poult Sci, 1969, 48 :196. 85.Cox
F.E.G. J Roy Soc Med,1979, 72 :635. 85a.Davidson I. et.al. Virus Res. 1995, 35, 3 :233. 86.Eidson C.S.
et.al. Avian Dis, 1969, 12 :544. 87.Eidson C.S. et.al. Poult Sci, 1980, 59 :54. 88.Eidson C.S. et.al. Avian
719
Г лава XVI. Family Hapesvirida Г ерпесвирусные инфекции
Dis., 1971, 15, 1 :68. 89.Else R.W. Vet Rec, 1974, 95 :182. 90.Espinosa et.al. Rev Avicultura, 1978, 22, 2
:95. 91.Fabricant J. et.al. Avian Dis, 1978, 22, 4 :646. 92.Fletcher 0.1. et.al. Mareks disease task force
report, 1969. 93.Gavora J.S. Proc 19th World’s Poultry Cong Amsterdam,Netherlands, 1992 :175.
94.Gingerich E. Egg Ind, 1989, 31 :39. 95.Gupta S.K. et.al. Avian Diseases, 1982, 26 :7. 96.Halonzka R.
et.al. Acta Vet Brno, 1992, 61, I :43. 97.Halliwell W.H. Avian Dis, 1971, 15 :49. 98.Harris S.T. Vet J
1993, 95 :104. 99.Hlozanek J. etal. Folia biol (Praha), 1973, 19, 2 :118. lOO.Ianconescu M., et.al. Avian
Dis, 1971, 15 :4. lOl.IancjnescuM. et.al. Avian Dis, 1971, 15 :177. 102.Ikuta K. Et.al. J Gen Virol. 1985,
66 .1131. 103.Iglesias M. Rev Avicuit, 1980, 24, 2 :93. 104.Ikuta K. etal. Virol., 1984, 49 :1014.
104a.hnai K. et.al. Avian Pathol. 1991, 20, 1 :57. 105.1sfort R.J. et.al. J Virol. 1986, 59 :411. 106.1sfort
R.J. et.al. J Virol. 1986,57 :464 107.Jakowski R.M. et.al. Avian Dis., 1969, 13 :215. 108.Jennings A.R. J
comp Path, 1954, 64 :356. 109.Jonson E.A. et.al. J Nat Caancer Inst,1975, 55, 1 :89. HO.Jungherr E. J
Amer Vet Med Ass, 1939, 94 :49 lll.Juraida V. et.al. Avian Dis, 1970, 14, 1 :188. 112.Juraida V. et.al.
Vet Med, 1992, 37, 9-10 :531. 113.Kaleta E. Clin Veter, 1978, 101, 5 :238. 114.Kaleta E. et.al. Am J Vet
Res, 1972, 33 :567. 115.Kawada Masasi etal. Avian Pathol. 1995, 24, 3 :565. 116.Kawamura HL. et.al.
Avian Dis., 1969, 13 :853. 117.Kenzy S.G. et.al. Avian Dis.,1969, 13, 1 :211. 118.Kojimaeiki. Jap J Vet
Res, 1991, 39, 1 :60. 119.Kottaridis S.D. et.al. Amer J of Vet Res, 1969, 30, 10 :1851. 12O.Kreager K.
Poultry, 1985, 2, 1 :8. 121.Krisawsr E. et.al. Arch Virol, 1986, 89, 1-1 .29. 122.Kudo Yuzuru et.al. Jap .J
Vet Res., 1992, 40, 1 :41. 123.Lee L.F. et.al. J Immunol. 1983, 130 :1003. 124.Liberona P. et.al. Poultry
Adviser, 1990, V. ХХШ, 1 :65. 125.bin J.A. et.al. J. Vet Med Sci, 1991, 53, 2 :269. 126.Lesnik F. etal. Int
J Cancer, 1975, 16 :153. 127.Lesnik F. et.al. Folia veter, 1976, 20 :I. 128.Lesnik F. et.al. Arch exp vet
medl978, 1, 8 :127. 129.Maas H. J. L. etal. Avian Pathol 1978, 7, 1 :6I. 13O.Martin A et.al. Anim Gen
1989, 20, 41 :407. 131.Matsuda H. et.al. Biken J, 1976, 19 :119. 132.Mazija H. Veterinarski archiv., 1977,
47, 3 :161. 133.McKie E.A. J Virol. 1995, 2 -.1310. 134.Meszaros J. Mh Vet Med, 1978, 33, 15 :58O.
135.Mladenov L. et.al. Mh Vet Med, 1978, 33, 16 :630. 136.Morgan R.W. Патент 717150, заявл.
18.06.91.опубл.27.07.93. 137.Morimura T. et.al. J Gen Virol. 1995, 76,12 :2979. 138.Nazerian K. et.al.
Proc Soc Exp Biol Med, 1968, 127 'All. 139.Nazerian K. J Nat Cancer Inst, 1970, 44 :1257. 14O.Nazerian
K. et.al. J Virol 1970, 5 :388. 141.Nazerian K. J Nat Cancer Inst, 1971, 47 :207. 142,Nazerian K. et.al.
Avian Dis, 1977, 21 :69. 143.Nazerian K. et.al. J Virol. 1992, 66 :1409. 143a.Nazerian K. etal. Патент
803633, заявл. 10.12.91; опубл.29.11.95. 144.Neumann U. Avian Pathol,1980, 9 :597. 145.Nielsen K.H.
et.al. Poultry Sci, 1971, 50, 5 ; 1518. 146.Okazaki W. et.al. Avian Dis 1970, 14 :413. 147.Oho M. et.al. Vi-
rus Res, 1995, 38, 2-3 :219. 148-Ono K. et.al. Avian Dis. 1984, 29 :533. 149.Parcells M.S. et.al. J Virol.
1994, 68,12 :8239. 15O.Patrasku I.V. et.al. Avian Dis ,1970, 14 :413. 151.Paul P.S. et.al. Am J Vet Res
1977, 38, 10 :1653. 152.Payne L. N. et.al. J Nat Cancer Inst 1967, 39 :281. 153.Payne L. N. etal. Inter
Reviews of Exper Pathol, 1976, 16 :59. 154.Payne L. N. Clin Vet, 1978, 101, 5 :223. 155.Payne L.N. Proc
19th W Poultry Cong Amsterdam, Netherlands. 1992 :189. 156.Phillips P.A. et.al. J Nation Cane Inst 1972,
49, 5 :1367. 157.Powel P. et.al. Nature, 1974, 251 :79. 158.Powell P. et.al. J Nation Cane Inst 1977, 59
:919. 159.Powell P. et.al. Avian Pathol, 1980, 9, 4 :567. 160.Powell P. et.al. Vet Res, 118, 25 :668.
161.Powrll P.S. Clin Vet, 1987, ПО, 1 :36. 162.Prasad L.B.M. et.al. Australian Vet J ,1977, 53 :582.
163.Purchase H.G. et.al. Ann Meet Anim Health, 1970, 315. 164.Purchase H.G. Cane Res,1970, 30 :1898.
165.Purchase C.H. et.al. Avian Dis, 1971 :391. 166.Purchase H.G. et.al. Am J Vet Res, 1971. 167.Purchase
H.G. Oncogenesis and herpeaviruses, 1972, 2 :95. 168.Purchase C.H. et.al. Avian Dis, 1972, 16 :57.
169.Purchase C.H. etal. Avian Dis,1972, 16 :34. 17O.Purchase H.G. Beltsville Symp in agr Res N Y 1971,
1 :63. 171.Romacwamy V. et.al. Indian J Avian Sci, 1991, 61, 4 :396. 172.Reddy S.D. et.al. Indian Vet J,
1980, 57, 3 :185. 173.Rispens B.H. et.al. Avian Dis. 1972, 16 :108. 174.Riddel C. et.al. Veter Res. 1978,
102, 6 :123. 175.Sahota P.S. et.al. S Res. 1977, 14, 3 :372. 176.Sambyal D. et.al. Indian J Microbiol. 1972,
19, 4 :182. 177.Schat K.A. et.al. J Nat Cancer Inst. 1978, 61 :855. 178.Schat K.A et.al. Av Pathol. 1985,
14, 1 :127. 179.Schat K.A. Proc 19th World’s Poultry Congress Amsterdam, Netherlands, 1992 :233.
180.Shapiro D. Egg Ind. 1990, 96, 2 :28. 181.Sevoian M. et.al. Avian Dis. 1963, 7 :102. 182.Shabbir A.
et.al. Avian leycosis Complex. 1977 :43. 183.Sharma J. et.al. J Nat Cancer Inst. 1977, 58 :1647.
184.Sharma J. M. Avian Dis. 1987, 31 :570. 185.Sarma G. Proc 19th W Poultry Cong Amsterdam, Nether-
lands. 1992 :310. 186.Schudel A. et.al. Rev Med Veter. 1977, 58, 3 :191. 187.Siegmann O. et.al. Avian
Pathol. 1980, 9 :21.188.Sing G. et.al. Indian Vet J. 1979, 56 :87. 189.Solomon J et.al. Proc Soc Exptl Biol
Ned. 1968, 127 :173. 190.Sugimoto C. et.al. Jap J Vet Res. 1978, 26 :57. 192.Swoyne D.E. etal. Avian
Pathol. 1989, 18, 31 :397. 193.Vickers J. et.al. Avian Dis. 1967, 11, 4 :531. 194.Vielitz E. Poultry Guide,
1986, 23 :58. 195.Vielitz E. et.al. Poultry intern. 1987, 26,12 :48. 196.Waseem M. etal. Indian J Exp Biol
720
Г лава XVI. Family Heipesvirida Г ерпесвирусиые инфекции
1977, 15, 11 :1053. 197.WitterR. et.al. Proc SOc Exptl Biol Med, 1967,124 :59. 198.Witter R. et.al. Avian
Dis. 1968, 12, 3 :522. 199.Witter R. Et.al. 1970, 31, 3 :525. 200.Witter R. et.al. Avian Dis. 1970, 14 :255.
201.Witter R. et.al. Infect Immun. 1971, 4, 4 :356. 202.Witter R. et.al. Avian Dis. 1972, 16,1 :34.
203.Witter R et.al. Avian Dis 1972, 20, 4 :676. 204.Witter R. Oncogenesis and herpesviruses, 1972, 20, 4
:111. 205.Witter R. et.al. J Immunol. 1975, 115 :177. 206.IARS Sci Publ. 1978, 24, part 2 :1043.
207.Witter R. et.al. Nat Cancer Inst 1979, 62 :143. 208.Witter R. et.al. Avian dis. 1980, 24, 1 ;210.
209.Witter R. et.al. Zootech Int. 1983, 24, 1 :210. 210.Witter R.L. Avian Pathol. 1984, 13, 2 :133.
211.Witter R. et.al. Avian Pathol. 1984, 13, 1 :75. 212.Witter R.L. Very virulent Marek’s disease viruses:
impotance and control. World’s Poultry, 1989, 45, 1: 60. 213.Witter R. Pat. 4885717-A61 К 39/12-
23.01.1990. 214.Witter R. Proc.W Poultry Cong Amsterdam, Netherlands, 1992 :298. 215.Yoschido £>hi-
geto etal. Virol. 1994, 200, 2 :484. 216.Zander D. et.al. Avian Dis., 1972, 16 :163. 217.Zanella A et.al.
Atti Soc Ital Sci Vet. 1970, 24 :622. (217a). Zelnik V.T.P. et.al. J Gen Virol. 1995, 76, 11 :2903.
218.Zillehoj H.S. Poultry Sci. 1991, 70, 5 :1154. 22O.Zygraich N. et.al. Avian Dis. 1972, 16 :793.
221.ZygraichN. et.al. Avian Dis. 1972, 16, 4 :735.
46 Зак. № 171
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Глава XVII. ПОКСВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕМЕЙСТВА POXVIRIDAE
Поксвирусы (от лат. рос, росс - пустула, язва) - большая группа вирусов, поражающая
позвоночных и насекомых. Вирионы поксвирусов представляют собой овальные или прямо-
угольные частицы размером (220-450)-(140-260) нм, имеющие сложную структуру. Они со-
стоят из центральной части - нуклеотида, овальных боковых тел и наружной оболочки. Нук-
леоид содержит ДНК, связанную с белком, и окружен гладкой мембраной, толщиной около
5 нм. Боковые тела как бы сдавливают нуклеоид, придавая ему форму двояковогнутого дис-
ка, имеющего вид гантели на разрезе. Нуклеоид и боковые тела окружены наружной обо-
лочкой, состоящей из липидов и трубчатых белковых структур (Рис. 104, 105).
Геном поксвирусов представлен единой 2-спиральной линейной молекулой ДНК, со-
стоящей из 130-375 тыс. п.н. Концы ДНК ковалентно связаны и содержат инвертированные
повторы различной длины. Доля Г+Ц в нуклеотидном составе поксвирусов позвоночных и
насекомых составляет соответственно 35-64 и 20%. ДНК поксвирусов не обладает инфек-
ционностью. В составе вирионов обнаружено более 100 полипептидов. С нуклеоидом ви-
риона ассоциировано 15 ферментов, некоторые из них участвуют в транскрипции ДНК и
модификации информационных НРНК: полиаденилировании, кэпировании и метилирова-
нии. Белки составляют 88%, ДНК - 5, липиды - 4, углеводы - 3% массы вириона.
Поксвирусы размножаются в цитоплазме, и зрелые вирионы выходят из клетки после ее
разрушения, а также в результате экзоцитоза без разрыва клеточной оболочки. Генетическая
рекомбинация происходит между поксвирусами, входящими в состав одного рода. Негене-
тическая реактивация наблюдается не только в пределах рода, но и между представителями
различных родов поксвирусов позвоночных. Для многих поксвирусов характерен узкий
спектр естественной патогенности. Вирусы передаются аэрогенно, при контакте и механиче-
ски посредством членистоногих (3,4).
В семействе Poxviridae выделено два подсемейства: Chordopoxvirinae (поксвирусы по-
звоночных) и Entomopoxvirinae (поксвирусы насекомых).
Подсемейство Chordopoxvirinae состоит из 8 родов: Orthopoxvirus, Parapoxvirus,
Avipoxvirus, Capripoxvirus, Leporipoxvirus, Suipoxvirus, Molluscipoxvirus, Yatapoxvirus.
1 .Род Orthopoxvirus (от греч. orthos - правильный). Включает вирусы вакцины
(прототипный вирус) и натуральной оспы (вариола), вирусы оспы коров, верблюдов, обезь-
ян, енотов-полоскунов, африканских песчанок, полевок и вирус эктромелии. Вирусы оспы
буйволов и кроликов являются подвидами вируса вакцины. Вирионы имеют кирпичеобраз-
ную форму, размер (250-300) (200-250) нм. Геном этих вирусов состоит из 185 тыс. п. н.,
доля Г+Ц 36%. Вирусы устойчивы к эфиру, обладают гемагглютинирующей активностью.
Между различными видами происходит генетическая рекомбинация. Вирусы сходны по ан-
тигенной структуре и дают между собой перекрестные серологические реакции.
2 .Род Parapoxvirus (от греч. para - около). В состав рода входят: вирус ОРФ
(контагиозного пустулезного дерматита, контагиозной эктимы - прототипный вирус), виру-
сы папулезного стоматита КРС и псевдооспы коров (паравакцины, узелков доярок). К воз-
можным представителям этого рода относят вирусы контагиозной эктимы верблюдов и
серн, вирусы оспы новозеландских красных оленей и тюленей. Вирионы имеют яйцевидную
форму, размер (220-300) (140-170) нм. Поверхностные трубчатые белковые структуры обра-
зуют спираль, обвивающую весь вирион. Геном состоит из 130-150 тыс. п. н., доля Г+Ц
64%. Вирусы чувствительны к эфиру. Между представителями рода имеется АГ родство.
722
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
З .Род Avipoxvirus (от лат. avis - птица). В состав рода входят вирусы оспы кур
(прототипный вирус), индеек, голубей, перепелок, скворцов, воробьев, попугаев, канареек и
вирус оспы юнко. В качестве возможных представителей рода рассматриваются вирусы ос-
пы павлинов, пингвинов и майи (индийских скворцов). Вирионы имеют кирпичеобразную
форму, размер 330-280-200. Геном состоит из 260 тыс. п. н. Вирусы устойчивы к эфиру и
дают между собой перекрестные серологические реакции.
4 .Род Capripoxvirus (от лат. caper, capri - коза). Включает вирусы оспы овец
(прототипный вирус) и коз, вирус кожной бугорчатки КРС (вирус Нетлинга). Вирионы
имеют кирпичеобразную форму, размер 300-270-200 им. Геном состоит из 150-160 тыс. п. н.
Вирусы чувствительны к эфиру и антигенно родственны между собой.
5 .Род Leporipoxvirus (от лат. lepus, leporis - заяц). В состав рода входят вирусы мик-
сомы кроликов (прототипный вирус) вирусы фибромы зайцев, кроликов (вирус Шоупа), бе-
лок. Возможный представитель рода - вирус злокачественной фибромы кроликов. Вирионы
имеют кирпичеобразную форму, размер (250-300)-250-200 нм. Геном состоит из 160 тыс. п.
н., содержание Г+Ц 40%. Вирусы чувствительны к эфиру и дают между собой перекрест-
ные серологические реакции.
б .Род Suipoxvirus ( от лат. suis - свинья). В состав рода входит только один предста-
витель - вирус оспы свиней. Вирноны имеют кирпичеобразную форму, размер (250-
300) 200-250 нм. Геном вируса состоит из 170 тыс. п. н.
7 .Род Molluscipoxvirus (от лат. molhiscum - моллюск). В состав рода входит один
представитель - вирус контагиозного моллюска. Под световым микроскопом вирионы вид-
ны как овоидные или моллюсковые тельца размером 320-250 нм. Геном состоит из 188 тыс.
п. н., доля Г+Ц 60%. Отличается от поксвирусов позвоночных и патогенен для человека.
8 .Род Yatapoxvirus. Название образовано из первых 2-х букв наименования состав-
ляющих его вирусов - laba (прототипный вирус) и Тала. Геном состоит из 146 тыс. п.и., до-
ля Г+Ц 33%. Вирусы патогенны для обезьян и человека и вызывают образование опухолей.
Подсемейство Entomopoxvirinae (от греч. entomon - насекомое).
Включает 3 рода: Entomopoxvirus A, Entomopoxvirus В и Entomopoxvirus С. Не имеют
антигенного родства с поксвирусами позвоночных. Вирионы представляют собой кирпиче-
образные или овоидные частицы размером (300-400)-( 175-250) нм, имеют 1 или 2 боковых
тела. Геном состоит из 225-380 тыс. п. н. Вирусы размножаются в цитоплазме гемоцитов
или жировых клеток насекомых.
В состав семейства входят еще несколько вирусов, которые пока недостаточно изучены
и не отнесены ни к одному из родов, в частности вирусы оспы альбатросов, обезьян мармо-
зеток, австралийских кенгуру, американского оленя, полевок и полосатых скунсов (1,2).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М., 1979. 2.Орлянкин Б.Г. Классиф. и номенк.
вирус, позвон. М., 1996. 3.Francki R.I.B. et.al. Arch Virol, 1991, 2. 4.Kibenge F.S.B. et.al. J
Gen Virol, 1988, 69, 8:1757.
ОСПА ОВЕЦ
Variola ovina (лат.); Scheep pox (англ.); Clavelee (франц.); Schafpocken(neM.)
Оспа овец - острая контагиозная болезнь, протекающая с характерными папулезно-
пустулезными поражениями кожи морды и других мест со слабым волосяным покровом
(экзантема) и слизистых оболочек.
В 1964 г. на XII сессии Генерального Комитета МЭБ оспу овец внесли в список наибо-
лее опасных (конвенционных) болезней животных. Она широко распространена в Турции,
46*
723
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Иране, Пакистане, Афганистане, Индии, Марокко, Алжире, Тунисе, Ливии, Кувейте и мно-
гих других странах Азии, Африки и Ближнего Востока. В бывшем Советском Союзе её эпи-
зодически регистрировали в Читинской, Саратовской, Амурской областях и Хабаровском
крае (1983), Дагестане (1986), Грузии (1983), Киргизии (1985-1986), Казахстане (1983-
1987), Таджикистане (1986) и Армении (1987). Эпизодически в результате заиоса из небла-
гополучных соседних стран бывают вспышки этой инфекции в южных регионах РФ. Она
наносит овцеводству огромный экономический ущерб, слагающийся из гибели и вынужден-
ного убоя больных животных, снижения продуктивности, затрат на проведение ветеринар-
но-санитарных и охранно-карантинных мероприятий.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Первые симптомы
болезни характеризуются кратковременным повышением температуры тела на 1-2°С, вяло-
стью и снижением аппетита. Часто эти признаки сопровождаются катаральным конъюнкти-
витом, ринитом и отеками подкожной клетчатки. Эта, так называемая предвестииковая,
стадия болезни длится обычно 1-2 дня и нередко просматривается. Затем опухают веки и
появляются истечения из глаз и носа. Оспенная экзантема чаще и более четко выступает на
малошерстных участках головы, внутренних поверхностях конечностей, хвоста и вымени, а
у баранов - на мошонке. Сначала появляются розеолы, которые затем превращаются в тем-
но-красные, быстро некротизирующиеся папулы. Последние имеют вид серо-белых и жел-
товатых плотных припухлостей с красноватыми ободками. Покрывающий их тонкий слой
эпидермиса некротизируется и легко снимается. Обнажается влажная воспаленная поверх-
ность кожи. Иногда папулы сливаются и, когда подсыхают, образуются корочки, после от-
падения которых остаются белые или розовые пятна. Если некротизируются глубокие слои
кожи, образуются толстые струпья, которые отпадают через 5-6 дн или позже. Края рано
некротизировавшихся папул слегка приподняты, а центр немного запавший. Такие папулы
называются сплюснутыми. Иногда развиваются везикулезные папулы размером 4-6 мм.
Они представляют собой многокамерные пузырьки с натянутым серо-белым некротизиро-
ванным эпидермисом с запавшей серединой.
Иногда у овец образуются виррукоидные (бородавкоподобные) папулы. Эго плотные,
сухие, цвета кофе образования, которые сверху покрыты чешуйками; при этом эпидермис
кожи может быть сильно утолщен и перерожден. Особенно тяжело протекают сливная и ге-
моррагическая формы оспы.
Вирус оспы овец (ВОО) вызывает ряд типичных изменений в коже: гиперплазию эпите-
лия и пролиферацию клеток эндотелия, выстилающего капилляры, формирование микросо-
судов эпидермы, образование элементарных телец, возникновение цитоплазматических,
включений на месте размножения. Многочисленные овальные цитоплазматические включе-
ния располагаются рядом с ядром и сходны с тельцами Гварниери. Они служат местом реп-
ликации вируса и окружены его зрелыми частицами.
Болезнь продолжается 20-28 дн, у истощенных и слабых животных - дольше. Погибают
50-80% заболевших особей (молодняк), чаще от сепсиса. При доброкачественной форме те-
чения и у взрослых животных смертность достигает 5-10%. Особенно тяжело болеют овцы
тонкорунных пород. Очень восприимчивы романовские овцы, менее восприимчивы тушин-
ские и овцы некоторых других пород (13).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Этиологию болезни установил в 1903 г. французский исследователь А. Боррель.
Устойчивость. В лимфе при температуре 2-4°С вирус выживает не менее 2 лет. Он бы-
стро погибает при высокой температуре (при 55°С за 20 мин) и в гниющем материале. Дол-
го выживает в сухих оспенных корочках, в лимфе при -5-10°С - в течение 4-5 лет, чувстви-
телен к хлороформу и диэтиловому эфиру. Остается активным в кошарах до 6 мес, на паст-
бищах и в шерсти переболевших овец до 2 мес. В 1%-ном р-ре карболовой кислоты погиба-
ет через несколько мин. Вируссодержащий лиофилизированный материал, сохраняемый при
724
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
температуре -15-20°С, остается активным до 20 лет. Культуральный вирус следует хранить
при -40°С (5-6 мес).
АГ структура. В РСК, PH и РДП в структуре вируса выявлено несколько АГ.
АГ вариабельность и родство. Все выделенные в разных странах штаммы вируса оспы
овец (ВОО) в АГ отношении идентичны. Иммунологические варианты не описаны. Выявле-
на тесная АГ связь между вирусами оспы овец и коз.
Локализация вируса. Вирус, попадающий в организм с вдыхаемым воздухом, раз-
множается в клетках эпителия дыхательных путей, вызывая типичные изменения. Отсюда
он током крови заносится в кожу и слизистые оболочки, в которых вызывает характерные
изменения. У суягных овец вирус вызывает аборт или рождение больных нежизнеспособ-
ных ягнят. В период вирусемии, когда наблюдается лихорадка, возбудитель обнаруживается
в крови, легких и почках. По окончании лихорадки и при появлении кожной сыпи из крови
и органов больного животного он, как правило, не выделяется.
АГ активность. КС антиген в оспенных корочках выявляется через 8 дн после зараже-
ния. Преципитирующая активность вирусного АГ отмечалась в 63% исследованных образ-
цов. У переболевших и гипериммунных животных выявлялись ВНА, специфический титр
которых можно определить в культуре клеток со шт., адаптированным к этой системе (11).
Экспериментальная инфекция. Болезнь воспроизводится на молодых неиммунных к
оспе овцах путем внутрикожного и подкожного заражения. Внутрикожное введение вируса с
внутренней поверхности хвоста (лучше непигментированного) практикуется при биопробе.
Культивирование. Удается на овцах по методу Борреля. Некоторые шт., адаптируясь в
ХАО КЭ, утрачивали патогенные и иммуногенные свойства. Вирус культивируется в пер-
вичной и субкультуре клеток почек и тестикул ягнят, козлят и телят, вызывая ЦПИ через 48-
96 ч (в зависимости от числа пассажей) и накапливаясь в титре до 106 ТЦД5О/о,2мл- Румын-
ский шт. LK после 49 пассажей в культуре клеток почки ягненка через 96-120 ч после зара-
жения образовывал бляшки. Шт. Perego адаптирован к гетерологичной ткани - культуре
клеток почки новорожденных телят. Вирус не размножается в клетках ВНК-21 и Vero (12).
Шт. НИСХИ ВОО успешно культивировался в клетках гонад козленка и эта линия клеток
рекомендована в качестве производственной для его репродукции. Получен культуральный
АГ, активность которого в РДСК соответствовала 1:250-1:300, а в РДП - 1:4-1:16 (1).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные,
особенно в период генерализации процесса. Вирус передается при контакте больных живот-
ных со здоровыми, а от овец, с поражениями трахеи и легких, - воздушно-капельным путем.
Спектр патогенности в естественных условиях. Вирус поражает только овец. Наибо-
лее восприимчивы овцы породы меринос и менее - животные грубошерстных пород. Неко-
торыми шт. вируса удавалось вызывать местные поражения у коз, газелей и КРС. К оспе
овец восприимчивы домашние козы и дикие животные - сайгаки и козероги. Последние мо-
гут служить источником инфекции и переносчиком возбудителя (9).
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят с учетом эпизоотологических данных, результатов клинического обсле-
дования, биопробы и вирусоскопии мазков (Рис. 106) из свежеразвившихся первичных оча-
гов поражения или мест инокуляции вируса при постановке биопробы. В этих случаях необ-
ходимо найти животных с характерными оспинами гнездно-сетчатого строения с кратерооб-
разными углублениями, чего при других экземах, как правило, не бывает.
При типичном течении диагностировать оспу не трудно. При тщательном обследовании
овец пораженной отары всегда можно найти отдельных животных с типичными оспинами
на разных стадиях формирования. У одного и того же животного оспины образуются ие од-
новременно, одни находятся в стадии розеол, другие - в стадии папул.
725
Глава ХУП. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Выделение вируса. Для исследования берут содержимое везикул или пустул, поверх-
ность которых предварительно очищают ватным тампоном, смоченным эфиром или спир-
том. Для гистологического исследования вырезают измененные участки кожи на границе с
неизмененными. Патологический материал для вирусологических исследований следует пе-
ресылать в замороженном или охлажденном (до 4-6°С) виде. Обычно при абортивном н не-
ясном течении болезни ставят биопробу иа неиммунных молодых овцах. Испытуемую сус-
пензию, приготовленную общепринятым методом в разведениях 1:20 и 1:200, инокулируют
внутрикожно в бесшерстную поверхность хвоста в дозе 0,1-0,15 мл. Наблюдение ведут в те-
чение 10 дн. В положительных случаях на месте инъекции развивается местный оспеииый
процесс (розеола, папула, везикула, пустула, некроз), специфичность которого подтвержда-
ют методом вирусоскопии мазков, приготовленных нз срезанного эпителия розеолы, на при-
сутствие элементарных частиц.
Прн положительной биопробе и вирусоскопии необходимость в других методах лабора-
торной диагностики (РИФ, РДП и т.п.) отпадает.
Серологическая идентификация
ИФ. Исследование (прямой метод) проводят общепринятым методом. При наличии
ВСЮ в клетках инфицированной культуры с 6-8-го ч после заражения в отдельных участках
цитоплазмы появляются светящиеся очаги. Позже начинают светиться обширные участки.
РДП. Для получения сыворотки, годной для использования в РДП, иммунизируют кро-
ликов овиной, делают 2-4 внутривенные инъекции в объеме 2; 1; 0,5 и 0,25 мл с интервалом
в 5 дн. Через 7 дн после последней инъекции у кроликов берут кровь для получения сыво-
ротки. Полученные кроличьи сыворотки необходимо истощить культурой фибробластов эм-
бриона овцы. РДП ставят общепринятым методом.
Дифференциальная диагностика. Оспу овец и коз в стадии образования пустул и ко-
рок следует дифференцировать от парши, чесотки, пустулезной экземы и контагиозного пус-
тулезного дерматита (эктимы) овец и коз.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Естественно переболевшие животные приобретают иммунитет не менее чем иа 2 г. В
течение 8-10 мес в сыворотке крови обнаруживают ВНА в титрах 1:20 - 1:40. Угасание тит-
ра АТ не сопровождается одновременным снижением постинфекциониого иммунитета. Для
специфической профилактики оспы овец в бывшем СССР на протяжении многих лег при-
меняли инактивированную ГОА формолвакцину, предложенную Н.В. Лихачевым и др. еще
в 1943 г. Она сыграла большую положительную роль в борьбе с инфекцией, однако из-за
ряда существенных недостатков (сложность и неэкономичность технологии, длительность
формирования нестойкого и непродолжительного иммунитета, а также нестабильность при
хранении и громоздкость при транспортировке) с 1989 г. была снята с производства.
За рубежом широко используют вирусвакцину из аттенуированного шт. RM/65, однако
она малоэффективна против некоторых местных полевых изолятов ВОО в Индии и Марокко
(17, 19, 20). Поэтому была разработана вирусвакцина на основе аттенуированных вариан-
тов местных эпизоотических шт. возбудителя (16,18,19).
Сотрудники ВГНКИ ветпрепаратов (3, 10) создали живую культуральную вакцину из
вируса, адаптированного к культуре клеток почек крольчат, но из-за низкой иммуногенно-
сти она не нашла практического применения. В 1991 г. НИСХИ получил новый аттенуиро-
ванный шт. НИСХИ путем серийных пассажей вирулентного ВОО в культуре клеток почки
ягнят н последующего клонирования его методам бляшек (4, 5, 6, 7). Изготовленная иа ос-
нове этого шт. культуральная вирусвакцина характеризовалась меньшей реактогенностью и
более выраженной иммуногенностью (6). Вакцина производится с 1983 г. Шт. НИСХИ не
передается от вакцинированных овец к не привитым, не реверснбелен, стабильно сохраняет
основные биологические свойства при пассажах в культуре клеток ПЯ, устойчив при хране-
726
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
нии в нативном виде и в модифицированном состоянии при различных температурах (2).
Полная защита привитых овец наступает через 11 сут, длительность иммунитета до 12 мес.
Родившиеся от привитых овец ягнята приобретают с молозивом иммунитет продолжитель-
ностью до 3 мес. С 1985 г. сухая культуральная вирус-вакцина из шт.НИСХИ против оспы
овец внедрена в ветеринарную практику (8).
Вакцинный шт.“Ставропольский” при всех методах введения - внутримышечно, внутри-
кожно, проколом ушной раковины, интраназально, аппликацией на ограниченную диссими-
нацию в организме. Он создает напряженный иммунитет через 5 сут после внутримышечной
инокуляции (1000-1500 ИДзо/мл) сроком на 12 мес и через 11 сут после внутрикожной при-
вивки (100 ИДзо/о,о15мл) - в течение 2-х лет (14)..
В настоящее время для получения вакцины против оспы овец широко используется пер-
вичная культура клеток почки ягнят. Оказалось, что вакцина, полученная методом культи-
вирования вируса в линии клеток гонад козленка, безвредна и высокоиммуногенна (1а).
Сухая культуральная вакцина из шт. НИСХИ против оспы овец обладает выраженной
противоэпизоотической эффективностью при применении в очаге инфекции и угрожаемых
зонах. Ее использование обеспечивает устойчивое благополучие по этой болезни (4).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Диев В.И. и др. Сб. тр. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :131. 2.Диев В.И. и др. Тез. докл. Все-
росс. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995. З.Жидкова Л.А. и др. Тез. докл. 1У Всесоюзн.
Вет. вир. конф.,1976. 4.Иванющенков В.Н. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, Владимир,1995 :254.
5.Иванющенков В.Н. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, Владимир,1995:186. 6.Иванющенко В.Н. и
др. Ветер.,1990, 7 :8. 7.Курченко Ф.П. и др. Ветер., 1991, 10 :21. 8.Курченко Ф.П. и др. Ве-
тер.,1993, 11 :36. 9.Керембекова У.Ж. и др. Вести, с/х науки Казахстана, 1992, 3 :122.
10.Лихачев Н.В. Ветер, 1945 :2. П.Орлянкин Б.Г. С/х. биол. 1995:4. 12.Сюрин В.Н. и др.
Част. вет. вирусол. М., Колос, 1979. 13.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. животных. М. Аг-
ропромиздат, 1991. 14.Черняк Е.П. и др. Ветер,1991, 3 :24. 15.Bull off Inst Epizoot, 1981 -
1990. 16.Das S.K. et.al. J Exp Biol 1986, 24, 6 :282. 17.Fassi-Fehri M. etal. Ann Rech
Vet,1984 :15. 18.Martin W.B. etal. Res Vet Sci, 1984 :54. 19.Singh J.P. etal. Anim Sci 1984
:54. 2O.SharmaP.C. et.al. Indian J Anim Sci,1987 :57.
ПАПУЛЕЗНЫЙ СТОМАТИТ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine papular stomatitis, Stomatitis papulosa of cattle, «Infectious ulcerativ,
erosive, proliferativ or pseudo-aphtous stomatitis of cattle» (англ.);
Stomatitis papulosa des Rindes (нем.)
Вероятно, это та же болезнь, что и язвенный стоматит (Ulcerative stomatitis), папулезный
стоматит, псевдоафтозный стоматит, эрозионный стоматит КРС. Расхождения в наименова-
нии болезни позволяют предположить, что указанную болезнь вызывает несколько агентов.
Папулезный стоматит КРС вызывается вирусом из семейства оспенных (Poxviridae) и
характеризуется слегка возвышающимися папулами вокруг рта. Болезнь распространена в
Северной Америке, Африке, Европе и Австралии. Заболевание впервые описано в 1947 г.
Поражения в ротовой полости несколько сходны с поражениями, наблюдаемыми при ящуре
(Рис. 166). Иногда образуются кратерообразные язвы диаметром до 1 см. Генерализации
процесса не бывает. Заболевание сопровождается температурой, лейкопенией, иногда диа-
реей. Многие авторы обнаруживали цитоплазматические включения, содержащие паранук-
леарный ацидофильный компонент, окружённый кольцеобразной зоной.
727
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус вызывает цитоплазматические включения 2-х типов: базофильные, соответствуют
включениям типа В (описанным Карго) и эозинофильные, соответствуют включениям типа
А. Первые состоят из вироплазмы и большого количества вирионов, находящихся на разной
стадии развития, а вторые содержат бледную зернистость и непрозрачный матрикс без ви-
русных частиц. Вирус относится к роду Parapoxvirus. Это ДНК-содержаший липовирус.
Впервые его описал Речко ( 1957 ) и Притчард (1958 ). По данным Кастручи и Мак Керчера
( 1970 ), размер вириона 280-160 нм.
Устойчивость. Вирус чувствителен к pH 3, термолабилен, устойчив к гидроксилбензи-
мидазолу (50 мгк/мл) и трипсину (0,125 %). От телят выделены 2 изолята этого вируса: 721
и 8665. По антигенной характеристике они не различались, но были антигенно отличными
от вируса Orf (Rosenbu,1982). Вопрос об антигенном родстве между вирусами паравакцины
и папулезного стоматита КРС не решен. ГА-свойства не установлены.
Культивирование. Вирус хорошо размножается в первичной культуре клеток почек
эмбриона КРС, вызывая ЦПД и образование включений.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Вирус папулезного стоматита КРС патогенен для кроликов, новорожденных и взрослых
мышей, не культивируется в КЭ. Источники и пути передачи инфекции не изучены.
ДИАГНОСТИКА
Диагностика болезни не разработана. Ее необходимо дифференцировать от ящура, вези-
кулярного стоматита и ИРТ КРС.
Иммунитет и специфическая профилактика не изучены.
ОСПА ПТИЦ
Variola avium, Epitheliosis contagiosa cutis et mucosae avium, Epithelioma et diptheriae
avium (лат.); Fowl pox, Bjrd or chicken pox and avian diphtheria, Avian pox, Contagious
epithelioma, Borreliota avium (англ.);'Vogelpocken, Geflugelpocken und Geflugrldiph-
1 therie (нем.); Variole aviaire (франц.)
Оспа птиц (ОП) - контагиозная болезнь кур, голубей,- канареек, скворцов, индюков, фа-
занов. У кур проявляется в 2-х формах: оспенной и дифтеритической. Возможно смешанное
течение болезни. ' , ,
Болезнь распространяется повсеместно, проявляется во все времена года, но чаще вес-
ной и осенью. Экономический ущерб заключается в резком и продолжительном снижении
яйценоскости, вынужденноц убое больных и переболевших птиц.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод длится 15-20 дн, при экспериментальном заражении - 10-14 дн. Общее состояние
больной птицы ухудшается, аппетит исчезает, появляется вялость; у кур-несушек резко сни-
жается яйценоскость. В дальнейшем на коже гребня, бородок, углов рта, век, иногда на опе-
ренных частях головы, шеи, затылка, живота, конечностей, окружности клоаки, появляются
бледно-желтые пятньпйки. Вскоре оспинки покрываются желто-серым или красно-бурым
кровянистым струпом, становятся очерченными и твердыми. Рядом расположенные оспины
сливаются друг с другом, образуя небольшие бугры-бородавки. Процесс высыхания и обра-
зования струпа длится 2-3 нед (Рис. 168, 169). Больные куры часто склевывают друг у друга
оспинки, способствуя распространению инфекции.
Дифтеритическая форма ОП проявляется поражением слизистых оболочек ротовой и
носовой полости, подглазничной ямки. На слизистой оболочке ротовой полости вначале
возникают мелкие, ясно очерченные округлые желтовато-белые возвышающиеся пятна ве-
728
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
личиной от чечевицы до 10-копеечной монеты, которые, разрастаясь, сливаются в ложные
перепонки - мягкие, иногда кашицеобразные (особенно у голубей), легко снимающиеся или
сухие плотные творожистые, трудно снимающиеся. Дифтерические пленки появляются
главным образом под языком или по краям его, на щеках, в углах рта, вдоль небной щели, в
зеве, окружности гортани и даже трахее. Для пленок оспенного характера типично глубокое
врастание их в слизистую оболочку. Гортань поражается наиболее часто. Дыхание сильно
затруднено, больные птицы вытягивают шею, дышат с открытым клювом. Прием пищи за-
труднен, рот часто открыт. При распространении дифтеритического процесса на носовую
полость появляется насморк. Из ноздрей вытекает серозная или слизистая, впоследствии
гнойная жидкость грязно-желтого цвета, которая, подсыхая, заклеивает носовые ходы. При
поражении носоглотки в процесс вовлекается слезный канал и подглазничная ямка. Послед-
няя заполняется воспалительным экссудатом и выпячивается под глазом в виде горячей бо-
лезненной припухлости плотной консистенции величиной с лесной орех.
Часто отмечается поражение глаз. Появляется светобоязнь, покраснение и отечность их.
Слизисто-гнойный экссудат высыхает у краев век и склеивает их. При искусственном рас-
крывании глазной щели на роговице видно гнойно-творожистое наложение, а на поздних
стадиях процесса обнаруживается засохший беловатый гной. Чаще поражаются оба глаза
(“совиная голова”). Воспаление может распространиться на склеру и роговицу.
При кожной форме оспы обычно обнаруживают бородавчатые образования, покрытые
бурым кровянистым струпом, чаще на гребне, бородках, сережках, у основания клюва, на
щеках, иногда на коже по всему туловищу. Течение болезни преимущественно хроническое.
Оспа, протекающая без осложнений, заканчивается в течение 5-6 нед. Кожная форма чаще
протекает доброкачественно. Нередко отмечают стертые формы ОП. Переболевшие куры
становятся истощенными, многие слепнут на один или оба глаза. Летальность среди взрос-
лых кур достигает 10-20%, среди молодняка, особенно в холодное время года - 50-70%.
Прогноз при дифтеритической форме в общем неблагоприятный.
Сообщалось об изменении клинического проявления ОП, наблюдаемой с 1973-1974 гг.
Тяжелые поражения были только в трахее: сильное воспаление и обширное набухание сли-
зистой оболочки трахеи с некротическими наслоениями вызывали сужение и закупорку про-
хода, что вызывало высокую смертность птицы (10-35%) вследствие удушья.
Трахеальную форму ОП наблюдали в Новой Зеландии, Южной Америке. Ею поража-
лись только куры-несушки, содержащиеся в клетках.
Описаны и атипичные случаи ОП у молодых несушек в зимний период. Процесс проте-
кал атипично и характеризовался незначительным снижением яйценоскости, ломкостью пе-
чени и казеозными наложениями в верхней части трахеи.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Формы болезни известны давно. Вначале их считали различными инфекциями. После
того, как Маркс и Штиккер в 1902 г. доказали, что кожная форма вызывается вирусом, а в
1907 г. Карноут показал, что вируссодержащими эпителиомами можно вызвать оспенное
поражение слизистых оболочек, установилось единое представление о возбудителе оспы и
дифтерита птиц. За последние 10-15 лет в отечественной и зарубежной литературе опубли-
кован ряд сообщений о биологических свойствах полевых и вакцинных шт.вируса оспы кур,
диагностики инфекции и ее эпизоотологических особенностях (2,18,11,19,14,6,13, 4).
Устойчивость. Вирус чувствителен к высокой температуре. Высушивание и холод кон-
сервируют его. В оспенных корочках при температуре -15°С он выживает до 2 лет и более.
В лиофилизированном виде при хранении под вакуумом оспенный материал остается виру-
лентным до 8 лет. Чувствителен к этиловому спирту, быстро погибает в гниющем субстрате.
АГ структура. В составе очищенного вируса ОП обнаружено 29 полипептидов с мол.м.
14-138 кД (17). Наивысшей антигенной и иммуногенной активностью обладают полипепти-
729
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
ды с мол.м. 35 и 37 кД (17). За индукцию ВНА вируса ОП ответственны АГ, расположенные
на поверхности наружной оболочки вириона и прежде всего белок 58 кД (VP4c), являющий-
ся основным структурным компонентом трубочек (ворсинок). Антисыворотка к этому белку
нейтрализует инфекционность вируса и предотвращает образование синцития в культуре
клеток. Этот белок ответственен за выработку иммунитета (12). Выявлен 21 белок, коди-
рующий вирус оспы птиц. Эти белки можно разделить на пререпликативные и постреплика-
тивные по аналогии с вирусом осповакцины. В первую группу входит белок 70 кД (7, 8,9).
Внеклеточные вирионы вируса ОП покрыты дополнительной наружной оболочкой, от-
сутствующей у внутриклеточных вирионов. Она играет важную роль в индукции синтеза
ВНА. Используются рекомбинантные вакцины на основе вируса ОП. Размер генома вируса
допускает встраивание нескольких генов, позволяя получить мультивалентные вакцины, а
также вакцины. Эффективными вакцинами показали себя экспрессируемые с рекомбинант-
ным вирусом ОП антигены вируса НБ, гриппа птиц, ИББ, БМ. Приведены данные разных
лабораторий по получению и испытанию этих препаратов. Пока не ясно, можно ли с их по-
мощью решить проблему вакцинации в 1-й дн жизни, при наличии у вылупляющихся птен-
цов высокого уровня материнских АТ (11а).
Антигенная вариабельнось и родство. Между вирусами оспы кур, голубей и индеек
имеется родство. Вирус оспы канареек в иммунологическом отношении отличается от воз-
будителей оспы кур и голубей (табл. ХУПЛ).
Таблица XVII. 1. Сравнительная патогенность и иммунологическое
родство между вирусами оспы птиц
Вирус Реакция Иммунитет
оспы кур голубей канареек кур голубей канарек
Кур + ± + + -
Голубей + + - + + • -
Канареек + + - - - +
АГ вариабельность у вируса оспы кур не установлена. Шт. существенно различаются по
спектру патогенности и степени вирулентности. С помощью РСК, PH и РДП установлено
антигенное родство вируса оспы кур с вирусами оспы овец и коз. Антигены ВОП, миксома-
тоза кроликов, экгромелии мышей и оспы коров идентичны. Вирус оспы перепелов иммуно-
логически отличен от вирусов оспы голубей и кур и защищает цыплят, голубей и индеек
только против себя. Также иммунологически отличен вирус оспы попугаев.
Локализация вируса. В естественных условиях у больной птицы вирус локализуется в
оспинах. В период предшествующей генерализации оспенного процесса (на 17-20-й дн после
инфицирования), вирус можно обнаружить в крови, почках, яичниках, селезенке, головном
мозге и других органах. Однако он чаще обнаруживается в бесперьевых участках кожи го-
ловы и иа слизистой оболочке глотки, гортани, трахеи. В органах и тканях переболевших
кур вирус выживает до 487 дн (срок наблюдения). Наружу вирус выделяется с вируссодер-
жащим корочковым материалом больных птиц.
АГ активность. В сыворотках крови больных и экспериментально зараженных кур с 4-
7-го дня появляются анти-ГА в титре 1:10 - 1:80 и достигающие к 22-30 дн. титра 1:160 -
1:640, далее идет снижение титра. РЗГА специфична, ее можно использовать для диагно-
стики оспы. У гипериммунизированных вирусом оспы кур выявляются специфические АТ -
преципитины. Преципитирующая сыворотка при 4°С сохраняет активность до 300 дн. АТ в
сыворотке крови кур после 1-кратного введения им оспенного вируса реагируют только с
полипептидами мол.м. 37 и 35 кД, тогда как АТ после вторичной инокуляции курам вируса
730
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
оспы реагируют еще с 6-ю другими структурными белками вируса ОП. Иногда полевые ви-
рулентные изоляты вызывают образование анти-ГА в высоком титре, но ВНА - в низком.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится ВОК у неиммунных цыплят и
кур при заражении в скарифицированную кожу гребня, бородки, сережек и обнаженные
перьевые фолликулы. Вирусом оспы голубей удается получить оспенный фолликулит у го-
лубей (на груди) и доброкачественный (без некроза) фолликулит у цыплят (8,9).
Культивирование. Вирусы оспы кур и голубей хорошо размножаются на ХАО КЭ,
различаясь между собой по характеру поражения мембраны и степени генерализации. Шт.,
относящиеся к куриному вирусу оспы, как правило, поражают ХАО и обнаруживаются в
тканях и органах зародыша, а голубиный вирус оспы обычно не вызывает генерализованно-
го процесса в эмбрионе и размножается преимущественно в зоне отслоенного участка ХАО.
Кроме эмбрионов, вирус оспы кур культивируется в клетках фибробластов КЭ, вызывая
ЦПИ (округление и вакуолизацию клеток, образование гигантских клеток с 5-7 ядрами).
Максимум инфекционной активности наблюдается к 72 ч. Вирус хорошо репродуцируется в
перевиваемой линии клеток QT-35. Вирус оспы перепелок (шт. QP-241) размножается в
культуре фибробластов. В первых пассажах он не вызывает ЦПД.
ГА свойства. Вирус способен АГ эритроциты кур пород белой русской и леггорн. Оп-
тимальными условиями реакции ГА являются: 0,5%-ная взвесь эритроцитов, pH физиологи-
ческого р-ра 7,2-7,4 и температура 37°С. Адсорбированные ГА с эритроцитов не элюируют,
их удается отделить специфической иммунной сывороткой. Суспензия вируса оспы, консер-
вированная 0,5%-ным формалином, при хранении в темном месте при 4°С сохраняет свою
ГА активность более 8 мес и может быть использована в РГА и РЗГА. Все шт. вируса про-
являют одинаковую Г А-активность. За ГА-активность вируса ОП ответствен полипептид 85
кД и гликопептид 41 кД. Внутриклеточные вирионы (без дополнительной оболочки) не со-
держат полипептида 85 кД. Неструктурный ГА формируется на цитоплазматических мем-
бранах. С его образованием инфицированные клетки приобретают способность адсорбиро-
вать эритроциты (5).
ГАд свойства не изучены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Основной источник - больная птица. Пере-
носчиками могут быть насекомые. Доказана передача вируса оспы кур посредством
Guliceides arakawae. Механические носители ВОП - клещи A. persicus, D. gallina, S.
bipectinatus и клопы Cimex lectularius. Вирус оспы кур в организме зараженных в естест-
венных условиях клещей A. persicus сохраняет активность до 730 дн, передается в после-
дующее поколение трансовариально, в организме клещей D.gallinae - соответственно до 300
и 240 дн. Однако чаще птицы заражаются при контакте с больной птицей, через загрязнен-
ные вирусом корма, инвентарь, одежду обслуживающего персонала. В организм вирус про-
никает через поврежденные кожу и слизистые оболочки.
Спектр патогенности в естественных условиях. Большинство выделяемых полевых
шт. вируса оспы кур патогенны для птиц этого вида. Однако в экспериментальных условиях
некоторые шт. могут вызвать заражение норок, уток, ястребов и канареек. Встречаются так
называемые бипатогенные и трипатогенные шт. оспы кур; они заражают кур и голубей или
кур, голубей и индеек Шт. Никано и Хоккей обладают широким спектром патогенной ак-
тивности; вызывают оспенную реакцию у цыплят, голубей и кроликов. По спектру патоген-
ности ВОП могут быть расположены в таком порядке: голуби, индейки, куры и канарейки.
Вирус оспы перепелов (шт. QP-241) вызывает гибель перепелов-цыплят. При кожном зара-
жении у голубей развивается слабовыраженная фолликулярная реакция. Вирус оспы выде-
лен из бородавкоподобных поражений у 3-х видов австралийских диких птиц: сороки
Gymnorhina tibicen, белоглазки Zosterops laterales и сорочьего жаворонка Grallina
731
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
cyanoleuca. Все 3 вируса не вызывали ЦПД в культуре фибробластов КЭ. В PH, РДП пока-
зана АГ близость этих вирусов с вирусами оспы кур и голубей, но они не давали антигенных
перекрестов с вирусом осповакцины.
ДИАГНОСТИКА i
Диагноз на ОП ставят на основании эпизоотологических данных, результатов клиниче-
ского обследования птиц, вирусологических и серологических исследований. Если имеются
типичные оспенные поражения кожи, гребня, сережек и лицевой части головы, диагноз по-
ставить не трудно. Если же поражения локализуются только в роговой и носовой полостях,
диагностировать болезнь значительно труднее.
Выделение вируса
Выделение вируса на КЭ. Из 10%-ной суспензии, свободной от микрофлоры, готовят
разведения 10'2 и 10'3 на физиологическом р-ре. Каждым разведением (по 0,2 мл) заражают
на ХАО по 4 10-12-дн КЭ, которые инкубируют в течение 6 дн. КЭ, погибшие на 3-и сут и
позже, а также оставшиеся живыми на 6-е сут после заражения охлаждают и вскрывают. В
положительных случаях на ХАО обнаруживают отдельно расположенные или слившиеся
оспины. Под влиянием вируса оспы голубей возникают наиболее крупные, толстые, ком-
пактные, с выпуклой серединой очаги оспенных поражений диаметром 5-6 мм, не имеющие
признаков некроза. При высокой заражающей дозе наблюдается значительное утолщение и
железообразный отек всей оболочки (вид медузы).
От вируса оспы кур появляются более мелкие (3-5 мм в диаметре) плоские поражения,
иногда с неровными краями. При большой заражающей дозе наблюдаются обширные утол-
щения оболочки, которая имеет беловатую окраску. Вирус оспы индеек дает беловатые сла-
бо выраженные очаги поражения диаметром 2-3 мм, часто окруженные кольцеобразной зо-
ной. Вирус оспы канареек образует дифференцированные очаги. Первичные очаги средней
величины, разлитые и напоминают поражения, вызываемые оспой голубей. Вторичные оча-
ги имеют вид мелких беловатых точек. От вируса осповакцины появляются хорошо види-
мые очаги уже на 3-й дн после инфицирования. Они плоские, диаметром 2-3 мм, с отчетли-
во видимым центральным некрозом в первичных очагах. Из оспенных поражений ХАО де-
лают тонкие мазки или отпечатки на предметных стеклах и окрашивают цо Морозову или
Пашену для выявления элементарных оспенных телец (вирионов). Выделение вируса на КЭ
проводят до 3-х пассажей.
Биопроба. Биопробу проводят на неиммунных к вирусу оспы цыплятах 3-4-мес возрас-
та. Для этого используют 10%-ную суспензию материала, полученного от естественно боль-
ной птицы, или суспензию ХАО зараженных КЭ. В том и другом случаях испытуемый ма-
териал осторожно втирают стеклянной палочкой или зубной щеткой в скарифицированную
поверхность гребня, бородок, а также в освобожденные от перьев фоллцкулы голени. При
наличии в материале вируса оспы на месте втирания на 5-6-й дн развиваются оспенные по-
ражения: припухание и покраснение фолликулов, появление на поверхности их гнойных
пробочек, затем струпьев, которые в дальнейшем, сливаясь, дают общий струп коричневого
цвета. Специфичность оспенных поражений у экспериментально зараженной птицы в каж-
дом случае может быть подтверждена при помощи вирусоскопии мазков. У кур, заражен-
ных вирусом оспы голубей в перьевые фолликулы, развивается доброкачественный фолли-
кулит (без некроза), который к 10-12-му дню исчезает. Вирус оспы кур после нескольких
пассажей на индейках может вызывать оспенный процесс у голубей, а после нескольких
пассажей через них ослабить свою вирулентность по отношению к курам и индейкам.
Индикация вируса
Вирусоскопии. Готовят мазки из воспаленных фолликулов голени экспериментально
зараженных кур или голубей или из свежих оспенных бородавок естественно больной пти-
цы. Окрашивают их методом серебрения по Морозову, на присутствие элементарных телец
можно окрашивать также по методу Герцберга илн Пашена.
732
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
При иммерсионной микроскопии элементарные тельца Борреля просматриваются в виде
мелких (200-300 нм) округлых образований темно-коричневого или черного цвета, распо-
ложенных поодиночке, парами, короткими цепочками, в виде скоплений. Присутствие ос-
пенного вируса считается подтверждением только при обнаружении характерных телец в
массовом количестве. Достоинством метода вирусоскопии следует считать быстроту ответа
(0,5-1 ч после доставки материала в лабораторию), простоту и доступность. Однако есть и
некоторые недостатки: наиболее четкие результаты при вирусоскопии можно получить при
использовании срезов от свежих везикул (до нагноения) или везикулярной жидкости; при
исследовании пустулезной жидкости, особенно корок, возможность обнаружения элемен-
тарных телец и достоверность полученных результатов значительно снижаются. Вирусоско-
пические исследования могут быть проведены также с использованием техники фазово-
контрастной микроскопии.
ЭМ. В эпителии оспин можно найти вирус ЭМ методом после адсорбции на коллодие-
вую пленку. При этом выявляются как незрелые пузырьковидные вирусные частицы разме-
ром от 60 до 200 нм, так и типичные кирпичеобразные и овальные зрелые вирионы. При не-
гативном контрастировании видны филаментозные структуры вирионов. Диагноз считают
установленным при наличии в препаратах одиночных или расположенных группами оспен-
ных вирионов (Рис. 108). Метод позволяет определить не только размеры исследуемых ви-
русов, но и форму и структуру их (7, 8,9).
Обнаружение телец-включений. В цитоплазме инфицированных клеток обнаружива-
ют 2 типа телец-включений (телец Боллингера): первые представляют собой волокнистый
материал, соответствующий зрелым вирионам (тельца -включения типа В), вторые - зрелые
вирионы (тельца-включения типа А), имеют структуру, идентичную структуре других
штаммов вируса оспы кур. Предложен метод определения телец Боллингера в раздавленных
срезах, изготовление которых доступно каждому ветеринарному специалисту непосредст-
венно в производственных условиях. Для этого лезвием безопасной бритвы срезают вер-
хушку оспины, следующий, предназначенный для исследования срез, делают как можно
тоньше. Со слизистой оболочки срез производят ножницами. Полученный срез в расправ-
ленном состоянии кладут в капле воды между двумя предметными стеклами, которые для
удобства микроскопии смещают продольно относительно друг друга на 1,5-2 см. Раздавлен-
ный срез осторожно снимают с предметного стекла, красят Суданом III 10-15 мин, после че-
го промывают в воде и в капле воды накрывают покровным стеклышком (1).
Быстрый и простой метод гистологических исследований (18) позволяет в течение не-
скольких часов обнаружить цитоплазматические тельца-включения и дифференцировать ос-
пенную инфекцию от ИЛТ кур.
Серологическая идентификация
РДП. При оспенной форме болезни для приготовления АГ ex tempore используют ку-
сочки гребешка или кожи с оспенными поражениями, легкие, печень, а при дифтеритиче-
ской форме - гортань, трахею, легкие и инфицированные вирусом ХАО КЭ. Преципити-
рующие линии из суспензии легкого и печени довольно четкие, но они в 2-3 раза слабее, чем
из суспензии гребешка и кожи. Положительная РДП подтверждает диагноз на оспу, а отри-
цательная не дает права исключать ее.
Помимо РДП для исследования сывороток используют тест встречного ИЭФ. В сыво-
ротках бройлеров с помощью РДП АТ выявляются позже, чем в тесте ВИЭФ. Последний
имеет преимущества в отношении выявления ранних преципитинов. Тест прост и быстро
воспроизводится. Для проведения ВИЭФ требуется всего лишь 45 мин в условиях комнат-
ной температуры. Линии преципитации видны без окрашивания (16).
ИФ. Для индикации вируса используют метод простого флюорохромирования акриди-
новым оранжевым, а также метод флюоресцирующих АТ. Последний является экспресс-
733
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
методом диагностики ОП при исследовании препаратов -отпечатков из оспенных поражений
больной птицы, зараженной культуры клеток КЭ и т. д. Результаты исследования материала
можно иметь через 5-7 ч после поступления его в лабораторию.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Разработана методика постановки
РИГА для диагностики оспы кур с использованием как нативных, так и формалинизирован-
ных бараньих эритроцитов. В диагностических лабораториях применяется РДП в агаровом
геле. Антигеном служат ХАО, собранные на 4-5-й день после заражения КЭ. Преципити-
рующую сыворотку получают от естественно больной и переболевшей птицы. С помощью
РДП с заведомо “активным” эмбриональным вирусом оспы кур можно выявить присутствие
специфических АТ у кур, не имеющих видимых клинических признаков заболевания. РДП
ставят по методу Джордани и Чабб (1962), модифицированному Г.А.Лежава (ВГНКИ вет-
препаратов, 1964). При этом надо учитывать, что ПА в сыворотке крови обычно появляются
между 11 - 36 дн после заболевания кур оспой. Сыворотка крови птицы, зараженной сильно
вирулентным шт. вируса оспы, обычно дает более выраженную РДП. Однако преципити-
рующая сыворотка реконвалесцентов часто оказывается слабоактивной, а у 15% больных
оспой кур ПА не удается выделить совсем.
Разработан ELISA для определения АТ к вирусу ОП.
Дифференциальная диагностика. ОП следует дифференцировать от авитаминоза А,
ИЛТ, ИБК, пастереллеза, парши, аспергиллеза и респираторного микоплазмоза.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Куры, переболевшие оспой в естественных условиях, приобретают иммунитет на 2-3 г..
Поствакцинальный иммунитет менее продолжителен и зависит от характера вакцины. Для
специфической профилактики ОП применяют живые вакцины 2-х типов: приготовленные из
иммуногенных и ареактогенных шт. гетерологичного вируса оспы голубей илн из аттенуи-
рованного или природно ослабленного ВОП 27-АШ. В СНГ применяют сухую вирусвакцину
из вируса оспы голубей (шт. НД). Вирусвакцину из голубиного вируса (Рис. 108) оспы реко-
мендуют для цыплят 1-1,5-мес возраста. Иммунитет у привитой птицы наступает через 3
нед и сохраняется около 3 мес у цыплят и до 10 мес у кур. При использовании вакцины из
вируса оспы голубей напряженность и длительность создаваемого иммунитета во многом
зависит от числа воспалившихся после вакцинации перьевых фолликулов. Считают, что для
создания напряженного иммунитета у птицы голубиной вакциной каждая доза последней
должна иметь титр не менее 105 ЭИД 50, а у птицы, привитой вакциной в рабочем разведе-
нии, должно быть не менее 15 воспалившихся фолликулов. Проведены успешные опыты аэ-
розольного применения вирус-вакцины из голубиного штамма оспы Нью-Джерси. При та-
ком методе вакцинации иммунитет у цыплят формируется к 11 сут и сохраняется не менее
190 дн. Ф.Б. Ширинов (10) выделил природно ослабленный ВОП и, всесторонне изучив его,
рекомендовал для широкого применения в качестве живой вакцины с профилактической це-
лью. 5-летний срок использования этой вакцины дал основания оценить ее положительно.
Однако в настоящее время в РФ применяется сухая вакцина из шт. ВГНКИ из куриного ви-
руса. Ее готовят на основе аттенуированного культурального шт. К. Птицу иммунизируют
методом укола в перепонку крыла. Реакция на введение вакцины наступает на 5-8-й дн и ха-
рактеризуется образованием на наружной и внутренней поверхностях перепонки крыла ос-
пин, которые исчезают через 28-30 дн. По эффективности и иммунобиологичским показате-
лям, технологии изготовления и применения эта вакцина превосходит все предыдущие (3).
В Австралии проводят вакцинацию цыплят путем добавления в корм коммерческого
препарата. По данным авторов, вакцинация per os с кормом дешевле аэрозольной вакцина-
ции, поскольку требует гораздо меньшего количества вируссодержащего материала при
одинаковом индуцировании АТ (15).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета не разработана.
734
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Апатенко В.М. Ветеринария., 1964, 4:32. 2.Борисович Ю.Ф. Вет. препар., ВГНКИ, 1981.
З.Гуненков В.В. и др. Ветеринария, 1991, 6:22. 4.Дутко Ю.С. и др. Ветеринария, 1980, 5 .38.
5.Сергеев В.А. и др. Стукт. и биология вирусов животных, М,1983. б.Сюрин В.Н. Оспа
птиц, М, Сельхозиздат,1954. 7.Сюрин В.Н. и др. Диагностика вир. бол. жив., М, Агропром-
издат,1991. 8.СюринВ.Н., Фомина Н.В. Част. Вет. вирусол. М, Колос, 1979. 9.ФоминаН.В.
и др. Вирусы животных, MBA, 1991. 10.Ширинов Ф.Б. Ветер., 1983, 10 :37. ll.Annuar В.О.
et.al. Arch Virol, 1983, 76, 3 :217. lla.Boyle D.B. et.al. Imm and Cell Biol, 1993, 71, 5 :391.
12.Dales S. et.al. Biol of Poxviruses, Springer Verb,1981. 13.Fernen de Z.D. An Fac vet,
Leon,1978, 24, 1 :79. 14.Fukuda T. et.al. Nat Inst Anim Health Qurt 1979, 19, 3 :104.
15.Jieynan J. et.al. J Vet Med B, 1992, 39, 5 :388. 16.Kataria J.M. et.al. Indian J Poultry
SC,1989, 24, 2 :139. 17.Mockett A.P. et.al. Avian Pathol, 1987, 16 :407, 493. 18.Sevoian M.
Avian Dis,1960, 4 :474. 19.Thiele J. Arch virol, 1979, 62, 1 :77.
ОСПА СВИНЕЙ
Variola suilla (лат.); Pig pox (англ.); Schweinepocken (нем.); Variole du pore (франц)
Оспа свиней (ОС) - контагиозное заболевание, характеризующееся лихорадкой и пу-
зырьково-пустулезной сыпью, появляющейся на коже и слизистых оболочках. Вызывается
или оригинальным эпителиотропиым вирусом оспы свиней (ВОС), или вирусами оспы ко-
ров и осповакцины Впервые об ОС сообщили в 1848 г. Spinela в Европе и. Me Nutt в Се-
верной Америке в 1929 г. Регистрируется во всех странах.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Первые признаки бо-
лезни - розеолы - появляются почти одновременно на многих участках тела, слабо покры-
тых щетиной (на морде, ушах, животе, внутренней части бедер). Инкубационный период по-
сле экспериментального интрадермального заражения составляет 2-5 дн, после внутривен-
ного - 10-14 дн. В естественных условиях - 10-14 дн. Через 2-3 дн розеолы превращаются в
папулы с красноватыми ободками. Везикулы у свиней образуются редко. Макроскопически
видимых пузырьков чаще ие бывает, и папулы сразу превращаются в пустулы, заполненные
гноем. Они желтовато-серого цвета, с некротизированной тканью, иногда, сливаясь между
собой, такие оспины достигают 2,5 см в диаметре. Подсыхая, они превращаются в черно-
коричиевые корочки, которые через 5-8 дн начинают отпадать. На их месте остаются быстро
исчезающие белые пятна. У отдельных животных можно наблюдать напряженную, неустой-
чивую походку, зуд, иногда понос. С появлением на коже оспин температура тела обычно
снижается и аппетит несколько ухудшается. Во время нагноения и вскрытия пустул, перед
появлением вторичных оспин и развитии осложнений температура вновь повышается (Рис.
115, 172, 173).
Болезнь продолжается 19-30 дн, но может затягиваться до 45-60 дн, особенно при появ-
лении вторичных оспин. При поражении большей части кожи и слизистых оболочек
(сливная форма) болезнь протекает тяжело и принимает затяжной характер. В этом случае
прогноз неблагоприятный. Примерно такой же прогноз и при геморрагической форме оспы
(черная форма). В остальных случаях, если нет осложнений, оспа протекает доброкачест-
венно, наносит незначительный экономический ущерб. Но часто осложняется бронхопнев-
монией, паратифом, энтеритом и кокковым сепсисом (7а). Летальность при оспе, особенно
при осложнении, среди поросят-сосунков может достигать 40-80%. Оспа у свиней, вызван-
ная вирусом оспы коров, протекает более доброкачественно. Легко она также проходит у
свиней, инфицированных вирусом осповакцины.
735
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Гистологические изменения, вызванные ВОС, подобны таковым при других поксвиру-
сах (4, 5). В срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, выявляются 1-3 цитоплазмати-
ческих эозинофильных тельца-включения, в некоторых клетках - на протяжении всего пе-
риода инфекции (116, 117). Некрозы эпителиальных клеток и наличие нейтрофилов и мак-
рофагов в коже и эпидермисе является общим признак более поздних стадий поражений
ВОС (7). После внутривенного заражения у поросят-гнотобиотов развивались кожные пора-
жения на всей поверхности тела, но во внутренних органах поражения отсутствовали, что
подтверждает тропизм ВОС (7).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Поксвирус свиней относится к семейству
Poxviridae и является единственным представителем рода Suipoxvirus (6). Это крупный ви-
рус, (300-450)-(176-260) нм, содержит 2-нитевую ДНК в характерном ядре или нуклеоиде,
граничащим с латеральными тельцами и окруженном внутренней оболочкой из множества
белков, характерных для поксвирусов (Рис. 107).
Устойчивость. Очищенный вирус малоустойчив, быстро разрушается прямым солнеч-
ным светом и УФ лучами. При комбинированном воздействии солнечного света и ней-
трального красного вирус инактивируется за 7 ч. Особенно губительно на него действуют
слабые р-ры йода (1:Ю4), 0,5%-ный р-р формалина, 3%-ный р-р NaOH, 2,5%-ные р-ры НО
и H2SO4. Хорошими дезинфицирующими средствами служат 20%-ный р-р свежегашеной
извести и 3-5%-ные р-ры хлорамина.
АГ вариабельность и родство. АГ- и вирулентные варианты вируса натуральной ОС
не выделены. ВОС, осповакцины, оспы коров и вариолы имеют общий АГ, выявленный в
перекрестных серологических реакциях. Однако это не свидетельствует об иммунологиче-
ской идентичности этих вирусов.
Локализация вируса. В деталях не изучена. Больные животные выделяют возбудителя
со слюной, истечениями из носа, глаз и с отторжениями оспин в течение всего периода бо-
лезни. В высохших тканевых частицах ВОС может сохранять активность до 1 г и дольше. В
связи с этим хозяйства длительное время могут оставаться неблагополучными. В крови ви-
рус не обнаруживается уже спустя 6 ч после внутривенного введения. Максимальное разви-
тие его в эпителиальных клетках кожи свиней отмечается на 7-й дн после внутрикожного
введения. АГ активность не изучена.
Экспериментальная инфекция. Свиней удается заразить вирусом натуральной ОС
разными методами. К ВОС лишь в 1-ом пассаже чувствительны также кролики, 2-ой пассаж
обычно не удается.
Культивирование. На ХАО КЭ ВОС не размножается. В первых 2-3 пассажах он ре-
продуцируется в первичной культуре клеток почки и тестикул эмбриона свиней и поросенка.
Далее способность размножения его в этой системе угасает. В инфицированной монослой-
ной культуре вирус вызывает образование мелких бляшек. Культуры клеток КРС, овец,
мышей и косуль к вирусу не чувствительны. Кроме первичных культур, вирус размножается
в культуре перевиваемых клеток почки свиньи РК-15 и вызывает образование как цито-
плазматических, так и внутриядерных включений. Г А- и ГАд свойства не установлены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные. Ос-
новным механическим переносчиком ВОС сдужит свиная вошь (Haematopinus suis), в теле
которой вирус сохраняется 1 г и больше. В Австралии распространителями ОС считают
москитов, а также мух. Свиньи чаще заражаются вирусом коровьей оспы при совместном
содержании их с больным КРС или заражаются через инфицированные молоко и обрат.
Ранние вспышки ОС возникают во время противооспенных прививок людей. Однако в
большинстве случаев причиной болезни служит иммунологически самостоятельный ВОС.
736
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Он проникает в организм аэрогенным путем, через поврежденную кожу и слизистую обо-
лочку ротовой полости. Чувствительность к инфекции зависит от возраста, породы, условий
выращивания. Вирус не инфицирует телят, лошадей, овец, собак, кошек, домашнюю птицу,
кроликов, морских свинок, крыс, мышей и человека. Источник инфекции - зараженные сви-
ньи, которые йредсгавляют резервуар инфекции. Заболеваемость при ОС может достигать
100% в возрасте 3-4 мес. Может ‘наблюдаться сезонность инфекции, связанная с наличием
насекомых. Смертность не превышает 5%., Недавно описана спорадическая конгенитальная
инфекция плодов'ВОС с различным исходом даже в одном помете (3).
Спектр патогенности в естественных условиях. К оригинальному ВОС восприимчи-
вы только свиньи, которых удается заразить введением вируса внутрикожно, внутривенно,
подкожно и per os. Отмечались случаи заражения ВОС человека.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании клинико-эпизоотологических и эпидемиологических дан-
ных, результатов вирусоскопии, гистологического исследования, постановки биопробы на
поросятах, кроликах и телятах (последние реагируют на введение вирусов коровьей оспы и
осповакцины).
Выделение вируса
Подготовка материала. Очень важно правильно взять патологический материал для
исследования. Его берут не менее чем с 5-10 участков пораженных тканей (везикул, папул и
др.). Материал от больных животных, до этого обработанных моющими, дезинфицирую-
щими р-рами, для исследования не пригоден. В лабораторию направляют мазки, сделанные
из содержимого везикул больного животного, мазки-отпечатки оспенных поражений кожи,
содержимое везикул, целые папулы и пустулы, иссеченные вместе с субэпидермальной тка-
нью. Мазки высушивают на воздухе и упаковывают в целлофан. Везикулярную жидкость
собирают в капилляры пастеровских пипеток, концы которых осторожно запаивают и по-
мещают в пробирки с резиновыми пробками. Для гистологических исследований папулы и
пустулы помещают во флаконы с 50%-ным р-ром глицерина и 10%-ным р-ром формалина.
Не консервированный материал доставляют в термосе со льдом в тот же день. Необходимо
помнить, что ВОС малоустойчив к теплу и кислой среде. Водный р-р глицерина (4-10%-
ный) консервирует вирус в течение 4-5 лет. Лиофилизированный вирус сохраняется актив-
ным до 3 лет и более, особенно под вакуумом при низкой температуре. Для выделения ви-
руса пробы взятого вируссодержащего материала растирают в ступке или готовят 10%-ную
суспензию на физиологическом р-ре. Если материал консервировали глицерином, его пред-
варительно отмывают физраствором. Суспензию центрифугируют 15 мин при 2000 мин’1.
Надосадочную жидкость отсасывают, добавляют к ней 500 ЕД/мл пенициллина, 250 мкг/мл
стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина, встряхивают и выдерживают 12 ч при 4°С.
Заражение животных. Биопробу ставят на 2-3-мес поросятах. Надосадочную жидкость
(0,6 мл) втирают в участки скарифицированной кожи живота. Биопробу считают положи-
тельной при образовании по ходу насечек через 6-8 дн характерной узелково-пустулезной
сыпи и при обнаружении элементарных телец при микроскопии. Биопробу ставят при неяс-
ных симптомах болезни и отрицательных результатах вирусоскопических исследований.
Индикация и идентификация вируса
Вирусоскопия. Свежую папулу протирают ватой, смоченной спиртом, срезают (лучше
бритвой) и поверхностью среза делают несколько тонких мазков на предметных стеклах.
Мазки подсушивают на воздухе и окрашивают методом серебрения (по Морозову). При ви-
русоскопических исследованиях пораженных участков кожи обнаруживают характерное
расположение вирионов в виде россыпи. Однако отсутствие вирусных частиц в препарате
еще не исключает оспу.
47 Зак. № 171
737
Глава ХУП. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Э{И. ЭМ пораженных участков кожи больных оспой поросят и обнаружение характер-
ных вирусных частиц - один из методов экспресс-диагностики оспы. Для этого требуется
всего около 30 мин.
Обнаружение специфических телец-включений. Развитие оспенных поражений в
коже больных хорошо прослежено гистологическими исследованиями, результаты которых
приведены в табл. XVII.2.
Таблица XVII.2. Результаты гистологических исследований кожи
свиньи, больной оспой (по Касца и Гриземер, 1962)
День после зара- жения Гидропи- рическая дистрофия Гипер- плазия Внутрикл включен. Клеточная ифильтрация Некро- зы Регенера- ция эпи- дермиса
3-й + + + - - -
5-й ++ ++ ++ - - -
7-й +++ +++ +++ + + -
11-й + + + +++ +
13-й - - - + -
21-й - - - - - +
Обозначения: (+, ++, +++) - выраженность реакции
(-) - отсутствие реакции или внутриклеточных включений
Диагноз на оспу считают положительным при наличии в гистологических препаратах
ацидофильных включений и внутриядерных вакуолей в гиперплазированных кератиноцитах
эпидермиса кожи. Цитоплазматические включения при ОС относятся к группе Б, т. е. к
включениям, материал которых участвует в репродукции вируса.
Серологическая идентификация. Не разработана. Однако при необходимости воз-
можна постановка РДП и более чувствительного теста - противоточного электрофореза (5).
Дифференциальная диагностика. Болезнь у свиней могут вызвать вирусы ОС, оспы
коров, осповакцины и, по данным некоторых исследователей, оспы кур. Дифференциацию
возбудителя, вызвавшего оспу у свиней, проводят на КЭ, культурах клеток органов и тканей
кроликов или поросятах. Для этого используют 2-х поросят, переболевших оспой (подопыт-
ные), и 2-х здоровых (контрольные). Им втирают в скарифицированную кожу по 2 капли
растворенной сухой осповакцины. Развитие оспенных поражений у подопытных и кон-
трольных животных через 5-8 дн после нанесения вируса осповакцины указывает на нали-
чие в хозяйстве оспы, вызванной натуральным ВОС. Отсутствие их у подопытных живот-
ных при положительной поствакцинальиой реакции у контрольных свидетельствует о нали-
чии у свиней оспы коров или осповакцины.
Дифференциацию возбудителей, выделенных от больных свиней с клинической карти-
ной оспы, проводят на основании данных, приведенных в табл. XVII. 3. Более простым спо-
собом дифференцирования этих болезней является заражение кролика путем введения ис-
следуемого материала в скарифицированную кожу. ВОС не вызывает у этих животных кож-
ной реакции, в то время как вирусы осповакцины и оспы коров ее вызывают. Оба последних
вируса можно выделить также путем заражения КЭ и культур клеток. Наличие телец-
включений вдоль центральной “просветленной” околоядерной зоны в пораженных эпители-
альных клетках является патогномоничным для ВОС (8).
Оспу у свиней следует дифференцировать от экзантем, появляющихся при авитамино-
зах, аллергии и нарушении обмена веществ, энзоотической бронхопневмонии, стрептокок-
ковом сепсисе, паратифе, чесотке, лишае, ВБС и везикулярной экзантеме. При экзантемах
738
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
незаразной этиологии обычно не бывает лихорадки и биопроба отрицательная. Экзантема
при чесотке, паратифе и других болезнях протекает без стадийного развития, как при оспе, а
из патологического материала выделяют соответствующих возбудителей.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет у поросят-реконвалесцентов сохраняется 3-6 мес и дольше. У взрослых жи-
вотных он продолжительнее. Для профилактики ОС в качестве вакцины часто применяют
Таблица XVII. 3. Дифференциальная диагностика оспы свиней
(по Е.И.Скалинскому и Ю.Ф.Борисовичу,1966)
Заболе- вание Воспри- имчи- вость Зара- жение ИП Морфоло-гия оспин Вто- ричн осп. Течени е бол ДБ Срок появл. имм X А О Чувств культ, кл.
Нату- ральная ОС Часто и легко, вреимущ. молодняк Нако- жно, в/к; в/в 4-7 10- 14 Центр часть окай- млена возвышенно- стью с корочками Через 15-20 да Медлен- ное с ли- хсрадк. 20- 60 21-22 0 Только в культ, кл. ЭС
Оспо-вак- цина Легко, всех воз- растов Тоже 2-3 4-5 Пузырьки со светло- кор. Возвышающим- ся цешром Быст- ро, ли хер ад ка 9- 14 10-14 + В культ, кл. Разных видов
Оспа ко- ров Редко свиньи любого возраста Накож- но 4-5 Быстро подсысыха- ющие пузырьки меньшей величины, чем от ВН ОС - Обычно без ли- хорадки * 6- 8 10-14 + То же
Оспа кур Редко, обычно подсвин- ки до 6-и мес 4- 5 Крупн с пузырьком в центре и углубле- нием, по 1раям; вто- ричн пузырьки; в дальи в центре ко- рочка Бывае т че- рез 15-20 дн Тоже 6-8 12-16 + Тоже
Обозначения: + наличие репродукции на ХАО; 0 - отсутствие таковой. ИП - инкубационный период; * - при отсут-
ствии осложнений; ДБ - длительность болезни; в/к - внутрикожное заражение; в/в - внутривенное заражение.
Примечание. Свиньи оспой от овец и коз обычно не заражаются Среди указанных вирусов перекрестный им-
мунитет образуется только между вирусами оспы коров и осповакцины; ВН ОС - вирус натуральной оспы свиней.
детрит (осповакцину), используемый в медицине. Положительный эффект иммунизации по-
лучается лишь в тех случаях, когда ОС была вызвана вирусом оспы коров или осповакцины.
При натуральной ОС такие прививки бесполезны. В этих случаях приходится проводить
иммунизацию натуральным ВОС. Материал для иммунизации берут от свиней, у которых
оспа протекает без осложнений.
Оспенный детрит или ВОС наносят на скарифицированную кожу тыльной поверхности
уха или внутренней поверхности бедра. При прививке детритом на коже животных делают
4-5 царапин длиной 1-1,5 см. При иммунизации ВОС делают не больше 2 коротких цара-
пин. На одно животное расходуют 3-5 капель разведенной вакцины. Местная реакция у
привитых свиней исчезает через 13-18 дн. Помимо вакцинации, необходимо уничтожить пе-
реносчика вируса - вшей Haematopinus suis. Невосприимчивость у привитых животных вы-
ражена уже через 11-12 дн после появления первой папулы. Серологическая оценка по-
ствакцинального иммунитета не разработана.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Част. вет. вир., М, Колос,1979. 2.Фомина Н.В. и др. Вирусы
жив., М, MBA, 1991. 3.Borst G.H.A. et.al. Vet Rec, 1990, 127 :61. 4.Conroy J.D. et.al. Am J
Vet Res, 1971, 32 :2021. 5.De Boer G.F. Arch Vir, 1975, 49 :141. 6.Matthews R.E.F.
47*
739
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Intervirology, 1979, 12 .160. 7.Meyer R.C. etal. Res Vet Sci,1972,13 :334.7a.Miller R.B. et.al.
Am J Vet Res, 1980,41 :341. 8.Teppema J.S. etal. Arch Virol,1975, 49 :151.
ОСПА КОЗ
Variola coprina (лат.); Goat pox, Variola caprina (англ.); Variole des chevres,
Variole ouclavelee de lachevre (франц.); Ziegenpocken (нем.)
Оспа коз - остропротекающая контагиозная болезнь коз, характеризующаяся образова-
нием специфической папулезно-пустулезной сыпи (экзантемы) на коже и слизистых обо-
лочках. Оспа коз значительно распространена и тяжело протекает в странах с теплым кли-
матом: в Африке, южной и средней частях Азии, в Греции, Иране, Турции, Италии, Испа-
нии, Франции. В СНГ благодаря плановой специфической профилактики в зонах неблаго-
получия болезнь встречается редко в виде спорадических случаев.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У коз оспа протекает
примерно так же, как и у овец. Оспенный процесс локализуется на вымени. У козлят-
сосунов, заразившихся после рождения, болезнь протекает атипично, процесс локализуется
на слизистой оболочке рта, чаще в сычуге. У больных наблюдают кашель, учащение дыха-
ния и гнойные истечения из носа, позже образуются корки возле ноздрей и губ.
Оспа коз, как правило, протекает остро в виде эпизоотий, погибают до 25% заболевших
животных, особенно молодняк. В случае осложнения оспенного процесса гибель достигает
80%. Особенно тяжело болезнь протекает у коз ангорской и придонской пород. Часто со-
провождается абортами, а у лактирующих маток осложняется паренхиматозными или гной-
ными маститами, приводящими к общему сепсису и гибели животных.
Нередко оспа у коз протекает атипично без характерных признаков оспенной экзантемы,
с локализацией болезненного процесса в легких, с частыми осложнениями и смертельным
исходом. При вскрытии трупов в легких обнаруживают серые узелки, бронхопневмониче-
ские очаги или участки гепатизации. Отмечаются случаи абортивного течения оспы, без ос-
пенной экзантемы или с развитием сухих, мелких, быстро подсыхающих поражений в виде
сосцевидных образований. Патологоанатомические изменения самые разные - в зависимо-
сти от тяжести и длительности оспенного процесса и характера осложнений (1).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Патогенность фильтрата оспенной лимфы была показана ещё в 1902 г.
Устойчивость. При температуре ниже 0°С вирус сохраняется, не снижая своих виру-
лентных свойств, свыше 2 лет, в кошарах - до 6 мес, в шерсти переболевших коз - до 2 мес.
Довольно долго (до 9 мес и дольше) выживает в высушенном состоянии и в соединении с
белками, устойчив к эфиру (отдельные штаммы чувствительны).
АГ структура. В деталях не изучена. Вирионы содержат ГА 2-х типов: термостабиль-
ный и термолабильный и преципитиноген.
АГ вариабельность. Установлена односторонняя иммунологическая связь вируса оспы
коз с вирусами оспы овец и контагиозного пустулезного дерматита. При испытании на коз-
лятах сыворотка к вирусу оспы коз нейтрализовала вирус контагиозной эктимы, но не на-
оборот. Вирус оспы коз иммунизирует коз против пустулезного дерматита (контагиозной эк-
тимы), но не наоборот. Вирус оспы коз защищает КРС против бугорчатки.
Локализация вируса. В деталях не изучена. Вирус удается адаптировать к подкожной
клетчатке коз по методу Борреля. Больные животные выделяют вирус во внешнюю среду с
отпадающими оспенными струпьями, в острый период- с выдыхаемым воздухом.
АГ активность. В крови переболевших животных выявляются ВНА, титр которых
можно определить в культуре клеток с адаптированным вирусом.
740
Г лава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на молодых неиммунных козлятах
при кожном (скарификацией) заражении.
Культивирование. Некоторые штаммы вируса удавалось культивировать на ХАО 12-
дн КЭ после предварительной адаптации перемежающимися пассажами. Такие штаммы вы-
зывали на ХАО появление непрозрачных оспинок и при серийном культивировании сравни-
тельно быстро теряли патогенность и иммуногенность. Вирус (шт. Pellor и Dumoh) репроду-
цируется в культуре клеток почек и тестикул козлят, ягнят и телят, вызывая ЦПД, прояв-
ляющееся округлением и скучиванием клеток, увеличением гранулярности цитоплазмы и
появлением фольгенположительных цитоплазматических включений, подобных тем, какие
наблюдаются при культивировании оспы овец. Культура клеток легкого козы более пригод-
на, чем почечная ткань.
ГА и ГАд свойства не установлены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные. В
естественных условиях вирус оспы проникает через органы дыхания (капельная или пыле-
вая инфекция). Заражение возможно при контакте, через инфицированные предметы, ране-
ния кожи и слизистых оболочек. Козлята могут заражаться через молоко от больных коз.
Спектр патогенности в естественных условиях. Оспа коз протекает как самостоя-
тельная болезнь и поражает только этих животных, однако в Нигерии и Кении выделен ви-
рус оспы коз, патогенный для овец.
ДИАГНОСТИКА
Выделение вируса: взятие и подготовка материала, хранение, консервирование и пере-
сылка материала, идентификация вируса (вирусоскопия (Рис. 109), биопроба), ретроспектив-
ная и дифференциальная диагностики аналогичны лабораторной диагностике оспы овец.
Дифференциальная диагностика. Оспу коз следует дифференцировать от ящура, так
как большие папулы, встречающиеся при оспе, иногда напоминают ящурные афты. Для ос-
пы коз характерно отсутствие экзематозных поражений на нижних частях ног и то, что жи-
вотные других видов оспой коз не болеют. Вирусом ящура можно заразить морских свинок,
новорожденных мышат (2).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие оспой козы приобретают стойкий иммунитет. Козлята, рожденные мате-
рями-реконвалесцентами, в период подсоса устойчивы к искусственному и естественному
заражениям. После отъема резистентность их исчезает.
Для специфической профилактики оспы коз используют инактивированную гидроокись-
алюминиевую формолвакцину. Получена живая вакцина из вирулентного штамма оспы коз
(3). Вакцинный вирус не передавался горизонтально, не восстанавливал свою вирулент-
ность после 5 серийных пассажей на козах.
Показана протективная эффективность субъединичной вакцины против оспы коз, в со-
став которой входит групповой АГ, связанный с белком слияния (GST-P32), экспрессируе-
мый в Е. coli. Показано, что введение козам GST-P32 обыкновенно приводит к нарастанию
ВНА. Субъединичная вакцина имеет ряд преимуществ: она неинфекционна, безопасна, сти-
мулирует синтез ВНА и может быть использована в процессе вспышки инфекции, она не
препятствует применению других живых вакцин (4).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ЕСюрин В.Н. и др. Част. вет. вирусол., М, Колос, 1979. 2,Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол.
жив., Агропромиздат, 1991. 3.Wang S. et.al. Acta Vet Zootechn Sin, 1988, 19 :111. 4.Carn
V.M. et.al. Virol, 1994, 24, 4 :56.
741
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
МИКСОМАТОЗ КРОЛИКОВ
Myxomatosis cuniculi (лат.); Myxomatosis, Infectious myxoma of rabbits (англ.);
Myxomatose des Kaninchens, die Myxomatose der Kaninchen (нем.);
Myxome infectieux de Sanarelli, La myxomatose (франц.)
Миксоматоз - остропротекающая, высококонтагиозная вирусная болезнь кроликов, ха-
рактеризующаяся воспалением слизистых оболочек и появлением студенистых отеков в об-
ласти головы, ануса, гениталий и кожи тела. Инфекция распространена во многих странах
Южной Америки, Европы, Австралии. В бывшем СССР болезнь регистрируется в кролико-
водческих хозяйствах с 1989 г. и наносит большой экономический ущерб.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод при миксоматозе длится от 2 до 20 дн, что зависит от вирулентности вируса, способа
заражения и устойчивости организма. Болезнь может протекать в 2-х формах: классической,
характеризующейся появлением студенистых отеков на теле, и нодулярной (узелковой), при
которой на теле появляются ограниченные опухоли. Классическая форма болезни болеее
опасна, смертность при ней достигает 100%, нодулярная форма сопровождается более доб-
рокачественным течением, смертность также высокая - 70-90%. При обеих формах болезни
первыми признаками являются, покраснения в виде пятен или маленьких бугорков на коже
кроликов, в основном в области век и на ушных раковинах (Рис. 170). Болезнь, если проте-
кает остро, а это чаще бывает при классической форме, длится 5-6 дн. Причем единствен-
ный признак миксоматоза - отек в области головы, подгрудка, половых органов. Кролик
принимает уродливую форму- распухшая голова, распухшие и опущенные уши. При более
длительном течении болезни, кроме отеков, появляется конъюнктивит, переходящий в
гнойный блефароконъюнктивит, веки набухают, краснеют, из глаз выделяется гнойно-
фибринозный экссудат, который толстым слоем скапливается между веком и глазным ябло-
ком. Выделения бывают иногда настолько обильными, что они закрывают полностью глаз-
ные щели. Из носовой полости также выделяется гнойное содержимое, которое засыхает во-
круг носовых отверстий в виде корочек. Дыхание становится затрудненным. За несколько
дней до смерти можно прослушать хрипы в грудной полости и тяжелое дыхание. Иногда
кролик пытается дышать через рот, болезненно повизгивая.
При узелковой форме болезнь протекает легче. Папулы, узелки величиной от просяного
зерна до голубиного яйца образуются на различных участках тела: на спине, ушных ракови-
нах, веках, носу, лапах, между пальцами и вокруг когтей лап. На 10-14 дн на месте узелко-
вых разрастаний формируются очаги некроза. В случае выздоровления некротические очаги
заживают в течение 2-3 нед. Болезнь может продолжаться до 30-40 дн. При классической
форме температура тела у кроликов за 24-48 ч до появления признаков болезни на коже
поднимается до 40-41,5°С, но затем падает до нормы. При узелковой форме она, как прави-
ло, остается в пределах нормы. Экссудативная форма миксоматоза отмечается при остром
течении болезни, охватывает до 95-100% поголовья и сопровождается высокой смертно-
стью. При подостром течении (3-4 нед) наблюдают воспалительные псевдоопухолевые из-
менения (Рис. 171) и смертность. Хронически болезнь протекает в виде локализованного
миксоматоза с незначительными экссудативными процессами при удовлетворительном об-
щем состоянии и редких случаях смертности.
В последние годы в хозяйствах промышленного типа зарегистрирована новая клиниче-
ская форма миксоматоза. Она характеризуется поражением органов дыхания, насморком,
слезотечением. Иногда болезнь сопровождается нарушением воспроизводства и гибелью
крольчат. При вскрытии трупов наблюдаются студенистые инфильтраты в подкожной клет-
чатке туловища, шеи, головы и конечностей. В случаях длительного течения болезни отме-
742
Г лава ХУП. Family Poxviridae Оспенные инфекции
чаются кровоизлияния в легочную ткань, очаговая бронхопневмония. В остальных органах
не обнаруживают каких-либо характерных изменений.
К концу эпизоотии появляются апатогенные штаммы возбудителя и характер клиниче-
ского проявления болезни изменяется, инкубационный период затягивается, на теле местами
образуются лишь изолированные миксоматозные узлы, которые в дальнейшем сморщива-
ются и покрываются корками.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ.
Вирус миксоматоза выделил Шоуп в 1932 г. Как инфекционная болезнь миксоматоз
кроликов впервые описан в Уругвае в 1898 г. Болезнь протекала среди домашних кроликов.
Морфология и химический состав. Вирус имеет прямоугольную форму размером 230-
330 нм. Центральную часть вириона занимает осьмиофобный нуклеоид, гантелевидной
формы, состоящий из тонких разбросанных нитей. Вирус репродуцируется в геалоплазме
клетки (Рис. 111). В состав виропласта входят провирионы, нуклеоиды, рибосомы, полисо-
мы, скопления осьмиофильных тяжей, микротрубочки. По периферии матрикса формируют-
ся провирионы. В отличие от вирионов они имеют округлую форму размером 250-370 нм и
электронно-плотный нуклеоид. Первоначально образовываются первичные оболочки виру-
са. В процессе дальнейшей дифференцировки вируса нуклеоид превращается в вытянутую
овальную S-образную структуру, появляются боковые тельца, а при взаимодействии с цито-
плазматическими мембранами образуется суперкапсидная оболочка. В большом количестве
вирионы обнаруживаются как в цитоплазме, так и в межклеточном пространстве. В одной и
той же клетке одновременно наблюдают скопление зрелого вируса и провирионов.
Устойчивость. Вирусы фибромы и миксомы по структуре идентичны между собой и с
другими вирусами данной группы. Оба чувствительны к эфиру, однако вирус миксомы ус-
тойчив к дезоксихолату натрия и более резистентен к нагреванию, чем вирус фибромы.
Терморезистентный вирус миксомы вызывает генерализованную смертельную инфекцию, а
вирус фибромы дает только местные опухоли. Вирус миксомы устойчив к высушиванию. В
высушенной пораженной кроличьей ткани он сохраняет вирулентность до 20 дн, во влажной
среде при 8-10°С - до 3 мес, при более высокой температуре (26-30°С) выживает до 10 дн.,
при температуре 55-60°С погибает в течение 15 мин. Устойчив к pH в широких пределах -
4-12, а также к действию химических веществ: борной кислоты, перманганата калия и фе-
нола. Надежными дезинфицирующими веществами являются р-ры формальдегида и едкой
щелочи 3%-ной концентрации.
АГ структура. Сложная, имеются L, S, NP-антигены.
Антигенная вариабельность и родство. Вирус родствен возбудителю фибромы кроли-
ков. Переболевшие фиброматозом кролики невосприимчивы к миксоматозу или болезнь
протекает у них легко. Между шт. Lu (Lausone) и G (Glinfild) имеются выраженные АГ раз-
личия. Шт. Urana Field (UF) оказался родствен шт. Lu. Вирус миксомы также родствен ви-
русу фибромы белок. С помощью перекрестной РДП выявлено наличие иммунологического
перекреста между вирусами миксомы и осповакцины.
Локализация вируса. После первичного размножения, чаще всего в слизистых оболоч-
ках ротовой и носовой полостей, вирус проникает лимфоидным путем в регионарные лим-
фоузлы, где через 48 ч начинается вторая стадия размножения. Уже на 3-4 дн появляется
виремия и развиваются патологические изменения, при этом нарушается проницаемость ка-
пилляров, возникают отеки. Наибольшее количество вируса выявлено в миксомах, затем в
лимфоузлах, легких, селезенке и крови, во всех внутренних органах и кожных поражениях
больных и переболевших кроликов. Через 3 дн после инфицирования вирус выделяется с
секретами носовой полости и глаз; на 4-е сут - обнаруживается также в коже и семенниках,
на 5-е сут - в области наружных половых органов.
743
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
АГ активность. Вирус индуцирует образование ВНА, которые можно выявить в реак-
циях на коже кролика или ХАО КЭ. В тканях, а иногда в сыворотке крови у кроликов с ост-
рым течением болезни имеются растворимые АГ, обнаруживаемые в РДП.
Экспериментальная инфекция. Искусственное заражение европейских диких и до-
машних кроликов легко удается при внутрикожном или подкожном введении высоковиру-
лентного материала. Болезнь развивается через 4-5 дн. Невосприимчивы к заражению юж-
ноамериканские дикие кролики (в Уругвае и Бразилии). У них на месте введения вируса
появляются опухоли. Генерализации процесса и гибели не наблюдается.
Культивирование. Вирус размножается на ХАО куриного и утиного эмбрионов, вызы-
вая образование характерных фокусов (оспин), на коже кроликов, которые в 2,5 раза чувст-
вительнее КЭ, и культуре почечных клеток диких и домашних кроликов, белок, крыс, хомя-
ков морских свинок и человека, вызывая ЦПИ, образование бляшек и крупных цитоплазма-
тических включений. Установлена зависимость между вирулентностью вируса для кроликов
и способностью его образовывать бляшки при температуре выше оптимальной и низком pH.
Вирус миксоматоза удавалось культивироовать в головном мозге мышат-сосунов, у ко-
торых он вызывал латентную инфекцию, в саркоматозной опухоли морской свинки и транс-
плантатах гомологичных тканей этих животных. Интрацеребральными пассажами на кро-
ликах получен аттенуированный штамм (нейромиксома).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Здоровые кролики заражаются при контакте с
больными. Кроме того, инфекцию распространяют насекомые: комары (в Южной Америке
и Австралии - Anopheles annulipes, во Франции - Anopheles atroparmes, в США - Anopheles
free borni), блохи (в Англии - кроличья блоха Spilopsyllus cuniculi) и вши, паразитирующие
на кроликах. Некоторые исследователи считают, что насекомые передают инфекцию меха-
нически, а не трансмиссивно. Во Франции вирус выделили из комаров Culiseta annulata S
Ghrank во время зимовки. Предполагают, что комары служат резервуаром вируса в приро-
де, также хорошо известны резервуары этого вируса - кроличьи блохи и почва кроличьих
нор. Замечено, что в годы с обильным выпадением осадков, когда создаются более благо-
приятные условия для интенсивного развития насекомых, вспышки миксоматоза протекают
более интенсивно и на обширных территориях.
Спектр патогенности в естественных условиях. Болеют как дикие, так и домашние
кролики, принадлежащие к родам Sylvilagus и Oryctolagus. Дикие зайцы (род Lepus) бо-
леют редко. Вирулентность полевых штаммов вируса миксомы в Австралии за период 1959-
1974 г. изменилась. Вначале (с 1959 по 1964 г.) исчезли высоковирулентные и аттенуиро-
ванные штаммы, что, видимо, обусловлено повышением резистентности кроликов. За пери-
од 1962-1981 г. в распределении штаммов по степени вирулентности произошли значитель-
ные изменения: увеличилось количество полевых изолятов, вызывающих падеж 95-99%
кроликов. Всегда с развитием инфекции миксоматоза в полевых'.условиях происходило 2
параллельных явления: возбудитель снижал свою вирулентность, а восприимчивые живот-
ные становились более устойчивыми. ,
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, характерной клинической
картины, патологоанатомических изменений и лабораторного исследования. Лабораторная
диагностика заключается в постановке биологической пробы на^ кроликах и гистологиче-
ском анализе патологического материала.
Выделение вируса. Вирус вначале размножается на месте введения, затем через 48 ч
обнаруживается в регионарных лимфоузлах. В крови, селезенке и легких выявляется через
72 ч, в коже и семенниках - на 4-й дн, в конъюнктиве, внешних половых органах и анусе -
744
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
через 5 дн. Содержание вируса во всех органах и тканях ежедневно нарастает, за исключе-
нием крови, где накануне и в день смерти животного его количество снижается.
Подготовка материала. Для исследования в лабораторию доставляют клинически
больных кроликов или трупы (не позднее чем через 2 ч после гибели). У вынужденно уби-
тых или павших животных отбирают измененные участки кожи. Патологический материал
доставляют в термосе со льдом или 50%-ном р-ре химически чистого глицерина.
Заражение кроликов. Используют молодых, в основном белых, кроликов массой 1,5 кг.
На предварительно выбритый участок кожи в области бока 2-м кроликам внутрикожно вво-
дят исследуемый материал по 0,1-0,2 мл и по одной капле в конъюнктивальные мешки глаз.
Для контроля оставляют 2-х незаряженных кроликов. Если проба положительная, то обычно
на 3-6-й дн на месте инъекции появляются покраснение и отек, а на 5-10-й дн - конъюнкти-
вит и ринит. При отечной форме на голове, ушах, анусе и наружных половых органах раз-
вивается отечно-сосудистая инфильтрация подкожной клетчатки, из глаз выделяется сероз-
но-фибринозный или гнойный экссудат и на 7-16 день кролики погибают.
При узелковой форме на ушах, голове, веках и других частях тела образуются узелки,
которые некротизируются. В этом случае животные иногда выживают. Диагноз на миксома-
тоз кроликов считается установленным при получении положительных результатов биоло-
гической пробы на кроликах и гистологического исследования. Срок исследования 15 дн.
Заражение КЭ проводят на ХАО по общепринятой методике. При наличии вируса на ХАО
наблюдают образование характерных фокусов (оспин).
Индикация и идентификация вируса. Вирусоскопия не применяется.
При ЭМ в цитоплазме клеток видны скопления зрелых вирионов - включения типа А,
которые часто локализуются вблизи липидных включений. Часто вокруг скоплений сфор-
мировавшегося вируса видна многослойная мембрана, и вирионы вместе с участком клетки
изолируются в цитосоме, где в дальнейшем подвергаются морфологической деструкции.
Иногда обнаруживают фагоцитированные ядром полуразрушенные вегетативные формы
вирионов. На ранних стадиях цитопатологии происходит полная деструкция клетки и ви-
рионы освобождаются в межклеточное пространство.
Гистологически при миксоматозе в клетках эпидермы кожи и корневого влагалища во-
лос наблюдаются вакуолизация цитоплазмы, кариолизис и кареорексис, встречаются цито-
плазматические ацидофильные включения: в коже и подкожной клетчатке отмечают сероз-
ный инфильтрат, набухшие фибробласты, ретикулярные клетки, эозинофилы и миксомные
клетки, образующие рыхлую сетку, заполненную слизистой жидкостью.
ИФА. Для серологической диагностики ELISA имеет преимущество - высокая чувстви-
тельность, простота реакции, высокая производительность, стандартизация учета.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Не проводятся.
Дифференциальная диагностика. Миксоматоз у кроликов рода Syvilagus может про-
текать так же, как инфекционный фиброматоз: без признаков нарушения общего состояния,
поражений слизистых оболочек и блефароконъюнктивита; при этом обнаруживаются лишь
небольшие подкожные новообразования в различных участках тела, регрессирующие через
несколько недель. Тем не менее у новорожденных крольчат болезнь протекает остро и с вы-
сокой летальностью. Миксоматоз необходимо также дифференцировать от стафилоккоза и
бродячей пиемии с подкожными абсцессами. Последние в отличие от миксоматозных абс-
цессов содержат густой белый гнойный экссудат. Кроме того, при бродячей пиемии отсутст-
вуют поражения головы, глаз и аногенитальной области. Массового распространения за ко-
роткий срок эта болезнь не приобретает, она длится дольше, но нет большого отхода.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У выживших кроликов развивается активный иммунитет. Молодняк, родившийся от ма-
терей-реконвалесцентов, до 5-нёд возраста устойчив к инфекции благодаря пассивно пере-
данным материнским АТ.
745
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Опыты по применению инактивированной вакцины не привели к успеху. Ветеринарная
практика ряда стран, в т.н. РФ, имеет 2 типа вакцин: из вируса фибромы Шоупа
(гетеровирулентный вирус) и из ослабленного вируса миксоматоза (1,2, 7, 8,9).
Первый успех был достигнут благодаря гетероиммунитету, используя безвредный для
кроликов вирус фибромы Шоупа: 2-кратная прививка этим вирусом защищала 40-90% кро-
ликов от миксоматоза в течение 2-4 мес. С целью повышения иммуногенности в дальней-
шем были получены живые вакцины из аттенуированных штаммов вируса миксоматоза. С
этой целью вирус пассировали в первичной культуре клеток почки кроликов при 37, 34 и
33°С соответственно в течение 5, 20 и 79 пассажей. Вирус дважды клонировали методом
бляшек на 36 и 65 пассажах. Вторым этапом было пассирование в культуре клеток КЭ при
33°С в течение 25 пассажей в сочетании с перемежающимися пассажами и клонированием в
культуре клеток почки кролика на уровне 6, 10 и 24 пассажей. После пассажей в культуре
клеток КЭ был получен аттенуированный штамм вируса миксомы. Он утратил патогенность
для кроликов разных возрастов, не передавался горизонтально любыми способами, в том
числе с помощью комаров, обладал выраженными антигенной и иммуногенной активностя-
ми при внутрикожном, интраназальном и аэрозольном применениях. После внутрикожного
введения вакцины иммунитет продолжался 6-12 мес. Аэрозольным методом можно имму-
низировать домашних и диких кроликов (7, 8).
Другие авторы аттенуировали шт. СК-82 вируса миксомы путем 5 пассажей в КЭ и 20 в
первичной культуре клеток почки крольчонка. Такой вирус при подкожном и внутримышеч-
ном введении вызывал у кроликов незначительное повышение температуры и образование
ВНА в титре 1:20 - 1:320. Кролики с титром ВНА 1:80 оказались полностью устойчивыми к
экспериментальному заражению вирулентным штаммом вируса миксомы (6,7).
Живую гетерологическую вакцину готовят из вируса фибромы, размноженного в куль-
туре клеток и повторного замораживания - оттаивания и обработки ультразвуком. Лиофили-
зированная вакцина из вируса фибромы вызывает иммунитет на 3-й дн. Иммунитет закреп-
ляют ослабленным вирусом миксомы. Применяемая в Бельгии гомологичная вакцина (ММ-
16005) также оказалась безвредной, не вызывала отрицательных реакций даже в крольчат-
никах, неблагополучных по пастереллезу. Внутрикожные инъекции её в область уха вызы-
вали развитие местных узелков, полностью исчезающих через 6 нед. Гетерологичный
штамм вируса фибромы Шоупа защищал кроликов не более 3 мес.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. В связи с тем, что сероло-
гические показатели в оценке постинфекционного и поствакцинального иммунитетов не
изучены, оценка их по этим тестам не проводится.
Помимо вакцины показана противовирусная активность индукторов иммуногенеза
(РНК и полигуанидина) в отношении вирусов миксомы и фибромы Шоупа при внутрикож-
ном введении вирусов. Лучший противовирусный эффект был получен при введении индук-
тора РНК за 4 ч до заражения (6).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Бояринцев Л.Е. Тр. НИИПЗК им. В.А. Афанасьева, 1989, 165. 2.Симонова Э.Г. и др. Ма-
тер. н. конф. ВНИИВВИМ, 1992, Покров, 168. З.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. живот-
ных, М., Агропромиздат, 1991. 4.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М., Колос, 1979.
5.Фомина Н.В. и др. Вирусы животных., М., MBA, 1991. 6.Jackson R.J. et. al. J Gen Virol,
1992, 73, 12 :3241. 7.Knezevic N. Veter Clasnic, 1986, 40 :901. 8.Peeters J.E. et. al. Rev Agr,
1987, 40, 5 .1255. 9.Saurat P. et.al. Rev Med Vet, 1978, 129 .415.
746
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
НОДУЛЯРНЫЙ ДЕРМАТИТ
Lampy Skin Disease (англ.), Knopvelsieckte, Exanthema nodularis bovis, Dermatose
nodulaire (фран.), Knochensschlag des Rindes (нем.), seudo-urticaria (итал.)
Нодулярный дерматит (кожная бугорчатка, узелковый дерматит, кожно-узелковая сыпь,
болезнь “кожного отека” у буйволов, “лоскутная болезнь кожи”, вирусная, заразная бугор-
чатка кожи, узелковая экзантема КРС) - болезнь КРС, характеризующаяся лихорадкой, по-
ражением лимфатической системы, отеками подкожной клетчатки и внутренних органов,
образованием кожных узлов (бугров), поражением глаз и слизистых оболочек дыхательного
и пищеварительного трактов.
Впервые болезнь зарегистрирована в Центральной Африке (1929 г.) как ложная крапив-
ница (1). Бакстром в 1943 - 1945 гг. доказал заразный характер болезни. Томаси Мере
(1945) наблюдали её в Южно-Африканской Республике, а Дизель (1949) - в Свазиленде и
Мозамбике. Примерно в это же время болезнь появилась на территории Намибии и Малави,
а в 1945 г. - на Мадагаскаре (Ла Ланне, 1956 г). Затем её диагностировали на севере, а в
начале 1960 г. в некоторых странах Экваториальной Африки. В настоящее время она встре-
чается в 19 странах Африки. В СНГ нодулярный дерматит не зарегистрирован (1).
В настоящее время нодулярный дерматит относится к особо опасным инфекциям КРС,
имеет широкое распространение в странах Африканского континента и Азии. Экономиче-
ский ущерб значительный. Бальные животные быстро худеют, портится шкура (после дуб-
ления кожи на местах узлов остаются чашеобразные углубления и дыры). У коров снижают-
ся, а затем прекращаются удои. Больные коровы не приходят в охоту. У быков наступает
временная половая стерильность. Чаще поражаются и тяжелее переболевают чистопородные
животные, лакгирующие коровы, недостаточно упитанные особи и молодняк. Легче болезнь
протекает у животных местных пород.
Клинические признаки. Инкубационный период в среднем 7 дн. Он зависит от вос-
приимчивости животного, типа и вирулентности возбудителя и путей его проникновения в
организм. Продромальный период короткий, нередко протекает незаметно, особенно при
появлении первых случаев болезни в хозяйстве (1). У заболевших животных повышается
температура тела до 40°С, появляются водянистые истечения из глаз, вялость. Животные
отказываются от корма, быстро истощаются. Лимфоузлы увеличиваются, легко прощупы-
ваются на бедрах и особенно в предлопаточной области. Поверхностные лимфоузлы иногда
имеют вид припухлостей.
При тяжелом течении болезни поражаются ротовая полость, органы дыхания и пищева-
рения. Изо рта выделяется густая тягучая слюна, из носа - гнойная слизь зловонного запаха.
Водянистое истечение из глаз сменяется слизистым, при подсыхании его образуются короч-
ки. На веках появляются эрозии и изъязвления. Иногда наблюдается конъюнктивит; рого-
вица мутнеет, что может привести к частичной или полной слепоте. Изъязвления, появляю-
щиеся в дыхательных путях, вызывают сильный отек, и животное гибнет от удушья.
По всему телу, а иногда только на конечностях и животе, образуются внутрикожные бу-
горки (Рис. ПО) с плоской поверхностью (диаметр 0,5-7 см, высота до 0,5 см); число узел-
ков колеблется от 1-10 до нескольких сотен. На некоторых участках тела бугорки сливаются.
Иногда они образуются под кожей и обнаруживаются лишь при прощупывании. По краям
бугорков эпидермис отделяется, а в центре ткань некротизируется и образуется характерная
впадина, окаймленная валиком из грануляционной ткани размером 1-3 мм.. Через 1-3 нед
после появления бугорка некротизированную ткань можно удалить в виде пробки (секвестр)
или она, подсыхая, отпадает сама. Несеквестрированные узелки затвердевают и остаются
многие месяцы. При асептическом течении впадина быстро заполняется грануляционной
тканью и зарастает волосом несколько другого цвета. При осложнении (вторичная инфек-
747
Глава ХУП. Family Poxviridae Оспенные инфекции
ция) в глубоких слоях кожи и подкожной клетчатки появляется отек. У лактирующих коров
поражается вымя. Оно увеличено в объеме, в нем видны узелки; молоко густое, с розовым
оттенком, сдаивается каплями, при нагревании превращается в гель.
Болезнь продолжается около 4 нед, при осложнениях - дольше. Из осложнений при бу-
горчатке часто бывают трахеиты, пневмонии, сопровождающиеся атрезией трахеи и затруд-
ненным дыханием, поражением половых органов, пропуском 4-6 течек, а у самцов - вре-
менной половой стерильностью. Нередко болезнь осложняется вторичной бактериальной
инфекцией, при этом поражаются суставы, легкие и другие органы (2).
Патологоанатомические изменения. На коже, на поверхности и в толще мышц видны
характерные узелки. Лимфоузлы отечны, сочны на разрезе. Под висцеральной плеврой, ино-
гда на раковинах носовых ходов, в селезенке, печени и рубце можно обнаружить звездчатые
кровоизлияния. Легкие отечны, иногда в них видны узелки. В носовых ходах и в сальнике
находят признаки застойных процессов, под капсулой почек - мелкие узелки (2-3 мм), в сы-
чуге - диффузное воспаление, иногда изъязвление дна и пилоруса, в слизистой оболочке ки-
шечника, чаще тонких кишок, - кровоизлияния.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Александер, Плоурайт и Хайг (1959) разделили вирусы (по ЦПД), вызывающие кожную
бугорчатку КРС, на 3 группы: BLD, Allerton, Neethling. Штаммы, относящиеся к группе
BLD, не образуют синцития, вызывают ЦПЭ в тканевых культурах за 40-66 ч, непатогенны
для КРС, овец, кроликов и мышей. Штаммы вируса группы Allerton быстро размножаются в
культуре клеток, вызывая ЦПИ (в течение 24 ч), сходные с изменениями, наблюдаемыми
при кори (образование больших внутриядерных эозинофильных включений и синцития,
краевое стояние хроматина). В слое клеток проявляются отверстия круглой или овальной
формы с четко выраженными границами. Такие отверстия придают монослою вид “изъе-
денного молью”. Вирусы группы Neethling являются основным возбудителем нодулярного
дерматита. Они также вызывают ЦПИ в культуре клеток ПТ, эмбриона овцы и тестикуляр-
ной ткани ягнят и телят не ранее 14 дн после заражения. По ЦПД вирус Neethling сходен с
вирусами оспы (2).
Самые крупные вспышки болезни в Африке были вызваны вирусом типа Neethling,
имеющим АГ родство с вирусом оспы овец. Болезнь, вызванная возбудителем этого типа,
протекает особенно тяжело. Её рассматривают как подлинную кожную бугорчатку. Вирус
типа Allerton, как правило, вызывает болезнь, протекающую более благоприятно, и её ино-
гда называют ложной бугорчаткой. Вирус типа BLD, выделенный от больных кожной бу-
горчаткой и названный Орфан (сиротским) вирусом, видимо, не является истинным возбу-
дителем нодулярного дерматита, так как в очищенном виде не вызывает у животных ни
клинических признаков болезни, ни образования специфических АТ. В связи с этим опреде-
ленной классификации вирусы нодулярного дерматита КРС не имеют.
Морфология и химический состав. Зрелые вирионы вируса Neethling округлой фор-
мы, имеют двойную оболочку, плотную сердцевину и боковые тельца. По морфологии они
идентичны возбудителям оспы.
Устойчивость. Вирус Neethling хорошо переносит 3-кратное замораживание и оттаива-
ние, но чувствителен к 20%-ному р-ру эфира. По данным Вайсса (1960), он может сохра-
ниться жизнеспособным в пораженных участках кожи не менее 33 дн, в слюне -11, в крови
и в некоторых внутренних органах - 4 дн.
АГ структура. Не изучена.
АГ активность. У переболевших животных вирус вызывает образование ВНА, время
появления и исчезновения которых не изучено. Суспензия из внутренних органов и лимфо-
узлов от убитых на 20-й дн после заражения животных вызывает образование АТ, выяв-
748
Глава XVU. Family Poxviridae Оспенные инфекции
ляемых в РДСК при постановке реакции с сыворотками крови переболевших животных.
Активность сыворотки крови достигала 1:30, а органов и тканей 1:4 - 1: 120.
АГ вариабельность и родство. Не изучены. В антигенном отношении вирус Neethling
родствен вирусу африканской оспы овец и, возможно, вирусу оспы коз, но отличается от ви-
русов Allerton и BLD. АГ связи и таксономическое положение вируса Allerton не изучены. В
1961 г. Капстик и Куклей установили иммунологическое родство между вирусом типа
Neethling и кенийскими штаммами вируса оспы овец (Кедонг, SP-143 и Isiolo).
ГА свойства. Не изучены.
Локализация, вирусоносительство и вирусовыделение. Вирус Neethling обнаружи-
вали в крови животных через 22 дн после появления симптомов болезни. Во внешнюю сре-
ду вирус попадает с отторгаемыми кусочками пораженной кожи и вируссодержащими спер-
мой, слюной и кровью. Со спермой вирус выделяется в течение 60 дн после клинического
выздоровления быка. В уплотненных кожных узлах вирус можно обнаруживать до 120 дн с
момента их появления.
Экспериментальная инфекция. После введения изолятов 1-2-го пассажей мышата-
сосуны погибали на 5-6-е сут. У морских свинок через 10 дн появлялись внутрикожные
узелки, ВНА в сыворотке крови не обнаруживали. Показана нейтрализующая активность
кроличьих сывороток (1).
При заражении вирусом Neethling у КРС появляются лихорадка и кожные поражения. У
кроликов возникает кратковременная местная реакция с генерализованными поражениями.
Морские свинки более восприимчивы к вирусу, чем кролики. У них находили некротиче-
ские поражения, сходные с поражениями у КРС. Взрослые мыши к вирусу Allerton невос-
приимчивы, однако новорожденные мышата высокочувствительны. Вирус удавалось пасси-
ровать на мышатах-сосунках путем интрацеребрального заражения. Перекрестного иммуни-
тета между различными типами вируса не наблюдается. Овцы и козы восприимчивы к ви-
русу нодулярного дерматита. Шт. Isiolo вызывает у КРС заболевание бугорчаткой и сооб-
щает резистентность к шт. Neethling. Это свидетельствует об их иммунологическом родстве.
При экспериментальном заражении вирусом бугорчатки (шт. Эфиопский) в области
средней трети шеи, плеч и живота, через 6-9 дн после заражения отмечают образование
узелков на месте инокуляции вируса размером 0,7-0,8 см, а на 12-й дн - повышение темпе-
ратуры тела до 40,5°С. Генерализованная форма характеризовалась образованием узелков
внутрикожной локализации по всей поверхности тела на 13-й дн. Наблюдают депрессию,
снижение аппетита, учащенное дыхание, тахикардию, гиперемию в ротовой и носовой по-
лостях, конъюнктивит. Из носовой полости выделялся серозно-слизистый экссудат. В облас-
ти подгрудка и путовых суставов отмечалось образование обширных отеков. Температура
тела достигала 41,1°С. В дальнейшем животные теряли в массе. Узелки на коже достигали
размеров 3-3,5 см, а на видимых участках они сливались. При пальпации кожи выявлялась
болезненность. Региональные лимфоузлы увеличивались, до размеров гусиного яйца.
При введении изолятов I-П типов мышата-сосунки погибали на 5-6-е сут; у морских
свинок через 10 дн появлялись внутрикожные узелки, ВНА в сыворотках крови не обнару-
жены. Показана циркуляция среди коров 2-х серотипов, причем изоляты предположительно
тождественны: 1 и 2 шт. вируса типа Allerton, 3-й подобен вирусам группы Орфелен.
Культивирование. Вирус Neethling размножается в 5-7-дн КЭ при 33,5-35°С. На ХАО
вызывает оспоподобные поражения: мелкие мутные фокусы вокруг возвышающегося белого
центра. Вирус хорошо культивируется в культуре клеток почки и тестикул теленка и ягнен-
ка. В ранних культурах ЦПЭ развивался медленно, но уже через 24 ч после адаптации по-
являлись веретенообразные клетки, которые позже округлялись; образовывались включе-
ния, сходные с включениями, свойственными вирусу оспы овец, но синцитий не выявлялся.
Вирус Allerton размножался в первичной культуре тестикул быка и барана. С 3-го последо-
749
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
вательного пассажа через 24-36 ч он вызывал полную деструкцию клеточного монослоя.
Вирусы всех 3-х разновидностей удалось адаптировать к клеткам почки кролика. Культу-
ральный вирус Neethling сохранял патогенность для телят.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Спектр патогенности в естественных условиях. Нодулярный дерматит - высококон-
тагиозная болезнь. В Южной и Экваториальной Африке поражает КРС, в том числе буйво-
лов и зебу. Животные других видов и человек невосприимчивы.
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные жи-
вотные и вирусоносители, а также животные, переболевшие в латентной форме. Возбуди-
тель болезни передается, в основном, трансмиссивно кровососущими насекомыми, комара-
ми, москитами и мухами некоторых видов. Ареал болезни - зоны парковых саванн и редко-
лесий Юго-Восточной Африки. Наибольшее число больных животных бывает там, где
большое скопление насекомых. Зарегистрирована передача возбудителя телятам через мо-
локо коровы. Подмечено, что вирус могут распространять птицы, в частности цапли. При
первичных вспышках болезни может заболевать 50-75 и даже 100% животных (особенно
среди животных европейских пород). У 50% животных болезнь протекает типично.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомиче-
ских, гистологических данных, а также результатов лабораторных исследований: выделение
вируса и идентификация его типов в PH, РИФ и биопробы.
Размножение вируса каждого типа сопровождается появлением характерных ЦПИ и об-
разованием эозинофильных цитоплазматических телец-включений, выявление которых в
окрашенных препаратах инфицированных монослойных культур, как и в гистологических
срезах биопсированных участков пораженной кожи считается одним из основных методов,
подтверждающих диагноз нодулярного дерматита. Идентификацию типов вируса нодуляр-
ного дерматита проводят по характеру ЦПИ, и результатам PH.
Дифференциальный диагноз. Нодулярный дерматит необходимо отличать от крапив-
ницы, кожиой формы туберкулеза, стрептотрихоза, делидикоза, оспы, а также от пораже-
ний, возникающих в результате укусов клещей и жалящих насекомых. При крапивнице эпи-
дермис по краям не отслаивается.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные иммунны к повторному заражению. Однако длительность и
напряженность постинфекционного иммунитета варьируют. Перекрестного напряженного
иммунитета между вышеуказанными типами вируса нет. Надлежащих средств специфиче-
ской профилактики нет. Для иммунизации КРС против нодулярного дерматита, вызываемо-
го вирусом типа Neethling, применяют 3 кенийских штамма вируса оспы овец (Кедонг, SP-
143 и Isiolo), выращенные в культуре тканей семенников ягнят и на ХАО КЭ. Обычный ви-
рус оспы овец иммунитета против нодулярного дерматита не дает. Вакцину вводят подкож-
но; длительность иммунитета 1 г. При контакте привитых коров с не иммунными к оспе ов-
цами последние не заболевают.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Захаров В. М. и др. Тр. ВНИВВИМ, Покров, 1992.
ОСПА КРОЛИКОВ
Rabbit Рох, Rabbit plague (англ.), Kaninchenpocken ( нем.)
Оспа кроликов (ОКр) - острая заразная болезнь, характеризующаяся появлением па-
пулезной сыпи на коже, лимфаденита, оспенных инфильтратов на слизистых оболочках
ЖКТ, некротических очагов в паренхиматозных органах, орхитом и офтальмией. Эпизоотии
750
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
ОКр описаны в Голландии, США, Франции, ФРГ, ГДР. В бывшем СССР впервые выделили
вирус во время эпизоотической вспышки в 1958 г.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. ОКр вначале заболе-
вает молодняк 1,5-3-мес возраста, а позднее и взрослые кролики. Инкубационный период
продолжается от 5 дн до 2-3 нед. У больных животных развиваются гнойные конъюнктиви-
ты, кератиты, риниты, отёки кожи головы и живота, появляется гипертермия и учащается
дыхание. С 6-10-го дн болезни на месте отёков начинается некроз кожи. Различают молние-
носное (смерть наступает внезапно, без клинических предвестников), острое и хроническое
течение болезни. Трупы кроликов истощены, слизистые оболочки носа и рта воспалены,
подкожная клетчатка суховата. В грудной и брюшной полостях небольшое количество се-
розного экссудата. Лёгкие не изменены. Сердечная мышца дряблая, истончённая, серого
цвета. Печень тёмно-вишнёвая, иногда с желтушным оттенком. Селезёнка сине-фиолетовая,
несколько увеличена, пульпа плотная. Болезнь очень контагиозна, гибнет до 70% молодых и
30-40% взрослых кроликов.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус ОКр впервые выделил и описал Янсен в 1914 г. Американские исследователи ус-
тановили, что он во многих отношениях сходен с вирусом осповакцины (Рис. 112) и прохо-
дит через фильтры Беркефельда. Одни исследователи считают ВОКр самостоятельным ви-
дом; другие полагают, что это штамм нейролапины, естественно распространившийся среди
лабораторных кроликов. В действительности оба вируса имеют близкое антигенное и имму-
нологическое родство, однако ВОКр высоко контагиозен, а вирус нейролапины - неконта-
гиозен. В геноме вируса ОКр идентифицированы 2 участка, ассоциированных с повышенной
вирулентностью для мышей. Один содержит несколько открытых рамок считывания и за-
ключает 3 гена, один из которых кодирует образование продукта, связанного с С5-белком
комплемента; другой, ассоциированный с повышенной вирулентностью, участок геномной
ДНК, представляет собой Hind III М фрагмент, содержащий лишь одну полную открытую
ранку считывания. Этот ген кодирует полипептид из 254 аминокислот (мол.м. 25 кД ), свя-
занный с 4-ым компонентом комплемента.
Морфология и химический состав. Между вирусами ОКр и осповакцины морфологи-
ческих различий не найдено.
Устойчивость. Вирус терморезистентен. Вирусосодержащая суспензия ткани семенни-
ков в 50%-ном р-ре глицерина полностью сохраняла вирулентность 127 дн при температуре
4°С. Прогревание вируса в течение 40 мин при 55°С снижает титр инфекционности на 0,9-
1,1 1g. На ХАО КЭ при 40 - 40,5° С вирус индуцировал образование оспин.
АГ структура. В структуре вириона ОКр найдены растворимый LS АГ и группоспеци-
фический NP-антиген (общий для всех вирусов группы оспы, составляет 50% от всей массы
вириона и содержит всю его ДНК, которая связана с внутренним белком).
АГ активность. Вирус индуцирует образование ВНА и других АТ.
АГ вариабельность и родство. В серологических реакциях (РСК, РДП, PH и РЗГА), а
также ИФ установлено близкое, но, видимо, одностороннее родство вируса ОКр с вирусами
оспы коров, эктромелии, оспы обезьян и осповакцины (при использовании в качестве АГ
инфекционного вируса или растворимого LS-антигена ).
Животные, иммунизированные шт. Утрехт (У) и Солнцевский (С) вируса ОКр, не при-
обретают иммунитета к вирусу дермовакцины (шт. Ташкенский). Однако кролики, иммуни-
зированные шт. Ташкенский, приобретают устойчивость к вирусу ОКр. По движению в гра-
диенте плотности сахарозы вирус ОКр отличается от вирусов осповакцины и нейровакцины.
ГА свойства. Изучены недостаточно. Они, видимо, связаны с особенностями штаммов.
Так, например, шт. У и С не обладают, а шт. Р обладает этими свойствами.
751
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Локализация, вирусоносительство и вирусовыделение. При внутрибрюшном зара-
жении кроликов вирусемия отмечалась через 2-4 ч, на 6-7-й дн после заражения концентра-
ция вируса в крови достигла 105,3-108 мл. При аэрозольном заражении кроликов вирусом
нейровакцины его находили в печени, почках, надпочечниках и в других органах. Выделить
вирус от заражённых кроликов можно из места его введения, региональных введению лим-
фоузлов, селезёнки и других органов. Через сутки его можно также выделить из крови, взя-
той в большом объёме (16-20 мл); из меньшего объёма его выделяют позже.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на кроликах. При внутрикож-
ном введении ВОКр на месте инокуляции появляются обширные отёки, а в последующем
развивается некроз кожи. Аппликация вируса на скарифицированную кожу сопровождается
некрозом без образования оспин. Сильный отёк кожи появляется и после внутрикожного
введения вируса курам. Мыши при подкожном введении не гибнут, при внутрибрюшинном -
гибнут до 50% животных. Штаммы ВОКр обладают различной вирулентностью. Например,
шт. У и Р высоковирулентны для мышей при интрацеребральном заражении, однако виру-
лентность их для кроликов при введении в мозг оказалась различной: шт. У вызывал их ги-
бель, шт. Р - нет. Инфицирующая доза шт. У для кроликов зависит от места введения. При
внутрикожном введении она минимальна, при введении в конъюнктиву максимальна. Шт. Р
менее вирулентен для кроликов. Он вызывает гибель лишь 50% животных.
Культивирование. Кроме кроликов, культивирование вируса удаётся на КЭ и в куйьту-
ре клеток некоторых видов. При заражении 11-12-дн КЭ на ХАО шт. С образуются оспины
с выраженными геморрагиями и изъязвлениями (и+ - признак) размером 1 -2 мм. Эмбрио-
ны обычно погибают через 72 ч. На теле, голове и лапах зародыша видны кровоизлияния.
ВОКр хорошо культивируется в первичных культурах клеток лёгких кроликов н в пере-
виваемых линиях L и HeLa, вызывая ЦПД. Трипсин, хемотрипсин и панкреатин повышают
бляшкообразующий титр вируса при кратковременном (не более 1 ч) воздействии. В куль-
туре клеток почки зелёных мартышек CV-1 вирус ОКр вызывает слияние н лизис клеток.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Болезнь очень контагиозна. Перезаражение происходит преимуществвенно респиратор-
ным путём. Вирус может передаваться от кроликов лошадям.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании клиннко-эпизоотологических и эпидемиологических дан-
ных, патологоанатомических изменений, результатов исследования в световом микроскопе
мазков из патологического материала (папул), окрашенных по Морозову. В стёртых случаях
применяют РДП в агаре. Иногда ставят биопробу. Для этого кроликов заражают суспензией,
приготовленной из паренхиматозных органов и головного мозга павших животных. Мате-
риал инокулируют подкожно и внутрибрюшинно. При заражении на ХАО развиваются спе-
цифические поражения (оспины с геморрагической зоной в центре). ОКр следует дифферен-
цировать от эктромелии, кокцидиоза и язвенного стоматита.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие кролики приобретают пожизненный иммунитет. Для профилактики кро-
ликов прививают вирусом осповакцины. Он создаёт иммунитет через 72 ч продолжительно-
стью до 3 лет. Вирус наносят на скарифицированную кожу внутренней поверхности уха. У
кроликов развивается местная реакция, подобная той, какая наблюдается у людей при оспо-
прививании. Весь процесс от начала прививки до полного заживления длится 16-21 день.
Во время переболевания убивают подозрительных и явно больных кроликов, а осталь-
ных вакцинируют. Не рекомендуется прививать самок в конце беременности (за неделю до
окрола), так как приплод может быть нежизнеспособным или мёртвым. Молодняк вакцини-
руют после отъема. Следует иметь ввиду, что применение с профилактической целью ос-
пенной медицинской вирусвакцины может вызвать у кроликов осложнение и даже вспышку
752
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
поствакцинальной прививной оспы. В результате скрыто протекающей спонтанной инфек-
ции у некоторых кроликов может вырабатываться невосприимчивость.
ОСПА ВЕРБЛЮДОВ
Camel pox (англ.); Variole du chemau (франц.); Kamelpocken (нем.);
Photo-Shootur (исп.)
Оспа верблюдов (ОВ) - контагиозная болезнь, протекающая с образованием характер-
ной узелково-пустулезной оспенной сыпи на коже и слизистых оболочках. Впервые об ОВ
стало известно в 1840 г. (Массон, 1940). Позже о ней сообщали Э. Нокар и Е. Лекленш
(1898), С. А. Аманжулов, А. А. Самарцев и Л. Н. Арбузов (1930), описавшие заражение по-
гонщиков от верблюдов, больных оспой. Её регистрируют в Иране, Афганистане, Пакистане
и в северо-восточной Африке. Последняя эпизоотия ОВ наблюдалась в Туркмении в 1964 -
1966 гг. В те же годы её регистрировали в Узбекистане, а в 1965 - 1969 гг. она распростра-
нилась из Туркмении на территорию Гурьевской области Казахстана.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод в зависимости от возраста верблюдов, свойств вируса и путей проникновения его в ор-
ганизм продолжается 4-15 дн: у молодняка 4-7, у взрослых 6-15 дн. Верблюжата от неим-
мунных верблюдиц могут заболевать через 2-5 дн после рождения. Наиболее короткий ин-
кубационный период (2-3 дн) наблюдается у верблюдов после заражения ВОВ.
В продромальный период у больных верблюдов температура тела повышается до 40 -
41 °C, появляется вялость, животные отказываются от корма, конъюнктива и слизистые обо-
лочки рта и носа гиперемированы. Однако эти признаки часто просматриваются, особенно
в начале возникновения болезни. Протекает оспа различно в зависимости от возраста жи-
вотных: у молодняка, особенно у новорожденного, чаще остро (до 9 дн); у взрослых - подо-
стро и хронически, у беременных верблюдиц - чаще латентно. Наиболее характерна кожная
форма оспы, протекающая подостро. При таком течении у больных изо рта и носа выделяет-
ся сначала прозрачная, позже мутноватая серовато-грязноватого цвета слизь. Животные
трясут головой, трутся о различные предметы, сопят и фыркают, выбрасывая при этом вме-
сте с вируссодержащей слизью пораженный вирусом эпителий. Вскоре в области губ, нозд-
рей и век образуется отечность, иногда распространяется на межчелюстную область, шею и
даже область подгрудка. Подчелюстные и нижние шейные лимфоузлы увеличены. У живот-
ных снижается аппетит, они подолгу лежат и с трудом поднимаются. На коже губ, носа и
век, на слизистой оболочке рта и носа появляются красновато-серые пятнышки; под ними
образуются плотные узелки, которые увеличиваются и превращаются в папулы серого цве-
та, а затем в пустулы размером с горошину и фасоль с западающим центром и валикообраз-
ным утолщением по краям. Пустулы размягчаются, лопаются, и из них выделяется липкая
жидкость светло-серого цвета. Оспины появляются сначала на голове.
В возрасте от 1 года до 4 лет верблюды переболевают легко. Поражения локализуются
на коже головы, преимущественно в области губ и иоса. У верблюдиц нередко поражается
вымя, а иногда и слизистая оболочка влагалища. У некоторых животных мутнеет роговица,
отчего на 5-10-й дн наступает временная слепота на один глаз, а у верблюжат - чаще на оба
глаза. У взрослых верблюдов на слизистой оболочке ротовой полости вскрывающиеся пус-
тулы сливаются и кровоточат, особенно при травмировании грубыми кормами. При генера-
лизации оспенного процесса иногда развивается пиемия и осложнения (пневмония, гастро-
энтериты, некробактериоз и др.). Прогноз болезни у взрослых верблюдов благоприятный, у
верблюжат при остром течении, особенно в возрасте до 15-20 дн, и рожденных не иммун-
ными к оспе верблюдицами, неблагоприятный. Верблюжата болеют тяжело, и многие (20-
30%) гибнут. Верблюды в возрасте 1-3 лет переболевают оспой легче, а в старшем возрас-
48 Зак. № 171
753
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
те, хотя и болеют тяжело, с признаками ярко выраженного генерализованного процесса, но
погибают мало (смертность не превышает 4-7%).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Величина вирионов (260-280)( 190-200) нм. Она характерна для рода Orthopoxvirus. Ор-
топоксвирусы верблюдов составляют отдельные виды вирусов рода Orthopoxvirus.
Устойчивость. В сухих корках, запаянных в ампулах, находящихся в прохладном мес-
те, вирус сохраняется жизнеспособным не менее 4,5 мес. При кипячении он погибает мо-
ментально, при 90°С - за 1-2 мин, при 70-80°С - за 10, при 60°С - за 15 мнн. УФ облучение
(1000 Вт, лампа ПРК-7 на расстоянии 0,5 м) инактивирует вируссодержащую суспензию за
3 ч, прямые солнечные лучи - за 2 ч. Вирус высокочувствителен к эфиру и хлороформу.
АГ структура не изучена. У ВОВ шт. СР-1 идентифицирован ген, аналогичный гену
160 кД вируса коровьей оспы, кодирующему белок телец- включений типа А.
АГ активность не изучена.
АГ вариабельность и родство. Серологически выявлена взаимосвязь ВОВ с вирусами
группы осповакцины. Однако в РДП вирус (шт. Т-72) проявил АГ отличие от вирусов оспо-
вакцины и оспы коров. Между отдельными штаммами ВОВ имеются иммунологические
различия. Например, кролики, иммунизированные ВОВ (шт. Тегеран), резистентны к вирусу
осповакцины, но чувствительны к ВОВ (шт. Tayoum/71). Перекрестной иммунизирующей
активности между двумя шт. Tayoum/71 и Teheran не обнаружено.
Г А активность вируса низкая -1:2-1:16.
Вирусемия, вирусоносительство и вирусовыделение. Попав в организм животного,
вирус проникает в кровь (вирусемия), лимфоузлы, внутренние органы, эпителиальный слой
кожи н слизистые оболочки. Оспины развиваются по стадиям: от розеолы с узелком до пус-
тулы с корочкой и последующим рубцом
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на верблюжатах 2-4-мес воз-
раста при инокуляции вируса в скарифицированную кожу губ и бесшерстную часть паховой
области. Через 5 дн после внутрикожного введения у верблюжат появляются папулы, а на 9-
10-й формируются корочки. У некоторых животных происходит генерализация процесса.
Вирус выделяется из кожных поражений и крови.
Из 11 проверенных видов животных и птиц к ВОВ оказались чувствительны лишь верб-
люды, кролики (только при внутримышечном заражении) и мыши (при интрацеребральном
заражении). Вирусы оспы овец и осповакцины непатогенны для одногорбых египетских
верблюдов и не защищают их от последующего заражения ВОВ (шт. Tayoum/71).
Культивирование. ВОВ культивируется на ХАО КЭ. Через 4 дн инкубации при 36-
38°С вирус индуцировал мелкие (до 1 мм) белые пролиферативные фокусы, внешне напо-
минающие очаги поражения ХАО, вызываемые вирусом коровьей оспы. Генерализации
процесса и гибели КЭ не наступало даже при высокой дозе заражения.
Шт. (64-7255 и 64-7275), выделенные в Иране в 1970 г., репродуцируются на ХАО КЭ,
но не размножаются в коже кролика. ЛД50 их для взрослых и новорожденных мышей рав-
нялась таковой для вируса натуральной оспы. На ХАО КЭ они образуют серо-белые оспины
диаметром 0,5-1 мм без центральных геморрагий или некроза. В цитоплазме клеток ХАО
выявлены эозинофильные фольгенположительные включения. Вирус не вызывает кожной
реакции у кроликов, овец и цыплят; патогенен для клеточных культур широкого спектра и
обладает выраженными цитоцидными свойствами, чем отличается от вируса оспы человека.
Он хорошо размножается в первичных культурах почки овцы, ВНК-21, РК-15 и Vero. По-
сле 7-го дн инкубации под агаровым покрытием образует мелкие бляшки в клеточных куль-
турах куриных фибробластов. В зараженных клетках образуются цитоплазматические эози-
нофильные включения.
Особенности внутриклеточной репродукции не изучены.
754
Г лава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. В естественных условиях верблюды заража-
ются при контакте с больными животными, а также через инфицированную воду, корма,
помещения и предметы ухода, аэрогенно - при разбрызгивании вируссодержащих истечений
больными животными. Инфекция очень контагиозна.
Спектр патогенности в естественных условиях. Оригинальный вирус ОВ патогенен
для верблюдов всех возрастов, но не передается человеку, крупному и мелкому рогатому
скоту, лошадям, ослам, свиньям, зайцам, кроликам, сусликам, крысам, сирийским хомяч-
кам, белым мышам, курам и голубям.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомиче-
ских изменений, положительных результатов вирусоскопии (по Морозову), а также биопро-
бы на восприимчивых животных. Вирус удается выделить из органов абортированных пло-
дов больных оспой верблюдиц. При наличии активных специфических сывороток или гло-
булинов рекомендуется использовать РДП и PH.
ОВ необходимо дифференцировать от некробактериоза, ящура, грибковых поражений и
незаразных болезней, прн которых поражается кожа в области губ и носа (янтак-баш, джан-
ток-бас); последние возникают в результате травмирования губ и носа верблюжьей колюч-
кой. При дифференциации вируса оспы необходимо определить его вид (оригинальный
ВОВ, вирус оспы коров или осповакцины).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У верблюдов, переболевших оспой в естественных условиях, иммунитет сохраняется до
25 лет. Характер иммунитета кожно-гуморальный, о чем свидетельствуют присутствие в
сыворотке реконвалесцентов ВНА и невосприимчивость верблюдов к повторному зараже-
нию гомологичным вирусом оспы. Верблюжата, родившиеся от переболевших оспой верб-
людиц, невосприимчивы к тому виду оспы, которым переболела верблюдица, особенно в
первые 3 года. Верблюжата, находящиеся в период эпизоотии под маткой, не заболевают
или переболевают сравнительно легко.
Для профилактики заражения верблюдов оспой коров в неблагополучных и угрожаемых
по оспе коров хозяйствах рекомендуют использовать медицинский препарат - оспенный
детрит. Иммунизируют всех клинически здоровых верблюдов независимо от возраста, пола
и физиологического состояния.
ОСПА ЛОШАДЕЙ
Ansteckende pustulose Mundentzundung, Stomatitis pustilosa contagiosa,
Variola eguina (лат.); Horse pox, Grease disease (англ); Variole eguine
(франц.); Pferdepocken (нем.)
Оспа лошадей - контагиозный пустулезный дерматит лошадей, контагиозный пусту-
лезный стоматит (greose-heel) - острая контагиозная болезнь, протекающая сравнительно
легко, особенно если вызвана вирусом осповакцины. Распространение повсеместное. В на-
стоящее время болезнь встречается крайне редко. В 1959 г., по данным ФАО, она зарегист-
рирована (низкая заболеваемость) в Норвегии, Венгрии, Испании, Ливане и Ирландии.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь проявляется в
формах контагиозного пустулезного стоматита, везикулярно -пустулезного дерматита или в
сочетании их с преобладанием тех или иных признаков. В первом случае поражаются, глав-
ным образом, слизистая оболочка ротовой полости, кожа губ, носа и щек, реже - кожа груди,
плеч, бедер, вокруг анального отверстия и половых органов. Иногда в процесс вовлекаются
слизистая оболочка зева, гортани и носа, а также конъюнктива и роговица.
48* 755
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Болезнь продолжается 14-20 дн, при осложнениях - 26 дн и дольше. Во этом случае ча-
ще поражается кожа в области сгибателей путового сустава. После того как нагноившиеся
пузырьки лопаются, болезненный процесс напоминает картину “мокреца”. Животные хро-
мают, худеют. Прогноз, как правило, благоприятный, особенно при поражении вирусом ос-
повакцины, так называемой дженнеровской оспой. Оспой болеют лошади всех возрастов.
Тяжелее болезнь протекает у жеребят-отьемышей.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Возбудителем оспы у лошадей служит вирус оспы коров, но может быть и вирус оспо-
вакцины. Установлена возможность переноса оспы от лошадей свиньям, коровам, кроликам,
морским свинкам и человеку. Вирусом оспы лошадей могут заражаться мулы, верблюды,
буйволы и коровы.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Среди лошадей оспа передается путем контакта от больных животных здоровым, а так-
же обслуживающим персоналом с одеждой и предметами ухода. Диагноз при типично вы-
раженной экзантеме поставить нетрудно. Правильность клинического диагноза подтвержда-
ется обнаружением в мазках элементарных телец. Для дифференциации оспы от других эк-
зематозных патологий, часто развивающихся у лошадей в области путового сустава, можно
ставить биопробу на кроликах. Ретроспективная диагностика не разработана.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет у лошадей-реконвалесцентов длится несколько мес. Вирулицидность сыво-
ротки исчезает через год, “кожный” иммунитет сохраняется дольше. Переболевшие жеребя-
та через год могут опять заболеть оспой. Специфической профилактики нет. После иммуни-
зации лошадей вирусом осповакцины невосприимчивость к оспе у них развивалось к 10-му
дн. Оспенный детрит-(вирус осповакцины) - в количестве 10 человеческих доз втирают ло-
шади в скарифированную кожу тупым концом скальпеля на границе верхней и средней тре-
ти шеи. Через 2-4 дн края ранки на месте введения детрита припухают, а еще через 1-2 дн
появляются отдельные узелки. Из них на 5-7-й дн образуются пустулы, которые быстро под-
сыхают и покрываются коркой.
ОСПА КОРОВ
Cowpox (англ); Variola vaccina (лат.); Vaccine ( франц.); Rinderpocken (нем.)
Оспа коров (ОК) - контагиозная болезнь, характеризующаяся интоксикацией организма,
лихорадкой и узелково-пустулезной сыпью на коже и слизистых оболочках. Распростране-
ние повсеместное. В последние годы истинная (генуинная) оспа коров встречается сравни-
тельно редко. Чаще причиной её служит вирус осповакцины, передавшийся коровам, глав-
ным образом, от доярок после вакцинации (или их детей) оспенным детритом телят.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. В естественных усло-
виях болезнь может быть вызвана вирусом генуинной ОК и прививочным ВОВ. Инкубаци-
онный период продолжается 8-9 дн. Продромальный период (лихорадка, повышение темпе-
ратуры на 0,5-1 °C, вялость, отсутствие аппетита, снижение удоя, разжижение молока) не-
редко проходит незамеченным. Болезнь чаще протекает остро и подостро, реже хронически.
При оспе у коров на коже вымени и сосков, а иногда головы, шеи, спины, бедер (у бы-
ков на мошонке) появляются розеолы, а через 2-3 дн папулы и везикулы, превращающиеся в
круглые или продолговатые (чаще на сосках вымени) пустулы с красноватым ободком и уг-
лублением в середине. При генуинной оспе некротизируются обычно более глубоко распо-
ложенные ткани, и оспины выглядят сравнительно плоскими, а если произошло кровоиз-
лияние, они становятся синевато-черными. Подкожная клетчатка под пустулами воспалена и
тверда на ощупь. Через 10-12 дн после начала болезни на месте пустул образуются коричне-
756
Глава XVU. Family Poxviridae Оспенные инфекции
ватые корочки (струпья). Оспины появляются постепенно, в течение нескольких дней, и со-
зревают не одновременно, а примерно 14-16 дн. У телят оспины обычно появляются на го-
лове, слизистых оболочках губ, рта и носа. Болезнь длится 14-20 дн., она может сопровож-
даться ярко выраженными признаками генерализации, осложняться язвами и маститами.
Оспа у коров, вызванная вирусом осповакцины, протекает легче и менее продолжитель-
но, хотя и охватывает иногда всех дойных коров в стаде. Оспины появляются лишь в местах
первичного поражения, захватывая главным образом поверхностные слои кожи, и выглядят
они более выпуклыми, чем при болезни, вызванной истинным вирусом оспы коров.
Патологоанатомические изменения характеризуются появлением описанных выше по-
ражений на коже и слизистых оболочках. При генерализации процесса (множественном вы-
сыпании оспин) обнаруживают признаки лимфаденита и лимфангита, а при осложнениях
образуются в подкожной клетчатке абсцессы и флегмоны. При гистологическом исследова-
нии отмечается специфическое сетчато-гнездное строение оспенных везикул и обнаружива-
ются оспенные тельца-включения.
Животные заболевают оспой независимо от времени года и природно-климатических
условий. Однако болезнь чаще регистрируют, и она тяжело протекает зимой и ранней вес-
ной, когда в организме коров уменьшается содержание витаминов, нарушается обмен ве-
ществ, повышается проницаемость кожи и слизистых оболочек и снижается резистентность.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. ВОК в процессе внутриклеточной репродукции
проходит несколько стадий. Зрелые вирионы имеют форму куба с округлыми краями. Раз-
меры вирионов 170-350 нм, их продолговатый капсид имеет винтовой тип симметрии. По-
верхностный белковый слой вириона состоит из сети полых ( канал 2-7 нм) нитевидных
структур - филаментов диаметром 8-12 нм. В центре вириона находится двояковогнутый
содержащий ДНК нуклеоид.
Устойчивость. При температуре 4°С вирус сохраняется до 1,5 лет, при 20°С - 6 мес, а
при 34°С - до 60 дн. Замораживание консервирует его. Он быстро гибнет в загнивающей
ткани, чувствителен к высокой температуре, действию солнечных лучей и кислот; при кипя-
чении погибает за 2-3 мин, при 70°С - за 5, при 60°С - за 10, при 55°С - за 20 мин. и при
39°С - в течение 1 сут. Пептон повышает его стабильность. Терморезистентность штаммов
вируса варьирует. УФ лучи инактивируют его за 4 ч, ультразвук быстро разрушает. При pH
3-3,6 инактивируется в течение 1 ч. Оптимальный pH для хранения равен 7,5-8,5. Из хими-
ческих веществ наиболее губительно действуют на вирус 2,5-5%-ные р-ры серной, соляной и
карболовой кислот, 1-4%-ные р-ры хлорамина, 5%-ный р-р лизола, калия перманганата.
АГ структура. Сходна с АГ структурой вируса осповакцины. В поверхностной части
вириона расположен комплексный LS антиген с 2 серологическими реактивными компонен-
тами: L (heat labil - термолабильный) и S (heat stable - термостабильный). Антиген LS спе-
цифичен для вирусов оспы и осповакцины и идентичен образцам его, полученным как из
оспенных корок человека и ХАО КЭ, зараженных вирусом оспы, так и из тканей телят, кро-
ликов, морских свинок, зараженных ВОВ. Обе части L и S молекулы могут распадаться.
Антиген NP- нуклеопротеид, содержащий 6% ДНК, - другая иммунологически специфи-
ческую часть ВОВ и оспы коров. Его можно выделить из элементарных телец экстрагирова-
нием разведенными щелочами. Антиген NP составляет не меньше половины вещества ви-
русной частицы. После удаления антигена NP нейтрализующая способность сыворотки, по-
лученной на ВОК, не изменяется. Антигены LS и NP составляют значительную часть по-
верхности элементарных телец, участвуют в реакциях преципитации, агглютинации элемен-
тарных телец и связывания комплемента. Они отличаются от Г А вируса оспы.
АГ активность. В сыворотке крови реконвалесцентов обнаруживают ВНА, КСА, ПА, и
задерживающие ГА антитела, динамика повышения и снижения титров которых не изучена.
757
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
АГ вариабельность и родство. В АГ отношении ВОК весьма сходен с вирусом оспо-
вакцины, но отличается от него в РСК и РДП.
ГА свойства. ВОК агглютинирует эритроциты кур при 37°С. Агглютинабельносгь
эритроцитов отдельных особей значительно колеблется, вплоть до полной нечувствительно-
сти. При размножении вируса ГА накапливаются в ХАО и в тканевых культурах. При пас-
сажах вируса на перевиваемых клетках L и клетках асцитной карциномы Эрлиха ГА спо-
собность может утрачиваться, но после пассажей на КЭ она обычно восстанавливается. ГА
вирусов осповакцины и ОК отличается от элементарных телец и молекул белка LS и пред-
ставляет собой липопротеин. Он отделим от элементарных телец и содержит фосфолипиды.
В суспензиях ХАО зараженных КЭ, обработанных эфир-этанолом илн подвергнутых
хроматографии в сефадексе LH-20, обнаруживают ГА 2-х типов. Один из них (легкий ком-
понент) - лнпид. Он осаждается при 30000 мин'1, обладает неспецифической ГА активно-
стью, термолабилен; его активность повышается после обработки трипсином и подавляется
нормальной сывороткой морской свинки. ГА другого типа более тяжелый, термостабилен,
на него не влияет трнпснн, и ГА не подавляется нормальной сывороткой, он способен бло-
кировать АТ. Первый ГА является тканевым АГ, а второй - вирусным.
Локализация, вирусоносительство и вирусовыделение. Вирус размножается локаль-
но в эпителиальных клетках кожи и слизистой оболочки. Пораженные клетки подвергаются
баллонирующей и ретикулирующей дегенерации и растворяются. На их месте образуются
полости, заполненные прозрачной лимфой. При тяжелом поражении вымени вирус выделя-
ется с молоком. Сроки вирусемии при ОК не изучены. В папулах вирус находится обычно в
виде чистой культуры, в везикулах появляются гноеродные бактерии н другие микроорга-
низмы. Во внешнюю среду вирус попадает с отпадающими струпьями.
Экспериментальная инфекция. ВОК удается заразить телят (в скарифицированную
кожу), кроликов (в яичко), морских свинок, мышей и обезьян. У инфицированных живот-
ных некроз эпителия развивается медленнее, чем при заражении их вирусом осповакцины,
но поражение мезодермальной тканн более значительно и геморрагии крупнее. Мыши, за-
раженные вирусом интраперитонеально, погибают чаще, чем зараженные вирусом вакцины.
При подкожном заражении они погибают через 5-7 дн. От вируса осповакцины мыши не
гибнут. Поражения от ВОК на роговице у кроликов меньше по сравнению с ВОВ.
В последние годы наблюдается расширение спектра животных-хозяев, возможно носи-
телей ВОК. Возбудитель оказался причиной оспенного заболевания кошек и различных жи-
вотных в зоопарках. Он был также изолирован от нескольких видов грызунов, которые, ве-
роятно, являются резервуаром инфекции. Описано заражение людей оспой коров от кошек.
Наблюдается рост заболеваемости кошек ортопоксвирусными инфекциями. Резервуаром,
по-видимому, являются грызуны. У кошек развиваются язвенные поражения на голове и пе-
редних лапах, обычно без тенденции к генерализации; через 3-5 нед наступало выздоровле-
ние. Иногда поражались внутренние органы (легкие, печень), что могло приводить к ле-
тальному исходу. В последние годы описано 8 случаев заболевания людей, обусловленные
ВОК; В 6 из них источником были домашние кошки. Поражения у людей локализовались
главным образом на лице и руках. Изучали 14 штаммов, обусловившие в ФРГ в 1985-1990
гг. оспенные заболевания кошек, людей и слонов; 11 из них оказались родственны ВОК.
Для вирусов осповакцины и натуральной оспы возможен единый предшественник, кото-
рым может быть ВОК илн его аналог. Подтвердить этот вывод возможно после секвениро-
вания всего генома ВОК и сравнения с геномами вирусов натуральной оспы и ВОВ.
Культивирование. ВОК отличается от вируса осповакцины характером роста на ХАО
КЭ, размером и структурой включений, образует диффузные и геморрагические оспины.
Большие заражающие дозы легальны для эмбрионов. Выделено несколько вариантов штам-
мов, вызывающих образование белых оспин на ХАО. КЭ, зараженные ВОК в аллантоисную
758
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
полость, погибают; зараженные аналогичным методом вирусом осповакцины - не погибают.
Кроме КЭ, вирус можно культивировать в культуре клеток почки КРС, КЭ и почки эмбрио-
на человека. Образуются мутные бляшки. Для вируса характерны в пораженных тканях
включения 2-х типов: одни - сходны с тельцами Гварниери, другие - гиалиновые тельца, не
дающие реакции на ДНК и не реагирующие со специфическими сыворотками в РИФ.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные жи-
вотные, выздоровевшие и вирусоносители, находящиеся в инкубационном периоде болезни.
Во внешнюю среду вирус попадает с отторгающимся эпителием (оспинами) кожи, истече-
ниями из носовой и ротовой полостей, глаз больных животных и вирусоносителей. В пере-
даче инфекции участвуют обслуживающий персонал в период вакцинации и ревакцинации
их оспенным детритом, если не соблюдается правила личной гигиены, а также предметы
ухода за животными и корма. Основные пути заражения коров оспой - контактный, аэро-
генный и алиментарный. Возможна передача вируса кровососущими насекомыми, в орга-
низме которых он может сохраняться 100 дн и дольше.
Спектр патогенности в естественных условиях. Кроме коров, к вирусу восприимчи-
вы буйволы, лошади, ослы, мулы, свиньи, верблюды, кролики, обезьяны и человек. Предпо-
лагают, что ВОК - родоначальник вирусов оспы животных других видов и человека. Шт.
Gen-86 ВОК изолирован от больных коров, он оказался патогенным для котят при разных
способах их заражения. Очевидно, домашние кошки могут быть промежуточным хозяином
при циркуляции ВОК в цепи грызуны - КРС.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на ОК ставят на основании анализа клинико-эпизоотологических и эпидемио-
логических данных, результатов лабораторных исследований (вирусоскопия, гистология, се-
рология) и биопробы на кроликах с идентификацией выделенного возбудителя в КЭ, куль-
турах клеток и показаний реакции РДП. Отсутствие элементарных телец в препарате ещё не
служит основанием для исключения оспы. В этом случае испытуемым материалом заража-
ют кроликов в роговицу (проба Пауля). При гистологическом исследовании поражённых
участков роговицы обнаруживают тельца-включения Гварниери.
При заражении кроликов ВОК в скарифицированную кожу развивается геморрагическое
воспаление ( при заражении вирусом осповакцины геморрагий не бывает ) и появляются
лишь небольшие оспины в местах скарификации. Биопробу можно ставить на телятах. В ка-
честве экспресс-диагностики применяют РДП на предметном стекле с использованием со-
держимого оспенной сыпи и иммунной антивакцинальной кроличьей сыворотки. ОК диф-
ференцируют от ящура и осповакцины (по гибели КЭ и белых мышей).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет при оспе тканево-гуморальный (последний подтверждается обнаружением в
крови специфических АТ). Хотя АТ в крови обнаруживают, но более выраженным является
тканевый (кожный) иммунитет. После естественного переболевания животных ОК иммуни-
тет сохраняется пожизненно. Для специфической профилактики применяют живой вирус
осповакцины, нанося его на свежескарифицированную кожу в области промежности или
внутренней поверхности ушной раковины.
ОСПА БУЙВОЛОВ
Buffelpocken (нем.)
Оспа буйволов (ОБ) - контагиозная болезнь, протекающая локально (с поражением,
главным образом вымени) или генерализовано. Болезнь известна на Ближнем Востоке и на
полуострове Индокитай. Первые сведения о ней относятся к началу XX в. Значительные
759
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
вспышки оспы среди буйволов были зарегистрированы в Индии в 1934 г. Подробно оспу у
буйволов описали Шрам (1934), Бахатия (1936) и Варйяр (1937) в Индии. Позже (1944-
1958) болезнь описал Максуд в Пакистане, а Мансор (1951) в Индонезии. В Италии зареги-
стрировал Маммерикс в 1960 г, в Египте - Тантави и др. в 1973-1974 гг, а в Азербайджан-
ской ССР описали М.К.Ганиев и Н.АФарзалиев (1964). ОБ протекает в виде эпизоотий (в
Индии), спорадических случаев (в Египте) или отдельных вспышек. Чаще она возникает в
период вакцинации людей вирусом осповакцины.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Оспой болеют буйво-
лы всех возрастов, но наиболее восприимчивы 2-3-летние животные. Инкубационный пери-
од зависит от возраста животных, их резистентности, степени вирулентности вируса, путей
заражения и после искусственного заражения колеблется от 5 до 11 дн. В продромальный
период перед появлением оспенных поражений у больных животных наблюдается пониже-
ние аппетита и повышение температуры тела до 39,5°С, гиперемия конъюнктивы и сероз-
ные выделения из глаз. Оспенные поражения сначала появляются на сосках и вымени, за-
тем по всему туловищу. Иногда их обнаруживают на бёдрах и влагалище. Все поражения
проходят типичную стадию оспенного формирования. Больные выздоравливают обычно че-
рез 3-4 нед. У некоторых животных наблюдаются осложнения (мастит, стеноз молочных
каналов, болезненные язвы на сосках и других участках туловища).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
М. К. Ганиев и Н. А. Фарзалиев сообщили об идентичности возбудителя оспы буйволов
с вирусом осповакцины. Однако некоторые исследователи считают, что вирус оспы буйво-
лов (ВОБ) - это оригинальный поксвирус (Рис. 114).
Морфология и химический состав. Размер зрелых вирионов вируса оспы, выделенно-
го от больных буйволов в Египте, равен 280-200-100 нм. Морфологи чески частицы вируса
представляют собой кирпичеобразные овальные тельца с хорошо выраженной перифериче-
ской частью. Вирус репродуцируется в цитоплазме клеток. Химический состав не изучен.
Устойчивость. Не изучена.
АГ структура. ВОБ даёт РДП с гомологичной сывороткой 7-9 преципитирующих ли-
ний, из них 6 линий общие с вирусом осповакцины.
АГ активность не изучена.
АГ вариабельность и родство. В РСК, PH и иммунодиффузии ВОБ близок, но не иден-
тичен вирусам осповакцины и коровьей оспы. По имеющимся данным, он не имеет антиген-
ного родства также с вирусами оспы овец, свиней, кур и голубей. Однако нуклеопротеидный
антиген NP вируса даёт слабую линию преципитации с иммунной сывороткой к вирусам ос-
пы кур, голубей и осповакцины. Микроэлектрофоретическим методом исследования удалось
дифференцировать ВОБ, коров и осповакцины.
ГА свойства. У разных штаммов ВОБ различны: у индийского шт. БП-4 средний титр
гемагглютининов 1:32 - 1:64, а у египетского БП Гиза-72 - 1:8-1:16. Египетский шт. Г-1 во-
обще не проявлял ГА активность в отношении эритроцитов кур.
Экспериментальная инфекция. Индийский шт. БП-4 патогенен для кроликов, при
внутрикожном введении его появлялись типичные узелки (оспины, некроз не развивался).
Египетские шт. Г-1 и БП Гиза-72 непатогенны для кроликов. Индийский шт. БП-4 высо-
копатогенен для мышей-сосунков и взрослых мышей при интрацеребральном введении.
Египетские шт. Г-1 и БП Гиза-72 для мышей слабовирулентны.
Культивирование. ВОБ размножается на ХАО КЭ. На 2-3-и сут после заражения ин-
дийским шт. БП - 4 формируются оспенные поражения двух типов: белые выпуклые с ге-
моррагиями или без них и расплывчатые серые, размером 1,6-3 мм. Этот высоковирулент-
ный для КЭ штамм вызывал гибель их на 3-4-е сут. после введения в дозе 104 ООЕ/0,2 мл.
Египетские штаммы наиболее интенсивно размножаются в КЭ при температуре 35,5°С. На
760
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
3-4-е сут после заражения образовывались округлые, плотные, опалесцирующие пролифера-
тивные оспины без геморрагий. Размер их был не более 0,8 мкм. Гибели эмбрионов эти
штаммы не вызывают. Египетские шт. Г-1 и БП Гиза-72 размножались в культурах клеток
первично - трипсинизированных почек крольчат, телят, буйволят и фибробластов КЭ, вы-
зывая ЦПИ на 4-е сут. В заражённых культурах образовывались многоядерые клетки или
синцитий. В цитоплазме появлялись характерные для оспы ацидофильные включения.
В культуре перевиваемых клеток эпителия почек кроликов индийский шт. РК-13 раз-
множался и вызывал формирование бляшек размером 0,8 мм, которые на 6-е сут после за-
ражения отличались от бляшек, образуемых вирусом осповакцины. ВОБ удалось также
адаптировать и к культуре перевиваемых клеток HeLa.
Исследована кривая роста ВОБ в культуре фибробластов КЭ. Шт. ВР-4 ВОБ размно-
жался в первичной культуре почек щенков. Вирус индуцировал ЦПЭ и продуцировал бляш-
ки диаметром 1,5-2 мм с зазубренными краями. Титр вируса возрастал от 2,5 1g в первом
пассаже до 6,5 1g в 5-м.
Особенности внутриклеточной репродукции не изучены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники инфекции и пути заражения. Источником ОБ служат больные животные
и вирусоносители (в инкубационный период и после переболевания). Оспа передаётся здо-
ровым животным как при контакте с больными животными, так и через обслуживающий
персонал, инфицированные вирусом корма и инвентарь. ВОБ могут переносить также насе-
комые, в частности мухи.
Спектр патогенности в естественных условиях. ВОБ, по-видимому, монопатогенен.
Даже коровы после контакта с больными буйволами не заболевали.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомиче-
ских изменений и результатов лабораторных исследований: биопробы, вирусоскопии, серо-
логических реакций (РДП и РСК) и электронной микроскопии. Последняя позволяет прово-
дить быструю и надёжную идентификацию вируса. Для диагностики ОБ можно использо-
вать также РДП. В качестве АГ берут кожу больных оспой буйволов и кроличью антивак-
цинную сыворотку или гипериммунную сыворотку к ВОБ.
Для дифференциации возбудителя ОБ от вирусов ОВ и ОК ставят биопробу на месяч-
ных цыплятах. Они восприимчивы к вирусу осповакцины и невосприимчивы к вирусам ос-
пы коров и оригинальному ВОБ. Идентификацию вирусов ОК и ОБ проводят на коже кро-
ликов (очень чувствительны к вирусу оспы коров) или же по характеру поражений ХАО за-
ражённых КЭ. Так, вирус оспы коров вызывает формирование красных геморрагических
поражений, а ВОБ - мелкие белые оспины. Окончательный диагноз ставят только при выде-
лении вируса - возбудителя болезни.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Не изучены и не разработаны.
ПАРАВАКЦИНА КРС
Pseudocowpox, False cowpox, Natural cowpox (англ.); Vaccine rouge (франц.);
Pseudo-, Stein-, Spitz-, Wasser-, Warzenpocken, Paravakzine, Pseudokuhpocken (нем.)
Паравакцина - вирусная контагиозная болезнь КРС (псевдооспа коров, узелки доярок),
проявляющаяся оспоподобным поражением сосков лактирующих коров. Распространение -
повсеместно.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Поражаются соски
вымени и ротовая полость коров. Оспины напоминают оспу коров; инфекция передаётся до-
761
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
яркам и вызывает у них поражения кистей рук. Узелки появляются после 4 - 8 дн инкубаци-
онного периода и представляют собой ограниченные и безболезненные твёрдые зудящие ве-
зикулы. Выздоравливают животные через 1-2 мес. Человек заражается при доении коров,
особенно если на руках есть ссадины или царапины. У лактирующих коров поражения име-
ют форму полусферических папул вишнёво-красного цвета. Они быстро развиваются, затем
изъязвляются. Гистологически поражение представляет собой эндотелиальную проли-
ферацию с образованием новых мелких кровеносных сосудов.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые описал Липшуц в 1920 г.
Морфология и химический состав. Размер вирионов 296-190 нм. Вирионы более уз-
кие, чем у ВОВ. После обработки пепсином у них обнаруживают полую сердцевину
(Рис. 113).
Устойчивость. Вирус инактивируется в течение 10 мин хлороформом. Выдерживает
нагревание 56°С в течение 30 мин, при 60°С - вирус инактивируется. При обработке суспен-
зии, содержащий вирус, диэтилэфиром в течение 18ч при 4° С активность его не снижается.
АГ структура и АГ активность не изучены
ГА свойства не установлены.
Антигенная вариабельность и родство. В иммунологическом отношении вирус отли-
чается от вируса оспы коров и осповакцины.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на телятах, кроликах, мышах, мор-
ских свинках и КЭ.
Культивирование. Вирус размножается в первичной культуре клеток почки и тестикул
эмбриона КРС. ЦПД проявляется на 8-10-й день и характеризуется округлением, грануляр-
ностью клеток и последующей дегенерацией монослоя. Через 8-10 дн после заливки агаром
образуются гладкие круглые бляшки диаметром 4-5 мм. В окрашенных гематоксилин-
эозином инфицированных клетках обнаруживают большие цитоплазматические тельца-
включения, подобные оспенным. Вирус, адаптированный в культуре клеток почки эмбриона
КРС, хорошо размножается в клетках почек обезьян Cercopithecus.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источником инфекции служат больные животные. От больного животного здоровому
инфекция передаётся человеком при доении.
Спектр патогенности в естественных условиях. К вирусу восприимчив КРС всех по-
род и человек ( заболевают главным образом доярки).
ДИАГНОСТИКА
Быстро поставить диагноз можно по результатам микроскопического исследования ве-
зикулярной жидкости из не лопнувших пузырьков или ультратонких срезов, приготовлен-
ных из стенки везикулы. Дифференцировать паравакцину от оспы коров или осповакцины в
начальной стадии папул и везикул трудно. Считают, что поражённые эпителиальные клетки
не содержат включений, что отличает их от вирусов осповакцины и оспы коров.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Данных нет.
ФИБРОМАТОЗ КРОЛИКОВ
Fibromatosis infectiosum cuniculi (лат.); Shopes fibroma (англ.);
Fibromatose des Kaninchens (нем.)
Фиброма кроликов - вирусная болезнь домашних и диких кроликов, проявляющаяся по-
явлением под кожей и слизистой оболочкой ограниченных узлов или диффузных разраста-
ний соединительной ткани.
762
Г лава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
У диких американских кроликов Syivilagus, (естественного хозяина), и европейских
кроликов Orictolagus вирус вызывает подкожные опухоли. В естественных условиях они
обычно встречаются на ногах. Мягкие и вязкие по консистенции поражения появляются че-
рез 3-5 дн после внутрикожного заражения и сохраняются в течение 10-15 дн до образова-
ния некроза и начала рассасывания.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые описал Шоуп (1932). Вирус Шоупа - онкогенный поксвирус, вызывает
появление внутриядерных эозинофильных включений в 2-5% клеток. Включения различной
формы и размеров, имеют филометозную структуру, иногда заполняют почти всё ядро.
Морфология и химический состав. Размер вирионов 200-240 нм. Они имеют сердце-
вину и электронно-плотный нуклеоид, расположенный эксцентрично. Оболочка вириона со-
стоит из широких и узких трубок. Широкие трубки представляют собой гексамеры, установ-
ленные в гексагональной плоской решётке, свёрнутой в цилиндрическую трубку. Узкие
трубки представлены пентамерами, установленными определённым образом. В цитоплазме
клеток опухолей имеются незрелые и зрелые вирусные частицы, типичные для поксвирусов.
Устойчивость. Изучена слабо. Вирус чувствителен к эфиру.
АГ структура не изучена.
АГ активность не изучена.
АГ вариабельность и родство. В РСК и РПД установлено родство вируса с вирусом
миксомы.
Экспериментальная инфекция. Крысы, мыши, морские свинки и хомячки невоспри-
имчивы к вирусу фибромы кроликов. Инкубационный период после искусственного зараже-
ния кроликов продолжается 2-3 дня. Развивается воспалительная пролиферация соедини-
тельной ткани в виде единичных или множественных неравномерно расположенных яйце-
видных плотных узлов разных размеров, достигающих к 10-му дню величины 2-3 мм. Ино-
гда узелки или диффузные уплотнения охватывают подлежащие мышцы, сухожилия, фас-
ции и появляются в области век, ушных раковин и конъюнктивы. Далее узелки некротизи-
руются и эрозируются. Примерно через 4-5 нед они рассасываются, и на их месте остаются
рубцы. Молодняк иногда худеет и гибнет.
В различных участках подкожной клетчатки находят плотные узелки серо-белого цвета
с блестящей поверхностью. Иногда их обнаруживают в стенке вульвы, в области промежно-
сти и в брюшной стенке, а также в почках, печени, брыжейке, костном мозге, поясничных
позвонках и слизистой оболочке кишечника. Инокуляция вируса в различные ткани кроли-
ков быстро вызывает воспалительную реакцию, затем вскоре начинается пролиферация
фибробластов, которая является основой возникновения опухолевых образований. В 1936 г.
Берри и Дерик показали реактивирующую способность вируса фибромы в отношении про-
гретого вируса миксомы кроликов. Интратестикулярная инокуляция кролику вируса фибро-
мы вызывает значительное увеличение яичка.
Культивирование. Вирус культивируется на КЭ, и, в частности, шт. ОА можно культи-
вировать на ХАО, но в противоположность вирусу миксомы характерные поражения на
оболочке не образуются и эмбрион не погибает. Вирус размножается с ЦПД в культуре кле-
ток домашнего и дикого американского кролика, морской свинки, крысы и человека. В мо-
нослойной культуре почечных клеток кролика появляются очаговые скопления клеток. Ви-
рус фибромы культивировали путём интрацеребральных пассажей на 1-дн мышатах.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Основным источником возбудителя служат больные фибромой дикие и домашние кро-
лики. Передача инфекции в естественных условиях происходит, главным образом, через
укусы комаров, москитов и других насекомых. Контагиозность болезни не установлена.
ДИАГНОСТИКА
763
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Диагноз основан на анализе клинико-эпизоотологических данных, патоморфологиче-
ских изменений и биопробы на восприимчивых крольчатах методом подкожного заражения
суспензией патологического материала.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У переболевших кроликов образуется иммунитет как к возбудителю фиброматоза, так и
к вирусу миксоматоза. Вакцинопрофилактика не разработана.
КОНТАГИОЗНЫЙ ПУСТУЛЕЗНЫЙ ДЕРМАТИТ
(КОНТАГИОЗНАЯ ЭКТИМА) ОВЕЦ И КОЗ
Lippengrind, Ansteckender Lippengrind, Ecthyma contagiosum (лат.); Contagious pus-
tular dermatitis Orf, Sore mouth ( англ. ); Dermatitis pustulosa (нем.)
Контагиозный пустулезный дерматит (КПД) - инфекционная болезнь овец и коз, харак-
теризующаяся поражением слизистых оболочек ротовой полости, кожи губ, головы, молоч-
ных желез и конечностей, сопровождающаяся образованием узелков, везикул, пустул и ко-
рок с преимущественным поражением одного какого-либо участка тела. Болезнь распро-
странена повсеместно. Во многих странах с развитым овцеводством и козоводством она яв-
ляется стационарной инфекцией.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный пе-
риод длится 2-4 дня, редко до 7 дн. Болеют овцы и козы всех возрастов, особенно тяжело -
молодняк. В стационарно неблагополучных хозяйствах взрослые животные болеют редко; у
кормящих овцематок могут встречаться поражения на сосках и вымени. Энзоотии в таких
хозяйствах, как правило, наблюдаются в период окота и после отъема молодняка от маток.
В зависимости от локализации поражений различают стоматит, губную, генитальную и
копытную форму болезни. У ягнят, которые заражаются в первые дни жизни, чаще поража-
ется слизистая оболочка ротовой полости. Болезнь протекает тяжело. У взрослых овец в по-
раженных участках ротовой полости появляются красные пятна диаметром от 2 до 15 мм, в
центре их вскоре образуются пузырьки с прозрачным или мутным содержимым. Увеличи-
ваясь в размере, пузырьки вскоре прорываются, оставляя эрозии. Через 2-3 дня эрозии по-
крываются фибринозным налетом, под которым разрастается грануляционная ткань, запол-
няющая впоследствии весь дефект тканн. В отдельных случаях, когда грануляционная ткань
слишком бурно разрастается, на месте дефекта возникают гроздевидные или малиновидные
образования величиной с орех и более. В осложненных случаях на месте эрозии (на деснах,
щеках, языке) могут возникать некротические очагщили глубокие, плохо заживающие язвы.
Патологический процесс может распространяться на область глотки и гортани, пищевод и
трахею. При благоприятном течении болезни, обычно у взрослых овец и реже у ягнят, по-
ражения на слизистых оболочках заживают в течение 1-2 нед. Эпителизация происходит без
образования рубца. При осложнениях заживление происходит медленно, а в тяжелых случа-
ях (при наличии некротических очагов и изъязвлений) ягнята нередко погибают.
Параллельно с развитием патологического процесса на слизистой оболочке ротовой по-
лости возникает поражение губ (Рис. 167), носового зеркальца, крыльев носа и других уча-
стков головы. Вначале на коже появляются красные пятна, затем - узелки, везикулы и пус-
тулы. Последние увеличиваются и нередко сливаются в обширные очаги. При подсыхании
на их месте образуются корки. Нередко пустулы прорываются, истечения из них засыхают.
При осложнениях микрофлорой образуются долго незаживающие язвы с толстыми корко-
выми наслоениями; из трещин в корках выделяется гноевидная жидкость с запахом. Губы в
таких случаях утолщены, нижняя губа отвисает. У ягнят нередко наблюдают пенистые, либо
764
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
слизистые истечения из ротовой полости. Они содержат частицы омертвевших тканей и
имеют неприятный запах. Больные ягнята с трудом сосут маток или отказываются сосать
вообще, отстают в росте и развитии, худеют и нередко погибают. У больных может повы-
шаться температура тела на 1-2°С.
Копытная форма болезни чаще встречается у овец, обитающих в местах, где почвенно-
климатические и хозяйственные условия способствуют мацерации и травматизации нижних
частей конечностей. Поражается одна, реже несколько конечностей. В межкопытной щели, в
области венчика и на бабках развивается везикуло-пустулезный процесс, заканчивающийся
образованием корок, их постепенным подсыханием и отпадением. Как правило, процесс ос-
ложняется вторичной инфекцией, возникают гнойно-некротические явления. Больные жи-
вотные хромают, чаще лежат, истощаются. У кормящих овцематок поражения в виде розе-
ол, папул, везикул, пустул и корок можно обнаружить на сосках и вымени. В осложненных
случаях могут развиться тяжелые формы мастита. Иногда поражения появляются на срам-
ных губах, препуции, вокруг анального отверстия.
Большинство больных животных выздоравливают. Ягнята погибают либо от истощения,
либо в результате осложнения вторичной инфекцией, поэтому при вскрытии трупов патоло-
гоанатомические изменения во внутренних органах обычно обусловлены осложняющими
факторами. Характерны патологоанатомические изменения на губах и других пораженных
участках кожи, эрозии, некротические очаги и изъязвления на слизистых оболочках ротовой
полости, языке. Иногда обнаруживают пролиферативные поражения в области гортани, на
слизистых оболочках пищевода, рубца, сетки, кишок и сычуга. Изменения в органах пище-
варения, печени, легких чаще всего обусловливаются возбудителем некробактериоза.
При гистологических исследованиях в эпидермисе участков поражения находят ретику-
лярную дегенерацию и внутриклеточные включения, паракератоз, лейкоцитарная инфильт-
рация, полнокровие сосудов, скопление гистиоцитов, лимфоцитов и полибластов.
Кроме поражения конечностей и половых органов, наблюдают и отечную форму болез-
ни, при которой разрастаются клетки слизистой оболочки ротовой полости в виде цветной
капусты, наблюдаются глубокий язвенный стоматит, фарингит, эозофагит. Смертность сре-
ди ягнят высокая. У многих больных ягнят отпадает роговой башмак (6, 7,8).
В Австралии описана необычайная вспышка КПД овец. Обнаружены поражения языка,
напоминающие таковые при ящуре. При ЭМ методом негативного контрастирования обна-
ружены овальные частицы размером 260-160 нм, характерные для парапоксвирусов. В стаде
50 % имели поражения рта, языка, десен в различных комбинациях. Необычное проявление
эктимы в виде преимущественных поражений языка следует учитывать в дифференциаль-
ной диагностики экзотических вирусных болезней овец (9,12).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирусную этиологию болезни установил Эйно в 1921 г. Он воспроизвел её эксперимен-
тально и доказал вторичную роль бактерий некробактериоза (вирус ОРФ) (6, 7).
Устойчивость. Вирус устойчив к высушиванию. В струпьях в условиях комнатной тем-
пературы он сохраняет патогенность до 15 лет, в естественных условиях в сухом струпе - в
течение 4, в высушенном состоянии в запаянных ампулах - до 6 лет. Культуральный лиофи-
лизированный вирус в ампулах при комнатной температуре сохраняется более 5 лет. Во
влажной среде погибает сравнительно быстро: при 64°С - в течение 2 мин, при 60°С - 5 и
при 56°С - 30 мин. В дистиллированной воде инактивируется через 24 ч, но устойчив к рас-
творам КМпО4 и солнечному свету (42 ч). Высокочувствителен к ауреомицину, pH 3 и хло-
роформу, менее чувствителен к эфиру.
В животноводческих помещениях вирус сохраняет активность более 3 лет, на пастбищ-
ных растениях и скошенной траве - до 300 дн, на поверхности почвы и в навозе - до 200 и
на глубине 10-20 см - до 100 дн.
765
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
АГ структура не изучена. Получен банк генов ДНК вируса ОРФ в количестве 1488
клонов. Клоны исследованы на размер вставки, варьировавший от 0,4 до 4,7 тыс. п.н. (3).
АГ вариабельность не установлена. Однако не все штаммы серологически идентичны.
До пускается возможность существования различных АГ типов вируса (6,7,8).
Локализация вируса. Вирус содержится в везикулах, папулах, корках и струпьях боль-
ного животного. В крови и выделениях его обнаружить не удается. При поражениях слизи-
стой оболочки ротовой полости можно выделить также из пораженных участков и истече-
ний. Не выделяется из кала, лимфоузлов, внутренних органов, крови и костного мозга.
АГ активность. Вирус индуцирует образование ВНА, КСА, анти-ГА и ПА. Титр анти-
ГА у выздоровевших овец, кроликов и людей высокий. Другие АТ накапливаются в сыво-
ротках больных и переболевших животных в низком титре, поэтому для серологических ис-
следований обычно используют сыворотку от гипериммунизированных животных. ВН ак-
тивность таких сывороток невысока: неразведенная сыворотка способна нейтрализовать 10-
1000 доз вируса, т.е. в 2-3-х последних его разведениях.
Экспериментальная инфекция. В лабораторных условиях удается заразить кроликов,
котят, щенков собак и обезьян. У кроликов после образования мелких папул наблюдали ше-
лушение кожи и быстрое выздоровление. У большей части инфицированных наблюдали
частичную или полную потерю аппетита, лихорадку, тахикардию, учащенное дыхание, по-
ражения губ и зубов. В ряде случаев болезнь сопровождалась диареей.
При экспериментальном заражении овец и коз на скарифицированную слизистую обо-
лочку губ инкубационный период продолжался 3 дня, после чего поднималась температура,
губы становились отечными, далее появлялись мелкие желтовато-белые узелки 1-2 мм в
диаметре, которые затем увеличивались в размере и превращались в пустулы. Появлялись
вторичные высыпания по краям губ. Корки формировались на 7-й дн у коз и на 10-й дн у
овец. Процесс заканчивался отделением корок на 29-31-й дн у коз и на 36-40-й - у овец. Па-
томорфологическая картина поражений у животных этих видов была сходной. У всех жи-
вотных имела место сероконверсия (10).
Культивирование. Данные о возможности культивирования вируса на ХАО КЭ разно-
речивы. Он хорошо размножается в первичной культуре клеток кожи, семенников и почки
эмбрионов овцы и КРС, а также в клетках почки взрослой овцы с проявлением ЦПД (6, 7,
8). В культуральной среде вирус появляется через 6 ч после обнаружения его в клеточной
фракции культуры. Сроки максимального накопления его в культуре клеток (в жидкой и
клеточной фракциях) колеблются в пределах от 72 до 96 ч и зависят от штамма и степени
адаптации его к данной культуре клеток. В культурах клеток почечного эпителия взрослой
овцы, её плода, кожи плода овцы вирус образует прозрачные круглые, с ровными краями
негативные колонии (бляшки). Вакцинные и эпизоотические штаммы вируса не различают-
ся по морфологии и размерам образуемых бляшек. Вакцинный шт. КК размножается в ор-
ганной культуре кожи неиммунных овец и на 5-е сут инкубирования накапливается в титре
до 10б ТЦД50/МЛ. (5). В органной культуре кожи иммунных животных он не размножается.
Культуральный вирус, обладая иммуногенностью, утрачивает пирогенность. В процессе ре-
продукции вируса идет формирование цитоплазматических включений как типа Б, так и
типа А. Включения типа Б связаны с репродукцией вируса и формированием полноценных
вирусных частиц (инфекционных). Длительному сохранению вида вируса способствует об-
разование включений типа А с вирионами, заключенными в плотный матрикс, что защища-
ет вирус во внешней среде (2).
ГА свойства. Вирус КПД агглютинирует эритроциты человека группы 0.
ГАд свойства. Не изучены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
766
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Источники и пути передачи инфекции. Основной источник инфекции - больные жи-
вотные, в организме которых вирус размножается. Во внешнюю среду он выделяется со
струпьями, корочками и истечениями из ротовой полости, что вызывает заражение пастбищ,
кормушек, воды, кормов, кошар, тепляков, загонов, подстилки. Вирусом загрязняются шер-
стный покров овец, предметы ухода, одежда чабанов. Овцы могут заразиться при пастьбе на
инфицированных пастбищах, поедании зараженного сена, комбикорма, приеме воды из за-
раженных водопоев, непосредственном контакте больных со здоровыми. Значительная роль
в распространении болезни принадлежит переболевшим животным-вирусоносителям. Вирус
может быть занесен в благополучные хозяйства с вновь поступившими больными или пере-
болевшими животными.
Спектр патогенности в естественных условиях. Вирус вызывает болезнь у овец, коз,
серн и туров всех возрастов и у других парнокопытных полорогих животных. Молодые жи-
вотные болеют тяжелее. Человек заражается КПД овец очень редко главным образом при
контакте с больными животными. Заражение происходит прн наличии кожных дефектов
(порезов, царапин). Поражения развиваются в месте проникновения вируса, чаще на кистях
рук. Поэтому по решению МЭБ контагиозная эктима относится к зоонозам. Высокий про-
цент серопозитивных сывороток обнаружен среди овцебыков.
ДИАГНОСТИКА
Первичный диагноз может быть поставлен по симптомам болезни и данным эпизоото-
логии. Для подтверждения его необходимы лабораторные исследования. Диагноз ставят на
основании ЭМ и выделения вируса в культуре клеток почки и легких эмбриона овец или
КРС. Серологические исследования имеют меньшее значение, так как образуется мало ВНА.
Выделение вируса
Подготовка материала. Для лабораторных исследований берут корочки, струпья, по-
раженные участки кожи и слизистых оболочек. Для гистологического исследования отбира-
ют измененные ткани кожи и слизистых оболочек (иногда и легких), размером 11 см, фик-
сируют в 0-кратном количестве 10%-ного р-ра нейтрального формалина.
Заражение животных. Ягнят 3-6-мес возраста заражают, нанося подготовленный ис-
следуемый материал одновременно на несколько предварительно очищенных и скарифици-
рованных участков кожиого покрова - губ, паха, внутренней поверхности бедер. Царапины
должны быть неглубокими, чтобы избежать кровотечения, которое может препятствовать
внедрению вируса. Через 2-4 дня на месте инфицирования возникает мелкая эритема, затем
по ходу царапин кожа становится гиперемированной и припухает. Далее появляются мелкие
узелки, на месте которых образуются вначале везикулы, а затем пустулы с серовато-белым
гнойным содержимым. Пустулы, как правило, имеют по периферии красный ободок. Разви-
тие инфекционного процесса сопровождается усилением отечности и гиперемии поражен-
ных тканей. Пустулы увеличиваются в размере, соседние сливаются, образуя обширные
очаги. Температура тела может повышаться на 1-2°С, особенно, если патологический мате-
риал нанесен на обширные участки кожи (50 см2 и более), а также при осложнении секун-
дарной микрофлорой. С 8-12-го дн после заражения обычно начинается процесс заживле-
ния. В центре пустулы появляется темноватое пятно, которое увеличивается, приобретает
коричневый оттенок. Постепенно пустулы подсыхают, и на их местах образуются корки или
струпья. Под ними разрастается новый слой эпидермиса, корки постепенно отторгаются.
Заживление обычно заканчивается к 18-22-му дню после инфицирования, у отдельных жи-
вотных - несколько позже. После заживления рубцов или пятен, как правило, не остается.
Кроме ягнят, рекомендуют ставить биопробу на кошках.
Заражение культуры клеток. Для этой цели 0,2 мл надосадочной испытуемой суспен-
зией каждой пробы инфицируют ие менее 4-6 пробирок с культурой клеток почек, семенни-
ков или щитовидной железы ягнят. Адсорбируют 1 ч при 37°С, затем инокулируемую жид-
767
Глава XVH. Family Poxviridae Оспенные инфекции
кость удаляют и вносят поддерживающую среду. Инкубируют при 37°С. Вирус вызывает
ЦПД в период между 4-14 дн.
Идентификацию вируса проводят в PH.
Индикация и идентификация вируса
Вирусоскопия. Препараты окрашивают методом серебрения по Морозову и исследуют
под микроскопом с использованием иммерсионной системы (увеличение 90x10). В поле
зрения видны вирионы, располагающиеся группами, попарно, небольшими цепочками или в
виде рассеянных одиночных шариков. При окраске гистологических срезов по Романовско-
му - Г имзе также выявляются элементарные тельца вируса. При экспериментальной инфек-
ции они обнаруживаются в эпидермисе с 3-го по 12-й дн после заражения.
ЭМ. Точный метод диагностики. Диагноз ставят по характерным морфологическим
признакам вирионов: размер, соотношение осей, наличие сетчатой структуры из филамен-
тозных тяжей, образующих левосторонние переплетающиеся спирали.
Обнаружение специфических телец-включений. Ацидофильные тельца-включения
находят в цитоплазме пролиферирующих кератиноцитов эпидермиса.
При остром заболевании в измененных участках кожи и эпителия видна ретикулярная и
баллонизирующая дегенерация клеток; позже в межклеточных пространствах развиваются
небольшие полости. В субэпителиальной соединительной ткани обнаруживают лимфоги-
стиоцитарную клеточную инфильтрацию. Иногда в этой стадии болезни обнаруживают на
границах измененных участков эпителия цитоплазматические ацидофильные включения.
Обнаружение элементарных телец и цитоплазматических включений может служить
достаточным основанием для лабораторной диагностики КПД.
Серологическая идентификация. Для серологической идентификации вируса КПД
можно ставить РСК, РА элементарных телец и PH. Методы серологической идентификации
вируса могут быть использованы в условиях оборудованной лаборатории.
Дифференциальная диагностика. КПД необходимо отличать от некробактериоза, ос-
пы, ящура, катаральной лихорадки и микотического дерматита. Однако следует учитывать
возможность одновременного течения двух инфекций.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные приобретают иммунитет, который наступает на 10-15-й дн,
что, видимо, зависит от индивидуальных, возрастных и породных особенностей животного,
условий содержания и кормления, погодно-климатических условий, свойств штамма возбу-
дителя и т.п. По одним данным, постинфекционный иммунитет длится 8 мес, по другим -
более года. Выявлен ряд особенностей инфекции и иммунитета. Инфекционный процесс но-
сит локальный характер: поражения возникают и развиваются только в местах внедрения
возбудителя. Соседние участки кожи или слизистых оболочек могут быть вовлечены в ин-
фекционный процесс лишь в начальный период - до развития частичного или полного им-
мунитета. При этом невосприимчивость быстрее развивается в зоне локализации поверхно-
стных патологических изменений и несколько медленнее - в отдаленных участках. Одно-
временно со снижением чувствительности к вирусу в организме животного увеличивается
содержание КСА, ПА и анти-ГА, в то время как ВНА накапливаются в незначительных ко-
личествах и выявить их, как правило, не удается.
Более длительный и напряженный иммунитет вырабатывается у овец, иммунизирован-
ных в возрасте старше 8 мес. Продолжительность местной резистентности к вирусу оказа-
лась различной: слизистая оболочка рта - до 17 мес, кожа губ - более 12, бедра - до 3 мес.
Учитывая, что КПД овец и коз относится к числу болезней с ярко выраженным клеточ-
ным иммунитетом, некоторые авторы рекомендуют профилактическую иммунизацию про-
водить введением вакцины в участки наиболее частой локализации патологических измене-
ний (у ягнят в слизистую оболочку рта и кожу губ).
768
Глава XVII. Family Poxviridae Оспенные инфекции
Ягнята, переболевшие в естественных условиях в раннем возрасте, к периоду отъема ут-
рачивают иммунитет, и вспышка болезни может повториться. Доказана передача АТ против
вируса через молозиво и молоко. Защита ягнят через молозиво сохранялась 3-4 нед.
Для специфической профилактики предложены вакцины нескольких типов. До 1975 г.
широко применяли так называемую корочковую (или дермальную) вакцину. Это корочки и
струпья, собранные с пораженных участков кожи. Вирус, содержащийся в этом материале,
обладает естественной вирулентностью.
В настоящее время для специфической профилактики применяют аттенуированные
культуральные штаммы вируса. Вакцину наносят на скарифицированную кожу внутренней
поверхности бедер или слизистую оболочку верхней губы, либо вводят подкожно. Овцам и
козам старше 3 мес вакцину вводят однократно. Ягнят и козлят до 3-х мес вакцинируют
дважды с интервалом 4-6 нед, в неблагополучных хозяйствах - все клинически здоровое по-
головье овец и коз. Новорожденных ягнят прививают 3 раза в возрасте 2-3, 10-14 дн и в 3
мес. В бывшем СССР успешно применяли сухую живую культуральную вакцину (1). Для
профилактики эктимы в Африке наряду с гомологичной вакциной применяют гетерологич-
ную против оспы овец и коз (11).
Оптимальный метод применения живой вакцины из шт. Л - нанесение её на скарифици-
рованную поверхность кожи верхней губы. Иммунитет наступает на месте непосредствен-
ной аппликации через 10 дн, а на удаленных участках кожи - через 20 дн (4).
С 1971 г. в бывшем СССР применяется сухая культуральная вакцина из шт. КК, имею-
щая ряд преимуществ перед корочковой вакциной. Иммунизируют животных втиранием по
0,3 мл вакцины в скарифицированный участок кожи верхней губы 2-кратно с интервалом 8-
12 дн. Ягнят прививают в первые дни жизни. Если через 5-6 дн в месте инъекции не обра-
зуется пустул, вакцинацию повторяют. Схема вакцинации включает прививку маток в конце
суягности. Иммунизацию повторяют перед отъемом от овцематок (через 4-6 мес). В небла-
гополучных хозяйствах ежегодно весной и осенью вакцинируют все поголовье до ликвида-
ции болезни. В ФРГ предложена ОРФ-вирусвакцина из апатогенного шт. Д171, который
оказался иммуногенным и не контагиозным. Вакцинируют ягнят в 2-3-дн возрасте.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета не нашла применения и практи-
чески, по-видимому, нецелесообразна, так как уровень накопления специфических АТ у им-
мунизированных животных низок.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ЕИманов Э.Д. Автореф. докт. диссерт., Фрунзе, 1987. 2.Рослеков А.А. и др. Диагност., ле-
чен. ипроф. инфек. болезней. Казахстан, 1989 :54. З.Рустамбеков А.С. Тез докл. I Всес. пл -
отчетн. конф, по направл. «Ген. и клеточн. Инженерия». 1992. 4.Салидинов Б.С. Инф. бол.
жив. ивопр. природной очаговости, 1989, 11:49. 5.Соловьев Б.В. и др. Тез докл. н.-пр. конф,
вет. вирусол. МНР., Улан-Батор, 1982. б.Сюрин В.Н. и др. Част. Вет. вирусология М., Ко-
лос,1979. 7.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. животных, М., Агропромиздат 1991.
8.Фомина Н.В. и др. Вирусы животных. М., MBA, 1991. 9.Hawkins C.D. et.al. Austral Veter
J, 1991, 68, 6 :210, lO.Honsawi F.M.T. et.al. J Vet Med B, 1993, 40, 4 :272. ILLacheretz A. Rev
Med Vet, 1987, 138 :637.
49 Зак. № 171
Г лава УШ. Африканская чума свиней
Глава XVIII. АФРИКАНСКАЯ ЧУМА
СВИНЕЙ
Pestis africana suum (лат.); African swine fever (англ.);
Peste porcine africaine (франц.); Peste porcina africana (испан.)
Африканская чума свиней (АЧС, болезнь Монтгомери) - контагиозная болезнь, проте-
кающая остро, подостро, хронически, бессимптомно и характеризующаяся лихорадкой, ге-
моррагическим диатезом, воспалительными и некродистрофическими изменениями парен-
химатозных органов. Болезнь зарегистрирована в Африке, Испании, Португалии, Франции,
Бразилии и на Кубе. Болеют свиньи всех возрастов и пород в любое время года.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Они сходны с тако-
выми при КЧС. АЧС проявлялась в виде интенсивной геморрагической септицемии - в
высшей степени контагиозной, быстро протекающей болезни, вызывающей гибель всех кон-
таминированных животных. В естественных условиях инкубационный период длится 5-7 дн,
в эксперименте срок его варьировал в зависимости от штамма и дозы вируса. Различают
сверхострое, острое, подострое, хроническое и латентное течение болезни. Чаще наблюдают
сверхострое и острое течение.
При сверхостром течении температура тела у больного животного повышается до 40,5-
42°С, сильно выражены угнетение и одышка. Животное больше лежит, а через 24 -72 ч по-
гибает. При остром (наиболее характерном) течении болезни температура повышается до
40,5-42°С и понижается за 1 дн до гибели животного. Одновременно с повышением темпе-
ратуры появляются первые симптомы болезни: подавленное состояние, парез задних конеч-
ностей. Появляются красно-фиолетовые пятна на коже ушей, рыла, брюха, промежности и
нижней части шеи. Параллельно проявляются признаки воспаления легких: дыхание стано-
вится коротким, частым, прерывистым, иногда сопровождается кашлем. Симптомы рас-
стройства пищеварения выражены слабо: обычно наблюдается д лительный запор, кал быва-
ет твердым, покрыт слизью. В некоторых случаях наблюдается понос с кровью. В агональ-
ной стадии болезни животные находятся в коматозном состоянии, которое продолжается 24-
48 ч, температура тела снижается ниже нормы и через 4-10 дн с момента повышения темпе-
ратуры животное гибнет.
Подострое течение по симптоматологии сходно с острым, но признаки болезни разви-
ваются менее интенсивно. Болезнь длится 15-20 дн, свиньи обычно погибают. У единичных
выживших особей развивается хроническое течение болезни, которое характеризуется пере-
межающейся лихорадкой, истощением, остановкой роста, мягкими безболезненными отека-
ми в суставах запястья, плюсны, фаланг, подкожных тканей морды и нижней челюсти, нек-
розами кожи, кератитами. Животные болеют 2-15 мес, гибель, как правило, наступает после
вовлечения в инфекционный процесс легких. Клинически же большинство выздоровевших
животных превращаются в здоровых носителей возбудителя, т.е. у них развивается латент-
ное течение АЧС. Патогенез хронического течения АЧС имеет некоторое сходство с такими
болезнями как ИНАН, алеутская болезнь норок и др. Эго сходство выражается в персисти-
ровании вируса, слабой, если не полностью отсутствующей, вируснейтрализующей активно-
сти сывороток, гипергаммаглобулинемией. Последняя, видимо, обусловлена постоянной ан-
тигенной стимуляцией персистирующим вирусом, поскольку он выделяется нз органов
большинства хронически инфицированных животных, и его титр коррелирует с повышени-
ем уровня гаммаглобулинов и АТ.
В последние 20 лет в Португалии, Испании, Анголе и других странах произошло изме-
нение формы проявления АЧС - летальность значительно снизилась, возросло число случаев
инаппарантной инфекции, латентного носительства.
770
Глава УШ. Африканская чума свиней
Латентное течение характерно для естественных носителей вируса - бородавочников,
лесных и кустарниковых свиней в Африке и домашних в Испании и Португалии. Клиниче-
ски эта форма не выражена и проявляется лишь перемежающейся виремией. При стрессах
они выделяют вирус и заражают здоровых свиней. По крайней мере 3 вида диких свиней,
обитающих в Африке, могут быть носителями вируса АЧС без видимых клинических при-
знаков болезни. Однако, если этот вирус ввести домашним свиньям, он вызовет высококон-
тагиозную сверхострую лихорадочную болезнь с летальным исходом. Отдельные особи,
выжившие при такой форме болезни, обычно устойчивы к массивной дозе высокопатоген-
ного гомологичного штамма. Хотя в сыворотках таких свиней-реконвалесцентов можно вы-
явить высокие титры специфических (КС, ПА) АТ, их иммунологическое значение остается
неясным. Такие животные почти всегда являются хронически инфицированными, носящими
в крови одновременно АТ и вирус (22,23,63,68).
У свиней, павших от острой или подострой формы болезни, упитанность сохраняется,
трупное окоченение выражено, кожа подгрудка, вентральной части брюшных стенок, внут-
ренней поверхности бедер, мошонки покрасневшая или багрово-фиолетового цвета. Носовая
полость и трахея заполнены розоватой пенистой жидкостью. Лимфоузлы туши и внутренних
органов увеличены, поверхности разреза мраморные. Нередко они темно-красного, почти
черного цвета и напоминают сгусток кровн. Селезенка увеличена, вишневого или темно-
красного цвета, мягкой консистенции, края её закруглены, пульпа сочная, легко соскаблива-
ется с поверхности разреза. Легкие полнокровны, увеличены в объеме, серовато-красного
цвета. Междольковая соединительная ткань сильно пропитана серозно-фибринозным экссу-
датом и выступает в виде широких тяжей, четко ограничивающих легочные дольки и доли.
Нередко обнаруживают мелкофокусные кровоизлияния под плеврой и очаги катаральной
пневмонии. Почки часто увеличены, темно-красного цвета, с пятнисто-точечными кровоиз-
лияниями. Почечная лоханка отечна, усеяна пятнистыми геморрагиями. Иногда кровоиз-
лияния находят на фоне анемии почек. Печень увеличена, полнокровна, неравномерно ок-
рашена в серовато-глинистый цвет. Слизистая оболочка желчного пузыря набухшая, прони-
зана точечными кровоизлияниями, последние локализуются и в серозной оболочке. Слизи-
стая ЖКТ покрасневшая, набухшая, местами (особенно по складкам) с кровоизлияниями. В
некоторых случаях геморрагии локализуются в серозной оболочке толстого кишечника. Со-
суды головного мозга кровенаполнены, мозговое вещество отечно, с кровоизлияниями (Рис.
119, 120, 121).
При хроническом течении болезни патоморфологические изменения проявляются рез-
ким увеличением бронхиальных лимфоузлов и двусторонним поражением легких. Бессим-
птомное течение характеризуется мраморной окраской портальных или бронхиальных лим-
фоузлов и очаговым поражением легких (7).
Гистологические изменения. При остром и подостром течении болезни резко рас-
страивается гемодинамика в лимфоузлах и селезенке в результате мукоидного набухания и
фибриноидного некроза стенок кровеносных сосудов; опустошения лимфоидной ткани и
распад клеток по типу кариорексиса. В ЦНС и в паренхиматозных органах отмечают воспа-
лительно-дистрофические изменения различной степени выраженности. ИФ вирус и его АГ
обнаруживают в макрофагах, ретикулярных клетках, лимфоцитах и в купферовских клет-
ках, в мегакариоцитах и гемоцитобластах мазков-отпечатков селезенки, лимфоузлов, кост-
ного мозга, печени и легких больных животных. Видны перинуклеарные включения.
При хроническом течении патологический процесс локализуется преимущественно в
бронхиальных лимфоузлах и легких. При этом регистрируют изменения, присущие серозно-
геморрагическому лимфадениту н крупозно-некротической пневмонии. Возможен переход
воспаления на сердечную сорочку и миокард. Бессимптомное течение болезни ограниченно-
го характера проявляется неравномерной гиперемией бронхиальных или портальных лим-
фоузлов, очаговой серозно-катаральной или серозно-фибринозной пневмонией. В организме
49*
771
Глава УШ. Африканская чума свиней
больных свиней вирус первоначально обусловливает гиперплазию лимфоидных клеток. В
процессе его репродукции и накопления основная масса их (70-80%) погибает по типу ка-
риопикноза и кариорексиса. В культуре клеток костного мозга и лейкоцитов крови свиньи
происходит адсорбция эритроцитов на поверхности инфицированных клеток вирусом АЧС
при достижении титра вируса Ю3,5"4 0 ГАЕ50/мл. В перинуклеарной зоне инфицированных
клеток появляются включения, располагающиеся в местах синтеза вируса. Позднее зара-
женные клетки округляются, теряют связь друг с другом и отслаиваются от стенки (7).
Патогенез. В естественных условиях вирус проникает в организм свиней через органы
дыхания, пищеварения, поврежденную кожу и слизистые оболочки. Нуклеиновая кислота
вируса индуцирует перестройку клеточного метаболизма и активизирует гидролитические
ферменты, в результате чего усиливается пролиферация клеток лимфоидной ткани. Проли-
ферирующие клетки представляют собой благоприятную среду для репродукции вируса. В
организме вирус быстро распространяется по кровеносным и лимфатическим сосудам, ока-
зывает воздействие на лимфоидную ткань, костный мозг и на стенки кровеносных сосудов.
Действие его усугубляется развитием аллергических реакций, проявляющихся увеличением
количества тучных клеток, эозинофилов, а также развитием мукоидного набухания и фиб-
риноидного некроза сосудистых стенок (7, 66, 71, 74).
Вирус АЧС размножается в клетках лимфоидной (Рис. 118) и ретикулоэндотелиальной
тканей. При остром течении болезни он угнетает иммунную систему, разрушая или изменяя
функции лимфоидных клеток, при хроническом или латентном - нарушает соотношение
субпопуляций лейкоцитов, функцию макрофагов, синтез и активность медиаторов клеточ-
ного иммунитета (43, 67, 68, 69, 77). Патологические процессы, развивающиеся в поздней
стадии острого течения АЧС (резкое ухудшение общего состояния, увеличение проницаемо-
сти сосудов, множественные геморрагии), а также при длительном течении болезни
(крупозно некротическая пневмония, инфильтрация тканей лимфоидными клетками, некро-
зы кожи, артриты, гипергаммаглобулинемия) вызваны гиперэргическим, аллергическим и
аутоиммунным процессами (40, 48). В патогенезе АЧС аллергические и аутоаллергические
процессы играют существенную роль. При остром течении болезни резко изменяются свой-
ства крови (лейкопения, повышение склеиваемосги лейкоцитов, акгивадия ферментов в
крови и органах), тяжелые дегенеративные изменения клеток РЭС, множественные крово-
излияния в результате нарушения проницаемости стенок сосудов, активации фосфотаз и ис-
чезновение гликогена в печени.
При хроническом течении АЧС выявляют системное проявление аллергической реак-
ции, переходящей в аутоиммунную болезнь с поражением органов-мишеней. В очагах по-
ражения установлено отложение комплексов антиген-антитело с фиксацией комплемента. В
период рецидивов болезни выявляют циклические изменения в картине белой крови, ауто-
иммунное повреждение нейтрофилов и угнетение фагоцитарной активности. При подостром
и хроническом течениях АЧС на месте повторного введения вируса часто развиваются об-
ширные местные воспалительные процессы, названные опухолеподобными образованиями.
Они представляют собой обширные припухлости в области подчелюстного пространства и
шеи в диаметре до 30-40 см. При этом болезненность и повышение местной температуры не
выражены. Одиако в течение 12-14 сут эти образования увеличиваются, что сопровождается
повышением температуры и ухудшением общего состояния животных. При убое и вскрытии
таких свиней устанавливают нечетко ограниченные от нормальных тканей образования с
выраженным отеком по периферии и некрозом в центральной части. В тканях установлено
накопление вируса в негемадсорбирующей форме до 1О7,5 ТЦД50/мл и специфического АГ,
выявленного в РСК и ИФ. При гистоисследовании установлены изменения, характерные для
гиперэргического воспаления: инфильтрация тканей лимфоидно-гистиоцитарными элемен-
тами с примесью эозинофилов, нейтрофилов и плазмоцитов.
772
Г лава УШ. Африканская чума свиней
Воспалительно-аллергические реакции на месте повторного введения вируса или его АГ
способствуют локализации патологического процесса. Аллергическую сенсибилизацию при
АЧС удается выявить методом внутрикожной аллергической пробы. Аллергеном служат
концентрированные вируссодержащие материалы, инактивированные у-лучами, которые
вводят внутрикожно. На месте введения аллергена у инфицированных вирусом АЧС живот-
ных через 24-48 ч развивается воспалительная реакция, сопровождающаяся инфильтрацией
соединительнотканного слоя кожи мононуклеарными клетками, что проявляется гиперемией
и припухлостью от 10 до 40 мм в диаметре. Аллергическую реакцию выявляют с 3 по 150-е
сут после инфицирования у 68,7% животных. Приведенные сведения позволяют считать, что
аллергические или аутоаллергические реакции играют существенную роль в патогенезе и
иммуногенезе АЧС (15).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Описан Монтгомери в 1921 г. (70). Вирус АЧС выделен в отдельное семейство.
Морфология и химический состав. Вирионы представляют собой округлые частицы
диаметром 175-215 нм, состоящие из плотного нуклеоида (Рис. 118), 2-слойного икосаэдри-
ческого капсида и наружной оболочки. Нуклеоид содержит ДНК и белок и окружен элек-
тронно-прозрачным слоем. Двухслойный капсид состоит из 1892-2172 капсомеров. Наруж-
ная липопротеидная оболочка вирионов имеет типичное строение и не необходима для про-
явления инфекционных свойств вируса. Между наружной оболочкой и капсидом имеется
электронно-прозрачный слой. Плавучая плотность в CsCl составляет 1,19-1,24 г/см3, коэф-
фициент седиментации 1800-8000S. Инфекционность вируса сохраняется при 5°С в течение
5-7 лет, при комнатной температуре - 18 мес, при 37°С - 10-30 дн. Вирус стабилен при pH 3-
10, чувствителен к жирорастворителям и инактивируется при 56°С в течение 30 мин.
Концы ДНК ковалентно связаны и содержат инвертированные повторы, сходными с та-
ковыми в ДНК поксвирусов. ДНК не обладает инфекционностью. В вирионах вируса АЧС
обнаружено 54 полипептида. С вирионами ассоциировано несколько ферментов, необходи-
мых для синтеза ранних иРНК.
Вирус АЧС размножается в цитоплазме клеток, однако функция ядра также необходима
для его репродукции. В инфицированных клетках обнаружено 106 вирусспецифических бел-
ков, из которых 35 синтезируются до начала репликации вирусной ДНК (ранние белки) и 71
после репликации ДНК (поздние белки). Вирионы созревают в цитоплазме и приобретают
наружную оболочку при почковании через цитоплазматическую мембрану. Вирус размно-
жается в организме свиней и клещах рода Ornithodoros. В организме свиней вирус реплици-
руется в моноцитах, макрофагах и ретикулоэндотелиальных клетках. У самок клещей вирус
сохраняется более 100 дн, передается трансовариально и трансфазно.
Известно, что проникновение вирусов в организм сопровождается образованием ВНА.
Исключение представляет прежде всего вирус АЧС. Инфицирование этим вирусом не инду-
цирует у животных синтез ВНА, хотя в сыворотке крови выявляют КСА, ПА и типоспеци-
фические задерживающие ГА АТ. Отсутствие ВНА обусловливает неспособность организма
связывать и элиминировать вирус, что, в свою очередь, приводит к исключительно высокой
летальности инфицированных животных. С другой стороны, отмеченный парадоксальный
феномен сводит на нет попытки создания эффективной вакцины, поскольку аттенуирован-
ные штаммы вируса вызывают у свиней хроническое течение болезни и длительное вирусо-
носительство, что весьма опасно в эпизоотологическом отношении. Вирус АЧС обладает от-
дельными характеристиками иридо- и поксвирусов. Является единственным представите-
лем уникального семейства. ДНК кодирует свыше 100 полипептидов, из которых более 30
обнаружено в препаратах очищенного вируса. С вирионами ассоциированы ряд фермента-
тивных активностей, в том числе ДНК-зависимая РНК-полимераза (56), фосфатогидролаз-
ная активность (57), а также протеинкиназа (58) и кислая фосфотаза (59). ДНК-зависимая
773
Глава УШ. Африканская чума свиней
РНК-полимераза расположена на периферии капсида, а АТФ-гидролаза - между капсидом и
нуклеоидом. Капсид образуют, в основном, полипептиды с мол.м. 73 и 37 кД. С капсидом
ассоциирована и ДНК-зависимая РНК-полимераза, участвующая в начальных стадиях ре-
продукции вируса (60). ДНК представляет 2-нитчатую структуру мол.м. 100-106Д, состоя-
щую из 170 тыс. п.о. длиной 58 нм с ковалентными концевыми сшивками в виде инверти-
рованных повторов величиной 2,7 тыс. п.о. (11,14в, 26,31,33,43, 64,73, 75, 76).
Вирус АЧС имеет 20-гранную форму, величина его 175-215 нм, покрыт 2-слойной ли-
попротеиновой оболочкой, имеющей антигенное родство с тканями хозяина. Далее распола-
гается 3-слойный капсид из периодически размещенных капсомеров, внутри находится нук-
леопротеид из плотных фибрилл, содержащих ДНК. Поверхностная оболочка и капсид со-
держат большое количество липидов (11, 31, 38, 43). ДНК вируса АЧС шт. BA71V имеет
длину 170101 п.о. и 151 открытую рамку считывания. Секвенирование ДНК показало, что
вирус АЧС занимает промежуточное положение между поксвируами и иридовирусами и
принадлежат к независимому семейству вирусов (49). Под действием рестриктазы ECo-R-1
выявлено 28 фрагментов ДНК (величина 0,3-21,9 кД), что составляет 96% всей молекулы, а
другими рестриктазами -11-50 фрагментов (0,3 -76,6 кД). Получена экспрессия 16 фрагмен-
тов ДНК в Е. coli, методом молекулярной гибридизации определено местонахождение 80
сайтов и составлена карта расположения фрагментов. Выявлены различия между отдельны-
ми изолятами и вариантами вируса, а также механизм и последовательность синтеза вирус-
специфических белков, их роль в патогенезе болезни (28, 32, 35, 37, 41, 65, 72). В составе
вирионов и инфицированных клеток установлено 28-37 вирусспецифических белков по дру-
гим данным, зарегистрировано 100 структурных и 162 неструктурных вирусспецифических
белков м.м. 11,5-245 кД (14). Выявлены мажорные полипептиды (172, 73, 46, 36, 15, 12 кД),
ранние и поздние белки, гликопрогеиды (54, 34, 24, 5, 15 кД), установлена связь с АТ 25
белков (4, 27). Считают, что ранние белки синтезируются с концевых участков ДНК, а позд-
ние - с центральной её части. Вирус специфические белки в инфицированных клетках рас-
положены следующим образом: в мембранных белках - 220, 150, 24, 14, 2 кД, в виропла-
стах - 220, 150, 87, 80, 72, 60 кД, в ядре клетки - 220, 150, 27 кД. Установлен определенный
порядок местонахождения отдельных белков в вирионе (начиная с поверхности) - 24, 14,
12, 72, 17, 37 и 150 кД (11, 29, 45). Построены физические карты ДНК вирулентного штам-
ма вируса АЧС К-73 (2-й серотип) и выделенного из него авирулентного варианта КК-262,
адаптированного к культуре клеток почки поросенка (ППК-666). Каждый штамм имеет
свою, отличающуюся от других физическую карту ДНК при наличии определенного сходст-
ва (14а). Белки 32 и 35 кД обладают штаммоспецифичностью (29, 45, 43). В составе вирио-
на выявили ДНК-полимеразу, протеинкиназу и другие ферменты, которые необходимы для
раннего синтеза вирусспецифических структур (31, 43).
Вирус АЧС неоднороден. Он представляет собой гетерогенную популяцию, состоящую
из клонов, отличающихся по признакам гемадсорбции, вирулентности, инфекционности,
бляшкообразования и антигенным свойствам. По биологическим свойствам вирус, исполь-
зуемый для экспериментального заражения свиней, отличается от изолятов вируса, выде-
ленных позднее от этих же свиней. В 1991 г. опубликовано сообщение о современных дан-
ных по архитектуре морфогенеза и распределению структурных полипептидов в вирионе
АЧС (10). На основании общего плана строения вируса АЧС, локализации виропластов в
инфицированных клетках, вирус был отнесен к группе иридовирусов (16). Р.М.Чумак (25)
высказал гипотезу о гибридном происхождении вируса АЧС, предками которого явились
вирусы группы оспы и один из иридовирусов насекомых. По мнению автора, этот вирус
должен быть выделен в отдельное семейство, куда позднее будут отнесены и другие вирусы.
А. Д.Середа и В.В.Макаров (19) идентифицировали изолят-специфический гликопептид ви-
руса АЧС. В составе оболочек очищенных вирионов вируса АЧС обнаружены три гликози-
774
Г лава УШ. Африканская чума свиней
лированных полипептида с мол.м. 51, 56, 89 кД (10) и три радиомаркированных монохром-
ных оболочечных компонента с мол.м. 9, 95, 230 кД, биохимическая природа которых не
выяснена. Пять вирусиндуцированных гликозилированных полипептидов с мол.м. 13, 33,
34, 38, 220 кД идентифицировано в инфицированных вирусом АЧС клетках Vero. Полипеп-
тид (110-140 кД), по-видимому, имеет прямое отношение к ГАд АГ, о существовании кото-
рого ранее судили лишь по феномену ГАд. Авторы показали, что олигосахаридные белки
составляют около 50% массы гликозилированного полипептида (110-140 кД). Липидный со-
став вируса АЧС зависит от клеточной системы культивирования (9).
Устойчивость. Вирус АЧС исключительно устойчив в широком диапазоне температур
и pH среды, включая высушивание, замораживание и гниение. Он может оставаться жизне-
способным в течение длительного времени в фекалиях, крови, почве и на различных по-
верхностях - деревянных, металлических, кирпичных. В трупах свиней инактивируется не
раньше чем через 2 мес, в кале - в течение 16 дн, в почве - за 190 дн, а в холодильнике при
-30-60°С - от 6 до 10 лет. Солнечные лучи независимо от инфицированных объектов (бетон,
железо, дерево) полностью инактивируют вирус АЧС (шт. Долнзи-74) через 12 ч, а шт.
Мфути-84 - через 40-45 мнн. В условиях свинарника при 24°С естественная инактивация
вируса (шт. Долизи-74) происходила за 120 дн, а шт. Мфути-84 - за 4 дня. Оптимальным
для дезинфекции инфицированных помещений оказался 0,5%-ный р-р формалина (14). За-
мораживание не влияет на биологическую активность вируса, но является начальной стади-
ей повреждения генома. Вирус с перколом устойчив к действию ДНК-азы после заморажи-
вания при -20°С и -70°С и повреждается при +50°С. Высушивание вируса без стабилизатора
вызывает потерю его инфекционности (17). В мясе инфицированных свиней и копченых
окороках он сохраняется 5-6 мес. Продолжительную устойчивость возбудителя в крови, экс-
кретах и трупах учитывают при планировании ветеринарно-санитарных мероприятий. По-
скольку вирус сохраняет жизнеспособность в инфицированных свинарниках в течение 3
мес, именно этому сроку соответствует экспозиция, после которой разрешается завоз новой
партии свиней. На устойчивость вируса влияют состав и pH среды, в которой он суспенди-
рован, содержание белка и минеральных солей, степень гидратации, природа исследуемого
вируссодержащего материала. При 5 °C он сохраняет активность в течение 5-7 лет, при хра-
нении в условиях комнатной температуры - до 18 мес, при 37°С -10-30 дн. При 37°С инфек-
ционность его снижалась на 50% в течение 24 ч в среде с 25% сыворотки и в течение 8 ч в
среде без сыворотки. При 56°С небольшое количество вируса сохраняло инфекционность
более 1 ч, поэтому применяемой на практике 30-мин инактивации сыворотки при 56°С не-
достаточно для разрушения возбудителя. При 60°С он инактивировался в течение 20 мин.
Вирус исключительно устойчив как в кислой, так и в щелочной среде. Большинство дезин-
фицирующих веществ (креолин, лизол, 1,5%-ный р-р NaOH) не инактивирует его. Наи-
большее вирулицидное действие на него оказывают хлорактивные препараты (5%-ный р-р
хлорамина, гипохлориты натрия и кальция с 1-2% активного хлора, хлориая известь) при 4-
часовой экспозиции. Гидроксид натрия в виде 3%-ного р-ра рекомендуется при дезинфекции
только в горячем виде (при температуре 80-85°С). При дезинфекции особое внимание об-
ращают на тщательную механическую очистку и промывание горячей водой, так как орга-
нические вещества навоза могут снижать эффективность дезинфекции.
АГ структура. Оиа у вируса сложная. Возбудитель содержит групповые КС-, преципи-
тирующий и типовой ГАд антигены. Обнаружены ДНК-связывающие белки, в числе кото-
рых имеются мажорные и минорные с мол.м. от 12 до 130 кД. Общее число их достигает 15,
из них 7 являются структурными. Протеины Р14 и Р24 расположены по периферии вириона,
а Р12, Р17, Р37 и Р73 - в промежуточном слое; обнаружен протеин Р150 - мажорный вирус-
ный протеин, который расположен в нуклеоиде или в одной из вершин (углов) вириона. Во
всех эукариотических клетках имеется особый белок, состоящий из веществ аминокислот-
775
Глава УШ. Африканская чума свиней
ных остатков и ковалентно-связанный с различными клеточными белками (например гисто-
ном). Такая связь обеспечена убиквитин-конфигурирующим ферментом УБС. Один из бел-
ков, кодируемых вирусом АЧС, способен активировать убиквитин (51).
Вопросы о сущности инфекционного АГ, индуцирующего образование ВНА, остается до
сих пор открытым. Иначе вопрос обстоит с АГ, индуцирующими образование АТ, задержи-
вающих гемадсорбцию. Сыворотки с анти-ГАд свойствами широко используются всеми ис-
следователями, изучающими проблему АЧС. Полипептиды с мол.м. 120, 78, 69, 56, 45, 39,
28, 26, 24, 16 и 14 кД наиболее интенсивно выявляются на электрофореграммах и имму-
ноблотограммах препаратов очищенного вируса АЧС. Смесь протеаз и панкреатической ли-
пазы в низких концентрациях удаляет из этих препаратов полипептиды с мол.м. 120 и 78
кД, в средних концентрациях - полипептиды с мол.м. 69, 56, 45, 39, 28 и 14 кД, в высоких
концентрациях - полипептид с мол.м. 26 кД. Полипептид с мол.м. 21 кД, не реагировавший
в иммуноблоте со специфической антивирусной сывороткой, был устойчив к совместному
действию протеаз и липазы. Обработка вируса тритоном Х-100 и эфиром приводила к по-
вышению активности вирусассоциированной ДНК-зависимой РНК-полимеразы, а обработ-
ка эфиром и последующее переосаждение - к значительному снижению активности в осаж-
денном препарате. Обработка вируса эфиром не влияла на его активность. На основании
полученных результатов и данных литературы предложена схема расположения вирусных
полипептидов и ферментов в структуре вириона (50).
АГ вариабельность и родство. На основании задержки гемадсорбции выделено две АГ
А- и В - группы (типы) и одна подгруппа С вируса АЧС. В пределах А-, В -групп и С -
подгруппы выявлено много серотипов этого возбудителя.
С помощью иммунопробы и РЗГА установлено по 7 референс-шт. каждой группы: Л-
57; Л-60; Хинде-2; Родезия; Дакар; 2743; Мозамбик. К референс - штаммам отнесены - шт.
Хинде; N 2447; 262; Магади; Спенсер; Л-60 и Родезия (78, 79). Методом иммуноблоттинга с
монАТ выявлено 6 групп, а рестрикционным анализом - 4 группы и 3 подгруппы. Это рефе-
ренс-шт. Уганда, Спенсер, Тенгани, Ангола, Л-60, Е-75 (43). Имеются сообщения о высокой
изменчивости вируса АЧС по антигенности, вирулентности и другим свойствам, а также о
существовании смешанных популяций его, которые трудно поддаются аттенуации (40, 43).
На примере шт. Керовара-12, выделенного от бородавочника в Танзании (47), показана ти-
повая гетерогенность популяции АЧС. Особенности вируса взаимосвязаны с патологиче-
ским и иммунологическим процессами в организме зараженных свиней. Большинство изо-
лятов, выделяемых во время эпизоотий от домашних свиней в Африке, имели различные ГА
АГ. Изоляты, пассируемые in vivo в макрофагах свиней, изменяются быстрее и глубже, чем
при пассировании в клетках Vero. В африканских изолятах наиболее вариабельными про-
теинами оказались Р150, Р27, Р14 и Р12, в неафриканских изолятах - Р150 и Р14, протеин
Р12 не изменяется, а Р72 - главный АГ - при диагностике с помощью ELISA оказался ста-
бильным. АГ различия между шт. вируса АЧС невозможно определить с помощью твердо-
фазного ИФА, РДП и ИЭОФ, так как этими методами выявляются лишь общие для всех шт.
вируса АЧС АГ. Это удается сделать лишь методом истощения культурального АГ вируса
АЧС гетеротиповой сывороткой (1). Как видно из приведенных выше фактов, серологиче-
ский и иммунологический плюралитет вируса АЧС - один из основных его свойств (20).
Локализация вируса. Вирус обнаруживают во всех органах и тканях больных живот-
ных. В крови он появляется во время первоначального повышения температуры и обнару-
живается там до гибели животного в титрах от 103 до 108 ГАдзо/мл. При хроническом тече-
нии болезни титр вируса в крови быстро снижается, виремия носит прерывающийся харак-
тер. При отсутствии виремии он может долго (до 480 дн) сохраняется в селезенке и лимфо-
узлах. Точная локализация вируса при латентном течении болезни не установлена. В перво-
начально инфицированных органах (лимфоидная ткань в области глотки) вирус сохранялся
776
Глава УШ. Африканская чума свиней
в титре около 107 ГАДзо/г до гибели животного. Наивысшие титры его (Ю8) наблюдали в
тканях, содержащих большое количество ретикулоэндотелиальных элементов: селезенке,
костном мозге, печени, что согласуется с выявлением в этих тканях значительных пораже-
ний. Первичным местом локализации вируса являются миндалины. Присутствие его в лей-
коцитах с 1-го дня инфекции свидетельствует о том, что возбудитель заносится в другие
ткани лейкоцитами. Появление вируса в селезенке и костном мозге через 2 дня и быстрое
повышение титра вируса в этих тканях дает основание полагать, что они являются местом
вторичного размножения возбудителя (67).
Из организма зараженных животных вирус выделяется с кровью, носовыми экскретами,
фекалиями, мочой, слюной и, вероятно, через легкие с выдыхаемым воздухом. У большин-
ства выживающих животных вирусоносительство практически пожизненное. Периодически
вирус может быть выделен из крови, лимфоузлов, легких, селезенки. Из других тканей вы-
деление его затруднительно. Вирусовыделение наступает на 2-4-й дн после появления лихо-
радки. Стресс-факторы способствуют обострению инфекции и выделению вируса во внеш-
нюю среду. При этом сезонность вирусовыделения связана с опоросами. В клещах
Ornithodoas вирус АЧС размножается в кишечнике и затем распространяется в слюнные
железы и репродуктивные органы. Клещи могут оставаться персистентно инфицированными
и передавать вирус в течение 3-х лет; наряду с бородавочниками они создают перманентный
резервуар вируса для домашних свиней. Клещи способны передавать его трансовариально и
трансфазово. Концентрация вируса в клещах выше, чем у свиней-вирусоносителей.
АГ активность. В сыворотках реконвалесцентов появляются преципитирующие, КС и
задерживающие ГАд АТ, не влияющие на ЦПД вируса. ПА и КСА не являются типоспеци-
фическими, они общие для всех шт., тогда как АТ, задерживающие РГАд, строго типоспе-
цифичны и используются для типирования вируса АЧС. КСА и ПА не связаны с образова-
нием иммунитета. ВНА не образуются, но в защите действует опосредованный АТ меха-
низм. Эти антитела активны в 2-х системах: a) in vitro антиитело зависимой клеточной
цитотоксичности; б) комплементзависимом лизисе. Сыворотки животных-реконвалес-
центов специфически задерживают ГАд в культурах, инфицированных гомологичным виру-
сом АЧС. Титр таких АТ достигает максимума через 35-42 дн после клинического выздо-
ровления животных. Вирус АЧС не вызывает формирование ВНА и гуморальные компонен-
ты иммунной реакции не имеют большого значения. Неспособность вырабатывать ВНА
против вируса АЧС, вероятно, обусловлена свойствами самого возбудителя.
Взаимодействие вируса с АТ. Одна из причин недостаточной изученности иммуноло-
гии АЧС - отсутствие нейтрализации вируса АТ - главного свойства других вирусов, состав-
ляющих традиционную основу изучения их иммуногенности со времени открытия серологи-
ческих реакций. В этом отношении существует только один зоопатогенный аналог - парво-
вирус алеутской болезни норок, но известна также низкая способность к нейтрализации ти-
пичных представителей иридовирусов. Было предпринято много попыток изучения этого
уникального феномена, но удовлетворительного объяснения до сих пор не предложено; вер-
сий много - от отсутствия вирионных гликопротеинов до антигенной мимикрии и гетероген-
ности (12). В стремлении выяснить данный вопрос авторы поэтапно исследовали результа-
ты взаимодействия вируса с АТ, вируса с чувствительными клетками в культуре и комплек-
са вирус+АТ с чувствительными клетками. Показано, что иммунный комплекс (АГ+АТ)
беспрепятственно проникает в чувствительные клетки, и вирус сохраняет исходную репро-
дуктивную активность. При АЧС нейтрализация вируса in vitro сопровождается противопо-
ложным эффектом - усилением вирусного размножения и экстенсивной патологией за счет
распространения инфицированных моноцитов-макрофагов.
Вопрос взаимодействия вируса АЧС с АТ нуящается в дальнейшем экспериментальном
изучении. У серопозитивных аборигенных животных в крови обнаруживаются специфиче-
777
Глава УШ. Африканская чума свиней
ские КСА и ПА в титрах до 1:128 и 1:64 соответственно. Специфические АТ в крови поро-
сят появляются только после приема молозива от серопозитивных свиноматок. Уровень АТ
в молозиве был равен или превышал концентрацию их в крови (3).
Экспериментальная инфекция. К экспериментальному заражению невосприимчивы
кошки, собаки, мыши, крысы, кролики, куры, голуби, овцы, козы, КРС и лошади. У экспе-
риментально зараженных аргасовых клещей Ornithodoros turicata вирус выявляли методом
биопробы в течение года. В кишечнике клеща установлено наиболее раннее и длительное
присутствие вируса. Быстрое распространение его и репликация в других тканях происходит
посредством гемолимфы. Уже через 24 ч после заражениях помощью МФ А выявляли АГ .
Через 2-3 нед вирус обнаруживали в гемоцитах, а к 6-7-й нед - в большинстве тканей.
Культивирование. Для культивирования вируса АЧС могут быть использованы под-
свинки 3-4-мес возраста, которых заражают любым способом. Чаще заражают внутримы-
шечно в дозе 104-106 ГАд50. При развитии клинических симптомов болезни на 4-6-е сут по-
сле заражения животных убивают и в качестве вируссодержащего материала используют
кровь и селезенку, в которых вирус накапливается в титре 106'8 ГАд50. Попытки культивиро-
вать вирус АЧС в организме других видов животных успеха не имели.
К вирусу чувствительными оказались культуры лейкоцитов крови и макрофагов костно-
го мозга свиней. Обычно заражают клетки на 3-4-й день роста в дозе 103 ГАД вируса на 1
мл питательной среды. Через 48-72 ч он накапливается в культурах клеток в титре 106’7,5
Г АД so/мл. Вирус АЧС инфицировал большинство макрофагов (моноцитов), если не все, и
только около 4% полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови. В- и Т-
лимфоциты, находящиеся в стадии покоя или стимулированные ФГА, липосахаридом или
митогеном из фитолакки американской, не обладают чувствительностью к вирусу. Послед-
ний реплицируется исключительно в макрофагах, и в наивысших титрах содержится в эрит-
роцитах свиней. Он проникает в клетку главным образом рецепторнезависимым путем, реп-
ликация его происходит в цитоплазме, но для синтетических процессов необходимо участие
ядра. Возможно заражение более чем одной частицей вируса, что предполагает наличие не-
скольких его субпопуляций в одной клетке и их взаимодействие (52). Число клеток, содер-
жащих АГ на поверхности, спустя 13-14 ч достигает максимального уровня (61, 62). Боль-
шое количество неиспользованного вирусспецифического материала, имеющего мембран-
ную, цилиндрическую или эксцентрическую структуру, остается в зараженных клетках.
Предполагается, что в их оболочках содержится ГАд АГ (43).
Вирус размножается в культурах лейкоцитов и костного мозга свиней с развитием ГАд
и ЦПД без адаптации. При оптимальной дозе заражения ГАд проявляется через 18-24 ч,
ЦПД - через 48-72 ч и характеризуется образованием цитоплазматических включений с по-
следующим вытеканием цитоплазмы и появлением многоядерных гигантских клеток
(клеток-теней). Он проникает в клетки CV-1 или Vero адсорбционным эндоцитозом или эн-
доцитозом, опосредованным рецептором. “Раздевание” вирионов происходит в эндосомах
или в других кислых внутриклеточных везикулярных органеллах (42). При инкубировании
вируса АЧС с мононуклеарными клетками периферической крови свиней, он ингибирует
пролиферативную реакцию лимфоцитов к фитогемагглютинину и другим лектинам. Пола-
гают, что такое ингибирование индуцируется растворимыми фракциями, которые освобож-
даются периферическими мононуклеарными клетками после совместного инкубирования с
вирусом (34). Г Ад вируса в зараженных культурах настолько специфична, что используется
в качестве основного теста в диагностике болезни. В других видах культур клеток вирус без
предварительной адаптации не размножается. Он адаптирован к ряду гомо- и гетерологич-
ных культур: перевиваемым линиям клеток почки поросенка (ПП и РК), почки зеленой мар-
тышки (MS, CV), Vero-клеткам почки макаки и др, В литературе мало уделяется внимания
влиянию углеводных компонентов, которые могут составлять от 50 до 90% массы гликопро-
778
Г лава УШ. Африканская чума свиней
теидов, на иммуногенность вируса: одной из причин слабой иммуногенности оболочечного
гликопротеида (gp 120) вируса иммунодефицита (ВИЧ) является то, что 50% его массы обу-
словлено “атмосферой” сахаров, которая может играть негативную роль, препятствуя, на-
пример, доступу АТ к сайту фиксации на оболочке ВИЧ, т.е. жизненно важные участки ВИЧ
“химически” защищены от действия иммунной системы. Не исключено, что причиной не
нейтрализуемое™ вируса АЧС может быть наличие высокогликозилированных белков на
поверхноста вирионов. О сосуществовании гликозилированных компонентов неизвестной
природы в оболочке вирионов АЧС сообщалось Мюдель Вал и др. в 1986 г. Наличие таких
компонентов на мембранах клеток также может способствовать “ускользанию” от других
эффекторных механизмов иммунной системы хозяев и повышать его патогенность (18).
ГА и ГАд свойства. ГА свойствами вирус не обладает. При размножении его in vitro в
культурах лейкоцитов или клетках костного мозга свиней наблюдают явление адсорбции
эритроцитов на поверхности пораженных клеток. Эритроциты прикрепляются к стенке лей-
коцита, образуя вокруг него характерный венчик и иногда закрывая клетку со всех сторон,
вследствие чего пораженные лейкоциты внешне напоминают тутовую ягоду. Время появле-
ния ГАд зависит от инокулируемой дозы вируса и может проявиться уже через 4 ч, но в
большинстве случаев - через 18-48 ч, а при низких титрах вируса - через 72 ч. С увеличени-
ем времени инкубации число пораженных клеток возрастает, затем они начинают просвет-
ляться, и проявляется ЦПД вируса. Чувствительность РГАд зависит от свойств вируса и
степени его накопления в инфицированной культуре клеток. Она выявляется под световым
микроскопом при достижении титра инфекционности в культуре не ниже 104 ЛД^о/ю- По
мнению отдельных авторов, время наступления ГАд зависит от титра вируса в исследуемой
пробе материала. Снижение титра вируса АЧС влечет за собой снижение чувствительности
РГАд. В связи с этим в ряде случаев возникает необходимость проведения до трех последо-
вательных серийных “слепых” пассажей вируса в культуре лейкоцитов или костного мозга,
чтобы подтвердить наличие его в исследуемом материале в случае ГАд варианта. Иногда
выделяются негемадсорбирующие штаммы вируса, обладающие только выраженными ци-
топатогенными свойствами. При пассировании их в культуре клеток не менее 50 раз и зара-
жении свиней гемадсорбция не восстанавливалась. В ЮАР выделили негемадсорбирующий
штамм от домашних свиней при естественной эпизоотии. Позднее там был выделен неге-
мадсорбирующий вариант из суспензий клещей О. moubata, собранных в очагах инфекции.
Так как специфическая ГАд характеризует вирулентность штаммов АЧС, выделение
менее вирулентных негемадсорбирующих вирусов от свиней с хронической пневмонией
представляет большой интерес. Однако отдельные негемадсорбирующие изоляты или клоны
могут быть высоковирулентаыми. Механизм реакции ГАд, а также локализация ответствен-
ных за ГАд АГ не установлены. Показана важная роль внешних мембран вирионов в связы-
вании их с эритроцитами, так как вирионы, не имеющие оболочек, на эритроцитах не ад-
сорбируются. Антигены, которые принимают участие в ГАд, локализованы в оболочках ви-
рионов, происходящих из цитоплазматических мембран клеток хозяина.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Главный источник инфекции - больные и
павшие свиньи. Переболевшие животные остаются длительное время носителями и выдели-
телями вируса. Заражение происходит непосредственно при контакте больных свиней со
здоровыми (через поврежденные слизистые оболочки, кожные покровы, алиментарно и, ве-
роятно, через дыхательные пути) и опосредованно - через мясо, мясопродукты, внутренние
органы, кровь, мочу, фекальные массы и т.д. от павших и убиваемых больных свиней; через
предметы ухода, обслуживающим персоналом, домашними и дикими животными, птицами,
кожными паразитами и насекомыми, которые были в контакте с больными и павшими
свиньями. АЧС при первичном проявлении обычно протекает остро и подостро с гибелью
до 97% свинопоголовья. В изолированных хозяйствах в тропических условиях причиной
779
Глава УШ. Африканская чума свиней
возникновения вторичных очагов являются переболевшие свиньи - скрытые носители воз-
будителя (2). Так, вирус АЧС в Народной Республике Конго циркулирует среди местных
животных в виде трудно обнаруживаемой негемадсорбирующей популяции, не вызывая ка-
ких-либо видимых симптомов болезни и создавая положительный иммунный фон у местных
свиней (2). Эпизоотологическое обследование местного свинопоголовья свидетельствует о
том, что в определенных условиях аборигенные домашние свиньи, как резервуар вируса в
природе, играют существенную роль в эпизоотологии АЧС. У серопозитивных аборигенных
животных в крови обнаруживаются специфические КСА и ПА в титрах до Г. 128 и Г. 64 со-
ответственно. С целью изучения формирования пассивного иммунитета проведены опыты с
поросятами различного возраста, полученными от серопозитивных животных. В крови не
родившихся плодов, а также безмолозивных поросят, специфические АТ отсутствовали.
Также не был выделен вирус от указанных животных. Специфические АТ в крови поросят
появились только после приема молозива от серопозитивных свиноматок. Прослежена ди-
намика специфических АТ в крови 82 поросят от серопозитивных свиноматок в течение 5-
мес периода. При контрольном заражении 2-5 мес поросят, в крови которых обнаружива-
лись КСА и ПА в титре 1:16-1:32 и 1:2-1:4 соответственно, все животные пали с клиниче-
скими признаками АЧС. Находящиеся с ними в контакте серопозитивные поросята того же
возраста оказались устойчивыми к заражению (53). Вирус АЧС может персистировать как в
организме восприимчивых свиней, так и in vitro в культуре клеток (8). В условиях Африки
домашние свиньи могут инфицироваться посредством контакта с дикими бородавочниками
(Phaco choerus) и кустарниковыми свиньями (Patomochoerus), у которых он вызывает ла-
тентную инфекцию. Аргасовые клещи О. moubata porcinus - естественный резервуар и пере-
носчик вируса АЧС. Клещи орнитодорины (переносчики вируса АЧС) могут жить 9 лет, и
вирус АЧС долго сохраняется в их популяции. O.turicata обнаружены в Северной Америке в
штатах Ута, Колорадо, Канзас, Оклахома, Техас, Нью-Мехико, Аризона, Калифорния и
Флорида. Клещи могут мигрировать иа 8 км от места обитания. Помимо O.turicata, вирус
АЧС может переноситься еще тремя видами клещей: О. puertoriceusis, О. tolaje, О. dugersi.
Установлены устойчивость вируса в мертвых клещах, а также размножение и персисти-
рование его у 70-75% клещей в течение 13-15 мес. Членистоногие получают вирус при кро-
вососании больных животных в период виремии. Вирус размножается в членистоногих, у
которых длительный период персистенции, и, наконец, клещи его передают здоровым
свиньям в процессе кормления. Вирус АЧС был выделен из коксальной жидкости, слюны,
экскретов, мальпигиевых сосудов и экссудата половых органов у естественно и эксперимен-
тально инфицированных клещей, а также из яиц и нимф первой стадии инфицированных
самок. Таким образом, у этого вида клещей возможна трансовариальная и трансспермаль-
ная передача вируса. Эго способствует поддержанию и циркуляции вируса в популяции да-
же при отсутствии регулярных контактов переносчиков с инфицированными животными.
Достаточно агента однажды занести в популяцию клещей, и возникает его циркуляция неза-
висимо от контакта этой популяции с чувствительными животными в дальнейшем. В связи с
большой продолжительностью жизни клещей (10-12 лет) очаг болезни в случае его возник-
новения может существовать неопределенно долгое время. В местностях, где это произош-
ло, возможность искоренения АЧС представляется сомнительной.
Таким образом, основной путь быстрого распространения возбудителя и возникновения
новых вспышек болезни, вероятно, алиментарный. Респираторный путь способствует рас-
пространению его в пределах эпизоотического очага, а трансмиссивный - созданию стойких
природных очагов. В связи с тесными биологическими взаимоотношениями вируса и арга-
совых клещей природный очаг может существовать без повторных заносов вируса неопре-
деленное время.
780
Глава УШ. Африканская чума свиней
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях африкан-
ской чумой болеют домашние и дикие свиньи. У некоторых диких африканских свиней бо-
лезнь протекает субклинически. Такие животные представляют большую опасность для
свиней культурных пород. В природе существует замкнутый круг циркуляции этого вируса
между дикими свиньями-вирусоносителями и клещами (род Ornithodorus). Вирус АЧС
представляет гетерогенную популяцию, состоящую из клонов, обладающих разными биоло-
гическими характеристиками в отношении ГАд, вирулентности, инфекционности, размеров
бляшек, АГ свойств. Вирулентность изолята определяется вирулентностью доминирующего
в популяции клона, а не количеством введенного вируса. Пассирование изолятов вируса
АЧС на свиньях и в культуре клеток Vero может привести к изменению соотношения раз-
ных клонов в вирусной популяции и изменению всех её характеристик. Культуральные и
вирулентные свойства возбудителя АЧС подвергаются модификации в процессе естествен-
ного течения эпизоотии и при экспериментальной селекции. Культуральные и вирулентные
свойства вируса АЧС чрезвычайно лабильны: он может утрачивать ГА способность, сни-
жать вирулентность, вплоть до полной её утраты, в процессе естественной эволюции эпизо-
отии, и в эксперименте при пассировании в тканевых культурах (2, За).
ДИАГНОСТИКА
Предположительный диагноз на АЧС может быть поставлен на основании анализа кли-
нико-эпизоотологических данных и патологоанатомических исследований. Основанием для
подозрения АЧС может служить возникновение заболеваний с быстрым течением и высокой
смертностью среди свинопоголовья, привитого против классической чумы свиней. Сходство
клинических и патологоанатомических признаков классической и африканской чумы свиней
затрудняет постановку диагноза.
В отличии от возбудителя классической чумы вирус АЧС имеет многообразие в анти-
генном и иммунологическом отношениях, Г Ад и негемадсорбирующие штаммы, что значи-
тельно усложняет постановку диагноза. Возбудители АЧС и КЧС вариабельны и по виру-
лентности: в природе выделены штаммы вируса, вызывающие различные формы и течения
болезни - сверхострое, острое, подострое, хроническое бессимптомное с летальностью от 10
до 100%; встречаются и природноослабленные, авируленгные штаммы. Поэтому дифферен-
цировать АЧС на основании клинико-эпизоотологических данных и патоморфологических
изменений чрезвычайно трудно, необходимо прибегать к лабораторному анализу (6,14, 75).
Методы лабораторной диагностики. Их можно разделить на 2 группы; первая вклю-
чает методы выделения вируса и выявления АГ, вторая - методы выявления АТ (73, 75).
Экспресс-метод обнаружения вируса. Во Франции разработан метод определения ви-
руса АЧС в культурах клеток и полевых пробах с помощью ДНК-зонда, меченного биоти-
ном. Данный метод позволяет обнаружить негемадсорбирующие штаммы вируса АЧС, не-
большие количества его в материалах и убитые или поврежденные вирионы Полученный
зонд в 10 раз чувствительнее 32Р-меченого зонда (36).
В процессе усовершенствования метода гибридизационного зонда, предложен не менее
быстрый и биологически безопасный метод диагностики АЧС с помощью ПЦР с фрагмен-
том длиной 740 тыс. п.о., полученным из консервативной части генома вируса. Идентифи-
кация амплифицированного фрагмента проводится с помощью гнездных праймеров или при
использовании биотинилированных олигонуклеотидных зондов. Метод превосходит выде-
ление вируса и ГАд (39). В нашей стране применена ПЦР для обнаружения последователь-
ностей ДНК, специфичных для вируса АЧС. Показана возможность амплификации индиви-
дуальных фрагментов ДНК вируса АЧС различных серотипов, а также повышение чувстви-
тельности индикации этого вируса с использованием гнездовой ПЦР и гибридизацией про-
дуктов ПЦР с нерадиоактивным ДНК-зондом (54).
781
Глава УШ. Африканская чума свиней
Индикация и идентификация вируса. При первичном возникновении АЧС лабора-
торная диагностика основана на выделении вируса в культуре клеток костного мозга или
лейкоцитов крови свиней, его идентификации в реакции ГАд или прямой ИФ и определения
типовой принадлежности вируса в РЗГАд. Для выявления вируса АЧС непосредственно в
жидкой пробе предложено использовать сенсибилизированные эритроциты, иммуносорбент
сефарозу и суспензию клеток костного мозга для специфического концентрирования АГ ви-
руса АЧС из объектов ветнадзора с последующим его определением 125g АТ (20а).
Выделение и индикация вируса в культурах клеток. Наиболее достоверным и на-
дежным лабораторным методом диагностики АЧС - выделение вируса в клеточных культу-
рах и идентификации его в РГАд. Биопроба длительна по времени и проводится в учрежде-
ниях, где имеются для этого ветеринарно-санитарные условия для работы с особо опасными
экзотическими болезнями. Наиболее достоверный и надежный лабораторный метод - РГАд.
Она состоит в том, что зараженные вирусом АЧС мононуклеарные фагоциты в ККМС
(культура клеток мозга свиней) или КЛС (культура лейкоцитов свиней) приобретают спо-
собность адсорбировать на себя эритроциты крови свиньи, образуя при этом скопления в
виде ягоды малины. Для получения ККМС и КЛС используют клинически здоровых под-
свинков 2-4-мес возраста массой 25-30 кг из хозяйств, благополучных по инфекционным
болезням. Лейкоциты получают из гепаринизированной крови подсвинков.
О размножении вируса судят по РГАд. Для заражения используют 2-3-сут культуру лей-
коцитов или клеток костного мозга свиней. Вирус АЧС характеризуется рядом уникальных
особенностей. Во-первых, популяция его гетерогенна; во-вторых, некоторые штаммы вируса
способны вызывать атипичную “рыхлую” ГАд, в отличие от типичной “многослойной” ГАд
(13). Некоторые варианты АЧС не обладают ГАд свойствами, а вызывают только ЦПД, ко-
торое проявляется лизисом зараженных клеток. При выделении негемадсорбирующих изо-
лятов вируса идентификацию проводят в ИФ или ставят биопробы.
Тест ауто-ГАд. Метод постановки ауто-ГАд основывается на выявлении ГАд клеток,
образовавшихся в крови больного животного. Данный способ по чувствительности сравним
с описанной выше РГАд в ККМС или КЛС. Однако его применение позволяет получить
предварительный результат в течение 1-3 ч после отбора пробы крови без убоя животного.
Реакция считается положительной, если в культуре клеток, зараженной одним из материа-
лов, обнаружена четкая ГАд, при отсутствии её в контроле. Результат выделения вируса от-
рицательный при отсутствии ГАд и ЦПД в культурах клеток в течение 3-х пассажей.
РЗГАд. Предназначена для определения типовой принадлежности ГАд штаммов вируса
АЧС и основана на способности специфических сывороток задерживать ГАд в культурах
клеток КМС и ЛС, зараженных гомологичным типом вируса АЧС. РЗГАд ставят со стан-
дартными специфическими сыворотками серотипов 1, 2, 3 и 4, полученными, на соответст-
вующие эталонные штаммы вируса АЧС (“Лиссабон-57” -1-й тип, “Конго-73” - 2-ой тип,
“Мозамбик-78” - 3-й тип, ”Португалия-60” - 4-й тип). Материал эталонных штаммов и ти-
пируемых изолятов используют с активностью 104-106 ГАЕ50/мл, а типоспецифические сы-
воротки - не менее 1:50. Зараженные и контрольные культуры клеток инкубируют при 37-
38°С. Учет результатов реакции проводят ежедневно в течение 2 сут при отсутствии неспе-
цифической дегенерации в контроле культур клеток и сывороток, наличии Г Ад в контроле.
РДП. Успешно применяется для обнаружения специфического АГ в органах павших
свиней (печень, селезенка), а также для выявления специфических ПА в сыворотках и тка-
нях хронически больных животных. РДП - относительно низкочувствительная. Она прояв-
ляется с тканями, полученными через 24 ч и после подъема температуры, перед появлением
других симптомов болезни. Поскольку специфичность РДП была доказана и при европей-
ской чуме свиней, ее предложили для дифференциации двух видов чумы свиней. Для этого
782
Глава УШ. Африканская чума свиней
используют сыворотку свиней, иммунизированных аттенуированным вариантом вируса, ко-
торая дает преципитацию с материалами от свиней и с детритом инфицированных клеток.
По отдельным отзывам, РДП при АЧС специфична и удобна в полевых условиях при
остром течении болезни. В Испании сравнивали РДП с другими методами. Установили, что
РДП удобна, но её чувствительность ниже, чем других. Поэтому реакцию рекомендуют для
предварительной диагностики. Чувствительность РДП при выявлении вирусного АГ 50%.
Реакцию считают положительной, если между лунками со специфическим и испытуе-
мым компонентами (АГ и сыворотками) через 12-24 ч появляются одна или две линии пре-
ципитации. Они должны быть тонкими и иметь четкие границы. При отсутствии их между
указанными компонентами реакцию считают отрицательной.
ИФ. Применяют для выявления специфического АГ АЧС в мазках-отпечатках, приго-
товленных из проб органов больных или павших свиней, а также в культуре клеток, инфи-
цированных вируссодержащим материалом (6).
Испытуемые материалы: пробы органов и тканей от больных и павших свиней; куль-
тура ЛС или КМС, инфицированная испытуемым материалом; флюоресцирующие 1g спе-
цифические по ТУ 4620-81. Контрольные материалы: пробы органов и ткаией интактных
свиней; интактная культура ЛС или КМС. При сомнительных результатах дальнейшие ис-
следования с помощью ИФ проводят в культуре ЛС и КМС, инокулированной подозревае-
мым в заражении вирусом АЧС материалом, через 24-72 ч после его внесения.
Модифицированный прямой метод РСК чувствителен при обнаружении антигена вируса
АЧС в испытуемых тканях, взятых от свиней в период острой болезни (через день после по-
вышения температуры). При помощи модифицированной РСК устанавливают лишь сыворо-
точные АТ (в случаях серологической оценки постинфекционного и поствакцинального им-
мунитетов). КС АГ получают методом экстракции ткани смесью ацетона и эфира.
Биопроба. Ставят с разрешения Департамента ветеринарии. При первичном подозре-
нии на АЧС её постановка обязательна. Биопробу ставят по одному из двух вариантов.
Первый вариант. Четырех из восьми подсвинков 2-4-мес возраста, иммунных к класси-
ческой чуме, заражают внутримышечно вирусом КЧС, а 4-х - испытуемым материалом
(кровь, суспензия органов). У всех подопытных животных ежедневно измеряют температу-
ру. Если зараженные животные заболеют и погибнут (обычно в течение 10 дн), а все инфи-
цированные вирусом КЧС останутся здоровыми, в испытуемом материале содержится вирус
АЧС. Специфичность гибели зараженных животных должна быть подтверждена характер-
ными для АЧС клиническими симптомами и патологоанатомическими изменениями, а так-
же выделением от павших животных вируса и его идентификацией. Если после заражения
останутся здоровыми все 8 подсвинков испытуемый материал содержит вирус КЧС.
Второй вариант. Восемь подсвинков 2-4-мес возраста массой от 25 до 40 кг (4 из них
должны быть иммунны к КЧС, а 4 - не иммунны) заражают внутримышечно суспензией из
испытуемого материала (или кровью). Если иммунизированные против КЧС животные ос-
танутся здоровыми, а не иммунизированные погибнут, значит, в испытуемом материале был
вирус КЧС. Если же погибнут все 8 подсвинков - в испытуемом материале был вирус АЧС.
В последнем случае специфичность гибели подсвинков от АЧС должна быть подтверждена,
как указано выше. В случае опасности появления АЧС на территории страны диагноз на
КЧС и АЧС ставят одновременно. Поэтому второй вариант иммунологической пробы пред-
почтительнее, так как позволяет диагностировать обе болезни одновременно. Биопроба ме-
тодологически не сложна, но в санитарном отношении должна быть проведена с соблюдени-
ем мер, абсолютно исключающих вынос инфекции.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Определение АТ к вирусу АЧС
имеет большое эпизоотологическое значение ввиду длительной персистенции вируса в орга-
низме свиней без проявления клинических признаков болезни. Такие животные-
783
Г лав а УШ. Африканская чума свиней
вирусоносители могут явиться источником инфекции. По индикации АТ можно судить о ко-
личестве хронических и субклинических случаев болезни.
НИФ. Она может с успехом применяться в лабораторной диагностике для определения
специфических АТ к вирусу АЧС. Данный метод оказался ценным при установлении эпизо-
отической ситуации. С его помощью установлены АТ у больных свиней-хроников в 100% и
у свиней-вирусоносителей в 74,5% случаев. В качестве АГ для непрямого метода ИФ ис-
пользуют 4-5-дн КЛС, зараженные вирусом АЧС. Через 24-48 ч после заражения культуры
фиксируют в ацетоне, после чего наслаивают на 60 мин исследуемые сыворотки и еще на 30
мин ангисвиную конъюгированную сыворотку. При положительной реакции в цитоплазме
наблюдают ярко-зеленое свечение вирусных включений. Для контроля используют зара-
женные клеточные культуры, обработанные сывороткой здоровых свиней.
В 1976 г. был разработан новый метод, основанный на выявлении специфических АТ в
экстрактах тканей погибших животных. Эти АТ в НИФ были идентифицированы как IgG.
АГ служила культура клеток, выращенная на покровных стеклах и зараженная адаптиро-
ванным вирусом. Анти-АЧС-IgG обнаруживали в различных тканях (легких, селезенке,
лимфоузлах, печени, почках, поджелудочной железе, мозге и коже) через 12-14 дн после
инокуляции. Лучшие результаты получали с пробами селезенки и легких: в зависимости от
клинической стадии титры АТ колебались в пределах от 1:5 до 1:5000. Исследование ткане-
вых АТ погибших свиней - более чувствительный метод, чем обнаружение вирусного АГ.
Метод прост, исследование выполняется за 2-3 ч. По данным испанских ученых у свиней,
при хроническом течении болезни АТ выявляют в 100%, у свиней-вирусоносителей - в
74,5% случаев. Положительный результат указывает на АЧС, и дальнейших исследований
не проводят. Метод непрямой ИФ используют при хроническом и латентном течении АЧС
для выявления АТ в пробах сывороток крови или суспензий из органов.
Испытуемые материалы: суспензии из проб органов (20%) от павших, вынужденно
убитых или подозреваемых в заражении АЧС и вакцинированных животных; сыворотки
крови хронически больных, переболевших и вакцинированных животных.
ИФА. ИФА (ELISA) используют для обнаружения специфических АТ в сыворотках
крови больных АЧС (4, 6, 54, 55, 76). Набор препаратов для непрямого метода ИФА вклю-
чает: антивидовой (антисвиной) пероксидазный конъюгат (ангисвиные 1g сыворотки осла,
меченые пероксидазой); специфическая сыворотка свиньи, содержащая АТ к вирусу АЧС;
контрольная (нормальная) сыворотка свиньи; специфический культуральный АГ для серо-
логической диагностики АЧС; контрольный АГ из незараженной культуры клеток. Поли-
стироловые пластины для ИФА сенсибилизируют специфическим и нормальным АГ, взя-
тыми в рабочих разведениях, в течение ночи при комнатной температуре во влажной камере
в 0,5 М карбонатно-бикарбонатном буферном р-ре. Учет результатов проводят через 20 мин
после проявления окраски на сканирующем спектрофотометре при длине волн 492 нм или
визуально. Для визуального учета необходимо остановить реакцию, внося в лунки по 25 мкл
2,5 М H2SO4. Реакцию учитывают по разности поглощения сыворотки в испытуемых разве-
дениях против специфического и контрольного АГ. Результат считают положительным, если
разница поглощения при разведении сыворотки 1:125 превышает 0,1.
Метод ингибирования твердофазного ИФА. Предназначен для выявления специфи-
ческих к вирусу АЧС антител в сыворотке крови или суспензиях проб органов животных с
низким их уровнем (1:5-1:25) в ранние сроки после вакцинации или заражения (3-5 сут).
Преимущество его заключается в том, что он позволяет выявлять АТ в цельной пробе и
проще в техническом исполнении, не уступая по чувствительности непрямому методу.
Инструментальный учет проводят после внесения субстрата и инкубирования пластин в
темноте при комнатной температуре аналогично непрямому ИФА. Если интенсивность
(оптическая плотность) окрашивания в лунках с испытуемыми пробами снижается на 50% и
более по отношению к оптической плотности содержимого лунок с нормальной сывороткой,
784
Г лава УШ. Африканская чума свиней
т.е. оптическая плотность содержимого лунок с исследуемой сывороткой в 2 раза и более
ниже, то данная сыворотка считается положительной.
ВИЭОФ. Используют для выявления специфических АТ в сыворотках крови больных
свиней при хроническом и латентном течении АЧС (4). В РФ предложен порядок и схема
лабораторных исследований при первичном диагностировании АЧС (4.6). Патматериал из
первичного эпизоотического очага направляют во ВНИИВВиМ. Предварительно диагноз
ставят на основании экспресс-анализа поступившего материала при выявлении специфиче-
ского АГ и АТ в прямой ИФ и непрямой ИФ с ответом через 3 ч с момента получения проб.
Диагноз подтверждают выделением возбудителя в КЛС или КМС и биопробой на подсвин-
ках. Затем вирус идентифицируют и типируют в РГА, ИФ и РЗГА, при положительных ре-
зультатах ставят окончательный диагноз. АЧС исключают на основании отрицательных
данных выявления АГ и АТ в ИФ, твердофазного ИФА и ВИЭОФ; выделения и идентифи-
кации вируса в культуре клеток в течение трех последовательных пассажей (15 сут) проб
патматериала и сыворотки крови животных, подозреваемых в заражении.
Патологический материал из вторичных эпизоотических очагов АЧС исследуют в зо-
нальных специализированных лабораториях по особо опасным заразным болезням живот-
ных и во ВНИИВВиМ. Зональные специализированные лаборатории при наличии специфи-
ческих АГ или АТ в исходных пробах через 2-3 ч ставят предварительный диагноз на АЧС
и направляют материал во ВНИИВВиМ. Ретроспективную диагностику проводят выявлени-
ем антител в сыворотке крови свиней ВИЭОФ и твердофазным ИФА. Отсутствие их дает
основание дать отрицательный результат на АЧС. Положительные данные ВИЭОФ или
твердофазного ИФА подтверждает непрямой ИФ, после чего ставится диагноз на АЧС. Во
ВНИИВВиМ на основании выделения, идентификации и типирования возбудителя в культу-
рах КЛС или ККМС в РГА ИФ и РЗХГА через 1-15 сут устанавливают окончательный ди-
агноз на АЧС, вызванную ГАд штаммами. Низковирулентный негемадсорбирующий вирус
АЧС (летальность 30-50%) выявляют обнаружением специфических АТ в ИФ, выделением
возбудителя в течение 1-3 пассажей (5-15 сут) в клетках КЛС и КМС и идентификацией АГ
в ИФ. При необходимости проводят биопробу. Отрицательное заключение на АЧС во вто-
ричных эпизоотических очагах дают по тем же критериям, что и в первичном.
Современная дифференциальная диагностика АЧС и КЧС обеспечивает проведение со-
ответствующих противоэпизоотических мероприятий по локализации, ликвидации и преду-
преждению распространения в наиболее сжатые сроки. Разработка наборов препаратов для
выявления АЧС и КЧС, оценка их эффективности на большом полевом материале позволи-
ли предложить схему лабораторной дифференциальной диагностики этих болезней. ИФ
мазков-отпечатков, несмотря на низкую чувствительность широко применяют в зональных
специализированных лабораториях при предварительной оценке материала для последую-
щего направления в региональный центр. Исследуемым материалом для выделения вирусов
АЧС и КЧС сразу же инокулируют культуры ККМС (КЛС) и РК-15. В течение 1-5 сут инку-
бирования культуры клеток 1-го пассажа контролируют РГА и ИФ на наличие вируса АЧС,
исключая возможную неспецифическую ГАд или наличие негемадсорбирующего вируса.
Для обнаружения вируса КЧС в культуре клеток РК-15 ИФ проводят ежедневно в течение 4
сут. При отрицательных результатах делают 3 пассажа с обязательной ИФ.
В случае выделения вируса АЧС его типируют в РЗГА. Одновременно пробы исследуют
на наличие специфических АТ в сыворотке и органах (20%-ная суспензия) унифицирован-
ной ИФ на оба вируса, методом ингибирования твердофазного ИФА возбудителя АЧС и PH
флюоресцирующих микробляшек (РНФБ) вируса КЧС. Положительные результаты ИФ и
РНФБ на КЧС оценивают в зависимости от сроков проведения вакцинации, а на АЧС - да-
ют основание поставить окончательный диагноз.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
50 Зак. № 171
785
Глава УШ. Африканская чума свиней
В патогенезе и иммуногенезе АЧС аллергические или аутоаллергические реакции игра-
ют существенную роль (15). При действии аттенуированных штаммов вируса на лимфоид-
ные клетки происходит синтез неполноценных АТ, неспособных нейтрализовать вирус. Об-
разуются комплексы антиген-антитело, которые концентрируются в тканях органов-
мишеней, приводя к нарушению их функций и развитию аллергических и аутоиммунных
процессов; наблюдают стимуляцию клеточного иммунитета - лизис инфицированных клеток
сенсибилизированными лимфоцитами, выделение медиаторов клеточного иммунитета:
лимфотоксина, фактора угнетения миграции бласттрансформации и др. Развитие этих про-
цессов зависит от биологических свойств используемых штаммов и индивидуальных осо-
бенностей организма (состояние иммунной системы).
Определенную роль в патогенезе болезни играют взаимодействие вируса с эритроцита-
ми и нарушение механизма свертывания крови (6). Влияние вируса на клетки лимфоидной
системы и эритроциты характеризуется их разрушением или изменением функции, а также
развитием аллергического и аутоиммунного процессов.
Переболевшие или привитые (инактивированным материалом или аттенуированным
вирусом) животные имеют определенную степень устойчивости к гомологичному изоляту
вируса (задержка гибели свиней), изменение выраженности клинических признаков болез-
ни, выздоровление и полное отсутствие реакции на контрольное заражение). Отсутствие
специфической защиты против изолятов, выделенных в других зонах, свидетельствует об их
АГ и иммунологических различиях (19,21,28,29,31).
С. Anderson (48) наблюдал длительное носительство вируса и его приживление при по-
вторном заражении у переболевших и привитых животных. Пассивный и колостральный
иммунитет выражен слабо. АТ недостаточно нейтрализуют вирус (17). Причины слабой на-
пряженности иммунитета, а также нейтрализующей активности АТ связывают с особенно-
стями АГ структуры вируса (блокирование АГ липидами, конкуренция или маскировка про-
тективных АГ видовыми АГ вируса или хозяина), а также с изменением функции лимфоид-
ных клеток - нарушение взаимодействия вируса и АГ с макрофагами и кооперации послед-
них с Т- и В-лифоцитами (28, 29). В пользу первого предположения свидетельствует слабый
или измененный ответ на инактивированные АГ препараты как у чувствительных, так и у
других видов животных. В условиях низкой активности АТ усиливаются реакции клеточно-
го иммунитета, которые имеют существенное значение в блокировании инфекции, а также
являются причиной развития гиперчувствительности замедленного типа, аллергических и
аутоиммунных осложнений (28, 29).
Процесс защиты при АЧС представляется в виде динамического равновесия между
этиологическими факторами (вирусом) и механизмами иммунной защиты. Он может быть
преобладающим как в том, так и в другом направлении, это зависит от свойств применяе-
мых шт. и состояния иммунной системы животного. Надежных профилактических препара-
тов против АЧС - нет. Получить инактивированные вакцины против АЧС классическими
методами, используя современные методики, никому не удалось. Большинство привитых
животных при контрольном заражении погибали и только незначительная часть их выжива-
ла после длительного переболевания. Результаты испытания инактивированной вакцины на-
водят на мысль, что основное значение в аномалии иммунитета при АЧС имеет структура
АГ и их взаимодействие между собой, а не состояние иммунной системы макроорганизма.
Препараты из живого аттенуированного вируса были более эффективными, вызывая
слабую поствакцинальную реакцию, они защищали от заражения гомологичным вирусом
50-90% вакцинированных животных. Однако, самые существенные недостатки живых вак-
цин - длительное вирусоносительство после прививки, развитие осложнений у части иммун-
ных животных, приживление у вакцинированных животных вирулентного вируса без про-
явления клинических признаков болезни, что также опасно в практических условиях. Учи-
786
Глава УШ. Африканская чума свиней
тывая эти недостатки поставлен под сомнение вопрос о применении живых аттенуирован-
ных вакцин для ликвидации очагов болезни в сочетании с другими ветеринарно-
санитарными мероприятиями. Множественность иммунологических типов возбудителя и
существование смешанных или измененных популяций вируса значительно ограничивают
возможности использования таких препаратов. Однако имеются сведения о подборе эффек-
тивных средств для лечения больных свиней и снятия вирусоносительства, которые можно
применять в сочетании с аттенуированными штаммами вируса (15, 24). В материалах сове-
щания экспертов по АЧС Европейского экономического сообщества (1978-1987) и других
сообщениях намечено развитие научных исследований, направленных на создание компо-
нентных, химических и генно-инженерных вакцин. С этой целью изучают тонкую АГ струк-
туру возбудителя АЧС и инфицированных клеток, структуру и функции генетического мате-
риала, проводят поиск протективных АГ с использованием современных методов молеку-
лярной биологии, генетики, монАТ. Эти направления могут привести к выработке новых
подходов к созданию эффективных и безвредных вакцин против АЧС.
СПИСОК .ЛИТЕРАТУРЫ
ЕАнохина Е.Г. и др. Мат. и. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :50. 2.Бадаев Ф. А. и др. Мат. и. коиф. ВНИИВВиМ, 1992 :24.
З.Бадаев Ф.А и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992. За.Балышев В.М. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995
:230. 4.Вишняков И. Ф. и др. Диагн. и диф. диагн. африк. и класс, чумы свиней, М, 1992. 5.Бадаев Ф.А. и др. Мат. н.
конф. ВНИИВВиМ, 1992 .44. б.Вишняков И.Ф. и др. Матер, н. коиф. ВНИИВВиМ, 1992 :57. 7.3еленцов В.А. Патан,
диагн. вир. бол. жив., Колос 1984 :107. 8-Каламина Т В. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :36. 9.Колонцов А. А.
Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :34. 10-Малахова М.С. и др. С/х., биология. Сер. биол жив., 1991, 4 :183.
П.Макаров В.В. Вопросы вирусол. 1988,2 :5. 12.Макаров В.В. и др. Докл. ВАСХНИЛ, 1991, 12 :27. ГЗ.Макаров В.В.
и др. Вопросы вирусол 1991,4 :321. 14.Никитин И.В. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :51. 14а.Пашк>шенко
М.С. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :23. 14б.Паипошенко М.С. н др. Там же, :24. 14в.Паипошенко
М.С. и др. там же, :25. 15.Пелров Ю.И. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992, -.21. 16.Петров Ю.И. и др. Ветерина-
рия. Иммунобиол. свойства вируса АЧС (обзор). 17.Роцько Л.Н. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ,1992 :53. 18.Середа
А.Д. Тез. докл. н. конф. ВНИИВВиМ, 1990 :40. 19.Середа А.Д. и др. Ветеринария, 1992 :1. 2О.Середа А.Д. и др. Мат.
н. конф. ВНИИВВиМ, 1992, :31. 20а.Старовойтов Н С. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :51. 21.Сюрин В.Н. и
др. Вет. вирусология. М., Агропромизд. 1991. 22.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. животных. М. Агропромизд,
1991. 23.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М., Колос, 1979. 24.Фомина Н.В. и др. Вирусы животных, MBA, 1991.
24а.Цыбанов С.Ж. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :26. 25.Чумак Р.М Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, Покров,
1992, 41 :32. 26.Almedral I.M. Syrnp African Swine Fever and Pig Immunol, Salamanca, 1987. 27.Barros M.F. et.al.
Virology, 1986,155 :1 28.Cadallero R.G. Arch Virology, 1986, 87 :1. 29.Carrascosa AL. Symp African Swine Fever and Pig
Imm, Salamanca, 1987. 3O.Devanchelle G. et.al. Iridoviridae Berlin, e.a.1985 :1. 31.Dixon L.K. Rev Sd Nechn of Int lipiz.
1986, 5 :2. 32.Escribano J.M-Symp African Swine Fever and Pig Immunol., Salamanaca, 1987. 33.Consales A. etal.
Symp.African Swine Fever and Pig Immunol, Salamanca, 1987. 34.Gonzalez S. etal. Veter Immunol Immunopat, 1990, 26, 1
:71. 35.Martins C.L. et al. Symp Afr Swine Fever and Pig Immunol, Salamanca, 1987. 36.Petit F. et.al. Ann Rech Veter, 1991,
22,2 :201. 37.Santurde G. Dep Virol Animal Madrid, 1987. 38,Schloer G.M. Virus Res, 1985 : 3. 39.Stdger Y. et. al. J Clin
Microbiol, 1992, 30, :1. 40.Plowright W. Rev Sd Techn of Int Epiz, 1986, 5 :2. 41.Talavera A. Centr. Biology Mollecular,
Madrid, 1987. 42.Valderia M. et. al. Cienc Biol Mol and Cell Biol, 1989, 14, 3 :96.43.Vinela E Curr. Topics in Microbiol
and Immunol, 1985, 116 :291. 44.Vinuela E etal. Symp African Swine Fever and Pig Immunol, Salamanca, 1987. 45.Wiard
T.C. et al. Virology, 1985, 142 :2. 46.Wilkinson P. Pirbright, 1985. 47.Вишняков И.Ф. и др. Тез. Всерос. н.-пр. конф.
ВНИИЗЖ, 1995 :164. 48.AndersonE.C. Rev Sd Thechn off Int Epiz, 1986, 5 :2. 49.Yamz R.J. etal. Virol, 1995, 208, 1
:249. 50,Колоицов A.A. Мол ген. микр. и вир., 1995, 3 :34. Sl.Hyngowp Р.М. et.al. EMBO J, 1992, 11,1 :361. 52.Рап
J.C. etal. Am J Vet Res, 1985, 46, 2 :314. 53.Бадаев Ф.А. и др. Тез. докл. н. конф. ВНИВВИМ, 1990, :46. 54.Цыбанов
С.Ж. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1990 :26. 55.Пелров Ю.И. и др. Мат. н. конф. ВНИВВИМ, 1992
:20. 56.Kuznar J. et.al. Virol, 1980, 101 :169. 57-Kuznar J. etal. Virol, 1981, 96 :307. 58.Palatnick J. et al. Arch ges
Virusforsch, 1974, 44 :156. 59.VoldeiraM.L. et.al. Arch virol, 1990, ИЗ :125. бО.Колонцов A.A. Мол. ген., микр., виру-
сол 1995, 3 :34. 61.Salas ML. et.al. Biochim., 1988, 70 :627. 62.Salas J. etal. J Virol, 1984, 52, 1 :37. 63.Arias M.L. etal.
Med Vet, 1986, 3 :333. 64.Blasco R. etal. Virology, 1989, 168 :819. 65.Carrascosa J.L. etal. Virol, 1984, 132 :160.
66.Casals I. etal. J Virol, .1984, 52 :37. 67.McKercher P.D. etal. Can Inst Food Sd Technol, 1987, 20 .267. 68.Mebus C.A.
Adv Vir Res, 1988, 35 :251. 69.Minguez I. etal. Vet Pathol, 1988, 25 :193. 70.Montgomery R.E. J Comp Pathol, 1921, 34
:159. 71.Nesser J.A. et al. Ondertepoort J Vet Res, 1986, 53 :133. 72.Pastor M.J. et.al. J Virol Methods. 1990, 26 :67.
73.Pastor M. J. etal. Can J Vet Res, 1987, 53 :105. 74.Quintero J. etal. Am J Vet Res, 1986, 47 :1125. 75.Sanchez-Viscaino
J.M In Afr svine fever Ed J Beccer Boston :63. 76.Tabares E. etal. Arch Virol, 1980, 66 :107. 77.Wardley R.C. etal. Pros
Med Virol, 1987, 34 :180. 78.Coggins L. Prog Med Virol. 1974, 18 :48. 79.Malmquist W.A. et al. Am J Vet Res, 1963, 24
:450.
50*
787
Глава XIX. Family Papovaviridae Паповавирусные инфекции
Глава XIX. ПАПОВАВИРУСНЫЕ
ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
СЕМЕЙСТВА PAPOVAVIRIDAE
Название семейства образовано из сочетания первых двух букв наименования вирусов
papilloma, polyoma и vacuolating agent (раннее наименование SV 40). Паповавирусы - груп-
па вирусов, поражающая позвоночных. Вирионы паповавирусов представляют собой ли-
шенные суперкапсидной оболочки икосаэдрические частицы диаметром 40-55 нм. Капсид
построен из 72 капсомеров. Липиды и углеводы в составе вирионов не обнаружены. Моле-
кулярная масса вирионов составляет 25-47 МД, плавучая плотность в CsCl 1,34 г/см3, коэф-
фициент седиментации 240-300S.
Паповавирусы устойчивы к эфиру и прогреванию. Геном представлен двуспиральной
кольцевой молекулой ДНК с мол.м. 3-5 МД, доля Г+Ц составляет 40-50%. ДНК обладает
инфекционностью. В вирионах обнаружено 6-9 полипептидов с мол.м. 3-82 кД. Низкомоле-
кулярные полипептиды - клеточные гистоны, прочно связанные с вирусной ДНК и не обна-
руживаемые в составе “пустых” вирионов. Репликация вирусной ДНК и сборка вирионов
осуществляется в ядре, синтез полипептидов происходит в цитоплазме. Зрелые вирионы вы-
ходят из клетки после ее лизиса. Некоторые паповавирусы вызывают трансформацию кле-
ток-хозяев и образование опухолей.
Семейство состоит из двух родов: Papillomavirus u Poliomavirus.
1 .Род Papillomavirus (от лат. papilla - сосок, греч. ота - опухоль). В состав рода вхо-
дят: вирус папилломы кроликов, или папилломы Шоупа (прототипный вирус), вирус па-
пиллом человека (более 60 типов), обезьян, КРС, лошадей (6 типов), слонов, оленей, лосей,
овец, собак, опоссумов, мышей, черепах, зябликов, попугаев. Вирусы вызывают образова-
ние полипов у естественных хозяев и не размножаются в культуре клеток.
2 .Род Polyomavirus (от греч. poly - много и ота - опухоль) В состав рода входят: ви-
рус папилломы мышей (прототипный вирус), вирусы полном обезьян (SV 40, SA 12), чело-
века (ВК, JC), КРС (WRSV), кроликов (RKV) и мышей (К). Возможный представители рода
- вирусы, обнаруженные у свиней и хомячков.
ПАПИЛЛОМАТОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine papillomatosis, Warts in cattle (англ.); Les papillomes chez les
bovides (франц.); Papillomatose des Rindes (нем.)
Папилломатоз КРС - доброкачественно протекающая болезнь, характеризующая появ-
лением на коже бородавок, часто самопроизвольно исчезающих. Вирусная папиллома КРС -
одна из многочисленных опухолей млекопитающих, где этиологическая роль вируса в появ-
лении опухолевого роста не вызывает сомнения. Распространение повсеместное.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Вирус отличается от
других, вызывающих образование бородавок, тем, что основным компонентом бородавок
.лужит пролиферирующая соединительная ткань. Бородавки встречаются на голове и шее
телят (Рис. 124), реже на коже других частей тела. Через несколько месяцев они исчезают.
Бородавки на сосках, пенисе встречаются реже и могут быть вызваны другим возбудите-
лем. Вначале появляются небольшие, медленно растущие узелки. Иногда они растут быстро,
частично ороговевают и напоминают цветную капусту. Достигнув максимального роста, бо-
788
Глава XIX. Family Papovaviridae Паповавирусные инфекции
родавки отпадают. Размеры опухолей - от горошины до нескольких сантиметров в диаметре
(1).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус папилломатоза КРС первые описал Магалхес в Бразилии в 1920 г., затем Грин в
1929 г. в США.
Морфология и химический состав. Размеры вирионов в среднем 47,5 нм, содержат
72 продолговатых капсомера длиной 7,5 нм и шириной 5-6 нм (Рис. 123). Выделена инфек-
ционная ДНК вируса. В градиенте плотности CsCl вирус даёт 2 пика; 1,33 г/см3 (плотные
вирионы) и 1,29 г/см3 (пустые вирионы). Мол.м. и содержание белка в вирусе бычьего па-
пилломатоза такие же, как у вируса папилломы Шоупа, то есть 47- 10б Д и 88% белка. Одна
ГА ед. соответствует ~ 1,5 • 108 вирионов и содержит около 10 нг вирусного белка. В опухо-
левых клетках присутствует 28, а в культивируемых клетках 9 геномов вируса. Вирусная
ДНК присутствует в интегрированном состоянии с клеточной ДНК (McVay, 1982 г.). Белок
Е1 папилломавируса КРС обладает высоким сродством с ДНК. Он образует комплексы с
белком Е2 (активатором транскрипции). Белок Е1 поддерживает плазмидное состояние ге-
нома папилломавируса КРС в клетках. Изучено функционирование генома вируса папилло-
мы.
Устойчивость. Вирус резистентен к эфиру, кислотоустойчив, термостабилен.
АГ активность. Сыворотки крови коров, инфицированных вирусом бычьего папилло-
матоза в естественных условиях, а также хомячков, имеющих вирус-индуцированные опу-
холи (в результате экспериментального заражения), содержат высокие титры АТ (анти-ГА).
У естественно поражённого КРС титр АТ к вирусу ниже, чем при экспериментальном зара-
жении. АТ также были выявлены в сыворотке заражённых лошадей и кроликов. Очищен-
ный и концентрированный АГ, полученный из бородавок естественно больных и экспери-
ментально заражённых телят, вызывает в организме кроликов и морских свинок образова-
ние ПА и ВНА, активность которых можно установить на мышатах. Вирус папилломы, ино-
кулированный подкожно белым мышатам, вызывает опухолевое разрастание. Гипериммун-
ная сыворотка кроликов и морских свинок полностью нейтрализует вирусы папилломы, и
при заражение у мышей опухолевое разрастание не образуется.
АГ вариабельность и родство не изучены. Вирус папилломы КРС удавалось переда-
вать лошадям, у которых он вызывал опухоли соединительной ткани. При обратной иноку-
ляции опухолевой ткани у телят развивались бородавки.
ГА свойства. Вирус обладает ГА активностью с эритроцитами мышей. ГА происходит
при 4-12°С, но отсутствует при 22- 37°С. Оптимальный режим реакции ГА при pH 6,8 - 8,4.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится у телят и лошадей. Возможность
передавать папилломы фильтратом была показана ещё в 1920 г. При введении бесклеточ-
ных фильтратов подкожно новорождённым мышам линии СЗН/еВ и хомячкам у них при-
мерно через 100 дн на месте инокуляции развивались плотные опухоли. Метастазов не от-
мечалось. При заражении в мозг появлялись опухоли без наклонности к регрессии.
При внутрикожном введении вирус у лошадей индуцировал саркомоподобные опухоли
кожи. У мышей линии СЗН/еВ и сирийских хомячков нередко возникали матастазы. Вирус
способен трансформировать культуры клеток КРС и эмбрионов мышей. При подкожном
введении новорожденным мышам он вызывал опухоли. Гипериммунная сыворотка кролика
и морской свинки нейтрализовала действие вируса. Локализация вируса, вирусемия, виру-
соносительство, вирусовыделение у естественно больного КРС не изучены.
Культивирование. Вирус размножается на ХАО КЭ, причём её эпителиальные утол-
щения содержат большое количество возбудителя, а также в культуре клеток эмбриона ко-
ров и мышей. Размножается также в культуре клеток эмбриона коров и мышей. ЦПЭ не на-
блюдается, но через 45-50 дн можно отметить трансформацию клеток. Трансформирован-
ные клетки легко пассируются. Особенности репродукции не изучены. Вирус обладает спо-
собностью ограничивать собственное размножение, а также размножение SV40 (2).
789
Глава XIX. Family Papovaviridae Паповавирусные инфекции
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Не изучены. Заражение, по-видимому, про-
исходит при прямом контакте.
Спектр патогенности в естественных условиях. Не изучен.
ДИАГНОСТИКА
В 1974 г. Л. Коллер и др. для количественного определения вируса рекомендовали
РИД, для определения АТ в сыворотке крови - микрометод по Оухтерлони. Однако не все
вируссодержащие препараты, полученные из папиллом, могли реагировать в РДП в качест-
ве АГ. В тканевых суспензиях вирус папилломатоза и АТ к нему не существуют в виде ком-
плекса, и АТ препятствуют диффузии вируса навстречу антисыворотке (Коллер, 1972). По-
пытки разобщить комплекс АГ-АТ - оказались неудачными. С целью диагностики опреде-
ляют тип по вирусной ДНК с помощью различных методов гибридизации. Наиболее чувст-
вительным является ПЦР, а наиболее специфична - реакция по Соузерену .
При естественном заболевании в папилломах накапливается вирус в более высоких тит-
рах, чем при экспериментальном заражении, в то время как экспериментально заражённые
телята имеют титры АТ большие, чем при естественном переболевании. При определении
АТ к вирусу более чувствителен тест пассивной ГА, однако он сложен по выполнению и
требует больших количеств ингредиентов.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Иммунитет не изучен. Для профилактики применяют нативный вируссодержащий мате-
риал. Суспензии ткани бородавок, приготовленные на глицериновом солевом р-ре или фор-
малинизированные, используют в качестве вакцин для профилактики и лечения.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., М., Колос,1979. l.Nallaseth F.S. J Virol, 1994,
68, 5 :3051.
ПАПИЛЛОМАТОЗ ШОУПА КРОЛИКОВ
Rabbit papilloma (англ.)
Папилломатоз Шоупа (папиллома кроликов, фиброматоз Шоупа) - доброкачественная
опухолевая болезнь кроликов, проявляющая наличием рассеянных эпидермальных образо-
ваний в различных участках тела животного. Согласно имеющимся сведениям, в естествен-
ных условиях болеют только дикие американские кролики в Северной Америке (Sylvilagus
flori-danus). Однако Бирд и Раус (1933) наблюдали незначительные новообразования у
крупного северо-американского зайца.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Папиллома Шоупа -
доброкачественная опухоль, ограниченная эпидермисом, представляет собой высокие тон-
кие сосочки чёрного или серого цвета. В естественных условиях опухоли появляются на
спине, передней части головы и на ушах; диаметр их ~ 2 см. Примерно через 8 нед они ис-
чезают, но иногда сохраняются месяцами. Редко и только у диких американских кроликов
папиллома может перерождаться в злокачественную форму типа эпидермоидной карциномы
(плоскоклеточный рак), часто дающей матастазы и приводящей к смерти (1-5).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Болезнь впервые описал Шоуп в 1933 г., он же и выделил вирус. Среди папилломавиру-
сов животных наиболее изучен вирус папилломы кроликов. В естественных условиях он вы-
зывает образование доброкачественных опухолей эпителиального происхождения в различ-
ных участках тела диких американских и домашних кроликов (1-5).
Морфология и химический состав. Вирион представляет собой икосаэдр диаметром
45 нм (Рис. 122), Двуспиральная ДНК составляет 6-8% общей массы вириона, имеет супер-
циркулярную форму (кольцевую с вторичной спирализацией), причём в первичной спирали
790
, Глава ХИ. Family Papovaviridae Паповавирусные инфекции
не хватает 20 витков, а вторичная спираль состоит из 20 витков . Мол.м. ДНК - 3-5 106 Д.
Г+Ц от 41 до 49%. Константа седиментации 280-300 S, плавучая плотность в CsCl 1,34
г/см3. Легко фильтруется через свечи Шамберлена и Беркефельда, но не проходит через
фильтр Зейтца.
В очищенном вируссодержащей материале идентифицировано 18 аминокислот. В опу-
холевых клетках присутствует 28, а в культивируемых клетках 9 геномов вируса. Вирусная
ДНК присутствует в интегрированном состоянии с клеточной ДНК.
Устойчивость. Вирус термостабилен и разрушается только при 70°С после 30-мин на-
гревания. Имеются и другие данные относительно повышенной терморезистентности. Ус-
тойчив к изменениям pH в пределах 3-7 чувствителен к эфиру и хлороформу. Вирус удаётся
очистить с помощью фторуглерода или преципитации метиловым спиртом. Плотность час-
тицы варьирует от 1,29 до 1,34 г/см3 в зависимости от содержания ДНК. В кислой среде ви-
рус термостабилен. Более устойчив к облучению Х-лучами, чем большинство вирусов. Хо-
рошо сохраняется в глицерине и в лиофилизированном виде.
АГ активность. У переболевших кроликов появляются сывороточные ВНА. Вируссо-
держащая ткань бородавок домашних кроликов индуцирует образование АТ при интрапери-
тонеальной инокуляции. Экстракты папиллом, из которых не удаётся выделить вирус, при
внугрибрюшном введении здоровым кроликам вызывают появление специфических АТ, т.е.
в них содержится АГ в какой-то маскированной форме. В организме больных кроликов ви-
рус Шоупа индуцирует образование фермента аргиназы. Поэтому у животных с папилло-
мой, кроме ВНА имеются АТ к этому энзиму, содержащемуся в аутологичных опухолях. С
АГ легко экстрагируется из бородавок домашних кроликов, более устойчив к воздействию
УФ лучей, чем инфекционные частицы, и механически неотделим от вирусной частицы.
Способность раковой ткани кролика, развившийся из папилломы, блокировать вирус связа-
на с а- и р-глобулиновыми фракциями.
АГ вариабельность и родство. В РСК и PH показаны тесные взаимосвязи между шт.
Огайо и 6 шт., выделенными из кроличьих фибром. Родства с вирусами герпеса, а также ви-
русами Яба и Тана, вирусом вакцины не установлено. Нет АГ родства у вируса папилломы
Шоупа с вирусами папилломатоза КРС, собак и папилломы ротовой полости кроликов.
ГА свойства. Вирус адсорбируется эритроцитами кролика, человека, обезьяны, мор-
ской свинки, курицы, ио ГА иё происходит .
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Вирус локализуется
в местах кожных поражений, в кератогиалиновом и роговом слоях кожи. В старых опухолях
находится в замаскированном состоянии; экстракты папиллом, из которых не удаётся выде-
лить вирус, при внутривенном введении здоровым кроликам вызывают появление АТ. Ви-
русный АГ обнаруживают в оболочках клеток. В висцеральных органах и крови больных
кроликов вируса нет. Длительность вирусоносительства не изучена.
Экспериментальная инфекция. Экспериментально можно инфицировать домашних
кроликов, а также несколько видов кроличьих, втирая вирус в скарифицированную кожу.
При втирании экстракта опухоли в скарифицированную кожу кроликов через 2-4 нед появ-
ляются мелкие папилломы, которые либо рассасываются, либо сливаются в крупные конг-
ломераты. Возможны метастазы и раковые перерождения. Течение экспериментально вы-
званной болезни и вспыхнувшей спонтанно одинаково. У домашних кроликов опухоль раз-
растается относительно быстро. Она мясиста, розового цвета или цвета сажи, плоская или
возвышающаяся, сухая или сочная. Вирус выделяется с трудом, хотя имеются сообщения о
серийном пассировании вируса на домашних кроликах. Неясно, отличается ли “маскиро-
ванный вирус” домашних кроликов от вируса диких кроликов качественно или только коли-
чественно. Шоуп предполагает, что у первых он может присутствовать как неполный вирус,
возможно, только как инфекционная ДНК.
Культивирование. Высокочувствительной системой для репродукции вируса служит
куль тура клеток ПЭКр. Размножаясь, вирус вызывает в ней ЦПД и накапливается в титре
791
Глава XIX. Family Papovaviridae Паповавирусные инфекции
не ниже 104 ТЦД50/мл. При массивном заражении культуры 5-10 БОЕ/кл отмечали кратко-
временное подавление размножения клеток. Затем скорость размножения восстановилась и
в заражённых культурах начинали появляться морфологически изменённые клетки, имев-
шие форму вытянутых фибробластов и содержащие включения. Эффект подавления роста
был использован для титрования вируса. В линии клеток SP8, выделенной из папиллома-
тозной ткани домашних кроликов, специфический вирусный АГ выявлялся уже в первых
пассажах, затем по мере пассирования количество позитивных клеток уменьшалось и ви-
русный АГ переставал обнаруживаться. Однако, если такие негативные в отношении ви-
русного АГ клетки помещали из 37°С в условия 30°С, АГ обнаруживался вновь, и уже через
2 нед 80% клеток линии SP8 оказывались АГ содержащими. Шт. вируса фибромы Шоупа в
культуре перевиваемых клеток почки кролика (линия ДИИ) дифференцируются как цитопа-
тогенные, так и нецитопатогенные. Однако такие штаммы не различались по темпу репро-
дукции, типу бляшек и антигенной характеристике в PH и термолабильности при 56°С. Ин-
фекционную нуклеиновую кислоту, способную индуцировать обычные папилломы, можно
выделить из папиллом 2-х видов: первичной и трансплантируемой Vx7 карцином.
Особенности внутриклеточной репродукции. В 5-10% клеток гранулярного слоя по-
ражённого участка увеличивается синтез ДНК, вирус начинает размножаться, видимо, в яд-
рышке, где образуются частицы диаметром 33 нм. Вскоре в процесс вовлекается остальная
часть ядра, и тогда появляется большое количество зрелых вирусных частиц. Последние
располагаются упорядоченно, но таких правильных кристаллоподобных скоплений, как с
аденовирусами, не бывает. Некоторые препараты могут содержать неполный вирус.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. В естественных условиях вирус передаётся,
вероятно, при контакте здоровых кроликов с больными при наличии травм, а также, по-
видимому, через клещей. В экспериментальных условиях инфекцию могут передавать кома-
ры и клопы. Указывалось на возможное участие в этом процессе нематод. Возможен пере-
нос инфекции от диких кроликов домашними москитами.
Спектр патогенности в естественных условиях. Спектр патогенности в естественных
условиях весьма ограничен. Вирус вызывает поражение кожи у диких американских и до-
машних кроликов. В организме людей, имевших контакт с вирусом папилломы Шоупа, ви-
рус может находиться в дефектной форме в виде генома, лишённого белковой оболочки.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании клинического исследования, биопробы и вирусологической
экспертизы. Показана возможность выявления специфического вирусного АГ в клетках тка-
невой культуры с помощью люминисцентной микроскопии.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие кролики невосприимчивы к повторному заражению. Специфические
средства для профилактики не разработаны.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, Урожай,1993. 2.Сюрин В.Н. и др. Частная вет.
вирус. М, Колос, 1979. З.Сюрин В.Н. и др. Вет. вирусология. М. , Агропромиздат,1991.
4.Сюрин В.Н. и др. Лаб. диагн. вирус, бол. жив. М. , Агропромиздат,1992. 5.Сюрин В.Н. и
др. Мет. лаб. диагн. вир. бол. жив., М, Агропромиздат, 1986.
792
Глава XIX. Family Papovaviridae Паповавирусные инфекции
ПАПИЛЛОМАТОЗ ЛОШАДЕЙ
Cutaneous papilloma of the horse (англ.); Papillome chez les eguides
(фран.); Papillomatose des Pferdes (нем.)
Папилломатоз лошадей - хроническое заболевание лошадей, характери- зующееся
появлением на лицевой части головы и других частях тела многочисленных бородавок
(папиллом). Распространение повсеместное.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Папилломы чаще об-
разуются в ноздрях и на губах. Это небольшие (диаметр до 1 см) возвышения на коже, со-
стоящие из ороговевших масс. Папилломы встречаются у лошадей в возрасте 1-3 лет.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Кук и Олсон впервые описали передачу опухолей фильтратом в 1951г.
Морфология и химический состав. Вирионы икосаэдральной формы, диаметр их 51
нм, симметрия 5:3:2.
Устойчивость. Вирус сохраняется 75 дн при 4°С и 185 дн после замораживания при -
35°С. Не выдерживает нагревания и инактивируется при 55°С за 30 мин.
АГ вариабельность и родство. В литературе описана близкая папилломатозу болезнь -
саркоид лошадей. Он передаётся путём подкожного введения в скарифицированную кожу
фильтрата или надосадочного слоя центрифугата из опухолей. Вирус не классифицирован и,
по-видимому, родствен папилломавирусам КРС, так как материал папиллом КРС может вы-
зывать типичные саркоиды у лошадей и наоборот. Инкубационный период продолжается 10-
170 дн. Саркоид локализуется на так называемом седловом поясе, на истончённых, часто
травмированных участках кожи (области живота, шеи, головы, конечностей). При саркоиде
на коже появляются фибропапилломы с изъязвлением. Иногда возникают поражения боро-
давочного типа. Саркоидом поражаются лошади всех возрастов независимо от пола, поро-
ды, масти и времени года.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Вируссодержащие
клетки обнаружены только в эпидермальном слое. Вирус локализуется в основном ядре и
изредка в ядрышке клеток. Экспериментальная инфекция возможна материалом, взятым от
больных лошадей.
Культивирование. Вирус хорошо растёт на ХАО КЭ.
Особенности внутриклеточной репродукции не изучены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Болезнь легко передаётся лошадям при контакте. Животные других видов не болеют.
ДИАГНОСТИКА
Не разработана. Диагноз на саркоид основан на гистологическом исследовании.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие животные иммунны. Специфическая профилактика не разработана.
ПАПИЛЛОМАТОЗ СОБАК
Orale papillomatosis of dogs (англ.); Papillomatosis buccale du chein
(франц.); Orale Papillomatose der Hunde (нем.).
Болезнь характеризуется поражением слизистых оболочек, особенно у молодых собак.
Распространена повсеместно. Чаще регистрируется в собачьих питомниках.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Бородавки, по внеш-
нему виду иногда напоминающие цветную капусту, обычно появляются вначале на губах, а
затем распространяются на полость рта и глотку. Через 4-21 нед исчезают. Инфицироваться
793
Глава XIX. Family Papovaviridae Паповавирусные инфекции
могут только слизистые оболочки рта и соседние участки кожи. Болезнь может передаваться
молодым собакам; инкубационный период может длиться 4-8 нед.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Передача фильтратами опухолей молодым щенкам доказана ещё в ЗО-х г.
Морфология и химический состав. Вирус папилломатоза собак морфологически схо-
ден с вирусом полиомы и кроличьей папилломы Шоупа.
Устойчивость. Вирус термолабилен: при 58°С разрушается за 30 мин, при 45°С выжи-
вает до 1 ч сохраняется в 50%-ном глицерине и в лиофилизированном виде.
Экспериментальная инфекция. Гомогенаты папиллом от больных собак при втира-
нии в скарифицированную слизистую оболочку здоровых собак вызывают заражение па-
пилломатозом. Заразить собак втиранием в слизистые оболочки (конъюнктиву, вагину), ко-
жу брюшной стенки не удавалось.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Болезнь, видимо, передаётся при контакте.
Спектр патогенности в естественных условиях. Животные других видов невоспри-
имчивы.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие собаки иммунны. С целью профилактики применялось внутримышечное
введение суспензий ткани бородавок с наполнителями.
ПОЛИОМАВИРУСНЫЕ БОЛЕЗНИ
Представители рода Poliomavirus характеризуются следующими свойствами: размер ви-
рионов 44-48 нм. ДНК 2-нитчатая, кольцевая, ее мол.м. (2,4-3,0)-106 Д (вирус полиомы);
(2,3-3,3)106 Д (вирус SV-40) составляет 12% массы вириона, константа седиментации в за-
висимости от конфигурации ДНК составляет 21S для . суперспирали, 16S для циркулярий,
14S для линейной. Суперспиральная и кольцевая формы ДНК инфекционны. ДНК вируса
включается в состав генома клетки-хозяина. Белки составляют 88% массы вириона и пред-
ставлены двумя крупными и 4-5-ю низкомолекулярными полипептидами. Вирусы SV-40 и
полиомы имеют эндонуклеазу. Вирионы голые, формы икосаэдра, мол. м. их 20-25 кД, пла-
вучая плотность 1,28-1,29 г/см3, константа седиментации 229-240S. Выдерживают темпера-
туру 56°С, устойчивы к эфиру, но разрушаются додецилом натрия. Размножаются в ядре.
Описаны различные виды генетического взаимодействия, кроме множественной реактива-
ции. Вызывают инаппарантную инфекцию, при определенных условиях онкогенны.
Вирус полиомы, введенный новорожденным мышатам, вызывает развитие разнообраз-
ных по гистологической структуре опухолей. Он также вызывает опухоли у животных раз-
личных видов при заражении вскоре после рождения. Опухоли, индуцированные вирусом
полиомы, не содержат инфекционного вируса, этим они отличаются от вируса SV40.
ПОЛИОМАТОЗ АВСТРАЛИЙСКИХ ПОПУГАЕВ
Заболевание птенцов австралийских попугаев вызывает ДНК-содержащий вирус, отно-
сящийся к роду Poliomavirus, сем. Papovaviridae. Разработан метод обнаружения вируса с
помощью ПЦР, который позволяет успешно выявлять вирусную ДНК в организме заражен-
ных птиц. С помощью ПЦР полиомавирусы обнаружены у целого ряда птиц.
794
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Глава XX. АДЕНОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА ADENOVIRIDAE
Аденовирусы (от греч. aden, adenos - железа) - группа вирусов, поражающая живот-
ных в т.ч. и птиц. Вирионы аденовирусов представляют собой лишенные суперкапсидной
оболочки изометрические частицы диаметром 70-90 нм. Они состоят из сердцевины, содер-
жащей ДНК и белок, икосаэдрического капсида, построенного из 252 капсомеров, из кото-
рых 240 гексоны и 12 пептоны. Последние расположены на вершинах икосаэдра и состоят
из основания и длинного отростка (нити). Каждый пептон окружен 5-ю гексонами, а каж-
дый гексон - 6-ю соседними капсомерами (Рис. 125). В вирионах аденовирусов содержится
86-88% белка и 12-14% ДНК. Мол.м. вирионов 170 МД, плавучая плотность в CsCl 1,32-
1,35 г/см3, коэффициент седиментации 560S. Аденовирусы стабильны при pH 6-9, устойчи-
вы к растворителям липидов, но быстро инактивируются при 56°С.
Геном аденовирусов представлен единой 2-спиральной молекулой ДНК с мол.м. 20-25
МД (35-36 тыс. п.н.). На концах молекулы ДНК имеются инвертированные повторы длиной
50-200 п.н. Каждый 5-конец молекулы ДНК ковалентно связан с белком (55кД). Доля Г+Ц
составляет 48-61%, у аденовирусов птиц - 54-55%. ДНК обладает инфекционностью. В ви-
рионах их обнаружено 10 полипептидов с мол.м. 5-120 кД. Полипептид гексонов имеет
группе- и типоспецифические АГ детерминанты. Последние индуцируют синтез АТ, ней-
трализующих инфекционную активность вируса.
Нить пентона отвечает за адсорбцию вириона на поверхности клетки и образование АТ,
обладающих ВНА. Полипептиды синтезируются в цитоплазме клеток, тогда как транскрип-
ция и репликация ДНК, сборка вириона осуществляется в ядре. Аденовирусы выходят из
клеток в незначительном количестве. Даже при полном их разрушении в культуральной
жидкости обнаруживают менее 10% синтезированного вируса.
Семейство состоит из 2-х родов: Mastadenovirus, Aviadenovirus.
1 .Род Mastadenovirus (от греч. mastos - молочная железа). В состав рода входят аде-
новирусы млекопитающих: человека (47 серотипов), обезьян (27), КРС (10), свиней (4), овец
(6), коз (1), лошадей (1), собак (2), мышей (2 серотипа). Типичным представителем рода
является аденовирус человека серотипа 2.
2 .Род Aviadenovirus (от лат. avis - птица). В состав рода входят аденовирусы птиц:
кур (12 серотипов), индеек (3), уток (2), фазанов (1 серотип). Типичный представитель рода
- аденовирус кур серотипа 1 (вирус CELO).
АДЕНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Bovine Adenoviral Infections (англ.); Adenovirusbedingte respiratorisch-
enterale Erkrankung des Kalbes, Pneumo-Enteritis (нем.)
Аденовирусная инфекция КРС (АВИ КРС, аденовирусная пневмония телят, аденовирус-
ный пневмоэнтерит) у телят протекает остро и характеризуется поражением органов дыха-
ния, пищеварения и конъюнктивитами. КРС часто является носителем латентных аденови-
русов (АВ) КРС, вызывающих бессимптомные инфекции, патогенез и роль которых в общей
патологии животных остается неясной. АВИ КРС регистрируется во многих странах мира.
795
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь характеризу-
ется поражением органов дыхания, пищеварения (пневмонии, энтериты и пневмоэнтериты)
и реже глаз. Чаще болеют телята в возрасте от 2 нед до 4 мес. Инкубационный период
длится 4-7 дн. Болезнь проявляется повышением температуры тела до 41,5°С, слезотечени-
ем, серозным истечением из носа, кашлем, затрудненным дыханием, тимпанней, коликами,
диареей. Истечения из глаз и носа слизистые, а затем слизисто-гнойные или гнойные.
В период острой инфекции у больных снижается аппетит, а некоторые животные отка-
зываются от корма. Течение болезни зависит от условий содержания, кормления и возраста
телят. Наиболее остро она протекает у молодняка 15-20-дн возраста. При этом наблюдают
общую слабость и понос (фекалии с примесью крови и кусочков слизистой оболочки кишеч-
ника). Телята гибнут через 1-3 дн после появления первых симптомов болезни. Среди телят
раннего возраста смертность достигает 60%, у телят до 10-дн возраста, получивших с моло-
зивом матери АТ, болезнь клинически не проявляется. Однако они могут инфицироваться,
даже если содержат ВНА молозивного происхождения. В течение острой эпизоотии АВ КРС
изолируют от 50-80% животных из проб конъюнктивы, носовой полости, миндалин, фека-
лий. Их также выделяют от телят 1-4-нед возраста с симптомами пневмонии и энтерита. У
животных старшего возраста болезнь часто приобретает хроническое течение. Переболев-
шие телята внешне кажутся здоровыми, но отстают в росте, развитии и долго кашляют.
При вскрытии обнаруживают признаки геморрагического катарального гастроэнтерита,
расстройства циркуляции крови, изменения органов дыхания (уплотнение, ателектаз и эм-
физему легких). При гистологическом исследовании находят гиперплазию и слущивание
бронхиального эпителия; закупорку бронхов некротическими массами; в легких вокруг мел-
ких кровеносных сосудов видно скопление лейкоцитов; в клетках легочной ткани, слизистой
оболочки трахеи и бронхов, эндотелиальных клетках тонких сосудов, в клетках лимфоузлов,
почек, печени, селезенки, сердца, слизистой оболочки желудка и кишечника - внутриядер-
ные включения.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые был обнаружен в 1959 г. в США .
АВ КРС различаются по ряду свойств, в т.ч. и по морфологии включений, что послужи-
ло основанием для разделения их на 2 подгруппы (19). В клетках, инфицированных вируса-
ми 1-й подгруппы (типы 1, 2 и 3), выявляют полиморфные базофильные образования
(мелкозернистые, гранулярные), превращающиеся в одно грубое ядерное базофильное
включение. При флюорохромировании акридином оранжевым выявляли яркое зеленое све-
чение. Вирусы 2-й подгруппы (типы 4, 5, 6, 7 и 8) индуцируют образование множественных
эозинофильных включений правильной округлой формы, которые увеличиваются в объеме,
количество их снижается до 1-3. Только некоторые из них на поздних стадиях становятся
слабо базофильными. На 5-е сут после заражения многие из инфицированных клеток деге-
нерируют, но даже в таких клетках включения часто сохраняются. При флюорохромирова-
нии акридином оранжевым включения флюоресцируют слабо, но они более четко видны как
округлые светло-зеленые образования. Подтверждено четкое морфологическое различие
включений, образующихся при репродукции 1-й и 2-й подгрупп АВ КРС. Метод отличается
большой чувствительностью, простотой и быстротой приготовления препаратов (9,10).
Устойчивость. АВ КРС устойчивы к физико-химическим воздействиям, трипсину,
эфиру, хлороформу, сапонину, дезоксихолату натрия и 50%-ному этиловому спирту. Инак-
тивируют вирус абсолютный этиловый спирт и формальдегид в конечной концентрации 0,1-
0,3%. Обработка хлороформом повышает его инфекционный титр на 0,5 1g. АВ инактиви-
руются при температуре 56°С за 30-60 мин. Прогревание при 56°С приводило к полной
инактивации эталонного шт. Fukuroi через 30 мин, а изолятов - через 2 ч. В условиях 70°С
шт. Fukuroi полностью инактивировался через 10 мин, а полевые изоляты - через 30 мин.
При 4° С все изучаемые вирусы сохраняли инфекционную активность в течение 90 дн. При
796
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
24°С в течение 2 мес титр вируса постепенно снижался на 1 1g. Таким образом, при 56 и
70°С была установлена большая терморезистентность свежевыделенных изолятов по срав-
нению с эталонным штаммом. Эти данные учитывают при изучении кинетики инактивации
вирусов и условий хранения вируссодержащего сырья в технологическом процессе изготов-
ления (9). АВ КРС устойчивы к изменению pH среды (3-9) в течение 3 ч при комнатной
температуре, полностью инактивируются УФ лучами за 30-60 мин. Они длительно хранятся
при -30°С, при 4°С - более 6 мес, при комнатной температуре - 1-4 мес н при 36°С - 15-60
дн; устойчивы к повторному замораживанию и оттаиванию, хорошо сохраняются при pH 6-
9 и переносят сушку.
АГ структура. При репродукции АВ, помимо зрелых форм в клетках образуются не-
инфекционные растворимые АГ, которые накапливаются в больших концентрациях при от-
носительно малом содержании инфекционного вируса. Различают АГ 3-х видов: А, В, С.
АГ А группоспецифичен, при иммунизации он стимулирует образование группоспецифиче-
ских КСА, ПА н АТ, реагирующих в РИГА. Кроме того, стимулирует образование ВНА
против гомологичного вируса. АГ В - белковый компонент, токсичный фактор, ответстве-
нен за ранний ЦПЭ. АГ С типоспецифичен, при иммунизации индуцирует выработку только
тнпоспецифических АТ, выявляемых в PH и РИГА.
Указанные АГ различаются не только по АГ специфичности, но и по локализации в ви-
рионе. АГ А связан с гексонами, В - с пентонами и С - с филаментозными структурами ви-
русного капсида. В культуре клеток, инфицированной онкогенными АВ, выявляется Т
(трансплантационный) АГ.
Вирусы 1-й подгруппы содержат в гексоне родоспецифическую детерминанту альфа,
общую для АВ млекопитающих, а у АВ 2-й подгруппы такой детерминанты ранее не обна-
руживали.
АГ вариабельность и родство. Шт. АВ КРС подтипов 1, 2 и 3 имеют общий КС АГ.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится только на телятах 15-30-дн возраста.
У больных животных развиваются пневмоэнтериты при явлениях общей слабости, леталь-
ность может достигать 60%. У животных старшего возраста болезнь протекает хронически.
Изоляты, выделенные от больных телят, поражают респираторно-кишечный тракт. При
сравнительном изучении серотипов 1, 2 н 3 АВ доказано, что наиболее патогенен для телят
тип 3 (1,11).
Культивирование. Культуры клеток - единственная биологическая система для репро-
дукции АВ КРС. Наиболее чувствительны ПЭК, ТБ. Реже используют ЛЭК и ПТ. На осно-
вании различий в культуральных свойствах отдельных серотипов КРС и характера вызы-
ваемых ими цитоморфологических изменений их делят на 2 подгруппы. 1-я подгруппа
включает шт., относящиеся к серотипам 1, 2 и 3, которые размножаются на ПЭК, ЛЭК и ТБ,
а иногда на гетерологических культурах почки других животных. Представители этой под-
группы обычно индуцируют одно ядерное включение неправильной формы. В процессе раз-
множения их развиваются характерные ЦПИ, время наступления которых зависит от вида
клеток, штамма вируса и его заражающей дозы.
2-я подгруппа включает шт., относящиеся к серотипам 4, 5 и 6, а также шт. Нагано, Fu-
kuroi н Bil. Эти штаммы хорошо репродуцируются в культуре клеток ЛЭК, медленно - в
культуре клеток ТБ (ЦПИ проявляются лишь на 5-7-е сут после заражения) и совсем не раз-
множаются в культуре клеток ПЭК. Представители этой подгруппы продуцируют множест-
венные внутриядерные включения правильной округлой формы.
В последние годы предложена новая биологическая система для культивирования АВ
КРС - перевиваемая линия клеток почки теленка (Т1). Установлено, что из перевиваемых
клеток только клетки Т1 оказались чувствительны к АВ как 1-й, так и 2-й подгрупп. Бычьи
шт. АВ в культуре клеток под агаровым покрытием при температуре 37°С через 5-7 дн об-
797
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
разуют бляшки диаметром не более 0,5 мм; при введении в агаровое покрытие MgCl2 про-
исходит стимуляция образования бляшек.
ГА свойства. ГА-активность штаммов АВ КРС неодинакова. Она зависит от вида и
концентрации эритроцитов, температуры и pH среды. Шт. WBR-50 и Bovine-Ю (серотип!)
АГ эритроциты белых крыс в титрах 1:32 - 1:256, но не АГ эритроциты белых мышей. Шт.
Bovine-19 (серотип 2) АГ эритроциты белых крыс и эритроциты мышей в титре 1:2. Более
четкие результаты ГА отмечены при температуре 4°С и использовании 1,5%-ной взвеси
эритроцитов. Шт. серотипов 3, 4 и 5, ранее считавшиеся негемагглютинируюшими, после
концентрации приобретают это свойство в отношении эритроцитов белых крыс. Шт. 671130
(серотип 6) г негемагглютинирующий. АВ КРС обычно не АГ эритроциты морских свинок,
кур, овец и человека, однако японские шт. Нагано и Fukuroi АГ эритроциты белых крыс,
мышей, овец, коз, морских свинок, коров и хомячков при 4°С и не реагируют с эритроцита-
ми обезьян, лошадей, кур и гусей. Шт. WBR-1 не агглютинирует эритроциты ни одного из
указанных видов животных. Спектр ГА активности многих шт. АВ КРС, выделенных в раз-
личных странах мира, ещё не изучен.
ГАд свойства не установлены.
Онкогенные свойства. При введении грызунам АВ вызывают развитие опухолей, но
из опухолей, в которых обнаруживаются вирусные АГ, выделить вирус не удавалось. АВ
человека, разделенные по биологическим подгруппам, обладают разной онкогенной способ-
ностью. Онкогенные свойства обнаружены и у некоторых шт. бычьих АВ (у шт. WBR-1 для
новорожденных хомячков). Опухоли, индуцируемые у хомячков бычьим АВ типа 3, по он-
кологическим характеристикам были сходны со спонтанными новообразованиями: имели
низкую степень дифференцировки, высокую скорость клеточного роста, пониженную адге-
зивность и высокую туморогенность. Бычий АВ типа 3 - единственный ДНК- содержащий
вирус КРС, индуцирующий злокачественные неоплазии у лабораторных животных.
Интерфероногенные свойства. У АВ КРС не изучены;'Однако все 12 испытанных се-
ротипов АВ человека индуцируют образование интерферона в культуре фибробластов КЭ.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Основной источник АВИ - больные животные, выделяющие вирус во внешнюю среду,
главным образом с истечением из носа и фекалиями. Наблюдается латентное вирусоноси-
тельство, о чем свидетельствуют факты выделения вируса из ткани почек, тестикул и крови
клинически здоровых животных. Заражаются животные воздушно-капельным и алиментар-
ным путями, а также через конъюнктиву. Передача инфекции возможна через корма, под-
стилку, навоз, загрязненные выделениями больных животных.
ДИАГНОСТИКА
Поставить диагноз на АВ по эпизоотологическим данным, клиническим и патологоана-
томическим признакам нельзя, так как сходную патологию могут вызывать вирусы других
таксономических групп: парагриппа-3, диареи, неориккетсии и др. Поэтому при постановке
диагноза решающее значение имеют лабораторные исследования (13).
Лабораторная диагностика АВИ КРС заключается в следующем, обнаружение АГ в па-
тологическом материале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных, в
ИФ и РСК, выделение возбудителя в культуре клеток ТБ, ПЭК или ЛЭК и его групповая
идентификация в серологических реакциях: (РСК, РДП и РИФ); выявление АТ в сыворотке
крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в серологических
реакциях: (РСК, РИГА, РДП и ELISA).
Лабораторную диагностику АВИ проводят с использованием соответствующего набора
диагностикумов, выпускаемого биологической промышленностью, и параллельно с исследо-
ванием материала на ПГ-3, PC-инфекцию, ИРТ и ВД-БС. Показана возможность (14) тести-
рования АВИ с помощью ДНК-зонда. Это, по существу, экспресс-метод лабораторной диаг-
798
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
ностики АВИ, который можно с успехом применять при массовом обследовании телят в хо-
зяйствах промышленного типа. Наиболее четкую картину гибридизации наблюдали на 5-7-е
сут в пробах смывов из носа. Это соответствует динамике накопления вируса в организме
зараженных животных.
Серологическая идентификация. Идентификацию выделенных шт. вируса проводят в
ИФ, РСК и РДП. Ввиду того, что КС и преципнгирующий АГ вирусов 1-й подгруппы (1, 2 и
3) отличны от АГ 2-й подгруппы (4, 5, 6 и др.), РИФ, РСК и РДП ставят с 2-мя антисыво-
ротками, соответствующим 2 подгруппам. Препараты считаются положительными при на-
личии флюоресценции в 10% клеток, заражённых патологическим материалом, при ее от-
сутствии в контрольной (незараженной) культуре клеток. Срок выявления АВ в культуре
клеток зависит от заражающей дозы и колеблется в пределах 20-96 ч. Показана возмож-
ность применения сыворотки к гексону 1-го типа АВ человека для обнаружения АВ КРС.
Близкое АГ родство АВ 1-й подгруппы КРС и человека может служить основанием для соз-
дания на основе гексона единого диагностикума для ИФ-выявления данных АВ (1,10).
Исследование в данном методе антигексоновых сывороток к АВ позволяет повысить его
эффективность в 3 раза в сравнении с использованием антисыворотки к цельному вирусу.
НИФ. Для экспресс-диагностики АВИ КРС в клинических образцах разработан вариант
непрямой ИФ клеточных культур на покровных стеклах, зараженных АВ, с помощью мо-
нАТ с групповой специфичностью гексонов всех АВ млекопитающих.
РСК. С ее помощью можно успешно обнаруживать и идентифицировать выделенные
полевые шт. АВ. РСК ставят по общепринятой методике в макро- или микровариантах. В
качестве испытуемого АГ используют органы и ткани больных животных, а также культу-
ральный вирус, полученный после заражения культуры клеток. Разработаны методики при-
готовления АГ и схемы иммунизации для получения (1:1280) сывороток
РДП. Ставят в чашках Петри в слое застывшего агара. Как и РСК, её используют для
идентификации вновь выделенных шт. АВ с гипериммунными сыворотками кроликов
(сыворотки морских свинок для этой цели не применяют). Шт. серотипов 1-й подгруппы
(Bovine-10, Bovine-19, WBR-1) в РДП прекрасно реагируют между собой, тогда как шт. 2-ой
подгруппы (ТНТ/62, В4/65 и 671/130) проявляют низкую активность в РДП даже с гомоло-
гичными сыворотками. Однако, если использовать концентрированные АГ этих шт., с по-
мощью РДП удается четко выявить перекрестную АГ- связь между ними (4). В качестве ис-
пытуемого АГ используют культуральную вируссодержащую жидкость, которую необходи-
мо концентрировать (1- 8).
РТНГА. Рекомендуют для идентификации выделенного в культуре клеток вируса. При
положительных реакциях РСК и РДП устанавливают принадлежность АВ к 1-й или 2-й под-
группе АВ КРС и проводят его типирование с типоспецифическими сыворотками к АВ КРС.
Типирование бычьих АВ осуществляют в научно-исследовательских учреждениях, имею-
щих типоспецифические сыворотки и вирусы для PH.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Необходимо иметь в виду, что
при положительном результате выделения и идентификации АВИ для окончательной поста-
новки диагноза необходимо исследовать парные сыворотки больного животного с выделен-
ным вирусом. Если при помощи РИГА и РСК выявлено 4-кратное и более повышение тнтра
АТ к выделенному вирусу во 2-й сыворотке больного по сравнению с 1-й, ставят диагноз. В
реакциях используют парные пробы сывороток, взятые в первые 2-3 сут болезни и через 14-
30 дн. У заболевших животных вначале выявляются АТ в РИГА, затем - в PH и РТГА и уже
через 1-1,5 нед - в РДП и РСК. КС и ПА сохраняются у животных-реконвалесцентов до 4
мес. У экспериментально заражённых телят ВНА обнаруживают на 5-й дн после заражения
в титре 2,2 logs и на 10-й дн - в титре 4-4,3 log?.
799
Гпявя УХ Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
ELISA. Установлена в 100 раз большая его чувствительность для выявления АТ к гек-
соновому АГ АВ по сравнению с РСК Были получены гипериммунные, высокоактивные и
специфические сыворотки против гексонов АВ 1-й подгруппы (BAV1 и BAV3) и 2-й под-
группы (BAV7), которые были рекомендованы при разработке иммуноферментного набора
для серодиагностики АВИ КРС (13). Для диагностики АВИ биопромышлеиность выпускает
2 диагностических набора для выявления и идентификации вируса и АТ методами ИФ,
РСК, РДП и РИГА (3).
Дифференциальная диагностика. Клинико-эпизоотологическая диагностика АВИ за-
труднена из-за сходства её с ПГ-3, ВД-БС, ИРТ, PC-инфекцией, хламидиозом и другими бо-
лезнями, поражающими респираторно-кишечный тракт животных. Кроме того АВИ часто
протекает в ассоциации с вышеуказанными болезнями. Поэтому только лабораторные ис-
следования, проводимые с использованием диагностических наборов к указанным болезням,
помогут правильно поставить диагноз.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Достижения в иммунопрофилактике АВИ более скромные, чем при других вирусных
болезнях. Это, очевидно, связано с множеством типов возбудителя и латентным течением
самой инфекции у взрослых животных. Поиск специфических средств защиты животных от
АВИ ведется в 2-х направлениях: создание пассивной защиты с помощью иммунных сыво-
роток и применение живых или инактивированных вакцин. Так, применение 2- и 3 валент-
ных специфических сывороток снижало заболеваемость в 4-5 раз. Однако имеются сообще-
ния о том, что пассивная иммунизация гипериммунными сыворотками в практическом от-
ношении нецелесообразна и как средство массовой профилактики тяжела. Помимо того,
пассивная защита ненадежна, поскольку животные с пассивными АТ могут быть инфициро-
ваны патогенными вирусами.
Инактивированные вакцины. В РФ и странах СНГ применяются инактивированные
вакцины из штаммов 2-х серологических групп АВ, а также бивалентная вакцина, содер-
жащая АВ КРС (2-х групп) и возбудитель пастереллеза КРС. В качестве инактиванта ис-
пользуют димерэтилеиимин (ДЭИ) и адъювант аэросил (4, 6, 11,15, 16). 2-кратная привив-
ка моновакциной коров на 7-8-м мес стельности стимулирует к моменту отела образование
ВНА в крови и молозиве в высоком титре - 9,5 и 10,0 logs соответственно. Вакцина зареко-
мендовала себя устойчивым в хранении и надёжным иммуногенным препаратом (2). Ново-
рождённые телята приобретали устойчивость к АВИ через молозиво иммунных матерей,
срок персистенции колостральных АТ у телят составлял 73-78 дн. Колостральные АТ инги-
бировали активную реакцию организма телят на первую вакцинацию в период с 10-15 до
31-36 дн, одиако после повторной вакцинации через 14 дн титр гуморальных АТ возрастал
(до 6,31-6,65 log2 в PH, 7,6-7,75 log2 в РИГА). АТ, имевшиеся в крови перед вакцинацией,
не влияли на интенсивность вторичного иммунного ответа. Результаты исследований пока-
зали, что первая прививка телят вакциной на фоне колострального иммунитета ведет к не-
которому снижению уровня гуморальных АТ, однако повторное введение препарата стиму-
лирует повышение их титра. Поствакцинальные АТ у вакцинированных телят сохраняются
на высоком уровне (4,75-5,69 loga в PH; 6,0-8,25 loga в РИГА) до 122-127 дн (срок наблюде-
ния), в то время как пассивные - до 73-78 дн (1,13,17,18,20).
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Через 2 нед после вакци-
нации у коров отмечали повышение титров АТ в PH до 4,3 loga, в РИГА до 6,4 log>. 2-
кратная вакцинация животных на 7-8 мес стельности вызывала ко дню отела образование
высокого титра АТ, который в PH составлял 9,55 loga и в РИГА - 11,9 loga. В молозиве он
соответственно был равен 10,7 и 12,3 loga. После приема молозива от вакцинированных ко-
ров АТ у телят обнаруживали в высоком титре, причем на 3-и сут жизни после приема мо-
лозива они достигали максимального значения - 5,25 log2 в PH и 7,35 log, в РИГА. Через 21
800
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
дн после прививки неиммунных телят титр АТ у них был равен 2,73-4,28 logz в PH; 4,3-5,7
log2 в РИГА. Уровень АТ у телят, вакцинированных в возрасте 45-50 дн, был на 1-1,5 log2
выше по сравнению с телятами, привитыми в возрасте 10-15 дн. ВНА у вакцинированных
телят обнаруживали с 5-7-го дн, а в РИГА с 3-го дн. Что касается длительности циркуляции
поствакцинальных АТ, то они у стельных коров, привитых инактивированной вакциной, за
1-2 мес до отела выявлялись в высоком титре (7,6-8 log^ в PH и 8,95-9 1о& в РИГА) и сохра-
нялись в течение 6 мес после отела (срок наблюдения). Уровень АТ в молозиве вакциниро-
ванных коров снижался довольно быстро. Так, в день отела титр их в молозиве составлял
10,08 и 12,3 log2 соответственно, но через 2-е сут он снизился в 2 раза и спустя 7 дн был ра-
вен в PH 2,18-2,33 log2 и в РИГА 4,55-4,65 1о&. Однако снижение уровня колостральных АТ
происходило постепенно и зависело от первоначального титра. Пассивные АТ у телят выяв-
ляли до 78-дн возраста в PH в тигре до 2,5 1о&, в РИГА до 5 loga, а в 127-дн возрасте их
выявляли только в РИГА в титре 4 log2 (17). При 2-кратной вакцинации телят инактивиро-
ванным препаратом максимальный титр АТ на 14-й дн достигал в PH 8,4-9,3 1о& и в РИГА
9,5-10,4 log2 и сохранялся на высоком уровне 2 нед с тенденцией к снижению. Через 6 нед
он составлял 7,4 и 8 Iog2 соответственно, а через 13 нед снизился на 2-3 log2.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
1.Белоусова Р.В. Докт. дисс, ВИЭВ, 1990. 2.Белоусова Р.В. и др. Авт. св. №44314999/30-
137080715 от 24.11.88 г. З.Георгис М.М. Канд. дисс. MBA, 1981. 4.Гуненков В.В. и др. Ве-
теринария, 1982, 4 :65. 5.Кругляк В.А. и др. Докл. ВАСХНИЛ, 1987, 11 :41. б.Литвинов
О.Б. и др. Пробл. вет. иммун. Тр. ВИЭВ, 1983 :57. 7.Мирошниченко О.И. и др. Вестник с-х
науки, 1987, 9 :91. 8.Михайлова Э.Г. и др. Микробиол. журнал. Киев, 1988 :90. 9.Носач Л.Н.
и др. Тез. докл. VI съезда Укр. микроб, общества, Донецк, 1984, 2 :212. Ю.Носач Л.Н. и др.
Цитология и генетика, 1986, 20, 1 :51. И.Сюрин В.Н. и др. Авт. св. №1387406 от 8.12.87,
12.Тарасишин Л.А. и др. Вопросы вирусол., 1986, 5:620. ^Третьякова И.В. и др. Ве-
тер.,1989, 8 :28. 14.Сергеев В.Д. Вир. вакцины. Киев, Урожай, 1993. 15.Сюрин В.Н. и др.
Методы лаб. диагн. вир. бол. жив. М, Агропромиздат, 1986 :350. 16.Сюрин В.Н. и др.
Части, вет. вирусол., М, Колос, 1979 ЛОЗ. 17.Фомина Н.В. Аденовир. инф. жив., М, Колос,
1995 ЛОЗ. 18.AdvirB. et.al. Veter, Microbiol, 1979, 3-4 :241. 19. Bartha A. etal. Microbiol and
inf Dis, 1983, 6 Л89. 2O.RiviereY. Adenoviruses: Genes. Proteins and Expression, Berlin, 1987,
68:525.
АДЕНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ЛОШАДЕЙ
Equine adenovirus infection (англ. )
Аденовирусная инфекция лошадей - острая контагиозная болезнь жеребят, проявляю-
щаяся гипертермией, конъюнктивитом, пневмонией и часто гибелью иммунодефицитных
жеребят арабской породы. У взрослых лошадей болезнь протекает легко. M.Studdert и др.
(10) провел обширный серо-эпизоотический анализ, из которого стало ясно, что аденовирус-
ная инфекция может широко распространяться среди взрослых лошадей всех пород.
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. А.Е.McChesney и др.
(4) сообщили о наличии в США у 31 жеребенка до 3-мес возраста (29 арабской и 2 неараб-
ской породы) аденовирусной инфекции. У жеребят развивалась болезнь, характеризующая-
ся пневмонией, лимфопенией и перемежающейся лихорадкой; 28 арабских жеребят пали, 1
арабский и 2 неарабских жеребенка выздоровели. Позднее было показано, что подобная бо-
лезнь жеребят распространена в 22 стадах 11 штатов США. В большинстве стад инфициро-
ванные жеребята до этого находились в контакте с молодыми жеребятами и взрослыми ло-
51 Зак. № 171
801
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
шадьми. Однако болезнь развивалась лишь в 2-х стадах у жеребят в возрасте до 1 г. Клини-
ческие симптомы заболевания - депрессия, быстрая утомляемость и слабость, глубокий ка-
шель и истечения из глаз и носа, повышение температуры тела. Прослушивались бронхи-
альные, легочные и сердечные шумы, влажные бронхиальные хрипы, усиленное дыхание.
Приблизительно у 30% пораженных жеребят развивались поверхностные язвочки на слизи-
стой губ. Примерно у 25% наблюдали диарею. При всех летальных случаях обнаруживали
лимфопению. Это указывает на то, что смерть при аденовирусной инфекции лошадей обу-
словлена состоянием лимфоидной системы.
Слизистая оболочка носовых ходов, трахеи и бронхов была утолщена, передние и цен-
тральные части легкого уплотнены, ателектичны. Стенки бронхов и бронхиол были утолще-
ны, а их просветы заполнены экссудатом. Эпителиальные клетки респираторного пути раз-
бухшие, гиперплазированы, некротизированы и имели внутриядерные включения. Лимфо-
идные ткани гиперплазированы. Типичные аденовирусные включения находят в отдельных
эпителиальных клетках кишечника.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирус впервые выделил J.D.Todd в 1969 г. (11) в Пенсильвании (США).
Морфология и химический состав. Под ЭМ видно, что очищенные вирионы имеют
типичную аденовирусную морфологическую характеристику, проекции фибера в длину 50
нм на каждой верхушке икосаэдра, составляющего в диаметре 80 нм. Экстрагированная ви-
русная ДНК, обнаруженная в виде двойной спирали, имеет мол.м. (21-22) 106. Все 4 изолята
имели плавучую плотность в CsCl 1,346±0,02 г/см3. Под действием додецилсульфата натрия
все 4 изолята при электрофорезе в полиакриламидном геле имели один и тот же состав по-
липептидов (мол.м. от 9,5 до 100 кД), которые по электрофоретической подвижности были
легко отличимы от полипептидов аденовируса человека.
Устойчивость. В деталях не изучена. Сообщалось об устойчивости к органическим рас-
творителям, трипсину и pH 3.
АГ структура. Не изучена.
АГ активность. У переболевших лошадей в сыворотке крови выявляют ВНА. Жеребя-
та, лишенные молозива, как и жеребята, получавшие его, имели однотипные показатели сы-
вороточных АТ через 3 нед после их заражения вирусом. Однако жеребята, получавшие мо-
лозиво, особенно арабские, имели более высокий титр специфических АТ, чем жеребята,
лишенные молозива. Через 11 дн после заражения вирусом неарабских жеребят из их лег-
ких выделяли возбудитель.
АГ вариабельность и родство. После первого сообщения о лошадиных аденовирусах,
количество выделенных шт. вируса быстро увеличилось, причем при изучении их как в PH,
так и РЗГА была показана АГ идентичность; все они были отнесены к одному серотипу (2,
7, 9).
ГА свойства. Для РЗГА лучше применять эритроциты крысы или человека группы 0,
хотя эритроциты лошади, овец, кроликов и КРС также пригодны, но АГ в более низком тит-
ре, эритроциты кур не АГ.
Культивирование. Вирус лучше всего репродуцируется в культуре клеток почки лоша-
ди, в культуре клеток бычьей почки и в линии клеток BSC-1, а также в культуре клеток
почки зеленой мартышки (AGMK) (1,2, 8).
Показано, что относительно небольшая часть жеребят арабской породы обладает повы-
шенной чувствительностью к аденовирусной инфекции и гибнет от тяжелой летальной
пневмонии. Развивается лимфопения, которая переходит в умеренную у жеребят-рекон-
валесцентов. Так, Т.С. McGuire и др. (6), обследовали 30 больных и 78 клинически нор-
мальных арабских жеребят на предмет комбинированного (В- и Т-лимфоцитов) иммуноде-
фицита. Диагноз основывался на подсчете лимфоцитов н содержании сывороточных имму-
802
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
ноглобулинов (Ig) или на микроскопическом исследовании лимфоидных органов. 10 жере-
бят из 30 больных и 2 жеребейка из 78 клинически нормальных имели комбинированный
иммунодефицит. У 2-х пораженных жеребят (из 78) впоследствии развивалась смертельная
пневмония. Подсчет лимфоцитов проводили у 9 из 12 иммунодефицитных жеребят; значе-
ния были в пределах 0 до 936 кл/см3, в то время, как нормальное значение составляло 4119
кл/см3, со стандартными отклонениями 1649 кл/см3. IgM не были обнаружены ни в одной нз
9 имеющихся сывороток от 12 пораженных жеребят, a IgA отсутствовали в 3 из 9 сыворо-
ток. Во всех 11 селезенках при микроскопии отсутствовали селезеночные зародышевые цен-
тры и периферийные лимфоцитиые оболочки. У всех отмечалась тимусная гипоплазия, 9
жеребят с комбинированным иммунодефицитом были чувствительны к аденовирусам и по-
гибли от них и различных сопутствующих инфекций (6).
Экспериментальная инфекция. При экспериментальной инфекции у жеребят, вы-
званной АВЛ, пытались установить, какие факторы обусловливают тяжесть поражения (4).
В итоге было показано, что жеребята различных пород (арабские и неарабские), разного
возраста (неонатальные или 2-4-мес), с колостральным иммунитетом и без него по-разному
реагировали на экспериментальное заражение. Из 7 арабских жеребят 6 реагировали иа ин-
фицирование так же, как все 18 неарабских жеребят. У всех жеребят, как лишенных моло-
зива, так и получавших его, развивались сходные клинические симптомы и посмертные из-
менения. Однако у жеребят, лишенных молозива, клинически болезнь проявлялась более
ярко, наблюдались обширные посмертные поражения. У зараженных жеребят развивалась
перемежающаяся лихорадка, выделения из носа н глаз, на 5-7 дн появлялся кашель. На 7-й
ди после заражения развивались обширные патологические поражения в виде пульмонарно-
го ателектаза, интерстициальной пневмонии и серозного воспаления во многих лимфоузлах.
Отмечали их отечность, гиперплазию. Внутриядерные включения постоянно обнаруживали
в эпителиальных клетках респираторной системы, иногда конъюнктивы, глотки, слюнных
желез, мочевого тракта и поджелудочной железы. У жеребят, зараженных в возрасте 2-4
мес, развивались слабые симптомы болезни или они отсутствовали. При вскрытии таких
жеребят после убоя, как правило, ие отмечалось поражений. У одного жеребенка арабской
породы при вскрытии на 9-й дн после заражения было обнаружено сильное поражение лег-
ких с рассеянными пурпурно-коричневыми дольками ателектаза и бронхопневмонией. К
тому же поражения легких, лимфоузлов, селезенки и тимуса были очень слабые и гистоло-
гически установлен недостаток лимфоцитов и плазматических клеток. Таким образом, было
показано, что почти все жеребята различных пород (кроме арабской) переносят эксперимен-
тальную аденовирусную инфекцию с развитием слабых респираторных симптомов. Повы-
шенная чувствительность к ией у жеребят арабской породы объясняется врожденным дефек-
том Т- и В-лимфоцитарной системы, генетически контролируемой геном, ответственным за
аутосомный рецессивный иммунный ответ (3,5,12,13).
ДИАГНОСТИКА
Проводится как и при аденовирусной инфекции КРС, овец, свиней.
СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Не разработана.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
l.Adeyefa .D.O. et.al. Rev elev et Vet, 1992, 45, 1 :21. 2.England Y.I. et.al. Am J Vet Res,1973,
34 :1587. 3,Fatemie-Nainie S. et.al. Am J Vet Res, 1979, 40 :521. 4.McChesney A.E. et.al. Am J
Vet Res,1974, 35 :1015. 5. McChesney A.E. et.al. J Fm Vet Med Assoc, 1973, 162 :545.
6.McGuire T.C. etal. Inf Imm,1973, 8 :272. 7.McGuie T.C. etal. J A V M A, 1974, 164, 1 :70.
S.Moorthy A.R.S. etal. Zbl Vet Med Reihe B, 1978, 25, 6 :469. 9,Shahrabadi M.S. et.al. Can J
Microb, 1977, 23 :497. lO.Studdert N.J. etal. Am J Vet Res, 1974, 35 :693. ll.Todd J.D. J Am
51*
803
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Vet Med Assoc, 1969, 155 :387. ll.Thompson D.B. etal. Aust Vet J, 1975, 51 :109. 13.Фомина
H.B. Аденовир. инф. жив. M., 1996 :196.
АДЕНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
ОБЕЗЬЯН И ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
После первого сообщения об изоляции АВ обезьян в 1956 г. (3) большое число их было
выделено от этого вида животных в Азии, Африке и Новом Свете. Доказано присутствие в
АВ обезьян АГ, родственного одному из АВ человека. Многие изоляты от обезьян последо-
вательно обозначены как SV, SA, М или Р. Их сравнивали между собой и с АВ человека в
перекрестной PH. Однако 20 обезьяньих серотипов обозначены как АВ от SAV-1 (SV1) до
SAV-20 (V340). Прототипные шт. АВ обезьян от SAV-1 (SV1) до SAV-15 (SV-38) были вы-
делены от азиатских макак; аденовирусы от SAV-16 (SA7) до SAV-18 (SA18) и SAV-20
(V340) - от африканских зеленых мартышек и АВ SAV-19 (АА153) - от африканских бабуи-
нов. Недавно в перекрестной PH было показано, что эти серотипы отличаются от 35 серо-
типов человека.
Подобно многим АВ человека, АВ обезьян хорошо размножаются в клетках макаки-
резус или в клетках AGMK. Однако некоторые АВ обезьян, также как SAV-1 (SV1) и SAV-2
(SV11), размножаются в клетках человечьего происхождения, в то время как другие в этой
системе вообще не размножаются (1). 16 серотипов АВ обезьян были классифицированы в
РГА в 4 подгруппы. Данную реакцию ставили с эритроцитами макаки-резус, крысы или
морской свинки при разных температурах.
Обезьяноподобные аденовирусы
Классификация АВ шимпанзе и других АВ обезьян в специальной литературе рассмат-
ривалась отдельно, но все эти вирусы отнесены к обезьяноподобным АВ. Шт. SqM-1, выде-
ленный от беличьих обезьян, не включен в список обезьяноподобных АВ, хотя этот вирус в
основном превалирует у обезьян Нового Света. Подавляющее большинство серотипов их
было изолировано от явно здоровых обезьян и приматов, также как и другие АВ животных.
Выделение АВ от больных обезьян и приматов не подтверждает их экологической роли в
заболевании обезьян. Лишь в отдельных сообщениях указывалось, что возрастание титра
АТ в течение болезни и появление специфических ЦПИ в виде обширных посмертных по-
ражений (при отсутствии других патогенных микроорганизмов) может служить основанием
того, что причиной заболевания явились АВ.
Сведения об этиологической и патогенетической роли обезьяноподобных АВ приводятся
ниже. Так, обезьяноподобные вирусы SAV-20(V340) были последовательно выделены от
новорожденных павианов, пораженных пневмоэнтеритами, SAV-3 (SV15) или SAV-10
(SV30) были выделены от различных макак, пораженных острым заболеванием, сопровож-
дающимся пятнисто-пузырчатой сыпью на коже, конъюнктивитами, лицевой эритемой. Ви-
рус SAV-9 (SV31) выделен от макаки-резус, которая погибла в результате острого некроти-
ческого панкреатита, a SAV-2 (SV11) - от 3 из 4 интактных макак, живущих вместе в изоля-
торе и пораженных во время вспышки пневмонии. Имеется большое число сообщений отно-
сительно эпизоотологии и клинической картины болезни обезьян, экспериментально зара-
женных обезьяноподобными АВ. В результате интраназального заражения 6-и обезьян
(африканских верветок) вирусом SAV-4 (SV17) у них развивалось заболевание верхнего
респираторного тракта, сопровождающееся симптомами покраснения и опухания слизистой
804
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
оболочки гортани и тонзиллита, а с 3-го по 5-й дн заражения от них был выделен вирус из
глоточных и носовых смывов и значительно возрос титр ВНА. В подобных опытах также
наблюдали слабую форму нефибрильного конъюнктивита в группе из 6 интактных макак,
однако из конъюнктивальных смывов больных животных был выделен вирус SAV-3 (SV15).
При инокуляции в конъюнктиву 8-ми обезьян прототипного шт. SAV-3 (SV15) у них разви-
вались поражения конъюнктивы, сходные с поражениями при естественных вспышках бо-
лезни. После инокуляции у всех обезьян возрастал титр АТ и был выделен вирус.
Приведенные два сообщения по экспериментальной инфекции показывают, что адено-
подобные вирусы являются этиологическими агентами, вызывающими экспериментальное
заболевание. Однако недостаточное число посмертных патологоанатомических и вирусоло-
гических исследований различных органов больных животных нуждается в подтверждении.
Такие приматы, как гориллы, орангутанги и гиббоны, в отличие от шимпанзе, обычно не
имели АВАТ. Однако эти данные получены на приматах, живущих в неволе, поэтому вряд
ли могут отразить реальную ситуацию среди подобных животных в естественных условиях
(1). Естественно протекающую перемежающуюся виремию, вызванную АВ шимпанзе Рап-
11, наблюдали у многих шимпанзе на протяжении года. При этом у них было также обна-
ружено в моче небольшое количество ВНА классов IgG и IgA, что позволило предположить,
что эти вирусы локально продуцируются в мочеполовой системе.
Аденовирусная инфекция шимпанзе
АВ шимпанзе обладают некоторыми свойствами, отличными от свойств других обезья-
ноподобных АВ. После первого сообщения об изоляции АВ от шимпанзе в 1958 г. было оп-
ределено еще 7 серотипов АВ шимпанзе, которые давали перекрестную PH между первым и
другими 6-ю типами, а также между последними и 33 серотипами АВ человека или 22 серо-
типами АВ обезьян. 7 серотипов, выделенных от шимпанзе, включают шт. Cl, Рал 5-7 и Рал
9-11. Из них первые 4 серотипа назывались АВ S-21 - S-24, а другие 3 не были включены в
предложенные типы АВ обезьян и, по мнению авторов, могут быть названы АВ S-25 - S-27.
АВ шимпанзе хорошо размножаются в клетках почки человека, шимпанзе, но не раз-
множаются в культуре клеток AGMK или в клетках неприматного происхождения. В отли-
чие от АВ обезьян других видов они плохо репродуцируются в клетках обезьяньего проис-
хождения. Морфологически и физико-химически эти вирусы относятся к АВ. Их АГ родство
по общему АГ с АВ человека определяют в реакции ИФ. SAV-21 (С 1) агглютинирует эрит-
роциты обезьяны макаки-резус и мартышки-верветки, тогда как другие серотипы не вызы-
вают агглютинации указанных эритроцитов. Помимо вышеупомянутых шт., относящихся к
7 серотипам АВ шимпанзе (Cl, Рал 5-7, Рал 9-11), от шимпанзе были выделены еще более
20 шт. АВ, которые по ГА свойствам классифицированы на 3 подгруппы, а в РЗГА некото-
рые из них оказались АГ родственными с АВ человека. Однако, большое количество АВ че-
ловека и обезьян, исследованных в PH, не были идентичными 7-и указанным серотипам АВ
шимпанзе.
Аденовирусная инфекция мышей
В настоящее время известны 2 шт. АВ мышей, MAV-1 1-го типа и MAV-2 2-го типа
выделенных от лабораторных мышей. Указанные шт. различались в PH и даже в РИФ, не
АГ эритроциты различных животных, хорошо размножались в культуре клеток почки мы-
шей, но не повышали титр в различных культурах клеток, включая эмбрионы человека,
крыс и различные перевиваемые линии опухолевых тканей мышей. АВ, выделенные от
мышей, не обладали ГА активностью. Лабораторные мыши обычно переносят АВИ без за-
805
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
метных клинических признаков, природные мышиные АВ широко циркулируют среди ла-
бораторных мышей.
Патогенез инфекции MAV-1 был экспериментально изучен иа нескольких группах мы-
шей, инокулируемых MAV-1 перитонеально, в мозг и носовую полость мышей-сосунков,
отъемышей и взрослых мышей. Воспроизводили смертельное заболевание мышей, прояв-
ляющееся общей слабостью и гибелью на 5-7 дн после заражения. Рассеянные ЦПИ с внут-
риядерными тельцами-включениями наблюдали в коричневом жире, миокарде, надпочеч-
никах и менее выраженными в слюнных железах и почках мышей. Мыши-сосунки, рожден-
ные от матерей с АТ, были резистентны к экспериментальной инфекции. У отъемышей и
взрослых мышей клинически выраженное заболевание не развивалось, однако при зараже-
нии у них выявлялись специфические АТ.
Сходные эксперименты проведены с мышами-сосунками. Животных инокулировалн
MAV-1 интраперитониально. На 3 и 5-й дн после инокуляции обнаруживали многочислен-
ные внутриядерные включения в эндотелиальных клетках кровеносных сосудов мозга и
также в некоторых микроглиальных клетках и малых нейронах в коре головного мозга от 6
до 13-го дн после инокуляции. Взрослые (4-нед) мыши, инфицированные MAV-1, выращи-
вались и находились под наблюдением в течение 2-х лет. Вирусемия у них впервые была
обнаружена через 2 нед после заражения, далее следовала персистенция вируса в течение 24
мес. Малое количество мышей, инокулированных интраперитониально, становились летар-
гичными и к 16-му дн после инокуляции погибали. Wintez и др. (5) заражали взрослых го-
лых (пи-пи мышей) интраперитонеально вирусом MAV-1. Инокулят содержал 100 БОЕ. В
результате у зараженных мышей развивалась изнуряющая болезнь и через различные пе-
риоды времени они гибли. Перед этим у всех животных находили геморрагии в просвете 12-
перстной кишки, а при электронной микроскопии выявляли вирус в эндотелиальных клет-
ках ворсинок 12-перстной кишки. У гетерозиготных (+/пи) мышей не было установлено ни
изнуряющей болезни, ни дуоденальных геморрагий. Эти опыты показали, что Т-лимфоциты
играют важную роль в устойчивости мышей к АВ. MAV-1 проявлял тропизм к надпочечни-
кам и сердцу, но мутант MAV-1 с явно пульмональным тропизмом был выделен как чистый
бляшкообразующий мутант в L-клетках монослойной культуры.
Мыши, как лабораторная модель для разных видов аналитических исследований, имеют
преимущество перед другими животными. Например, более глубокое изучение мутанта,
имевшего тропизм к легким или сходных мутантов приблизило исследователей к понима-
нию механизма органного тропизма, проявляемого АВ.
Патогенез инфекции от MAV-2 , был также изучен в условиях эксперимента. Более де-
тально изучен патогенез экспериментальной АВИ у мышей и обнаружено, что вируспроду-
цирующие клетки у этих животных рассеяны в эпителиальном слое слизистой оболочки
тонкого кишечника. Устойчивость кишечника к вирусу контролируется, главным образом,
локально продуцируемым IgA. MAV-2 в отличие от MAV-1, выделялся исключительно с
фицес. Отмечался также кишечный тропизм MAV-2 к надпочечникам и сердцу.
Аденовирусная инфекция морских львов
Описаны случаи, когда в течение 10 дн 5 калифорнийских морских львов были выбро-
шены на берег в районе Лос-Анджелеса. При вскрытии их был диагностирован острый ви-
русный гепатит, а ядра некоторых печеночных клеток содержали базофильные тельца-
включения, имеющие много вирусоподобных структур без оболочки размером 70-75 нм в
диаметре.
806
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Аденовирусная инфекция хомяков
Reeves и др. (4) выделили вирус в культуре клеток почки хомяков, зараженной кровью
от белоногих оленевых хомяков. Выделенный агент оказался устойчивым к дезоксихолату и
хлороформу и проходил сквозь фильтр Зейтца (типы ST и Lpad). Агент давал положитель-
ную реакцию с сыворотками (Ad4 Ad7) людей в стадии реконвалесценции. В культурах кле-
ток макаки-резус AGMK и Нер-2 этот вирус вызывал характерный для АВ ЦПЭ.
Аденовирусная инфекция кроликов
В 1979 г. Boton и др. (2) выделили вирус от кроликов с клинической картиной диареи.
По морфологическим, физико-химическим и АГ особенностям возбудитель проявлял родст-
во с АВ человека; он не реплицировался в первичной культуре клеток почки свиней, почки и
тестикул телят и перевиваемой линии клеток Не1 (легких эмбриона человека), но он АГ
эритроциты кроликов при 4°С. По мнению автора, выделенный агент представлял новый
серотип Mastadenovirus, для которого кролик является естественным хозяином. По АГ свой-
ствам (в PH) он отличался от BAV-1-4 и BAV-1, 2 и 6.
Аденовирусная инфекция опоссума
Вирус обнаружили спонтанно в культуре клеток почки опоссума. По морфологическим и
физико-химическим особенностям он был отнесен к АВ. Не размножался в культуре клеток
почки кролика, хомяка, макаки-резус и человека. ИФ была положительной с 8-ю сыворот-
ками человека из 10 исследованных и 1-й из 5 сывороток опоссума и АВ человека. Однако
он не обнаружил отличий от АВ млекопитающих (1).
Аденовирусная инфекция тупайа
Тупайа - прообезьяна, занимающая филогенетическое положение между приматами и
грызунами, поддерживается учеными для применения в качестве экспериментальной моде-
ли. АВ от них был выделен из культуры клеток почки клинически здоровых животных. АВ
тупайа (Tup AV) хорошо размножался в культуре клеток почек тупайа и менее эффективно -
в культуре клеток почек обезьян, легких норки и бычьей почки; вирус почти не размножался
в почечных клетках человека, кролика, обезьян, свиньи или ягненка. Кроме морфологиче-
ской и физико-химической характеристики АВ тупайа в РП в агаровом геле, показано нали-
чие общего АГ между Tup AV и SV17, а также определены некоторые характеристики ви-
русной ДНК Tup AV и наличие терминальных белков. Таким образом, Tup AV классифици-
руется как новый член группы Mastadenovirus. Этот вирус агглютинирует эритроциты кры-
сы и 0-группы человека.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Фомина Н.В. Аденовир. инф. жив,- М, Колос, 1995, 2:3. 2.Boton L. et.al. Acta Vet Acad
Sci Hung, 1979, 27 :73. 3.Hull R.N. et.al. Am J Hyg 1956, 63 :204. 4.Reeves W.C. Proc Soc Exp
Biol Md 1967, 124 :1173. 5. Winters A.L. et.al. Proc Soc Exp Biol Med, 1980, 164 :280.
807
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
ИНФЕКЦИОННЫЙ ГЕПАТИТ СОБАК
Ansteckende Leberentzundung der Hunde, Rubarthsche Krankheit (нем.);
Hepatitis infectiosa canum, Encephalomyelitis enzootica vulpis (лат.);
Contagios canine hepatitis, Infectious canine hepatitis, Canine viral hepatitis,
Rubarths disease (англ.); Maladie de Rubarth (франц.).
Аденовирусная инфекция (АВИ) собак проявляется в виде инфекционного гепатита,
вызываемого типом 1 (CAV-1), и аденовироза, вызываемого типом 2 (CAV-2) АВ плотояд-
ных. Инфекционный гепатит собак ИГСоб, - заразное воспаление печени собак, болезнь
Рубарта, вирусный гепатит - остро-контагиозная болезнь, протекающая с лихорадкой, вос-
палительными процессами конъюнктивы, слизистой оболочки носовой полости, ЖКТ, пече-
ни и желчного пузыря, иногда сопровождающаяся нарушением деятельности ЦНС (8).
Rubarth (1947) показал, что возбудитель ИГСоб и энцефалита лисиц - один и тот же вирус.
Среди инфекционных болезней собак во всех странах мира особую опасность представ-
ляют чума плотоядных, парвовирусный энтерит, среди АВИ - ИГСоб и аденовироз (22).
ИГСоб зарегистрирован во многих странах мира. Широко распространен в странах СНГ.
Клинические признаки. Клиническое проявление ИГСоб зависит от возраста и им-
мунного статуса животных. Помимо инфекционного гепатита у собак описана самостоя-
тельная инфекция - аденовироз (инфекционный ларинготрахеит, вызываемый аденовирусом
собак типа 2).
У собак инфекция проявляется остро, сверхостро, инаппарантно. Сверхострое течение
отмечают чаще у молодых собак. Смерть животных наступает без определенной клиники,
иногда лишь перед смертью выражены судороги (11). Для острого течения характерна ги-
пертермия (до 40°С) и часто это единственый клинический признак болезни (16), хотя она
может сопровождаться лейкопенией. При естественном заражении инкубационный период
продолжается 3-9 дн, иногда дольше, при экспериментальном - 6-8 дн. Болезнь обычно на-
чинается с постепенно нарастающей вялости; собаки становятся малоподвижными, больше
лежат, с трудом встают, при движении походка шаткая, снижается аппетит, затем отказы-
ваются от корма. Появляются характерные признаки гепатита: рвота с примесью желчи, од-
но- или двусторонние кератиты и тонзиллит. Появляется жажда, анорексия, воспаление ви-
димых слизистых оболочек, при пальпации в области мечевидного отростка - болезнен-
ность, возникают подкожные отеки в области головы и шеи. Характерен конъюнктивит, со-
провождающийся слезотечением и светобоязнью, что приводит к воспалению радужной
оболочки, появлению на коже петехий и снижению свёртываемости крови. На этой стадии
болезни 40-50% собак через 5-8 дн выздоравливают, у части из них на 10-12-й дн отмечают
отек роговицы, переходящий в феномен Артюса. В первые дни болезни температура обычно
нормальная, но на 4-6-й дн она быстро повышается до 41-41,7°С и держится на таком уров-
не почти до гибели животного. В период лихорадки носовое зеркало у собак сухое и они ис-
пытывают повышенную жажду. Отмечается расстройство деятельности сердечно-сосудистой
системы: число сердечных ударов возрастает до 90-100 в мин и выше, сердечный толчок
усилен, а пульс при тяжёлом течении болезни ослаблен; иногда аритмичен. Дыхание учаще-
но - до 40-50 в мин. При осмотре зева - ярко-красные увеличенные миндалины, которые
мешают больной собаке глотать, вызывают першение в горле (впечатление застрявшего
инородного предмета). По признаку острого воспаления миндалин и отсутствию воспаления
лёгких можно клинически дифференцировать чуму плотоядных от инфекционного гепатита.
Для инфекционного гепатита наиболее типичны фибринозные или фибринозно-геморраги-
ческие наложения на поверхности печени и кишечника, студенистый отек стенки желчного
пузыря, в 90% случаев - увеличение и полнокровие селезенки. Помимо того, термины
“голубой глаз” и “отек роговицы глаза” учитывают при описании ИГСоб (14,17).
808
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Дополнительный признак инфекционного гепатита - наличие кератита, появление беле-
сого помутнения роговицы на одном или обоих глазах без явных признаков гнойного воспа-
ления конъюнктивы. Эго обычно наблюдается у животных через 2-3 дн от начала болезни.
Держатся эти признаки несколько дней и могут самостоятельно исчезнуть. Голубизна посте-
пенно исчезает, и глаз приобретает нормальный вид. Наблюдается рвота, понос. Рвотные
массы с примесью желчи, кал беловатого цвета, моча цвета темного пива. При желтушной
форме слизистые и кожные покровы имеют желтоватый цвет. Печень болезненна. Возмож-
ны судорожные припадки и др. симптомы поражения ЦНС.
Взрослые собаки болеют без характерной клиники: рвота сменяется запорами, периоди-
чески возникают судороги отдельных мышц конечностей и шеи, животные худеют, отмеча-
ется желтуха видимых слизистых оболочек. У молодых изнеженных щенков типичны
обильное кровотечение в брюшную полость, увеличение с кровоизлияниями тимуса. Поэто-
му клиническая форма “гепатит” проявляется не только этим симптомом, и не удивительно,
что этот вирус гепатита был изолирован при энцефалитах собак, иридоциклитах, нефритах,
респираторных заболеваниях (11,17).
При ИГСоб изменяется картина крови. Часто отмечается резко выраженная лейкопения
(2-3 тыс. лейкоцитов), сменяющаяся значительным лейкоцитозом (до 30-35 тыс.) в период
понижения температуры. Лейкоцитарная формула почти всегда претерпевает закономерные
изменения: в первые дни относительно увеличивается процент нейтрофилов с исчезновени-
ем эозинофилов и сдвигом влево до юных, снижается процент лимфоцитов (до 7-15 моноци-
тов). Отмечается зернистость нейтрофилов, у многих животных в крови появляются плаз-
матические клетки. В острый период болезни значительно ускоряется СОЭ до 20-30 мм, ре-
же до 60 мм и в течение 24 ч достигает 70-80 мм. Подобные изменения картины крови от-
ражают состояние организма животного в ходе его борьбы с инфекцией. Уменьшение коли-
чества лейкоцитов и эозинофилов, а также резко выраженный сдвиг влево - неблагоприят-
ные показатели, свидетельствующие о злокачественном течении болезни. И наоборот, рез-
кое увеличение количество лейкоцитов и появление нормального показателя эозинофилов
говорит о выздоровлении животного.
Продолжительность болезни различна - от нескольких дней до 2-3 нед. Погибают соба-
ки, находясь обычно в глубоком коматозном состоянии и совершенно не реагируя на внеш-
ние раздражения. Иногда у некоторых животных за несколько часов до смерти наблюдают-
ся подергивание отдельных групп мышц, судороги и непроизвольные движения конечно-
стей. Быстрый летальный исход чаще наблюдается у щенков, невакцинированных против
чумы, парвовирусной инфекции, которые присоединяются в момент ослабления организма.
Животные быстро худеют, у них развивается анемия конъюнктивы и слизистой оболочки
ротовой полости, у некоторых желтушность склеры. Моча принимает жёлто-бурую окраску,
что также часто является характерным признаком гепатита. Животные болезненно реагиру-
ют на пальпацию в области печени, становятся как бы осторожными в движениях. При этом
часто принимают позу сидячей собаки, широко расставив передние лапы. У взрослых со-
бак, выздоровевших после перенесенной болезни, может развиться цирроз печени или на-
рушения пищеварительной системы, у самок отмечается бесплодие, аборты, гибель плода
незадолго до рояодения (2).
При хроническом ИГСоб симптомы выражены не резко и носят неопределённый харак-
тер. Иногда они проявляются снижением или временной потерей аппетита, расстройствами
деятельности ЖКТ (поносы, сменяющиеся запорами, и прогрессирующее исхудание) и ред-
кими кратковременными подъемами температуры тела. Приступы могут быть различными
как по интенсивности, так и по продолжительности обострения. Ремиссии между приступа-
ми лихорадки не имеют особой закономерности, температура повышается с интервалом в
несколько дней, недель и даже через месяц. Хронически больные самки чаще всего аборти-
809
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
руют или приносят нежизненоспособных щенков. У них отмечают долго непреходящие ке-
ратиты одного или обоих глаз.
Патогенез. При алиментарном способе заражения собак первичное размножение виру-
са ИГСоб происходит в первые 5 сут в тонком кишечнике, миндалинах и подчелюстных
лимфоузлах. Доказательство этого - лихорадка, набухание миндалин и увеличение подче-
люстных лимфоузлов. Первичное размножение вируса ИГСоб происходит в клетках ретику-
лоэндотелиальной ткани. В дальнейшем он, выходя из ретикулярных клеток, появляется в
просветах синусов лимфоузлов, что совпадает с периодом появления вирусемии. В зависи-
мости от способа и дозы заражения спонтанное выздоровление собак наблюдается в сред-
нем на 10-е сут. К этому времени уже не удается выделить вирус из большинства органов и
тканей, за исключением почек. Сыворотки реконвалесцентов уже содержат ВНА.
Патологоанатомические изменения. В органах они чрезвычайно разнообразны и за-
висят от продолжительности процесса. При остром течении болезни трупы собак обычно
имеют удовлетворительную упитанность. При вскрытии находят распространенный (иногда
геморрагический) отек подкожной клетчатки, зобной и поджелудочной желез. Характерен
отек желчного пузыря и его ложа. В брюшной полости более чем в 40% случаев встречается
прозрачный или кровянистый экссудат. На висцеральной брюшине кишечника и печени мо-
гут быть фиброзно-геморрагические наложения. Печень увеличена, с отчетливым дольча-
тым рисунком; в одних случаях она темно-красная, полно кровная, в других - светлого, жел-
то-коричневого цвета или ярко-охряно-желтого, иногда с мелким неравномерным крапом
под капсулой и на поверхности разреза. Более чем в 90% случаев бросается в глаза значи-
тельный студенистый отек стенки желчного пузыря. Селезенка примерно в 50% случаев
увеличена и полнокровна. В желудке обычно бывает только слизь, нередко темно-коричне-
вого или почти черного цвета. На слизистой оболочке желудка возможны геморрагии, ино-
гда эрозии. В кишечнике чаще находят незначительные изменения, но иногда слизистая
оболочка тонкого и толстого кишечника утолщена, покрыта большим количеством слизи и
множественными кровоизлияниями. Постоянный признак ИГС - студенистый отек и полно-
кровие вилочковой железы, в большинстве случаев с множественными точечными кровоиз-
лияниями в ней. Вокруг вилочковой железы прилежащие ткани сильно отечны, отек может
распространяться на шею, нижнюю поверхность груди и средостение. Селезенка набухшая,
вишнево-красного цвета, кровенаполнена, пульпа на разрыве сочная, соскоб обильный.
Иногда она не увеличена, красновато-сероватого или серовато-малинового цвета. Почки
большей частью увеличены, капсула напряжена, но снимается легко. Паренхима пронизана
точечными и полосчатыми кровоизлияниями. На разрыве граница между корковым и моз-
говым слоями сглажена. Часто почки бывают застойно гиперемированы, а мозговой слой их
темно-красный. Поджелудочная железа увеличена, кровенаполнена, серовато-желтого цвета.
На поверхности точечные кровоизлияния, часто проникающие вглубь ткани.
Степень изменения других органов зависит от длительности болезни. Так, в сердечно-
сосудистой системе наблюдают серозный перикардит, в легких - уплотнения и отдельные
участки ателектаза, в отдельных случаях в головном мозге может быть заметна гиперемия,
изредка точечные кровоизлияния в области подкорковых узлов и нижележащих отделов
ствола. При затяжных, хронических течениях ИГСоб отмечают явления анемии и сильное
истощение животных. Дегенеративные изменения паренхиматозных органов различной сте-
пени в виде зернистого бежового и жирового перерождения. В отдельных случаях они осо-
бенно резко выражены в сердце, печени, почках и иногда в скелетных мышцах. Печень уве-
личена, уплотнена, со своеобразным рисунком мускатности, сильно выражена жировая дис-
трофия.
Особый интерес при вирусном гепатите собак представляют гистологические изменения
в печени. При остром течении последняя кровенаполнена, крупные сосуды ее расширены, в
просветах кровеносных сосудов отмечается повышенное скопление эритроцитов, клеток
810
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
пролиферирующего эндотелия, иногда свернувшийся фибрин. Эритроциты и серозный вы-
пот обнаруживаются в просветах Диссэ, в результате чего возникает резкое очертание
дольчатого рисунка. Отмечают выраженный периваскулярный отек и геморрагическую ин-
фильтрацию. Структура печёночных балок в зоне поражения нарушена. Большинство клеток
увеличено, цитоплазма их разрежена, содержит множество различных по величине капель
жира. Отдельные клетки уменьшены, с уплотненной, резко ацидофильной цитоплазмой,
пикнотическим ядром. Отмечают также диффузные дистрофические изменения печеночных
клеток, вплоть до их некроза, главным образом, в центральных и средних зонах долек. Ха-
рактерные тельца-включения выявляются в ядрах печеночных и эндотелиальных клеток.
При тяжелом течении болезни ткань печени малокровна, наряду с очаговыми некрозами
бывают обширные некрозы с гибелью значительных участков паренхимы.
Степень распространённости и интенсивность изменений печени не одинаковы не толь-
ко у различных больных животных, но и в различных участках органа одного и того же жи-
вотного. В селезёнке и лимфоузлах наблюдают полнокровие и ретикулярную гиперплазию
пульпы. Часто отмечают некробиотические изменения в центре фолликулов. В почках мож-
но видеть полнокровие клубочков, набухание клеток эндотелия капилляров клубочков. В
почечных канальцах заметны дистрофические изменения эндотелия, который в большинст-
ве случаев набухший, границы между клетками сглажены. В желудке и тонком кишечнике
имеются кровоизлияния и очаговые некрозы слизистой оболочки. В головном мозге отме-
чают инъекцию сосудов мягкой мозговой оболочки, в некоторых случаях - диапедезные
кровоизлияния. Иногда можно наблюдать круглоклеточную инфильтрацию мягкой мозговой
оболочки, в нервных клетках - тяжёлые дистрофические процессы, часто заканчивающиеся
лизисом нейронов.
АДЕНОВИРОЗ СОБАК
Клиническое проявление аденовироза с характерными воспалительными явлениями со
стороны респираторного тракта в виде кашля, фарингита и увеличением миндалин описано
многими авторами. Примером клинического проявления болезни может быть случай, опи-
санный в Японии. Так, зимой 1985 г. в одном из питомников префектуры Токио произошла
вспышка респираторного заболевания собак. У больных животных развивалась депрессия,
анорексия, сухой кашель, наблюдали истечения из носа. При вскрытии животных с тяжё-
лыми симптомами болезни отмечали локализацию наиболее выраженных патологоанатоми-
ческих изменений (застой венозной крови и кровоизлияния) в респираторном тракте, осо-
бенно в лёгких. У одной собаки в эпителиальных клетках протока поджелудочной железы
обнаружили цитоплазматические тельца-включения. От 6 из 33 поражённых собак выдели-
ли 2 вируса, которые идентифицировали как вирус парагриппа и АВ собак серотипа 2. В не-
скольких случаях удалось выделить из тонкого кишечника больных животных АВ типа 2.
Данное заболевание в Японии получило название синдрома кашля собак (13), позднее его
назвали аденовирозом. Общепринято, что аденовирус собак типа 2 является основным этио-
логическим агентом аденовироза. Изучением патогенеза при аденовирозе собак занимались
многие исследователи. Несмотря на разноречивость суждений все авторы сходятся в одном:
возбудители ИГСоб и аденовироза обладают выраженным гепатотропнзмом.
ЭНЦЕФАЛИТ ЛИСИЦ
Наблюдения можно суммировать следующим образом: лисята 4-5-мес возраста, кото-
рые выращивались в маленьких загонах, где находилось около 1000 молодых лисят, через 4
нед вдруг начинали погибать. Гибель достигала 15-20%. Главными симптомами были нерв-
ные явления, конвульсии, параличи и вялость. Заболеванием охватывалась половина попу-
ляции лисят. При вскрытии отмечали отсутствие выраженных патологоанатомических из-
менений кроме геморрагий н кровоизлияний. Геморрагии чаще наблюдали в надпочечни-
ках, плевральной и абдоминальной полостях, поджелудочной железе, слюнных железах,
811
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
лёгких и ЦНС. Основной симптом болезни - геморрагии в головном мозге. Общими гисто-
патологическими изменениями в этих органах были большие или маленькие геморрагии
или периваскулярная инфильтрация круглых клеток и эндотелиальная пролиферация. Ха-
рактерные внутриядерные включения были обнаружены в эндотелиальных клетках. Что ка-
сается названия болезней у лисиц и собак, то одни исследователи считают, что в патологии
участвует один и тот же вирус (CAV-1) и он проявляет различный “органный тропизм”.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОБУДИТЕЛЯ
Предположение о вирусной природе болезни впервые высказал Каудри в ЗО-х гг., а в
1947 г. Рубарт подтвердил её экспериментально. Многие исследователи изучали эпизоотии
энцефалита лисиц, которые наблюдались с 1925 г. в течение ряда лет. Выделенный автора-
ми вирус был назван вирусом энцефалита лисиц, в настоящее время он известен как АВС
типа 1 (CAV-1).
CAV-2 был впервые изолирован от группы собак при вспышке ларинготрахеита (кашля
в питомнике) и был предположительно определён как один из этиологических агентов этой
болезни. С AV-1 был один из вирусов, дезинтегрированных с целью выяснения принципи-
альной структуры капсида. АВ CAV-2 был выделен как вирус, который частично перекрёст-
но нейтрализуется антисывороткой CAV-1.
Морфология и химичесий состав. Вирус CAV-1 проходит через фильтры Зейтца EKS,
свечи Беркельфельда и Шамберлена Л2 и Л3 и задерживается коллоидными мембранами.
Размер его 55-96 нм. Он отнесён к обширной группе АВ, роду Mastadenovirus. В морфоло-
гическом отношении вирионы имеют кубическую симметрию и состоят из 252 капсомеров,
каждый капсомер - из 5-6 и более мелких субъединиц (Рис. 126). В культуре клеток вирус-
ные частицы часто имеют форму кристаллических скоплений, лишены липопротеидной
оболочки, не содержат гликопротеидов (22а).
Устойчивость. Вирус ИГСоб устойчив к физико-химическим факторам. Выделенный
из органов, тканей и секретов больных животных, он сохраняет активность несколько меся-
цев. При замораживании, высушивании и хранении в 50%-ном р-ре глицерина не теряет
своих свойств 3-5 лет. При температуре 37°С сохраняется до 29 дн, при комнатной темпера-
туре - 10-13 нед, при 4°С - более 9 мес. Высокая температура действует на вирус губитель-
но. Так, он теряет вирулентность в течение 40-50 мин, при нагревании до 100°С за 1 мин.
Вирус неустойчив к формалину, лизолу, фенолу, свежегашёной извести, эти средства инак-
тивируют его в течение 30 мин. Проявляет выраженную устойчивость к эфиру, хлороформу,
метанолу, антибиотикам и УФ лучам. Его выделили с волосяного покрова собак во время
клинического проявления болезни и спустя 35 дн после переболевания. На волосяном по-
крове шкуры жизнеспособность его колеблется в широких пределах в зависимости от тем-
пературы окружающего воздуха. Так, при температуре 17°С вирус инактивировался в ин-
тервале между 22-30 дн, при температуре 0-2°С - между 168-184 дн и при температуре - 1-
8°С - между 246-263 дн (3, 4).
АГ структура. Вирус ИГСоб содержит преципитирующий, ГА- и КС-АГ. Биологиче-
ские свойства его подвержены большим изменениям. В частности, в процессе лабораторных
пассажей он изменяет патогенность для собак. КС-АГ не связан с инфекционной активно-
стью вируса. В зараженных культурах клеток его обнаруживают через 25-30 ч, а максимум
накопления его происходит на 5-6-е сут. КС-АГ термолабильный и быстро разрушается при
нагревании до 60-70°С. Он обладает групповой специфичностью. Преципитирующий АГ у
АВ собак состоит из связанного и несвязанного с инфекционностью вирусной частицы ком-
понентов. Положительные результаты в РЗГА получаются с антисывороткой, полученной
против АВ человека. Эго указывает на то, что АГ, связанный с АВ человека, локализован в
пентоне этих вирусов. АВ животных и человека имеют 1-фазную морфологию и следующие
классификационные признаки: растворимый КС-АГ, устойчивость к эфиру, характерное
812
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
ЦПД в культурах клеток эпителиального происхождения, 2-спиральную ДНК и чёткие раз-
личия между типами, выявляемые в PH (11).
АГ активность. Вирус индуцирует образование ВНА, КСА, ПА и анти-ГА.
ГА свойства. Установлены у большинства эпизоотических штаммов вирусов ИГСоб.
Вирусы АГ эритроциты морской свинки и человека. Показано, что инфекционность вируса
ИГСоб, связанная с титром РГА, лучше проявляется с эритроцитами петухов в условиях pH
6,0 в присутствии NaCl и MgCb.
Культивирование. Вероятно по аналогии с АВ человека АВ собак условно могут быть
отнесены к группе 1 вместе с 3, 5, 7, 11, 14, 16 и 19 серотипами АВ человека (8, 9, 10). Ви-
рус ИГСоб успешно репродуцируется в культуре клеток почки щенков собак, песцов и ли-
сиц, ио не размножается в клетках человеческого, обезьяньего и бычьего происхождения. Из
перевиваемых культур к этому вирусу оказались чувствительными МДСК (Madin and Dary
Canine Kidnei). Данные по использованию первичных культур клеток свиного происхожде-
ния противоречивы.
В заражённой культуре клеток почек собак вирус размножается с характерными ЦПИ:
появлением отдельных округлившихся рефрактильных клеток, постепенно отторгающихся
от стекла. ЦПД достигает максимума через 43-48 ч. По мере развития инфекции число кле-
ток, подвергавшихся дегенерации, увеличивается, и в монослое образуются большие пусто-
ты. По краям сохранившихся островков поражённые клетки концентрируются, образуя
большие конгломераты, напоминающие грозди винограда. Специфичность ЦПИ подтвер-
ждается в PH. В культуре клеток после заражения её через 20-30 ч образуются характерные
внутриядерные включения, которые хорошо обнаруживаются при окраске препаратов или
методом ИФ.
Экспериментальная инфекция. Экспериментально ИГСоб можно воспроизвести у
собак, лисиц, песцов, используя для этой цели животных 4-6-мес возраста, предварительно
проверенных на инфекционный гепатит. Болезнь воспроизводится закономерно и в типич-
ной форме при заражении в переднюю камеру глаза, в вену, интраперитонеально и орально.
У заражённых животных симптомы болезни проявляются на 6-7-й дн (они обычно погибают
спустя 3-5 дн), причём они, как и патологоанатомические изменения, сходны с таковыми
при естественном заражении. Позднее с развитием вирусологической техники исследования
представилась возможность вновь исследовать патогенез экспериментальной инфекции.
Было показано, что при оральном введении собакам вируса CAV-1 в дозе 40-400 ТЦД50
удавалось наблюдать развитие болезни различной тяжести (41).
Описаны случаи летальной пневмонии у заражённых морских свинок. При гистологиче-
ском исследовании в клетках эпителия бронхов обнаружены базофильные тельца-
включения. При ЭМ исследовании они содержали гексагональные вирусные частицы диа-
метром 80-90 нм с решетчатообразным расположением. Высказано предположение о нали-
чии АВ пневмонии у морских свинок (20).
Во время эпизоотии среди американских чёрных медведей (Ursus americanus) от погиб-
ших зверей было изолировано несколько вирусов. Различными методами были изучены
изоляты 83-12075, 83-11726 и 83-11779, которые культивировали в клетках МДСК и пер-
вичных культурах клеток почек собак. Установлено, что это был АВ собак типа 1. Изолят
83-11779 был введён перорально или внутривенно 9-10-нед щенкам. Все они погибали. У
инфицированных животных обнаружены характерные для АВИ изменения в печени, лёгких
и почках. Это указывает на то, что медведи были естественно инфицированы диким виру-
сом, а не заразились вакцинным штаммом от контактировавших с ними вакцинированных
волков (26).
У лисиц экспериментальная инфекция более успешно воспроизводится на простых
(рыжих) лисятах при инокуляции им интрацеребрально или внутримышечно гомогенатов
813
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
головного, спинного мозга и селезенки павших животных. Инкубационный период при этом
обычно длится 3 дня. Большинство лисят (до 80%), причем не старше 6 мес, погибает на 3-
5-й день после инфицирования. Клинические симптомы и посмертные патологоанатомиче-
ские изменения были сходны с наблюдаемыми при естественной инфекции. Позднее уста-
новлена возможность экспериментального воспроизведения инфекции при заражении через
респираторный тракт. Заболевание может передаваться собакам и койотам, но оно не пере-
дается кроликам, белым крысам и африканским хорькам. Вирус ИГСоб выделяли из крови,
селезенки, спинного, головного мозга и других органов больных лисят.
АГ вариабельность и родство. Возбудители ИГСоб (АВ собак типов 1 и 2) и аденови-
роза четко различаются по патогенности. Например, шт. А 26/61 (АВ типа 2) выделен от со-
бак из области горла и легких при поражении респираторного тракта и отсутствии призна-
ков ИГ. Штаммы ИГСоб, выделенные от домашних животных и пушных зверей из различ-
ных республик и регионов нашей страны, в АГ отношении оказались родственными. Однако
АГ родства вирусов ИГС с АВ человека не установлено. В.И. Уласов (8) изолировал от со-
бак шт. ВГНКИ и Ада, относящиеся к типам 1 и 2 АВ.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Основной источник инфекции - больные со-
баки, выделяющие вирус с мочой, носовой слизью, конъюнктивальным секретом и калом.
Заражение происходит как при непосредственном контакте здоровых животных с больными,
так и посредством эктопаразитов (вшей, блох).
По некоторым данным (5), естественное заражение происходит через слизистые оболоч-
ки носовой и ротовой полостей, ЖКТ и половые органы. Установлены случаи распростране-
ния болезни при несоблюдении правил асептики и антисептики во время хирургических
операций, прививок, взятия крови и др.
Эпизоотии инфекционного гепатита носят сезонный характер, но чаще наблюдаются
весной и летом при появлении молодняка. Спорадически же болезнь встречается в любое
время года, что связано в основном с обострением латентного или хронического течения бо-
лезни под влиянием каких-либо неблагоприятных условий.
При возникновении болезни в собаководческих питомниках в течение энзоотии ИГСоб
наблюдается определенная последовательность. В начале развития энзоотии отмечают еди-
ничные случаи остропротекающей болезни. В дальнейшем, при отсутствии необходимых ве-
теринарно-санитарных мер, энзоотия распространяется, захватывая в первые 2-3 нед значи-
тельное количество животных и постепенно затухая к концу 2-3 мес. Такая динамика не-
строго постоянна и зависит от эпизоотической обстановки, степени первичного охвата пого-
ловья и длительности течения энзоотии.
Заболеваемость и летальность также значительно колеблются и зависят от состояния со-
противляемости организма и условий содержания животных. По данным иностранной лите-
ратуры самки-вирусоносители в течение ряда лет могут заражать своих щенков, а также
самцов-производителей при условии тесного контакта с ними, особенно во время случки.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к ИГ вос-
приимчивы собаки всех возрастов и пород. Описан он у песцов, лисиц, мышей, утят, кроли-
ков, обезьян и КРС (11). Хотя основной признак болезни у животных вышеуказанных видов
- поражение печени, однако в таксономическом отношении возбудители гепатитов отнесены
к различным группам вирусов; так, возбудитель ИГСоб - АВ, возбудитель гепатита утят -
энтеровирус, а гепатита мышей - коронавирус. У некоторых животных, связанных с собака-
ми и лисицами, таких как timber wolf (древесный волк), койот, медведь, полярный медведь,
наблюдается естественная инфекция, вызванная CAV-1. Специфические АТ к вирусу ИГСоб
типу 2 обнаружены у енотов, скунсов, медведей и других пушных зверей. Встречающиеся в
814
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
природе шт. ИГСоб по культуральным, серологическим, биохимическим, физическим, вы-
руленным и АГ свойствам идентичны вирусу гепатита песцов и лисиц.
Характерно длительное вирусоносительство - в течение ряда лет, что подтверждается
неоднократными случаями заноса инфекции в благополучные хозяйства при закупке пле-
менных самцов и самок, в число которых попали хронически больные.
При исследовании вируссодержащих проб из различных органов, крови и лимфы полу-
чены следующие результаты: начало размножения вируса - в миндалинах и региональных
лимфоузлах; далее ои переносится в кровь по лимфатическим сосудам и диссеминируется
по всем органам и тканям больного животного. На 5-6-й день после заражения вирус удава-
лось изолировать из надпочечников, почек, селезенки, печени, легких и глоточных смывов.
В фекалиях его обнаруживали крайне редко.
ДИАГНОСТИКА
ИГСоб диагностируют на основании эпизоотологических, клинических и патологоана-
томических данных, а также вирусологических исследований и биопробы. Выделить вирус
из истечений глаз, из мочи, кала, мазков из гортани удается после появления первых клини-
ческих признаков болезни. Для исследования от больных собак в период острого течения
болезни берут сыворотку крови, а от павших животных - асцитную жидкость или печень.
Суспензию из печени готовят общепринятым методом и заражают чувствительных живот-
ных или культуру ткани, приготовленную из почек щенков собак.
Идентификация вируса
РСК. Специфический АГ обнаруживали в печени. При широком серологическом обсле-
довании оказалось, что от 70% до 100% клинически здоровых щенков были серопозитив-
ными в РСК с этим АГ, что указывает на широкое распространение ИГСоб среди взрослых
собак.
РДП. Простота постановки реакции, высокая чувствительность и строгая специфич-
ность позволяют поставить диагноз в течение 24-48 ч, а также установить АГ родство раз-
личных штаммов. Реакция может быть применена для лабораторной диагностики в случаях
остро протекающей болезни, поскольку преципитирующий АГ обнаруживается у больных
животных в различных органах и тканях на 2-3-й день после заражения. Для постановки
РДП требуется тестирующая система, состоящая из АГ вируса ИГСоб, специфической гипе-
риммунной сыворотки против вирусного гепатита, контрольного положительного АГ, кон-
трольного отрицательного АГ. В качестве испытуемого АГ используют 10%-ную суспензию
печени больных животных. Специфическую гипериммунную сыворотку получают путем
иммунизации собак или используют иммунную сыворотку реконвалесцентов. Реакция про-
ходит при температуре 37°С в течение 48-72 ч. Сыворотку в лунки агара добавляют дробно,
через каждые 12 ч. Реакция считается положительной, если между испытуемым АГ и гипе-
риммунной сывороткой в агаре появляется полоска молочного цвета, по интенсивности вы-
явления равная известному АГ и гипериммунной контрольной сыворотке. Между нормаль-
ной сывороткой и АГ полосок не должно быть. Нечетко выраженные (расплывчатые) полос-
ки преципитата расцениваются как сомнительная реакция, а образование зон вокруг лунок
является неспецифической реакцией.
В нашей стране широко используют набор для реакции диффузионной преципитации в
ПААТ при диагностике ВГС (10).
ИФ. С успехом используют для обнаружения вирусного АГ в культуре клеток, срезах,
мазках, отпечатках из различного патологического материала. Метод ИФ применяют как в
прямом, так и непрямом вариантах.
При диагностике ИГСоб применяется метод неспецифической ИФ. С этой целью на на-
тивный препарат под покровное стекло наносят каплю акридина оранжевого. Препарат не-
медленно просматривают, внутриядерные включения окрашиваются на фоне зелено-желтых
ядер и оранжево-красиой протоплазмы.
815
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
ИФА. С помощью ИФА удавалось обнаружить АГ вируса чумы и гепатита собак в ци-
топлазме и ядрах клеток. ЦПИ (вирусные включения) были обнаружены в макрофагах и
эпителиальных клетках бронхиол. Данные были подтверждены методом ЭМ (19).
Гистологические исследования. Метод основан на выявлении специфических телец-
включений. При вскрытии животных отдельно из разных долей печени берут несколько ку-
сочков толщиной не более 1 см, фиксируют их в 10%-ном нейтральном формалине не менее
2-3 дн. После фиксации из кусочков вырезают пластинки толщиной 4-5 мм, тщательно от-
мывают проточной водой и на замораживающем микротоме делают гистологические срезы
толщиной 6-7 мкм. Окрашивают их гематоксилин-эозином по общепринятой методике.
Сформированные тельца Рубарта располагаются чаще всего в центре печеночных клеток и
имеют размер 0,5-0,75 мкм. В начале они оксифильные, рыхлые с четко очерченными края-
ми. Чаще всего включения встречаются в печёночных клетках Купфера, в эндотелии сосу-
дов, ретикулярных клетках всех органов, особенно селезёнки, почек и лимфоузлов. В боль-
шинстве случаев внутриядерные тельца могут быть эозинофильными или окрашенными в
нейтральный цвет. Форма их круглая и овальная. Структура телец гомогенная. Между
включением и ядерной оболочкой, как правило, имеется оптически пустая зона, в которой у
отдельных клеток хорошо видны тонкие хроматинные тяжи. Наиболее характерный морфо-
логический признак ИГСоб - крупные внутриядерные включения в печёночных купферов-
ских клетках. При аденовирозе выявляют ацидофильные аморфные внутриядерные включе-
ния в эпителиальных клетках бронхов и альвеолярных клетках (1,11).
Идентификация вируса
Проводят в культуре клеток почек телят с позитивной сывороткой против ИГС.
PH в культуре клеток щенков. ВНА в разведении до 1:20 у песцов появлялись на 7-й
дн и через 2 нед выявлялись у 50% зверей, достигая максимума (до 1:640) через 3 нед после
заражения.
РЗГА. Используют как надёжный метод серодиагностики ИГСоб. Для этого вначале
ставят РГА с эритроцитами петуха, но более постоянно с эритроцитами белых крыс и чело-
века группы 0. Для этой реакции более подходят эритроциты морской свинки.
РСК. Для её постановки не требуется высокая степень концентрации и чистоты АГ пре-
паратов. Однако около 20% сывороток крови собак обладают антикомплементарными свой-
ствами и непригодны для исследования в РСК.
РДП. В качестве заведомо положительного АГ используют суспензию печени щенков
лисиц, экспериментально заражённых вирусом ИГСоб. С 1965 г. используют культуральные
АГ, которые концентрируют различными методами. РДП - единственная реакция, которая
широко используется в лабораторной диагностике ИГСоб (для идентификации вируса и АТ).
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Основана на обнаружении спе-
цифических АТ в РДП. С успехом используется для выявления перенесённой ранее болезни,
так как АТ у переболевших собак могут сохранятся несколько лет.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У переболевших собак независимо от тяжести перенесённого инфекционного процесса
наступает продолжительный, практически пожизненный иммунитет. АТ появляются на 15-
21-й дн и достигают максимума на 3-й дн.
С профилактической целью в ряде стран (Англия, Нидерланды, США, Югославия, ФРГ,
Швеция, Румыния) применяют инактивированные вакцины. По обобщенным данным эти
вакцины оказались результативными для разных половозрастных групп животных, исклю-
чают возможность выделения вируса в окружающую среду и после 2-кратного введения жи-
вотным вызывают не менее чем у 85% животных напряжённый иммунитет продолжитель-
ностью до 1 г, индуцируя образование специфических АТ. За рубежом применяется также
около 20 живых вакцин на основе аттенуированных штаммов. Пассивные (материнские) АТ
816
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
к вирусу ИГСоб у щенков сохраняются до 6-нед возраста, поэтому 1-й раз их следует вакци-
нировать в 6 нед, а ревакцинировать в 4 мес (7,11).
Во избежание осложнений от применения живых вакцин ряд авторов (12, 14,15,16, 17)
предложили в качестве живого вируса специальный штамм возбудителя аденовироза собак
(тип 2). Он не вызывает общей поствакцинальной реакции, особенно у собак изнеженных
пород, не поражает глаза и почки, а в АГ отношении близок к вирусу ИГСоб.
Вакцину против ИГСоб чаще всего ассоциируют с другим компонентом - вирусом чумы
плотоядных. За рубежом широко известны эффективные 3-валентные вакцины, состоящие
из АГ вируса чумы плотоядных, инфекционного гепатита, бешенства или лептоспироза (21).
Фирма Мерье (Франция) на протяжении многих лет готовит вакцину Convac против чумы,
инфекционного гепатита и бешенства, а фирма “Рон-Пуленк” (Франция) - поливалентную
вакцину против чумы, инфекционного гепатита и парвовирусного энтерита собак. В состав
5-валентных вакцин (США, Франция) входят АГ вирусов чумы плотоядных, инфекционного
гепатита, бешенства, а также по два типа возбудителя лептоспироза (15,16,21).
В РФ разработана технология получения поливалентной лечебной сыворотки против
чумы плотоядных, инфекционного гепатита и парвовирусного энтерита собак. Получен так-
же аттенуированный штамм вируса инфекционного гепатита собак, на основе которого в на-
стоящее время готовят живую вакцину. Разработана и уже внедрена инактивированная вак-
цина против АВИ и парвовирусного энтерита собак.
Иммунитет у вакцинированных собак сохраняется немногим больше года. Новорождён-
ные щенки от вакцинированных собак с молозивом приобретают пассивный иммунитет, ко-
торый эффективно, но кратковременно (до 7-8 нед) защищает их от инфекционного гепати-
та. В случае появления болезни проводят общие ветеринарно-санитарные меры, в основу ко-
торых должен быть положен принцип комплексности: а) предупреждение заноса инфекции;
б) своевременное диагностирование; в) проведение мероприятий, направленных на ликви-
дацию болезни. Одно из важнейших профилактических мероприятий - поголовное исссле-
дование сыворотки крови животных на вирусный гепатит в РДП.
Завозить собак необходимо только из благополучных по гепатиту питомников, предва-
рительно подвергнув из тщательному клиническому обследованию. Предупреждение воз-
можного переноса инфекции обеспечивается своевременный изоляцией больных и подозри-
тельных по заболеванию собак, дезинфекцией клеток 10-15%-м р-ром свежегашёной извес-
ти или 2%-м р-ром NaOH, а также другими дезинфицирующими средствами, широко при-
меняемыми в ветеринарной практике.
Лечение. Специфического метода лечения ИГСоб нет. Поскольку при этой болезни в
патологический процесс вовлекается в основном печень, больным собакам вводят витамины
Вь В2, фолиевую кислоту и др. Витамин В12 рекомендуется больным животным вводить
внутримышечно в течение 4-5 дн, взрослым собакам по 400-500 мгк, молодым - по 250-300
мгк. Одновременно в течение 10-15 дн следует давать с кормом фолиевую кислоту из расчё-
та 0,05 - 0,06 мг на 1 кг массы животного. Во время лечения собакам рекомендуется вводить
также в рацион витамин С в дозе не менее 0,5 г, поскольку он способствует гликогенизации
печени, повышает её антитоксичную функцию, усиливает регенерацию почечных клеток.
Тиамин и рибофлавин дают в дозе 0,01 г, т.к. они участвуют в углеводном, жировом и бел-
ковом обмене. Витамин В12 в организме снижает жировую инфильтрацию и способствует
повышению функциональной способности печени. Часто используют группу витаминов. С
этой целью в рацион включают комплекс витаминов - ундевит или пушновит. Хорошие ре-
зультаты дают специфическая сыворотка от иммунизированных собак или лошадей, кото-
рую вводят больным в дозе 0,5 -1 мл на 1 кг массы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
52 Зак. № 171
817
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
1.Архипов Н.И. Патол. изм. при вир. бол. жив., М, Колос, 1984. 2.Баранов А.Е., Вестник
АМН СССР, 1983, 9 :88. З.Балабанова Г.Н. Вопр. вет. арахноэнтомол. H.-техн. бюллет. Тю-
мень, 1979, 16,59. 4.Балабанова Г.Н. Техн. бюлл. ВНИИ вет. энтомологии и арахнологии,
1979, Вып. 17 :77. 5.Белов А.Д. и др. Болезни собак, М., Агропромиздат, 1990. 6.Верхов-
ский О. А. и др. Тез. докл. Всерос. и.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :63. 7.Сюрин В.Н.
и др. Вопросы вет. вирусол., 29: 111. 8.Уласов В.И. Докт. дисс. ВГНКИ, 1990. 9.Уласов В.И.
и др. Пат. №3968466. от 10.04.95. Бюл.№10. Ю.Уласов В.И. и др. Ветеринария, 1989, 5 :64.
П.Фомина Н.В. Ад. вир. инф. ж-х., М, Колос, 1995. 12.Ackermann О. et al. Blauen hefte
Tierarztl, 1982, 65 :228. 13.Azetaka Masayuki. et. al. Jap J Sci (Huxon gzioraky gzaccu), 1988,
50, 4 :851. 14.Bass E.P. et.al. JAVMA, 1980, 177 :234. 15.Chappius G. Rec Med Vet, 1980, 156
: 109. 16.Chappius G. Comp Imm, Microbiol and Inf Dis, 1985, 8, 1 :29. 17.Curtius R. et al. Vet
Rec, 1983, 112, 5 :347. 18.Galeotti M. et.al. Boll Assoc Ital vet piccoli anim, 1988, 27, 1:11.
19.JunkerU. Schweiz Arch Tierheik, 1988, 130, 1 :629. 2O.Knezevic M. etal. Fetglos, 1982, 36,
2 :149. 21.Nieman H. etal. Prakt der Hunderklinic, Berlin, Hamburg, Parees, 1989 :828.
22.Olson Pekka K.B. et.al. Amer J Vet Res, 1988, 49, 9 :1460. 23.Phillips T.R. etal. Vet Res,
1989, 53, 2 :154. 24.Thronburg L.P. Am Anim Hosp Assoc, 1982, 18, 1 :21. 25.Whetstone C.A.
et.al. Am J Res, 1988, 49, 6 :778.
АДЕНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
ОВЕЦ И КОЗ
Аденовирусная инфекция овец (АВИО) - острая инфекционная болезнь молодых живот-
ных, проявляющаяся поражением респираторного и ЖКТ.
Широко распространена, но не повсеместно. По данным отечественных исследователей,
она часто проявляется в ассоциации с ПГ-3. В 1978 г. Писаренко и Соколов (10) впервые со-
общили о массовом заболевании ягнят смешанной этиологии: ПГ-3 и АВИ. Заболевание мо-
лодняка 2-3-мес возраста носило массовый характер, и в весенне-летний период в стадах ре-
гистрировалось от 30 до 70% серопозитивных животных с титрами АТ до 5 logj. Позднее (2,
13, 20) было показано, что средн КРС и овец широко циркулируют АВ, имеющие между со-
бой АГ родство. В хозяйствах Казахстана в парных пробах сывороток крови ягнят и овце-
маток постоянно наблюдали прирост АТ к АВ (7). Заболевание молодняка этой инфекцией в
различных зонах Туркестана достигало 30-60%, а летальность составляла от 10 до 30 % от
числа заболевших (14, 17). Широкая циркуляция АВИ установлена не только в хозяйствах
Казахстана (4, 7,9), но также в Узбекистане (9) и Таджикистане (1). Рахмедов (14) в 1982 г.
, исследуя овцематок 5-6-летнего и ягнят 4-5-мес возраста, обнаружил АТ к вирусу ПГ-3 у
овцематок в титрах 1:8 - 1:64, у ягнят - 1:16- 1:64 и более и к АВ у овец и ягнят в титре
1:32, причём эти титры в разных возрастных группах варьировали от 30 до 60%. В 1980 г.
(6) обнаружены АТ к АВ овец и ПГ-3 с помощью РСК и РИГА в 61% случаев в титрах 3-8
logj, причём в молозиве они составляли 5-8 logj. В овцеводческих комплексах Республики
Марий Эл установлено, что 25-32% проб сыворотки крови овец реагировало положительно
в РДСК на АВ-АГ; титр АТ составлял 1:5 - 1:20 (8).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Анализируя статисти-
ческие и эпизоотологические данные заболеваемости и падежа овец от пневмонии установ-
лено, что у взрослых овец характерные для АВ поражения органов дыхания, пищеварения,
конъюнктивиты встречаются редко, вероятно, потому, что мелкий рогатый скот является
носителем АВ, вызывающих бессимптомные инфекции у взрослых и острое течение болезни
у молодняка (11,12)..
818
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Заболевание овец, вызываемое ассоциацией 2-х вирусов (адено- и парагриппа), клини-
чески протекало более тяжело, чем моноинфекция. Оно сопровождалось лихорадкой до
41,5°С и выше, у некоторых животных проявляется диареей. Продолжительность икубаци-
онного периода от 3 до7 дн, затем на 10-12-й день развивались респираторные явления: слё-
зотечение, ринит и воспаление слизистых оболочек верхних дыхательных путей. В начале
болезни обычно наблюдались истечения из носа в виде слизистого, серозно-слизистого и за-
тем слизисто-гнойного экссудата, учащённое сердцебиение, затруднённое дыхание, депрес-
сия, сухой кашель, одышка, тимпания, диарея, уменьшалось количество актов жевания, или
же они полностью отсутствовали. Животные плохо поедали корм, а некоторые отказывались
от него. Инфекционный процесс был острым, подострым, хроническим и латентным. Тече-
ние болезни зависело от зоологических и ветеринарно-санитарных условий и вирулентности
полевых штаммов (25, 28, 32, 41, 42). Клинические признаки были наиболее выражены у
ягнят 2-3-мес возраста с преимущественным поражением органов дыхания и пищеварения.
В случаях секундарной инфекции, у больных животных появляются рецидивы в виде повы-
шения температуры и обострения воспалительных процессов (25). В отдельных случаях у
ягнят болезнь сопровождалась диареей в течение 7 дн, на 7-10-й дн она прекращалась, а
респираторные симптомы становились хроническими. Последнее также зависит от серотипа
АВ, его групповой принадлежности и сопутствующих бактериальных и зоогигиенических
факторов.(18,25,19,26).
Патогенез. Развитие патологического процесса при АВИО включает 5 основных фаз
(29): 1-ая фаза - репродукция вирусов в клетках дыхательных путей в результате заражения
или активации латентной инфекции, вызванной другими вирусами. Хроническая АВИО ча-
ще всего активируется вирусом ПГ-3; 2-ая фаза - это вирусная и токсикоаллергическая ре-
акция со стороны различных систем и внутренних органов; 3-я фаза - поражение дыхатель-
ных путей с преимущественной локализицией процесса в различных отделах дыхательного
тракта; 4-я фаза - бактериальные осложнения со стороны дыхательных путей. Эта фаза про-
текает длительно и тяжело; 5-я фаза - патологический процесс подвергается обратному раз-
витию, однако, при АВ- и парагрнппозной инфекциях болезнь может приобретать латентное
или хроническое течение. АВИО обычно генерализуется через лимфоидную систему и влия-
ет на иммунную систему организма.
При тяжёлой форме болезни температура после 1-3-дн повышения и снижалась до нор-
мы и через разные промежутки времени (чаще на 10-15-й дн) вновь резко повышалась до
40,1-41,4°С и длительно удерживалась на этом уровне. Дыхание учащалось до 80-98 движе-
ний, в углах глаз образовывались корочки. Истечения из носовой полости становились сли-
зистыми, понос продолжался, у животных отдельных видов отмечалось нарушение коорди-
нации движений. Американские исследователи обнаружили у 7-дн ягнят диффузный проли-
феративный бронхит, бронхиолит и пневмонию (33,34). Во многих клетках эпителия лёгких
наблюдали кариомегалию с внутриядерными включениями, а в нижних отделах лёгких и
альвеолах обнаружили накопление мёртвых клеток и нейтрофилов.
При вскрытии вынужденно убитых ягнят обычно находили выраженную гиперемию
верхних дыхательных путей, в верхушечных и сердечных долях лёгких участки ателектаза с
мелкими очагами катарального воспаления; у 50% больных ягнят был установлен катараль-
но-геморрагический гастроэнтерит. После переболевания (к 6-7-дн возрасту) 77% сывороток
ягнят реагировали в РИГА в титрах 3-5 logz. При создании необходимых условий содержа-
ния и кормления ягнят болезнь на этой стадии, как правило, заканчивалась выздоровлением
без лечебного воздействия. Однако 1-я стадия заболевания может быть осложнена пасте-
реллами. В таких случаях наступает 2-я осложнённая стадия. При ней на вскрытии отмеча-
ется сливная лобулярная пневмония до полного поражения долей лёгких с переходом ката-
рального воспаления в гнойную форму.
52*
819
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
При вскрытии павших ягнят, находившихся на откорме (54), наблюдали катаральное
воспаление верхушечных долей лёгких, которые были слегка увеличены и уплотнены, осо-
бенно сердечные доли. Слизистые оболочки носа, гортани, глотки, трахеи были воспалены,
гиперемированы, покрыты слизисто-серозным или слизисто-гнойным секретом. На слизи-
стой оболочке желудка тонкого кишечника местами встречались точечные кровоизлияния.
Наблюдалось увеличение заглоточных, бронхиальных, средостенных и брыжеечных лимфо-
узлов, в отдельных случаях в корковом слое почек отмечались изменения с неясными гра-
ницами (28, 49, 54).
Патоморфологические изменения в лёгких и почках наблюдали и при эксперименталь-
ном заражении 10-дн ягнят. Гистологические поражения в эпителии лёгких и почек выявля-
лись на протяжении 60-75 дн (27, 51, 54).
Экономический ущерб, чётко и обосновано отнесённый только к АВИО, никем в наших
странах не установлен, поскольку этой инфекции сопутствовали ПГ-3, микоплазмоз, хлами-
диоз, паратифозная и пастереллезная инфекции. Поэтому все информативные данные отече-
ственных исследователей относятся не столько к аденоинфекции овец, сколько к возбудите-
лям, вызывающим пневмоэнтериты ассоциированной этиологии. По данным венгерского
исследователя S. Belak, экономический ущерб в хозяйствах этой страны от АВИО составлял
большую часть экономических потерь в овцеводстве. Во время вспышек от инфекции поги-
бало 30-40% ягнят-сосунков и 10-15% откормочных ягнят. Потери также отмечались и при
хроническом, латентном течении АВИО. Даже при инапарантной форме АВИО мясо откор-
мочных ягнят не использовалось в пишу и утилизировалось (25).
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые вирус был изолирован из фекалий в 1969 г. в Шотландии. Выделенные изоля-
ты были отнесены к 3-м АГ типам АВ. Позднее АВ был выделен в Австралии. Шотланд-
ский штамм был идентифицирован как АВ 4-го типа. В октябре 1973 г. в хозяйствах Венг-
рии от овец был изолирован шт. Het/З из носовых истечений 6-8-нед ягнят-мериносов со
слабыми респираторными симптомами. Стадо ягнят не имело контактов с КРС. Шт. Het/З
легко был отличим от других прототипных штаммов овечьих АВ и оказался близок (но не
идентичен) типу 2 бычьего АВ. Шт. Het/З оказался этиологическим агентом болезни. Изуча-
лись репликация шт. 7769 АВ овец и иммунологический ответ на него без развития клини-
ческих признаков болезни. Возможно, данный штамм вызывает заболевание только в ком-
плексе с другими агентами инфекционной природы. В 1988 г. от сенегальских козлов было
выделено 5 штаммов вируса, которые были отнесены к серотипу 5 (19, 52).
Морфология и химический состав. Вирус содержит ДНК, вирионы размером 62-77
нм и имеют форму икосаэдра; частицы обычно 6-гранные, хотя отдельные из них 20-
гранные, имеют кубический тип симметрии. Вирионы не имеют наружной липопротеиновой
оболочки, не содержат липидов и гликопротеидов. Капсид их состоит из 252 капсомеров.
Мол.м. ДНК АВ овец составляет 23,3 МД, она на 5-6 МД больше мол.м. ДНК АВ КРС се-
ротипа 2, что еще раз подтверждает наличие генетических различий АВ животных обоих
видов (28). В этих исследованиях были использованы, как референтные штаммы 5-и прото-
типных штаммов овечьих АВ и прототипный шт. № 19 типа 2 бычьего АВ. Плавучая плот-
ность полных вирионов овечьего АВ при центрифугировании в градиенте плотности CsCl -
1,333 г/см3. Значительное различие было также обнаружено и в поведении бычьего типа 2 и
овечьего прототипного штамма. Бычий шт. 19 при ультрацентрифугировании показал, по
крайней мере, одну полосу, в то время как овечьи шт. выявили 3 полосы неполных вирус-
ных частиц. Различия были обнаруженны и между вирусами 2-х видов хозяев. Был под-
твержден факт, что структура неполных, дефектных вирусных частиц обоих вирусов может
различаться в зависимости от вида хозяина (28).
820
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
В литературе нет данных по сравнительному изучению ДНК 2-х типов АВ с применени-
ем проназы. Заметные отличия были установлены между нуклеиновой кислотой бычьего АВ
(типа 2) и штаммами овечьих АВ. Мол.м. ДНК бычьего АВ оказалась на 5-6 МД меньше
таковой АВ овец. Структурные белки вириона были проанализированы электрофорезом в
ПААТ. Мол.м. гексона - 105 кД, однако она оказалась более низкой у овечьих и бычьих
штаммов по сравнению с массой ДНК АВ человека. Были также обнаружены значительные
различия между структурными белками полных и неполных частиц.
Устойчивость. АВ овец термостабильны. Венгерские штаммы их выдерживали 30-мин
прогревание при 56°С, но заметно снижали при этом инфекционную активность. АВ овец
(как и другие АВ) устойчивы к эфиру, хлороформу, фреону-113, трипсину, а также к изме-
нению pH от 3,0 до 9,0 (19, 5, 23), чувствительны к 5%-ному р-ру фенола, 1%-ному р-ру
хлорамина, 3%-ной перекиси водорода, этиловый спирт и формалин их инактивируют. Ус-
тойчивость АВ к физическим и химическим факторам способствует длительному сохране-
нию их во внешней среде, а это увеличивает степень риска инфицирования животных и че-
ловека (19).
АГ структура. Принципиальных отличий в АГ структуре АВ овец и КРС нет.
АГ активность. У овец-реконвалесцентов выявлены 3 основных класса Ig: G, М, А (17,
37, 48). АТ классов IgA и IgG играют важную роль в защите организма овец от АВ, прони-
кающих в организм воздушно-капельным путем через слизистые оболочки. ВНА образуют-
ся при иммунизации животных как препаратами очищенного вируса, так и некоторыми кап-
сидными белками. У овец установлены закономерности формирования гуморального имму-
нитета при изучении распределения специфических АТ у ягнят разных возрастных групп и
взрослых овец. Так, у 3-мес ягнят на 5-й дн после заражения уровень IgA снижался, а со-
держание IgG повышалось. На 7-й дн после заражения в сыворотке крови ягнят АТ обнару-
живались в титре 3-4 loga, к 21-му дн титр АТ возрастал до 7 log?. Между тем, если до за-
ражения уровень IgA в носовых секретах составлял 0,38 мг/мл, то на 7-й дн после зараже-
ния он возрастал до 0,46 мг/мл; на 12-й дн - до 0,58 мг/мл. На 6-10 сут после заражения яг-
нят аденовирусом (М-15) были выявлены КСА в титрах 1:5 - 1:20 (12). Важное значение
имеет выявление динамики формирования колострального постинфекционного иммунитета
у ягнят. Поэтому сыворотки крови животных автор исследовал в РТГА на АТ к ПГ-3 и
РНГА к АВ овец (19). ВНА (в титре 1:8) впервые были обнаружены в крови ягнят, убитых
на 7-й день после заражения. В сыворотке, собранной позднее, титр их составлял 1:32 -
1:128. Тот же титр был обнаружен и с 100 ТСД50 шт. Het/З или бычьего АВ типа 2.
АГ вариабельность и родство. Род Mastadenovirus включает 6 серотипов АВ овец и 1
серотип АВ коз. Как уже указывалось, в 1962 г. в Сев. Ирландии впервые были выделены
изоляты АВ от овец, которые позднее, в 1971 г., (в PH) были подразделены на 3 серотипа. В
последующем, в Шотландии выделили АВ, не относящийся к этим 3-м прототипным штам-
мам (19). Венгерский изолят проявлял близкое родство с АВ КРС серотипа 2 (25, 28), а изо-
ляты, выделенные в Шотландии и Турции, были обозначены как АВ овец серотипов 4 и 5
(21). Далее, АВ удавалось выделить от овец в Новой Зеландии (22). Один из них был обо-
значен как серотип 6 АВ овец. Изоляты, выделенные в США, при исследовании оказались
родственными серотипам 5 и 6 АВ овец. Венгерские шт. Het/З и ORT/111, изолированные из
носовых секретов 1,5-2-мес мериносовых ягнят в период заболевания пневмонией, отлича-
лись от других серотипов АВ овец, о чем сообщили турецкие ученые.
При вирусологическом исследовании соскобов слизистой оболочки толстого кишечника
2-х коз, павших от чумы КРС в Нигерии, было выделено 2 изолята АВ - Ниг 75/1-445 и Ниг
75/2-840. Они были отнесены к различным серотипам. В 1988 г. в штате Луизиана, установ-
лена широкая циркуляция АВ среди овец, где были выделены шт. PTS-151 и PTS-42 в ассо-
циации с вирусом парагриппа-3 и респираторно-синтициальным вирусом. В АГ отношении
821
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
штаммы оказались сходными с изолированными из носовых секретов и фекалий овец в Ав-
стралии, Венгрии, Новой Зеландии, Болгарии, Турции и Египте. Шт. АХ-2 и АХ-4 АВ изо-
лировали в Монголии от ягнят с хроническими пневмониями. В Австралии шт. Р/11537
оказался идентичным новозеландскому шт. WV-757 и был родственен АВ КРС серотипа 7.
В Индии были выделены шт. Д16 и А31 от больных ягнят с признаками пневмонии, кото-
рые отнесены к АВ серотипа 1. В Египте при исследовании парных проб сывороток крови
овец в PH выявляли серопозитивных животных к АВ 1-ой подгруппы, 1-го серотипа. Титры
сывороток составляли Г. 4 и 1:16. Среди больных пневмонией овец, завезенных из Франции
и Англии, болгарские ученые установили наличие ВНА к АВ в тигре 1:2 и 1:32. Француз-
ские ученые выявляли специфические АТ к АВ в сыворотке крови овец, находившихся в
агональном состоянии, у которых ранее отмечалась алиментарная дистрофия, миопатия,
гельминтозы и пневмония. Таким образом, АВ овец были выделены ие только во многих
странах мира, ио, что самое главное, оии оказались не идентичны в АГ отношении.
По сообщению D.H. Davies и Humphreys в Северной Ирландии авторы изучали 9 серо-
типов АВ КРС, 5 - овец, 4 - поросят и 28 из 32 серотипов АВ человека в перекрестной PH,
проводившейся с целью изучения их АГ родства. Авторы показали, что все исследованные
ими вирусы относятся к различным серотипам. Подобный результат был получен авторами
в Новой Зеландии при сравнении 2-х шт. WV 419/75 и WV 757/75, выделенных от ягнят.
Среди овечьих АВ несколько особняком оказался шт.7769, выделенный от овец в Северной
Ирландии в 1974 г. Помимо АГ отличия от 6 известных серотипов АВ овец указанный
штамм медленно распространяется среди овец (36,37).
Таким образом, в настоящее время общепризнано, что АВ овец имеют 6 серотипов,
причем вирусы типов 1, 2 и 3 имеют общий КС АГ, который отличается от АГ типов 4, 5 и
6, на основании чего АВ овец делятся иа 2 группы (3,5,21,25,34,35,47).
В РДП и РСК было четко показано, что все овечьи штаммы содержат общий для АВ
млекопитающих АГ, а ИФ подтвердила это положение. Пробы сывороток, полученные от
овец при массовых обследованиях, содержали ПА, которые реагировали исключительно с
АГ бычьего АВ подгруппы 2. Это подтверждает и существование подгруппы 2 среди овечь-
их АВ. В PH и РЗГА в равной степени установлена близкая АГ связь между определенными
овечьими изолятами и бычьим АВ типа 2. Из этого, видимо, следует, что для определения
типа вьщелеиного изолята необходимо учитывать ие только принадлежность вируса к виду
хозяина, но также и его принадлежность к роду Mastadenovirus.
Степень родства между АГ АВ овец, КРС и человека изучали не только в серологиче-
ских реакциях, но и сравнением их ДНК. Выделение последней проводили ультрацентрифу-
гированием, фрагментировали методом ресгрикации ферментами BAM-HV, SAL-V и ЕСО-
RV. Полученные при этом фрагменты ДНК разделяли путем агарозно-гелевого электрофо-
реза (25, 26, 28, 29, 31). В итоге исследователи показали, что мол.м. геномов аденовирусов
овец и КРС меньше генома АВ человека. Различия также были обнаружены и между струк-
турными белками полных и неполных вирусных частиц (28, 29).
ГА свойства. Овечьи АВ тестированы по ГА активности для того, чтобы определить
все ли они обладают таким свойством, и если да, то сходна ли их ГА-активность с активно-
стью близкородственных АВ КРС. Среди испытанных эритроцитов крыс, обезьян, человека
(нулевой (0) группы), КРС, овец и кур, только эритроциты крыс агглютинировались всеми
овечьими АВ. При тестировании бычьих штаммов результаты оказались аналогичными.
Интересно, что овечьи штаммы ие вызывали АГ эритроцитов овец, в то время как бы-
чий прототипный штамм типа 2 вызывал незначительную АГ эритроцитов этих животных.
Было также отмечено, что штаммы АВ ие вызывают агглютинацию эритроцитов телят, в то
время как бычий штамм типа 2 вызывал. Овечий и бычий штаммы АВ в равной степени ие
вызывают АГ эритроцитов макаки резус (Macacus rhesus), кур и человека.
822
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
На основе РГА с эритроцитами крыс РЗГА оказалась типоспецифической и её результа-
ты коррелировали с результатами PH. Шт. 14-15 АВ овец агглютинировал эритроциты бе-
лых мышей (титр 1:2) и белых крыс (титр 1:32) (12).
Таким образом, исследование ГА-свойств дало возможность дифференцировать сероло-
гические близкородственные овечьи и бычьи штаммы, что может быть использовано как
наиболее простой и подходящий внутритиповой дифференцируюший маркер овечьих и
бычьих штаммов.
Экспериментальная инфекция. Поздеева Р.Д. и др.(11) экспериментально воспроиз-
вели АВИ на ягнятах романовской породы 1-мес возраста, предварительно исследованных
на отсутствие специфических АТ к ПГ-3, АВ и хламидиям в РТГА и РДСК. Помимо этого,
подобные результаты были получены многими авторами (10, 15, 16, 25, 26, 44, 45, 46, 47).
Все исследования однозначно свидетельствуют о том, что АВ вероятные возбудители син-
дрома слабости молодняка, что подтверждалось и патологоанатомическими изменениями
внутренних органов (27,30). Ягнят, выращенных без молозива, заражали в нос и трахею 2-
мя штаммами овечьего АВ типа 5 прототипным шт. SAV и РА/8 изолированном при эпизо-
отии острого пневмоэнтерита. Ягнята, заражённые шт. SAV, не имели характерных призна-
ков болезни, кроме ринита и интерстициальной пневмонии. У ягнят, заражённых шт. РА/8,
отмечали яркую клиническую картину болезни с поражением дыхательных путей, с выра-
женными патологоанатомическими изменениями. Шт. РА/8 вызывал поражение почек
(повреждение клубочков - Цбулонефроз) и печени (гепатит). Аналогичная патогенность бы-
ла установлена и у венгерского шт. АВ овец - Het/З. Помимо гиперемии и поражения респи-
раторного тракта, указанный штамм у опытных ягнят вызывал дисфункцию кишечника и
проявлял выраженную контагиозность. Как видно, 2 овечьих шт. АВ, изолированные из но-
совых истечений ягнят с респираторными симптомами или из кала при латентной инфекции
клиничеки здоровых овец, чётко различались по патогенности (26).
Интересны в научном и ценны в практическом отношении исследования по эксперимен-
тальному воспроизведению заболевания у молозивных ягнят, заражённых аденовирусом и
Pasteurella haemolytica. При смешивании вирусно-бактериальной инфекции симптомы бо-
лезни со стороны респираторного тракта были более продолжительными (9 дн) и интенсив-
ными. Аналогичные опыты проводились в Новой Зеландии (36,52).
Признание близкой связи между определёнными овечьими изолятами и бычьим АВ ти-
па 2 наводит на мысль, что инфицирование ягнят и телят происходит овечьим изолятом.
Бычий АВ типа 2, подобный овечьему изоляту (шт. Het/З), также вызывал эксперименталь-
ную инфекцию у ягнят н телят (55). У животных симптомы болезни были сходны. В этом
свете превалирующая концепция относительно абсолютной хозяйской специфичности АВ
нуждается в пересмотре.
Культивирование. АВ овец размножаются в первичной культуре различных тканях че-
ловека н животных, перевиваемых линиях эпителиальных клеток, опухолевых и нормаль-
ных тканей людей, животных, в том числе птиц (2). Большая часть репродуцируемого АВ
содержится в цитоплазме инфицированных клеток. ЦПИ обычно наблюдаются по перифе-
рии эпителиального пласта, клетки набухают и увеличиваются. При заражении однослойной
культуры клеток обычно уже через 24 ч инкубации в ядрах заражённых клеток появляются
вакуоли, набухают ядра и выявляются внутриядерные тельца-включения (19, 29). Сроки на-
ступления ЦПЭ зависят от вида культуры, штамма вируса и множественности заражения.
АВ овец (шт. ORT/111 и Gy/14) вызывал ЦПИ на 16-й дн. Все штаммы АВ овец, кроме
ORT/111, реплицировались при температуре 40°С (25, 26). Два индийских изолята АВ овец
(Д16 и Д16/31), выделенные от ягнят, вызывали ЦПЭ в культурах клеток почек и лёгких
эмбрионов овец и коз, а также в культурах тестикулов ягнят и козлят. Максимальный титр
вируса в инфицированной культуре сохранялся до 60 ч после заражения (1, И. 38, 39, 40).
823
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
По мнению венгерского исследователя Belak (31), характеристика ЦПЭ не связана с сероти-
пом АВ, а скорее всего со штаммом, который в опытах вызывал агрегацию клеток в виде
гроздей, в то время как другие штаммы индуцировали диффузное округление и набухание
клеток.
При сравнении циклов репликации разных штаммов в стационарных и роллерных куль-
турах было подтверждено различие между овечьими штаммами АВ. Установлено различие
овечьих шт. ОРТ/111 и Gy/14 в сроках репродукции, что, по мнению автора, имеет значение
в производстве вакцины. Для цикла репликации АВ овец не имеет особого значения возраст
(0-7 дн) используемой культуры клеток почки эмбриона овец. Наибольшая скорость репли-
кации каждого из них проходила при 40°С.
ЦПЭ автор изучал как в нативных и окрашенных препаратах под световым микроско-
пом, так и в ультратонких - под ЭМ. Кроме того, репликацию этого вируса изучали методом
непрямой ИФ. Используя этот метод, Belak показал, что в заражённой культуре вирусный
АГ появлялся в ядрах клеток через 8 ч после заражения, и к 16 ч уже около 90% клеток об-
ладали внутриклеточной флюоресценцией. Данный тест оказался пригодным для постанов-
ки быстрого диагноза на пневмоэнтериты АВ этиологии у ягнят (25).
Особенности внутриклеточной репродукции. Принципиальных отличий в особенно-
стях репродукции овечьих и бычьих АВ нет. На основании морфологических свойств изоля-
тов WV 419/75 и WV 757/75 пришли к заключению о полном сходстве овечьих АВ с из-
вестными АВ КРС.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источник инфекции - больные животные. При этиологическом анализе вспышек заболе-
вания кроме овечьих АВ могут выделяться бактерии и другие вирусы - реовирусы и вирус
ПГ-3 как секундарные агенты во время вспышек респираторных и кишечных заболеваний
ягнят.
Массовые поражения органов дыхание у ягнят наблюдаются летом. Вирус ПГ-3 и АВ
больные животные выделяют с секретами и экскретами. Инфицирование происходит воз-
душно-капельным путём (10).
ДИАГНОСТИКА
При АВИ овец она принципиально ничем не отличается от порядка и методов, приме-
няемых при диагностике АВИ КРС. Проводят выделения, индикацию и идентификацию ви-
руса, серодиагностику текущей или уже прошедшей инфекции (ретроспективная диагности-
ка) и пр. (10,11,12).
ЦПД АВ проявляют на протяжении 1-7 слепых пассажей. В 1-ом пассаже изменения
культуры клеток обычно наступают на 7-10-й, а в последующих - на 3-5-й дн. Они характе-
ризуются округлением клеток и, обычно через 7 дн, полной деструкцией монослоя. Ягнята,
заражённые путём инстилляции в нос и трахею вируссодержащего материала, обильно вы-
деляют вирус с носовыми истечениями и фекалиями в течение 8-9 дн после заражения. Об-
наружение поражений в почках и одновременное выделение вируса с мочой дополняют ин-
формацию о нефропатическом действии АВ, которые раньше наблюдались у овец и встре-
чались очень редко у животных других видов.
Вирусный АГ в смывах из носовой полости, а также в суспензии органов больных и
павших животных обнаруживают ИФ (11). Обычно групповую идентификацию изолята
проводят с помощью РСК и РДП, а титрование в PH. Выявление прироста АТ в парных сы-
воротках крови проводят с помощью РИГА, PH (5, 18, 19). При этом следует иметь в виду
данные Belak S. (31), полученью в Венгрии, где тип 1 овечьего АВ был причиной 4-х вспы-
шек, тогда как серотипы 4 и 5 вызывали лишь 1 вспышку. Кроме того, 5 вспышек инфекции
были вызваны несколькими овечьими серотипами и в АГ отношении были близко связаны с
бычьим АВ типа 2. Эти наблюдения важны, поскольку ещё мало известно об естественном
824
Г пава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
распространении АВ у животных разных видов или, иными словами, о чувствительности
одного вида хозяев к близкородственным АВ другого вида. Результаты экспериментов по
выделению вируса и эпизоотологические наблюдения подтверждают факт, что полевые
штаммы могут играть этиологическую роль при вспышках как респираторных заболеваний,
так и энтеритов овец (19).
• Серологическая диагностика. В Шотландии проводили серологические исследования
(в РДП и PH) сывороток крови 600 овец. В итоге 83% проб содержали ВНА против одного
или нескольких серотипов АВ, и лишь 17% сывороток содержали ПА. При исследовании
750 проб сывороток крови КРС и 120 проб сывороток крови овец из зон, где регистрировали
АВИ, преципитирующие АТ к АВ обнаружили лишь у 25,1% коров и 15,8% овец. Belak (25)
в Венгрии часто обнаруживал АТ у овец к АВ с помощью РТГА с 1%-ной суспензией эрит-
роцитов крыс. В овцеводческих хозяйствах республики Марий-Эл были выявлены серопо-
зитивные животные к вирусам ПГ-3, АВ, а также к хламидиям в РСК и РДСК (7, 10, 14).
Диагноз на 2-й стадии болезни ставят при дополнительном бактериологичеком исследова-
нии. В этом случае часто из очагов поражения лёгких выделяют высокопатогенные культу-
ры Pasteurella multacyda, Р. hemolytica. При более тяжёлых процессах, кроме пастерелл, вы-
деляют палочковую и кокковую микрофлору. Иногда массовые пневмонии заканчиваются
пастереллезом. При этом диагноз ставят с использованием всех методов эпизоотологии. При
дифференциальной диагностике АВИ овец необходимо исключить ПГ-3, диарею, пастерел-
лез, паратиф, диплококковую инфекцию, стронгилятоз Ц0).
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
У овец после инфекции создаётся активный иммунитет против АВИ. Высокой противо-
вирусной эффективностью у переболевших или вакцинированных овец обладают секретор-
ные АТ слизистой оболочки респираторного тракта. На устойчивость к АВИ влияют раз-
личные специфические и неспецифические факторы (48). В полевых условиях среди взрос-
лого поголовья овец иммунитет поддерживается за счёт постоянного инфицирования широ-
ко циркулирующими серотипами АВ. Первичные АВИ у ягнят в первые дни жизни возни-
кают среди иммунизированных животных, а повторные инфекции - у овец в результате от-
сутствия в достаточном титре АТ. Было показано, что выращивание на промышленной ос-
нове ягнят романовской породы приводило к угнетению гуморального иммунитета, к сни-
жению содержания 1g класса М и G и фагоцитарной активности нейтрофилов. Выгульно-
пастбищное содержание овец нормализовало иммунологический статус организма и повы-
сило их продуктивность. Постинфекционный иммунитет у овец-реконвалесцентов продол-
жался до 12 мес и в известной степени зависел от патогенности эпизоотического штамма
вируса и возраста животного. Переболевшие овцематки сообщили потомству колостральный
(материнский) иммунитет, предохраняя потомство в течение 2-2,5 мес (14,15). Следует учи-
тывать, что до приёма молозива АТ в сыворотке крови ягнят отсутствуют и появляются
лишь у 64% ягнят на 5-й дн после выпаивания молозива, причём титр сывороточных АТ у
таких ягнят составлял 3-8 log2. К 3-мес возрасту было выявлено 10% положительно реаги-
рующих животных с титром АТ 2-3 log2. Среди 6-мес ягнят АТ к АВ были выявлены у 46%
животных с титром 5-6 log2 (6). У ягнят с выраженным колостральным иммунитетом до 3-
мес возраста клинические признаки болезни могут и не проявляться (10,14, 16, 22). Однако
на фоне снижения колострального иммунитета среди ягнят возникали вспышки респиратор-
ного заболевания. Установлено, что из 140 обследованных животных 44% овцематок во
время окота давали положительную реакцию в РТГА и в титрах 1:16- 1:32, 12% в РИГА в
титрах 1:8 - 1:32 и 18% к хламидиям в титрах 1:16 - 1:64 (19).
Ввиду отсутствия у нас вакцины для специфической профилактики АВИ овец, практиче-
ские и научные сотрудники широко применяют сыворотки реконвалесцентов и гипериммун-
ные поливалентные сыворотки. Применение моно-, би- и трёхвалентных сывороток позво-
825
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
лило снизить заболевание овец от пневмоэнтеритов инфекционной природы (в т.н и АВ-) в
4-5 раз. На Ставрополье вводили ягнятам сыворотку реконвалесцентов и получили сохран-
ность 97,2% , а в контроле она составляла 79,8% (10). Аэрозольное применение бивалент-
ной сыворотки (против ПГ-3, хламидий) с интервалом 10-12 дн позволилило сократить за-
болеваемость ягнят более, чем в 6 раз (13).
В Венгрии в 1967 г. впервые были разработаны и применены живая и инактивирован-
ная вакцины из шт. ТНТ-62 серотипа 4 АВ КРС, широко распространённого в этой стране
(23, 24). При применении в этой стране инактивированной адсорбированной гидроокисьа-
люминиевой бивалентной вакцины ягнятам 4-мес возраста формировался иммунитет: по-
ствакцинальные АТ выявлялись в титрах 4-5 logz, на 16-й дн после вакцинации - 8-9 logz и
на 30-й дн - 6-8 logj (27). В 1962 г. в Англии была изготовлена ассоциированная инактиви-
рованная бивалентная формолвакцина, содержащая АВ КРС серотипа 3 (WBR-1) и вирус
ПГ-3. Однако, эта вакцина не нашла широкого применения, так как uit.WBR-1 обладал он-
когенными свойствами (53). Во Франции успешно применяют ассоциированные вакцины
против ИРТ, АВ, ПГ-3, РЕО и вирусной диареи. Во многих странах применяют ассоцииро-
ванные вакцины, содержащие вирусы ПГ-3, вирусной диареи, РЕО, ИТР и др. С положи-
тельным результатом в Австралии испытывали опытные образцы поливалентных вакцин,
содержащие АВ, вирусы ПГ-3 и диареи (19,55).
Интересные исследования по оценке иммуногенности инактивированной вакцины
(“Овцевак”) провели венгерские учёные, определяя титр колостральных АТ у самок мышей.
После оплодотворения их иммунизировали внутрибрюшинно, иммунологический ответ оце-
нивали в PH. В результате были выявлены АТ в потомстве мышат, причём иммунологиче-
ский ответ у такого потомства от иммунизированных маток был ниже, чем у потомства от
неиммунизированных (43). В 1980 г. V.Palfi и S. Belak (50) описали так называемый фено-
мен recall, суть которого состоит в том, что уровень активных АТ на данный серотип повы-
шается после заражения животного другим серотипом, обладающим большими АГ-
детерментами. АГ действие одного серотипа может вызывать recall, т.е. образование АТ бо-
лее чем на этот серотип. Авторы при этом считают, что различие в ГА свойствах овечьего
АВ серотипа 4 - не основное при классификации этих вирусов и делении на серотипы. Фе-
номен recall имеет большое значение при специфической профилактике АВИ и, в частности,
при вакцинации суягных овцематок, у которых повышается уровень не только гомо-, но и
гетеротипных АТ как следствие ранее циркулировавших инфекций. Благодаря этому рож-
дающиеся ягнята будут защищены даже против тех серотипов, которых нет в вакцине, но
которые циркулируют в вакцинированном поголовье.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Амирбеков М. и др. Бюлл. ВИЭВ, М, 1996, 62 :20. 2.Букрииская А.Г. Вирусология, М.,
Медицина, 1986, 332. 3.Вертинская К.К. и др. Сб. науч. тр. MBA, 1976, 87, 68. 4.Глухов М.
И. и др. Вестник с.-х. науки Казахст. , 1985, 10, 71. 5,Гуненков В.В. Тр. ВГНКИ, 1982 :20.
б.Дюбченко И.И. и др. Тез. докл. Всес. и. конф, по инфекц. параз. и незар. Бол. овец. Чита,
1980 :42. 7.Какимов С.Ф. и др. Вести, с.-х. науки Казахстана, 1983, 6, 61. 8.Караваев Ю.Д. и
др. Овцеводство, 1980, 12, 31. 9.Курбанов Р . Матер. 9-й н.-пр. конф., М., 1986 :73.
10.Писаренко Н.И. и др. Бюл. ВИЭВ, М., 1982, 47 :56. П.Поздеева Р.Д. и др. Бюл. ВИЭВ,
М., 1980, 40 :10. П.Поздеева Р.Д. Автореф. дисс. канд. вет. наук, М., 1981, 20. 13.Равилов
А.З. и др. Ветеринария, 1987, 3 :41. 14.Рахмедов Б.Ч. и др. Бюл. ВИЭВ, 1987, 64 :48.
15.Соколов М.Н. и др. Ветеринария, 1980, 8 :121. 16.Соколов М.Н. Вести, с.-х. науки, М.,
1980, 8:121. 17.Соколов М.Н. и др. Тр. ВИЭВ, 1987, 64 :49. 18.Сюрин В.Н. и др. Части, вет.
вирусол., М., Колос., 1979. 19.Фомина Н.В. Адеиовир. инф. жив., М. Колос, 1995.
2О.Хамадеев Р.Х. и др.Этиология и специфические меры борьбы с пневмоэнтеритами ягнят,
Казань, 1985, 70. 21.Adair В.М. et.al. Ach Virol, 1982, 74, 4 :269. 22.Adair В.М. et.al. Am
826
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Vet Res, 1985, 46, 4 :945. 23.Bartha A. et.al. Acta Vet Acad Sci Hund, 1970, 20, 4 :397.
24.Bartha A. et.al. Comp Immun Microbiol and Infect diseases, 1983, 6, 3 :189. 25.Belak S. Acta
Vet Acad Sci Hung, 1980, 28, 1 :47. 26.Belak S. et.al. Magyar Allatorv Lapja, 1980, 35, 5 :322.
27.Belak S. et.al. Междунар. с-х. ж-л, 1982, 2 :81. 28.Belak S. et.al. Arch Virol, 1983, 77, 2-4
: 181. 29.Belak S„ Nord Vet Med., 1985, 37, 4 :249. 30.Belak S. et.al. Virology, 1986, 153, 2
:262. 31.Belak S. et.al. Autorefer. “Magy allator v Lapia”, 1987, 42, 1 :35. 32.Caldora C. et.al.
Clin Veter, 1985, 108, 3 :144. 33,Cutlip R.C. et.al. Am J Vet Res, 1982, 43, 12 :2101.
34.Cultip R. C. et.al. Am J Vet Res, 1983, 44, 12 :2395. 35.Cultip R.C. et.al. Vet Pathol, 1986,
23, 5 :589. 36.Davies D.H. et.al. Vet Microbiol, 1981, 6, 12 :113. 37.Davies D.H. Infect and
Immun Farm Anim, Basel., 1985 :229. 38.Dubey C.S. et al. Indian J Anim Sci, 1985, 55, 8 :653.
39.Dubey C.S. et.al. Indian J Anim Sci, 1985, 55 10 :878. 4O.Dubey C.S. et.al. Indian J Anim
Sci, 1986, 56, 3 :301. 41.Florent G. et.al. Vet Microbiol, 1986, 11, 4 :309. 42.Frigo F.J. et.al. Vet
Mex, 1986, 17, 12 .116. 43.Hassan Bard, et.al. Magiar Allatorv Lapja, 1985, 40, 11 :680.
44.Lehmkuhl H.D. et.al. Am J Vet Res, 1984, 45, 2 :260. 45,Lehmkuhl H.D. et.al., Am J Vet
Res, 1984, 45, 3 :562. 46. Lehmkuhl H.D. et.al. Am J Vet Res, 1985, 46, 12 :2601. 47.Lehmkuhl
H.D. et.al. Amer J Vet Res, 1986, 47, 4 :724. 48,Morein B. Rapp. Inst husdjurseorade
sjukdomesgenet, 1981, 47 :12. 49.Palfi V. et.al. Zbl Vet Med Reine B, 1980, 27, 5 :345. 5O.Palfi
V. et.al. Magiar Allatorv Lapja, 1980, 35, 5 :332, 51.Palfi V. et.al. Zbl Vet Med Reine B, 1982,
29, 3 :231. 52.Peet R.J. et.al. Aust Vet J, 1983, 60 :307. 53. Tribe C. et.al. Vet Rec, 1986, 82, 15
:442. 54,Tuboly S. Magyar Allarorv Lapja, 1987, 42, 1 :34. 55.Werenue J Outlook Agr, 1985, 14,
3 :129.
АДЕНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ
СВИНЕЙ
Schweineadenovirus Infektion (нем.)
Аденовирусная инфекция свиней - хроническая (у взрослых животных) и острая - у по-
росят болезнь, проявляющаяся поражением, главным образом, респираторного тракта. Се-
рологическими исследованиями установлено широкое распространение инфекции и, вероят-
но, не только среди свиней (3). В Японии обнаружили нейтрализующие антитела к АВ сви-
ней типа 1 (шт. 25R), типа 2 (А47), типа 3 (6618), типа 4 (Мюнхен, 618), типа 5 (HNF70).
АТ к АВ типов 1-5 выявлены в 43,1, 63,7, 27,1 и 87,1% пробах соответственно (10).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. В основном инфекция
протекает бессимптомно. Эти вирусы ассоциированы с энцефалитом, пневмонией, пораже-
нием почек и диареей, хотя важность их как самостоятельных патогенов сомнительна. Не
известно, вызывают ли АВ свиней инфекцию у других видов, хотя свиньи могут быть инфи-
цированы АВ человека (1,2,3, За).
Референтный шт. свиного АВ типа 4 был изолирован из мозга свиньи с анорексией, эн-
теритом, нарушением координации движений, подрагиванием мышц, часто принимающей
лежачую позу. Другие штаммы того же серотипа были изолированы от свиней с респира-
торными и желудочно-кишечными признаками болезни (8). Другие серотипы также были
выделены от поросят с диареей (4, 5), однако АВ также довольно часто выделяли из фециса
клинически нормальных поросят. Хотя описанные поражения, связанные с АВ инфекцией, в
основном, основаны на экспериментальной инфекции, имеется несколько сообщений о по-
ражениях, вызванных аденовирусами в естественных условиях.
Поражения включают дистрофию почечных канальцев и расширение капилляров, что
сопровождается появлением обширных петехий. В энтероцитах и терминальной части то-
щей и подвздошной кишок при естественной инфекции обнаружены внутриядерные тельца-
827
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
включения (6,12). В эксперименте у инфицированных поросят обширные поражения описа-
ны только в лёгких; они состоят из областей ателектаза различных размеров. Микроскопи-
чески в лёгких обнаружена интерстициальная пневмония, характеризующаяся утолщением
альвеолярной перегородки, пролиферацией её клеток, некоторые из них содержат тельца-
включения; отмечена инфильтрация лимфоцитами, плазматическими клетками и гистиоци-
тами. При экспериментальном менингоэнцефалите свиным аденовирусом типов 1 и 3 полу-
чали хронические воспалительные изменения в печени, сердце, поджелудочной железе и
надпочечниках. В последующих работах кишечные поражения были вызваны свиным АВ
типа 3. Описана задержка роста ворсинок в нижнем отделе тощей и подвздошной кишок и
показали инфицирование энтероцитами при гистологическом исследовании, иммуноперок-
сидазном окрашивании и электронной микроскопии (6).
Экспериментальное изучение патогенеза болезни, вызванной различными шт. АВ (6),
подтверждает, что основные места репликации вируса - миндалины и в меньшей степени
тонкий кишечник. Вирус широко распространяется по различным тканям, включая ЦНС,
лёгкие, сердце, печень, почки, селезёнку. Выделение его с фекалиями продолжалось в тече-
ние нескольких недель после инфицирования. По мнению исследователей, он персистировал
в почках и других тканях инфицированного животного. Отдельные исследования показали,
что АВ могут играть роль в патогенезе бактериальной инфекции респираторного тракта.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Впервые АВ свиней был изолирован из смывов с ректальных тампонов у свиней, боль-
ных диареей, из головного мозга свиней, больных энцефалитом. В дальнейшем свиные АВ
были изолированы из различных источников, включая стада, поражённые вирусом чумы, из
кала и почечных тканей свиней при использовании их для приготовления культур клеток.
Морфология и химический состав. У аденовирусов свиней они сходны с таковыми
других аденовирусов (Рис. 127).
Устойчивость. Свиные АВ стабильны при pH 4 и при обработке хлороформом и эфи-
ром. Это - температуроустойчивые вирусы, они могут храниться более 10 дн при комнатной
температуре. Эффективные дезинфектанты для них - гипохлорид натрия, формальдегид,
компоненты фенола, этиловый спирт, гидроксид натрия. В жидком навозе вирусы инакти-
вируются аэрацией, а также при обработке гидроксидом кальция.
АГ структура. Содержат группоспецифический АГ млекопитающих, обнаруживаемый
в РДП и РСК.
АГ вариабельность и родство. О первом выделении вируса было сообщено ещё в 1964
г. С тех пор было определено ещё 4 серотипа АВ свиней (9). В настоящее время они обще-
признаны, причём шт. серотипа 4 наиболее широко распространены как в европейских
странах, так и в Северной Африке. Для обнаружения связей между свиными АВ других ви-
дов обычно проводят PH. В этой реакции было установлено 4 серотипа АВ свиней: серотип
1 (шт. 25R), серотип 2 (шт. А47), серотип 3 (шт. 6618), серотип 4 (шт. 618). Очевидно суще-
ствуют и другие серотипы (8,7).
Референтные антисыворотки готовят для каждого серотипа. В реакции перекрёстной
нейтрализации не было установлено связи между шт. выделенными в Англии, и PAV-4, но
была установлена связь между 7-ю новыми шт. и несколькимим PAV-1 - 3. Двенадцать
вновь выделенных штаммов не проявляли чёткой перекрёстной нейтрализации с PAV-1 - 4,
собачьми АВ CAV-1, CAV-2 и бычьими АВ BAV-3. Более детальное изучение новых изоля-
тов позволило установить большое число достоверных серотипов и прояснило внутритипо-
вые вариации или рекомбинации внутри этой группы вирусов (2,3).
Культивирование. Свиные АВ удаётся легко культивировать в первично-трипсини-
зированной культуре клеток ПС, линиях клеток свиней. Сообщалось об успешном культи-
вировании этих вирусов в культуре клеток почки телят, человека и меланомных клетках со-
828
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
баки. В неокрашенных культурах ЦПЭ характеризуется увеличением и округлением клеток
с последующим их отделением; в окрашенном монослое наблюдали внутриядерные тельца-
включения. Ультра- структурные исследования инфицированных клеток показали, что вирус
расположен внутри ядер, иногда в кристаллической форме. Он лучше всего размножается в
культуре клеток почек свиней, а серотип 4 относительно хорошо репродуцируется в культуре
клеток меланомы собак, но очень плохо - в культуре клеток КРС и человека .
ГА свойства. Все известные шт. свиных АВ типа 4 АГ эритроциты различных видов
животных: типа PAV-1 - эритроциты морской свинки, человека 0 группы и крыс при темпе-
ратуре 37 и 4°С, но эритроциты обезьяны и мыши только при температуре 4°С. PAV-2 и
PAV-3 вообще не вызывают гемагглютинацию.
Вирусемия, вирусовыделение и вирусоносительство. Вирус выделяется с фекалия-
ми, чаще всего у свиней в послеотъёмный период. Взрослые свиньи редко выделяют вирус,
так как они часто имеют высокий уровень АТ. Показано, что ни один свиной АВ не вызыва-
ет тяжёлой клинически выраженной болезни, сопровождающейся явными патологическими
поражениями, и что только при ассоциации с другими агентами наблюдаются клинически
выраженные пневмоэнтериты или энцефалиты. Спектр патогенности свиных АВ не изучен.
Экспериментальная инфекция. При экспериментальном заражении поросят АВ типа
4 отмечали диарею (5). Хотя при экспериментальном инфицировании поросят могут разви-
ваться поражения в головном мозге, лёгких, почках, однако клинические признаки болезни,
связанные с этими поражениями, не описаны. Интраназальная инокуляция вируса оказалась
наиболее эффективным методом воспроизведения экспериментальной инфекции. Свиной
АВ типа 4 в сочетании с Mycoplasma hyopneumania вызывает более тяжёлую пневмонию по
сравнению с раздельным их введением.(11, 13). АВИ может предрасполагать свиней к
пневмонии при ассоциации с Hemophilus parahemolyticus. Однако, экспериментальная
пневмония, вызванная свиным АВ типа 4, не утяжеляет пастереллёзную инфекцию. Более
достоверно патогенность свиных АВ показана при интраназальной инокуляции обычным
поросятам и поросятам-гнотобиотам вирусов PAV-2, PAV-3. У поросят-гнотобиотов в воз-
расте 1, 22 и 32 дня инфекция установлена в миндалинах и тонком кишечнике. Вирус можно
было изолировать из этих тканей на 5-18-й дн после заражения. Когда 10 эмбрионам и 17
SPF-поросятам менее чем 48 ч возраста инокулировали интраназально PAV-4, у них разви-
лась интерстициальная пневмония без симптомов. При вскрытии через 10-13 дн после за-
ражения отмечались поражения в виде внутриядерных телец-включений не только в лёгких,
но и в почках, щитовидной железе и лимфоузлах. Вирус часто изолировали из коры голов-
ного мозга, слизистой оболочки носа, миндалин, лёгких, и тощей кишки через 5-48 дн после
заражения. Позднее PAV-4 инокулировали поросятам-гнотобиотам орально и интраназально
и подтвердили наблюдения.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Передача свиных АВ происходит, вероятно, с
фекалиями. Возможно, имеет место и ингаляция вируссодержащего аэрозоля.
ДИАГНОСТИКА
При АВИ у свиней клинические признаки и явные поражения бывают минимальными
или совсем отсутствуют. Наличие внутриядерных телец-включений в лёгких, почках или
кишечном эпителии могут подтвердить аденовирусную инфекцию, но в этом случае нельзя
поставить диагноз, пока не будет обнаружен вирусный АГ в реакции ИФ или ИФА.
Вирус изолируют из инфицированных тканей в культуре клеток РК15. Однако некото-
рые шт. требуют нескольких “слепых” пассажей, прежде чем проявится чёткое ЦПД. В ок-
рашенных препаратах инфицированных клеток выявляют внутриядерные тельца-включе-
ния. Аденовирусный группоспецифический АГ в экстрактах инфицированных клеток выяв-
ляют с помощью РСК или РДП. Серологическая идентификация изолированного вируса
829
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
проводится в PH с референтной сывороткой. Серологический диагноз на аденовирусную
инфекцию у свиней можно установить по увеличению титра АТ в PH или РДП.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Специфическая вакцинопрофилактика аденовирусной инфекции свиней не практикует-
ся. Создание SPF-стад в отношении данной инфекции не имеет практического значения. По-
росята получают АТ с молоком матери, в результате они преобретают колостральный им-
мунитет (3).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Никольский В.В. и др. Болезни молод, свиней. Киев, 1989 :192. 2.Сюрин В.Н. и др. Част-
ная ветер, вирусол., М., Колос, 1979, ПО. 3.Фомина Н.В. Аденовир. инфекция животных.
М., Колос, 1985. 3a.Bibrack В. Zentralbl Veterinaermed, 1974, (В) 20 :193. 4.Blood D.C. et.al.
Veterinary medicine. A textbook of the diseases of Cattle, shepp, pigs, goats and horses. London,
1989, 24 :1502. 5.Coussement W. et.al. Am J Vet Res, 1981, 42 :1905. 6.Ducatelle R. et.al. Vet
Pathol, 1982, 19 :179. 7.Derbyshire J.B., lova State University Press Ames Iowa USA, 1986.
8.Genov I. et.al. Vet Med Nauki, 1976, 13 :32. 9.Hafez S.M. et.al. Vet Microbiol, 1980, 5 :101.
10. Hirohara T. etal. Japan Veter Med Assn, 1990, 43, 11 :779. ll.Pensaert M.B. Virus
infections of porcines Amsterdam ect 1989, 18 :283 s. Virus infections of vertebrates 2. H. 88. B.
12.Sanford S.E. et.al. Enteric adenovirus infection in piglets. Can J Comp Med, 1983, 47 :396.
13.Straw BE. et.al. Diagnosis of swine deseases St Paul (Minn), 1985, 8 :70.
АДЕНОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ ПТИЦ,
ВЫЗЫВАЕМАЯ ВИРУСАМИ CELO И GAL
Аденовирусная инфекция птиц - хроническая в основном у птиц и летальная у КЭ ин-
фекция, вызываемая вирусами CELO (Chicken Embrio Lethal Orphan) и GAL (Gallus Adeno-
Like virus ). Первые сообщения о выделении штаммов, которые позднее были классифици-
рованы как аденовирусы птиц (АВП), поступили из Южной Африки и США. С тех пор в
ряде лабораторий были выделены многочисленные изоляты АВ, в том числе от домашних
кур, индеек, уток, фазанов, перепелов, цесарок, голубей, а также от диких птиц. До тех пор,
пока не были выяснены связи между изолятами и болезнями птиц, выделенные изоляты по-
лучали самые разные названия, например, энтеровирус, латентный вирус или энтероцитопа-
тогенный птичий вирус орфан (ЕСАО). Так, выделенный из КЭ вирус соответственно его
патогенному действию назвали Chicken Embtyo Lethal Orphan (CELO). Вирус, выделенный
как контаминант из nrr.RPL-12 лимфоидного лейкоза, из-за сходства с АВ получил название
Gallus Adeno-Like (GAL). Лишь в 1977 г. Me Ferran, Adair (37) предложили в названии ви-
русов, выделенных от птиц, отражать как вид птицы, от которого они выделены, так и их
серотип. Таким образом, название “аденовирусы птиц” остается общим для обозначения
всех изолятов от птиц. Ветеринарным вирусологам были известны 3 птичьих вируса до того,
как они были отнесены к семейству аденовирусов: 1) возбудитель бронхита перепелов (Quail
Bronchitis Virus - QBV), впервые выделенный в 1949 г. N. О. Olson в Западной Вирджинии
(США); 2) CELO- кишечный сиротский летальный вирус КЭ, изолированный в 1962 г. док-
тором V.J.Yates и являющийся причиной гибели эмбрионов. До недавнего времени вирус
CELO не вызывал заболевания цыплят после вылупления; 3) вирус, изолированный в 1958
г. доктором G.R. Sharpless из общего пула с вирусом лимфоматоза птиц, а в 1960 г. иденти-
фицированный B.R.Burmester как аденоподобный вирус GAL. Он был выделен позднее, чем
QBV (вирус бронхита перепелов) и вирус - CELO. В 1959г. было показано близкое родство
(но не идентичность) между вирусами CELO и QBV, и лишь в 1963 г. вирусы CELO и CAL
830
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные ттфекптт
были отнесены к аденовирусам. В настоящее время насчитывается 13 различных серотипов
АВ, относящихся к группам CELO, GAL, и 1 тип - возбудитель синдрома снижения яйце-
носкости или литья яиц - EDS-76 (Egg Drop Syndrome -76). АВ инфекция в промышленном
птицеводстве приобрела особое значение по раду причин. Во-первых, у кур она вызывает
такие болезни, как гепатит с тельцами-включениями, у индеек - геморрагический энтерит, у
фазанов - вирусный гепатит и мраморная болезнь селезенки, у перепелов - бронхит. Во-
вторых, АВ часто выступают в роли вторичного фактора при других инфекционных болез-
нях, особенно при инфекционном бронхите кур, микоплазмозе и других заболеваниях дыха-
тельных путей птицы. В-третьих, АВ отрицательно влияют на яйценоскость и качество яиц.
И наконец, вследствие вертикальной передачи АВ птиц, контаминируя КЭ, часто являются
помехой в использовании эмбрионов с целью репродукции других вирусов (29). АВ птиц
широко распространены в США, Канаде, Германии, Швеции, Франции, Венгрии, Италии,
Югославии, Чехии, Северной Ирландии, Южной Ирландии, Японии, Индии, Корее, Египте,
Австралии, Англии (1- 9,13,15,34,37, 42-44, 54, 55).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. В естественных усло-
виях CELO-инфекция может протекать остро или латентно. АВ в ассоциации с другими воз-
будителями вызывают развитие инклюзионного гепатита, респираторных болезней, воспа-
ления органов яйцеобразования, теносиновитов, апластической анемии, геморрагического
энтерита, геморрагий в мышечной ткани и органах (2,16, 28, 37, 41, 51, 52). Наиболее пато-
генным оказался вирус CELO. Вирус GAL распространен широко, однако его роль недоста-
точно ясна; аденовирус IBH (Inclusion body hepatitis), вызывающий инклюзионный гепатит с
тельцами-включениями в печени, продолжается 5-7 нед с летальным исходом до 31% (52).
Многообразие клинических симптомов и патологоанатомических изменений, вызванных
вирусом CELO, или, возможно, некоторыми другими типами АВ, могут быть связаны с по-
ражением респираторных органов, печени и диареей, нервными симптомами, слабостью ко-
нечностей, отставанием в развитии или снижением яичной продуктивности.
Течение АВ инфекции у кур и цыплят может усиливаться или ослабляться сопутствую-
щими факторами: наличием специфических АТ, возрастом птицы, поражением её бакте-
риями, микоплазмами, вирусом инфекционного бронхита и усугубляться условиями содер-
жания, излишней плотностью посадки птицы, плохой вентиляцией и проводимой в птични-
ках дезинфекцией. Помимо вялой, клинически нечетко проявляющейся аденоинфекции
птиц, известны еще 4 нозологически обособленных болезни, вызываемые аденовирусами
группы CELO. Это инклюзионный гепатит, мраморная болезнь селезенки фазанов, бронхит
перепелов и геморрагический энтерит индеек.
После первичного инфицирования слизистой оболочки верхних дыхательных путей у
зараженной птицы в течение 3-14 дн отмечается виремия. В этот период вирус можно выде-
лить из крови, трахеи, легких, почек, печени и селезенки. Однако с повышением титра АТ
уровень виремии постепенно снижается, но в течение 1-2 нед еще удается выделять вирус из
слизистой оболочки кишечника, верхних дыхательных путей, иногда помета, т. е. из мест,
благоприятных для размножения АВ (8).
Механизм воздействия АВ на изменение яичной скорлупы, пока недостаточно ясен. При
гистологическом исследовании яйцевода у естественно больных птиц находили незначи-
тельные изменения, отек его с умеренной инфильтрацией плазматическими клетками, лим-
фоцитами и гетерофилами в соединительную пластину и уменьшение или исчезновение сек-
реторных гранул в эпителии матки. Анализ сыворотки показывает уменьшение алкалин-
фосфатов, энзимов, входящих и участвующих в формировании скорлупы. Исследования
матки показали, что на 3-й дн она была нормальной, на 7-й - находили в клетках складок
эпителия тельца-включения, на 10-й - отмечали тельца-включения и некроз эпителия с вос-
831
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
палением и артериитом, на 15-й дн - сильное воспаление и некротическо-пролиферативный
артериит.
Патология КЭ. Это наиболее патогномоничные признаки АВ инфекции (группы CELO)
в птицеводстве. В естественных условиях она проявляется уменьшением объема амниотиче-
ской жидкости и увеличением аллантоисной, геморрагией КЭ, аналогичной той, которая вы-
зывается вирусом ИБК, утолщением и помутнением ХАО. В ядрах клеток эктодермального
эпителия оболочек обнаруживают базофильные включения, гиперемию эмбрионов и деге-
неративные изменения в печени. КЭ меньше контрольных, отекшие, с кровоизлияниями. На
17-й дн вирус влияет на вылупление. Winterfield (55) считал, что поражения, возникающие в
КЭ, зависят от возраста его и метода введения вируса. Mandelli (36) заражал эмбрионы АВ
птиц (шт. 1123/75 и PV, выделенными из образцов печени с ядерными включениями в клет-
ках) и наблюдал в 20-60 % случаев их гибель. При вскрытии таких КЭ отмечалась их блед-
ность, печень имела светло-коричневый или зеленоватый цвет с обширными некротически-
ми очагами вдоль краев печеночных долей. При инокуляции вируса на ХАО через 6-7 дн
появлялись небольшие беловатые фокусы. При гистологическом исследовании печеночные
поражения представляли собой ишемические некрозы, окруженные интенсивной перифо-
кальной гиперемией, в остальной паренхиме печени были дегенеративные явления и слабо
эозинофильные внутриклеточные включения. В эпителиальных клетках фокусов эктодермы
ХАО просматривались большие внутриядерные эозинофильные включения.
У КЭ, зараженных в аллантоисную полость или желточный мешок, в гепатоцитах и в
меньшей степени эпителиальных клетках кишечника и почечных канальцев обнаруживают-
ся внутриядерные тельца-включения. Причем, в тех случаях, когда вирус не инокулировался
в аллантоисную полость, вирусный АГ в эмбрионе не выявляется. При заражении КЭ в ал-
лантоисную полость вирусный АГ успешно выявлялся ИФ в легких, почках, кишечнике,
слизистой оболочке носовой полости и костном мозге, а внутриядерные тельца-включения -
в клетках печени тех эмбрионов, которые инокулировались вирусом GAL. Вирус GAL, ино-
кулированный на ХАО эмбриона, также индуцировал образование внутриядерных включе-
ний в клетках гепатоцитов.
Патологоанатомические изменения у больной птицы нетипичны, иногда они проявляют-
ся легким опуханием верхней части трахеи. При гистологическом исследовании в подслизи-
стой области трахеи находили небольшую пролиферацию мононуклеарных клеток. Описаны
изменения у кур, как тяжелые поражения в виде хронического гепатита. Более ранние пора-
жения печени проявлялись инфильтрацией лимфоцитов и фибробластов в портальную об-
ласть. Цитоплазма гепатоцитов содержала маленькие жировые вакуоли, а внутри - ядерные
эозинофильные включения в гепатоцитах также выявлялись, но в меньшей степени, чем в
печени. В большинстве случаев печень поражалась лимфоцитарной и гетерофильной ин-
фильтрацией в портальной области. В области фокусов отмечалась достаточно обширная
жировая инфильтрация.
При интравенозном заражении 12-мес кур вирусом CELO (шт. Ote) отмечали изменения
только в печени в виде серовато-белых фокусов размером от булавочной головки до прося-
ного зерна или серовато-белых поражений на поверхности и разрезе органа.
Внутриядерные включения в гепатоцитах печени находили на 2-6-й дн после инокуля-
ции вируса. В почках их также обнаруживали на 2-6-й дн после заражения. В эпителии про-
токов отмечали слабую дегенерацию и некроз. Внутриядерные включения в трахее были в
эпителиальных клетках слизистой оболочки на 2-6-й дн после инокуляции, а в легких они
отмечались в ядрах эпителиальных клеток бронхов. В пластинках соединительной ткани, в
основном в бронхах, обнаруживалась легкая лимфоцитарная и гетерофильная инфильтра-
ция. Лишь у кур, зараженных вирусом интратрахеально, отмечали гистопатологические из-
832
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
менения в трахее. Базофильные внутриядерные включения в эпителиальных клетках трахеи
обнаруживали редко.
Патологоанатомические изменения у птиц, инокулированных интравенозно, обнаруже-
ны в печени, селезенке, поджелудочной железе и почках. Поражения поджелудочной желе-
зы отмечали на 4-й дн после инокуляции вируса. В эпителиальных клетках концевого отдела
панкреатической железы были также обнаружены внутриядерные включения. Поражения
селезенки отмечали на 2-й и на 4-й дн после заражения. Они состояли в периваскулярном
увеличении числа лимфоцитов и появлении внутриядерных телец-включений. В кишечнике
отмечался незначительный острый катаральный энтерит.
При аэрозольном заражения шт. Ote и В1209 вируса CELO развивались обширные по-
ражения легких, сопровождающиеся гиперемией и некоторым уплотнением. Поражения
воздухоносных мешков состояли в помутнении и утолщении задней торакально-абдоми-
нальной части, иногда наполненных пенистым или кремообразным экссудатом. У птиц, за-
раженных внутривенно или в костный мозг вирусом GAL, наблюдали только анемию.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. АВ птиц, так же как и млекопитающих, имеют
размер 95-100 нм с гексагональным профилем в сердцевине. Полые капсомеры в виде рас-
тянутых призм длиной 10-11 нм и шириной 5-6 нм имеют полигональные секции пересече-
ния. Капсомеры кажутся упакованными в равносторонние треугольные грани, которые на
ребрах разделены. По периферии частиц имеется 30 капсомеров в виде осей двойной сим-
метрии, в каждом ребре по 4 капсомера, разделенных верхушками (Рис. 102). АВ птиц име-
ет икосаэдральную форму кубической симметрии в соотношении 5:3:2, строение капсомеров
сходно со стоением АВ человека типа 5. Вирионы его содержат 252 капсомера. Различие
между АВ птиц и человека состоит в пустых вытянутых капсомерах, которые по форме при-
ближаются к капсомерам вируса герпеса и полиомы. В препаратах инфицированных клеток,
окрашенных ФВК, вирус GAL появлялся в ядре в виде кристаллических конгламератов и
имел гексагональный профиль (8).
Ультраструктура очищенного вируса CELO такая же, как и вируса GAL. Каждый кап-
сомер окружен 5-ю, а некоторые 6-ю соединительными капсомерами.
При ЭМ вируса бронхита перепелов обнаружено 2 типа частиц: большие (70-75 нм), по-
хожие на вирус CELO, и маленькие (20-24 нм), возможно возникшие из больших частиц
или представляющие лишь их внутренний компонент.
В монослое клеток почки КЭ, инфицированных вирусом CELO, вирионы иногда пред-
ставлены в виде цепочки в ядре пораженной клетки, но никогда не обнаруживаются в виде
кристаллоподобной ракетки, как об этом сообщалось в отношении вируса GAL. В виде кри-
сталлов вирус CELO был обнаружен лишь в ядрах эндодермальных клеток ХАО КЭ, иноку-
лированных в аллантоисную полость.
Вирионы АВ птиц не имеют липопротеиновой оболочки, плотность их в CsCl составляет
1,34-1,35 г/см3. Они не содержат липидов или жиров, что обусловливает их устойчивость к
жирорастворителям (эфиру и хлороформу). В результате внутриядерной репродукции виру-
сов CELO и GAL формируются внутриядерные включения, имеющие диагностическое зна-
чение. ДНК и белок в вирусе CELO составляют 17,3 и 80,7% соответственно.
Геном - линейная 2-спиральная молекула ДНК с мол.м. 30 кД. Наибольший полипептид
вируса CELO представляет гексон АГ, котоэый был определен методом электрофореза в
ПААТ. Так же были идентифицированы 2 полипептида пентона и 2 внутренних компонента.
Описаны такие структурные белки вируса CELO как V-антиген и неструктурный специ-
фический Т-, или tumor (опухолевый)-антиген (или нео- антиген). Эти АГ обнаружены и в
онкогенных птичьих АВ. Сообщалось о трансплантационном специфическом АГ вируса
CELO, однако связь этого АГ с Т-АГ не установлена.
53 Зак. № 171
833
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
АГ вариабельность и родство. В 1980 г. идентифицировали 16 АВ птиц, в том числе
12 шт., выделенных из печени при гепатите, 3 - при респираторном заболевании и один -
при разрыве связок ног (31). Пять из них оказались вирусами CELO серотипа 1; 11, изоли-
рованных из печени кур при гепатите, классифицировали по 4 различным серологическим
группам: 1 - Р36 (тип 7); 2 - Н1 (Тип 8); 3 - варианты типа 6, 7, 8; 4 - изолят 50, не проявлял
родства ни с одной из испытанных сывороток, полученных к изучаемым штаммам.
Следует отметить, что некоторые изоляты относительно легко типируются, другие, на-
против, в перекрестных тестах проявляют широкую нейтрализующую активность, охваты-
вающую многие типы. Jurajada (30) предложил назвать их вариантами определенного серо-
типа или интермедиарными штаммами.
Устойчивость. АВ птиц терморезистентны. Эго относится к вирусу CELO (шт. Phelps)
и к вирусу бронхита перепелов. У разных шт. терморезистентность неодинакова, причем
она зависит от соотношения в среде моно- и бивалентных катионов. Устойчивость к темпе-
ратуре 36°С являлась маркером дифференциации вирусов CELO, бронхита перепелов
(QBV) и инфекционного бронхита цыплят. Стандартных методов тестирования штаммов АВ
птиц по их термостабильности еще нет. Поэтому Burke предложил использовать темпера-
турные тесты, которые могут считаться стандартными для характеристики 7-и американ-
ских штаммов. Последние были тестированы в различных разведениях и в присутствии 1М
моно- и бивалентных катионов и оказались чувствительны к нагреванию до 50°С.
Среди структурных АГ АВ пентон наименее стоек к воздействию физических и химиче-
ских факторов. Он термолабилен, разрушается в течение 10 мин при температуре 60°С; чув-
ствителен к трипсину, который переваривает его основание. Бивалентные катионы АВ при-
дают ему высокую термолабильность. Вирус активен после воздействия на него температу-
ры 56°С более 1 ч. Его репродукцию не нарушает пребывание в среде с pH 3-8 (47).
Описаны характеристики температурочувствительных мутантов вируса CELO, получен-
ных из эпизоотического вируса при обработке мутагенами. Такие мутанты размножались
крайне слабо в условиях 40°С (пермиссивная температура) и хорошо - при 31 °C
(непермиссивная температура) (28). Вирус CELO относительно устойчив к УФ лучам, но
чувствитен к фотодинамической инактивации. Обработка вируса CELO генетроном (3-
флуорто-3-хлорэтаном), используемым для очистки вируса, существенно не снижала его
титр. Титр вируса CELO не изменяется в широких пределах pH (2-9). Гусиный шт. АВ птиц
не снижал свою инфекционность даже при pH 3.
АГ структура. У АВ птиц АГ идентифицируют по структурным субъединицам вируса,
которые обозначают: 1) гексон АГ; 2) пентон АГ; 3) фибер АГ. В АВ птиц данные о длине
фибера различаются. Показано наличие 3-х типов АГ вируса CELO, которые были обозна-
чены как А, В и С. Аналогичные АГ были выделены элюцией на ДЕАЕ-целлюлозе и назва-
ны Е-АГ (рано элюирующими), L (позднее элюирующими) и Т (токсином). Компонент, на-
зываемый в настоящее время гексоном, идентифицирован как группоспецифический АГ, так
как он ответственен за групповую реактивность, и обозначен аАГ. Однако сыворотка, полу-
ченная на очищенный гексон, не только группоспецифична, но и нейтрализует инфекцион-
ность вируса, т. е. гексон обладает также типоспецифичностью.
АГ активность. АВ птиц индуцируют АТ, определяемые в РСК, ИФ, РДП, ИФА, PH,
РЗГА. ВНА, КСА и анти-ГА появляются через 7 дн после инокуляции вируса и достигают
максимального титра через 2-3 нед. КСА циркулируют от 2-3 до 6-12 мес, а ВН - более 1 г.
АТ одного и того же типа обнаруживали также и в желтке яиц инфицированных кур-
несушек. У цыплят материнские АТ сохраняются до 5-6 нед возраста.
При заражении кур вирусом CELO оральным путем в начале их яйценоскости образо-
вывалось больше ВНА, чем ПА. Последние сохранялись до 11-14 нед, однако при инокуля-
ции вируса интратрахеально ПА сохранялись дольше. При этом у взрослых кур их образо-
834
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
вывалось больше, чем у молодых. Преципитирующие АТ образовывались у птицы как при
прямом заражении ее, так и контактно. У SPF-кур ВНА появлялись через 1-2 нед после ин-
траназального заражения. Реинфицирование цыплят через 8 нед повышало их титр. Через 8
нед птица была чувствительна, хотя и имела специфические АТ, но выделяла вирус с поме-
том.
Местный иммунитет при АВ инфекции играет более важную роль, чем гуморальный,
так как препятствует размножению вируса на слизистых оболочках.
Все известные АВ птиц имеют общий групповой АГ. Он выявляется при двойной имму-
нодиффузии (ПААГ) или ИФ. В PH в культуре клеток установлено 12 различных серотипов
АВ птиц. Вирус EDS-76 (Egg drop syndrome -76) не проявляет родства ни с одним из из-
вестным серотипом АВ птиц.
В современных птицеводческих хозяйствах АВ - постоянные (убикви -тарные) вирусы.
Их часто изолируют от внешне здоровых птиц. Совершенно неправильно считать, что у
больных птиц АВ циркулируют в высоких титрах и что именно они - причина болезни пти-
цы. Действительно, в одном случае они могут быть причиной болезни, в то же время могут
быть только частью нормальной вирусофлоры птицы.
ГА свойства. В отличие от АВ человека, АВ птиц не агглютинируют эритроциты, за
исключением некоторых шт. серотипа 1 (EV-89, Phelps, GAL-3, GAL-4 и 93), которые агг-
лютинируют эритроциты крыс. Вирус CELO типа 1 из 10 видов эритроцитов агглютинирует
лишь эритроциты крыс в условиях 37°С; но реакция не протекала при 4°С. Штаммы, отно-
сящиеся к типам 2-8 и двум серотипам АВ индеек (ТА-1, ТА-2), также не обладали гемаг
глютинирующими свойствами. Недавно был описан микротест задержки гемагглютинации
для обнаружения аденовирусных АТ.
Элюция птичьих ГА вирусов с эритроцитов происходит при более низкой температуре,
сам ГА антиген инактивируется при 56°С в течение 15-30 мин, хотя инфекционность вируса
при этой температуре остается стабильной в течение часа. При центрифугировании 54000 g
Г А АГ седиментирует полностью в течение 1 ч. Прикрепление вируса CELO к эритроцитам
крыс происходит и при 4°С, несмотря на отсутствие видимой агглютинации.
Описана пассивная Г А вируса CELO.
Патогенность АВ. Достаточно четко охарактеризованы АВ птиц по их патогенности.
Изоляты, вызывающие инклюзионный гепатит и инфекционную анемию, представлены 3-
мя разными серотипами. Данные по АГ различию (выявляемому в перекрестной PH) виру-
сов, выделенных в Венгрии, США, Японии, Северной Ирландии и других регионах, приве-
дены в табл. XIX. 1.
Таблица XIX. 1. Антигенные связи АВ птиц.
Серотип Изоляты, выделенные от кур в странах
Япония США С.Ирл Венгрия Разные
FA-1 Ote CELO (Phelps), TV-89, 93, GAL3,GAL4, Indiana C.,QBV 112 Hung 1 Bl.363 JV29
FA2 SR-48 GALI (Fontes) GAL2, 65, 95 685 Hung III 144
FA3 SR-49 75 Hung V
FA4 KR-5 506 Hung II B-4015
FA5 TR-22 Tipton 340 HS/1
FA6 CR-119
FA7 YR-36
FA8 TR-59 58, 764 Hung VI 131
53*
835
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Культивирование. АВ птиц (CELO и GAL) успешно репродуцируются в КЭ, культурах
клеток и органных культурах - тканевых эксплантатах. С момента открытия вируса
QBV/CELO (возбудителя бронхита перепелов) КЭ широко используют для выделения, ре-
продукции и изучения АВ птиц. Птичьи АВ (включая шт. Tipton) также хорошо репродуци-
руются в культуре клеток почек КЭ. Гомогенат ХАО используется для приготовления ак-
тивного АГ при постановке РДП. Если клетки почек цыпленка, печени и почки эмбриона в
равной степени чувствительны к вирусу CELO, то фибробласты КЭ почти в 100 раз менее
чувствительны. По чувствительности и пригодности для выделения полевых изолятов виру-
са КЭ неоднозначны. Лишь японские изоляты CELO во всех разведениях вызывают 100 % -
ную гибель эмбрионов.
Адаптация вируса GAL к куриным эмбрионам, в отличие от штаммов CELO, происхо-
дит более медленно и требует интравенозной инокуляции вируса в высоком титре. Гибель
зараженных эмбрионов в этих случаях наступает лишь через 3-4 дня. После адаптации ви-
рус GAL также оказывался летальным для эмбрионов при любом методе инокуляции. Раз-
множение в эмбрионах других птичьих АВ, кроме CELO и GAL, изучено недостаточно.
Размножение АВ птиц в эмбрионах птиц других видов происходило плохо, хотя вирусы
бронхита перепелов и CELO-вирус успешно размножались в эмбрионах индеек.
Вирус CELO слабее реплицируется в культуре эпителиальных клеток птиц, чем в пер-
вично-трипсинизированных клетках КЭ.
В культурах клеток АВ вызывают округление клеток и крупные базофильные внутри-
ядерные включения. Размножение вируса подтверждают специфической внутриядерной
флюоресценцией или электронной микроскопией. В почечных клетках КЭ синтезируются Т-
и V (структурный)-антигены. Синтез Т-антигена в начинается с 8-9-го ч, а V-антигена - с
15-16-го ч, пик титра вируса отмечался к 96 ч, а наибольшее количество внеклеточного ви-
руса обнаруживалось через 72 ч после заражения, ЦПИ инфицированной культуры при этом
не происходит. Вирус CELO в культуре ФЭК также индуцирует образование внутриклеточ-
ных включений. Для каждого серотипа выявлено несколько вариантов размера бляшек.
Открытие вируса GAL было связано с использованием культуры клеток эмбрионов или
органов кур. В ранних обширных работах американских и английских исследователей этот
вирус ошибочно принимали за адаптированный в культуре клеток вирус лимфоматоза, ко-
торый был испытан в различных клеточных культурах. Эмбрионы кур и клетки печени цы-
плят являются лучшими системами, чем клетки легких, почек и всего КЭ, хотя вирус GAL
развивался во всех перечисленных культурах. Клетки утиного эмбриона были также чувст-
вительны, но в этой системе, как и в клетках эмбрионов индеек, вирус не способен длитель-
но поддерживаться.
Вирус GAL легко удавалось пассировать в эксплантантах печени. Однако органные
культуры оказались менее чувствительными, чем клеточные культуры или эмбрионы. Опи-
сан ЦПЭ, вызываемый вирусом GAL, в культуре клеток печени КЭ. Он проявлялся уже че-
рез 18 ч после заражения культуры в виде набухания клеток и грануляции цитоплазмы. Яд-
ро при этом оставалось плотным, а ядрышки часто были увеличены и прижаты к ядерным
мембранам.
При изучении размножения вируса CELO под электронным микроскопом в препаратах,
окрашенных акридином оранжевым наблюдали увеличение количества ядерной ДНК и по-
явление зрелого вируса в ядрах инфицированных клеток.
АВ птиц обладают интерфероногенными свойствами и тератогенным действием на КЭ.
Онкогенные свойства. У новорожденных хомяков, инокулированных подкожно виру-
сом CELO, через 88-195 дн на месте введения развивались опухоли. Как последние, так и
культуры клеток, полученные из первичных опухолей, были трансплантированы новорож-
денным отнятым от матери хомячкам. У них также развивались опухоли, однако вирус в
культурах клеток не обнаруживался. Выявлен в РСК и ИФ специфический опухолевый Т-
836
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
антиген как в первичных, так и в трансплантированных опухолях. С помощью ИФ вирус-
специфический внутриядерный Т-антиген был обнаружен во всех клеточных системах, но в
клетках фибробластов эмбриона хомячка он продуцировался лишь в ранних пассажах.
Аденоассоциированный вирус (AAV). Он, как правило, сопутствует АВ CELO. В 1979
г. Dawson и др.(21, 22) оба вируса изолировали из аллантоисно-амниотической жидкости
КЭ от несушек породы Black Sexiinked при естественном течении инфекции. AAV был вы-
делен из 23,2 %, вирус CELO - из 18,6 % исследованных яиц, а оба они одновременно - из
14 % яиц. Однако при 4-кратном возрастании у несушек титра АТ указанные вирусы из их
яиц уже не выделялись.
Как вирус CELO, так и AAV передаются потомству через яйцо. Однако оба они не пере-
даются трансовариально при наличии у несушек специфических АТ. В отличие от трансова-
риальной передачи реовируса AAV и CELO-вирус трансовариально передается только в пе-
риод активной инфекиии.
Низкие концентрации AAV- и CELO-вируса у 14-дн КЭ не проявляют патогенного эф-
фекта. AAV во вновь снесенных яйцах видоизменяют патогенность вируса CELO, чем, ве-
роятно, и объясняются низкие титры АВ. Если допустить, что CELO-вирус не размножается
в КЭ, то он, вероятно, все равно там присутствует, так как AAV является дефектным и про-
дуцируется в клетках только в присутствии помощника - АВ.
AAV изменяет патогенез АВ инфекции у птиц. Вероятно, он может изменять патоген-
ную роль в трансовариальной передаче CELO-вируса.
Экспериментальная инфекция цыплят и КЭ. В подавляющем большинстве случаев
цыплята оказались нечувствительны к вирусу CELO при иитравенозной, интраперитонеаль-
ной, интрамускулярной, интратрахеальной инокуляции или инокуляции в воздушные меш-
ки. Не удалось воспроизвести экспериментальную инфекцию у кур, зараженных в клоаку и
повторно в инфраорбитальный синус. По другим данным экспериментальная инфекция цы-
плят сопровождалась небольшими респираторными отклонениями и временным ухудшени-
ем общего состояния, а интравенозная инокуляция вируса не вызывала никаких симптомов
болезни (8).
У молодых птиц, инокулированных интратрахеально или аэрозольно шт. Ote или В-
1209 вируса CELO, проявлялись сравнительно слабые симптомы: чихание, респираторные
шумы и депрессия. Заражение цыплят первых дней жизни в трахею приводило к длитель-
ному (около 2 нед) выделению вируса с фекалиями. Шт. вируса GAL удавалось реизолиро-
вать из респираторного тракта, печени, почек, кишечника птиц, экспериментально заражен-
ных внутривенно. При заражении их per os вирус выделялся с фекалиями. Внутривенная
инокуляция цыплятам вирусом GAL сопровождалась пятнистостью печени, вакуолизацией
гепатоцитов и местными некрозами.
CELO-вирус вызывает респираторные явления у индюшек и цесарок, у последних часто
отмечается панкреатит. Отмечали респираторные признаки слабой интенсивности у кур,
инокулированных различными способами американским шт. Indiana С вируса CELO. У
больных птиц отмечали чихание, крепитацию, признаки, передающиеся от птицы к птице
внутри группы. При иитравенозной инокуляции или инокуляции в костный мозг вирус GAL
вызывал гибель до 25% птиц. В более поздних исследованиях у зараженных цыплят отме-
чали некоторую сонливость или симптомы болезни вообще отсутствовали.
Разноречивость результатов воспроизведения экспериментальной АВИ у цыплят и кур,
видимо, можно объяснить особенностями полевых шт. Так, например, интраназальная ин-
стилляция английского шт. CELO (188/67) вызывала клинические признаки болезни, тогда
как итальянский шт. CELO при иитравенозной инокуляции лишь вызывал депрессию, утом-
ляемость, анорексию, потерю массы, слабость, а иногда и смерть. Яичная продуктивность
снижалась на 10 % у кур, инокулированных вирусом CELO. В ассоциации с Mycoplasma
837
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
gallisepticum и вирусом ИБ наблюдался более высокий процент снижения яичной продук-
тивности.
Гистопатологические изменения у кур при АВИ проявляются в следующем.
Пораженная печень серо-белого цвета с фокусами жировой дегенерации. Наблюдают
инфильтрацию лимфоцитами и фибробластами, появление внутриядерных эозинофильных
включений на первых стадиях заболевания, позднее эти включения становятся базофиль-
ными. Помимо печени, аналогичные поражения находили в селезенке, трахее, почках, лег-
ких, реже - в желудке и постоянно - поджелудочной железе.
Картина патологии эмбрионов, экспериментально зараженных вирусами CELO и GAL,
выглядит более однозначно. При инокуляции 6-13-дн КЭ вирусом CELO происходит их ги-
бель, развивается карликовость или курчавость. При заражении 6-дн КЭ в желточный ме-
шок гибель их наступает примерно в те же сроки (1). Характер поражений эмбрионов, пере-
пелов, зараженных в аллантоисную полость вирусом бронхита, был сходен с поражениями,
индуцированными вирусом CELO, т. е. отставанием в росте и курчавостью. После зараже-
ния КЭ вирусами QBV (вирусом бронхита перепелов) и CELO (шт. Phelps) отмечали заку-
порку сосудов почек и эритему в дорсальной и метадорсальной областях эмбриона. Пораже-
ния, вызываемые указанными вирусами, были сходны с таковыми при индуцировании виру-
сом ИБ цыплят (коронавируса), и поэтому при АВИ их нельзя рассматривать патогномо-
ничными.
Патогенность вирусов CELO и GAL в значительной степени связана с конкретными шт.
и зависит от степени их адаптации к КЭ.
Интравенозное заражение 12-дн КЭ вирусом GAL сопровождалось гибелью большинст-
ва эмбрионов на 3-4-й дн без выраженных патологических изменений. После адаптации ви-
руса GAL к эмбрионам он становился для них летальным при любом методе заражения.
Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. Передача АВ птиц
происходит в результате 1-2 нед контакта птицы в период яйцекладки. Цыплята, инокулиро-
ванные интратрахеально или в синус вирусом CELO, выделяют его с фекалиями и передают
здоровым контактирующим цыплятам. Такой вирус обычно имеет высокую контагиозность,
высокий титр его в фекалиях наблюдают обычно в период острой фазы инфекции. Доказана
реизоляция вируса CELO из кишечного тракта и других органов цыплят экспериментально
зараженных орально и интравенозно. Наиболее высокий титр его был выявлен в трахее, ки-
шечнике, фекалиях и желчи. В экскретах 1-дневных цыплят вируса было больше, чем в экс-
кретах птицы более старшего возраста.
У птицы более старшего возраста период экскреции вируса короткий. Он часто выявля-
ется в ворсинках эпителиальных клеток подвздошной кишки, где может сохраняться в крип-
тах перед миграцией на поверхность клеток. В гистологических срезах гипертрофированные
клетки содержали внутриядерные тельца-включения.
Вылупившиеся цыплята, как правило, не заражались АВ, так как до 4-нед возраста они
имели материнские АТ.
О генерализации вируса GAL в организме инфицированной птицы значительно меньше
информации. При интраназальной инокуляции цыплят вирусом GAL он постоянно выявлял-
ся в фекалиях в высоком титре (105-108 ТЦЩо/г) и в течение 14 дней обнаруживался в гор-
тани, трахее, легких, печени, селезенке, ткани кишечника, костном мозге и яйцеводах, но не
в почках, тимусе, поджелудочной железе, брызжейке и желточном мешке.
При бронхите естественно инфицированных перепелов вирус изолировали из слизистой
оболочки трахеи, легких и воздухоносных мешков. У перепелов, экспериментально зара-
женных вирусом QBV или CELO, возбудители были изолированы из водянистой влаги гла-
за, трахеи, легких, воздухоносных мешков, селезенки, мозга и конъюнктивы. Изучена пер-
систенция вируса. Его удавалось выделить из различных органов перепелов через 48 дн
контакта с подсаженной в клетку зараженной птицей. Большая скорость распространения
838
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
АВИ среди перепелов указывает на ее высокую природную контагиозность в отличие от ин-
фекции среди цыплят, вызываемой вирусом CELO.
Относительно изоляции вируса QBV от животных различных видов, включая диких
птиц, имеется крайне мало сообщений. Кроме цыплят и перепелов, QBV изолировали из
внутренних органов индеек, из респираторного тракта молодых фазанов, фекалий гусей и
внутренних органов морских птиц.
Птица, поражённая АВ, является потенциальным вирусоносителем в течение всей жиз-
ни. Возможно, что вирусоносители выделяют вирус с определёнными интервалами. Возоб-
новление активности латентного вируса вызывает образование группоспецифических АТ, и
если птица продолжает оставаться яйценоской, вирус выделяется также и с яйцами.
АВ птиц широко распространены при всех системах содержания. Их выделяли почти в
каждом клиническом случае. Однако это было связано чаще всего с одной из форм гепатита
(инклюзионный гепатит), респираторной болезнью, синдромом снижения яйценоскости, по-
носом, теносиновитом, а также плохим ростом. Недавно был описан изолят, вызывающий
панкреатит, анемию и острое лимфоидное поражение фабрициевой сумки и селезёнки.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Бессимптомное течение - персистенция вирусов. Аденовирусы циркулируют у внеш-
не здоровых птиц в 19-80 % случаев (8,18,38). Заражённые аденовирусом внешне здоровые
цыплята в возрасте 4 нед могут быть вирусовыделителями до 7 мес, причём пик вирусовы-
деления обычно наблюдают в возрасте 5-14 нед. Персистенция АВ у домашних птиц не
имела предела; наблюдали случай выделения вируса в возрасте 4-5 лет (11,12,37,38,39).
Источники и пути передачи инфекции. Птичий АВ серотипа 1 передаётся не только
горизонтально, но и вертикально - через яйцо. Однако при эксперментальном заражении да-
леко не всегда удаётся воспроизвести вертикальный путь передачи инфекции.
При горизонтальной передаче инфекции помёт - основной источник заражения. Высо-
кий титр вируса в помёте способствует тому, что оральная передача вируса может прохо-
дить через заражённую воду или корм. Аэрогенный путь заражения играет значительную
роль, когда заболевание проявляется респираторной инфекцией в комплексе с микоплазма-
ми и ИБК. У индеек, заражённых вертикальным путём, передача вируса наблюдалась
оральным и респираторным путями. Через 7 дн вирус был выделен из респираторного трак-
та, а через 11 дн - из помёта. Для вирусов геморрагического энтерита индюков и вируса бо-
лезни мраморной селезёнки фазанов трансовариальная передача не доказана. Эти вирусы
передавались через помёт и при 37°С сохраняли патогенные свойства в течение нескольких
недель. Вирус геморрагического энтерита индюков был выделен из подстилки (37, 49). В
распространении вируса CELO участвуют различные птицы - переносчики. Вирус выделяли
от диких птиц и от индюков, гусей, голубей, фазанов, куропаток.
Контагиозность АВ птиц не очень высока, и заражение стада протекает относительно
медленно. Но поскольку эти вирусы в окружающей среде сохраняют активность долгое вре-
мя, имеется возможность частых и повторных заражений восприимчивого поголовья (8).
Чрезвычайно сложно установить роль АВ при заболеваниях птицы в хозяйствах, по-
скольку имеется 12 серотипов, которые в разных сочетаниях могут циркулировать в орга-
низме здоровых цыплят. Пассивные материнские и активно приобретённые АТ защищают
только от инфекции, вызванной гомологичным серотипом АВ, поэтому иногда на одной
ферме, в одном стаде или даже у одной и той же птицы выделяют АВ нескольких серотипов.
Спектр патогенности АВ птиц в естественных условиях. Серологические исследова-
ния показали, что CELO-инфекция может быть у индеек, фазанов, дроздов-белобровиков,
дроздов и лебедей, но основной хозяин - куры. По данным серологических исследований
достоверно показано наличие АВИ у уток и других видов мигрирующих птиц. В Японии по-
гибло 200 попугаев в течение 2 нед после прибытия из других стран. При гистопатологиче-
839
Глава XX Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
ском исследовании в эпителии почечных канальцев и в рогах матки обнаружены внутри-
ядерные включения 2-х видов.
ДИАГНОСТИКА
Поскольку эпизоотологическое наблюдение с учетом количества заболевших, клиниче-
ских проявлений болезни и патологических изменений при АВИ не поддается анализу и во
многих случаях инфекция протекает незамеченной, диагностика (групповая и типовая иден-
тификация АВ) основана на использовании лабораторных тестов.
Выделение и идентификация вируса. Для выделения вируса лучший источник - ткани
со специфическими поражениями, трахея, клоака, а также культура клеток, зараженная
10%-ной суспензией пораженного органа или помета. Для клеточных культур используют
печень, почки и легкие эмбриона кур, однако культура клеток фибробластов тех же эмбрио-
нов и культура клеток трахеи не чувствительны. Однако при этом всегда имеется риск кон-
таминации, если эмбрионы или куры получены не из SPF-стад. Поэтому всегда необходимо
ставить контроль для культуры клеток. При отрицательном результате в первом пассаже не-
обходимо продолжать пассирование изолята. Как правило, делают не менее 2-3 пассажей в
культуре клеток и 3-5 пассажей на эмбрионах. В то же время вирус может быть изолирован
из кишечника клинически здоровых птиц. Выделение АВ от клинически здоровых птиц сви-
детельствует о его вирусоносительстве (25,26).
QBV и CELO-вирусы были вначале изолированы из аллантоисной полости КЭ. Необхо-
димо было провести 2 или 3 слепых пассажа, чтобы вызвать гибель эмбрионов. Вирусы
QBV и CELO (оба относятся к серотипу 1) вызывают изменения КЭ в виде карликовости,
покраснения, сморщивания кожи, т. е. похожи на те, которые образуются при действии ви-
руса ИБ. Другие серотипы птичьих АВ на КЭ изолируются труднее. Для выделения вируса
может быть использована культура клеток почки КЭ, почки цыпленка; ФЭК, культура кле-
ток трахеи - малочувствительны. Многие шт. АВ размножаются на КЭ, не вызывая их гибе-
ли, только от серотипа 1 (CELO) и серотипа 5 (Tipton) эмбрионы гибнут.
АВ могут быть изолированы из печени, селезенки, трахеи у коммерческих кур с клини-
ческими признаками болезни. Вирусы серотипа 1 (FAV-1) лучше всего выделяются на SPF-
эмбрионах кур при заражении их на ХАО. В положительных случаях на ней образуются
диффузные вздутия, очаговые бляшки, эмбрионы отстают в росте, появляются курчавое
оперение, кожная эритема и очаговые некрозы печени. Через 5-10 дн после инфицирования
эмбрионы, как правило, погибают. В печени и в пораженных участках ХАО отмечаются
внутриядерные включения. Остальные серотипы АВ кур лучше выделяются в моиослойной
культуре клеток. При этом устраняются трудности, связанные с адаптацией изолятов поле-
вого вируса.
Иногда при наличии АВ инфекция проявляется уже при первом пассаже, через 2-5 дн
после заражения культуры появляются типичные участки круглых дегенерированных клеток
с внутриядерными включениями.
При использовании эмбрионов или культуры клеток предварительный диагноз основы-
вается на изменениях, вызванных этими вирусами, т. е. поражение эмбрионов и ЦПЭ с
тельцами-включениями в культуре клеток, хотя массивные изменения эмбрионов не явля-
ются патогномоничными признаками. Клонирование изолята можно проводить, пользуясь
методом трех предельных разведений или, предпочтительнее, методом селекции бляшек.
Серодиагностика. Для исследования куриных сывороток на присутствие специфиче-
ских АТ в PH и РТГА их предварительно освобождают от специфических ингибиторов као-
лином, фильтратом холерного вибриона, гепарином, МпС12 или гемадсорбцией.
В серодиагностике АВ инфекции птиц наиболее широко используют две реакции: двой-
ную РДП и PH, а для идентификации выделенного вируса - тесты ИФ, РЗГА, ИФА и РСК.
Поскольку РДП обнаруживает групповой АГ, то АТ выявляются к любому из 12 серотипов
АВ птиц. Результаты серодиагностики трудно интерпретировать из-за широкого распро-
840
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
странения АВ инфекции в хозяйствах и ассоциации АВ с другими вирусами, особенно при
интенсивном откорме бройлеров (17,19, 20).
Серологические тесты (РДП) чаще используют в качестве контроля при выращивании
птицы на SPF-фермах. Среди неполовозрелых или растущих птиц положительно реагирова-
ло в РДП до 10-40 % поголовья, а среди половозрелых - до 80 % и выше. Увеличение пре-
ципитинов в связи с возрастом птицы, видимо, обусловлено накоплением других серотипов
АВ в период роста или яйцекладки.
Тест иммунодиффузии для исследования полевых сывороток на АВИ птиц проводится
по методике Domermuth (23). ВНА к вирусу CELO обнаруживали по уменьшению фокусов.
РСК не давала такого ясного результата как РДП в геле и не предлагается для серодиагн-
стики.
ИФА более чувствителен, чем РДП, РЗГА и в большинстве по чувствительности срав-
ним лишь с PH. Титры АТ не всегда прямо коррелируют с титром в других серологических
реакциях, исключая PH (8).
ELISA является общей группоспецифической реакцией, хотя в некоторых случаях, при-
меняя данный тест, можно получить выраженный типиспецифический ответ. Так, в 1982 г.
В. W. Calnek и др. (16), используя 10 серотипов птичьих аденовирусов, показали высокое
значение данного теста во взаимоперекрёстных реакциях. С помощью ИФА был обнаружен
группоспецифический АГ, общий для всех 12 серотипов АВ птиц. Высокая специфичность и
чувствительность позволяет использовать метод ELISA для изучения патогенеза АВ инфек-
ции, лабораторной дифференциальной диагностики гепатитов, а также скрининга коммерче-
ских СПФ-стад, на наличие птичьих АВ (40, 48).
В настоящее время ИФА проводят микрометодом в плашках с круглым дном. Перед ис-
пользованием конъюгат разводят 1:100 (PBS) с 0,05% твина-20. Субстратом является орто-
фенилендиамин (0,1 мг/мл) на свежеприготовленном 0,03%-ном раствора перекиси водоро-
да на дистиллированной воде.
Поскольку AAV является парвовирусом, то при размножении его должен присутство-
вать “помощник” - АВ птиц CELO. Поэтому во всех поголовьях птиц, где имеется AAV, не-
избежно продуцируются АТ к АВ. Чтобы обнаружить АТ к AAV в ELISA, необходимо очи-
стить его, чтобы удалить какие-либо АВ АГ, или, наоборот, разделение 2-х вирусов может
быть достигнуто лучше всего при изопикническом центрифугировании в градиенте плотно-
сти.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшая АВИ птица преобретает иммунитет, строго адекватный серотипу вирусов
CELO или GAL. Продолжительность и напряжённость его зависит от возраста птицы, мо-
мента вылупления цыплят, сроков их инфицирования, титров материнских (желточных) АТ,
патогенности лабораторного штамма или полевого изолята, а также сопутствующих инфек-
ций вирусной и бактериальной природы. В литературе встречаются разобщённые данные
авторов, изучавших постинфекционный и поствакцинальный иммунитеты в разных странах
и на разной по иммунологическому статусу птице (SPF-птица). Поэтому результаты изуче-
ния данного вопроса, практически не поддаются обобщению. Так напряжённость и продол-
жительность иммунитета при бронхите перепелов адекватна тяжести переболевания; пере-
болевшие перепела сохраняли устойчивость к заражению в течение в 2-х мес. Высокий уро-
вень постинфекционных АТ у них к QBV обеспечивал устойчивость птиц к повторному за-
ражению вирусом в течение 6 мес.
Материнские АТ у цыплят не предотвращают размножение вируса в пищеварительном
тракте; у большинства вновь вылупившихся цыплят с материнскими АТ развивается ла-
тентная инфекция и, как правило, такие цыплята имеют тенденцию утрачивать их уже в 3-4-
нед возрасте, после чего на них может появиться активная инфекция.
841
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Проводить специфическую профилактику АВИ у птицы очень трудно и не потому, что
наши знания о патогенности и поведения АВ птиц ограничены, а потому, что даже при од-
ной болезни птицы возможно выделение множества различных серотипов и изолятов АВ.
Учитывая это обстоятельство, специфическая вакцинация птиц против АВИ пока ещё нахо-
дится на стадии научных поисков.
Вакцина для взрослых индеек из шт. Tipton вызывала образование ВНА, устойчивость к
инфицированию новорождённых индюшат, содержащих материнские АТ (24). У спешно
применяли инактивированную p-пропиолактоновую вакцину с масляным адъювантом про-
тив CELO инфекции (33). Помимо ВНА вакцина сообщала цыплятам устойчивость к зара-
жению в 60-80% случаев. В 1979 г. испытывали подобную вакцину на 2-х группах птицы,
заражённых впоследствии вирусами CELO и EDS-76, было показано чёткое иммунологиче-
ское различие этих вирусов. Успешно применяли трёхвалентную вакцину против аденоин-
фекции (из шт. Phelps), ньюкаслской болезни и инфекционного бронхита птиц (33,46).
В литературе приведены более обнадёживащие результаты по вакцинации индеек
(против гемаррагического энтерита) и фазанов (против болезни мраморной селезёнки). Изу-
чены формирование иммунитета у перепелов и кур на АВ CELO-1. Изучали также динамику
посвакцинальных АТ у вирджинских куропаток, поражённых вирусом бронхита перепелов,
и устойчивоть их к инфекции в течение 6 мес. после вакцинации. Для профилактики приме-
няли живую вакцину из ослаблённого вируса путём серийных пассажей его на КЭ. С. Н.
Domermuth и др. (23) впервые успешно применяли инактивированную вакцину против ге-
моррагического энтерита индеек, приготовленную из суспензии больных птиц. В дальней-
шем подобные результаты были получены во Франции и Италии (11).
Успешно испытана живая авирулентная вакцина против болезни мраморной селезёнки
фазанов. Для этой цели вирус репродуцировался в лимфобластоидных клетках; поствакци-
нальный иммунитет развивался через 3 нед. Инактивированную вакцину готовили из селе-
зёнки индеек, клинически болевших в лёгкой форме геморрагическим энтеритом. В ответ на
вакцинацию у привитых фазанов продуцировались ПА. Спустя 7 нед все вакцинированные
фазаны не реагировали на экспериментальное инфицирование вирусом болезни мраморной
селезёнки. Инактивированная р-пропиолактоновая эмульсинвакцина против той же инфек-
ции сообщала фазанам надёжную устойчивость и образование ПА продолжительностью
180-240 дн в 50 и 35% случаев соответственно (23, 24).
Другие клинические формы проявления аденовирусной инфекции.
Гепатит с тельцами-включениями (инклюзионный гепатит - IBHV). Иногда это забо-
левание называют инфекционной анемией цыплят. В Японии от поражённых инклюзион-
ным гепатитом голубей выделен uit.S-PL-1 - типичный АВ птиц серотипа 2. Он высоко ви-
рулентен для 1-дн цыплят, вызывает у них гепатит и панкреатит. Аналогичный АВ был вы-
делен в 1990 г. от белохвостых перепёлок. Он оказался идентичным вирусу бронхита пере-
пёлок и был отнесён к серотипу 1 птичьего аденовируса (27, 29, 53).
Возбудитель инклюзионного гепатита цыплят устойчив к теплу, хлороформу, кислотам;
при инокуляции на ХАО КЭ образовывал светонепроницаемые участки, в культуре клеток
печени КЭ вирус - внутриядерные включения.
При инфекционной анемии бройлеров у погибших птиц обычно отмечали чёткую ане-
мию, пожелтение слизистых оболочек, диффузные геморрагии, анаплазию костного мозга.
При сильном поражении печени отмечали внутриядерные включения. При инфекционной
анемии бройлеров выделяли различные типы аденовирусов; отмечали иммунодепрессию,
усиливающую тяжесть болезни.
Аденовирусный синовит бройлеров. Помимо респираторных симптомов инклюзион-
ного гепатита, доказано участие АВ в поражении ног у цыплят. Недавно установлено, что
теносиновиты бройлеров связаны с АВ домашних птиц. Австралийские исследователи изо-
842
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
лировали АВ и Staphylococcus aureus при вспышках клинического теносиновита. В стадах
вспышки связаны с возрастом, первые клинические признаки появляются в 1-3 нед. У по-
ражённых птиц отмечают опухоли под местом соединения сухожилия с суставом, что меша-
ло их движению. Птицы при передвижении испытывают боль, у них спотыкающаяся по-
ходка. Также наблюдаются переломы, в результате которых для птиц становится проблемой
доставать пищу и воду. Иногда повреждается одна нога, но отмечается поражение и двух
ног. При прогрессирующих признаках наступает хроническая стадия, но смерти может не
наступить. Похожие признаки отмечались в Западной Вирджинии в 1978 г. среди 5-нед
бройлеров.
Гепатит кур-несушек. Этот синдром вначале наблюдали в стадах США (шт. Индиана)
в период пика продуктивности или после него. В результате выделен АВ, обозначенный как
“Индиана С”. Этот вирус является аденовирусом серотипа 1, подобным CELO-вирусу.
Аденовирусная инфекция у птиц других видов. Вирус CELO, изолированный от фа-
занов, явился осложняющим фактором, содействующим появлению респираторной болезни
среди этих птиц. Вирус, изолированный от гусят, может осложнять аспергиллёз и сальмо-
неллёз. Кроме того, его присутствием объясняется снижение процесса вылупляемости гуси-
ных эмбрионов. Изолирован вирус CELO от цесарок с явлениями панкреатита, от индеек с
микоплазмом и стафилококкозным артритом.
Аденоинфекция перепёлок и индеек. Бронхит перепелов может возникать в виде
вспышки, полностью поражая всё стадо в течение 3-7 дн с момента выявления первого при-
знака болезни. Болезнь характеризовалась высокой контагиозностью, респираторными рас-
стройствами и падежом перепелов, достигающим 80%. Первые симптомы аденоинфекции у
перепелов проявлялись в 3-недельном возрасте в виде отказа от корма, далее следовал ка-
шель, чихание и хриплое дыхание без выделений из носа, у 2-3% птиц наступал изгиб шеи к
спине между крыльями и между ногами. Болезнь длилась 1-3 нед, позднее у некоторых птиц
наблюдались нервные симптомы и чётко выраженные респираторные признаки. Вирджин-
ские перепела обычно поражались в 8-нед возрасте или ранее, и болезнь, проявляющаяся
депрессией, скученностью и взъерошенностью оперения у больных птиц, продолжалась в
течение 2-х нед. При респираторной форме у некоторых птиц в результате переполнения но-
совых проходов отмечались отёки кожи вокруг инфраорбитальных синусов. Однако носовых
выделений не отмечалось. У птиц более старшего возраста симптомы болезни были выра-
жены слабее, и распространялась она медленнее.
Данный вирус вызывает высокую смертность выращенных на ферме вирджинских ку-
ропаток в возрасте 3 нед. При вскрытии их выявлены множественные бледные фокусы диа-
метром 1-2 мм. Гистологические изменения в них варьировали от острого гепатоцеллюляр-
ного некроза без воспалительной реакции до некроза с инфильтрацией мононуклеарными
воспалительными клетками и отчасти гетерофилами. В гепатоцитах, прилежащих к пора-
жённым областям, отмечали базофильные внутриядерные включения. Из поражённой пчени
был выделен птичий АВ группы 1.
У 4-нед перепелов, заражённых интраназально и внутримышечно аллантоисным виру-
сом 3-го пассжа, первые симптомы отмечались на 7-й день после заражения и проявлялись
кашлем, чиханием, хриплым дыханием, в контрольной группе птиц симптомы были выра-
жены так же хорошо, как и у экспериментально заражённых. 9-нед виржинские перепела
более устойчивы к вирусу CELO при конъюктивальной и внутримышечной инокуляции.
Чувствительность более молодых перепелов (3-нед и моложе) оказались выше. Они прояв-
ляли респираторные и нервные симптомы, а некоторые погибали от инфекции. Респиратор-
ные симптомы появлялись как при инокуляции перепелам вируса бронхита и вируса CELO,
так и в контактных контрольных группах. Инкубационный период составлял 3-4 дня.
При контакте больных перепелов с курами различного возраста последние не заболева-
ли, хотя вирус от них выделялся. Симптомы, наблюдаемые у больных перепелов, легко вос-
843
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
производились при интраназальном заражении испытуемым материалом. Некоторые пере-
пела через 7 ди погибали, в трахее имелось небольшое количество желтоватой слизи, а так-
же отмечалось помутнение воздухоносных мешков. В эпизоотологическом отношении для
бронхита перепелов характерны внезапные вспышки с быстрым распространением болезни,
респираторные симптомы и высокая смертность. При вскрытии в трахее, бронхах и возду-
хоносных мешках находят обширные изменения в верхнем отделе респираторного тракта и
конъюнктиве.
Диагноз на бронхит перепелов основан на выделении вируса на эмбрионах или в куль-
туре клеток трахеи, из воздухоносных мешков, лёгких и водянистой влаги глаза. PH ставят с
моноспецифическими сыворотками к вирусу CELO или вирусу бронхита перепелов (QBV) с
целью идентификации изолята.
К вирусу бронхита перепелов оказались малочувствительными индейки. При заражении
в 3-4-нед возрасте интраназально или в синус у них отмечали только лёгкие респираторные
признаки болезни или их отсутствие.
Геморрагический энтерит индеек. АВ индеек - Turkey adenovirus (TAV) впервые за-
регистрирован в США в 1973 г., а болезнь “мраморная селезёнка фазанов” впервые описана
в Италии. В 1987 г. в Польше зарегистрировано 2 случая аденовирусного энтерита индеек.
Вирус был выделен из 12-пёрстной кишки и селезёнки после 5 пассажей на 6-нед восприим-
чивых индюшатах (32)..
Вирусы геморрагического энтерита индюков и болезни “мраморная селезёнка” фазанов
устойчивы при 56°С в течение 1 ч. Инфекционность этих вирусов подавлялась 0,0086%-ным
раствором гипохлорида натрия, сульфатом натриевого лаурила. Вирусы сохраняли виру-
лентность в течение 4 нед при 37° С, 6 мес при 4°С и 4 года при 40° С, были устойчивы к
хлороформу, эфиру и pH 3 в течение 30 мин. Они ие размножаются в КЭ, эмбрионах индю-
ков, уток, гусей и фазанов (23, 35, 45). Размножали эти вирусы при последовательных пас-
сажах в индюшиных клетках, полученных из лимфобластов типа В, взятых из опухоли, ин-
дуцированной вирусом болезни Марека. Уже иа 3-ем пассаже в этой клеточной системе
ЦПД проявлялось набуханием поражённых клеток, при микроскопии которых на 5-7-й дн
наблюдалось увеличение объёма их ядер. Последние были беспорядочно заполнены вирио-
нами.
Возбудитель геморрагического энтерита индеек успешно культивируется в культуре
лейкоцитов крови индеек. О первом успешном перенесении этого вируса на цыплят сооб-
щили A. Silim et al. (50). Авторы считают его источником инфекции для индеек, хотя у цы-
плят болезнь протекает бессимптомно или легко. Для выделения TAV используют содержи-
мое кишечника и селезёнку больной или павшей птицы. Этот вирус не размножается на эм-
брионах домашних птиц и в культуре клеток из них. Его обычно выделяют на индюшатах,
заражаемых в клоаку, орально или внутривенно. Смерть наступает на 5-6-й дн. У оставших-
ся в живых птиц наблюдается гипертрофия селезёнки. В настоящее время для выделения
данного вируса чаще используют клеточные линии опухолей индюков MDTS-RP19 или сус-
пензионную культуру клеток Lubovits-McCoy с добавлением куриной или фетальной сыво-
ротки крупного рогатого скота при инкубации культуры в термостате с СО2 при 41 °C.
Геморрагический энтерит поражает индеек в возрасте 5-12 нед. Падеж достигает 50%. У
индеек в возрасте 4-10 нед клинически болезнь проявляется общей депрессией, анорексией и
появлением крови в помете. Наблюдается некро-геморрагический энтерит, геморрагия пе-
чени, увеличение селезенки с некротическими очагами поражения. При микроскопии препа-
ратов из печени и селезенки наблюдаются внутриядерные включения. По морфологическим
и серологическим свойствам АВ индеек сходны с вирусом болезни “мраморной селезенки
фазанов”. Изоляты от индеек в Сев. Ирландии были отнесены к двум серотипам: TAV-1 и
TAV-2. Однако в США на основании кинетической PH они были разделены на 4 группы.
844
Глава XX. Family Adeuoviridae Аденовирусные инфекции
Болезнь “мраморная селезенка фазанов”. Это острая болезнь, протекающая с сим-
птомами поражения дыхательных путей и вызывающая большие потери среди фазанов при
интенсивном содержании. Для нее характерен внезапный падеж птицы в возрасте 2-8 мес от
асфиксии, возникающей в результате острого отека легких. Селезенка при вскрытии увели-
чена в 2-4 раза. На ее поверхности находят многочисленные некротические очаги, придаю-
щие органу мраморный вид. Отмечены также увеличение печени, геморрагический энтерит,
геморрагии в нижней части пищевода, измнение цвета и консистенции почек и костного
мозга. Гистологически обнаруживают, что гиперплазированная селезенка и некротические
очаги состоят из белой пульпы, содержащей амилоид. Скопление амилоида наблюдается
также в легких и почках. В ретикулярных клетках обнаруживали внутриядерные включения
эозинофильной и базофильной окраски. Электронно-микроскопический анализ выявил на-
личие вирусных частиц, по морфологии и размерам характерных для АВ. В паренхиме ор-
ганов отмечалась различной степени дистрофия или некротические изменения.
Обе инфекции можно попеременно переносить от индеек на фазанов с помощью гомо-
генатов из соответствующих тканей. Однако гибель наступает только у естественных хозяев.
Реконвалесцентная сыворотка, полученная от индеек, выживших после геморрагического
энтерита, способна защищать фазанов от инфекции, вызываемой вирусом болезни
“мраморная селезенка”.
В РДП вирус образует линии преципитации, идентичные тем, которые образуют вирусы,
вызывающие геморрагический энтерит индеек и болезнь “мраморная селезенка фазанов”.
Вирус болезни “мраморная селезенка фазанов” имеет также антигенные варианты. При
болезни “мраморная селезенка фазанов” преципитирующих АТ в желточном мешке и в сы-
воротке новорожденных фазанов до 80-дн возраста не обнаруживали (10). Однако наблюда-
ли повышенную сопротивляемость птенцов фазанов, рожденных от серопозитивных родите-
лей, что также свидетельствует о защитной роли материнских АТ при АВ инфекции птиц.
Аденовирусная инфекция гусей (GAV). АВ гусей был выделен из фекалий 1-2-мес гу-
сят и гусиных эмбрионов. Вирус резистентен к 20%-ным р-ром хлороформа и эфира, 0,1%-
ному р-ру дезоксихолата натрия, к 0,25%-ному р-ру трипсина. Патогенность для клеток
почки гусей не снижалась ни при pH 3, ни под действием 50°С свыше 3 ч, но бивалентные
катионы ослабляли терморезистентность. GAV не агглютинирует эритроциты гусей, домаш-
них кур и морских свинок. Антисыворотки к TAV не нейтрализуют GAV. Более точной се-
рологической типизации пока нет.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Х.Ибрагимов А. и др. Тр. ВСХИЗО, М. 1979, В., 159 :52. 2.Коровин Р.Н. Аденовирусные
инфекции. М. Колос. 1982 :112. З.Носач Л.Н. и др. Киев., Наук думка, 1982 :124. 4.Сергеев
В. А. и др. Основы проф. бол. птиц. 1989 :75. 5.Стойков Д. и др. Н. тр. Высш. Инет, зоотехн.
вет. мед. Стара Затора. София, 1989, 33, 2 :297. б.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирус., М.
Колос. 1979. 7.СюринВ.Н. и др. Вет. вирусология. М. Агропромиздат, 1991. 8.Фомина Н.В.
Аденовир. инф. живота., М., Колос, 1995. 9.Adair В.М. et.al. Avian Pathol, 1980, 9 :291.
lO.Agrimi Р. Bandeechi Ann Un Pisa., 1981, 34 :49. ll.Andral B. Et.al. Rec Med, 1984,160
.817. 12.Andral B. et.al. Avian Pathol, 1985, 14, 1 :147. 13.Battistacci B. et.al. Clin Vet 1982,
105 :289. 14.Beasly J.N. et.al. Av Dis 1978, 22 :313. 15.Borzenska W. Et.al. Med Wet, 1988, 44,
5 :279. 16.CalnekB.Wet.al. Avian Dis, 1982, 26 :897. 17.Cervio G. Clin Veter, 1987, НО, 1 :7.
18.Cowen B.S. et.al. Am J Vet Pres, 1977, 38 :959. 19.Cowen B.S. Zoot Int 1979,11 :3.
20.Cowen B.S. Avian Dis, 1987, 31, 2 :351. 21.Dawson G.J. etal. Am J Vet Res, 1979, 40, 11
:1624. 22.Dawson G.J. et.al. Avian Dis, 1980, 24, 4 :890. 23.Domermuth C.H. et al. Dis. of
poultry, 7th, ED, Cap. 22, 1984, 497. 24.Fadly A.M. et.al. Av. Dis., 1985, 29, 768. 25,Girshick T.
et.al. Avian Dis, 1980, 24, 2 :527.26.Goryo M. et al. Avian Pathol., 1989, 18, 4 605. 27.Guy J.S.
et.al. Avian Dis., 1988, 32, 3, 587. 28.1shibashi M. et.al. Adenoviruses. Ed. H.S.Gins-berg, New-
845
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
York, 1984, 497. 29.Jack S.W. et.al. Avian. Dis., 1990, 34, 3 :526. 3O.Jurajada V. Mh Vet Med,
1981, 36, 4 :147. 31,Keffbrd B. et.al. Avian Dis, 1980, 24, 4 :998. 32.Koncicki A. Med. Veter.,
1990, 46, 1, 16. 33.Lombardi D. et.al. Giorh Aliev, 1976,26 :13. 34.Luisis C. et.al. Bull Ac Vet
Fn, 1984, 57, 307, 13. 35.Malkinson M. et.al. Vet Rec, 1983, 113 :497. 36.Mandelli G. Clin Vet,
1985,109 :11,37.McFerran J.B. et.al. A review, Avian Pathol, 1977, 6 :189. 38.McFerran J.B.
Avian Imm, 1981, 16 :187. 39.McFerran J.B. Dis of poultry, 1984, 22 :516. 40.Mockett A.P.A.
et.al. Vir Meth, 1983, 7 :327. 41.Monreal G. et.al. Belin und Munchen, tierarztl. Wochenschr,
1979, 92, 13 :264. 42.Mori F. et.al. Avian Pathol., 1989, 18, №1, 197. 43.Mortrino P. et.al. Clin
Vet, 1986, 109, 84. 44.Nagaraja K.V. et.al. Am J Vet Res, 1982,43 :502. 45.Naserian K. et.al.
Avian Dis. 1982, 26 :816. 46.Rampin T. et.al. Clin Vet, 1980, 103 :422. 47.Reece R.L. et.al.
Austral, veter. J., 1987, 64, 12, 365. 48.Saifaddin M. et.al. Avian Dis., 1990, 34, 2, 239. 49.Silim
A. Et.al. Av Dis, 1978, 18 :399. 5O.Silim A. et.al. Av Dis, 1981, 25 :444. 51.Singh Dhillon A. La
clinica veterinaria, 1987, ПО, 1, 23. 52,Szeleszczuk P. Med Vet, 1980, 36, 8 :449. 53.TokaseK.
J. Veter. Sc., 1990, 52, 2, 207. 54.Van den Hurk J. Canad J veter Res, 1988, 52, 4 :458; Avian
Dis., 1990, 34, 1, 12. 55.Winterfield R.W. Dis. of Poultry 7dl Ed. Cap. 1984, 22, 497.
СИНДРОМ СНИЖЕНИЯ ЯЙЦЕНОСКОСТИ (ССЯ-76)
Egg drop Syndrome-76, EDS-76
Синдром снижения яйценоскости 76 (литье яиц, аденовирусная болезнь птиц) - вирусная
болезнь кур-несушек, характеризующаяся размягчением, отсутствием или депигментацией
скорлупы яиц и сопровождающаяся значительным снижением яйценоскости. Болезнь, полу-
чившая названия “синдром снижения яйценоскости-76”, впервые описана голландскими
учеными в 1976 г.
Продукция яиц при таком синдроме коррелировала с появлением у несушек преципити-
нов к аденовирусу. В этих случаях они также были инфицированы Mycoplasma synoviae.
Лишь в 1976 г. был открыт новый патологический агент, названный “Egg drop syndrome-76”
(EDS-76), быстро распространяющийся среди многих птицеводческих хозяйств Западной
Европы.
EDS-76 не принадлежит ни к одному из 12-ти серотипов птичьих АВ, отличаясь от них
в серологических реакциях, а также гемагглютинацией куриных, утиных и гусиных эритро-
цитов. Роль АВ в возникновении синдрома снижения яйценоскости-76 подтверждена много-
численными исследователями. McFerran впервые выделил вирус в Северной Ирландии из
слизистой оболочки носовой полости и гортани кур, у которых отмечалось снижение яйце-
кладки. Изолированный им шт. вируса EDS-76 в настоящее время известен как штамм 127.
В 1978 г. Baxendale из лейкоцитов кур изолировал вирус, серологически идентичный шт.
127. Он был назван ВС-14. McCacken и др. при экспериментальном заражении кур на
конъюнктиву и per os штаммом 127 воспроизвели болезнь и подтвердили этиологическую
роль его. В последующие годы во время вспышек подобной болезни у кур в Англии, Фран-
ции, Италии, Венгрии, ФРГ и других странах подтверждена ведущая роль вируса EDS-76.
Поскольку McFerran впервые предположил, что вирус 127 произошел от уток, Baxendale
исследовал сыворотки 24 уток и у 20 из них обнаружил преципитирующие, нейтрализующие
АТ и анти-ГА против вируса ВС-14. В дальнейшем Baxendale и др. предположили, что ви-
рус EDS-76 первоначально был изолирован от уток, не проявляя патогенности для птиц это-
го вида. Основанием для такого предположения являлся факт выявления его в Голландии -
стране, которая интенсивно занимается разведением уток. По мнению авторов, инфициро-
вание куриных стад в этой стране произошло в результате широкого применения живой
846
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
вакцины против болезни Марека из шт. “Риспенс”, продуцированного в культуре клеток
утиных фибробластов.
Со времени подробного описания болезни синдрома снижения яйценоскости (EDS), сде-
ланного Еск и др., и открытия самого вируса появились многочисленные сообщения о
вспышках этой болезни во многих странах мира: в Нидерландах, Северной Ирландии, Япо-
нии, Англии, Франции, Бельгии, Италии, США, Ираке и нашей стране. АТ к вирусу EDS-76
были выявлены у 51 % обследованных уток, 66 % гусей, 1 % кур.
Японские исследователи сообщали, что с 1978 по 1980 гг. в 14-ти бройлерных стадах
кур страны отмечалось снижение яйценоскости, а из клоачных смывов больных птиц было
выделено 11 изолятов и доказана их этиологическая роль. У кур-несушек в возрасте 8-9 мес
яйценоскость в течение 3-7 нед снижалась на 6-25 %, а яйца были размягчены и деформи-
рованы. Авторы считали, что возбудитель был завезен в Японию из европейских стран с
импортируемой птицей.
Было также показано широкое естественное распространение вируса 127 среди уток,
причем куры, находившиеся в контакте с инфицироваными утками, не становились инфи-
цированными. По мнению McFerran, птицы в Северной Ирландии лишь недавно стали чув-
ствительны к вирусу 127, поскольку ранее 1976 г. специфических АТ в сыворотках кур не
выявляли.
Lohr и др. в 1981 г. провели серологическое исследование стад кур, уток, гусей и чаек в
Англии и Нидерландах. В птицехозяйствах Дании эту болезнь и экономический ущерб, на-
носимый ею, изучали Badstue, в Англии - Baxendale. По данным последнего, у 80 % кур с
пониженной яйценоскостью постоянно обнаруживали АТ к EDS-76. Позднее было много-
кратно подтверждено широкое распространение вируса у взрослых уток и молодняка раз-
личных пород. У утят до 2-нед возраста в 40-90 % случаев выявляли пассивные АТ, но в 3-
нед возрасте их уже не обнаруживали. Более позднее возрастание уровня АТ свидетельство-
вало о персистенции вируса (35). В Израиле в 1980 г. обследовали стада домашних и диких
птиц (индеек, кур, гусей, уток, цапель) и установили наличие АТ у пекинских и мускусных
уток, а также высокие уровни антигемагглютининов у египетских цапель (28). Серологиче-
ское исследование диких птиц показало наличие анти-ГА в крови сов, аистов, лебедей и ди-
ких гусей. Яйца, снесённые положительно реагирующими дикими птицами (совы, аисты),
имели плохо сформированную скорлупу (19, 20). Подобная болезнь кур обнаружена во мно-
гих птицеводческих хозяйствах Венгрии (15). В Англии проведен анализ снижения продук-
тивности птицепоголовья (6). У 80% обследованных кур с пониженной яйценоскостью вы-
явлены антитела к EDS-76. В результате серологического обследования 16 стад кур породы
белый леггорн и уток породы хаки Кембпел специфические антигемагглютины выявили в
27 и 37,6% случаев соответственно. В нашей стране в 1980-1982 гг. в ряде птицефабрик бы-
ли выявлены антигемагглютины к вирусу EDS-76.
Ещё в 1975 г. во Франции отмечали, что средние потери от этой болезни составляли 15
яиц на несушку. Больная птица давала до 15% деформированных, совершенно без скорлупы
или с очень слабой скорлупой яиц. У племенных несушек, яйцо которых используют для ин-
кубации, выбраковка достигала 50 яиц на голову (16). Указанный синдром вызывал сниже-
ние яйценоскости на 15-25%, по другим данным - на 15%. Потери продуктивности при этой
болезни составляли в среднем 12 яиц на курицу. В Англии ущерб этой инфекции достигал
2,4 млн фунтов в год. В 1979 г. в 6 штатах США экономический ущерб от снижения яичной
продуктивности и качества яиц достигал 5 млн долларов. Аналогичные данные приводили и
другие учёные (10, 16). На птицефермах Японии восстановление продуктивности у перебо-
левшей птицы продолжалось 3-7 нед, при напольном содержании её яйценоскость так и не
восстанавливалась до первоначального уровня на 6-12% (42). Количество яиц с дефектами
скорлупы может достигать 38-40% (13). Отмечено также снижение выводимости, а также
847
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
жизнеспособности цыплят в первые дни жизни. Клинические признаки болезни у кур, как
правило, не проявляются. Лишь некоторые авторы (24) отмечали отдельные случаи про-
страции, взъерошенности перьев, анемии, диареи, анорексии и угнетения во время яйце-
кладки. У 10-70% больных птиц наблюдалась также синюшность серёжек и гребня. Основ-
ной характерный клинический признак инфекции в стаде - снижение яйценоскости до 15% и
более. По данным Е. Gough (16), этот процент достигал 30, а по данным I. Brugere-Picoux
(10) - 50. Пик яйцекладки может задерживаться до 4-5 нед, восстанавливаться через 4-6 нед,
но первоначального уровня уже не достигает. Указанные признаки в неблагополучном стаде
сохраняются 2-12 нед (42). Кроме того, для кур яичных пород характерно изменение внут-
реннего качества яиц: белок их становится водянистым и мутным с беловатыми хлопьями.
Симптомы EDS-76 также наблюдали и среди молодых мускусных уток, находившихся
среди пекинских уток. В начале болезни заметно увеличение числа бесцветных яиц с тонкой
и шероховатой скорлупой или яиц с трещинами. Затем следовала продукция яиц вообще без
скорлупы (“литьё яиц”). Это чаще проявлялось у несушек в 25-35-нед возрасте, хотя птица
всех возрастов была подвержена этому синдрому. Нарушение яичной продуктивности про-
являлось двояко: либо невозможностью достичь ожидаемого пика продуктивности, либо па-
дением яйценоскости сразу после достижения пика. Снижение продуктивности может коле-
баться в пределах 3-55%, наиболее резкое падение её происходит в том случае, если птица
достигла пика продуктивности или инфекция в стаде быстро распространяется. При медлен-
ном распространении инфекции обычно отмечается небольшое снижение яйценоскости, но
продолжающееся более продолжительное время.
Птица, поражённая EDS-76, обычно внешне выглядит здоровой и лишь в некоторых
случаях разбитые и водянистые яйца, временное снижение аппетита или сонливость птицы
наводят на подозрение в хозяйстве инфекции EDS-76.
Интересно, что в группах птиц, где выявляются антигемагглютины, нет признаков бо-
лезни, свойственных синдрому EDS-76, но в тех группах птиц, где их нет или они выявля-
ются в малых титрах, яйценоскость снижается. Признаки болезни обычно проявляются на
30-й нед. при наступлении пика яйценоскости. Это указывает на то, что вирус в латентной
фазе находился в организме и ранее, но резко и активно начал проявлятся на фоне физиоло-
гического стресса - возрастания яйценоскости и увеличения гормонов.
Патологоанатомические изменения характеризуются отёком и инфильтрацией тканей
матки и яйцевода, незначительным катаральным энтеритом, однако в ряде случаев при
вскрытии трупов выраженные изменения отсутствуют. При гистологическом исследовании
установлена дегенерация кальцифирующих желёз, их мононуклеарная инфильтрация, лим-
фоидная гиперплазия различной степени в печени, селезёнке и других органах (15), атрофия
маточных желёз, инфильтрация гетерофилов, лимфоцитов и плазмоцитов, сопровождаю-
щаяся обширным отёком (2, 39). Заражение кур 110-135-дневного возраста внутремышечно
и интратрахеально вирусом EDS-76 (шт. В8/78) ведёт к поражениям различных отделов яй-
цевода и кишечника. При внутримышечном введении вируса патологические изменения от-
мечались в мышечной ткани.
Что касается механизма повреждения яичной скорлупы, то он до сих пор не ясен. Гисто-
логические исследования яйцевода не показали глубоких изменений; при исследовании сы-
воротки обнаружено только уменьшение щелочной фосфатазы - энзима, который входит в
комплекс механизмов формирования скорлупы.
Вирус EDS-76 в эмбрионах уток вызывает повышение содержания некоторых фер-
ментов (альделазы и холинэстеразы), что коррелирует с размножением вируса. Далее иссле-
дователи проследили за поведением некоторых трансфераз и обнаружили повышение их ак-
тивности, особенно аминотрасферазы и пироватоксидазы. На примере вируса EDS-76 были
848
Рис. 86. Вирус простого герпеса.
1-нуклеокапсид вируса: 2 модель нуклео-
капсида (стрелки обозначают капсомеры,
образующие вершины икосаэдра, х340000)
(Киселев, 1964).
В
Рис. 87. Вирус ИРТ ИПВ. А-внутриядер-
ный вирус ИРТ 7ИПВ (а-просматриваются
капсомеры), х140000 (Е. И. Скалинский,
Г. А. Иванова, 1971). В-ИРТ/ИПВ вирус
по Шульце. 1974.
А В
Рис. 88. Вирус РПЛ. А-мембрана ви-
рионов (а) и палочковидный нуклеоид
(б), (х160000), (Абодили и др., 1970);
В-штамм К 19, оболочечный капсид
(а), полые капсомеры (б), (х240000),
(Багустидр., 1970).
Рис. 89. Клинические признаки ИРТ
(Либерман, Шарф. 1974).
Рис. 91. Болезнь Ауески у кро
лика (С. Кретцшмар, 1974).
Рис. 90. Вирус болезни Ауески. Внекле-
точное скопление вирионов, х27ОООО
(А. Авякян, А. Быковский, 1970).
849
Рис. 92. Вирус ИЛТ.
А- «полный* капсид с характерным шес-
тигранным контуром (х 180000); б-группа
«полных* капсид; в,г- «полный» капсиде
очерченными, удлиненными капсомера-
ми на периферии (линии=10нм) (Вотрач,
1962, 1963).
Рис. 93. Признаки ИЛТ птиц
(Шарф. 1974).
Рис. 94. Поражения ХАО КЭ, заражен-
ных вирусом ИЛТ (фото Шарф, 1974).
Рис. 95. Культура клеток легочных
макрофагов через 11 дн после зара-
жения вирусом цитомегалии поро-
сят. Базофильные внутриядерные
включения, х720 (R. G. Watt, 1994).
Рис. 96. Поражение легких на16-й дн
после заражения вирусом ЦМП в су-
точном возрасте (N. Edington, 1994).
Рис. 97. Вирус БМ: a-ядро; б-цито-
плазма; в-созревшие вирионы, окру-
женные одной добавочной мембраной,
х80000 (Эпштейн, 1971).
850
Рис. 99. Клинические признаки при БМ
(Шарф. 1974).
С
Рис. 100. Патологоанатомические изменения при БМ: A-поражение легких; В-опухоли в
сердечной мышце; С-диффузное поражение яичника; D-опухоли печени.
851
Рис. 100. Патизменения при
БМ: Е-поражение грудной
мышцы; F-поражение железис-
того желудка;О-иной характер
опухолей в печени (сравни с D).
Рис. 101. ЦПД ВГИ в культуре фибробластов
эмбрионов перепелов(Слепенко, 1987).
Рис. 102. Вирус CELO: а-икосаэдральная
структура вирионов; б-гексагональные кап-
сомеры с треугольными поверхностями (Пе-
тер и др., 1972).
Рис. 103. Вирионы аденовируса птиц (изо-
лят Н 131), х160000 (Мак Доугал и Петерс,
1974).
852
Рис. 104. Строение вириона вируса ос-
пы: 1 - общий вид; 2 - вирион без обо-
лочки (видны нуклеоид и одно боковое
тело); 3 - общий вид нуклеоида; АОС,
АОВ, ВОС - плоскости рассечения ви-
риона (А. Авякян и др. 1970).
Рис. 105. Строение вириона вируса ос-
пы при рассечении в плоскости АОВ со-
гласно рис.86: 1 - фрагмент цитоплаз-
матической оболочки: 3, 4, 5 - внешняя,
средняя и внутренняя осмиофильная
мембраны; 6 боковое (латеральное) те-
ло; 8 - гранула; 11 - впрусоплазма: 12,
13 и 14 внешняя средняя и внутренняя
оболочки нуклеоида; 15 - нуклеоидо-
плазма; 16. 19 и 20 - компоненты S-
Рис.106. Скопление вирионов оспы
овец, х80000. (Скалинский, 1961).
структуры нуклеоида.
Рис. 107. Вирионы (а) и белковые пара-
кристаллы, характерные для ориги-
нальной (генуинной) оспы свиней,
хЮОООО (Скалинский и др., 1966).
Рис. 108. Вирус оспы голубей. А - выра-
женные филаменты белковой оболоч-
ки, х200000; Б - скопление вирионов
ОГ (тельца Боллингера) х20000 (Ска-
линский, 1958, 1966).
Рис. 109. А - вирион оспы коз, хЮОООО;
Б - паракристаллические скопления (а)
и вирионы (б).
853
Рис. 110. Типичные кожные узлы у ко-
ровы при бугорчатке (по Томасу).
Рис.111. Вирус миксомы кроликов.
Зрелая частица - три электронноплот-
ных слоя и гантелеобразное ядро,
хООООО (Пурчелл и Кларк, 1972).
Рис. 112. Вирус оспы кроликов (Эп-
лейрд и др., 1972).
Рис. 113. Вирион паравакцины (Черта
= 100 нм).
Рис. 114. Ультратонкий срез вириона
оригинальной оспы буйволов. х80000
(Скалинский и др., 1974).
Рис. 115. Оспенные поражения на коже
живота свиньи: Ра - папула; Ри - пусту-
ла; N - сосок (J.A.House, C.A.House,
1994).
854
Рис. 116. Оспенные поражения в эпидер-
мисе свиньи: балонирующая дегенера
ция цитоплазмы (В); цитоплазматичес-
кие включения (I); просветление центра
ядра (N)(J.A. House, С.A. House, 1994).
Рис.117. Микрофотография эпидермаль-
ной клетки с цитоплазматической деге-
нерацией и множеством частиц вируса
оспы свиней (V); во второй клетке - мар-
гинация хроматина (МС) и филаментоз-
ный матрикс в ядре (F) (Д.А. Григ, 1994).
Рис. 118. Свиные макрофаги, инфици-
рованные вирусом АЧС. Несколько ви-
русных частиц показаны стрелками
(J.M. Sanchez-Vizcaino, 1994).
А
Рис. 119. Изменения селезёнки (А) и
лимфоузлов (Б) при острой и подострой
АЧС (нижние - норма)
Рис. 120. Почка при острой АЧС.
Интенсивные геморрагии и петехии на
поверхности.
Рис. 121. Казеозная пневмония при
хронической АЧС.
855
Рис. 122. Вирус папилломы кролика
(Вильямс и др. 1960).
Рис. 123. Вирус папилломы КРС,
х320000 (Шульце, 1974).
Рис. 124. Папилломатоз КРС.
Рис. 125. Модель аденовируса (Вален-
тайл, 1965).
Рис. 126. Вирус инфекционного гепати-
та собак: а - частицы округлой формы;
б - частицы удлинённой формы,
х110000 (Дрисмен и др., 1972).
Рис. 127. Аденовирус свиней, х200000
(Шульце. 1973).
856
Рис.128. Патологоанатомические из-
менения при КЧС.
Рис.130. Селезёнка при острой форме
КЧС. Зоны геморрагий с некротизиро-
ванными центрами.
Рис. 132. Слизистая толстого кишечни-
ка при хронической форме КЧС. (Хоро-
шо различимые округлые зоны некро-
зов - “бутонные язвы”).
Рис. 129. Выраженный геморрагичес-
кий диатез кожи при острой форме
КЧС.
Рис.131. Поражение серозной оболоч-
ки тонкого кишечника свиней при ос-
трой форме КЧС.
Рис. 133. Петехии и геморрагии в поч-
ках при острой форме КЧС.
857
Рис.134. Геморрагии на слизистой обо-
лочке мочевого пузыря при КЧС.
Рис.135. Эрозии и язвы носового зер-
кальца при ВД-БС.
Рис. 136. Поражение почек и отложе-
ние мочекаменных солей (уратов) при
ИБК.
Рис.137. Изменение формы и размера
яиц при ИБК (норма - в центре).
Рис. 138. Характерные патологоанато-
мические изменения при НБ.
Рис.139. Патологоанатомические из-
менения при НБ.
858
Рис.140. Изменение лимфоузлов при
лейкозе КРС.
Рис.141. Гемосидероз печени при ин-
фекционной анемии лошадей.
Рис.142. Первичные поражения пятач
ка при везикулярной экзантеме сви-
ней.
Рис.143. Поражения языка при вези-
кулярной экзантеме свиней.
Рис.144. Запрокидывание головы и па-
резы конечностей при болезни Тенеша.
Рис.145. Отделение копытца и пораже-
ние кожи при везикулярной болезни
свиней.
859
Рис. 146. Поздние поражения при ВВС.
Такой тип поражений обусловлен раз-
вивающейся волной инфекции.
Рис.147. Изъязвление носового зер-
кальца и нижней губы при везикуляр-
ной болезни свиней.
Рис.148. Изменения печени при гепа-
тите утят.
Рис.149. Сильный цианоз кожи и ко-
нечностей при энцефаломиокардите
свиней.
Рис. 150. Цианотичность конечностей
при энцефаломиокардите свиней.
860
Рис. 151. Множественные некротичес-
кие поражения миокарда при энцефа-
ломиокардите.
Рис. 152. Ящур!
Рис. 153. Везикула при ящуре.
Рис. 155. Отделение копытец при ящуре.
Рис. 154. Поражения языка при ящуре:
лопнувшие и нелопнувшие везикулы.
Рис. 156. Недавно лопнувшие везику-
лы с последующим образованием язв.
861
Рис. 157. Поражения при ящуре.
Рис. 158. Повышенная саливация у со-
баки при болезни Ауески.
Рис. 159. Вульвовагинит при ИРТ/
ИПВКРС.
Рис. 160. Поражения носового зеркаль-
ца при злокачественной катаральной
лихорадке.
Рис. 161. Поражения сосков вымени
при язвенном мамиллите КРС.
Рис. 162. Острая герпесвирусная экзан-
тема лошадей (HVE-1).
Рис.163. Изъязвления при герпесви-
русной экзантеме (ринопневмонии) ло-
шадей.
862
in
Рис. 164. Тяжёлые геморрагии и проб-
ки в трахее при ИЛТ.
Рис. 165. Болезнь Марека. Утолщение пра-
вого седалищного нерва.
Рис. 166. Поражения твёрдого нёба при
папулезном стоматите КРС.
Рис. 167. Поражения губ при контаги-
озном пустулезном дерматите овец.
Рис. 169. Оспа птиц. Поражение века
и глаз.
Рис.168. Оспа птиц. Поражения гре-
бешка и верхней части головы.
863
Рис. 170. Миксоматоз кроликов.
Рис. 171. Гистосрез кожи при миксома-
тозе кроликов. Балонирующая дегене-
рация.
Рис.172. Оспа у поросят-сосунов в раз-
личной стадии развития.
Рис. 173. Морфология оспин у свиней.
Рис. 174. Оспа у пигментированных по-
росят.
Рис. 175. Множественные оспенные по-
ражения 6-недельного поросёнка.
864
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
(19, 20). По мнению A.Bartha и др1. (5), инфицирование куриных стад вирусом произошло в
результате применения вакцины против болезни Марека из шт. “Респенс”,
репродуцируемого в культуре клеток утиных фибробластов.
Локализация вируса, вирусемия, вирусоносительство и вирусовыделение.
Вирус в организме инфицированной птицы может находиться в латентном состоянии до
её половой зрелости или начала яйцекладки. В органах и тканях экспериментально
зараженных цыплят он сохранялся до 5 нед. и выделялся с фекалиями в течение 2-х нед.
после заражения (13, 17). В.И.Бурцев и др. (1, 2) показали, что при заражении цыплят в
конъюнктиву, клоаку и per os возбудитель удавалось реализовать на 7-е сут из кишечника,
селезенки, трахеи, матки, прямой кишки.
Экспериментальная инфекция. По данному вопросу в литературе имеются
однозначные результаты. Экспериментальное заражение цыплят различных возрастных
групп и кур до момента яйцекладки показало отсутствие у них клинических признаков
болезни. В их органах и тканях вирус сохранялся до 5 нед и выделялся с фекалиями в
течение 2 нед. после заражения (17). При заражении 1-дневных SPF-цыплят в глаз или
клоаку через 7 дней вирус реизолировали из их кишечника и бурсы Фабрициуса. Цыплята,
вылупившиеся из яиц, снесенных несушками в острой фазе заболевания EDS-76, не
образовывали АТ, и отних удавалось изолировать вирус (3, 6, 8, 12). Последний постоянно
выделяли ииз яиц, снесенных в первые 8-9 дн после заражения, когда их скорлупа была
нормальной, но вирус уже присутствовал в яйцеводе несушки. Вирус (шт. ВС-14) удавалось
выделить и из лейкоцитов крови эспериментально зараженных цыплят в течение 15-ти дн
после заражения, но безуспешно - из полевых проб в более поздние сроки.
У цыплят, инфицированных в 19-нед возрасте, начало яйцекладки по сравнению с
контрольными птицами задерживалось на 9 дн. В начале опыта она на 15-20% была ниже,
чем у контрольных птиц, при этом процент выбракованных яиц нарастал, достигая
максимума к 15-16-ному дн после заражения. При экспериментальном заражении кур-
несушек перед яйцекладкой шт. Д-61 происходила задержка её и снижение яичной
продуктивности приблизительно на 20%. Как уже указывалось, экспериментальное
заражение цыплят и кур различных возрастных групп не сопровождается появлением
клинических признаков болезни до момента яйцекладки. Симптомы болезни проявляются
лишь у взрослых кур в период яйцекладки. Из белка и желтка яиц, снесенных без скорлупы,
выделить вирус не удавалось. Это свидетельствует о том, что вертикальная передача
инфекции (через яйцо) имеет место лишь короткое время, вероятно, в первые 7 дн псле
инфицирования.
Патология при EDS-76 проявляется однотипно у кур-несушек разных линий и пород.
Так, например, при заражении коричневых кур линий ВС, НС и кур породы белый леггорн
линии WL штаммом Н-162 уже через 7 дн после заражения у птицы обнаруживались
антитела, снижение яйценоскости и в течение 3-х дн наблюдали нарушение скорлупы.
Яйца,особенно с ненормальной скорлупой, прошедшие через пораженный яйцевод, могут
нести в себе вирус. Инфицированные яйца могут иметь важное значение в распространении
вируса EDS-76 во внешней среде (37). Инфекция EDS-76 подавляла образование
группоспецифических АТ к АВИ, ызываемой АВ группы CELO (FAV). Относительно
чувстви-тельности других видов птиц к экспериментальной инфекции опубликовано
сравнительно мало данных. В опытах 8, 19, 29-дн гусята, а также гусыни в период
яйцекладки весьма восприимчивы к заражению вирусом EDS-76. У всех инфицированных в
течение 3 нед после заражения в фекалиях установлено наличие вируса и анти-ГА. При
экспериментальном заражении этим вирусом у чижей не отмечалось видимых симптомов
болезни в течение всего периода наблюдения, но вирус выделяли из фекалий, и у всех птиц
находили АТ в титре 1:64-1:256. АТ также были выявлены у воробьев, обитающих вблизи
55 Зак. № 171
865
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
птицефабрик. Предполагают, что в естственных условиях происходит перекрестное
инфицирование дикой и домашней птицы, а выделение вируса с фекалиями делает
возможным его распространение на разные расстояния (33).
Культивирование. Вирус EDS-76 размножается in vitro в клетках утиных эмбрионов
более интенсивно, чем в эмбрионах птиц других видов (34, 35, 36), поэтому утиные
эмбрионы и однослойные клеточные культуры утиного происхождения - оптимальная
система для культивирования этого вируса. J.B.Ferran (31) адаптировал штамм 127 в
культуре клеток печени эмбрионов кур и успешно культивировал его на утиных эмбрионах.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источник инфекции - инфицированная птица, выделяющая вирус с фекалиями или
передающая его потомству с яйцом, т.е. наблюдается вертикальная или трансовариальная
передача. К настоящему времени мнения относительно источников и путей передачи данной
инфекции мнения не всегда однозначны. Анализ таких сообщений позволяет составить
следующее представление об эпизоотических особенностях EDS-76. Во-первых, в
естественных условиях резервуар возбудителя болезни домашние и дикие утки всех пород
(43). При исследовании стада уток в 85% случаев выявляли ПА, ВНА и анти-ГА к шт. ВС-
14, а из клоаки 10 клинически здоровых утят белой пекинской породы выделил изоляты, не
отличающиеся от шт. ВС-14. Эго свидетельствует о широком распространении вируса EDS-
76 среди уток, причем в естетвенных условиях он всегда передается от утки к утке, но нет
прямых доказательств передачи его посредством контакта от уток курам, хотя в хозяйствах
у кур антигемагглютинины обнаруживались лишь после того, как их выявляли у уток. У кур
в этих случаях АТ обнаруживались очень редко и в низких титрах (максимально 1:20). В
коммерческих утиных стадах США обнаруживали анти-ГА к шт. 127. Вопрос о
естественном носительстве этого вируса утками, курами, гусями и птицами других видов
подтверждается большим числом однозначных по существу примеров. В естественных
условиях куры-реконвалесценты продолжительное время остаются вирусоносителями, и
активизация персистирующего вируса - следствие стрессового воздействия на организм,
обусловленного началом яйцекладки. Слабая горизонтальная передача вируса EDS-76
показана как в экспериментальных, так н полевых условиях (31). Эго подтверждается тем,
что иногда EDS-76 долго регистрируется в одной части помещения, тогда как другие части
свободны от инфекции. Поэтому перегородки между группами птицы могут быть
препятствием для распространения инфекции EDS-76. При напольном содержании болезнь
распространяется в течение 1-15 дн. В этих условиях возбудитель передается контактным
путем через обслуживающий персонал, предметы ухода, транспорт и т.д. (16). При
скармливании зараженных яиц здоровым птицам, последние заолевают. Когда вирус EDS-
76 есть в хозяйстве и наблюдается литье яиц,большинство, если не все птицы
неблагополучной фермы серопозитивны, что также доказывает горизонтальную передачу
вируса. Птица может инфицироваться при транспортировке в плохо дезинфицированных
грузовиках, при использовании корма из инфицированных мест; а также через предметы
ухода, особенно через контаминированные подложки для яиц. Основной путь передачи
инфекции не только горизонтальный, но и вертикальный - через яйца, снесенные
инфицированными птицами. Отмечают случаи распространения возбудителя болезни со
спермой петухов (28,43). Подтверждена вертикальная передача вируса выделением шт. В61
из печени вылупившихся цыплят (13). Экспериментально доказана вертикальная передача
вируса потомству в первую неделю после заражения.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на оновании лабораторных исследований с учетом эпизоотологических
данных, клинических признаков и патологических изменений. Для выяснения причины
болезни используют методы ранней и ретроспективной диагностики.
866
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
Метод ранней диагностики
Выделение вируса. Из патологического материала (клоаки печени, селезенки,
яйцевода, лейкоцитов, крови, фекалий) более успешно вирус выделяют в первые 10 дн
инфицирования (29,30). Испольуют для этого утиные эмбрионы или культуру клеток почек,
печени эмбрионов уток и гусей, утиных и гусиных фибробластах, а также клетки
гепатоцитов КЭ. Однако ФЭК и сами эмбрионы для этой цели не пригодны (4). Для
выделения вируса необходимо не менее 3-х последовательных пассажей. Материалом,
взятым с помощью тампона из клоаки, глотки, яйцевода, кусочками печени и селезенки, а
также лейкоцитами заражают чувствительную культуру клеток. Проводят не менее 3-х
последовательных пассажей с 7-10 дн интервалом. Присутствие в среде вируса EDS-76
устанавливают с помощью РГА. Обычно в сыворотке у всех экспериментально зараженных
птиц в РЗГА выявлялись антигемагглютинины. В опытах, где имелась одна зараженная
птица среди группы здоровых контактных птиц, последние, как правило, становились
серопозитивными, однако выделить вирус от иих не удавалось, и инфекция далее не
передавалась следующей партии контактно подсаженных птиц.
Индикация выделенного вируса. Вирус EDS-76, как правило, типируют в РЗГА и PH
на утиных эмбрионах илн в культуре клеток утиного происхождения. Учитывая, что между
шт. вируса EDS-76, выделенными в различных странах, отсутствует антигенное различие, в
качестве специфических сывороток для типирования вновь выделенного вируса используют
антисыворотки к штаммам 127, ВС-14, Е-7, В8/78, 3877 и JPA-1.
Антисыворотку к штаммам готовят на SPF-курах-несушках и кроликах и используют
для непрямого метода иммунофлюоресценции с меченой кроличьей или козьей антикуриной
сывороткой конъюгированной ФИТЦ.
Первые изменения в инфицированной культуре клеток утиных фибробластов отмечают
уже через 48 ч после заражения, когда в пограничных районах, зонах клеточного монослоя,
появляются отчетливые и частые уплотнения. Через 72 ч после заражения появляется
множество округлившихся клеток и мертвых клеток, плавающих в среде; монослой
начинает сжиматься и в нем появляются большие дыры. К 96-му часу монослой зараженных
клеток, содержащих соединившиеся гранулы, формирует длинные тяжи. Таким изменениям
подвергаются эпителиальные клетки. Однако фибробласты между эпителиальными
островками не поражены. Часто в среде культивирования присутствует большое число
округлых, свободно плавающих клеток. В этом, собственно, и состоит цитопатический
эффект, индуцируемый шт. 127.
Окраска зараженного монослоя гематоксилин-эозином позволяет выявлять
внутриядерные включения.
ЭМ. Через 24 ч после заражения культуры клеток утиных фибробластов вирионы и
несколько типов включений выявляются в ядрах клеток. Размер частиц составлял 70-75 нм
в диаметре. Отмечали 2 основных типа их. Некоторые из них имели электронноплотную
сердцевину (нуклеотид) 50 нм в диаметре, отделенную от внешнего капсида светлым
пространством. Другие частицы имели электронно-светящийся (яркий, прозрачный) центр,
содержащийся в мембране, соединенной с капсидом. Эта внутренняя структура (40 нм в
диаметре) была также отделена светлым пространством от внешнего капсида.
Серодиагностика. Помимо выделения и идентификации вируса с помощью РГА-РЗГА
и ИФ у птиц подозрительного стада исследуют сыворотки на присутствие специфических
антител. Это делается в 3-х случаях: когда изучают динамику АТ в результате
экспериментального заражения птицы: при широких полевых серологических
обследованиях птицы с целью установления наличия инфекции в стаде, используя принцип
парных сывороток; и в случаях установления иммунологического статуса птицы после
применения вакцины. Во всех случаях применяют серологические исследования (РЗГА,
55*
867
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
РДП, PH и ИФА), для чего врачу-диагносту необходимо в качестве контроля иметь под
рукой заведомо положительные сыворотки.
Тест ингибиции ГА (РЗГА) с желтком яиц. Предложен в 1985 г. Он имеет ряд
преимуществ перед аналогичной РЗГА с испытуемой сывороткой крови.
PH. Её ставят в утиных эмбрионах и в культурах клеток печени и почки эмбрионов уток
и утиных фибробластов и имеет важное значение для типирования вируса в сомнительных
случаях. Для этого монослойную культуру, выращенную в пробирках на среде Игла,
инокулируют смесью вирус-сыворотка, которую предварительно выдерживают (30 мин) при
комнатной температуре (22°С ) и инокулируют по 0,2 мл в 5 пробирок с культурой клеток.
Данная реакция может быть использованна для определения различий между типичными
аденовирусами птиц, поскольку этот метод недостаточно чувствителен для обнаружения
сходных антигенов. С помощью РДП проводят серологиеское исследование стада кур на
EDS-76 (42), но она менее чувствительна, чем РЗГА, и в РДП невозможно обнаружить
низкий уровень АТ. РДП удобно ставить и с экстрактом желтка.
На основании сравнительных исследований по обнаружению АТ к вирусу ССЯ-76 в
РЗГА и ИФА была установлена более высокая чувствительность последнего (32). Он
выявлял положительных сывороток на 7% больше, чем РЗГА.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Переболевшие куры приобретают напряженный продолжительный иммунитет. В
литературных источниках отсутствуют сведения о повторном заболевании птиц. Отдельные
птицы могут быть поражены в течение 3-16 дн, далее они выздоравливают и
восстанавливают свою яйценоскость. У небольшого числа птиц вообще никогда не
развивается болезнь. Обычно в неблагополучном стаде птицы процесс выздоровления
длится от 4 до 14 нед. Для специфической профилактики EDS-76 в различных стадах
разработаны и успешно применяются, главным образом, инактивированные вакцины. Так,
еще в 1978 г. была показана возможность вакцинопрофилактики этой инфекции с помощью
инактивированной масляной вакцины, содержащей вирус ВС-14. В 1980 г. (43) разработана
и успешно испытана бивалентная вакцину против EDS-76 и НБ, причем первый вирус был
представлен двумя шт. Е-77 и 127, которые вначале репродуцировались в культуре
гепатоцитов КЭ, а далее в культуре фибробластов утиных эмбрионов. Четыре
высокоиммуногенных шт. ВНБ размножались в КЭ. Вирусы инактивировали р-
пропилактоном, в качестве адъюванта использовали высокий уровень анти-ГА (2 7-210) к
EDS-76 и НБ. Вакцинация обеспечивала полную защиту несушек при повторном заражении
их патогенным вирусом EDS-76 как спустя 10 дн после вакцинации, так и в более поздние
сроки - до года, а также высокий уровень материнских АТ у потомства. По рекомендации
авторов птицу вакцинируют внутримышечно в 16-20-нед возрасте по 0,5 мл. Помимо
горизонтальной передачи этот препарат надежно предотвращает и вертикальную передачу
вируса и ограничивает распространение инфекции не только в пределах одной фермы, но и
по всему региону, от фермы к ферме.
В 1982 г. предложена комбинированная инактивированная эмульгированная вакцина
против НБ, ССЯ-76 и ИББ, которую вводили подкожно в дозе 0,75 мл. У привитых несушек
наблюдался высокий титр анти-ГА и ВНА. При контрольном заражении они были
иммунными и сохраняли высокую яйценоскость. Подобные результаты применения
инактивированной вакцины получили многие авторы (3, 5, 9, 11, 22, 23 ,25, 26, 27, 34).
Максимальный уровень поствакцинальных антител отмечали к 30-му дн.
В настоящее время фирма “Mirieux” (Франция) готовит бивалентную
инактивированную вакцину против EDS-76 и НБ на масляном адъюванте, которую вводят
курам в 17-20 недельном возрасте продкожно или внутримышечно в дозе 0,5 мл.
Продолжительность иммунитета 1 год. Эта вакцина содержит вирус ВС-14 ,
868
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
инактивированный формалином, и минеральное масло как стимулятор. Её вводят путем
внутримышечной или подкожной инъекции в период яйцекладки. Вакцина прошла
тщательные испытания на безопасность и эффективность в лабораторных и естественных
условиях. В настоящее время миллионы птиц успешно вакцинируют этим препаратом.
Фирма “Intervet” (Голландия) выпустила комбинированную инактивированную вакцину для
борьбы с НБ и EDS-76 (Ноби-Вак EDS-76+ Ньюкавак Нобилис), а недавно - первую
тройную инактивированную вакцину EDS-76 + БН+Гамборо. При изготовлении
инактивированных вакцин против EDS-76 помимо иммуногенности штамма большое
значение имеет биологическая система его репродукции в производственных масштабах.
Известно, что многочисленные опыты по адаптации вируса к клеточным системам кур не
дали ожидаемых результатов. Поэтому только предварительная адаптация вируса EDS-76
(шт. 127) к культуре клеток утиного эмбриона (СЕСВ) обеспечивает получение вируса
высокого титра
Технологический процесс изготовления инактивированной вакцины включает контроль
за размножением культуры клеток, контроль активности вакцины за предотвращение
снижения яйценоскости. Эффективность вакцины оценивали по реизоляции вируса из
селезенки и по титру анти-ГА до и спустя 7 дн после контрольного заражения. В первые 10
дн после вакцинации кур-несушек инактивированным препаратом после контрольного
заражения вирус выделялся с пометом (11). В опытах E.T.Kaleta (26) взрослые петухи,
привитые коммерческой вакциной, после контрольного заражения через 1, 2 и 4 нед
выделяли вирус с пометом в течение 1-й нед. По сообщениям ряда исследователей
оптимальный срок вакцинации птицы 14-16-ти нед возраст или за 2 нед до перевода в
маточное стадо. Эго особенно важно, если птицу перемещают к возможно
инфицированному поголовью. Если же птицу перемещают к заведомо благополучной в
отношении EDS-76 птице, то вацинацию рекомендуется завершить до конца перемещения,
так как препарат может неполностью проявить свои протективные свойства через 10 дн
после вакцинации.В случае необходимости птицу рекомендуют ревакцинировать.
Вакцинация обеспечивает полную защиту от болезни: предотвращает фазу виремии и
связанную с ней экскрецию вируса, улучшает яйценоскость и качество скорлупы. Обычно
вакцину вводят однократно подкожно или внутримышечно в 16-20-нед возрасте, доза 0,5 мл
(1000 ГАЕ). Иммунитет образуется через 15 дн. Максимальный уровень поствакцинальных
антител отмечается к 30-му дн.
Таким образом, чтобы избежать заболевание птицы EDS-76, необходимо:
1) предотвратить поступление в хозяйство контаминированного материала или
персонала из неблагополучного хозяйства ; 2) комплектовать родительские стада птицей,
свободной от EDS-76; 3) перевозить вновь поступающую птицу в чистом транспорте и,
наконец, проводить специфическую вакцинацию.
В случае, если болезнь в хозяйстве уже имеется, дальнейшее распро-странение её может
быть предотвращено путем ограничения передвижения материалов и персонала из
инфицированных птичников; учета того,что ненормальные, измененные яйца являются
ифицированными; чистки и окуривания помещения парами формалина после убоя или
вывода птицы; проведения вакцинации птицы, контактируемой с неблагополчными по EDS-
76 птичниками. Учитывая, что основной источник возбудителя EDS-76- утки, необходим
постоянный вирусологический и серологический контроль утководческих хозяйств на EDS-
76. В случае необходимости должна осуществлятся плановая вакцинопрофилактика с
использованием вакцин в зависимости от эпизоотического состояния птицеводческих
хозяйств. Для оценки эффективности вакцинопрофилактики необходим иммунологический
контроль привитой птицы. Поскольку в естественных условиях резервуаром возбудителя
болезни EDS-76 - домашние и дикие утки всех пород (4, 5), для успешной борьбы с
болезнью необходимо воздействие на 3 основные звена эпизоотической цепи: источник
869
Глава XX. Family Adenoviridae Аденовирусные инфекции
возбудителя болезни, пути передачи и восприимчивых птиц. Обязательны также
ветеринарно-санитарные мероприятия по предупреждению распространения болезни и
широкая вакцинация восприимчивой птицы. Уничтожение вируса во всей птичьей
популяции возможно только при выведении определенных устойчивых пород и
уничтожении родителей, у которых обнаруживаются антитела к шт. ВС-14. Однако, если это
провести невозможно, то широкая вакцинация такой птицы может на какое-то время
снизить уровень вертикальной передачи, что также хорошо, поскольку поможет уменьшить
горизонтальное распространение вируса и будет способствовать санации хозяйства.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Бурцев В.И. и др. Тез.докл.н.конф.ВНИИВВиМ, Покров, 1983 :61. 2.Бурцев В.И. и
др. Ветеринария, 1985, 1 :75. 3. Фомина Н.В. Аденовирусные инф.жив. М., Колос, 1995.
4.Adair В.М. et.al. Avian Pat, 1979,8,2 :133. 5.Bartha A. Etal. Avian Pathol, 1982, 11,3 :511.
6.Baxendale W. Et.al. Proc Meet Ital Avian Pathol, 1979, 12-13. 7.Baxendale W. Clin Vet 1980,
103, 7 :388. 8,Baxendale W. Патент №43024446 246 1981. 9.Baxendale W. Патент №
1590448, опубл. 3.06.1981. lO.Brugere P.J. Rec Med Vet, 1978, 154,12 :1015. 11. Cook J.K.A.
et.al. Avian Pathol, 1981, 10, 4 :449. ll.Darbyschire J.H. et.al. Avian Pathol, 1980, 9, 3 :277. 13.
Eck J.H.H. etal. Avian Pathol 1976, 5 :261. 14.Feheryari T. et.al. Acta Vet Acad Sci Hung,
1980, 28, 4 :351. 15. Gazdzinski P. Med Vet, 1981, 37, 3 :172. 16.Gough R.E. et.al. Vet Res,
1982, 110,12 :275. 17.Higashihara M. et.al. Jap J Vet Sci, 1983, 45, 5 :603. 18.Holmes H.C.
et.al.Vet Res, 1989, 124, 12 :309. 19.Kaleta E.F. et.al. Avian Pathol, 1980, 9, 4 :587. 2O.Kaleta
E.F. et.al. Prakt Tierarztl, 1980, 61, 11 :948. ll.Kisari J. Et.al. Arch Virol, 1980, 65,1 :63.
22.Lee A.M.T. et.al. Develoup Biol Standart, 1982, 51 :65. 23.Lombardi D. Et.al. там же. :285.
24.Loupal G. Et.al. Dt tierarztl Wschr, 1982, 89,1 :11. 25. Lutticken D. Et.al. Zootech Intern,
1981, 4 :10. 26. Lutticken D. Etal. Selecciones Avicoias, 1981, 45. 27,Lutticken D. Et.al.
Divelop Biol Standart, 1982, 51 :301. 28.Malkinson M. et.al. Avian Pathol, 1980,9, 3 :421. 29.
McFerran J.B. etal. Avian Pathol,1977, 6 :187. 3O.McFerran J.B. etal. Avian Pathol, 1977, 6
: 187. 31.McFerran J.B. et.al. Am J Vet Res, 1978, 39 :505. 32.Monreal J. Etal. Infect Dt
Tierarztl Wschr, 1981, 88, 12 :508. 33. Modugno G. Et.al. Riv Zootech evet, 1982, 10, 5 :297.
34. Rampin T. et.al. La clinica Veterinaria, 1980,103, 7 :422. 35.Schloer G.M. etal. Connection
Annal... avicolaa, 1980, 81, 5025 : 189. 36.Schloer G.M. et.al. Avin Dis, 1980, 24 :63. 37.Smyth
J.A. et.al. Avian Pathol, 1988, 17, 1 .193. 38.Todd D. Et.al. J gen Virol, 1978, 40, 1 :63.
39.Tuniguchi T. etal. Nat Inst Anim Health Q, 1981, 21, 2 :83. 40.Yamaguchi S. Anim Dis,
1981, 25,3 : 628. 41.Yamaguchi S. Et.al.Nat Inst Anim Health Q, 1982, 22, 2 :88. 42.Yamaguchi
S. Et.al. Avian Dis, 1981, 25, 3 :642. 43. Zanella A. Et.al. Clin Veter, 1980, 103, 7 :459.
Глава XXI Family Circoviridae Цирковирусные инфекции
Глава XXI. ЦИРКОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ
СЕМЕЙСТВА Circoviridae
Семейство Circoviridae состоит из одного рода Circovirus, в состав которого входят ви-
рус анемии цыплят (прототипный вирус), цирковирусы свиней, голубей и попугаев. Вирио-
ны цирковирусов предстваляют собой икосаэдрические частицы диаметром 15-24 нм. Кап-
сид состоит из 32 капсомеров. Липиды и углеводы в составе вирионов не обнаружены. Пла-
вучая плотность вирионов в CsCl 1,33-1,36 г/см3. Цирковирусы устойчивы к растворителям
липидов и стабильны при 60°С в течение 30 мин.
Геном цирковирусов представлен односпиральной кольцевой ковалентно-замкнутой мо-
лекулой минус-ДНК длиной 1760-2319 нуклеотидов. Имеются три частично перекрываю-
щиеся открытые рамки считывания, кодирующие белки с мол.м. 51,6, 24,0 и 13,6 кД. В
вирионах цирковирусов свиней и цыплят обнаружен один полипептид с мол.м. 36-50 кД.
Репликация вирусной ДНК происходит в ядре и зависит от белков клетки-хозяина, синтези-
рованных в S-фазе клеточного цикла.
Цирковирусы птиц вызывают иммунодефицитное состояние, поскольку они раз-
множаются в макрофагах и предшественниках Т-клеток. Цирковирус свиней широко рас-
пространен в хозяйствах, проникает через плаценту и вызывает гибель плодов. Типичным
представителем цирковирусов является вирус инфекционной анемии циплят.
ИНФЕКЦИОННАЯ АНЕМИЯ ЦЫПЛЯТ
Infectious chicken anaemia
Впервые это заболевание зарегистрировано и описано в Японии в 1979 г. (25, 26, 28).
Позднее оно также диагностировано в США (20), Швеции, Германии (24), Англии (15). От
цыплят, вакцинированных ВГИ, выявлено заболевание, характеризующееся высокой смерт-
ностью, некротическими поражениями и сильно выраженной атрофией тимуса и бурсы, а
также поражениями, сходными с таковыми при БМ (19). Из почек больных цыплят изоли-
рован вирус анемии цыплят (АЦ), названный ЦАА82-2 и вирулентный ВБМ, названный
ВБМ82-2. При заражении цыплят обоими агентами (двойная инфекция) отмечалась ранняя
гибель цыплят, связанная с сильным некрозом и уменьшением количества лимфоцитов в
лимфоидных органах и аплазией костного мозга (19).
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. К заболеванию наи-
более чувствительны к вирусу АЦ цыплята 1-8-дн возраста. При возникновении заболева-
ния, вирусом может поражаться до 60% птиц. Отход в среднем составляет 10%. При сочета-
нии вируса анемии цыплят с реовирусами наблюдается более тяжелое течение болезни.
Аналогичные явления наблюдаются при ассоциации инфекционной анемии цыплят с БМ и
ИББ (25, 27, 29). В естественных условиях возбудитель передается вертикальным путем -
через яйцо (5). Появление первых вспышек инфекционной анемии цыплят в Японии и Гер-
мании связывают с иммунизацией птицы против БМ вакциной, контаминированной виру-
сом анемии цыплят. Последний поражает цыплят и реже кур, заболевание сопровождается
инфицированием гемопоэтических клеток (включая костный мозг), внутрикожными и внут-
римышечными геморрагиями, а также вовлечением в процесс лимфоидной ткани (17).
У заболевших цыплят отмечают сильную депрессию, отсутствие аппетита замедление
роста, истощение. Слизистые оболочки, кожа бледные, костный мозг развит недостаточно с
изменением цвета до желтого и белого. Часто наблюдается гангренозный дерматит. Очаго-
вые поражения кожи локализуются в области головы, крыльев, грудной клетки, брюшка,
бедра и голени. Из трещин кожи вытекает кровянисто-серозный эксудат. По-видимому
871
Глава XXI Family Circoviridae Цирковирусные инфекции
причиной дерматитов является секундарная микрофлора. Болезнь может протекать со слабо
выраженными признаками или бессимптомно, что зависит от состояния иммунитета (25,
30). В естественных условиях заболевают обычно цыплята в возрасте 5 нед, если родители
не имели соответствующих АТ (14).
Патологоанатомические изменения проявляются септическим некротическим дермати-
том, гепатитом, целлюлитом, миозитом, фибринозно-гнойным некротическим бурситом. У
цыплят, которым в суточном возрасте инокулировали внутримышечно шт.ВЬТК 5803 виру-
са анемии цыплят отмечали снижение гематокрита и подавление прироста массы тела осо-
бенно на 12-20 дн. У большинства цыплят на пике инфекции макроскопически обнаружи-
вают желтоватый костный мозг, атрофию тимуса и бурсы, увеличение и обесцвечивание пе-
чени. Гистологические поражения выявлялись у зараженных вирусом анемии цыплят, сна-
чала в костном мозге и тимусе (на 6-й дн), затем в бурсе, селезенке и печени (9, 10, 11, 12).
На ранней стадии заболевания в гемопоэтических клетках наблюдали нарушенные плазмен-
ных мембран, вакуолизацию, наличие внутриядерных включений, состоящих из тонких
гранул гомогенного материала. В дегенеративных клетках обнаруживались конгломераты
вирусподобных частиц. Незрелые клетки изредка находили на 12-й дн после заражения. Ак-
тивный эритропоэз возобновлялся на 20-й дн или позже. У выживших цыплят большинство
тканей восстанавливались через 32 дн.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Вирионы диаметром 18-25 нм. Геном вируса представлен циркулярной 1-нитчатой ДНК.
Вирус состоит из 32 пустотелых морфологических единиц (капсомеров), представляющих
правильный Т-3 икосаэдр. По данным венгерских исследователей (6, 7, 8) диаметр вирионов
- менее 50 нм. Клонирован полный геном ВАЦ, который использован для гибридизации с
ДНК полевых изолятов вируса. Разработан метод точечной гибридизации с использованием
нерадиоакгивно-меченных зондов. Все полевые изоляты обнаруживали высокую степень
идентичности с клонированной прототипной ДНК (18).
Устойчивость. Вирус устойчив к эфиру, хлороформу, pH 3, выдерживает прогревание
при 56°С в течение 60 мин. Вирус, выделенный в Венгрии Bia-штамм устойчив к хлоро-
форму, проявил АГ родство с референс-штаммом CUX-1 (6, 7). Полевой изолят EF-
88/78/276 оказался устойчив к воздействию хлороформа и нагреванию до 70°С в течение 5
мин (16). Раствор йода и 1%-ный гипохлорит натрия полностью инактивируют вирус в
культуре клеток. Он устойчив к действию таких жирорастворителей как этиловый и метило-
вый спирты, ацетону, хлороформу.
Культивирование. Вирус репродуцируется в КЭ, но не вызывает у них патологических
изменений и гибели. Вирус анемии цыплят (CAV-BIA) был выделен в культуре клеток
MDC-MSB1 от 1-дн цыплят-бройлеров различных птицеферм Венгрии (7, 8).
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится гомогенатом печени от по-
гибших птиц. Она проявляется существенным отставанием птиц в росте, апластической
анемией и общей атрофией лимфоидных органов. При экспериментальном заражении об-
щие потери составляют 7-8%, кроме того 25% цыплят не набирают необходимого веса к 7
нед возрасту (7). У СПФ-цыплят породы леггорн при внутримышечном заражении полевым
материалом развивался анемический синдром и возбудитель выделялся в культуре клеток
MDCC-MSB1 из костного мозга и лимфоидной ткани инфицированных цыплят. У цыплят,
находившихся в контакте с зараженными с суточного возраста, симптомов болезни не отме-
чали, однако у всех цыплят на 30-й дн опыта в сыворотках крови обнаруживали АТ к ВАЦ.
Ни в одном случае смертельных случаев не отмечали, но на 14-й дн опыта при вскрытии об-
наруживали выраженную атрофию зобной железы и бурсы, желтизну костного мозга, а у
некоторых птиц - подкожные и внутримышечные кровоизлияния (16). При введении ВАЦ
1-дневным цыплятам в течение 10 дн у них развивалась апластическая анемия, причем
снижалось число как эритроцитов, так и лейкоциитов и тромбоцитов. В период с 12 по 24 дн
872
Глава XXI Family Circoviridae Цирковирусные инфекции
около 50% цыплят погибало. С возрастом чувствительность их уменьшалась. Материнские
АТ защищают цыплят от инфекции (14).
По данным Otary и соавт. (19) основные клинические признаки у 9 обследованных экс-
периментально зараженных изолятами ЦАА82-2 и БМ82-2 цыплят отмечалось угнетенное
состояние и слабость или параличи ног. При вскрытии у всех птиц находили утолщение
плечевого, сидалищного и блуждающего нервов, а также сильно выраженную атрофию ти-
муса и бурсы. Микроскопические исследования выявляли от незначительной до обширной
лимфоидную инфильтрацию периферических нервов всех птиц.
Выделение вируса. Вирус удавалось выделить из разных органов инфицированных
птиц. О наличии инфекции у зараженных суточных цыплят судят по пониженному числу
эритроцитов, наличию апластического процесса клеток MDCC-MSB1 из индуцированной
ВБМ лимфомы (14).
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Заболевание чаще возникает у бройлеров в возрасте 14-21 дн. При ассоциации вируса
АЦ и реовирусов наблюдают более тяжелое течение болезни. Аналогичное явление наблю-
дается при ассоциации ИАЦ с болезнями Гамборо и Марека. Заражение японскими и не-
мецкими изолятами вируса суточных цыплят вызывало анемию, атрофию лимфоидных ор-
ганов и костного мозга и в некоторых случаях гибель до 30% цыплят (25). В естественных
условиях возбудитель передавался потомству вертикальным путем - через яйцо (5). Гори-
зонтальное распространение вируса связано с субклинической инфекцией. Вертикальная пе-
редача встречалась в результате первичной инфекции несушек. Как клиническая так и суб-
клиническая формы инфекции наносят хозяйству большой экономический ущерб (17). По-
явление првых вспышек ИАЦ в Японии и Германии связывают с иммунизацией птицы про-
тив БМ вакциной, контаминированной вирусом АЦ. Японские исследователи отмечают, что
проводить дезобработку среды в присутствии птицы крайне трудно (31).
ДИАГНОСТИКА
Выделение возбудителя удается в культурах клеток МДСС-М В1, полученных из лим-
фомы при БМ. Полагают, что вирусная репродукция проявляется на 3-ем пассаже. Вирус
репродуцируется в КЭ, но не вызывает в них патологических изменений и гибели. С целью
выделения вируса наиболее эффективным оказалось внутрибрюшинное заражение 1-дн цы-
плят. Для серологической идентификации наиболее широко применяется НИФ. Для выявле-
ния ВАЦ у зараженных птиц разработан метод дот-блот-гибридизации. Зонд вируса АЦ
32р-ДНК готовят из всего вирусного генома. Вирус обнаруживался в тканях эксперимен-
тально зараженных цыплят в течение 5-42 дн после заражения и содержится в большом ко-
личестве в вилочковой железе, селезенке, печени, крови и фекалиях. Положительная реак-
ция проявлялась с вилочковой железой цыплят в возрасте 1-2 нед. При этом проявлялись
клинические признаки синдрома анемии-дерматита. (21, 22, 23). В Великобритании получе-
ны монАТ к вирусу АЦ (17). В Национальном институте здоровья животных (Япония) раз-
работан микрометод для серологической и вирусологической диагностики агента анемии
цыплят. Для контроля эпизоотической ситуации необходимо знать иммунный статус роди-
тельских стад. Наличие антител устанавливают с помощью PH и НИФ. Обычно PH даже в
упрощенном варианте требует длительного времени, поскольку работа связана с пересевом
клеточных культур. Поэтому предложен полумикрометод с использованием 24-луночных
планшетов. PH в таком микрометоде выявляет АТ к вирусу АЦ аналогично макрометоду.
По чувствительности PH превосходит ИФ, но не выявляет АТ при разведении сывороток
более чем 1:40. Таким образом PH в микроварианте предпочтительнее чем стандартная и
даже НИФ (13). По данным других исследователей PH превосходила НИФ примерно на 20%
(1-4).
СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Для профилактики инфекционной анемии цыплят некоторые исследователи рекоменду-
ют создавать иммунитет у родительского поголовья с целью обеспечения передачи материн-
873
Глава XXI Family Circoviridae Цирковирусные инфекции
ских АТ потомству. Такая устойчивость цыплят может сохраняться до 3-х нед. В Германии
создана экспериментальная эмбриональная вакцина.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
l.Bulow V. Et.al. Zentralblatt fur Vet Med.,1983, B30.742. 2.Bulow V. Et.al. Zentralblatt fur
Vet Med, B32,679. 3.Bulow V. J Vet Med. 1988, 35, 8 :594. 4.Bulow V. Et.al. Journal of
Vet.Med. B33, 717. S.Engstrem B.C. et.al. Avian Pathol. 1988, 17, 1 :33. 6.FarcasT. etal. Acta
microbiol Hung. 1991, 38, 2-4 :184. 7.Fareas T. et.al. Magy allator hap. 1991, 46, 11 :661.
8.Farcas T. et.al. Acta Vet Hung. 1992, 40, 3 :207. 9.Goryo M. et.al. Avian Pathol. 1985, 14
:483. lO.Goryo M. et.al. Avian Pathol. 1987, 16:149. ll.Goryo M. et.al. Jap J Vet. Science, 1987,
49 :867. ll.Goryo M. et.al. Avian Patol.1985, 14 :581. 13.1mai K. et.al. Jap J Vet Sci. 1990, 52,
4 :873. 14.Jap Agr Res Quart 1990, 24, 3 :219. 15.McNalty M.S. et.al. Avian Pathol. 1988, 17, 2
:315. 16.McNulty M.S. et.al. Avian Dis. 1989, 33, 4 :691. 17.McNulty M.S. et.al. Avian Dis.
1990, 34, 2 :352. 18.Noteborn M.H. et.al. Avian Pathol. 1992, 21, 1 :107. 19.Otary G. Et.al.
Avian Pathol. 1987, 16 :291. lO.Rozenberger I.K. et.al. Avian Dis. 1989, 33, 4 :707.
ll.Taniguchy T. et.al. Nat Inst Anim Helth. 1982, 22 :61. 22.Taniguchy Y. et.al. там же, 1983,
23 :1. 23.Todd D. et.al. J Clin Microbiol. 1991, 29, 5 :933. 24.Vielitz E. Et.al. Lohman Inform.,
may/june, 1991, :9. 25.Yuasa N. etal. Avian Dis. 1979, 23 :366. 26.Yuasa N. et.al. Avian Dis.
1980, 24 :202. 27.Yuasa N. et.al. Avian Path. 1985, 14 :521. 28.Yuasa N. Nat Ins Anim Helth.
1983, 23 :13. 29.YuasaN. et.al. там же. 1983,13 :78. 3O.YuasaN. et.al. Avian Pathol. 1987, 16
:521. 31.YuasaN. Avian Pathol. 1992, 21, 2 :315.
Прионные инфекции
Глава XXII. ПРИОННЫЕ ИНФЕКЦИИ
Ситуация, связанная с прионными инфекциями, в последние 10 лет стала серьезной
проблемой как в медицинской, так и в ветеринарной науке и практике.
Известны медленно протекающие инфекции, при которых макроорганизм не отвечает
иммунологической реакцией. К таким инфекциям относятся куру, болезнь Крейцфельда-
Якоба, Герстлер-Страусслер-Шейнкер синдром, летальная семейная бессоницу (ЛСБ),
скрейпи, энцефалопатия норок, губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота.
Прионные инфекции свойственны как животным, так и человеку, хотя среди людей регист-
рируются сравнительно редко. К прионным инфекциям отнесено значительное число нозое-
диниц. Однако список этот в ближайшем будущем видимо будет расширяться (5).
Для подострых спонгиоформных энцефалопатий характерно то, что возбудитель их реп-
лицируется, не вызывая гибели клеток, обеспечивающих его репродукцию, и эти клетки не
изменяются в такой степени, которыми можно объяснить появление симптомов заболева-
ния. Так, например, при скрейпи и энцефалопатии норок организм не реагирует на присут-
ствие и репликацию возбудителя. После инфицирования лимфоидной ткани он проникает в
мозг, где воспроизводится, возможно в астроцитах, что приводит к медленной дегенерации
нейронов. Видимо этот процесс отмечается при таких формах патологии человека, как куру
и болезнь Крейцфельда-Якоба.
При медленных прионных инфекциях патологические изменения проявляются поздно и
не сопровождаются воспалением. Преобладают пролиферативные и дегенеративные изме-
нения. Каждая из этих энцефалопатий имеет сходное прогрессирующее клиническое течение
с летальным исходом и сходные гистопатологические изменения (вакуолизация нейронов,
status spongiosus серого вещества головного мозга, пролиферация и гипертрофия астроглии
без признаков воспалительной реакции, которая обычно встречается при других инфекциях.
Возбудители куру и болезни Крейцфельда-Якоба (БКЯ) патогенны для некоторых видов
обезьян, а возбудитель БКЯ - также и для кошек. У паукообразных обезьян болезнь проте-
кает медленно, у мармозеток и саймири - остро.
Куру - эндемическая болезнь, встречающаяся только среди народности Форе, населяю-
щей восточное плоскогорье Новой Гвинеи. Постепенное исчезновение этой болезни является
следствием прекращения ритуального поедания мозга погибших от куру людей (естест-
венная передача инфекции). Однако, соседние народности, также поедающие мозги погиб-
ших родственников, никогда не болеют куру, что позволило предположить роль генетиче-
ского фактора в чувствительности к данной болезни.
Основные клинические признаки трансмиссивных губкообразных энцефалопатий (ТГЭ
- transmissible spongiform encephalopathies) обусловлены медленно прогрессирующими рас-
стройствами нервной системы: отклонения в психическом и умственном состоянии, положе-
нии тела и координации движений (атаксия, тремор, миоклонус), нарушение реактивности, а
также облысение и пигментация. Наиболее характерные патологические изменения, которые
можно наблюдать при световой микроскопии мозга, - дегенерация нейронов, гиперплазия и
дегенерация астроцитов, формирование амилоидных бляшек (7).
Экстракты мозга больного содержат большое количество характерных амилоидных
скрейпи-ассоциированных фебрил (САФ), видимых при негативном контрастировании под
ЭМ. Известно, что САФ представляют собой агрегаты мембранного сиалогликопротеина
(прионного белка, РгР) с мол.м. 33-35 кД, кодируемого геномом хозяина. У неинфициро-
ванных животных существует только нормальная изоформа, не способная образовывать
САФ. Прион как термин обозначает белковоподобную частицу очень маленького размера.
Прион - Proteinacous infections particles - общее обозначение инфекционных агентов с ви-
русподобными свойствами (штаммовая вариабельность, способность к мутациям), но отли-
875
Прионные инфекции
чающихся от вирусов необычной устойчивостью к высоким температурам, УЗ, ионизирую-
щему облучению, химическим дезинфектантам. Прионный белок существует в 2 изоформах
- нормальной или клеточной (РгРс) и аномальной, или патологической, способной образо-
вывать САФ (РгР80). Их различия не зависят от аминокислотной последовательности, по-
скольку они аналогичны. Свойства изоформ обусловлены посттрансляционной модификаци-
ей РгР, которая происходит в процессе инфекции. Функции нормальной изоформы РгР в
клетке до конца не выяснены. Предполагается ее участие в межклеточном узнавании и кле-
точной активации. В норме гены, связанные с чувствительностью к ТГЭ, предположительно
определяют старение, их функцией является подавление возрастных процессов и болезней
(1, 2). РгР с мол.м. 33-35 кД состоит из 254 аминокислот, включая 22-члеииый N-
терминальный сигнальный пептид. Это трансмембранный протеин, пересекающий мембра-
ну по крайней мере дважды. Детергентная экстракция солюбилизирует РгРс, ио индуцирует
реполимеризацию РгР80 в амилоидные фибриллы. Протеинкиназа К гидролизует РгРс, но
расшипляет РгР80 с образованием РгР 27-30, который является дериватом PrPSc и мажор-
ным компонентом инфекционного приона.
За основу принята не генетическая, а модификационная природа образования патоген-
ной изоформы РгР и, как следствие, инфекционное™ приона. Это обеспечивает патогену эи-
до- и экзогенную инфекционность, преодоление межвидовых барьеров и обусловливает эпи-
демиологические особенности ТГЭ. В настоящее время различают инфекционную, наслед-
ственную и спорадическую формы прионных болезней (6).
Болезнь Крейцфальд-Якоба диагностируют спорадически во всем мире.
Массовое заболевание КРС в Великобритании ГЭ в результате скармливания боенских
отходов от овец, больных скрейпи, а также случаи заболевания при этих же условиях диких
животных в зоопарках и домашних кошек показало возможность преодоления прионами
межвидовых барьеров. Это насторожило мировую ветеринарную и медицинскую общест-
венность. В последнее время широко дискутируется возможность заболевания губкообраз-
ной энцефалопатией человека при употреблении в пищу мяса и внутренних органов живот-
ных, инфицированных прионами. Прионные инфекции из чисто ветеринарной стали соци-
альной проблемой (3).
Гипотезы о природе прионов
После установления возможности передачи скрейпи в экспериментальных условиях ов-
цам и козам были предложены вирусная, вироидная, белковая, полисахаридная, мембранная
и др. гипотезы о природе агента скрейпи.
Вирусная гипотеза базировалась на малых размерах возбудителя, его инфекционное™,
фильтруемости и неспособности расти на питательных средах. Главным возражением про-
тив вирусной теории служит необычайно высокая резистентность возбудителя к УФ лучам,
ионизирующей радиации и нуклеазам.
Вироидная гипотеза предложена после того, как были открыты возбудители ряда болез-
ней растений (1971). Вироиды - односпиральные циркулярные РНК длиной 246-375 нуклео-
тидов. Они не кодируют белок и размножаются с помощью клеточной ДНК-зависимой РНК-
полимеразы. Важным аргументом против вироидиой гипотезы агента скрейпи является вы-
сокая устойчивость его к рибонуклеазам, которые легко разрушают вироиды.
Белковая природа приона основана на том, что агент скрейпи является самореплици-
рующимся белком. В клетке нет механизмов, с помощью которых бы белок обеспечивал
синтез белка без участия НК.
Полисахаридная и мембранная гипотезы предполагают, что агент представляет собой
вид полисахарида или часть измененной клеточной мембраны. Эти гипотезы носят доста-
точно умозрительный характер.
876
Прионные инфекции
Прионная концепция возбудителей ТГЭ человека и животных
К началу 80-х годов в лаборатории С.Прузинера (Калифорния) разработан простой ме-
тод получения очищенного и концентрированного агента скрейпи из мозга зараженных си-
рийских хомячков. Полученный белок с мол.м. менее 50 кД обладал инфекционностью.
Именно Прузинер высказал предположение, что возбудители ГЭ животных и человека
представляют собой белковые инфекционные частицы (proten infectious particles) или при-
оны - название образовано путем транслитерации начальных букв первых двух слов наиме-
нования возбудителей. Благодаря высокой степени очистки удалось изучить структуру и со-
став агента. Большая часть инфекционной фракции центрифугированного материала состо-
ит из одного белка, обозначенного как прионный белок (РгР - prion protein) с мол.м. 27-30
кД. При ЭМ очищенного материала обнаружены палочковидные структуры диаметром 10-
20 нм и длиной 100-200 нм. Они состоят примерно из 1000 молекул прионного белка. Все
попытки обнаружения в очищенном материале НК оказались безуспешными. Несмотря на
то, что вопрос о природе инфекционного агента при ТГЭ до сих пор не получил однозначно-
го ответа, прионная концепция их этиологии представляется наиболее предпочтительной -
РгР 27-30 специфичен, «репродуцируется» в культурах клеток неврального происхождения,
выделяется совместно с инфекционным прионом при различных процедурах очистки; при
этом РгР 27-30 - основная макромолекула в очищенных препаратах приона, концентрация
его соответствует титру инфекционности и др. Прионная концепция этиологии ТГЭ не имеет
противоречий и слабых мест, объясняет ряд фактов, не укладывающихся в общепринятые
микробиологические представления о возбудителе инфекций (2).
Существует ядерная гипотеза, которая не исключает предположения о матричной функ-
ции аномальной изоформы для конверсии РгРС в PrPSC по типу шаперона, белка, присутст-
вие которого необходимо при сборке мультимолекулярных или надмолекулярных биологи-
ческих структур (клеточных, ферментных олигомерных агрегатов), которые не входят в со-
став конечного продукта, но необходимы для своевременного и парвильного сворачивания
полипептидной цепи агрегируемого белка, ее транспортировки к месту сборки и включения
в агрегационный процесс.
Морфология и химический состав возбудителя
В 1 г инфицированного мозга содержится более 107 ЛД возбудителя куру - при такой
концентрации вобудитель мог бы быть обнаружен под ЭМ. Однако даже во фракциях инфи-
цированного мозга, разделенных в градиенте плотности при ультрацеитрифугировании, не
было обнаружено других частиц, кроме клеточных мембран.
Возбудители куру и БКЯ устойчивы при 85°С в течение 30 мин, очень устойчивы к дей-
ствию некоторых физических и химических факторов.
АГ активность возбудителей куру и болезни Крейцфельда-Якоба не установлена. До сих
пор не установлен иммунологический ответ организма хозяина на возбудитель. Сыворотки
больных не нейтрализовали агент, используемый для экспериментального заражения шим-
панзе. Ни в ИФ, ни в РСК в сыворотках больных людей и шимпанзе не обнаружено АТ к
агенту, приготовленному из инфицированного мозга. Лейкоциты шимпанзе, больных куру,
не трансформируются под влиянием мозгового антигена нормального и инфицированного
животного. Американским исследователям удалось получить антитела к прионному белку
на кроликах, которым трехкратно вводили очищенный материал в дозе 70-130 мкг в смеси с
адъювантом Фрейнда. АТ реагировали с прионным белком и очищенными прионными па-
лочками. РгР в обеих изоформах реагирует с АТ на РгР 27-30 (инфекционный прион) и его
синтетические пептиды. Изоформы прионного белка возбудителя скрейпи отличаются ус-
тойчивостью к протеиназам, его гидрофобностью, связью с гликолипидом. Он способен к
агрегации/олигомеризации (амилоидогенностью). После установления последовательности
первых 5 аминокислот с N-конца очищенного прионного белка с использованием словаря
877
Прионные инфекции
генетического кода были синтезированы кодирующие эту последовательность полинуклео-
тидные цепочки, которые использовались как зонды для обнаружения гена прионного белка.
Получение прионного белка в очищенном виде и специфических АТ, установление ами-
нокислотной последовательности части полипептидной цепи прионного белка и синтез по-
линуклеотидных зондов явились основой для проведения молекулярно-биологических ис-
следований прионов человека и животных.
К настоящему времени определены нуклеотидные последовательности гена РгР челове-
ка, некоторых видов хомячков, мыши, крысы, овцы, КРС ( 13,14,18,19)). Открытая рамка
считывания кодирует полипептид, состоящий, например, у КРС из 256 или 264 аминокислот
с различной степенью межвидовой гомологии (19). Так аминокислотная последовательность
РгР КРС н овцы различается всего 6 остатками, степень гомологии очень высокая и состав-
ляет 98%; КРС и человека - уже 30 остатками и 89% гомологии; овцы и человека -33 остат-
ками и 87,5%; хомячка и человека - 27 остатками и 89,33% соответственно. Единичные му-
тации или дополнительные повторы в определенных положениях последовательности гена
РгР человека связаны с проявлением семейных случаев БКЯ и синдрома Герштмана-
Штраусслера (СГШ) ((20, 22)). У трансгенных мышей с заменой в гене РгР, соответствую-
щей точечной мутации в гене РгР пациентов с СГШ, спонтанно проявлялись признаки, по-
добные таковым при СГШ (15). Мутации в разных участках гена связаны с длительностью
инкубационного периода при экспериментальном заражении. Последовательность гена оп-
ределяет видовую специфичность инфекционности при скрейпи (21).
Прионный белок синтезируется во многих тканях н органах человека и животных. Од-
нако, наибольшее его количество выявляют в ЦНС. Прионный белок образуется иа мембра-
нах шероховатого эндоплазматического ретикулума и быстро транспортируется в секретор-
ных везикулах на наружнюю поверхность клетки. В процессе транспорта происходит созре-
вание (процессинг) пригонного белка. От синтезированного полипептида отщнпляется N-
концевая сигнальная последовательность, к двум аминокислотам присоединяются олигоса-
харидные цепочки, отщипляется также С-концевая последовательность полипептида н к С-
концевой аминокислоте укороченного пептида присоединяется глнкозилфосфатилннозитол.
Последний удерживает зрелый прионный белок на наружной поверхности клетки путем зая-
коривания в плазматическую мембрану.
Функция прионного белка изучена недостаточно, возможно он необходим для функцио-
нирования синапсов. Синтезированный в клетке нормальный прионный белок обозначают
РгРс - клеточная нзоформа (cellular isoform). Конформационно измененный прионный белок
(аномальный, инфекционный) обозначают РгР80 - скрепийная изоформа (scrapie isoform). В
последнее время клеточную изоформу прионного белка обозначают PrPsen (protease-
sensitive - протеазочувствительный), а скрепийную нзоформу - PrPr“ - (protease resistant -
протеазорезистентный). Полагают, что все прионные болезни (инфекционной, наследствен-
ной или спорадической форм) являются результатом изменения конформации нормального
прионного белка. С помощью спектроскопических методов изучена вторичная структура
очищенных препаратов Ргрс и РгР80, полученных в неденатурирующих условиях из головно-
го мозга здоровых и скрейпи-инфицнрованных хомячков. Установлено, что РгРс имеет вы-
сокое содержание а-спиралей (42%) и незначительное содержание р-складчатых структур
(31%). Напротив в РгР80 p-структуры составляют 43%, а а-спирали только 30%.
В популяции человека или животных первичная структура гена РгР не идентична и мо-
жет отличаться по нескольким кодонам. Присутствие в популяции 2 или более аллельных
вариантов гена обусловливает полиморфизм. Полиморфизм кодона 129 влияет на развитие
прионных болезней человека инфекционной, наследственной и спорадической форм. На пе-
редачу инфекционных прионов от одного вида животных другому глубоко влияет последо-
вательность нуклеотидов между 90 и 130 кодонами (90-130 аминокислоты в гене РгР). Чем
878
Прионные инфекции
больше гомология аминокислот в этом участке, тем эффективнее происходит конверсия
РгРс в РгР80 под воздействием инфекционного приона.
Вопрос о возможности заражения людей возбудителем ГЭ КРС остро обсуждается с
1994 г после появления в Великобритании нетипичных случаев БКЯ (новый вариант БКЯ) -
заболевание развивалось у людей 16-39 лет (в среднем 29 лет), продолжительность ее в
среднем 14 мес. Получены доказательства, что новый вариант БКЯ вызывается возбудите-
лем ГЭ КРС - инкубационный период и патология у мышей были аналогичны при введении
гомогената мозга людей, погибших от нового варианта БКЯ, КРС и кошек, погибших от ГЭ
КРС. Очень сходная патология отмечена у макак, зараженных возбудителем ГЭ КРС. Со-
всем недавно удалось осуществить конверсию РгрС человека в PrPSc в бесклеточной систе-
ме с использованием очищенных препаратов ГЭ КРС и скрейпи овец.
Вопрос об инфекционном агенте (агентах) при ТГЭ не имеет однозначного решения: ли-
бо аномальная изоформа РгР является существенным (возможно единственным) компонен-
том инфекционного начала, необходимым для передачи заболевания, либо она представляет
собой побочный патологический продукт в процессе развития инфекции. В первом случае
можно говорить о новых «беспрецедентных» инфекционных агентах, для которых давно
предложен специальный термин -прионы-, называемых также неканоническими вирусами
(12, 18). Как альтернатива предполагается существование неустановленного к настоящему
времени вируса, вызывающего амилоидоз мозга.
Конверсия РгрС в PrPSC может происходить спонтанно, под воздействием экзогенного
аномального (инфекционного) прионного белка и при мутациях в кодирующей части гена
прионного белка. Такая конверсия является посттрансляционной, включает глубокие кон-
формационные изменения, которые лежат в основе размножения прионов. Формируется
комплекс нормальный-скрепийный прионный белок, к которому присоединяется белок X,
функционирующий как шаперон и участвующий в превращении а-спиралей в Р-структуры.
Полученный скрепийный прион в свою очередь связывается со следующей молекулой кле-
точного прионного белка и превращает её в инфекционную форму. Таков механизм накоп-
ления Prpso
в клетках. Синтез Ргрс в инфицированных клетках не изменяется.
Экспериментальная инфекция. К возбудителям наиболее изученных ТГЭ в естест-
венных и экспериментальных условиях чувствительны более 30 видов животных, относя-
щихся к 4 порядкам. Во многих случаях воспроизведена или вполне вероятна оральная
трансмиссия как внутривидовая, так и межвидовая. Высокую эффективность орального за-
ражения обеспечивали вполне реальные в естественных условиях дозы (от 0,1 для норок до
130 г для овцы, козы). Интрацеребральное заражение эффективнее орального в 105 раз (23).
В литературе приведены интересные данные о экспериментальной передаче куру.
Обезьян шимпанзе заражали мозгом больных куру людей, что вызывало у них заболевание
с инкубационным периодом от 14 до 39 мес. После 3-х последовательных пассажей от шим-
панзе к шимпанзе инкубационный период сократился до 10-18 мес. Болезнь удалось воспро-
извести у 3 видов южноамериканских обезьян: паукообразных, капуцинов и белкообразных.
Инкубационный период продолжался от 23 до 45 мес. В серийных пассажах возбудителя на
обезьянах инкубационный период сокращался до 16-28 мес. Шимпанзе заболевали при пе-
риферическом заражении, при введении больших количеств инфекционного материала не-
посредственно в желудок заражения не происходило. Это позволяет предположить, что в ес-
тественных условиях заражение куру может происходить через поврежденную кожу или
конъюнктиву во время каннибализма, а не через пищеварительный тракт.
Механизм передачи болезни Крейцфельда-Якоба неизвестен. Тканью мозга от 12 боль-
ных удалось заразить 14 шимпанзе. Инкубационный период продолжался 11-16 мес. Экспе-
риментально удалось также заразить южноамериканских обезьян: паукообразных, капуци-
нов, белкообразных и шерстистых. После первичного заражения мозгом погибшего челове-
879
Прионные инфекции
ка обезьяны заболели с инкубационным периодом 23-29 мес. После заражения этих обезьян
мозгом павшего шимпанзе инкубационный период продолжался 9-19 мес. При гистологиче-
ском и ЭМ исследовании обнаруживали вакуоли внутри аксонов, дендритов; тела нейронов
были окружены фрагментированными мембранами и заполнены фрагментами таких же
пролиферирующих мембран. Цитоплазма астроцитов была разбухшей, но без вакуолей.
Фрагментированные мембраны цитоплазмы и мембраны, содержащие вакуоли, были сход-
ны с такими же, какие наблюдаются при скрейпи. Однако, таких частиц, которые обнару-
живаются при скрейпи, при БКЯ и куру не находили.
Патогенез куру изучается медленно. Инфекционный агент обнаружен во внутренних ор-
ганах шимпанзе, но еще не доказано присутствие его в организме больного человека.
Культивирование. Агенты, вызывающие куру и БКЯ, были получены в культуре кле-
ток из инфицированного мозга. Возбудитель куру был найден в культуре клеток мозга шим-
панзе через 70 дн, а возбудитель БКЯ - в культуре клеток мозга человека через 255 дн. Раз-
множение агентов скрейпи и энцефалопатии норок уже доказано.
СКРЕЙПИ
Scrapie, Euky pine, scratchie, rubbers, shaking (англ.); la tromblente (франц.); tra-
berkrankheit, reiber krankheit (нем.)
Скрейпи - почесуха овец - медленно развивающаяся болезнь овец и коз, в основе кото-
рой лежат дегенеративные изменения в клетках центральной нервной системы. Болезнь ха-
рактерихуется длительным инкубационным периодом (до 2-3 лет), хроническим течением,
возбуждением, сильным зудом, атаксией, параличами, истощением и высокой, почти 100%-
ной, смертностью заболевших.
Скрейпи регистрируется в США, Канаде, Австралии, Новой Зеландии, Индии и ЮАР. В
Шотландии (южная часть) и Англии (восточная часть) болезнь носит стационарный харак-
тер. Впервые болезнь с подобной клиникой была зарегистрирована в 1732 г. в Англии, в
1981 г. во Франции. В Болгарии она отмечалась в 1970 г. По сообщениям В.А. Шубина и др.
по причине медленных инфекций наша страна теряет романовскую породу овец. Значитель-
ный, если не основной вклад в эту трагедию внесен скрейпи-инфекцией (8)
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Клинические призна-
ки болезни при спонтанном и экспериментальном заражении однотипны. При эксперимен-
тальном заражении овец инкубационный период составляет 4-24 мес. У ягнят, зараженных
сразу после рождения, он короче - 3-5 мес. При спонтанном заражении инкубационный пе-
риод может достигать 5 лет. У зараженных коз он длится 7-22 мес.
Первые признаки болезни проявляются временами, поэтому диагностировать болезнь
трудно. Больные овцы не выходят из овчарни или бегут навстречу собаке, к закрытым воро-
там. Такое состояние длится около 30 мин. У некоторых овец замечают неподвижный
взгляд, зрение ослабевает или наступает слепота. Кожа становится грубой, шерсть взъеро-
шена (в результате раскручивания волоса), жесткая, а кончики волос белеют. Описанная
стадия длится около месяца, а иногда и дольше.
С развитием болезни животные трутся о различные предметы и расчесывают область
ягодичных мышц, основания хвоста, лба, затылка и верхней части шеи н груди. Эти участ-
ки кожи плотные, изъязвлены и покрыты струпьями. Некоторые животные расчесывают зу-
бами область запястья и скакательного сустава или трут носом эти места (на носу обычно
возникает папулезная сыпь и он опухает). Отмечается атаксия. Шаг укорочен, задние конеч-
ности не сгибаются в скакательном суставе. Равновесие нарушено. В тяжелых случаях бо-
лезни копытца задних конечностей во время движения волочатся. Животное пугливо, насто-
880
Прионные инфекции
рожено и возбудимо, зрачки расширены, наблюдается пучеглазие, нистагм. Голову и шею
овца держит напряженно и выше чем обычно. Вскоре после развития параличей задних ко-
нечностей животное погибает. Описанная стадия длится 4-6 нед, иногда несколько мес.
У больных коз характерного трения телом о неподвижные предметы не наблюдают, но
они чаще обычного чешутся и грызут зубами кожу и характерно поднимают хвост. От про-
явления первых признаков до полного развития болезни проходит 2-3 мес. В последней ста-
дии болезни развивается коллапс., скорее связанный с невозможностью удержать равнове-
сие, нежели с параличом конечностей.
Гистологические изменения. В срезах коры мозга мышей внутри разбухших отрост-
ков нейронов находят большое количество частиц диаметром 32-36 нм с полупрозрачным
центром, толщиной стенок 9,5 нм, а также палочковидные образования такого же диаметра
с шипами и др. необычные структуры. Подобные структуры наблюдали внутри нейронов
мозга экспериментально зараженных овец. В нейронах, пресинаптических окончаниях и в
осевых цилиндрах больных овец обнаружены частицы двух типов.
Патогенез. Предполагаемый патогенез скрейпи включает ряд стереотипных последова-
тельных этапов: оральную инфекцию; накопление в мононуклаерных фагоцитах; отсутствие
иммунного ответа; распространение инфекции с кровотоком; внедрение в ЦНС; накопление
в ЦНС; индукцию амилоидоза; дегенерацию нервной ткани; клинический симптомоком-
плекс; смерть. Результаты патогенетических исследований при естественном скрейпи свиде-
тельствует о том, что местами самой ранней локализации инфекции являются миндалины,
подвздошная кишка и проксимальная часть толстой кишки, а также селезенка и различные
лимфоузлы. При экспериментальной инфекции прион распространяется от места инъекции
через циркулирующие системы и обнаруживается в селезенке, лимфоузлах и некоторых
тканях лимфоретикулярной системы. В ЦНС первым местом его лакализации является
грудной отдел спинного мозга, далее возбудитель распространяется вдоль висцеральных
симпатических волокон и достигает передних областей головного мозга. (7,10).
У овец содержание возбудителя значительно варьирует в различных органа и тканях.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Устойчивость. Возбудитель скрейпи выдерживает кипячение, многократное заморажи-
вание и оттаивание, не гибнет в течение 30 мин при 115°С, в течение 1 ч при 90°С, не пол-
ностью инактивируется при 100°С, когда он освобожден от стабилизирующих белков, но в
ткани мозга мышей инактивируется при автоклавировании (45 мин при 121°С).Возбудитель
в течение нескольких месяцев выдерживает воздействие 12%-ного раствора формалина и pH
от 2 до 10,5. В 20%-ном растворе формалина инфекционность агента не утрачивается 18 час
при 37°С. В замороженной ткани агент сохраняется годами, при комнатной температуре -
несколько месяцев. Возбудитель высокорезистентен к УФ радиации. Раствор фенола
(водный, 90%-ный), 8М раствор мочевины и 0,01М раствор перйодата калия существенно
снижает активность агента скрейпи.
Локализация возбудителя. Проникнув в организм возбудитель сначала размножается
в региональных лимфоузлах. Обнаружить его здесь можно не ранее, чем через месяц после
инокуляции мышей и через несколько месяцев у коз. При экспериментальном заражении
мышей per os прионы, проникнув в слюнные железы и ЖКТ, появляются в лимфоузлах и
селезенке на первом, в тимусе на втором, в спинном мозге на третьем, в головном мозге на
четвертом месяце. Симптомы болезни развиваются на шестом месяце, а через 6 нед живот-
ные погибают.
У овец, зараженных прион содержащей суспензией мозга подкожно, возбудитель обна-
руживается в селезенке в течение одной недели, после чего следует 2-х недельный период
«эклипса», в течение которого ни в одном органе животного не выявляется агент скрейпи.
Через 4 нед он вновь появляется в селезенке и лимфоузлах. У овец и мышей прионы прони-
56 Зак. Ns 171
881
Прионные инфекции
кают во все отделы лимфатической системы и сохраняются там до гибели животного. У коз
они первоначально размножаются в лимфоузлах, где он обнаруживаются в период 12-24
мес после инокуляции. У мышей сплеиэктомированных до внутрибрюшинного заражения,
инкубационный период был более продолжительным, чем у контрольных животных.
Экспериментальная инфекция. До 1936 г. все представления о скрейпи основывались
на клинических наблюдениях за животными. В 1936 г. Кюилль и Шнелль показали возмож-
ность заражения здоровых овец интрацеребрально и подкожно, используя суспензию голов-
ного и спинного мозга больных животных. Инкубационный период продолжался до 1 года.
Показано, что естественная резистентность к скрейпи обусловлена генетической предраспо-
ложенностью. Возбудитель может пассироваться на козах н передаваться от них овцам. При
пассажах агента спрейпи на козах наблюдали два различных синдрома: drowsy (глубокое
угенетение, сонливость) н scratching (доминирование явлений зуда и чрезмерной возбуди-
мости). В дальнейших пассажах каждый из них воспроизводился, и у вновь заражаемых
животных развивался только переходной синдром.
При интрацеребральном заражении коз (агентом, адаптированным к мышам) симптомы
болезни появлялись через 58-77, а при подкожном - через 89-146 нед. При подкожном зара-
жении агент первоначально размножался в лимфоидных тканях (главным образом лимфо-
узлах). Через 92 нед он был обнаружен в спинном мозге и в стволовой части головного моз-
га. Клинически болезнь проявлялась тогда, когда концентрация агента в тканях мозга со-
ставляла около 3 1g мышиных интрацеребральных ЛД50 на 30 г ткани. Концентрация при-
онов в слизистой носовой полости, слюнных железах, тканях кишечника была очень низкой.
У зараженных мышей инкубационный период продолжался от 4 до7 мс. Задолго до по-
явления клинических признаков у них отмечалось прогрессивное снижение двигательной
активности, а ко времени появления клиники скрейпн начальный спад сменяется подъемом
активности. У мышей описано три различные синдрома почесухи: чрезмерная возбудимость
(длительность болезни несколько дней); ожирение (более длительное хроническое течение);
и летаргия (самый обычный синдром, длительность болезни несколько нед). Во всех случаях
исход болезни смертельный.
При периферическом заражении мышей агент сначала размножался в селезенке, а затем
уже в мозге. Медленное накопление его в мозге возможно обусловлено тем, что репликация
возбудителя происходит лишь в некоторых органах. Неизвестно в каких клетках размножа-
ется возбудитель и какие механизмы участвуют в его инактивации. По мнению Фрезер и
Оутрем (1975) инкубационный период при скрейпи зависит от генотипа мышей, штамма,
дозы агента н пути заражения, а по сообщению Дикенсона (1975) этот период зависит от ге-
на sine (аллели S7 и Р7). У гетерозиготных мышей инкубация зависит от штамма. Очевидно
указанны ген определяет места репликации агента скрейпи и характерные черты медленной
инфекции. К агенту скрейпн очень чувствительны мыши-полевки, хомячки, песчанки. Уда-
ется экспериментальное заражение норок мозгом больных овец. Помимо указанных видов
животных удалось установить патогенность агента скрейпи для обезьян пяти видов: резусов,
циномольгусов, капуцинов, паукообразных и саймири. Инкубационный период продолжает-
ся 1-6 лет при инокуляции в мозг.
Культивирование. Помимо восприимчивых животных агент скрейпи культивируется в
культуре клеток нейронов мышей. Установлено, что инфекционность агента в культуре пе-
ревиваемых клеток SMB связана с плазматическими мембранами.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Спектр патогенности в естественных условиях.
В естественных условиях почесухой болеют овцы, редко козы. Однако эксперименталь-
ная инфекция чаще удается на козах, чем на овцах. Особенно восприимчивы чистопородные
овцы. Установлен контактный путь передачи скрейпи среди овец и мышей.
882
Прионные инфекции
Источники и пути передачи инфекции. Почесуха передается как при контакте боль-
ных и здоровых овец, так и при содержании животных в зараженном помещении. Взрослые
овцы заражаются от поедания плаценты и на пастбище при инфицировании его плодными
водами. Ягнята заражаются через плаценту или при заглатывании плодных вод. Скрейпи
свойственна и вертикальная передача - от родителей потомству. Возможно имеет место на-
следственная восприимчивость (генетически передаваемый рецессивный признак чувстви-
тельности). В отношении устойчивости к почесухе существует 3 группы овец: гетерозигот-
ные резистентные, гомозиготные резистентные и гомозиготные восприимчивые. Возможно
агент скрейпи способен переживать в организме овец первой группы и они довольно долго
будут являться носителями инфекции. Между тем из организма овец второй группы возбу-
дитель может быстро выводиться, в то время как овцы третьей группы, заразившись поги-
бают. Овцы первой группы наиболее опасны в смысле распространения инфекции, но кли-
нически выраженных признаков болезни у них нет. Именно среди этой категории живот-
ным могут встречаться такие, которые заболев с явными признаками почесухи, затем вы-
здоравливают.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании симптомов болезни. Ведущими признаками являются не-
ослабевающий зуд и связанные с этим расчесы, особенно в области запястных и скакатель-
ных суставов, чрезмерная возбудимость, расстройство координации движений, мышечная
дрожь, нистагм, общая слабость и истощение. В результате трения шерсть выпадает и появ-
ляются голые пятна. Пробой на зуд вызывают харакетрное состояние у овцы. При умерен-
ном сжимании пальцами кожи в области ягодичных мышц, поясницы, основания хвоста и
других мест у овцы возникает зуд. Она поднимает голову, делает захватывающие движения
губами, высовывает язык. Одновременно может возникать и мышечная дрожь.
При гистологическом исследовании наблюдается выраженная вакуолизация нейронов
продолговатого мозга. Кроме вакуолизации нейронов показательны макроскопические и
микроскопические повреждения и дегенерация мускулатуры.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Не разработаны.
ТРАНСМИССИВНАЯ ЭНЦЕФАЛОПАТИЯ НОРОК
Трансмиссивная энцефалопатия норок - заразная болезнь, характеризующаяся очень
продолжительным инкубационным периодом, симптомами поражения нервной системы и
патологоанатомическими изменениями в ЦНС. С 1963 г данное заболевание считается рас-
пространенным повсеместно.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь протекает в
виде эпизоотий, восприимчивы норки, а лабораторных условиях и хорьки. Инкубационный
период продолжается от 5 мес до года. В естественных условиях чаще поражаются взрослые
животные. Ранними симптомами болезни считается изменение внешнего вида норок. У них
своеобразно изгибается хвост, грубеет мех, снижается масса тела. Во время отдыха норки
резко подергивают задними лапами. Движения замедленны, появляется неустойчивость за-
да, постепенно нарушается координация движений. Одни норки становятся агрессивными,
другие - робкими, пугливыми и малоподвижными. С прогрессированием болезни кратко-
временные периоды сонливости становятся более продолжительными, а сон - глубоким.
Продолжительность болезни неодинакова. У некоторых норок продромальный период
продолжается от трех до 4 нед, после чего болезнь обостряется и через 5-7 дн животные по-
56*
883
Прионные инфекции
гибают. У других животных клинических признаков болезни не наблюдают и только за 2-3
дн до гибели отмечают анорексию. Иногда норки с атаксией живут более 6 нед.
Видимых патологоанатомических изменений нет, лишь иногда отмечают умеренную
отечность мозга. Микроскопические изменения постоянно находят только в мозге: увеличе-
ние глиальных элементов, астроцитоз, вакуолизацию нейроглии, инфильтрацию, дегенера-
цию нейронов; некоторые нервные клетки содержат эозинофильные гранулы. Изменения
обнаруживают также в лобной области коры, в обонятельных луковицах, мозолистом теле
(corpus stratum). Повреждения распространяются каудально, обычно вовлекается таламус,
гипоталамус, варолиев мост, продолговатый мозг. В белом веществе, мозжечке, спинном
мозге поражений не бывает. У норок с прогрессирующим заболеванием в этих отделах об-
наруживают ишимический некроз клеток. Микроскопические изменения при трансмиссив-
ной энцефалопатии норок напоминают таковые при скрейпи, однако у овец и коз их распре-
деление отличается, а вакуолизация нервных клеток при скрейпи менее заметна.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Прион сходен с возбудителем скрейпи. Различаются агенты тем, что возбудитель энце-
фалопатии норок может инфицировать хомячков, коз, полосатых скунсов, енотов, макак-
резус, белок и тупохвостых макак, но не поражает мышей линии Swiss. Агент скрейпи пато-
генен для мышей, но менее патогенен для приматов. В этом аспекте возбудитель энцефало-
патии норок аналогичен возбудителям энцефалопатий человека (куру или БКЯ), которые
также не патогенны для мышей и не передаются приматам.
Устойчивость. Агент устойчив к высокой температуре н УФ облучению. Прогревание в
кипящей водяной бане 15 мин, воздействие 0,3%-ным раствором формалина в течение 12 ч
при 37°С не инактивирует его, 10%-ный раствор формалина в течение 20 мес снижал ин-
фекционный титр агента более чем на 31%. При воздействии эфира в течение 18 ч титр
снижался незначительно. Агент разрушается проназой. Выделить фракцию инфекционной
нуклеиновой кислоты не удалось.
Экспериментальная инфекция. Удается при подкожной, внутримышечной, внутри-
мозговой и внутрибрюшинной инъекции 1 мл гомогената мозга в разведении 105-107, а так-
же при скармливании норкам инфицированного материала. Продолжительность инкубаци-
онного периода зависит от способа заражения и числа пассажей агента на норках. При внут-
римышечной инокуляции инкубационный период на 2-3 мес короче, чем при скармливании
зараженного материала или естественном заражении. Кроме норок удается заразить хомяч-
ков, коз, полосатых скунсов, енотов, белок, обезьян макак-резус.
Культивирование. Возможно пока только на норках.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
В естественных условиях болезнь передается при контакте больных и здоровых животных.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании симптомов болезни и нейрогистологических изменений,
сходных с наблюдаемыми при срейпи, но отличающихся от скрейпи по виду хозяина и ло-
кализации (только в ЦНС).
ГУБКООБРАЗНАЯ ЭНЦЕФАЛОПАТИЯ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Губкообразная энцефалопатия (ГЭ) - медленно развивающаяся болезнь ЦНС взрослого
КРС, сходная со скрейпи овец, трансмиссивной энцефалопатией норок, медленными инфек-
циями человека (куру, болезнь Крейцфельда-Якоба). У КРС её впервые зарегистрировали в
ноябре 1986 г. в Великобритании (25). К 1991 г. выявили около 20 тыс. больных животных
884
Прионные инфекции
(в основном голштинофризской породы) на территории почти всей страны; отмечали 350-
400 случаев болезни в месяц. Клинические признаки поражения в большинстве стад регист-
рировали у единичных особей, что не снижало значимости проблемы в виду фатального ис-
хода, характерного для ГЭ. Фактически одновременно болезнь выявили в Ирландии, а с
1990-1991 гг. МЭБ информирует о неблагополучии по ней Швейцарии и Франции: в первой
за 8 мес 1991 г. отмечено 9 вспышек (число случаев не указано), во второй - 4 (278 случаев),
но причины её возникновения не установлены. В Омане болезнь выявили у 2-х коров джер-
сейской породы, импортированных телочками в 1985 г. из Великобритании.
ГЭ КРС новая нозологическая форма из группы ТГЭ быстро распространялась с про-
грессивно возрастающей инцидентностью с 2,5 тыс. случаев в 1988 г (начало эпизоотии) до
37 и 35 тыс. соответственно в 1992 и 1993 гг. (пик эпизоотии). Общее число пораженных
животных к 1996 г. превысило 150 тыс. голов (около 30% поголовья КРС Великобритании,
более половины молочных стад оказались неблагополучными). Заболевание было объявлено
как особо опасная болезнь (notificable disease).
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Термин ГЭ примени-
тельно к КРС впервые ввели Уэлл и др. (25) для обозначения симптомокомплекса болезни,
при которой нейроны и серое вещество мозга напоминали губку, будучи пронизанными ва-
куолями. Эта картина была сходна с таковой в группе медленных инфекций у животных
других ввдов(скрепи овец, трансмиссивная энцефалопатия норок, хроническое изнурение
чернохвостных оленей) и человека ( куру, БКЯ). Инфекционный характер болезни подтвер-
жден экспериментально у мышей, зараженных суспензией мозга от больных животных, у
которых клинические проявлялась ГЭ (24).
Предполагают, что инкубационный период может составлять от 2,5 до 8 лет. Клиниче-
ская картина складывается из следующего комплекса: состояния страха, расстройства локо-
моции, гиперстезия, потеря массы.
Заболевания прионной этиологии и естественно восприимчивые животные
Нозоединицы
Губкообразная энцефалопатия КРС
Скрепи
Трансмиссивная энцефалопатия норок
Хроническое изнурение
Губкообразная энцефалопатия кошек
Куру
Болезнь Крейцфельда-Якоба
Синдром Герштманна-Штраусслера
Летальная семейная бессоница
Амиотрофический лейкоспонгиоз
Семейная летальная бессоница
Естественно восприимчивые животные
КРС, копытные 6 и кошачьи 4 видов
Овцы, козы
Норки
Олене-мулы, лоси
Кошки
Человек
Человек
Человек
Человек
Семейная инфекция
Семейная инфекция
Подозрения фермеров возникали из-за незначительных изменений, похожих на гипо-
магнезию или кетоз. Первоначально агрессивность животного рассматривалась в качестве
основного симптома; в настоящее же время считают, что основной признак - боязливость, а
агрессивность является лишь следствием нервного состояния животных. Отмечали, что
большинство животных были послушны и возбуждались только в том случае, когда к ним
приближались или загоняли в угол. У больных животных отмечали скрежет зубов, дрожа-
ние нижнего отдела шеи и плечевой области, а иногда боковых сторон туловища, редко -
дрожание всего тела. Больные животные сопротивлялись попыткам их осмотра, особенно в
области головы. Локомоторные нарушения на ранней стадии проявлялись в слабой атаксии
885
Прионные инфекции
задних конечностей, причем заметнее при резких поворотах животного, когда происходило
заплетание конечностей, спотыкание и даже падение. Атаксии передних конечностей обыч-
но не наблюдали. Если животное падало, то часто поднималось на передних конечностях,
демонстрируя при этом резко выраженную слабость задней части тела. Отдельные случаи
патологии впервые выявлены при неудаче животного преодолеть обычные препятствия:
подставки, применяемые при доении, ступеньки или скользкий спуск, отмечали также вне-
запную боязнь проходить в дверь. Если же такое животное заставить сделать пробежку, то
можно наблюдать полную картину болезни.
Часто наблюдали также опускание таза, утрату нормальной походки и характерные ры-
систые движения. Передние и задние конечности животного на одной стороне двигались со-
вместно, оно при этом покачивалось. Отмечена гиперстезия, проявлялся неадекватный ответ
(испуг и падение) на звук, внезапный шум или прикосновение. Симптомы проявлялись по-
степенно спустя 6-8 нед с начала заболевания, с последующим нарастанием (до 4-х мес). Но
обычно животных убивали раньше в связи с потерей ими продуктивности. Несмотря на
нормальный аппетит, у них снижалась лактация. Прогноз в целом безнадежный. Несмотря
на отдельные случаи ремиссии, болезнь, однажды проявившись, неизбежно имеет тенден-
цию к прогрессированию.
При вскрытии обнаруживают двусторонние симметричные дегенеративные изменения в
сером веществе стволовой части мозга, в нейроглии - вакуоли яйцевидной или округлой
формы, реже менее правильной формы с неотчетливыми отверстиями по краям. Выявлен
также перикарион нейронов и неврит некоторых стволовых ядер (особенно дорсальных ядер
блуждающего нерва), сетчатость; вестибулярные ядра и красное ядро содержали крупные,
отчетливо различимые единичные или множественные внутрицитоплазматические вакуоли.
При микроскопии обнаружена картина, сходная с таковой при скрейпи овец (как в све-
товом, так и электронном микроскопах). В экстрактах головного мозга больных животных
выявлены ассоциированные со скрепи фибриллы. Как указано, первые симптомы названно-
го заболевания отмечены в апреле 1985 г., после чего инцидентность заметно увеличилась к
сентябрю 1987 г. и составляла около 60 случаев в месяц (до января 1988 г.). В большей мере
подвержены этой болезни молочные стада (по сравнению с мясными). Заболевали главным
образом, коровы, за исключением 2-х случаев - у быков, одного подтвержденного и одного
клинически подозреваемого. Все случаи ГЭ зарегистрированы у взрослых животных в воз-
расте от 2-х лет 9-и мес до 1.1 лет, при этом самая высокая инцидентность у 4-летних (3,4%),
а наименьшая - у 6-летних животных (25%). Не установлено связи между стадией стельно-
сти, сезоном и началом заболевания. В 15% пораженных стад не завозили КРС, а в 20%
стад контакта с овцами не выявили. Отсутствуют доказательства передачи болезни непо-
средственно от КРС к КРС, а также между овцами и КРС. Хотя, несомненно, у ГЭ генетиче-
ский компонент и просматривается, но это не просто наследственная болезнь. В небольшой
части случаев ГЭ обнаружена семейная связь между пораженными животными внутри стада
и между стадами. Однако внезапное появление болезни у животных в национальном мас-
штабе, поражение некоторых пород и кроссбредов, отсутствие общего предка или неболь-
шой родоначальной группы еще убедительнее подкрепляет мысль о факторах, связанных с
окружающей средой (24).
Анализ данных о закупках животных и изучение родословной быков-производителей,
особенно в изолированных хозяйствах, привели к заключению, что ГЭ была занесена в Ве-
ликобританию с импортированным КРС или распространена со спермой. Распределение
случаев по месяцам и годам свидетельствовало об обширном общем источнике возбудителя.
Считается, что фактором передачи являлось воздействия на КРС скрепиподобного агента,
находящегося в корме, содержащим белок жвачных. Такое явление отмечалось в 1981-1982
гг., продолжалось до июля 1988 г., когда было запрещено включать в рацион КРС белок,
полученный от жвачных в форме мясо-костной муки, а большинство животных было инфи-
886
Прионные инфекции
цировано в раннем возрасте (26). По-видимому, нет оснований говорить о мутации приона-
скрепи. Полагают, что видовой барьер преодолен в связи с возросшим воздействием био-
агента.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Инфекционная природа ГЭ КРС подтверждена результатами экспериментального зара-
жения и воспроизведения заболевания у КРС, мышей и ряда других животных. Восприим-
чивыми в эксперименте оказались свиньи, овцы, козы, норки (в том числе при оральном за-
ражении) и обезьяны - мармозетки.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Распространение болезни в Великобритании обусловил ряд факторов: значительный
рост поголовья овец в 1980-е г., что, возможно, способствовало увеличению инцидентности
скрепи; широкая переработка овечьих голов (экстрагирование жира и белка); применение
новых химических технологий их обработки (ранее использовали автоклавирование), кото-
рые менее эффективно инактивировали агент скрепи. Гипотезу заноса болезни с кормом
подтверждала более высокая заболеваемость животных в молочных хозяйствах, чем в от-
кормочных, где дают меньше кормовых концентратов (особенно телятам) (4,25,26).
Болезни больше подвержены животные молочных стад ( по сравнению с мясными), за-
болевали; в основном, коровы, редко - быки. Наибольшее число случаев выявили среди жи-
вотных голштинофризской породы, лучшей и самой продуктивной в Англии. Связь между
стадией стельности, сезоном и началом болезни не установили. В 15% пораженных стад
КРС не завозили, в 20% животные не контактировали с овцами. Доказательства вертикаль-
ной и горизонтальной передачи болезни в естественных условиях между КРС (или между
КРС и мелким рогатым скотом) пока отсутствуют. В зоопарках страны признаки ГЭ обна-
ружили у 5 видов антилоп (ньяла, канна, сернобык и др.), 2 видов оленей, изолированных и
неконтактировавших с крупным и мелким рогатым скотом. Этих животных кормили то же
мясо-костной мукой. Обращает на себя внимание значительное уменьшение инкубационного
периода у ньялы (3 мес) и сернобыка (15 мес). Особую тревогу вызвала болезнь домашних
кошек (4 случая), у них при вскрытии обнаружили признаки ГЭ (животных кормили кон-
сервами). Считают, что распространение болезни связано не с внезапной мутацией возбуди-
теля, а с попаданием в организм КРС большого количества агента скрепи и преодолением
им видового барьера; так, энцефалопатия норок возникла при скармливании им мяса боль-
ных скрепи овец (1). Имеет место как горизонтальная, так и вертикальная передача возбу-
дителя. В пользу этого говорят и эпизоотологические данные о возникновении заболевания
в стадах Франции, Швейцарии, Португалии и Ирландии, а также у зоопарковых жвачных и
представителей семейства кошачьих (24).
Принципиальные различия между вирусами и прионами (по В.В.Макарову и др. 1992)
ВИРУСЫ ПРИОНЫ
Сложные мультимолекулярные комплексы, от нуклеопротеидов до липосодержащих оболочечных структур. Обладают первичными свойствами жи- вой материи Простой белок - модифициро- ванная изоформа нормального белка организма хозяина
Имеют собственный геном, кодирующий ви- русное потомство, включая вирусные белки Не содержит генетического ма- териала. Белок приона кодируется генами организма-хозяина
Чувствительны к денатурирующим и модифи- цирующим факторам (нагревание, детергенты)
887
Прионные инфекции
ДИАГНОСТИКА
Этиологический агент ГЭ пока не изолирован, но как и при скрейпи он уникален: чрез-
вычайно устойчив к действию физико-химических факторов. Даже длительное автоклави-
рование не дает 100%-ной стерилизации материала. Диагноз на ГЭ ставят на основе патоло-
гоанатомических, клинических и эпизоотологических данных. Прижизненная лабораторная
диагностика не разработана. Из-за отсутствия у животных иммунного ответа АТ при ГЭ не
вырабатываются, поэтому серологические реакции не используют. Специфические тесты ис-
следования крови (или других жидкостей организма) не созданы. Окончательно диагноз
можно поставить лишь посмертно, при изучении гистосрезов тканей головного мозга - при
наличии в цитоплазме стволовых нейронов крупных сферических и яйцевидных вакуолей
(губкооб-разное изменение). Как дополнительный диагностический прием для обнаружения
в экстрактах мозга больных особей специфических фибрилл используют ЭМ. Ученые уг-
лубленно, на молекулярно-генетическом уровне исследуют возбудителя и самих животных
для определения устойчивых пород, поскольку при скрепи обнаружен определенный ген,
влияющий на чувствительность овец к агенту. Если подобную связь установят при ГЭ КРС,
этот феномен будут применять в селекционной работе. При диагностировании необходимо
отличать ГЭ от сходных патологий (табл.ХХП.1.). В ранней стадии развития клинических
признаков её прежде всего дифференцируют от листериоза (наблюдали их смешанное тече-
ние), бешенства, болезни Ауески, нервных форм ацетонемии и гипомагнезимии.
Параллельно с широкими исследованиями эпизоотологии и клинического течения бо-
лезни в Великобритании, США и странах ЕЭС развернуты фундаментальные исследования
прионов человека и животных. Расшифрована аминокислотная последовательность прион-
ного белка скрепи овец, ГЭ коров и приона мышей. Синтезированы специфические пепти-
ды, получены рекомбинантные белки прионов животных в E.coli и клеточной культуре с ис-
пользованием ретровирусного вектора. Разработана методика типирования штаммов энце-
фалопатий животных, основанная на сравнительном изучении патологии у генетически
стандартной группы линейных мышей. Эти опыты показали, что источник инфекции ГЭ у
коров в Англии, Швейцарии, Франции и Португалии, видимо, один и тот же: гепард, пума,
Таблица XXII. 1. Губкообразные энцефалопатии прионной этиологии
Характе- ГЭКРС Скрепи БКЯ Куру
ристика Восприимчвые эпизоотология КРС ЭПИДЕМИОЛОГИЯ Овцы, козы Человек Человек
животные Спонтанное 6 видов парно ? - -
заражение Распростране- копытных, кошки Локальное Глобальное Глобальное Локальное
ние Характер эпи- Энзоотичность Энзоотичность Спорадичность Эндемичность
зоот/эпидем. Способ переда- Кормовая инфек- Контактный и Ятрогенная, се- Ритуальный
чи ция вертикальный мейная инфекция канибализм
Восприимчивы Мыши, овцы, козы, Мыши, хомячки, (пищевой путь ?) Обезьяны, ко- Обезьяны,
888
Прионные инфекции
е эксперимен- свиньи норки, обезьяны зы, кошки, м. норки, козы,
тальные жи- свинки, мыши, хорьки
вотные хомячки
Возможность алиментарного + + + +
заражения ПАТОЛОГИЯ
Возраст боль- ных (лет) >3 >5 >50 >5
ИП мес. >30 24-60 18-360 60-360
Продолж. бол. С им пт.: ~4 2-6 1-55 3-12
- медленно
прогресс.разв. + + + +
- испуган- ность, тревож- ное состояние + + + +
- наруш.коорд. + + + +
- тремор + + + +
- летальность 100% 100% 100% 100%
-Statatus spongiosus + + + +
оцелот и домашние кошки поражены штаммом, циркулирующим в популяции коров, и он
отличается от всех известных штаммов скрепи, выделенных от овец. Однако нельзя полно-
стью исключить, что штамм ГЭ коров происходит от какого-то штамма скрепи овец, но он
существенно изменился и стабилизировался в процессе адаптации к организму КРС (4).
Сравнительно недавно в цереброспинальной жидкости (ДСЖ) пациентов, страдающих
БКЯ были обнаружены два белка, отсутствующие в ЦСЖ здоровых. Эти белки происходят
из нервных тканей и затем появляются в ЦСЖ , как результат патологии при этих заболева-
нии. Ранее была установлена неполная аминокислотная последовательность этих белков, как
представителей класса белков 14-3-3. Иммунологический анализ на основе использования
белка 14-3-3 с высокой степенью достоверности применялся при диагностике БКЯ. Белки
14-3-3 оказались весьма стабильными. Иммнологический анализ с их использованием воз-
можен для диагностики скрейпи и других энцефалопатий. При исследовании на присутствие
белка 14-3-3 в ЦСЖ быков, пораженных губкообразной энцефалопатией. Проводили ЭФ
подготовленных проб ЦСЖ в 12%-ном ПААГ с последующим перенесением их на мембра-
ны миллипор. Для определения у-изоформ белка 14-3-3 использовали коммерческие специ-
фические поликлональные АТ к данному белку. Результаты показали, что белок 14-3-3 да-
вал иммунореактивную полосу у всех 10 исследованных больных быков, тогда как она име-
лась лишь у одного из 6 контрольных животных (вероятно из-за технических погрешно-
стей).
Результаты, полученные на основе иммунологического анализа белка 14-3-3 согласовы-
ваются с гипотезой о том, что этот белок спиномозговой жидкости позволяет подтвердить
диагноз при наличии клинических признаков ГЭ КРС. Изучение более ранней стадии бо-
лезни и её диагностика при помощи обнаружения белка 14-3-3 является наиболее перспек-
тивным направлением. Данный тест оказался высокочувствительным (10/10). Необходимы
дальнейшие исследования животных с другими неврологическими расстройствами для
оценки специфичности 14-3-3 маркера и использования его для дифференциальной прижиз-
ненной, ранней диагностики (17).
889
Прионные инфекции
МЕРЫ ПРОФИЛАКТИКИ И БОРЬБЫ
ГЭ официально регистрируют в Великобритании с 21 июня 1988 г., и закон обязывает
сообщать обо всех случаях подозрения на эту болезнь. Больных животных убивают и унич-
тожают, владельцам выплачивают компенсацию. Период от регистрации болезни до убоя в
среднем равен 8 сут. Чтобы не допустить дальнейшего распространения ГЭ, правительство
утвердило рекомендации экспертной комиссии Министерства сельского хозяйства. Они
(кроме обязательного оповещения о появлении болезни) запрещают скармливание кормов,
содержащих белок жвачных; с сентября 1990 г. запрет распространен на животных всех ви-
дов, включая свиней, домашних и декоративных птнц. С 13 ноября 1989 г. запрещено ис-
пользование человеком в пищу головного и спинного мозга, тимуса, селезенки, миндалин,
кишечника от здорового КРС, убитого в возрасте старше 6 мес, тогда как мясо используют
на общих основаниях.
В последние годы проведены многочисленные дискуссии специалистов Великобритании
и других стран ЕЭС, ведущих ученых по медленным инфекциям, на которых обсуждалась
возможная опасность данной патологии для людей. Когда болезнь только была диагности-
рована, страны Западной Европы, США, Канада, Австралия отказались от импорта из Ве-
ликобритании живого скота и говядины. Но в результате дискуссий английских ученых и
практиков, экспертов ЕЭС о ситуации со скрепи овец и анализа данных по ГЭ пришли к вы-
воду, что произведенная в Великобритании говядина не опасна для здоровья людей. Участ-
ники дискуссий утверждают, что учитывались даже отдаленные последствия и теоретиче-
ский, и гипотетический риск. Считают, что принятые правительством страны меры исклю-
чают возможность попадания зараженных продуктов в пищу человека. Достаточность этих
мер заключается в следующем. Во-первых, убивают и уничтожают животных с клиниче-
скими признаками болезни. При убое здоровых особей старше 6 мес головной и спинной
мозг, тимус, селезенку, кишечник и другие органы, богатые лимфоидной тканью, в пищу не
используют. Полагают, что этих мер для защиты здоровья людей достаточно. Во-вторых,
другие страны сохраняют запрет на импорт живого скота из Великобритании, Германия
ввозит только вырезку без лимфоузлов (при наличии дополнительного сертификата о благо-
получии стада).
По нашему мнению, мясо от здоровых животных из неблагополучных по ГЭ районов
безопасно и может быть использовано в пищу людям, ведь его подвергают тепловой обра-
ботке, что значительно инактивирует агент, даже если он присутствовал в продукте. К тому
же выше отмечали, что для алиментарного заражения животных требуются огромные дозы
возбудителя (в 100 тыс. раз выше, чем при инокуляции через мозг). Даже если предполо-
жить, что в пищу человека попадает мясо животного, находящегося в инкубационном пе-
риоде, риск заражения будет маловероятен, поскольку органы, богатые лимфоидной тканью,
и нервную ткань, где в это время присутствует возбудитель, не употребляют.
Однако организация систематического эпидемиологического и эпизоотологического
надзора ТГЭ совершенно очевидна. В его рамках особое место имеет следущее. Во-первых,
безопасность для групп риска, так или иначе соприкасающихся с зараженным материалом
или больными ТГЭ (ветеринарные и медицинские хирурги, паталогоанатомы, ветсанэкспер-
ты, работники мясоперерабатывающей промышленности, лабораторные работники и др.) -
прион ГЭ КРС квалифицирован как патоген 2-й степени опасности по мерам предосторож-
ности для персонала. Фиксация формалином не инактивирует прион - воспроизведено забо-
левание мышей формалин-фиксированным мозгом от больного ГЭ КРС (11). Кроме того,
исследования показывают, что 9% виниловых и 6% латексных перчаток проницаемы для
мелких вирусов (16)Во-вторых, это пищевая цепь. Никакая технология переработки и при-
готовления пищи (термическая - кулинарные приемы, пастеризация, стерилизация, замора-
живание, лиофилизация; химическая - квашение, засолка, ферментация, облучение) a priori
нееффективна в отношении инфекционного приона. Алиментарное заражение возможно при
890
Прионные инфекции
попадании в пищу субпродуктов от животных в инкубационной стадии болезни. В-третьи,
медикаментозная цепь. С точки зрения ятрогенной инфекции и стереотипа потенциального
эпизоотического и эпидемического процесса особенно опасны парентеральные инъекции
фармпрепаратов, приставленных из мозга или лимфоидной ткани КРС (ганглиозидов и др.
препаратов нейрогенеративного назначения, миелопептидов, биогенных стимуляторов, гор-
монов, ферментов). Также потенциально опасны сыворотки и ткани - источники культур
клеток и биосырья в научной работе и вакцинно-сывороточном производстве (2, 9,23).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Бакулов И.А. и др. Ветеринария, 1990.10 :35. 2.Воробьев А.А.,Макаров В.В. Вести. АМН
РФ, 1996, 6: 3. 3. Коромыслов Г.Ф. Бюлл. ВИЭВ. 1996, 77 :2. 4.Макаров В.В. и др. Вести.
РАСХН, 1992, 6 :44. 5. Надточей Г.А. и др. Бюлл. ВИЭВ,1996, 77 :5. б.Орлянкин Б.Г. не
опубликованные данные, 1998. 7. Устинов А.В. и др. С/х биол. 1994, 2 :20. 8. Шубин В.А.
Бюлл. ВИЭВ, 1996, 77 :23. 9.Bennett A. Et.al. Rev Sci Tech Off intEpiz. 1992, 11,2 :569. 10.
Bradley R. etal. Rev Sci OffintEpiz. 1992, 11, 2 :605. ll.Fraser H. et.al. J Jen Virol., 1992, 73
: 1891. 12. Gajdusek D.C. J Neuroimmunol.,1988, 20 :95. 13.Goldmann W. Etal. Proc Natl
Acad Sci USA, 1990, 87 :2476. 14.Goldmann W. Et.al. J Jen Virol.,1991, 72, 1:201. 15. Hsiao
K.K. et.al. Sci., 1990, 250 :1587. 16.Kotilainen H. et.al. Appl Enveron Microbiol., 1990, 56
.1627. 17.Lee K.H. et.al. Vet Rec., 1997, 140, 8 :206. 18.Prusiner S.B. Ann Rev Microbiol.,
1989, 43, :345. 19.Prusiner S.B. et.al. J Inf Dis.,1993, 167 :602. 20.Prusiner S.B. et.al. Cell.,
1990, 63 :673. 21.Prusiner S.B. et.al. Mol Plant-Microbe Interactions, 1991, 4,3 :226. 22.Ridley
R.M. etal. Dordrecht, Kluwer Acad Publ.,1991 :203. 23.Report WHO Cons, Geneva, 17-19
May, 1995. 24.Vet.Rec., 1988. 25.Wells G. et.al. Vet Rec, 1987, 121 :419. 26.Willesmith J. et.al.
Ibid.,1991, 128.199.
ПОСЛЕСЛОВИЕ
Перевернув последнюю страницу книги, думающий и любознательный
читатель наверняка захочет знать: какое же направление в ближайшем бу-
дущем примет наука о вирусах и вирусных болезнях животных?
Ветеринарная вирусология не отделена китайской стеной от фито- и ме-
дицинской вирусологии. Методы исследования широко используются в лю-
бой из указанных областей вирусологии. За вторую половину текущего сто-
летия прогресс в области медицинской и ветеринарной вирусологии был
неразрывно связан с классическими открытиями в биохимии, генетике и
молекулярной биологии.
Ниже мы приведем в хронологической последовательности открытия
мирового значения и авторов выдающихся работ, заслуженно отмеченных
Нобелевскими премиями. Перечень этих работ, позаимствован нами из бле-
стящих очерков Е.Д. Свердлова (1995) по современной молекулярной гене-
тике (Свердлов Е.Д. Мол. ген.,1995,2, 3 :4).
Напомним, что серповидно-клеточная аксмия - молекулярная болезнь, при-
водящая к изменению гемоглобина, - стала классической моделью наслед-
ственных заболеваний (открытие Лайнуса и Поллинга, 1949);
Работа Чаргаффа (1950) по нуклеотидному составу ДНК - знаменитые пра-
вила Чаргаффа - стали основными аргументами в пользу двуспиральной
структуры ДНК;
В 1954 г. Фрэд Сэнгер, дважды Нобелевский лауреат, определил структуру
одной из цепей инсулина; Барбара Макклинток, Нобелевский лауреат, от-
крыла «прыгающие» генетические элементы у кукурузы;
1953 г. - Уотсон и Крик - открыта двуспиральная структура ДНК;
1955 г. - S Benzer - тонкая генетическая карта rl 1-области Т-четных бакте-
риофагов; - А.Тодд и А.Михелъсон (Англия) разработали основы синтеза
олигонуклеотидов;
1958 г. - Мезельсон и Сталь , а также Корнберг и сотр. - показали: 1) фер-
мент полимеризующий НК в зависимости от матрицы - ДНК-полимеразы I;
2) полуконсервативный механизм репликации ДНК;
1959 г. - Овчинников и Свердлов - открыли РНК-полимеразу и структуру
его генов;
1961 г. - Жакоб, Мезельсон и Бреннер - теория оперона и контроля экс-
прессии генов; Крик - теория триплетности кода - каждая аминокислота
кодируется тремя нуклеотидами, расположенными в определенном порядке;
1961 г. - Ниренберг и Маттеи показали синтез белка в бесклеточной
системе;
1963 г. - Меррифилд разработал метод синтеза пептидов на твердой под-
ложке;
892
1964-1966 - продолжается детализация генетического кода, открыты нон-
сенс-кодоны детерминирующих синтез белка;
1970 г. - Гарвард Темин и Дэвид Болтимор -открытие обратной транскрип-
тазы; - описание рестрикционной эндонуклеазы Hinfe в группе Смита;
1972 г - Пол Берг, Нобелевский лауреат, получил первые рекомбинантные
ДНК, позволившие вторгаться в геном. Началась эпоха парасексуальной
генетики;
1973 г. - усовершенствование методической базы парасексуальной генетики,
применение рестрикционных эндонуклеаз в сочетании с ДНК-лигазами;
1976 г. - генная инженерия начала работать на науку. Рекомбинантные ДНК
используют для пренатальной диагностики наследственного заболевания -
альфаталассемии;
В 1977 - У.Гильберт и М.Сэнджер и соавт. определены длинные последова-
тельности ДНК как основа для понимания их функций. Установили экзо-
интронную структуру аденовируса, показали, что это свойство общее для
эукориотических генов;
1978 - эукориотические гены заработали в бактериях и синтезировали ко-
дируемый ими белок - пр о инсулин; - появилась первая трансгенная мышь -
ген тимидинкиназы (ТК) заработал в соматических клетках мыши;
1985 - появилась статья о полимеразной цепной реакции (ПЦР);
1987 - появляются дрожжевые искусственные хромосомы - YAC (Yeast Аг-
tifi Ciol) - как векторы для клонирования больших фрагментов и геномов.
Далее удалось разработать методы включения онкогенов, расшифровать
гены иммунной системы, гены рецепторов, различных регуляторных бел-
ков, механизм репликации, транскрипции, трансляции, репарации - все это
базовые исследования для развития современной генетики и вирусологии.
Это результаты упорного труда выдающихся генетиков предыдущих поко-
лений. Но все это история до 1988 г. А что же дальше? - Началась новая
эпоха молекулярной генетики, эпоха интегральных исследований генома.
Последние два десятилетия велись интенсивные исследования по выяс-
нению природы агентов, вызывающих ТГЭ животных и человека. Амери-
канский исследователь Стенли Прузинер в 1982 г. высказал предположение,
что эти болезни вызываются прионами - инфекционными белковыми части-
цами, не содержащими нуклеиновой кислоты - носителя генетической ин-
формации. К прионной концепции этиологии ТГЭ многие ученые отнеслись
скептически. Ситуация по губкообразной энцефалопатии КРС в Великобри-
тании, а также скрейпи романовских овец в России и последствия
(возможный образец технологического происхождения аналогичных ситуа-
ций в эпидемиологии и эпизоотологии) продемонстрировала реальность
возникновения «рукотворных» болезней. Оказалось, что для их возникнове-
ния социальные и технологические возможности существуют как в высоко-
893
цивилизованных государствах при самых современных технологиях, так и
наоборот.
Все связанное с ГЭ КРС лишь условно можно объяснить спонтанностью,
случайным стечением обстоятельств. Такие ситуации должны быть безус-
ловно прогнозируемыми, а возникновения бедствия и его масштабы свиде-
тельствуют о своеобразной профессиональной недоработке на уровне вы-
полнения законов, кодексов, технологий. Возникновение и распространение
новых ТГЭ при этом высветили неожиданные и непредсказуемые возмож-
ности широкой территориальной инвазии, а также перехода инфекций на
другие виды животных и человека. (Воробьев А.А., Макаров В.В. Вести.
АМН РФ, 1996, 6 :3).
Нобелевская премия по физиологии и медицине за 1997 г. присуждена
американскому неврологу, биохимику и вирусологу Стенли Прузинеру за
вклад в идентификацию инфекционного агента, вызывающего ТГЭ. Основ-
ная заслуга С.Прузинера в доказательстве прионной концепции возбудите-
лей губкообразных энцефалопатий В 1995 г. в США был сформулирован
национальный проект «Геном Человека». Этот глобальный проект предпо-
лагающий к 2005 г. завершить определением полной последовательности
всех трех миллиардов нуклеотидных звеньев, кодирующих всю генетиче-
скую информацию человека.
Дальнейшее развитие вирусологии в общечеловеческом и прикладном
значении будет идти по пути углубленного изучения молекулярных основ
патогенности вирусов, новых ранее неизвестных патогенов (прионов и ви-
роидов), природы и механизмов персистенции вирусов и их экологии, раз-
работки новых и совершенствования существующих методов диагностики и
специфической профилактики вирусных болезней животных. Изменилось
представление о спектре патогенности ряда вирусов. Так например, показа-
на высокая чувствительность сайгаков к ряду вирусных болезней крупного и
мелкого рогатого скота: чуме, оспе, везикулярному стоматиту, эфемерной
лихорадке, эктиме. Эти болезни протекают остро и с большим процентом
гибели. Экономический ущерб может быть весьма значительным не только
за счет массовой гибели сайгаков, но и за счет перезаражения крупного и
мелкого рогатого скота, пользующегося одними и теми же пастбищами с
дикими животными.
В последние годы внимание вирусологов привлекает морбилливирусная
инфекция у водных млекопитающих. Так, несколько вспышек этих болезней
привели к гибели многих тысяч тюленей и дельфинов. Вспышки 80-х годов
у береговых и серых тюленей Северной и Западной Европы и у байкальских
тюленей в Сибири были вызваны соответственно вновь открытым вирусом
чумы тюленей и штаммом вируса чумы собак. Морбилливирус дельфинов
оказался близкородственным вирусу, выделенному от морских свиней на
894
побережье Западной Европы в конце 80-х годов. Согласно серологическим
опытам морбилливирусы продолжают циркулировать в большинстве рай-
онов со времени первых эпизоотий в 1988 г. Наиболее вероятным источни-
ком их у европейских тюленей (PDV-1) являются потомки североатлантиче-
ских и арктических тюленей. Что касается морбилливируса средиземномор-
ских дельфинов и морских свиней, то серологические данные указывают на
широкое распространение этих вирусов у многих видов китообразных в Ат-
лантике. Эпизоотия среди пресноводных тюленей озера Байкал не связана с
ситуацией у европейских морских млекопитающих. Вирус, инфицировав-
ший байкальских тюленей (PDV-2), неотличим от полевых изолятов вируса
чумы собак.
В последние годы появилось много сообщений о выделении оспенных
вирусов от кошек. Есть данные об инфицированности этими вирусами мел-
ких грызунов, которые, возможно, являются резервуаром возбудителей. По-
скольку мелкие грызуны служат пищей лисицам, была исследована инфи-
цированность лисиц поксовирусами. Сыворотки 703 лисиц из северо-
восточной части Германии были исследованы с помощью ИФА на АТ к ви-
русу осповакцины шт. Эльстр. АТ были обнаружены у 46 (6,5%) лисиц.
Обратила на себя внимание патология людей и животных, в которой
этиологическая роль вирусов даже не подозревалась. Так, например, появи-
лись сообщения о роли птиц, являющихся переносчикамии экзогенного
агента, и высоком проценте положительных ответов на АГ ВБМ и Эпштей-
на-Барр у лиц, больных рассеянным склерозом; о роли вирусов в ишемиче-
ской болезни сердца, поскольку признается существенная роль хронической
вирусной инфекции в генезе кардинальной патологии. Оказалось, что наи-
большим кардиотропизмом отличаются энтеровирусы (вирусы полиомие-
лита, ECHO, Коксаки). Активно разрабатывается аутоиммунная теория па-
тогенеза атеросклероза (Гирина О.Н. Укр. кард, жури., 1995, 6 :73), пока-
зана роль вирусов в патогенезе рассеянного склероза (PC). Причем возник-
новение последнего не является результатом прямого действия вируса, а
следствием персистенции его и вариантом соответствующей защитной ре-
акции организма на вирусную персистенцию (Simon J. et al. Med Hipoth.,
1996, 46, 6 :537 ).
Установлена и роль герпесвируса в этиопатогенезе атеросклероза, вы-
сказано предположение о том, что гомологичные участки в генах человека
и вируса могут играть роль в развитии атеросклеротических поражений.
ЧРЕЗВЫЧАЙНЫЕ СИТУАЦИИ
С УЧАСТИЕМ ВИРУСОВ
Это - очень важный в государственном плане вопрос, которому уделяет-
ся большое внимание. Неожиданное появление малоизученных болезней,
895
таких как геморрагическая болезнь кроликов, губкообразная энцефалопатия
КРС, скрейпи, респираторно-продуктивный синдром, вызванный парвови-
русами, и ряд инфекций «заморского» происхождения (типичных для стран
африканского континента) при все возрастающих торговых и туристических
связях должны настораживать нашу отечественную ветеринарную службу
на возможность появления таких опасных инфекций как африканская чума
свиней, экзотические типы вируса ящура и ряда других. Такую насторожен-
ность испытывает ветеринарная служба ряда стран, что можно подкрепить
примером неожиданного появления вирусной инфекции креветок, прояв-
ляющейся синдромом Таура. Последний вызывается вирусом (TSV) и пора-
жает креветок. Он официально отмечен в июне 1992 г., когда поражал от-
дельные фермы в Эквадоре и затем исчез до марта 1993 г., когда вновь поя-
вился и стал главной причиной эпидемий, убивающих креветок на фермах
по всему заливу Гуаякиль Эквадора. TSV распространился до побережья
Тихого и Атлантического океанов Колумбии, Мексики, Гавайских островов,
и в мае достиг Техаса и быстро привел к упадку небольшую индустрию кре-
веток. На всех 3 фермах южного Техаса смертность последних достигла 80-
90%. Культивируемые на фермах креветки оказались наиболее чувствитель-
ными к вирусу синдрома Таура в возрасте между 20-50 дн, культивируемые
в воде низкой солености.
Морбилливирусы имеют широкий круг хозяев и возможно, это связано
со специфическими рецепторами клетки для вируса кори Геном этого виру-
са обнаружен в лимфоцитах периферической крови больных с такими ауто-
иммунными заболеваниями, как красная волчанка и хронический гломеру-
лонефрит. Сравнительно недавно показана высокая чувствительность сай-
гаков к ряду вирусных болезней крупного и мелкого рогатого скота: чуме,
оспе, везикулярному стоматиту, эфемерной лихорадки, эктиме. У сайгаков
эти болезни протекают остро и с большим процентом гибели. В последние
годы все большее внимание привлекает морбилливирусная инфекция вод-
ных млекопитающих. Несколько вспышек болезней, приведших к гибели
многих тысяч тюленей и дельфинов, были вызваны новыми морбилливиру-
сами. Вспышки 80-х гг. у среди тюленей в Сибири были вызваны вновь от-
крытым вирусом чумы тюленей и штаммом вируса чумы собак. Вирус, ин-
фицировавший забайкальских тюленей, неотличим от полевых изолятов ви-
руса чумы собак, а морбилливирус дельфинов оказался близко родственным
вирусу морских свиней на побережье северо-западной Европы. Морбилли-
вирусы продолжают циркулировать в большинстве районов со времени
первых эпизоотий в 1988 г. Серологические данные указывают на широкое
распространение их у многих видов китообразных в Атлантике.
896
ЭКОЛОГИЯ И НОЗОГЕОГРАФИЯ ВИРУСОВ
Продолжаются активные исследования роли синантропных и перелет-
ных птитт в распространении вирусов. Так, например, в Моравии у боль-
шинства птитт, пойманных в биотипе камыша на берегу пруда, в сыворотках
находили АТ к вирусам Синдбис, Западного Нила, клещевого энцефалита
(3,2%), Тягиня (6,4%), Чалово-Батан (1,7%) и Бхавджа (0,7%). Из крови мо-
лодой тростниковой камышовки выделили и охарактеризовали новый для
науки буньявирус Седлец. Эти примеры свидетельствуют о том, что про-
блема экологии вирусов привлекает внимание эпидемиологов, эпизоотоло-
гов и, в первую очередь, вирусологов.
Интригующий интерес вызывают сообщения о нозогеографии полевых
изолятов ряда вирусов и изменении их генома. Для многих вирусов первич-
ная структура генома пока остается неясной. В этих случаях применение ме-
тода полимеразной цепной реакции (ПЦР) в сочетании с рестрикционным
анализом дает новую информацию о генетической структуре изолятов, цир-
кулирующих на разных территориях. Неоднозначность результатов диффе-
ренциальной серодиагностики, делает необходимой разработку генетиче-
ского метода.
Изменились несколько представления о генетическом дрейфе вирусов и
в частности о вирусе кори. В США, например, с 1988 по 1991 гг. заболевае-
мость корью выросла в 10 раз по сравнению с предыдущим 3-летием. При-
чина такой вспышки не ясна. Предполагают, что одной из причин является
недостаточный охват вакцинацией. Второй потенциальный фактор - АГ из-
менчивость этого вируса, несмотря на то, что последний считается моноти-
пическим, появилось большое количество работ, показывающих АГ и гене-
тическую изменчивость современных диких штаммов вируса кори. Причем,
наибольшая степень генетического дрейфа свойственна диким штаммам,
вызвавшим вспышки заболеваемостью корью в США в 1988-1991 гг. В по-
левых изолятах этого вируса белок Fo оказывается сравнительно консерва-
тивным - имеет всего 3 аминокислотных замещения, в то время как «Н» от-
личается от вакцинного шт. Моратен по 19 аминокислотам и содержит но-
вый потенциальный белок гликозилирования в области 416-го аминокис-
лотного остатка, локализованного на С - конце Н-белка. Гемагглютинин со-
временных полевых штаммов вируса кори содержит новый или модифици-
рованный старый эпитоп, соседствующий в ГА вакцинного штамма. Пола-
гают, что изменения именно в «Н» белке являются наиболее вероятной при-
чиной различия в нейтрализующей активности антисывороток в отношении
современных диких и вакцинных штаммов этого вируса кори (Хайдар А.М.
Вопр. вир., 1996, 2 :72).
Ротавирусы повсеместно являются основной причиной острого гастро-
энтерита у телят, а также детей в младенческом возрасте. Поэтому проблема
897
57 Зак. № 171
профилактики ротавирусной инфекции чрезвычайно актуальна, однако до
сих пор нет достаточно эффективной вакцины. Разработка стратегии адъю-
вантов, которые способны усиливать иммуногенность орально вводимых
ротавирусов может помочь в создании эффективной вакцины. Так, на мы-
шах уже изучена возможность микроинкапсуляции антигена для усиления
гуморального иммунного ответа на ротовирус. Используя систему микро-
капсуляции, основанную на ионнной связи водных анионовых полимеров и
водных аминов, было обнаружено, что при микроинкапсуляции происхо-
дит: захват инфекционных ротавирусов; проникновение и персистенция их
в GALE антигена ротавируса на более высоком уровне, чем это выявляется
после оральной инокуляции свободного вируса. Увеличивается так же час-
тота обнаружения вируса. Кроме того усиленный вирусспецифический им-
мунный ответ ассоциируется с усилением образования поликлональных, не-
вирусспецифических АТ в GALE и поверхности слизистой кишечника (Offit
P.A. е.а., J Cell Biochem., 1995,19а :262).
ЛАТЕНТНЫЕ И ПЕРС ИС ТЕНТНЫЕ ИНФЕКЦИИ
Это одна из важнейших проблем современной эпидемиологии и эпизо-
отологии. Латентные и персистентные вирусные инфекции приобретают все
возрастающий интерес. Они могут вызываться многими вирусными пред-
ставителями разных семейств. При персистентной инфекции образуются
инфекционные вирусные частицы, но клетки не повреждаются, поскольку
инфекционный вирус из клеток не выделяется или выделяется периодиче-
ски. Рассматривается три механизма этого явления. 1). Маскировка крити-
ческих эпитопов, иногда с отсутствием ВНА (при парвовирусной АБН). 2).
Интеграция вирусного генома в геном клетки при ретровирусных инфекци-
ях. 3). Своеобразный механизм прионных инфекций.
Персистенцию вирусов можно трактовать как одну из возможностей их
ускользания от воздействия неспецифических и особенно специфических
защитных факторов организма с целью сохранения их как вида. Существу-
ют данные, объясняющие феномен ускользания вирусов от иммунного от-
вета как мимикрию вирусов под необходимые для клетки вещества. Вирусы
(в частности вирусы гриппа) проникают в клетки тканей благодаря рецепто-
рам к аминопротеидам низкой плотности. Показана способность вируса
гриппа сохраняться (персистировать) в макрофагах in vivo на протяжении
этого длительного периода времени после заражения. Сегодня сформирова-
лось иное представление о роли клеток РЭС в патогенезе гриппозной ин-
фекции. По-видимому, в процессе эволюции вирусы выработали защитно-
приспособительный механизм ускользания от иммунного ответа, что позво-
лило им сохраниться как виду. Подвергшись модификации, они утрачивают
способность захватываться соматическими клетками и приобретают новые
898
качества во взаимодействии их с макрофагами, где они могут долгое время
сохраняться без риска быть обнаруженными антителами. Модифицируясь,
они утрачивают свою вирулентность и способны проникать в те клетки, в
которых могут репродуцироваться. Этот феномен лежит в основе разделе-
ния вирусной популяции на вирулентные и авирулентные формы в процессе
их циркуляции в организме хозяина.
Появление в вирусной популяции авирулентных форм, по мнению Пле-
скова и др., является приспособительной реакцией, направленной на сохра-
нение данного вида вируса. Отсутствие такого рода механизма привело бы к
гибели вирусной популяции под воздействием специфических и неспеци-
фических факторов. Модифицированные частицы вируса гриппа, проникнув
в клетки РЭС, способны изменять свою структуру и, что особенно важно,
антигенные свойства. Механизм этого процесса пока не известен, однако
установлено, что вирусы, выделенные в поздние сроки развития экспери-
ментальной гриппозной инфекции у мышей, во многом отличались по сво-
им биологическим свойствам, полипептидному составу и структуре генома
от вирусов, взятых для моделирования персистентной инфекции. Как видно,
способность вируса кори персистирвать в культуре клеток впервые была
продемонстрирована в системе клетки HeLa - шт. Эдмонстон. Геном этого
вируса обнаружен в лимфоцитах периферической крови больных с аутоим-
мунными заболеваниями как красная волчанка и хронический склерози-
рующий панэнцефалит. У больных результаты точечной гибридизации свя-
заны с повышением титра аутоантител (Плесков В.М. и др. Вопр. вир.,
1996, 2 :53).
Вирус может персистировать в широком спектре культур клеток челове-
ческого и животного происхождения. При персистенции in vitro, как прави-
ло, выделяют 2 стадии -становление и поддержание хронической инфекции.
В культурах клеток, хронически инфицированных этим вирусом, выявляют-
ся такие защитные факторы, как дефектные и интерферирующие частицы
(ДИЧ), ts -мутанты, интерферон, селекция более резистентной клеточной
популяции или менее цитоцидного вируса. При персистенции вируса кори
in vitro происходят изменения его биологических свойств, что нередко про-
является увеличением длительности латентного периода, приобретением
мелкобляшечного фенотипа и снижением вирулентности, происходит воз-
никновение множественных мутаций этого вируса, проявляющихся струк-
турными и конформационными изменениями некоторых вирусных белков.
В большинстве хронически инфицированных культур происходит ослабле-
ние экспрессии белков слияния (Fo), белка (М) и ГА. Таким образом, вирус
кори способен вызывать у человека редкое медленно прогрессирующее де-
генеративное заболевание, симптомы которого состоят в нарушении интел-
57*
899
лектуальных и физиологических функций, в основе которого лежит про-
грессирующая церебральная дегенерация.
ПРОБЛЕМА АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Существует 3 гипотезы, объясняющие причину аутоиммунных заболева-
ний. Ключевую роль в этом процессе играют антигены класса II главного
комплекса гистосовместимости (МНС), которые кодируются тремя генами
(DP, DQ и DR) и Т-лимфоцитами. Аутоиммунные болезни ассоциированы с
экспрессией ограниченного набора цепей d и £ Per; показано, что антитела
против цепи £, элиминируя аутоиммунные субпопуляции Т-клеток, могут
быть средством профилактики и терапии множественного склероза. Суще-
ствует четкое различие между белками, что указывает скорее на существо-
вание гена «долголетия», нежели гена «старения». Японская исследователь-
ская группа обнаружила, что срок жизни взрослых дрозофилл определяется
на стадии вылупления. Детерминирующий ген Ym кодирует белок с мол.м.
77 кД. Добавление этого белка в пищу дрозофиллам приводило к удлине-
нию срока их жизни, по крайней мере, на треть. Перспективно использова-
ние синтетических пептидов, экспрессирующих эпитопы вирусных белков.
При разработке вакцин к ним следует предъявлять требования: высокая эф-
фективность, индуцирование пожизненного иммунитета термостабиль-
ность, однократное введение, безопасность, дешевизна, введение предпоч-
тительно не инъекционным путем, причем, вскоре после рождения.
Несмотря на большие достижения в борьбе с вирусными инфекциями,
многие из них еще и сейчас представляют большую опасность. В последнее
время появился ряд новых инфекций. Следует учитывать необыкновенную
способность вирусов к эволюции. Особенно часты мутации у вирусов с сег-
ментированным геномом - миксо- и ротавирусов, а так же у вирусов с дип-
лоидным геномом. В последние годы был обнаружен ряд новых возбудите-
лей: вирус гепатита С, своеобразный вирус Хантаан в США. Увеличилось
число тяжелых форм денге, появились новые варианты вируса гриппа. По-
сле ликвидации оспы возросла опасность для человека оспенных вирусов
животных. Выявлены канцерогенные действия вирусов гепатита В и С и не-
которых папилломавирусов (Tolow Н. Med trop., 1994, 54, 4 :317). И, нако-
нец, опубликовано большое число работ по вирусу СПИД этой сугубо ме-
дицинской проблеме. Сегодня в систематике возбудителей СПИД'а появил-
ся новый член семейства Retroviridae. Специалисты из Корнельского Меди-
цинского колледжа обнаружили новый ретровирус человека, вызывающий
симптомы острой иммуносупрессии в отсутствие инфекции ВИЧ1 и ВИЧ2.
Вирус получил название «внутриполостной ретровирус человека» (Bourn
Rudy, 1992).
900
О ТЕРАТОГЕННОМ ДЕЙСТВИИ ВИРУСОВ
Впервые связь вируса с тератогенным действием на плод человека была
обнаружена N. Gregg после изучения причин врожденных уродств, вызван-
ных краснушной инфекцией. К настоящему времени доказана связь много-
численных случаев нарушения развития плода с инфицированием матери на
разных сроках беременности цитомегаловирусом, вирусами герпеса, гриппа,
чумы свиней, ИБК, парвовирусом, аденовирусом ССЯ и др. Как правило,
вирусы кори, паротита, парвовируса В19, вируса ветряной оспы, энтерови-
русов и ринопневмонии лошадей вызывают детские инфекции, протекаю-
щие в большинстве случаев благоприятно, но при инфицировании беремен-
ных женщин могут возникать серьезные осложнения, приводящие к гибели
плода или появлению у детей врожденной патологии.
Парвовирус человека В19 является возбудителем широко распростра-
ненного детского «краснухоподобного» заболевания - инфекционной эри-
темы, или инфекция ПВ 19 вызывает острые артриты, хроническую анемию
у больных иммунодефицитами, а так же высокий процент случаев водянки
плода или его усыхания.
Ветряная оспа - типичная детская инфекция, характеризующаяся высо-
кой контагиозностью. Частота внутриутробного поражения плода этим ви-
русом достигает 10%. У новорожденных могут отмечаться гипотрофия, хо-
риоретинит, микроцефалия.
Энтеровирусам принадлежит особое место в перинатальной патологии,
что обусловлено чрезвычайно широким их распространением. Среди энте-
ровирусов частой причиной гибели плода или нарушения его развития яв-
ляются вирусы Коксаки и Echo различных типов. Наиболее часто встре-
чающиеся патологии, связанные с этими вирусами, проявляются самопро-
извольными выкидышами, мертворождением, недоношенностью, внутриут-
робной патологией, развитием порока сердца, нарушении развития мочепо-
ловой системы, образованием грыж, случаями энцефаломиокардита и гепа-
тита. Существует 2 формы врожденной энтеровирусной инфекции - острая и
хроническая. Первая связана с заражением плода от неиммунной матери,
перенесшей во время беременности острое заболевание. Вторая форма на-
блюдается при заражении от матери с хронической энтеровирусной инфек-
цией или латентной персистенцией вирусов данной группы в материнском
организме (Коптяева И.Б. Вопр. Вир., 1996, 2 :74).
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ВИРУСОВ ПРИ ИЗУЧЕНИИ
ТРАНСФОРМАЦИИ КЛЕТОК
Показана возможность использования вируса SV 40 в качестве модели
при изучении процесса концерогенеза продукции опухолевого антигена (Т-
АГ), интеграции чужеродной ДНК в клеточный геном. В основе исследова-
901
ний по переносу генетического материала лежит метод трансформации ви-
русом герпеса клеток, дефицитных по тимидинкиназе. Оказалось возмож-
ным перенос гена вирионной тимидинкиназы с помощью клонированного в
бактериальной плазмиде материала. На модели гена этого фермента показа-
на возможность микроинъекционного введения генетического материала в
яйцеклетку мыши с последующим выведением потомства, содержащего ген
тимидинкиназы.
РОЛЬ ПЕРЕЛЕТНЫХ И СИНАНТРОПНЫХ ПТИЦ
В РАСПРОСТРАНЕНИИ ВИРУСОВ
В этом плане продолжаются активные исследования. Так, например, в
Моравии у большинства птиц, пойманных в биотипе камыша на берегу пру-
да, в сыворотках находили антитела к вирусам Синдбис (1,8%), Западного
Нила (4,3%), клеевого энцефалита (3,2%), Тягиня (6,4%), Чалово-Батан
(1,7%) и Бханджа (0,7%). Из крови молодой тростниковой камышовки
(Acrocepholus seipracens) выделен и охарактеризован новый для науки бунь-
явирус Седлец. Многочисленные примеры в этом направлении должны
привлечь пристальное внимание эпидемиологов, эпизоотологов и, в первую
очередь, вирусологов.
ВИРУСЫ КАК БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИНСЕКТИЦИДЫ
Известно, что вирусы играют значительную роль в динамике численно-
сти лесных насекомых, часто являясь ведущим фактором прекращения
вспышки их массового размножения. Именно поэтому вирусы среди других
патогенов начали применяться в качестве биологических инсектицидов, и в
настоящее время на их основе создан ряд препаратов, использующихся в
защите леса. Значительная часть особей массовых популяций непарного
шелкопряда (Ocneria dispar L) и шелкопряда монашенки (Ocneria monacha L)
содержат вирусы как в латентном состоянии, так и в виде вирионов и поли-
эдров.
Недавно выделены два новых вируса из организма клопов. Оба они со-
вместно вызывают сильные симптомы заболевания этих насекомых. Один
из них, обозначенный NW-1, оказался сходным по свойствам с пикорнави-
русами. Диаметр его сферических частиц по данным электронной микро-
скопии составлял 29 нм. Коэффициент седиментации равнялся 153 S, плаву-
чая плотность при равновесном центрифугировании в градиенте плотности
CsCl - 1,34 г/см3. Частицы этого вируса содержали РНК длиной 9400 нук-
леотидов и три белка с мол.м. 32,1, 31,5 и 30,7 кД. Второй вирус (NW-2)
имел константу седиментации 177 S, плавучую плотность - 1,39 г/см3 и ви-
рионы диаметром 39 нм. В состав вирионов входит одна молекула двуните-
вой РНК длиной 6200 п. н. и три структурных белка, с мол.м. 73,8
902
(основной), 16,5 и 13,5 кД (минорный). Обсуждается возможность исполь-
зования смесей этих двух вирусов для борьбы с N. viridula.
ЗНАЧЕНИЕ НОВЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ
ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ
Поскольку диагностика - это «глаза и уши» эпизоотолога, она может
быть как индивидуальной (относительно кошек и собак в условиях горо-
дов), так и крупномасштабной применительно к большим партиям живот-
ных. Методы крупномасштабной диагностики врач-эпизоотолог использует
для прогноза и рациональной специфической профилактики с учетом оцен-
ки поствакцинального иммунитета («службы иммунитета»). Прогресс в ла-
бораторной диагностике отдельных вирусных болезней идет параллельно с
усовершенствованием средств и методов специфической профилактики, что
уже является уделом новой дисциплины биотехнологии вакцинных и диаг-
ностических препаратов, и преподается в наших ветеринарных вузах. Каж-
дому из уровней диагностических исследований соответствуют и методы,
их чувствительность, специфичность, сложность, стоимость, четкость и ин-
формативность результатов, а также длительность анализа пробы.
Для диагностики вирусных болезней и индикации их возбудителей в ок-
ружающей среде интенсивно разрабатываются методы гибридизации нук-
леиновых кислот. Важным преимуществом этих методов является возмож-
ность выявления их в пробах, в которых вирус уже утратил инфекционность
и АГ свойства. Это обусловлено высокой устойчивостью нуклеиновых ки-
слот, особенно двуцепочечных, к жестким физико-химическим воздействи-
ям. Метод ПЦР незаменим также при индикации вирусов, для которых еще
не найдены чувствительные культуры клеток и не получены специфические
АТ. ПЦР включает в себя три циклически повторяющихся процесса: 1) де-
натурацию двуцепочечной ДНК путем нагревания реакционной смеси до 95-
100°С; 2) отжиг праймеров (гибридизация праймеров с комплементарными
участками одноцепочечной ДНК) и 3) удлинение праймера за счет синтеза
новой цепи. Весь цикл длится всего 3-5 мин и может повторяться до 20-40
раз. Теоретически за каждый цикл происходит удвоение количества молекул
ДНК в пробе. В таком случае 30 циклов должны завершаться увеличением
количества ДНК в миллиард раз. Увеличение количества ДНК в миллион
раз вполне достаточно для выявления ее методом гибридизации без предва-
рительного накопления вируса в культуре клеток.
Первые работы по амплификации нуклеиновых кислот в ПЦР проводили
с использованием фрагмента Кленова ДНК-полимеразы кишечной палочки.
В дальнейшем полимераза кишечной палочки была заменена термостабилъ-
ной ДНК-полимеразой бактерии термус акватикус, устойчивой к нагрева-
903
нию до 95°С, что привело также к повышению специфичности ПЦР и уве-
личению выхода продукта реакции.
В 1985г. Кэри Б. Мюллис предложила метод амплификации (amplification
- увеличение, усиление) заранее выбранного участва ДНК в пробирке, по
существу являющийся методом клонирования in vitro. Метод получил на-
звание полимеразной цепной реакции (ПЦР, от англ. Polymerase Chain Reac-
tion, PCR).
ПТ TP основана на амплификации ДНК с помощью термостабильной
(выделенной из бактерий термофилов, живущих в геотермических источни-
ках) ДНК-полимеразы, осуществляющий синтез взаимно комплементарных
цепей ДНК, начиная с двух олигонуклеотидных праймеров (затравок).
Праймеры комплементарны противоположным цепям ДНК в участках, ог-
раничивающих выбранную область ДНК, и ориентированы 3-концами на-
встречу друг другу и в сторону той последовательности которую необходи-
мо амплифицировать. Очевидно, что для амплификации интересующего
района ДНК необходимо иметь хотя бы минимальную информацию о его
концевых участках (например, об N-C-концевых последовательностей бел-
ка, если речь идет об амплификации областей его гена) с тем чтобы синте-
зировать соответствующие праймеры. При синтезе ДНК праймеры физиче-
ски встраиваются в цепь новосинтезирующих молекул ДНК. Каждая из
вновь синтезируемых молекул ДНК с помощью одного из праймеров мо-
жет служить матрицей для синтеза комплементарной ДНК с помощью дру-
гого праймера. Для этого надо лишь денатурировать образовавшиеся в ре-
зультате первой стадии реакции двуцепочечные молекулы ДНК, дать воз-
можность праймерам комплементарно присоединиться к ДНК и осущест-
вить элонгацию. Эти три операции составляют цикл ПЦР и приводят к уд-
воению количества ДНК в образце. Любая из вновь синтезированных цепей
ДНК служит матрицей для синтеза новых молекул ДНК, выбранному для
амплификации (такие молекулы образуются уже после второго цикла ПЦР).
Поэтому ПЦР будет приводить к экспоненциальному росту количества
именно таких, ограниченных с двух сторон праймерами молекул ДНК. Сле-
довательно, теоретически за 20 циклов ПЦР можно амплификацию задан-
ного участка в 2О20 раз.
Практическая сторона ПЦР выглядит достаточно просто и обстоятельно
изложена в книге Т.Маниатис и др., «Мир», 1984.
Эффективность метода ПЦР такова, что по прошествие 25-30 циклов для
того, чтобы увидеть окрашенный бромистым этидием ДНК-продукт после
электрофореза в агарозе, достаточно взять десятую часть реакционной сме-
си, даже в том случае, если исходное количество нужной ДНК в пробе было
исчезающе малым. Интересующий фрагмент ДНК далее может быть ис-
пользован непосредственно с помощью стандартных методов.
904
Таким образом, ПЦР состоит и трех основных процедур: подготовки ис-
следуемой пробы материала, которая большинстве случаев сводится к изо-
ляции ДНК или РНК, собственно ПЦР и детекции продукта ПЦР
(амплифицированной ДНК).
В настоящее время ПЦР в сочетании с методом гибридизации НК ус-
пешно исползуется для выявления вирусов СПИД, гепатита В, папиллома-
вирусов и открывает качественно новые возможности для повышения чув-
ствительности и скорости обнаружения вирусов. Эта реакция может стать
особенно полезной при исследовании проб окружающей среды, так как та-
кие пробы очень трудно исследовать с использованием культуры клеток из-
за сильной загрязненности их самыми разнообразными микроорганизмами.
ПЦР начинает широко применяться в диагностической практике как экс-
пресс-метод диагностики инфекционных болезней, вызываемых ДНК и
РНК-содержащими вирионами, автор ПЦР - Кэри Мюллос (США) - удо-
стоена за разработку и внедрение указанного метода Нобелевской премией.
В настоящее время уже четко определены недостатки и трудности, кото-
рые встречаются при использовании общепринятой процедуры ПЦР.
В последние годы появилось много модификаций ПЦР, повышающих ее
надежность. Так, качество амплификации проверяется рестрикционным
анализом. Для проведения количественной ПЦР предложены различные
усовершенствования. Разработаны методы, позволяющие производить
оценку результатов без процедуры электрофореза, что не только сокращает
время процедуры, но и позволяет механизировать или автоматизировать
проведение анализов, что важно при массовых обследованиях (Бело-
хвостиков А.С. Мол. ген., микробиол. и вир., 1995, 2, :21). Наиболее про-
стой по исполнению можно считать методику с использованием нового
флюоресцентного красителя для выявления амплифицировавшейся ДНК-
интерколятора УОУО-1 непосредственно в полипропиленовых планшетах
на 96 лунок для иммунологических целей.
ДРУГИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
В последнее время были разработаны новые высокочувствительные и
быстрые методы диагностики вирусных инфекций: точечный иммунофер-
ментный анализ (дот-ИФА) и твердофазный лантанидный иммунофлюорес-
центный анализ (ТФ ЛИФА). Метод дот-ИФА базируется на сорбции АГ на
мембранном фильтре и его выявлении вирусспецифическими АТ, конъюги-
рованными пероксидазой хрена. Данный метод был успешно применен для
детекции HBsAg вируса венесуэльского энцефаломиелита лошадей и АТ к
нему. Метод ТФ ЛИФА основан на применении меченых ионами лантани-
дов (европия, тербия, самария и празеодима) иммуноглобулинов с исполь-
зованием специальных приемов регистрации флюоресценции этих ионов. К
905
настоящему времени на основе ТФ ЛИФА за рубежом созданы диагности-
ческие тест-системы для выявления HBsAg, рота- и аденовирусов, вирусов
гриппа А и В и других вирусов, вызывающих ОРЗ, а также вирусспецифиче-
ских АТ к вирусам краснухи и иммунодефицита человека, а также инфекци-
ям вирусов гриппа, клещевого энцефалита и венесуэльского энцефаломие-
литов лошадей, осповакцины и ряда других вирусных инфекций. Апробация
отечественных тест-систем для дот-ИФА и ТФ ЛИФА показали, что эти
тест-системы позволяют быстро и надежно выявлять вирусы (через 1,5-2 ч)
в жидких пробах (Градабаев В.Н. и др. Вопр. Вир.,1996, 6 :277).
ГИБ РИДОМ НАЯ ТЕХНОЛОГИЯ -
МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА
Обобщены данные литературы и собственных исследований авторов по
получению и применению монАТ в ветеринарной вирусологии, а также
практической и экспериментальной ветеринарной медицине. Показаны пре-
имущества диагностических препаратов, созданных на основе монАТ.
Прогресс в области инфекционной патологии в настоящее время в зна-
чительной мере связан с разработкой и внедрением в практику гибридомной
технологии. Гибридные клетки, продуцирующие АТ к известным АГ, были
описаны сравнительно недавно. Так, в 1969 г. Sinkovics сообщил о спонтан-
ном образовании гибридных клеток между лимфоцитами и плазматически-
ми клетками лейкозных мышей. При этом отмечено, что гибридные клетки
неограниченно делились и продуцировали АТ к АГ вируса лейкоза. В рабо-
тах Mohit показано, что в гибридных клетках миеломы и лимфомы мышей
продуцирууются иммуноглобулины. Однако гибридомы как продуценты
монАТ заданной специфичности были впервые описаны Kohler с соавт.
Только в 1975 г. Авторы применили известный метод гибридизации сома-
тических клеток к иммуноцитам: они осуществили слияние. Предложенная
Kohler с соавт. гибридлмная технология позволяет получать биохимически
гомогенные, специфичные (направленные только одной антигенной детер-
минанты), стабильные по аффинности иммунные реагенты. Подавляющее
большинство молекул монАТ, продуцируемых одним гибридомным кло-
ном, идентичны друг другу. Использование монАТ при изучении вирусных
и бактериальных патогенов открыло новые возможности в исследовании
структуры, функции и синтеза АГ. Поэтому во многих странах мира, в том
числе и нашей, ведутся работы по получению гибридом к АГ самых различ-
ных микроорганизмов. В настоящее время монАТ широко применяют в ме-
дицине и ветеринарии при изучении АГ структуры вирусов, иммуногенеза и
патогенеза при вирусных инфекциях, а также усовершенствовании диагно-
стики заболеваний и технологии изготовления вакцины.
906
Во всероссийском НИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии
получено более 500 клонов гибридом, секретирующих монАТ к возбудите-
лям таких заболеваний, как африканская чума свиней, чума КРС, орто- и па-
рамиксовирусные инфекции птиц, болезни Ибараки, эпизоотическая гемор-
рагическая болезнь оленей, катаральная лихорадка овец, вирусная геморра-
гическая болезнь кроликов, лейкоз КРС, а также к иммуноглобулинам раз-
личных видов животных. Имеющиеся штаммы гибридомных клеток и про-
дуцируемые ими монАТ используются при изучении свойств возбудителей,
эпитопном картировании вирусных белков и диагностике заболеваний.
Однако использование монАТ к нуклеопротеину - консервативному бел-
ку вируса гриппа А птиц (ВГП) не позволяет выявить АГ различия между
шт. 13 различных подтипов ВГП, а также первого и второго серотипов па-
рамиксовирусов птиц (ПМВ-1, ПМВ-2). Поэтому монАТ к нуклеопротеину
этих вирусов было предложено использовать для диагностики орто- и пара-
миксовирусных инфекций птиц. С этой целью был разработан двойной
«сэндвич» - вариант твердофазного ИФА (ДАС-ИФА), позволяющий выяв-
лять АГ ПМВ-1 и ПМВ-2.
С целью усовершенствования диагностики гриппа птиц предложена
РИГА, для постановки которой используют эритроциты КРС, сенсибилизи-
рованные монАТ к нуклеопротеину ВГП. Реакция технически проста и на ее
проведение требуется в 2-3 раза меньше времени по сравнению с ИФА. В то
же время ДАС-ИФА и РИГА на основе монАТ к ВГП в отличие от других
серологических методов позволяют обнаруживать АГ непосредственно в
пробах органов животных без дальнейшей его идентификации в РТГА с на-
бором антисывороток к гемагглютининам ВГП, ПМВ-1 и ПМВ-2, а при от-
сутствии этого этапа выделения вирусов на КЭ сокращает сроки диагности-
ческих исследований.
Использование монАТ, обладающих строгой специфичностью (компле-
ментарностью к определенному участку белка), дает возможность изучать
тонкие структурные изменения антигенных детерминант в процессе эволю-
ции и проводить эпитопное картирование вирусных белков. Так, с помо-
щью монАТ получена эпитопная характеристика полипептидов вируса аф-
риканской чумы свиней с молекулярной массой 72, 22, 18 и 14 кД. Методом
конкурентного ИФА с использованием монАТ к нуклеопротеину ВГП уста-
новлено, что в молекуле нуклепротеина ВГП имеется, по крайней мере, три
неперекрывающихся антигенных сайта. На основе использования этих мо-
нАТ продемонстрирована вариабельность антигенных детерминант нуклео-
протеина вируса гриппа. Например, выявлена общая антигенная детерми-
нанта практически у всех исследованных штаммов вируса гриппа птиц, сви-
ней, лошадей и человека, а также детерминанта, характерная лишь для ви-
русов гриппа птиц и лошадей. Данные исследований, проведенных с монАТ
907
к ПМВ-1 и ПМВ-2, свидетельствуют о консервативности детерминант нук-
леопротеина штаммов этих вирусов и вероятном отсутствии изменений в
антигенной структуре нуклеопротеина других серотипов ПМВ.
В связи со способностью монАТ идентифицировать тонкие АГ различия
стало возможным дифференцировать штаммы внутри подтипа и следить за
АГ дрейфом вирусов. Учитывая узконаправленный характер реагирования
монАТ с поверхностными белками ВГП можно предположить, что сероти-
поспецифичный участок в молекуле ГА представлен не одним, а нескольки-
ми эпитопами. Присутствие в молекуле нейраминидазы консервативных
эпитопов создает возможность применения монАТ при разработке быстрых
и надежных методов типирования шт. ВГП по нейраминидазе.
Использование монАТ в серологических реакциях позволяет дифферен-
цировать близкородственные вирусы и служит основой для создания высо-
кочувствительных и специфичных методов диагностики ряда вирусных бо-
лезней. На основе наиболее активных монАТ разработаны диагностические
тесты, позволяющие дифференцировать эпизоотическую геморрагическую
болезнь оленей и болезнь Ибараки от катаральной лихорадки овец. Обнару-
жено, что монАТ к группоспецифической антигенной детерминанте вируса
катаральной лихорадке овец способны идентифицировать агент независимо
от серотиповой принадлежности. Кроме того, высокая чувствительность
метода ИФА на основе использования монАТ сделала возможным иденти-
фикацию этого вируса непосредственно в крови больных животных, что со-
кращает сроки диагностики. Вируснейтрализующие монАТ гредставляют
интерес не только как специфические лечебные препараты, но и как мощ-
ный инструмент изучения механизмов вирусной нейтрализации. С помо-
щью различных монАТ могут быть идентифицированы эпитопы, участвую-
щие в вирусной нейтрализации in vitro u in vivo. Благодаря применению мо-
нАТ определена топография нейтрализуемых и не нейтрализуемых эпито-
пов вирионов.
Таким образом, каждому из уровней диагностических исследований со-
ответствуют диагностические методы, их чувствительность, специфичность,
стоимость, четкость и информативность, а также длительность анализа гро-
бы (Мищенко В.А., ВНИИЗЖ, 1995, 1997). Усовершенствован метод оп-
ределения АГ и АТ - ускоренный иммуноферментный метод (УИФМ) на
модели антигенов вирусов 9 семейств и определении ВНА в сыворотке кро-
ви КРС, верблюдов, лосей, яков, овец, свиней и морских свинок.
Настало время дать анализ эволюции методов лабораторной диагности-
ки ряда вирусных инфекций животных, особенно вирусно-бактериальных
инфекций. Эта область - одна из важнейших для эпидемиологов и эпизо-
отологов. В медицинской практике спектр обследования детей с тяжелой
респираторной и нейропатологией выявил высокую частоту сочетанных ви-
908
русно-вирусных и вирусно-бактериальных инфекций. При всех смешанных
инфекциях первично доминирующим возбудителем оказался вирус гриппа,
который не только утяжелял течение вторичной инфекции - ресшфаторной,
энтеровирусной, дифтерийной или менингокковой, но и приводил к актива-
ции ряда оппортунистических инфекций, таких как герпес, цитомегалия,
токсоплазмоз, краснуха, микоплазма и хламидиоз. Прослежена закономер-
ность увеличения частоты вирусно-вирусных ассоциаций при нейроинфек-
циях в противоположность тяжелой ресшфаторной патологии, где вторич-
ные наслоения связаны с возбудителями невирусной природы (Аксенов
О.А. и др. Тр. С-П инет, пед, 1996, :30).
Наконец, несколько слов о полезных функциях человеческих вирусов.
Минуло 13 лет с тех пор, как были установлены неожиданные аспекты ис-
пользования их в качестве биотехнологических инструментов. Использова-
ние выгод, предоставляемых в результате применения пяти ниже описанных
вирусов открыло возможности изучения этиологии, патогенеза и поиска
средств лечения заболеваний, в том числе и невирусной этиологии.
Во-первых, установлена возможность использования вируса SV 40 в ка-
честве модели для изучения трансформации клеток и процессов концероге-
неза, продукции опухолевого антигена (Т-АГ), интеграции чужеродной
ДНК в клеточный геном.
Во-вторых, описана роль аденовирусов в обнаружении и исследовании
РНК, что в дальнейшем привело к углубленному пониманию закономерно-
стей экспрессии фрагментарных генов клеток и вирусов и, в частности, по-
зволило понять механизмы возникновения талассемии и некоторых иммун-
ных заболеваний.
В-третьих, результаты изучения простого герпеса открыли возможность
разработки методов переноса генетического материала метод трансформа-
ции вирусом герпеса клеток дефицитных по тимидинкиназе. Механизм
«биохимической трансформации» в ТК-клетках открыл возможности пере-
носа других эукариотических генов, в частности, макроинъекциоиного вве-
дения генетического материала в яйцеклетку мыши с последующим выведе-
нием потомства, содержащего вирусный ген тимидинкиназы.
В-четвертых, показана возможность использования процедур слияния
клеток и получения гибридных клеточных популяций, что привело к созда-
нию продуцентов монАТ.
Наконец, суммируя материал по вирусу Эпштейна-Барр как инструмента
при получении перевиваемых лимфиодных клеток человека больных с гене-
тическими нарушениями открывает пути исследования биохимии изменен-
ных клеток, возможности экспериментального манипулирования с генети-
ческими материалами На этих примерах видно переплетение фундамен-
тальных и прикладных аспектов в современной вирусологии.
909
Таким образом, оценка специфичности, чувствительности, технологич-
ности, простоты применения диагностических методов с использованием
МКА и поликлональных антисывороток свидетельствует о существенных
преимуществах препаратов, созданных на основе монАТ, которые прочно
входят в практику современной ветеринарии. Предполагается, что на рынке
диагностических препаратов доля монАТ будет составлять 60%. Простота и
высокая производительность гибридомной технологии позволили ей стать
одной из ведущих отраслей биотехнологии. В настоящее время в мире су-
ществует более 500 фирм и объединений, производящих гибридомные АТ.
При этом производится несколько сотен наборов монАТ диагностического
назначения, которые, превосходя по своим свойствам и возможностям био-
препараты, существовавшие ранее, открывают новые направления практи-
ческого и теоретического использования иммуноглобулинов.
Большие надежды возлагаются на монАТ как тонкого высокоспецифич-
ного инструмента иммунологического распознавания. Они применяются
для создания диагностических тест-систем. До сих пор монАТ получали,
используя гибридомы из лимфоцитов мышей. В настоящее время успешно
решается задача получения гибридом-продуцентов монАТ из лимфоцитов
человека.
О новых источниках получения специфических иммуноглобулинов
Одним из удобных и доступных источников получения специфических
иммуноглобулинов (IgY) являются желтки яиц иммунизированных кур, со-
держащие гораздо более высокие концентрации АТ по сравнению с сыво-
роткой крови животных. Вместе с тем, изучение их биологических свойств,
в частности, противовирусной активности, было проведено в основном в
экспериментах in vitro. Показано, что иммуноглобулины, выделенные из
желтков яиц кур, иммунизированных вирусом осповакцины, обладали ви-
руснейтрализующей активностью при тестировании на ХАО 11-12 дн КЭ.
УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСОВ
Известно, что необходимым компонентом для культивирования клеток
является сыворотка животных, однако сыворотка обладает рядом сущест-
венных недостатков: нестандартностью, патогенностью отдельных серий,
наличием ингибиторов и, кроме того, возможной контаминацией различ-
ными агентами (вирусами, микоплазмами). За рубежом и в последнее время
в нашей стране ведутся активные исследования по конструированию синте-
тических бессывороточных сред, а также по использованию комплекса рос-
товых факторов, выделенных из сывороток животных с целью замены ее в
качестве компонента питательной среды. В настоящее время, выделенные
из сывороток разных животных ростстимулирующие белки могут быть ис-
910
пользованы в качестве компонента питательной среды взамен нативных сы-
вороток для культивирования широкого спектра (первичных, перевиваемых
и суспензионных) клеток млекопитающих. При этом необходимо учитывать
фактор видоспецифической потребности клеточных культур в случае ис-
пользования ростстимулирующих белков. В то время как некоторые кле-
точные линии (Vero, МДСК, МДВК, СПЭВ) способны активно пролифери-
ровать в ростовой среде с ростстимулирующими белками без добавления
сыворотки, однако другие клеточные культуры (Hep-2, HeLa, ПО-2, Lg29)
нуждаются в добавлении в среду 1-2%, а иногда т 3% нативной сыворотки.
Актуальность подобных исследований не утрачена и на сегодняшний день.
Помимо того в настоящее время культуры клеток насекомых находят все
более широкое применение в молекулярно-биологических и вирусологиче-
ских исследованиях. Наработка бакуловирусов как компонентов энтемопа-
тогенных препаратов или векторов для экспрессии генов вирусов млекопи-
тающих в культивируемых in vitro клетках насекомых представляется весьма
перспективным направлением.
Успехи клеточной биотехнологии
В настоящее время в мировой практике используется большое количест-
во постоянных линий и создаются новые. Только из тканей клещей получе-
но более 20 постоянных линий клеток (представляющих интерес для куль-
тивирования орбивирусов.
В американской коллекции типовых культур хранится свыше 400 кле-
точных линий более чем 40 видов животных.
Все больше в клеточной биотехнологии находят суспензионные культу-
ры лимфобластоидных и миелоидных клеток. Эти клетки просты в обраще-
нии, сохраняют диплоидный и псевдо диплоидный карнотит, растут с боль-
шой скоростью в крупномасштабных культурах.
Клеточные линии, происходящие из миелом, сохраняют способность
синтезировать иммуноглобулины - служат основой получения монокло-
нальных АТ.
Проблема контаминации и деконтаминации
Мы не будем останавливаться на контаминации клеточных культур бак-
териями, дрожжами, грибами и особенно различными вирусами. Например,
культура клеток почек обезьян может быть контаминирована более 50-ю
вирусами. В стремлении избежать или уменьшить последствия контамина-
ции исследователи используют культуру клеток гетерологичных животных,
эмбрионы безлейкозных линий кур.
Вирусная контаминация выявлена у перевиваемых линий клеток. Эндо-
генные вирусы-контаминанты попадают в биологические препараты при
использовании для инкубации неконтролируемого сборного яйца, а сыво-
ротки крови животных также могут быть источником вирусной контамина-
911
ции. В последнее время в нашей стране и за рубежом ведутся активные ис-
следования по конструированию синтетических бессывороточных сред а
также использованию комплекса ростовых факторов, выделенных из сыво-
роток и способных заменить их в качестве компонента питательной среды.
В настоящее время выделенные из сывороток разных животных ростстиму-
лирующие белки, могут быть использованы в качестве компонента пита-
тельной среды взамен нативных сывороток для культивирования широкого
спектра (первичных, перевиваемых и суспензионных) клеток млекопитаю-
щих. При этом необходимо учитывать фактор видоспецифической потреб-
ности клеточных культур в случае использования ростстимулирующих бел-
ков. Если некоторые клеточные линии (Vero, MDCK, MDBK, СПЭВ) спо-
собны активно размножаются в ростовой среде с ростстимулирующими
белками без добавления сыворотки, то Hep-2, HeZa, ПО-2, Lg29 и др. все же
нуждаются в добавлении в среду 1-2%, а иногда и 3% нативных сывороток.
ПРОГРЕСС В СПЕЦИФИЧЕСКОЙ
ПРОФИЛАКТИКЕ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Прогресс в создании иммунобиологических препаратов
В настоящее время насчитываются многие сотни иммунобиологических
препаратов, находящихся в производстве и используемых практической ве-
теринарной службой во всех странах мира. За последнее столетие вакцины
претерпели большие изменения, пройдя путь от аттенуированных и убитых
препаратов времен Пастера до современных генно-инженерных и синтети-
ческих вакцин, препаратов. В группе живых вакцин, помимо ранее извест-
ных из аттенуированных штаммов (против чумы КРС, оспы птиц, БА, чумы
плотоядных, ИРТ, ВД-БС, бешенства и др.) появились векторные вакцины,
полученные генно-инженерным методом.
Корпускулярные вакцины наиболее «древние» и традиционные. Для их
получения используют инактивированные физическим или химическим
способом цельные вирусные частицы, а также извлеченные из них АГ. Не-
смотря на наличие в их составе балластных веществ, они применяются в
практике иммунизации против бешенства, БА, вирусной диареи и др., там,
где еще не получены эффективные молекулярные или живые вакцины. Мо-
лекулярные вакцины содержат АГ в молекулярном виде. Такие вакцины по-
лучают тремя способами: 1) путем выращивания вируса в культуре клеток;
2) химическим синтезом антигенов (специфических пептидов вирусов), ана-
логичных по своей структуре антигенам вирусов (АГ вируса иммунодефи-
цита); 3) биосинтезом молекул АГ - генно-инженерным способом. Молеку-
лярные вакцины из протективных АГ вирусов уже приносят практические
результаты. Так, более 10 лет применяются так называемая «дрожжевая»
912
вакцина против гепатита В, представляющая собой ИВ5Ад. Получены АГ
ВИЧ, вирусов гриппа, кори, полиомиелита, бешенства, ящура и др. вирусов.
На основе молекулярных АГ возможно конструирование вакцин с повы-
шенной иммуногенностью, лишенных балластных веществ культуральной
клетки. В качестве реципиентов генов при создании рекомбинантных
штаммов, используют чаще всего Esheicia coli, дрожжевые клетки, а также
вирусы осповакцины и вирусы насекомых. Чрезвычайно интересна возмож-
ность конструирования полигенов, кодирующих несколько различных по
специфичности АГ, и создание на их основе рекомбинантных штаммов ви-
русов, обусловливающих иммунитет. Полусинтетическая вакцина состоит
из специфического АГ в молекулярной форме носителя (сорбента - синте-
тический полимер) и адъюванта. Часто носитель выполняет в вакцине и
роль адъюванта. Все больше привлекает внимание липосомальные противо-
вирусные вакцины. В последние годы за рубежом появился вариант вакцин
под общим названием ИСКОМ, или иммуностимулирующий комплекс, в
котором цельные вирионы адсорбируют на мицелии растительного проис-
хождения.
За прошедшее десятилетие произошел большой прогресс в специфиче-
ской профилактике вирусных инфекций. В настоящее время современная
вакцинология базируется на физико-химических и генно-инженерных экс-
периментах. Основное внимание уделяется созданию поливалентных вак-
цин, требующих минимальных прививок в возможно ранние сроки после
рождения и преимущественно оральным методом, а ДНК-рекомбинантная
технология включает создание иммуностимулирующих комплексов и мик-
роинкапсуляцию АГ, создают реальные предпосылки выполнения этой за-
дачи. В целях усиления иммуногенности и сокращения числа прививок все
чаще стали применяться синтетические полимеры, деградирующие в орга-
низме до нормальных компонентов тела. Конструируя подобные типы вак-
цин можно добиться эффекта перекрестной вакцинации разовой прививкой,
поскольку АГ будет высвобождаться из частиц полимера с определенными
заданными интервалами.
Применение рекомбинантных вакцин
Помимо традиционных живых вакцин против инфекций, передающихся
воздушно-капельным путем, перспективна работа по вакцинации рекомби-
нантными вакцинами на основе вируса осповакцины, поскольку последний
обладает тропизмом к клеткам слизистой дыхательного тракта. На модели
вирусов осповакцины и вируса оспы кроликов разработан и создан вектор
тестирования вирусных вакцин Получены жизнеспособные делеционные
мутанты этих вирусов, которые не реплицируются во многих органах и тка-
нях, включая мозг, но размножался во многих линиях клеток, чувствитель-
ных к исходному вирусу, в наружном эпидермисе кожи. Сконструированы
913
58 Зак. № 171
рекомбинантные плазмиды, способные включаться в ДНК с делецией. Пер-
спективно использование синтетических пептидов, экспрессирующих эпи-
топы вирусных белков. В настоящее время генно-инженерным путем удает-
ся получать мультипротеиновые вирусные частицы, имитирующие вирус-
ные. Так, клетки насекомых, коинфицированных двумя рекомбинантными
бакуловирусами, из которых один содержал гены белков наружного капсида
VP2 и VP5 вируса синего языка, другой экспрессировал два основных белка
кора (VP3 и VP7) того же вируса синтезировали неинфекционные вирусо-
подобные частицы (напоминающие таковые у вируса синего языка, но не
содержали генома и трех минорных полипептидов внутреннего капсида
этого вируса, а имели наружную оболочку из VP2 и VP5 и US вируса синего
языка, прикрепленную к экосаэдрическому каркасу, и сообщали привитым
животным специфический иммунитет. Помимо того предложен способ по-
лучения различных суперкапсидных частиц (таких как у RS-вируса), кото-
рые не отличались по иммуногенности от нативных вирусных оболочек.
НОВЫЕ ТИПЫ ПРОТИВОВИРУСНЫХ ВАКЦИН
За последнее десятилетие в отечественной и иностранной литературе
опубликовано много увлекательных интригующих новинок с точки зрения
перспективы биотехнологии специфических средств защиты людей и жи-
вотных от вирусных болезней. Уже сегодня вакцинология базируется на фи-
зико-химических и генно-инженерных экспериментах. Основное внимание
уделяется созданию поликлональных вакцин, требующих минимальных
прививок в возможно ранние сроки после рождения и преимущественно
оральным методом. ДНК-рекомбинантная технология, создание иммуно-
стимулирующих комплексов и микроинкапсуляция АГ создают реальные
предпосылки решения упомянутых задач. Так, для усиления иммуногенно-
сти и сокращения числа прививок стали применяться синтетические поли-
меры, деградирующие в организме до нормальных компонентов тела. Кон-
струируя подобные типы вакцин, удается получать эффект перекрестной
вакцинации разовой прививкой, поскольку АГ будет высвобождаться из
частиц полимера с определенными заданными интервалами. Генноинже-
нерным путем удается получать мультипротеиновые вирусоподобные час-
тицы, имитирующие вирусные. Так, например, клетки насекомых, коинфи-
цированных двумя рекомбинантными бакуловирусами, один из которых со-
держал гены белков наружного капсида VP2 и VP5 вируса синего языка,
другой экспрессировал два основных белка кора (VP3 и VP7) того же виру-
са. Коинфицированные клетки синтезировали не инфекционные вирусопо-
добные частицы (напоминающие таковые у вируса синего языка, но не со-
держали генома и трех минорных полипептидов внутреннего капсида этого
вируса, а имели лишь наружную оболочку, состоящую из VP2, VP5 и US
914
вируса синего языка, прикрепленную к икосаэдрическому каркасу, образо-
ванному двумя основными белками кора: VP3 из вируса синего языка (типа
17-го) и VP7 из US того же вируса 10-го типа.
Или, например, предложен способ получения различных суперкапсид-
ных частиц (таких как у RS-вируса) и получение таким образом вирусомы
неоличающихся по иммуногенности от нативных вирусных оболочек.
ДНК-вакцины и перспективы их использования в ветеринарии
Вирусные белки, синтезированные в микроорганизмах, не стали вакци-
нами субъединичного типа. Они оказались недостаточно иммуногенными.
Так, например, гемагглютинин вируса гриппа в составе вириона находится в
виде тримера, который образуется из мономерных полипептидов в клетках
животных. Иммуногенность гемагглютинина в составе цельных вирионов в
100 раз выше иммуногенности свободного гемагглютинина и в 100000 раз
выше таковой мономерного полипептида, синтезированного в бактериях.
Вероятно конформация свободного и вирионного гемагглютинина и моно-
мерного полипептида сильно различается. Мономерный полипептид VP1
вируса ящура в 1000000 раз менее иммуногенен, чем эквивалентное количе-
ство пептида в составе вириона. Таким образом, вирусные вакцины, создан-
ные на основе белков, синтезированных в микроорганизмах, неконкурент-
носпособны по сравнению с цельновирионными вакцинами.
В последние 5 лет создано новое направление в разработке генноинже-
нерных вакцин, основанное на введении плазмидной ДНК (вектора) с
встроенным геном протективного белка непосредственно в организм жи-
вотного. Иммунизацию плазмидной ДНК с чужеродным геном называют
ДНК-вакцинацией (генетической иммунизацией, вакцинацией нуклеиновы-
ми кислотами, вакцинацией «голой» ДНК).
Плазмидная ДНК представляет собой кольцевую ковалентно-замкнутую
молекулу длиной 4-6 тысяч пар нуклеотидов. В ней имеется участок, ответ-
ственный за начало транскрипции (промотор), ген протективного белка,
ген, обеспечивающий устойчивость клеток к антибиотику (ампициллину) и
участок начала репликации плазмидной ДНК. В качестве промоторов ис-
пользуют регуляторные участки генома цитомегаловируса человека, обезья-
него вируса 40 и вируса саркомы Рауса. Репликация плазмидной ДНК про-
исходит только в бактериальных клетках, тогда как транскрипция гена про-
тективного белка осуществляется только в клетках млекопитающих. Плаз-
мидную ДНК реплицируют в клетках кишечной палочки в присутствии ам-
пициллина, очищают и вводят внутримьппечно животным в дозе 1О10 -
1012молекул. Плазмидная ДНК поглощается клетками животных в неболь-
шом количестве (0,01-1,0%), а большая часть ее быстро разрушается. Про-
никшая в клетку ДНК транспортируется в ядро и транскрибируется клеточ-
ной ДНК-зависимой РНК-полимеразой с образованием информационной
915
58*
РНК, которая в цитоплазме обеспечивает синтез протективного белка.
Плазмидная ДНК длительное время (до 3-6 мес) функционирует в клетках.
В организме животного плазмидная ДНК не размножается, не встраивается
в хромосомы и на нее не образуются антитела. Синтезированный в клетках
протективный белок расщепляется на цитоплазматических протеосомах на
короткие пептиды (8-10 аминокислот). Последние с молекулами главного
комплекса гистосовместимости класса 1 (ГКГС1) и транспортируются к
клеточной поверхности. На клеточной поверхности комплексы анти-
ген+молекулы ГКГС 1 распознаются СД 8+-цитоксическими Т-лимфо-
цитами. Антигенспецифические ЦТЛ активируются, размножаются и обес-
печивают гибель клеток, экспрессирующих на своей поверхности фрагмен-
ты данного протективного белка.
Механизм воздействия ЦТЛ на клетку - мишень состоит в следующем.
Лимфоцит прикрепляется к клетке и из него путем экзоцитоза выделяется
специальный белок перфорин, который образует поры в мембране клетки-
мишени. После выделения перфорина лимфоцит отсоединяется от клетки и
способен к взаимодействию с другой клеткой-мишенью. Действие СД8+-
ЦТЛ стимулируется СД4+-Т-хелперами 1-го типа посредством продукции
ими цитокинов -медиаторов межклеточных взаимодействий. Цитокины Т-
хелперов 1-го типа способствуют в основном развитию клеточного иммун-
ного ответа, а цитокины Т-хелперов 2-го типа стимулируют гуморальный
иммунный ответ.
Синтезированный протективный белок может транспортироваться из
клетки в межклеточное пространство в свободном нерасщепленном состоя-
нии. Он связывается с антиген презентирующими клетками (макрофагами),
проникает в них путем эндоцитоза и расщепляется в эндосомах на короткие
фрагменты (10-20 аминокислот). Фрагменты белка объединяются с молеку-
лами главного комплекса гистосовместимости класса И (ГКГС 11) и
встраиваются в поверхностную мембрану клетки. На поверхности клетки
комплексы антиген + молекулы ГКГС 11 распознаются СД4+- Т-хелперов
типа 2 превращаются в антителопродуцирующие клетки. Таким образом,
плазмидная ДНК с встроенным геном протективного белка индуцирует у
животных полноценный гуморальный и клеточный иммунный ответ.
Первые работы по экспрессии в организме животных вирусных генов,
встроенных в плазмидную ДНК, были опубликованы в 1993 г. У ДНК- со-
держащих вирусов встроенный в плазмиду ген представляет собой участок
геномной ДНК, а у РНК- содержащих вирусов -ДНК- транскрипт участка
геномной РНК, полученный с помощью обратной транскриптазы.
Американские исследователи из лабораторной фирмы «Merck» показали,
что внутримышечное введение мышам плазмидной ДНК, содержащей ген
белка нуклеокапсида NP вируса гриппа A (H1N1), приводит к образованию
916
специфических антител и ЦТЛ. Антитела к белку NP не обладают протек-
тивными свойствами. А ЦТЛ защищают 90% животных' от последующего
заражения не только гомологичным (H1N1), но и гетерологичным (H3N2),
штаммами вируса гриппа А.
Двукратная иммунизация 3-нед цыплят плазмидной ДНК, содержащей
ген гемагглютинина Н7 вируса гриппа А, обеспечивает защиту 50-60% цып-
лят от интраназального введения 100 летальных доз вирулентного вируса
гриппа (H7N7). В контрольной группе гибель цыплят составляет 98%. Ис-
следования по влиянию различных способов введения плазмидной ДНК,
содержащей ген гемагглютинина Н1 вируса гриппа А, на защиту от кон-
трольного заражения были проведены американскими исследователями на
6-8 нед мышах. Подкожное, интраназальное, внутрикожное, внутривенное и
внутримышечное введение плазмидной ДНК в дозе 50-22 мкг приводит к
защите 67-95% мышей Интраперитональное введение не сопровождается
развитием иммунного ответа. Заслуживают внимания результаты по так на-
зываемому баллистическому методу введения (gene gun), когда частички зо-
лота диаметром 1-2 мкм, покрытые плазмидной ДНК, с помощью специ-
ального устройства доставляются в клетки кожи. Доза плазмидной ДНК со-
ставляет всего 0,4 мкг, а защита мышей от контрольного заражения дости-
гает 95%.
Успешно проведены исследования по разработке ДНК-вакцины против
бешенства. Двукратная внутримышечная иммунизация мышей плазмидной
ДНК, экспрессирующей гликопротеин вируса бешенства, приводит к пол-
ноценному гуморальному (синтез ВНА) и клеточному (образование ЦТЛ)
иммунному ответу и защищает животных от контрольного заражения виру-
лентным штаммом вируса бешенства. В последние 3 года широко ведутся
исследования по разработке различных ДНК-вакцин. Два года назад в США
была проведена конференция под названием «ДНК-вакцины: новая эра в
вакцинологии». Новый подход дает возможность на базе одного плазмид-
ного вектора конструировать различные ДНК-вакцины. Меняют только ген,
кодирующий протективный белок. ДНК-вакцины обладают безопасностью
инактивированных вакцин и эффективностью живых. К настоящему време-
ни сконструированы ДНК- вакцины против ряда вирусных, бактериальных и
паразитарных болезней. В одну плазмидную ДНК можно встраивать гены
протективных белков нескольких возбудителей и гены цитокинов - регуля-
торов иммунного ответа. Эффективность иммунизации ДНК-вакцинами
очевидна, однако, потребуется еще много усилий для практической реали-
зации нового подхода к профилактике инфекционных болезней животных
(Орлянки Б.Г. С/х биол.,1995,1996, 1998).
917
О совершенствовании методов иммунизации
С каждым годом аэрогенная иммунизация животных, особенно в про-
мышленном птицеводстве, приобретает все возрастающие масштабы. Дыха-
тельную систему обычно разделяют на три основные части: 1) верхнюю
респираторную область, состоящую из носовой полости, носоглотки и по-
лости рта; 2) проводящую область, которая состоит из гортани, системы
разветвленных каналов от трахеи до терминальных бронхов и служащую
для распределения вдыхаемого воздуха и 3) легочную или газообменную
область, образованную респираторными бронхиолами, альвеоляторными
мешками и альвеолами. Носовая полость разделена хрящевой перегородкой
и выступами костей на сложные каналы, поверхности которых служат для
подготовки входящего воздуха, где последний разогревается, увлажняется и
за счет резкого изменения направления воздушного потока на стенках носо-
вой полости происходит инерционное осаждение некоторой части аэро-
зольных частиц. Инерционное осаждение является основным механизмом
улавливания аэрозолей в верхней респираторной области. Носовые ходы
покрыты слизистой оболочкой с поверхностным многоядерным эпителием,
состоящим из реснитчатых цилиндрических клеток с множеством разбро-
санных среди них бокаловидных клеток. Каждая реснитчатая клетка имеет
несколько ресничек, которые совершают колебательные движения с часто-
той около 1000 колебаний в минуту. В результате возникает пульсирующее
движение покрывающего их слоя слизистой жидкости толщиной 5-10 мкм
со скоростью 0,3-0,6 см/мин из носовой полости в носоглотку. Осевшие
частицы удаляются из большинства отделов носа за 30-40 мин.
При аэрогенном введении препарата появляется возможность обеспе-
чить его абсорбцию на большей поверхности внешних отделов дыхательно-
го тракта и быстрый выход действующего вещества в системную циркуля-
цию. Причем, искусственный препарат прежде всего поступает с кровето-
ком в головной мозг, что является главной особенностью фармакокинетики
при аэрогенном способе введения лекарств. Изучение формирования сис-
темного и локального иммунитета при аэрогенной иммунизации представ-
ляет интерес при массовой вакцинации животных в качестве способа, аль-
тернативного инъекционному.
Контроль эффективности вакцинации
Представляется необходимым усилить контроль эффективности массо-
вых вакцинаций по принципу, разработанному Александером, микротитро-
вания противокоревых АТ, основанного на реакции агглютинации латекса
(РАЛ), простом, экономном и чувствительном методе. Повторимся - диаг-
ностика - это «глаза и уши» эпизоотолога, может быть как индивидуальной
(относительно кошек и собак в условиях городов), так и крупномасштаб-
ной, применительно к большим партиям животных, поэтому методы круп-
918
номасштабной диагностики врач-эпизоотолог использует для прогноза и
рациональной специфической профилактики с учетом оценки поствакци-
нального иммунитета. Последнее мероприятие, условно именуемое «служ-
бой иммунитета», к сожалению до сих пор не определено как обязательное,
подобно тому, как оно уже проводится более двух десятков лет в отноше-
нии НБ птиц.
Очевидно, что в современной вирусологии происходит переплетение
фундаментальных и прикладных аспектов. Это ярко иллюстрируется боль-
шим числом исследований по вирусу СПИД, этой сугубо медицинской про-
блеме. Сегодня в систематике возбудителей СПИДа появился новый член
семейства Retroviridae. Специалисты из Корнельского Медицинского кол-
леджа обнаружили новый ретровирус человека, вызывающий симптомы
острой иммуносупрессии в отсутствие инфекции ВИЧ 1 и ВИЧ 2. Вирус по-
лучил название «внутриполостной ретровирус человека».
Таковы, как нам представляется, перспективы развития ветеринарной
вирусологии на рубеже 20-го и 21-го века. Нет сомнения, что многие чаяния
и надежды воплотятся в исследовательсую работу и практические результа-
ты по охране здоровья людей и животных.
Авторы
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ - антиген
АТ - антитела
АЧЛ - африканская чума лошадей
анти-ГА - антигемагглютипины
АЧС - африканская чума свиней
АСВ - авирулентная сухая вакцина
(из лапинизированного
штамма против КЧС)
АЭК - артрит энцефалит коз
БПЛ - бетапропиолактоп
БОЕ - бляшкообразующая единица
БС - болезнь слизистых
БГ - болезнь Гамборо
БелНИЭВ - Белорусский на-
учно-исследовательский
институт экспериментальной
ветеринарии
Б - бешенство
БН - болезнь Найроби
БМ - болезнь Марека
и»»,,»"
ВНА - вируснейтрализующие анти-
тела
ВИЭФ - встречный иммуноэлектро-
форез
ВАЭЛ - восточный американский
энцефаломиелит лошадей
ВЭЛ - венесуэльский энцефломие-
лит лошадей
ВД-БС - вирусная диарея - болезнь
слизистых
ВЯЭ - вирус японского
энцефаломиелита
ВКЧС - вирус классической
чумы свиней
ВИНК - вирус инфекционного
перитонита кошек
ВБА - вирус болезни Ауески
ВГНКИ - Всероссийский
государственный институт по
контролю, стандартизации и
сертификации ветпрепаратов
МСХ РФ
ВНИИВВиМ - Всероссийский
научно-исследовательский
институт ветеринарной
вирусологии и микробиологии
ВНИИЗЖ - Всероссийский
научно-исследовательский
институт защиты животных
ВНИТИБП - Всероссийский
научно-исследовательский и
технологический институт био-
логической промышленности
ВНИВИП - Всероссийский
научно-исследовательский
ветеринарный институт
птицеводства
ВИБ - вирус инфекционного
бронхита
ВИЭВ - Всероссийский институт
экспериментальной ветеринарии
ВРТИ - вирус ринотрахеита индеек
ВПГ-3 - вирус парагриппа-3
ВЧКРС - вирус чумы крупного
рогатого скота
ВЧМЖЖ - вирус чумы мелких
жвачных животных
ВЧС - вирус чумы собак
ВЧП - вирус чумы плотоядных
ВК - вирус кори
ВЧТ - вирус чумы тюленей
ВБ - вирус бешенства
ВВС - вирус везикулярного
стоматита
ВС - везикулярный стоматит
ВГП - вирус гриппа птиц
ВГУ - вирус гриппа уток
ВГЛ - вирус гриппа лошадей
ВГС - вирус гриппа свиней
ВГЧ - вирус гриппа человека
ВЛХМ - вирус лимфоцитарного
хориоменингита
ВЛК - вирус лейкоза кошек
ВЛКРС - вирус лейкоза крупного
рогатого скота
ВБЛ - вирус бычьего лейкоза
920
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВОВ - вирус осповакцины
ВИЧ - вирус иммунодефицита
человека
ВИДК - вирус иммунодефицита
кошек
ВИДЧ - вирус иммунодефицита
человека
ВИДКРС - вирус иммунодефицита
крупного рогатого скота
ВЭС - везикулярная экзантема
свиней
ВЯ - вирус ящура
ВАЛ - вирусный артериит лошадей
ВВС - везикулярная болезнь свиней
ВМЛСМ - вирус морских
львов - Сан-Мигуэля
ВГП - вирус герпеса простого
ВБМ - вирус болезни Марека
ВГК - вирус герпеса кур
ВГИ - вирус герпеса индеек
Г - гуанин
ГА - гемагглютинин
ГОА - гидроокись алюминия
г. - год
ГЛАХ - гидролизат лактальбумина в
растворе Хенкса
ГВЭС - гемагглютинирующий вирус
энцефаломиелита свиней
ГАЕ - гемагглютинирующая
единица
ГЛ - грипп лошадей
ГБК - геморрагическая болезнь
кроликов
ГВЛ - герпесвирус лошадей
ДНК - дезоксирибонуклеиновая
кислота
дн - день
Д - дальтон
ДКП - длинный концевой повтор
ДМСО - диметилсульфоксид
ЕК - естественные киллеры
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт
ЗАЭЛ - западный американский
энцефаломиелит
ЗКЛ - злокачественная катаральная
лихорадка
ИФ - иммунофлуоресценция
ИФА - иммуноферментный анализ
ИЭОФ - иммуноэлектроосмофорез
ИБК - инфекционный бронхит кур
ИГС - инфекционный гастроэнтерит
свиней
ИБ - инфекционный бронхит
ИД50 - 50%-ная инфекционная доза
ИЭМ - иммуноэлектронная
микроскопия
ИББ - инфекционная бурсальная
болезнь
ИПК - инфекционный перитонит
кошек
ИБП - инфекционный бронхит птиц
ИМД50 - 50%-ная иммунизирующая
доза
ИНАН - инфекционная анемия
ИДК - иммунодефицит кошек
ИДКРС - иммунодефицит крупного
рогатого скота
ИЭП - инфекционный
энцефаломиелит птиц
ИРТ - инфекционный ринотрахеит
ИЛТ - инфекционный ларинготра-
хеит
КРС - крупный рогатый скот
кД - килодальтон
КЭ - куриный эмбрион
КЛО - катаральная лихорадка овец
КС - комплемент связывающий
КСА - комплемент связывающие
антитела
КЧС - классическая чума свиней
ККИД50 - 50%-ная культурально-
клеточная инфекционная доза
921
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
КВС - коронавирус собак
ККРА - кровекапельная реакция
агглютинации
КЧП - классическая чума птиц
(грипп птиц)
ЛД50 - 50%-ная летальная доза
ЛДР - лихорадка долины Рифт
ЛПС - липополисахариды
ЛЭК - легкие эмбриона коровы
ЛХМ - лимфоцитарный
хориоменингит
ЛАО - легочный аденоматоз овец
мол.м. - молекулярная масса
МД - мегадальтон, 106 Д
монАТ - моноклональные антитела
МФ А - метод флуоресцирующих
антител
мес - месяц
мин - минута
мл - миллилитр
МЛД - мышиная летальная доза
МФ - макрофаги
МФЗ - метод флуоресцентных
зондов
МЭБ - Международное
эпизоотическое бюро
нм - нанометр
НРИФ - непрямая реакция
им муноф луоресценции
НИФ - непрямая флуоресценция
ОРЗ - острое респираторное
заболевание
ПААГ - полиакриламидный гель
ПА - преципитирующие антитела
ПМВ-3 - парамиксовирус индеек
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПБО - пограничная болезнь овец
ПГ-3 - парагрипп-3
ПМВ-2 - парамиксовирусная-2
инфекция кур
ПЭП - полиэнцефалопатия
ППО - прогрессирующая пневмония
овец
РНК - рибонуклеиновая кислота
РДП - реакция дифузионной
преципитации
PH - реакция нейтрализации
РТГА - реакция торможения
гемагглютинации
РП - реакция преципитации
РСК - реакция связывания
комплемента
РГА - реакция гемагглютинации
РЗГА - реакция задержки
гемагглютинации
РИГА - реакция непрямой
гемагглютинации
РПГА - реакция пассивной
гемагглютинации
РВИ КРС - ротавирусная инфекция
крупного рогатого скота
РВИЭОФ - реакция встречного
иммуноэлектроосмофореза
РНФБ - реакция нейтрализации
флуоресцирующих бляшек
РНИФ - реакция непрямой
иммунофлуоресценции
РИФ - реакция иммунофлуорес-
ценции
РСВ - респираторно-синцитиальный
вирус
РСБ - респираторно-синцитиальная
болезнь (РСИ-инфекция)
РКВС - респираторный коронавирус
свиней
PCX - родамин сульфат хлорид
РТИ - ринотрахеит индеек
РНП - рибонуклеопротеид
РРГ - реакция радиального гемолиза
РИД - реакция иммунодиффузии
922
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
РБТЛ - реакция бласттрансформации
лейкоцитов
РИА - радиоиммуноанализ
РНПТ - реакция нейтрализации
псевдотипа
РРСС - респираторный и репродук-
тивный синдром свиней
РПЛ - ринопневмония лошадей
РТК - ринотрахеит кошек
СМФ - система мононуклеарных
фагоцитов
СГГС - синдром "голубой глаз"
свиней
ТЦД50 - 50%-ная тканевая
цитопатическая доза
ТСК - теносиновит кур
ТФИФА - твердофазный
иммуноферментный анализ
ТГС - трансмиссивный гастроэнтерит
свиней
в т.ч. - в том числе
ТЦИД - тканевая цитопатическая
инфекционная доза
ТСО - тест синцитиеобразования
УФ - ультрафиолетовые
УНИЭВ - Украинский научно-
исследовательский институт
экспериментальной ветеринарии
ЦНС - центральная нервная система
ЦПА - цитопатогенная активность
ЦМП - цитомегалия поросят
ч - час
ЧМЖЖ - чума мелких жвачных
животных
ЧП, ЧС - чума плотоядных, чума
собак
ЭФ - электрофорез
ЭЛД50 - 50%-ная эмбриональная
летальная доза
ЭГБО - эпизоотическая геморраги-
ческая болезнь оленей
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат
ЭМ - электронная микроскопия
ЭДП - эпидемическая диарея
поросят
ЭС - энцефаломиелит свиней
ЭЛ - эфемерная лихорадка
ЭМК - энцефаломиокардит
ЭИД50 - эмбриональная инфекци-
онная доза
ЭЛД50 - эмбриональная летальная
доза
шт. - штамм
ЯЭ - японский энцефалит
ФБР - фосфатный буферный раствор
ФИТЦ - флуоресцеин изотиоцианат
ФВК - фосфовольфрамовая кислота
ФКЭ - (ФЭК) (культура клеток)
фибробластов куриного
эмбриона
ХАО - хориоалантоисная оболочка
Ц - цитозин
ЦПД - цитопатическое действие
ЦПИ - цитопатические изменения
923
ОГЛАВЛЕНИЕ
ПРЕДИСЛОВИЕ
з
ЧАСТЬ I. ИНФЕКЦИИ, ВЫЗЫВАЕМЫЕ
РНК-СОДЕРЖАЩИМИ ВИРУСАМИ
ГЛАВА I. РЕОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 4
Реовирусная инфекция крупного рогатого скота (1) 14
Реовирусная инфекция овец (2) 15
Реовирусная инфекция лошадей (3) 16
Реовирусная инфекция собак (4) 16
Реовирусная инфекция кошек (5) 16
Реовирусная инфекция кур (6) 20
Синдром плохого усвоения кормов (7) 22
Инфекционный энтерит индеек (8) 23
Другие реовирусные болезни птиц (9) 24
Реовирусная инфекция поросят (Ю) 25
Реовирусная инфекция овец (Катаральная лихорадка (П) 33
Африканская чума однокопытных (лошадей) (12) 37
Эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей (13) 41
Болезнь Ибараки (14) 42
Ротавирусная инфекция крупного рогатого скота (15) 54
Ротавирусная диарея свиней (16) 62
Ротавирусная инфекция птиц (17) 64
Ротавирусная инфекция лошадей (18) 64
ГЛАВА И. БИРНАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 65
Инфекционный бурсит птиц (болезнь Гамборо) (19) 65
ГЛАВА III. ТОГАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 85
Западный Американский энцефаломиелит лошадей (20)
Восточный Американский энцефаломиелит лошадей (21)
Венесуэльский энцефаломиелит лошадей (22)
ГЛАВА IV. ФЛАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 97
Японский энцефалит (23) 99
Шотландский энцефалит (24) 103
Менингоэнцефалит индеек (24а) 105
Лихорадка долины Рифт (25) 107
Чума свиней (26) 111
Вирусная диарея болезнь слизистых (27) 135
Пограничная болезнь (28) 158
ГЛАВА V. КОРОНАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 162
Инфекционный гастроэнтерит свиней (29) 165
Инфекционный бронхит кур (30) 183
Эпидемическая диарея поросят (31) 198
Энцефаломиелит свиней (32) 202
Коронавирусная инфекция телят (33) 206
924
Коронаподобная инфекция телят (34) 209
Инфекционный перитонит кошек (35) 210
Коронавирусная инфекция собак (36) 212
ГЛАВА VI. ПАРАМИКСОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 213
Ньюкаслская болезнь (37) 214
Парамиксовирусная болезнь индеек (38) 233
Ринотрахеит индеек (39) 234
Парамиксовирусная-2 инфекция птиц (40) 235
Синдром “голубой глаз” свиней (41) 238
Парагрипп крупного рогатого скота (42) 242
Сендай-инфекция (43) 251
Парагрипп собак (44) 254
Чума крупного рогатого скота (45) 254
Чума плотоядных (46) 268
Морбиливирусная инфекция лошадей (47) 283
Эпидемический паротит (свинка) (48) 284
Респираторно-синцитиальная инфекция
крупного крупного скота (49) 285
ГЛАВА VH. РАБДОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 294
Везикулярный стоматит (50) 295
Бешенство (51) 300
Эфемерная лихорадка крупного рогатого скота (52) 319
ГЛАВА VHI. ОРТОМИКСОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 324
Грипп кур (53) 326
Грипп уток (54) 336
Грипп лошадей (55) 338
Г рипп свиней (56) 343
ГЛАВА IX. БУНЬЯВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 351
Болезнь Найроби (57) 352
Болезнь Акобане (58) 356
ГЛАВА X. АРЕНАВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ 358
Лимфоцитарный хориоменингит (59) 358
ГЛАВА XI. РЕТРОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 363
Лейкемия мышей (60) 371
Лейкемия кошек (61) 372
Лейкоз птиц (62) 376
Лейкоз крупного рогатого скота (63) 383
Инфекционная анемия лошадей (64) 407
Висна-Мэди (65) 422
Иммунодефицит кошек (66) 438
Иммунодефицит крупного рогатого скота (67) 445
Легочной аденоматоз овец (68) 449
Прогрессирующая пневмония овец (69) 455
Артрит-энцефалит коз (7 0) 456
ГЛАВА XII. КАЛИЦИВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 460
Везикулярная экзантема свиней (71) 461
925
Калицивирусная инфекция крупного рогатого скота 483
Калицивирусная ифекция кошек (72) 483
Гемморрагическая болезнь кроликов (73) 485
ГЛАВА ХШ. ПИКОРНАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 495
Энцефаломиелит мышей (74) 496
Энтеровирусная инфекция крупного рогатого скота (75) 498
Энтеровирусная инфекция свиней (76) 501
Болезнь Тешена (77) 502
Синдром СМЭДИ (78) 507
Везикулярная болезнь свиней (79) 510
Энцефаломиелит птиц (80) 514
Гепатит утят (81) 519
Энцефаломиокардит (82) 522
Риновирусная инфекция крупного рогатого скота (83) 529
Риновирусная инфекция лошадей (84) 531
Ящур (85) 532
ГЛАВА XIV. АРТЕРИВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 549
Артериит лошадей (86) 549
Респираторный и репродуктивный синдром свиней (87) 552
ЧАСТЬ II. ИНФЕКЦИИ, ВЫЗЫВАЕМЫЕ
ДНК-СОДЕРЖАЩИМИ ВИРУСАМИ
ГЛАВА XV. ПАРВОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 554
Парвовирусная инфекция собак (88) 561
Панлейкопения кошек (89) 570
Парвовирусная инфекция свиней (90) 573
Парвовирусная инфекция крупного рогатого скота (91) 584
Энтерит норок (92) 586
Килхем-вирусная инфекция крыс (93) 591
Алеутская болезнь норок (94) 593
ГЛАВА XVI. ГЕРПЕСВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 601
Болезнь Ауески (95) 603
Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота (96) 630
Герпесвирусная инфекция лошадей (97) 646
Ринопневмония лошадей (98) 648
Злокачественная катаральная горячка (99) 659
Герпесвирусная инфекция крупного рогатого скота (ЮО) 663
Ринотрахеит кошек (Ю1) 665
Герпес собак (Ю2) 668
Маммиллит крупного рогатого скота (ЮЗ) 669
Инфекционный ларинготрахеит птиц (Ю4) 672
Чума уток (Ю5) 683
Цитомегалия поросят (Ю6) 685
Болезнь Марека (Ю7) 689
Герпесвирусная инфекция индеек 716
926
ГЛАВА ХУП. ПОКСВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 722
Оспа овец (Ю8) 723
Папуллезный стоматит крупного рогатого скота (Ю9) 727
Оспа птиц (ИО) 728
Оспа свиней (1И) 735
Оспа коз (Н2) 740
Миксоматоз кроликов (ИЗ) 742
Нодулярный дерматит (Н4) 747
Оспа кроликов (П5) 750
Оспа верблюдов (Н6) 753
Оспа лошадей (П7) 755
Оспа коров (118) 756
Оспа буйволов (П9) 759
Паравакцина крупного рогатого скота (120) 761
Фиброматоз кроликов (121) 762
Контагиозный пустулезный дерматит (эктима) (122) 764
ГЛАВА ХУШ. АФРИКАНСКАЯ ЧУМА СВИНЕЙ 770
ГЛАВА XIX. ПАПОВАВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 788
Папилломатоз крупного рогатого скота (124) 788
Папилломатоз Шоупа кроликов (125) 790
Папилломатоз лошадей (126) 793
Папилломатоз собак (127) 793
Полиомавирусные болезни Полиоматоз австарлийских попугаев (128) 794
ГЛАВА XX. АДЕНОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 795
Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота (129) 795
Аденовирусная инфекция лошадей Аденовирусная инфекция обезьян и (130) 801
лабораторных животных (130) 804
Аденовирусная инфекция собак (131) 808
Аденовирусная инфекция овец и коз (132) 818
Аденовирусная инфекция свиней (133) 827
Инфекции, вызываемые вирусами CELO и GAL (134) 830
Синдром снижения яйценоскости (ССЯ-76) (135) 846
ГЛАВА XXI. ЦИРКОВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ 871
ГЛАВА ХХП. ПРИОННЫЕ ИНФЕКЦИИ 875
Скрейпи (136) 880
Трансмиссивная энцефалопатия норок (137) 883
Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота (138) 884
ПОСЛЕСЛОВИЕ 892
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ 920
ОГЛАВЛЕНИЕ 924
927
КЛАССИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ ЖИ
Семейство Family Род Genus Представители
Parvoviridae Parvovirus Dependovirus Densovirus Мелкий вирус мышей, парвовирус челов кошек, парво цыплят. КРС, собак, птиц Вирусы насекомых
Herpesviridae Подсемейство Alphaherpesvirinae Simplexvirus Varicellavirus Группа вирусов простого герпеса
Герпес простой 1 и 2 типа, ВГ КГ
Ветряной оспы, свиней -1 (ВБА),
Подсемейство Bethaherpesvirinae Citomegalovirus Muromegalovirus Группа цитомегаловирусов
Герпесвирус человека-5 Герпесвирус мышей -1, ГВ Свин<
Подсемейство Gammavirinae Limphocriptoviruis Герпесвирусы человека-4, Эпште
Hepadnoviridae Orthogepadnovirus Avigepadnovirus Гепатит В человека, сурков, беле Геаптит уток В, цапель
Iridoviridae Iridovirus Cloriridovirus Ranavirus Limphocystivirus Вирусы насекомых Вирусы насекомых Вирус лягушек Вирус лимфоцистоза камбалы
Adenoviridae Mastadenovirus Aviadenovirus Человека (47с/т), КРС (10 с/т), с овец (6 с/т), коз, лошадей, собак Кур (12 с/т), индеек (3 с/т), уток
Papovaviridae Papillomavirus Poliomavirus Папилломы кроликов Шоупа, пг Вирус полиомы мышей, обезып
Poxviridae • Orthopoxvirus Parapoxvirus Avipoxvirus Capripoxvirus Leporopoxvirus Suipoxvirus Moluscipoxvirus Yatapoxvirus Вирус вакцины, натуральной оа Вирус эктимы, контагиозного г узелков доярок) Вирус оспы кур, индеек, голубе! Вирус оспы овец, коз, бугорчата Миксомы кроликов, фибромф з; Вирус оспы свиней Вирус контагиозного моллюска Вирус Yabag Tana
Circoviridae Circovirus Вирус анемии цыплят, циркови]
Вирус АЧС Вирус африканской чумы свине
[ВОТНЫХ: ДНК-СОДЕРЖАЩИЕ ВИРУСЫ
ека, свиней, КРС, собак, кроликов, енотов, гусей, крыс, энтерита норок, Алеутской бол. норок, панлейкопении
С-2 (маммилита)
ВГ КРС-1 (ИРТ КРС), ГВЛ-1 (РПЛ), ГВЛ-4 - (респ. болезнь лошадей)
й-2 (цитомегало вирус свиней), лошадей-2, мышинных 2, морских свинок-1
йн-Барр
к
иней 4 с/т
(2 с/т), мышей (2 с/т)
"1 с/т), фазанов_______________________________________________________________________
тиллом человека, КРС, обезьян, лошадей и др.
.человека, КРС, кроиков,_______________________________________________________________
ы, оспы коров, верблюдов, обезьян, эктромелии, буйволов, кроликов
^стулезного дермати та, пустулезного стоматита КРС, псевдооспы коров (пара вакцины,
, перепелов, сквор цов, воробьев, попугаев, канареек
iKPC
йцев, кроликов (Шоупа), белок
ры свиней, голубей, попугаев