/
Автор: Саргин К.Д.
Теги: медицина биология практическая медицина фармакология лекарственные средства
Год: 1938
Текст
ОГЛАВЛЕНИЕ
Предисловие ко второму изданию................................ 3
Глава I. Общая часть.......................................... 5
Глава , ХЕ Группа наперстянки.............................; . 40
Глава 1 уПДПрепараты задней доли гипофиза.................... 89
Глава 1V. Адреналин.......................................117
Глава V. Инсулин.........................................139
Глава VI. Гормоны женской половой сферы...................162
Глава ^ТГ) Гонадотропный гормон передней доли гипофиза....^179
Глава wlfEjrормон желтого тела...............................Q§5
Глава Гормоны мужской половой сферы..........................193
Глава X. Препараты щитовидной железы.........................207
Глава XI. Гормон околощитовидных желез........................216
Глава XII. Препараты против злокачественного малокровия.......225
Глава ^Пр Гормон коры надпочечника................................
Глава XIV. Маточные рожки, спорынья............................237
Глава XV. Различные растительные продукты.....................248
1. Морской лук (Scilla maritima)..................... 249
2. Ландыш (Herba Convallaria majalis).................. —
3. Индийская конопля (Herba Cannabis indicae).........252
4. Аконитин......................................... 255
5. Валериана (Valeriana officinalis)................... —
6. Препараты одутловатой лобелии (Lobelia inflata).... 257
7. Препараты белладонны и их аналоги (Atropa Belladonna) 258
8. Слабительные вещества..............................261
9. Противоглистные препараты..........................266
Глава XVI. Различные органотерапевтические препараты...............268
. Препараты, понижающие кровяное давление.......... —
Препараты тиреотропного гормона....................270
, Препараты лактогенного гормона передней доли гипо-
w физа (пролактин)..........................,....... 272,
Глава XVII. Препараты группы сальварсана (арсенобензолов).........276
Глава XVIII. Витаминные препараты..................................281
Витамин А.............................................284
Витамин Вх............................................285
Витамин С.............................................286
. Витамин D..............................................287
Указатель литературы...........................................291
Предметный указатель...........................................305
«61
<шэ
К. Д. САРГИН
/
<
БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА
ЛЕКАРСТВЕННЫХ
ВЕЩЕСТВ
21 РИСУНОК В ТЕКСТЕ
Утверждено
Всесоюзным Комитетом по делам высшей школы
при СНК СССР
в качестве учебного пособия
для фармацевтических институтов
НАРКОМЗДРАВ СССР
ГОСУДАРСТВЕННОЕ МЕДИЦИНСКОЕ ИЗДАТЕЛЬСТВО
(МЕДГИЗ)
МОСКВА — ЛЕНИНГРАД
19 3 8
Книга К. Д. Саргина «Биологическая оценка
лекарственных веществ» является пособием для
работников лабораторий институтов, заводов и
кафедр вузов при производстве испытаний на
животных ряда препаратов, выпускаемых нашей
промышленностью и сырья для них. Подробные
технические указания проведения испытаний
в большинстве случаев основаны на личном
опыте автора.
Редактор М. Николаев. Техред. X. Лейтес. Зав. граф. ч.
Е. Смехов. Зав. коррект. Л. Голицына.
Леноблгорлит № 3347. Медгиз № 291. МД 4. Тираж 5000.
Формат 60 X 92>/16. Печ. л. l!)1^. Знак, в 1 печ. л. 43130.
Авт. л. 21,01. Сдано в набор 3/VI 1938 г. Подписано к печ.
21/V||| 1938 г. Заказ № 317. Цена 4 р. 60 к. Перепл. 1р. 20 к.
Набрано и отматрицировано во 2-й тип. ОГИЗа РСФСР
.Печатный двор" им. А. М. Горького. Отпечатано во 2-й
фабрике Детской книги. Ленинград, 2-я Советская, 7. 3. 3730.
ЗАМЕЧЕННЫЕ ОПЕЧАТКИ
Стр. Строка Напечатано Нужно
45 24 снизу figrina tigrina
56 21 сверку oubain ouabain
78 9 снизу переносится переносимая
130 10 сверху f высокого полного
143 24 сверху доказавших доказывавших
168 20 снизу мыши мыши иля крысы
184 4 снизу Люсбовецкой Любовцевой
194 16 снизу Тестостерон Дигидроанд- ростерон (андростандиол) Дагидростерон <аядро- стандиол) Тестостерон
238 2 св’ерху 0,5 г. 0,5 мг.
38 23 снизу • эргостерина эргостетрина
??5 14 сверху меданофорный меданофорный
289 18 снизу десятков ЕД десятков тысяч ЕД
1
оказанную помощь в работе.
Ссылки на литературные источники, несмотря на сравни-
тельную многочисленность, имеют целью лишь обосновать при-
1 * »- 3
Набрано и отматрицировано во 2-й тип. ОГИЗа РСФСР
.Печатный двор" им. А. М. Горького. Отпечатано во 2-й
фабрике Детской книги. Ленинград, 2-я Советская, 7. 3. 3730.
ПРЕДИСЛОВИЕ КО ВТОРОМУ ИЗДАНИЮ
Предлагаемое вниманию читателей второе издание книги,
излагающей методы биологической оценки. активности некото-
рых лекарственных веществ, появляется в свет через 9 лет
после первого издания. Естественно, что за такой длительный
срок в этой новой отрасли фармакологии накопилось большое
количество новых данных, потребовавших многочислен-
ных изменений и дополнений. Переработке подверглись реши-
тельно все разделы. Более или менее без изменений сохра-
нены главы о препаратах группы наперстянки, щитовидной
железы и адреналина, хотя все они несколько дополнены. Ко-
ренной переработке подверглись главы об инсулине, гормонах
женской половой сферы, пролане и препаратах околощито-
видных желез. Заново введены главы о гормонах мужской
половой сферы и коры надпочечника, о препаратах против
злокачественного малокровия и о витаминах. Кроме того,
вновь включены описания методов оценки ряда имеющих
меньшее значение органотерапевтических препаратов (тирео-
тропный и лактогенный гормоны, депрессорные препараты
и др.) и растительных продуктов (лобелии, валериана и др.).
Значительному сокращению подверглась глава о препаратах
спорыньи, биологическая оценка которых практически мало
осуществима. Исключено как излишнее описание биологиче-
ской оценки пантопона. В конце книги вкратце приведены
описания методов оценки сальварсанных и витаминных пре-
паратов. Краткость описания объясняется тем, что испытание
этих препаратов в последние годы было по преимуществу
сконцентрировано в специальных учреждениях и в известной
мере отошло от фармакологов.
Основная часть нового материала падает на эндокринные
препараты. При изложении соответствующего материала был
использован богатый опыт фармакологической лаборатории
Государственного! института экспериментальной эндокрино-
логии в Москве. Пользуюсь случаем, чтобы принести благодар-
ность всему коллективу сотрудников этой лаборатории за
оказанную помощь в работе.
Ссылки на литературные источники, несмотря на сравни-
тельную многочисленность, имеют целью лишь обосновать при-
1 * 3
водимый материал, охарактеризовать основные методы и обри-
совать картину чрезвычайного развития и распространения
методов биологической оценки. При выборе литературного
материала не имелось в виду дать полный литературный об-
зор, что не вызывалось необходимостью и едва ли возможно
вообще.
Расположение материала сохранено прежнее. Вначале
(главы I—V) помещено описание методов, включенных в Фар-
макопею СССР, т. е. являющихся официальными. Главы VI—
XVI содержат описание методов, завоевавших себе признание
и уже вошедших (и частью вводимых) в практику, но еще не
ставших официальными. Главы XVII—XVIII содержат описа-
ние методов оценки сальварсанных и витаминных препара-
тов.
Прежнее излишне громоздкое название «Биологическая
оценка лекарственного сырья и фармацевтических препара-
тов» заменено более кратким.
К. С а р г и н
Март 1938 г.
ГЛАВА I
ОБЩАЯ ЧАСТЬ
Исследованием действия лекарственных веществ на живот-
ных фармакология пользуется с момента своего существова-
ния в качестве самостоятельной экспериментальной научной
дисциплины. Данные, добытые при помощи опытов на жи-
вотных, вскрыв сущность действия на животный организм,
установив преимущественное воздействие на тот или иной
орган и т. д., оказали практической медицине ценнейшие
услуги. Биологическое (на живых объектах) исследование ле-
карственных веществ предшествует введению в практику вся-
кого нового фармацевтического препарата. Настоящая работа
имеет целью рассмотрение не этих обычных фармакологиче-
ских методов, а такого рода методов, при помощи которых в
испытуемом объекте устанавливается количество харак-
терных для данного вещества действующих начал. Эта цель
для большинства, но далеко не для всех фармацевтических
препаратов достигается при помощи химического анализа.
Как будет показано далее, исключения из этого правила на-
столько многочисленны и практическое значение количествен-
ного фармакологического эксперимента оказалось столь боль-
шим, что эта работа, постепенно расширяясь, вылилась в спе-
циальную отрасль фармакологии, некоторыми авторами [напри-
мер, Мэнч) обозначаемую как «количественная фармакология».
Последнее название, однако, мало привилось, и за количествен-
ными фармакологическими исследованиями, имеющими целью
определение активности препаратов, установилось название
«метод биологической оценки», «биологической пробы» (bio-
assays, assais biologiques, biologische Priifung и т. д.). Ввиду того
что биологическая оценка имеет дело с медикаментами, являю-
щимися промышленными продуктами, которые должны отве-
чать определенному стандарту, ей часто присваивается назва-
ние «биологическая стандартизация». Не так давно этим тер-
мином пользовались для того, чтобы подчеркнуть применяемое
в Данной методике сравнение со стандартным препаратом, и
выделяли в особую группу те методы, где такое сравнение не
могло быть проводимо из-за отсутствия таких препаратов.
В настоящее время количественное испытание без сравнения
5
со стандартным препаратом, где, следовательно, в основу по-
ложено лишь получение в эксперименте определенной картины
действия, определенной суммы эффекта, применяется все реже
и реже, как дающее недостаточно точный результат. Такого
рода количественным методам было присвоено название «био-
логическая валоризация». Обычно к такому менее точному
опыту прибегают в первое время изучения вводимых в прак-
тику новых препаратов, для которых еще нет возможности
получить стандартный, т. е. не меняющийся с течением вре-
мени и не теряющий активности препарат.
Все сказанное ограничивает размер данной работы, кото-
рая, следовательно, не является собранием всевозможных ме-
тодов фармакологии, даже применяемых -для сравнительной
количественной оценки разных препаратов, а разбирает лишь
строго методы количественного определения, необходимые
для постоянного контроля определенных промышленных фар-
мацевтических препаратов. Методы, столь сами по себе инте-
ресные, как, например, методы сравнения активности новых
синтетических снотворных или местно обезболивающих
средств, нужны для выделения из массы вновь предлагаемых
препаратов наиболее подходящих. В дальнейшем соответствие
производимых промышленностью препаратов может быть про-
ведено чисто химическим путем без помощи эксперимента на
животных. ♦
Практическая необходимость методов биологической
оценки лучше всего может быть подтверждена примерами для
различных препаратов и лекарственного сырья.
Старинное правило, предписывавшее содержателям аптек
производить ежегодную замену имевшихся в запасе трав, за-
ключает в себе ту же мысль, которая лежит в основе необхо-
димости биологического испытания лекарственного сырья,—
мысль о непостоянстве действия различных препаратов, изго-
товленных из одного и того же вида лекарственного сырья.
Разница в действии одинаково приготовленных настоев и от-
варов из одного и того же вида растения была замечена уже
очень давно. Выбор времени для сбора основывался на раз-
личных чисто внешних признаках. Лучшим временем сбора
считался период цветения, отожествлявшийся с моментом наи-
большего расцвета всех сил данного растения. Выработанные
веками правила сбора трав и их сушки давали видимую рав-
ноценность товара (сырья), одинаковые способы приготовления
тех или иных лекарственных форм тоже, казалось, гаранти-
ровали от резких колебаний. Всего этого все же оказалось не-
достаточно, и е качестве одной из предупредительных мер
было установлено правило, приведенное выше. Само собой ра-
зумеется, что предписание ежегодной замены трав свежими
травами нового сбора тоже в некоторых случаях является пе-
режитком, ибо достаточных научных оснований для этого не
6
имеется *. Оно является, однако, характерным показателем
того, что неуверенность в постоянстве терапевтического
эффекта одноименных препаратов существовала уже давно.
С расцветом химии для некоторых групп растительного
сырья оказалось возможным решить вопрос о пригодности
того или иного препарата путем их химического исследования.
С течением времени выяснилось, что даже с развитием и усо-
вершенствованием химической методики для очень большой
части лекарственных растений путем химического определения
количества содержащихся в них действующих начал нельзя
получить сколько-нибудь точного представления о силе дей-
ствия данного сырья и препаратов из него. Для некоторых
случаев химия оказалась вообще бессильной. В поисках вы-
хода из создавшегося положения научная мысль пришла к
убеждению о важности, а в некоторых случаях и необходи-
мости биологического исследования лекарственных веществ,
т. е. исследования путем животного эксперимента с целью ко-
личественного определения действующих начал.
Опуская длинный ряд растений, химическое исследование
активных начал которых не дает ничего или дает недостаточ-
ные сведения, возьмем для примера хотя бы группу лекар-
ственных растений, обладающих действием на сердечную
мышцу. Сведения, которыми мы обладаем благодаря химии,
оказываются очень неполными. Для относящихся сюда расте-
ний характерна чрезвычайно быстрая смена данных, добывае-
мых путем химического анализа. Опубликовываемые в печати
материалы очень быстро опровергаются и пополняются но-
выми. О наиболее изученных листьях пурпурной наперстянки
довольно длительно господствовало мнение, что содержащиеся
в них действующие начала оставляют около 1% общего коли-
чества веществ, входящих в состав листьев; затем, — что про-
цент этот делится приблизительно на три равные части между
тремя отдельными глюкозидами — дигитоксином, дигиталеином
и гиталином. Если, далее, строение дигитоксина представля-
лось более или менее твердо установленным, то относительно
Хигиталеина имелись гораздо менее точные сведения, а про
гиталин прямо знали, что в состав его входит целая группа
действующих начал. Имея вполне определенный способ для
химического определения дигитоксина, мы не располагали та-
ковыми для дигиталеина и гиталина. Эти данные были пере-
смотрены исследователем и знатоком химии дигиталиса Клоет-
та*, значительно углубившим сведения о химизме действую-
щих начал наперстянки. В результате многолетних работ он
выделил из листьев три глюкозида, обладающих каждый опре-
* Необоснованное в большинстве случаев требование о замене сырья
в отдельных случаях может быть вполне оправдано; к последним должны
быть отнесены такие, где наличие больших изменений в содержании актив-
ных начал с течением времени является в той или иной форме обоснован-
ным. Таково, например, требование о замене через год запасов спорыньи.
7
деленными химическими свойствами, способностью давать те
или иные кристаллизующиеся производные в определенной
форме, обладающие определенной точкой плавления. За двумя
из выделенных им глюкозидов Клоетта сохранил название ди-
гитоксина и гиталина; третий получил название гитоксина или
бигиталина, так как молекулярный вес его вдвое превышает
молекулярный вес гиталина. Дальнейшими исследованиями
Клоетта удалось выделить из этих соединений еще более чи-
стые вещества, производными которых оказались вышеназван-
ные глюкозиды; для них даны были названия, составленные из
предыдущих, с добавлениями к ним слова «гении»; таким обра-
зом получились названия «дигитоксигенин», «гиталигенин» и
«бигиталигенин».
Очень скоро, однако, оказалось, что данные и этого так
много давшего исследования Клоетта не являются окончатель-
ными. Работы последних лет вносят в него ряд дополнений и
коррективов. По Штолю и Крейсу 2, дигитоксин и гитоксин (би-
гита лин) содержатся в листьях наперстянки не как таковые, а
в, виде аморфных соединений, получивши^ название пурпур-
ных глюкозидов А и В. Из этих соединений получаются путем
гидролитического расщепления одна молекула глюкозы и одна
молекула дигитоксина и соответственно гитоксина.
Одна из разновидностей наперстянки, Digitalis lanata, со-
держит в листьях не аморфные глюкозиды, а чистые глюко-
зиды! как таковые, дающие при расщеплении, кроме обычных
ингредиентов, еще и уксусную кислоту.
Как видно из этого краткого перечня главнейших работ по
химии действующих начал наперстянки, говорить о недостатке
данных о химизме глюкозидов наперстянки не приходится.
На данном примере мы встречаемся, следовательно, не с таким
растительным сырьем, где сведения о химическом составе
активных начал отсутствуют или крайне скудны, а имеем дело
с достаточно тщательно изученным объектом. Тем не менее
все сведения о химизме глюкозидов наперстянки оказываются
недостаточными для того, чтобы удовлетвориться химическим
анализом листьев. Биологические методы испытания листьев
наперстянки позволяют не только проще и точнее, чем хими-
ческие, оценить активность, но, что самое главное, позволяют
определить сразу всю сумму действующих начал, число кото-
рых, как мы видели, достаточно обширно. То, что действие
химически чистых активных начал растительного сырья может
отличаться от действия, вызываемого простейшими препарата-
ми из соответствующего исходного материала, является фак-
том общеизвестным. Кроме прямого содержания в расщепле-
ниях действующих начал, даже и доступных химическому
определению, терапевтические свойства растений зависят от
того, в каком соотношении между собой и в каком состоянии
эти действующие начала находятся. Для наперстянки Готлиб
и Тамбах3 установили, что все ее многообразные глюкозиды
8
находятся в соединении с дубильной кислотой, образуя так
называемые глюкотанноиды. Выделение действующих начал
поэтому может разрушить те условия, которые являются не-
- обходимыми для вызывания терапевтического эффекта, и по-
тому суждение о данном лекарственном веществе по выделен-
ному из него химически чистому соединению окажется непра-
вильным. Это обстоятельство не служило бы препятствием к
химическому исследованию, если бы было известно, что то
или иное количество выделенных действующих начал соответ-
ствует тому или иному количеству находящихся в естествен-
ной связи между собой всех действующих начал, всему тера-
певтическому комплексу растения, т. е. находится в той или
иной пропорциональной зависимости от терапевтического
эффекта сырья. На деле оказывается, что этого нет. Устана-
вливаемый экспериментально терапевтический эффект напер-
стянки вовсе не идет, например, параллельно процентному со-
держанию дигитоксина (Цигенбейн4, Сторм ван Лёвен5).
Другие представители группы наперстянки в большей своей
части изучены химически еще меньше. Те данные, которые
известны, например, для горицвета и ландыша, подтверждают
все сказанное для наперстянки. Особенно показателен в этом
отношении пример ландыша. Когда Каррер 6 опубликовал ра-
боту о выделении глюкозида чрезвычайно высокой активно-
сти, названного им конваллотоксином, можно было думать,
что вопрос о действующих началах ландыша сможет быть
этим разрешен аналогично строфанту с его действующим на-
чалом — строфантином. Очень скоро, однако (Штрауб7, Сар-
гин8), выяснилось, что наряду с конваллатоксином сохраняют
свое значение и другие глюкозиды ландыша.
Иногда выделенные химически чистые вещества обладают
даже качественно отличным эффектом от препаратов, содер-
жащих действующие начала растения в их естественной связи;
действие гиосциамина и атропина отличается от действия
Extr. Belladonnae; действие основного алкалоида Fol. Jaborandi,
пилокарпина, выступает менее отчетливо в случае применения
отвара из листьев, что объясняется присутствием в последнем
яборина, действующего подобно атропину, т. е. противополож-
ным пилокарпину образом, и т. д.
Небольшие численные колебания содержания второстепен-
ных алкалоидов опия значительно меняют картину действия
препаратов из разных образцов сырья.
В случае опия мы встречаемся с новым вопросом взаимо-
действия между собой отдельных действующих начал в расте-
ниях, которое может быть названо потенцированием. Явление
это заключается в том, что незначительные сами по себе ко-
личества веществ могут в комбинации с основным действую-
щим началом данного сырья (морфин — наркотин) менять
эффект последнего в сторону его усиления (Штрауб 8К).
I
9
Прямым следствием всех приведенных примеров является
необходимость при желании иметь правильное суждение о ле-
чебных свойствах растительного сырья, физиологически иссле-
довать те виды лекарственных растений, действие которых
основывается на содержании различных, чрезвычайно сложно
между собой связанных отдельных химических веществ, и те,
для которых химический анализ не дает сколько-нибудь точ-
ных данных.
Кроме этих теоретических обоснований, остается еще и
чрезвычайно ценное практическое свойство: животный экспе-
римент, как это ни покажется странным на первый взгляд,
сплошь и рядом является гораздо более скорым и легким де-
лом, чем соответствующее химическое исследование. Во много
раз легче и быстрее можно испытать семена строфанта био-
логически, чем выделить из них строфантин. Выделение хи-
мически чистых веществ из многих лекарственных растений
наталкивается на чисто технические препятствия: для того
чтобы выделить очень незначительное количество (1—2 г), при-
ходится оперировать с килограммами сырья, расходуя огром-
ные количества экстрагирующих веществ; соответственно это-
му чрезвычайно увеличивается и затрата времени. Так обстоит
дело с выделением чистых глюкозидов дигиталиса (Клоетта *)
и активных начал спорыньи (Форет9). Требующие меньших
затрат сырья, реактивов и времени колориметрические способы
во многих случаях не дают точных результатов.
Таким образом, химическое определение содержания дей-
ствующих начал недостаточно и может вести к ошибочным ре-
зультатам. Вместе с тем и терапевтический эффект однород-
ного сырья может меняться от тысячи условий. К числу таких
условий относятся: время сбора, способы сушки и хранения
растений, условия (дикое или культивированное) и местность,
в которых растение произрастает. Культивирование расте-
ний, дающих в диком состоянии хороший терапевтический
эффект, иногда понижает их лечебные свойства. Географи-
ческие условия играют огромнейшую роль; валор собранных,
например, в разных местностях образцов наперстянки, выра-
женный в определенных единицах (см. ниже), колеблется в
пределах от 60 до 120. Это имеет место в тех случаях, когда
растение берется всегда одного и того же вида, в данном
случае Digitalis purpurea.
Легко представить себе, что при замене одного вида ра-
стения родственным ему, к чему иногда приходится прибегать,
уклонения будут еще больше. В этом отношении особенно
показательна разница в активности Digitalis purpureae и изучен-
ной в последние годы Digitalis lanatae. Другие виды наперстян-
ки, произрастающие у нас, — Digitalis ambigua, Digitalis ferru-
guinea, — менее отличаются по своей активности.
Высказывалось мнение, что одной из причин, влияющих
на терапевтическую ценность растения, может быть близость
10
к месту произрастания магнитных руд (Левчук10). Всем йзве-
стен факт высокой активности произрастающего в европей-
ской части СССР горицвета (Herba Adonidis vernalis) и гораздо
меньшая активность этой травы, растущей в Германии. Влаж-
ность почвы, ее состав, условия освещения — все это в сово-
купности играет огромную роль.
Упомянутое выше хранение, конечно, также сказывается
на сырье, однако не играет такой существенной роли, которая
раньше ему приписывалась. Как на основании литературных
данных (Мейер 11 и др.), так и на собственном опыте мы убе-
дились, что хранение листьев наперстянки даже очень про-
должительное время не оказывает особенно резкого влияния
на их терапевтические свойства в случае, если, конечно, листья
хорошо высушены и хранятся в нужных условиях. В частно-
сти, образцы Fol. Digitalis, сохранявшиеся более 10 лет, давали
при исследовании валор, сплошь и рядом превышающий тако-
вой у листьев свежего сбора. Другое дело, когда хранение
ведется небрежным образом: в сырости, ведущей к плесени
и загниванию, способствующей ферментативным процессам
разложения активных начал (листья наперстянки) и т. д.; в
этих случаях даже непродолжительное хранение самым па-
губным образом отражается на сырье, делая его подчас совер-
шенно негодным. Особо следует отметить, что один внешний
вид растения еще никоим образом не может служить реши-
тельным критерием к суждению о годности или негодности
данного сырья. Внешний вид особенно легко меняется от со-
стояния в листьях красящего вещества, хлорофила, которое
далеко не обязательно идет параллельно терапевтической цен-
ности сырья. Нередки случаи, когда листья выцветшей, но не
плохой Digitalis purpureae дают более высокий валор сравни-
тельно со свежими, яркозелеными образцами.
Совокупность всех причин, способных повести к тем или
иным изменениям качества сырья, ведет к возможности ко-
лоссальнейших колебаний терапевтического эффекта препара-
тов. Особенно резкий пример возможных колебаний мы нахо-
дим в работе Сторм ван Лёвена 12, пожелавшего испытать ак-
тивность разных образцов спорыньи.
Для этой цели им были выписаны из шести различных
аптек шесть образцов Extr. Secalis cornuti, приготовленных
аналогичным образом. Результаты оказались потрясающими:
разница в валоре между худшим и лучшим образцом достигала
3 000%; другими словами, один препарат действовал лучше
другого в 31 раз. Нужно оговориться, что маточные рожки
реагируют на хранение особенно резким понижением тера-
певтического эффекта, так что судить по этому именно слу-
чаю о других видах сырья не приходится. Достаточно, одна-
ко, ярким примером является наперстянка, не подверженная
легкой разрушаемости и все же дающая колебания до 400%,
т. е. до пятикратного количества терапевтического эффекта.
11
В такой же, пожалуй, мере, как для спорыньи, доказана раз-
ница в содержании действующих начал в препаратах строфанта,
достигающая 2 000% и более и зависящая, конечно, только от
разницы в исходном материале. В качестве других примеров
можно еще привести хинную корку, содержание алкалоидов в
которой колеблется от 3,6 до 10%, мужской папоротник с ко-
лебанием от 0,1 до 0,65%; далее, многочисленные алкалоид-
ные растения с колебанием в 2—3 раза и т. п.
Успехи химии и увлечения химическими исследованиями
в прошлом столетии значительно задержали развитие вопроса
о биологических путях испытания лекарственного сырья. То,
что сейчас делается очевидным, раньше оспаривалось. Пред-
полагалось, что химическое исследование сможет во всех слу-
чаях решить вопрос.
Весьма интересный пример практического использования
испытания на животных с целью определения ядовитости
растительных продуктов можно найти еще у Гумбольдта, на-
блюдавшего картину торговли стрельными ядами в Южной
Америке, где сила действия продаваемого продукта подтвер-
ждалась тут же на базаре примитивным опытом на животных
(курах).
Испытание всякого рода растительного сырья сводится,
конечно, к испытанию приготовленных из него препаратов.
Экспериментатор, производя исследование того или иного
сырья, каждый раз готовит одним и тем же образом, с точным
соблюдением установленных для этой цели правил препарат,
исследуя который, он создает себе впечатление о сырье. Дру-
гое дело, когда исследованию подлежат уже готовые галено-
вые препараты. К основной побудительной причине, заставля-
ющей прибегать к биологическим исследованиям, — качествен-
ной разнице сырья, из которого готовится препарат, — здесь
присоединяется еще его обработка, которой оно подверглось.
Выше мы видели, что выделение из растительного сырья дей-
ствующих начал ведет как к количественным, так и к качест-
венным изменениям лечебных свойств. Та примитивная обра-
ботка, которая применяется для приготовления простейших
лекарственных форм, конечно, не может дать таких резких
изменений свойств, но может до известной степени менять
силу терапевтического эффекта препарата. Приготовленные
из одного и того же сырья инфуз или тинктура разными ли-
цами в разной Обстановке могут давать некоторые колебания
в силе действия препаратов. Такие простейшие мероприятия,
как нагревание, фильтрование, настаивание со спиртом и пр.,
могут изменять силу препарата в связи с продолжительностью
нагревания, разностью температур, крепостью спирта и т. д.
Отдельно нужно упомянуть еще также о том, что иссле-
дование все более распространяющихся так называемых на-
тивных препаратов должно производиться только биоло-
гическим путем. Под нативными понимаются препараты, со-
12
держащие действующие начала сырья в их естественном, не-
измененном нативном состоянии, по возможности близко к
тому, в каком они находятся в сырье (Готлиб). Такие препа-
раты не могут быть испытываемы химически, так как разло-
жение их на химические ингредиенты разрушит то взаимо-
отношение действующих начал, которое именно и составляет
главную терапевтическую особенность препаратов такого
рода. Примером последних могут служить вырабатываемые у
нас дигинорм, адонилен и гитален. При производстве таких
препаратов биологическая стандартизация включается как обя-
зательный момент: каждая серия данного препарата устана-
вливается на определенный фармакологический эффект,
всегда одинаковый. На этом примере мы видим, какое важное
значение может иметь биологическая оценка в химико-фарма-
цевтическом производстве.
Группа органотерапевтических препаратов в смысле необ-
ходимости применения к отдельным препаратам методов био-
логической оценки занимает совершенно особое место. Если
среди многочисленных образцов растительного сырья и пре-
паратов приходилось отыскивать отдельные примеры, в кото-
рых необходим биологический метод исследования, то в груп-
пе органотерапевтических препаратов приходится искать
исключения, в которых биологический метод был бы не ну-
жен. В группу органотерапевтических препаратов включают
весьма разнообразные по существу продукты. Основными и
терапевтически самыми ценными являются гормональные пре-
параты, т. е. такие, которые содержат гормоны — специфиче-
ские продукты органов внутренней секреции. Далее, к органо-
препаратам относят весьма большое число разных сухих и
жидких препаратов (в том числе и лизатов), обобщающим
признаком которых и объединяющим их с эндокринными
препаратами моментом является их происхождение из орга-
нов животных. Большая часть этих обычно неспецифических
препаратов вовсе не имеет свойственных им специфических
фармакологических реакций, что лишает возможности произ-
водить какое-либо количественное определение их активных
начал. Таким образом, все, что сказано в начале этого раз-
дела, и все, что будет указано про органопрепараты, дальше
следует понимать лишь в отношении эндокринных специфи-
ческих продуктов.
Основной момент, обусловливающий необходимость биоло-
гической оценки, — отсутствие достаточных химических по-
знании об активных веществах, в данном случае гормонов,—
казалось бы, должен был быть исключен блестящими работа-
ми последних лет. Если еще не так давно химически были
хорошо изучены лишь адреналин и гормон щитовидной же-
лезы, тироксин, то сейчас детально изучены гормоны муж-
ских и женских половых желез (включая и гормон желтого
Тела), очень хорошо изучен инсулин, достигнуты относительно
13
большие успехи в изучении химии гормонов задней и от-
части передней доли гипофиза, коры надпочечника и некото-
рых других. Необходимость испытывать препараты, содержа-
щие эти гормоны, биологически не стала тем не менее от
этого меньше. Уточнение химических знаний не позволяет
воспользоваться химическим анализом или потому, что они
требуют огромного количества препарата для анализа, или,
наконец, потому, что они дают неточные результаты. Приме-
ром последнего служат колориметрические реакции для опре-
деления женского полового гормона.
Для растительного царства выше чЗыла указана важность
таких факторов, как место произрастания, время сбора, спо-
собы сушки и хранения и т. д., имеющих значение для изме-
нения количества действующих начал. Легко себе предста-
вить, что факторы этого рода для органотерапевтических
препаратов играют гораздо большую роль, поскольку биоло-
гические процессы животного организма разнообразнее и
сложнее таковых в растениях. В самом деле, такие моменты,
как пол, периоды роста, полового созревания и старости, бе-
ременность, если дело идет о женских особях, различные за-
болевания и сами по себе чрезвычайно сложные взаимоотно-
шения между собой желез внутренней секреции, наконец,
даже влияние климатических условий — все это является мо-
ментами, чрезвычайно важными в деле колебания содержания
действующих начал в эндокринных железах. Далее, при изго-
товлении органотерапевтических препаратов огромную роль
играет еще один момент, значение которого для большинства
препаратов растительного царства сравнительно невелико:это
смерть животного. Отделение растения от почвы или даже его
измельчение на отдельные части особенно резко не влияет на
изменение содержания действующих начал; связанные же с
прекращением жизни животного организма посмертные из-
менения существенным образом меняют не только количество
инкрета в тканях желез, но, возможно, и его качество. Уже
такой короткий промежуток времени, как 1—2 часа, может
играть значительную роль.
Гормоны многих желез крайне нестойки и известны своей
чрезвычайно легкой разрушаемостью. Такие обычные воздей-
ствия при обработке, как нагревание, подщелачивание или
подкисление, осаждение белков и т. д., могут резко понизить
силу действия препаратов. В качестве яркого примера можно
привести всем известный факт легкой разрушаемости адрена-
лина под влиянием воздействия света и щелочей. Если ко
всему этому прибавить, что очень многие эндокринные пре-
параты очень легко теряют активность при хранении, то ста-
нет понятной особая необходимость проверки активности та-
ких препаратов, несмотря на то, как бы тщательно ни был
проведен производственный процесс, как бы механизирован и
возможно однотипен он ни был. Вообще говоря, все отклоне-
14
ния, носившие для растительных продуктов характер возмож-
ности и вероятия, приобретают для эндокринных препаратов
характер законности.
Применявшиеся в сравнительно недавнем прошлом расчеты
на весовое отношение органопрепаратов к исходному сырью
потеряли на основании сказанного выше всякий смысл. Кли-
нициста никак не может интересовать, из какого количества
органа приготовлено данное количество препарата, если он
недостаточно активен. Если сейчас данные Тренделенбурга13
о чрезвычайной разнице в активности препаратов задней доли
гипофиза и соответственные данные Лёве14 для препаратов
яичника (тот и другой получили колебания в несколько десят-
ков и даже сотен раз при одинаковом соотношении между
весом желез и количеством препарата) являются устаревшими и
если сейчас неактивных препаратов становится все мецыпе, то
это является заслугой фармакологических — биологических —
методов анализа, сделавших такое положение невозможным.
Последнее десятилетие значительно увеличило количество
эндокринных препаратов, доступных биологической оценке.
В 1928 г. практически этот вопрос был решен для адреналина,
. препаратов щитовидной железы, околощитовидных желез,
инсулина, женского полового гормона и гонадотропного гор-
мона передней доли гипофиза. Сейчас в группу биологически
оцениваемых препаратов включен ряд других гормонов пе-
редней доли гипофиза (тиреотропный, кортикотропный), муж-
ские половые гормоны, гормон желтого тела яичника, коры
надпочечника. Кроме того, делаются серьезные попытки поды-
скать биологические методы оценки для некоторых препара-
тов, точно не подходящих под название гормональных; это
относится главным образом к препаратам против злокаче-
ственного малокровия и так называемым гипотоническим, сни-
жающим кровяное давление. Само собой разумеется, что точ-
ность методов оценки за последние 10 лет значительно воз-
росла.
Органотерапевтические препараты чаще, чем галеновые,
должны быть проверяемы периодически, так как хранение от-
зывается на них пагубно (особенно на жидких формах). Не-
редки случаи, когда прекрасный препарат через 5—6 месяцев
начинает давать вдвое меньший эффект или даже теряет его
вовсе. В клинической литературе и в практической деятель-
ности нередко приходится встречаться с примерами отсутствия
активности инсулина, несколько месяцев назад дававшего пре-
красный эффект. Подобные факты установлены и для неко-
торых других препаратов.
Особые свойства препаратов эндокринных желез приняты
в° внимание последним (VII) изданием Фармакопеи: в то
нремя как на несколько сот галеновых препаратов и сырья
миологическая оценка предписывается в шести случаях, из
четырех органотерапевтических препаратов — тиреоидина,
15
адреналина, инсулина и питуитрина — три последних подле-
жат обязательному биологическому анализу.
В число препаратов, обследуемых биологическим путем,
прочно вошли витаминные препараты. Успехи в изучении хи-
мии витаминов за последние годы чрезвычайно велики; из-
учены противоцынготный и противорахитический витамины,
витамин А и др. Клинические данные, однако, как и в случае
гормональных препаратов, не смогли заменить или исключить
методов биологических, и витаминные препараты, особенно
не химически чистые, стандартизуются биологически. Работа
с этими препаратами Выросла в самостоятельную область и
перешла из рук фармакологов в руки биологов, оставаясь по
существу, конечно, фармакологической. Как и для эндокрин-
ных препаратов, методы биологической оценки для витамин-
ных препаратов являются господствующими.
Синтетические продукты, казалось бы, исключают всякую
мысль о необходимости биологического анализа. Тем не ме-
нее и для отдельных представителей синтетических препара-
тов биологический анализ является необходимым. К этим пре-
паратам относятся продукты сальварсанного ряда, имеющие
столь большое практическое значение.
Всякое применение лекарственных ‘веществ имеет целью
вызвать тот или иной терапевтический эффект у больного.
Терапевтический (клинический) эффект складывается из со-
стояния больного организма, его реакции на лечебное сред-
ство и свойств последнего не только качественного, но и ко-
личественного характера. Состояние больного учитывается
врачом; реакция организма зависит как от его свойств, так и
от терапевтической ценности препарата; третье условие цели-
ком относится к препарату. Отсюда ясна важность для кли-
ники иметь уверенность если не в абсолютном, то все же в
более или менее определенном постоянстве действия применяе-
мого препарата. Она дает врачу возможность правильной
оценки реакции больного организма на вводимое вещество,
позволяет сделать правильное заключение о некоторых осо-
бенностях данного больного, позволяет выбрать нужную дозу.
Легко представить себе могущую быть в противном случае
картину осложнения у постели больного. Применяя, например,
тот же в процентном отношении настой наперстянки, но изго-
товленный из разных листьев, отличающихся друг от друга
по содержанию действующих начал, врач легко может отне-
сти недостаточность терапевтического эффекта на изменение
реакции сердца на дигиталис; имея в руках препарат инсулина
неизвестной силы, врач будет не в состоянии ориентироваться
в дозе и, применяя, например, недостаточно активный пре-
парат, может в особо резких случаях комы рисковать жизнью
больного. Весьма вероятным является предположение, что не-
которые случаи повышенной сопротивляемости или восприим-
чивости по отношению к тем или иным препаратам могут
16 ь
быть отнесены на счет одного из случаев чрезвычайных коле-
баний содержания действующих начал в последних.
• Имея уверенность в постоянстве эффекта препаратов, по
изменению реакции организма врач сделает правильный вы-
вод о переменах в состоянии больного, что даст возможность
назначить в дальнейшем правильное лечение.
Несмотря на кажущуюся справедливость вышесказанных
положений, на практике очень часто приходится встречаться
с заключениями, основанными на противоположной точке
зрения. Сплошь и рядом при применении у двух разных боль-
ных разных серий одного и того же препарата (стандарти-
зованного) клиницисты по разности эффекта делают заклю-
чение о неравноценности отдельных серий препарата вместо
того, чтобы отнести это на счет реакции больных. Особенно
часто такие выводы приходится слышать при применении
органотерапевтических препаратов, проявление действия ко-
торых может зависеть от чрезвычайно сложного состояния
внутрисекреторного аппарата больного.
Ставя себе целью создать для клиники препараты с посто-
янным терапевтическим эффектом, биологическое испытание
может и должно опираться только на клинику, итти по пути
выставляемых ею требований. Основным суждением о препа-
рате остается суждение клиники, биологический эксперимент
приспособляется к данным последней. Имея в руках препа-
рат с определенным клиническим эффектом, лаборатория
устанавливает известные качественные и количественные осо-
бенности действия такого препарата в животном эксперименте.
Далее удостоверяются в том, как получаемый эксперименталь-
но эффект меняется соответственно изменениям терапевти-
ческого эффекта. Раз установив такое соотношение, лаборато-
рия может теперь иметь суждение о новых препаратах того
же вида, может дать верное заключение об ожидаемом тера-
певтическом эффекте данного образца или пробы. Здесь в
сущности повторяется закон, установленный для применяю-
щихся в медицине химически чистых веществ или соединений:
если известно, что вещество, обладающее определенным воз-
действием на организм, имеет такое-то строение, то определе-
ние химической формулы испытуемого вещества, установле-
ние его идентичности с таким препаратом позволяют сделать
заключение о его терапевтической ценности.
Все только что сказанное о биологическом и химическом
исследовании касается, конечно, уже ранее эмпирически
вошедших во врачебный обиход веществ и препаратов.
В случаях, если бы пришлось иметь дело с совершенно неиз-
вестным веществом, первое суждение о нем дала бы, само
собой разумеется, только лаборатория, определив на живот-
ных его токсичность, предпочтительное или преимущественное
Действие на те или иные ткани или органы и т. д. То же
касается и новых химически чистых, синтетических' нрепара-
2-317 • <-ч17
тов, которые, прежде чем попасть в клинику, неминуемо под-
вергаются лабораторной проверке на животных, так как су-
ждение о возможном действии препарата по его химической
структуре, наличию тех или иных групп, той или иной форме
строения и т. д. ненадежно и недостаточно. Дальнейшие дан-
ные, в случае если новый препарат окажется клинически при-
годным, необходимые для стандартизации и оценки других
образцов однотипных препаратов, могут быть получены лишь
путем клинического испытания и последующего установления
взаимоотношений между клиникой и экспериментом на жи-
вотном.
'Общий основной принцип всякого биологического (фарма-
кологического) эксперимента и, в частности, биологической
стандартизации сводится к испытанию на живом объекте.
Живое понимается здесь в самом широком смысле этого слова.
Сюда может быть отнесен в первую очередь, конечно, целый
организм; затем идут отдельные органы — сердце, матка, поч-
ка и т. д., — поставленные в условия, возможно близкие к их
естественному состоянию в организме (переживающие органы
с воспроизведением \ кровообращения); затем — отдельные
части организма, иногда неправильно называемые в практике
органами (ухо, конечность, голова). Несколько особняком
должно быть поставлено испытание на отдельных частях
органов (матки, сердца), вырезанных полосках сосудов, участ-
ках кожи, отрезках кишечника и т. д. Понятие живого объ-
екта может быть распространено еще далее: испытание может
вестись на отдельных группах клеток. Хорошим примером по-
следнего служит испытание на форменных элементах крови,
например, вызывание агглютинации красных кровяных телец
токсальбуминами (рицином, абрином и др.), испытание сапо-
нинов на вызывание ими гемолиза красных кровяных телец
(Коберт15). При опытах над отдельными клетками можно из
принципиальных соображений отличать опыты над клеткой
как животным организмом (как это только что приведено в
примерах агглютинации и гемолиза) от опытов, в которых за-
трагивается не сама живая клетка, а входящие в нее ингре-
диенты; примером последних служит испытание окиси угле-
рода на связывание гемоглобина — красящего вещества крови
с образованием карбоксигемоглобина (Фюнер16).
Объектом эксперимента на целом организме могут б^ть
самые разнообразные представители как растительного, так
особенно и животного царства. Так, уже давно применяется
исследование дезинфицирующих свойств разных соединений
на бактериях. Лечебные сыворотки испытываются на их спо-
собность нейтрализовать токсины — продукты жизнедеятель-
ности бактерий (опыт ведется на животном, которому впры-
скиваются одновременно токсин и сыворотка). Способность
дрожжей расщеплять путем брожения сахар на алкоголь и
углекислоту была использована для испытания ряда неоргани-
18
ческих соединений (сулемы, цианистого калия, соединений
мышьяка, меди и т. п.) и хинина, которые меняют процесс
брожения в ту или иную сторону. Из животных организмов
объектом эксперимента служат черви (круглые дождевые
черви, пиявки, аскариды), амфибии (лягушки, тритоны), затем
рыбы и т. д. вплоть до целого ряда различных представителей
млекопитающих.
С развитием учения о половых гормонах очень многие
авторы предлагают пользоваться рыбами для определения
разными путями как мужского, так и женского полового гор-
монов (Хемпель 17). Из обычных лабораторных животных для
биологической стандартизации особое значение имеют крысы,
мыши, кролики и кошки. Морские свинки и собаки использу-
ются несколько реже. Делались попытки постановки опытов на
отдельных органах животных с боен (Тренделенбург 18).
Были сделаны попытки испытания некоторых средств на
получаемых при операциях отдельных органах или частях
органов человека. Таков описанный Флури19 способ испыта-
ния маточных препаратов на удаляемых во время операций
матках женщин (при выпадениях, когда матка не поражена
каким-либо болезненным процессом).
Наиболее распространены методы испытания на целых жи-
вотных. Выбор подходящих животных для биологической
оценки представляет особый интерес, так как на основании
реакции животных должны выводиться количественные дан-
ные. Животные, используемые для специальных методов био-
логической оценки, должны отвечать нескольким условиям:
1) быть подходящими для испытания данного объекта по
своей реактивной способности и по своим внешним свойствам,
2) отдельные экземпляры должны максимально соответство-
вать друг другу по весу, возрасту, упитанности, состоянию
здоровья и т. д. Сказанное лучше всего пояснит^ при-
мерами.
Пригодность данного животного для определенной мето-
дики сразу станет понятной, если мы вспомним, что различные
представители животных, даже стоящие чрезвычайно близко
один к другому, могут различно реагировать на одни и те же
яды. В качестве яркого примера может быть приведена рез-
кая разница в реакции на гистамин маток двух представите-
лей мелких грызунов — морской свинки и крысы: возбуждая
матку первых, гистамин действует на матку вторых противо-
положным образом. Далее, как на пример разницы восприим-
чивости можно указать на известный факт повышенной рези-
стентности кролика к атропину сравнительно с другими лабо-
раторными животными,— собакой и кошкой. Собаки различ-
ных пород по-разному реагируют на индийскую коноплю: не-
которые породы обнаруживают малую восприимчивость к
обычным средним дозам, тогда как другие дают от тех же
Доз картину полного расстройства мышечной координации и
2* 19
атаксию. Под влиянием гормона околощитовидных желез
кальций крови изменяется отчетливо только у собак и т. д.
Пригодность животных по их внешним свойствам, т. е. по
удобству работы на них, заставляет иногда несколько отсту-
пать от принципа выбора наиболее ярко и наиболее близко к
человеку реагирующего животного. Классический объект для,
испытания инсулина — кролик — представляет, благодаря сво-
им ушам и удобству взятия из ушных вен крови через ко-
роткие промежутки времени, неоценимые преимущества срав-
нительно с другими животными, реагирующими, может быть,
более однообразно на инсулин, чем кролики. Выбор мелких
грызунов для оценки женского гормона и петухов для муж-
ского также в значительной мере диктуется удобствами ра-
боты на этих объектах.
Интересен, например, тот факт, что, несмотря на относи-
тельную невосприимчивость кроликов к атропину (и пилокар-
пину), изолированные органы этих животный обнаруживают
скорее повышенную чувствительность по отношению к этим
ядам (Сторм ван Лёвен20).
Естественно, что, выбирая для исследования препаратов,
белладонны целого кролика, мы не можем ожидать хороших,
отчетливых, — а такие именно и нужны, — результатов; то же
самое получилось бы и в том случае, если’для исследования
’ спорыньи по оставленному теперь методу Фармакопеи СССР,
‘ где стандартом служил гистамин, мы взяли бы матку крысы
вместо морской свинки, так как при этом в качестве стандарта
применялся гистамин; известная невосприимчивость кур и
голубей к стрихнину, основанная на плохом его всасывании
из наполненного желудочно-кишечного канала (Хейнекамп 21),
служит основанием к тому, что курами в обычных условиях
не пользуются для целей испытания стрихнина и т. д.
Для соблюдения второго условия исследование всегда дол-
жно вестись на животных, возможно близких по своему со-
стоянию друг к другу, находящихся в одинаковых условиях.
Основным моментом, гарантирующим равномерность реакции
разных животных, является их здоровье: животные должны
бЬ1ть здоровыми, ибо по понятным причинам два здоровых
организма всегда будут более соответствовать друг другу, чем
‘ ' два больных. Возможно ’ меньшее уклонение отдельных экзем-
пляров друг 6т друга достигается выбором животных одного
пола и возраста. Вполне естественно, что мужские и женские
особи скорее дадут разницу в реакции, чем два представителя
одного и того же пола. Чаще всего является предпочтитель-
ным выбирать самцов, так как индивидуальные отклонения
самок всегда значительнее. Наиболее близкими по реакции
являются животные одного помета или происходящие от од-
них и тех же производителей.
Во’зраст играет очень большую роль; действие ядов, исчи-
сленное на единицу веса, будет количественно равняться для
20
взрослых и неполовозрелых животных, хотя бы одного и
того же вида. Важным фактором является выбор животных
нужного веса, нарастание которого идет до известного пре-
дела параллельно возрасту.
Выбор одинаковых экземпляров животных важен, конечно,
всегда, но особенное значение приобретает при испытаниях
на сериях животных, как это имеет, например, место при стан-
дартизации сердечных средств на лягушках или стандартиза-
ции инсулина на кроликах.
Чрезвычайно существенным моментом, в значительной мере
устанавливающим равномерную, однородную реакцию со сто-
роны животных, является выбор пищи. Пища должна быть
• одинакового состава’ и количества для всех животных, исполь-,
зуемых для данного опыта и по возможности должна подби-
раться с учетом влияния ее на реакцию животного на испы-
туемое вещество. Столь же важным условием, соблюдение ко-
торого является необходимым, является содержание живот-
ных: чистота помещения, клеток, отсутствие скученности,
температура, освещение и т. д.
В тех случаях, где эксперимент ставится по условиям ме-
тодики на патологически измененных животных, соблюдение
всех условий должно быть исключительно тщательным. С та-
кой же тщательностью должны быть соблюдены условия рав-
номерности в вызываемых искусственно патологических нару-
шениях в организме. Наиболее распространенными методами
испытания на животных, подвергнутых тем, или иным воздей-
ствиям, являются методы работы на оперированных живот-
ных (кастрация мужских и женских особей, удаление гипо-
физа, удаление надпочечников) и на животных, вскармливае-
мых авитаминозной пищей.
Все сказанное в одинаковой мере касается и тех случаев,
•когда опыт ведется не на целом животном, а только на от-
дельном органе — конечности, ухе и т. д. Для исследования'
маточных средств на матке выбирают органы, всегда находя-
щиеся в одинаковом состоянии, что достигается выбором жи-
вотных небеременных и не находящихся в состоянии течки.
На этом же основано и предпочтение здоровых животных
больным: реакция двух здоровых органов всегда даст меньшие
уклонения, чем реакция двух больных.
При работе на животных, получаемых из разных источни-
ков, когда пройсхождение их бывает трудно установить, пе-
ред проведением опыта требуется в течение некоторого вре-
мени содержать их в определенных условиях и на опреде-
ленной диэте. Методы биологического испытания на лягушках
в значительной мере зависят от вида лягушек. В условиях Со-
ветского Союза выбор одного и того же вида для всех респу-
блик с разнообразным климатом весьма затруднителен, так как
в разных широтах распространены разные виды лягушек.
21
Для исследования какого бы то ни было растительного
сырья необходима уверенность в том, что испытание пригото-
вленных из него для этой цели настоев, отваров и т. д. выя-
вит на животном характерные для исходного материала осо-
бенности. Для этого нужен для каждого отдельного случая
способ приготовления из сырья экстракта, позволяющий из-
влечь возможно полно его действующие начала, выявляющий
наиболее ярко его терапевтические свойства и особенности.
Если это почему-либо невыполнимо, то нужен выбор экстрак-
ции, извлекающей хотя и заведомо неполную сумму действую-
щих начал, а только одну какую-нибудь часть, но устанавли-
вающей пропорциональную зависимость между нею и полным
.содержанием активных веществ сырья. Подлежащие испыта-
нию готовые препараты как растительного, тай и животного
царства, включая сюда и органотерапевтические, само собой
разумеется, испытываются по возможности в том виде, в ка-
ком они поступают для анализа. Допускаемая обработка ка-
сается лишь придания им более или менее удобного для
испытания вида, причем применяемые мероприятия не должны
менять свойств испытуемого препарата. Операции над гото-
выми препаратами сводятся, таким образом, к растворению,
упариванию, частичной замене спирта водой, нейтрализации,
иногда удалению дезинфицирующих примесей и т. п.
Применение всех этих воздействий имеет целью придание
вводимым веществам наиболее удобной для усвоения и вос-
приятия формы и устранения возможности самостоятельного
эффекта со стороны растворителей, дезинфицирующих и кон-
сервирующих веществ и т. д. Крепкие растворы спирта, есте-
ственно^ вызовут раздражение не только при внутривенном и
подкожном введении или даче per os, но и при местном воз-
действии на слизистые оболочки и даже на кожу. Такие де-
зинфицирующие вещества, как формалин, хлорэтон, тимол,
карболовая кислота и т. д., сами по себе обладают фармако-
логическим эффектом и в известной концентрации могут спу-
тать или извратить картину действия испытуемого вещества.
Значительные уклонения реакции среды вводимых препаратов
в сторону кислотности или щелочности также могут изменять
эффект подлежащего стандартизации или валоризации препа-
рата. Последнее обстоятельство особенно важную роль играет
при испытании органотерапевтических препаратов, ибо мно-
гие гормоны легко выпадают из растворов при изменении
кислотности или даже нацело разрушаются (например, адре-
налин и питуитрин от воздействия щелочей).
Выбор соответствующих путей введения подчиняется обыч-
ным фармакологическим правилам, т. е. стоит в связи с целью,
которую преследует опыт, и с тем, в каком виде исследуется
препарат.
Несмотря на всю очевидность отдачи предпочтения наибо-
лее удобному пути введения, встречаются случаи, где с целью
22
точного воспроизведения способа приема больными лекарст-
венных веществ, в опыт переносят и преимущественные кли-
нические пути введения данного препарата, совершенно не
считаясь с неудобствами, сопутствующими подобному введе-
нию. Таков, например, способ испытания наперстянки на ля-
гушках путем введения препаратов per os. Насильственность
введения в связи, весьма вероятно, с общими раздражающими
свойствами дигиталиса (сапонины) ведет к тому, что у лягу-
шек наступает рвота. Для предотвращения последней реко-
мендуется впрыскивать кураре (Лендле22). При возможности
простого введения препарата под кожу такое усложнение
представляется нецелесообразным.
. При испытаниях на изолированных органах путй введения
заранее предначертаны способом изоляции: при изоляции с
воспроизведением кровообращения испытуемое вещество вво-
дится с током питательного раствора; при погружении орга-
нов в изотонический раствор (матка, кишка) препараты вво-
дятся в омывающую органы жидкость. Для червей, пиявок
и рыб иногда применяется простое погружение их в раствор
испытуемого вещества.
Биологическое испытание препаратов имеет целью дока-
зать соответствие данного образца своему назначению, соот-
ветствие определенному стандарту. Очень хорошо и показа-
тельно, когда эта цель достигается экспериментом, в котором
воспроизводятся те стороны цли та сторона действия, кото-
рые лежат в основе терапевтического применения. Здесь не
только устанавливается, что препарат отвечает принятому
для него стандарту, но одновременно каждый раз демонстри-
руется и специфическая активность образца. Этот весьма же-
лательный и удобный путь не является, однако, обязательным
для определения качества препарата. Точно так же, как вы-
водится заключение об активности препарата по химическому
анализу, устанавливающему идентичность образца и соответ-
ствующего стандарта, можно сделать вывод об этой идентич-
ности по какой-нибудь биологической реакции, не воспроиз-
водящей терапевтических свойств препарата. То, что химиче-
• ский анализ не стоит ни в каком отношении к воспроизведе-
нию терапевтической способности препарата, понятно само
собой и не вызывает ни у кого удивления, но когда соответ-
ствующее заключение делается по испытанию на биологиче-
ском объекте, не воспроизводящем лечебных свойств препа-
рата, это часто вызывает недоумение и лежит в основе кри-
тического отношения к таким методам. Такого рода взгляд,
конечно, неправилен, так как принципиально можно вполне
точно составить себе впечатление о препарате и по его каким-
либо побочным свойствам. При возможности выбора между
разными методами при прочих равных условиях следует, ко-
нечно, отдать предпочтение наиболее наглядному, рисующему
картину действия препарата. Однако целый ряд условий, ко-
23
Торым должны удовлетворять методы биологической оценки,
могут заставить отдать предпочтение каким-либо другим ме-
тодам. /
К числу таких условий, соблюдение которых при выборе
метода является необходимым, относятся потребное для про-
ведения исследования время, трудоемкость, потребность в ап-
паратуре и возможность наиболее точного объективного учета.
Вполне естественно, что экономия во времени и меньшая по-
требность в животных создают очень большие преимущества.
Небольшая затрата времени на проведение опыта крайне важ-
на еще и потому, что при испытании препаратов (и особенно
их отдельных стадий), вырабатываемых производящими учре-
ждениями, иногда требуется по производственным соображе-
ниям получение ответа в минимальный срок. Значение объек-
тивности регистрации данных опыта чрезвычайно велико уже
потому, что всякое колебание в оценке эффекта прежде всего
скажется на точности расчета активности препарата. Есте-
ственно, что, например, строя заключение ,о действии, веще-
ства по степени его судорожного действия, скорее можно
впасть в ошибку, чем выводя суждение по остановке сердца.
Естественно, что в выборе метода все эти соображения край-
не важны. Иногда в погоне за воспроизведением терапевти-
ческих свойств идут на усложнение опыта, меньше обращают
внимания на время и регистрацию и, конечно, делают ошибки.
Остается еще одно чрезвычайно важное условие, которое
должно служить решающим моментом при выборе метода:
это — специфичность реакции. Во всех случаях предпочтение
должно быть отдано тем методам, где получаемый эффект
является специфичным для данного препарата. Вполне есте-
ственно, что, например, вызывая предбеременное состояние в
слизистой оболочке небеременной матки препаратом желтого
тела и делая на этом основании вывод об активности препа-
рата, экспериментатор меньше рискует впасть в ошибку, чем
при выводе заключения об активности какого-нибудь депрес-
сорного препарата по степени снижения давления у живот-
ного. Действие гормона желтого тела на слизистую матки
строго специфично, депрессорное же действие может быть
вызвано огромным числом препаратов самого различного
происхождения.
По тому, какие изменения может вызывать испытуемое ве-
щество у подопытного объекта, биологические методы оценки
могут быть разбиты на три больших группы.
Первую из них составят вышеупомянутые опыты, имеющие
целью вызвать у подопытного животного или на отдельных
его органах тот же эффект, который ожидается от препарата
и на больном, т. е. вызвать картину терапевтического действия
препарата.
Из наиболее удачных по подбору в этом смысле способов
биологических испытаний могут служить методы оценки ма-
24
точных препаратов на матке животных или, например, инсу-
лина на его сахаропонижающую способность. Очень интере-
сен метод испытания овариальных препаратов на вызывание
у кастрированных самок мелких грызунов течки, одной из
наиболее характерных физиологических функций гормона
яичника. Адреналин испытывается измерением повышения
кровяного давления, основанном на сосудосуживающих свой-
ствах. этого гормона, — типичное свойство этого препарата,
позволяющее по нему судить о силе его воздействия и на
другие объекты, ибо сосудосуживающий эффект адреналина
идет параллельно большинству его прочих многообразных
сторон воздействия на организм.
При работе на изолированных органах последние, если это-
• возможно, выбираются так, чтобы испытание велось на органе,
служащем объектом преимущественного воздействия подлежа-
щего испытанию вещества (для маточных средств — матка, для
сердечных — сердце и т. д.).
Вторую большую- группу дадут опыты, целью которых бу-
дет вызывание картины отравления опять-таки всего орга-
низма или его отдельных органов или областей. Здесь усло-
вия могут быть разнообразными. При испытании аконитина
простб определяется доза, которая способна убить животное
определенного веса через определенный промежуток времени,
и по этому судят о терапевтической ценности препарата (спо-
соб Фармакопеи Соединенных Штатов): смертельная доза
для- животного должна лежать в определенных границах'; это
дает возможность оценивать эффективность препарата. Испы-
тывая сердечные средства, мы определяем наименьшую токсиче-
скую дозу, способную в течение определенного времени отра-
вить сердечную мышцу, и по ней заключаем о степени актив-
ности препаратов. Здесь условия сложнее: терапевтический
эффект глюкозидов сердечных средств соответствует началь-
ной стадии отравления мышцы сердца, но эта стадия по сво-
ей нехарактерности (урежение пульса, лучшее опорожнение
желудочков и т. д.) не может быть принята в качестве кри-
терия для суждения об активности испытуемого вещества.
Для эксперимента пользуются дальнейшей стадией отравле-
ния, дающей резкий, отчетливый эффект, не допускающий
возможности субъективных истолкований в ту или другую
сторону. Картина конечной степени отравления сердца — его
остановки — отвечает этому требованию вполне.
Приведенное деление испытания действия веществ по те-
рапевтическому и токсическому эффекту, конечно, искусствен-
но и носит характер чисто внешний, так как по существу в
строго фармакологическом смысле слова разницы между
терапевтическим и токсическим воздействием на клетку нет и
всякое влияние чужеродных для организма ядов на прото-
плазму сводится к частичному, так сказать, отравлению по-
следней; всякое лечебное • воздействие на организм основано
25>
»
на этом. Деление на эти две группы, однако, удобно чисто
практически, но пользоваться им можно только при условии
только что приведенной оговорки.
Третью большую группу составляют методы, имеющие
целью вызвать изменения сопротивляемости организма по от-
ношению к каким-либо ядам. Само собой разумеется, что
пригодными являются такие методы, где изменение сопроти-
вляемости организма к тем или иным веществам идет парал-
лельно лечебным свойствам данного испытуемого вещества.
Примером такого способа может служить определение повы-
шения сопротивляемости белых мышей к ацетонитрилу, кото-
* рое наступает у них от введения препаратов щитовидной ч
железы. По соотношению между этой дозой и дозой, устано-
вленной для среднего хорошего препарата, судят о-качестве
исследованного образца. В отдельных случаях речь может
итти о полном уничтожении действия какого-либо яда испы-
туемым веществом. Таково, например, испытание препаратов
белладонны на содержание в них алкалоидов путем опреде-
ления уничтожения пилокарпинового эффекта на слюнные же-
лезы. Пилокарпин и атропин (гиосциамин) представляются
антагонистами по действию на последние: первый возбуждает
секрецию, второй прекращает ее.
Ввиду того что данные опытов на животном объекте не
могут считаться абсолютными, всегда остается возможность
отнести часть эффекта на индивидуальные особенности под-
опытного животного, — нужно было найти какое-то дополни-
тельное условие, устраняющее зависимость результата от
свойств данного животного. Правда, тут же следует огово-
риться, что реакция животного организма весьма постоянна
для животных одного и того же вида; животные, вообще го-
воря, реагируют на яды гораздо постояннее людей. Постоян-
ство эдо увеличивается в связи с местом животного на зооло-
гической лестнице: чем ниже стоит данный вид, тем постоян-
нее реагируют на различные яды отдельные представители
этого вида. Это обстоятельство заставляет — в случае возмож-
ности выбора, конечно, — отдавать предпочтение животным,
стоящим на более низкой ступени развития.
Такое постоянство реакции животных, повторяем, не носит
абсолютного характера, всегда возможны уклонения в от-
дельных случаях. Для устранения этих уклонений найдены два
пути. Первый заключается в пользовании при каждом опыте
целым рядом животных и определении среднего эффекта на
всех взятых животных. Второй путь состоит в сравнении эф-
фекта от испытуемого вещества с эффектом от стандартного
препарата, обладающего заведомо постоянным действием на
том же объекте. Примером первого служат испытания всех
сердечных средств на лягушках, которых для этой цели бе-
рут сериями; примером второго — испытание маточных средств
на матке, где эффект от подлежащего оценке препарата срав-
26
нивается на том же отрезке матки с эффектОхМ от стандарт-
ного препарата. В случаях, когда самцы лягушек находятся
в одинаковых условиях, имеют одинаковый средний вес,
можно в течение некоторого времени (несколько недель)
практически говорить об их весьма близкой реакции на сер-
дечные глюкозиды, и в таких случаях средний эффект воз-
действия на серию лягушек приобретает характер довольно
большой точности. Более продолжительное хранение лягушек,
особенно в дереходное время года (весна, а также лето, когда
резистентность их сильно повышается), лишает эксперимен-
татора такой уверенности и заставляет его прибегать к про-
верке силы сопротивляемости животных. Для этой цели поль-
зуются стандартным препаратом, не теряющим от времени
своей силы, установленной на лягушках же в определенных,
если так можно выразиться, стандартных условиях. Воздей-
ствуя таким образом препаратом на группу лягушек из того
же запаса, из которого они берутся для стандартизации, су-
дят,о степени их сопротивляемости, вычисляя в случае ее из-
менения ее отношение к норме. Из только что сказанного
вытекает разница в применении стандарта в этом случае срав-
нительно с описанным выше примером стандартизации на
матке: в одном случае стандарт применяется непосредственно
на том же объекте, в другом — стандартным препаратом
определяется средняя сопротивляемость ряда животных, при-
чем стандарт испытывается на самостоятельном объекте, а не
на тех, на которых ведется испытание исследуемых образцов.
В опытах на лягушках считалось возможным обойтись иногда
без стандартного препарата; в опытах, подобных испытанию
маточных препаратов, этого сделать нельзя. Иными словами,
в некоторых случаях за стандарт, за мерило, может быть
принята средняя сопротивляемость животных. Так же, напри-
мер, обстоит дело и со стандартизацией инсулина на мышах,
где стандартный препарат впрыскивается равновеликому ко-
личеству контрольных мышей.
В самом начале уже было указано, что методами, осно-
ванными на определении действия по ряду опытов без срав-
нения со стандартом, пользуются лишь в тех случаях, где
стандартного препарата почему-либо еще нет. С получением
последнего он всегда применяется во всех исследованиях.
Некоторые виды даже высокостоящих животных, пови-
димойу, могут обладать очень постоянной реакцией на опре-
деленные яды. К числу таких животных могут быть отнесены
кошки при испытании препаратов наперстянки, на которых
при расчете вводимых количеств яда на килограмм веса жи-
вотного получаемые данные в среднем дают очень близкие
Друг к другу цифры. Противоположный пример: на двух кро-
ликах одинакового веса, пола и возраста в аналогичных усло-
виях опыта получить от адреналина равновеликого подъема
•кровяного давления почти невозможно; начальная высота кро-
27
вяного давления, индивидуальные колебания в реакции на
адреналин и тому подобные причины всегда дадуТ себя знать
и делают поэтому неизбежным применение в каждом опыте
сравнения со стандартом. Что же касается изолиррванных или
переживающих органов, например, матки,‘то получить сколь-
ко-нибудь количественно сходный эффект на двух разных
объектах представляется уже почти совершенно невозможным.
Кроме ряда всяких привходящих причин (разница в степени
травматизации при выделении органа, величина .взятого от-
резка, время от смерти животного до начала опыта и т. д.),
сущность этого обстоятельства заключается в том, что жиз-
ненные условия для переживающих органов создаются искус-
ственно. Как бы хорошо ни был сконструирован прибор, как
бы тщательно каждый раз ни соблюдались все необходимые
детали, создание в двух отдельных случаях совершенно оди-
наковых условий невозможно. Сказывается все это настолько
р?езко, что даже два рога одной и той же матки морской •
свинки (обычно опыт ведется на одном роге) никогда не* бу-
дут отвечать одинаковой реакцией на одну и ту же дозу ве-
щества. Этим еще раз подчеркивается необходимость приме-
нения стандартных препаратов. «
Отдельную группу проверки данных стандартизации со-*
ставляют методы, где в качестве контроля берутся животные,
поставленные в иные сравнительно с подопытными условия.
Таковы способы, основанные на изменении сопротивляемости*
организма: животные, получающие тиреоидин с ацетонитри-
лом, контролируются животными, получающими только ацето-
нитрил. Авитаминозно вскармливаемые крысы служат контро-
лем для животных, получающих безвитаминную пищу с доба-
влением рыбьего жира, и т. д. Сюда же должны быть отне-
сены те испытания, где контрольные животные находятся
просто в естественных, обыкновенных, условиях.
При испытании некоторых веществ, на которые подопыт-
ные животные реагируют очень непостоянно, приходится при-
бегать к своеобразному приему, а именно испытывать сопро-
тивляемость животных по отношению к стандарту через неко-
торое время после испытания на них неизвестного образца
(речь идет о тех случаях, где в течение самого опыта приме-
нение стандарта исключается по тем или иным причинам —
кумуляция и т. п.). Примерами такого рода служит испытание
на кроликах сахаропонижающей способности инсулина, испы-
тание на мышах и крысах препаратов женского полового
гормона. И тут, и там на подопытных животных по истече-
нии определенного промежутка времени должен быть испы-
тан стандартный препарат. В таких случаях обычно одной
половине животных вводят испытуемый препарат, другой —
стандартный, а после перерыва вводят животным препараты в
обратном порядке. • ,
2ь
В случаях, где требуется применение стандарта — будь то
проверка резистентности подопытных животных или пользо-
вание стандартом в прямом смысле этого слова, — выбор ве-
щества для этой цели может быть основан на двух принци-
Пах: первым является применение химически чистых веществ,
вторым — применение стандартных препаратов, изготовляемых
из того же вида сырья, к которым относится подлежащий
'испытанию препарат. Не останавливаясь пока подробно на
примерах, теперь же можно сказать, что тот и другой вид
стандарта имеют и положительные, и отрицательные сто-
роны. Чистые химически вещества хороши благодаря абсо-
лютному постоянству вызываемого ими эффекта и плохи
именно по своей чистоте: эффект их иногда не будет в точ-
ности соответствовать эффекту препаратов растительного и
животного царства. Стандартные экстракты, однородные
испытуемым веществам, имеют преимущества и недостатки в
обратном соотношении; плюсом их применения является од-
нородность их действия со стандартизуемым
минусом для них будет невозможность получения от двух
разных экстрактов абсолютно постоянного эффекта. Разно-
родность исходного материала всегда может в той или иной
г форме изменить силу действия стандартного препарата. При
’ применении стандартных препаратов на целом животном в
сущности определяется сила сопротивляемости подопытных
животных, почему естественно каждый раз проверять послед-
нюю по отношению именно к данной группе испытуемых ве-
ществ. Как показывает опыт, сопротивляемость животных по
препаратом,
отношению к различным ядам, даже действующим на один и
тот же объект, может меняться различным образом: повы-
шаясь по отношению к одним, она может понижаться по от-
ношению. к другим и обратно.
Успехи химии гормонов в последнее десятилетие позво-
ляют пользоваться в качестве стандартных препаратов синте-
тическими продуктами в том случае, если путем синтеза по-
лучаемся то же • вещество, которое в химически чистом виде
. выделяется из соответствующего сырья (железы, моча и т. д.).
Все стандартные препараты должны отвечать одному не-
4 пременному условию: обладать не подверженной никаким из-
, Щенениям активностью в течение того времени, на которое
^рассчитано их применение. Ввиду того что сухие вещества
являются более стойкими, в большинстве случаев стандарт-
ные' препараты стараются иметь в сухом виде. Нужные для
испытания растворы готовят или ex tempore, или же загото-
вляют на срок, в течение которого может быть гарантирована
стойкость раствора. Обычный способ хранения стандартных
препаратов — запаянная ампула в эксикаторе над серной кис-
лотой или пятиокисью фосфора. К жидким стандартным пре-
паратам прибегают лишь в редких случаях, и именно тогда,
29
когда получение соответствующего продукта в сухом виде
по химическим или техническим условиям невозможно.
Для всех биологических стандартизируемых препаратов
принято условное выражение активности в так называемых
единицах действия, кратко обозначаемых ЕД. Раньше под
1 ЕД какого-либо препарата понимали то количество актив-
ных начал, которое является способным вызвать определен-
ный эффект, доступный определению. Ввиду того что иногда*
увеличение дозы не сразу дает увеличение эффекта или, дру-
гими словами, один и тот же эффект может быть получен от
нескольких, в особенности близких одна другой доз, обычно
при установлении ЕД включалось требование определения
наименьшей из доз, вызывающей требуемый эффект. Такое
определение ЕД, конечно, является достаточно расплывчатым
уже потому, что колебания в картине «определенного эффек-
та» могут быть очень значительными в зависимости от опыта
и экспериментатора, различных неизбежных колебаний в со-
стоянии животных в разных странах и т. д. В связи с
этим возникали различные трудности и противоречия в опре-
делений активности и терапевтической ценности однц^ и тех
же препаратов. С тех пор, как представилась возможность
иметь стандартные препараты, перешли на весовое или объ-
емное определение ЕД, понимая под одной или несколькими •
ЕД то количество активности, ту сумму действия, которая за-
ключается в определенном весовом или объемном количестве
стандартного препарата. Такое определение позволяет каж-
дому исследователю, где бы он ни находился и на каких
объектах ни работал, правильно оценить значение ЕД, испы-
тав действие нужной дозы стандартного препарата. Понятие
ЕД и стандарта ранее было установлено для сывороток.
Количество ЕД, потребных для однократной лечебной до-
зировки, может для разных препаратов колебаться в огром-
нейших пределах. За 1 ЕД принимают доступное в экспери-
менте определению и легко измеримоё действие. Поэтому ЕД
для гормона, вызывающего течку, очень мала, так как опыт
ставится на мышах или крысах, и достаточно велика для гор-
мона околощитовидных желез, где опыт проводится на соба-
ках. Количество мужского полового гормона, потребное для
получения ясной реакции на петухах, относительно очень ве-
лико, а пролана для развития яичника очень мало. В резулЬ-.
тате этого различные препараты назначаются больным в до-
зах от долей ЕД до десятков и даже сотен тысяч ЕД.
В настоящее время в большей части всех методов биоло-
гической оценки за 1 ЕД принимается сумма эффекта, которой
обладает определенное количество стандарта. Лишь при не-
возможности иметь стандартный препарат прибегают к ЕД,
основанным на определении некоторого эффекта без сравне-
ния со стандартом. Обычно это имеет место при введении
в практику новых методов.
30
После всего уже сказанного методы биологической оценки
можно разбить на ряд групп. Прежде всего можно методы,
включающие в себя сравнение эффекта от испытуемого пре-
парата с эффектом от стандартного, считать за абсолютные;
незначительную труппу методов, в которых оценка препарата
выводится прямо из опыта по определению наименьшей дозы,
вызывающей требуемое действие, составят методы относитель-
ные (Фюнер16). В абсолютных методах стандартом является
само животное и те условия, в которых оно находится. По
Бэрну23, можно разбить все методы биологической стандар-
тизации на методы с количественной реакцией, где данные
каждого опы^а принимаются во внимание при расчете, и ме-
тоды с качественной реакцией, где расчет основывается на
данных части подопытных объектов. Примером метода с реак-
цией количественной является испытание веществ группы на-
перстянки, где используются данные, полученные на каждой
кошке; примером метода с качественной реакцией — опреде-
ление дозы инсулина, дающей судороги у 50% подопытных
мышей.
Некоторые методы биологического испытания не ограничи-
ваются, собственно, опытом с непосредственно вытекающими
из него результатами, а комбинируются с другими методами
исследования. По большей части суждение о данном испы-
танном веществе вытекает прямо из опыта; изменение сосу-
дистой реакции, падение или подъем кровяного давления,
остановка сердца, сокращение отрезка кишки или матки, су-
дороги, смерть животного и т. д. —все это представляет ко-
нечный результат, по которому судят об испытанном объекте.
Некоторые методы преследуют цель получения в организме
известных изменений, регистрацию которых биологический
опыт уступает каким-либо другим методам (химическому,
гистологическому и др.). В качестве ярких примеров таких
комбинированных методов могут быть приведены способы
биологического испытания инсулина и гормона женской поло-
вой сферы. При стандартизации инсулина вызываемое послед-
ним падение сахара в крови определяется при помощи микро-
химических методов; препараты гормонов яичника оцениваются
по их способности вызывать у мелких кастрированных гры-
зунов течку, которая определяется путем микроскопического
исследования. Эти и подобные им методы все же должны це-
ликом быть отнесены к методам биологических исследований
в том смысле, как это понимается для всех прочих методов,
так как основным моментом остается общий для всех спосо-
бов биологической оценки признак: вызывание изменений на
живом объекте. Химическое и гистологическое исследования
являются тут только подсобными операциями.
Данные биологического опыта могут регистрироваться еще
некоторыми другими способами, например, определением изме-
нения объема выделяемой мочи или веса животного или под-
вергнувшегося изменению органа. Вэрн2.3 очень советует поль-
зоваться весом как фактором определения активности даже
в тех случаях, где вес заменяет более детальное гистологиче-
ское изучение органа. По этому автору, методы, основанные
на взвешивании, дают очень хорошие результаты и заслужи-
вают предпочтения перед другими.
При желании сравнить методы биологических исследова-
ний с общеупотребительными методами количественного ана-
лиза, применяющимися в химии, можно найти целый ряд ана-
логий. Способы, предъявляющие к испытуемым веществам
требование в такой-то дозе убить животное такого-то веса
или в такой-то дозе на единицу веса вызвать наступление та-
кого-то эффекта, могут быть приравнены к весовому анализу.
Определение наименьшей токсической или наименьшей, вызы-
вающей изменение сопротивляемости дозы соответствует ме-
тоду предельных разведений. Способы, в которых произво-
дится сравнение со стандартом, больше всего подходят к ко-
лориметрическим определениям. Испытание лечебных сыворо-
ток на их лечебный эффект вполне соответствует титрованию:
измеряется количество, потребное для нейтрализации эффекта
другого вещества — токсина; аналогия может быть еще углу-
блена сравнением экспериментального животного с индикато-
ром.
При проведении биологических испытаний, само собой ра-
зумеется, должны быть соблюдаемы все правила физиологиче-
ского эксперимента. Особенное внимание должно быть обра-
щено на кумуляцию ядов и сенсибилизацию (повышение чув-
ствительности, восприимчивости) объектов во время самого
опыта. Подлежащие необходимому выполнению условия раз-
личны для каждого отдельного случая, почему они будут разо-
браны при описании отдельных методов.
Всякий метод биологической оценки может иметь реальное
значение лишь постольку, поскольку получаемые при его по-
мощи данные удовлетворяют известной степени точности. Пе-
дантичное соблюдение всех обычных условий опыта может
гарантировать эту точность лишь тогда, когда сам по себе
метод является достаточно точным. Поэтому при введении ка-
кого-либо нового метода в практику предварительно нужно
убедиться в его точности, установив предел возможных оши-
бок и потребность в числе параллельных экспериментов, не-
обходимых для гарантии определенной точности. В каждом
методе ошибочные данные могут явиться результатом случай-
ных ошибок, связанных с неудачами, небрежностью экспери-
ментатора и т. д., и систематических ошибок, зависящих от
самого метода. Изучение точности методик биологической
оценки проводится методами вариационной статистики.
В большом числе параллельных опытов определяются необ-
ходимые моменты для соответствующих расчетов, так на-
32
зываемое среднее отклонение, стандартное отклонение, ве-
роятная ошибка, коэфициент корреляции и т. д. Изложение
математического анализа данных опыта, как совершенно спе-
циальное и обычно фармако логам мало знакомое, здесь опу-
скается.
Как уже было указано, одним из самых главных моментов,
обеспечивающих точность получаемых данных, является при-
менение стандартных препаратов.-При изучении точности ме-
тодов всегда является необходимым построение кривых, отра-
жающих изменение в эффекте в зависимости от изменений
концентрации изучаемого вещества. Эти кривые строятся таким
образом, что на оси абсцисс откладываются количества взя-
того для опыта вещества, а на оси ординат отмечается коли-
чественно выраженный вы- ~
званный этими дозами эффект.
Линия, соединяющая точки 913' /
пересеченияперпендикуляров, во /
восстановленных в указанных 10. 1
точках осей абсцисс и орди- /
нат, будет характеризовать е0~ I
собой изменения в эффекте so /
в зависимости от доз. Вполне . /
понятно, что кривые для раз- /
ных препаратов, действую- 311 /
щих даже на один и тот же J
объект, могут между собой t0. J
не совпадать. Практически
пригодными будут те методы, ° 2 k 6 в
Рис. 1. Кривая смертности лягушек
в зависимости от дозы (по Тревэну).
На оси абсцисс отложены дозы t-rae
Digitalis, на оси ординат — процент
гибнущих от данной дозы лягушек.
в которых соответствующие
кривые окажутся возможно
более отвесно поднимающи-
мися вверх. В таких случаях
можно говорить о прямой за-
висимости между увеличением дозы и изменением эффекта.
Более пологие кривые характеризуют собой относительно
небольшое увеличение эффекта в зависимости от увеличе-
ния доз. Ступенчатый характер кривой указывает на то, что
несколько последующих, постепенно увеличиваемых доз
дают одинаковый результат. Если кривая идет параллельно
оси абсцисс, это говорит о том, что увеличение доз неспо-
собно увеличить эффекта. Обычно такой характер кривые при-
обретают тогда, когда в опыте имеется действие максимальных
доз, дальнейшее увеличение которых результата изменить не
может. Это имеет, например, место тогда, когда целью опыта
является смерть подопытных животных или сокращение мы-
шечного органа и т. д. В отдельных редких случаях продол-
жающееся увеличение дозы может вызвать обратный эффект,
возбуждение органа или их функции может смениться угне-
тением, что на кривой выразится ее падением.
а — ан
33
На рис. 1 приведена известная кривая смертности лягушек
от препаратов наперстянки (Тревэна 24). Из рассмотрения этой
кривой вытекает, что увеличение смертности нарастает про-
порционально дозе в средней части кривой.
Изучение кривых позволяет установить ту степень эффекта,
к которой следует стремиться для получения отчетливых дан-
ных, позволяющих улавливать изменения в дозе. Для кривой
Тревэна наибольшая точность будет получена от доз, дающих
смертность в пределах 50% подопытных животных.
Кроме значения изучения самой методики, анализ кривых
концентрации — действия имеет огромное значение при вы-
боре стандартного препарата. Различная степень чистоты, рас-
творитель и т. д. могут изменять характер действия испытуе-
мого и стандартного препаратов, результатом чего может
явиться разный характер соответствующих кривых.
Нетрудно представить себе ошибки, возникающие в тех
случаях, когда кривые действия стандартизуемого веще-
ства и стандарта не идут параллельно друг другу. Допустим,
что в опыте на изолированной (переживающей) матке мы уста-
новили, что определенные дозы испытуемого препарата и стан-
дарта дают одинаковые по интенсивности сокращения; из этого
может быть сделано заключение о силе испытанного препа-
рата. Если теперь увеличение дозы стандарта на 50% даст
увеличение эффекта вдвое, а для испытуемого препарата для
получения такого же действия потребуется увеличение перво-
начальной дозы вдвое, то экспериментатор, взяв для сравнения
эти две дозы, получит иное суждение о препарате сравни-
тельно с теми, которые он составит от сравнения двух первых
доз. Сравнение на высоких сокращениях даст цифры меньшие,
чем на низких; легко, конечно, представить себе и обратные
соотношения, когда скорость нарастания эффекта будет более
быстрой для испытуемого препарата. В случаях, когда кривые
будут совпадать для обоих препаратов, ошибки, подобные
приведенным выше, не будут иметь места.
Для облегчения сравнения кривых часто прибегают к отло-
жению на оси абсцисс не непосредственно доз вещества, а их
логарифмов. Благодаря этому кривые приобретают характер
прямолинейно пробегающих под некоторым углом по отно-
шению к оси абсцисс линий.
Ценнейшим качеством биологических методов исследова-
ния, кроме ряда уже указанных выше преимуществ, остается
их необычайная чувствительность: В абсолютных цифрах для
многих веществ (особенно для алкалоидов, гормонов и вита-
минов) не редкость встретить совершенно отчетливый эффект
от миллионных разведений. В качестве примеров можно при-
вести несколько наудачу взятых цифр: стрихнин в дозе
0,002 мг вызывает у небольшой мыши судороги; 0,0002 мг
сернокислого атропина и даже 0,00002 мг бромистоводород-
ного скополамина еще способны вызвать расширение зрачка
34
•у кошки; разведения адреналина в отношении один к десят-
кам и даже сотням миллионов могут давать отчетливые суже-
ния сосудов изолированного уха. На живых объектах можно
улавливать разницу в действии, достигающую ничтожных до-
лей миллиграммов, причем разница эта может быть отмечена,
совершенно отчетливо. При исчислении количества гормонов
и витаминов, потребных для получения определенного дей-
ствия, очень часто приходится прибегать к понятию у, т. е.
одной тысячной доли миллиграмма. На приводимых в даль-
нейшем кривых ясно будет показана высокая чувствитель-
ность матки морской свинки к ничтожным количествам гор-
мона задней доли гипофиза.
Выше было упомянуто огромное значение методов биоло-
гической оценки для клиники. Очень скоро оказалось, что эти
методы могут быть с успехом использованы и для других це-
лей. Прежде всего биологическая проверка активности при
изыскании способов выделения активных препаратов (осо-
бенно гормональных) в некоторых случаях не только помогает
научно-исследовательской работе, но иногда решает успех
работы. Испытанием различных фракций препаратов устана-
вливается правильность или ошибочность избранного пути по-
лучения препарата. Огромное значение, далее, приобрели ме-
тоды биологической оценки в клинике в качестве диагности-
ческих методов (особенно в клинике эндокринных заболеваний).
Данные количественного определения содержания в крови
и моче некоторых гормонов во многих неясных случаях могут
решить вопрос о природе данного заболевания. Вполне есте-
ственно, что определение ничтожных количеств активных на-
чал, доступное методам биологической оценки, используется
также и с судебномедицинскими целями. Определение это не
обязательно касается «ядов» в специфическом смысле этого
слова, но может иметь место и для таких совершенно «неядо-
витых» веществ, как пролан или гормон, вызывающий течку
(женский половой гормон). Устанавливая наличие в пятнах
крови гормонов, судебномедицинское исследование может уста-
новить происхождение этих пятен от беременных и т. д.
Описание качеств биологических реакций было бы, конеч-
но, неполным, если бы были оставлены без внимания те отри-
цательные стороны, которые, без сомнения, в той или иной
степени им свойственны. Существеннейшим недостатком опы-
тов на животных остается все-таки их некоторая неточность.
Сравнивая результаты' параллельных испытаний одного и того
Же вещества, поставленных на однородных объектах, можно
всегда отметить колебания в полученных результатах в ту или
Другую сторону. Размер колебаний различен в разных слу-
чаях. Иногда он не превышает 5%, иногда может быть около
10%, иногда даже достигает 20%, несмотря на тщательное и
Полное соблюдение всех условий опыта. Ошибки эти неиз-
бежны, так как являются следствием работы на живом
объекте, способном давать в каждом отдельном случае укло-
нения от средней нормы.
Процент ошибки (до 20—25) будет далеко не таким значи-
тельным, если мы припомним, что без помощи биологического
анализа мы можем пропустить случаи, в которых колебания
в содержании действующих начал, а соответственно и в вызы-
ваемом данным веществом эффекте, могут достигать не только
300—400% (наперстянка), но даже и 3 000% (спорынья) и
2 000% (строфант).
Вторым серьезным недостатком некоторых биологических
методов можно считать относительную произвольность в су-
ждении о результатах, полученных путем опыта. Недостаток
этот не носит общего характера: опыты, в результате которых
остаются кривые или данные взвешивания, титрования или ги-
стологического исследования, представляющие собой докумен-
тальные данные, могут быть отсюда исключены, так как обсу-
ждение кривых доступно всякому и не зависит от одного
экспериментатора. Другое дело, когда конечным моментом
воздействия яда являются такие факты, как наступление су-
дорог (инсулин на мышах), расширение или сужение зрачка
(адреналин, скополамин, атропин, физостигмин и т. п.), пара-
личи, атаксия (индийская конопля), изменения в окраске —
вообще явления, протекающие лишь некоторое время и даю-
щие почву для субъективных истолкований. При обсуждении
этого недостатка необходимо помнить, что биологический
эксперимент, как и всякий другой, требует со стороны экспе-
риментатора известного навыка и опыта. В руках опытного
химика всегда будут получаться лучшие, более точные резуль-
таты, чем в руках мало опытного. Что же касается самой (воз-
можности получения расходящихся результатов, то таковая
в равной мере существует и при химических реакциях (а с
ними именно и идет сравнение):, стоит только вспомнить о ко-
лориметрических реакциях.
> К числу неудобств биологических методов исследования
может быть отнесена еще и их сравнительная дороговизна;
стоимость животных, их содержание, корм, уход за ними
и т. д. делают эту методику доступной лишь специальным лабо-
раториям и требуют значительных затрат.
Очень часто экспериментатору приходится иметь дело не
с одним каким-либо веществом, а с препаратом, представляю-
щим собой смесь целого ряда веществ. Чаще всего это мо-
жет встретиться при испытании новых препаратов неизвест-
ного состава, но может иметь место и при оценке давно во-
шедших в практику препаратов. Какая-либо смесь, содержащая
в себе вещество, которое лучше всего может быть определено
биологическим путем, может быть исследуема на количествен-
ное содержание этого вещества. Таков, например, общеприня-
тый раствор новокаина с адреналином. Кроме общих сообра
жений о возможности антагонистических и синергетических
36
взаимоотношений входящих в состав смеси веществ, исследо-
вания такого рода должны обязательно проводиться с усло-
вием учета возможной сенсибилизации. Вопрос этот имеет
особо важное значение при испытании органотерапевтических
препаратов. Из многочисленных работ школы Абдергальдена 25
о действии оптонов * и работ целого ряда авторов (Ромейс26,
Адлер27, Саргин28 и др.) вытекает с полной очевидностью
факт усиления действия отдельных гормональных экстрактов
в смеси с другими гормонами или даже продуктами расщеп-
ления белковой молекулы (протеиногенные амины, амино-
кислоты и т. д.). Факт этот имеет место и в тех случаях,
когда добавляемые к основному действующему началу гор-
моны или вышеупомянутые вещества являются сами по себе
индиферентными по отношению к объекту действия основного
вещества. В случае, если в смеси имеется комбинация двух и
более гормональных экстрактов, вопрос о биологической
оценке таковых делается особенно сложным. Хорошим приме-
ром таких сложных препаратов могут служить препараты типа
астмолизина, состоящие из комбинации нескольких гормональ-
ных препаратов. Судить по получающемуся в эксперименте
эффекту о содержании в таких препаратах того или иного
ингредиента довольно трудно, использовать же целиком дан-
ные опытов на животных для клиники не всегда возможно
ввиду сложности ожидаемого эффекта. По существу в таких
случаях биологическое испытание сможет дать во всяком слу-
чае больше, чем химическое, которое в подобных примерах
не сможет дать вообще ничего. *
Отдельно следует упомянуть о возможных ошибках при
работе на целом животном. Животные, как показали знаме-
нитые работы Павлова и его учеников, способны в силу вы-
работки у них условных рефлексов реагировать на отдельные
раздражители из одной цепи наступлением одной и той же
реакции, причем бывает безразлично, какой из раздражителей
будет применен. Если животное привыкло получать пищу, вы-
зывающую выделение слюны определенного состава, на метал-
лической тарелке, то как сама пища, так и ее вид, стук метал-
лических тарелок и т. д. могут вызвать отделение слюны соот-
ветственного состава. Аналогия этому явлению была замечена
и при более сложных опытах. Подкожное введение собаке
морфина действует на животное усыпляюще; частое повторение
опытов ведет к выработке условных рефлексов, и через неко-
торое время введение под кожу тому же животному простого
физиологического раствора будет вызывать сон, подобный на-
ступающему от морфина (Крылов 2Э). Далее оказалось, что про-
стой укол без введения чего бы то ни было или даже один
вид шприца способен вызвать то же действие.
* (Элтонами Абдергальден назвал препараты, содержащие выделенные
им продукты аутолиза желез внутренней секреции.
37
Установление данного факта имеет прямое значение для
методов биологических испытаний; при всех исследованиях на
целых животных необходимо помнить о сказанной возможно-
сти с целью избежать ошибочного признания годности препа-
рата даже в том случае, когда он на самом деле и не обладает'
достаточным фармакодинамическим эффектом.
Постепенное проникновение в жизнь методов биологиче-
ской оценки сырья и препаратов началось уже давно. Не оста-
навливаясь подробно на истории развития всего учения, ука-
жем только, что уже в 1866 г. появилась работа Фагге и Сти-
венсона 30 о биологическом испытании ядов органического
происхождения и, в частности, дигиталина.
Собственно стандартизация препаратов биологическим пу-
тем была впервые предложена для препаратов наперстянки
одновременно в Европе и Америке Жаке31 и Хаутоном32:
в 1898 г. В дальнейшем вопрос о биологической стандартная*
ции стал двигаться вперед гигантскими шагами, и в настоящее
время последняя является общепризнанной.
Вначале многообразие предложенных методов и определе-
ний ЕД затрудняло введение биологической проверки в Фар-
макопею как обязательного мероприятия в некоторых случаях.
Первой на этот путь вступила Фармакопея Соединенных Шта-
тов, принявшая в IX издании ряд обязательных биологических
испытаний для наперстянки, строфанта, морского лука, ако-
нита, индийской конопли и адреналина. О том, что это введе-
ние оправдало себя и оказалось жизненным, можно судить
хотя бы по тому, что в X и XI изданиях Фармакопеи Соеди-
ненных Штатов принят, ряд новых методов, а в числе старых
сделаны лишь незначительные сокращения. За США последо-
вал СССР и ряд западноевропейских государств, причем го-
сударства Западной Европы в этом отношении отстали от
СССР, уже в 1925 г. включившего в VII издание Фармакопеи
8 методов биологической оценки. Вслед за СССР биологиче-
ские методы постепенно проникают в западноевропейские
фармакопеи — голландскую, германскую (1926), британскую
(1932) и особенно французскую (1937) и др. Следует отме-
тить, что VI издание германской фармакопеи, вышедшее
в 1926 г., т. е. на год позже VII издания Фармакопеи СССР,
включает в себя лишь один метод биологической оценки (напер-
стянки). Дальнейшие годы подтвердили справедливость реше-
ния советской фармакопеей о широком использовании биоло
гических методов.
Самым существенным моментом в вопросе объединения ме-
тодов биологической оценки следует считать международное
соглашение по этому вопросу, осуществленное гигиенической
секцией Лиги наций в 1925 г. Специальной постоянной комис-
сией по биологической стандартизации при гигиенической сек-
ции, собирающейся периодически, был одобрен ряд методов,
имеющих солидные научные основания и, что самое главное»
38
было организовано изготовление и распределение междуна-
родных стандартных препаратов. К настоящему времени дея-
тельность комиссии по биологической стандартизации полу-
чила широкое признание, и в большинстве государств органи-
зована одна или несколько государственных лабораторий, ве-
дающих вопросами биологической стандартизации и изгото-
влением государственных стандартов. В СССР имеются от-
дельные лаборатории по испытанию органопрепаратов и
витаминных препаратов. Работа по алкалоидам, галено-
вым и сальварсанным препаратам и растительному сырью
сконцентрирована главным образом в Научно-исследователь-
ском химико-фармацевтическом институте в Москве. Кроме
этих центральных учреждений, работа по биологической стан-
дартизации проводится рядом учреждений крупных городов
СССР — в Ленинграде (Научно-исследовательский фармацев-
тический институт), в Харькове (Украинский эндокринологи-
ческий институт) и др.
Изложение отдельных методов биологической оценки
должно распасться на две группы. В первую войдут методы,
включенные в официальные источники — прежде всего в Фар-
макопею СССР, а также принятые международным соглаше-
нием. Вторую группу составят методы, хотя еще и не приня-
тые в качестве обязательных, но уже имеющие практические
применения или постепенно входящие в лабораторную прак-
тику.
Описание отдельных методов удобнее начать с сердечных
средств вообще и в частности с наперстянки.
ГЛАВА II
ГРУППА НАПЕРСТЯНКИ
Вопрос об активности наперстянки является одним из ис-
ходных пунктов всего учения о биологической оценке лекар-
ственных веществ, почему он имеет наибольшее прошлое и
наиболее богатую литературу. Давным-давно осознанная и от-
меченная необходимость испытания силы действия разных об-
разцов листьев наперстянки (например, уже цитированная ра-
бота Фагге и Стивенсона, 1866 г.) повела к интенсивной раз-
работке вопроса в этом направлении в разных лабораториях,
что закончилось одновременным, совершенно самостоятель-
ным опубликованием, без взаимного влияния, двух работ по
стандартизации листьев наперстянки. Таковы уже упомяну-
тые работы Жаке 31 и Хаутона32, появившиеся в 1898 г. С тех
пор в течение уже тридцати лет вопросу о стандартизации
листьев наперстянки уделялось и уделяется в текущей литера-
туре очень много места. Сколько-нибудь подробный обзор по-
степенного развития учения об этом вопросе занял бы слиш-
ком много времени, почему уместно прямо перейти к рассмо-
трению выработанных методов стандартизации.
Все то, что к настоящему времени установлено и принято
для листьев наперстянки, в равной мере относится и к раз-
личным препаратам наперстянки.
Вполне естественно, что число предложенных различных
методов и их модификаций является очень значительным.
Большинство из предлагавшихся способов сводится к вос-
произведению в эксперименте фармакодинамических свойств
глюкозидов наперстянки. Объектом действия последних
является главным образом сердечно-сосудистая система в ши-
роком смысле этого слова. В основу большинства способов
было положено действие наперстянки на сердце или на крове-
носные сосуды. К числу методов, основанных на действии
глюкозидов наперстянки на сердечную мышцу, должны быть
отнесены как методы определения наименьшей токсической
дозы непосредственно на изолированных сердцах кролика,
кошки или лягушки, так и методы определения наименьшей
смертельной дозы на целом животном — собаках, кошках,
кроликах, морских свинках, мышах, лягушках и др., так как
4U
причиной смерти животных является остановка сердца, являю-
щаяся результатом отравления сердечной мышцы. Вазомотор-
ный эффект наперстянки был использован в методах опреде-
ления подъема кровяного давления у собак, кошек и кроликов.
Само собой разумеется, что все переименованные отдельные
способы отличались друг от друга не только выбором экспе-
риментальных животных, но и различными деталями в прове-
дении испытания и оценке получаемых в опытах данных или
в способах введения испытуемых веществ. Число методов,
сводящихся, в конце концов, к определению эффекта листьев
наперстянки на сердце, значительно превышает число спосо-
бов, основанных на изменении кровяного давления. С течением
времени последние способы окончательно уступили место пер-
вым. Повышение кровяного давления под влиянием действия
на организм глюкозидов наперстянки представляется далеко
не таким типичным и характерным, как непосредственный
эффект дигиталиса на сердечную мышцу. Вопрос о вазомотор-
ном и именно сосудосуживающем эффекте наперстянки был в
свое время предметом горячего спора между такими видными
фармакологами, как Шмидеберг и Готлиб, из которых первый
утверждал, что наперстянка не суживает сосудов, а второй
на опыте доказывал обратное. Несмотря на дальнейшее выяс-
нение этого спора в сторону подтверждения-мнения Готлиба,
некоторая неясность этого вопроса и во всяком случае срав-
нительная трудность воспроизведения этого эффекта в экспе-
рименте сделали то, что в числе методов биологической
оценки наперстянки, оказавшихся лучшими из всей массы
предложенных, нет таких, которые были бы основаны на
определении повышения кровяного давления.
Достаточная точность и простота методов испытания актив-
ности листьев наперстянки на сердце не остановили исследо-
вательской мысли, и в последние годы снова предложен целый
ряд новых методов, в основе которых лежит не прямое
действие на сердечно-сосудистую систему, а различные вто-
ричные явления, вызываемые наперстянкой. Таков в первую
очередь метод испытания на голубях, где моментом, опреде-
ляющим'действие наперстянки, является рвота у подопытных
птиц. Далее заслуживают внимания методы определения как
задержки диуреза, так и усиления диуреза, вызываемых на-
перстянкой в различных условиях опыта, и, наконец, методы
прямой проверки терапевтических свойств препаратов на лю-
дях.
К настоящему времени из всего большого числа в разное
время описанных методов на практике, конечно, с разными,
подчас даже существенными вариациями применяются три.
Таковыми являются, во-первых, способ определения наимень-
шей токсической дозы (остановка сердца или смерть) у лягу-
шек в течение 1—24 часов после введения яда (Хаутон, Жаке,
Готлиб33, Штрауб34 и др); во-вторых, способ Фоке35, осно-
41
ванный на определении промежутка времени, потребного для
остановки сердца лягушки от введения определенной средней
дозы; в-третьих, способ определения токсической дозы на
кошке (Хатчер и Броди36, Сторм ван Лёвен37, де Линд ван
Виингарден38) по действию на сердце in situ. Испытание на
изолированных переживающих сердцах предлагается сравни-
тельно редко и в практике не привилось. Это является резуль-
татом прежде всего сравнительно больших технических труд-
ностей работы на изолированных органах, а затем следствием
особых свойств глюкозидов наперстянки, их способности к
кумуляции. Стойкая связь глюкозидов с сердечной мышцей
или, согласно новейшим воззрениям (Бауер 93, Бюхнер 40, Веезе
и Дикхоф41), анатомические изменения, вызываемые глюко-
зидами в сердечной мышце, не позволяют получить в опыте
на одном сердце полного восстановления работы после его
отравления, в особенности в случае работы на сердцах тепло-
кровных животных. В силу этого повторные дозы дают не-
пропорционально большой эффект сравнительно с величиной
взятой дозы. Это обстоятельство делает невозможным сравне-
ние на этом же объекте действия испытуемого образца со
стандартным препаратом, пользование же для стандарта дру-
гими изолированными сердцами (не говоря уже опять-таки о
технической трудности этого) менее надежно, чем пользова-
ние другим экземпляром животного в случае опыта на целом
животном. Кроме того, при испытании неочищенных экстрак-
тов,— а с таковыми именно и придется встречаться на прак-
тике при оценке сырья, — всегда возможны более значитель-
ные колебания при работе на изолированном сердце, чем при
работе на целом животном. Для главного (кроме глюкозидов)
фармакологически активного ингредиента неочищенных экс-
трактов наперстянки — сапонинов — изолированное сердце
представляет высокочувствительный объект; при подкожном
введении влияние сапонинов на сердце будет значительно
меньше, чем при непосредственном введении их в орган.
Справедливость требует, однако, признать, что испытание
на изолированных сердцах имеет одно принципиальное пре-
имущество перед всеми другими способами испытания по дей-
ствию на сердце: при непосредственном пропускании раство-
ров экстрактов наперстянки через сердце избегается момент
всасывания препарата, неизбежный при большинстве обычных
способов введения — per os, подкожно. Как мы увидим далее,
всасывание глюкозидов наперстянки и даже процесс связыва-
ния сердечной мышцей препаратов, введенных внутривенно, в
достаточной мере затрудняют такую постановку опыта, при
которой действие было бы пропорционально введенной дозе.
Предпочтенное практикой методы стандартизаций — опре-
деление отравляющей сердце дозы — встречают одно серьез-
ное возражение, носящее, впрочем, общий характер для мно-
гих способов биологической оценки: по токсическому дей-
42
ствию на здоровое сердце судят о терапевтическом эффекте
на больное сердце. С большим вероятием можно считать, что
действие глюкозидов наперстянки на здоровую и больную сер-
дечную мышцу идет более или менее параллельным путем,
хотя справедливость этого положения Сторм ван Лёвен счи-
тает еще недоказанной. Терапевтический эффект наперстянки
в большей своей части зависит от связывания яда сердечной
мышцей, т. е. от начальной стадии отравления, доводимой в
опыте до предела — остановки сердца. Из всех возможных
способов биологического исследования методы указанной
группы, не будучи идеальными, все же являются самыми луч-
шими.
Нам предстоит теперь разобраться в том, какой из методов
всей группы является в свою очередь наиболее удобным и
приемлемым. При определении этого, конечно, во внимание
должны быть приняты как теоретическая обоснованность ме-
тода, так и соображения практического характера.
Еще прежде, однако, чем приступить к сравнительной
оценке методов, нужно установить, какой из существующих
способов экстракции листьев окажется наиболее отвечающим
условиям, упомянутым на стр. 22, так как всякий метод иссле-
дования наталкивается прежде всего на вопрос экстракции.
Для того чтобы ответить на это, необходимо вспомнить о том,
какими свойствами обладают глюкозиды наперстянки.
Приведенные в главе I новейшие данные о глюкозидах на-
перстянки, об их связи с углеводами и о различных состоя-
ниях, в которых они находятся в листьях, должны были бы,
казалось, изменить прежние представления о методах полу-
чения активных экстрактов из листьев. Новые данные о рас-
творимости отдельных действующих начал и их химических
свойств не меняют, однако, давным-давно практически уста-
новленных двух основных методов извлечения глюкозидов на-
перстянки — водой и спиртом. Для целей суммарной оценки
активности листьев нужны такие методы экстракции, которые
гарантировали бы максимальное извлечение всех активных на-
чал. Связь отдельных глюкозидов с разными балластными ве-
ществами, например, с таннином (Готлиб), сапонинами и т. д.,
приводит к тому что нерастворимые в воде чистые глюкозиды
могут тем не менее быть в значительной мере извлечены во-
дой из листьев (при нагревании). Спирт, растворяющий зна-
чительную часть чистых глюкозидов, при непосредственном
Воздействии на листья извлекает и те из глюкозидов, которые
в нем нерастворимы, правда, возможно, несколько их изме-
няя. Интересные данные о растворимости отдельных глюкози-
дов и их генинов в холодной воде и хлороформе, известные
еще со времени работ Килиани и Виндауса 42 Крафта 43, не мо-
гут быть использованы для получения полноценного экстракта
листьев наперстянки. Желая примирить два основных метода
извлечения максимального количества глюкозидов, Штрауб44
43
предложил для исчерпывающей экстракции соединить оба ме-
тода вместе: экстрагированные холодной или горячей водой
листья подвергать последующей обработке 50° спиртом с
целью извлечения дигитоксиновой группы. Другим из предло-
женных методов был метод длительного извлечения возможно
крепким абсолютным спиртом листьев без предварительной
обработки водой (Гефтер45). Сравнительное испытание
экстрактов, полученных по тому и другому способу, показало,
что непосредственная спиртовая экстракция дает максималь-
ное количество действующих начал. К настоящему времени
экстракция спиртом применяется в большинстве методов био-
логической стандартизации наперстянки; отдельные вариации
сводятся к продолжительности (8—24 часа) и пользованию
различной аппаратурой (аппарат Сокслета или упрощенная
экстракция). Только при исследовании на кошках, где испы-
туемый экстракт вводится непосредственно в вену, приме-
няется инфуз.
Сравнение между собой существующих методов валориза-
ции легче и яснее всего можно произвести путем их более или
менее подробного изложения, которое позволит отметить их
слабые и положительные стороны. Рассмотрение отдельных
способов удобнее всего начать, ввиду их многочисленности, со
способов исследования на лягушках.
' Испытание на лягушках, будь то 1—24-часовой метод оста-
новки сердца или метод Фоке35 с определением времени, ве-
дется в средних широтах на лягушках вида Rana temporaria.
В южных широтах для опытов пользуются лягушками Rana
pipiens (особенно в США). Второй вид в Средней Европе и, в
частности, в средних широтах СССР не встречается, почему
для нас представляет интерес первый вид — Rana temporaria.
Отличие этой породы от другой, распространенной у нас, —
Rana esculenta, — заключается прежде всего в образе жизни
тех и других. Rana temporaria, травяная или лесная лягушка,
живет в сырых местах в лесу, в траве, Rana esculenta, водяная
лягушка, живет по преимуществу в воде, выходя из нее лишь
по временам. При приближении человека Rana esculenta всегда
прячется в воду; встретить лягушек этой породы в отдален-
ных от водоемов мест не удается. Вторым резким отличием
будет служить окраска: Rana temporaria имеет окрашенную в
серый цвет спину (от самых светлых до самых темных тонов),
спина Ranae esculentae обычно окрашена в зеленый цвет.
Брюшко Ranae esculentae всегда белого цвета, брюшко Ranae
temporariae может иметь разные оттенки, но никогда не бы-
вает белым. В разное время года окраска брюшка травяных ля-
гушек бывает то желтой, то серой, то даже голубой. Вариации
в окраске часто, но не всегда связаны с полом: желтый цвет
чаще встречается у самок, серый с голубым оттенком на шее
больше свойствен самцам; эта разница особенно резко за-
метна в весенние месяцы. Образ жизни и окраска служат на-
44
дежными признаками и делают излишним описание приводи-
мых иногда более мелких различий — строение головы, абсо-
лютные размеры и т. п. Rana esculenta больше распространена
к югу, Rana temporaria больше встречается на севере. Окрест-
ности Москвы занимают в этом отношении среднее место; в
многочисленных болотах и небольших водоемах (пруды) можно
встретить достаточное количество Ranae esculentae.
Огромное разнообразие климатических условий в разных
районах СССР приводит к тому, что разработанные для Мо-
сквы, Ленинграда и других центральных районов методы
должны модифицироваться путем приспособлений для опыта
местных разновидностей лягушек. Работа по биологической
оценке наперстянки до настоящего времени сосредоточена
в наиболее крупных культурно-промышленных центрах.
Там, где эти методы вошли в практику, вместо Rana temporara
применяют другие виды лягушек. Так, в Харькове стандартиза-
ция проводится на разновидности Ranae esculentae — Rana ridi-
bunda, в Грузинской и Узбекской республиках — тоже Rana ridi-
bunda. большие затруднения получения пригодных для опыта
лягушек отмечаются в западных и центральных областях Сибири.
То же, что отмечается для СССР, еще в большей мере касается
районов экваториальных, южного полушария и т. д., в которых
местные фармакологи также прибегают к замене Ranae tempora-
riae и Ranae pipientis другими видами, например, Xonopus laevis
(Южная Африка — Гэнн и Сапейка г46), Rana nigromaculata (Япо-
ния— Такабе 47), Rana figrina (Индия — Батия и Лаль 48). Инте-
ресно, что данные советских лабораторий и заграничных
источников обычно указывают на возможность работы на мест-
ных лягушках. 4
Поэтому необходимость соответствующих изменений в ме-
тодике на местах не мешает разбору той особенно ха-
рактерной картины действия наперстянки, которая на-
блюдается на Rana temporaria, к описанию которой мы теперь
приступим.
Для возможного исключения индивидуальных колебаний,
свойственных отдельным экземплярам, выбирают лягушек
мужского пола, возможно близких друг к другу по весу.
Самцы по понятным причинам реагируют более постоянно,
чем самки. Многочисленные опыты показали, что наиболее по-
стоянно реагирующими на введение одинаковых доз яда
являются некрупные самцы, весом по 30—40 г, почему лягуш-
ки обычно берутся такого именно веса.
Отличие самцов от самок, кроме некоторых общих призна-
ков строения грудной клетки и упомянутых различий в
окраске, заключается главным образом в строении большого
пальца передних лап, на котором у самцов имеется утолще-
ние, являющееся типичным признаком пола, ибо оно играет
роль при процессе спаривания лягушек, когда самец охваты-
вает самку, соединяя передние конечности у нее на груди, и
45
г
тем способствует выделению икры у самки. Утолщение это
бывает особенно ясно заметно к моменту спаривания, т. е.
к весне. Существующее мнение, что самцы бывают обычно ме-
нее самок (Фюнер 16), по нашим наблюдениям, неверно и ни-
как не может служить руководящим признаком, так как на
практике можно очень часто встретиться с экземплярами муж-
ского пола, достигающими больших размеров (60—80 г). При-
знак этот является и ненужным, так как строение большого
пальца, а при некотором опыте и общий вид служат достаточ-
ной гарантией для избежания ошибок.
Запасать лягушек для лабораторий удобнее всего глубокой
осенью. В это время года лягушки, собираясь на зимовку, рас-
полагаются большими группами — в несколько сот и даже ты-
сяч штук — в подходящих местах: под корнями старых де-
ревьев, в трубах под шоссейными дорогами и т. д. Зимовку
лягушки проводят в полусонном состоянии, ничем не пи-
таясь; в течение всего этого периода их сопротивляемость по
отношению к сердечным ядам меняется сравнительно мало.
Штрауб44 считает возможным пользоваться зимой даже сам-
ками, полагая, что и они в период зимовки не меняют своей
восприимчивости. Нам представляется все же более целесооб-
разным пользоваться только самцами, тем более что это не
представляет (по крайней мере для Москвы) больших затруд-
нений. Из особого постоянства лягушек зимой вытекает прак-
тическое правило производства особенно тщательных опытов
именно в зимние месяцы, когда на лягушках в силу равномер-
ности сопротивляемости могут быть достигнуты возможно
точные результаты. Вопрос об изменении сопротивляемости
лягушек в разные месяцы имеет чрезвычайно’ большое значе-
ние. Вполне естественно и понятно, что весной, в период наи-
большего накопления физических сил и подготовки организма
к спариванию, сопротивляемость лягушек повышается. К этому
вопросу нам придется еще вернуться потому, что эти измене-
ния сопротивляемости не носят равномерного характера по
отношению к разным глюкозидам растений группы напер-
стянки.
Первый из способов испытания наперстянки на лягушках,
принятый в разных модификациях нашей Фармакопеей и Фар-
макопеей Соединенных Штатов, заключается в определении
наименьшей дозы, вызывающей по истечении часа систоличе-
скую остановку сердца у большинства лягушек нужного веса
и в определенных условиях. Для этого берутся лягушки се-
риями по 5—6 штук, и каждой серии вводится разная доза
(отдельным лягушкам одной и той же серии одинаковые дозы).
По истечении одного часа определяют, какая доза отвечает
нужному требованию, т. е. является наименьшей из доз, оста-
навливающих сердце большинства лягушек данной серии.
Доза, отвечающая такому требованию, носит название одной
лягушиной единицы действия и кратко обозначается ЕД. Зная
40
количество ЕД в определенном весовом или объемном коли-
честве сырья или препаратов наперстянки, мы, определив в
исследуемых образцах количество ЕД, создаем себе предста-
вление о терапевтической ценности исследованных объектов.
Такова схема часового метода стандартизации наперстянки на
лягушках. Встречающийся в немецкой литературе расчет на
лягушиные дозы (FD в отличие от лягушиных единиц — FE)
представляет собой не что иное, как расчет вещества, потреб-
ного для остановки сердца, на 1 г веса лягушки, почему ко-
личество лягушиных доз соответственно среднему весу по-
следних будет в среднем в 30 раз больше лягушиных единиц.
Техника испытания по методу советской Фармакопеи сво-
дится к следующему.
Выбирают лягушек самцов Rana temporaria весом в среднем
по 30 г; уклонения от этого веса допускаются в ту и в дру-
гую сторону, с тем, однако, чтобы вес лягушек не был меньше
28 и не превышал 33 г. Взвешивание производится до начала
опыта, так как последующие манипуляции и высыхание во
время опыта могут изменить начальный вес животных. Ля-
гушки самцы Rana temporaria весом по 28—33 г практически
обладают равной сопротивляемостью и во всяком случае дают
незначительные отклонения, так что результаты опытов с
экземплярами такого веса могут быть приравнены к резуль-
татам, полученным на лягушках точно в 30 г весом.
Для более удобного наблюдения и для удобства инъекции
испытуемого препарата лягушек накалывают на большие проб-
ковые доски (0,5 X 0,5 м) брюшком вверх. Булавки вкалыва-
ются в перепонки между пальцами верхних и нижних конеч-
ностей, которые при этом максимально вытягиваются в соот-
ветствующие стороны, с тем чтобы лишить лягушек возможно-
сти произвольных движений. Наколов достаточное количество
экземпляров (обычно для одного испытания бывает доста-
точно 20—30 лягушек), приступают к обнажению сердца. Для
этого тонким пинцетом захватывают кожу на груди между
верхними конечностями и вырезают в ней треугольное от-
верстие, основанием которого будет служить линия, соеди-
няющая места отхождения от туловища верхних конечностей,,
а вершина будет на середине брюшка. Вырезанный лоскут не
должен быть очень велик, другими словами, разрез не должен
заходить слишком далеко ни вверх, ни вниз, ни в стороны.
Излишнее расширение отверстия в стороны повлечет за собой
сильное кровотечение из находящихся в подмышечной области
крупных кожных вен; расширение вверх поведет к тому же
вследствие обширной васкуляризации шейной части кожи ля-
гушки; направление разреза далеко вниз попросту ненужно.
Общие размеры отверстия должны быть таковы, чтобы выве-
денное в дальнейшем наружу сердце свободно помещалось на
лишенном кожи участке, не прикасаясь к наружной стороне
последней. Предосторожность эта необходима по той причине,
47
что выделяемый кожей лягушки секрет содержит вещества,
способные действовать отравляюще на сердечную мышцу ля-
гушки. После этого одна из ветвей тонких ножниц подво-
дится под перехват имеющей форму песочных часов грудины,
просвечивающей через тонкий слой мышц и отчетливо види-
мый простым глазом. Верхняя часть грудины иссекается со-
вершенно, всему отверстию придается форма небольшого
прямоугольника, большая сторона которого будет итти парал-
лельно линии, соединяющей передние конечности лягушек.
Образовавшееся таким путем отверстие будет расположено
как раз над областью предсердий (с впадающими в них
венами) и крупных сосудов, выходящих из сердца. Всякие
дальнейшие манипуляции поэтому должны быть производимы
с сугубой осторожностью, ибо поранение предсердий или
крупных сосудов немедленно поведет к кровотечению, кото-
рое если и не будет для лягушки непосредственно смертель-
ным, то все же лишит возможности пользоваться данным
экземпляром для опыта.
, Вслед за этим тонким пинцетом захватывается сердечная
сорочка, которую особенно хорошо видно и удобнее всего
захватить в момент сокращения предсердий, когда она не-
сколько отстает от них, в месте соприкосновения предсердий
с аортой. Захваченная оболочка вытягивается наружу, на-
сколько это только оказывается возможным, и отсекается нож-
ницами. Затем осторожным нажимом снизу вверх на верхнюю
часть брюшка выдавливают сердце в образованное в сорочке
и грудной стенке отверстие. В случае, если разрез сделан
правильно, выскочившее наружу сердце будет лежать сим-
метрично по средней линии на нижней части грудной стенки,
и перед глазами наблюдателя будут совершенно отчетливо
проходить все стадии работы сердца. Желудочек будет нахо-
диться снаружи, предсердия частью будут видны сверху,
частью будут заключены в грудной полости. В случае, если
разрез будет сделан неправильно, последствия этого скажутся
различным образом в зависимости от того, в чем заключается
ошибка. Прежде всего, если отверстие будет мало, сердце по-
просту не сможет выскочить наружу, если же и удастся вы-
вести его наружу, то последующая работа обнаженного сердца
будет затрудняться сдавливанием его основания; сильно вы-
раженное сдавливание может даже прекратить работу сердца,
которое будет как бы перешнуровано, во всяком же случае
при узком разрезе картина работы сердца будет неправиль-
ной. Если отверстие будет слишком широким, то от конвуль-
сивных сокращений лягушки, обычно имеющих при этом
место, давления на брюшную стенку и тому подобных при-
чин в отверстие, кроме сердца, могут выскочить и другие
органы — легкие и печень; последнее возможно благодаря
строению организма лягушек: диафрагмальная перегородка у
48
них отсутствует. Обнаженное сердце, как уже сказано, не дол-
жно касаться наружной поверхности кожи.
Рис. 2 изображает отпрепарированную нужным образом
лягушку (с остановившимся сердцем).
При обнажении сердца необходимо иметь в виду, что в
числе прочих заболеваний у лягушек изредка встречается
гнойный перикардит, в результате которого может образо-
ваться слипчивое воспаление, способное повести к полному
или частичному сращению сердечной сорочки с мышцей серд-
ца. В таких случаях освобо-
диться от перекардия не удает-
ся, и попытки добиться этого
поведут к неизбежному поране-
нию сердца, почему в случае об-
наружения слипчивого перикар-
дита лучше всего не пытаться
освобождать сердца, а заменить
таких лягушек другими, тем бо-
лее что и реакция больного
сердца на испытуемый яд может
значительно отличаться от реак-
ции здоровых сердец.
После обнажения сердец ля-
гушкам тонкой иглой вводят в
лимфатические бедренные меш-
ки определенные количества
испытуемого экстракта, причем
каждая доза, вводится пяти ля-
гушкам, составляющим одну се-
рию. Для введения оттягивают
тонким пинцетом кожу над бед-
рами; нужное количество яда
вводится обыкновенным шпри-
цем под кожу через оттянутую
складку. Для большей точно-
сти В дозировке с целью избе- рис> 2. Отпрепарированная лягушка
Жать ошибок лучше всего наби- с остановившимся сердцем. Видны
рать в шприц точно отмеренное переполненные кровью предсер-
количество и при инъекции вво-
дить все содержимое шприца.
Если нужно ввести 0,2 см3 пяти лягушкам, лучше пять раз на-
брать по 0,2 см3, чем, взяв 1 см3, ввести его, распределив
между пятью лягушками. При сравнительно малых дозах (как,
например, 0,2—0,3 см3) малейшее уклонение, мало заметное
в шприце, уже даст разницу в 10—2Ов/о. Имея готовое отме-
ренное количество, легче избежать ошибок, чем при дробном
введении набранного в шприц раствора: возможность ошибки
будет более вероятной при отсчитывании от одной границы
до другой, чем при полном опорожнении шприца. Теперь де-
4 —317
49
лается понятным еще одно основание, по которому вырез
кожи не должен опускаться очень низко на животе: подкож-
ное пространство передней стороны бедра непосредственно
переходит в подкожное пространство брюшной полости, пере-
секаясь лишь небольшой перетяжкой в паховой области. Ши-
рокий дефект в коже живота может повести поэтому к неко-
торой механической потере испытуемого вещества, способного
просочиться из бедренного лимфатического мешка в брюшной.
По общему мнению, вводимые лягушкам экстракты не
должны содержать более 25°/о спирта, так как большее коли-
чество небезразлично для организма лягушки как по мест-
ному, так и по общему действию, хЬтя отдельные авторы при-
меняют растворы, содержащие до 50% спирта (Розенкранц49).
Концентрация испытуемых растворов должна быть рассчита-
на таким образом, чтобы вводимые лягушкам дозы колеба-
лись приблизительно в пределах от 0,1 до 0,5 см3. Ввиду того
что время, в течение которого может всосаться введенная
доза, находится в зависимости от ее величины, дозы, превы-
шающие 0,3 см3, вводятся половинными количествами в оба
лимфатических бедренных мешка.
Время введения отмечается в протокольной записи с точ-
ностью до одной минуты для каждой лягушки в отдельности.
С момента введения испытуемого вещества начинают наблю-
, дение за работой сердца. Изменения в работе сердца под
влиянием введения сердечных средств начинаются с измене-
ния числа и характера сокращений сердца; часто наступающее
урежениц., пульса может быть констатировано сосчитыванием
количества сердечных сокращений в минуту. Начальные из-
менения характера работы сердца заключаются в усилении
систолических сокращений и параллельно этому в посте-
пенном увеличении диастол. Дальнейшее отравление сердеч-
ной мышцы ведет к более резким нарушениям ее работы,
сказывающимся , в наступлении неправильных сокращений:
желудочек сокращается не весь сразу, как это имеет место в
норме, а дает сокращения частичные, в отдельных местах. Ча-
стичные сокращения мышцы сердца могут группироваться
самым разнообразным образом. Иногда сократившиеся участ-
ки чередуются на всей поверхности желудочка с несокра-
тившимися, причем несократившиеся участки несколько высту-
пают сравнительно с сократившимися, что придает всему
сердцу вид тутовой ягоды. Иногда сокращению подвергается
какой-нибудь один участок сердца, причем сокращение это
носит стойкий характер, постепенно расширяя границы пора-
женного участка. В таких случаях мы имеем стойкое поблед-
нение отдельного участка желудочка; чаще всего таким
участком оказывается верхушка сердца, несколько реже — пра-
вый или левый угол у основания сердца, т. е. границы между
желудочком и предсердиями. Иногда — и это бывает всего
чаще — получается попеременное сокращение и побледнение
50
отдельных частей сердечной мышцы; сначала, например, со-
кращается вся правая половина желудочка, которая предста-
вляется совершенно белой, в то время как левая, резко воз-
вышаясь над соседней, переполнена кровью до последней воз-
можности и имеет темный застойно-гиперемичный цвет; при
следующем сокращении явления из правой половины перено-
сятся в левую и наоборот. Сказанные изменения не обяза-
тельно локализуются в правой или левой части сердца — они
могут наблюдаться и в верхней, и в нижней половине послед-
него. Сравнительно часто кровенаполнение желудочка имеет
волнообразный характер; когда мышца желудочка не в состоя-
нии дать нормального расслабления, кровь пробегает по же-
лудочку волнообразно; соответственно этому и побледнение
мышцы имеет волнообразный характер. Весь комплекс опи-
санных изменений носит название перистальтики по анало-
гии с сокращениями кишок, которые не сокращаются сразу,
а всегда отдельными участками. (Z
Дальнейшая картина отравления заключается во все уве-
личивающемся урежении пульса и расширении очагов отра-
вления. Постепенно область остающихся при диастоле нерас-
слабленными участков сердца все увеличивается, пока, нако-
нец, весь желудочек не оказывается отравленным и неспособ-
ным к диастоле.
Такая картина наступает при близких к искомым дозах
через Vs—1 час после введения препарата. В некоторых слу-
чаях переход к полному побледнению бывает более резким, и
остановка желудочка может наступить как бы внезапно в те-
чение 2—3 сокращений, после только что имевших место пол-
ных диастол. Такому явлению обычно предшествует резкое
замедление пульса: вместо 30—40 сокращений в минуту в
норме сердце дает 8—10 и даже менее ударов, и в таких слу-
чаях при диастолах желудочек имеет вид застойного органа
с максимально расширенными стенками.
В случаях, когда испытуемая доза оказывается излишне
большой для данной лягушки, моментальная остановка сердца
может наступить внезапно, без урежения пульса и без после-
довательных стадий отравления мышцы.
V Почти у каждой лягушки в течение опыта наступают не-
сколько раз временные спазматические остановки сердца, во
время которых желудочек находится в состоянии максималь-
ного растяжения; в этом периоде желудочек окрашен в черно-
красный цвет. Такие моменты, длящиеся 5—10 секунд, обыч-
но сопровождаются общими конвульсивными сокращениями
всего туловища и конечностей лягушки, благодаря которым
обнаженное сердце выпячивается из грудной клетки настоль-
ко, насколько это позволяют механические условия, и прини-
мает перпендикулярное к плоскости передней стенки груд-
ной полости положение. Явления эти, невидимому, не нахо-
дятся в зависимости от действия глюкозидов дигиталиса, так
4* 51
как они наблюдаются и у лягушек с обнаженными, но не от-
равленными наперстянкой сердцами.
Окончательной остановке сердца может предшествовать
выпадение отдельных сокращений желудочков; такие выпаде-
ния обычно наступают через одно сокращение. Таким обра-
зом, после сокращения желудочка будут следовать подряд
два сокращения предсердий, из которых только второе закон-
чится проникновением крови в желудочек, после чего желу-
дочек даст обычное сокращение. Выпадение сокращений обыч-
но наблюдается на сердцах, не склонных давать резкой кар-
тины перистальтики.
Наступающее, в конце концов, полное прекращение сокра-
щений желудочка, остановившегося в стадии систолы, носит
название систолической остановки сердца. Свет-
лая окраска совершенно опорожненного желудочка особенно
резко подчеркивается темным цветом предсердий, обычная
окраска которых выделяется благодаря их переполнению и
максимальному расширению. Проделавшая полный круг кровь,
попав в предсердия, не может проникнуть в отравленный же-
лудочек и переполняет последние до пределов их максималь-
ной растяжимости. Разница в окраске между желудочком и
предсердиями и сама форма сидящих широкб растянутых
предсердий на сократившемся желудочке позволяют сравнить
сердце, находящееся в систолической остановке, с грибом, в
котором роль шляпки будут играть предсердия, а роль нож-
ки -т- желудочек (Кравков). Несмотря на остановку желудочка,
предсердия продолжают некоторое время сокращаться. Оста-
новка желудочка не влечет за собой быстрого наступления
смерти лягушки, способной в течение довольно продолжитель-
ного времени (7s—1 час) жить после этого. Мышца сердца
лягушки способна в случае, если доза, вызвавшая ее отравле- *
ние, не очень велика, преодолеть силу яда, «обезъядиться», и
начать снова сокращаться. В таких случаях кровь из предсер-
дий попадает в желудочек, который сокращается сначала ред-
ко, потом все чаще и чаще и в результате способен снова к
регулярной работе. Способность мышцы сердца освободиться k
от связанных с нею глюкозидов некоторые авторы объясняют
ферментативными процессами расщепления в самой мышце.
Момент полной систолической остановки изображен на рис. 2.
v , В некоторых случаях наперстянка, всегда, вызывающая
именно систолическую остановку сердца, может дать
кажущуюся диастолическую остановку, при кото-
рой желудочек перестает сокращаться в состоянии расшире-
ния. Происходит это таким путем: после наступившей систо-
лической остановки сердца (которая всегда имеется в течение
некоторого времени перед длительной диастолой) скопив-
шаяся в огромном количестве кровь в предсердиях медленно
проникает в желудочек, приобретает свойственную диа-
столе форму. В дальнейшем отравленное сердце не сможет
52
при помощи последующих сокращений освободиться от пере-
полнившей его крови и будет иметь вид остановившегося в
диастоле. Подобные случаи, по Шмидебергу, могут объяс-
няться тем, что иногда сильнее отравляются наружные слои
мышцы сердца, которые при этом за счет их увеличивающейся
сравнительно с внутренним слоем силы вызывают растяжение
всего органа. Внимательное наблюдение почти всегда отме-
тит разницу между картиной такой насильственной и вызывае-
мой некоторыми ядами действительной диастолической оста-
новкой сердца: при диастолической остановке сердца от на-
перстянки обычно значительная часть желудочка, особенно
верхушка, продолжает частью оставаться в состоянии сокра-
щения, благодаря чему вся картина представляется весьма
своеобразной. Само собой разумеется, что такое состояние же-
лудочка возможно только в случае его нерезкого отравления.
Диастолическая остановка сердца от дигиталиса наблюдается
в тех случаях, когда дозы яда являются пограничными, стоя-
щими на границе между токсическими и не оказывающими
ядовитого эффекта дозами. Большие количества дают систо-
лическую остановку, не изменяющуюся в дальнейшем.
Как уже сказано выше, описываемый опыт ведется с со-
блюдением некоторых предосторожностей. Кроме раньше упо-
. мянутых условий производства опыта при постоянной темпе-
ратуре (15°) и устранения соприкосновения сердца с наруж-
ной поверхностью кожи, сюда еще относится смачивание
сердца во время опыта физиологическим раствором хлори-
стого натрия (для лягушки 0,6%). Выведенное наружу сердце
подвержено быстрому высыханию в атмосфере воздуха; для
предупреждения высыхания, способного оказать значительное
влияние на работу сердца, и применяется смачивание физио-
логическим раствором сердца каждые 10—15 минут.
Вся описанная процедура обнажения сердца, введения яда
и т. д. является очень простой и несложной. При некотором
навыке выведение сердца наружу занимает одну минуту и
даже меньше времени.
При заключении о том, остановилось сердце или нет, не-
обходимо принимать в соображение, кроме вышеописанной
типичной картины систолической остановки, еще и некоторые
| допустимые отступления от этого типа. В нашей лабораторной
практике мы всегда считаем за остановку также и те случаи,
где на общем фоне побледневшего желудочка продолжаются
отдельные точечные сокращения мышцы, если только сокра-
щающиеся участки занимают лишь очень незначительное про-
странство; допустимыми являются местные расслабления
мышцы, имеющие вид подобных булавочным головкам выпя-
чиваний. Точно так же нами считается за остановку только
что описанная диастолическая остановка сердца. Вспомнив,
Далее, способность сердца лягушки разрушать накопленный
ею яд, укажем, что случаи, в которых пробывшие в состоянии
систолической остановки в течение 10—15 минут сердца снова
начинают работать, относятся нами к положительным, т. е.
к таким, где токсический эффект наперстянки является устано-
вленным и не подлежащим сомнению. Время наблюдения, при-
нимаемое равным часу, удлиняется, по предписанию Союзной
Фармакопеи, до 1 часа и 10 минут; таким образом, сердце,
остановившееся в течение 10 минут по истечении часа,
включается в общий счет остановившихся во-время сердец.
Все сердца, остановившиеся по истечении этого срока, в счет
не принимаются. Льготные 10 минут не приходится считать
за общее удлинение времени наблюдения до 70 минут. Эти
10 минут являются именно льготными. Обычно сердца, не оста-
новившиеся в течение часа, редко останавливаются и по исте-
чении этого срока. Представить себе случай, где большинство
сердец данной серии остановилось бы именно между 60 и 70
минутами после инъекции, очень трудно и, пожалуй, даже не-
возможно. Практически пользование льготными 10 минутами
сводится к тому, что в случаях, когда почти уже остановив-
шееся сердце еще не стало, именно в течение часа, несколько
льготных минут позволяют, дождавшись его остановки, вклю-
чить и это сердце в общее число остановившихся в нужное
время сердец. Обычно вовсе не приходится пользоваться
льготными 10 минутами, и если приходится, то для одной и
уже совсем редко для двух лягушек серии из 5—6 штук. Эта
оговорка является очень существенной и часто позволяет ре-
шить вопрос в сомнительных случаях, не прибегая к повто-
рению опыта.
J Выше было сказано, что искомой дозой является мини-
мальная доза, вызывающая остановку сердец в систоле у боль-
шинства лягушек данной серии. Спрашивается: что нужно
понимать под большинством? По правилам Фармакопеи СССР,
в опытах, где каждая серия состоит из пяти лягушек, боль-
шинством считается три. В некоторых случаях, однако, оста-
новка у трех лягушек может быть рассматриваема как недо-
статочная. Разобраться в этом помогает время, в которое про-
изошла остановка, и состояние остановившихся сердец. Если
неостановившиеся сердца работают очень хорошо, а оста-
новка у остальных наступила в самом конце часа и даже в
льготные 10 минут, то такая остановка сердец у трех лягу-
шек может быть признана недостаточной (в таких случаях
обычно остановка называется скоропреходящей: после 5—10
минут остановки сердца начинают работать снова); если же
остановившиеся сердца дали остановку через 30—50 минут
после начала опыта, а неостановившиеся /являют собой кар-
тину отравления — перистальтики, выпадений отдельных со-
кращений и т. д., — то при таком положении вещей остановка
сердец у трех лягушек из пяти может быть признана безого-
ворочно за большинство. В спорных случаях производится
повторное исследование.
Еще раз нужно подчеркнуть, что доза, вызывающая оста-
новку сердца у всех лягушек, должна считаться излишне вы-
сокой. Если две соседние дозы вызовут одинаковое количе-
ство остановок, например, четыре из пяти, то нужной дозой
считается меньшая.
Интересно отметить, что у лягушек, сокращение сердец ко-
торых еще до введения яда представляется более вялым и
редким, систолическая остановка желудочков наступает труд-
нее и позднее, чем у лягушек с интенсивно работающими серд-
цами. Сущность этого парадоксального на первый взгляд
явления заключается, повидимому, в том, что энергичнее ра-
ботающие сердца скорее и быстрее усваивают циркулирующий
в крови яд. Не говоря уже о количестве сокращений в ми-
нуту, в каждое отдельное сокращение лучше опоражниваю-
щийся и наполняющийся желудочек войдет в соприкоснове-
ние каждый раз с большим количеством крови, а следова-
тельно, и яда.
При наблюдении за остановившимися сердцами можно от-
метить одно очень интересное явление: после 20—30 минут
остановки, иногда позже темнокрасная окраска предсердий ме-
няется, причем нижняй их часть (считая за низ ту сторону,
которая будет обращена вниз у лежащей лягушки) остается
темнокрасной, а широко растянутая верхняя делается совер-
шенно светлой и наполнена прозрачной жидкостью. Явление
это объясняется тем, что в неподвижном пространстве пред-
сердий в нециркулирующей крови происходит постепенное t
осаждение кровяных шариков. Последние, скопившись внизу,
образуют темный слой, над которым остается прозрачная
плазма. Встряхиванием очень легко получить смешение шари-
ков с плазмой, что снова придаст предсердиям темный застой-
ный цвет. Свертывания крови в остановившихся случаях не
происходит благодаря отсутствию внешних факторов при
продолжающейся общей жизни организма. Описанное осажде-
ние красных шариков может иметь место лишь в случае пол-
ной остановки и, следовательно, полной неподвижности пред- ,
сердий, так как даже их небольшая подвижность, не говоря
уже о сокращениях, не даст возможности осесть форменным
элементам крови.
Наиболее равномерной сопротивляемостью лягушки обла-
дают во время зимней спячки и особенно ее начала (октябрь —
ноябрь). В это время лучше всего производить все крупные
основные испытания и во всяком случае установку стандарт-
ного препарата. Под этим названием понимается препарат,
обладающий постоянной силой действия, установленный на
лягушках, отвечающих только что сказанным условиям. Во
всех тех случаях, когда испытание производится на лягушках,
не отвечающих нужным условиям по тем или иным причинам
(уклонения в весе, летние месяцы и т. д.), при помощи стан-
дартного, обладающего постоянной силой действия препарата
55
।
определяется изменение сопротивляемости лягушек, и оконча-
тельный расчет ведется с соответствующей поправкой.
Выбор стандартного препарата должен быть произведен
так, чтобы он отвечал условиям, указанным выше, т. е.
обладал бы той же кривой концентрации действия, как и
исследуемое вещество, в данном случае наперстянка. Здесь
могут быть две точки зрения: применение в качестве
стандарта химически чистого вещества или же препарата
с постоянной силой действия, приготовленного из того же
сырья, что и испытуемое вещество. Кроме того, конечно,
необходимым является выбор такого стандарта, при котором
не только относительное изменение силы в ту или иную сто-
рону давало бы картину, сходную с таковой при испытуемом
веществе, но чтобы и абсолютная сопротивляемость по отно-
шению к стандарту не менялась бы сравнительно с испытуе-
мым объектом. Из химически чистых веществ значение веще-
ства, обладающего постоянным эффектом на сердечную мышцу,
приобрел выделенный из семян строфанта глюкозид строфан-
тин. Из приготовляемых разными способами строфантинов
наилучшим считается строфантин Томса (G. Thoms), иначе на-
зываемый oubain. Что применение химически чистого глюко-
зида строфанта может быть с полным правом, научными обо-
снованиями и успехом иметь место при испытании семян стро-
фанта и приготовленных из них препаратов, не подлежит ни
малейшему сомнению. Применение же в качестве стандарта
строфантина при испытании наперстянки и ее препаратов вы-
зывает ряд самых серьезных возражений. Вышеупомянутая
способность лягушки разрушать отравляющие сердечную
мышцу вещества, обнаруживающаяся при введении не слиш-
ком больших доз, проявляется совершенно различно по от-
ношению к наперстянке и строфанту: степень разрушения по-
следнего гораздо незначительнее сравнительно с наперстянкой
(Готлиб50). Такая разница в свойствах уже по одному этому
делает затруднительным сравнение наперстянки со строфан-
том. Способность к освобождению от яда у лягушек меняется
с временами года: наиболее отчетливо она проявляется в весен-
ние и летние месяцы. Понятно, что в эти месяцы разница бу-
дет особенно яркой, так как фактор «обезъяживания», играя
существенную роль для наперстянки, оказывается для стро-
фантина незначительным. Короче говоря, изменение сопроти-
вляемости силы лягушек в разное время года по отношению
к этим двум веществам не идет параллельно друг другу.
Больше того, опыт показал, что это имеет место не только в
отдельные времена года, но и на протяжении даже несколь-
ких дней: оставаясь неизменной к наперстянке, сопротивляе-
мость лягушек к строфанту может в течение одних суток уве-
личиться вдвое (Кольсон 51). Серьезность этих возражений на-
столько значительна, что с уверенностью можно говорить о
неправильности применения в качестве стандарта для напер-
56
стянки строфантина. Поэтому особенно странным (кроме слу-
чая строфанта) является факт выбора последнего в качестве
стандарта для всех сердечных средств, подлежащих биологи-
ческому испытанию, что имело место в Фармакопее США (на-
перстянка и морской лук), которая рекомендовала строфан-
тин как в первом, принявшем биологические методы (IX), так
и в X издании. Лишь в XI издании, вышедшем в 1936 г.,
Фармакопея США ввела в качестве стандартного препарата
для наперстянки сухие стандартные листья по образцу между-
народного стандарта. В последние годы особенно убедитель-
ные данные о необходимости выбора стандартного препарата
из соответствующего сырья представлены Фромхерцем 52 в ряде
работ. VII издание Фармакопеи СССР в качестве стандарта
предлагает применять экстракт из того же вида растения, в
данном случае наперстянки.
Предпочтение экстракта какому-нибудь одному из глюко-
зидов наперстянки должно быть отдано уже по одному тому,
что их имеется большое количество, причем ни один из них
не представляет собой суммы всего эффекта наперстянки. От-
дельные глюкозиды, кроме того, могут разниться между со-
бой по быстроте всасывания, легкости «обезъяживания» и т. д.
Особенно легко сердце восстанавливает работу после оста-
новки, вызванной пропусканием генинов (Деджиакоми 53). Для
приготовления стандартного экстракта листья экстрагируются
в течение 8 часов абсолютным этиловым спиртом в аппарате
Сокслета; полученный экстракт упаривается и обрабатывается
эфиром с целью удаления сапонинов и некоторых балластных
веществ. Очищенный экстракт доводится до нужной концен-
трации на основании данных, полученных при испытании его
на лягушках (см. дальше). Таким образом, стандартный
экстракт готовится способом, аналогичным принятому Фарма-
копеей для экстракции испытуемых листьев. Благодаря этому
достигается то же взаимоотношение в содержании действую-
щих начал в испытуемом и стандартном экстрактах. Забегая
несколько вперед, здесь можно указать, что принятые стандар-
тизационной комиссией гигиенической секции Лиги наций ме-
тоды стандартизации в главе о наперстянке дают предписание
о приготовлении экстракта из стандартных листьев, по идее
совершенно схожее с принятым нашей Фармакопеей.
Первоначальная установка силы действия стандарта произ-
водится на лягушках весом по 28—33 г, самцах Rana temporaria,
в октябре — ноябре с педантичным соблюдением всех требуе-
мых условий опыта. Лягушки, отвечающие всем этим требова-
ниям, могут быть названы «стандартными лягушками». В дру-
гое время года новые запасы стандарта должны готовиться
путем приготовления образца, сила действия которого как раз
соответствовала бы силе приготовленного вышеуказанным
способом стандарта. К такому приему нужно стараться по
возможности не прибегать, а приготовлять стандартный экс-
57
Иракт именно в тот период года, когда по постоянству
сопротивляемости сама лягушка может считаться за стандарт.
Стойкость приготовленного соответствующим образом экстрак-
та очень велика: по нашим наблюдениям, на протяжении не
только многих месяцев, но даже и нескольких лет сила дей-
ствия экстракта не ослабляется. С этими данными не согласна
Мохначева53, отмечавшая падение активности стандартного
экстракта.
7 Приготовляя стандартный спиртовый экстракт, мы должны
помнить, что концентрация спирта во вводимом лягушке рас-
творе не должна превышать 25%. Это правило легко соблю-
дается соответствующим упариванием экстракта с тем расче-
том, чтобы для доведения его до нужной крепости требова-
лось прибавить тройной объем воды. Сила действия стандарт-
ного экстракта рассчитывается таким образом, чтобы 0,3 см3
вводимого раствора были нужной дозой, т. е. чтобы это ко-
личество было наименьшей дозой, вызывающей остановку у
большинства лягушек, отвечающих всем нужным условиям.
Количество действующих начал, вызывающее такой эффект у
одной лягушки, называется единицей действия или одной ля-
гушиной единицей. Кратко одна единица действия обозна-
чается ЕД. Сила действия отдельных препаратов или листьев
наперстянки определяется путем вычисления содержания ЕД
в одной объемной или весовой части испытуемого объекта.
Стандартный препарат, таким образом, должен содержать в
1 см3 13,33 ЕД, ибо если 0,3 см3 раствора, в котором лишь
25% приходится на долю стандарта, представляют собой 1 ЕД,
то при пересчете на основной экстракт мы получаем, что 1 ЕД
содержится в 0,3 : 4 = 0,075 см3, а в 1 см3 — 1 : 0,075 = 13,33 ЕД.
Анализируя все сказанное про стандартный препарат, мы
должны подчеркнуть, что основным моментом, на котором
базируется весь расчет, является «стандартная лягушка». Все
приведенные выше данные для равномерной сопротивляемости
и постоянства реакции лягушек нами могут утверждаться
только в отношении Москвы. Таким образом, нельзя сказать
наверное, что в абсолютных цифрах сила стандарта, пригото-
вленного на местах, будет соответствовать силе изготовлен-
ного в Москве. Весьма вероятным является предположение,
что где-нибудь, на очень далеком расстоянии от Москвы, ре-
зистентность лягушек будет иной сравнительно с резистент-
ностью московских лягушек. Ввиду того что стандартный
препарат служит для вытитровывания резистентности лягу-
шек в разных местностях, необходимо, чтобы производство
его было центрировано, ибо только таким путем будет достиг-
нуто единообразное понимание единицы в любом месте
страны.
То обстоятельство, что изготовление нового стандартного
препарата должно основываться на сопротивляемости лягушек,
несмотря на ее сравнительно большую равномерность, делает
58
возможным в отдельных случаях некоторое отклонение в ак-
тивности между стандартными препаратами. Эта разница, по
нашим наблюдениям, никогда не достигает сколько-нибудь
значительных цифр, но тем не менее служит поводом для
критики. Далее, в описании метода международной комиссии
будет указано применение в качестве стандартного препарата .
не заранее приготовленного экстракта определенной активно-
сти, а каждый раз ex tempore приготовляемого экстракта из
высушенных листьев наперстянки, обладающих постоянной
активностью. В этом методе имеется возможность заготовле-
ния большого количества стандартных листьев на очень дол-
гий период, что исключает всякую возможность получения
ошибок при заготовлении нового количества экстрактов, по
Фармакопее СССР возобновляемого каждый год. Эти положи-
тельные стороны сухого стандартного препарата в некоторой
мере ослабляются возможностью получения небольших коле-
баний при постоянных приготовлениях экстрактов из стан-
дартных листьев.
Для производства анализов в любой момент в лаборато-
риях должны устраиваться запасы лягушек. В зимнее время,
когда пополнять запасы представляется делом затруднитель-
ным, приобретенные осенью лягушки сохраняются в условиях,
возможно близких к тем, в которых они находятся в это время
в природе. В естественных условиях лягушки собираются мас-
сами по нескольку сот и даже тысяч штук и располагаются на
зимовку в углубленных местах, защищенных от прямого за-
валивания снегом, иногда под водой, где они проводят зиму
в спячке, не питаясь ничем. В некоторых случаях возможны
даже замерзания отдельных экземпляров с последующим от-
таиванием и оживлением. Для хранения лягушек в зимние ме-
сяцы устраиваются в темном месте бетонные аквариумы с по-
катым полом с проточной водой. Вода должна занимать не
более половины поверхности пола с целью дать лягушкам воз-
можность выходить из воды. Помещение, в котором находится
аквариум, не должно отапливаться; лучшей температурой
является + 2—3°. Кормить лягушек зимой не приходится.
В таком виде лягушки хорошо переносят зимовку. Процент
погибающих, экземпляров не очень велик, если только лягушки
размещены не слишком скученно. В весенние и летние месяцы
хранить лягушек гораздо труднее, так как кормление их пред-
ставляет очень кропотливую задачу; ввиду того что летом и
весной оно нужно, стараются в это время года не заготовлять
большого количества лягушек и по возможности часто (1—2
раза в месяц) возобновлять их запас. В связи с тем, что рези-
стентность лягушек в первые дни после поимки подвержена
резкому колебанию, стараются опыты производить ме ранее
чем через 3—4 дня после доставки лягушек в лабораторию.
Испытанию, по Фармакопее СССР, подлежит сырье — Folia
Digitalis, из готовых препаратов — T-ra Digitalis. Обычно врачи
59
охотно назначают настой и сравнительно редко применяют
тинктуру. Испытание сырья' поэтому имеет первенствующее
значение. Фармакопея предписывает следующий порядок испы-
тания листьев наперстянки. ‘ *•
Подлежащие испытанию листья высушиваются в сушиль-
ном шкафу вместе со всеми имеющимися в образце примесями
(так как аптеки при приготовлении препаратов листьев не
очищают) при температуре, не превышающей 60—80°, и за-
тем экстрагируются абсолютным этиловым спиртом в течение
8 часов в аппарате Сокслета.
Вопрос о температуре, которая может быть допущена при
сушке листьев, заслуживает некоторого внимания. Сушка при
температуре, не превышающей 100°, не разрушает действую-
щих начал немедленно, тут же к моменту опыта. При хранении
листьев больше года оказывается, что температура, при кото-
рой листья были высушены, играет большую роль; если листья
сушились при температуре до 55°, сила их не падает по исте-
чении года; если же сушка производилась при более высокой
температуре, через год замечается падение их активности;
сушка при низкой температуре (30°) способна даже повысить
активность листьев (де Линд ван Виингарден38). Так как для
нашего опыта сохранность во внимание не принимается, указы-
ваемая выше температура (60—80°) является вполне приемле-
мой. Экстракция ведется обычным способом 10—15 объемами
абсолютного спирта. По окончании экстракции полученный
экстракт переносится в фарфоровую чашку и там осторожно
упаривается до пятикратного объема по отношению к весу
взятых листьев. Во избежание потери вещества упаривают
экстракт до несколько меньшего объема, например, до трех-
кратного по отношению к весу листьев, а затем двумя объе-.
мами спирта смывают чашку. Доведенный до концентрации
1 :5 экстракт разбавляется водой в отношении 1:4 (1 см3
экстракта + 3 см3 дестиллированной воды), чем достигается
нужная (25%) концентрация спирта. Для лучшей раствори-
мости действующих начал в таком растворе спирта к нему
прибавляют несколько капель 1% раствора Na2CO3. Общий
объем раствора будет соответствовать 1 :20 по отношенью
к весу листьев, т. е. окончательный раствор будет 5%. Все
операции по переливанию и растворению экстракта ведутся
с соблюдением правил количественного анализа — сливанием
по палочке, последующим обмыванием посуды и т. д.
•*— Ценность испытуемого сырья обозначается латинским сло-
вом «valor» (ценность), сокращенно буквой V и выражается
в количестве ЕД, содержащихся в 1 г листьев. Удовлетворяю-
щие требованиям Фармакопеи листья не должны содержать в
1 г меньше 50 ЕД, или, как говорят, не должны иметь V
меньше 50. Это значит, что 5% экстракт из листьев должен
вызвать остановку сердца у большинства лягушек в дозе
0,4 см3, ибо при пересчете на листья нужная доза будет рав-
60
ч
няться 1:50= €,02 см3, а при пересчете на 5% экстракт —
0,02 X 20 = 0,4 см3. Валор 50 является крайним допустимым,
хорошими же листьями Фармакопея признает такие, V кото-
рых достигает 66,66, что при аналогичном пересчете потребует
от экстракта остановки в дозе 0,3 см3 (1 :66,66 = 0,015 X
X 20 = 0,3).
Взвесив, разместив нужным образом и обнажив сердца ля-
гушек, начинают испытание. Выбор первоначальной дозы осно-
вывается на предполагаемой силе листьев и на обычно извест-
ной к моменту опыта резистентности лягушек, установленной
при помощи стандартного препарата. Для избежания излиш-
ней траты лягушек сначала вводится одной серии лягушек
только одна предполагаемая доза. Наблюдают за вызванным
ею эффектом; в случае явно излишней активности этой дозы
берется ряд постепенно уменьшающихся доз и впрыскивается
3—4 сериям по пяти лягушек в каждой; в случае недостаточ-
ной силы пробного введения вводят 3—4 нарастающие дозы.
Разницу между соседними дозами лучше всего установить
в 0,05—0,1 см3; таким образом, например, параллельными до-
зами будут 0,3, 0,35, 0,4, 0,45 см3 и т. д. или 0,2 0,3, 0.4 см3.
Первый пример, конечно, дает более точные результаты. При
невозможности сделать вывод из одной дозы берется средняя
из двух пограничных доз. Дозы стандартного препарата бе-
рутся в тех же границах.
Применение стандартного препарата, нужное при проведе-
нии каждого отдельного эксперимента, делается особенно важ- ,
ным в те месяцы, когда сопротивляемость лягушек особенно
резко меняется. Как литературные (например, Розенкранц49),
так и наши данные указывают на чрезвычайно повышающуюся
сопротивляемость лягушек в весенние месяцы (особенно май).
При перемене запаса лягушек опыт должен производиться
с тщательной проверкой их резистентности. При необходи-
мости работать с лягушками другого веса (вообще нежелатель-
ной) необходимо следить за тем, чтобы средний вес их
оставался одинаковым и колебания между отдельными экзем-
плярами не превышали бы 6—7 г (при более крупных экзем-
* плярах).
’—Рассмотрим несколько примеров исследования различных
образцов листьев.
к Взято 3 г. высушенных и измельченных листьев; в тече-
ние 8 часов проведена экстракция в аппарате Сокслета 40 см3
абсолютного спирта. Полученный экстракт был упарен в фар-
форовой чашке до 10 см3; 5 см3 была смыта чашка. К полу-
ченным 15 см3 добавлено 45 см3 воды и несколько капель 1°/о
раствора Na2CO3. Полученный 5% экстракт на 25% спирте ис-
пытывается на лягушках. Опыт предыдущих дней показал,
что сопротивляемость лягущек нормальна, т. е. что 0,3 см3 раз-
веденного в 4’ раза стандартного экстракта вызывает оста-
новку у большинства лягушек. Первоначально взяты 5 лягу-
61
*
р
шек, которым вводится по 0,3 см3 экстракта, т. е. средняя
предполагаемая доза. Результаты введения отмечаются в про-
токоле.
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систоличе- ская оста- новка Приме- чание
1 29 0,3 Через 45 м. Не остано-
2 32 0,3 вилось
3 31 11 ч. 30 м. 0,3 > 1 ч. 8 м. >
4 28 0,3
5 33,3 0,3
Таким образом, пробная доза вызвала остановку лишь
у двух лягушек, причем у одной в льготные 10 минут. Взятая
доза, очевидно, является недостаточной, но близкой к нужной.
Взяты еще 3 серии лягушек, из которых первой повторена
предыдущая доза, а двум другим введены восходящие дозы,
увеличивающиеся на 0,05 см3.
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систоличе- ская оста- новка • • Примечание
1 28 0,3 Через 40 м. » •
2 29 0,3 Не остановилось
3 32 12 ч. 50 м. 0,3 Явления отравления
4 31,5 0,3 » »
5 30 0,3 Не остановилось
6 33,3 1 0,35
7 32 0,35 > 38 » » »
8 31,5 12 ч. 55 м. 0,35 » 1 ч. 01 »
9 29 0,35 » 53 »
10 28 0,35 > 44 >
11 28,5 0,4 > 40 »
12 31,5 0,4 » 33 >
13 33 1 ч. 00 м. 0,4 > 38 > •
14 32 0,4 > 57 »
15 31 0,4 Не остановилось
Из протокола видно, что повторное испытание первона-
чальной дозы дало и на этот раз почти те же результаты:
остановку у одной, тогда как первый раз у двух (причем
у второй через 1 час 8 минут). Дозы 0,35 и 0,4 см3 вызвали
одинаковый эффект — остановку у четырех. Так как искомой
дозой является наименьшая из доз» вызывающих остановку
62
у большинства, то за таковую в данном случае принимается
0,35 см3. Дальнейший расчет ведется нижеследующим образом:
так как экстракт был взят 5°/о, то из 1 г листьев было полу-
чено 20 см3 экстракта; 1 г листьев содержит, следовательно,
20 : 0,35 = 57,15 ЕД. Ввиду того что сопротивляемость лягу-
шек нормальна, полученные данные представляют собой окон-
чательный результат. V испытуемых листьев будет равняться 57,
что удовлетворяет требованиям Фармакопеи.
2. Листья высушены и экстрагированы обычным путем.
Сопротивляемость лягушек нормальна. Пробная доза:
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систолическая остановка
1 29 0,3 Через 39 м.
2 32 0,3 » 41 »
3 31 1 11 ч. 00 м. 0,3 » 28 »
4 28 0,3 » 58 »
5 33 J 0,3 » 1 ч. 00 »
Доза велика, так как вызвала остановку сердец у всех ля-
гушек до истечения льготного срока. Далее берем еще 2 се-
рии, которым вводим дозы, уменьшаемые на 0,05 см3.
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систолическая остановка Примечание
1 33,3 1 0,25 Не остановилось
2 31 0,25 Через 58 м.
3 30 12 ч. 30 м. 0,25 » 51 »
4 32 0,25 » >
5 29 0,25 » 1 ч. 09 >
6 31 0,2 » »
7 30 0,2 » »
8 28 12 ч. 35 м. 0,2 > 59 »
9 28 0,2 > >
10 32 0,2 > >
Доза 0,25 см3, вызвавшая остановку у трех из пяти, при-
чем у одной в конце льготного срока, представляется не-
сколько недостаточной, как дающая не вполне убедительную
картину. Предыдущая доза (0,3 см3), как остановившая сердца
у всех лягушек, была признана чрезмерно высокой; поэтому
f. 0,25 -1- 0,3 р. otcz тг « «
берем среднее из двух доз: - ------= 0,275. Дальнейший рас-
чет: 20 : 0,275 = 72,7, V листьев = 72, чТо' говорит об их очень
высоком качестве.
3. Опыт ведется на лягушках, резистентность которых не
установлена; испытанию подлежит обычным способом приго-
63
товленный экстракт. Сначала вводим одной серии 0,3 см3 ис-
пытуемого раствора и 0,3 см3 стандартного раствора. Резуль-
таты: первый не вызвал остановки ни у одной, второй тоже
не дал остановок, но у двух лягушек к концу часа были
ясные явления отравления. В дальнейшем взяты две увеличи-
вающиеся дозы стандартного раствора и три испытуемого, так
как первая доза была, очевидно, дальше от искомой, чем
у стандарта.
Стандартный раствор
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систолическая остановка Примечание
1 32 0,35 Через 58 м.
2 35,5 0,35 Не остановилось
3 28 । 12 ч. 00 м. 0,35 » »
4 29 0,35 Явления отравления
5 29,5 0,35 Не остановилось
6 28 0,4 > 40 »
7 29 0,4 Явления отравления
8 31 12 ч. 05 м. 0,4 » 1 ч. 01 >
9 33 0,4 » 50 »
10 32 0,4 > »
Доза 0,4 см3 дала остановку у трех и притом ясные явле-
ния отравления у двух других, почему она признается отве-
чающей своему назначению. Отсюда следует, что резистент-
ность лягушек повышена.
Испытуемый экстракт
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систолическая остановка Примечание
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 64 32 31,5 28,5 29 29 28 33 32 31 30 31 28 29 32 32,6 • 12 ч. 10 м. । 12 ч. 15 м. 12 ч. 20 м. • 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 0,4 0,4 ол 0,4 0,4 0,45 0,45 0,45 0,45 0,45 Через 52 м. » 50 » » 1 ч. 07 > » 1 ч. 08 » 51 > -» 55 > » 40 » Не остановилось » » » » » > * » У> Ъ > > » 1
Для испытуемого препарата искомой дозой оказалась
0,45 смi * 3. Далее расчет ведется с поправкой на повышенную
сопротивляемость лягушек: высчитывается та доза, которая
была бы нужна, если бы сила лягушек была нормальна. Вычи-
сление ведется по пропорции 0,3 : 0,4 = X : 0,45; X -4 5- =
= 0,34. Далее — обычным путем: 20,0:0,34 = 58,8. V ли-
стьев = 58,8. Расчет можно вести и другим путем — опреде-
ляют содержание ЕД на данных лягушках (т. е. количество
доз, останавливающих сердце лягушки) и содержание на
данныхже лягушках ЕД в стандартном препарате. Зная* да-
лее, содержание единиц действия в стандартном препарате на
нормальных лягушках, вычисляем силу испытанного
образца. Таким образом, испытуемый препарат содержит
20:0,45 = 44; 44 ЕД на данных лягушках, стандарт
4 (1,0 + 3,0 aq. dest.) :0,4 = 10 ЕД на данных лягушках вместо
13,33 на нормальных; следовательно, 10 : 13,33 = 44 : х;
х = = 58,65. -----------
4. Аналогичное предыдущим исследование листьев. Отсут-
ствие лягушек нужного веса заставляет прибегнуть к нежела-
тельной вообще необходимости работать на более крупных
экземплярах, весом в 45—50 г, почему и стандарт, и пригото-
вленный экстракт берутся в больших, чем обычно, дозах.
Стандартный раствор в дозе 0,45 см3 остановил сердца
у 4 лягушек; испытуемый в дозе 0,45 см3 не остановил сердец
ни у одной. Берем стандарт в дозе 0,4 см3 с целью установить,
является ли 0,45 см3 наименьшей дозой из вызывающих оста-
новку доз или нет; испытуемый берется в трех постепенно
увеличивающихся дозах. 1
Стандарт
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систолическая остановка Примечание
1 45 0,4 Не остановилось
2 47 0,4 Через 57 м.
3 50 12 ч. 25 м. 0,4 > 1 ч. 05 »
4 49 0,4 * Не остановилось
5 48 J 0.4 > »
i
Таким образом, правильность для стандарта дозы 0,45 см3
подтверждается: доза 0,4 см3 мала.
Как видно из следующей таблицы ни одна из трех серий
не дает ответа. На этом опыте видим пример неудачи, где для
достижения цели требуется значительная затрата времени и
большая, чем обычно, трата лягушек. Берем еще две серии.
5 — 317 65
Испытуемый экстракт
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систолическая остановка Примечание
1 45 0,5 Не остановилось
2 46 1 0,5 > »
3 50 1 1 ч. 25 м. 0,5 Явления отравления
4 49 0,5 » »
5 46 0,5 Не остановилось
6 46 0,55 » >
7 49 0,55 Через 1 ч. 09 м.
8 50,5 >1 ч. 35 м. 0,55 Явления отравления
9 49 0,55 » >
10 49 0,55 Не остановилось
11 50 0,6 » »
12 50*,5 0,6 » >
13 48 - 1 ч. 45 м. 0,6 » 55 м.
14 47 «В 0,6 Явления отравления
15 49 0,6 » »
Вес Время Доза Систолическая
(г) инъекции (см3) остановка Примечание
1 50 0,65 Через 56 м.
2 50 0,65 Не остановилось
3 46 ► 2 ч. 15 м. 0,65 Явления отравления
4 45 0,65 > 49 »
5 47 ) 0,65 » >
6 47 0,7 » 45 »
7 45 0,7 » 43 »
8 48 । 2 ч. 25 м. 0,7 » 59 »
9 50 0,7 > 1 ч. 05 »
10 49 0,7 Не остановилось
Нужной дозой будет 0,7 см3. Расчет: 0,3 :0,45 = х: 0,7.
X = — = 0,47; 20:0,47 = 42. Другим путем имеем: 20:7 =
1 О ПП у ПО G
= 28,5; 4:0,45 = 9,1; 9,1 -.13,33 = 28,5 : х; х = ^ ^---= 42.
V = 42.
'Листья как содержащие менее 40 ЕД в 1 г, имеющие V
меньше 50, должны быть признаны негодными.
В последнем примере для испытуемого препарата пришлось
дойти до доз, превышающих 0,5 см3, что вообще признается
Фармакопеей нежелательным. В данном случае вес лягушки
допускает увеличение доз без особых изменений в вопросе
66
о быстроте всасывания. В случае работы на нормальных ля-
гушках введения очень больших доз можно избежать, так как
установленный отрицательный результат является достаточ-
ным, и дальнейшего исследования можно не производить.
Если, например, 0,5 см3 экстракта еще не дают эффекта у нор-
мальных лягушек, то необходимость последующих увеличений
доз отпадает, так как листья, имеющие V, равный 40 (20 :0,5),
уже, очевидно, непригодны. В таких случаях только специаль-
ное желание узнать абсолютное содержание действующих на-
чал в сырье может побудить к продолжению анализа.
Кроме подробно разобранного часового метода с обнаже-
нием сердца, существует еще, как было указано выше, ряд
методов, признанных и применяемых на практике. Это прежде
всего методы, принятые в разных государствах как обяза-
тельные или как желательные. В числе их в свою очередь на
первое место должен быть поставлен старейший из официаль-
ных методов, введенный как обязательный инициатором лега-
лизации биологических стандартизаций — Фармакопеей США.
Между ним и только что описанным имеется существеннейшее
сходство, заключающееся в том, что они оба основаны на
определении вызывающей остановку сердца дозы в течение
одного часа. Техника опыта отличается от метода нашей
Фармакопеи существенно: тогда как у нас наблюдение ведется
за обнаженным сердцем, американцы вскрывают лягушек лишь
к концу часа. Разница во введении исчерпывается выбором
места; Фармакопея США отдает предпочтение шейному лимфа-
тическому мешку, причем введение производится при помощи
пипетки с острым концом через дно полости рта. Очевидное
преимущество американского способа, как не содержащего
в себе допускаемого нашей Фармакопеей момента травматиза-
ции лягушек, в значительной мере парализуется недостатками,
заключающимися именно в отсутствии этой травмы, т. е. в ра-
боте с лягушками, сердца которых не обнажены. В том, что
аккуратное обнажение сердца вовсе не является для лягушки та-
кой травмой, которая оказывала бы резкое влияние на дея-
тельность сердца и тем более могла привести к гибели живот-
ных, мы имели возможность убедиться множество раз. Ля-
гушки с обнаженным сердцем могут жить не только часами,
но и днями. При некотором навыке наносимая лягушкам травма
будет для них равномерна и не изменит средней сопротивляе-
мости всех взятых для опытов экземпляров. Картина посте-
пенного накопления изменений в сердце, при которой все ста-
дии проходят перед глазами экспериментатора, является зна-
чительно более полной, чем картина отдельного момента
к концу часа. Наблюдение за сердцами лягушек имеет суще-
ственное значение при сроке опыта в 1 час, так как к концу
этого периода времени процессы «обезъяживания» могут изме-
нить результат, вызвав возобновление работы сердца у одной
из лягушек, у которой могла быть до этого налицо нужная
5* 67
систолическая остановка. Наглядное наблюдение за постепен-
ным отравлением сердца в течение часа дает вообще гораздо
более полную картину и позволяет легче разобраться в сомни-
тельных случаях. Вместо долгое время употреблявшегося стро-
фантина (по требованиям IX и X изданий Фармакопеи США)
в настоящее время стандартом служат сухие стандартные
листья. Для испытания из них ex tempore должна изгото-
вляться настойка путем настаивания на холоду в течение
24 часов при постоянном взбалтывании стандартных испо-
рошкованных листьев в смеси 4 объемов спирта и 1 объема
воды в количестве 10 см3 на 1 г листьев. Обработкой листьев
на холоду Фармакопея США отличается qt других официаль-
ных источников, в том числе и Международной комиссии.
Вместо рекомендуемых Фармакопеей СССР лягушек Rana
temporaria Фармакопея США предписывает пользоваться ля-
гушками Rana pipiens— разница, конечно, чисто местного ха-
рактера. Колебания веса животных допускаются очень боль-
шие: от 15 до 35 г. Естественно, что ожидать в таких случаях
средней сопротивляемости не приходится. Для этого вводится
расчет как испытуемого, так и стандартного экстрактов на 1 г
веса лягушки, что до известной степени предполагает прямую
пропорциональность между весом и сопротивляемостью. Ко-
личество вводимого раствора не должно быть меньше 0,2 и
более 0,7 см3. Не имея собственного опыта с Rana pipiens, мы
совершенно определенно можем утверждать, что для Rana
temporaria это не совсем так: если у 30-граммовых лягушек
сердце останавливается, допустим, от 0,3 см3 какого-либо
экстракта, то из этого совершенно не следует, что для оста-
новки сердец у 45-граммовых экземпляров потребуется 0,45 см3
того же экстракта.
Далее рассмотрим один из методов, рекомендуемых Между-
народной комиссией (на лягушках), подходящий к только что
описанным.
Международная комиссия в основу своего метода иссле-
дования наперстянки, как и для всех других препаратов, кла-
дет принцип полного устранения всех возможностей, способ-
ных вызвать ошибку. Поэтому понятно прежде всего, что в ка-
честве стандарта берется наперстянка. Далее Международная
комиссия предписывает длительное наблюдение (многочасовой
метод Жаке, Хаутон, Штрауб и др.), которое не ограничи-
вается в сторону удлинения, но не должно быть менее 4 ча-
сов — период, в течение которого процессы чистого отравле-
ния или борьба с ним разрушающих яд сил организма закан-
чивается победой той или иной стороны. Порода лягушек не
ограничивается каким-нибудь одним видом: допускается как
Rana temporaria, так и Rana pipiens; вес рекомендуется около
40 г. При малых допустимых колебаниях в весе все же реко-
мендуется пропорциональная весу дозировка — лягушке ве-
сом в 39 г должно быть впрыснуто на Шо меньше дозы, рас-
68
считанной на 40-граммовый экземпляр. Место введения
также не ограничивается каким-либо определенным участком;
допускается введение как в шейный, так и в бедренный лим-
фатический мешок; последнему отдается предпочтение при до-
зах, превышающих 0,3 см3; испытуемый экстракт также гото-
вится на спирте (24-часовое настаивание с последующим полу-
часовым кипячением на песчаной бане). Стандартный экстракт
готовится тем же точно способом ведущим испытание лицом
или учреждением самостоятельно, с тем чтобы устранить воз-
можность различного приготовления стандарта и испытуемого
препарата. Для этого стандарт рассылается Международной
комиссией прямо в виде испорошкованных, ничем не обрабо-
танных листьев. Таким образом, на первый взгляд совершенно
исключено пользование животным как стандартом, так как
в качестве последнего применяются обладающие постоянной
силой листья. Наша Фармакопея прямо указывает, что ля-
гушки, отвечающие определенным условиям, представляют со-
бой объект, по реакции которого можно судить о качестве
листьев; стандартный препарат устанавливается на этих же
лягушках. Иллюзия полной абсолютности международного
стандарта быстро рассеивается, так как скоро мы узнаем, что
стандартные листья суть не что иное, как средняя проба испы-
танных на кошках и отвечающих известным данным листьев.
Таким путем мы в основе все-таки имеем, следовательно,
реакцию животного организма как стандарт для оценки веще-
ства. Способ, которым листья проверяются, является в то же
время и вторым из принятых Международной комиссией. *
Валоризация наперстянки на кошках впервые предложена
американскими авторами (Хэтчер и Броди 36) и развита и раз-
работана голландскими фармакологами (Сторм ван Лёвен37,
де Линд ван Виингарден38). Сущность этого метода сводится
к следующему.
Определяется количество препарата из испытуемых листьев,
способное при внутривенном введении повлечь за собой
смерть кошки от наступившей систолической остановки сердца.
Пользование сравнительно крупным теплокровным животным
принуждает к возможно большему соблюдению физиологиче-
ских условий. С целью избегнуть различных уклонений в эффекте
от быстроты всасывания испытуемый препарат вводится прямо
в ток крови. Понятно, что поэтому должен употребляться
водный, а не спиртовой препарат. Настой, употребляемый для
этой цели, готовится полупроцентный при температуре, не пре-
вышающей 90° (по предписанию голландской Фармакопеи).
Для исключения посторонних влияний кошка наркотизируется
эфиром. Для выявления чисто сердечных свойств наперстянки
и для общей ясности картины производится трахеотомия.
* Отклонение от стандарта при испытании на лягушках раньше допу-
скалось на ± 25%, теперь оно ограничено пределами ± 15%.
69
ТТосле того, когда она уже произведена, эфирный наркоз под-
держивается при помощи искусственного дыхания. Медлен-
ность действия глюкозидов на наперстянку и здесь требует
продолжительного времени для получения нужного эффекта.
Само собой разумеется, что вводимый настой должен быть
изотоничным, что достигается прибавлением О,9°/о хлористого
натрия, и поступать в ток крови под постоянным давлением.
Постоянное давление в бюретке обусловливает собой постоян-
ную скорость поступления настоя в вену. Скорость поступле-
ния настоя в организм должна быть постоянной и соответ-
ствовать скорости действия глюкозидов на сердце, для того
чтобы по количеству поступившего настоя можно было су-
дить о количестве действующих начал, действительно потреб-
ных для отравления. Соблюдение всех условий достигается
помещением настоя в градуированную бюретку, снабжен-
ную приспособлением, благодаря которому давление в ней,
как в сосуде Мариотта, поддерживается на постоянном уровне.
Для этого через каучуковую пробку, вставленную вверху бю-
ретки, вниз до определенного уровня проводится тонкая стек-
лянная трубка. Из нижнего конца бюретки при посредстве
каучуковой трубки жидкость через стеклянную канюлю по-
ступает в бедренную вену кошки. По пути включается спи-
раль, помещаемая в баню для поддержания постоянной тем-
пературы вводимого раствора. Средняя продолжительность
опыта устанавливается в 40 минут с колебаниями на 15 минут
в ту или другую сторону, т. е. от 25 до 55 минут. Быстрота
вытекания в этих границах колеблется примерно в пределах
от 0,5 до 1 см3 в минуту. На бюретке прямо отмечается коли-
чество инфуза, потребовавшегося в каждом данном опыте для
смерти кошки. Ввиду того что находящаяся внутри бюретки
стеклянная трубка вытесняет собой некоторый объем жидко-
сти, абсолютная точность расчета несколько уменьшается. Не-
смотря на относительно очень небольшую ошибку, все сравни-
тельные испытания лучше производить всегда при помощи
одной и той же аппаратуры.
Для соблюдения равномерности реакции животных тре-
буется их тщательный подбор. Само собой разумеется, что
больные животные (нужно особенно иметь в виду сравни-
тельно частые случаи воспаления легких) не должны употреб-
ляться; то же касается беременных самок. В случае, если та-
кое животное все же почему-либо было взято для опыта, ре-
зультат такового не должен быть засчитываем, после того
как вскрытие подтвердит картину беременности или болезни.
Точно так же не должны итти в счет случаи, в которых
кошка обнаружит необъяснимое повышение или понижение
восприимчивости. Вес кошек, пригодных для испытания, не
должен быть меньше 1,7 кг и не должен превышать 2,7 кг.
В таких больших пределах, конечно, нель,зя считать каждое
животное за единицу — расчет ведется на 1 кг веса живот-
70
ного. В указанных пределах (1,7—2,7 кг) количество яда, по-
требное для отравления сердца кошек, пропорционально их
весу.
Для получения удовлетворительных результатов после не-
скольких ориентировочных опытов, обнаруживающих, прибли-
зительную силу испытуемого отвара, производят целую серию
определений. Ориентировочные опыты могут быть включены
в общее число только в том случае, если концентрация отвара
не меняется, что иногда может иметь место при высокой
активности листьев, когда О,5°/о инфуз на основании ориен-
тировочных опытов приходится несколько развести. Коли-
чество опытов, необходимых для того, чтобы средний резуль-
тат из их числа обнаруживал уклонение от истинной ценности
листьев не более чем на 5°/о в ту или иную сторону, каждый
раз может быть различным. Произведенный де Линд ван Виин-
гарденом38 матёматический анализ показал, что удовлетво-
ряющий вышесказанной точности результат получится в том
случае, когда число опытов будет таково, что среднее про-
центное отклонение данных отдельных опытов от среднего
результата всех произведенных определений будет меньше
произведения 6,67 на квадратный корень из числа опытов без
одного. Обозначив число опытов через, п, мы получим, что
только что сказанное отклонение должно быть меньше
6,67|/^ZZ7j. Когда опыты проделаны в числе, достаточном для
того, чтобы удовлетворить приведенному условию, присту-
пают к расчету. Средняя цифра из всех определений коли-
чества, потребовавшегося в каждом опыте на 1 кг веса кошки
для остановки сердца, будет искомым титром, тем числом, ко-
торое в первоначальной редакции этой методики (Хэтчер и
Броди36) носило название одной кошачьей единицы.
Дальше легко может быть рассчитано количество смертель-
ных кошачьих доз, содержащихся в 1 г испытуемых листьев;
для этого число 200 делят на полученную в конечном итоге
величину, так как из 1 г листьев получается 200 г полупро-
центного инфуза. Для того чтобы вычислить в миллиграммах
количество листьев, потребных для смертельной дозы на 1 кг
веса кошки, множат полученное число на 5, так как 1 см3
настоя, в котором смертельные дозы выражены, содержит в
себе 5 мг. Для единообразного понимания активности препа-
ратов наперстянки было предложено понятие «международ-
ная единица действия». Под 1 МЕД понимается действие 0,12
международного стандартного препарата (сухих листьев).
В оригинальном методе Хэтчера и Броди кошкам вводился
препарат наперстянки в дозе, составляющей примерно 75%
смертельной, вслед за чем вводился дополнительно строфан-
тин для получения полной остановки сердца. Метод Междуна-
родной комиссии, как явствует из описания, требует получе-
ния остановки от одной наперстянки. По данным Бауера и
Фромхерца 54 при пользовании оригинальным методом Хэтчера-
71
и Броди препараты наперстянки оказываются несколько бо-
лее активными.
Несмотря на встречающиеся в литературе возражения про-
тив точности методики работы на кошке (Хаскелл и Коурт-
ней55, Курода56), длительное изучение и проверка ее цити-
рованными выше голландскими авторами, подтвержденные вы-
сокой авторитетностью Международной комиссии, позволяют
считать ее вполне отвечающей своему назначению. Родсма и
Гёлам57 подчеркивают особое значение методики Хэтчера и
Броди в жарком климате, где способ оценки листьев на ля-
гушках является абсолютно непригодным.
Эсвельд58 подчеркивает несоответствие между обычным
способом введения в клинике — per os — и принятым в дан-
ном методе внутривенным введением. Опытами с введением
препаратов per os децеребрированным кошкам и сравнением
эффекта, получаемого таким путем, с эффектом от внутри-
венного введения этот автор установил значительную разницу
в действии. И,з других замечаний по поводу метода Между-
народной комиссии "на кошках заслуживает упоминания пред-
ложение Рэпсона и Эндерхила59 о замене кошек кроликами,
на которых опыт протекает значительно скорее. Однако это
предложение, ранее выдвигавшееся еще Нири и Дюбуа 60, было
опровергнуто Лендле 61, показавшим, что результаты, получае-
мые на кроликах, колеблются в огромных пределах сравни-
тельно с результатами, получаемыми на кошках.
Точность методики, без сомнения, кроется как в свойствах
кошек — их неменяющейся резистентности, — так и в самой
методике: непосредственное введение яда в кровь устраняет
такой сложный фактор, как всасывание, присущий большин-
ству других способов испытания. Метод стандартизации
листьев наперстянки на кошках принят голландской Фарма-
копеей.
Для сравнения тех требований, которые предъявляют
к листьям наперстянки Международная комиссия и Фармако-
пея СССР, требовалось сравнение активности советского стан-
дартного препарата и листьев, служащих международным
стандартом. Многократно проведенными по методу Фармако-
пеи СССР испытаниями мы могли установйть, что V стандарт-
ных листьев равен 55, т. е. лежит в пределах, допускаемых
советской Фармакопеей, но все же значительно уступает V
советского стандарта, изготовленного из расчета содержания
в листьях 66,6 ЕД в 1 г.
Международный стандартный препарат должен останавли-
вать сердце лягушки в дозе 0,72 мг на 1 г веса (Кнафль-
Ленц62), таким образом, 1 г содержит 1 400 доз, считая на 1 г
веса. При пересчете на 30-граммовую лягушку по Фармакопее
СССР мы должны были бы получить 1 400 : ’30 = 46,6 ЕД. Ка-
жущееся расхождение между этими данными и полученным
в опыте — 55 — объясняется тем, что при принятом Фармако-
72
пеей С 2 СР более коротком времени наблюдения количество
действующих начал, потребное для остановки сердца, не-
сколько уменьшается, ибо при значительном удлинении опыта
часть остановившихся от пограничных доз сердец может
снова начать работать.
Кроме перечисленных легализованных методов испытания
листьев наперстянки, имеется еще один, который, не будучи
признан обязательным, имел в свое время в Германии и до
сих пор имеет у нас некоторое количество приверженцев, —
это метод, предложенный Фоке 35.
Объектом испытания служит та же лягушка, критерием
служит также остановка сердца, но расчет ведется иным пу-
тем. Ценность препарата определяется не прямым содержа-
нием в нем известного количества действующих начал, еди-
ниц действия, а вычисляется из формулы 1/==—^. буквой V
выражается валор, ценность препарата, под р понимают вес
данной лягушки, d обозначает взятую дозу, t — время, про-
шедшее от момента инъекции до остановки сердца. Для опыта
берутся лягушки Rana temporaria, небольшие, весом 20—30 г,
сердце перед опытом обнажается так же, как это было опи-
сано для метода Фармакопеи СССР. Количество вводимого
препарата должно составлять от Vso до 1/зовеса лягушки, т. е.
для 20-граммовой оно будет равняться в среднем 0,5 см3, для
30-граммовой — 0,75 см3. Из испытуемых листьев пригото-
вляется инфуз, непременно 10%, нужное количество которого
вводится равными частями в оба бедренных лимфатических
мешка. Листья среднего хорошего качества имеют, по Фоке,
V, равный 4. Для получения такого V остановка сердца должна
20
наступить чрезвычайно быстро, что видно из примера: 4 = ^-^;
t = 10. Листья лучшего и худшего качества дадут соответ-
ственно остановку в больший или меньший промежуток вре-
мени Испытание должно дать одинаковые результаты не ме-
нее чем на 4 лягушках.
Как видно из сказанного, принцип расчета в этом методе
резко отличается от всех вообще методов испытания напер-
стянки: вместо определения количества препарата, способного
в известное время вызвать определенный эффект, опреде-
ляется время, в которое известная доза сможет вызвать тре-
буемую картину. Особенно нужно отметить, что период вре-
мени при этом должен быть особенно коротким. Кроме того,
не допускается широкое пользование границами времени: пер-
воначально Фоке считал результаты пригодными, если оста-
новка наступала не ранее 7 и не позже 20 минут; впослед-
ствии границы были сужены еще более: колебания допуска-
ются лишь в пределах между 7 и 14 минутами.
73
Такая своеобразность условий явилась следствием попытки
автора проанализировать свою собственную методику и дать
ответы на ряд само собой напрашивающихся вопросов о вса-
сываемости в такой короткий промежуток времени и о про-
порциональности между всасывающейся частью и всей дозой,
об изменении силы препаратов соответственно изменению их
концентрации и т. д. Строгое ограничение концентрации на-
стоев и вводимого количества является результатом деталь-
ного исследования этих вопросов, произведенного Фоке.
Опыты состояли в том, что в совершенно аналогичных усло-
виях сравнивалось действие настоев различной концентрации
одного и того же образца листьев и одновременно произво-
дилось сравнение действия разных доз настоев одной и той
же концентрации; расчет доз велся на вес лягушки, определя-
лось отношение между взятой дозой и весом лягушки. В ре-
зультате этих опытов оказалось, что настои различных кон-
центраций, приготовленные из одних и тех же листьев, дают
разный V.. В случаях применения, например, отвара 1 : 6,6 и
1 :40 V соответственно менялся с 3 до 7. Таковы результаты
при введении одного и того же количества, в данном случае
равного 1 : 40 веса лягушки. Изменение количества вводимого
настоя меняло V почти в такой же степени, как и изменение
концентрации раствора: уменьшение количества вводимого от-
вара в 5 раз (V200 веса лягушки вместо V40) дало увеличение
V с 3 до 6. Сущность изменения V в зависимости от концен-
трации раствора и размера дозы заключается в тех совер-
шенно различных свойствах, которыми обладают настои раз-
ной крепости, и в условиях их всасываемости, особенно в ко-
роткий промежуток времени.
Известно (Паранжпе 63), что всасываемость настоя из лим-
фатического мешка лягушки ни в коем случае не может за-
кончиться в 10 минут. Быстрый эффект, обнаруживающийся
уже через такой короткий промежуток времени, сводится, оче-
видно, к всасыванию лишь некоторой части введенного на-
стоя, и именно каких-то веществ, особенно к тому способных.
С другой стороны, уже давно установлено, что возможно
большее количество действующих начал переходит в настой
лишь в том случае, если концентрация его очень незначительна
и составляет 1 или даже О,5°/о. Увеличение концентрации до
1О°/о, как это имеет место в методике Фоке, благодаря пере-
ходу в инфуз большего количества экстрактивных веществ,
создает условия для более медленного всасывания из него дей-
ствующих начал. Поэтому делается понятным, что более сла-
бые концентрации настоев, как обладающие меньшим количе-
ством примесей, тормозящих всасывание, дадут больший V;
этим же объясняется и парадоксальное на первый взгляд уве-
личение V при уменьшении дозы: всасывание менее концен-
трированных настоев идет быстрее и лучше, уменьшение же
основной дозы уменьшает количество глюкозидов не настолько,
74
чтобы их было недостаточно для быстрой остановки сердца,
ибо при способе Фоке основная доза всегда содержит такой
избыток действующих начал, что уменьшение ее даже в не-
сколько раз оставит достаточное количество для получения
нужного эффекта.
Сравнение точности получающихся результатов при тех или
иных дозах настоев разной концентрации привели Фоке к вы-
работке вышеупомянутых ограничений — инфуз должен быть
1О°/о, количество вводимого настоя должно лежать в границах
между 1/зо и 1/so веса лягушки, время опыта ограничивается
7—14 минутами. Сказанные условия лишают метод Фоке не-
обходимой для всякого метода стандартизации широты. Этот
способ дает возможность судить лишь о листьях, содержание
действующих начал в которых лежит не ниже и не выше опре-
деленной границы. Валор вне допускаемых методикой преде-
лов не может считаться точным. В абсолютных цифрах, взяв
для примера лягушку весом в 30 г и приняв вводимую дозу
равной Убо веса лягушки (0,6 г), получим при минимальном
времени (7 минут) V, равный приблизительно 7, а при макси-
мальном (14 минут) — приблизительно 3, что явствует из со-
ответствующего расчета:
30 50 7 30 _50
0,6x7 7 0,6x14 14~6’b-
При других соотношениях между весом и дозой цифры по-
лучатся приблизительно те же самые. Таким образом, сужде-
ние об испытанных листьях будет иметь значение только
тогда, когда V их будет лежать в границах между 3 и 7. Та-
кое ограничение лишает метод практической пригодности, так
как биологическое испытание имеет целью не только уста-
новку препарата с определенным средним V, но и стремится
избавить клинику от резких колебаний и в первую очередь от
низких сортов трав. Суждение о сырье, имеющем V меньше 3,
будет неполным, так как метод не даст ничего, кроме того, что
валор лежит ниже 3, и оставит нетронутым вопрос о содержа-
нии действующих начал в испытанном образце.
Необходимо отметить, что, производя свои опыты, Фоке
исходил из 1О°/о настоя и уже из него готовил дальнейшие
разведения. Такой способ мог дать менее резкие колебания,
чем это можно было бы предположить в том случае, если бы
настои разной концентрации готовились каждый раз непосред-
ственно из листьев.
В отсутствии необходимой широты заключается главная
отрицательная черта этого метода, которая, однако, не яв-
ляется единственной. Работа по методу Фоке ведется, в сущ-
ности, втемную, ибо зависимость между всасываемостью и
концентрацией остается неизученной. Очень остро в этой ме-
тодике обстоит вопрос с соблюдением постоянства темпера-
туры: фактор этот, играющий несомненную роль в каждой
75
методике, в данном случае приобретает сугубую важность, так
как колебания температуры резко меняют V. Гинзберг и Голь-
берг 63а приводят опыт, в котором испытание строфантина (хи-
мически чистого вещества, следовательно, с исключением мо-
мента препятствия к всасыванию со стороны всевозможных
примесей) дало при одних и тех же дозах на лягушках рав-
ного веса и при прочих равных условиях, но при изменении
температуры разные результаты.
При изменении температуры от 19,5 до 22 и 24° V соответ-
ственно менялся от 4,32 до 5,37 и 7,5.
Одновременно с перечисленными метод Фоке обладает не-
достатком, присущим и часовому методу нашей Фармакопеи —
обнажением сердца. Если это последнее возражение легко мо-
жет' быть отклонено отнесением этой операции к числу необхо-
димых для производства опыта условий, в равной мере касаю-
щихся всех лягушек, то вышеперечисленные отрицательные
стороны окончательно затмевают собой те немногие чисто
внешние преимущества, которыми обладает метод Фоке, —
малую потребность в лягушках и быстроту работы.
Интересно, что, несмотря на очевидность недостатков
этого метода, он нашел себе признание в качестве официаль-
ного в японской Фармакопее, претендующей на научную обос-
нованность своих методов. Вполне понятно поэтому, что это
встретило суровую критику со стороны даже и некоторых
японских авторов, например, Нуки 64.
И,з препаратов наперстянки обязательному исследованию по
нашей Фармакопее подлежит тинктура. По требованию Фарма-
копеи 1 см3 официальной тинктуры, приготовленной по отно-
шению к сырью, как 1 : 10, должен содержать не меньше 4 ЕД
по методу часового испытания сердечных средств на лягушках.
Это значит, что 0,25 см3 тинктуры должно быть наименьшей
дозой, вызывающей остановку сердца у большинства лягушек.
Испытания тинктуры, кроме соблюдения всех вообще нужных
правил, требуют ее предварительной обработки. Как было ука-
зано выше, процент содержания спирта в инъицируемых ля-
гушкам растворах не должен превышать 25; по Фармакопее
тинктура готовится на 70° спирте. Взятое количество не-
сколько упаривается. Сгущенная настойка разбавляется за-
тем водой с тем расчетом, чтобы довести объем до двукрат-
ного по отношению к исходному количеству объема, что
будет соответствовать 1 : 20 по отношению к листьям. Таким
образом, например, из 10 см3 тинктуры получим 20 см3 рас-
твора с содержанием 20—25% спирта, т. е. придадим пре-
парату концентрацию, в точности соответствующую концен-
трации приготовляемого при испытании листьев экстракта.
Ввиду того что тинктура разводится, следовательно, вдвое,
соответственно должна быть повышена доза: для удовлетво-
рения требованиям Фармакопеи раствор должен останавли-
76
вать сердце в дозе 0,5 см3. Испытание, само собой разумеется,
ведется с контролем.
Приведем несколько примеров.
1. Взятые 10 см3 тинктуры упарены до 6 см3; к последним
добавлено 14 см3 дестиллированной воды. Получено 20 см3
раствора с нужным содержанием спирта. Контрольным опытом
установлена нормальная сопротивляемость лягушки. Взяты три
серии лягушек по 5 штук.
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систоличе- ская остановка Примечание
1 33 1 0,3 Преходящая
остановка
2 32 0,3 Через 55 м.
3 28 10 ч. 00 м. 0,3 Явления
отравления
4 29 0,3 То же
5 29 0,3 Не оста-
повилось
6 31 0,4 То же
7 31,5 1 0,4 » 40 »
8 30 10 ч. 05 м. 0,4 » 59 »
9 28 0,4 » 1 ч. 03 »
10 29,5 0,4 » 50» V
11 29,5 0,5 » 40 »
12 32 0,5 » 35 »
13 31,5 10 ч. 10 м. 0,5 » 40 »
14 33 0,5 » 25 »
15 30 0,5 Явления
отравления
Нужная доза — 0,4 см3, что соответствует 0,2 см3 неразве-
денной тинктуры. Отсюда 1 см3 содержит 1 : 0,2 = 5 ЕД. Тинк-
тура вполне удовлетворяет требованиям Фармакопеи, превы-
шая на 20% минимальный предел.
2. Обработка тинктуры та же. Сила лягушек нормальна.
Дозы 0,3 и 0,4 см3 остановки не дали; доза 0,5 См3 дала прехо-
дящую остановку у двух лягушек. Далее взяты еще две дозы.
Доза 0,7 см3 велика, 0,6 см3 мала; нужной будет среднее:
0 । 0
——2—— — 0,65, что соответствует 0,325 см3 неразведенной
тинктуры. Последняя, таким образом, содержит 1 .0,325 =
= 3,08 ЕД. Испытанная тинктура не удовлетворяет требова-
ниям Фармакопеи. В этом случае пришлось прибегнуть к очень
большим дозам.
В приводимых двух примерах последовательные дозы отли-
чаются одна от другой на 0,1 см3, что соответствует обычным
0,05 см3 на неразведенный препарат
Из иностранных Фармакопей, принявших требование о стан-
дартизации t-rae Digitalis, можно указать на Фармакопею США.
77
№ Вес (г) Время инъекции Доза (см3) Систоличе- ская остановка Примечание
1 31 0,6 Через 58 м.
2 32 0,6 » 50»
3 32,5 0,6 Не оста-
1 ч. 00 м. новилось
4 28 0,6 Явления
отравления
5 29 0,6 Преходящая
остановка
6 28 1 0,7 » 59»
7 29 1 0,7 » 55»
8 33 11 ч. 05 » 0,7 » 48»
9 32 0,7 » 1 ч. 02 »
10 31 1 0,7 » 49»
Произведенный пересчет дозы с 1 г веса лягушки на средний
вес (30 г) показывает, что требования последней несколько
превышают требования нашей Фармакопеи: 1 см3 настойки
должен содержать около 5,5 ЕД.
По правилам Международной комиссии, t-ra Digitalis может
испытываться как на лягушках, так и на кошках. Для испы-
тания на лягушках 10 см3 настойки упариваются на водяной
бане при температуре, не превышающей 60°, до половинного
объема. Упаренная жидкость сливается в мерную колбу емко-
стью 25 см3, которую до мерки доливают дестиллированной
водой. В дальнейшем с этим раствором поступают точно так
же, как с экстрактом из листьев.
Для испытания на кошках настойка разводится физиологи-
ческим раствором в 20 раз.
Несмотря на то, что целью настоящей работы не является
сводка всех методов и предложений по стандартизации, неко-
торые из них заслуживают быть здесь упомянутыми, хотя
практическое их распространение сравнительно невелико.
Большой интерес привлекал и продолжает привлекать к
себе метод, описанный Тревэном24. Этот автор считает воз-
можным выводить заключение об активности препаратов по
смертельной дозе, сравнивая полученный в опыте эффект с
постоянной для данного препарата кривой смертности лягушки.
Тревэн установил, что для тинктуры наперстянки максимально
переносится доза примерно в 5 раз слабее смертельной дозы
для всех подопытных животных. Из построенной им кривой,
где на оси абсцисс отложены дозы, а на оси ординат число
погибших лягушек в процентах, следует, что наиболее подхо-
дящей дозой (для настойки наперстянки) является доза, вы-
зывающая 50% смертности подопытных животных. Как видно
на рис. 1, воспроизводящем кривую Тревэна, кривая в сред-
ней своей части близка к прямой линии, что указывает на
прямую пропорциональность между изменением дозы и полу-
72
чаемым эффектом. Подобный характер кривой для выражения
восприимчивости организма к некоторым ядам был показан
еще ранее Шэкелем65 с сотрудниками. Определяя по Тревэну
дозу, вызывающую смертность лягушек в пределах, близких
к 50%, можно, следовательно, пользуясь стандартной кривой,
прямо определять активность испытуемого образца. Данные
Тревэна, вызвавшие большую критическую литературу, в
основном большинством авторов подтверждались. Некоторые,
например, Хамэ66, подчеркивает резкую разницу в характере
кривых, получаемых, как и у Тревэна, на лягушках Rana
temporaria для чистых глюкозидов и галеновых препаратов.
Моллер67 считает, что не имеется необходимости доби-
ваться дозы, вызывающей остановку сердца именно у 50%
лягушек, и что достаточно точные результаты могут быть по-
лучены и при определении доз, убивающих от 20 до 80% ля-
гушек. Особо следует отметить совершенно справедливое за-
мечание Фромхерца и других относительно того, что кривая
Тревэна не носит универсального характера и значительно
отличается от кривых для других глюкозидов группы напер-
стянки, в частности, особенно для строфантина. Это снова
подчеркивает необходимость пользоваться для каждого вида
соответствующим стандартом. Интересно, что даже разные
препараты наперстянки, более или менее очищенные, дают
весьма различные кривые смертности по Тревэну (Хамэ66).
Данные Тревэна легли в основу метода британской Фарма-
копеи. Выдерживающие требования этой Фармакопеи листья
должны вызывать смертность лягушек в равных количествах
по сравнению со стандартным экстрактом, ex tempore изгото-
вляемым из стандартных листьев путем продолжительного'
извлечения их абсолютным алкоголем. Опыт должен прово-
диться на 24 лягушках, одной половине которых впрыски-
вается испытуемый экстракт, а другой — стандартный. Для
вычисления активности препаратов предлагается пользоваться
нижеследующей таблицей, устанавливающей зависимость ме-
жду процентом погибших в течение 4 часов лягушек и актив-
ностью препарата.
% погибших лягушек Активность % погибших лягушек Активность
5 56 55 103
10 67 60 107
15 75 65 110
20 80 70 114
25 83,5 75 118
30 87 80 122
35 90 85 127
40 93,5 90 134
45 97 95 146
50 100 100 150
79
После ориентировочного испытания на другой день опыт
повторяют, вводя лягушкам раствор в новом разведении на
основании данных первого опыта в дозах, дающих смертность
лягушек в пределах 50%.
Большое внимание привлек к себе метод Хэнцлика 68, осно-
ванный не на определении действия наперстянки на сердце,
а на присущей веществам этой группы способности вызывать
рвоту голубей.
Эта реакция, не зависящая от действия на сердце, оказа-
лась сравнительно очень удобной и простой, занимающей
мало времени. Испытание на голубях сводится к введению
препарата в вену крыла и дальнейшему наблюдению за пти-
цами. Рвотный эффект наступает внезапно в среднем в пре-
делах1 от 1 до 15 минут. Как всегда при биологическом
эксперименте, определяется наименьшая из доз, дающих дан-
ный эффект. Большие дозы приводят к смерти голубей в пе-
риод от 5 минут до часа, в среднем в 35 минут. Док, Стоктон
и Леман69, проведшие сравнение между определением актив-
ности препаратов по смертельному и рвотному действию у
голубей и другими обычными методами, установили, что дан-
ные по смертельному эффекту у голубей соответствуют дан-
ным по смертельному эффекту на кошках, а данные по рвот-
ному эффекту у голубей отличаются от только что указанных
весьма значительно и больше отвечают данным на лягушках
и изолированных сердцах теплокровных. Далее эти авторы
считают, что по рвотному эффекту возможно более точно
улавливать разницу в действии, чем по смертельному. Леман
и Хэнцлйк70 установили, что отношение смертельной и вызы-
вающей рвоту доз для голубей не представляет собой по-
стоянной величины, а колеблется в зависимости от качества
препаратов. Для препаратов с невысокой активностью (дига-
лен, дигифолин) отношение дозы рвотной к смертельной со-
ставляет 1:2— 3, для высокоактивных препаратов—1:10,
для средних по активности продуктов’—1 :5 — 5,5. В послед-
нюю группу попадает международный стандарт наперстянки
(высушенные листья).
Согласно данным Хэнцлика, следует, что рвота у голубей
наступает рефлекторно и не связана с отравлением сердца;
отчасти именно поэтому Стоктон71 считает метод с вызы-
ванием рвоты у голубей лучшим из всех методов в биологи-
ческой оценке. По мнению этого автора, рвотная доза на 1 кг
веса голубя (при внутривенном введении) может быть непо-
средственно перенесена на человека при введении per os. Для
практического выполнения метода Хэнцлика с добавлениями
Бэрна 72 и Шунтермана73 предлагается пользоваться голубями
со средним весом 250—300 г одного штамма, используя птиц
не чаще одного раза в неделю. Имеются указания, что муж-
ские особи несколько более резистентны, чем женские.
50
Несмотря на приведенные благоприятные отзывы, метод на
голубях широкого практического применения пока не нашел.
Причину этому следует искать, повидимому, в том факте, что
рвотное действие не связано с влиянием на сердце. Хотя
принципиально, как это было указано уже в общем обзоре
методов биологической оценки, это и не может служить осно-
। ванием для признания метода непригодным, широчайшая воз-
можность пользоваться хорошо изученными методами, осно-
ванными на определении специфических свойств наперстянки,
вполне объясняет это положение.
Попрежнему многие авторы продолжают настаивать на
недостаточной точности методов, основанных на введении
препаратов под кожу, исходя из тех соображений, что при
всасывании из лимфатического мешка (лягушек) концентра-
ция в крови все время будет1 меняться. Берарди, Кэннон и
Макгигэн74 предлагают испытывать листья наперстянки по
действию их 10% настойки на собак при внутривенном вве-
дении и отмечать при этом не «остановку сердца, а урежение
пульса. Частота последнего падает пропорционально силе
действия испытуемой тинктуры. Обычно 10% настойка в ко-
личестве 0,02 см3 на 1 кг веса собаки через 30—60 минут вы-
зывает уменьшение количества ударов на 20%. Вводимое ко-
личество тинктуры предварительно разбавляется физиологи-
ческим раствором
Ульман75, считающий метод Международной комиссии на
кошках громоздким и сложным, предлагает проводить испы-
тание на лягушках с внутривенным введением. Для этого у
них вскрываются сердце и брюшная стенка, на внутренней
стороне которой лежит брюшная вена (v. abdominalis). Послед-
няя служит местом введения. Остановка сердца наступает
очень быстро, начиная от 15 секунд до нескольких минут
В качестве стандарта предлагается пользоваться строфанти-
ном, который берется в растворе 1:10 000. Установлено, что
0,005 см3 этого раствора на 1 г веса лягушки вызывает оста-
новку сердца через 7 минут. При испытании препаратов опре-
деляется, какая доза способна вызвать остановку в течение
этого времени. Хорошие препараты должны давать остановку
в этих же дозах, т. е. 0,005 см3 на 1 г веса лягушки. Сравне-
нием найденной дозы с 0,005 см3 определяется ценность пре-
парата.
Неудобство этого метода в техническом отношении и не-
правильность в выборе стандарта очевидны сами собой. По
Кнафль-Лентц76, определяется остановка сердца через 1 час
после внутривенного введения препарата лягушке (в v. musculo-
cutan.). В последнее время в пользу внутривенного введе-
ния лягушкам и краткого времени наблюдения высказывается
также Кутателадзе, работающий на Rana ridibunda. Ряд япон-
ских авторов возражает против методов, основанных на вы-
зывании остановки сердца, рекомендуя пользоваться опреде-
€—317 81 *•
лением характерных изменений в работе переживающих
сердец лягушек Ranae nigromaculatae (Такабе47, Токита77, Та-
мура и Кобаяши 78 и др.).
Заслуживает упоминания предложение Дьёэда, Тёнга и
Бьена79 об испытании препаратов наперстянки на людях,
/ больных и здоровых, с регистрацией результатов при помощи
электрокардиограмм. Крайне сложен и длителен предлагаемый
Дефандорфом80 метод определения задержки мочеотделения
у кошек при внутривенном введении, требующий наблюдения
в течение 7 часов. Интересной стороной этого метода является
попытка практически использовать давнее наблюдение Гот-
либа и Магнуса81 и Маршала 82 о сужении сосудов почек под
влиянием внутривенных введений препаратов наперстянки
здоровым животным.
При испытании разнообразных патентованных препаратов
можно встретиться с различными препятствиями, зависящими
от способов приготовления препаратов, их консервирования
и т. д. Так, например, клинически имевший высокую оценку
препарат дигален дает при часовом методе (и особенно по ме-
тоду Фоке) несоразмерно низкие цифры, что может объяс-
няться содержанием в этом препарате 25% глицерина, своим
присутствием затрудняющего всасывание действующих на-
чал. Обстоятельство это может быть обойдено применением
в данном случае другого метода, а именно так называемого
бессрочного метода Международной комиссии, так как при
* удлинении времени наблюдения все действующие начала спо-
собны всасываться нацело; в параллельно поставленных опы-
тах Эрисман83 получал совершенно одинаковые результаты
от препаратов, свободных от глицерина, и с добавлением по-
' следнего. Справедливость требует, однако, отметить, что всеми
способами получаемые для дигалена цифры говорят о малой
активности этого препарата и никак не согласуются с теми
представлениями, которые создались об этом препарате на
основании благоприятных клинических отзывов.
В наших опытах по испытанию советских патентованных
препаратов дигиталиса — гиталена и дигинорма, — из которых
первый представляет собой специальным образом обработан-
ный водный экстракт, а второй — спиртовый экстракт листьев
наперстянки, мы могли убедиться, что сердца, остановившиеся
от водных растворов действующих начал, гораздо чаще спо-
собны восстановить свою работу, чем сердца, остановка кото-
рых вызвана спиртовым экстрактом. Объяснения этому явле-
нию находим в работе Клоеттапоказавшего, что в листьях
находятся в чистом виде генины глюкозидов, способные пере-
ходить в воду, и в прямых опытах Деджиакоми, установившего'
легкую отмываемость изолированных сердец (лягушек) после
вызванной остановки их генинами.
Переходя к описанию исследования других сердечных
средств—травы горицвета и семян строфанта (испытание
82
которых принято нашей Фармакопеей как обязательное), не-
обходимо прежде всего отметить несоответствие между полу-
чающимися путем эксперимента данными и клиническим
эффектом от приготовляемых из указанного сырья препара-
тов. Если врач, назначая больному лечение наперстянкой, вы-
писывает настой в отношении 0,6—1,0 : 200,0, то при назначе-
нии горицвета он выпишет 5,0 и больше на 200,0 или, не
боясь токсического эффекта, даже позволяет самому больному
заваривать траву на-глаз, как чай. В эксперименте на лягуш-
ках мы видим другие соотношения: в то время как 1 г листьев
наперстянки содержит 65 ЕД, в том же количестве горицвета
содержится 45 (а иногда и много больше) ЕД — разница, очень
незначительная. Подобное же по характеру, но еще более рез-
кое количественное различие существует и между наперстян-
кой и строфантом: несколько более сильная по клиническому
эффекту тинктура строфанта содержит минимум 200 (а часто
и много больше) ЕД, тогда как тинктура дигиталиса содер-
жит 4—5 ЕД. Сущность такого расхождения заключается в
повышенной восприимчивости к адонису и строфанту лягу-
шек сравнительно с человеком или в пониженной восприим-
чивости человека сравнительно с лягушкой. Этими примерами
очень хорошо подтверждается указанная в главе I необхо-
димость основной ориентировки только на клинику. В слу-
чаях, подобных сказанному, оценка препарата по абсолют-
ному эффекту на животных дала бы совершенно ложные ре-
зультаты. Еще большая разница, бросающаяся в глаза, отме-
чается при изучении активности других растительных продук-
тов группы наперстянки, особенно майского ландыша.
Разница в действии различных препаратов группы напер-
стянки может объясняться их различной разрушаемостью в
желудочно-кишечном тракте.
Означенная оговорка необходима для того, чтобы преду-
предить возможное недоумение по поводу приводимых в
дальнейшем цифр.
Испытание Herbae Adonidis vernalis ведется совершенно
аналогично испытанию листьев наперстянки. Приготовление
экстракта производится тем же точно образом; высушенная
при 60—80° и измельченная трава экстрагируется в аппарате
Сокслета в течение 8 часов десяти-пятнадцатикратньгм количе-
ством абсолютного этилового алкоголя; экстракт упаривается,
разбавляется водой для доведения концентрации спирта до
25% и с тем, чтобы раствор был двадцатикратным по отно-
шению к листьям. По требованию Фармакопеи, 0,45 см3 этого
экстракта должны быть нужной дозой. Таким образом, содер-
жание действующих начал в 1 г травы составит 20:0,45 =
= 44,44 ЕД. Листья, содержащие действующие начала в мень-
шем количестве, признаются негодными. Высшим пределом,
по Фармакопее, является содержание в 1 г травы 66 ЕД.
Сравнив содержание действующих начал в одинаковом коли-
6* 83
I
честве сырья наперстянки и горицвета, мы увидим, что и то,
и другое содержит приблизительно одинаковое количество
действующих начал. Между тем в клинике, как уже сказано,
для достижения эффекта нужны пятикратные количества го-
рицвета сравнительно с наперстянкой. В том, что это не за-
висит от плохого перехода действующих начал горицвета в
настой, можно убедиться на примере очищенных препаратов —
гиталена и адонилена, из которых второй, давая эффект,
приблизительно равный эффекту первого, содержит в 5 раз
больше лягушиных единиц действия: 1 см3 гиталена содержит
5 ЕД, 1 см3 адонилена — 25 ЕД.
Аналогия испытания наперстянки и горицвета касается
также приготовления стандартного раствора и его концент-
рации. Экстракция абсолютным спиртом в аппарате Сокслета
дает исчерпывающее извлечение действующих начал (Певз-
нер 84). 1 см3 стандартного экстракта горицвета на крепком
этиловом спирте (94—96°), приготовленного точно так же,
как экстракт наперстянки, содержит 13,33 ЕД; разведение
этого экстракта в 4 раза водой даст раствор с содержанием
25°/о спирта активностью 3,33 ЕД в 1 г. Таким образом, оста-
новка сердца у лягушки нужного веса будет вызываться
1 : 3,33 = 0,3 см3. Выбор спирта в качестве экстрагирующего
вещества объясняется удобством и длительной сохранностью
действующих начал в спирте. Данные о глюкозидах гори-
цвета, которые также были выделены в чистом виде и изу-
чены, указывают на то, что исчерпывающее извлечение мо-
жет быть получено также и путем извлечения водой, как хо-
лодной, так и горячей, благодаря стойкости этих глюкозидов
к нагреванию.
Приведение подробных примерных протоколов исследова-
ния представляется излишним, так как они в точности будут
совпадать с таковыми для наперстянки, за исключением сред-
них доз: тогда как для наперстянки хорошие листья в сред-
нем дадут остановку в дозе 0,3 см3 экстракта, для горицвета
доза будет несколько выше — 0,4—0,45 см3. Расчет ведется,
как обычно, принимая во внимание данные контроля.
Ввиду того что клиника применяет горицвет почти исклю-
чительно в вид£ инфузов, Фармакопея не предъявляет требо-
ваний к каким-либо другим препаратам из горицвета. Уста-
новленный предел активности, равный 45 ЕД, является мини-
мальным. На практике встречаются образцы (особенно цвету-
щие растения свежего сбора), гораздо более богатые дей-
ствующими началами: V травы может достигать 100—150 и
даже еще более высоких цифр. Из многочисленных обследо-
ванных нами образцов наиболее активной оказалась цветущая
трава, произрастающая в Крыму. Наоборот, в достаточно ши-
роко распространенном в Западной^ Сибири горицвете содер-
жание действующих начал оказалось необычайно скудным и
составляет всего 6—8—10 ЕД в 1 г.
84
Последнее из включенных в Фармакопею испытываемых на
лягушках сердечных средств, которое нам остается рассмо-
треть, — семена строфанта, — отличается от всех других тем,
что главное его действующее начало выделено и имеется
в химически чистом виде. Это сказалось на выборе стандарта,
в качестве которого принимается г-строфантин, иначе но-
сящий название уабаина. В этом стандарте мы одно-
временно имеем и химически чистое вещество, и производное
того же вида сырья, обладающее тем же эффектом, что и
сырье. В этом заключается первое отличие валоризации стро-
фанта от адониса и дигиталиса. Вторым отличием будет не-
большое изменение методики: срок наблюдения за сердцем
удлиняется до 2 часов. Удвоение промежутка времени до оста-
новки основано на практических данных. Наш опыт показал,
что эффект от обычных доз наступает к концу второго часа,
в то время как к концу первого часа особого действия на
сердца лягушек отметить не удается, несмотря на их самый
тщательный подбор и методическое выполнение всех необхо-
димых предосторожностей. Под обычной дозой понимается
доза, указываемая различными авторами. Такой дозой являет-
ся 0,3 см3 раствора строфантина, содержащего в 1 см3 0,05 мг
вещества. Введение этой дозы, не давая, как правило, эффекта
в течение часа, к концу второго часа вызывало остановку
у большинства лягушек. Ввиду того, однако, что у лягушек
средней полосы европейской части СССР остановка сердца от
0,3 см3 раствора указанной концентрации наступает далеко не
всегда, за стандартную дозу была принята несколько боль-
шая — 0,4 см3 раствора, содержащего в 1 см3 0,05 мг стро-
фантина.
Сущность замедленного проявления эффекта от строфан-
тина на первый взгляд представляется мало понятной. Если
оставить в стороне возможность индивидуальных отклонений
лягушек данной местности, то скорее всего можно было бы
рассчитывать на более быстрое наступление действия, чем это
имеет место для экстрактов наперстянки и черногорки. В са-
мом деле, чистые глюкозиды, а строфантин именно таковым
и является, обычно всасываются быстрее неочищенных экстрак-
тов. Именно для строфантина это показано Паранжпесз, по-
лучившим в 23 из 28 случаев полное всасывание в течение
30—45 минут (из бедренного лимфатического мешка ля-
гушки). w
Далее известно, что быстрое всасывание является момен-
том, способствующим скорейшему проявлению действия яда
(медленнее всасывающиеся лекарственные формы обнаружи-
вают эффект позднее). В том, что положение вещей, одцрко,
не так просто, можно убедиться хотя бы из того из-
вестного факта, что дозы некоторых сердечных средств,
введенные лягушкам даже в медленно резорбируемом виде,
не обнаруживают вообще эффекта, если он не наступает в те-
85
чение первого часа. Таким образом, медленное всасывание
еще не служит причиной для более позднего проявления эф-
фекта. Быстро наступающее освобождение мышцы сердца от
глюкозидов, как мы это знаем для действующих начал напер-
стянки, не имеет места для строфантина: последний разру-
шается в опытах на лягушином сердцу крайне медленно и не-
значительно (Готлиб). Позднее проявление эффекта от стро-
фантина должно, повидимому, объясняться какими-то своеоб-
разными условиями . замедленного усвоения мышцей сердца
уже циркулирующего в крови яда. Разбирая вопрос о дей-
ствии отдельных глюкозидов наперстянки на изолированное
сердце лягушки, Деджиакоми 53 нашел, что для всех глюкози-
дов токсичность обратно пропорциональна наступлению пол-
ного эффекта, т. е. что менее токсичные глюкозиды, от ко-
торых сердце может отмыться, скорее вызывают остановку
сердца. Возможно, что и действие строфантина подчиняется
этому закону и что в связи с большой токсичностью строфан-
тина конечный эффект от него наступает относительно поздно.
Повторяем, что сущность описанного явления может лежать
(по всей вероятности, по крайней Мере частично так оно и
есть на самом деле) и в своеобразной реакции на строфантин
лягушек нашей местности.
Вопрос о длительности опыта в данном случае разбирается
лишь по отношению к действующим началам отдельных пред-
ставителей группы наперстянки. Многочисленные литератур-
ные источники и Международная комиссия, как это было
указано выше, считают один час недостаточным сроком.
Весьма любопытно, что Нуки 64, критикующий принятый япон-
ской Фармакопеей метод Фоке, считает необходимым (на ля-
гушках Rana nigromaculata) вести наблюдение за действием
наперстянки не менее 2 часов, а строфанта — 4 часов. Таким
образом, здесь подтверждаются данные о вдвое замедленном
действии глюкозидов строфанта сравнительно с глюкозидами
наперстянки при определенных условиях опыта на лягушках
другого вида.
Что касается вообще постоянства резистентности лягушек
по отношению к строфантину, то здесь как литературные дан-
ные, так и собственные наблюдения одинаково сходятся в од-
ном: сопротивляемость лягушек колеблется в очень больших
пределах. Лягушки одного и того же улова, содержащиеся
в одних и тех же условиях, в течение зимних месяцев вдруг
начинают реагировать иначе, сопротивляемость их в отдель-
ные дни значительно повышается сравнительно со средним
уровнем.
За исключением указанного удлинения периода наблюде-
ния, и в особенности выбора стандарта, во всем прочем испы-
тание семян строфанта ведется совершенно аналогично испы-
танию наперстянки и горицвета. Ввиду того что из препа-
ратов строфанта на практике исключительно применяется
86
тинктура, по. нашей Фармакопее 10%, всякое определение
силы действия семян сводится к испытанию приготовленной
из них спиртовой настойки. Поэтому вместо приготовления
экстракта 1 :20 в аппарате Сокслета просто готовится обыч-
ным путем 10% тинктура, которая и подлежит испытанию
По требованию Фармакопеи 1 г тинктуры должен содержать
не менее 200 ЕД. Из этого следует, что для испытания тинк-
тура должна быть разбавлена в 50—100 раз. Разбавление ис-
пытуемых тинктур удобнее всегда производить в 100 раз и
лишь при необходимости введения очень больших доз пере-
ходить на более концентрированные растворы.
В качестве растворителя берется 25% спирт с тем, чтобы
воспрепятствовать возможному выпадению действующих на-
чал из сильно разбавленного водного раствора. Для соблюде-
ния идентичности условий всасываемости контрольный рас-
твор строфантина также должен содержать 25% спирта. Рас-
творение строфантина практически удобнее вести таким обра-
зом, чтобы из заранее приготовленного концентрированного
раствора ex tempore готовить раствор нужной концентрации —
0,05 мг в 1 см3. Содержание единиц действия в 1 см3 такого
раствора будет равняться 2,5, так как дозой, вызывающей
остановку сердца, является 0,4 см3.
Сравнение со стандартом, ввиду легкой изменяемости со-
противляемости лягушек, должно обязательно иметь место
при каждом испытании, даже если два испытания будут иметь
место на совершенно одинаковых лягушках на следующий
день один после другого. В случаях резкого уклонения от
средней нормы вносится соответствующая поправка, как это
было указано при описании валоризации наперстянки.
Если, например, дозы 0,4, 0,5 и 0,6 см3 стандартного рас-
твора строфантина оказались недостаточными и нужный эф-
фект к концу второго часа наступил лишь от 0,7 см3 этого
раствора, то, получив остановку от 0,6 см3 раствора 1 : 100
испытуемой тинктуры, дальше ведем расчет так:
0,4 :0,7 = х: 0,6; х = 0,345.
Это значит, что при нормальной резистентности лягушек
остановка наступила бы от 0,345 см3 испытуемого разведе-
ния тинктуры. Таким образом, 1 см3 этого разведения содер-
жит 1 :0,345 = 2,9, а нерцзведенная тинктура содержит
в 1 см3 290 ЕД, т. е. с избытком удовлетворяет требованиям
Фармакопеи.
В случае нормальной сопротивляемости лягушек та же доза
0,6 см3 дала бы совершенно иной результат: 1:0,6 = 1,66.
Тинктура в этом случае содержит в 1 см3' 1,66 X 100 = 166,
т. е. меньше допускаемого Фармакопеей предела.
В случае необходимости исследовать прямо готовую тинк-
туру поступают точно так же во всем, как это только что
описано для тинктуры, ex tempore приготовляемой из семян.
87
При испытании семян пользование обычной спиртовой на-
стойкой весьма удлиняет весь процесс, так как получение
тинктуры занимает много времени. При естественно возни-
кающем желании воспользоваться для испытания извлечением
семян строфанта в аппарате Сокслета аналогично извлечению
листьев наперстянки необходимо иметь в виду, что при таком
извлечении получаемый экстракт будет при пересчете на ис-
ходный материал всегда содержать несколько большее коли-
чество действующих начал сравнительно с тинктурой.
ГЛАВА III
ПРЕПАРАТЫ ЗАДНЕЙ ДОЛИ ГИПОФИЗА
Препараты задней доли гипофиза имеют весьма широкое
распространение, как вызывающие сокращение и повышение
тонуса органов с гладкой мускулатурой, в первую очередь
матки и кишечника, как повышающие тонус сосудов и как сред-
ства совершенно специфически задерживающие диурез. Кроме
того, питуитарные препараты * обладают еще целым рядом
свойств, которые частично используются с терапевтическими це-
лями, частично же имеют экспериментальный интерес. Сюда мо-
гут быть отнесены действие на отделение желчи и молодса, влия-
ние на секрецию слюнных желез, способность вызывать язву
желудка у кролика (Доде, Нобль, Смис, Сели, Стеле, Коллип 85),
влияние на меданофорный аппарат у амфибий. Такая разно-
сторонность и многообразие действия экстрактов задней доли,
естественно, вызвали вопрос о том, какие активные начала
обусловливают это действие. Естественно было предполо-
жить, что препараты содержат ряд гормонов, обладающих
специфическими свойствами. Такое предположение уже давно
было высказано Фюнером86 и Дрейпером87, причем послед-
ний считал возможным их раздельное выделение. Серьезным
подтверждением этого предположения служит то обстоятель-
ство, что приготовленные разными фирмами препараты обла-
дают разными свойствами. Так, например, питуитрин и гипо-
физин обладают различным вазомоторным действием, в то
время как основной эффект на матку качественно одинаков
для обоих препаратов (Попельский88). Известно, далее, что
не всегда антидиуретический эффект, препаратов идет парал-
лельно их способности сокращать матку. Прямых доказа-
тельств содержания разных гормонов в питуитарных препа-
ратах тем не менее долгое время получить не удавалось, по-
скольку вопрос об их выделении в изолированном виде ре-
шался отрицательно. Существовавшее в прежнее время мне-
ние о том, что одним из активных начал может быть гиста-
* Здесь, как и в дальнейшем в этой главе, для краткости опущено
указание на происхождение препаратов из задней доли.
89
мин (З-имидазолилэтиламин), обладающий способностью энер-
гично сокращать матку, давно оставлено.
В настоящее время отсутствие большого количества гиста-
мина в гипофизарных препаратах является одним из основ-
ных требований. Содержание гистамина в препаратах, как
будет показано дальше, не должно превышать того предела,
при котором на долю этого вещества приходится 5% всей
суммы .маточного эффекта препаратов. В таком количестве
гистамин может содержаться в жидких препаратах как допу-
стимая составная часть.
Далее по преимуществу работами школы Цондека89 было
установлено наличие в гипофизе специального меланофор-
ного гормона, присутствием которого в препаратах может
быть объяснено действие на меланофоры кожи.
Что .касается вопроса об основных сторонах действия
экстракта задней доли — влияния на матку, сосуды и диу-
рез,— то на основании работ Камма, Олдрич, Грота, Роу и
Бэгби89а, разделивших активные начала задней доли на маточ-
ную и прессорную фракции, можно считать доказанным, что
действие на матку и сосуды вызывается различными дей-
ствующими началами. Выделение в изолированном виде анти-
диуретического начала, несмотря на утверждение отдельных
авторов (например, Бёгтера90), следует пока считать недока-
занным.
Успехи в разделении гормонов задней доли не замедлили
сказаться на выпуске отдельно маточных и прессорных пре-
паратов. Однако прогресс в этом направлении не изменил
прежнего положения вещей — невозможности химическим пу-
тем определять наличие этих гормонов, несмотря на то, что
выделяемые фракции могут быть высоко очищенными (Стелл
и Фрезер 91). Суммарные, неразделенные препараты во многих
случаях продолжают сохранять значение и потому продол-
жают вырабатываться. Таким образом, углубление химических
познаний в вопросе об активных началах питуитарных препа-
ратов повело к тому, что перед фармакологией стал вопрос об
испытании биологическим путем не только суммарных экстрак-
тов задней доли, но и отдельных фракций.
При необходимости биологическим путем оценить актив-
ность неразделенных экстрактов можно думать о применении
многих биологических реакций., Пе вой и основной реакцией
остается, конечно, реакция гладкой мускулатуры "матки. Не-
смотря на некоторые возражения, частично указанные выше,
можно считать доказанным, что испытанный на матке и ока-
завшийся активным суммарный препарат задней доли будет
обладать активностью во всех направлениях. Во всяком случае
можно утверждать, что по маточному эффекту можно наибо-
лее полно охарактеризовать препарат. Суждение об актив-
ности суммарных экстрактов задней доли по сосудосуживаю-
щему действию затруднительно уже по одному тому, что в за-
£)0
висимости от многих причин (наркоз, децеребрирсувание, пере-
резка блуждающих нервов~и т. д.) сосудосуживающий эффект
этих препаратов у млекопитающих проявляется в разной сте-
пени. Наблюдающееся преходящее падение давления при по-
вторных введениях может быть устранено предшествующей
обработкой растворов питуитрина спиртом (для удаления вы-
зывающих падение давления веществ группы гистамина). Од-
нако даже таким образом обработанные препараты вызывают
у птиц, как правило, понижение кровяного давления (Хогбен,
Лэнселот, Шлап и Макдональд92) после предварительного
подъема его. У черепах гипофизарные препараты, подобно ги-
стамину, дают падение давления, тогда как адреналин вызы-
вает у них, как правило, повышение кровяного давления. Все
вместе взятое говорит за недостаточную характерность сосудо-
суживающего эффекта суммарных препаратов задней доли,
почему испытание их на этот эффект и не имеет такого ре-
шающего значения, как испытание действия на матку.
В еще большей степени это относится к способности пре-
паратов .задней доли вызывать потемнение лягушек, которое
Хогбен и Уинтер 93 предложили использовать со стандартиза-
ционными целями. Потемнение кожи является результатом
действия питуитрина на меланофорный аппарат кожи амфи-
бий. Под влиянием воздействия на организм питуитарных экс-
трактов пигментные клетки расширяются, вследствие чего на-
ступает потемнение кожи. Лёве и Илисон 94 установили, что это
периферическое действие на амфибий имеет место не только
при действии препаратов на целое животное, но может про-
являться и при действии на вырезанные участки кожи. На-
блюдением за числом меняющих свои формы клеток в кусочке
кожи лягушки, помещенном в слабый раствор препарата, Лёве
и Илисон предложили воспользоваться как методом для
биологической оценки разных экстрактов, считая, что указан-
ный эффект на меланофоры вызывается активными началами
препаратов. Наблюдение должно вестись под микроскопом
при небольшом увеличении.
Фен 95 дает метод, основанный на этом же принципе иссле-
дования гипофизарных препаратов на обезглавленных лягуш-
ках. У последних путем промывания рингеровским раствором
вызывают максимальное сужение меланофоров кожи, затем,
перевязав одну ногу, продолжают пропускать жидкость Рингера
с препаратом вместе, после чего меланофоры снова расширя-
ются; расширение не происходит на перевязанной ноге. Ввиду
того что реакция не специфична (тот же эффект получается
от экстрактов яичника, зобной железы, препаратов щитовид-
ной железы и др.), результаты ее должны оцениваться с осто-
рожностью.
Неточность методики, основанной на действии на мелано-
форы, зависит еще и от того, что этот эффект, повиДимому,
не идет параллельно* терапевтическим свойствам препаратов.
91
Кнаус, Дрейер и Кларк 96 путем сравнения разных сторон дей-
ствия питуитрина и свежих экстрактов приходят к выводу, что
действие на меланофоры вызывается иными, чем действую-
щими на матку, веществами. Маттеи 97 прямо указывает на не-
специфичность меланофорной реакции.
Естественно, что число разнообразных методов, предлагае-
мых для целей биологической оценки питуитарных препара-
тов, весьма велико. Так, например, указывалось на возмож-
ность испытания по действию на секрецию слюнных желез,
резко угнетаемую препаратами задней доли (О. В. Нико-
лаев 98). К числу до некоторой степени курьезов может быть
отнесен метод испытания гипофизарных препаратов на повы-
шение кровяного давления на изолированной голове кролика
(Хеймане"). В этом опыте головой пользуются для опреде-
ления сосудосуживающей силы препаратов. Изоляция головы
с такими целями не оправдывает технической трудности
опыта.
В числе не использованных с целями стандартизации свойств
задней доли гипофиза может быть упомянуто влияние ее на
жировой обмен, заключающееся в повышении накопления
жира в печени (Рааб 10°), действие на переживающие отрезки
кишок — слабое возбуждение тонких и парализующее влияние
на толстые (Кауфман 101).
Весьма интересно не получившее распространения предло-
жение Маттеи102 об определении активности препаратов зад-
ней доли по их способности вызывать цианоз гребня у пету-
хов, очевидно, основанное на сосудосуживающих свойствах
гормонов задней доли.
Ценное клиническое свойство экстрактов задней доли, за-
ключающееся в усилении желчеотделения, в опыте воспроиз-
водимо трудно, почему эта сторона действия препаратов экспе-
риментально определяется редко.
Действием на кровяное давление гипофизарных экстрак-
тов Чепай и Коватс 103 пользуются для клинической стандар-
тизации, определяя на людях подъем кровяного давления, вы-
зываемый внутривенным введением препаратов. Свое предло-
жение они основывают на работе Эбе ль, Роулера и Джей-
линга104, которые утверждают, что чистые препараты задней
доли гипофиза всегда дают только повышение кровяного да-
вления и что все случаи уклонения от этого зависят от недо-
статочной чистоты продукта.
Что касается определения активности препаратов только
маточных или сосудосуживающих, то оно проводится, ко-
нечно, по определению их специфического действия. Таким
образом, все, что в дальнейшем будет сказано относительно
испытания по маточному эффекту суммарных препаратов,
в равной мере относится и к чисто маточной фракции.
В вопросе о выборе наиболее удобного объекта для опре-
деления сокращающей матку способности препаратов особых
92
разногласий не существует. Большинство авторов и все офи-
циальныс источники* предлагают пользоваться переживающей
маткой девственной морской свинки. Изолированная матка
к настоящему времени остается незаменимым объектом для
испытания препаратов задней доли гипофиза. Возражений
против этого метода с принципиальной стороны не встре-
чается.
Наиболее подходящей для целей опыта является матка дев-
ственной морской свинки, на чем сходится большинство авто-
ров. Некоторыми авторами рекомендуется проводить исследо-
вание и на более взрослых, рожавших свинках (Кохман105)
или на кошках в послеродовом периоде (Шюбель 106). Методы
записи сокращений предлагаются различные, но в общем все
сводятся к принципу регистрации сокращений матки, подве-
шенной в стаканчике с изотоническим раствором при темпе-
ратуре 38° между дном и пишущим пером, отмечающим со-
кращения на барабане.
Так же, как и выбор животного, теперь не вызывает сомне-
ния и выбор стандартного препарата, что имеет, конечно, пер-
востепенное значение для точности- методики. Еще не так
давно в первом тираже VII издания Фармакопея СССР ре-
комендовала пользоваться в качестве стандартного препарата
гистамином — веществом, в ничтожных долях вызывающим со-
кращения переживающей матки, аналогичные тем, которые
вызываются препаратами задней доли гипофиза. Ранее пробо-
вали применять в качестве стандарта пилокарпин (Сторм ван
Лёвен), хлористый калий и некоторые другие вещества. Все
эти препараты справедливо должны были уступить место на-
тивному стандарту, который, как увидим далее, может слу-
жить целям определения не только маточного, но и всех иных
сторон действия питуитарных препаратов. Нативный препа-
рат, описание изготовления которого приводится ниже, одно
время вызывал возражение в том отношении, что он изгото-
вляется из желез животных без достаточной очистки, благо-
даря чему нет полной уверенности в его абсолютной однород-
ности. Предполагалось, что химически чистый продукт, ка-
ким является гистамин, будет в этом смысле иметь некоторые
преимущества перед неочищенным препаратом. Однако это
преимущество оказалось скорее теоретическим и сводится на-
нет другими особенностями гистамина. Несмотря на то, что и
мне лично удавалось получать с гистамином удовлетворитель-
ные результаты, следует признать работу с нативным стан-
дартом более простой и точной. Фромхерц 107, считавший, что
с гистамином можно получать хорошие результаты, относил
к недостаткам нативного стандарта наличие zb нем белка. На-
блюдающееся во время опыта изменение чувствительности
изолированной матки ведет к тому, что она в разные моменты
опыта по-разному реагирует на разные дозы, а тем более на
разные вещества. Поэтому сравнение с однородным испытуе-
93
мому веществу стандартом должно давать более точные ре-
зультаты, нежели сравнение с веществом иного состава.
Для определения маточного действия препаратов задней
доли гипофиза вырезанный рог матки девственной морской
свинки помещается в небольшой сосуд, наполненный изотони-
ческим раствором, подогреваемым до температуры тела во
время опыта. Рог матки помещается таким образом, что ниж-
ний конец укрепляется неподвижно внизу, а верхний соеди-
няется со свободно висящим концом рычага. Сокращение ор-
гана по длине вызовет притяжение рычага книзу, одновре-
менно приведя в движение другой его конец в обратном на-
правлении. Присоединив свободный конец рычага к вращаю-
щемуся барабану, можно при помощи любого метода записи
графически регистрировать на ленте сокращение в виде кри-
вой.
Аппараты для регистрации сокращений переживающих от-
резков матки, кишки и т. д. весьма многочисленны. Прототи-
пом таких приборов служит описанный Магнусом прибор для
кишечника. Хорошее описание весьма простого прибора, кото-
рый легко может быть сконструирован в любой лаборатории,
дано Чечулиным 454. Устройство этого прибора сводится к сле-
дующему.
Небольшой стеклянный стаканчик емкостью в 30—50 см®
помещается в наполненном водой другом, большего размера,
в котором температура поддерживается на постоянной высоте
при помощи терморегулятора. Внешний стакан нагревается
или непосредственно на пламени, или из предосторожности на
водяной бане. Внутренний стакан укрепляется во внешнем при
помощи плоской пробки, в которой вырезано для маленького
стаканчика соответствующее отверстие. При помощи этой же
пробки укрепляются вводимые во внутренний стакан две со-
гнутые под прямым углом тонкие стеклянные трубки. Конец
одной из последних оттянут в виде капилляра, идущего
плоско по дну стаканчика и имеющего на себе П-образный из-
гиб. Эта трубка с таким образом приспособленным концом
служит одновременно для двух целей: укрепления отреза
матки внизу и снабжения кислородом или воздухом изотони-
ческого раствора. Укрепление рога внизу. достигается путем
подведения под изгиб капилляра петельки, помещаемой на
нижнем конце отрезка. Натягиваемый на другой конец рыча-
гом рог будет внизу держаться при помощи такой петельки.
Пропускание через наполняющий внутренний стаканчик соле-
вой раствор воздуха (оказавшееся достаточным для замены
пропускания кислорода) достигается путем соединения наруж-
ного конца стеклянной трубки при помощи каучука с газо-
метром. Последний в простейшем виде может быть сконструи-
рован из большой стеклянной банки, из которой поступающая
сверху вода будет вытеснять находящийся там газ, в данном
случае комнатный воздух. Другая из опущенных в стаканчик
94
стеклянных трубок служит для отсасывания жидкости, для
чего конец ее, не утонченный, должен быть доведен до дна
стаканчика. Наружный конец трубки соединяется с резиновой
грушей, позволяющей производить отсасывание. Обе идущие
в стаканчик стеклянные трубки, как уже сказано выше, укре-
пляются при помощи той же пробки. Для этого к горизон-
тальным выступающим из стаканчика частям трубочек припаи-
ваются отрезки трубочек из того же стекла, которым пре-
дается направление, строго параллельное находящимся в ста-
канчике вертикальным концам трубок. Эти служащие как бы
ножками трубочки укрепляются в соответствующие отверстия
пробки, прикрывающей наружный стакан.
В большой обыкновенной колбе, помещаемой в баню соот-
ветствующего размера, постоянно нагревается до нужной тем-
пературы запас солевого раствора. Для регулирования темпе-
ратуры нагревающая баню горелка соединяется с терморегу-
лятором. Колба плотно закупоривается каучуковой пробкой,
через которую проходят две стеклянных трубки. Конец одной,
доходящей до дна, соединяется при помощи каучуковой
трубки с маленькой, согнутой под прямым углом трубочкой,
конец трубочки укрепляется в пробке, окружающей внутрен-
ний стакан, совершенно аналогично двум упомянутым выше.
Всего, таким образом, в стаканчик, в котором помещается рог
матки, вводятся три трубочки: одна для укрепления рога и
аэризации раствора, другая для отсасывания и третья для на-
полнения стаканчика свежим раствором. В то время как пер-
вые две спущены до дна, последняя лишь несколько нависает
сверху. Другая из входящих в колбу стеклянных трубок, ко-
роткая, соединяется с грушей. Нагнетая при помощи послед-
ней воздух в колбу, перегоняют раствор из колбы в стакан-
чик. При необходимости переменить раствор в стакане жид-
кость высасывают при помощи отсасывающей системы. Рис. 3,
заимствованный из работы Чечулина, дает представление об
аппарате.
Необходимое условие работы при помощи этого аппарата
сводится к точному поддержанию температуры на одном и
том же уровне в обеих частях прибора (даже колебания тем-
пературы до 1° могут вызвать раздражение гладкой мускула-
туры матки), для чего необходимы точные терморегуляторы.
Как уже сказано выше, аппарат может быть сконструиро-
ван и каким-либо другим путем, лишь бы устройство его до-
пускало соблюдение всех нужных условий, необходимых для
правильной работы переживающей матки. В частности, мы
всегда пользуемся аппаратом, представляющим собой моди-
фикацию вышеописанного. Сущность изменений сводится к по-
мещению стаканчика, в котором находится рог матки, и колбы
с запасом раствора Рингера в одну общую баню. При помощи
этого добавления одновременно достигаются и упрощение тех-
ники, и большее удобство работы. Кроме того, общая баня
95
I
гарантирует равномерность температуры в стаканчике и колбе
с запасным раствором. На рис. 4 изображена схема этого
аппарата.
Рис. 3. Схема прибора для переживающей матки.
<а — внутренний стаканчик с тремя трубочками; Ь — наружный стакан; сие — водяные бани;
d— колба с запасным раствором Рингера; ff— груши для нагнетания и отсасывания:
fife — термометры; Z — барабан кимографа; тт — горелки; о — пишущее перо;
tt — терморегуляторы.
Выше было указано, что, по общему мнению, наиболее под-
ходящим животным для испытания действия на гладкую му-
Рис. 4. Схема упрощенного прибора для переживающей матки; обозначения
те же, что и на рис. 3.
скулатуру матки питуитарных препаратов является девствен-
ная морская свинка. Выбор на этот именно объект пал потому,
что он наиболее полно отвечает тем требованиям, которые
96
к нему предъявляет данный эксперимент. Для возможности
отмечать сокращения матки и притом даже разную степень
сокращений нужны органы, дающие в спокойном состоянии
при регистрации более или менее правильную горизонтальную
линию, от которой было бы возможно вести отсчет. Свеже вы-
резанный рог матки, помещенный в изотонический раствор,
в силу полученных им механических, травматических и тому по-
добных раздражений приходит обычно в состояние сокращения.
Естественно, что на сократившемся органе вызвать эффект даль-
нейшего сокращения невозможно. Для разных маток перво-
начальное сокращение может быть однократным и затем усту-
пить место нужному стойкому расслаблению или же может
носить периодический характер, повторяясь через определен-
ные промежутки времени. Первой задачей поэтому будет вы-
бор такой матки, которая, раз расслабившись, не меняла бы
своего состояния без соответствующих воздействий. Оказа-
лось, что здесь решающую роль играет момент, рожала матка
или нет, и состояние матки к моменту опыта: матка рожавшая
легко дает самопроизвольные повторные сокращения, что
в одинаковой степени имеет место при беременности и течке.
Отсюда вытекает следствие — пользоваться для опытов только
девственными животными, у которых притом нет течки. Выбор
животных того или иного вида основывается, кроме сообра-
жений удобства, на способности матки тех или иных живот-
ных реагировать на вызывающие сокращения гладкой муску-
латуры яды. Несмотря на первоначально кажущуюся парадок-
сальность этого условия, — ибо естественно, чтобы матка реаги-
ровала на маточные средства, — мы на примере такого ши-
роко распространенного лабораторного животного, как крыса,
убеждаемся в необходимости подобной оговорки: матки белых
крыс не сокращаются под влиянием гистамина (р-имидазо лил-
этиламина), одного из наиболее активных в этом смысле ве-
ществ; гистамин вместо обычно вызываемого им на матках
теплокровных эффекта дает на матках крыс обратный резуль-
тат — угнетение мускулатуры. Из обычных лабораторных жи-
вотных лучшими и наиболее отвечающими всем условиям ока-
зались морские свинки. Матки девственных свинок расслаб-
ляются лучше и быстрее других и одновременно обладают
еще одним очень ценным свойством — способностью быстро
приходить в состояние расслабления после отмывания яда,
вызвавшего сокращение матки, хотя бы и в очень сильной
степени.
Подготовляемых для опытов подрастающих животных от-
саживают от самцов и держат их отдельно до достижения
требуемого веса. Для того чтобы, не убивая животного, убе-
диться в том, что оно не находится в состоянии течки, можно
-воспользоваться микроскопическим исследованием мазка из
влагалища и определением на основании этого состояния по-
лового тракта. О том, какая картина влагалищного отделяе-
7 — 317 , 97
•мого соответствует периоду покоя, будет указано далее в главе
о гормонах женской половой сферы. Если почему-либо нельзя
провести такого исследования, по внешнему виду матки легко
можно судить о ее состоянии — матка таких свинок предста-
вляется несколько увеличенной сравнительно со средними раз-
мерами, пиперемирована, благодаря чему цвет ее вместо обыч-
ного белого переходит в родовый; на рогах такой матки ясно
выступает кольцевое строение мускулатуры.
Характер более или менее спокойной работы матки (отсут-
ствие произвольных сокращений) зависит в некоторой степени
от состава солевого раствора. В качестве такового для матки
употребляется обычная жидкость Рингера, в состав которой
входят: NaCl — 0,9%, СаС12 — 0,024%, КС1 — 0,024 %, NaHCO3 —
0,02%.
В последней особая роль принадлежит солям кальция.
Гладкая мускулатура матки чрезвычайно восприимчива к ни-
чтожным количествам кальция. Поэтому при приготовлении
изотонического раствора приходится следить за тем, чтобы
входящий в раствор хлористый кальций был взят обязательно
в кристаллическом, а не в прокаленном виде; кристаллический
хлористый кальций за счет имеющихся в нем шести молекул
кристаллизационной воды будет содержать в одном и том же
количестве значительно меньше ионов кальция, чем про-
каленная соль. Соблюдение этого условия все же не всегда
оказывается достаточным, и при многократных введениях,
когда на одном объекте приходится проделать много отдель-
ных испытаний (а на практике такие случаи встречаются по-
стоянно), матка начинает обнаруживать склонность к само-
произвольным сокращениям. Здесь должны быть подчеркнуты
слова «не всегда», так как для некоторых маток опыт может
протекать хорошо с рингеровской жидкостью обычного со-
става. Понижение обычного процента хлористого кальция до
2/з нормы значительно уменьшает возможность произвольных
сокращений.
Кохман 105, занимавшийся этим вопросом с несколько дру-
гой точки .зрения, — желая, ввиду сравнительной дороговизны
девственных животных, выработать способ, при котором была
бы возможность работать на матках животных любого воз-
раста, — нашел, что уменьшение содержания хлористого каль-
ция до Vio нормального количества устраняет имеющиеся у та-
ких маток, как правило, произвольные сокращения. В случае
такого резкого уменьшения количества кальция приходится
покрывать его недостаток соответствующим количеством маг-
ния. Уменьшение кальция до 2/з нормы — 0,016% — не требует
дополнительной замены недостающего количества солями
магния.
Иногда раствор Рингера готовят по упрощенной прописи,
в которой количества солей кальция, калия и двууглекислой
соды равны между собой и составляют 0,02%, количество же
98
хлористого натрия остается тем же — 0,9%. Все приводимые
у нас опыты проделаны с раствором обычного состава, т. е.
NaCl —0,9%, КС1 —0,042%, CaCL — 0,016%, NaHCO3 — 0,2%
с понижением содержания кальция до % нормы, т. е. до
0,016%.
Ввиду того что такое понижение 'сказывается на матках
только в благоприятном смысле и не является очень сильным
уклонением от нормы, можно рекомендовать применение рин-
геровского раствора с такой поправкой, как правило. Приво-
димая в Фармакопее упрощенная пропись рингеровской жид-
кости также содержит кальций в несколько меньшем, чем
в обычном составе, проценте — 0,02 вместо 0,024. Работа
с раствором такого упрощенного состава дает вполне удовле-
творительные результаты.
Препарирование рога производится чрезвычайно просто.
Свинка убивается ударом молотка по голове. Широким раз-
резом вскрывают брюшную полость; закрывающие спереди
матку кишки отодвигаются в сторону, после чего весь орган
ясно выступает на задней стенке брюшной полости в виде
Y-образного тяжа. Нижняя, короткая часть будет, собственно,
телом, а расходящиеся сверху в сторону тяжи будут предста-
влять собой рога, простирающиеся вверх и в стороны вплоть
до яичников. Прикрепляющиеся к рогам с боковых сторон
связки матки, состоящие из тонкой соединительной пленки
с вкрапленными в нее прослойками жира, отсепаровываются
от органа. Вся матка затем вырезывается и переносится в на-
полненный рингеровской жидкостью при температуре 38° ста-
канчик (отдельно от аппарата). Все манипуляции производятся
с большой осторожностью с целью максимально ограничить
неизбежную травматизацию. От перенесенной в стаканчик
матки отрезается один рог (или, если он велик, часть его); на
обоих концах рога делаются из тонкой нитки петли, внизу —
маленькая, наверху — большая. Маленькой петлей зацепляют
за изгиб трубочки, снабжающей воздухом внутренний стакан-
чик аппарата, а верхнюю надевают на крючок пишущего пера,
расположенного таким образом, чтобы крючок как раз при-
ходился над местом укрепления матки внизу. В целях еще
большей осторожности можно накладывать петли на концы
рога еще тогда, когда матка не выделена из организма.
К моменту переноса органа в аппарат в последнем, есте-
ственно, все должно быть приготовлено для производства
опыта, т. е. температура должна быть равной 38°, питатель-
ный раствор во внутреннем стаканчике должен снабжаться
воздухом. Травматизация рога, как это уже было указано
выше, ведет к сокращению, благодаря чему рог сильно укора-
чивается. Длина привязываемой к верхнему концу рога петли
должна быть выбрана с таким расчетом, чтобы при последую-
щем полном расслаблении рога положение пишущего пера
7* 99
было бы горизонтальным или слегка наклоненным наружным
концом вниз.
Помещенный в нужные условия рог начинает постепенно
приходить в состояние физиологического расслабления. Для
этого, однако, необходимо, чтобы вес наружного рычага пи-
шущего пера был несколько тяжелее внутреннего, к концу ко-
торого прикрепляется петля. Обычно перо конструируется та-
ким образом, чтобы вес наружной его части был несколько
больше внутренней. Иногда, в удачных случаях, заранее уста-
новленное соотношение веса рычагов оказывается как раз тем,
которое будет нужным. Иногда приходится регулировать вес
пера, добавляя к нему тот или иной груз. Лучше всего это
достигается путем устройства передвигающегося по рычагу
груза; перемещение его по длине рычага будет, в зависимости
от удаления от точки опоры, давать перу большую или мень-
шую нагрузку. Подбор последней должен удовлетворять двум
непременным требованиям: нагрузка должна быть достаточно
тяжелой, чтобы способствовать расслаблению матки и удер-
жанию ее в расслабленном состоянии, и достаточно малой для
того, чтобы не служить препятствием к сокращению матки;
матка должна быть в состоянии преодолеть сопротивление на-
грузки. Здесь особенно нужно подчеркнуть, что груз должен
именно способствовать расслаблению, а не производить его
силой своей тяжести, так как в противном случае будет уте-
ряна физиологичность опыта, необходимая для получения пра-
вильных результатов. Расслабление и сокращение должны .
быть непременно самостоятельными, иначе будет потерян вся-
кий смысл опыта. Нагрузка имеет значение именно вспомога-
тельного момента, помогающего выпрямлению расслабленного
органа, удержанию пера в определенном положении и, таким
образом, регулирующего механизм регистрации сокращений.
Само собой разумеется, что дать какие-нибудь нормы, по ко-
торым можно было бы судить о величине нагрузки, совер-
шенно невозможно: груз подбирается эмпирически в каждом
отдельном случае, причем на одном и том же роге иногда при-
ходится перепробовать разную нагрузку. При в'ыработке на-
выка можно со значительной долей вероятности судить о том,
какой груз потребуется для данной матки, принимая во вни-
мание величину рога, его внешний вид и т. д. (конечно, при
условии работы на одном и том же аппарате). Непременным
условием производства опыта является сохранение одной и
той же нагрузки во все время испытания, так как изменение
груза повлечет изменение условий работы матки, увеличив
или уменьшив ее работу; сравнение, естественно, может про-
изводиться лишь в случае полной равномерности всех усло-
вий.
По прошествии некоторого времени (15—30 минут) пребы-
вания во внутреннем стаканчике аппарата матка достигает
максимального расслабления. Предел расслабления опреде-
i 100
ляется как по виду рога, так и по тому, что пишущее перо
при пуске барабана будет писать горизонтальную линию без
уклонения книзу. Когда такое состояние достигнуто, начи-
нается, собственно, опыт.
Расслабляемость матки бывает более скорой или более за-
медленной, как это было указано выше, не только от состоя-
ния животного, но и от того, через какой промежуток вре-
мени после смерти орган помещается в дппарат. Длительность
периода первоначального расслабления почти всегда сочетается
с трудностью отмывания рога после сокращения и со склон-
ностью к самопроизвольным сокращениям. Для устранения
всех этих возможностей пробовали (Тренделенбург и Борг-
ман 108) вырезанный из только что убитой свинки рог поме-
щать в рингеровском растворе в холодильный шкаф. Кроме
того, что такой прием грешит против общих соображений
о физиологичности, он не оправдал себя и практически. По на-
шим наблюдениям, через 2—3 часа после вырезания матки
реагируют гораздо энергичнее, труднее отмываются и чаще
дают произвольные сокращения. Более длительное выжида-
ние — до суток, — по нашим опытам, сказывается на матках
очень губительно, понижая их реактивную способность,
а иногда даже и создавая условия для неправильной работы.
Контроль и в этом, и другом случае легко может быть по-
ставлен при помощи другого рога, который помещается в ап-
парат тотчас после вырезывания из только что убитого жи-
вотного. Фармакопея США ставит непременным условием не-
медленное помещение матки в стакан после того, как живот-
ное убито.
Реакция расслабившегося рога на вводимые извне в ста-
канчик действующие начала будет зависеть как от внешних
причин, так и от свойств самой матки. Из внешних факторов
уже упомянуты свойства солевого раствора и температура.
Остается остановиться еще на одном существенном моменте —
размере стаканчика, в котором помещается рог. Само собой
разумеется, что это обстоятельство играет большую роль, так
как вводимая доза растворяется в окружающем матку объеме
жидкости и концентрация действующих начал будет различ-
ной при различной величине стаканчиков. Одна и та же доза
вещества в разной концентрации даст разный эффект, так как
воздействие яда на клетку меняется в зависимости от распре-
деления активных веществ в окружающей ткани среде. В ап-
парате описанной выше конструкции объем стаканчика, в ко-
тором помещается матка, равняется 50 см3. Ввиду того что
он никогда не наполняется до краев, количество жидкости
в нем колеблется в отдельных случаях между 30 и 40 см3 в за-
висимости от длины растянувшегося рога (который весь дол-
жен быть покрыт солевым раствором). Такой сравнительно
малый объем и вытекающая отсюда относительно высокая кон-
центрация действующих начал являются причиной того, что
101
I
в наших опытах матки оказываются восприимчивыми к мень-
шим количествам активных веществ, чем указывается в рабо-
тах разных авторов (например, Сторм ван Лёвен), пользовав-
шихся более крупными стаканчиками для помещения матки.
Отдельные дозы испытуемого вещества вводятся прямо во
внутренний стаканчик осторожным вдуванием из точной пи-
петки с мелкими делениями. По получении определенной реак-
ции и по истечении определенного времени раствор отсасы-
вается, матка промывается свежим рингеровским раствором
(38°), и по прошествии некоторого промежутка времени вво-
дится следующая доза. •
Прежде чем привести подробное описание примерного ис-
пытания, остановимся на разборе некоторых свойств пережи-
вающей матки в условиях нашего опыта.
Из особенностей матки первой должна быть отмечена пер-
воначальная неравномерность реакции на количество вводи-
мого яда. Первые сокращения матки могут быть иногда (по
сравнению с последующими) парадоксальными. Первая доза
может вызвать сокращение, сильно превышающее таковое от
повторных последующих введений, или, наоборот, не дать
почти никакого эффекта, тогда как в дальнейшем те же дозы
вызовут почти максимальное сокращение. Обстоятельство это
быстро выясняется после второго или третьего введения и не
должно служить препятствием к продолжению опыта. Сущ-
ность этого явления представляется неясной. Возможно, что
она лежит в самых условиях опыта: матка не сразу может на-
чать правильно реагировать в чуждых ее физиологическому
состоянию условиях.
Второй особенностью изолированной матки является ее
склонность к постепенному увеличению чувствительности
в первое время опыта по отношению к препаратам гипофиза,
в так называемом явлении сенсибилизации. Особенность эта
не носит характера случайности и является вполне законо-
мерной.
Третьим важным свойством матки как мышечного органа
является наличие чередований периодов возбудимости и не-
возбудимости. Известно, что машца, сократившаяся под влия-
нием какого-нибудь раздражителя, в течение некоторого вре-
мени после расслабления находится в состоянии невозбуди-
мости, при котором раздражитель той же силы оказывается
неспособным вызвать сокращения. По прошествии известного
промежутка времени, когда этот так называемый рефрактер-
ный период заканчивается, мышца снова приобретает нормаль-
ную возбудимость. Значение этого обстоятельства само собой
понятно для матки, на которой в течение опыта вызывается
целый ряд отдельных сокращений. *
Из этих трех приведенных особенностей матки вытекают
правила, которыми нужно руководствоваться при испытании
гипофизарных препаратов. Во внимание, таким образом,
102
должны быть принимаемы парадоксальность начальной реак-
ции, сенсибилизация и рефрактерный период.
Несоответствие первой реакции матки сравнительно с по-
следующими встречается довольно часто. При препаратах
неизвестной крепости первая доза берется, конечно, до из-
вестной степени вслепую, на основании общих соображений
и аналогии с прежде имевшими место опытами. Разный эф-
фект на разных отрезках матки будет зависеть не только от
разницы в силе действия подлежащих испытанию образцов,
но и от большей или меньшей реактивной способности матки.
Таким образом, даже и при испытании образца известной
силы можно ошибиться в выборе начальной дозы. При несо-
ответствии взятой дозы нужному условию (т. е. при полу-
чении от нее небольшого сокращения) повторяют введение
препарата с соответствующей поправкой в ту или иную сто-
рону. Быстрое выяснение этого вопроса при последующих
введениях позволяет довольно легко достичь первого момента
испытания — определения дозы,' дающей небольшое сокра-
щение.
После укрепления рога надлежащим обра,зом в стаканчике
с рингеровской жидкостью, нагретой до 38°, ждут, пока не
наступит полное расслабление. Дождавшись его, выжидают
еще 10—15 минут, что дает некоторую гарантию устранения
части случаев парадоксальной реакции первых сокращений.
Наполнение стаканчика, в котором помещается матка, должно
производиться с тем расчетом, чтобы вполне расслабившийся
рог был бы целиком покрыт жидкостью. В случае, если часть
рога будет выступать над уровнем жидкости, атмосферный
воздух будет побуждать эту часть к сокращению, тогда как
находящаяся внутри часть будет стремиться расслабиться.
Нефизиологичность такого состояния очевидна.
Количество жидкости все время, естественно, должно под-
держиваться на одном и том же уровне. Так как работа всегда
ведется с одним и тем же аппаратом, при некотором навыке
легко выбрать рог или отрезок такой длины, которая позво-
лила бы ему легко поместиться в стаканчике при Полном рас-
слаблении.
Все время опыта температура должна поддерживаться на
постоянном уровне, иначе колебания ее скажутся на матке,
меняя ее сократительные свойства. Введение испытуемых доз
производится выдуванием в окружающую матку жидкость
отмеренного количества из тонкой пипетки с делением до
0,01 см3. Как это введение, так и все вообще манипуляции во
время опыта должны производиться с максимальной осто-
рожностью для устранения всех механических моментов раз-
дражения органа. Промывание матки между двумя отдельными
моментами ведут таким образом, чтобы отсасываемая жид-
кость одновременно заменялась тем же количеством свежего
раствора, другими словами, стараются регулировать замену
юз
жидкости так, чтобы уровень ее в стаканчике не понижался
во время этого процесса. Особенно следует бояться обнаже-
ния матки, так как атмосферный воздух и связанное с обна-
жением охлаждение принадлежит к числу сильных раздражи-
телей гладкой мускулатуры матки. Промывание длится с тем
расчетом, чтобы количество потраченного на это раствора
равнялось тройному количеству помещающейся в стаканчике
жидкости. В тех случаях, когда после обычного промывания
матка не расслабляется в течение долгого времени (10 и
больше минут) или, расслабившись, обнаруживает тенденцию
к самопроизвольным сокращениям, очень хорошую услугу
иногда оказывает дополнительное промывание.
Между введениями отдельных доз барабан останавли-
вается. Промывание рога происходит при остановленном бара-
бане, благодаря чему линия расслабления представится почти
отвесной (в виде отрезка дуги, образуемой движением пера
около точки опоры). Барабан снова пускается в ход за 1—
2 минуты до введения следующей дозы: в течение этого вре-
мени убеждаются, что матка действительно находится в со-
стоянии стойкого расслабления.
Указанная оговорка о необходимости следить за тем,
чтобы рог матки не подвергался воздействию атмосферного
воздуха, должна быть особенно подчеркнута, потому что, как
это ни покажется странным, некоторые авторы не только
считают возможным не обращать внимания на эту, по су-
ществу, резкую травму матки, но даже рекомендуют пользо-
ваться наступающим сокращением рога в качестве известного
диагностического признака. Так, например, Пенс и Сим-
моне 108 а) рекомендуют каждый раз при промывании выпускать
из стаканчика всю имеющуюся в нем жидкость для того,
чтобы по силе сокращения, наступающего после каждого
выпускания жидкости, судить о том, что реактивная способ-
ность матки остается неизменной; сокращение должно всегда
давать один и тот же максимум подъема, что гарантирует до-
статочную реактивную способность органа. Само собой разу-
меется, что в.згляд этот является в корне неправильным.
Всякое излишнее сокращение увеличивает утомление матки
и уже по одному этому ухудшает ее работу; кроме того, и
вывод подобного заключения совершенно неоснователен, так
как по максимальному сокращению от такого сильного раз-
дражителя, как воздух и охлаждение органа, никоим образом
нельзя судить о том, что матка будет правильно реагировать
на относительно небольшие дозы испытуемых веществ.
, Чтобы предупредить возможность введения препарата в
период нево.збудимости, последующее после промывания вве-
дение делается через 5 минут после пребывания рога в пол-
ностью расслабленном состоянии. Возможно, что в случае
начальной парадоксальной реакции матки, выражающейся в
невосприимчивости органа к обычным дозам, это явление
'' 104
может > объясняться тем, что первое введение попадает на
период невозбудимости, следующей за первоначальным сокра-
щением, обусловленным травмой матки. Это соображение
вполне объясняет требование о более или менее длительном
выжидании в начале опыта.
Для окончательного дополнения всех условий опыта нужно-
еще добавить, что период действия введенной дозы всегда
берется одинаковый. Смысл этого условия в общем понятен
сам собой; заслуживает внимания только одно обстоятельство:
одинаковая продолжительность наблюдения за действием из-
вестной до,зы позволяет отметить продолжительность так
называемого скрытого периода раздражения, заключающегося
в том, что от момента воздействия раздражителя до реакции
со стороны мышечного органа, в данном случае матки, про-
ходит известный промежуток времени. Последний обратно
пропорционален размеру дозы: чем больше доза, тем скорее
наступает эффект и, следовательно, тем короче скрытый, пе-
риод возбуждения; чем меньше доза, тем позднее наступает
эффект, тем длительнее промежуток от введения дозы до ре-
зультата этого введения. Наблюдение за действием данной
дозы ведется до тех пор, пока эффект не достигнет предела
для введенного количества препарата. Обычный срок, в тече-
ние которого сокращение рога достигает максимума, равен
2—3 минутам.
Суть испытания препаратов задней доли сводится к опре-
делению дозы, дающей равновеликое сокращение сравни-
тельно с сокращением от стандартного препарата. Для срав-
нения выбирают дозы, дающие отчетливое, но не слишком
большое и не слишком малое сокращения. Полное, максималь-
ное сокращение для целей сравнения непригодно. Совершенно-
очевидно, что если 0,2 см3 какого-нибудь вещества вызовут
полное сокращение рога, то и 0,3, и 0,4 см3 и т. д. дадут не
больше возможного для данного отрезка сокращения. Полу-
чив на матке полное сокращение рога, мы никогда не будем
уверены, что такое же действие не сможет быть вызвано еще
меньшей дозой. За критерий действия разных доз прини-
мается только высота подъема, являющаяся следствием боль-
шей или меньшей степени сокращения рога. Дозы, вызываю-
щие полное сокращение матки, т. е. дающие максимальный
подъем, могут быть различаемы между собой и по характеру
сокращений, и по их интенсивности, которая выразится в кру*
тизне подъема.
В то время как пограничная доза достигает максимума
ступенчатыми подъемами, большие дозы дают быстрое сокра-
щение, которое при медленном движении барабана выразится
почти в отвесной линии. Естественно, что таким критерием,
как крутизна подъема, пользоваться можно только с осто-
рожностью, почему мы приходим к выводу о непригодности
максимальных сокращений для сравнения. Исключения из.
105
этого правила могут быть допущены лишь в том случае,
когда данная доза окажется минимальной из доз, вызываю-
гцих максимальное сокращение. Сравнение между собой очень
малых, начальных сокращений неудобно как по причине труд-
ности измерений и возможности при этом больших (в про-
центном отношении) ошибок, так и потому, что не всегда
удается работать на матках, период покоя которых выразится
при записи прямой линией; часть маток даже в состоянии
полного расслабления и при наличии надлежащим образом
подобранного груза все-таки дает волнообразную кривую.
В таких случаях можно спутать небольшое по силе сокраще-
ние с произвольным колебанием матки. Вполне отчетливое,
но неполное сокращение будет наиболее удачным для сравне-
ния, гарантирующим от ошибок.
Бёрн113а рекомендует при сравнении со стандартом пред-
варительно определять дозы испытуемого препарата, даю-
щие сокращение меньшее и большее, чем сокращение, вызван-
ное принятой дозой стандартного препарата.
Выбор одинаковых по эффекту доз испытуемого и стан-
дартного препаратов производится путем измерения высоты
подъема.
Измерение производится точно от нижней горизонтальной
линии, соответствующей наибольшему расслаблению матки.
Там, где эта горизонтальная линия выражена ясно, измерение
не представляет затруднений. В случаях, когда расслабив-
шаяся матка дает ряд небольших периодических сокращений,
выражающихся на кривой в виде волнообразной линии, про-
водят линейкой горизонтальную линию на уровне максималь-
ного расслабления и от этой линии ведут измерение.
Регистрация на ленте производится любым из существую-
щих способов. Наиболее простым и удобным способом
является запись острым пером (стеклянным, соломенным, ме-
таллическим и т. д.) на закопченной ленте. Менее удобна, но
не требует приспособлений для копчения запись стеклянным
пером с тонким капиллярным окончанием краской по чистой
ленте барабана. Этот способ требует специальным образом
приготовленных перьев, которые засариваются, легко ломаются;
краска, которой наполняется перо, может быть выбрана . лю-
бая в форме возможно менее сохнущих растворов (например,
с добавлением глицерина). Удача записи таким путем в зна-
чительной степени зависит от качества бумаги, на которой
она производится.
Уже простое перечисление массы всех необходимых для
удачного опыта условий показывает, что не каждый раз
можно ожидать правильной работы матки. Методика испы-
тания на вырезанном роге принадлежит к весьма капризным.
При самом тщательном выполнении всех необходимых пред-
начертаний всегда могут встретиться случаи, когда опыт по
той или иной причине окажется неудавшимся. Приступаю-
106
щему к работе на матках необходимо примириться с тем
обстоятельством, что известная часть опытов заранее обре-
чена на неудачу. Процент неудачных случаев, естественно,
уменьшается б связи с увеличивающейся опытностью исследо-
вателя, но все же около 10—15% опытов не по вине экспери-
ментатора дают неудовлетворительный результат.
* Из неудачных опытов особенно часто встречается насту-
пающее к концу исследования судорожное сокращение матки,
не расслабляющейся, несмотря ни на что. Эти случаи особенно
обидны, когда для успешного окончания опыта остается сде-
лать 1—2 введения.
Получающиеся в разных случаях кривые (удачные) могут
по внешнему виду значительно отличаться друг от друга.
Некоторые кривые будут состоять из разных дугообразных
подъемов большей или меньшей высоты; другие будут иметь
вид стрельчатых подъемов; некоторые матки дадут подъемы,
вершины которых будут иметь зубчатый вид, и т. д. Все эти
изменения должны быть отнесены на счет индивидуальности
матки.
Нативный стандартный препарат, служащий целям опреде-
ления всех сторон действия питуитарных препаратов, изго-
товляется по методу, описанному впервые Фармакопеей США.
Принцип изготовления заключается в удалении из железы
липоидов с сохранением в неприкосновенности белков, вклю-
чающих в себя все активные начала органа.
Для избежания посмертных изменений в железах обра-
ботка их должна быть начата не позднее чем через 30 минут
после убоя животного. Прежде всего производится тщатель-
ная очистка желез от внешних тканей (оболочек и т. д.). Тот-
час после очистки железы помещаются в сосуд и заливаются
ацетоном по расчету 4 см3 на одну железу (заднюю долю).
В таком виде железы оставляют стоять на 3 часа. По истече-
нии этого времени ацетон сливают и ножницами разрезают
железы на возможно мелкие куски, после чего их заново за-
ливают тем же объемом свежего ацетона. Измельченные и
залитые свежим ацетоном железы оставляют стоять до сле-
дующего утра. Утром сливают ацетон и сушат измельченный
материал в вакуум-эксикаторе над фосфорным ангидридом
в течение 5 часов при температуре не выше 50°. После этого
высушенный материал протирают через чистое сито для при-
дания ему вида порошка, который при тех же условиях снова
сушится в вакуум-эксикаторе в течение 12 часов. Затем поро-
шок в течение 2 часов экстрагируется ацетоном в аппарате
Сокслета, снова помещается в вакуум-эксикатор на 12 часов
с соблюдением всех прежних условий. Эта сушка является
последней стадией обработки. Высушенный порошок хранится
в прохладном темном месте в запаянных ампулах в безвоз-
душном пространстве, или же в вакуум-эксикаторе над фос-
форным ангидридом.
107
Для применения стандартного препарата в опыте поль-
зуются заранее приготовленными его растворами (вернее,
экстрактами) 1 : 1 000, т. е. содержащими в 1 см3 1 мг актив-
ных начал сухого стандартного препарата. Для получения
раствора (экстракта) поступают, по правилам Международной
комиссии, следующим образом.
Точно и быстро отвешивают нужное небольшое количество
стандартного препарата, переносят навеску в толстостенную
пробирку, куда добавляют 0,25% раствора уксусной кислоты в
количестве 1 см3 на 1 мг отвешенного порошка. Отверстие
пробирки закрывают ватным тампоном и пробирку погружают
на 5 минут в кипящую баню. После быстрого охлаждения со-
держимое пробирки фильтруют через фильтровальную бумагу.
Полученный фильтрат содержит в 1 см3 2 ЕД, так как за
1 ЕД считается сумма действующих начал, содержащихся в
0,5 мг стандартного порошка. Указанный раствор (экстракт),
разлитый в ампулы нещелочного стекла и подвергнутый трех-
кратной стерилизации в течение 3 дней подряд путем нагре-
вания до 100° в течение 20 минут, может храниться на холоду
без изменения активности в течение 6 месяцев. Вскрытые ам-
пулы сухого стандартного препарата должны храниться в
вакуум-эксикаторе над фосфорным ангидридом.
Общепринятый сухой стандартный препарат был впервые
предложен Фегтлином и его учениками1оэ. В настоящий мо-
мент стандартный препарат задней доли гипофиза является
международным стандартом и рассылается для сравнения
с государственными стандартами. Получаемый в СССР стан-
дартный препарат весьма близок по активности международ-
ному. Образец, полученный в 1928 г. (Саргин110), содержал
сравнительно с международным стандартом на 10% меньше
активных начал: 1 см3 экстракта 1 : 1 000 содержал 1,8 ЕД
вместо требуемых 2 ЕД.
Испытание препаратов по Фармакопее СССР ведется сле-
дующим образом.
Опыт начина/от после полного и установившегося рассла-
бления рога. Вводя разные дозы стандартного экстракта,
определяют дозу, способную вызвать сокращение, близкое к
полному сокращению рога. Затем подыскивают дозу испытуе-
мого препарата, дающую сокращение, равновеликое сокра-
щению от установленной дозы стандартного экстракта. Полу-
ченный эффект должен быть подтвержден по меньшей мере
двумя парными сокращениями от стандартного и испытуемого
препаратов, вводимых поочередно. Зная содержание актив-
ных начал в подобранной для сравнения дозе стандартного
препарата, простым пересчетом определяют активность препа-
рата, подлежавшего оценке.
При выборе начальной дозы станлаотного экстракта сле-
дует иметь в виду, что при работе на аппарате, в котором
емкость стаканчика, служащего для помещения рога, равна
108
50 см8, нужно исходить из разведенного в 20 раз исходного
раствора, содержащего в 1 см3 2 ЕД. Дозы в несколько деся-
тых этого разведения, содержащего, следовательно, в 1 см3
0,1 ЕД, обычно дают требуемый эффект, т. е. субмаксималь-
ное сокращение рога.
По указанию Фармакопеи СССР продажные препараты
содержат 2—3 ЕД в 1 см3. Промышленные предприятия вы-
пускают препараты и более высокой активности, содержащие
4, 6 и даже 10 ЕД в 1 см3. Непременным условием является
указание на этикетке активности. Это требование в одинако-
вой мере относится к суммарным препаратам (обладающим
маточным, прессорным и антидиуретическим действием) и к
препаратам, представляющим собой одну маточную фракцию.
Несмотря на принципиальную простому метода, получение
при его помощи точных данных требует большого опыта. Так,
Тренделенбург111 подчеркивает, что при этой методике ра-
бота с точностью до 2О°/о отклонения в ту или другую сто-
Рис. 5. Стандартизация питуикрина „Р“ по Фармакопее СССР. 1 —10 ряд —
действие чередующихся доз испытуемого препарата 1 : 100 и стандартного
раствора 1:20; 11 и 13 — действие 0,22 см3 испытуемого раствора; 12 и
14 — действие 0,2 см3 стандартного раствора. Время наблюдения — 2 мин.
рону представляется делом очень нелегким и требует особо
тщательного выполнения всех условий методики.
Приводимая кривая (рис. 5) иллюстрирует испытание
одного образца.
Ввиду того что в экстрактах задней доли гипофиза мо-
жет быть некоторое количество гистамина, обладающего чрез-
вычайно выраженной способностью сокращать матку и по-
этому создавать впечатление о высокой активности препара-
тов, Фармакопея СССР аналогично другим официальным
источникам рекомендует проводить испытание на присутствие
этого вещества. С этой целью обрабатывают испытуемый
экстракт щелочью, которая разрушает гормоны задней доли,
- но не оказывает влияния на гистамин. Благодаря этому спо-
собность препарата сокращать матку после обработки ще-
лочью будет зависеть только от присутствия гистамина. По
Фармакопее, к 1 см3 препарата добавляют 1 см3 двунормаль-
ного раствора едкого натра (чем создается раствор однонор-
мального едкого натра, достаточный для разрушения актив-
, ных начал препарата) и оставляют полученный раствор на
|1 час при комнатной температуре. По прошествии часа к рас-
' твору добавляют 1 см3 двунормальной соляной кислоты и
109
полученный нейтрализованный раствор рассматривают в даль-
нейшем как разведение испытуемого препарата 1 :3. Обрабо-
танный указанным образом препарат должен обладать при
пересчете на начальный раствор активностью по отношению
к матке, не 'превышающей 5°/о его начальной активности.
Таким образом, обработанный препарат может вызывать то
же сокращение матки лишь в дозах, в 20 раз превышающих
дозы необработанного препарата.
Советская химико-фармацевтическая промышленность пока
еще не изготовляет разделенных на отдельные фракции пре-
паратов.
Наиболее известными из заграничных препаратов являются
питрессин (прессорная фракция) и питоцин (маточная фрак-
ция). Возможность иметь эти две фракции позволила уточнить
некоторые особенности их действия и, в частности, по некото-
рым данным даже считать их антагонистами (задержка ма-
точных сокращений питрессином — Мельвиль 112, угнетение
матки — Азума и Кумагава 11S).
Различные комплексные препараты задней доли гипофиза
обладают крайне различной активностью. Произведенное в
1927—1928 гг. в Научно-исследовательском химико-фармацев-
тическом институте в Москве П. Д. Левитским сравнительное
обследование ряда заграничных и советских препаратов пока-
зало очень высокие колебания активности. Эго еще раз гово-
рит за необходимость биологической оценки этих препаратов.
Введенное в Фармакопею СССР требование об обязатель-
ной оценке экстрактов задней доли дало на практике очень
хорошие результаты.
Другие литературные и официальные источники рекомен-
дуют в основном проводить исследование таким же образом.
Разница с требованием Фармакопеи СССР сводится по преи-
муществу к предложениям применять более сложные растворы
изотонической жидкости вместо упрощенной прописи Фар-
макопеи СССР (NaCl—0,9%, КС1, СаС12 и ЫаНСОз —по 0,02%).
Так, по данным Английского государственного медицинского
исследовательского института, являющегося официальным
исполнительным органом Международной комиссии по био-
логической стандартизации, изотонический раствор готовится
так: NaCl — 9,0, КС1 — 0,42, CaCh — 0,24 (прокаленного),
NaHCOs — 0,5, MgCh — 0,05 и декстрозы 5,0 на 1 л. Присут-
ствие декстрозы заставляет готовить ежедневно свежий раствор.
Несмотря на весьма благоприятное общее мнение о методе
испытания йа изолированной матке, отдельные авторы выска-
зывают о нем отрицательное мнение. Из наиболее существен-
ных укажем на возражения Кюрцеля 114 и Шюбеля 106. Первый
не согласен с обычной техникой опыта, при которой остается
неучитываемым фактор внутриматочного давления. Шюбель
не соглашается с самой мыслью о работе на изолированном
органе. И тот, и другой предлагают свои способы. Кюрцель
НО
ограничивается добавлением к аппаратам обычной конструк-
ции приспособления, позволяющего учитывать давление вну-
три органа; Шюбель советует испытывать маточные средства
на животных (кошках) в течение нескольких первых дней
после родов. Возникающие от введений животным сокраще-
ния матки регистрируются графически при помощи вводимых
в нее баллонов или рентгеноскопически. В более поздней ра-
боте Шюбель и Гелен115 настаивают на предпочтительности
метода на пуерперальной кошке и подчеркивают чрезвычай-
ную точность метода. По их мнению, активной дозой при
внутримышечном введении будет 0,1 ЕД (Фёгтлина) на 1 кг
веса и 0,01 ЕД при внутривенном введении. Закономерность,
с которой реагируют кошки, столь велика, что эти авторы
^читают возможным при испытании препаратов задней доли
по их методу не прибегать к стандартному препарату. Если
судить по их же собственным данным, по этому методу пре-
параты оцениваются излишне высоко: препараты, содержа-
щие по данным производящих учреждений 10 ЕД в 1 см3,
были оценены, как содержащие 15 и даже 40 ЕД в 1 см3.
Определения сосудосуживающего действия препаратов
задней доли гипофиза почти исключительно проводят для
прессорной фракции и лишь в очень редких случаях для сум-
марных препаратов. В прежних предписаниях Международной
комиссии рекомендовалось лишь дополнительное испы-
тание на сосудосуживающий эффект. Это объясняется тем,
что сосудосуживающее действие экстрактов задней доли
гипофиза выражено в обычных условиях опыта не очень
ярко и непостоянно. У некоторых видов животных гипофи-
зарные препараты, как правило, вызывают падение кровяного
давления (черепахи), несмотря на то, что у них сосудосужи-
вающие вещества (адреналин) дают обычную картину. За-
ведомо активные по действию на матку препараты могут да-
вать различные в смысле силы эффекты на сосуды. Для удач-
ного воспроизведения сосудосуживающего эффекта требуются
своеобразные условия опыта. Более всего подходящими объек-
тами являются наркотизированные собаки и обезглавленные
кошки, на которых Международная комиссия и рекомендует
дополнительное исследование питуитарных препаратов.
Естественно было ожидать, что прессорная фракция пре-
паратов будет более отчетливо давать сужение сосудов на
обычных объектах. Однако это не подтвердилось, и для опре-
деления сосудосуживающего действия таких препаратов по-
прежнему прибегают к специальным методам. Наибольшую
известность приобрел метод на кошках в модификации Дэля
(Бэрн 11<;), получивший название метода на спинальной кошке.
По этому методу с целью устранения влияния со стороны
высших центров и создания постоянного, хотя несколько по-
ниженного уровня кровяного давления, с одной стороны, раз-
рушается связь между продолговатым и спинным мозгом,
111
а с другой — между межуточным мозгом и продолговатым.
Для опыта рекомендуется кошка 3—4 кг веса. В начале опе-
рации кошка хлороформируется. Под хлороформенным нар-
козом путем разреза шеи по средней линии спереди освобо-
ждается трахея, в которую затем вставляется через разрез в
передней стенке трахеальная канюля, соединяемая с двугорлой
склянкой, в которой на 3—5 см от уровня дна налит эфир.
Вдыхая воздух, проходящий через склянку над эфиром, жи-
вотное в дальнейшем находится под эфирным наркозом. Уве-
личение или уменьшение притока воздуха соответственно
углубляет или ослабляет наркоз. Вслед за этим отыскивают
обе сонных артерии и перевязывают их. После этой части
операции животное переворачивают спиной кверху. На за-
тылке по средней линии послойно разрезается кожа, затем
мышцы, которые при помощи груза растягиваются в стороны.
Ощупав остистый отросток второго шейного позвонка, самым
тщательным образом очищают его от мышц. Обнаженный ости-
стый отросток вместе с задней костной стенкой спинномозго-
вого канала откусывают костными щипцами на протяжении
около 1 см. Далее захватывают пинцетом твердую мозговую
оболочку, разрезают ее и через образовавшееся отверстие
подводят нитку под спинной мозг, а затем, выводя нитку
наружу, разрезают ею мозг. В этот момент трахеальная ка-
нюля должна быть соединена с аппаратом для искусственного
дыхания, которое в дальнейшем поддерживается все время.
Вслед за перерезкой спинного мозга через большое затылоч-
ное отверстие зондом разрушают головной мозг.
В дальнейшем соединяют одну из крупных артерий с ртут-
ным манометром так, как это описано в главе об испытании
адреналина, и определяют дозу испытуемого препарата, вво-
димого внутривенно, вызывающую подъем кровяного давле-
ния, равновеликий подъему, установленному для определенной
дозы стандарта. В качестве стандартного препарата приме-
няется тот же самый экстракт стандартного сухого препарата
4 : 1 000, содержащий 2 ЕД в 1 см3. Прессорную активность
выражают также в ЕД соответственно стандартному препа-
рату путем простого переучета, зная количество активных
начал, входящее в данную дозу стандартного препарата, при-
нятую для сравнения. Введение испытуемого и стандартного
раствора производят поочередно, поступая во всем анало-
гично испытанию адреналина. При проведении этого экспери-
мента следует иметь в виду, что промежутки между отдель-
ными введениями должны быть весьма значительны (от полу-
часа до часа), так как нормальная сократительная способ-
ность сосудистой системы спинальных кошек, после введения
гипофизарных препаратов восстанавливается очень медленно.
Вопрос о том, каким образом экстракты задней доли гипо-
физа приводят к сужению сосудов, решается, всего вероятнее,
так, что это действие не аналогично действию адреналина.
112
Это можно видеть хотя бы на очень простом опыте — на
переживающем отрезке кишечника. Возбуждающий окончания
симпатических волокон в кишечнике адреналин приводит к
остановке перистальтических сокращений кишки и расслабле-
нию ее тонуса, тогда как препараты задней доли, как сум-
марные, так особенно и прессорные, вызывают значительное
повышение тонуса кишечника и усиление перистальтики.
Очень интересны далее наблюдения Хеллера117, показавшего,
что введение растворов адреналина интрацистернально сни-
жает кровяное давление, и Хеллера и Кузуноки 118, установив-
ших, что экстракты задней доли при введении в цистерну не
только не понижают давления, но даже снижают понижение
от адреналина, переводя его в повышение.
То обстоятельство, что препараты задней доли действуют
не через симпатическую нервную систему, а, невидимому, не-
посредственно возбуждают гладкую мускудатуру, может объ-
яснить недостаточно резкую картину сужения сосудов от этих
препаратов.
Вопрос об определении антидиуретической способности в
связи с распространением применения препаратов задней доли
при несахарном мочеизнурении (Атабек119, Адельсберг 12°)
приобрел в последнее время большое значение. Необходи-
мость такого испытания диктуется прежде всего тем, что
антидиуретическое действие различных препаратов, проверен-
ных по действию на матку, оказывается в клинике различным.
Это явление может зависеть от того, что причиной разного
эффекта в различных случаях может служить состояние самих
пациентов и именно определенных центров в мозгу (regio
hypothalami, Мегес и Молитор 121). Вследствие того что «анти-
диуретический гормон» до настоящего времени еще не вы-
делен в изолированном виде, говорить об изменении его ко-
личества в препаратах с уверенностью трудно. Однако несо-
мненно, что действующая на матку фракция обладает лишь
частичным действием на диурез. Прессорная фракция дей-
ствует на задержку диуреза весьма энергично, почему неко-
торые авторы (Стеле122) считают, что «прессорный гормон»
одновременно является и «антидиуретическим гормоном».
С другой стороны, имеются указания на наличие антидиуре-
тического гормона в передней и особенно в промежуточной
доле гипофиза (Даунес и Ричардс123). ^Несогласованность
мнений и неясность результатов отдельных авторов лучше
всего подтверждают необходимость определения антидиуре*
тической силы, особенно по отношению к суммарным пре-
паратам.
Испытание может быть проведено по описанному Макфар-
ланом124 способу. Испытание ведется на здоровых собаках
без какого-либо наркоза. Пища последний раз дается за
18 часов до опыта, вода — за 12 часов. Перед началом опыта
пузырь при помощи катетера освобождается от мочи. Если
Ь — 317 ИЗ
собаке, находящейся в таких условиях, дать 400 см3 воды, то
у нее быстро наступает сильнейший диурез, достигающий мак-
симума на втором часу и длящийся около 4 часов. В случае
одновременного с дачей этого количества воды введения жи-
вотному под кожу 1 см3 активного препарата диурез наступает
лишь на пятом-шестом часу. Если препарат вводится спустя
час после дачи воды, то уже начавшийся диурез прекращается.
Наличие диуреза подтверждается катетеризацией. У собак, не
подготовленных указанным образом (т. е. неголодавших и все
время получавших воду), диурез не останавливается даже
активными препаратами. Применение наркоза противопоказано
уже потому, что у наркотизированных животных введенная в
Рис. 6. Установка опыта на мышах для определения антидиуретического
действия препаратов задней доли гипофиза.
желудок вода не всасывается. Кроме указанного пути, за-
, держка мочеотделения у собак может регистрироваться при
помощи наложенной на мочевой пузырь фистулы или выведен-
ных под кожу мочеточников. По Кнафль-Лентцу 125, I ЕД вы-
зывает в течение первых 2 часов уменьшение нормального
диуреза у собак на 80%.
По Унна и Вальтерскирхен 126, подкожное введение препа-
ратов собакам дает более продолжительное действие, чем
внутривенное. Эти авторы ведут наблюдение в течение 2 часов
после введения препарата, отмечая количество выделяемой
мочи через фистулу мочевого пузыря. Эффект отмечается уже
от до,з 0,1—0,25 и даже 0,01 ЕД. Стандартным препаратом
здесь тоже служит тот же раствор 1 : 1 000 сухого стандарта,
содержащий в 1 см3 2 ЕД.
Гораздо более удобным практически и дающим вполне
удовлетворительные результаты является метод определения
задержки диуреза у мелких грызунов, впервые предложенный
114
1
Джибсом127 и затем получивший одобрение ряда авторов
(Бэрн 128, Бонсман и Бракхаге 129, Хельмут 18°). Мы в лабора-
тории Государственного института экспериментальной эндо-
кринологии в Москве обычно пользуемся этим методом
вкратце сводящимся к следующему. Взрослых здоровых мы-
шей-самцов весом 18—22 г помещают в обыкновенные боль-
шие воронки, которые, как это видно на рис. 6, укреплены
в штативе таким образом, что их задний конец опускается в
градуированные центрифужные пробирки. Мышь сидит на
укрепленной в воронке железной сетке, через которую выде-
ляемая животным моча стекает в пробирку. Для того чтобы
вызвать сильнейший диурез у мышей, достаточно каждой
мыши ввести внутрибрюшинно по 1 см3 дестиллированной
воды. В течение последующих за введением воды 5 часов
мыши выделяют обычно в среднем 1 см3 мочи, иногда не-
сколько более или менее. Для изучения антидиуретической
силы препаратов мышам вводят подкожно равные до.зы,
используя для каждой дозы 5 мышей. Большими дозами
можно вызвать задержку диуреза на 4—5 часов полностью.
Доза 0,01 ЕД на 1 г веса мыши вызывает именно такое дей-
ствие. Для целей биологической оценки, как всегда, лучше
пользоваться не максимальным эффектом, т. е. в данном слу-
чае не определением полной задержки диуреза, а установле-
нием дозы, дающей несомненный, но неполный эффект,
Удобным критерием является такая задержка диуреза, при ко-
торой количество выделяемой мочи в течение 5 часов, следую-
щих за введением воды, составляет 30—4О°/о введенного коли-
чества, т. е. 0,3—0,4 см3.
При определении антидиуретической силы препаратов бе-
рут разные до,зы, предположительно колеблющиеся в преде-
лах от 0,005 до 0,02 ЕД на 1 г веса, и каждую дозу вводят
5 мышам. Для определения реакции животных пользуются
стандартным раствором, вводя его, конечно, другим мышам
того же веса, из того же питомника и содержащимся в тех
же условиях. Весьма существенным фактором является темпе-
ратура помещения, в котором проводится опыт. Необходимо,
чтобы температура не была ниже 15°, что понижает воспри-
имчивость мышей к препаратам задней доли.
Рекомендуемое предварительное в начале опыта отжимание
мочи и затем повторение его каждый час во время опыта (Бон-
сман и Бракхаге 129) нами не применяется, как ненужное, а мо-
жет быть, сказывающееся на точности результатов в силу ме-
ханического раздражения. Точно так же представляется из-
лишним рекомендуемое этими же авторами дополнительное
внутрибрюшинное введение мышам в течение каждого часа
во время опыта по 0,2 см3 0,2% раствора хлористого натрия.
Одно первоначальное введение воды без добавочных меха-
нических раздражителей и инъекций в достаточной мере
обеспечивает развитие у мышей диуреза.
8* 115
I
При постановке опыта на крысах воду вводят не внутри-
брюшинно, a per os (5 см3 на 100 г веса).
При необходимости определения антидиуретической силы
сухих препаратов задней доли гипофиза (например, адиурек-
- рина) предварительно экстрагируют эти препараты точно так
же, как это делается при экстракции стандартного порошка.
Высокоактивные сухие препараты содержат в 1 мг около
2 ЕД (сухой стандартный препарат содержит в 1 мг точно
2 ЕД). По указанию Международной комиссии антидиурети-
. ческий эффект может быть определяем на людях.
ГЛАВА IV
АДРЕНАЛИН
Адреналин (эпинефрин) представляет собой выделенное из
мозгового слоя надпочечника вещество, вполне изученное
с химической стороны, полученное в кристаллическом виде, и
первый из продуктов внутрисекреторных органов, для кото-
рого был осуществлен синтез.
Химически адреналин представляет собой производное пи-
рокатехина (бранцкатехина); формула его такова:
СН
ОН.сРс. СН(ОН). ch2nh . сн3
J. II
ОН.С СН
ч/
СН
(ОН)2СбНзСН(ОН)СНгХН.СНв — диоксифенйлэтанолметиламин.
Естественный адреналин представляет собой левовращающий
изомер, обладающий сравнительно с правовращающим изоме-
ром гораздо большей силой действия. По своему происхожде-
нию адреналин может быть еще назван левометиламиноэтанол-
катехолем. Для растворения адреналина в воде требуется до-
бавление кислот (обычно соляной). Растворы такого соляно-
кислого адреналина легко разрушаются в щелочной среде, при-
чем бесцветный раствор окрашивается в розовый и далее крас-
ный и бурокоричневый цвет.
Несмотря на детальное изучение химии адреналина, во-
прос о том, является ли он гормоном надпочечника, до сих
пор остается открытым. Скорее всего ответ на этот вопрос
должен быть отрицательным. Дело в том, что адреналин не
может считаться гормоном или во всяком случае носителем
всех свойств продуктов внутренней секреции надпочечников
уже потому, что по удалении этих желез введением адрена-
лина не только не удается устранить наступающих симптомов,
но невозможно даже вызвать ни малейшего улучшения в со-
стоянии животных, быстро гибнущих после этой операции.
Далее будет указано, что предохраняющим животных от ги-
бели в этих случаях является гормон коры надпочечника (см.;
главу XIII).
Детальное изучение адреналина с химической стороны
имело следствием предложение огромного количества методов
его химического определения, в большинстве своем колори-
метрических. Не имея возможности входить в рассмотрение
вопроса об этих методах, мы должны указать, что, по мнению
большинства исследователей, одного химического определения
адреналина еще недостаточно и что для полного подтвержде-
ния его активности необходимо или по меньшей мере жела-
тельно еще и биологическое испытание. Относительно быстрая
разрушаемость растворов адреналина делает понятным необ-
ходимость проверки их активности, для чего химические ме-
тоды оказываются очень часто недостаточно чувствительными
и сравнительно неточными.
Помимо химических и биологических свойств адреналина,
для целей характеристики его препаратов используется также
и оптическая активность его растворов — вращение плоскости
поляризации влево. Как добавочный момент к данным хими-
ческого анализа это может иметь значение, ибо, как было
указано выше, левовращающий изомер превосходит по актив-
ности другие формы (примерно в 2 раза выше активности
рацемической формы и в 50 раз правовращающей).
Фармакопея СССР в VII издании включила метод биологи-
ческой оценки препарата, Фармакопея США сохраняет это тре-
бование уже на протяжении трех последних изданий (IX—XI),
несмотря на то, что из последнего издания исключены мало
достоверные или ненужные методы биологической оценки пре-
дыдущих изданий (препараты морского лука, индийской ко-
нопли). Германская Фармакопея предписывает определять
адреналин лишь химически и по его оптической активности,
тем самым подчеркивая ненужность биологического испыта-
ния. Это положение отвергается Фармакопеей США, в послед-
нем издании предлагающей испытывать адреналин биологи-
чески, помимо требуемого химического испытания и определе-
ния оптической активности.
Физиологическое испытание препаратов надпочечников поз-
воляет количественно определять их активность путем срав-
нения со стандартом, который является в данном случае
идеальным, одновременно отвечая обоим условиям, предъ-
являемым к стандарту: химически чистый адреналин, 1-метил-
аминоэтанолкатехол, является в одно и то же время хими-
чески чистым веществом и производным того же исходного
материала — надпочечников. Сохраняемый в сухом виде син-
тетический адреналин не разлагается и не теряет силы дей-
ствия.
Адреналин принадлежит к числу ядов, обладающих много-
образным действием на организм. Главным объектом воздей-
ствия является симпатическая нервная система; адреналин дей-
ствует на окончания симпатических нервных волокон, вызы-
вая их возбуждение. Проявление этого возбуждения будет
118
различно в зависимости от иннервации объекта волокнами
симпатической нервной системы. Возбуждение вазоконстрик-
торов адреналином вызывает резкое сужение сосудов боль-
шинства органов и участков тела (исключение составляют ко-
ронарные сосуды сердца, легочные сосуды). Снабжаемые сим-
патической нервной системой органы с гладкой мускулатурой
подвержены резким изменениям под влиянием адреналина.
Так, например, матка кролика обнаруживает усиление сокра-
щений, кишечная перистальтика уменьшается и т. д. Адрена-
лин, далее, оказывает характерное действие на радужную обо-
лочку глаза, расширяя ее, влияет расслабляюще на спазмати-
чески сжатые бронхиолы, вызывает глюкозурию, основанную
на переводе гликогена печени в сахар крови, возбуждает
центр блуждающих нервов, что выражается в замедлении ра-
боты сердца, усиливает отделение некоторых желез (слюн-
ных), меняет окраску кожи травяных лягушек и т. д.
Резко избирательное действие по отношению к вегетатив-
ной нервной системе и характерное химическое строение поз-
воляют сравнить адреналин с алкалоидами. Такое наименова-
ние адреналина, распространенное в прежнее время, еще и те-
перь встречается в англо-американской литературе.
Многообразие проявления эффекта адреналина на организм
указывает многочисленные пути для биологического испыта-
ния. Несмотря на это, большинство исследователей принимает
за критерий его действия возбуждение сосудосуживающих во-
локон симпатической нервной системы. Были и до настоящего
времени имеются предложения испытывать адреналин и дру-
гими путями, но последние оказались неспособными заменить
методов, основанных на определении сосудосуживающих
свойств адреналина.
Из таких не привившихся на практике методов биологиче-
ского определения адреналина можно упомянуть опыты на
плавательной перепонке кураризированных лягушек (сужение
сосудов и устранение этого сужения опто нами Абдергальдена),
установление антагонизма между адреналином и действую-
щими на окончания парасимпатических нервов ядами (муска-
рин, ацетилхолин, нейрин) и противоположно действующих на
симпатические окончания веществ (эрготамин) на вырезанном
лоскуте сердца (Лёве1зоа) расширение зрачка энуклеирован-
ного глаза-лягушки (Эрман 131), понижение температуры у бе-
лых мышей при внутрибрюшинном введении (Абдергальден и
Славу 132, Абдергальден и Кауч 133), побледнение кожи лягушки
через 30—60 минут после введения адреналина в v. cutaneam
magnam или спинной лимфатический мешок (Либен134). Из-
вестный метод изолирования кишки по Магнусу для целей
биологического определения адреналина модифицирован Шюл-
лером 135, предложившим заменить тонкую кишку прямой;
единственное преимущество этой замены, невидимому, заклю-
119
чается в том. что прямая кишка не требует поддержания по-
стоянной температуры питательного раствора.
Затем действие адреналина на организм может быть реги-
стрируемо при помощи измерения выпуклости глазного яблока
в связи с расширением радужной оболочки. Последнее осо-
бенно легко наступает у кроликов с вырезанным верхним шей-
ным симпатическим узлом. Измерение кривизны наружной по-
верхности глазного яблока ведется под микроскопом, напра-
вляемым на глаз кролика, укрепленного неподвижно в ящике
(Шимидзу 13С).
Сосудосуживающая способность адреналина может быть
отмечена как непосредственно на отдельных органах или ча-
стях‘тела, так и на целом организме. В связи с этим и методы
испытания, основанные на определении сосудосуживающей
силы, делятся на две группы. Первую составляют методы
определения повышения кровяного давления на целом живот-
ном, так как результатом общего сужения периферических со-
судов организма окажется в связи с затруднением для тока
крови повышение кровяного давления на наркотизированных
собаках, кроликах или же на обезглавленных или децеребри-
рованных кошках (с целью устранения влияния центральной
нервной системы) и т. д.
Из методов непосредственного определения сужения пери-
ферической сосудистой системы наибольшую славу приобрели
способы исследования на изолированном по Кравкову-Писем-
скому ухе (подробности см. дальше) и на лягушачьем препа-
рате Лёвен-Тренделенбурга, принципиально ничем друг от
друга не отличающиеся. В этих метЪдах критерием для дей-
ствия адреналина будет служить уменьшение количества про-
текающего в определенный промежуток времени через препа-
рат солевого раствора, основанное на уменьшении просвета
сосудов в связи с их сужением, наступившим от адреналина.
Способность адреналина суживать периферические сосуды
является универсальной и проявляется при введении его под-
кожно и внутривенно. Введение per os ведет к разрушению
адреналина в щелочной среде кишечного содержимого. Указы-
вают, что при введении адреналина в полость спинномозгового
канала непосредственно под затылочной костью (субокципи-
тально) можно получить повышение кровяного давления
(Хемлер 117).
Несмотря на то, что изменение сосудосуживающих свойств
адреналина идет параллельно изменению большинства сторон
его действия, встречаются указания (правда, нуждающиеся
в подтверждении) на возможность получения, например, дей-
ствия на гликоген печени от препаратов с явно пониженной
сосудосуживающей способностью.
По методу Фармакопеи СССР, исследование адреналина
должно производиться на кроликах. Выбор в качестве под-
опытного животного именно кролика объясняется, повиди-
120
давления. Для устранения
Рис. 7. Ртутный манометр.
мому, чисто техническими соображениями, так как кроликов
удобно и легко иметь повсюду; с одинаковым успехом могут
быть использованы, например, собаки. В качестве небольшого
возражения против этого выбора можно привести то сообра-
жение, что кролики обладают повышенной сопротивляемостью
к атропину, почему у них труднее вызывается паралич блу-
ждающих нервов, нужный по условиям опыта. Возбуждение
последних адреналином ведет к замедлению сердцебиений и
увеличению отдельных размахов кривой, затемняющих чистую
картину подъема кривой кровяного
этого обстоятельства кроликам
вводят атропин, обладающий пара-
лизующим действием на окончания
парасимпатических нервов. У от-
дельных животных для этого тре-
буются довольно значительные до-
зы. В то время как для получения
соответствующего эффекта на
средней собаке (12—15 кг) тре-
буется 1—2 мг сернокислого атро-
пина, количества этого часто ока-
зывается недостаточным для того,
чтобы достичь того же у кролика
в 1,5—2 кг весом. По Фармакопее
кроликам вводят перед опытом по
5 мг атропина.
Сущность опыта сводится, как
уже сказано, 'К регистрации кровя-
ного давления и его изменений.
Кровяное давление удобнее всего
может быть отмечено на ленте дви-
жущегося барабана при помощи
соединения тока крови с обыкно-
венным ртутным манометром. По-
следний представляет собой согну-
тую трубку, снабженную с одной стороны (рис. 7) двумя кранами.
Нижний кран служит для соединения при помощи резиновой
трубки манометра с артерией подопытного животного, верх-
ний—для возможности герметического закупоривания наруж-
ного конца манометрической трубки той стороны, к которой
припаяны краны. Манометр наполняется приблизительно на 1/з
или несколько выше ртутью. Через другой конец манометри-
ческой трубки вставляется специальный поплавок, основание
которого должно точно соответствовать поперечному сечению-
трубки, из которой приготовлен манометр. Поплавок соеди-
няется с пишущим пером, которое помещается несколько-
выше манометра. В качестве пера может служить простая изо-
гнутая под прямым углом тонкая (стальная) проволока, дви-
жением которой на закопченном барабане образуется белая
121
линия. Манометр соединяется с артерией животного, для чего
в последнюю вводится стеклянная канюля, которая соеди-
няется с манометром при помощи резиновой трубки соответ-
ствующего диаметра. Техника операции животного и соедине-
ния с манометром несложна.
Ввиду того что кролик принадлежит к числу мелких жи-
вотных, приходится пользоваться возможно крупной из лежа-
щих близко к поверхности тела артерией. Такой артерией яв-
ляется сонная (безразлично с какой стороны). Для удобства
обнаружения сонной артерии кролику придается специальное
положение: животное растягивается на операционной доске на
спине, что достигается вытягиванием всех конечностей и укре-
плением головы при помощи специального мордодержателя
так, чтобы шея была легко доступна для операции. Шерсть на
шее тщательно выстригается. Операция на кролике может
быть производима без соблюдения условий стерильности, так
как кролики к общему гнойному заражению невосприимчивы
(незначительное местное наблюдается довольно часто). Опера-
ция ведется под наркозом, преследующем как обычные гуман-
ные цели, так и цель устранения движений кролика, которые,
несмотря на самое тщательное привязывание, могут всегда
иметь место. Если движения будут даже ничтожными, то все
напряжение мышц вызовет повышение кровяного давления, ко-
торое скажется на кривой отдельными подъемами. В качестве
наркотизирующего вещества Фармакопея предлагает пользо-
ваться уретаном (2 г на 1 кг веса животного). Хорошие ре-
зультаты дает также и эфирный наркоз; хлороформ для кро-
ликов непригоден в силу их повышенной к нему восприим-
чивости.
Разрез через выстриженную кожу ведется по средней ли-
нии шеи, начиная несколько выше щитовидного хряща и кон-
чая у места прикрепления к ключицам грудино-ключично-со-
сковых мышц (mm. sterno-cleido-mastoidei). Протяжение разреза
должно составлять в среднем 3—4 см с тем, чтобы была пол-
ная свобода для маневрирования. Далее последовательно раз-
резают по той же линии подкожножировой и мышечный слои,
под которыми лежит трахея. Собственно мышц разрезать по
средней линии не приходится, так как шейные мышцы распо-
ложены симметрично по обеим сторонам шеи. Артерия оты-
скивается чрезвычайно просто: тупым путем, чтобы избежать
возможного поранения сосудов, раздвигают две лежащие кна-
ружи от трахеи мышцы; в глубине между мышцами обнару-
живается артерия, лежащая в одном влагалище с блуждающим
нервом. Сосудисто-нервный \ пучок обнажают на возможно
длинном протяжении, после чего приступают к выделению
артерии из окружающей сосуд клетчатки и отделению ее от
прилежащих нервных стволов. Тщательно очищенный арте-
риальный ствол берут на лигатуру. При очистке артерии нуж-
но следить за тем, чтобы не порвать отходящих в стороны
Я 22
веточек, из которых особенно отчетливо обычно выделяется
идущая к щитовидной железе. Ясно видные глазом веточки
рассекаются между двумя наложенными на них лигатурами.
Еще прежде, чем приступить к дальнейшим манипуляциям
мад артерией, обнажают яремную вену, в которую во время
опыта будут делаться введения подлежащих испытанию ве-
ществ. По соображениям удобства вену открывают на сто-
роне, противоположной той, на которой была открыта арте-
рия. Яремная вена расположена несколько кнаружи от сонной
артерии и лежит более поверхностно, располагаясь непосред-
ственно под кожей в подкожножировой клетчатке. Выделение
вены должно производиться также тупым путем и с осторож-
ностью, так как в толстый венозный ствол (v. jugularis commu-
nis), слагающийся из наружного и внутреннего стволов, на
уровне середины шеи впадает несколько довольно крупных
ветвей, переплетающихся между собой в виде сети.
Как разрез через кожу, так и дальнейшее обнажение со-
судов обычно протекают бескровно, если не считать незначи-
тельного кровотечения из кожных вен, которое лишь в случае
очень толстой кожи подопытного животного требует принятия
каких-либо мер для остановки, обычно же останавливается от
простого прижатия ватой.
После обнажения обоих сосудов приступают к введению
в сонную артерию канюли. Для этого сперва артерия наглухо
перевязывается возможно высоко по направлению к перифе-
рии. Затем на сердечный конец также настолько глубоко, на-
сколько это позволяет кожный разрез, накладывается клемма.
Между клеммой и лигатурой должен остаться свободным отре-
зок артерии длиной от 1 до 2 см. Под эту часть сосуда под-
водится нитка, из которой приготовляется петля. После этого
оттягивают артерию по направлению ее хода и вверх за нитку,
которой она перевязана наглухо. На натянутой таким образом
артерии с верхней стороны острыми ножницами производят
разрез, который ведется под острым углом к поперечному
сечению сосуда с тем, чтобы получилось отверстие, прикрытое
сверху подобно клапану.
Вместо того, чтобы оттягивать артерию за нитку, можно
захватить верхнюю стенку сосуда сверху тонким пинцетом и
провести разрез непосредственно над захваченной частью.
В произведенный тем или иным способом разрез вводится
стеклянная канюля, носик которой сточен наискось, с тем рас-
четом, чтобы она могла бы быть легче введена в отверстие.
Естественно, что края носика должны быть или гладко отпо-
лированы, или оплавлены. Перед носиком на канюле должен
быть перехват, который служит целям лучшего укрепления
канюли в артерии: после введения именно на месте перехвата
крепко завязывается двойным узлом заранее приготовленная
в виде петли лигатура. Таким образом, канюля никогда не вы-
скочит из артерии, так как ее движениям в ту и другую сто-
123
рону будут противостоять утолщения. При введении канюли
в артерию особенно важно упомянутое выше очищение сосуда
от окружающей его клетчатки — периваскулярной ткани: после
надреза, благодаря которому вытечет из отрезка вся кровь,
стенки артерии, несмотря на их естественную упругость, не-
сколько спадутся, и в случае, если артерия очищена недоста-
точно тщательно, вводить канюлю будет труднее, так как при
надрезе одновременно разрезается и окружающая сосуд клет-
чатка, в которой окажутся ложные отверстия.
Канюля вводится в отверстие или после того, как захва-
тывается верхний лоскут и этим обнаруживается отверстие,
или же, если артерия очень тонка или канюля относительно
толста, расширяют отверстие, оттягивая верхний лоскут
кверху изогнутым под прямым углом куском тонкой прово-
локи и по нему вводят канюлю, после чего крючок тотчас
вынимается. Канюля еще до введения в артерию наполняется
раствором, препятствующим свертыванию крови. В качестве
такового для кролика пригоден 25% раствор сернокислого
магния. Тотчас после укрепления канюли шприцем с длинной
иглой тем же раствором несколько раз промывают канюлю
для удаления из нее небольших количеств крови. Введение
канюли должно быть произведено с тем расчетом, чтобы не
образовалось никакого перекручивания сосуда по оси, так как
последнее затруднит ток крови вследствие уменьшения про-
света. Это обстоятельство необходимо помнить в течение
всего опыта.
Прежде чем приступить к соединению канюли с маноме-
тром, нужны некоторые предварительные приготовления по-
следнего. Вся резиновая трубка, надетая на нижний кран,
наполняется при помощи большого шприца тем же раствором
сернокислого магния. Через трубку наполняется и вся выше
уровня ртути лежащая часть той стороны манометра, в кото-
рую впаяны краны. Попавшие пузырьки воздуха могут быть
удалены через временно открытый верхний кран. Закрыв по-
следний, через нижний кран вводят избыточное количество
раствора сернокислого магния с тем, чтобы уровень ртути
в открытой трубке манометра поднялся сравнительно с другой
трубкой на 3—4 см, после чего нижний кран также запирается.
Означенная предосторожность необходима для того, чтобы
предупредить резкий толчок и подъем ртутного столба за
счет нормального давления кровяного тока сонной артерии
кролика. Давление сонной артерии способно поднять уровень
ртутного столба на эту или даже несколько большую высоту.
После этих приготовлений соединяют периферический конец
канюли, введенной в артерию, с резиновой трубкой, надетой
на нижний, кран манометра. Диаметр резиновой трубки подби-
рается с тем расчетом, чтобы канюля как раз плотно входила
в него. Укрепив канюлю на месте соединения с резиновой
трубкой, сначала открывают нижний кран манометра, а затем
124
снимают клемму с артерии. К этому моменту, само собой разу-
меется, манометр должен быть помещен около ленты кимо-
графа (предпочтительно большого) так, чтобы перо на по-
плавке как раз касалось закопченной ленты. В случае, если нет
приспособления для копчения больших лент, можно пользо-
ваться стеклянным пером с краской для записи на чистой бу-
маге. Рис. 8 дает представление об общей картине опыта.
Если все описанные манипуляции выполнены правильно и
кролик находится в состоянии глубокого наркоза, на ленте
будет записываться кривая нормального давления сонной арте-
рии кролика, которая будет иметь вид волнообразно пробе-
Рис. 8. Общий вид опыта записи кровяного давления,
тающей зубчатой линии, причем мелкая зубчатость будет соот-
ветствовать сокращениям сердца, а волнообразные колеба-
ния —- дыхательным экскурсиям.
Введение препаратов в вену производятся при помощи тон-
кой иглы, что или вовсе не вызывает, или дает легко остана-
вливаемое простым прижатием кровотечение.
Собственно испытанию адреналина предшествует упомяну-
тая выше атропинизация кролика, которая производится также
через вену. Эффект от атропина наступает уже через несколько
минут. Без предварительной атропинизации введение адрена-
лина вызывает чрезвычайно сильное усиление и замедление
сердцебиений, получающее отражение на кривой в виде от-
дельных редких размахов, которые будут затруднять измере-
ние высоты подъема (по Фармакопее, кроликам вводится 5 мг
сернокислого атропина на 2 кг веса). Такая картина носит на-
звание вагус-пульса. На приводимых двух кривых (рис. 9 и 10)
отчетливо видна разница действия адреналина на атропинизи-
рованного и не получившего атропина кролика. Реакция кро-
125
К
1
ликов на атропин чрезвычайно индивидуальна; в некоторых
случаях, даже после предварительной атропинизации, введение
адреналина все-таки урежает пульс; это урежение, однако, ни-
когда не достигает такой степени, как это видно на первой
кривой. При выборе кроликов всегда лучше останавливаться
на животных простой породы (не длинношерстных), так как
их реакция на адреналин является более постоянной.
Принцип метода заключается в определении дозы испытуе-
мого препарата, способного вызвать подъем кривой кровяного
Рис. 9. Действие адреналина на кр.овяное давление неатропиниэированного
кролика.
давления, равный по высоте подъему, вызванному стандарт-
, ным препаратом. Сначала определяется доза стандартного пре-
, парата, способная дать отчетливый подъем. Под отчетливым
подъемом для разных животных может быть понимаема раз-
ная высота. В среднем для большинства кроликов давление
, легко поднимается на 25—35 мм; у отдельных животных даже
максимальные дозы не способны поднять кривую выше, чем на
30 мм; у некоторых высота подъема может достигать 40 мм и
даже больше. Выбор начальной дозы очень нетруден: 1 см3
раствора солянокислого адреналина разведения 1 :50 000
Рис. 10. Стандартизация адреналина на атропинизированном кролике по
Фармакопее СССР. 1, 3 и 5 — действие 1,0, 0,5 и 0,3 см3 раствора
1:50 000 испытуемого адреналина; 2, 4 и 6 — действие 1,0, 0,5 и 0,3 см’
раствора 1:50 000 стандартного адреналина.
обычно оказывается дозой, достаточной для получения макси-
мального для данного кролика подъема кривой. В дальнейшем
уменьшением дозы определяют ту, которая дает субмакси-
мальный подъем давления. Определив эту дозу для стандарт-
ного препарата, подыскивают такую дозу подлежащего испы-
танию препарата, которая дает подъем на ту же высоту. Для
подтверждения полученных данных каждое введение испытуе-
мого препарата чередуют с введением стандартного препарата.
Требуется, чтобы одинаковый эффект от сравниваемых доз
126
был подтвержден двумя последующими одно за другим пар-
ными сокращениями.
В первом тираже VII издания Фармакопеи СССР принцип
метода был несколько иной: требовалось сравнение с подъе-
мом, вызванным введением точно 1 см3 раствора стандартного
препарата 1 :50 000, и для сравнения требовалось подыскать
такие дозы испытуемого препарата, которые дают подъем, от-
личающийся от подъема, вызванного введением стандартного
препарата, на :± 2О°/о по вышине подъема. Удовлетворяющие
такому требованию дозы приравнивались по активности к 1 см*
раствора стандартного препарата 1:50 000 с отклонением на
20%. Такого рода постановка опыта предполагает, что 1 см3
раствора 1 :50 000 дает подъем, которым можно будет без-
условно воспользоваться для сравнения. Между тем не только
эта дюза часто дает максимальный подъем давления, но и не-
сколько меньшие дозы — 0,9, 0,8 см3 — могут давать то же дей-
ствие. Далее, следует отметить, что, приравнивая разницу в вы-
шине подъема к разнице в активности, этот метод исходил из
недоказанного положения о прямо пропорциональном отноше-
нии между изменением дозы и увеличением подъема кривой
кровяного давления. В связи со сказанным в последующих ти-
ражах VII издания Фармакопея приняла указанный выше видо-
измененный метод.
При подыскании доз стандарта и испытуемого препаратов,,
дающих равновеликий эффект, необходимо принимать во вни-
мание не один только подъем кривой на определенную высоту,
т. е. не одно только измерение высоты подъема, но и общий
характер кривой—продолжительность действия, отлогость
спуска, крутизну подъема и т. д. В некоторых случаях высота
подъема от небольших, не дающих максимального эффекта доз
может быть почти одинаковой, тогда как продолжительность
действия, быстрота падения эффекта могут очень отличаться.
На кривой для удобства измерения отмечается нулевая ли-
ния, соответствующая уровнню стояния пера манометра при
нормальном комнатном давлении. Многократные введения
адреналина одному и тому же кролику возможны благодаря
тому, что адреналин в крови чрезвычайно быстро разрушается.
Быстрое разрушение адреналина в организме, повидимому, за-
висит от воздействия слабо щелочной среды и, может быть, от
быстрого усвоения его всеми иннервируемыми симпатической
нервной системой органами (Харада 137). Отмечена особая спо-
собность печени разрушать адреналин, которую Рико и Мала-
файя 138 наблюдали в работе над действием взвеси из органов
на адреналин, а Бейн и Сэффолк 139— на срезах тканей.в рас-
творе адреналина. Обычно бывает достаточно 5, максимум 10 ми-
нут времени, чтобы эффект от воздействия предыдущей дозы
уступил место нормальной картине. Подъем кривой заканчи-
вается падением ее несколько ниже начального уровня, кото-
рого кривая снова достигает через несколько минут. Каждое
127
введение не оставляет после себя никаких следов в смысле
угнетения или, наоборот, повышения чувствительности реак-
ции животного; каждая новая доза действует прямо пропор-
ционально ее размерам. Движение барабана во время опыта
должно совершаться равномерно, так как разная скорость даст
разное представление о крутизне подъема. В промежутки ме-
жду отдельным^ введениями барабан останавливают.
В качестве стандартного препарата применяется синтетиче-
ский левовращающий адреналин, растворяемый в соляной кис-
лоте из расчета 100 см3 децинормального раствора на 1 г ве-
щества и в дальнейшем разводимый до нужной концентрации.
Ввиду того что обычная концентрация продажных растворов
адреналина равна 1 :1 000, стандартный раствор готовится
в таком же разведении. Следует иметь в виду, что рас-
творение 1 г адреналина в литре сантинормальной соляной
кислоты дает раствор солянокислого адреналина не 1 : 1 000, а
1,2 : 1 000, так как молекулярный вес хлоргидрата адреналина,
образующегося при растворенци, будет равен 219 вместо
183 адреналина основания. Этой существенной разницей в 20%
можно тем не менее принебречь, так как все вырабатываемые
препараты представляют собой основания и при их раство-
рении исходят из веса адреналина как такового, а не его хлор-
тидрата. Поэтому растворы «солянокислого адреналина
1 . 1 000» обычно представляют собой в действительности рас-
твор 1,2 : 1 000.
Во время исследования, особенно если опыт почему-либо
затягивается, экспериментатору иногда приходится столкнуться
с неприятным фактом образования тромба на месте соприкос-
новения канюли с артерией или в самой канюле. Причины
этого обстоятельства могут быть различны. Наиболее простой
и частой являются недостаточная чистота канюли и недоста-
точная гладкость введенного в сосуд носика канюли. В по-
следнем случае тромб образуется аналогично тому, как это
имеет место при всяком механическом препятствии в сосуде;
по этим же соображениям, кровь легко свертывается в каню-
ле, стенки которой являются недостаточно гладкими. Для пре-
дупреждения этого обстоятельства необходимо внимательно
следить за тем, чтобы носик канюли был бы тщательно опла-
влен. Канюли должны содержаться в безукоризненной чистоте.
Иногда применяют парафинирование канюли, но большого
значения это не имеет.
В некоторых случаях тромбозирование сосуда происходит,
повидимому, в силу повышенной свертываемости крови дан-
ного животного, так как, несмотря на принимаемые меры,
тромб образуется повторно несколько раз. Для удаления
тромба временно выключают сообщение артерии с маноме-
тром, на время же удаляют канюлю, извлекают тромб и снова
соединяют животное с аппаратом.
Для разъединения кролика с кимографом запирают нижний
5J28
кран манометра, надевают зажим на артерию и только после
этого снимают с канюли каучуковую трубку, а затем выни-
мают из артерии и самую канюлю. Если тромб образовался
в канюле, то его удаляют промыванием, если же тромб сидит
в сосуде, то достаточно на время разжать клемму, чтобы си-
лой естественного давления крови сгусток был выброшен в
зияющее отверстие в стенке артерии. Для устранения возмож-
ности образования тромба была предложена канюля специаль-
ной конструкции (Маккракен и Уеркнес140), отличающаяся
сравнительно сложным устройством. Несмотря на похвальные
отзывы, на практике к ней, повидимому, прибегают редко.
Образование тромба скажется на кривой постепенным
уменьшением силы пульсовых колебаний вплоть до их полной
остановки. Если такая остановка наступает внезапно, то она
может зависеть от механических причин, которые могут быть
двух родов. Одна из них может относиться к манометру: в
случае, если поплавок не совсем точно подходит по диаметру
к манометрической трубке, возможно заскакивание вверх ртути,
которая будет тормозить движение поплавка. Другая причина
встречается реже и состоит в дерекручивании сосуда по оси.
Это обычно имеет,место при недостаточно внимательном про-
ведении опыта, при неполном наркозе, когда кролик может де-
лать резкие движения и т. д. Оба эти обстоятельства — заска-
кивание ртути и перекручивание канюли —определятся нагляд-
но и легко устранимы.
По окончании опыта кролик может быть сохранен для даль-
нейшей работы. Для этого по удалении канюли из артерии, по-
сле предварительной перевязки последней наглухо, двуслой-
ным швом зашивают место разреза. Разрез обычно заживает
очень хорошо, несмотря на то, что местное нагноение встре-
чается почти в каждом случае. Через несколько недель зажив-
шее и заросшее место разреза приобретает совершенно преж-
ний вид — настолько, что иногда, если приходится оперировать
уже бывшего в употреблении кролика, удается догадаться о
бывшем разрезе только по рубцовой ткани на месте разреза и
отсутствию с одной стороны сонной артерии. Повторное поль-
зование для той же операции уже оперированным ранее кро-
ликом йе всегда возможно, так как выключение второй сонной
артерии может повлечь за собой смерть кролика тут же во
время опыта.
При постоянной работе лаборатория может иметь уже гото-
вый концентрированный раствор стандартного препарата, на-
пример, 1 : 1 000, как и большинство продажных препаратов. Для
испытаний как стандартный, так и испытуемый препараты рас-
творяются в изотоническом (0,9%) растворе •поваренной соли.
Очень близким к описанному методу Фармакопеи СССР яв-
ляется метод Фармакопеи США. Отличие касается выбора жи-
вотного: Фармакопея США предписывает пользоваться соба-
ками. Препарирование животного в общем ведется так же, за
9 — 317 129
исключением того, что для введения препарата обнажают не
яремную, а одну из бедренных вен; последние легко могут
быть найдены в паховых складках, где они лежат поверхност-
но; ориентировке помогает пульсация одноименных артерий,
заключенных вместе с веной в одно влагалище.
На случай возможных осложнений со стороны дыхания в
трахею вводится трахеальная канюля; к искусственному ды-
ханию прибегают, однако, только в случае необходимости. Вы-
бор наркоза предоставляется экспериментатору, указывается на
желательность введения кураре для высокого обездвиживания
животных; при глубоком наркозе необходимость в этом от-
падает.
Стандартом также служит тот же синтетический адреналин.
Стандартный препарат разводят 1:100 000. \
Само исследование сводится к определению дозы стандарт-
ного препарата, вызывающей подъем кривой на высоту от 30
до 60 мм, и затем подбора дозы испытуемого препарата (в том
же предположительно разведении 1:100 000), способной вы-
звать подъем кривой на ту же высоту. Как определение стан-
дартной дозы вначале, так и определение дозы испытуемого
препарата должно быть подтверждено получением совпадаю-
щего эффекта от повторных доз. Требование, предъявляемое
к растворам солянокислого адреналина, заключается в том,
чтобы растворы последнего в количестве не менее 0,095 и не
более 0,105 в 100 см3 (в среднем, следовательно, 1 : 1 000) вы-
звали эффект, не уступающий эффекту от равновеликих доз
стандартного раствора.
Объектом испытания очень часто являются растворы адре-
налина в комбинации с местно анестезирующими веществами —
кокаином и его заместителями. При исследованиях такого рода
препаратов следует иметь в виду особенности влияния других
ингредиентов на окончания симпатических волокон. Кокаин,
обладая сам способностью возбуждать окончания симпати-
ческих волокон, усиливает действие адреналина еще и тем,
что повышает чувствительность симпатических волокон к адре-
налину. Последняя особенность кокаина выражена столь
резко, что, например, Тейнер141 пользуется ею как методом
для определения характера сосудосуживающего действия не-
которых соединений. По отсутствию усиления их действия
кокаином этот автор выводит заключение о том, что их дей-
ствие осуществляется, помимо симпатических окончаний.
Препараты типа антиастмокрина (астмолизина), предста-
вляющие собой смесь растворов адреналина и экстрактов зад-
ней доли гипофиза, также могут давать несколько больший
эффект сравнительно с тем, который должен быть получен
от данного количества адреналина. Это обстоятельство зави-
сит от того, что препараты задней доли гипофиза сами могут
вызывать некоторое сужение сосудов, хотя, повидимому, и не
через окончание симпатических нервов.
130
Валоризация адреналина на изолированном по Кравкову-
Писемскому ухе кролика сводится, по существу, к определе-
нию того же сосудосуживающего эффекта препарата, только
регистрируемого иным способом. Уменьшение количества про-
текающей в определенный (короткий) промежуток времени
через ухо жидкости Рингера служит критерием силы сосудосу-
живающего действия препарата.
Изоляция уха, равно как и всякого вообще органа или от-
дельной части тела, сводится к помещению последних в воз-
можно близкие к естественным условия. Ухо представляет в
этом отношении чрезвычайно благодарный объект. Для созда-
ния близкой физиологическим условиям картины достаточно
восстановить картину кровообращения. Ухо представляется
настолько нетребовательным объектом, что для него не тре-
буется даже обычного нагревания физиологического раствора
до температуры тела. Причина этого понятна: покрытые тон-
ким слоем кожи и небольшой шерстью уши подвержены в
первую очередь атмосферному воздействию и обладают в силу
этого высокой приспособляемостью к температурным* усло-
виям (Кравков). Ухо представляет собой идеальный объект
для воспроизведения кровообращения, так как оно снабжается
главным образом одной центральной артерией; отток крови
совершается по трем венам: центральной и двум боковым.
Введением одной канюли в центральную артерию полностью
восстанавливается все кровообращение. Оттекающая по трем
венам рингеровская жидкость легко может быть собрана
вместе. Нормальная высота давления достигается простым под-
нятием уровня притекающей к уху жидкости Рингера на
определенную высоту.
Дальнейшие преимущества уха перед другими однородными (
препаратами состоят в его строении: хрящевая ткань, из кото-
рой в основном состоит ухо, отекает чрезвычайно медленно.
На ушах легко можно спокойно работать часами, не опасаясь
наступления отека, тогда как на препарате Лёвен-Тренделен-
бурга (нижние конечности лягушки) это явление может иметь
место уже через г/2 часа после начала опыта.
Для опытов более всего пригодны взрослые кролики, с хо-
рошо развитыми сосудами ушей; о развитии сосудов можно
судить по краевым венам, ясно видным в том случае, если со-
суды развиты в достаточной степени. Ухо отрезается возмож-
но ближе к основанию бритвой или острым скальпелем. Для
предупреждения кровотечения из перерезываемой ушной арте-
рии предварительно перевязывают сосудисто-нервный пучок.
Чтобы перевязать идущие в одном влагалище артерию, цен-
тральную вену и нерв, под кожу в месте прохождения пучка
подводят при помощи хирургической иглы лигатуру. Место
прохождения сосудисто-нервного пучка проще всего опреде-
ляется по ходу центральной вены, которая, как и краевые,
большей частью бывает видна простым глазом. Так как и ар-
*
131
терия, и нерв проходят у, основания уха в одном влагалище,
непосредственно соприкасаясь друг с другом, то лигатура, под-
веденная под вену, одновременно будет лежать и под артерией,
и под нервом. В тех случаях, когда центральная вена бывает не
видна, артерия может быть найдена на основании следующих
соображений: сосудисто-нервный пучок проходит на границе
внутренней и средней трети линии основания уха; при ощупы-
вании удается определить небольшое углубление между двумя
хрящевыми возвышениями; в углублении будет лежать пучок,
а в нем, следовательно, и артерия. Убедиться в том, что нитка
подведена правильно и артерия попадает в накладываемый
узел, можно проще всего по реакции животного: завязывание
правильно наложенной лигатуры вызывает у кролика резкие
болевые ощущения, зависящие от сдавливания нервного
ствола. Кроме того, можно сделать заключение и по виду
центральной вены, которая после перевязки выступает более
отчетливо.
После отделения уха вся дальнейшая обработка произво-
дится возможно быстро, чтобы избежать последствий сверты-
вания крови в сосудах уха. Если на введение канюли и соеди-
нение уха с аппаратом потребуется 10—15 минут, то обычно
первыми порциями поступающей жидкости Рингера * легко уда-
ляются остатки крови из сосудов уха. При возможности по-
жертвовать целым животным для изоляции уха можно предва-
рительно убить кролика путем вымывания всей крови и замены
ее физиологическим раствором. Для этого в сонную артерию
вставляется выводящая канюля, а в яремную вену — другая
канюля, по которой поступает в ток крови подогретая до 38°
жидкость Рингера. В первое время сердце кролика продолжает
работать, благодаря чему идет активная промывка организма:
с каждым сокращением сердца часть крови выбрасывается че-
рез сонную артерию и заменяется поступающей через вену
рингеровской жидкостью. Через некоторое время кровь по-
всюду (за исключением крупных вен брюшной полости) будет
заменена изотоническим раствором. С отрезанным после про-
мывания кролика ухом можно манипулировать совершенно
спокойно, не опасаясь возникновения тромбов в сосудах.
Отделение одного уха представляется более экономичным,
так как оставляет возможность воспользоваться в дальнейшем
другим. После удаления обоих ушей кролик может быть ис-
пользован для любого опыта на целом животном.
Для введения канюли в артерию ухо кладется на плоскую
стеклянную пластинку или на обыкновенную тарелку. Тонкими
ножницами обрезают кожу и подкожную клетчатку на 0,5—
1 см выше линии отреза с тем, чтобы хрящевая часть уха на
таком расстоянии оставалась обнаженной. Отрезая кожу, сле-
* Рингеровская жидкость берется в обычном составе: NaCl—0,9°/в,
КС1—0,042,% СаСЦ—0,024%, NaHCO3—0,02%.
132
дят за тем, чтобы сосудисто-нервный пучок остался неповреж-
денным. На белом фоне хряща последний будет отчетливо ви-
ден благодаря темносиней окраске вены (если, конечно, кро-
лик не был предварительно промыт). Захватывая тонким пин-
цетом выступающий конец пучка, тонкой иглой отделяют друг
от друга нерв, артерию и вену. Вена, как уже сказано, узнает-
ся по окраске. Нерв является самым толстым по сравнению
с артерией и веной и отличается блестящим белым цветом.
Артерию можно узнать по зиянию наружного отверстия. Для
отличия друг от друга нерва, артерии и вены можно руковод-
ствоваться и их взаимным расположением. Ближе всех к бли-
жайшему краю уха лежит нерв, за ним идет вена, наиболее
удаленной является артерия. Тщательнейшим образом очистив
артерию от периваскулярной ткани, наружный конец перевязы-
вают очень тонкой ниткой; затем, подведя предварительно под
артерию лигатуру и приготовив петлю, надрезают сосуд сверху
так же, как это имело место при введении канюли в сонную
артерию. Малые размеры ушной артерии, сплошь и рядом не
превышающие толщины суровой нитки, требуют соответственно
большей осторожности. За наложенную на конец артерии ли-
гатуру сосуд несколько вытягивают к себе, стараясь не пере-
крутить его по оси. Надрезание сосуда хорошо удается лишь
при полной очистке наружных стенок артерии от окружаю-
щих их тканей. Операция надреза требует некоторого навыка,
но в общем не может быть признана особенно трудной; не-
пременным условием является работа с хорошими инструмен-
тами, так как грубыми ножницами сделать надреза не удается
ни в каком случае. Канюля для введения должна быть со-
ответственно мелких размеров. Трудным моментом в ее при-
готовлении является оплавление или шлифовка тонкого конца.
Между тем это обстоятельство играет очень большую роль,
так как при введении канюли с заостренным концом легко
прорезать тонкую стенку артерии. Введение канюли ведется
под контролем тонкого волоска, согнутого под прямым углом.
Коротким концом волоска расширяют входное отверстие. Вво-
димая канюля предварительно наполняется жидкостью Рин-
гера. После введения канюли волосок тотчас же вынимают об-
ратно и немедленно приготовленной заранее петлей укреп-
ляют канюлю в сосуде Узел должен лежать на месте пере-
хвата в канюле, который делается на последней специально с
этой целью. При укреплении канюли все время необходимо
помнить об опасности перекручивания сосуда. Ухо с укреплен-
ной в артерии канюлей помещается на специальную стеклян-
ную пластинку. Последняя имеет форму пятиугольника. На пла-
стинке ухо прикрепляется при помощи прикрепленных к ней
сургучом двух кусков пробки. Куски пробки расположены на
пластинке с тем расчетом, чтобы положенное на них ухо со-
хранило свою естественную выпуклость. Для этого пробка,
приходящаяся на уровне отреза, имеет вышину 2—2,5 см, на
133
месте укрепления вершины уха пластинка пробки берется тол-
щиной в несколько миллиметров. На высокой пробке делается
углубление в виде продольно идущего желобка. Ухо помещает-
ся на пластинке таким образом, чтобы наружная часть ка-
нюли пришлась как раз на месте этого желобка. С целью не
допустить перекручивания артерии по оси, наружный конец
канюли, находящийся в желобке пробки, заливают сургучом с
тем, чтобы в дальнейшем устранить всякую возможность изме-
нения положения сосуда. Одновременно нужно следить и за
тем, чтобы направление канюли соответствовало ходу сосуда,
Рис. 11. Схема изоляции уха по Крав кову—Писемскому.
не уклоняясь ни вверх, ни вниз, что также повлечет за собой
изменение просвета. Верхушка уха укрепляется на верхней
пластинке булавкой; прокалывая ухо, стараются не попасть в
одну из крупных вен. Укрепленное таким образом ухо не будет
давать поводов для неправильных выводов о сосудистой ре-
акции, так как все моменты механического изменения про-
света при таком способе фиксации будут устранены.
Преимущества уха как объекта для наблюдения за сосуди-
стой реакцией вполне очевидны.
Поступающая по центральной артерии жидкость будет от-
текать обратно тремя путями — через центральную и две кра-
евых вены; оттекающая по всем трем сосудам жидкость будет
скопляться на остром углу пластинки, с которого она и будет
стекать каплями, регистрация числа которых возможна любым
путем.
134
Рисунок 11 изображает собой полусхематично всю уста-
новку опыта.
Здесь видны два мариоттовских сосуда (давление жидкости
в которых постоянно, благодаря пропущенной через верхнюю
пробку стеклянной трубке, до известного, постоянного уров-
ня), один несколько больше другого. Два сосуда нужны для
переменного включения в ток то изотонического раствора, то
раствора, подлежащего испытанию. Оба сосуда расположены
на одинаковом уровне и сообщаются с бюретками, нижние
концы которых соединяются при помощи тройника в один
проток, соединяемый со вставленной в ухо канюлей. Включе-
ние на пути бюреток удобно для того, чтобы по уровню нахо-
дящейся в них жидкости было бы можно наглядно судить о
том, что давление в обоих сосудах является одинаковым. Ус-
ловия вытекания жидкости из обоих сосудов должны быть со-
вершенно совпадающими для того, чтобы исключить всякую
возможность разницы в реакции сосудов от посторонних при-
чин. Уровень жидкости в бюретках будет равен тому уровню
жидкости в сосуде, на котором будет находиться нижний ко-
нец пропущенной через верхнюю пробку трубки. Ухо укреп-
ляется около всего аппарата на отдельном штативе, причем
пластинке придается наклон приблизительно в 45’, что, с од-
ной стороны, соответствует естественным условиям положения
уха, а с другой — способствует оттоку капель.
Перед включением уха в аппарат шприцем с длинной тон-
кой иглой удаляют из наружного конца канюли пузырьки воз-
духа и следят за тем, чтобы нигде в каучуковых трубках по
пути между бюретками и канюлей не оставалось пузырьков
воздуха. Попадание их в ухо вызовет закупорку (воздушную
эмболию) капилляров. Для уловления пузырьков воздуха на
пути идущей к канюле резиновой трубки включается верти-
кально расположенная стеклянная трубка с пробкой наверху и
двумя коленами, приводящим (снизу) и отводящим (вверху),
над которым имеется запасное пространство; из поступающей
в приводящее колено жидкости пузырьки воздуха будут вы-
скакивать кверху, и оттекающая через верхнее колено жид-
кость будет совершенно лишена воздуха. Пластинка с ухом
помещается на такой высоте, чтобы высота давления равня-
лась 40 или несколько более сантиметрам, т. е. чтобы от уров-
ня стояния жидкости в бюретке до линии отреза уха рас-
стояние по перпендикуляру соответствовало бы указанному
числу сантиметров.
Перед соединением с тройником на резиновые трубки, иду-
щие от нижних концов бюреток, надеваются зажимы. Откры-
вая один и закрывая другой, можно по желанию впускать в
ухо содержимое любого сосуда. Соединив ухо с аппаратом,
сначала пропускают из большой склянки жидкость Рингера.
Пропускания кислорода для лучшей работы уха не требуется;
ухо представляет собой настолько невзыскательный объект,
135
1
что легко обходится без кислорода в солевом растворе, равно
как и не требует подогревания раствора.
Первые 2—3 минуты из вен оттекает окрашенная жидкость,
затем из уха начинает капать совершенно светлый раствор.
Для более удобного собирания жидкости по краям стеклянной
пластинки от места выхода жидкости из вен до острого угла,
с которого она будет капать, прокладывают куски фильтро-
вальной бумаги. Пустив рингеровскую жидкость, оставляют
ухо на 15—25 минут в покое. В течение этого времени ухо,
как говорят, «разрабатывается» и приобретает постоянную про-
пускную способность. Иногда вначале пропускание солевого
раствора играет роль раздражителя, благодаря чему может
наступить временный спазм сосудов, проходящий через ука-
занное время.
Средняя пропускная способность ушей взрослых кроликов
составляет 60—80 капель в минуту; некоторые уши про-
пускают до 100—120 капель, другие — 40—50. Ушамй, про-
пускающими меньше 40 капель в минуту, лучше для опыта не
пользоваться.
Убедившись в том, что число протекающих в минуту ка-
пель постоянно, приступают к опыту. Для этого готовят рас-
творы стандартного и испытуемого адреналина. Уши реагируют
на очень большие разведения: концентрация адреналина 1 : 30—
40 миллионов обычно дает еще вполне отчетливое сужение со-
судов; высокочувствительные уши дают уменьшение протека-
ния жидкости даже от разведений 1 : 100 миллионов и больше.
Растворы готовятся таким образом, что сначала получают по-
степенными разведениями концентрацию в сто или даже не-
сколько сот раз более крепкую, чем та, в которой предпола-
гают пропустить адреналин через ухо. Для последнего разве-
дения к 200—300 см3 рингеровской жидкости прибавляют со-
ответствующее количество более крепкого разведения. Коли-
чества 200—250 см3 обычно бывает достаточно для того, чтобы
при наполнении вполне бюретки можно было бы 10—15 минут
пропускать раствор через ухо, в течение же этого периода эф-
фект от раствора обычно успевает проявиться. Все растворы,
как испытуемые, так и солевой, должны быть абсолютно чи-
стыми, так как малейшее загрязнение поведет, в конце концов,
к большей или меньшей закупорке капилляров. Само собой
разумеется, что вся аппаратура также должна содержаться в
образцовой чистоте. Между отдельными введениями произво-
дится самая тщательная промывка сосуда,ч бюретки, резиновых
трубок и т. д. той стороны, где производится замена раствора.
Длительность пропускания того и другого раствора должна
быть одинаковой.
Эффект от действия адреналина проявляется в уменьшении
количества оттекающей в единицу времени жидкости из уха,
что происходит вследствие сужения просвета периферических
восудов. Эффект считается положительным лишь в том слу-
136
чае, если последующее отмывание уха изотонической жидко-
стью восстановит количество протекающей жидкости до нормы,,
имевшей место до пропускания испытуемого раствора. Креп-
кие растворы (1 : 1—5 миллионов) вызывают полное прекраще-
ние протекания жидкости, в лучшем случае ухо сохраняет спо-
собность пропускать в минуту 2—3—4 капли. Концентрация
1 : 10—15 миллионов вызывает большое сужение, при котором'
количество протекающей жидкости уменьшается на 70—90%;
растворы 1 : 30—40 миллионов дают отчетливое сужение, умень-
шая отток на 40—5О°/о. Само собой разумеется, что цифры эти
представляют собой средние данные и нередки случаи уклоне-
ния в ту и другую сторону. Восстановление пропускной спо-
собности уха от полного сужения до нормы требует длитель-
ного промежутка времени, равного 20—30 и больше минутам;
сужение от растворов слабых концентраций проходит скоро, и
уже через 5—10 минут пропускная способность возвращается
к норме.
Для сравнения удобно выбрать именно такую дозу, которая,
не дав полного, даст в то же время вполне отчетливое суже-
ние, уменьшив протекание жидкости на 40—50%. Определив
такую дозу стандартного препарата, берут то же разведение
испытуемого образца и устанавливают его активность. Если
эффект оказывается резко отличным от эффекта стандарт-
ного препарата, то пробуют другие разведения, которые ока-
жутся способными дать приблизительно такое же сужение.
Особенно нужно подчеркнуть приблизительность совпадения
эффекта, так как делать какие-либо количественные выводы
об активности препаратов по процентному уменьшению проте-
кания жидкости крайне трудно. Если раствор стандартного
препарата дает уменьшение оттока на 50 >—60%, а испытуемый
вызывает соответствующий эффект на 40—50%, то вывести
определенное заключение о разной силе действия растворов на
этом основании едва ли возможно. Уменьшение оттока на 40-
и 60% может наступить от пропускания растворов приблизи-
тельно равной активности. Если же для достижения одинако-
вого эффекта нужно изменение концентрации, то здесь можно
более определенно делать количественные выводы; практиче-
ски такой подход является более удобным. Так, если разведе-
ние стандарта 1 :50 миллионов дает отчетливое сужение (на-
пример, на 60%), а такой же приблизительно эффект от испы-
туемого образца получится лишь от концентрации 1 :30 мил-
лионов, мы будем вправе судить о соотношении активности
препаратов, которое для данного случая выразится отноше-
нием 5:3.
Вместо такого способа исследования можно вводить извест-
ное количество испытуемого препарата непосредственно в ток
, изотонического раствора и по прошествии определенного вре-
мени отмечать эффект, вызванный этой дозой, т. е. отмечать
уменьшение протекания жидкости, длительность этого периода
137
и т. д. Введение можно производить прямо шприцем через толщу
резиновой трубки. При этом нужно помнить, что на некото-
рый, хотя бы самый короткий, промежуток времени в токе
жидкости произойдет изменение давления, так как для введе-
ния в ток нужно будет преодолеть сопротивление давления
внутри резиновой трубки. Результаты, получаемые при испы-
тании адреналина на целом животном и на изолированном ухе,
совпадают между собой довольно близко. М. П. Николаев 141 а
указывает на изменение чувствительности сосудов уха к адре-
налину при повторном его пропускании. Для того чтобы избе-
жать возможных вследствие этого ошибок, следует после ка-
ждого пропускания испытуемого раствора непременно пропу-
скать раствор стандартного препарата так же, как это было
указано при испытании на целых животных.
/
/
ГЛАВА V
ИНСУЛИН
Инсулин, продукт внутренней секреции поджелудочной
железы, обладающий ценнейшим практическим свойством сни-
жать уровень сахара в организме диабетиков, имеет огромное
практическое значение. Перед клиникой с первых шагов при-
менения инсулина остро встал вопрос о качестве препаратов
и дозировке. Отсутствие вначале достаточных химических дан-
ных о действующих началах инсулина, который не представ-
ляет собой в этом отношении исключения из общего числа
производных желез внутренней секреции, заставило и здесь
прибегнуть к помощи биологического испытания. За 15 лет,
истекших с момента выделения инсулина, химические свойства
этого гормона были изучены если и не с исчерпывающей полно-
той, то во всяком случае настолько детально, что сейчас имеет-
ся возможность получения этого вещества в кристаллическом
виде. Хотя структура молекулы инсулина не является абсолют-
но бесспорной и не подтверждена синтезом, данные о хими-
ческих свойствах инсулина позволили значительно повысить
качество вырабатываемых препаратов. Тем не менее необходи-'
мость биологической оценки продажных препаратов полностью
сохраняется и теперь, так как даже тщательно соблюдаемая
стандартность процесса изготовления препаратов не гаранти-
рует полной однородности продукта и так как отдельные се-
рии препарата по-разному ведут себя в смысле стойкости и
могут терять активность ранее установленного срока годности
препарата. Все это заставляет проверять биологически как ак-
тивность вырабатываемых препаратов, так и проводить время
от времени проверку активности запасов инсулина. Перед спе-
циальными лабораториями, производящими проверку активно-
сти инсулина, кроме того, постоянно ставятся вопросы по изу-
чению различных новых модификаций инсулина, в последнее
время особенно препаратов, рассчитанных на длительное дей-
ствие.
Для целей биологической оценки инсулина используются
его основные фармакодинамические свойства.
В самом грубом виде картина воздействия инсулина на
обычных лабораторных животных сводится к наступлению у
139
к
последних судорог, заканчивающихся смертью. Параллельное
химическое исследование крови показывает, что содержание
сахара в крови падает под влиянием воздействия инсулина. Сам
по себе механизм удаления сахара из крови представляется
одним из интереснейших вопросов учения об углеводном обмене,
но здесь подлежать обсуждению не может. Нас интересует во-
прос о том, насколько экспериментальный эффект инсулина идет
параллельно его терапевтическим свойствам, причем для целей
стандартизации, по существу, безразлично, будет ли взят для
опыта терапевтический или токсический эффект препарата;
основным моментом остается соответствие изменений в экспе-
риментальном эффекте терапевтическим свойствам. Таким об-
разом, три основных момента действия инсулина на животных
бросаются в глаза: его способность снижать сахар, судорожное
действие и, наконец, смертельное. Для целей биологического
испытания были использованы все три указанных свойства ин-
сулина.
Кроме того, предлагались методы исследования не на це-
лом животном, а на отдельных участках тканей (как, например,
на свеже вырезанном мускуле in vitro). На практике оказались
принятыми как более точные лишь методы на целых животных.
Естественно, что сахаропонижающие свойства инсулина в
опыте, как вполне соответствующие сущности клинического
эффекта препарата, привлекли к себе наибольшее количество
приверженцев. Огромное большинство всех предложенных спо-
собов стандартизации инсулина сводится к определению саха-
ропонижающей способности данного препарата.
Для определения способности инсулина снижать сахар поль-
зуются обычно кроликами, представляющими наиболее удоб-
ный объект для частых проб крови, необходимых для опреде-
ления степени падения сахара крови: из ушных вен кроликов
легко повторно брать 0,1—0,2 см3 крови, потребных для ми-
крохимического определения сахара. Эти внешние свойства ре-
шили выбор животного, потому что, по другим соображениям,
кролики далеко не являются подходящими для изучения дей-
ствия инсулина, особенно ввиду индивидуальных колебаний
отдельных животных.
Вторую большую группу составляют способы, основанные
на вызывании судорожного эффекта в определенных условиях
у мышей, для которых доказана параллельность этого эффекта
инсулина с терапевтическими свойствами препарата. Мыши,
обладающие относительно высокой сопротивляемостью к ин-
сулину, делаются восприимчивыми к нему, если они нахо-
дятся в термостатных условиях при температуре 30—38°. В
таком именно состоянии мыши и употребляются для опыта
(Хеммингсен и Крот 142, Тревэн и Бук 143).
Предлагавшийся метод оценки по смертельной дозе на кры-
сах (Фёгтлин и Дэнн 144) не привился, равно как не вошли в
практику и такие методы, как, например, определение времени,
140
в течение которого инсулин окажется способным удалить из
крови определенное количество введенной в организм живот-
ного глюкозы (Иди и Маклеод145, Буккерт и Стрикер 145 а), или
определение инсулина по его антагонизму с адреналином (Иди
и Маклеод 145). Крайне интересный в теоретическом отношении
метод был предложен Аллан 146. Этот автор исходил из теоре-
тически вполне правильного положения, что действие инсулина
на здоровое животное неизбежно тем или иным путем будет
находиться в зависимости от естественной функции панкреати-
ческой железы данного животного. Для устранения этого об-
стоятельства Аллан предложил испытывать инсулин на собаках
с нацело экстирпированной поджелудочной железой, т. е. та-
ких, у которых исключается всякая возможность участия в ре-
акции инсулина, выделяемого организмом самостоятельно. Ме-
тод этот оказался на практике мало пригодным отчасти по
тем большим техническим трудностям, с которыми он связан,
отчасти по неудовлетворительности получаемых при пользова-
нии им результатов (Маклеод и Орр 147, Пэно и Симоннэ 148).
Не заслужило внимания и не получило распространения ориги-
нальное предложение Форнэ 119 испытывать инсулин по реду-
цирующим свойствам этого вещества Способность самого ин-
сулина восстанавливать красную кровяную соль идет якобы
паралелльно его сахаропонижающей способности.
Разница в результатах, получаемых по методам, основанным
на судорогах и на снижении сахара, особенно подчеркивалась
защитниками последнего метода в то время, когда большин-
ство препаратов инсулина представляло собой сравнительно
мало очищенные продукты. Подвергалось сомнению соответ-
ствие судорожного эффекта терапевтическим свойствам препа-
рата. Так, например, доказывалось, что препараты разного про-
исхождения (от разных видов животных), обладая одинако-
вым сахаропонижающим эффектом, дают различный по интен-
сивности токсический эффект (Маклеод и Орр 13°). Считалось,
что препараты одного и того же происхождения, именно из
поджелудочных желез млекопитающих, имеют некоторую об-
щую тенденцию вызывать судороги у кроликов при падении
сахара до 0,045%. Однако даже и однородные препараты спо-
собны в связи со степенью их чистоты давать в этом отноше-
нии колебания до 50% (Гревенстук и Лакёр ш). В некоторых
случаях оказалось, что судороги наступают раньше падения
сахара до указанного уровня (Гревенстук и Лакер, Борн-
штейн 132 и др.). Вопрос о вызывающем судороги действии ин-
сулина имел значение еще и потому? что ранее строгого раз-
граничения между сахаропонижающим и судорожным эффек-
том инсулина как моментами, лежащими в основе принципи-
ально различных способов оценки, не проводилось. При испы-
тании инсулина по его сахаропонижающей способности неиз-
бежно, как мы это увидим дальше, приходилось считаться как
141
1
*
с одним из добавочных признаков и с судорожным эффектом
препарата (особенно при ориентировочных опытах).
Гейгер и Сциртес 15S, сделавшие попытку установить зависи-
мость между падением сахара и появлением судорог, пришли к
убеждению, что само по себе уменьшение содержания сахара
в крови еще не может служить фактором, обусловливающим
наступление судорог: последние, по их мнению, зависят от об-
щего нарушения углеводного обмена, почему они предлагают
называть судороги, наступающие от действия инсулина, не ги-
погликемическими, как это делают обычно, а дисгликометабо-
лическими. Применение того или другого названия, по суще-
ству, не меняет дела, так как нарушение углеводного обмена на-
ступает вследствие воздействия на организм инсулина. Указан-
ное наблюдение, однако, до известной степени говорит против
мнения авторов, утверждающих, что судороги наступают как
непосредственное следствие падения сахара до определенного
уровня.
На основании огромного опыта фармакологической лабора-
тории Государственного института экспериментальной эндокри-
нологии в Москве можно с уверенностью утверждать, что аб-
солютное падение сахара крови не служит обязательным усло-
вием, определяющим наступление судорог у кроликов и что
индивидуальные колебания в реакции животных в этом отно-
шении чрезвычайно велики. Попытка установить зависимость
между содержанием в крови кролика инсулина и моментом на-
ступления судорог также не дала однородных результатов; у
некоторых животных в момент судорог содержание инсулина
было крайне высоко, у других же весьма мало (Махотина 134).
Все .приведенные соображения о непостоянстве по тем или
иным причинам судорожного эффекта справедливы для кроли-
ков в обычных условиях. Что же касается реакции мышей, по-
мещенных в специальные условия, то тут доказана параллель-
ность наступления у них судорожного эффекта с одновременно
определенными на кроликах сахаропонижающими свойствами
(Хеммингсен и Крог, Тревэн и Бук).
Таким образом, несмотря на существующие по этому во-
просу разногласия, оба метода получают достаточное обосно-
вание для своего существования.
С самых первых шагов стандартизации инсулина возник
вопрос о том, что должно быть признано за стандарт, в каких
единицах можно измерять терапевтические свойства препарата.
Отсутствие какого-либо стойкого препарата с постоянным, не-
меняющимся эффектом заставляло прибегать к какому-то дру-
гому способу. Первоначально за единицу действия инсулина
условились считать одну треть того количества препарата, ко-
торое способно вызвать падение сахара крови до 0,045% и
приступы судорог у многих животных. Чтобы сделать такое
расплывчатое понятие более точным, были введены определен-
ные условия, которым должны отвечать подопытные живот-
142
ные. Вес кролика должен был лежать в границах 2—2,25 кг;
предварительным 24-часовым голоданием достигались более
или менее равномерные условия в состоянии подопытных жи-
вотных. Реакция поставленных в такие условия животных при-
нималась за нечто постоянное; предполагалось, что падение са-
хара у них имеет место при введении некоторого более или ме-
нее определенного количества действующих начал. Принятие
за одну единицу одной трети этого количества объяснялось
удобствами клиники, для которой дозировка в большом коли-
честве была слишком грубой. Расчет содержания действующих
начал велся на указанные единицы — определялось, сколько
единиц действия содержится в определенном объеме жидкого
препарата или определенном весовом количестве сухого ве-
щества.
Такой способ расчета оставлял большое место естествен-
ным колебаниям реакции животных и представлял обширное
поле для ошибок. На почве различным образом производимых
и различным образом понимаемых определений активности по-
стоянно происходили недоразумения при применении препа-
ратов в клиниках. Последующими исследованиями была дока-
зана коллоссальнейшая изменчивость реакции на инсулин не
только разных кроликов, но даже одних и тех же животных
через равные промежутки времени. Вопреки мнению Дёдли 155,
Штросса и Вьеховского156, доказавших, что резистентность
каждого данного кролика представляет собой нечто постоян-
ное, Лакёр и Дейонг157 утверждают, что не только сопроти-
вляемость каждого кролика меняется изо дня в день, но что-
степень этих колебаний значительнее, чем колебания раз-
ных кроликов в течение одного и того же опыта. Одни и те
же дозы могут в редких случаях давать результаты, разня-
щиеся между собой йа 500—1 000%.
По нашим данным, сопротивляемость одного и того же кро-
лика при содержании в определенных условиях и использова-
нии животного не ранее как через 5—6 дней меняется весьма-
незначительно. Возможно, что при испытании более частом,
когда нормальная сопротивляемость организма не успеет вое- *
становиться, могут быть получены иные отношения, но в усло-
виях нормального проведения опыта с регулярными промежут-
ками отдыха каждый кролик представляет собой довольно
определенную реактивную единицу.
Тем не менее все методы, основанные на прямом заключе-
нии об активности препарата по реакции животных, были, ко-
нечно, достаточно грубыми вследствие отсутствия возможности
проверить сопротивляемость животных. В связи с этим опреде-
лявшееся известное содержание единиц действия в определен-
ном объеме препаратов не всегда соответствовало действитель-
ной активности последних. При таком положении вещей, усу-
гублявшемся еще сравнительно быстрым падением активности
жидких форм препаратов, представлялась совершенно необхо-
143
I
.димой ориентировка на что-нибудь более конкретное и посто-
янное, чем такой неопределенный критерий, как реакция жи-
вотных, подверженных таким огромным колебаниям. Вывод
мог быть найден только в одном направлении — приготовле-
нии стойкого не теряющего от времени силы, обладающего
постоянным эффектом стандартного препарата.
Многочисленными работами главным образом американ-
ских и английских авторов в дело стандартизации инсулина
-была внесена необходимая ясность и точность. Кроме выработ-
ки целого ряда деталей, условий производства опыта и рас-
чета, было сделано самое главное, дающее прочную базу всему
вопросу о стандартизации инсулина, — был получен стандарт-
ный препарат. Путем применения последнего устраняется воз-
можность ошибки, основанной на индивидуальных отклонениях
реакции животных, так как каждый исследователь всегда имеет
'возможность проверить резистентность путем испытания на
животных препарата с постоянным эффектом и по полученным
результатам судить об изменении их сопротивляемости.
Препарат с постоянным действием был получен путем очист-
ки обыкновенных продажных препаратов (Дёдли158). Очистка
сводилась в общих чертах к переводу продажных препаратов
в соль пикриновой кислоты, затем к растворению пикрата в
смеси соляной кислоты и алкоголя и осаждению инсулина из
.этого раствора ацетоном в виде соли хлористоводородной кис-
лоты, так называемого хролгидрата инсулина.
Международная комиссия по биологической оценке лекар-
ственных веществ, получив значительное количество хлоргид-
рата инсулина, стойкого, не теряющего активности сухого пре-
парата, должна была точно определить, что следует понимать
под 1 ЕД инсулина. Этот сухой препарат, получивший название
международного стандартного препарата, был разослан ряду
наиболее авторитетных лабораторий Англии, США и Канады.
К моменту проведения испытания точность определения на
большом числе животных в течение длительного времени
была довольно значительной, и результаты разных лаборато-
рий оказались более или менее совпадающими. Было установ-
лено, что 1 мг этого препарата содержал несколько более 8 еди-
ниц действия. Было принято считать за 1 ЕД 0,125 мг стандарт-
ного препарата, т. е. сумму активности, которую может про
явить это количество препарата.
Совпадение результатов говорит как за точность работы
исследовавших препараты лабораторий, так и за то, что уста-
новленное содержание ЕД в препарате является отвечающим
истине. Производившие испытание лаборатории пользовались
в качестве критерия прежним понятием, т. е. исходили из
прямой сахаропонижающей силы препарата,, и по ней сделали
заключение об активности его. Это соответствие стандарта
действительному количеству единиц (в том смысле, как она
понималась к тому времени) не имеет существенного значения,
144
но удобно потому, что клиника уже привыкла понимать под
одной единицей определенную сумму активности препарата. В
настоящее время, обозначая активность препарата определен-
ным количеством единиц, подразумевают под каждой из них
не определенный объем раствора, а количество, отвечающее
по эффекту 1 ЕД стандартного препарата. Благодаря наличию
препарата с постоянным эффектом теперь просто сравнивают
препарат неизвестной силы со стандартом, что дает возмож-
ность иметь гораздо более точные результаты.
Стандартный препарат активностью 8 ЕД в 1 мг, принятый
в качестве международного стандарта еще в 1925 г., очень бы-
стро, соответственно успехам в технологии получения инсули-
на, перестал полностью удовлетворять своему назначению. Не
меняя своей силы и продолжая давать постоянное действие,
он тем не менее с ростом активности продажных инсулинов
стал терять свое значение как препарат, уступающий по чисто-
те тем продуктам, которые должны с ним сравниваться. В по-
следние годы степень очистки продажных препаратов инсули-
на повысилась настолько, что 1 мг препарата стал содержать до
20 ЕД. Возможность разницы в действии более или менее очи-
щенных препаратов, указанных уже выше, подтвердилась при
сравнении действия высокоочищенных кристаллических про-
дуктов с имеющими меньшую активность. Сравнение данных
методов испытания по сахаропонижающему и судорожному (на
мышах) эффекту показало, что расхождения в этих данных го-
раздо значительнее при применении мало активного стандарта,
чем при пользовании для этой цели высокоочищенным инсу-
лином. Таким образом, предстояло заменить прежний стандарт-
ный препарат другим, более высокоочищенным.
Соответствующие работы были проделаны в 1935 г., когда
Международная комиссия выпустила новый стандартный пре-
парат активностью 22 ЕД в 1 мг.’Одной ЕД нового стандарта,
таким образом, является 0,045 мг. Естественно, что действие
одной единицы нового стандартного препарата точно соответ-
ствует действию единицы прежнего стандарта. В вопросе по-
лучения столь высокоочищенного препарата решающим момен-
том послужили работы Скотта, который описал способ
получения кристаллического препарата в виде цинковой соли.
Выделение инсулина в кристаллическом виде было относи-
тельно давно осуществлено Эбелем и его учениками, пока-
завшими, кроме того, что полученные из поджелудочных
желез весьма разных животных (рогатого скота, трески и др.)
кристаллические препараты являются идентичными и обладают
постоянной активностью. Этими работами, носившими принци-
пиальный характер и подтвердившими индивидуальность кри-
сталлического инсулина, было положено твердое основание для
принятия его в качестве стандартного препарата. Получение
стандартного препарата было осуществлено самим Скоттом.
io — 317 145
Прежний и новый стандартный препараты отличаются, кро-
ме своей активности, также и растворимостью. Старый стан-
дарт — хлоргидрат инсулина — легко растворялся в воде. Но-
вый препарат нерастворим в воде и требует добавления соля-
ной кислоты для растворения *. Способ его применения будет
указан дальше.
К настоящему времени несколько методов биологической
оценки инсулина получили официальное признание. Кроме
ЛАеждународной комиссии, принявшей методы оценки по саха-
ропонижающему эффекту на кроликах и судорожному на мы-
шах, испытание инсулина биологическим путем предписы-
вается Фармакопеей СССР (дополнительные тиражи VII издания
1933 и 1938 гг.) и британской (1932), причем и та, и другая
рекомендуют методы, основанные на определении снижения
сахара крови у кроликов. Следует отметить, чТо Фармакопея
США даже в XI издании, вышедшем в 1936 г., не содержит ста-
тей по инсулину и его испытанию. Французская Фармакопея
1937 г. также предписывает биологическое испытание инсулина.
Методов, основанных на определении сахаропонижающей
способности у кроликов, Международная комиссия предлагает
два. Для работы по тому или другому способу нужно большое
количество кроликов, так как для получения возможно верных
результатов необходимы средние данные из большого числа
опытов. Количество потребных для испытания кроликов уве-
личивается и в связи с другими требованиями, установленными
на основании опыта. Это прежде всего — пользование кроли-
ками для эксперимента* не чаще чем один раз в неделю (или
шестидневку). Таким образом, при ежедневной постановке
опытов мы уже сразу приходим к необходимости иметь пяти-
кратный запас животных, необходимых для работы в течение
одной недели. Вес подопытных животных должен лежать
в границах 1 800—2 200 г, а при достижении более высокого
веса кролики должны быть заменяемы другими. Выбранные
для опыта животные должны отвечать известным условиям.
Есл;и последние и не доходят до такого предела, как, напри-
мер, предлагавшееся пользование одними самцами (Лангекер
и Штросс159), то все же кролики должны быть здоровыми,
иметь уши с хорошо развитыми венами. По данным Междуна-
родной комиссии, основанным на опыте лаборатории Торонт-
ского университета i6°, при пробных опытах со стандартным
препаратом животные должны реагировать на одну единицу
последнего на 1 кг веса наступлением судорог приблизительно
в 15—20% случаев. При подборе животных, хорошо реагирую-
щих на инсулин, можно руководствоваться до известной сте-
пени их породой и цветом. По данным Эктон Хёга и Боз161,
особенно резистентными являются альбиносы, тогда как чер-
* Указание на то, что современный стандартный препарат является также
хлоргидратом, опубликованное в «Bulletin trimestriel de I’Organisation d’Hy-
giene de la Soc. des Nat», vol. IV, 646, является, очевидно, ошибкой.
146
ные кролики проявляют повышенную чувствительность к ин-
сулину. Полную непригодность альбиносов подтверждают Фен-
гер и Уильсон 162. Значение породы кроликов отчетливо пока-
зали Аллан и Хэнбери163, установившие, что активный инсу-
лин не давал никакого действия в Индии на кроликах гима-
лайской породы. По нашим данным, мало восприимчивыми
к инсулину оказываются не только альбиносы, но и разные
смешанные породы длинношерстных животных разного цвета.
Мало восприимчивые животные не только в меньшем процент-
ном числе реагируют судорогами, но и по реакции крови оце-
нивают . препараты ниже их действительной активности. При-
водимая таблица (Саргин166) показывает, как две партии по
36 кроликов, разбитые на 4 группы по 9 животных, реагиро-
вали на обычные дозы судорогами и как они оценили препа-
рат, содержащий в 1 мг 8 ЕД (первоначальный стандартный
препарат). Метод испытания и расчет будут указаны ниже.
Кролики, у которых
Число были судороги 11U ДаННЫМ опыта, 1 мг
кроликов содержит ЕД
число В °/о
А. Длинношерстные кролики и
альбиносы
9 1 11 7,87
9 1 11 6,97
9 0 0 7,30
9 0 0 7,94
В среднем
36 2 5,6 7,52
В. Обычные серые кролики
9 1 11 8,90
9 3 33 8,99
9 3 33 9,89
9 1 11 9,37
R гпрппрм
36 8 22,3 9,29
Вопрос о судорожной реакции кроликов является весьма
существенным потому, что по судорожному эффекту ранее
рекомендовалось определять приблизительную активность ин-
сулина. Грубое определение ведется на 5—6 группах кроли-
ков; в каждую группу входит по 3—5 животных. Дозы берутся
резко отличающиеся одна от другой. Останавливаются на
меньшей из доз, дающей судороги у большинства животных
Данной группы. Эта доза рассматривается как такая, при по-
мощи которой можно создать приблизительное впечатление о
ю * 147
силе препарата, считая, что судороги наступают у большинства
кроликов от дозы около 3 ЕД. По данным Гонзацела и Кар-
раско Формигуэра164, молодые кролики склонны к судорогам
более, чем старые животные. Ввиду того что одни и те же
кролики служат для опыта в течение многих месяцев, весьма
существенно проследить, подвержена ли у них изменениям
судорожная реакция. Все, что относилось к утверждению или
отрицанию изменчивости в реакции кроликов на инсулин во-
обще (см. стр. 140), в равной мере касается и судорожной
реакции. Специальное изучение показало, что у некоторых
кроликов с течением времени судороги от инсулина встреча-
ются все реже (Гревенстук и Лакёр 151). Блезеруик, Лонг, Бэлл,
Максвелл и Хилл 165, наоборот, считают, что животные, быв-
шие под опытом, более склонны к судорожной реакции. По
мнению Бочкарева и Преображенского165а, кроликов можно
разбить на определенные группы с довольно постоянной су-
дорожной реакцией. Это мнение можно считать совершенно
справедливым с оговоркой, что постоянная реакция у живот-
ных вырабатывается по прошествии нескольких месяцев. Как
правило, обычные серые кролики, дающие на средние дозы в
первых опытах судороги в 20—30% случаев, через несколько
месяцев делаются в этом отношении более стойкими, пол-
ностью сохраняя свою прежнюю реакцию в смысле снижения
сахара крови. Следующая таблица (Саргин 166), в которой при-
ведены данные опытов, во всем совпадающие с опытами пре-
дыдущей таблицы, показывает, как реагировали на инсулин
обычные серые кролики, бывшие под опытом в течение 4 ме-
сяцев.
Число кроликов Кролики, у которых были судороги По данным опыта, 1 мг
число В 7о содержит ЕД
9 0 0 9,12
9 1 11 9,92
9 1 11 9,79
9 0 0 8,93
В среднем
36 2 5,6 9,44
На судорожной реакции кроликов мы останавливаемся не
только для того, чтобы показать ее малую, пригодность для
даже самых грубых, ориентировочных определений, но еще и
потому, что ею одной некоторые авторы считают возможным
пользоваться в качестве критерия для оценки активности ин-
сулина. Если это более или менее понятно было в 1923 г., когда
такой путь рекомендовали Депиш, Хёглер и Юберрак 167, то на
основании приведенных данных вызывает большое недоумение
148
предложение возврата к стандартизации инсулина на кроликах
по судорожному действию теперь (Штефл 168), несмотря на ряд
несомненных усовершенствований в этой методике.
Для того чтобы максимально обеспечить равномерность
реакции кроликов на инсулин, животных, отобранных для
опыта, помещают на определенную диэту, поддерживаемую да-
лее во все время работы над ними. Пищей служат овес и сено,
которые всегда должны находиться в клетке в избытке; летом
по возможности сено заменяют свежей травой. В клетке всегда,
не исключая моментов голодания, должна находиться вода.
Выбор сена и овса в качестве постоянной диэты для кроликов
получил полное обоснование в работах Пэджа169, а затем Аб-
дергальдена и Вертхеймера 17°, показавших значение катионов
и анионов пищи. По данным этих авторов, кролики, получаю-
щие в пищу овес и хлеб, богатые катионами, более стойки по
отношению--к инсулину, чем животные, вскармливаемые бога-
той анионами пищей — травой или сеном. Значительную роль
играет и температура помещения, в которой находятся живот-
ные; по возможности температура должна поддерживаться на
постоянном уровне, так как колебание ее влечет за собой изме-
нение реакции животных. Испытание по сахаропонижающему
методу на кроликах может быть проводимо по двум методам,
принятым Международной комиссией. Фармакопея СССР также
приняла оба этих метода.
Первый из них интересен тем, что он был разработан и
оказался практически пригодным еще до введения стандарт-
ного препарата. Несмотря на ряд весьма существенных возра-
жений, которые могут быть сделаны по существу этого метода,
практически оказалось возможным продолжать пользоваться
этим методом попрежнему, дополнив его проверкой сопротив-
ляемости животных по отношению к стандартному препарату.
Из сказанного следует, что пользование приводимым ниже рас-
четом активности по этому методу, включающему в себя, на-
пример, такой шаткий фактор, как падение сахара крови до
определенного уровня, носит в настоящий момент условный
характер. Получаемые при помощи этого метода данные те-
перь не имеют, как это было раньше, абсолютного значения, а
служат лишь для сравнения с данными, получаемыми в каж-
дом опыте по этому же методу для стандартного препарата.
Таким образом, обоснования для расчета по специальной фор-
муле (см. ниже) имеют сейчас лишь исторический интерес и
приводятся лишь с целью показать, каким путем эта формула
была выработана. Проведение испытания по первому сахаро-
понижающему методу требует, чтобы концентрация вводимого
препарата соответствовала содержанию в 1 см3 2—2,5 ЕД. Пер-
воначальные данные о необходимости пользоваться раствора-
ми, содержащими именно 2,5 ЕД в 1 см3, сейчас не подтверди-
лись на практике. На основании своего опыта в первую оче-
редь мы можем считать доказанным, что снижение этой кон-
149
центрации до 2 ЕД в Г см8 дает более точные результаты, так
как при более высоких концентрациях действие достигает
столь относительно высокой степени, что эффект от двух раз-
нящихся между собой на 20—25% доз может оказаться оди-
наковым. Что касается того, каким путем должна устанавли-
ваться первоначальная ориентировочная концентрация препа-
рата, то вышеприведенные соображения относительно неточ-
ности судорожной реакции кроликов заставили совершенно
отказаться от этого пути. Фармакопея СССР не указывает, ка-
ким путем должна определяться предположительная актив-
ность, на основании которой делается разведение препарата
для точной стандартизации. В фармакологической лаборатории
Государственного института экспериментальной эндокриноло-
гии в Москве это первоначальное определение всегда прово-
дится на основании снижения сахара крови у кроликов.
Опыт ведется на кроликах, голодавших 24 часа и отвечаю-
щих всем вышеперечисленным условиям. Раствор указанной
концентрации (2 ЕД в 1 см3) берется в дозах 0,3, 0,4 и 0,5 см3
на 1 кг веса, причем каждая доза вводится трем кроликам.
Таким образом, в среднем животное получает 1,6 ЕД на 2 кг
веса. В течение последующих 5 часов 3 раза — через Р/г, 3 и
5 часов — берутся у каждого животного пробы крови, в кото-
рых определяется содержание сахара. Естественно, что началу
опыта должно предшествовать установление нормы, для чего
перед инъекцией из ушей также берется проба крови, сахар
в которой определяется отдельно. По истечении 5 часов опыт
заканчивается; к этому времени обычно при правильно подо-
бранной концентрации уровень сахара в среднем значительно
повышается, иногда достигая начальной нормы. Для упроще-
ния вместо определения сахара в каждой пробе крови отдельно
допускается определение содержания сахара в смеси всех трех
проб, взятых после введения препарата.
Результат действия определяется для каждого кролика в
отдельности по формуле:
~ X ~ X 1,5 = количеству ЕД в 1 см3 впрыснутого раствора.
В этой формуле а равняется процентному содержанию са-
хара до инъекции минус среднее из процентных содержаний
сахара в трех последовательных пробах крови, взятых после
инъекции; b представляет собой результат от вычитания 0,045
из нормального уровня содержания сахара в крови; 0,045 пред-
ставляет собой тот уровень, до которого опускался сахар от
действия одной единицы (в прежнем ее понимании); w— вес
кролика в килограммах; с — двойное количество кубических
сантиметров впрыснутого на 1 кг веса раствора инсулина.
Микрохимическое определение сахара может быть произ-
водимо любым способом; предпочтение отдается тем, в кото-
рых могут быть получены достаточно точные данные при ми-
нимальной потребности крови (в среднем 0,1 см3) для одного
150
определения. Наилучшим из способов оказался, по опыту боль-
шинства лабораторий, общеизвестный метод Хагедорн-Иенсена.
По требованиям Международной комиссии и Фармакопеи
СССР, каждое исследование должно быть проведено не менее
чем на 27 кроликах, причем в один день под опытом должны
быть не менее 9 животных. Так как обязательным условием
опыта является — проверка сопротивляемости животных по
стандартному препарату, которая, естественно, должна прово-
диться в тех же условиях, наиболее удобно делить подопыт-
ных животных на две группы, вводя одной стандартный, а
другой подлежащий испытанию препарат: затем через 6 дней
повторяют опыт, вводя на этот раз кроликам, получившим
стандартный препарат, препарат испытуемый, и наоборот. Для
того чтобы не дробить отдельных девяток животных, мы
в практической работе в течение многих лет пользуемся не 27,
а 36 животными, ставя опыт 2 дня подряд, каждый день на
18 животных, и затем повторяя опыт через 6 дней с указан-
ными изменениями. Из полученных для каждого кролика дан-
ных вычисляются средние данные для всего опыта. В случае,
если кролики оценивают стандартный препарат выше или ниже
его номинальной постоянной активности, в данные для расчета
активности испытуемого образца вносится соответствующая
поправка. Ход испытания может быть иллюстрирован следую-
щим примером.
Испытанию подлежит порошок инсулина. Предварительным,
ориентировочным испытанием установлено, что для приблизи-
тельного содержания 2 ЕД в 1 см3 раствора нужно взять
0,02°/о раствора препарата. Стандартный препарат растворен
с расчетом содержания 2 ЕД в 1 см3 (см. таблицу, стр. 152—153).
При работе по указанному «первому» методу на практике
вырисовывается ряд неизбежных во всяком деле деталей.
Прежде всего необходимость работать с растворами более
или менее точной концентрации заставляет относиться с боль-
шой тщательностью к наблюдению за характером падения
кривой содержания сахара в крови. Выше мы видели, что при-
близительное определение активности производится по судо-
рожному эффекту, видели и то, что определение таким путем
может быть только очень грубым. Другим критерием правиль-
ности выбранной концентрации может служить кривая паде-
ния сахара, которая идет таким образом, что максимум паде-
ния сахара приходится на Р/г—3 часа после инъекции, к концу
же опыта, т. е. через 5 часов, уровень сахара в среднем при-
близительна возвращается к норме. В формуле, по которой
ведется расчет, учитывается среднее падение сахара в течение
всего опыта, почему Международная комиссия допускает
определение сахара в смеси трех проб, чем достигается сокра-
щение числ^ отдельных микроопределений. Такое упрощение
представляется на практике не совсем удобным, ибо, не говоря
уже вообще о преимуществе работать, имея перед глазами всю
151
1. Испытуемый препарат
№ кролика Доза на 1 кг веса Сахар крови * а ь Резуль- тат
норма через 17, ч. через 3 ч. через 5 ч.
1 106 53 42 81 47 61 2,31
2 0,5 105 60 51 47 52 60 2,60
3 106 62 71 54 44 61 2,16
4 117 57 66 99 43 72 2,24
5 - 0,4 112 73 67 90 35 67 1,96
6 НО 49 57 49 58 65 3,34
7 108 55 48 53 56 63 4,44
8 0,3 114 69 66 56 50 69 3,62
9 99 62 78 98 20 54 1,85
В среднем. . 109 60 61 70 — — 2,72
10 108 60 54 55 52 63 2,48
11 1 0,5 ПО 64 60 63 34 65 1,57
12 ) 95 58 42 55 43 50 2,58
13 101 64 65 94 37 56 2,48
14 0,4 112 71 61 84 40 67 2,23
15 101 69 78 87 23 56 1,54
16 94 67 65 67 28 49 2,86
17 0,3 99 42 56 93 35 54 3,24
18 90 42 43 78 36 45 4,00
В среднем. . 101 60 .59 75 — — 2,55
2. Стандартный препарат
(1 см3 —2 ЕД)
Обозначения те же, что и в предыдущей таблице
19 1 106 50 47 66 52 61 2,55
20 0,5 94 56 65 53 36 49 2,20
21 108 54 60 59 50 63 2,38
22 117 62 63 105 40 72 2,08
23 0,4 112 76 76 64 40 67 2,22
24 90 44 45 50 44 45 3,67
25 ’ 108 65 47 77 45 63 3,57
26 0,3 115 62 62 77 48 70 3,43
27 104 90 78 86 19 59 1,61
В среднем. . 107 62 60 71 — — 2,63
28 105 49 27 22 72 60 3 60
29 j 0,5 114 71 52 47 57 69 ЗД8
30 112 66 65 83 37 67 1,65
31 114 71 60 67 48 69 2,61
32 0,4 112 73 63 76 41 67 2,29
33 121 75 83 96 36 76 1,78
34 119 58 56 54 63 74 4,26
35 0,3 112 66 52 85 44 67 3,28
36 1 ) 105 71 67 80 32 60 2,66
В среднем . . 113 67 58 68 — — 2,85
* Для удобства записи содержание сахара показано не в мг °/0, а
в абсолютных цифрах.
152
Повторение опыта с переменой препаратов дало следующие результаты:
№ кро- Содержание ЕД
лика в 1 см3
Испытуемый
19—27 I
28—36 I
препарат
3,06
2,64
№ кро- Содержание ЕД
лика в 1 см3
2,69
2,52
Стандартный препарат
1— 9
10—18
Сопоставление всех данных дает следующий результат:
№ кро- Содержание ЕД
лика в 1 см3
Испытуемый препарат
1— 9 2,72
10—18 2,55
19—27 3,06
28—36 2,64
В среднем для
всех опытов 2,74
№ кро- лика Содержание ЕД в 1 см3
Стандартный препарат
1— 9 2,69
10—18 2,52
19—27 2,63
28—36 2,85
В среднем для
всех опытов 2,67
картину опыта, а не только средний его результат, знание
кривой падения сахара желательно и по другим соображениям.
Оно помогает, как уже сказано, судить о правильности избран-
ной концентрации; далее, оно позволяет разобраться в случаях
так называемых парадоксальных реакций. Кролики, отвечаю-
щие на средние дозы необычными результатами в ту или дру-
гую сторону, подлежат исключению из общего числа при под-
счете средних данных. Исключение из общего числа двух жи-
вотных может резко изменить данные опыта. Между тем, на-
пример, кролики, не дающие вовсе в среднем никакого падения
сахара, на самом деле далеко не всегда обладают полной не-
чувствительностью к данным дозам инсулина; отсутствие ре-
зультативного падения сахара может явиться следствием силь-
ного скачка сахара к концу опыта при имевшем место боль-
шом, но кратковременном падении. Такие случаи встре-
чаются вовсе не так редко. Знание истинной причины отсут-
ствия реакции в некоторых случаях может дать чрезвычайно-
ценные указания на то, как надо производить опыт в даль-
нейшем. Справедливость этой точки зрения находит подтвер-
ждение в работе Бургера и Коля171. Что касается кроли-
ков, которые повторно реагируют на инсулин парадоксально,,
то такие животные подлежат исключению, и впредь ими пере-
стают пользоваться для опытов. При сравнении со стандарт-
ным препаратом или, выражаясь иначе, при определении силы
сопротивляемости животных к стандартному препарату, не-
153
обходимо помнить, что это сравнение получает убедительность
только тогда, когда концентрация растворов испытуемого и
стандартного препаратов является близкой. Для стандарта пра-
вильная концентрация достигается простым расчетом при раз-
ведении, ибо активность сухого препарата представляется по-
стоянной; концентрация испытуемого препарата выбирается на
основании всех указанных ранее признаков, результатов пер-
воначальных определений и др. Означенная оговорка необхо-
дима для того, чтобы избежать тех ошибок, которые неиз-
бежно должны получаться при простом пропорциональном пе-
ресчете, так как активность препаратов меняется пропорцио-
нально их концентрации только в известных границах. Точ-
ность данных резко падает в тех случаях, когда данные для
стандартного и испытуемого образцов расходятся очень зна-
чительно. Особенно должно быть отмечено, что меньшие дозы
всегда показывают при пересчете относительно больший эф-
фект. Там, где кролики оценивают раствор, как в среднем но-
минально в абсолютных цифрах содержащий менее 2 ЕД,
истинная активность всегда будет значительно ниже вычислен-
ной на основании такого опыта.
Из других практических замечаний можно указать на то,
что обычное подкожное введение дает одинаково быструю ре-
акцию сравнительно с введением внутривенным. По Сехинну,
Мельвиллю и Блезеруику 172, внутривенное введение в связи со
сложным влиянием инсулина на печень может дать меньшее
снижение сахара, чем введение под кожу и внутрибрюшинно.
При желании спасти животное в случае очень резких явлений
вводят подкожно концентрированные растворы глюкозы (20—
30% по 10—20—30 см3). Естественно, что такие животные вы-
падают в дальнейшем из опыта. При расчете активности сле-
дует иметь в виду, что произведение отношения веса к впрыс-
нутому количеству на коэфициенг 1,5 есть величина постоян-
ная, составляющая для доз 0,5, 0,4 и 0,3 см3 на 1 кг веса соот-
ветственно 3,-3,75 и 5.
Из рассмотрения приведенных таблиц можно сделать ряд
интересных выводов.
Среднее содержание сахара крови у голодавших 24 часа
кроликов несколько превышает 0,100°/о. Кривая падения сахара
достигает наибольшей глубины часто уже через Р/г часа, дер-
жится на этом уровне до 3 часов и затем обнаруживает не-
сомненный подъем. У отдельных животных кривая может
иметь более плоский характер. Абсолютное снижение сахара
крови не стоит в прямой зависимости от его начального со-
держанйя. Кролики, получившие меньшие дозы, к концу опыта
имеют несколько более высокие цифры сахара, хотя из этого
правила исключения встречаются очень часто. Из данных при-
веденного примера, являющегося типичным образцом наших
массовых исследований по инсулину, следует, что при расчете
154
по указанной формуле раствор, содержащий 2 ЕД, всегда оце-
нивается как более высокоактивный. Это наблюдение вполне
объясняет высказанное выше положение о нежелательности
вводить растворы более высокой концентрации, ибо они будут
давать цифры, допускающие ошибку при расчете, так как по-
вышение дозы на 25% может не дать соответствующего уве-
личения эффекта. При ориентировочных опытах следует иметь
в виду, что растворы, оцениваемые кроликами, как содержа-
щие около 2,5 ЕД в 1 см3, являются на самом деле содержа-
щими около 2 ЕД.
Несмотря на то, что при работе по этому методу, пользуясь
большим числом животных, мы получаем хорошие результаты,
нельзя обойти молчанием его одного существенного недо-
статка. Дело в том, что, как это следует из рассмотрения пре-
дыдущей таблицы, очень часто абсолютное падение сахара
оказывается одинаковым для доз в 0,5 и 0,3 см3 на 1 кг веса.
Таким образом, расчет активности уже по одному этому может
быть ошибочным, так как на основании одинаковых ре-
зультатов будет сделан разный вывод. Хотя одинаковые
данные от разных доз выравниваются дальнейшим расчетом
(чем больше дозы, тем меньше отношение веса к впрысну-
тому количеству), однако сам по себе принцип, при котором
иногда заключения делаются не на основании наименьших
доз, дающих определенный эффект, вызывает возражение.
Возможность ошибки при пользовании относительно боль-
шими дозами лучше всего может быть показана на примере
лаборатории Торонтского университета в Канаде 16°, где перво-
начальный стандартный препарат, оцененный по этому методу
как содержащий в 1 мг 8,5 ЕД, при первой стандартизации
получил гораздо более низкую оценку — 6,5 ЕД в 1 мг.
Правда, ошибка произошла в большой мере от желания до-
биться судорожного эффекта у 25% кроликов, но цифра паде-
ния сахара при этом не была столь показательной, чтобы сразу
можно было сделать заключение об излишне большой дозе.
Выходом из этих соображений будет всегда возможно боль-
шее число подопытных животных (по нашим данным, не менее
18 кроликов в день) и самое тщательное сравнение со стандар-
том, без чего трудно будет достигнуть нужной точности в ре-
зультатах.
Предложение Мохначевой 172а проводить одновременное ис-
пытание стандартного и исследуемого образцов ничего нового
к методу не добавляет, как соответствующее общему принципу
фармакологии проводить контрольные опыты в тех же усло-
виях, следовательно, в одно и то же время. Как указано выше,
мы пользуемся для этой цели 9 животными для испытуемого
и 9 для стандартного препарата. При пользовании лишь 9 жи-
вотными в один день, как это делает /Мохначева, точность ме-
тода снижается и испытание растягивается на долгий срок.
155
Недостатки, связанные с введением подкожно животным
разных доз, как будто устраняются «вторым» методом, осно-
ванным тоже на снижении сахара крови у кроликов. Этот ме-
тод, также принятый Международной комиссией, советской и
британской Фармакопеями, предложенный Марксом 173, состоит
в следующем.
Опыт проводится на кроликах весом 1 800—2 200 г, голо-
давших 18—24 часа до опыта. Животные, числом 12, делятся
на две равные части, из которых одна получает испытуемый
препарат, а другая — стандартный. Последний вводится в ко-
личестве 0,5 ЕД на 1 кг веса животного, что соответствует при
среднем весе животных в 2 кг 1 ЕД. В этом состоит первое
отличие этой методики от приведенной выше, в которой сред-
няя доза равнялась 1,6 ЕД на 2 кг животного. Испытуемый
препарат вводится в той же дозе (конечно, предположительно).
Через 3—4 дня повторяют опыт, меняя животных в обратном
порядке: тем, которые получили стандарт, впрыскивают испы-
туемый препарат; получившим испытуемый впрыскивают
стандарт. Вторым отличием служит характер расчета: опреде-
ляется процентное падение сахара, которое высчитывается
в результате соотношения между нормой и средним падением
в течение 5 часов после инъекции. Микрохимическое определе-
ние сахара производится перед началом опыта и затем через 1,
2, 3, 4 и 5 часов после введения инсулина. Если, например, норма
равна 110, а среднее падение составляет 70, то процентное па-
дение составится из соотношений 110 : (ПО—70) = 100 : х, от-
куда х = —: -—=36,4. Определив среднее процентное падение
для 6 кроликов от испытуемого препарата, сравнивают его с
таковым от стандартного препарата. При расхождении резуль-
татов более чем на ± 5°/о опыт повторяют, меняя концентра-
цию испытуемого раствора до тех пор, пока не будет достиг-
нута нужная точность. Добившись отклоняющихся друг от
друга менее чем на± 5% результатов, зная количество раство-
ренного препарата, простым пересчетом определяют активность
испытанного образца.
Небольшой собственный опыт работы по этому методу по-
казывает, что получение при его помощи результатов нужной
точности также требует большого числа испытаний. То обстоя-
тельство, что все животные получают одну и ту же и притом
небольшую дозу, говорит принципиально в пользу этого ме-
тода. Практика показывает, однако, что даже и эти условия не
гарантируют большей равномерности реакции кроликов. При-
водимый ниже пример реакции 12 кроликов на одну и ту же
дозу — 0,5 ЕД на 1 кг веса — по «второму» методу лучше всего
иллюстрирует высказанное соображение.
156
№ кро- лика Сахар крови Процентное падение сахара
начальная норма среднее из 5 определений
1 106 52 51,0
2 90 74 17,7
3 90 80 11,0
4 86 44 49,0
5 86 67 22,0
6 90 77 14,4
7 85 48 43,5
8 106 50 53,0
9 88 66 25,0
10 87 60 31,0
11 88 53 40,0
12 96 89 7,3
Таким образом, если даже выбросить одного непрореагиро-
вавшего кролика (№ 12), при среднем процентном снижении
сахара 28,2, мы имеем колебания от 11 до 53%.
Весьма расходящиеся между собой результаты могут по-
лучаться в зависимости от разведения препарата и по «вто-
рому» методу.
Уолден 173 а , разводя различным образом стандартный пре-
парат, определил по этому методу содержание активных на-
чал в 1 мг равным 20,9, 21,9 и 22,9 ЕД.
При сравнении между собой, обоих методов на кроликах
отдать безусловное предпочтение какому-нибудь из них за-
труднительно. В разных лабораториях приняты разные методы,
в зависимости от опыта и условий работы. «Первый» метод
имеет то преимущество, что по нему можно ориентировочно
судить о прямом содержании инсулина в испытуемом образце.
«Второй» метод удобен при массовых испытаниях образцов,
близких между собой по активности, не требующих затраты
времени на подбор нужной концентрации.
Огромная потребность в стандартном препарате инсулина
для практических целей затрудняет применение всегда ориги-
нального международного стандартного препарата. С этой
целью Фармакопея СССР вводит советский стандартный пре-
парат, активность которого устанавливается по международ-
ному стандарту. Действующий в настоящее время международ-
ный стандарт содержит в 1 мг 22 ЕД. Для его растворения
применяется изотонический раствор хлористого натрия
(0,85%), подкисленный соляной кислотой до pH ~ 2,5 и содер-
жащий 0,3 % трикрезола. Растворитель берется с точным рас-
четом, чтобы 1 см3 содержал 20 ЕД, для чего нужно 1,1 см3
на 1 мг препарата. Из этого раствора делаются дальнейшие
разведения. Советский стандартный препарат до сих пор имел
невысокую активность и сейчас заменяется новым. Прежний,
представлявший собой хлоргидрат инсулина, растворялся не-
157
посредственно в воде; новый препарат, аналогичный между-
народному, также будет растворяться в подкисленном растворе
хлористого натрия.
При длительных опытах на одних и тех же животных воз-
никает вопрос о возможности того или иного изменения в ре-
акции на препарат. По данным Арндта174, чувствительность
кроликов к инсулину повышается при ежедневном введении им
малых количеств — от 0,1 до 0,3 ЕД на 1 кг веса. Не реагируя
на эти дозы вначале, животные через 4—5 минут начинают
отвечать на них судорогами. Таким образом, чувствительность
кроликов как будто повышается. Собаки, обратно этому, по-
видимому, делаются менее восприимчивыми при ежедневном
введении им 1—4 ЕД на 1 кг веса (Хорнунг 175).
Как уже было указано выше, между опытами перерыв в 5
(«первый» метод) или в 3—4 дня («второй» метод) обеспечи-
вает восстановление нормальной реакции животных и пред-
охраняет их от привыкания. Некоторые кролики в связи с из-
вестной способностью инсулина повышать питание организма
быстро увеличиваются в весе и потому подлежат замене.
Из некоторых добавлений к методам стандартизации инсу-
лина на кроликах по снижению кривой сахара крови вызывает
удивление предложение Коль 176 измерять площадь получаемых
при графическом изображении кривой падения сахара. При
этом, по мнению Коль, необходимо вводить инсулин внутри-
венно. Пользуясь таким методом, этот автор установил, что
активность кристаллического инсулина превосходит активность
прежнего международного стандарта в 1,9 раза. Таким обра-
зом, кристаллический инсулин по этому методу должен содер-
жать 8 X 1>9 = 15,2 ЕД в 1 мг, тогда как кристаллические пре-
параты, по всем прочим методам и по клинической оценке, со-
держат в 1 мг больше 20 ЕД.
Другую группу методов, рекомендуемых Международной
комиссией, составляют методы, основанные на определении су-
дорожной дозы у мышей. Отдельные модификации отличаются
друг от друга лишь по технике и потому могут быть рассмот-
рены вместе. Эта группа встречает в качестве возражения то,
что было поставлено в плюс методу с определением сахаро-
понижающей способности, — определение терапевтических
свойств по токсическому эффекту. Второй минус этой, мето-
дики — возможный субъективизм, так как эффект опреде-
ляется на-глаз по виду животного.
Работами Крога и его школы было показано, что судорож-
ное действие инсулина на мышей идет параллельно его сахаро-
понижающей способности. Это послужило твердым обоснова-
нием для метода. Однако, как уже было указано выше, рас-
хождение данных при определении двумя методами были до-
вольно значительны в тех случаях, где испытывавшийся и стан-
• дартный препараты имели разную степень очистки. Достаточная
техническая сложность метода явствует из его описания.
158
Одной половине большого количества мышей впрыски-
вается подкожно стандартный препарат, другой — испытуемый
образец. Критерием для выбора подходящих мышей служит
только вес 16—20 г. Не только пол, но даже и цвет не играют
роли. Мыши должны содержаться в термостатных условиях
при температуре 30—38°. Для соблюдения этих условий можно
пользоваться или электрическим инкубатором, или простой во-
дяной баней. Последняя имеет форму большого прямоуголь-
ного ящика, в которой помещаются покрытые на % водой
отдельные небольшие цинковые ящички, накрываемые сверху
стеклянными пластинками; в выступающих над водой краях
делаются отверстия для вентиляции. Число ящичков равняется
10, в каждый помещается по 6 мышей. Мыши, как получающие
испытуемый, так и получающие стандартный препарат, для
соблюдения полного равенства условий сажаются по одинако-
вому количеству в каждый ящичек, где, следовательно, поме-
щаются 3 животных, на которых испытывается неизвестный
препарат, и 3 контрольных животных. Все количество — 6 мы-
шей— нужно для испытания одной дозы. Объем вводимой
подкожной дозы не должен превышать 0,5 см3. Средняя доза,
дающая требуемый эффект, выражается в 0,0075—0,01 ЕД.
Действие инсулина на мышей в термостатных условиях про-
является следующим образом.
После инъекции наступает общее успокоение; мыши сидят
большую часть времени, согнув спину и наклонив голову ко-
нечности, особенно задние, парализуются и расползаются по
гладкой поверхности пола; некоторое время мыши нахо-
дятся в неестественном положении. Глаза широко открыты, ча-
сто наблюдается экзофтальм. Далее паралич конечностей при-
обретает резкий характер, и мыши уже все время лежат на
брюхе, не1 будучи в состоянии подняться на ноги; хвост часто
принимает приподнятое (до вертикального включительно) по-
ложение. В этом периоде экзофтальм встречается чаще, чем при
временном параличе. После возможных послаблений наступает
период коллапса, в течение которого животные лежат или на
брюхе, или на боку без признаков движения, в состоянии пол-
ного расслабления. Коллапс заканчивается судорогами. Появле-
ние последних служит признаком положительного эффекта
данной дозы инсулина. Для предотвращения наступления в
дальнейшем смерти мышам внутривенно (через хвостовую вену)
вводят 0,5 см3 10% раствора глюкозы, что обычно спасает
Жизнь животных. Процент гибнущих животных невелик. Мыши
могут по истечении нескольких дней служить для повторного
опыта. Продолжительность всего опыта составляет 2 часа. Из-
менения, наступающие у мышей, начинают отмечать через пол-
часа после введения инсулина и первый час отмечают через
каждые четверть часа, второй — через полчаса. Таким образом,
наблюдения делают через %, %, 1, 1% и 2 часа. Сравнительно
краткая продолжительность опыта позволяет повторить в те-
159г
чение одного рабочего дня испытание 2 раза. Каждая доза
должна быть испытана 4 раза в течение двух следующих один
за другим дней.
Установив дозы стандартного и испытуемого препаратов,
вызывающие судороги у 50% всех подопытных мышей, про-
стым пересчетом определяют активность стандартизируемого
образца.
Большим преимуществом данного метода является отсут-
ствие необходимости производить огромное количество микро-
определений сахара крови. Имеются некоторые указания на то,
что опыты на мышах можно проводить и при комнатной тем-
пературе.
При работе по оценке активности инсулина фармакологиче-
ским лабораториям часто приходится сталкиваться с вопросом
о стойкости растворов препаратов. Естественно, что стойкость
зависит от очень большого количества условий — чистоты пре-
парата, консервантов, состава растворителя, способов хранения
и т. д. Фармакологический анализ, конечно, может установить
активность препарата лишь в данный момент. Для заключения
о стойкости препарата в дальнейшем нет никаких безусловных
критериев. Нам представляется все же возможным на основа-
нии своих наблюдений допустить, что одним из основных фак-
торов сохранности активности растворов инсулина является
степень очистки исходного продукта. В наших опытах наибо-
.лее длительно сохраняли активность образцы растворов от-
носительно хорошо очищенных препаратов.
Весьма интересно в подтверждение этой точки зрения при-
вести наблюдение Мейнса и Макмёллена 177, установивших, что
кристаллический инсулин в растворе (40 ЕД в 1 см3) с доба-
влением 0,1% трикрезола и 1,6% глицерина, в течение 8 меся-
цев не потерял активности при хранении при температуре 40°.
При испытании различных препаратов, часто предлагаемых
для замены инсулина (экстракты из слизистой оболочки тон-
кой кишки и даже желудка и т. д.), приходится пользоваться
одним из способов, основанных на прямом сахаропонижающем
эффекте препаратов.
Гораздо более сложную задачу представляет собою опреде-
ление длительного действия соединений инсулина с протами-
нами, солями некоторых металлов и т. д. Здесь приходится
проводить значительно более длительное, чем обычно, изуче-
ние сахарной кривой крови (10—12 и больше часов). Имеются
основания думать, что таких препаратов, которые уже стано-
вятся достоянием практики, можно будет не подвергать спе-
циальному испытанию на длительность эффекта, если только
активность исходного инсулина будет предварительно точно
установлена.
Испытание различных препаратов инсулина, рассчитанных
на введение внутрь, в мазях и т. д., каждый раз должно про-
.160
водиться в зависимости от специальных требований к таким
препаратам.
Определение инсулина в крови больных, также проводимое
путем биологическим, стоит несколько в стороне от прямых
целей биологической оценки. Здесь следует только указать,
что для этой цели обычно пользуются мышами, у которых
определяют сахар крови после введения им .крови больных (су-
дорог в связи с малым количеством инсулина получить не
удается). По данным фармакологической лаборатории Государ-
ственного института экспериментальной эндокринологии в Мо-
скве, этим путем можно установить наличие лишь относи-
тельно огромных количеств инсулина в крови (Махотина134),
что лишает этот метод практического значения.
11 — 317
161
ГЛАВА VI
ГОРМОНЫ ЖЕНСКОЙ ПОЛОВОЙ СФЕРЫ
Вопрос об определении активности препаратов яичника в
настоящее время понимается гораздо шире, чем это было
раньше и чем это имеет место по отношению к большинству
препаратов желез внутренней секреции. Препараты яични-
ков принадлежали к той обширной группе органотерапевти-
ческих препаратов, где из-за отсутствия химических и не-
возможности подыскать соответствующих объектов для био-
логических реакций, которыми можно было бы определить
богатство препарата действующими началами яичника, всякое
сколько-нибудь обоснованное суждение об их активности от-
сутствовало.
Основным путем для определения специфического действия
какой-либо эндокринной железы является удаление ее из ор-
ганизма и установление в нем наступающих вслед за этим из-
менений. Если последние носят притом своеобразный характер
и не могут появиться при удалении других желез, то специ-
фическая зависимость между определенным состоянием орга-
низма и функцией данной железы может считаться установлен-
ной. Устранение вызванных удалением железы расстройств
при помощи пересадки новой железы этого рода или введения
активных экстрактов из нее делает такую зависимость доказан-
ной вполне. Несмотря на то, что функция яичника как внутри-
секреторного органа в организме женских особей прекращается
обычно прижизненно, и тем представлялась полная возмож-
ность установить картину, являющуюся результатом лишения
организма продуктов внутренней секреции яичника, путей для
суждения об активности овариальных препаратов при помощи
биологических' методов таким именно образом установить дол-
гое время не удавалось. Все изменения, наступающие в орга-
низме в результате угасания функции яичника, носили нерез-
кий характер; уловить каких-либо резких изменений в орга-
низме такого животного под влиянием действия на него пре-
паратов яичника не удавалось, поскольку сами изменения не
давали отчетливой картины. Для гормонов яичника раньше не
было известно специфического действия (в кратковременном
эксперименте). Эффект, оказываемый препаратами яичника
162
<1
на обычные физиологические объекты, одинаковым образом
мог быть вызван и препаратами других желез внутренней се-
креции. Связь яичника с процессом течки у животных и мен-
струацией у женщин была установлена уже давно. Для экспе-
риментального доказательства этой связи недоставало подхо-
дящего объекта. По наблюдениям Стокарда и Папаниколау 178,
Лонга и Ивэнса179, Аллена и Дойзи180 и др. за процессами
течки у мелких грызунов, оказалось, что смена периодов по-
коя и течки крайне просто может быть установлена у этих
животных путем изучения микроскопической картины влага-
лищного отделяемого. Слизистая оболочка этих животных
является ярким выразителем циклических изменений в поло-
вой сфере самок крыс и мышей. Определение того или иного
момента достигается гистологическим исследованием мазков
влагалищного отделяемого, которое в разные моменты про-
цесса богато клетками того или другого характера. В проме-
жутке между периодами течки отделяемое влагалища пред-
ставляет собой совершенно иную картину. У животных с уда-
ленными яичниками прекращается течка, а вместе с нею и
изменения в слизистой влагалища, которая перестает претер-
певать циклические изменения. Если теперь кастрирован-
ным мышам или крысам ввести препарат, содержащий про-
дукты внутренней секреции яичника, то у таких животных на-
ступает течка более или менее продолжительная и яркая,
в зависимости от богатства активными началами данной
дозы.
Следует отметить, что еще в 1892 г. Латает181 описал ана-
логичные изменения в слизистой вагины у грызунов во время
течки.
Установленная таким путем отчетливая и сравнительно
быстро протекающая реакция (3—5 дней) позволила пересмо-
треть весь вопрос о внутренней секреции яичника. Очень скоро
было установлено, что течка у кастрированных животных мо-
жет быть вызвана не только препаратами яичника, но в более
резкой степени фолликулярной жидкостью (откуда названия
«фолликулин» и «фолликулярный гормон»), далее — экстрак-
тами из последа и, наконец, кровью и мочой беременных жен-
щин и самок различных животных. Благодаря тому, что моча
беременных оказалась самым простым, дешевым и главное
высокоактивным исходным материалом, все дальнейшие ра-
боты по изучению «гормонов яичника» были проведены с ве-
ществами, выделенными из мочи. Это изучение очень скоро по-
ставило вопрос о множественности гормонов женской половой
сферы. Появились различные «женские половые гормоны»,
разделяемые по методам получения, по исходному материалу и
по активности. Очень скоро работами американских (Дойзи
с сотрудниками 182) и европейских авторов (Бутенандт183 с со-
трудниками) была установлена и химическая природа этих
тормонов. Оказалось, впервые в истории химии гормонов, что
163
эти вещества не содержат азота и относятся к стеронам,
являясь аналогами желчных кислот и холестерина. Работы по
химии «женских половых гормонов» составили целую эпоху и
способствовали разрешению ряда вопросов в строении гормо-
нов мужской половой сферы, затем специального внутрисе-
креторного органа женского организма, желтого тела и, на-
конец, даже и гормонов коры надпочечника. Самое краткое и
схематическое изложение этого огромного вопроса является
здесь невозможным. Мы должны ограничиться лишь указа-
нием на следующие принципиально важные для фармакологи-
ческого изучения моменты.
Ввиду того что все многочисленные вещества, выделенные
разными авторами, обладали способностью вызывать течку у
кастратов, причем содержание этих веществ в большинстве
источников — последе, моче — во много раз превосходило их
наличие в яичниках, возникло естественное предложение не
считать эти продукты за безусловные гормоны женской поло-
вой сферы, «женские половые гормоны», «фолликулярный гор-
мон» и т. д., а сохранить за ними более точно определяющее
характер их действия название «гормонов, вызывающих теч-
ку» или, короче, «гормонов течки». Правильность такого пред-
ложения подтверждается еще и тем, что многолетний опыт
клиницистов указывал на возможность получения в известных
случаях эндокринных расстройств женской половой сферы
благоприятных результатов от препаратов Яичников, содержа-
щих незначительное количестве гормона течки. Допустимо ду-
мать, что в самом яичнике гормон или гормоны находятся
в каком-то ином виде, иной форме.
Изучение строения веществ, вызывающих течку, привело
к выделению их в кристаллическом виде и к установлению их
строения. Все эти вещества имеют весьма разную активность и
часто химическим путем могут быть переводимы из одной
формы в другую. Для биологической оценки важно знать, что
гормоны течки могут быть эстерифицированы и что процесс
эстерификации сказывается не только на изменении активно-
сти вещества в количественном отношении, но меняет ее и ка-
чественно.
В структурном отношении следующие два соединения явля-
ются наиболее характерными.
кето гидроксирюрми
горпона течки
Дигидрокеифорпо еормоно
течки
164
Продукт бензоилирования дигидроксиформы является са-
мым типичным представителем эстеризированных гормонов
течки, тогда как кетоксиформа служит образцом неэстеризи-
рованных гормонов.
Оба указанные вещества, точно изученные в химическом
отношении, были Международной комиссией приняты в каче-
стве международных стандартных препаратов для препаратов
женской половой сферы, причем первый служит стандартом
для простых, а второй для эстерифицированных (именно бен-
зоилированных) продуктов. В литературе для этих веществ
разными авторами устанавливались разные названия. Кетоги-
дроксиформа гормона течки иначе носит название эстрона и
тилина, фолликулина; дигидроксиформа — эстрадиола, тилола,
дигидрофолликулина.
Международные стандартные препараты получили следую-
щие официальные наименования:
1) кетогидроксиформа гормоне течки (температура плав-
ления около 261—264°); '
2) монобензоат дигидроксиформы гормона течки, или эк-
страдиол монобензоат (температура плавления около 191—
193,5°).
Оба препарата растворимы в растительных маслах и этило-
вом спирте.
Основные работы по (выделению и изучению строения гор-
монов течки были выполнены школами Дойзи (США), Буте-
нандта (Данциг), Мэрриана (Канада), Лакёра (Голландия), Жи-
рара (Франция). Усилиями руководимых ими лабораторий было
заготовлено нужное количество препаратов для международ-
ного стандарта.
На фоне этих в высшей степени интересных химических ра-
бот прошло незамеченным и не получило дальнейших подтвер-
ждений сообщение Эндрью и Фенджер 184 о выделении ими из
ткани яичника высокоактивного кристаллического вещества,
отличающегося от всех известных «женских половых гормо-
нов» тем, что в его состав входит также и азот (примерная
формула C2oH4102N, температура плавления 95,1°). С физиоло-
гической точки зрения возможность наличия гормонов в яич-
нике в ином, чем в моче, виде может, как уже указывалось
выше, быть обоснована многими соображениями.
В СССР рядом работников осуществлено выделение в кри-
сталлическом виде как кетоксигормопа течки, так и бензоата
дигидроксигормона (Лапинер, Дятлова).
Сообщения некоторых авторов (Маркер, Камм, Окууд и
Лауциус и др. 185 186) о синтезе гормонов течки пока еще не
получили широкого подтверждения, почему этот вопрос не мо-
жет считаться решенным.
С самого момента применения реакции на кастрированных
грызунах возник вопрос о том, насколько способность препа-
ратов давать эту реакцию является гарантией того, что эти
165
препараты содержат гормон или гормоны женской половой
сферы. Далее, требовалось получить ответ на вопрос о значе-
нии реакции течки у грызунов для суждения об активности
препарата в клинике.
Изучение самой реакции и препаратов гормона течки поз-
волило установить следующую картину.
Все препараты гормона течки одновременно со способно-
стью вызывать течку у кастрированных грызунов оказались
обладающими еще рядом таких физиологических особенно-
стей, которые могут считаться характерными для гормонов
женской половой сферы (Лакёр, Лёве, Цондек и Ашгейм
ряд работ американских авторов). Особенно отчетливо влия-
ние таких препаратов было установлено на всем половом
аппарате самок. У инфантильных самок (мыши, крысы)
отмечается быстрое развитие матки, наружных половых орга-
нов, грудных желез, наступает быстрое характерное раскрытие
половой щели. У старых особей (крысы, мыши) наступившие
атрофические изменения в матке и влагалище устраняются,
прекратившаяся в связи со старостью течка возобновляется.
Были описаны случаи роста грудных желез и секреции молока
даже у самцов. Много данных приводилось в пользу доказа-
тельства так называемого антимаскулинового действия гормо-
нов течки, выражающегося, например, в атрофии яичек у сам-
цов. Установлено своеобразное изменение типа оперения у пе-
тухов, переход мужского типа в женский и т. д. Все вместе
взятое позволяет с несомненностью установить, чго ве-
щества, полученные обычным путем из мочи беременных, по-
следа и т. д., наряду со способностью вызывать течку, несо-
мненно, вызывают такие изменения, которые мы считаем зави-
сящими от наличия в организме гормональных начал яичника.
Таким образом, с этой точки зрения вопрос о специфично-
сти реакции течки решается довольно благополучно. Если же
подойти к решению вопроса о возможности получения течки у
грызунов от каких-либо других веществ, заведомо ничего об-
щего с гормонами течкй не имеющими, то картина предста-
вится в совершенно ином виде. Оказалось, что целый ряд ве-
ществ весьма различного происхождения может в той или
иной степени вызывать характерные изменения в слизистой
влагалища у грызунов. Литература по этому вопросу довольно
значительна. Не входя в отдельные подробности, можно ука-
зать на то, что все эти вещества, способные вызывать течку
у грызунов (кастратов и некастратов), принадлежат к сильно
действующим на организм соединениям и попутно дают ряд
других характерных явлений. Это относится к некоторым ал-
калоидам (никотину, морфию), к алкоголю, к раздражающим
всю тазовую область иохимбину и кантаридину, затем адрена-
лину и т. д. Это же может быть отнесено к некоторым иным
воздействиям на организм, как вскармливание пищей, приводя-
166
щей к разным авитаминозам (связанным с отсутствием вита-
минов А и В), воздействию лучами Рентгена и т. д.
Устанавливая, таким образом, принципиальную неспецифич-
ность реакции течки, мы, однако, можем подчеркнуть тоже
глубоко принципиальное различие между действием всех пере-
численных веществ и факторов воздействия, с одной стороны,
и препаратами гормонов течки — с другой.
Это различие заключается, главным образом, в отсут-
ствии при этом каких-либо других, не связанных с гормональ-
ным влиянием изменений в организме. Данное различие в
действии столь велико, что само по себе практически исклю-
чает возможность ошибок при определении специфических
свойств препаратов. В последнее время, благодаря возмож-
ности пользоваться химически чистыми кристаллическими про-
дуктами, особенно ярко подчеркивается еще одно обстоятель-
ство— способность препаратов гормона течки вызывать реак-
цию в совершенно исключительно малых дозах.
Серьезный удар такому положению наносят попытки хими-
ков синтезировать ряд соединений, ничего общего не имеющих
со структурой гормонов течки, но в то же время обладающих
их свойствами.
Когда описывались соединения, выделяемые из каменно-
угольной смолы, торфа и т. д., этим не нарушался вопрос об
общности или близости строения этих веществ и гормонов
течки. Но когда Доде 187 с сотрудниками перешел к изучению
простых соединений ароматического ряда, оказавшихся спо-
собными вызывать течку, положение резко начало меняться.
Если первые препараты этих авторов давали относительно ма-
лый эффект, то последнее описанное ими простейшее веще-
ство, анол, представляющее собой производное эфирного мас-
ла из семян аниса (анетола), по их данным, обладает той же
активностью, что и кристаллический препарат гормона течки.
Эти еще, правда, не законченные работы могут резко изменить
. вопрос о значении реакции течки, если подтвердится аналогия
анола или близких ему веществ и гормонов течки и в других
направлениях, в первую очередь в отсутствии влияния на дру-
гие объекты.
Много сомнений с физиологической точки зрения возни-
кало по поводу того, что по реакции течки у грызунов
Делаются заключения о действии препаратов на организм жен-
щин. Вполне уместно было допустить, что в связи с различием
в физиологическом отношении течки у мышей и крыс и мен-
струальных явлений у женщин заключение о специфичности
Действия окажется ошибочным.
Первым серьезным обоснованием для возможности пользо-
ваться реакцией течки явилось то обстоятельство, что разно-
образный материал, получаемый от женщин, давал эту реак-
цию у животных. Течка наступала от впрыскивания фоллику-
лярной жидкости и мочи, от имплантации кусочков ткани
167
яичника и т. д. Таким образом, было доказано, что гормо-
нальные начала половой сферы женщины оказались способ-
ными вызывать эту реакцию. Сделать обратное заключение
с уверенностью сначала было затруднительно, так как устра-
нения явлений кастрации в организме женщин долгое время
получить при помощи гормонов течки не удавалось. Послед-
ние годы подтвердили и эту возможность. Клиническая лите-
ратура последних лет содержит ряд примеров, показывающих,
как при помощи гормонов течки (правда, в колоссальных до-
зах) можно у полностью кастрированных женщин вызывать
менструальный цикл. Эти наблюдения служат вторым и очень
веским аргументом в пользу возможности основываться на
реакции течки.
В последнее время эта реакция получает обоснование еще
и потому, что у женщин установлено наличие циклических
изменений в слизистой влагалища, соответствующих измене-
ниям, наблюдаемым у грызунов. Изменения у женщин, соответ-
ствующие течке животных, наблюдаются в межменструальный
период (Папаниколау 188, Бочкарев 189).
Испытание препаратов гормона течки проводится на кры-
сах и мышах. Цитированные в начале этой работы американ-
ские авторы обычно работают на крысах, европейские авторы—
на мышах. Большинство лабораторий в СССР также поль-
зуется мышами. До введения стандартных препаратов долгое
время в литературе существовали две группы единиц действия
для гормонов женской половой сферы — единица мышиная
и единица крысиная. Под одной ЕД в том и другом случае
принималось то наименьшее количество препарата, которое
оказывалось способным при определенных условиях вызывать
течку у одной мыши. Это простое требование, как увидим
далее, давало возможность для самого различного расчета
активности. В результате по такому, казалось бы, простому
вопросу, как зависимость между мышиной и крысиной ЕД,
в литературе нельзя было найти согласных данных. Разница
в числе введений, в растворителях, наконец, в самом опреде-
лении понятия течки служила основанием для противоречивых
мнений, которые могут быть иллюстрированы хотя бы следу-
ющими немногими примерами.
1 мышиная ЕД относится к 1 крысиной ЕД, как:
1 : 1 (масляные растворы, Коуард и Бэрн 19°),
1 :1 (масляные растворы, Бекер, Меллиш, Дамур и
Гэставсон 191)>
1 : 1 (водные растворы, Крейтмайр 192),
1 : 2 (водные растворы, Кохман 193),
1 : 3 (масляные растворы, Липшютц 194),
1 : 4 (масляные растворы, Крейтмайр 192),
1 : 4 (масляные растворы, Кохман 193),
1:5 (водные растворы, Григорьев, Данилова, Преобра-
женский 195).
16b
Отдельные авторы приводят цифры, вызывающие уже пол-
ное недоумение у всякого, работавшего по этому вопросу.
Указывают, что 1 крысиная ЕД равна 30 мышиным (Хигле и
Хигле 1S6) или даже. 36 (Хейн и Робсон 197).
Не удивительно, что реакция, дававшая столь разные ре-
зультаты в руках различных исследователей, оценивалась
некоторыми не очень высоко. Поэтому введение стандартных
препаратов в данном случае дало возможность внести в дело
нужную ясность. При имеющейся теперь возможности всегда
произвести проверку сопротивляемости мышей отпадает необ-
ходимость перечисления того, что понимают под 1 ЕД авторы.
' Соблюдение необходимых условий опыта, крайне важное само
по себе, тоже не является абсолютно необходимым для всех
исследователей. Важно то, чтобы каждый производящий испы-
тание считал за 1 ЕД то, что при его технике, при его
манере определять микроскопическую картину, при его спо-
собе введения и т. д. дает в эксперименте 1 ЕД стандартного
препарата.
Для обоих вышеупомянутых стандартных препаратов за
1 ЕД принимается 0,0001 мг (или 0,1 у) препарата. Для кето-
гидроксиформы гормона 1 ЕД примерно равна Vs крысиной
ЕД в понимании Дойзи и Аллен.
Техника кастрации мышей, взятие мазков и их окраска сво-
дятся к нижеследующему.
Для опыта берут молодых здоровых мышей со средним
весом 20 г. Удаление яичников просто производится со сто-
роны спины. Для этого на выстриженной спине в нижней
ее трети проводят вертикальный разрез по середине длиной
около 1 см. Раздвигают кожу в сторону и далее поочередно
делают разрез слева и справа в том месте, где проецируются
окончания рогов матки. Это место находится несколько ниже
бокового края грудной клетки и характеризуется крайней тон-
костью мышечного слоя, через который иногда просвечивает
жировая ткань. Через разрез длиной в несколько миллиметров
вытягивают наружу рог матки с яичником. После перевязки
рога в верхней его трети удаляют яичник, который отчетливо
виден простым глазом и ни чем не может быть смешан,
вместе с концом рога и окружающей эту железу жировой
тканью. После удаления обоих яичников мышечных разрезов,
если они были сделаны правильно, можно не зашивать. Кож-
ный разрез зашивают 2—3 швами, рану смазывают иодом и
помещают мышь в клетку, ежедневно тщательно вычищаемую.
Пищей мышам служат молоко, белый хлеб и какая-либо
крупа (обычно овес или пшено).
Для выяснения пригодности мышей через 3 недели после
операции начинают брать у них мазки из влагалища. Если
в течение 2—3 недель течка у мышей не обнаруживается, мыши
считаются годными для испытания. К исключению из общего
числа мышей, оказавшихся невосприимчивыми к препаратам
169
женской половой сферы, прибегать приходится крайне редко.
Если оперированные мыши продолжают давать течку, наблю-
дение за ними удлиняют и пускают их лишь после того,
когда в течение 3 недель у них будет отсутствовать течка.
Изучение наличия естественной течки, равно как и течки,
вызываемой препаратами, ведется по микроскопической кар-
тине влагалищного отделяемого. Наиболее простой, но и наи-
более грубый способ взятия мазка состоит в протирании, вла-
галища ватным тампоном, закрученным на булавочной головке;
более точные результаты дает мазок, взятый платиновой пет-
лей. Преимущества последнего способа очевидны, так как
первый, вследствие грубости, заключает в себе возможность
травматизации слизистой вагины. Защитники взятия мазка
при помощи тампона указывают на то, что таким путем захва-
тывается все отделяемое, тогда как платиновая игла берет
лишь отделяемое одного какого-нибудь участка слизистой
влагалища. Бочкарев 198 предложил простой и удобный способ
взятия мазка, заключающийся в смывании влагалищного со-
держимого водой при помощи вводимого во влагалище сте-
клянного капилляра. Каплю воды выдувают во влагалище и
затем последовательными насасывающими и выдувательными
движениями несколько раз смывают со стенок вагины ее содер-
жимое, которое затем непосредственно наносят на предметное
стекло. Такой же способ рекомендует и Франк199. Если влага-
лищное отделяемое получено при помощи тампона или петли,
то оно смывается в капле дестиллированной воды, заранее
нанесенной на предметное стекло. После сушки мазка на
воздухе и фиксации метиловым спиртом в течение 10—15 ми-
нут препарат красят. Ясная картина получается от окраски по
Гимза. Некоторые авторы предлагают рассматривать препа-
раты без окрашивания.
Как уже было указано выше, при наличии стандартного
препарата, позволяющего проверить сопротивляемость мышей
для получения согласных данных, нет необходимости придер-
живаться всем лабораториям и отдельным работникам какой-
нибудь однообразной методики. По принятым Международной
комиссией постановлениям, для получения точных результатов
обязательно должны- быть соблюдаемы совершенно одинако-
вые условия для испытуемого и стандартного препарата20,).
В частности, требуется следующее.
Испытания могут проводиться на мышах и на крысах.
Реакция на кастрированных грызунах признается единственно
пригодной для сравнительной оценки активности препаратов.
Оба препарата должны быть обязательно растворены
в одном и том же растворителе. В случае растворения препа-
рата в масле вся доза может быть введена сразу. При пользо-
вании водными растворами (для стандартного препарата и вы-
сокоочищенных испытуемых требуется первоначальное раз-
ведение в спирте с последующим разведением в воде) доза
170
вводится в несколько приемов, причем промежутки между
отдельными введениями и число введений должны быть оди-
наковыми для обоих препаратов и не должны быть менее
трех. Все три введения делаются не менее чем в течение
9 часов. Препараты вводятся подкожно, а не внутримышечно.
Взятие мазков предлагается делать в одно и то же время для
мышей, получивших тот и другой препарат, причем мазки
рекомендуется брать не менее одного раза ежедневно до тех
пор, пока вызванные препаратом изменения не пройдут. В день,
когда можно ожидать развития полной картины, мазки беру г
не менее двух раз. Дозы стандартного и испытуемого препа-
ратов могут считаться равными только в тех случаях, когда
идентичные изменения в слизистой влагалища наступают от
обоих препаратов приблизительно в одно и то же время после
введения препаратов. Если разница во времени наступления
течки будет больше 24 часов, то заключения по такому опыту
будут неточными.
Особенно трудным для практического выполнения является
предложение вводить каждую дозу не менее чем 20 мышам.
I При меньшем количестве точность метода падает, и ошибка
в определении будет больше zt 2О°/о. Каких-либо указаний на-
счет того, какая именно картина влагалищного отделяемого
является наиболее удобной для оценки действия препарата, не
дается и выбор ее предоставляется собственному опыту лабо-
раторий.
Уменье определять по микроскопической картине мазка из
вагины грызунов момент полового цикла, по образному выра-
жению известного голландского ученого Лакёра, для фармако-
логов столь же обязательно, как для химиков пользование
лакмусовой бумагой. В самом деле, отдельным моментам поло-
вого цикла соответствуют столь различные состояния слизи-
|.стой влагалища, что ошибка в оценке едва ли возможна.
В период покоя стенки влагалища выстланы низким основ-
ным эпителием, немногослойным (1—2 слоя), снаружи по-
крытым слоем слизистых клеток. Микроскопическая картина
в этом периоде дает большое количество слизи и лейкоцитов,
изредка с небольшой примесью эпителиальных клеток. С на-
, чалом течки слизистая оболочка влагалища подвергается раз-
растанию, число слоев эпителия вместо двух достигает 8—12.
I Разрастаясь, эпителий начинает отторгаться. В этом периоде
мазок под микроскопом дает картину поля, сплошь усеянного
эпителиальными клетками с хорошо окрашивающимися ядра-
ми. С моментом наивысшего развития процесса совпадает мо-
• мент массового отторжения эпителиальных клеток, к этому
времени теряющих ядра, подвергающихся ороговению и на-
зываемых теперь глыбчатыми клетками. По окончании течки
очень быстро наступает прежняя картина: разросшийся и
переродившийся эпителий постепенно отторгается весь, и
через остающиеся 1—2 слоя на поверхность начинают высту-
171
пать лейкоциты. В переходных стадиях в мазках сначала бу-
дет отмечена смешанная картина, где к глыбчатым клеткам
будут примешиваться лейкоциты и клетки ядерного эпителия;
Рис. 12. Период покоя.
в дальнейшем число
лейкоцитов увеличи-
вается, тогда как чи-
сло глыбчатых и ядер-
ных клеток умень-
шается, и картина бу-
дет соответствовать
состоянию покоя—лей-
коциты, слизь и отдель-
ные эпителиальные
клетки.
Для того чтобы за-
помнить различные
моменты, лучше всего
обратиться к микро-
скопической картине
влагалищного отделяе-
мого в разные перио-
ды. Рис. 12, 13 и 14
представляют собой
соответственно ста-
дию покоя, стадию
пролиферации и оттор-
жения эпителиальных
клеток и момент пол-
ной течки. В литера-
туре встречается де-
ление микроскопиче-
ской картины влага-
лищного отделяемого
на 6—8 отдельных фаз,
представляющих собой
различные переход-
ные моменты между
вышеописанными ос-
новными стадиями.
У выдержанных ка-
стрированных живот-
ных всегда будет на-
блюдаться картина по-
коя, причем характер-
Рис. 13. Пролиферация и отторжение эпители- НЫМ моментом являет-
альпых клеток. ся бедность содержа-
ния в мазке клеточных элементов. В периоде покоя у здоро-
вых животных мазок всегда бывает более насыщен лейкоци-
тами, бактериями, слизью. В переходном периоде от покоя к
172
течке часто можно наблюдать отторжение ядерных эпите-
лиальных клеток целыми пластами. При таком развитии
течки влагалище переполнено глыбчатыми клетками («теч-
ка» в буквальном смысле слова). При некотором навыке мо-
мент течки удается определить по характеру мазка еще до
его микроскопического изучения. Течка носит названия
эструса (oestrus), основные переходные состояния имеют
названия, производимые от этого слова: проэструс (период
перед течкой), метаэструс (следующий за течкой), диэструс
(период между теч-
ками, период покоя).
Следует иметь в ви-
ду, что при сильном
раздражении, особен-
но при взятии мазка
платиновой петлей, у
мышей могут разви-
ваться вагиниты, ха-
рактеризующиеся ог-
ромным количеством
гнойных телец. По
Уейд и Дойзи201, у
крыс от длительного
взятия мазков может
наступить ороговение
слизистой..
Разница в деталях
опыта может быть
очень значительна и
показана на следую-
Рис. 14. Полная течка.
щих примерах.
В первоначальном методе Дойзи, Роллса, Аллена и Джон-
стона 202 масляные растворы предлагалось вводить в несколько
приемов — от трех до восьми, тогда как теперь мысляные
растворы по преимуществу не дробят. Цондек 203 рекомендо-
вал делать 6 введений в течение 48 часов. Бэгби и Симонд 204—-
8 введений. По мнению Мэрриана и Паркеса 205, нужно в тече-
ние 48 часов делать 4 введения и т. д. В фармакологической
лаборатории Государственного института экспериментальной
эндокринологии в Москве масляные растворы вводят в один
прием, водные — в шесть в течение двух дней. Большинство
сходится на целесообразности подкожного введения, хотя те
же Мэрриан и Паркес считают, что внутрибрюшинное введе-
ние имеет предпочтение перед подкожным. Фосс 206 полагает
(по опытам на морских свинках), что оптимум всасывания для
кристаллического гормона течки соответствует его минималь-
ной активной концентрации, а для масляных — двойной мини-
мальной дозе. При испытании на мышах при однократном
введении масляных растворов удобно вводить данную дозу
173
в 0,2 см3 раствора соответствующей концентрации. При введе-
нии водных растворов в 3 приема в течение дня объем
впрыскиваемого раствора ограничивают 0,5 см3 (0,2+0,2+0,1),
при введении в течение двух дней в 6 приемов — 1 см3.
Весьма сказывается на результатах частота опытов на жи-
вотных и срок их годности. По нашим данным, животных сле-
дует брать для опыта не чаще чем один раз в 12 дней и поль-
зоваться ими не свыше полугода.
Первое время спорным моментом в указанном способе испы-
тания являлся вопрос о том, какую картину можно безогово-
рочно считать за наступившую течку, т. е. какая картина вла-
галищного отделяемого может быть принята в качестве дока-
зательства активности данной дозы. Самым простым и есте-
ственным является считать за вполне ясно выраженную течку
проявление в мазках сплошной массы глыбчатых клеток (см.
рис. 14). как и поступает большинство авторов. Лёве207
вводит своеобразное понятие единицы, понимая под по-
следней 10/9 гой дозы, которая вызывает появление в мазке
9О’7о глыбчатых клеток; больше того, он предлагает по про-
центнсму количеству клеток устанавливать доли «единиц дей-
ствье : 60% глыбчатых клеток в поле зрения должны соответ-
ствовать действию такой-то доли единицы действия, 50% —
меньшей, 80% — большей и т. д. Против этого совершенно
резонно возражают другие авторы (Цондек и Ашгейм 208, Лакёр
с сотрудниками 209), полагающие, что течка может служить ме-
рилом только как таковая и что не может быть %, % и т. д.
течки.
Существующий в литературе спор о том, является ли
момент отторжения глыбчатых клеток показателем наивысшего
действия гормона или же их появление представляет собой
вторичное явление, наступающее уже после действия гормо-
на, сути дела нисколько не меняет, так как и в том, и в дру-
гом случае результат обусловливается специфическим действием
продуктов внутренней секреции яичника.
Мы в наших опытах считаем за течку картину массового
появления глыбчатых клеток, понимая под массовым появле-
нием безусловное их преобладание; отдельные ядерные клетки
могут при этом в расчет не приниматься. Важным предста-
вляется, по нашим наблюдениям, еще один момент: богатство
препарата глыбчатыми клетками В самом деле, при течке,
как показывает и само название, влагалище должно содержать
большое количество отделяемого (состоящего, как мы знаем,
из глыбчатых клеток); поэтому, коль скоро мазок при обыч-
ном способе взятия оказывается очень бедным, то, даже и при
преобладании над другими элементами глыбчатых клеток,
может возникнуть сомнение в том, что налицо имеется картина
полной течки. Дело в том, что если количество глыбчатых
клеток ничтожно, то такая картина характерной считаться не
может на тех основаниях, что она легко получается от слу-
174
чайно соскобленных ороговевших клеток при входе во вла-
галище; отделяемое же последнего в некоторых случаях
у кастрированных мышей бывает так скудно, что мазок дает
«пустой препарат».
Очень распространено определение картины по степени дей-
ствия. Лакёр и де Ионг 210 делят картину от покоя до полной
течки на четыре стадии, подчеркивая разницу между карти-
ной чистой течки и того состояния, когда количество безъядер-
ных (глыбчатых) клеток превышает количество клеток с ядром.
По нашим данным, этот момент улавливается довольно
трудно, так как после массового отторжения ядерных клеток
ороговение их идет очень' 'быстро. Мы обычно отмечаем как
неполную течку лишь картину с преобладанием ядерных кле-
ток, достаточно резко отличающуюся от полной течки.
На основании собственных наблюдений и литературных
данных можно думать, что реакция отдельных мышей на гор-
мон течки подвержена меньшим колебаниям, чем, например,
реакция кроликов на инсулин. Это постоянство реакции,
однако, не достигает такой степени, чтобы можно было согла-
ситься с Лакёром и де Йонгом, которые в свое время считали
возможным пользоваться опытом на мышах без стандартного
препарата, гарантируя при этом точность в пределах z* 25°/о.
В сравнительной однородности реакции мышей можно убе-
диться, наблюдая результат действия на мышей различных доз
препаратов.
На нижеследующей таблице приведены данные двух испы-
таний на мышах международного стандартного препарата
(кетогидроксиформы)
Количество мышей Доза (в 0,2 см3 масла) Число мышей, у кото- рых отмечен положи- тельный результат
в абсол. числах в 7о
1-е испытание
10 0,1257 10 100,0
10 0,17 10 100,0
11 0,087 7 63,6
2-е испытание
30 0,17 23 77,0
30 0,087 14 46,7
30 0,067 3 10,0
Для оценки положительного результа обычно требуется,
чтобы он был отмечен у 75% подопытных животных.
Требование о введении каждой дозы не менее чем 20 мы-
шам нами в практической повседневной работе выполняется не
всегда. Для ориентировочных определений берут по 3 мыши
175
на дозу; положительны?! эффект должен быть не менее чем у
2 мышей. Для более точных работ часто приходится ограничи
ваться тоже меньшим количеством мышей, например, 10 мы-
шами на дозу.
Положительный эффект обычно отмечается на третий-чет-
вертый день после введения препарата, иногда, особенно при
больших дозах, его можно отметить уже вечером второго дня.
Для сравнения берут наименьшую дозу, вызывающую нуж-
ное действие, ввиду того что увеличение дозы не всегда дает
течку обязательно у 90—100% животных, а иногда может вы-
звать ее у 75—80%.
Биологическое испытание препаратов гормона течки (на
крысах) принято последним изданием французской Фармако-
пеи (1937 г.). Кроме двух стандартных препаратов, аналогич-
ных международным, включены еще два: небензоилированная
дигидрооксиформа и бензоилированная кетогидроксиформа.
В связи с разными способами испытания у разных авторов
один и тот же препарат получает весьма различную оценку.
1 г международного стандартного препарата, содержащий
10 миллионов ЕД, может вызвать при однократном введении
• масляных растворов течку у мышей в дозе 0,08—0,12у, т. е
как бы содержать 8—12,5 миллионов мышиных ЕД. Этот же
препарат при дроблении дозы вызывает течку у мыши в дозе
0 025—0,03у, что дает содержание в 1 г 40—30 миллионов мы-
шиных ЕД. Соответственные колебания получаются и для крыс
Естественно, что разница в 4—5 раз, зависящая от разных
условий опыта, служила источником бесконечных ошибок и
разногласий. С введением стандартного препарата эта опас-
ность устраняется.
Необходимо отметить,^ что разные стандартные препараты,
внешне одинаковые по активности — одной ЕД и того, и дру-
гого является 0,1 у, — не идентичны между собой по действию
и никак не могут заменять один другого. Бензоилированным
стандартом можно пользоваться лишь для аналогичных ему
бензоилированных продуктов. Испытание последних прово-
дится точно так же, как и испытание простых препаратов гор-
мона течки, с удлинением срока наблюдения, ибо бензои-
лированные препараты обладают более длительным дейст-
вием. По абсолютной активности бензоилированный стандарт-
ный препарат значительно превосходит кетогидроксиформу
гормона течки.
Хотя в настоящее время на практике не пользуются ника-
кими иными реакциями, кроме реакции течки у грызунов, сле-
дует остановиться на предлагаемых отдельных ее видоизмене-
ниях и на некоторых других заслуживающих упоминания ме-
тодах.
Большое значение придавалось испытанию препаратов гор-
мона течки на неполовозрелых животных, у которых опреде-
ляют дозу, вызывающую открытие половой щели. Этим мето-
176
дом часто пользуются и сейчас, хотя Дингеманзе и Депонт 2П,
основываясь на испытании разных заведомо нечистых препа-
ратов, полагают, что фактор, вызывающий раскрытие половой
щели, может отличаться от собственно гормона течки. Бюль-
бринг и Бэрн 212 предлагают у молодых кастрированных крыс
определять увеличение веса матки, а Бур213 пользуется этим
же опытом на кастрированных крольчихах. Едва ли имеет ка-
кое-либо практическое значение предложение Тавасштерна214
об испытании гормона течки по определению изменений в на-
ружных частях гениталий у обезьян-гамадрилл, хотя бы по-
тому, что для этого требуются огромнейшие дозы —100 мг
(1 миллион ЕД!). Довольно многочисленные данные о действии
гормонов течки на рост растений имеют скорее общебиологи-
ческий, а не специально количественно-фармакологический ин-
терес. Различные предложения об испытании по действию на
яйцеклад некоторых рыб отпадают, поскольку такими же свой-
ствами обладают препараты мужской половой сферы и неко-
торые другие вещества.
Активность обращающихся на рынке препаратов гормонов
течки весьма велика. В СССР еще продолжают вырабатываться
водные растворы, содержащие 200, 100 и даже 40 ЕД в 1 см3.
В ближайшее время следует ожидать выпуска высококаче-
ственных масляных растворов — 5 000—10 000 ЕД в 1 см3 — ана-
логично заграничным препаратам. Если справедливы реклам-
ные утверждения некоторых фирм о том, что ими выпускаются
растворы кристаллических гормонов (аналогичных стандарт-
ным по строению и степени очистки), то активность таких пре-
паратов не нуждается в биологическом подтверждении. Ввиду
того что 1 г кристаллического гормона содержит 10 миллио-
нов ЕД, 1% раствор этого препарата будет содержать 10 000
ЕД в 1 см3, 0,1% раствор — 1 000 ЕД и т. д. Таким образом,
с переходом на выработку химически чистых кристаллических
гормонов течки биологическая оценка их станет ненужной.
Стойкость растворов гормонов течки весьма высока, так что
с этой стороны не приходится ожидать таких осложнений, ко-
торые сравнительно часто наблюдаются с препаратами инсу-
лина. Некоторые сомнения в этом отношении возникают для
водных растворов (М. П. Николаев и Пономарев215, Дамур и
Гэставсон 216). Раулендс и Каллоу 217 изучали стойкость между-
народного стандартного препарата (не бензоилированного)
в спиртовом растворе и нашли, что активность при хранении
на холоду не изменилась в течение года и несколько понизи-
лась при термостатных условиях (37°).
В заключение главы о гормонах течки следует упомянуть,
что ряд авторов предлагает проводить определение количества
гормонов в препаратах калориметрически (Кобер 218, Коен и
Мэрриан219, Шмулович и Уайли 220 и др.) и фотометрически
(Сюро и Гранадам 221). Лапинер, Леонтович и Кашеварова 222,
изучавшие и уточнявшие калориметрические методы, считают,
12 — 317 177
что этим путем можно определять с ошибкой ± 20% количе-
ства гормонов, соответствующих 2—20 у, т. е. 20—200 ЕД. Та-
кого рода методы не лишены известного .значения, однако
уступают по точности биологическим способам оценки и,
кроме того, по данным Циммермана 223, неспецифичны: одна
и та же красочная реакция получается для гормонов женской
половой сферы (включая сюда и неактивные формы, и гормон
желтого тела) и для мужских гормонов.
ГЛАВА VII
ГОНАДОТРОПНЫЙ ГОРМОН ПЕРЕДНЕЙ ДОЛИ ГИПОФИЗА
В передней доле гипофиза за последние годы обнаружено
наличие большого числа разнообразно действующих веществ,
имеющих одно общее им всем свойство — стимулировать вну-
трисекреторную деятельность других эндокринных желез.
Благодаря этому свойству — «тропности», с одной стороны, и,
несомненно, гуморальному характеру действия — с другой, за
этими гормонами установилось название «тропных гормонов
передней доли гипофиза». Из описанных тропных гормонов,
самостоятельное существование многих из которых оспари-
вается, практический интерес в качестве препаратов предста-
вляет прежде всего гормон, возбуждающий внутреннюю секре-
цию половых желез, — гонадотропный или гонадостимулирую-
щий гормон, препараты которого часто носят название про-
дана. Некоторое значение, далее, может иметь тиреотропный
гормон. Что касается остальных (панкреатропный, кортико-
тропный и др.), то они пока еще имеют чисто эксперименталь-
ное значение.
Общность характера биологических свойств тропных гормо-
нов передней доли сочетается с общностью их химических
свойств. Кроме того, тропные гормоны во многом схожи с дру-
гими гормонами той же передней доли гипофиза, не являю-
щимися собственно «тропными» (гормон роста, гормон жиро-
вого обмена). Недостаточная изученность их в химическом от-
ношении и трудность разделения вполне разъясняют необходи-
мость биологического эксперимента для их определения.
По своим химическим свойствам гонадотропный гормон,
равно как и другие тропные гормоны, принадлежит к группе
соединений белкового или альбумозного типа. Первоначаль-
ными экспериментами была установлена способность вызывать
рост и функцию яичников у неполовозрелых самок для экс-
трактов, получаемых непосредственно из передней доли гипо-
физа (Ивенс с сотрудниками 224). Очень скоро оказалось, что
схожим (хотя и не вполне идентичным) действием обладают
препараты из мочи беременных женщин (Смис 224, Бидль225
и особенно Б. Цондек и Ашгейм 226). Далее было показано на-
личие аналогичных продуктов в организме жеребых кобыл,
12 * 179
моче и особенно в сыворотке крови (Ивенс). Коллип (CoIIip)
с сотрудниками выделил и изучил аналогичное вещество из
плаценты, назвав его «anterior pituitary — lilke substance»
(A. P. L.), т. e. аналогом гормона передней доли.
Все источники получения препаратов, помимо передней
доли гипофиза, оказались несравненно более богатыми актив-
ными началами, чем сама железа, так же как мы это видели
и для гормонов яичника. Аналогично положению с послед-
ними и гонадотропные вещества, полученные не из исход-
ного органа непосредственно, отличаются, по действию от
гормонов из гипофиза. Более того, для выделяемых из мочи и
последа гонадотропных веществ было прямо показано их от-
личие от гипофизарных препаратов. По данным Ивенса, для
получения полноценного эффекта от препаратов из мочи или
последа у животных с удаленными гипофизами необходимо
дополнительно вводить извлекаемый из гипофиза некий «си-
нергетический фактор». Фармакологам приходится иметь дело
с препаратами, по преимуществу изготовляемыми из мочи, за
которыми собственно и установилось название пролана. При-
меняя это название, всегда следует иметь в виду указанное от-
личие пролана от веществ, получаемых непосредственно из
железы. Имеется достаточно оснований допустить, что веще-
ства, выделяемые из последа, образуются в нем самом, а не
в гипофизе. Возможно, что и находящийся в моче пролан не
является веществом гипофизарного происхождения.
В вопросе о биологической оценке пролана и иных гонадо-
тропных веществ, несмотря на то, что они дают чрезвычайно
яркую картину в опыте на животных, существует много спор-
ных моментов, объясняющих наличие разных мнений, разной
характеристики препаратов, разных ЕД. Для гормонов жен-
ской половой сферы удалось сгладить спорные вопросы путем
введения стандартного препарата, для гонадотропных гормо-
нов получение стандартного препарата до сих пор не осуще-
ствлено. Таким образом, биологическая оценка гонадостимули-
рующих препаратов продолжает оставаться на уровне грубо
ориентировочной методики, где изменения в сопротивляемости
животных не могут быть проверены и где взгляды и точки
зрения отдельных лабораторий и исследователей неизбежно
затрудняют получение однородных и совпадающих результа-
тов.
Основным экспериментом для характеристики гонадотроп-
ных веществ является разработанный и изученный главным
образом Цондеком и Ашгеймом 229 опыт на неполовозрелых
самках мелких грызунов, крыс и мышей. Как пересадка этим
животньпм ткани передней доли гипофиза, так и впрыскивание
препаратов из мочи ведут к быстрому росту и развитию яич-
ников, образованию фолликулов, гиперемии органа, образова-
нию желтых тел и изменениям в матке и влагалище, заключаю-
щимся в росте и набухании рогов и тела матки и разрастании
180
эпителия влагалища и заканчивающимся раскрытием у живот-
ных половой щели и картиной полной течки. Тропный харак-
тер действия подтверждается отсутствием всех явлений в матке
и влагалище в том случае, когда препараты или пересадка ги-
пофиза изучались на животном с удаленными яичниками. Этим
же простым экспериментом доказывается, что все изменения
в матке и наружных половых органах являются результатом
внутрисекреторной деятельности яичников, возникающей под
влиянием гонадотропных агентов. Цо Б. Цондеку, можно от-
метить три, следующих резко друг от друга отличающихся ста-
дии действия гонадостимулирующих веществ на яичниках:
1) созревание фолликулов и овуляция, 2) образование гемор-
рагических фолликулов и 3) лютеинизация и образование атре-
тических желтых тел. Соответственно с этими изменениями
различают три реакции на гонадотропные препараты.
Ввиду того что изменения в яичнике соответствуют как
картине его возбуждения (развитие фолликулов и овуляции),
так и угнетения (лютеинизация), Цондек допустил, что перед-
няя доля гипофиза выделяет два гормона—-гормон созревания
фолликулов и гормон лютеинизации, названные им соответ-
ственно проланом А и В. Созревание фолликула должно, по
этой теории, вызываться проланом А, а лютеинизация — про-
ланом В. Образование геморрагических фолликулов (вторая
реакция), наблюдающееся далеко не у всех животных и осо-
бенно ярко выраженное у мышей, трудно, даже по данным
самого Цондека, с уверенностью отнести к действию возбуж-
дающей или угнетающей фракции. <
Для решения этих вопросов требовалось получение в чи-
стом виде отдельно стимулирующего созревание фолликула и
лютеинизирующего гормонов. Мнения о возможности осуще-
ствления этого разделения расходятся. Весьма показательно,
что Ивенсу 227 не удалось разделить гормонов ни в случае по-
лучения их из сыворотки крови жеребых кобыл, ни даже при
выделении из железы непосредственно. Другие исследователи,
однако, сообщают, что такое разделение им удалось (Уоллен
Лауренс 23°, Фивольд и Хайсау231), но только для препаратов
из железы. Для получения чисто фолликулостимулирующего
или лютеинизирующего действия, по данным Фивольдд.и Хай-
сау, требуется наличие абсолютно чистых фракций того и дру-
гого вещества, ибо уже незначительная примесь одного фак-
тора к другому дает всегда суммарное действие, т. е. последо-
вательный переход от возбужденного до угнетенного состоя-
ния. Для выявления действия чистых фракций особое значение
имеет взвешивание яичников, которые при действии стимули-
рующей фракции резко увеличиваются в весе. Из передней
доли гипофиза лютеинизирующая фракция была выделена
также Рейссом 232.
По отношению к препаратам из мочи беременных расхо-
ждений не имеется: разделение их на две фракции еще никем
181
осуществлено не было. По данным Фивольда и Хайсау, в про-
лане из мочи преобладает содержание фракции В.
Вопрос о наличии в гонадотропных препаратах двух раз-
личных гормонов является, таким образом, спорным для выде-
ляемых из желез и сыворотки жеребых кобыл продуктов и со-
вершенно не доказанным для пролана из мочи. Нам необхо-
димо установить это для того, чтобы уяснить себе невозмож-
ность точной характеристики продажных препаратов (обычно
изготовляемых из мочи) с точки зрения содержания в них
факторов А и В. Одновременно становится понятным, почему,
изготовляя препараты из мочи беременных женщин, эндокрин-
ная промышленность не может гарантировать высокого или
преимущественного содержания фактора А в препаратах Счи-
тается экспериментально установленным, что моча некоторых
больных, а также женщин с прекратившейся половой функ-
цией богата фактором А. Производство таких специальных
препаратов не организовано отчасти потому, что обычный
пролан из мочи беременных женщин удовлетворяет клиниче-
ским запросам. На естественный вопрос о некоторой неполно-
ценности препаратов из мочи и преобладании в- них лютеини-
зирующего фактора и о возможности получения при этих ус-
ловиях терапевтического (обычно подразумевается стимули-
рующего) действия в качестве ответа следует вспомнить, что
неполноценность пролана, выражающаяся в отсутствии пол-
ного действия у гипофизэктомированных животных, не имеет
особого значения в клинике у больных с нормальными гипо-
физами и что суммарный препарат может проявлять возбу-
ждающее действие. Возражением по этому поводу может слу-
жить неполноценность гипофиза у больных.
Суммируя все изложенное, мы должны признать, что био-
логическая оценка гонадотропных препаратов представляет
для фармакологов крайне трудную и неблагодарную задачу.
Неясным остается, какие активные начала могут быть в пре-
парате, какая экспериментальная картина ближе всего соответ-
ствует терапевтическим свойствам препарата. С этими неясно-
стями можно было бы в известной мере мириться при наличии
стандартного препарата постоянной активности. Такие препа-
раты, однако, до настоящего времени отсутствуют, несмотря
на то, что некоторые авторы описывают выделение чистых
продуктов, обладающих громадной активностью (30 000 мы-
шиных ЕД в 1 мг! — Рейсс и Хауровитц 233).
Применяемые разными лабораториями методы сводятся
к определению наименьшей дозы, вызывающей определенный
эффект у неполовозрелых мышей или крыс (реже — кроликов).
Такие наименьшие дозы носят соответственно название мыши-
ных или крысиных ЕД без подчеркивания наличия фактора
А или В.
В фармакологической лаборатории Государственного инсти-
тута экспериментальной эндокринологии в Москве определение
182
активности продажных проланов ведется на мышах Согласно
с данными Б. Цондека, опыт ведется на инфантильных мышах
весом 6—8 г. Каждая доза вводится подкожно 3—5 мышам
в 6 приемов в течение двух рабочих дней. Животных убивают
через 100 часов после начала опыта и исследуют картину изме-
нения в половых органах. Для подтверждения положитель-
ного эффекта мы считаем необходимым, кроме роста яичника
и образования фолликулов, также и наличие в яичнике гемор-
рагических фолликулов, «кровяных точек», как они часто на-
зываются. Одновременно должно наблюдаться резкое увеличе-
ние рогов матки, наполнение их слизью. В качестве добавоч-
ного фактора отмечаются раскрытие половой щели и течка.
Принято считать, что рост яичников с одновременным ро-
стом матки и появлением течки характеризует фактор А, а что
для фактора В характерно появление в яичниках желтых тел
без изменений со стороны матки и без течки. При испытании
обычных, суммарных, препаратов наблюдать такой изолиро-
ванной картины не удается.
Появление кровоизлияний в яичниках, кровяных точек,
весьма характерно для мышей и наступает у них, как правило
При оценке препаратов в крысиных ЕД следует иметь
в виду, что у этих животных образование кровоизлияний
в яичниках наблюдается крайне редко, но зато с гораздо боль-
шей легкостью получаются рост яичников, развитие фоллику-
лов и вторичных явлений в матке и влагалище. Реактивная
способность крыс столь велика, что для получения соответ-
ствующих картин у них требуется одна пятая мышиной дозы.
В связи с этим препараты при дозировке в крысиных ЕД дол-
жны назначаться в пятикратных дозах сравнительно с мыши-
ными ЕД. Обычные продажные препараты содержат в 1 мг
| 30—40 мышиных ЕД.
Необходимо еще раз подчеркнуть, что такое условное опре-
деление ЕД как обязательное получение кровоизлияния в яич-
никах у мышей вызывается необходимостью иметь точную,
резкую и специфичную реакцию. Отсутствие чистых препара-
тов не дает возможности точно разобраться в характеристике
отдельных моментов реакции животных. Очень многие эндо-
кринологи до сих пор считают, что разная картина действия
объясняется не содержанием различных веществ в препаратах,
а лишь степенью действия одного и того же вещества. Для та-
кой точки зрения имеется достаточно экспериментальных дан-
ных, изложение которых здесь, однако, не может иметь места.
При испытании пролана следует иметь в виду его крайнюю
нестойкость. Обычные растворы теряют активность уже через
несколько недель, поэтому продажные препараты должны вы-
пускаться в сухом виде для растворения непосредственно пе-
ред употреблением. Стойкость водных растворов может быть
повышена добавлением к ним различных неорганических со-
лей, особенно тех, которые содержатся в моче (главным обра-
183
зом NaCl и далее КН2РО4, Na2HPO4, K2SO4, CaO — Руденко 234).
Интересно, что медные соли даже активируют пролан (Фи-
вольд, Хайсау и Грип 235).
Различными экспериментами было доказано влияние про-
дана на половые железы инфантильных самцов, в частности, на
семенные пузырьки (например, Борст 236, Додерлейн 237, Бочка-
рев и Преображенский 238). Это интересное и вполне естествен-
ное свойство гонадотропных гормонов Коренчевский 239 с со-
трудниками предложил использовать для стандартизации про-
дана на молодых крысах самцах весом по 22—28 г, у которых
пролан, вводимый также в 6 приемов в 2 дня, вызывает на
пятый день увеличение веса добавочных половых желез (се-
менных пузырьков — на 70%, предстательной железы — на
40% и т. д.). Доза, вызывающая такой эффект, равна, по Ко-
ренчевскому, 1 ЕД для крысы самца и соответствует 5 крыси-
ным ЕД, определяемым на самках.
Вопрос о биологической стандартизации гонадотропных
гормонов и выборе международного стандартного препарата
в настоящее время разрабатывается Международной комис-
сией.
При испытании гонадотропных препаратов часто прихо-
дится встречаться с разными продуктами, в той или иной мере
содержащими гонадотропные гормоны или их аналоги. Пер-
вым из таких препаратов является гравидан Замкова, ко-
торый теоретически должен содержать и гормоны течки, и
гонадотропные вещества. Однако выпускаемый для широкого
обращения препарат не имеет никакой гормональной характе-
ристики, и содержание гормонов в нем не гарантируется и не
указывается. Ввиду, следовательно, отсутствия указаний автора
препарата на то, какому стандарту должен отвечать гравидан
в смысле содержания стимулирующих половые железы ве-
ществ, обсуждение этого препарата с этой точки зрения не
имеет смысла. Другой препарат, экстракт хорионов человече-
ской беременности (л е й к о з о л), по данным Люобовецкой и
Глебовой 240, содержит до 30 000 мышиных ЕД в 1 г сухого ве-
щества. Выпускаемые в продажу растворы лейкозола при ис-
пытании их на инфантильных мышах оказались неактивными*
ГЛАВА VIII
ГОРМОН ЖЕЛТОГО ТЕЛА
Давнее справедливое предположение о том, что желтое тело
яичника выделяет какие-то гормональные начала, крайне дол-
гое время не находило себе определенного и точного экспери-
ментального подтверждения. Зависимость развития беремен-
ности от наличия желтого тела в яичнике была доказана и
в опытах на животных, но отсутствовали такие экспери-
менты, которыми прямо доказывалась бы специфическая функ-
ция активных начал желтых тел. Как всегда, отсутствие специ-
фических реакций затрудняло выделение активных начал.
Последние годы специфические реакции были найдены, и полу-
чению активных начал было положено основание. Очень скоро,
отчасти в связи с недостатком химических познаний в струк-
туре гормонов желтого тела, был описан целый ряд веществ,
обладавших разным воздействием на организм и большей или
меньшей активностью. Активные начала получали разные на-
звания — проджестин аир (Аллен241), корпорин (Фивольд
и Хайсоу 242), лютеостероны А, В, С и D (Фельс 243), релаксин,
как якобы специфически расслабляющий тазовые связки (Хай-
соу), и т. д. Выяснению вопроса о действующих началах жел-
тых тел способствовали успехи химии половых гормонов, так
как и гормон желтого тела оказался по строению весьма близ-
ким к половым гормонам.
Последние данные указывают на возможность получения
гормона желтого тела в химически чистом виде, причем это
вещество оказалось способным вызывать все те явления, кото-
рые приписывались ранее разным гормонам. Это соединение
получило название прогестерона, который имеет следующее
строение:
185
Впервые получение кристаллического гормона было осу-
ществлено Алленом. В дальнейшем Бутенандту244 удалось
осуществить и синтез этого вещества, доказав тем самым строе-
ние гормона желтого тела. По согласному мнению всех авто-
ров, работавших над получением кристаллического продукта,
ему было присвоено название прогестерона, который может
быть в двух формах (Аллен, Бутенандт, Корнер, Слотта 245).
Название «прогестерон» (или соответственно «прожестрон»
во французском или «проджестрон» в английском произноше-
нии) было принято для гормона желтого тела Международной
комиссией по биологической стандартизации лекарственных
веществ. Этим очень облегчается использование в будущем
данных различных литературных источников, ранее прибе-
гавших к разнообразным названиям (например, очень при-
вившемуся названию «проджестин»).
Получение гормона желтого тела в кристаллическом виде
дает надежду на уточнение в ближайшем будущем для препа-
ратов желтого тела методов биологической оценки, до сих пор
крайне неточных и носящих лишь качественный характер.
Если изученность в химическом отношении половых гормонов
и гормона желтого тела стоит на одинаково высоком уровне,
то этого никак нельзя сказать по отношению к биологическим
методам оценки, особенно если сравнивать методы оценки
женских половых гормонов и гормона желтого тела. Такое
положение дела зависит, однако, не только от того, что отсут-
ствовал препарат, который мог бы служить стандартным, но
стоит в связи с самой сущностью биологических свойств гор-
мона желтого тела.
Основное свойство гормона, заключающееся во влиянии
на развитие беременности, в способности гормона создавать
необходимые условия для укрепления, развития и роста опло-
дотворенного яйца, трудно для воспроизведения в опыте само
по себе и особенно в таких опытах, на основании которых
можно было бы делать заключения о количестве действующих
начал. Эта трудность в достаточной мере объясняется хотя бы
тем, что для появления беременности женский организм дол-
жен находиться в состоянии, соответствующем определенной
фазе полового цикла. Создание в эксперименте для ряда живот-
ных таких условий при непременной их равномерности,
конечно, крайне трудно. Основной биологической реакцией на
гормон желтого тела является изменение слизистой оболочки
матки, в которой наблюдаются явления, характерные для на-
чального периода беременности. Эта реакция, впервые опи-
санная Алленом и Корнером 246, отличается от всех предыдущих
экспериментов прежде всего принципиально. Все прежние
опыты, доказавшие физиологическое значение желтого тела
как внутрисекторного органа, заключались в удалении есте-
ственным образом образовавшихся желтых тел. Таким образом,
на основании отсутствия внутрисекреторного органа были сде-
186
ляны выводы о его значении Таковы первые опыты Френ-
келя 247, Анселя и Буэна 248 и других, установивших необходи-
мость наличия желтых тел для зачатия и угнетающее дей-
ствие внутрисекреторных начал желтых тел на функцию яич-
ника. Аллен и Корнер описали впервые метод, где наблю-
даются изменения, возникающие под действием вещества.
Метод количественного определения гормонов желтого
тела, по Корнер-Аллену 24Э, в общих чертах сводится к опреде-
лению изменений в слизистой оболочке матки подвергнутых
воздействию препаратов желтого тела взрослых крольчих, по-
крытых самцами и непосредственно вслед за этим кастриро-
ванных. За 1 ЕД авторы принимают наименьшее количество
гормона, которое, будучи введено в течение пяти дней по
одному разу в день, окажется способным вызвать у крольчих
весом '3—4 кг характерные изменения в слизистой оболочке
матки, соответствующие картине восьмого дня нормальной
-беременности. Предварительно эти авторы подтвердили, что
изменения в слизистой оболочке матки крольчих могут быть
предупреждены удалением желтых тел или введением боль-
ших доз гормона течки, что подтверждает антагонизм между
этими гормонами. Удаление яичников необходимо для того,
чтобы исключить влияние естественных желтых тел, быстро
образующихся вслед за овуляцией, которая у крольчих обычно
наступает вслед за покрытием (хотя иногда может наблю-
даться и спонтанно). При кастрации рекомендуется удалять
часть рога матки для того, чтобы при изучении слизистой матки
через 5 дней после начала опыта можно было иметь для срав-
нения картину, соответствующую началу опыта. ЕД по Кор-
неру была принята в англо-американской литературе.
Сложность технического проведения опыта по Корнеру,
сама по себе служащая известным возражением против метода,
сочетается с трудностью, если не невозможностью, подбора для
опыта животных, находящихся в одинаковом периоде поло-
вого цикла. Между тем это имеет огромное значение для
точности реакции, так как возможность зачатия, а следова-
тельно, и искусственных изменений в слизистой матки, зависит
от состояния ее мышечного слоя, которое в свою очередь свя-
зано с функцией яичников и целым рядом других факторов.
Поэтому и представляется вполне справедливым предложение
Клауберга 250 использовать для биологической оценки инфан-
тильных крольчих, которые, по данным Аллена 251, тоже оказа-
лись способными реагировать на гормон желтого тела, но лишь
при условии предварительного введения им гормона течки.
У инфантильных крольчих, вследствие отсутствия функции
яичника, будут исключены влияния на матку, связанные с мо-
ментами полового цикла. Кроме того, использование инфан-
тильных крольчих позволяет легко проводить опыт на живот-
ных, близких друг другу по возрасту и весу. Однако наличию
всех этих благоприятных моментов противопоставляется тот
187
факт, что недоразвитая матка оказывается мало восприимчи-
вой к гормону желтого тела. Для устранения этого обстоятель-
ства Клауберг, согласно с данными Аллена, рекомендует до
введения препаратов желтого тела подготовлять матку путем
введения животным в течение ряда дней гормона течки. По
Клаубергу, 1 ЕД будет то минимальное количество активных
начал желтого тела, которое окажется способным при введе-
нии в течение 5 дней по одному разу в день вызвать специфи-
ческие изменения в слизистой матки инфантильных крольчих
весом 600—800 г, предварительно получивших в течение
8 дней по 10 ЕД гормона^течки ежедневно. Эта клаубергов-
ская ЕД действия получила 'распространение в Европе, и таким
образом создались понятия европейской и американской ЕД.
Достаточная произвольность этих единиц следует хотя бы из
того, что оба метода не включают в себя сравнения эффекта
с эффектом от стандартного препарата. Естественно, что дан-
ные по обоим опытам допускают возможность произвольных
толкований как для производящих организаций, так и для
фармакологической оценки. Вполне понятно поэтому желание
дать сравнение активности препаратов, выраженной в ЕД Кор-
нера и Клауберга. Такое сравнение, проведенное Йонгом 252,
показало, что, как этого и следовало ожидать, единица Кор-
нера значительно больше единицы Клауберга: 1 ЕД Клауберга
оказалась равной приблизительно половине ЕД Корнера. Как
основной метод Аллена, так и построенный на основании его
метод Клауберга вызвали ряд предложений и дополнений. Так,
например, Февольд, Хайсоу и Леонард 253 рекомендуют пользо-
ваться крольчихами, находящимися в состоянии течки, ка-
стрируемыми к моменту начала опыта, проводимого в даль-
нейшем по Корнер-Аллену с небольшими изменениями.
В общей части настоящей работы было указано на нежела-
тельность пользования какими бы то ни было единицами,
основанными на прямой регистрации действия, без сравнения
со стандартом. Возможность иметь в химически чистом виде
прогестерон поэтому послужила основанием для Международ-
ной комиссии принять в качестве стандартного препарата этот
кристаллический продукт, а за 1 ЕД — эффект, вызываемый
1 мг этого вещества. Такая постановка вопроса должна
несколько облегчить оценку препаратов желтого тела, избавив
ее от неизбежных расхождений, естественных при пользовании
разными методами, притом без сравнения со стандартом.
Само собой разумеется, что точность той или иной методики
возрастает от применения стандарта, но степень этой точности
все же не будет очень высокой, поскольку отклонения в реак-
ции отдельных животных на гормон желтого тела остаются,
невидимому, довольно значительными.
' Практическое проведение в жизнь решения Международной
комиссии, принятого на международной конференции в Же-
неве еще в октябре 1935 г. 254, оказалось весьма затруднитель-
на
ным, и до середины 1938 г. предположенное снабжение меж-
дународным стандартом — прогестероном — еще не организо-
вано. Таким образом, до сих пор испытание препаратов жел-
того тела носит характер достаточно грубого определения.
В Государственном институте экспериментальной эндокри-
нологии испытания препаратов желтого тела проводятся по
методу Клауберга. Результаты этих наблюдений показывают,
что активные препараты в точном соответствии с литератур-
ными данными дают чрезвычайно яркую картину развития
прегравидарного состояния слизистой оболочки матки инфан-
тильной крольчихи, предварительно получавшей гормон течки.
Степень реакции может изменяться <в значительной мере, что
позволяет сравнивать ме-
|жду собой действие раз-
ных доз. По нашим наблю-
дениям над активными, но
не химически чистыми
препаратами, полученными
из яичников рогатого ско-
та, увеличение дозы ведет
к резкому возрастанию эф-
фекта до тех пор, пока
развитие слизистой не до-
стигает предела. Дальней-
шее увеличение дозы ино-
гда сказывалось уже в не-
котором уменьшении эф-
фекта, причем отдельные
препараты вообще не да-
вали картины максималь- Рис. 15. Матка девственной инфантильной
НОГО развития слизистой,не- крольчихи после введения гормона течки,
зависимо от величины дозы.
В наших опытах также подтверждены большие индивидуальные
отклонения в реакции отдельных животных, делающих не-
обходимым для точных исследований пользование несколькими
животными для каждой дозы.
Опыты проводятся во всем согласно с требованиями, уста-
новленными Клаубергом. Контрольным животным вводился
|лишь один фолликулин. На приводимых четырех микрофото-
граммах (рис. 15, 16, 17, 18) препаратов, полученных Б. Е. Ну-
синбойм, отчетливо видно специфическое действие препара-
та желтого тела. На снимках ясно видны разные степени
изменения слизистой сравнительно с состоянием матки, вы-
званным введением одного гормона течки.
Гистологическая обработка органов состояла в окраске
гематоксилином и эозином поперечных срезов рогов матки,
фиксированных формалином и замороженных углекислотой.
Окрашенные срезы затем последовательно обрабатывались
безводным спиртом, карболксилолом и ксилолом.
189
Введение препаратов желтого тела проводится обычно
подкожно. Растворителями служат растительные масла, так как
Рис. 16. Действие небольшой дозы гормона
желтого тела.
Рис. 17. Действие средней дозы гормона
желтого тела.
прогестеерон анало-
гично другим стеронам
нерастворим в воде.
Для оценки резуль-
татов опыта можно
пользоваться разными
степенями действия.
Мак Файл233 рекомен-
дует брать для срав-
нения действие, отно-
симое им ко второй
степени пролиферации
(всего он отличает,
как и Клауберг, че-
тыре степени), т. е.
пользоваться относи-
тельно небольшим эф-
фектом. Этот же автор
рекомендует вводить
гормон течки не 8, а
6 дней, но в больших
дозах (150 ЕД вместо
80 ЕД). Необходимо
иметь в виду, что на-
личие изменений в ро-
ге матки, соответ-
ствующих яркой кар-
тине воздействия гор-
мона течки, может, по
Клаубергу,обозначать
присутствие в испы-
тывавшемся препарате
гормона течки, так как
в противном случае
(конечно, при отсут-
ствии гормона жел-
того тела) матка в те-
чение 5 дней опыта
должна вернуться к
первоначальному ин-
фантильному состоя-
нию.
Вместо крольчих, обладающих наиболее ярко выраженной
реактивной способностью к гормону желтого тела, ука-
зывают на возможность пользоваться и инфантильными мор-
скими свинками, которых к тому же предлагается и кастриро-
вать. Судя по данным Дессау 256, морские свинки реагируют
1уи
хорошо, но требуют значительно больших количеств гормона-
желтого тела. Кошки, на которых работали Раулэндс и Мак
фэйл 257, реагируют также на очень большие дозы и при этом
должны предварительно получить относительно огромные
количества гормона течки (10 000 ЕД). Клауберг считал воз-
можным использовать для опыта и мышей, правда, в особых
условиях.
Специальное изучение кристаллического гормона — проге-
стерона, — принятого в качестве стандартного препарата, под-
твердило полную аналогию действия на слизистую этого ве-
щества и неполностью очищенных экстрактов желтого тела-
Рис. 18. Действие большой дозы гормона желтого тела (1 ЕД
по Клаубергу).
(Аллен и Рейнольдс 258 и др.). Интересно, что кристаллогра-
фическое и рефрактометрическое сравнение естественного и
синтетического гормонов желтого тела подтвердило их иден-
тичность (Нейхауз 258а). Гормон желтого тела оказался, подобно
половым мужские и женским гормонам, неактивным по отно-
шению к другим органам, не только к таким, как надпочеч-
ники и щитовидная железа, но и по отношению к грудным
железам (Мак Фэйл 255).
Угнетающее действие прогестерона на яичники, имеющее
огромное практическое значение, было убедительно показано
на крысах Сэли, Брауном и Коллипом 259, которые, вводя кры-
сам огромные дозы (по 4 мг в течение 13 дней подряд), вы-
звали атрофию яичников и прекращение циклических явлений.
191
Что касается количественных отношений, то 1 ЕД проге-
стерона (т. е. 1 мг) приблизительно как раз вызывает нужное
действие у крольчихи. По данным Пэно и Симмонз 26°, кар-
тина вызываемых 1 мг изменений' в слизистой матки соответ-
ствует 7-му дню естественной беременности. Робсон261, вообще
критически относящийся к методу на инфантильных животных,
считает, что доза 0,75 мг дает полное развитие слизистой.
Из других методов биологической оценки препаратов жел-
того тела прежде всего следует указать на основанной на
впервые описанной КнауссОхМ 263 зависимости между препара-
тами задней доли гипофиза и желтого тела. По Кнауссу, вве-
дение беременной крольчихе гормона желтого тела понижает
восприимчивость матки к сокращающим ее препаратам задней
доли гипофиза. Правильность этого положения была пока-
зана рядом данных, из которых особый интерес вызывают на-
блюдения Фэллса, Лэкнера и Крона 264, подтвердивших за-
держку гормоном желтого тела сокращений матки у жен-
щин. Мекпис, Корнер и Аллен 265, сравнивая понижение воспри-
имчивости изолированной кроличьей матки к препаратам зад-
ней доли гипофиза, наступающее от естественного и синтети-
ческого кристаллических гормонов желтого тела и неочищен-
ных препаратов, нашли, что это действие присуще именно
гормону желтого тела и 'идет параллельно его способности
вызывать пролиферацию слизистой матки. Это серьезное прин-
ципиальное обоснование предложения Кнаусса тем не менее
не способствовало практическому распространению этой реак-
ции, действительно включающей в себя ряд моментов, крайне
затрудняющих получение при ее помощи точных данных.
В еще гораздо большей степени трудный путь для сужде-
ния по непрямому действию желтого тела предлагает
Хольц -66, исходящий из тех данных, что на кошке во время
беременности гормоном желтого тела можно угнетающее дей-
ствие на матку адреналина перевести в возбуждающее. Этот
длинный сам по себе путь усложняется еще дальше предло-
жением задерживать гормоном желтого тела вызываемое жен-
ским половым гормоном (гормоном течки) извращение дей-
ствия адреналина на беременную матку морской свинки. Не
говоря уже о чрезвычайной сложности оценки действия по
определению дозы горхмона желтого тела, способной при одно-
временном введении вместе с гормонохм течки воспрепятство-
вать извращающему действию последнего на влияние адрена-
лина на матку, эта реакция едва ли может считаться пригод-
ной хотя бы потому, что в разные периоды беременности
матка морской свинки по-разному реагирует и на адреналин,
и на желтое тело. Изучение этих сложных взаимоотношений,
невидимому, пригодно для анализа характера нервных раздра-
жений, что делает при помощи аналогичного метода на не-
беременных кошках Кеннард 267, но, конечно, никоим образом
не подходит для практических целей биологической оценки.
192
I
ГЛАВА IX
ГОРМОНЫ МУЖСКОЙ ПОЛОВОЙ СФЕРЫ
Вопрос о мужском половом гормоне (или, вернее, гормо-
нах) возник вслед за изучением женских половых гормонов,
гормонов течки. Работа, проделанная с женскими гормонами,
облегчила разрешение вопроса о мужских гормонах. Сравни-
тельные трудности встретились на пути выбора соответствую-
щего биологического эксперимента, биологической пробы, ко-
торая позволила бы относительно быстро и точно количественно
определять содержание мужских гормонов. Если для жен-
ского организма решение этой задачи было относительно
просто в связи с периодическими изменениями в половой
сфере, то для мужского организма, не подверженного столь
быстрым и резким изменениям, подыскание соответствующей
реакции было гораздо сложнее. За сравнительно короткий
промежуток времени специальная литература обогатилась мас-
сой предложений по биологическим методам оценки препара-
тов мужского полового гормона. Число различных методов
достигло высокой цифры не только потому, что разные ме-
тоды давали разные результаты и резко разнились по бы-
строте и удобству выполнения, но и в связи с тем, что изучение
химического строения мужских гормонов очень быстро при-
вело к ряду разных соединений, обладавших разными биоло-
гическими особенностями.
В настоящей работе нет возможности сколько-нибудь по-
дробно останавливаться на вопросе о химическом строении
мужских половых гормонов. Касаясь его лишь в самых общих
чертах, следует указать, что мужские гормоны оказались так-
же принадлежащими к группе стеронов, как и женские. Исходя
из того, что женский половой гормон удобно и быстро может
быть получен из мочи беременных женщин, первые из авто-
ров, выделившие мужской гормон и доказавшие его специфи-
ческую активность, Галлагер и Кох 268, сделали правильное за-
ключение о возможности выделения гормона не^только из те-
стикулов, но и из мочи молодых здоровых мужчин. Одним из
трудно преодолимых препятствий на пути выделения мужских
гормонов было то обстоятельство, что для биологического'под-
тверждения специфического действия препаратов требуются
— 317 193
относительно огромные количества активных начал. Работами
ряда химиков (Галлагер и Кох, Лакёр с сотрудниками и др.)
очень скоро было установлено, что получаемые из мочи и
непосредственно из семенников гормоны различны по своим
свойствам и, как было показано в дальнейшем, по строению.
Таким образом, выяснилось наличие двух гормонов — андро-
стерона, как был назван гормон, выделяемый из мочи, и те-
стостерона, получаемого из яичек. К этим двум активным ве-
ществам присоединился еще ряд других соединений, как по-
лученных из мочи, так и искусственным путем.
Из этих соединений должны быть упомянуты еще по край-
ней мере два вещества — выделенный из мочи дегидроандро-
стерон и андростандиол (дигидроандростерон, продукт вос-
становления андростерона). Приводимые структурные фор-
мулы этих четырех соединений дают понятие об их строении
и различии между собой.
Д игидроондросп/ерон
(Андростандиол)
Химическое изучение новых производных андростерона и
тестостерона продолжается до настоящего времени самым
энергичнььм образом, причем ведущая роль в этом отноше-
нии принадлежит за границей Ружичка 269, а у нас — специ-
альной лаборатории по химии стеронов ВИЭМ (Ушаков). Наи-
больший интерес представляют работы по получению эстери-
фицировэнных производных. Основными достижениями изу-
чения химии гормонов мужской половой сферы следует счи-
тать синтез андростерона и тестостерона, осуществленный
Ружичка с сотрудниками, чем было подтверждено строение
этих соединений.
Столь детальное изучение химического строения мужских
гормонов тем не'менее не смогло привести к выбору соот-
ветствующего химического аналитического метода, что вполне
объясняет необходимость биологической оценки этих пре.ча-
194
ратов. Химическим и биологическим изучением окончательно
решен вопрос о спермине и родственных ему препаратах. Те-
перь совершенно точно доказано, что спермин не обладает
свойствами мужского полового гормона в эксперименте, не
вызывая устранения явлений кастрации у самцов. Возможность
получения в химически чистом виде и даже синтетически гор-
монов, выделяемых из мочи и яичек, не решает полностью
вопроса о действующих началах нативных экстрактов. Пре-
параты из тестикулов и мочи могут давать, особенно клини-
чески, действие, несколько отличное от действия химически
чистых гормонов. В биологическом эксперименте также пока-
зано, что препараты из мочи могут обладать более энергич-
ным действием, чем кристаллический андростерон (Каллоу и
Динелей 270). В то время как андростерон, действуя энергично
на птиц, менее активен по отношению к млекопитающим, пре-
параты из мочи сравнительно с ним активны и на млекопита-
ющих. По отношению к действию препаратов из яичек
Лакёром271 и его учениками было высказано мнение о нали-
чии в яичках фракции X, активирующей действие тестостеро-
на. Это мнение справедливо оспаривается авторами, указыва-
ющими на возможность не активации, а усиления всасывания
под влиянием воздействия разных веществ (Динелей и Пар-
кес 272), хотя сотрудники Лакёра Полак, Дингеманзе и
Фрейд 273 это отрицают. Так или иначе, приходится еще раз
подчеркнуть разницу в действии нативных препаратов и хи-
мически чистых веществ даже для половых гормонов, где,
казалось бы, вопрос можно было считать решенным на осно-
вании химического изучения действующих начал. Эти сообра-
жения еще больше обосновывают биологическое испытание
препаратов мужской половой сферы.
Огромное количество различных методов для биологиче-
ской оценки мужских гормонов не только не заслуживает
сколько-нибудь полного перечисления, но даже с трудом под-
дается систематизации.
Основным принципом доказательства наличия специфиче-
ской активности препаратов мужской половой сферы является
устранение этими препаратами явлений кастрации. Ввиду
того что у млекопитающих как развитие самих явлений, со-
путствующих кастрации, так и их устранение выражены не-
резко и развиваются весьма медленно, в поисках более бы-
стрых и демонстративных реакций обратились в первую оче-
редь к птицам (далее — к рыбам). Таким образом, можно раз-
бить основные методы на две группы: испытание на кастра-
тах млекопитающих и на кастратах птицах. Весьма скоро вы-
яснилось, что два основных гормона (андростерон и тестосте-
рон) по-разному относятся к объектам этих двух групп: в то
время как андростерон, проявляя энергичное действие на
птиц, относительно слабо действует на млекопитающих, тесто-
стерон оказался более активным в обоих случаях. Это обсто-
1з* 195
ятельство еще резче подчеркивает деление методов оценки на
кастратах на эти две группы.
Что касается того, сколь разнообразны предлагавшиеся
методы, об этом можно судить по приводимым примерам.
На теплокровных животных предлагалось пользоваться,
например, методом, основанным на возвращении к норме
строения эпителия семенных пузырьков, атрофирующегося у
кастратов мышей (Лёве и Фосс 274). Коренчевский 275 с сотруд-
никами определяют увеличение веса и размеров вторичных
половых желез и органов — семенных пузырьков, предстатель-
ной железы и полового члена — у кастрированных в молодом
возрасте крыс. Одно время положительно оценивался опыт
на кастратах морских свинок, у которых после введения муж-
ского полового гормона раздражение электрическим током
поясничной части спинного мозга вызывает выделение эяку-
лята, но своим физическим свойствам схожего с эякулятом не-
кастрированных самцов, что указывает на восстановление
секреторной деятельности предстательной железы и семенных
пузырьков (Бателли и Мартэн 276, Мур, Галлагер и Кох 277, Ка-
бак278). Возможны, далее, опыты с задержкой при помощи
препаратов мужского полового гормона явлений недоразвития
вторичных половых желез у неполовозрелых кастратов, на-
пример, у крыс. Эти опыты тянутся крайне долго и дают
весьма нерезкую картину. Затем указывалось на влияние пре-
паратов мужского гормона на развитие вторичных желез —
предстательной железы и семенных пузырьков — у неполово-
зрелых обезьян Rhesus maccacus (Цукерман и Паркес27Э).
Ю-Уонг и Уаю-Хсиен 280 определяют рост препуциальных же-
лез у кастратов крыс, возвращающихся к норме через 48 ча-
сов после двух инъекций препарата. Длительный и потому
мало пригодный для практических целей путь рекомендуется
Оуки 281, который советует определять задержку в увеличении
веса кастратов крыс, для чего требуется трехнедельное введе-
ние препарата.
На птицах наибольшее распространение, а последние годы
и официальное признание, получил метод определения роста
и покраснения гребня у кастрированных петухов, подробнее
описанный ниже. Любопытный метод испытания на воробьях
предлагает Уитши 282, у которых введение мужского полового
гормона кастратам (не только самцам, но и самкам) вызывает
изменение окраски клюва из светлокоричневого через бо-
лее темные тона в черный цвет.
Из опытов, проводимых не на кастратах, в качестве при-
мера можно указать на опыты на гипофизэктомированных
крысах, у которых мужские половые гормоны задерживают
атрофию семенников (Нельсон и Галлагер 283). Далее любо-
пытны данные Цукермана и Паркеса 284 о способности различ-
ных препаратов мужских половых гормонов вызывать течку
у кастратов самок.
196
Метод испытания на кастрированных петухах, как уже
сказано, получил всеобщее признание. Специальной Междуна-
родной конференцией по половым гормонам (Лондон, 1935 г.)
этот метод был принят в качестве единственного, обеспечи-
вающего достаточную точность определения активных начал
мужских половых гормонов. Этот метод, однако, может быть
признан лучшим с очень большими оговорками. Главнейшая
из них — это то, что вещества,. хорошо действующие на ка-
стратов петухов, могут менее активно, как уже было указано
выше, действовать на млекопитающих. Естественно, что дей-
ствие на млекопитающих для оценки клинического значения
препаратов имеет большее значение, чем действие на птиц. Как
всякий метод биологической оценки, и этот метод обеспечен
стандартным препаратом. В качестве такового Международная
комиссия приняла синтетический кристаллический андростерон,
имеющий точку плавления 183,5—184,5°. Разница в действии
андростерона (продукта, получаемого из мочи) и тестостерона
(выделяемого из яичек) лучше всего указывает на то, что
андростерон не является тем мужским гормоном, который вы-
рабатывается семенниками. Тем не менее однородность и не-
изменяемость этого вещества и точность его действия заста-
вили остановить выбор на нем. Андростерон пригодным для
стандарта оказался еще и потому, что он дает прекрасный и
четкий эффект в опыте на кастратах-петухах, который ока-
зался наиболее простым, быстрым и дающим сравнимые ре-
зультаты.
Для проведения испытания на гребне наиболее подходя-
щими являются петухи пород, обладающих хорошо развитыми
гребнями и бородами. Сюда прежде всего относятся леггорны,
белые и коричневые. Литературные данные говорят о некото-
рой предпочтительности коричневых леггорнов и гораздо
худшей реакции плимутроков, бантамов и других пород.
Ввиду большого опыта многих экспериментаторов на петухах
вопрос об их пригодности можно считать решенным не только
по практическим соображениям, но и достаточно обоснован-
ным теоретически. Специальным анализом точности реакций
занимался ряд авторов, преимущественно англо-американской
школы (Гринууд, Дженет Скотт, Сальмон Блуз, Каллоу285,
Галлагер и Кох 286, Каллоу и Паркес 287). Этими исследова-
ниями был установлен ряд чрезвычайно существенных фактов,
соблюдение которых обеспечивает необходимую точность реак-
ции. Прежде всего, по согласному мнению большинства, воз-
раст петухов не имеет большого значения — допускаются ко-
лебания от 4 месяцев до 6 лет. Далее, установлено, что по-
вторные исследования на одних и тех же петухах не меняют
точности реакции. Вес подопытных птиц, равно как и началь-
ный размер гребня, также не имеют существенного значения,
благодаря чему отпадает необходимость расчета дозы на вес
петухов.
197
Из бесспорно необходимых условий для точности реакции
на первом месте стоит тщательность кастрации. Необходимо,
чтобы удаляемые семенники были извлечены целыми, без по-
вреждений. Всякое нарушение целости желез, хотя бы с по-
следующим удалением видимых остатков, может сопрово-
ждаться сохранением части органа, что скажется на точности
реакции. Огромное значение имеют также растворители пре-
парата, пути введения и количество введений. Ввиду того
что гормоны мужской половой сферы относятся к стеронам,
пригодными для введения растворителями являются расти-
тельные масла. Необходимо, чтобы препараты растворялись
в лучше всего всасывающихся маслах, не оказывающих местно
раздражающего действия. Определенных требований и огра-
ничений в этом отношении указать нельзя. По нашим наблю-
дениям, хорошие сорта оливкового и персикового масла
вполне могут заменить отсутствующее у нас и особенно ре-
комендуемое в заграничной литературе масло Arachis (зем-
ляного ореха). Объем вводимого количества оказывает на
точность реакции весьма большое влияние (Гринууд и др.),
почему сравниваемые препараты должны всегда вводиться
в равных количествах растворителя.
Из всех путей введения признан лучшим и рекомендован
и Международной комиссией путь внутримышечный — в груд-
ные мышцы, хорошо развитые у петухов. Крайне интересное
введение непосредственно в гребень или даже путем смазы-
вания гребня с поверхности, заманчивые своей простотой,
полного признания еще не получили, хотя некоторым авторам
удавалось при наружном применении получать прекрасный
эффект (Тшоп 288).
Вопрос о числе и длительности введений, особенно по-
дробно разработанный Галлагером и Кохом, по согласному
мнению большинства, подтвержденному авторитетным мне-
нием Международной комиссии, решается таким образом, что
введения испытуемого вещества один раз в день должно
длиться 5 дней. Этот порядок лучше всего обеспечивает тре-
буемый результат — отчетливо определяемое небольшое уве-
личение гребня и его покраснение.
Промежуток между отдельными испытаниями на одних и
тех же петухах, по разным авторам, подвержен значительным
колебаниям. По нашим данным, обратный процесс, т. е. воз-
вращение гребня к первоначальному, атрофированному виду,
идет крайне быстро и уже на второй-третий день иногда
нельзя отметить результаты действия гормона (если доза да-
вала именно начальный эффект). Отдых птиц в течение трех
недель, повидимому, полностью возвращает им нормальную
восприимчивость и гарантирует от опасности получения сум-
марного действия. Следует оговориться, что Гринууд с сотруд-
никами, правда, вообще склонные к крайним мнениям, реко-
мендуют даже после минимальных доз выжидать не менее
198
месяца. Эти же авторы считают нужным начинать работу на
петухах лишь по истечении года после кастрации. Такой дли-
тельный срок следует считать излишним. Вполне возможно
начинать испытание на птицах, у которых наступившие явле-
ния максимальной атрофии гребня остаются без изменения
в течение месяца. Весь этот процесс занимает несколько ме-
сяцев.
Изучение реактивной способности петухов по отношению
к гормонам мужской половой сферы делает понятным, почему
именно опыт на каплунах считается наиболее удобным. Во
всех перечисленных выше реакциях на млекопитающих по-
лучение полного устранения атрофических явлений не удается
вовсе или удается лишь с большим трудом, независимо от
того, каким веществом будет вызываться регенерация. На
каплунах полное возвращение к норме гребня является делом
вполне возможным и чрезвычайно демонстративным. Для
этой цели требуются, правда, относительно огромные коли-
чества препаратов и длительное их введение. Для андросте-
рона, по Каллоу и Паркесу, требуется ежедневное введение
2,5—5 мг в течение нескольких недель. Когда прежние, раз-
меры гребня будут достигнуты, для поддержания его на нор-
мальном уровне требуется введение 1 мг в день. Огромное
значение этой реакции станет понятным, если вспомнить, что
гребень у нормальных петухов породы леггорн достигает
размеров ладони взрослого человека, а у каплунов умень-
шается в длину, вышину и толщину в несколько раз, прибли-
жаясь к размерам гребня у кур обычных пород.
Техника подготовки петухов к опыту сводится к следую-
щему.
Для удаления семенников мы пользуемся одномоментной
операцией, вопреки некоторым указаниям на желательность
удаления в два приема. Петуха кладут на бок, причем одно
боковое положение сразу вызывает у него успокоение, напо-
минающее гипнотическое состояние, что позволяет проводить
операцию без наркоза. Предварительно в области подреберья
с боков выщипываются перья. Помощник оператора удержи-
вает петуха за ноги и шею в боковом положении. Для уда-
ления семенника проводят разрез длиной 3—4 см между
двумя последними ребрами. Далее, предоставив другому по-
мощнику максимально растягивать края раны, захватывая
крючками ребра и раздвигая их, хирург тупым пу-тем, разде-
ляя воздушные камеры и раздвигая кишечные петли, отыски-
вает очень глубоко лежащий семенник, отчетливо видимый
сверху. Осторожно подходят к органу, стараясь не разо-
рвать крупных сосудов, и удаляют яичко вместе с оболочками
тупым путем. Очень хорошо это удаление удается при по-
мощи тонзиллотома. Проволочная петля заводится под яичко
и тупым путем отделяет его от окружающих тканей. При
правильно проведенной операции семенник извлекается со-
199
вершенно целым, и операция не сопровождается кровотече-
нием. Если кровотечение наступает, то его следует останавли-
вать тампонами, так как отыскание сосудов, очень глубоко
расположенных в ране, затруднительно. Яичко взрослого
петуха имеет в длину 2—4 см, характерного цвета и формы
и не может быть ни с чем смешано. Одним швом соединяют
ребра, для закрытия кожной раны накладывают 2—3 шва.
Удачное выполнение операции зависит от освещения опера-
ционного поля, всегда крайне затемненного окружающими
тканями. Второй семенник удаляется точно таким же спосо-
бом. Полного соблюдения стерильности не требуется. Смерт-
ность петухов (от последующего кровотечения) не очень ве-
лика и составляет 10—20%. Из осложнений отмечаются по-
явления на месте шва подкожных воздушных пузырей, обра-
зующихся в связи с нарушением перегородок воздушных ка-
мер в грудобрюшной полости, свойственных птицам. При по-
явлении таких пузырей воздух из них выпускают при по-
мощи иглы. Оперированные петухи должны содержаться по
одному в клетке, тщательно очищаемой каждый день. Пища
во избежание различных явлений авитаминозов должна быть
смешанной, например, овес, каша, отруби, дрожжи и корне-
плоды. Кроме изменений в размерах и окраски гребня, а так-
же и бороды, у каплунов параллельно с этими атрофически-
ми явлениями отмечается изменение в поведении и характере.
Они перестают драться, делаются вялыми.
При проведении опыта необходимо соблюдать правила,
вытекающие из общих положений о биологических методах
оценки и из указанных выше особенностей данной реакции.
Подлежащий испытанию и стандартный препараты должны
быть растворены в одном и том же растворителе и вводиться
в одинаковых объемах. Введение должно производиться в
одно и то же время и одинаковым путем. Каплуны, на кото-
рых производится сравнение действия испытуемого и стан-
дартного препаратов, должны быть по возможности кастри-
рованы в одно и то же время и обязательно быть одной по-
роды. Во всяком случае время отдыха всех подопытных пету-
хов не должно быть меньше определенного, принятого в дан-
ной лаборатории срока (в Государственном институте экспери-
ментальной эндокринологии в Москве — 3 недели). Введение
делается раз в день в одно и то же время поочередно в пра-
вую и левую грудные мышцы. Мы стараемся ограничить
объем однократной дозы 0,5 см3. Все наблюдение продол-
жается 5 дней.
Для суждения об увеличении гребня можно пользоваться
разными методами — от простейшего измерения гребня до
пользования аппаратом, измеряющим количество света, погло-
щаемого каким-либо телом. Рекомендовалось более или менее
точное измерение площадей фотоснимков гребня в нормаль-
ную величину или даже сравнение веса таких снимков, обре-
200
занных по контуру гребня. Критерием для суждения о дей-
ствии является рост гребня через 5 дней. Требуется, чтобы у
каплунов можно было отметить начальную степень роста
гребня, что обычно сопровождается и его покраснением. На-
сколько можно судить по литературным данным, применение
для измерения специальной аппаратуры, измерение площадей
не оправдывается потребностями реакции. Точно так же как
довольно необычно и неожиданно оказалось ненужным вво-
дить препарат пропорционально весу, повидимому, не тре-
буется и большой тщательности в измерении. Такие осторож-
ные исследователи, придирчиво относящиеся к соблюдению
разных мелочей в опыте, как Гринууд, считают вполне воз-
можным ограничиться измерением максимальной длины и ма-
ксимальной вышины гребня. Они полагают, что увеличения по
обоим размерам на 5 мм вполне достаточно для характе-
ристики положительного действия.
Отсутствие потребности в скрупулезном измерении роста
гребня отчасти может быть объяснено и тем, что, кроме этого
объективного признака действия мужского полового гормо-
на, эффект от него сказывается еще и в общем изменении
поведения, большей подвижности, драчливости, изменении
осанки, сразу характеризующими препарат. Кроме того, очень
важным признаком служит и покраснение гребня.
В фармакологической лаборатории Государственного ин-
ститута экспериментальной эндокринологии в Москве мы
пользуемся измерением гребней по двум размерам — макси-
мальной длины и максимальной ширины, — проводя эти изме-
рения перед введением препарата и затем повторяя их
ежедневно до конца наблюдения (не менее пяти дней).
До введения понятия международной ЕД каждый автор
понимал под 1 ЕД произвольную величину. Были ЕД мыши-
ные, крысиные, эякуляторные (на морских свинках), рыбьи,
петушиные и т. д., причем каждая из этих единиц бесконечно
вариировала в зависимости от возраста животных, длительно-
сти эксперимента, методов измерения активности, объектов
изменения и т. д.
В настоящее время по предложению Международной ко-
миссии за 1 ЕД принимается активность 0,1 мг синтетического
андростерона, имеющего точку плавления в пределах 183,5—
184,5°. Активность этого препарата такова, что введение его
каплунам в указанной дозе в течение 5 дней, т. е. всего в ко-
личестве 0,5 мг, вызывает начальную степень изменений в
гребне. Рис. 19, 20 и 21 иллюстрируют один опыт испытания
кристаллического андростерона.
Испытание препаратов ведется таким образом, что опре-
деляют дозу испытуемого вещества, вызывающую эффект,
равновеликий эффекту, вызванному стандартным препаратом
в указанной дозе или несколько измененной, если это потре-
бовалось по реакции каплунов. Гринууд и другие считают, что
201
точность этой реакции довольно высока и что ошибка соста-
вляет ± 18%. Изучение ими кривой зависимости между до-
зой и эффектом показало, что эта кривая идет на определен-
Рис. 19. Кастрированный петух с атрофированным гребнем.
ном отрезке прямолинейно, и что, таким образом, данный ме-
тод в пределах определенных доз (именно вызывающих
Рис. 20. Тот же петух после введения ему в течение 4 дней по 0,1 мг
кристаллического андростерона.
небольшой рост гребня) дает пропорциональное дозам изме
нение эффекта.
Для характеристики стандартного препарата можно СО'
•слаться на некоторые данные о его влиянии на млекопитакт
щих. Так, например, по Коренчевскому 289 с сотрудниками, тре
202
буемое их методом увеличение размеров у кастрированных
крыс семенных пузырьков, предстательной железы и полового
члена достигается ежедневным введением 0,17 мг андросте-
рона. По Каллоу и Динелей 290, для возвращения к норме веса
простаты кастрированных крыс требуется ежедневно в тече-
ние 14 дней вводить по 1 мг андростерона. Интересно, что
для мышей этого количества оказывается недостаточно. У
крыс, кастрированных до половой зрелости, даже 20 мг в
день не давали возвращения к норме предстательной железы
и особенно семенных пузырьков.
Эти данные приводятся лишь для характеристики препа-
рата, принятого в качестве международного стандарта. Логи-
Рис. 21. Тот же петух после введения ему в «течение 8 дней по 0,1 мг
кристаллического андростерона.
ческое продолжение обзора требовало бы описания результа-
тов огромного количества работ, посвященных сравнительному
изучению других гормонов мужской сферы, в первую очередь
выделяемого из семенников тестостерона, далее — дигидроан-
дростерона (андростандиоля), дегидроандростерона и др.
Сравнительные данные об их действии можно найти, напри-
мер, у Коренчевского и Деннисона291 по андростандиолу, у
Каллоу и Динелей 292 по этому же препарату, у Давида, Дингс-
манзе и Лакёра и Динелей и Паркеса 293 по тестостерону и др.
Изложение этих данных выходит за пределы работы, тракту-
ющей о биологических методах оценки. Цитированные дан-
ные интересны для нас, однако, тем, что они устанавливают
гораздо более высокую активность тестостерона и андростан-
диола сравнительно с активностью андростерона. Тестостерон
вызывает рост гребня у каплунов в дозах, в 10 раз, а андро-
стандиол в 3 раза меньших сравнительно с дозами андросте-
рона. Кроме того, тестостерон, независимо от роста гребня, у
203
I
петухов вызывает у них гораздо скорее изменения в поведе-
нии, чем андростерон в соответствующих дозах (Б. Завадов-
ский и Несмеянова-Завадовская 2ЭЗ). Особый интерес привле-
кают к себе производные тестостерона, некоторые из которых
(например, пропионат) обладают особенно высокой актив-
ностью по отношению к млекопитающим (Ружичка294).
Оставляя в стороне детали различных методов на млеко-
питающих и сравнение между собой различных ЕД, имею-
щее богатейшую литературу, укажем лишь на интересные на-
блюдения о зависимости разных реакций от быстроты всасы-
вания препаратов. Так, Паркес 295 установил, что активность
разных препаратов мужской половой сферы повышается от
добавления жирных кислот, повышая их растворимость. Жир-
ные кислоты (например, пальмитиновая) активировали в числе
других препаратов и андростендион, являющийся насыщенным
дикетоном, что говорит против объяснения усиления действия
путем образования эстеров жирной кислоты. С другой сто-
роны, он же показал, что ацетаты и пропионаты мужских гор-
монов всасываются более медленно и потому действуют
более длительно. Интересна, далее, возможность пользоваться
растворимыми в воде солями мужских гормонов. В качестве
таковых Коренчевский, Деннисон и Симпсон 296 пользовались
литиевыми солями моноянтарнокислых эстеров андростерона
и андростандиоля. Точно так же, аналогично гормонам жен-
ской половой сферы, бензоат андростерона оказывает более
длительное действие, чем чистый андростерон (Каллоу 297).
Серьезный вопрос о том, можно ли считать андростерон под-
ходящим стандартом для испытания различных синтетических
продуктов, решается Международной комиссией, по крайней
мере по отношению к искусственно эстерифицированным пре-
паратам, отрицательно.
При пользовании андростероном как стандартом всегда
приходится иметь в виду, что это вещество не является тем
гормоном или одним из тех гормонов, которые продуциру-
ются тестикулами, что было уже указано выше. Имеется це-
. лый ряд данных, подчеркивающих эту разницу и возможность
ошибок, основанных на ней. Так, например, Дингеманзе,
Фрейд и Лакёр 298 приводят результат сравнительного испыта-
ния на крысах препаратов из мочи (т. е. типа андростерона) и
из семенников, содержавших одинаковое количество ЕД по
определению на каплунах. Оказалось, что препараты из мочи
увеличивали рост вторичных половых желез в 2—5 раз менее,
чем препараты из тестикул. Более того, даже препарат из
мочи, не полностью очищенный, лучше действовал на тепло-
кровных в опытах Каллоу и Динелей 2", чем кристаллический
андростерон. Таким образом, делается понятным относитель-
ность для клиники данных, получаемых путем биологической
оценки препаратов мужских гормонов сравнительно с андро-
стероном. Поэтому представляется совершенно справедливым
204
предложение Международной комиссии указывать для всех
препаратов мужских гормонов их происхождение (моча, тести-
кулы или то и другое), метод, каким производилось сравне-
ние со стандартным препаратом, степень очистки препаратов,
если речь идет о химических продуктах, и характер их хими-
ческой природы и, наконец, конечно, всегда активность в ме-
ждународных ЕД.
Общепринятый метод испытания на петухах, как и всякий
метод, продолжает подвергаться критике, не всегда серьезной
и обоснованной. Заслуживает, например, быть отмеченным со-
вершенно неправильный подход к делу Равирец и Риверо 30°,
предлагающих вместо петухов пользоваться курами.
Не получили распространения одно время усиленно изучав-
шиеся реакции на рыбах-самцах кастратах. Под влиянием гор-
монов мужской половой сферы некоторые породы рыб (напри-
мер, лещей) способны внешне изменяться, приобретая вид,
свойственный самцам этих рыб к моменту икрометания (Глэ-
зер и Хемпель 301). У этих рыб отмечается при этом пигмента-
ция на определенных местах, покраснение хвостовых и спин-
ных плавников и другие изменения, которые держатся 6—
7 часов. Ввиду того, однако, что эти изменения наступают
также и от алкалоида иохимбина и некоторых других ве-
ществ, назначаемых как aphrodisiaca, Глэзер и Копия 302 впо-
следствии стали использовать этот метод для оценки именно
возбуждающих сексуальную деятельность веществ, а не спе
циально препаратов мужского гормона. Далее оказалось, что
увеличение яйцекладов у женских особей пескарей, наступаю-
щее под влиянием мочи беременных (Кантор, Бауер и
Клоуэнс З°3), имеет место и при воздействии как андростерона,
так и мужской мочи (Клейнер, Вейсман и Мискинд 304). Ввиду
того что изменение окраски рыб может наступать и от гормо-
нов гипофиза (интермедин — Цондек и Крон 305), этот метод,
конечно, не может считаться специфическим. Мюллер 306 счи-
тает метод на рыбах непригодным потому, что он дает поло-
жительный результат с заведомо неспецифичным веществом —
спермином, тогда как химически чистыми гормонами измене-
ния окраски вызвать не удается.
Заслуживают также внимания своеобразные методы, осно-
ванные на предположительном антагонизме между мужскими
и женскими половыми гормонами. Так, указывалось на воз-
можность вызвать препаратами мужского полового гормона
на несколько дней выпадение зачатия крольчих после coitus’a
и на способность мужских гормонов задерживать обусловли-
ваемое проланом образование кровоизлияний в яичниках
(Аурисикио 307). Весьма интересно наблюдение де Ионга 308 о
задержке препаратами из мочи мужчин и семенников разви-
тия гипертрофии предстательной железы у мышей, у которых
этот процесс вызывается женскими гормонами. Сели, Маклуен
и Коллип 309 указывают на способность тестостерона вызы-
205
вать некоторое увеличение роста грудных желез и отделения
молока у крыс.
Аналогично попыткам колориметрически испытывать гор-
моны женской половой сферы Эстинг310 попытался использо-
вать колориметрический метод и для мужских гормонов. Пред-
лагаемый им метод, невидимому, особенно пригоден для кли-
нических определений содержания гормона в суточном коли-
честве мочи. Реакция сводится к экстракции гормонов бензо-
лом, затем некоторой их очистке и сравнений окраски подще-
лоченных спиртовых растворов с растворами метадинитробен-
зола определенной концентрации.
Вопрос о том, каким требованиям должны удовлетворять
активные препараты мужских гормонов, сейчас нельзя считать
решенным. Объяснением этому факту служит то обстоятель-
ство, что показания к применению препаратов мужских гор-
монов и дозировка клиникой еще не установлены. Та не-
ясность значения андростерона и реакции на петухах, которые
были указаны выше, приводят к тому, что со стороны клини-
цистов все чаще высказывается мнение о целесообразности
использования не чистых гормонов, а нативных препаратов из
мочи и особенно семенников. Эта постановка вопроса уже
сильно уменьшает возможность иметь высокоактивные, по
расчету на стандартный препарат, продукты. В настоящее
время активность выпускаемых за границей препаратов (совет-
ская промышленность еще только приступает к их выработке),
по литературным данным, колеблется от долей до 20 ЕД (при
испытании на петухах).
Позволительно, однако, высказать предположение, что и
химически чистые гормоны мужской половой сферы смогут
найти себе клиническое применение и именно в дозах очень
больших — подобно тому, как мы это видели для гормонов
женской половой сферы.
Приводимые в заключение данные показывают, в каких до-
зах основные гормоны мужской половой сферы вызывают
рост гребня у петухов.
Тестостерон.............. 10 —15? в день
Андростерон..............100т * *
Дегидроандростерон....... 400? т> »
Андростандиол (дигидроандростерон) 50? » »
Таблица составлена по данным различных исследователей
(Ружичка, Лакёр, Галлагер и Кох и др.).
Будущее покажет, какому из этих веществ сможет быть
с наибольшим правом присвоено название мужского полового
гормона. Уже теперь можно думать, что это скорее относится
к тестостерону, чем к андростерону и его аналогам.
ГЛАВА X
ПРЕПАРАТЫ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Активные начала препаратов щитовидной железы пред-
ставляют собой группу веществ, обладающих одним общим им
всем свойством — содержанием иода. Изучение химии дей-
ствующих начал различных производных щитовидных желез
уже имеет свою историю. Из щитовидной железы было выде-
лено действующее начало, которому было дано название ти-
роксина. Проделавший эту работу Кендал311 дал предполагае-
мую формулу строения тироксина. Вопрос о строении послед-
него подвергся пересмотру. Харрингтон 312, исследовавший этот
вопрос, дал новую формулу тироксина. По Харрингтону, ти-
роксин представляет собой параоксидииодфенилэфир дииод-
тирозина. Строение его представляется в следующем виде:
он/ \-0-< >СНг СН(ННг)СООН
Т- I
Выделяемый из щитовидных желез тироксин обладает
свойствами, присущими активным препаратам железы. Химиче-
ское изучение природы тироксина было проделано настолько
основательно, что к настоящему времени он получен синтети-
чески.
Тироксин, невидимому, не является единственным гормо-
ном, продуцируемым щитовидной железой, так как при рас-
чете на общее содержание иода в железе в виде тироксина
может быть выделено лишь около 60% иодистых соединений.
Известно, что специфическая активность как самой железы,
так и препаратов из нее прямо пропорциональна всему содер-
жанию в них иода. Простым определением иода можно с до-
статочной точностью установить активность препаратов.
Таким образом, вопрос получает наилучшее и наипростей-
шее разрешение. Так оно и могло бы быть на самом деле, если
бы сюда не примешивалась возможность простой фальсифика-
ции препаратов путем прибавления к ним иода в той или иной
форме (в виде иодированного белка, солей иодистоводород-
ной кислоты и т. д.). Такие препараты, будучи даже и очень
207
богатыми иодом, окажутся терапевтически неактивными, так
как активность препаратов щитовидной железы зависит не от
простого содержания в них иода, а от богатства иодом, вхо-
дящим в состав действующих начал железы. Естественно, что
для таких фальсифицированных препаратов химическое опре-
деление иода приведет к ошибочному заключению и об их
терапевтических свойствах. Путем химического определения
можно, следовательно, итти только тогда, когда имеется пол-
ная уверенность в доброкачественности препаратов. Для
СССР, между прочим, это имеет большее, чем для какого-ни-
будь другого государства, значение, так как, благодаря цен-
трализации медицинского снабжения, имеется полная гаран-
тия добросовестности производства. Как бы то ни было, к на-
стоящему моменту имеется налицо простой и удобный путь
определения активности препаратов при помощи химического
анализа. Поэтому приходится признать,- что значение биологи-
ческого метода в данном случае как единственного
способа оценки утрачено.
Методы биологической оценки препаратов щитовидной
железы имеют все же значение как для испытания новых ви-
дов препаратов (например, разным способом приготовленные
жидкие препараты), так и в качестве нужных и интересных
для разрешения разного рода экспериментальных задач. По-
этому является целесообразным краткое изложение этого
предмета. Интересно, что, не вводя биологической оценки пре-
паратов щитовидной железы в качестве обязательных, Между-
народная комиссия по биологической стандартизации дважды
(в 1925 и 1928 гг.) подтвердила желательность их биологиче-
ской проверки.
Действие гормона щитовидной железы на животный орга-
низм может быть в общем определено в одном понятии уси-
ления клеточного обмена веществ. Экспериментально это бу-
дет выражаться различно в зависимости от того, кому, в ка-
ком периоде жизни и при каких условиях будут вводиться
препараты, содержащие гормон железы.
Самым прямым путем будет непосредственная регистрация
обмена, которая позволит отметить это усиление, увеличение
поглощения кислорода и выделения углекислоты. При дли-
тельном кормлении препаратами, приготовленными из щито-
видной железы, повышенный обмен поведет к повышению
процессов распада в клетке, что скажется в прогрессивном па-
дении веса подопытных животных. Усиление процессов об-
мена в растущем организме скажется иначе, так как процессы
развития пойдут скорее и организм в ущерб общему росту
даст картину более быстрого созревания. Это особенно отчет-
ливо сказывается у животных, претерпевающих естественным
путем превращение одного вида в другой, как, например, при
переходе головастиков в лягушек, или аксолотлей, превра-
щающихся в амблистому. Влияние гормона щитовидной же-
208
лезы на организм принимает различный характер в зависи-
мости от того, дается ли он нормальным или тиреоидэктоми-
рованным животным (т. е. таким, у которых щитовидная же-
леза удалена оперативным путем).
Приведенные свойства гормона щитовидной железы дол-
жны быть отнесены к общеизвестным. Кроме них, отмечался
еще целый ряд других сторон действия. Так, например, ха-
рактерным для препаратов щитовидной железы свойством счи-
талось их отношение к адреналину, действие которого усили-
вается препаратами железы (Краус и Фриденталь313). Способ-
ность активировать действие адреналина вряд ли может быть
признана специфичной, так как активность адреналина легко
усиливается под влиянием воздействия различных органотера-
певтических экстрактов и даже просто отдельных аминокислот
(Абдергальден и др.).
Кроме этого свойства щитовидной железы, отмечена еще
способность последней вызывать повышение креатин-креати-
нинового обмена, уменьшение или даже полное удаление гли-
когена из печени кроликов, крыс и кошек, понижение сопро-
тивляемости крыс к повышению температуры и лишению кис-
лорода, повышение возбудимости нервов (Ашер314, Ост-
вальд 315), изменение вязкости крови и содержания белка в сы-
воротке и др.
Очень характерным и совершенно специфичным остается
свойство гормона щитовидной железы менять сопротивляе-
мость мелких лабораторных животных по отношению к ацето-
нитрилу — яду, резко действующему на организм вследствие
отщепления в последнем синильной кислоты.
Перечисленные вкратце физиологические свойства щитовид
ной железы дают богатую почву для выбора метода биологи-
ческой оценки. С этой целью были использованы очень многие
из них. Большинство из предлагавшихся методов оказывалось
неподходящим или из-за неточности получаемых при их по-
средстве результатов, или из-за сложности и длительности
опыта, и лишь некоторые оправдали себя на практике, дока-
зав свою пригодность тем, что результаты, полученные при
их помощи, оказались совпадающими с данными клиники. Не
имея возможности даже в общих, чертах рассматривать все
эти методы, отметим только, что способы оценки экстрактов
щитовидной железы по их действию на блуждающий нерв и
симпатические яды не оправдали себя совершенно и в прак-
тике не удержались. Дающие удовлетворительные резуль-
таты методы, основанные на ускорении метаморфоза (Гудер-
нач316) головастиков и аксолотлей, оказались трудно приме-
нимыми на практике из-за своей продолжительности.
Кроме различных способов, основанных на физиологиче-
ском эффекте препаратов щитовидной железы, предлагалось
воспользоваться для целей биологической стандартизации по-
следних вызываемым ими токсическим эффектом путем опре-
— 617
20у
деления дозы, способной снижать вес у морских свинок на
10% (Крейтмар 317) или даже смертельной дозы для этих жи-
вотных (Фрейнд и Нобель318).
На практике лучшими из методов оказались, во-первых, ме-
тод, основанный на изменении сопротивляемости по отноше-
нию к ацетонитрилу, и, во-вторых, разные модификации мето-
дов, основанные на определении изменений веса и газового
обмена. При сравнении между собой данных, получаемых раз-
личными путями биологических исследований и при помощи
химического определения иода, оказалось, что данные всех
методов совпадают.
Лучшим из методов биологической оценки препаратов щи-
товидной железы следует признать ацетонитриловый метод.
Преимущества его, кроме высокой специфичности, лежащей
в основе его реакции, заключается еще и в его относитель-
ной быстроте. В своей первоначальной редакции метод этот не
заслужил одобрения даже самого автора (Рейд Хэнт 31Э), кото-
рому не удавалось при его помощи получать согласных ре-
зультатов. Сущность методики лежит в определении той дозы
препарата, которая способна вызвать известное повышение
сопротивляемости мышей по отношению к ацетонитрилу.
Степень повышения сопротивляемости можег быть измерена
увеличением минимальной токсической дозы ацетонитрила,
необходимой для отравления мышей. Процессы, благодаря
которым щитовидная железа оказывается способной так
изменить свойства организма, неясны, но, по предложению
некоторых, должны быть сведены к процессам изменения об-
мена веществ (Штрауб 320). Естественная борьба организма с
ацетонитрилом сводится к превращению отщепленной от него
синильной кислоты в родан. Ацетонитрил CH3CN, отщепив от
себя метиловую группу, действует на организм группой CN;
усилением способности перевода этой группы в родан (CHNS)
объясняют повышение сопротивляемости после введения
активных начал щитовидной железы. Такое объяснение, быть
может, и подходящее для частного случая с мышами, лишено
необходимой широты, так как уже у таких близко к мышам
стоящих животных, как крысы и морские свинки, щитовид-
ная железа меняет отношение в обратную сторону: после
введения ее препаратов сопротивляемость этих животных
к ацетонитрилу падает; количество потребного для вызывания
токсического эффекта яда делается после щитовидной железы
меньше (Рейд Хэнт). Между тем для этих же животных нам
известна их совершенно сходная с мышами реакция на пре-
параты щитовидной железы вообще; например, хотя бы па-
дение веса, одинаково вызываемое последними у тех и дру-
гих.
Неточность и несовпадение результатов в первых редак-
циях методики зависели от ряда внешних причин. К числу
таких относилась прежде всего неправильная дозировка, так
210
как она зависела от того, сколько мыши съедят пищи, содер-
жащей испытуемый препарат, от выбора животных, пищи, ко-
торой они вскармливались до опыта и т. д. Возраст, пол жи-
вотных, время года, в которое производились опыты, далее
сам вопрос о том, что же считать за количественный эффект
препарата, — все это запутывало картину. К настоящему мо-
менту вся техника методики пересмотрена и усовершенство-
вана настолько, что ^Международная комиссия рекомендует
пользоваться ею в последней модификации Хафнера и Ко-
мияма 321.
По исследованию этих авторов, прежде всего оказалось,
что уже для получения однотипной реакции мышей на один
ацетонитрил требуется соблюдение целого ряда условий.
Сюда прежде всего относится содержание мышей до опыта.
Для того чтобы мыши одинаковым образом реагировали на
ацетонитрил, нужно, чтобы они в течение долгих предше-
ствующих опытам недель находились в совершенно одинако-
вых условиях. Пища мышей вообще должна состоять из овса,
черного хлеба и воды; в течение последних 7 дней, предше-
ствующих опыту, мыши получают только овес и воду. Для
опытов пригодны только самцы весом 20—25 г. За 4 часа до
начала опыта мышей перестают кормить; взвешивание произ-
водится после сказанного четырехчасового голодания с точ-
ностью до 0,1 г, что необходимо для правильной дозировки
ацетонитрила, вводимого в определенных количествах на 1 г
веса мышей. Мыши, не подвергшиеся длительному специаль-
ному режиму, а поступившие для опыта прямо от продавцов,
дают колебания в сопротивляемости, достигающие 300%.
Отравление ацетонитрилом выражается у мышей явлениями
задушения, развивающимся постепенно в связи с постепенным
же отщеплением от ацетонитрила синильной кислоты. Своего
полного развития отравление достигает через %—1 час, когда
наступает картина тяжелого коматозного состояния с
удушьем. Смерть наступает не сразу: от момента наивысшего
действия яда до смерти может пройти несколько часов. Нужно
оговориться, что смерть не является непременным следствием
картины полного отравления и мыши могут совершенно опра-
виться через 10—20 часов и возвратиться в нормальное состоя-
ние. Отщепление синильной кислоты ацетонитрилом в орга-
низме мышей стоит в зависимости от температуры окружаю-
щего мышей воздуха. В связи с этим вся картина отравления
течет или более резко и быстро, или более медленно. При бо-
лее резком течении процесса изменение его предварительными
Дачами препаратов щитовидной железы затрудняется. Поэтому
Для опытов предлагается держать мышей при температуре
18—20°. Указывавшаяся ранее разница в реакции мышей на
ацетонитрил в разное время года не наблюдается при соблю-
дении указанных температурных условий. Ввиду того что при
^ведении ацетонитрила непосредственно в вену процесс отра-
14 * 211
вления течет более регулярно и правильно, чем при введении
под кожу, рекомендуется делать инъекцию в хвостовую вену;
дозы при том и другом способе введения остаются почти рав-
ными. концентрация вводимых растворов ацетонитрила, есте-
ственно, должна быть постоянной, причем растворы должны
содержать 0,9% поваренной соли. При выборе дозы при-
нимаются во взимание следующие соображения: прежде всего
одна и та же доза должна давать совпадающий эффект по
меньшей мере у четырех мышей. Для опыта берется погранич-
ная смертельная доза. Под таковой понимается та доз^, кото-
рая лежит несколько ниже минимальной дозы, вызывающей
смерть у всех животных. Сравнительно высокая точность реак-
ции мышей на ацетонитрил позволяет определить две отли-
чающиеся друг от друга на 25% дозы (при отношении мень-
шей к большей, как 3:4, из которых большая будет вызывать
смерть у всех мышей, а от меньшей все мыши останутся
живы). Средняя из этих двух доз будет искомой пограничной
смертельной дозой; из приведенного расчета явствует, что по-
граничная смертельная доза будет на %, т. е. на 12,5%, ниже
смертельной дозы.
Наиболее удобной для опыта оказалась концентрация рас-
творов ацетонитрила, равная 9%, что соответствует содержа-
нию 0,09 г ацетонитрила в 1 см3. Определенная с точностью до
zt 15% смертельная доза равняется 0,01 см3 этого раствора на
1 г веса мышей (растворы разной концентрации действуют
различно, причем более слабые концентрации являются отно-
сительно более активными). Таким образом, 0,9 мг ацетони-
трила в растворе указанной концентрации являются дозой, по
требной на 1 г веса мышей для того, чтобы вызвать отравле-
ние- Ввиду указанных колебаний в точности реакции (zt 15%)
доза эта одновременно может считаться как смертельной, так
и пограничной, нужной для опыта. Мышам вводят столькэ
сантиграммов раствора, содержащего в 1 см3 0,09 г ацетони
трила, скольким граммам равняется вес мыши; мышь 20 г ве
сом должна получить 0,2 сг раствора, 18 г — 0,18 сг и т. д.
При всяком испытании препаратов щитовидной железы
одновременно каждый раз на 4—6 мышах проверяется сопро-
тивляемость мышей того запаса, на которых ставится опыт.
Для проверки трем группам мышей, по два животных в груп-
пе, вводят разные близкие к средней дозы. Одной группе
вводят обычную дозу, т. е. 0,01 сг раствора на 1 г вес‘а,
двум другим — несколько меньше и больше с тем, чтобы пер-
вая была на 25% меньше, а вторая на 25% больше средней.
Таким образом, выразив обычную дозу через %, получим
ряд — %, % и % — количества сантиграммов на 1 г веса
Если сопротивляемость мышей нормальна, то нужный эффект
получится от средней дозы. Для мышей, получающих пред
варительно тиреоидиновые препараты, доза пбвышается в не-
сколько раз, так как целью опыта являетс-я определение той
212
дозы испытуемого образца, которая окажется спЬсобной по-
высить сопротивляемость мышей вдвое, т. е. потребует
для отравления мЁппей двойного количества ацетонитрила.
На основании опыта установлено, что достаточно точные дан-
ные получаются в том случае, если количество санти-
граммов на 1 г веса животного увеличивается в опреде-
ленной прогрессии. Если, таким образом, для получив-
ших предварительно испытуемый препарат мышей взять для
начала дозу, на 33% превышающую среднюю, то количе-
ство сантиграммов на 1 г веса будет равно 1,33 нормальной
дозы, или %. Придерживаясь этого расчета в дальнейшем,
т. е. увеличивая каждую последующую дозу на 33% основ-
ной дозы, мы получим ряд доз, представляющих собой ариф-
метическую прогрессию, которые составятся из %, %, %, 7/з сг
основного раствора на 1 г мыши. Если теперь доза, равная •
% сг на 1 г веса, окажется достаточной, т. е. вызовет нужную
картину отравления, тогда как меньшие ее не дадут, то мы
как раз будем стоять перед фактом увеличения сопротивляе-
мости мышей на 100%, так как вместо 1 сг на 1 г мыши в та-
ком случае потребуется уже 2 сг ацетонитрила. При пересчете
нужно помнить, что прямая пропорциональность сохранится
только в том случае, если и в опыте, и в контроле эффект оди-
наков, т. е. имеется в обоих случаях картина смертельного
действия или только наступления пограничного эффекта. Как ,
было указано выше, смертельная доза лежит несколько выше
пограничной. Соответствующая поправка вносится в расчет.
Если, например, % в контрольном опыте оказались погранич-
ной дозой, то двойная смертельная доза в опыте с предвари-
тельным кормлением щитовидной железой будет не %, а не-
сколько больше, примерно 7/з *.
Введение препаратов щитовидной железы рекомендуется
производить единственным путем — через зонд в желудок, так
как подкожное введение не' дает точных результатов. В целях
равномерности реакции все животные ставятся в одинаковые
условия всасываемости, для чего введение производится после
предварительного четырехчасового голодания. Абсолютное ко- .
личество вводимой в желудок жидкости, содержащей препа-
раты щитовидной железы, принимается равным 0,2 г на 20 г
веса с соответствующими изменениями при колебании веса.
Главная сущность предложенных Хафнером и Комияма из-
менений заключается в способе определения качества разных
препаратов щитовидной железы. На основании огромного ко- *
личества опытов, имевших целью изучить быстроту наступле-
ния эффекта в зависимости от дозы, концентрации действую-
щих начал, продолжительности введения препаратов и т. д., и
на основании тщательной проверки точности методики был
выработан определенный способ испытания тиреоидных пре-
♦ 4/j 7з и т. Д- употребляются сокращенно в указанном выше смысле.
* 213
паратов. Смысл его заключается в определении дозы препара-
тов, способной при однократном введении голодавшим 4 часа
мышам вызвать повышение сопротивляемости к ацетонитрилу
вдвое, которое будет иметь место через 24 часа после введе-
ния препарата. Из опытов вышеупомянутых авторов выясни-
лось, что разнообразные концентрации препаратов дают в об-
щем однообразный эффект, заключающийся в среднем в по-
вышении сопротивляемости вдвое. Особенно ценным является
факт наступления реакции от однократного введения, что при-
обретает особое значение хотя бы потому, что однократное
введение на пустой желудок создает гораздо более правиль-
ные и более поддающиеся сравнению условия, чем повторные
введения в течение нескольких дней. Ввиду того что объем
вводимого раствора остается по понятным причинам постоян-
ным, изменению подлежит концентрация веществ в растворе.
Для достаточно точного определения допускается разница
концентраций на 33% одна от другой. Таким образом, берут,
например, 10, 6, 7, 4, 5, 3 и 2°/о растворы препаратов
и определяют, какая из этих концентраций в дозе 0,2 г
на 20 г веса мышей окажется способной вызвать увеличение
сопротивляемости вдвое. Каждая доза испытывается на четы-
рех мышах. Ацетонитрил вводится так, как это было указано
выше, т. е. на небольшом числе животных ставится контроль-
ный опыт с введением по %-, %- и %-кратному количеству
сантиграммов 9% раствора на 1 г веса мышей; мышам же,
получившим разные концентрации препаратов, вводится аце-
тонитрил в соответственно больших количествах, которые вы-
разятся тем же путем через 4/з, %, 6/з и 7/з сг на 1 г веса.
Количество препарата, потребное для того, чтобы вызвать
у одной мыши нужное увеличение сопротивляемости при
однократном введении, носит название 1 ЕД. В случае уста-
новления препаратов на определенную крепость придержи-
ваются того правила, что хорошие препараты должны в 5%
растворе вызвать в дозе 0,2 г на 20 г веса мыши повышение
сопротивляемости вдвое, т. е., другими словами, 0,2 г 5% рас-
твора будет единицей действия.
В качестве контроля могут быть применяемы препараты,
содержание иода в которых равно 0,2%.
Введение сухих препаратов производится, как уже сказано,
в растворе. Если препарат нерастворим, то его вводят в виде
водной взвеси. Для жидких препаратов необходим соответ
ственный пересчет на сухой препарат с содержанием 0,2%
иода.
Для получивших в последнее время распространение жид-
ких препаратов щитовидной железы желательно проводить
испытание путем введения препарата подкожно. Следует
иметь в виду, что клинически активные препараты для инъек-
ций содержат иода в два и больше раза менее, чем сухие пре-
параты (0,08—0,1%). »
214
Что касается других способов испытания производных щи-
товидной железы, к которым в первую очередь должны быть
отнесены способы с определением падения веса и изменением
газового обмена, то сколько-нибудь подробное описание их
не представляет специального интереса, поскольку воспользо-
ваться этими методами с практическими целями биологической
сценки не представляется удобным ввиду хотя бы их отно-
сительной продолжительности.
О недавно описанном методе (Руденко 322), основанном на
определении усиления посмертного аутолиза в печени мышей,
получавших предварительно препараты щитовидной железы,
трудно составить себе определенное представление как в
связи с отсутствием достаточных данных о специфичности этой
реакции, так и из-за отсутствия сведений о том, какие требо-
вания по этому методу должны предъявляться к препаратам.
ГЛАВА XI
ГОРМОН ОКОЛОЩИТОВИДНЫХ ЖЕЛЕЗ
Специфическое действие экстрактов околощитовидных (па-
ратиреоидных) желез, несмотря на относительно давнее приме-
нение сухих препаратов из этих органов, было впервые пока-
зано Коллипом 323 с учениками. Изучая на собаках изменения
в организме, наступающие вслед за удалением околощитовид-
ных желез, Коллип поставил на первое место всегда сопут-
ствующее паратиреоидэктомии падение количества кальция в
крови, идущее параллельно тяжелым явлениям тетании, кото-
рая наступает у собак в результате этой операции. Изучая
способность разных экстрактов паратиреоидных желез устра
нять явления тетании с одновременным выравниванием содер-
жания кальция в крови до нормы, Коллип выделил активную
фракцию, названную им паратиреоидным гормоном. Характе-
ристика этого вещества как гормона оправдывается специфич-
ностью его действия, однако этот гормон по степени очистки
весьма уступает всем прочим гормональным продуктам. Дан-
ные о химических свойствах этого гормона крайне скудны.
Установлено, что это вещество является азотистым продуктом,
несколько напоминающим инсулин, аналогично последнему
связываясь органическими кислотами и одинаково относясь к
обычным органическим растворителям Далее была показана
относительно высокая стойкость гормона по отношению к хи-
мическим и физическим факторам, но в то же время сравни-
тельно легкая его разру аемость в присутствии пищеваритель-
ных ферментов. Оценка активности препаратов околощитовид-
ных желез возможна лишь биологическим путем.
Изучение фармакодинамических свойств препаратов, полу-
ченных по Коллипу, иногда называемых препаратами «гор-
мона Коллипа», показало, что основным моментом, характери
зующим действие препарата, является его способность повы-
шать кальций крови не только у паратиреоидэктомированных,
но и у здоровых животных. Одновременно с повышением со-
держания кальция выше нормы в организме животных отме-
чается связанное с этим увеличением повышение свертывае-
мости крови (Коллип на собаках, Бьюм.и Фенг 324 на кроли-
ках). При действии паратиреоидного гормона отмечается уси
216
ленное выведение с мочой фосфора, чем одно время объяс-
няли нарастание кальция крови и что было отвергнуто опы-
тами, показавшими нарастание кальция у животных с удален-
ными почками (Элльсворс и Фетчер 323 на собаках, Коллип,.
Пэгслей, Сели и Томсон 326 на кроликах) и у больных с почеч-
ной недостаточностью (Годбай и Стесей 327). Выделение фос-
фора мочой, по данным Брюля 327а, является результатом не-
посредственного действия паратиреоидного гормона на почки,
так как оно наблюдается и в опытах на изолированных поч-
ках. Параллельно с увеличением выведения фосфора мочой
отмечается уменьшение его содержания в крови.
Повышение кальция в крови ведет к изменению реакции
организма на некоторые токсические вещества, связываемые
кальцием химически или являющиеся по действию его антаго-
нистами. Таким образом, предварительным введением парати-
реоидных препаратов можно вызвать увеличение сопротивляе-
мости у мышей по отношению к щавелевокислому натрию и
фтористому натрию (Кохман 328) и снимать у мышей наркоз,
вызываемый слоями магния (Дайер 329, Симон 33°). Постановка
опытов на изолированных органах затрудняется плохой рас-
творимостью паратиреоидного гормона в слабо щелочной
среде изотонических растворов. Поэтому получаемые этим
путем данные менее достоверны.
При передозировке у животных наблюдаются явления отра-
вления, могущие заканчиваться смертью. По данным Коллипа,
у собак при этом отмечаются характерные воспалительные
изменения в слизистой оболочке кишечника. Эти наблюдения,
несмотря на отдельные возражения, подтверждаются, причем
Тейлор, Уельд, Скайзес331, желая изучить влияние парати-
реоидного гормона на хищных животных, показали это дей-
ствие даже на львах. С другой стороны, те расстройства в вы-
делении пищеварительных ферментов, которые наблюдаются
при удалении околощитовидных желез, устраняются гормо-
ном (Меркулов и Сперанская-Степанова 332). Паратиреоидным
препаратам присуща способность противодействовать искус-
ственно вызываемым процессам воспаления в разных органах.
Баранов и Сперанская-Степанова 333 наблюдали это по отноше-
нию к урановому нефриту, Гольд 334 — к образованию экссу-
дата в плевре от сернокислой меди. Наши наблюдения над
внутривенным введением значительных доз препаратов (0,5—-
1 см3 на 1 кг) кроликам и кошкам, нормальным и декапитиро-
ванным, показали, что эти количества в остром опыте не вы-
зывают никаких заметных .изменений в работе сердца, кровя-
ном давлении и дыхании.
Из этого краткого перечня свойств гормона околощито-
видных желез выясняется возможность разнообразных путей
для выработки методов биологической оценки. Известное огра-
ничение этому выбору ставится, однако, тем обстоятельством,
что большинство обычных лабораторных животных мало при-
годно для изучения нарастания кальция крови под влиянием
паратиреоидного гормона. Первоначальные наблюдения Кол-
липа о том, что лучше всех лабораторных животных на это
вещество реагируют собаки, подтвердились полностью. Повы-
шение кальция крови у здоровых собак при подкожном вве-
дении препарата идет медленно и достигает при достаточных
дозах наивысшей точки примерно через 15 часов. Реакция со-
бак на гормон околощитовидных желез близка к реакции на
этот препарат человека, что особенно подчеркивает целесо-
образность выбора этих животных для опыта. Попытки
использовать других животных для опытов с прямым опреде-
лением кальция крови до сих пор не дали успеха Расхожде-
ние данных отдельных авторов можно отчасти объяснить раз-
личными способами введения. Даже собаки, обладающие, не-
сомненно, довольно постоянной реакцией, ведут себя иначе,
если препарат вводится не под кожу, как обычно, а внутри-
венно. В последнем случае подъем кальция крови достигает
меньшей степени и наступает значительно быстрее — через
4—8 часов вместо 15 (Аллардайс 335). У кошек менее отчетли-
вая картина наблюдается гораздо скорее, однако нужного для
метода постоянства отметить нельзя. По Херцкеймеру 336, мак-
симальный подъем у кошек наблюдается через 2 минуты после
введения, по Тельдте 337 через 15 минут, а Стюарт, Персиваль и
Пэйдж 338 регулярно наблюдали эффект лишь через Р/г—
2 часа. У кроликов положительный эффект можно наблюдать
лишь от огромных доз (100 единиц на животное — Дайер 340,
Бергоцини ззэ). Данные наших наблюдений о чрезвычайно не-
постоянной реакции кроликов на паратиреоидный гормон пол-
ностью согласуются с данными Дайера, который не получил
равномерной реакции даже и в случае усиления эффекта пу-
тем добавочного введения кроликам per os препаратов каль-
ция. Морские свинки и крысы мало восприимчивы к паратирео-
идным препаратам. У крыс не отмечается прямого повыше-
ния кальция крови, но большие дозы ведут к пролиферации
остеокластов и в дальнейшем к резорбции костей (Сели, Мор-
тимер, Томпсон и Коллип341). Незначительный подъем каль-
ция крови у голубей отметили Ридль и Дотти 342.
При выборе животных для испытания следует иметь также
в виду трудность взятия у кошек и у мелких животных нуж-
ного количества крови, достаточного для получения сыворотки,
в которой ведется определение кальция.
Подавляющее большинство авторов сходится в том отноше-
нии, что гораздо удобнее и проще вести испытание на здоро-
вых животных; хотя собаки с удаленными околощитовидными
железами требуют значительно меньших доз препарата, однако
во всех остальных отношениях работа на них представляется
весьма неудобной.
Ввиду того что удовлетворительного решения вопроса о
стандартном препарате до настоящего времени еще не имеется,
2L4
равномерность реакции отдельных собак и постоянство реак-
ции одних и тех же животных приобретают особое значение.
По данным Коллипа, наиболее восприимчивыми к препа-
ратам околощитовидных желез являются молодые крупные
собаки. Работая на таких собаках, он отметил значитель-
ные колебания в реакции отдельных животных и не мог уста-
новить строгой зависимости между дозой и весом животных.
Это же наблюдал Туиди 343, получивший при введении одина-
ковых доз разным по весу собакам иногда большее повышение
у более тяжелых животных. Тем не менее большинство авто-
ров во избежание внесения таким путем дополнительной
ошибки при работе на собаках разного веса пользуются рас-
четом на 1 кг веса животного. Коллип далее показал, что
введение определенной дозы препарата не сразу, а по частям
в течение нескольких часов дает гораздо больший эффект и
легче приводит к токсическим явлениям. Последние выража-
ются у собаки рвотой и поносом, т. е. явлениями, зависящими
от раздражения слизистой оболочки желудочно-кишечного
тракта. Токсические явления отмечаются при повышении каль-
ция крови, достигающем 16—18 мг% и выше. Коллип пред-
ложил считать за 1 ЕД одну сотую часть того количества пре-
парата, которое вызывает у собак при подкожном введении
повышение кальция крови через 15—18 часов в среднем на
15 мг°/о. Важным дополнительным фактором, уточняющим
данные, является диэта собак и голодание перед опытом в
течение 20—24 часов.
Собак обычно кормят мясом, овсянкой, мукой с добавле-
нием витаминоносителей — дрожжей, рыбьего жира. Требова-
ние Коллипа о подъеме кальция на большую высоту через
15—18 часов обеспечивает высокую активность препаратов,
отвечающих этому условию. Встречавшиеся в немецкой прессе
указания на хорошее качество препаратов околощитовид-
ных желез, дающих у собак некоторое повышение кальция
крови на 2—3 часа, следует считать попросту рекламными,
рассчитанными на незнакомство с предметом. Даже значитель-
ное повышение кальция, но не удерживающееся до 15 часов,
метод Коллипа учесть не сможет. Характерное медленное на-
растание кальция у собак под влиянием паратиреоидных пре-
паратов дает повышение через 15 часов только при больших
дозах.
Что касается самого способа расчета активности по методу
Коллипа, то в нем имеются существенные недостатки. Повы-
шение кальция крови на 5 мг°/о будет у разных животных
иметь разное значение в зависимости от начального уровня,
который подвержен значительным колебаниям (10—12 мг%, а
иногда и более резкие отклонения). Ввиду того что реактив-
ность собак, как мы видели выше, тоже подвержена значи-
тельным колебаниям, нам представляется целесообразным про-
водить расчет не по абсолютному повышению кальция крови,
2U
а по его процентному увеличению. Это видоизменение не»
сколько уточняет получаемые данные, устраняя один из фак-
торов возможности ошибки в опыте.
Работая по методу Коллипа на собаках очень часто .слу-
чайного происхождения, возраст которых нам неизвестен, мы
обычно предъявляем к препаратам требование вызвать првы-
шение кальция крови в среднем на 30% сравнительно с его
содержанием к началу опыта. Многочисленные клинические
данные говорят за то, что действие таких препаратов совпа-
дает с литературными данными о действии препаратов, стан-
дартизованных в ЕД'Коллипа (оригинального препарата Кол-
липа— пар^тормона — в нашем распоряжении не было). Таким
образом, принимая за 1 ЕД одну сотую часть того количества,
которое вызывает повышение кальция крови в тех же усло-
виях опыта на 30%, мы даем препаратам примерно ту же
оценку.
Требование о повышении кальция крови на 30% также
через 15—18 часов после начала опыта относится к собакам
случайного происхождения, менее восприимчивым к парати-
реоидным препаратам, чем молодые животные Приведенное
нами изучение реактивной способности наших животных пока-
зало, что, хотя колебания в реакции отдельных экземпляров
могут быть весьма значительными, средние данные, несомнен-
но, позволяют говорить о достаточной точности реакции. Из
приводимых протоколов двух опытов, где собакам вводился
препарат из расчета на 1 кг веса, можно видеть, что реакция
отдельных животных колеблется в довольно больших преде-
лах и что начальный уровень кальция крови колеблется от
9,8 до 12,7 мг%. Кальций определялся микроаналитическим
путем по несколько измененному методу Крамер-Тисдаля.
Опыт № 1 ,
№ со- бак Уровень кальция крови Повышение кальция
начало опыта через 18 часов в абсолют- ных цифрах в % ____ •
1 2 3 4 5 4 10,3 10,0 11,4 9,8 11,4 12,8 15,8 14,8 13,5 14,6 2,5 5,8 3,4 3,7 3,2 24,3 58,0 29,8 37,7 28,1
в среднем 35,6 •
Изучая, далее, изменение реакции одних и тех же собак
при изменении дозы, мы могли наблюдать, что нарастание
эффекта идет гораздо медленнее увеличения дозы. На приво-
димой ниже таблице сведены данные исследования одного и
того же препарата в постепенно убывающей „концентрации,
* 220
Опыт № 2
• № со- бак Уровень кальция крови Повышение кальция
начало опыта через 18 часов в абсолют- ных цифрах в %
Ч । 1 2 3 4 5 10,7 '10,7 11,2 10,3 12,7 11,4 11,6 13,0 11,0 12,7 0,7 0,9 1.8 0,7 6,5 8,4 16,0 6,8
в среднем 9,4
причем каждая последующая доза в одном и том же объеме
содержала активных начал на 20% менее предыдущей. Дан-
ные для каждой дозы являются средними для шести собак.
Из этой таблицы явствует, что при увеличении дозы более чем
в 3 раза (с 26,22% до 80%) подъем кальция увеличивается
лишь несколько более чем в 2 раза. Другим интересным вы-
водом является то, что при повышении кальция в среднем на
35% увеличение дозы на 25% не сказывается на дальнейшем
увеличении подъема. Это наблюдение указывает на то, что
на наших собаках подъем выше чем на 35% может быть до-
стигнут лишь с большим трудом. При попытках получить
подъем на 40—50% в среднем мы постоянно отмечали у со-
бак токсические явления, которые, по данным Коллипа, дол-
жны наступать лишь при абсолютном уровне кальция, равном
16—18 мг%.
Концентрация препарата (в %) Средний % повы- шения кальция крови у 6 собак Примечание
100 34,3
80 36,8
64 28,1
51,2 23,0 Среднее из трех опытов
40,96 21,65 Среднее из двух опытов
32,77 26,22 18,1
15,5
Активные препараты, по Коллипу, должны содержать в
1» см3 20 ЕД в его понимании. Несмотря на отсутствие воз-
можности прямого сравнения активности препарата, оценивае-
мого по нашему расчету с оригинальным препаратом Коллипа,
приведенные данные позволяют думать, что активность этих
препаратов будет приблизительно равной.
Весьма интересно отметить, что последнее издание (XI)
Фармакопеи США предъявляет к паратиреоидным препаратам
221
требование о повышении кальция крови у собак через 18 ча-
сов лишь на 1 мг°/о. Это требование, таким, образом, допу-
скает выработку и продажу препаратов гораздо меньшей
активности, чем это предлагал Коллип.
Считая, очевидно, дозировку Коллипа несколько грубой,
Ауб344 предложил принимать за ЕД количество в 5 раз менц-
шее и, таким образом, препараты активностью 20 ЕД в 1 см3
считать за содержащие 100 ЕД.
Выпускаемый фабрикой эндокринных препаратов в Москве
паратиреокрин содержит в 1 см 3 20 ЕД, считая за 1 ЕД одну
сотую часть того количества, которое вызывает на собаках в
указанных выше условиях опыта средний подъем кальция
крови на 30%.
Повторные опыты на одних и тех же собаках ставятся
после семидневного отдыха" животных. Оказавшиеся при пер-
воначальных испытаниях особо резистентными собаки в даль-
нейшем для опыта не используются.
Для решения вопроса о специфичности свойств паратирео-
идного гормона, следовательно, и специфичности реакции на
собаках, следует прежде всего иметь в виду продукт облуче-
ния эргостерина антирахитический витамин D, тоже являю-
щийся, как известно, регулятором кальциевого обмена. В ост-
ром опыте на собаках, однако, препараты витамина D не смо-
гут дать аналогичной картины.
Подчеркиваемая Тейлором, Уельд и Скайзесом 345 близость
действия витамина и паратиреоидного гормона (одинаковая
картина патологических изменений в слизистой кишечника,
повышение сопротивляемости к витамину D собак, у которых
длительным введением гормона вызывается повышение сопро-
тивляемости к нему, и т. д.), позволила этим авторам выска-
зать предположение о том, что витамин D возбуждает функ-
цию околощитовидных желез. Это предположение не оправда-
лось в опытах на крысах, где Коллип, Сели, Пэгслей и Томп-
сон 346 не смогли получить одинаковых изменений в костях от
паратиреоидного гормона и витамина D. Гораздо большее
значение в качестве аналога паратиреоидного гормона имеет,
судя по литературным данным, другой продукт облучения
эргостерина, получивший название «АТ-10» (антигетанин 10).
Этот препарат, описанный Хольтцем 347, оказался аналогичным
паратиреоидному гормону и витамину D в смысле способно-
сти вызывать отложение кальция в тканях, особенно в почках
(Брандт, Хольтц и Путчар 348). В дальнейшем Хольтц, Тюр-,
шинг и Краут 349 показали, что это вещество способно вызы-
вать повышение кальция крови при введении людям per os.
Подъем кальция длится значительно дольше (24—48 часов),
но держится несколько дней, иногда до недели (Хольтц и
Крамер 35°). АТ-10 дозируется в токсических ЕД, которые уста-
навливаются на мышах определением дозы, вызывающей
смерть мышей от отложения кальция в паренхиматозных
222
органах, особенно почках (Хольтц, Лакёр, Крейтмайр и
Молль351). Такой аналогии в действии паратиреоидного гор-
мона и АТ-10 на больных Xоф 352 подтвердить не мог, так как,
повышая кальций крови, АТ-10 не снижал одновременно фос-
фора, что всегда делает гормон; кроме того, оба вещества
действовали по-разному на картину крови и по-разному влия-
ли на реакцию среды организма: паратиреоидный гормон
действовал ацидотически, АТ-10 — алкалотически. Таким обра-
зом, действие паратиреоидных препаратов на собаках в остром
опыте может считаться специфическим.
Из других методов биологической оценки паратиреоидных
препаратов упоминания заслуживают следующие: Стюарт,
Пейдж, Персиваль 338 рекомендуют опыты на кошках. Ввиду
их незначительной реактивной способности — подъем кальция
крови на 2 мг°/о вызывают 10 ЕД по Коллип^ — метод прак-
тического распространения не получил.
Пэгслей 353 и Дайер 354 предложили определять у крыс вы-
ведение кальция с мочой под влиянием паратиреоидных пре-
паратов. Для устранения пищевого кальция животных держат
на диэте Мак Коллэма, применяемой при изучении действия
антирахитического витамина D, содержащей определенное ко-
личество фосфора и кальция.
Гораздо больший интерес представляют методы, основан-
ные на изучении антагонистического действия препаратов
околощитовидных желез по отношению к некоторым солям.
Кохман 328 предложил определять на мышах дозу препарата,
которая при введении в 3 приема в течение 3—-4 часов сохра-
няет жизнь животным, получающим смертельную дозу щаве-
левокислого натрия. По данным этого автора, одна такая мы-
шиная ЕД примерно равна 4 ЕД Коллипа. Тот же Кохман в
аналогичных опытах предлагает снимать отравление, вызы-
ваемое фтористым натрием, причем в этом случае одна мыши-
ная ЕД равна 2 ЕД Коллипа. Симон 330 и Дайер 329, тоже рабо-
тая на мышах, снимают у них вызываемую сернокислым маг-
нием начальную степень наркотического действия. Мыши для
этих опытов, по Симону, должны вскармливаться пищей, со-
стоящей из трех частей пшеницы, трех частей кукурузы, трех
частей овса и одной части льняного масла.
Ввиду необходимости проверки реактивной способности
животных независимо от метода, которым производится
оценка препаратов, является крайне желательным работать со
стандартным препаратом. То, что в этом отношении предла-
галось, не может быть признано удовлетворительным. Это
обычно примитивно обработанные органы, исходная актив-
ность которых далеко не однородна. Кроме того, и степень
очистки этих препаратов крайне низка.
Применявшийся Дайером очищаемый довольно сложным
путем ацетоновый экстракт продукта обработки желез пикри-
новой кислотой мало активен (1 ЕД Коллипа соответствует
223
12,5 мг препарата). Околощитовидные железы лошадей, обра-
ботанных ацетоном по тому способу, который принят для
стандарта задней доли гипофиза, Бомсков 355 предложил в
качестве исходного материала для приготовления из них стан-
дартных растворов путем извлечения 1,5°/о соляной кислотой
и последующей очистки экстракта. Оба предложения вопроса
не решают, так как сводятся к получению разных мало очи-
щенных препаратов, постоянство активности которых в двух
параллельных случаях мало вероятно. С таким же точно успе-
хом может быть применен любым способом полученный пре-
парат. Разница в активности исходного материала, как из-
вестно, достаточно высока, что отчасти зависит от количества
жировой ткани в железах. '
При разборе вопроса о препаратах из околощитовидных
желез следует иметь в виду, что из этих органов, по данным
Робинсона и Томпсона 356 и Истленда, Иверса и Томпсона 357,
может быть выделено вещество, независимое от гормона влия-
ющего на кальций крови, обладающее способностью задержи-
вать рост молодых животных (крыс).
ГЛАВА XII
ПРЕПАРАТЫ ПРОТИВ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО МАЛОКРОВИЯ
Со времени предложения Майнот и Мэрфи 358 о примене-
нии при злокачественном малокровии продуктов из печени
изготовление препаратов из этого органа проделало большую
эволюцию. Место первоначально слегка обжаренной сырой
печени поочередно заняли сухие препараты для приема per os,
затем жидкие для этой же цели и, наконец, препараты для
инъекции, значительно превосходящие по активности все дру-
гие формы. Очень скоро, в связи с выяснением сущности про-
цесса возникновения злокачественного малокровия, к препа-
ратам печени присоединились продукты слизистой оболочки
желудка, которая, как оказалось (Уилькинсон 35Э), выделяет не-
кий гемопоэтический фактор, способствующий образованию
из белков пищи соединений, затем накапливающихся в пече-
ни. Естественно, что для приготовления таких препаратов
нужно пользоваться желудками плотоядных или всеядных жи-
вотных (свинья). В последнее время появились препараты,
представляющие собой продукт обработки мышечной ткани
или печени ферментами слизистой оболочки желудка.
Огромное значение лекарственной терапии злокачествен-
ного малокровия, благодаря чему стало возможным в некото-
рых случаях отказываться от неизбежного ранее переливания
крбви, требует гарантии активности препаратов. Возникшая
необходимость оценки активности заставила испытать все до-
ступные химические и биологические методы оценки.
Активные начала препаратов из печени относятся к про-
дуктам расщепления белка, число которых, по данным неко-
торых авторов, или довольно велико (лейцин, аргинин, гли-
цин, лизин, гидроксипролин, аспарагиновая кислота, гистидин,
глутаминовые кислоты — Дейкин и Уест 860), или ограничи-
вается некоторыми определенными аминокислотами (трипто-
фан и гистидин — Серио361).
Этих данных оказалось недостаточно для целей химиче-
ского определения активности препаратов. Не оправдали себя
и предположения' о зависимости активности печеночных пре-
паратов от содержания в них меди или железа (Рикер 362). Та-
ким образом, пришлось прибегнуть к поискам биологических
15 — 317 225
методов, подобно тому, как это имеет место для большинства
гормонов. Здесь следует оговориться, что вопрос о принад-
лежности активных начал антианемических препаратов к гор-
монам следует считать открытым. Признать продукт, накапли-
вающийся в зависимости от процессов, сопровождающих пере-
варивание белков в желудке, за внутрисекреторный едва ли
возможно. С другой стороны, не получили подтверждения и
соображения, по которым активные начала печени относили к
витаминам группы В, так как ни витамин Вг, ни одно из ве-
ществ этой группы, дрожжи и разные продукты, из них не
оказалось активным при злокачественном малокровии (Лас-
сен и Кригер-Лассен 363). По данным Козеразс4, содержание в
препаратах печени витамина С ничтожно, а глютатион отсут-
ствует вовсе. Отсутствие витамина С подтверждают также
Диль, Молль и Шрёдер 3(55.
Для метода биологической оценки антианемических препа-
ратов, как это всегда бывает, стараются использовать все до-
ступные экспериментальному наблюдению фармакодинамиче-
ские свойства этих веществ. Оставляя в стороне основные те-
рапевтические свойства, указывают, что препараты против
злокачественного малокровия могут повышать холестерин
крови (Мараньон и Колацо 366, Гебхардт и Клейн 360 а) и, что
особенно интересно, вызывать у здоровых кроликов и собак
преходящую анемию при введении per os, предупреждаемую
введением этих же препаратов под кожу (Адельсберг и Лай-
нер 367). Указывают даже на симптоматический успех от пече-
ночных препаратов при эритроцитозах (Штефан, Малль36S).
Имеются указания на слабое и нехарактерное действие пре-
паратов печени на переживающий отрезок тонкой кишки кро-
лика (Бруно де Биазо 369) и на углеводный обмен (Генслейн370
и Ципф и Дрингенберг 371).
Методы биологической оценки антианемических препара-
тов весьма многочисленны, но ни один из них не получил до-
статочно определенного подтверждения. Один из последних
официальных источников, в который вошли препараты пече-
ни — XI издание Фармакопеи США, — в качестве метода оцен-
ки рекомендует испытание на больных. Приводимые ниже в
общих чертах существующие методы не могут претендовать
на необходимую точность и в большинстве своем требуют
большой затраты времени и очень трудоемки.
Все описываемые методы могут быть разбиты на две
группы, основанные на испытании на животных с различными
искусственно вызванными у них анемиями и на испытании на
здоровых животных. Работа на животных с эксперименталь-
ными анемиями затруднительна отчасти потому, что трудно
вызвать анемию, близкую к злокачественной анемии у чело-
века, отчасти в связи с резко выраженной способностью здо-
ровых животных к самостоятельному восстановлению нормаль-
ного состава крови.
226
Значительный интерес привлекает описанная еще в 1907 г.
Талквистом и Фаустом 372 анемия, вызываемая у собак токси-
ном ленточной глисты Bothriocephalus latus (аутолизат или
2% эмульсия из липоидов Bothriocephalus latus). Однако, по
данным Кингиссепа 373, на анемию, вызванную ботриотоксином
у кроликов, препараты печени не оказывают лечебного дей-
ствия и не способны задержать ее развития у этих животных.
Не имеется данных относительно действия антианемических
препаратов на анемию, вызываемую введением экстрактов из
головастиков Gastrophyius (Зейдельхейм 374). Из анемий, вызы-
ваемых различными химическими агентами, чаще других ре-
комендовалась фенилгидразиновая. Отчетливых данных и по
этому методу не получено, хотя Эрдёс 375 и предлагает опре-
делять активность препаратов из печени и слизистой желудка
по их способности задерживать момент максимального сниже-
ния числа эритроцитов у кроликов, получивших в водном
растворе 16 мг на 1 кг веса фенилгидразина, с 48 часов до
96—120 часов.
Анемия, наступающая у крыс вслед за удалением селе-
зенки в результате развивающейся у них инфекции бартонел-
лоза (от Bartonella muris), в наших опытах (Саргин и Зи-
берт376) препаратами печени не излечивалась и не задержи-
валась. По Эросу и Куносу 377, бартонеллоз у крыс при дли-
тельном наблюдении (1 месяц) и подсчете эритроцитов ка-
ждые 3 дня задерживается, однако, не только препаратами
печени, но и препаратами против вторичных анемий. Прихо-
дится согласиться с Рейтером 378, что бартонеллоз крыс и зло-
качественное малокровие человека являются такими патологи-
ческими процессами, которые не могут приравниваться один
к другому, и что по этому методу стандартизовать препаратов
печени нельзя (Бенцони 37Э).
Очень интересны работы Уиппля 380 на «стандартных анеми-
зированных собаках», у которых определенная степень мало-
кровия поддерживается постоянным кровопусканием. Опреде-
ляя количество крови, которое необходимо выпускать для под-
держания анемии на данном уровне при назначении разной
диэты собакам, он установил, что наибольшей активностью
обладает печень, и притом особенно печень больных со вто-
ричным и злокачественным малокровием. Эти в высшей сте-
пени любопытные данные указывают на то, что печень боль-
ных, повидимому, задерживает в себе антианемические веще-
ства. Воспользоваться методом Уиппля для целей оценки ак-
тивности препаратов весьма затруднительно.
Анемия, являющаяся результатом искусственной ахилии
(удаление желудка), впервые описанная Кэстлем381, оказа-
лась мало подходящим патологическим состоянием для изу-
чения антианемических препаратов. Опыты с удалением же-
лудка ставились на собаках и крысах (Айви, Морган и Фар-
рел382, Арон и Бауер 383, Мейсон и Айви 384 и др.). Метир и
15-= 227
Пэрвинел 385, пользуясь этим методом у собак, нашли, что при
диэте без витамина Вг у них не наблюдается типичной кар-
тины злокачественного малокровия (что, кстати, говорит про-
тив теории, объясняющей это заболевание авитаминозом).
В последнее время Готлебе 386 было предпринято сравни-
тельное изучение возможных экспериментальных анемий.
Были обследованы анемии, вызываемые разным путем вводи-
мыми уксуснокислым и хлористым свинцом, масляной кисло-
той (из семян льна), токсином В. coli, «сапонином» Мерка,
далее серебряными и железными соединениями сапонинов и,
наконец, анемии, вызываемые путем блокирования ретикуло-
эндотелиальной системы коллоидным серебром (колларголом)
самостоятельно и в комбинации с трипанблау. Наиболее близ-
кую заболеванию картину у кроликов вызывали одновремен-
ные введения сапонинов с железом и серебром. Эти комбина-
ции давали длительную анемию с повышением цветного пока-
зателя и отвечали на печеночную терапию. Подтверждая этим
данные, Стольман и Смис 387, Готлебе и Скиббе 388, пробовали
работать на крысах, вводя им сапонины вместе с колларго-
лом, электрарголом или даже тушью, так как действие этого
компонента зависит от его коллоидного состояния (накопле-
ние в клетках ретикуло-эндотелиальной системы кроветвор-
ных органов). Ввиду того что у крыс в некоторых случаях
активные препараты печени вызывали снижение числа эритро-
цитов (Готлебе и Краузе 389), работа на кроликах предста-
вляется более удобной.
Для точного определения картины изменения постоянной
анемии у животных Готлебе предлагает определять для каж-
дого кролика каждый день количество эритроцитов. Отклады-
вая на миллиметровой бумаге на оси ординат количество эри-
троцитов таким путем, чтобй 1 миллиону их соответствовал
1 см, а на оси абсцисс — дни (0,5 см — 1 день), определяют
площадь фигуры, образуемой данными отрезками и пересе-
чением восстановленных на конце их перпендикуляров. Опыт
тянется долго (9—10 дней), требует, кроме того, предваритель-
ного изучения каждого кролика, нескольких животных для ка-
ждой дозы. Несмотря на заманчивость, эта методика практи-
чески едва ли себя оправдает.
Весьма большого времени требует предложение Ромингера
и Бомскова 390 пользоваться крысами с анемией от козьего мо-
лока. Опыт должен тянуться 18—20 дней. Еще более продол-
жительно испытание на кроликах, у которых анемия вызы-
вается впрыскиванием культуры В. Welchii в костный мозг;
здесь наблюдение над действием препаратов должно тянуться
более месяца (Бирд, Кларк и Мозес391).
Картина испытания на анемизированных животных носит,
как это явствует из приведенного краткого изложения, мали
обнадеживающий характер. Трудность работы с антианемиче-
скими препаратами объясняется, кроме всех прочих условий,
228
еще и отсутствием стандартного препарата. Это в одинаковой
мере, конечно, относится и ко второй группе методов, основан-
ных на изучении влияния антианемических препаратов на
кровь здоровых животных.
Вогэн, Мэллер и Майнот 392, исходя из того, что костный
мозг у голубей находится всегда в состоянии мегалобласти-
ческой гиперплазии (что соответствует состоянию костного
мозга больных злокачественным малокровием), предложили
испытывать препараты печени на голубях. По данным этих
авторов, подтвержденным затем Эдмэндсом и Брюкенером 393,
среднее количество сетчатых форм красных кровяных шари-
ков (ретикулоцитов) у голубей составляет 1О°/о и может под
влиянием активных препаратов, вводимых в течение ряда
дней, значительно увеличиваться, достигая 2О°/о. В наших
опытах нам также удавалось получать подобную картину
(Саргин и Зиберт). Исследование на голубях требует также
большой затраты времени и труда. г
Кровь окрашивалась бриллианткрезилблау, данные о числе
ретикулоцитов выводились на основании подсчета не менее
одной тысячи эритроцитов в каждом мазке. Нами было отме-
чено чрезвычайно высокое колебание в количестве сетчатых
форм в норме у голубей, длительно содержащихся в неволе.
По данным Эдмэндса, Брюкенера и Фритцеле 394, голубями с
высоким содержанием ретикулоцитов пользоваться нельзя.
Проведенная в 1935 г. в фармакологической лаборатории Го-
сударственного института экспериментальной эндокринологии
в Москве работа по обследованию ряда препаратов печени на
голубях дала неясную картину (Нусинбойм 395). Гэрд396
считает, что при подсчете только ясных форм отчетливого
действия на голубях получить не удается; если же подсчиты-
вать все формы ретикулоцитов, то можно якобы отнести к ним
все 1ОО°/о эритроцитов.
Подсчетом роста числа сетчатых форм у млекопитающих
особенно рекомендует воспользоваться Джекобсон 397, остана-
вливающий свой выбор на морских свинках, обосновывая ме-
тод так же, как это делали авторы, рекомендовавшие испыта-
ние на голубях. Оливер 398, специально изучавший этот вопрос,
считает, что у голубей и морских свинок состояние костного
мозга не соответствует картине, наблюдающейся у больных
людей, т. е. мегалобластической гиперплазии. Работать на мор-
ских свинках он тем не менее считает возможным. Гораздо
более резкую оценку дают методу на морских свинках ^грен
и Касперсон3", полагающие, что огромные колебания в содер-
жании ретикулоцитов у этих животных как в норме, так и
у получающих препараты печени (от 0,25 до 4%), лишают его
всякой ценности. Далее указывают (Вихельс и Хёрер 40°), что
рост ретикулоцитов может наступить также и от веществ,
влияющих на вторичные анемии — железа, мышьяка и т. д.
Интересно отметить, что препараты печени, по данным Деди-
229
кена401, у молодых поросят (5—8 недель) вызывают в отличие
от действия на других животных увеличение числа белых ша-
риков.
Методы второй группы, таким образом, также не решают
вопроса о биологической оценке антианемических препаратов.
Указываемое Фармакопеей США требование об испытании на
людях в известной мере лежит вне компетенции фармакологов
и потому здесь рассматриваться не может. Методы оценки на
больных описаны рядом авторов (Дамачек и Кестль 402, Фран-
ке 403, Штёрринг и Штётер 404).
При разборе действия антианемических препаратов печени
следует иметь в виду, что они не имеют ничего общего с пре-
паратами этого органа, специфической способностью которых
является предупреждение развития в печени явлений некроза,
вызываемого в первую очередь аммиаком. Это вещество, опи-
санное в японской литературе под названием «якритон», уси-
ленно рекламируется авторами как обладающее общими про-
тивотоксическими свойствами. Способность алкогольных
экстрактов печени задерживать развитие некроза в печени
крыс, вызываемого аммиаком и четыреххлористым углеродом,
подтверждена Ферберсом, Ниле и Шерером 405, которые одно-
временно показали отсутствие этих свойств у антианемических
препаратов печени.
В заключение следует отметить, что рядом авторов предла-
гается для препаратов желудка проводить химическое иссле-
дование (Кейер, Брукс и Изаакс 406). Если такого рода иссле-
дования не дадут представления о специфической активности
препаратов, то они смогут избавить больных от таких устано-
вленных Бэллоком 407 явлений, как колебания в содержании
жира, которые составляют для различных препаратов от 0,5 до
19°/о, и от содержания некоторых микробов (В. coli).
ГЛАВА XIII
ГОРМОН КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКА
Препараты коры надпочечника, обладающие специфической
активностью, стали достоянием клиники и потребовали экспе-
риментального обследования относительно недавно. Наличие
в коре надпочечника гормональных веществ, имеющих огром-
нейшее значение для организма, было очевидно с тех пор,
когда опытами с удалением надпочечников целиком, а затем и
отдельно коры и последующим введением адреналина, не да-
вавшим результата, была доказана невозможность сохранения
।жизни животным без коры. Попытки получения препаратов из
коры делались давно и насчитывают уже более 25 лет. Одно
время под названием «интерренин» (от межпочечной железы
некоторых рыб, представляющей по строению орган, аналогич-
ный коре) описывались препараты, оказавшиеся мало актив-
ными (Гольдциер 408). В последние годы вопрос получил раз-
решение в работах американских авторов главным образом
Хартмана 409 и его школы и в особенности Суингля и Пфиф-
нера 41°.
За гормоном коры надпочечника установилось название
«кортин», которое если и не заслужило такого же общего
признания, как «инсулин», то во всяком случае является наи-
более употребительным из всех.
Химическое строение гормона коры точно не установлено,
хотя известно, что это вещество не содержит азота и, неви-
димому, так же как и половые гормоны, относится к стеронам
(Рейхштейн411). Де Фремери, Лакёр, Рейхштейн, Шпанхоф и
Уйдет412 описывают вещество под названием «кортикосте-
рона» с формулой С21Н32О5, оспаривая прежние данные Кен-
дала. Все эти авторы выделили вещество в кристаллическом
виде.
Основной специфической особенностью гормона коры над-
почечника является присущая ему способность сохранять
жизнь животных с удаленными надпочечниками, как правило,
погибающих после этой операции. Этот основной общий
эффект остается и основным для биологической оценки пре-
паратов коры. При разборе этих препаратов здесь и в даль-
нейшем имеются в виду лишь такие, которые содержат это
231
специфическое вещество. Описание свойств разных других
гормонов коры надпочечника, часто встречающихся в литера-
туре, сознательно опускается отчасти из-за того, что, описы-
вая отдельные гормоны, авторы, повидимому, на самом деле
изучают лишь разные детали действия основного гормона,
отчасти же потому, что наличие некоторых из таких веществ
является недостаточно доказанным и мало йравдоподобным.
Таковы, например, антогонист паратиреоидного гормона (Мэр-
виш и Босмэн413, Берман 414), кортикалин, обладающий рядом
разнообразных свойств, в том числе и гипогликемической спо-
собностью (Н. Б. Медведева414а) и др.
Биологическая оценка препаратов коры надпочечника до
сих пор еще не вышла из той первичной стадии, когда для
вещества имеется масса разнообразных критериев для сужде-
ния. Каждый автор предлагает свою единицу, свой способ
оценки. Основным фактором, объясняющим это положение,
является отсутствие стандартного препарата. Этим же объ-
ясняется и трудность выбора соответствующих реакций на это
вещество, так как до сих пор нельзя с уверенностью утвер-
ждать, какие из сторон действия гормона коры присущи ему
самому и какие обусловливаются наличием сопутствующих ему
веществ или даже другими гормонами.
Краткое описание методов оценки препаратов коры имеет
поэтому целью лишь помочь ориентироваться в этом сложном
и технически очень трудном вопросе.
Основные методы сводятся к определению дозы, вызываю-
щей переживание животных с удаленными надпочечниками.
Разница будет заключаться прежде всего в выборе животных,
далее, способе выполнения операции (одномоментное или двух
моментное удаление надпочечников), способах введения, рас-
чете доз и т. д.
Основоположники получения активных препаратов рабо-
тали на крупных животных — кошках, собаках (Суингль и
Пфифнер 415 с сотрудниками). За 1 ЕД последние авторы при-
нимали то наименьшее количество кортина, которое потребно
в день на 1 кг веса собак с удаленными надпочечниками для
сохранения физиологического состояния в течение 7—10 дней.
Критерием нормального состояния являются сохранение веса
и уровень небелкового азота (или мочевины) в крови. Испы-
тание на относительно крупных животных, какими являются
кошки и собаки, практически представляет массу неудобств,
во-первых, из-за сложности удаления у них надпочечников и,
во-вторых, из-за необходимости тратить на них огромное ко-
личество препарата. Крайне дорогой и трудно получаемый пре-
парат приходится расходовать в течение ряда дней по 10—
20 см3 ежедневно на одну собаку. Испытание на кошках в
первоначальной редакции требовало, например, получения сто-
дневного выживания животных (Хартман и Броунел416). По-
нятно поэтому стремление многих авторов проводить испыта-
232
ние на более мелких животных, в первую очередь на крысах (и
даже мышах). Возражением против использования этих живот-
ных служит частое наличие у них добавочных желез, не уда-
ляемых при операции. По данным Тунэ Дегти 417, добавочные
железы имелись в 80% случаев и были расположены вдоль
надпочечниковых вен. Мендец4:8 получал смерть лишь у
12,1% крыс, но доводил ее до 1ОО°/о, удаляя у крыс самцов
одновременно с надпочечниками и семенники. По Пенцарду и
Гирагосинцу 419, вопреки всем вышеприведенным мнениям,
крысы гибнут, как все другие животные, лишь несколько позд-
нее, что говорит против наличия добавочных желез. Шуль-
цер 42°, предлагающий удалять капсулу верхней части почки,
где, по его мнению, находятся добавочные железы, получал
100%-ную смертность у крыс. Детально изучив на опериро-
ванных таким путем маленьких крысах весом около 50 г дей-
ствие разных доз кортина, он предложил оценивать препа-
раты по определению дозы, вызывающей 100%-ное выживание
животных. Удаление надпочечников у крыс производится
крайне просто, со спины.
Работа на крысах, требующая много меньше препарата,
представляется весьма обнадеживающей, хотя разноречия в
ее оценке весьма значительны. Испытание на крысах рекомен-
довалось до Шульцера еще целым рядом авторов (Грольман
и Фирор421, Мартин 422 и многие другие). По Кутцу 423, за
1 ЕД считается то минимальное дневное количество, кото'рое
сохраняет жизнь 50% крыс в течение 20 дней при введении
дневной дозы в 2 приема.
Бомсков и Банзен 424 идут еще^ дальше и предлагают поль-
зоваться маленькими мышами, 9—11 г веса, операция на кото-
рых и особенно дальнейшее содержание животных требуют
очень большой осторожности и тщательности выполнения всех
условий (чистота, обогревание после операции и т. д.). За 1 ЕД
они принимают количество препарата, которое при ежеднев-
ном введении в течение 7 дней дает у таких мышей 80% вы-
живаемости.
В опытах с испытанием препаратов коры на животных с
удаленными надпочечниками при введении препаратов живот-
ным в тот момент, когда они находятся в тяжелом положении,
поражает необычайно быстрое действие препарата. Животное,
лежащее без движения в полной прострации, отказывающееся
от пищи, через несколько минут начинает проявлять признаки
улучшения, двигается, вскоре садится и через %—1 час может
производить впечатление здорового. В одном из наших опы-
тов собака, получившая кортин в недостаточном количестве,
тем не менее после введений препарата не только вставала,
начинала ходить, но даже вырывалась из клетки и вступала
в драку со здоровыми животными. Это быстрое действие
очень характерно для кортина, причем даже в случае кратко-
временного улучшения оно выражено очень ярко.
233
Бюльбринг и Бэрн 425 избрали для оценки кортина совсем
необычный объект — селезней. По данным этих авторов, се-
лезни переносят операцию хорошо, дают очень согласные
цифры. В среднем после операции они живут 8,2 часа. При
помощи кортина можно продлить жизнь в несколько раз (до
20 часов).
Кортин, сохраняя жизнь животным, одновременно устра-
няет и ряд частных патологических явлений в организме, на-
ступающих в результате удаления надпочечников. Главней-
шими нарушениями, сопровождающими эту операцию, явля-
иются понижение сопротивляемости к ядам, понижение работо-
IU способности, нарушение теплорегуляции, повышение количе-
|| ства мочевины в крови, сгущение крови, уменьшение содер-
I жания хлористого натрия в крови, изменения (по нашим
Д опытам на кроликах далеко не всегда закономерные) содержа-
ll ния хлостерина крови, далее некоторое снижение сахара
I крови и т. п. Определение всех этих сторон действия предла-
I галось использовать в качестве прямых методов оценки или
\в качестве подсобных мероприятий при других методах.
^Непосредственное определение активности по увеличению
‘ жидкой части крови не дало обнадеживающих результатов и
практически не используется. Значение хлористого натрия
очень велико. Значение солевой диэты (соблюдение которой
очень важно в клинике) находит очень много обоснований
в литературе. Р. Гаунт, Тобин и Д. Гаунт 426 достигали при по-
мощи солевой диэты уменьшения смертности крыс с 89 до
43%. Шульцер удлинял жизнь маленьких адреналэктомиро-
ванных крыс с 5,7 до 9,3 дней, вводя им в день по 1 см3 рас-
твора хлористого натрия. Весьма вероятно, что при испыта-
' нии препаратов коры можно будет снизить потребность в ко-
личестве препарата солевой диэтой. Нужно, однако, иметь
в виду, что это мероприятие будет до известной степени
уступкой практике, так как с принципиальной точки зрения
гораздо ценнее данные, полученные от одного препарата, без
комбинации его с другими веществами.
Весьма привлекает внимание предложение Рейхштейна,
Верцара и Ласта 427 испытывать кортин в особым образом про-
водимом остром опыте на крысах. По данным этих авторов,
крысы с удаленными надпочечниками при введении им per os
5 см3 50% раствора глюкозы гибнут в течение 5 часов. Под-
кожное введение за 1 час до этого кортина (кортикостерона)
сохраняет крысам жизнь.
Из испытаний, основанных на восстановлении отдельных
функций, интересны такие, где определяется восстановление
работоспособности мышц. Ингль 428 нашел, что величина ра-
боты, которую могут совершить оперированные крысы, и
продолжительность работы резко возрастают под влиянием
кортина. Этим же путем определял активность кортикосте-
рона и Рейхштейн 411. Против специфичности этой реакции го-
234
верит наблюдение Кучинского и Пьера 429, которым удавалось
и другими веществами возвратить работоспособность нереаги-
ровавшему m. gastrocnemio морской свинки, лишенной над-
почечников.
Де Мира и Фонтес 43°, сначала считавшие возможным поль-
зоваться таким методом, очень скоро от него отказались,
найдя, что как адреналин, так особенно и гистамин (резко
расширяющий капилляры и тем улучшающий кровоснабжение)
так же вызывают уменьшение мышечной усталости, как и
кортин.
Интересный эксперимент с возвращением при помощи кор-
тина крысам способности сохранять нормальную температуру
тела в холодном помещении (оперированное животное эту
способность теряет) дает, по данным самого автора (Вид-
стрём 431), колеблющиеся результаты. Весьма большой интерес
не только с точки зрения фармакологии представляет собой
наблюдение Гирагосинца и Сэндстрёма 432 об улучшении об-
щих симптомов у крыс, находящихся в разреженной атмо-
сфере (опыты ставились в горах), при помощи кортина, при-
чем это действие проявлялось не только на крысах без над-
почечников, но и у здоровых животных.
Далее предлагалось использовать свойства кортина умень-
шать явления анафилаксии у морских свинок (Вольфрам и
Цимер 433), понижать токсическое действие дифтерийного ток-
сина (Хербрандт 434, Эме435). Наличие в коре надпочечников не-
которых витаминов и возможность присутствия их в препа-
ратах послужили некоторым авторам основанием объяснять
специфическое действие препаратов коры содержанием в них
витаминов или считать эти препараты активными витаминоно-
сителями. Это относится в первую очередь к противоцингот-
ному витамину С (аскорбиновой кислоте) и .затем к В2, отсут-
ствие которого ведет в развитию пеллагры. Относительно вы-
сокое содержание в коре надпочечника витамина С является
фактом общеизвестным. Отсюда понятна возможность содер-
жания аскорбиновой кислоты в неочищенных препаратах.
Однако сравнительно с чистой аскорбиновой кислотой проти-
воцынготное действие экстрактов коры выражено гораздо
слабее (Грольман и Фирор 438). Наблюдение Верцара и Ласта 437
о действии кортина на адреналэктомированных животных
лишь при условии содержания в пище провитамина В2 (фла-
вина) и о прямом переживании таких животных (крысы 40—-
50 г) от флавинфосфорной кислоты, близкого к флавину про-
дукта, можно считать в значительной мере опровергнутыми
'Фирором и Грольманом 438, показавшими, что кортиком нельзя
заменить ни витамина В2, ни антиневритического витамина В,
ни аскорбиновой кислоты.
Кора надпочечника содержит также некоторое количество
витамина А (фактор роста, Байли и Неттир 439).
Кристаллические препараты гормона коры надпочечника не
235
изучены настолько точно, чтобы можно было установить, ка-
кие из отмеченных выше свойств препаратов коры зависят
именно от гормона и какие, быть может, от сопутствующих
ему веществ. Данные об активности кристаллического гормона
не поддаются сколько-нибудь точному учету, так как они по-
лучены в разных опытах, на разных животных и часто с раз-
ными препаратами.
Активность продажных препаратов, по этим же соображе-
ниям, также трудно определить полностью. В дозировке в по-
следнее время отмечается тенденция к огромному повышению
доз. Препараты по Суинглю и Прифнеру содержат в 1 см3 4—
10 собачьих ЕД (см. выше), что примерно соответствует со-
держанию в 1 см3 активных начал, выделяемых из 40 г железы.
Необходимым условием для препаратов коры надпочечника
является отсутствие содержания в них адреналина, могущего
оказать весьма неблагоприятное действие на аддисоников, у
которых кортин почти исключительно применяется. Обычно
препараты представляют собой водные растворы, применяе-
мые в силу чрезвычайно легкой разрушаемости в желудочно-
кишечном канале путем инъекций. Описаны препараты для
приема внутрь, где сохранность действующих начал достигается
тем, что кортин вводится вместе с углем, которым он адсорби-
руется. Такие препараты, повидимому, должны вводиться в го-
раздо больших сравнительно с подкожными дозах.
ГЛАВА XIV
МАТОЧНЫЕ РОЖКИ, СПОРЫНЬЯ
Secale cornutum — спорынья — принадлежит к виду лекар-
ственных веществ, эффект от которых в разных случаях мо-
жет давать резко различную (количественно, а иногда и каче-
ственно) картину. В уже упомянутой в главе I работе Сторм
ван Лёвена12 приведены примеры испытания наудачу взятых
шести проб, показавшие разницу между отдельными пробами,
достигающую тридцатикратного размера.
Учение о химическом составе действующих начал маточных
рожков подвергается до самого последнего времени постоян-
ным изменениям. Уже одно это говорит за то, что достаточ-
ной ясности в этом вопросе не было. Долго господствовавший
взгляд, по которому все фармакодинамические свойства спо-
рыньи объяснялись наличием мало индивидуализированного
алкалоида корнутина, а токсическим комплексом считалось
столь же мало определенная сфацелиновая кислота, уступил
место более детальной классификации.
Действующие начала, определяющие активность препара-
тов маточных рожков, относятся к двум основным группам:
алкалоидам и так называемым биогенным аминам — продук-
там декарбоксилирования имеющихся в спорынье аминокислот.
Довольно продолжительное время считалось, что в лице эрго-
токсина (Барджер) и особенно эрготамина (Штолль 440) уда-
лось выделить основные активные начала спорыньи, обладаю-
щие всеми присущими ей сторонами действия. Эрготоксин,
представляющий собой гидрат гораздо менее активного со-
единения— эрготинина, — оказался по действию идентичным
эрготамину (Дэль и Спиро441) Эрготамин, впервые подверг-
нутый фармакологическому изменению Спиро 442, оказался
веществом, обладающим весьма своеобразными свойствами.
Основной особенностью эрготамина является его способность
препятствовать действию адреналина на окончания симпати-
ческих волокон. Парализующее влияние эрготамина на сим-
патическую нервную систему может быть до известной сте-
пени устранено солями кальция, равно как вызываемое послед-
ними возбуждение симпатической системы устраняется эргота-
мином. Присущая препаратам спорыньи способность вызывать
237
сокращение матки выражена у эрготамина в чрезвычайно вы-
сокой степени — 0,2 — 0,5 г виннокаменнокислого эрготамина
(гинерген) могут вызвать отчетливые схватки у женщины. По
данным Спиро, эрготамин вызывает ритмические сокращения
матки, тогда как другие действующие начала маточных рож-
ков (см. дальше) дают тетанические сокращения. Интересно,
что общая токсичность эрготамина невысока: смертельная
доза этого алкалоида лежит в пределах 5 мг на 1 кг веса (для
обычных лабораторных животных). Способность эрготамина
препятствовать проявлению действия адреналина предста-
вляется столь высокоспецифичной, что в опыте на матках
некоторых животных, у которых адреналин вызывает сокра-
щение матки, при помощи эрготамина можно вызвать нейтра-
лизацию этого действия и таким образом получить парадок-
сальный на первый взгляд факт — задержку сокращений
матки препаратами маточных рожков, специально применяе-
мыми именно для сокращения матки. В дальнейшем было по-
казано (Хеймане и Ренье 443, Хаме 444), что и эрготсхнин (игдр-а-
том которого является эроготоксин) тоже обладает прису-
щими эрготамину свойствами; действие эрготонина оказалось
в 300 раз слабее действия эрготоксина.
Такое относительно благополучное положение с алкалои-
дами спорыньи было в последние годы нарушено описанием
четырех новых алкалоидов — эргометрина (Дёдли и Мойр),
эрготоцина (Карах и Леглон), эргобазина (Штолл и Бургхардт)
и эргостерина (Томпсон). Некоторые из этих алкалоидов
обладают иной растворимостью и отличаются по действию
от эрготамина — эрготоксина, будучи в некоторых отноше-
ниях даже их антагонистами (Дэвис, Эдейр, Чэн, Свансон 444d).
Авторы, выделявшие эти алкалоиды 445, вскоре пришли к со-
гласному мнению об идентичности всех описанных ими
алкалоидов, что несколько упростило положение, но не устра-
нило основного момента — крайне пестрой картины действую-
щих начал спорыньи. Список новых алкалоидов продолжает
увеличиваться (например, эргоклавин).
Чрезвычайная запутанность картины содержания алкалои-
дов спорыньи усугубляется значением наличия в препаратах
маточных рожков биогенных аминов, основными представите-
лями которых являются получающиеся из тирозина оксифе-
нилэтиламин— тирамин и из гйстидина (В-ими доазоли л эти ла-
мин— гистамин. Тирамин и гистамин обладают известным
действием на сосудистую систему, причем во взаимнопротиво-
положных направлениях: тирамин вызывает сужение сосудов,
тогда как гистамин дает сосудорасширяющий эффект, обладая,
кроме того, прямым возбуждающим действием на гладкую
мускулатуру, в том числе и на матку.
Кроме содержания биогенных аминов, в препаратах спо-
рыньи было установлено наличие ацетилхолина
238
Из этого краткого перечня как находящихся в маточных
рожках в готовом виде, так и образующихся в них при раз-
ных видах обработки или бродильных процессах * веществ,
по крайней мере 3 компонента — алкалоидная фракция, тира-
мин и гистамин — играют существеннейшую роль для выявле-
ния фармакологического эффекта. Такое состояние вопроса
не позволяло подойти к оценке сырья химическим путем, так
как, кроме своей многочисленности, перечисленные вещества
обладают и разницей в вызываемом ими эффекте. В том, что
количество сопутствующих алкалоидам активных веществ мо-
жет сильно колебаться, а вместе с этим, следовательно, изме-
няться и терапевтический эффект, можно убедиться хотя бы
из опытов Форета и Веезе 446, определивших в разных образ-
цах сырья от 1 до 2,6 мг гистамина в 100 г; в препаратах ко-
лебания были еще больше: в 1 см3 содержание гистамина ко-
лебалось от следов до 0,4 мг.
Химические способы определения активности препаратов
спорыньи сводятся к определению содержания в них алкалои-
дов. Насколько кропотливым и трудным является выделение
алкалоидов из спорыньи, можно убедиться из краткого знаком-
ства с методом Форета 447. По этому методу мелко измельчен-
ные маточные рожки перколируются дву- или трехкратным
(относительно всего исходного материала) количеством смеси
равных объемов ацетона и воды. Сильно кислый перколат, не
содержащий жиров, нейтрализуется и доводится до щелоч-
ной реакции на лакмус (не на фенолфталеин); ацетон отго-
няется при уменьшенном давлении. Плохо растворяющиеся в
воде алкалоиды спорыньи после отгонки ацетона выпадают
в виде осадка. Последний отфильтровывается, промывается и
высушивается над серной кислотой. Затем осадок очищается
путем обработки хлороформом и эфиром для удаления нерас-
творимых в них веществ и примесей (стерины). После от-
фильтровывания фильтрат упаривается; остаток от упаривания
представляет собой светложелтый порошок, на 25% состоя-
щий из алкалоидов. Выделение из этого остатка чистых алка-
лоидов представляет собой еще достаточно сложную и дли-
тельную процедуру. Если даже для целей определения богат-
ства алкалоидами того или иного образца сырья остановиться
на указанном моменте получения не вполне очищенных ве-
ществ, то и этот далеко не полный путь окажется настолько
сложным и продолжительным, что воспользоваться им для це-
лей валоризации вряд ли окажется целесообразным. Количе-
ство выделяемых описанным путем алкалоидов ничтожно; для
получения даже небольшого количества приходится исходить
из больших масс сырья и соответственно больших объемов
реактивов.
• * Собственно бродильные процессы в спорынье места не имеют; обычно
описываемые под этим названием изменения сводятся к плесневению маточ-
ных рожков.
239
Более упрощенные методы определения представляют со-
бой модифицированные старинные пробы Келлера 448 и Фром-
ме 449. Не касаясь уже того, что большинство исследователей
считает все химические методы недостаточно точными и мало
пригодными для количественного анализа, следует указать на
результаты проверки этих методов со стороны возможности
получения при их помощи представления о содержании в пре-
паратах или маточных рожках алкалоидов группы эрготамина.
С этой целью были поставлены параллельно химическое и био-
логическое исследование одного и того же сырья (и препара-
тов), причем в качестве биологического критерия был взят
эффект уничтожения задерживающего влияния адреналина на
сокращения изолированной тонкой кишки кошки (Иссекутц и
Лейнцингер 45°). Оказалось, что действие в этом направлении
смеси алкалоидов, выделенных по незначительно модифициро-
ванному способу Келлера-Фромме, соответствует действию
эрготамина. Таким образом, как бы представлялась возмож-
ность базироваться на одном химическом методе исследова-
ния спорыньи, так как при его помощи можно получить до-
статочно точное представление о богатстве испытуемого
объекта специфически действующими алкалоидами. Если, да-
лее, сопоставить это с данными Форета, прямо указывающими,
что при методе выделения алкалоидов по их способу послед-
ние получаются изолированно от всех других активных и не-
активных составных частей спорыньи, то мы увидим, что тем
или иным способом химического исследования определяется
именно содержание алкалоидов. Является вопросом, доста-
точно ли обладать этими сведениями, чтобы получить точное
представление о терапевтической активности сырья или препа-
ратов. В этом отношении вполне допустимо и такое мнение,
что маточный эффект все-таки представляет собой суммарный
эффект, складывающийся как из действия алкалоидов, так и
из действия сопутствующих им биогенных аминов. Ланге-
кер 451 проводит черту между чистым действием алкалоидов
и маточным эффектом спорыньи. Первому она дает название
статического, второму — динамического эффекта, считая,
кроме того, что последний должен определяться на матке.
Резюмируя все сказанное, приходится считать, что для
оценки терапевтического эффекта спорыньи биологические ме-
тоды являются крайне необходимыми.
Для маточных рожков оценка терапевтических свойств пред-
ставляется делом особой важности еще и потому, что содер-
жание действующих начал в спорынье, кроме первоначальной
разницы в сырье, зависит еще и от чрезвычайно легкой разру-
шаемости их при хранении. Специально интересовавшийся
этим Керер 452 показал, что уже в течение только одного года
количество действующих начал может упасть до V? и даже до
Ve первоначального содержания. В течение второго года па-
.240
дение продолжается, и активность может снизиться до Vis на-
чального количества.
Аналогично вопросу об испытании сердечных средств при
выборе метода для оценки маточных рожков исследователи
шли различными путями. Разносторонность эффекта сделала
то, что пути, избиравшиеся разными авторами, разнились ме-
жду собой в гораздо большей степени, чем это имело место
даже при наперстянке. Если, в конце концов, на практике для
наперстянки привились однотипные методы, то для спорыньи
до настоящего времени продолжают существовать совершенно
различные способы исследования. Многообразность фармако-
логического эффекта — маточный, вазомоторный, вызывающий
гангрену — и невозможность воспроизведения всей его суммы
в одном опыте вполне объясняют сущность такого положения
вещей.
Для целей биологической оценки спорыньи были исполь-
зованы одинаково как ее терапевтические свойства, так и свой-
ства токсического характера. Таким образом, способность
алкалоидов спорыньи вызывать сокращение матки дала толчок
к выработке метода испытания на матках небольших живот-
ных— как на целом животном in vivo, так и на вырезанных
частях органов — рогах матки. Известный факт наступления
гангрены на определенных симметрических участках тела при
отравлении спорыньей послужил основой метода определения
богатства содержания действующих начал путем вызывания
гангрены у петухов. Свойство алкалоидов спорыньи извра-
щать действие адреналина положило основание целому ряду
биологических методов.
Эрготамин извращает действие адреналина, в каком бы на-
правлении действие последнего ни проявлялось; задерживает
сосудосуживающий эффект адреналина на изолированном по
Кравкову ухе (Ротлин 453), голове и конечностях (Хеймане и
Ренье443), на децеребрированной кошке устраняет наступаю-
щий от адреналина подъем кровяного давления (Форет 447);
парализующий эффект адреналина на кишку не имеет места
после предварительного воздействия эрготамина (Пла-
неллес 454). Сосудистым препаратом лягушки (нижние конечно-
сти) воспользовался Масуда 455, определяя, какое количество
испытуемого препарата нужно для того, чтобы вызвать пони-
жение адреналинового эффекта в течение определенного вре-
мени на известную степень. В другой модификации методика
эта рекомендуется также Маном и Рейнертом 456, которые одно-
временно пропускали через одну конечность эрготамин, а че-
рез другую — испытуемый препарат и определяли параллель-
но влияние растворов того и другого на сужение сосудов про-
пускаемого через сосуды обеих лап адреналина. Брум и
Кларк 457, а за ними Браун 458 определяют качество препара-
тов спорыньи по их способности парализовать сокращения
матки кролика, вызванные ’адреналином.
ю —зо 241
Прямой вазомоторный эффект спорыньи непостоянен: да-
вая в некоторых случаях сужение сосудов, как препараты
спорыньи, так и выделенные из нее чистые основания в дру-
гих случаях способны давать обратную картину. Тем не менее
и эти свойства спорыньи оказались использованными со
стандартизационными целями. Пробовали судить о свойствах
спорыньи по повышению и понижению кровяного давления.
Однако непостоянство эффекта заставило отказаться от спо-
собов такого рода. Целая масса условий, сплошь и рядом не-
значительных, способна совершенно менять картину действия.
Вид животного (в зоологическом смысле), наркоз, децереб-
рирование и, наконец, даже доза (для эрготамина это пока-
зано Ротлином) меняют результат не только количественно,
но даже и качественно. Сущность этого явления лежит, неви-
димому, в том, что активные начала спорыньи действуют как
на сосудорасширяющие, так и на сосудосуживающие нерв-
ные окончания и что в разных случаях преобладающее зна-
чение получает та или иная сторона действия.
Указанными примерами, конечно, далеко не исчерпывается
перечень всевозможных методов как предлагавшихся ранее,
так и вновь публикуемых.
Если методы, основанные на вазомоторном эффекте маточ-
ных рожков, не заслужили признания, то испытание по маточ-
ному гангренозному извращающему действие адреналина
эффекту получило известное распространение.
Метод испытания на вырезанном роге матки морской
свинки был принят VII изданием Фармакопеи СССР (в первом
тираже 1925 г). Фармакопея США предлагает исследовать спо-
рынью по начальной стадии гангренозного процесса на греб-
нях у петухов; метод, основанный на извращении адреналино-
вого эффекта на матке, хотя и не получил официального
признания, но был признан практически пригодным и доста-
точно точным Международной комиссией в 1928 г. Основа-
нием для этого заключения послужили данные работы Бёрна
и Эллис 4581. Такое резкое расхождение в выборе методов
само по себе достаточно показательно и указывает на то, что
ни один из этих методов не является безоговорочно хорошим.
Принятый в VII издании Фармакопеи СССР метод был осно-
ван на прямом определении способности препаратов спорыньи
• сокращать матку. В этом методе принципиальной положитель-
ной стороной являлась оценка препарата по его терапевтиче-
скому эффекту. В подтверждение принципиальной справедли-
вости такого выбора можно привести упомянутое выше поло-
жение Лангекера451 о «динамическом» эффекте спорыньи и о
желательности определения его на матке. Интересно далее
вспомнить и указание о том, что лучшей заменой спорыньи
могла бы явиться комбинация эрготамина с гистамином
(Кнаффль-Ленц62). Как указано выше, эрготамин обладает
всеми присущими спорынье свойствами, а гистамин, сокращая
242
матку, в то же время расширяет сосуды. Таким образом, матка
является органом, на котором может быть определена актив-
ность обоих компонентов указанной смеси. Опытами на пере-
живающей матке для биологической оценки спорыньи предла-
гал воспользоваться Сторм ван Лёвен 5.
Все эти соображения вполне объясняют выбор советской
Фармакопеи в качестве объекта матки. О том, матка какого
животного и в каком состоянии является наиболее подходя-
щей для опыта, высказывалось много разноречивых предполо-
жений. Не входя в их оценку, укажем, что переживающая
матка девственной морской свинки, не находящаяся в состоя-
нии течки, является для испытания сокращающего действия
спорыньи наиболее пригодной. Особенности этого органа и
техника работы на нем подробно описаны в главе о препара-
тах задней доли гипофиза. Здесь следует лишь снова подчерк-
нуть, что основным достоинством переживающей матки дев-
ственной морской свинки является отсутствие у этого органа в
спокойном состоянии произвольных сокращений и сравни-
тельно быстрое возвращение к расслабленному состоянию
после сокращения.
Весьма трудным является вопрос о выборе стандартного
препарата для спорыньи. Естественно, что наилучшим стан-
дартным препаратом был бы нативный экстракт, содержащий
всю сумму действующих начал в тех же взаимоотношениях,
в которых они находятся в исходном материале. Получение
такого препарата и притом, как это должно быть для стан-
дартного препарата, обязательно стойкого едва ли возможно
в связи с постоянным изменением состава действующих на-
чал маточных рожков. С одной стороны, отмечается падение
содержания алкалоидов, с другой — увеличение содержания
биогенных аминов, причем последнее явление может иметь ме-
сто не только в результате плесневения маточных рожков (не-
правильно называемого брожением), но и вследствие фермен-
тативных процессов. Естественная мысль об использовании в
качестве стандартного препарата химически чистых алкалои-
дов спорыньи тоже встречает некоторые и достаточно серьез-
ные возражения. Несмотря на то, что эрготамин и эрготоксин
обладают всеми присущими маточным рожкам свойствами, при
их использовании в качестве стандарта выпадают из наблюде-
ния свойства испытуемых объектов, связанные с наличием
в них биогенных аминов. Кроме этого соображения, против
какого-либо отдельного алкалоида говорит их множествен-
ность и, как мы видели выше, даже и разный характер дей-
ствия.
Фармакопея СССР, исходя из работ Сторм ван Лёвена и
Чечулина 454*, остановила свой выбор на гистамине р-имидо-
азолилэтиламине. Против этого вещества в качестве стандарт-
ного препарата для спорыньи можно привести все только что
сказанное относительно чистых алкалоидов. Основанием для
ib* 243
выбора послужило то обстоятельство, что картина эксперимен-
тального эффекта на переживающей матке морской свинки от
препаратов спорыньи и гистамина является одинаковой и кри-
вые действия концентрации этих двух объектов в известной
части совпадают между собой.
Практическое пользование методом биологической оценки
Фармакопеи СССР себя не оправдало. Данные, которые полу-
чались разными лабораториями, обнаруживали чрезвычайно
резкое расхождение. В то время как активные маточные рож-
ки, по мнению некоторых, в условном исчислении, которым
предлагала пользоваться Фармакопея, должны были иметь и в
действительности имели V, равный 12—15-ти (Саргин 455 а),
другие считали, что пригодной является спорынья с V, равным
3—4-ем (Клепиков 456а). Многими отмечалась необычайно вы-
сокая чувствительность матки, благодаря которой даже и ма-
ло активные препараты получали удовлетворительную оценку.
Неравномерность получавшихся результатов зависела, ко-
нечно, от чрезвычайно многих обстоятельств. Весьма серьез-
ным моментом является изменение чувствительности матки во
время опытов, которая возрастает, невидимому, как об этом
можно судить на основании массовых экспериментов, не в оди-
наковой степени по отношению к гистамину и препаратам
спорыньи. Сама по себе высокая чувствительность органа не
может, конечно, служить препятствием для опыта, а скорее
при умелом ее использовании является положительным фак-
том. Изменение чувствительности в опыте было точно указано
Чечулиным, который прямыми опытами показал, что повтор-
ное введение одних и тех же доз препаратов спорыньи, даю-
щих сначала ничтожные сокращения, ведет к постепенному
(не резкому) увеличению чувствительности матки, выражаю-
щемуся в увеличении ответной реакции матки. Естественно,
что неравномерное нарастание чувствительности по отношению
к стандартному и испытуемому препаратам снижает точность
получаемых данных. Другим моментом, весьма влиявшим на
точность результатов испытания самих маточных рожков, был
неудачный метод экстракции действующих начал водою, ко-
торая едва ли может обеспечить полную экстракцию алкалои-
дов спорыньи. Не последним соображением, с моей точки зре-
ния, является и относительная трудность проведения испыта-
ний на переживающей матке — органе, достаточно капризном
и требующем к себе самого внимательного отношения.
Все вместе взятые соображения привели к тому, что фар-
макопейная комиссия Наркомздрава отказалась от метода био-
логической оценки спорыньи, как практически не получившего
распространения вследствие сложности и неточности. Таким
образом, еще одна попытка количественной оценки этого
сложного продукта /ебя не оправдала, как это имело место
раньше и имеет место и сейчас и по отношению к химическим
244
методам количественного определения активных начал спо-
рыньи.
Ввиду огромной важности подыскания удовлетворитель-
ного метода количественной оценки активности спорыньи сле-
дует остановиться на некоторых методах, принципиально от-
личных от описанного. Вместо прямой регистрации сокращаю-
щего матку действия наибольшее распространение и, как было
указано выше, одобрение Международной комиссии получил
метод определения способности активных начал маточных
рожков к извращению действия адреналина. Барджер и
Дэль 457а, впервые описавшие отсутствие повышающего кровя-
ное давление действия адреналина у кошек после введения им
эрготоксина, положили основание целому ряду таких методов.
Из них наибольшее распространение получил метод Брума и
Кларка 457а, которые определяют количество испытуемого пре-
парата, способное задержать проявление действия адрена-
лина на матку крольчихи. Здесь, следовательно, мы встре-
чаемся с упомянутым выше любопытным фактом определения
активности препаратов спорыньи по их способности препят-
ствовать проявлению сокращений матки. Метод Брума и
Кларка получил ряд подтверждений в литературе (например,
Браун 458 и, особенно, Бёрн и Эллис 458а). Несмотря на благо-
приятные отзывы и рекомендации Международной комиссии,
этот метод, однако, официально не принят ни одной из
фармакопей.
Несколько странным представляется на фоне всего сказан-
ного выше точка зрения Фармакопеи США, которая как в
прежних изданиях, так и в последнем (XI издание, 1936) пред-
лагает для испытания спорыньи метод, основанный на вызы-
вании гангрены гребня петухов.
В СССР описанный метод был применен Могильским и Мо-
гильской 459а, опыты которых показали очень значительные
индивидуальные отклонения в реакции отдельных экземпля-
ров; эти авторы полагают, что выразить результаты исследо-
ваний по степени окраски в абсолютных цифрах было бы
весьма затруднительно.
Этот метод основан на работах еще прошлого столетия
(Лоринзер 459, Хаутон 46°) и начала настоящего (Сантессон461),
когда авторы не располагали сколько-нибудь чистыми препа-
ратами для изучения реакции. С выделением эрготоксина и
эрготамина оказалось возможным подтвердить, что гангреноз-
ный эффект присущ алкалоидам спорыньи. На основной во-
прос, насколько точное представление об активности препара-
тов спорыньи можно получить, пользуясь определением ее
гангренозного действия, удовлетворительный ответ дает
исследование Эдмундса и Хэля4С2, получивших при помощи
этого метода удовлетворительные результаты.
Весьма слабым местом этого способа испытания является
отсутствие объективного мерила для определения степени из-
245
менения окраски гребня. Попытка регистрации изменений
объема гребня не дала положительных результатов (А. Крау-
форд и И. Крауфорд 463). Это, вероятнее всего, зависит от того,
что характер изменений в гребне под влиянием препаратов
спорыньи аналогичен тем изменениям, которые образуются
в гребне в результате зажима гребня у основания на 3—4 дня
и не вызывает резких изменений в объеме (сперва — сужение
сосудов, затем — их расширение со стазом, далее — образова-
ние гиалиновой массы с захваченными эритроцитами и др.)
(Льюис и Гефлэнд404).
В том, что указанный метод, так же как и другие биологи-
ческие методы оценки спорыньи, не решает полностью во-
проса, можно судить еще хотя бы и по тем изменениям, кото-
рые внесены в новое издание Фармакопеи США. Оставляя в
стороне ряд мелких изменений, касающихся технических усло-
вий опыта (частота пользования петухами, их возраст и др.),
укажем лишь на замену стандарта. В прежних изданиях стан-
дартом служил специальным образом приготовленный
экстракт, выдержанный после приготовления не менее полу-
года, что указывает на изменение с течением времени ак-
тивности нативных экстрактов. В последнем издании в ка-
честве стандарта принят этаносульфоновокислый эрготоксин
C35H41O6N5C2H5SO3H. Возражения против такого стандарта
были указаны на стр. 243. Для испытания маточные рожки из-
влекаются кислым спиртом (98 объемов разведенного спирта
и 2 объема соляной кислоты). Стандартный препарат раство-
ряется в 1% водном растворе виннокаменной кислоты с таким
расчетом, чтобы 1 см3 содержал 0,5 мг. Раствор стандартного
препарата готовится ex tempore. Маточные рожки должны об-
ладать такой активностью, чтобы экстракт из 1 г рожков да-
вал эффект, равновеликий эффекту, вызываемому 0,5 мг стан-
дартного препарата.
Для уточнения характера потемнения гребня указывается,
что вызываемое пороговой дозой (т. е. наименьшей активной
дозой) потемнение гребня сильно выражено лишь в задней
трети гребня, значительно слабее в средней и почти отсут-
ствует в передней.
1 см3 жидкого экстракта спорыньи должен давать действие,
не меньшее, чем 0,5 мг стандартного препарата.
Для характеристики изменчивости требований или же не-
точности результатов по этому методу любопытно отметить,
что 1 см3 применявшегося в прежних изданиях Фармакопеи
США жидкого стандартного препарата, который должен был
вызывать потемнение в дозе 0,5 см3 на 1 кг веса петухов, по
определению Эдмундса и Хэля, приблизительно соответство-
вал по действию 2,5 мг эрготоксина. Таким образом, так как
средний вес петуха близок к 2 кг, по данным указанных авто-
ров, активная доза стандартного препарата соответствовала
2,5 мг эрготоксина. Теперь активной дозой являются 0,5 мг
246
этого же алкалоида. Позволительно допустить, что здесь мы
имеем дело не только с изменением требований, но и с коле-
баниями данных разных наблюдений. Интересно, далее, вспо-
мнить, что, по данным Коберта и Грюнфельда 465, способность
спорыньи вызывать гангрену успевает претерпеть сильное по-
нижение тогда, когда маточный эффект не является еще за-
метно ослабленным. Это обстоятельство служит также серьез-
ным возражением против этого метода.
ГЛАВА XV
РАЗЛИЧНЫЕ РАСТИТЕЛЬНЫЕ ПРОДУКТЫ
1. Морской лук (Scilla maritima). Кроме перечисленных в
отделе испытываемых по нашей Фармакопее сердечных
средств — наперстянки, горицвета и строфанта, — на практике
применяются биологические испытания и некоторых других
сердечных средств растительного происхождения, из которых
главнейшими являются препараты морского лука и ландыша.
В то время как препараты ландыша имеют у нас довольно ши-
рокое распространение, к препаратам из луковиц морского
лука (bulbus Scillae) на практике прибегают редко. Последние
имеют сравнительно большое распространение в США и на-
чали завоевывать себе симпатию в Западной Европе, в особен-
ности после того, когда Штоллем было выделено актив-
ное начало морского лука — глюкозид сцилларен. Фармакопея
США в IX и X изданиях предписывала биологическое испыта-
ние препаратов морского лука, по прописи во всех деталях
совпадающее с таковым для препаратов наперстянки и стро-
фанта. Стандартным препаратом служил тот же уабаин (стро-
фантин). Неправильность выбора данного стандарта специально
для морского лука была показана Бэрном 466, который при ис-
пытании препаратов морского лука на кошках и лягушках по-
лучил со строфантином в качестве стандарта резко расходя-
щиеся между собой данные, тогда как сравнение со сцилларе-
ном давало вполне сходные результаты. Эти наблюдения
полностью подтверждают неоднократно высказанное мнение
о предпочтительности выбора в качестве стандартов произ-
водных того же вида сырья, к которому относится испытуе-
мое средство. В XI издание Фармакопеи США метод биологи-
ческой оценки морского лука не включен.
По своему отношению к человеку и лягушкам морской лук
ближе всего подходит к горицвету: тогда как одна весовая
часть сырья морского лука содержит при выражении в лягу-
шачьих единицах действия в три раза более активных начал,
чем наперстянка, в клинике последняя применяется при назна-
чении внутрь приблизительно в тех же дозах (Маркваль-
дер 467). По Хауптштейну 467а, разница эта еще больше: при
расчете на ЕД наперстянка дается в дозах 3—6 ЕД, стро-
248
фант —15—30 ЕД, а морской лук — 30—60 ЕД на прием. При
введении 'путем инъекции эти соотношения, как и для всех за-
местителей наперстянки, резко меняются; при назначении па-
рэнтерально требуются гораздо меньшие дозы.
2. Ландыш (Herba Convallaria majalis). Что касается ис-
пытания препаратов ландыша, так широко распространенных
у нас, то здесь на этом вопросе придется остановиться не-
сколько подробнее. Кроме общей многим препаратам расти-
тельного царства недостаточности сведений о химическом
строении действующих начал и невозможности пользоваться
ими для целей оценки активности и отдельных образцов, пре-
параты ландыша отличаются большим разнообразием в приго-
товлении. Активность препаратов в сильной мере колеблется
в зависимости от того, из какой части растения они изгото-
влены. Не касаясь предписаний Фармакопеи, по которой на-
стойка ландыша должна готовиться определенным путем, а
именно из свежей травы в отношении 1 • 1,2, мы на практике
часто встречаемся с выпускаемыми разными заводами настой-
ками, приготовленными то из одних листьев, то из одних цве-
тов, то из того и другого вместе, причем все эти разновидно-
сти. готовятся иногда из сухого, иногда из свежего материала.
Со времени Вальца 468 было принято считать, что в листьях
и цветах ландыша находятся два глюкозида — активный кон-
квалламарин и неактивный конвалларин. Лишь в последние
десять лет был опубликован ряд новых исследований по химии
действующих начал ландыша. Центральное место среди них
принадлежит работе Каррера 469, выделившего из цветов лан-
дыша глюкозид конваллотоксин, по своим фармакодинамиче-
ским свойствам оказавшийся близким строфантину (Фром-
херц 470). Выделение этого вещества еще больше повысило ин-
терес к ландышу, так как оказалось, что при парэнтеральном
введении оно по активности даже несколько превосходит стро-
фантин. Объектом биологической оценки поэтому теперь де-
лаются препараты, рассчитанные на применение путем инъек-
ций в качестве высокоактивных представителей группы напер-
стянки (Саргин 47г).
Для испытания различных настоек ландыша пользуются
обычными способами испытания активности сердечных препа-
ратов, именно определением наименьшей дозы, вызывающей
систолическую остановку сердца.
Нам пришлось испытывать продажные препараты ландыша
в течение многих лет, причем для испытания мы пользовались
методикой, предлагаемой Союзной Фармакопеей для сердеч-
ных препаратов. Испытанию подверглись различные настойки
как местного, так и заграничного производства.
Общим для всех обычных препаратов ландыша (аналогично
морскому луку) свойством является их большая активность в
опыте на животных при сравнительно малой активности на че-
ловеке. Тогда как настойка наперстянки, содержащая в 1 сма
219
4—6 ЕД, достаточно богата действующими началами для того,
чтобы быть активной в количестве 15—20 капель на прием, на-
стойки ландыша содержат в 1 см3 от 15 до ^0 ЕД. Колебания
содержания действующих начал в разных образцах разного
происхождения достигают очень значительных размеров. По-
пытки произвести сравнительную оценку между собой отдель-
ных образцов приводят к следующим выводам.
Наиболее активными настойками являются приготовлен-
ные из цветов; тинктуры, приготовленные или из одних ли-
стьев, или из всей травы, отличаются меньшей активностью.
Активность тинктур, приготовленных в равном процентном от-
ношении к сырью из цветов и листьев, колеблется в зависимо-
сти от качества сырья в отношении от 5 :3 до 3 : 1.
В абсолютных цифрах активность обычных продажных
тинктур, приготовляемых из свежей травы, невелика: 1 г на-
стойки содержит 15—20 ЕД. По литературным данным (Цон-
дек 472), настойки разных фирм содержали в 1 см3 10—15 ЕД
(для препаратов, изготовленных из свежей травы в отношении
1:2 и 1:1). Необходимо оговориться, что эти данные полу-
чены при испытании на лягушках по 24-часовому методу, где
для остановки сердца потребны несколько большие дозы пре-
парата, чем при наблюдении в течение одного часа, почему
для сравнения с нашими данными цифры эти должны быть
несколько увеличены.
Настойки, приготовляемые из сухих и свежих частей расте-
ния, не разнятся в силе между собой, если сохранены пропор-
циональные отношения. Другими словами, высушивание не ме-
няет активности растения, а только сводится к удалению влаги.
Если сравнивать между собой тинктуру, приготовленную из
свежих листьев в отношении 1 : 1 или из сухих листьев в от-
ношении 1 : 8 (принимая во внимание, что при сушке вес ра-
стения уменьшится приблизительно в 8 раз), то и та, и другая
будут обладать приблизительно одинаковой активностью. Те
же отношения сохраняются и для цветов.
Самыми богатыми действующими началами оказываются
настойки, приготовленные из сухих цветов. Приготовляемая в
отношении 1 : 8 тинктура из сухих цветов содержит в 1 см3
от 40 до 50 ЕД.
Что касается самой техники производства испытания, то
она во всех подробностях совпадала с таковой для напер-
стянки, горицвета и строфанта, предписываемой нашей Фарма-
копеей. В качестве стандарта, по существу, должен был бы
применяться стойкий препарат ландыша с определенной силой
действия. Ввиду сравнительной эпизодичности работ такого
рода мы пользовались определением резистентности лягушек
при помощи стандартного препарата наперстянки. Несмотря на
то, что в отдельных случаях при этом способе сравнения по-
лучались вполне совпадающие результаты, как это видно из
приводимого ниже протокола испытания четырех настоек лан-
250
дыша, неправильность выбора стандарта заставляет считать
все приведенные выше цифры довольно относительными. Воз-
можность ошибки хорошо иллюстрируется примерами испыта-
ния на лягушках кристаллического конваллотоксина Фром-
херца470 и Вейкера 473, из которых первый нашел, что 1 мг
конваллотоксина содержит 3 500 ЕД, а второй — лишь от
1 700 до 1 800 ЕД. При одном из испытаний различных настоек
были получены следующие результаты:
№
Способ изготовления
Результаты
1 1 часть сухих цветов:8 частей спирта 1 см3 содержит 44 ЕД
2 1 часть сухих листьев: 8 частей спирта 1 » 15 »
3 1 часть сухих цветов -f-1 часть сухих листьев : 8 частей спирта 1 > » 30 »
4 1 часть сухих цветов -J- 6 частей сухих листьев : 46 частей спирта 1 » 18 »
На примере этого опыта, производившегося в течение не-
скольких дней, видна большая точность реакции: получив для
тинктуры из цветов 44 ЕД в 1 см3 и для тинктуры из листьев
,15 ЕД, для смешанных тинктур (№ 2 и 4) мы должны ожи-
дать содержания действующих начал 29,5 (—~—) для пер-
! 444-15-7 \ \ 2
вой и 19 ---- 1 для второй, тогда как соответственно по-
лучены цифры 30 и 18, как нельзя более совпадающие с теоре-
тическим расчетом.
Данные этого испытания показывают, что 1 г сухих цветов
содержит более 300 ЕД, а листьев — 120 ЕД. Чрезвычайно вы-
сокая активность препарата ландыша для инъекции для теп-
локровных животных была показана на примере препарата
конваллена, в дозе 0,2 см3 на 1 кг веса вызывающего остановку
сердца у кошки при медленном внутривенном введении (Сар-
гин 471).
Биологическим испытанием доказана одинаковая раствори-
мость действующих начал ландыша в спирте и воде: водные
или спиртовые экстракты содержат в равновеликих объемах
одинаковое количество действующих начал. Препараты лан-
дыша отличаются чрезвычайно высокой стойкостью, переносят
нагревание до 100° и длительное хранение без заметной по-
тери активности (Саргин, Мэнч и Кретц 471а).
Из других произрастающих в СССР растений, относящихся
по содержанию активных начал к группе наперстянки, наи-
большее значение имеют обвойник(Репр1оса graeca) и олеандр
(Nerium oleander). Препараты из коры обвойника неоднократно
изучались, но широкого распространения не получили. Обыч-
ные препараты из листьев олеандра мало активны. Для полу-
251
чения активных препаратов, невидимому, требуется выделение
высокоактивных фракций («фолинерин»). Биологическая
оценка препаратов из обвойника и олеандра проводилась ме-
тодами, принятыми для наперстянки.
3. Индийская конопля (Herba Cannabis indicae). Индий-
ская конопля принадлежит к числу растений, действующие на-
чала которых, обладающие очень большой активностью, хими-
чески изучены очень мало. Применение препаратов индийской
конопли в медицине основано на их действии на центральную
нервную систему. В первой стадии препараты индийской ко-
нопли вызывают наркотическое действие, переходящее во вто-
ром периоде в возбуждающее, которое заканчивается насту-
плением галлюцинаторного состояния. Кроме наркотического
эффекта, конопля обладает еще некоторым диуретическим дей-
ствием, которое, однако, не может быть отнесено к основным
свойствам растения, так как оно проявляется непостоянно,
вариируя в зависимости от пути введения и т. д. (То-
блер 474). С лечебными целями препараты применяются только
как успокаивающие и болеутоляющие. Отсутствие химических
способов оценки заставило прибегнуть к биологическому опре-
делению, несмотря на то, что последнее, как мы увидим ниже,
не может рассчитывать на обычную для биологических мето-
дов точность.
Действующие начала смолы из соцветий индийской коно-
пли («гашиш», «анаша») растворимы в петролейном эфире и
химически, по мнению Френкеля 475, вероятно, представляют
собою фенолальдегид. В силу этого они являются легко под-
дающимися окислению и распаду, чем создаются препятствия
для химического исследования.
В IX и X изданиях Фармакопеи США предлагалось прово-
дить испытание препаратов индийской конопли путем опреде-
ления дозы, вызывающей у собак определенную картину рас-
стройства мышечной координации, которая выражается кача-
нием при стоянии и атаксией при движении. Собаки были вы-
браны для опыта, несмотря на крайнюю неравномерность их
реакции на препараты конопли. Мнение Френкеля об исклю-
чительном действии конопли на человека и собак опроверг-
нуто Тоблером, показавшим, что общее действие можно на-
блюдать и на других животных, в частности, на кроликах.
Трудность объективной оценки состояния, вызванного препа-
ратами конопли, крайне затрудняет определение нужной дозы.
В связи с этой неясностью и изменчивой реакцией животных
получение удовлетворительных результатов по этому методу
было невозможно. X издание Фармакопеи США резко изме-
нило требование к препаратам сравнительно с требованиями
IX издания (доза от 0,3 до 1 см3 жидкого экстракта на 1 кг
веса в X издании вместо максимальной дозы 0,3 см3 в IX из-
дании), а в XI издание 1936 г. метод биологической оценки
индийской конопли не включен вовсе.
252
Очевидная неудовлетворительность метода на собаках по-
буждала к изысканию других путей исследования. Так, напри-
мер, Вьеховский 476 указал, что для испытания приготовляе-
мого из индийской конопли гашиша можно пользоваться опре-
делением токсической дозы на мышах. Последним внутрибрю-
шинно вводятся масляные растворы петролейно-эфирных экс-
трактов гашиша. Штрауб 477 и Гайер 478, изучая реакцию кро-
ликов на препараты индийской конопли, установили, что при
непосредственном введении в кровь растворы активных начал
конопли вызывают у этих животных общую анестезию, выра-
жающуюся, в частности, в невосприимчивости роговицы к
местному раздражению, которое перестает вызывать обыч-
ный рефлекс. Этим моментом они воспользовались как крите-
рием для оценки действия препаратов конопли, после того как
было доказано постоянство этой реакции и зависимость ее
наступления от воздействия на животное определенного мини-
мума действующих начал. Минимальное количество препарата
индийской конопли, способное вызвать угасание роговичного
рефлекса у кролика, получило название «роговичной единицы
действия» (КД — корнеальная доза). Наступление этой реак-
ции у кроликов сопровождается одновременным появлением
атаксии и склонности к каталептическому состоянию. Как
общий эффект, так и действие на роговицу проходят через не-
который промежуток времени. Для введения кролику гото-
вятся ацетоновые растворы выделяемой из травы сырой
смолы. Для получения последней экстрагируют сырье легко
кипящим петролейным эфиром, который извлекает всю смолу.
После отгонки эфира остаток растворяется в теплом спирте;
из этого раствора на холоду выпадает небольшое количество
балластных нерастворимых веществ, которые затем удаляются
механически. После отгонки спирта остается смола, растворяе-
мая в ацетоне.
Растворы смолы в ацетоне вводятся кроликам внутривенно
(так как установлено, что per os доза должна быть десяти-
кратной сравнительно с вводимым внутривенно количеством),
что переносится животными легко.
Содержание смолы в разных образцах травы различно. Вы-
сокоактивное сырье содержит около 28°/о смолы. Для такого
сырья готовится ацетоновый раствор с содержанием в 1 см3
0,1 г травы, что при пересчете составит 0,028 г смолы. 1 КД
оказалась равной 0,2 см3 такого экстракта на 1 кг веса живот-
ного, что соответствует 0,02 г травы, или 0,0056 г сырой смолы.
1 КД является минимальным количеством, вызывающим эффект
у человека.
При практическом выполнении этого испытания нужно
иметь в виду, что введение ацетонового раствора следует про-
водить весьма медленно. При быстрых введениях даже одного
ацетона кролики часто погибают. Введение производится
в краевую ушную вену. Потеря чувствительности роговицей
253
наблюдается уже через 15—20 минут и держится в течение
15—20 минут. Чувствительность роговицы восстанавливается
при сохранении у кроликов всех прочих явлений действия ин-
дийской конопли. Каждую дозу следует вводить трем кроли-
кам и получить совпадающий результат не менее чем у двух.
Ввиду того что остающаяся после отгонки спирта смола
нацело растворяется в ацетоне и что при этом, следовательно,
происходит просто замена одного растворителя другим, мы
(Саргин и Васильева 479) испробовали возможность введения
животным спиртовых растворов смолы. Установив предвари-
тельно, что сам по себе спирт в тех же дозах не вызывает по-
тери чувствительности роговицы, мы не только получили то
же действие от спиртовых растворов, но смогли при этом от-
метить более быстрый и отчетливый эффект, чем наблюдав-
шийся в параллельных опытах эффект от тех же доз раство-
ров смолы в ацетоне.
При испытании самой распространенной у нас фармацевти-
ческой формы — Extr. Cannabis indicae (spissum) — мы пользуем-
ся непосредственным растворением этого препарата в горячем
спирте и фильтрованием раствора по охлаждении (при охла-
ждении осадка часто не образуется вовсе). Имея лишь неболь-
шой опыт по испытанию этих препаратов, мы можем указать,
что некоторый образцы вызывают потерю чувствительности
роговицы у кроликов уже при введении им по 0,25 см3 1°/о
спиртового раствора. Таким образом, подобные образцы со-
держат в 1 г 400 роговичных ЕД.
Советская фармацевтическая промышленность очень заин-
тересована в наличии какого-либо метода для оценки препа-
ратов индийской конопли. В качестве такового можно исполь-
зовать описанный метод на кроликах с той оговоркой, что при
его помощи могут быть получены лишь ориентировочные дан-
ные, так как при отсутствии стандартного препарата и нали-
чии несомненных значительных колебаний в реакции отдель-
ных кроликов говорить о большой точности метода не прихо-
дится.
В фармакологической лаборатории Научно-исследователь-
ского химико-фармацевтического института в Москве подвер-
гался испытанию ряд образцов индийской конопли, культиви-
рованной в разных областях нашего Союза, например, в Су-
хуми, Крыму, Киеве и даже под Москвой. Все эти образцы
оказались неактивными при испытании на собаках. Этим под-
тверждаются прежние наблюдения о том, что перенос индий-
ской конопли в другие климатические условия лишает ее
свойств, присущих экземплярам, произрастающим на родине
растения, или же резко снижает количество действующих
начал.
Испытание культивируемой в Германии травы на кроликах
показало, что она содержит качественно те же вещества,
что и выращенная на Востоке, но что количество дей-
254
ствующих начал в этой траве составляет лишь от Vis
до Vio того количества, которое содержится в обычных хоро-
ших продажных образцах (Штрауб 477).
4. Аконитин. Один из самых сильно действующих алкалои-
дов — аконитин — должен, по требованию Фармакопеи США,
подвергаться биологическому испытанию, которое заключается
в определении дозы, убивающей морскую свинку. Несколько
измененные сравнительно с предыдущими изданиями требова-
ния XI издания сводятся к следующему.
Опыт ведется на морских свинках весом от 250 до 350 г
с отклонением для каждого опыта не более чем на 50 г, ка-
ждая доза вводится десяти животным. Искомая доза должна
вызывать смерть не менее чем у трех и не более чем у семи
животных. Стандартным препаратом служит чистый аконитин;
для опытов растворяют 15 мг в 100 см3 70° кислого спирта
(pH = 3) и сохраняют в течение 6 месяцев. Испытуемый и
стандартный препараты в соответствующем разведении вво-
дятся животным под кожу живота. Результат опыта реги-
стрируется через 6 часов.
Требования, предъявляемые к готовой тинктуре: 1 см3 при
сравнении со стандартом не должен содержать более 0,16 и
менее 0,14 мг аконитина. Растворы аконитина (по вышеуказан-
ной прописи) должны убивать морскую свинку в дозе, не мень-
шей, чем 0,0004 см3 на 1 г веса, что соответствует 0,00006 мг.
Крайняя сложность и запутанность действия аконитина на
центральную и периферическую нервную систему затрудняет
выбор какой-либо специфической реакции для цели биологиче-
ской оценки препаратов этого алкалоида. В свое время Ахша-
румов 479 \ а за ним ряд других авторов, и особенно Фюнер 480,а
описали картину действия аконитина на изолированное сердце
лягушки (Rana esculenta). Фюнер отметил при пропускании
аконитина некоординированные сокращения отдельных участ-
ков сердечной мышцы («перистальтические сокращения»).
Брандт 480 предложил воспользоваться этим методом, записы-
вая работу отравленного сердца на кимографе и сравнивая
действие испытуемого и стандартного препаратов на одном и
том же сердце. Для отмывания сердца после пропускания он
пользовался раствором Рингера с добавлениехМ к нему ацетона.
Такого рода испытание нельзя считать подходящим для ако-
нитина, так как действие на сердце не является для него ха-
рактерным и так как изолированное сердце лягушки сравни-
тельно легко реагирует перистальтическими сокращениями на
различные вещества.
5. Валериана (Valeriana officinalis). Ввиду того что во-
прос о действующих началах валерианы до сих пор является
еще нерешенным и что в содержании их наблюдаются большие
колебания, многими авторами поднимается вопрос о биологи-
ческой оценке как корня валерианы, так и .различных его гале-
новых препаратов. Отсутствие стойкого стандартного препа-
255
рата и сравнительная трудность объективной регистрации на-
ступающего в опыте угнетения центральной нервной системы
лишают все методы необходимой степени точности. Этим, оче-
видно, следует объяснить расхождения в результатах, получен-
ных разными авторами. Не касаясь вопроса о химическом
определении эфирного масла корня валерианы, имеющего до-
вольно сложный состав (борнеол в виде эфиров разных кис-
лот, некоторые жирные кислоты и т. д.), укажем только на те
расхождения, которые имеются во взглядах на значение ак-
тивных начал и активность отдельных галеновых препаратов.
Нолле481 биологическим путем установил активность валериа-
новых препаратов после удаления эфирного масла; Ордын-
ский 482 на основании своих данных в аналогичных опытах на
лягушках считает, что угнетение центральной нервной системы
зависит главным образом от эфирного масла. Этот же автор
считает инфузы валерианы почти не содержащими активных
начал, тогда как, по данным Друкерей и Кёлера 483, проводив-
ших свои опыты на мышах, самыми активными из галеновых
препаратов являются именно инфузы, что говорит против
предположения о наличии активных начал в липоидной фрак-
ции валерианового корня. Эти примеры достаточно красноре-
чиво указывают на то, что вопрос о биологической оценке
препаратов валерианы еще далеко не может считаться раз-
решенным.
Все предполагавшиеся методы сводятся к определению до-
зы, вызывающей тем или иным способом регистрируемое угне-
тение центральной нервной системы животных, лягушек или
теплокровных, описанное для препаратов валерианы в 1876 г.
Бинцем 464.
Нолле, первый из предложивших испытывать биологиче-
ским путем препараты валерианы, считает за 1 ЕД то наимень-
шее количество препарата, которое, будучи введено подкожно
лягушкам (Rana temporaria) весом 30—35 г, вызывает у них
констатируемое в течение часа угнетение центральной нервной
системы, определяемое потерей способности перевертываться
со спины. Для практического проведения этого метода необ-
ходимо настойки валерианы сначала упаривать для удаления
спирта и эфира, которые сами по себе способны вызывать по-
добное действие, и заменять отогнанные вещества водой. Чув-
ствительность метода невысока: для получения нужного эф-
фекта требуется введение активных начал, содержащихся
в 1 см3, а часто и более, обычной эфирно-валериановой на-
стойки. Очень тщательно обследовавший все препараты вале-
рианы Ордынский 485 пользовался как описанным методом
Нолле, так и определением угнетения центральной нервной
системы по исчезновению у лягушек квакательного рефлекса
(приподнятая за спинку лягушка не квакает) на 1 час, считая
с момента исчезновения рефлекса, для чего требуются гораздо
меньшие количества препаратов. Кохман и Кунц 486 определяют
256
у лягушек различную степень угнетения. Исчезновение враща-
тельного рефлекса у лягушек — поворот головы в сторону,
противоположную вращению тарелки, на которой сидит ля-
гушка, — соответствует параличу среднего мозга и, может
быть, обонятельной доли; потеря способности вынырнуть из-
под стоящего на камнях колокола, наполненного снизу водой,
соответствует параличу большого мозга (при исключении, ко-
нечно, паралича спинного мозга или периферических нервов).
Угнетение центральной йервной системы у теплокровных
животных для оценки активности препаратов валерианы пер-
вым использовал Хафнер 4S7, определяющий наименьшую дозу
на 1 г веса белой мыши, вызывающую при подкожном введе-
нии смерти большинства животных. Для t-rae Valerianae aethe-
геае эта доза равна 0,2—0,3 см3 препарата. Кохман и Кунц счи-
тают удобным пользоваться кроликами, которым можно вво-
дить per os неочищенные препараты (хотя это возможно и
у мышей). Они определяют количество препарата валерианы,
потребное для того, чтобы снять у кроликов возбуждение, вы-
зываемое введением им кофеина б количестве 18 мг на 1 кг
веса. Двигательное возбуждение и отсутствие его регистри-
руются фотометрически; записываются движения подвешенной
клетки, в которой находится подопытное животное.
Суждение о том, какие методы являются более предпочти-
тельными на лягушках или теплокровных, высказать трудно.
Следует отметить, что, хотя теплокровные животные и более
близки к человеку, реакция их на препараты валерианы, неви-
димому, очень непостоянна: активные дозы на мышах, по дан-
ным Друкерей и Кёлера, равны V20 смертельной дозы, по дан-
ным Кохмана и Кунца — половине смертельной.
Интересно отметить, что абсолютная активность препарата
валерианы невысока. Некоторые менее известные растительные
продукты оказывают гораздо более энергичное действие в ана-
логичных опытах на лягушках. Глухая крапива (Leonurus
cardiaca), предложенная для применения А. П. Левчуком и изу-
ченная в фармакологической лаборатории Научно-исследова-
тельского химико-фармацевтического института в Москве Зве-
ревым, оказалась значительно активнее валерианы.
6. Препараты одутловатой лобелии (Lobelia inflata). Огром-
ное значение препаратов лобелии в качестве возбуждающих
дыхательный центр давно привлекало к себе внимание экспе-
риментаторов. Однако специальные методы биологической
оценки этих препаратов не получили- большого распростране-
ния в связи с тем, что с целями воздействовать на дыхатель-
ный центр применяются не галеновые препараты с колеблю-
щимся содержанием основного и побочных алкалоидов этого
растения, а химически чистый левовращающий лобелии. Воз-
можность пользоваться химически чистым продуктом не
исключила, однако, полностью необходимости в фармакологи-
ческом изучении отдельных серий продажных препаратов, так
17 — 317 257
как солянокислый лобелии оказался довольно нестойким в рас-
творах. Кроме того, биологическое испытание, правда, в зна-
чительной мере принципиального характера, потребовалось
для синтетических рацемических препаратов. Поэтому целесо-
образно вкратце упомянуть о некоторых методах, предложен-
ных для количественной оценки препаратов лобелина.
Сторм ван Лёвен определяет активность препаратов лобе-
лии на обезглавленных кошках по степени повышения кро-
вяного давления, вызываемого внутривенным введением раз-
ных доз. В качестве стандартного препарата он предложил
пользоваться никотином, исходя из аналогии его действия
с лобелином. Зверев 488 пользуется тем же объектом, но в ка-
честве стандарта берет адреналин, обосновывая свой выбор
тем, что лобелии у обезглавленных кошек вызывает подъем
давления путем возбуждения отделения адреналина надпо-
чечниками. Ввиду возможного истощения их функции в ре-
зультате повторных введений лобелина вышина вызванного
введением этого алкалоида подъема кровяного давления срав-
нивается с вышиной одного из подъемов, вызванных предва-
рительным введением разных доз адреналина. Таким путем
было установлено, что синтетический рацемический лобелии
обладает активностью, достигающей примерно 60% активно-
сти левовращающего изомера. Рейнарц 489, исходивший из
задач судебномедицинского анализа, предлагает неудачный
способ регистрации усиления дыхания на мышах, записывая
дыхательные движения мышей, помещенных в стеклянные
трубки, закрытые каучуковой мембраной. Выбор таких ма-
леньких животных был, очевидно, продиктован необходи-
мостью исследовать малые количества материала.
Более удачным является предложение Закусова 490 испыты-
вать препараты лобелина на кошках с разрушенным головным
мозгом. При помощи простого приспособления он регистрирует
количество выдыхаемого воздуха в определенный произволь-
ный промежуток времени. Определив норму для данного жи-
вотного, подыскивают дозу стандартного препарата, дающую
отчетливое увеличение объема выдыхаемого воздуха, и затем
подбирают дозу испытуемого образца, дающую тот же эффект.
Этим способом Закусов установил, что активность естествен-
ного левовращающего лобелина выше активности синтетиче-
ских рацемических образцов приблизительно на 25%.
7. Препараты белладонны и их аналоги (Atropa Belladonna).
Терапевтическая ценность различных образцов галеновых пре-»
паратов белладонны может колебаться в очень значительных
пределах. Это явление находит себе объяснение в том факте,
что эти препараты содержат, наряду с главным действующим
началом — алкалоидом 1-гиосциамином, — еще и ряд других
веществ, ослабляющих или усиливающих его действие. В то
время как Мааль и Сторм ван Лёвен 491 обнаружили вещество,
повышающее активность гиосциамина, Краузе 492 показал, что
258
препараты белладонны могут содержать вещества с обратным
действием.
В связи с таким положением вещей на практике уже давно
применяются различные способы биологической оценки препа-
ратов белладонны. Самым простым из таких способов является
испытание препаратов по их местному действию на глаз (рас-
ширение зрачка кошки по преимуществу). Неточность этого
метода очень велика, почему широкого распространения
с практическими целями он не получил.
Более точным может считаться способ Ротлина 493, предло-
жившего испытывать препараты белладонны путем определе-
ния наименьшей дозы, способной в опыте на целом животном
парализовать блуждающий нерв; состояние паралича устана-
вливается путем электрического раздражения нерва током из-
вестной силы. Кюль 494 предложил отмечать действие на блу-
ждающий нерв при помощи подыскания дозы, способной вер-
нуть нормальную реакцию нерву, предварительно подвергну-
тому действию ацетилхолина. Далее предлагались методы,
основанные на антагонизме пилокарпина и алкалоидов белла-
донны. Кэшни 495, Мааль и Сторм ван Лёвен в качестве объекта
для регистрации этого явления берут собаку, на которой уста-
навливают ту дозу, которая является достаточной для прекра-
щения слюноотделения, вызванного введением определенного
количества пилокарпина. Опыт ведется на собаках, у которых
предварительно накладывается слюнная фистула на одну из
слюнных желез. Ле Хё, Сторм ван Лёвен и Броке 496 опреде-
ляют задерживающее действие алкалоидов белладонны на
вызванное пилокарпином возбуждение переживающей кишки;
это же рекомендовали Экслар и Никерк 497. Нолле 498,
специально занимавшийся вопросом о биологическом испыта-
нии препаратов белладонны, считает все вкратце перечислен-
ные способы мало пригодными для практического применения.
Методы Ротлина и Июля он не считает удовлетворительными
на том основании, что при опыте на одном и том же животном
нельзя испытывать (а потому и сравнивать со стандартом) од-
новременно нескольких образцов. Прекращение вызванного пи-
локарпином слюноотделения на собаке представляет собой
чрезвычайно громоздкий и неудобный опыт, точность кото-
рого к тому же сомнительна хотя бы по тем соображениям,
что у собак чрезвычайно легко вырабатываются условные ре-
флексы на введение разных ядов. Работа на изолированной
кишке непригодна для- препаратов белладонны из-за того, что
слизистая кишка сама выделяет холин, являющийся антагони-
стом алкалоидов белладонны и потому частично уничтожаю-
щий их эффект (что впоследствии было отмечено и самим авто-
ром этого способа). Фернандец 4", ставивший перед собой за-
дачу определения именно различных растворов атропина,
пользуется способностью атропина вызывать возобновление
работы изолированного сердца лягушки (все равно земляной
17* . 259
или водяной), остановленного пропусканием растворов ацетил-
холина. Должна быть отмечена чрезвычайно высокая чувстви-
тельность реакции.
Для выработки более точной и удобной методики Нолле
остановился на свойстве атропина (Риссер 500) парализовать
нервный аппарат изолированной икроножной мышцы лягушки,
делая мышцу невосприимчивой к действию ацетилхолина,
обычно влияющего на нее возбуждающим образом. Сокраще-
ния помещенной в рингеровский раствор (с содержанием 0,6%
хлористого натрия) мышцы регистрируются при помощи пера
на барабане кимографа. Для оценки активности препаратов
определяется наименьшая доза, способная на некоторое время
сделать нервно-мышечный прибор невосприимчивым к дей-
ствию на него ацетилхолина в определенной концентрации.
Эффект препарата сравнивается с соответствующим действием
сернокислого атропина. Методика отличается большой просто-
той; в разных опытах получаются очень близко между собой
совпадающие результаты. За одну единицу действия Нолле
предлагает считать то наименьшее количество препарата, ко-
торое окажется способным при действии в течение 10 минут
вызывать угнетение нервно-мышечного прибора икроножной
мышцы лягушки (Rana temporaria весом 25—30 г) настолько,
что раствор ацетилхолина в концентрации 1:100 000 будет
не в состоянии проявить своего возбуждающего действия.
Большим преимуществом является возможность испытывать
при этом способе на одном и том же нервно-мышечном препа-
рате несколько разных доз, благодаря чему достигается срав-
нение со стандартом на том же объекте. Время, потребное для
полного восстановления реактивной способности нервно-мы-
шечного прибора после действия препарата белладонны или
атропина, равняется приблизительно 30 минутам. хМышца со-
храняет нормальную возбудимдсть в течение 3 часов. Для про-
мывки каждый раз требуется 3—4-кратный объем свежего
раствора Рингера.
В абсолютных цифрах действие сернокислого атропина та-
ково, что 0,4—0,5 см3 1,5% раствора (при емкости стаканчика,
в который помещена мышца, равной 20 см3) угнетают мышцу
настолько, что ацетилхолин в концентрации 1 : 100 000 более
не вызывает сокращения. Для получения аналогичного эф-
фекта от хороших образцов экстрактов белладонны оказались
нужны дозы препарата, достигающие 0,8 см3 10% раствора.
Что касается того, какое количество ЕД должны содержать
хорошие препараты, то этого вопроса нельзя считать оконча-
тельно разрешенным до согласования его с требованиями кли-
ники.
Пулевка501 решил уточнить методы, основанные на способ-
ности препаратов белладонны расширять зрачок, и с этой
целью избрал мышей, у которых это расширение может быть
легко вызвано введением им препаратов путем инъекций.
260
В ряде работ он установил несколько условий, необходимых
для получения точных данных. К числу таких условий отно-
сится пользование мышами-самцами весом 18—23 г, всегда сы-
тыми, проведение испытания в определенные часы с днев-
ным освещением, пользование при определении ширины зрачка
источником света постоянной силы на определенном расстоя-
нии. Для опыта пригодны мыши с нормальным диаметром
зрачка, лежащим в пределах 0,2—0,4 мм; измерение ширины
зрачка ведется при помощи прибора, дающего увеличение
1X5 два раза тотчас перед введением препарата, затем каж-
дые 10—20 минут. Определяется отношение максимального
диаметра к нормальному. Реакция дает совпадающие резуль-
таты у одних и тех же животных через 2—3 дня. Внутривенное
введение дает наибольший эффект, при подкожном и внутри-
брюшинном введениях доза увеличивается. Чувствительность
метода не уступает таковой в опыте на изолированных серд-
цах лягушек, остановленных ацетилхолином. Доза атропина
4 - 10~6 уже дает расширение зрачка до 1,3 мм. Окерс и
Винке 502 подтвердили и несколько дополнили данные Пу-
левки. Эти авторы считают крайне ценной возможность при
помощи этого метода уловить разницу между атропином, гиос-
циамином и скополамином. Тогда как по их данным химически
установить разницу между этими алкалоидами весьма трудно,
метод Пулевка устанавливает отчетливое количественное раз-
личие в йх действии. Левовращающий гиосциамин по способ-
ности расширять зрачок у мыши превосходит атропин в 2,23
раза, а скополамин активнее атропина даже в 6,65 раза.
8. Слабительные вещества. Биологическое испытание сла-
бительных средств представляет собой нелегкую задачу, по-
скольку является очень трудным выбрать подходящий объект
для $той цели. Особенности функций желудочно-кишечного
тракта делают очень затруднительным выбор такого живот-
ного, данными опытов на котором можно было бы воспользо-
ваться для нужд клиники. Другими словами, долгое время не
удавалось выбрать таких животных, на которых результаты
воздействия слабительных оказались бы параллельными ре-
зультатам действия последних на человека. В значительной
мере не достигающими результатов в этом смысле оказыва-
лись и опыты на отдельных вырезанных участках тонких и
толстых кишок: прямую параллельность между добытыми
этим путем данными .и клиникой оказалось возможным уста-
новить далеко не всегда.
Между тем, несмотря на кажущуюся на первый взгляд
ненужность биологического испытания слабительных средств,
необходимость в нем, конечно, существует. Из очень боль-
шого числа применяющихся в клинике слабительных большая
половина должна быть отнесена к числу препаратов расти-
тельного царства. Не говоря уже вообще о свойственных всем
препаратам такого рода больших колебаниях в содержании
261
действующих начал, химическая природа последних и их опре-
деление химическим путем представляются к настоящему мо-
менту недостаточно изученными и установленными. Такие
препараты, как производные Aloe, Fructus Colocynhidis, Tub.
Jalapae и др., служат к тому достаточно яркими примерами.
Необходимость в биологической проверке химически чистых
и особенно синтетических препаратов, конечно, относительно
очень незначительна по сравнению с необходимостью испыта-
ния препаратов растительного царства. Однако и для хими-
чески чистых препаратов такая необходимость может возник-
нуть, правда, не в качестве момента постоянного контроля, а
в качестве исследования общефармакологического характера,
особенно для веществ, выпускаемых впервые, и для тех, меха-
низм действия которых представляется неясным.
В качестве объектов для исследования слабительных пред-
лагались разными авторами разные животные. Уже давно было
установлено, что для этой цели оказываются непригодными
самые распространенные лабораторные животные — кролики.
Было доказано полное несоответствие реакции на боль-
шинство слабительных средств кролика и человека, так что
воспользоваться экспериментальными данными, полученными
на кроликах, для клиники оказалось невозможным. Аналогия
кишечного пищеварения у человека, с одной стороны, и у ко-
шек и собак — с другой, дала толчок к пользованию этими
животными (Подвысоцкий 503, Мейер 594, Магнус 305). Совпадение
реакции этих животных на слабительные средства с реакцией
человека очень значительно и касается большинства препара-
тов (за некоторыми исключениями, например, фенолфталеин), i
Крупные размеры животных делали очень сложными массовые
испытания препаратов. Между тем именно для испытания сла-
бительных средств нужны опыты в очень большом числе, так
как для получения более или менее определенной уверенности
в результате эффект каждой испытанной дозы должен быть
подтвержден несколькими параллельными опытами. Результа-
тами опытов на вырезанных отрезках кишечника воспользо-
ваться для целей биологической оценки препаратов было, как
уже сказано, трудно: этим путем получаются данные, служа-
щие главным образом для целей уяснения механизма дей-
ствия испытуемого вещества, его фармакодинамики: устанавли-
вается характер возникающих перистальтических сокращений
кишечника, их интенсивность и продолжительность, преимуще-
ственное воздействие на те или иные волокна гладкой муску-
латуры (продольные или кольцевые) и т. д.
То же должно быть отнесено и к опытам наблюдений за
скоростью продвижения содержимого кишечника по кишечному
тракту под влиянием воздействия слабительных, не дожидаясь
послабляющего действия последнего (Магнус). Наблюдение
делается или прижизненно, для чего производится рентгенов-
ский снимок (конечно, при условии предварительного введе-
262
ния в кишечник вещества, способного дать отчетливое изобра-
жение на пластинке, например, бисмутовой каши), или же
посмертно, для чего мышь убивается (Лёве и Фор 50С). Та или
другая модификация этого способа одинаково неудобны и
громоздки для целей оценки препаратов. В поисках наиболее
удобного и дешевого объекта остановились на мышах. Послед-
ние, относясь к всеядным, как и человек, подобно ему реаги-
руют на большинство слабительных (Фюнер 507, Гёльдин
Тифно 508). Методика испытания на мышах, разработанная
впервые Фюнером, подвергалась некоторым изменениям, сво-
дившимся главным образом к способам введения испытуемых
веществ — per os, в виде пилюль, через желудочный зонд
и т. д. В общем опыт сводится к определению срока, через
который у мышей, поставленных в одинаковые определенные
условия, от данной дозы испытуемого вещества наступает по-
слабляющее действие кишечника, причем отмечается не только
самый факт действия, но и характер выделений.
Для опыта выбираются белые мыши со средним весом 20 г.
Естественно, что все животные должны находиться на совер-
шенно одинаковой пище, так как необходимым условием для
точности опыта является однородность каловых масс, по кон-
систенции которых судят о разных степенях действия испыту-
емых веществ. По наблюдениям Фюнера, чувствительность
реакции мышей на слабительные средства меняется в разное
время года: летом чувствительность несколько ниже, чем
зимой. Объясняя это разницей в суточной температуре (в его
лаборатории в течение зимы на ночь мыши оставались в ис-
топленном помещении), Фюнер предложил изменить диэту
таким образом, чтобы соответственно повышалась в летние
месяцы восприимчивость к слабительным. Обычная пища, при
которой мыши реагировали очень хорошо и постоянно, состо-
яла из овсяного печенья (овсяной муки с прибавлением сахара,
воды и яиц); в летние месяцы пониженная восприимчивость
мышей достигала нормы после хлебной диэты.
В день опыта мышей с утра лишают всякой пищи, оста-
вляя им только воду. Несмотря на предлагаемые Фюнером
в случаях разных препаратов разные способы введения, для
точной реакции и уверенности в правильности дозировки,
конечно, лучше всего применять единообразный метод. Наи-
более удобным и точным является, вне всякого сомнения,
способ введения через желудочный зонд. Всегда желательно
всем испытываемым веществам придавать форму, удобную для
введения при посредстве зонда (раствор, взвесь). Кроме чисто
технического удобства и уверенности, что таким путем все
вводимое количество действительно достигнет желудка, способ
этот удобен еще и тем, что, создавая при испытании даже
совершенно разных веществ одинаковые условия для всасыва-
ния, он скорее позволяет делать выводы о сравнительной силе
препарата того или другого происхождения. Вместо желудоч-
263
ного зонда с успехом можно пользоваться обычным шприцем
для инъекций с металлической тупой иглой (Нолле 509). Введе-
ние такой иглы в пищевод удается очень легко. Преимущества
такого метода в смысле точности дозировки ясны сами собой.
Расчет вводимого количества ведется на целое животное, а не
на 1 г веса. .Действие препаратов отмечается по быстроте на-
ступления и по характеру: определяют, через какой промежу-
ток времени наступает опорожнение кишечника и является ли
выделяемое обычным, или оно имеет кашицеобразный, жидкий
и т. д. характер. Для того чтобы можно было установить и
эту качественную разницу, мышей помещают в специальные
удобные для этой цели условия: животных сажают каждого
в отдельности йод стеклянным колпаком или для простоты
под воронку широкого диаметра на белую тарелку, на которой
отчетливо выступают испражнения. Во избежание смешения
каловых масс с мочой на дно тарелки кладется выпуклая мел-
кая сетка, пропускающая мочу, но задерживающая кал, за
исключением тех случаев, когда последний будет иметь совер-
шенно жидкую консистенцию.
Средние подобранные дозы дают послабляющий эффект
че,рез 2—4 часа, что позволяет вполне закончить опыт в тече-
ние рабочего дня. Условия опыта требуют, конечно, непосред-
ственного наблюдения за экспериментальными животными
в течение всего времени работы. Мыши снова являются при-
годными для опыта через несколько (3—4) дней.
Что касается того, насколько получаемыми в опытах на
мышах данными можно пользоваться для признания препара-
тов пригодными для клинических целей, то здесь необходим
ряд существенных оговорок. Прежде всего, как это имеет
всегда и всюду место в учении о биологической оценке лекар-
ственных веществ, суждение о годности препаратов возможно
только в том случае, когда уже заранее известна клиническая
ценность хороших образцов данного рода. \ Далее необходима
уверенность в нормальной реакции мышей в данном опыте, из
чего вытекает следствие — применение стандарта, выбор кото-
рого произвести нелегко. Точка зрения Фюнера, применяющего
для сравнения препаратов различного происхождения всегда
экстракт ревеня, конечно, в корне неправильна. Достаточно
взглянуть на приводимую тем же автором таблицу действия
разных слабительных на мышей, чтобы убедиться в своеобраз-
ной реакции последних на разные вещества. Некоторые веще-
ства даже и в сравнительно очень больших дозах оказались
неспособными вызвать послабляющий эффект. На основании
этого легко заключить, что изменение сопротивляемости мышей
по отношению к препаратам разнородного происхождения едва
ли будет носить однородный характер, а если так, то и поль-
зование в качестве стандарта для препаратов всякого проис-
хождения одним и тем же препаратом (и притом мало инди-
видуализированным) растительного происхождения теряет свою
264
обоснованность. Принимая, далее, во внимание, что к насто-
ящему времени мы еще не имеем подходящего стандарта,
с одной стороны, и с другой — не имеем возможности рассчи-
тывать на абсолютную ценность реакции мышей, мы должны
притти к заключению, что методика работы на мышах может
считаться пригодной пока только для относительно грубых
определений. Значительную ясность в деле внесло бы приме-
нение однородных для каждого данного вида сырья стандарта.
В качестве таковых могли бы быть взяты заведомо активные,
клинически проверенные препараты, для которых была бы
доказана их стойкость, хотя бы даже в течение известного
времени.
Если, однако, описанная методика и не имеет такой широ-
кой области применения, как мы это видели в других анало-
гичных случаях, то все же она и теперь уже может иметь
практическое значение. При ее помощи представляется воз-
можным получить данные о новых, прежде фармакологически
не испытанных и не обследованных препаратах, можно выбрать
лучший путь для получения наиболее активных экстрактов из
сырья с заранее известным слабительным действием. С такой
именно точки зрения методика эта была применена Нолле 509,
подвергнувшим анализу разные фракции экстрактов коры
крушины, что дало возможность определить пути для получе-
ния активного экстракта крушины.
Далее приводим заимствованную у Фюнера таблицу срав-
нительного действия некоторых слабительных на человека и
мышей; дозы для первого выражены в граммах, для вторых —•
в миллиграммах. Данные Фюнера подтверждены Лёве и Форой,
для тех веществ, которые были ими испытаны.
Наименование веществ Доза для чело- века (в г) Доза для мы- шей (в мг)
01. Ricini Fol. Sennac Rhizoma Rhei Istizin Extr. Colocynthidis.... Tab. Jalapae Podophvlia 0,2 1,0—4,0 0,4—4,0 . 0,2—0,6 0,005—0,05 0,5—2,0 0,01—0,1 15,0—30,0 5,0—10,0 5,0—10,0 4,0— 6,0 1,0 4,0— 8,0 > 0,1— 0,2
Манна Каломель Жженая магнезия .... 50,0 0,2—1,0 1,5—3,0 20,0—30,0 3,0— 5,0 6,0— 8,0
Из этой таблицы явствует уже упомянутая выше неравно-
мерность действия отдельных препаратов и разница в реак-
ции мышей и человека.
Мышь, являясь более удобным и дешевым объектом, чем
применявшиеся ранее для опыта собаки и кошки, невидимому,
не представляет собой особого исключения в смысле постоян-
265-
ства реакции на все слабительные; подобно собакам и кошкам,
мыши совершенно или почти не реагируют на некоторые
вещества, как, например, каломель, далее, фенолфталеин и
серу и др.
При помощи метода на мышах в фармакологической лабо-
ратории Научно-исследовательского химико-фармацевтического
института в Москве был обследован целый ряд новых слаби-
тельных из советского растительного сырья. К числу оказав-
шихся в той или иной мере активными можно отнести следую-
щие растения: Chrosophora gracilis, Dodartio orientalis.
9. Противоглистные препараты. Вопрос о биологическом
испытании противоглистных или глистогонных препаратов не
получил удовлетворительного разрешения, несмотря на чрез-
вычайно высокую в этом потребность.
Вследствие токсичности и недостаточной изученности хи-
мического состава действующих начал противоглистные пре-
параты являются как нельзя более подходящим объектом для
биологической проверки. Особенно важным является испыта-
ние препаратов мужского папоротника (Filicis rnaris) и лебеды
(Chenopodii), по отношению к которым была сделана попытка
подыскать соответствующие методы.
Применявшиеся разными авторами (Тренделенбург 510 и др.)
с целью изучения фармакодинамических свойств различных
глистогонных, в частности, сантонина, испытания на пиявках и
круглых червях (с записью на кимографе вызываемых раз-
ными дозами препаратов сокращений мускулатуры отрезков
пиявок и червей) представлялось мало убедительным и недо-
статочно точным.
Международная комиссия при Лиге наций рекомендовала
в 1925 г. другой путь, принцип которого заключается в опре-
делении наименьшей дозы испытуемого вещества, способной
убить находящихся в известных условиях земляных червей
(Lumbricus terrestis, Allolobophora foetida) и небольших рыб
некоторых пород (Carassius, Gobio, Scardinius). Длина рыб
должна лежать в границах между 5—10 см. Достаточно
богатые активными началами препараты должны вызывать
смерть червей и рыб в дозах, не превышающих известных
границ.
Для готового препарата Extr. Filicis maris aethereum устана-
вливается, что 0,002% раствор его должен быть еще настолько
активным, что помещенные в раствор такой концентрации
черви и рыбы должны гибнуть. Если испытывается корневище
мужского папоротника, то из него готовится эфирный экстракт,
который должен обладать теми же свойствами, что и готовый
препарат, т. е. в концентрации 0,002% убивать рыб и червей.
Испытание ведется в насыщенном растворе окиси магния
в водопроводной воде. Препарат испытывается в концентра-
циях 0,004, 0,002 и 0,001%. Для каждой дозы берется 100 см3
раствора той или иной концентрации.
266
Нолле 509а рекомендует производить оценку экстрактов папо-
ротника по их способности парализовать мускулатуру дожде-
вых червей, определяя ту наименьшую дозу, которая окажется
способной вызвать настолько значительный эффект, что раз-
дражение червей током известной постоянной силы перестает
вызывать сокращение мускулатуры. Из испытуемых экстрактов
готовится эмульсия, действие которой на червей определяется
в разной концентрации.
Для испытания препаратов лебеды, по правилам Междуна-
родной комиссии, был рекомендован тот же метод на червях.
Проведенная проверка этого метода (Кнафаль-Ленц511)
показала, что он не дает удовлетворительных результатов.
То же было показано и для опытов на рыбах и теплокровные
животных. В связи с этим в 1928 г. Международная комиссия
признала, что биологическое испытание препаратов лебеды
уступает по точности колориметрическим методам определения
активных начал (масло, ol. Chenopodii).
Указанные методы не обладают достаточной точностью как
сами по себе, так и благодаря отсутствию стандартных пре-
паратов.
V
ГЛАВА XVI
РАЗЛИЧНЫЕ ОРГАНОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ
! * *
В этой главе будут рассмотрены некоторые препараты
животного происхождения, как гормональные, так и такие,
которые под это понятие полностью не подходят. Здесь
имеются в вину вещества, привлекающие к себе внимание
клиники и, быть может, обладающие некоторым действием, но
терапевтическое значение которых сравнительно с разобран-
ными в предыдущих главах препаратами невелико.
1. Препараты, понижающие кровяное давление, депрес-
сорные препараты. Специальная литература последних лет
содержит огромное количество данных о различных понижа-
ющих кровяное давление веществах, выделяемых из самых
разнообразных тканей, как нормальных, так и пораженных
патологическими процессами. Среди всех этих препаратов наи-
большее значение, судя по литературным данным, принадлежит
изученному Фрейем и Краутом 512 «гормону кровообращения»,
выделяемому из мочи, но продуцируемому поджелудочной
железой, при отсутствии которой он в моче не обнаруживается.
Далее были описаны и предложены препараты из мышечной
ткани, некоторыми считающиеся особенно активными по
отношению к коронарным сосудам сердца (миоль и т. п.), затем
препараты из почек, предстательной железы и семенных пу*
зырьков поджелудочной железы, кишечной мускулатуры, мозга
и т. д.
Обширная литература по этому вопросу объединена
в специальной работе, посвященной понижающим давление
веществам из тканей животного происхождения (Гэддам и
Дэль513) и здесь не может рассматриваться. По своим хими-
ческим свойствам эти вещества характеризуются разными
авторами весьма различно. В то время как некоторые склонны
объяснять депрессорное действие этих препаратов содержа-
нием в них таких заведомо снижающих давление веществ,
широко распространенных в тканях, кщ£^гистамин, ацетилхо-
лин, аденозин, адениловая кислота и т.жПдругие~доказывают,
что*наличие этих соединений для Проявления действия неко-
торых препаратов необязательно. Фармакологическая характе-
268
ристика депрессорных препаратов не дает возможности выра-
ботать методы биологической оценки, основанные на
достаточно точных и специфических реакциях.
Основной путь определения снижения кровяного давления
в остром опыте на здоровых животных является общеприня-
тым. Однако сколько-нибудь точных данных этим путем, по
нашему мнению, получить не удается. Всякому эксперимента-
тору, работающему над различными продуктами животного и
растительного происхождения, хорошо известно, как легко
наступает снижение кровяного давления при внутривенном
введении самых разнообразных препаратов. Снижение давле-
ния у кошек и кроликов от многих депрессорных препаратов
не превышает этого неспецифического снижения. По нашим
данным, это полностью относится к препаратам мышечной
ткани, поджелудочной железы, предстательных желез, семен-
ных пузырьков и отчасти к калликреину. Таким образом, этот
метод оценки может иметь самое относительное значение лишь
при сравнении препаратов, изготовленных по определенному
методу из данного органа, с образцами того же происхожде-
ния, заведомо оказавшимися активными в клинике. Этим про-
стым экспериментом нельзя доказать специфичности действия
и специфичности происхождения препарата. Обычно наступив-
шее снижение, если даже оно и достаточно глубоко, через
несколько минут сменяется постепенным возвращением давле-
ния к норме, причем повторные введения после соответствую-
щего промежутка заметного влияния на животных не оказы-
вают.
Весьма важно поэтому в будущем при дальнейшей разра-
ботке этого вопроса в биологическом эксперименте учитывать
те характерные особенности, которыми обладают некоторые
из депрессорных препаратов. Для наиболее интересного и изу-
ченного вещества (калликреин, препарат падутин) принята
оценка на собаках в определенных ЕД. За 1 ЕД принимается
то наименьшее количество препарата, которое необходимо для
снижения кровяного давления у собаки при внутривенном вве-
дении на 40% при одновременном повышении пульсовой кри-
вой в 1,6 раза. Эта степень действия вызывается введением
5 см3 нормальной диализированной смешанной мочи здорового
человека, которая, таким образом, может служить стандартным
препаратом (Фрей и Краут512, Шульц ®14). Предложение
Бауера515 пользоваться вместо собак кроликами и кошками
отвергается Веезе 516 на основании реакции этих животных на
соли мочи и на основании крайне малой чувствительности
к калликреину (кошки). Этот метод не учитывает приписыва-
емой калликреину способности действовать противоположно
адреналину на сосуды. Этот антагонизм, однако, носит свое-
образный и несколько относительный характер, так как кал-
ликреин одновременно может снимать действие эрготамина,
в свою очередь являющегося антагонистом адреналина. Эта
269
способность калликреина показана Сиво и Добоци517 по отно-
шению к вызывающему гангрену действию эрготамина на
гребнях петухов. •
Предложение Верле518 испытывать действие депрессорных
препаратов на петухах нельзя считать удачным, поскольку на
’ этом объекте он получил снижение давления от гипофизарных
препаратов и не наблюдал этого действия от калликреина.
В качестве дополнительных требований при биологической
оценке некоторых депрессорных веществ может быть прицято
сохранение понижающего давление действия на атропинизи-
рованных животных и влияние на сокращение кишечника.
Снижение давления у атропинизированных животных, служа-
щее одновременно признаком, исключающим наличие в препа-
ратах ацетилхолина, после атропина не действующего, описано
для получаемого из разных тканей (кишечная мускулатура,
мозг и Др.) «вещества Р» (Эйлер и Геддам519) и веществ из
семенных пузырьков, предстательной железы (Эйлер 519), спермы
человека (Гольдблат 52°) и для веществ из тканей, пораженных
патологическими процессами (раковая ткань, перерожденная
щитовидная железа, геморагическая жидкость из некротиче-
ского Очага и т. д. — Харкинс и Хармон521). «
Для исключения наличия в препаратах гиста^щна^ можно
пользоваться опытом на кроликах, у которых гистамин вызы-
вает лишь незначительнОе-чЛшженйе давления. Для исключаййя
аденозина препараты"*ббрабатывают щелочью, разрушающей
это вещество. Предложение Пономарева 521“ об использовании
при испытании депрессорных препаратов в качестве стандарта
гистамина на основании современных данных следует считать
нецелесообразным.
Следует еще раз подчеркнуть, что абсолютное снижение
кровяного давления депрессорными црепаратами животного
происхождения очень невелико, скоропреходяще и что оно
никоим образом не может итти в сравнение со снижением,
вызываемым некоторыми растительными продуктами, пони-
жающими давление на десятки минут: до 30—40 минут — пре-
параты омелы, Viscum album (Нолле 522).
2. Препараты тиреотропного гормона. Среди других
.тропных гормонов передней доли гипофиза, помимо гонадо-
« тропного, известное значение приобрел тиреотропный гормон,
специфически активирующий щитовидную железу. Давние
наблюдения Эванса 523 с учениками были впоследствии развиты
рядом исследователей и закончились выделением тиреотроп- .
ного гормона (Янсен и Лёзер 524, Юнкман и Шёллер 525), кото-
рый из-за неясности химического строения и отсутствия хими-
ческих реакций определяется биологическим путем.
Для определения гормона, вызывающего усиление функции
щитовидной железы, представляется возможным пользоваться
двумя путями — определением изменений в самой щитовидной
железе и определением изменений в организме, являющихся
270
результатом повышения функции этого органа. Большинство
из предлагавших методов основано на определении тех или
иных изменений в щитовидной железе. Наиболее подробно
изучавший тиреотропный гормон Лёзер 526 установил, что
внутрибрюшинное введение морским свинкам весом 180—220 г
в течение трех дней по 0,5—1 мг этого гормона дает (при
гистологическом изучении на четвертый день щитовидной же-
лезы) исчезновение коллоида и одновременно большой рост
фолликулярного эпителия (acinorum) при увеличении крово-
снабжения. Считая эту картину за положительную реакцию,
Лёзер в дальнейшем несколько изменил условия опыта, пред-
ложив пользоваться молодыми морскими свинками весом 100—
200 г и определять у них дозу, вызывающую рост фоллику-
лярного эпителия и набухание коллоида с признаками его вы-
деления. Наименьшее количество препарата, вызывающее у
одного из двух животных нужное изменение, считается 1 ЕД.
Тем же методом пользуются Юнкман и Шеллер. Авторы, изу-
чавшие зависимость между дозой и эффектом, устанавливают
наличие закономерных взаимоотношений между количеством
гормона и реакцией железы (Киппен и Лео 527). Хейль и Ла-
кёр 528 за 1 ЕД принимают одну четверть дозы, вызывающей
определенные изменения в средней зоне щитовидной железы
у морских свинок, убиваемых через 48 часов после окончания
введения, которое делается в два приема в течение двух дней-.
Эти авторы различают 6 степеней действия и подчеркивают
разную гистологическую картину в центре, крайней периферии
и средней полосе железы. Различные изменения в центре и
периферии органа у морских свинок отмечают также Алешин
и Руденко 528а, показавшие возможность проводить испытание
тиреотропного гормона на мышах.
Точность всех этих методов является очень относительной
как из-за отсутствия стандартного препарата, так и из-за са-
мого характера реакции, затрудняющей количественное изме-
рение результата. Неудобство и сравнительная техническая
сложность гистологического исследования побуждает некото-
рых к упрощению метода. Раулэндс и Паркес 529 принимают
за 1 ЕД то наименьшее количество препарата, которое при вве-
дении морским свинкам весом по 200 г вызывает у них уве-
личение веса щитовидной железы вдвое (в среднем с 30 до
60 мг). Против этого принципа возражает Макс Арон 53°, под-
черкивающий необходимость именно гистологического иссле-
дования. Мак Гуллэч и Штиммель 531 у тех же морских свинок
предлагают, кроме гистологического исследования в одной по-
ловине железы, в другой определять содержание иода, количе-
ство которого при положительной реакции увеличивается
на 50%. По данным Я. М. Кабака очень хорошим объектом яв-
ляются цыплята.
Вторичные изменения в организме под влиянием тирео-
тропного гормона отмечены рядом авторов. Описано увели-
271.
чение основного обмена, повышение сопротивляемости, к аце-
тонитрилу и т. д. в острых опытах на разных животных (Шит-
тельхейм и Эйслер 532). Отмечено также и увеличение метамор-
фоза головастиков при условии впрыскивания им препарата
(а не добавления к пище — Сайлер, Штимг^ель, Рэй, Мак Гул-
лэч 533). Все эти реакции не столько могут служить для опре-
деления активности препаратов, сколько являются очень серь-
езным подтверждением специфического действия тиреотроп-
ного гормона. Еще меньшее значение могут иметь для целей
биологической оценки такие свойства гормона, как некоторое
гипергликемическое действие и отсутствие влияния на жировой
и липоидный обмен в остром опыте у кроликов, некоторое не-
характерное влияние на диурез этих животных (Ротшильд и
Штауб 584), задержка действия тиреотропного гормона препа-
ратами задней доли гипофиза и т. д. (Готтендекер 535).
Существенным соображением в пользу биологического ис-
пытания препаратов тиреотропного гормона (значение кото-
рых для клиники, повидимому, весьма ограничено) является
подчеркиваемая рядом наблюдений его быстрая разрушаемость
не только в водном растворе, но даже и в сухом виде, если он
хранится при комнатной температуре (Хейль 536, Ротшильд и
Штауб).
3. Препараты лактогенного гормона передней доли гипо-
физа (пролактин). Повышающее отделение молока вещество,
выделяемое из передней доли гипофиза, менее других подхо-
дит под понятие «тропных» гормонов, так как под этим назва-
нием понимают вещества, возбуждающие внутрисекреторную
деятельность желез, а отделение молока относится к процессам
внешней секреции. Тем не менее повышающее отделение мо-
лока вещество иногда называют маммотропином. Параллельно
* правильно определяющему действие названию «лактогенный
гормон» в англо-американской литературе принято обозначать
этот продукт передней доли словом «пролактин»; изредка
встречается название «галактин».
В качестве возбуждающего секрецию вещества пролактин
в настоящее время вытесняет продукты задней доли гипофиза,
ранее считавшиеся в этом отношении наиболее активными.
Изучение действия пролактина, еще далеко не законченное,
проводится исключительно биологическим путем и наметило
пути для биологической оценки лактогенных препаратов пе-
редней доли гипофиза. Вполне естественно, что в опыте жела-
тельно определение результатов воздействия этих веществ на
грудную железу. Несмотря на то, что для изучения лактоген-
ного действия напрашивается опыт на каком-нибудь млекопи-
тающем животном, по данным большинства авторов, наиболее
удобными для этой цели являются голуби. Этот парадоксаль-
ный на первый взгляд выбор объясняется тем, что так назы-
ваемая зобная железа у голубей, изменения в которой служат
критерием при оценке действия лактогенных желез, является
272
органом секретирующим, отделяемое которого совместно с
проглатываемой голубями пищей идет на вскармливание птен-
цов. Выбор птиц для испытания в данном случае зависит
в первую очередь от быстроты, удобства и относительной про-
стоты и точности их реакции сравнительно с реакцией млеко-
питающих животных.
Активность лактогенных препаратов определяется в дозах,
вызывающих отчетливое увеличение веса зобных желез, насту-
пающее у голубей на пятый день с начала опыта при ежеднев-
ном введении в течение 4 дней препарата внутримышечно
(Риддль, Бэтс и Дайкшорн 535“). В дальнейшем оказалось, что
весьма большое значение имеют пути введения. Бэтс и
Риддль 53С“ показали, что при подкожном введении одни и те
же дозы в 5 раз активнее, чем при внутримышечном, в 8 раз
активнее, чем при внутрибрюшинном, и в 11 раз активнее, чем
при внутривенном введении. Лайонс и Пэдж 537 наиболее эф-
фективным считают внутрикожное введение в области зоба.
Считая изменение в весе недостаточно показательным, Макшау
и Тёрнер 538 рекомендуют гистологически определять образую-
щуюся пролиферацию железистого эпителия, поперечных тя-
жей эпителия и долек, ведущую к потере прозрачности зобной
ткани. Впрыскивание препарата они ведут 4 дня, зоб препари-
руют на пятый день и за 1 ЕД считают наименьшее количе-
ство, вызывающее указанную пролиферацию у 10 голубей из
20. Уоррен 539, признавая положительные стороны испытания
на голубях, настаивает на необходимости опыта на млекопи-
тающих животных. Удобным объектом он считает беременных
морских свинок, не' имеющих спонтанной лактации, и мнимо-
беременных кроликов, у которых Гарднер, Гомэц и Тёрнер 540
отмечали действие пролактина на млечные ходы грудных же-
лез.
Для многочисленных органопрепаратов часто приводятся
данные, характеризующие их активность, иногда, повидимому,
специфическую. Однако во многих случаях методы, устанавли-
вающие эту активность, сложны и практически неосуществимы,
или само наличие своеобразного действия подлежит сомнению.
Наконец, несмотря на ясную- картину действия некоторых ве-
ществ, изучение их с фармакологической точки зрения не
представляет специального интереса в связи с отсутствием со-
ответствующих препаратов, а в некоторых случаях их ненуж-
ности. Таким образрм, вопрос о биологической оценке многих
органопрепаратов остается нерешенным. Сказанное иллюстри-
руется несколькими примерами.
а) Препараты зобной железы (gl. thymus). Специальным спо-
собом изготовленные по Хансену экстракты из» зобных желез
самых молодых телят оказались при очень длительном изуче-
нии на нескольких последующих поколениях крыс способными
вести к увеличению роста и веса рождающихся крысенят,
ускоренному развитию, половому созреванию и увеличению
38 — 317 273
числа рождающихся в одном помете. При наблюдении над не-
сколькими поколениями удается отметить необычайную жизне-
способность крупных новорожденных крыс, покрытых шер- •
стью, быстро начинающих видеть и т. д. (Раунтри, Кларк, Хан-
сен 541). Эти в высшей степени интересные наблюдения по по-
нятным причинам не могут служить основанием для выра-
ботки метода биологической оценки препаратов зобной же-
лезы.
б) Препараты шишковидной железы (эпифиза) с давних;
пор считаются задерживающими половое созревание, действую-
щими на половую сферу угнетающе. Экспериментальное дока-
зательство этого действия приводит в ряде работ Эн
гель 542, утверждающий, что при помощи препаратов шишко-
видной железы удается задержать действие пролана на моло-
дых крыс. Дальнейшими наблюдениями он установил, что за-
держивается ’лютеинизирующее действие пролана, тогда как . ,
фолликулообразование под влиянием пролана эпифизарными
экстрактами не поражается. Энгель работал с препаратами,
представляющими собой водно-щелочные извлечения ацетони-
рованных желез (аналогично порошку задней доли гипофиза).
Работая с обычным продажным препаратом (эпифизокрин),
получаемым извлечением желез кислым спиртом, Данилова543
не могла получить никакого задерживающего действия на вы-
зываемые проланом изменения в яичниках крыс. На основании
своих данных Энгель говорит об «антилютеинизирующих ЕД»
для препаратов эпифиза. По Энгелю и Буно 544, свежеприго-
товленные экстракты купируют в дозе 0,5 см3 действие 50 кры-
синых ЕД пролана. Данные Энгеля очень многими авторами не
подтверждаются. Испытывая препараты, полученные аналогич-
ным путем, Дэн Хартог Егер и Хейль 515 не смогли получить ни
усиления, ни задержки циклических процессов у самок, равно
как не получили никаких определенных результатов и при
удалении эпифиза. Флейхман и Гольдхаммер 546, эксперимен-
тально проверявшие данные Энгеля, также не могли подтвер-
дить его наблюдений о задержке действия пролана, хотя им-
плантация эпифизов на молодых животных в их опытах при-
водила к задержке течки у молодых грызунов. Виньялис547
получил от эпифизарных препаратов даже усиление действия
пролана. Весьма интересный экспериментальный материал по-
лучили Раунтри, Кларк, Штейнберг, Хансен, Эйнхорн и Шан-
нон 548, наблюдавшие действие экстрактов шишковидной же»
лезы на четырех поколениях крыс. У последних поколений
отмечена увеличившаяся задержка в весе и рост$ с одновре-
менным ускорением психического и физического развития. Че-
тырехмесячное введение испорошкованных сушеных желез
шестинедельным цыплятам в опытах Лазло Такач 549 привело к
увеличению веса более чем на 200% без отставания развития
половой сферы. По прекращении опытов прибыль в весе
быстро убывала. Таким образом, при достаточно неясной кар- ♦
271
тине действия Ьообще и полностью пока не подтвержденных
данных о задержке действия пролана говорить о биологиче-
ской оценке эпифизарных препаратов затруднительно.
в) Препараты кортикотропного гормона передней доли ги-
пофиза, несмотря на описанные реакции по определению его
специфического действия на здоровых мышах (Иорес 550, Ан-
сельмино и Гофман551), у которых он вызывает увеличение
веса надпочечников, и на крысах с удаленными гипофизами
(Рейсс, Балинт, Острейхер и Аронсон 552), у которых он устра-
няет гистологически определяемые явления недостаточности
в коре надпочечников, пока не вырабатываются и мало при-
меняются. В связи с этим вопрос об их биологической оценке
пока отпадает.
г) Препараты пигментного и меданофорного гормонов ги-
пофиза, невидимому, являющиеся идентичными, имеют значе-
ние почти исключительно экспериментальное. Применение их
в клинике пока места не имеет, что также снимает с очереди
вопрос об их биологической оценке, несмотря на наличие не-
сомненных реакций на эти вещества (главным образом на
амфибиях и рыбах).
д) Препараты селезенки, все более привлекающие к себе
внимание, имеют столь пеструю характеристику, что для су-
ждения об их активности пока достаточных данных не имеет-
ся. Указывают на цлияние препаратов селезенки на парасим-
патическую нервную систему, на картину крови, на некоторые
инфекционные процессы, говорят даже об их аналогии со спер-
мином (Конникова 553) и т. д.
18 *
ГЛАВА XVII
ПРЕПАРАТЫ ГРУППЫ САЛЬВАРСАНА (АРСЕНОБЕНЗОЛОВ)
Препараты группы сальварсана, как получаемые синтетиче-
ским путем, собственно говоря, должны подлежать химиче-
скому контролю. Установление химического строения и соот-
ветствия его определенной требуемой форме решает вопрос
для химически чистых- синтетических продуктов. Однако в слу-
чае препаратов сальварсанового ряда одним химическим ана-
лизом вопрос о пригодности данного препарата не может быть
решен полностью. Это обстоятельство объясняется тем, что ве-
щества| этой группы трудно поддаются полной очистке и осо-
бенно легко изменяются вв присутствии кислорода. Следует
указать, что и строение сальварсановых препаратов не является
бесспорным. Изменение может иметь место как до момента
запаивания препаратов в ампулы (без доступа кислорода), так
и при хранении ампул в том случае, когда при запаивании не
были соблюдены все требуемые условия. Наступающие в пре-
паратах изменения могут сказаться как на токсических свой-
ствах, так и на терапевтической активности.
Ввиду того что разные производные сальварсана значи-
тельно отличаются друг от друга по своим свойствам, возник
вопрос о применении разных стандартов для разных типов
препаратов.
Впервые биологическая проверка производных арсенобен-
зола была регламентирована постоянной Международной ко-
миссией по биологической стандартизации при гигиенической
секции Лиги наций в 1925 г. По постановлению второй кон-
ференции указанной комиссии биологической проверке под-
лежали препараты следующего типа:
1) сальварсан,
2) его металлические производные (серебряный сальварсан),
3) его натриевые соли,
4) неосальварсан,
5) серебряный неосальварсан,
6) миосальварсан (сульфарсенол).
Каждый из исследуемых препаратов подлежал обязатель-
ному испытанию как на токсичность, так и на терапевтический
эффект, причем то и другое должно было производиться од-
276
повременно, параллельно со стандартным препаратом. Токсич-
ность испытуемых препаратов не должна была превышать то-
ксичности стандарта, соответственно терапевтические свойства
не должны были уступать стандартным препаратам.
Токсичность рекомендовалось проверять по крайней мере
на 10 мышах или 5 крысах, терапевтический эффект — на мышах
или крысах, зараженных одной и той же культурой трипано-
зом (Trypanosoma equiperdum или Trypanosoma brucei). Степень
зараженности должна была быть одинакова и определяться
подсчетом паразитов в единице объема крови. Каждая серия
испытывалась в нескольких (2—4) постепенно увеличиваю-
щихся дозах, причем каждая доза вводилась минимум 3 жи-
вотным. Как уже сказано, в тех же условиях и дозах произ-
водилось и испытание стандартного препарата.
Весь цикл испытаний заканчивался клинической проверкой
препарата на больных.
В отличие от общепринятого порядка приготовление, хра-
нение и рассылка стандартных препаратов были поручены от-
дельным лицам: миосальварсана (сульфарсенола) — проф. Фегт-
лин (Вашингтон, США), всех остальных — проф. Колле (Франк-
фурт, Германия).
Три года спустя, в 1928 г., на следующей конференции был
принят ряд дополнительных постановлений. Для испытания
терапевтических свойств препаратов было разрешено пользо-
ваться животными, зараженными не только патогенными три-
пано,зомами, но и спирохетами.
При определении токсических свойств препаратов верхний
предел отклонения был ограничен 20%. Были выработаны не-
которые условия для стандартных препаратов: они не должны
менять своих свойств при нагревании до 60° в течение не-
скольких дней, должны быть высушены в вакууме над пяти-
окисью фосфора и храниться в запаянных ампулах, наполнен-
ных каким-нибудь инертным газом при температуре, не пре-
вышающей 0°.
Относительно скоро, однако, выяснилось, что из всех при-
нятых для испытания типов сальварсановых препаратов широ-
кое практическое распространение имеют лишь препараты типа
неосальварсана и миосальварсана.
Все прочие препараты производились лишь в одной Герма-
нии. В связи с этим было решено ограничить международное
соглашение только вопросами по двум препаратам, т. е. по
неосальварсану и миосальварсану.
В настоящее время в отличие от прежнего положения оба
соответствующих стандартных препарата выпускаются анало-
гично всем прочим стандартным препаратам Английским госу-
дарственным медицинско-исследовательским институтом.
Международный стандартный препарат неосальварсанового
типа изготовлен путем замещения в сальварсане обеих амино-
групп метиленсульфоксиловокислым натрием 564.
277
Таким образом, он представляет собой диоксидиамино-
арсенобензол-ди-М-метиленсульфоксилат натрия. Продажные
препараты, полученные несколько разнящимися между собой
методами, могут представлять собой смесь одно- и двузаме-
щенных сальварсанов. Двузамещенный продукт был выбран не
потому, чтобы именно эта форма неосальварсана была непре-
менно наилучшей, а в связи с тем, что данный препарат по
своим терапевтическим и токсическим свойствам оказался
очень хорошим, могущим служить в качестве стандарта.
Второй международный стандартный препарат типа мио-
сальварсана представляет собой продукт замещения амино-
групп сальварсана метиленсернокислым натрием, причем в од-
ной аминогруппе имеется один такой радикал, а в другой два,
благодаря чему этот препарат является диоксидиаминоар-
сенобензол-три-М-метиленсульфитом натрия. Как и в случае
неосальварсанового стандарта, тризамещенный продукт был
выбран не по теоретическим соображениям, а благодаря своим
качествам.
Стандарт неосальварсанового типа служит для целей испы-
тания препаратов этого типа независимо от их названия — но-
варсенол (советский препарат), неоарсфенамин, новарсенобен-
зол, неосальварсан и т. д. Стандартом миосальварсанового
типа пользуются при испытании миарсенола (советский препа-
рат), сульфарсфенамина, сульфарсенола, миосальварсана
и т. д. Применение того или другого стандартного препарата
возможно лишь для однотипных с ними препаратов. Всевоз-
можные иные формы, в том числе и промежуточные продукты
комбинированного замещения аминогрупп сальварсана мети-
ленсульфоксилатом и метиленсульфитом натрия одновремен-
но, не могут сравниваться с международными стандартными
препаратами.
Необходимость точного соблюдения этого положения сле-
дует хотя бы из хорошо известного факта меньшей токсично-
сти и активности препаратов миосальварсанового типа сравни-
тельно с препаратами типа неосальварсана.
Испытание ведется путем определения сравнительной то-
ксичности и активности стандартного препарата и исследуе-
мого образца. Токсичность последнего не должна превосходить
токсичности стандартного препарата более чем на 20%, при
том непременном условии, чтобы активность соответственно не
уступала более чем на 20%, так как легко представить себе
такой случай, где снижение токсичности может быть достиг-
нуто путем потери терапевтических свойств препарата.
В настоящее время 564 Международная комиссия по биоло-
гической стандартизации лекарственных веществ не дает точ-
ных описаний всех деталей метода, настаивая лишь на том,
чтобы все условия были бы совершенно одинаковы для стан-
дартного и испытуемого препаратов. Вид животных, их вес,
диэта, условия содержания, растворение препарата, путь и
278
. быстрота введения, время наблюдения, паразиты, которыми
заражается животное для испытания терапевтической актив-
ности препаратов, — все должно совпадать во всех деталях.
Совершенно естественно, что проведение испытания как на
токсичность, так и на терапевтическую активность требует,
чтобы избранный данной лабораторией путь гарантировал
известную точность полученных данных. Таким образом, число
животных, взятых для испытания на токсичность, должно быть
не ниже определенного предела, обеспечивающего для данного
метода необходимую степень точности. При испытании на
терапевтические свойства необходим опыт определенной про-
должительности, уменьшение числа паразитов в крови должно
достигать определенной степени и т. д.
Для определения токсических свойств, по данным Между-
народной комиссии, во многих случаях возможно воспользо-
, ваться кривой, отображающей зависимость между дозой и
смертностью данных животных при данных условиях опыта,
построенной для стандартного препарата (аналогично кривой
Тревена для смертности лягушек от наперстянки, см. стр. 33).
Определив дозу стандартного препарата, дающую 50% смерт-
ности, вводят животным дозу испытуемого препарата, которая
будет на 20% меньше установленной дозы стандартного препа-
рата. Выдерживающий требование препарат не должен вызы-
вать в этой дозе более 50% смертности животных. Обозначив
установленную дозу стандартного препарата через х, берут
испытуемый в дозе у— х. Если токсичность подлежащего
испытанию препарата близка к токсичности стандартного пре-
парата или даже менее ее и во всяком случае лежит значитель-
но ниже допускаемого предела, то данные опыта на десяти
животных являются вполне достаточными. Если же испыту-
емый препарат обладает токсичностью, близкой к допустимому
пределу, т. е. превышает токсичность стандартного препарата
на 20%, требуется подтверждение данных на 30 животных.
Подробный ход исследования препаратов типа неосальварсана
на токсичность и математический анализ реакции приводятся
в работе Дэрхема, Гэддема и Марчела М5.
При испытании терапевтических свойств испытуемый пре-
, 120
парат берется в дозе • х, подразумевая под х ту дозу
10U
стандартного препарата, которая в данных условиях опыта
оказалась терапевтически активной. Подчеркивается, что сами
по себе данные, полученные на мышах и крысах564, заражен-
ных трипанозомами, не могут безусловно гарантировать тера-
певтической активности препарата у людей при заболеваниях,
вызываемых спирохетами. Ошибка в заключении может иметь
место и тогда, когда на животных будет определяться сравни-
тельная активность разных производных арсенобензола. Это
279
лишний раз подчеркивает возможность пользования междуна-
родными стандартными препаратами только для продуктов
данного типа.
Препараты неосальварсанового рода вводятся животным
внутривенно. Для инъекции препараты растворяются или
в дестиллированной воде, или в 0,4% растворе хлористого
натрия. Наиболее подходящим местом для введения у мышей
является хвостовая вена, у кроликов — краевые ушные вены.
Для более удобного обнаружения хвостовой вены у мышей
хвост на некоторое время опускают в теплую воду с целью
вызвать гиперемию сосудов; в случае, если краевые ушные
вены у кролика выражены недостаточно ясно, небольшим нати-
ранием уха толуолом достигается максимальное расширение
всей венозной сети уха.
Препараты миосальварсанового ряда, как известно, обла-
дают сравнительно с неосальварсановыми препаратами менее
выраженными раздражающими свойствами и клинически при-
меняются внутримышечно или подкожно. При испытании на
животных эти препараты также вводятся подкожно.
Препараты, выдерживающие лабораторное испытание на
животных, дополнительно испытываются на больных (ранние
формы сифилиса).
В СССР испытание новарсенола (неосальварсана) и миарсе-
нола (миосальварсана) ведется по специальной инструкции
Наркомздрава СССР, составленной на основании приведенных
выше данных Международной комиссии по биологической
стандартизации лекарственных веществ. Проведение испыта-
ния сконцентрировано в Научно-исследовательском химико-
фармацевтическом институте в Москве.
ГЛАВА XVIII
ВИТАМИННЫЕ ПРЕПАРАТЫ
• До сравнительно недавнего времени витаминные препараты
не входили в число лекарственных веществ и не изучались
подобно другим медикаментам, а рассматривались как «доба-
вочные факторы питания». Число лечебных препаратов, дей-
ствие которых обусловливалось наличием в них витаминов,
ограничивалось одним рыбьим жиром. В последние годы уче-
ние о витаминах необычайно разрослось как в сторону увели-
чения числа новых, так и в смысле изучения ранее известных
витаминов. Развитие учения о витаминах и возможность полу-
чения их во все более и более чистом виде повели к тому,
что витамины стали постепенно из «добавочных факторов
питания» переходить в разряд лекарственных веществ, изучае-
мых как таковые. Как только вопрос был поставлен таким
образом, сразу же возникла необходимость в подыскании
соответствующих методов анализа, обеспечивающих необхо-
димую активность витаминных препаратов. На первых порах,
однако, достаточного количества данных для этого не име-
лось. На второй Международной конференции по биологиче-
ской стандартизации лекарственных веществ (1925) предвари-
тельному обсуждению был подвергнут лишь один рыбий жир
и то лишь только с точки зрения возможности определения в
нем биологическим путем фактора роста — витамина А. По-
следующие годы дали в руки исследователей столь много но-
вых данных, что через 6 лет, в 1931 г., потребовался созыв
специальной международной конференции по стандартизации
витаминных препаратов, на которой был рассмотрен вопрос о
витамине А (факторе роста), антиневритическом витамине Bi,
противоцинготном витамине С и антирахитическом витамине D.
Для всех препаратов, содержащих эти витамины, были при-
няты международные стандартные препараты. В связи с чрез-
вычайно быстрым ростом знаний в области витаминов дей-
ствие этих стандартных препаратов было ограничено несколь-
кими годами (от 2 до 5 лет). Ближайшие годы показали спра-
ведливость этой предосторожности, так как уже в 1934 г.
потребовался созыв второй международной конференции по
витаминам, ибо к этому времени стало возможным заменить
281
большинство международных стандартных препаратов хими-
чески чистыми веществами. Решение вопроса в этом напра-
влении, т. е. изучение химической структуры витаминов, а
вместе с тем и получение их синтетическим путем, имело
следствием разработку ряда методов химического определе-
ния »витаминов как чистых, так и содержащихся в разных
препаратах. Таким образом, к биологическим методам присо-
единился ряд химических (и именно преимущественно коло-
риметрических) методов определения витаминов. Химические
методы получают в последнее время все большее распростра-
нение. *
Широкое'развитие учения о витаминах, ставшее специаль-
ной областью естествознания, повело к тому, что основная
работа по выделению, изучению и испытанию витаминных пре-
паратов стала концентрироваться в руках специалистов. Этому
в значительной мере способствовало то обстоятельство, что
основные методы изучения сводятся к длительным опытам на
животных, поставленным в условия развития у них того или
другого авитаминоза. В СССР основная работа по витаминам
проводится в специальных учреждениях, главнейшими из кото-
рых являются витаминный отдел Института питания в Москве
и Витаминный институт Наркомпищепрома в Ленинграде.
Кроме того, при витаминном отделе Института питания функ-
ционирует государственная контрольная лаборатория по
витаминным препаратам. На основании сказанного делается
понятным, почему в настоящей работе, излагающей предмет
с фармакологической точки зрения, вопросы испытания вита-
минных препаратов могут быть рассмотрены лишь в самой
общей форме. То обстоятельство, однакф, что основными мето-
дами испытания тех витаминных препаратов, по который
имеются международные соглашения, являются методы биоло-
гические, принципиально ничем не отличающиеся от других
методов биологической оценки, вполне объясняет необходи-
мость включения в данную работу хотя бы принципов испыта-
ния витаминов. Кроме того, как уже частично указано выше,
витаминные препараты стали теперь медикаментами, получают
все большее и большее распостранение (иногда при заболе-
ваниях, прямо не связанных с авитаминозами) и уже по одному
Этому не могут выпасть из поля зрения фармакологов.
•Изложение принципов испытания витаминных препаратов
ограничивается по понятным соображениям лишь методами
биологической оценки и лишь по тем витаминам, по испытанию
которых имеются международные соглашения. Методы биоло-
гической оценки витаминных препаратов постепенно получают
в ряде стран официальное признание и вошли в некоторые
фармакопеи в качестве обязательных (Фармакопеи британская,
-французская и США). Ряд витаминных препаратов вводится
в новое (VIII) издание фармакопеи СССР.
282
»
В настоящее время международные соглашения ограничи-
ваются четырьмя витаминами — A, Bi, С и D. Биологическое
испытание препаратов всех четырех витаминов принципиально
одинаково и сводится к устранению у подопытных животных
тех патологических явлений, которые развиваются у них при
вскармливании пищей, не содержащей данного витамина.
Такого рода опыты требуют большой затраты времени, дол-
жны, как правило, проводиться на большом числе животных,
юльшая потребность в животных объясняется не только тем,
гго для испытания каждой дозы требуется несколько живот-
дых, но зависит от необходимости большого количества кон-
трольных экспериментов. Контрольные опыты при испытании
витаминных препаратов состоят не только в испытании дей-
ствия стандартного препарата на пораженных соответствую-
щим авитаминозом животных, но и в наблюдении за нелечен-
1ыми животными, у которых наличие специфического патоло-
гического состояния к концу опыта должно подтвердить пра-
вильность данной диэты и правильность реакции подопытных
животных. Огромное значение для точности результатов имеет
тщательный подбор соответствующего пищевого рациона, в ко-
торый во избежание получения комбинированных авитамино-
зов должны в некоторых случаях входить все основные вита-
мины, за исключением изучаемого. Применяемые в качестве
растворителей для витаминов А и D растительные масла не
должны содержать сами по себе витаминов.
Само собой разумеется, что содержание животных, уход
за ними, пути введения препаратов, объем вводимой дозы,
растворители препаратов и т. д. — все это должно в мельчай-
ших подробностях быть одинаковым для опытов со стандарт-
ным и испытуемым препаратами. При выборе животных для
испытания витаминных препаратов крайне важно иметь экзем-
пляры с одинаковой сопротивляемостью. Это заставляет с осо-
бой тщательностью относиться к подбору животных. При ра-
боте с растущими животными, что имеет место при испытании
препаратов витаминов А и D, приходится не только тщательно
следить за возрастом и весом подопытных животных, но по воз-
можности пользоваться приплодом от родителей, находящихся
под наблюдением и на определенном вскармливании.
Вполне естественно, что проведение в общих чертах опи-
санных экспериментов требует точной и тщательной работы
целого коллектива работников. Отчасти также и этим обстоя-
тельством можно объяснить концентрацию работы по вита-
минным препаратам в специальных учреждениях. Понятно, что
обычные фармакологические лаборатории не всегда могут
ставить подобные массовые эксперименты. Международные
стандартные препараты рассылаются в ограниченном количе-
стве с тем, чтобы каждая страна для себя по этим стандартам
изготовляла свои стандартные препараты.
2S3
После этих общих замечаний вкратце рассмотрим принципы
испытания отдельных витаминных препаратов, х
Витамин А. Отсутствие в пище витамина А ведет у экспери-
ментальных животных к задержке роста и в дальнейшем к раз-
витию болезненных явлений в глазу, к так называемой ксе-
рофталмии. Особенно отчетливо можно наблюдать эти
изменения у крыс, на которых всегда и проводится испытание
препаратов витамина А. Успехи изучения химической природы
витамина А позволили уже в 1931 г. принять в качестве стан-
дартного препарата высокоочищенный продукт, представля-
ющий собой смесь двух изомеров каротина, аир, получаемых
по способу Вильштеттера из моркови. Каротины (провита-
мины), как, впрочем, и другие химически очищенные вита-
мины, обладают чрезвычайно высокой активностью. В связи
с этим ,за 1 международную ЕД витамина А было принято дей-
ствие, вызываемое I7 этого стандартного препарата. Однако
даже и этот столь высокоактивный стандартный препарат
в 1934 г. по постановлению второй Международной конферен-
ции по витаминам 566 был заменен чистым [3-каротином. Это ве-
щество формулы С40Н56 оптически неактивно, имеет точку пла-
вления 184—184,5° и характеризуется еще определенным спек-
тром поглощения в разных растворителях — хлороформе, серо-
углероде и циклогексане. Активность этого стандартного пре-
парата значительно выше прежнего. За 1 ЕД принимается дей-
ствие, вызываемое 0,6 7 этого вещества. Для характеристики
активности этого препарата следует указать, что для восста-
новления роста молодых крыс, вскармливаемых пищей, лишен-
ной витамина А, требуется от 2 до 4 ЕД в день, т. е. от 1,2
до 2,4у в день вещества. Устранение явлений ксерофталмии
требует несколько больших доз.
Этот действующий до настоящего времени международный
стандартный препарат рассылается ib ампулах по 5 см3 в 0,03%
растворе, что соответствует содержанию в 1 см3 500 ЕД. Рас-
творителем служит кокосовое масло, насыщенное азотом и со-
держащее с целью предохранения р-каротина от окисления
0,01% гидрохинона. Для дальнейших разведений препарата
требуется бесцветное растительное масло, не содержащее
витамина А.
Крайне любопытно, что сохранность этого стандарта, пред-
назначаемого для биологического эксперимента, проверяется
колориметрическим путем. Вкратце эта проверка сводится
к сравнению окраски раствора стандартного препарата (0,03%)
с 0,5% раствором двухромовокислого калия. При сохранении
в темноте при 37° окраска раствора каротина не должна
уменьшаться более чем на 10%. Этим же путем проверяется
сохранность раствора на протяжении эксперимента.
Следует иметь в виду, что кокосовое масло при темпера-
туре ниже 26° застывает, почему растворение препарата про-
водится при подогревании.
284
Из имеющих широкое распространение препаратов, подле-
жащих испытанию на содержание витамина А, основным яв-
ляется рыбий жир. По требованию Фармакопеи США (XI изда-
ние, 1936) 1 см3 рыбьего жира должен содержать не меньше
600 ЕД витамина А. Как Фармакопея США, так и международ-
ное соглашение разрешают при испытании именно рыбьего
жира пользоваться в качестве стандартного препарата соот-
ветствующим стандартным рыбьим жиром.
Опыт проводится на молодых белых крь1сах с явлениями
недостаточности витамина А. Наблюдение над действием испы-
туемого и стандартного препаратов ведется, по Фармакопее
США, 24 дня. Дневная доза не должна превышать 0,1 см3.
Введение масляных растворов производится per os зондом или
шприцем с тупой иглой. Обычной диэтой, ведущей к разви-
тию явлений недостаточности витамина А, является смесь
Осборн-Менделя507, состоящая из крахмала — 65%, казеина —
18%, растительного масла — 5%, сушеных дрожжей (вита-
мин В) — 8%, витамина D в количестве 3 ЕД на 1 г смеси и со-
левой смеси — 4%.
В состав солевой смеси входят соли кальция, магния, натрия,
калия, железа, квасцы, разные кислоты (серная, фосфорная,
соляная, лимонная).
Осборн и Мендель •"°8 дают следующую пропись: СаСОз —
13,48, MgCO3 —2,42, Na2CO3 —14,04", КазСОз — 14,13, Н3РО4 —
10,32, HCJ—12,75, H2SO4 — 0,92, Acidum ciricum + Н2О —
10,10, Ferrum citricum — 0,634.
Кроме препаратов рыбьего жира, на содержание витамина
А могли бы испытываться разные препараты, содержащие
каротин и в значительной мере предназначаемые для местного
действия. Таковы вырабатываемые у нас в СССР препараты
витадерма (мазь), каротин (коллоидный раствор каротинов),
каротоль (масляный раствор каротинов). Вопрос об их вита-
минной ценности, однако, окончательно еще не решен, почему
они биологической оценке пока не подвергаются.
Витамин Bt. Отсутствие в пище витамина Вг ведет у экспе-
риментальных животных к развитию явлений полиневрита
спастической или паралитической формы. Эти явления наблю-
даются у голубей, вскармливаемых полированным рисом, а у
растущих крыс сопровождаются и задержкой роста. Ввиду
того что витамин Вх растворим в воде, его иногда называют
воднорастворимым фактором роста в отличие от растворяю-
щегося в маслах витамина А.
Успехи в изучении химии витамина Вх не могли быть исполь-
зованы к моменту второй и пока последней Международной
конференции по витаминам, почему до настоящего времени
международным стандартным препаратом является еще в 1931 г.
принятый продукт 569, полученный путем адсорбции каолином
антиневритического витамина В из водного экстракта рисовых
отрубей, подкисленного до pH = 4,5. Высушенный продукт об-
285
ладает высокой активностью и большой стойкостью. За 1 ме-
ждународную ЕД принимается действие, вызываемое 10 мг
этого сухого препарата. Активность стандартного препарата
такова, что назначение голубям со средним весом 300 г, стра-
дающим полиневритом от отсутствия в пище витамина В1} по
2—3 ЕД в день (т. е. по 20—30 мг) приводит к устранению
болезненных явлений. При испытании на молодых крысах до-
бавление к полноценной во всех прочих отношениях пище 1—
2 ЕД (10—20 мг) поддерживает нормальный рост животных.
Государственная лаборатория по контролю витаминных пре-
паратов пользуется голубями, вскармливаемыми вместо полиро-
ванного риса гречневой крупой.
При работе на крысах важно добавление к пище други?
витаминов, особенно витамина А и так называемого витамина.
В2, отсутствие которого в пище ведет к развитию кожных явле.
ний (у человека — пеллагры). Препараты антиневритическок
витамина Bt у нас еще не вырабатываются в широком мае*
штабе, и потому их биологическая оценка широкого распро-
странения не получила.
В ближайшем будущем можно ожидать замены стандартного
препарата химически чистым препаратом витамина Вг (флавина).
Витамин С. Отсутствие в пище витамина С ведет у человека
к развитию цынги. Из животных наиболее близкую картину
дают морские свинки, у которых при этом развиваются крово-
излияния в коленных суставах, опухоли и тугоподвижность
конечностей, характерные изменения в костях и т. д.
Практическими наблюдениями уже очень давно, до разви-
тия учения о витаминах, было установлено, что свежая зелень
и некоторые плоды (в первую очередь лимон) предохраняют
от заболевания цынгой. Это житейское наблюдение, подтвер-
жденное в дальнейшем специальными опытами на пораженных
цынгой морских свинках,_легло в основу первого международ-
ного соглашения по витаминам (1931). В качестве международ-
ного стандартного препарата противоцинготного витамина С
был принят оказавшийся в опытах самым активным из всех
пищевых продуктов лимонный сок. За 1 ЕД было принято то
действие, которое вызывает 0,1 см3 свежевыжатого лимонного
сока. Неудовлетворительность такого стандартного препарата
очевидна сама собой. Вскоре после введения этого междуна-
родного стандарта было we только полностью изучено химиче-
ское строение витамина С, но он был получен и синтетическим
путем. Химически чистый витамин С получил название аскор-
биновой кислоты. Вторая международная конференция в
1934 г. 570 заменила достаточно неопределенный лимонный сок
левовращающей аскорбиновой кислотой, приняв за 1 ЕД дей-
ствие, вызываемое 0,05 мг этого препарата, чему приблизи-
тельно соответствует действие 0,1 см3 лимонного сока. Аскор-
биновая кислота растворяется в воде непосредственно перед
опытом.
286
Для предупреждения развития резких макррскопических
явлений цинги у молодых морских свинок, вскармливаемых
пищей, не содержащей витамина С, требуется примерно 10 ЕД
(0,5 мг) в день. Наблюдение над морскими свинками ведётся
чрезвычайно долго.
При’ опытах с устранением явлений иынги, т. е. с ее изле-
чением, наблюдение длится около 20 дней, при опыте с преду-
преждением развития цынги оно занимает гораздо больше вре-
мени (до 100 дней). Обычной диэтой, вызывающей цынгу
у морской свинки, является овес и автоклавированное сено
с добавлением автоклавированной моркови. Потребная днев-
ная доза при предупреждении и лечении примерно одинакова.
К выработке аскорбиновой кислоты у нас еще только при-
ступают. Выпускаемые с медицинскими целями противоцынгот-
ные препараты представляют собой более или менее очищен-
ные и концентрированные экстракты наиболее активных про-
тивоЦынготных растительных продуктов. Специфическая
активность этих продуктов (например, шиповника, черной смо-
родины и т. д.) была установлена при помощи биологического
эксперимента. Однако это испытание носило принципиальный
характер, и в настоящее время рядовые серии этих препаратов
систематическому биологическому контролю не подвергаются.
Витамин D. Биологическое испытание препаратов антирахи-
тического витамина имеет наибольшее распространение среди
биологических методов оценки витаминных препаратов. Недо-
статок витамина D в пище ведет к развитию рахита, уже давно
хорошо изученного как в клинике, так и в опытах на живот-
ных. Изучение химического строения витамина D привело
к возможности получения его синтетическим путем (облучение
выделяемого из дрожжей эргостерина). Уже Международная
конференция 1931 г. приняла в качестве стандартного препа-
рата высокоактивный раствор облученного эргостерина, за
1 ЕД которого считалось проявляемое 1 мг этого раствора
действие; 1 мг раствора содержал 0,1 препарата. Однако этот
столь высокоактивный препарат в 1934 г. уступил место рас-
твору кристаллического витамина D — кальцифероля, ЕД
которого, равная по активности прежней, содержится в 0,025 у
этого препарата. Этот международный стандартный препарат
рассылается в масляном растворе во флаконах по 10 см3, при-
чем 1 г этого раствора содержит 100 ЕД (т. е. 2,бу, что соответ-
ствует 0,00025% раствору). Испытание препаратов, содержа-
щих витамин D, ведется по определению их способности
устранять болезненные явления у животных с эксперименталь-
ным рахитом. Наибольшее распространение имеют методы
испытания на крысах. Молодые животные, вскармливаемые
пищей, приводящей к образованию рахита, содержатся в тем-
ном помещении, что ускоряет развитие патологических явле-
ний. Испытание возможно вести, как и при изучении действия
других витаминов, путем введения испытуемогб препар’ата
* ' 287
одновременно с вызывающей рахит диэтой, предупреждая
развитие болезненных явлений, или назначая препарат после
развития картины болезни, т. е. излечивая рахит. Таким обра-
зом, можно вести испытание профилактическим или лечебным
методом. Как для подтверждения наличия явлений рахита, так
и для констатирования излечения необходимо определение со-
стояния костей. Наиболее яркие изменения (отсутствие свое-
временного окостенения) отмечаются на проксимальном конце
большеберцовой кости или дистальном конце плечевой и
лучевой костей. Для определения изменений в этих местах
можно пользоваться тремя путями: рентгеновскими снимками,
химическим определением состава золы костей и изучением
продольных срезов эпифизов, обработанных азотнокислым
серебром. Всеми этими путями можно установить наличие или
отсутствие нормального окостенения в эпифизах указанных
костей. Профилактический метод требует наблюдения над
животными в течение 3—4 недель. Лечебное действие может
быть отмечено через 10—12 дней после начала лечения. При
исследовании состояния костей перед началом лечения можно,
по понятным соображениям, пользоваться лишь рентгенограм-
мами костей; после окончания лечения окостенение может
быть установлено любым способом.
Международное соглашение571 подчеркивает, что выражать
активность в международных ЕД можно лишь тогда, когда
сравнение действия испытуемого образца ведется только на
крысах. При испытании на других животных могут получиться
расходящиеся данные. Официальное биологическое испытание
препаратов витамина D (облученного эргостерина) предписы-
вается британской Фармакопеей 1932 г. Фармакопея США (XI
издание, 1936) предписывает испытание рыбьего жира на
содержание витамина D и облученного эргостерина. Вырабаты-
ваемые в СССР (в Москве) препараты витаминоль и «витамин
D» подвергаются биологическому контролю государственной
лаборатории по контролю витаминных препаратов в Москве.
Как указанные иностранные фармакопеи, так и эта лаборато-
рия пользуются опытом на крысах.
Для получения рахита Фармакопея США и британская поль-
зуются смесью, состоящей из кукурузы (желтой) — 76%, пше-
ничного белка — 20%, углекислого кальция — 3% и хлористого
натрия — 1%, Фармакопея США допускает, кроме этой, дру-
гую, несколько усложненную смесь.
Лаборатория по контролю витаминных препаратов поль-
зуется смесью Шерман-Папенгейма 527, состоящей из белой
муки самой высокой чистоты — 95%, молочнокислого каль-
ция— 2,9%, хлористого натрия — 2% и лимоннокислого же-
леза — 0,1%.
Фармакопея США пользуется лечебным методом, лаборато-
рия по контролю витаминных препаратов — профилактиче-
ским, британская допускает и лечебный, и профилактический
методы.
Введение испытуемого и стандартного препарата произво-
дится per os в масляном растворе зондом или шприцем с тугой
иглой. Объем вводимого раствора различен, по международ-
ному соглашению наиболее удобно вводить п,о 0,2 см3. При
выборе дозы следует иметь в виду, что количество препарата,
потребное в день, при лечебном методе значительно выше, чем
при методе профилактическом. По данным международного
соглашения, дневная доза при лечебном методе в 10 раз выше
дневной дозы при профилактическом методе. По британской
Фармакопее разница меньше и достигает всего 2,5. Одна
международная ЕД примерно равна дневной дозе при лечеб-
ном методе.
При растворении стандартного раствора берут препарат не
по объему, как обычно, а по весу.
По требованиям британской Фармакопеи, 1 см3 раствора
облученного эргостерина должен содержать 3 000 ЕД, Фарма-
копея США требует для рыбьего жира содержание не менее
85 ЕД в 1 см3, а для раствора облученного эргостерина не
менее 10 000 ЕД. Вырабатываемый в СССР витаминоль содер-
жит 2 000 ЕД в 1 см3, а «витамин D» — 10 000 ЕД. Ввиду того
что средняя лечебная доза для ребенка равна 3 000 ЕД, концен-
трацию 2 000 ЕД в 1 см3 следует признать нерациональной.
Боязнь токсического действия витамина D (при длительном
введении отмечено отложение кальция в паренхиматозных
органах, в частности, в почках351) при концентрации в 10 000
ЕД в 1 см3 лишена основания. Следует иметь в виду, что сей-
час пробуют проводить лечение, вводя сразу очень большие
дозы (по нескольку десятков ЕД), причем явлений отравле-
ния не отмечается.
Интерес к методам биологической оценки не только не
падает, но продолжает возрастать. Постоянно встречаются
предложения все новых и новых методов. Не имея никакой
возможности разбирать их, мы можем лишь привести некото-
рые примеры групп веществ, подвергающихся изучению в этом
направлении, и показать, какими иногда оригинальными, а
иногда и странными путями пользуются для методов биологи-
ческой оценки. В этих предложениях часто вопрос принципи-
ального фармакологического обследования вещества тесно
переплетается е вопросом о постоянной проверке качества
препаратов.
Действие всевозможных возбуждающих половую деятель-
ность препаратов (Aphrodisiaca) предлагают испытывать на
рыбах-самцах по наружным изменениям в окраске плавников,
пигментации чешуи и т. д. (Глезер и Кония 302). Предлагается
ряд методов для определения скорости свертывания крови, на
19 — 317 289
основании чего можно установить активность различных
кровоостанавливающих препаратов (Панвен и Розкам 554,
Шанковский 555, Риссер и Нагель55С). Для сравнения действия
различных обезболивающих пользуются определением болевой
чувствительности у морских свинок [при прикосновении к го-
лой коже нагретых до разной температуры металлических
цилиндров (Хильдебрандт 557)] или у мышей (Хессе 558 с сотруд-
никами), или, что особенно рекомендуется, у людей (Хейн-
рот559, Хессе и Рейхерт590, Фрейнд561), причем для вызывания
болевой чувствительности, показание которой затем испыты-
вается, прибегают к -раздражению фарадическим током боль-
ных и здоровых зубов. Действие приобретших в последнее
время известность препаратов пчелиного яда предлагают
испытывать путем определения in vitro их способности раство-
рять красные кровяные шарики (Шнейдер 562).
Даже столь сравнительно мало значащие препараты, как
экстракты чеснока, считают нужным испытывать биологически,
определяя якобы имеющуюся у них способность задерживать
развитие токсического действия больших доз витамина D на
мышах (Хитцельман 568). Описываются специальные методы
определения горьких веществ не только органолептически, но
и путем определения их действия на сокращения желудка и т. д.
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛ АВ А I
1. Cloetta, Arch. exp. Pathol, и Pharm., Bd. 88 u. 122.
2. Stoll u. Kreis, Helvetica chimica acta, v. 16, 1049, 1933; v. 17, 592,
1934; v. 18, 120, 1935.
3. Gottlieb u. Tambach, Miinch. med. Wschr., Nr. 1, 1911.
4. Ziegenbein, Arch. Pharmaz., 454, 1902 (цит. по работе № 5).
5. Storm v. Leeuwen, Handbuch der biologischen Arbeiismethoden, Abt
IV, T. VII, H. 5 (Lief. 98).
6. Karr er, Helvetica chimica acta, v. 12, 1929.
7. Straub, Munch, med. Wschr., Nr. 10, 1936.
8. Саргин и Васильева, Доклад на I Всесоюзной конференции
фармакологов, Москва, VI, 1937.
8а. Straub, Biochem. Zschr., Bd. 41 u. Bd. 53.
9. Forst, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 114.
10. Л e в ч у к, Курская аномалия и ее влияние на растения, 1927 (неопубли-
кованная рукопись).
11. Н. Meyer, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 81.
12. Storm v. Leeuwen, Ned. Tijdschr. v. Geneesk., 1917, ч. 1 (цит. по
работе № 5).
13. Р. Trendelenburg, Klin. Wschr., Nr. 1, 1925.
14. Loewe, Klin. Wschr., Nr. 2, 1927.
15. К obert, Beitr. z. Kenntnis d. Saponinsubstanzen, Stuttgart, 1904.
16. Fii h n e r, Handbuch der biologischen Arbeitsmethoden, Abt. IV, T. VII, H. 2
(Lief. 67).
17. Haempel, Intern. Rev. Hydrobiol., v. 31, 325, 1934 (цит. но Ber. ges.
Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 85, 626).
18. P. Trendelenburg, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 139, 301, 1928.
19. Flury, Zschr. f. Geburstshilf. u. Gynak., Bd. 87.
20. Storm v. Leeuwen, Journ. Pharm. a. exp. Ther., v. 23, No. 1.
21. Heine camp, Journ. Pharm. a. exp. Ther., v. 23, No. 2.
22. L e n d 1 e, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 109.
23. Burn, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 184, 37, 1937.
24. Trevan, Proc. Roy. Soc. London, ser. B, v. 101, 483, 1927.
25. Abderhalden u. Gellhorn, Pfl. Arch. ges. Physiol., Bd. 199.
26. R о m e i s, Zschr. exp. Med., Bd. 2.
27. Leo Adler, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 112.
28. Cap Вестник эндокринологии, т. I, № 2; Arch. exp. Pathol, u. Pharm.,
29. Крылов, Сборник в честь 75-летия И. П. Павлова.
30. Fagge a. Stevenson, Guys Hosp, reports, 1866 (цит. по работе № 5).
31. J a q u е t, Korrespbl. f. Schweiz. Artze, S. 745, 1898.
32. Haughton, Journ. Amer. Med. Assoc., p. 950, 1898.
г л AB А II
33. Gottlieb, Miinch. med. Wschr., Nr. 15, 1914.
34. W. Straub, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 80.
19* 291
35. Focke, Zschr. exp. Pathol., Bd. 14, 262, 1913; Bd. 16, 443, 1914. Далее —
см. Fulmer (№ 16).
36. H a t c h e r a. Brody, Amer. J. Pharm., v. 82, 360, 1910; Hatcher,
Journ. Amer. Pharmaceut. Assoc., v. 8, 913, 1919.
37. Storm v. Leeuwen (см. работу № 5).
38. De Lind v. Wijngaarden, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 112;
Bd. 113; Bd. 114.
39. Bauer, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 172, 699, 1935; Bd. 176, 65, 74,
1934.
40. F. Buchner, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 176, 59, 1934.
41. Weese u. Dickhoff, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 176, 274, 1934.
42. К i 1 i a n i u. W i n d a u s, Arch. Pharmaz., Bd. 237.
43. Kraft, Arch. Pharm., Bd. 250.
44. W. Straub, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 82.
45. Heffter, Berl. klin. Wschr., 28, 1917.
46. Gunn u. Sapeika, South-Afric. Journ. Med. Sci., v. I, 191, 1936 (цит.
no Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 96, 632).
47. Taka be, Jap. Journ. Med. Sc. Trans. IV. Pharm., v. 8, 141.
48. Bhatia u. Lal, Ind. Journ. Med. Res., 22, 3 (цит. no Ber. ges. Physiol,
u. exp. Pharm., Bd. 83, 675).
49. Rosenkranz, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 83.
50. Gottlieb, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 83.
51. С о h 1 s о n, Journ. Amer. Pharmaceut. Assoc., v. 7, No. 1.
52. Fromherz, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 161, 34, 1931; Bd. 168,
743, 1932; Bd. 182, 55, 1936.
53. De-Giacomi, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 117.
53a. M ox н а ч e в а, Физиологический журнал СССР, т. XVI, в. 3, 1933.
54. Bauer u. Fromherz, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 172,693, 1933.
55. Haskell a. Courtney, Amer. Journ. Med. Sci., v. 107, No. 6.
56. Kuroda, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 108.
57. R о d s m a u. G о e 1 a m, Geneesk. Tijdschr. v. Ned. Ind., T. 63, H. 5 (цит.
no Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 25, 135). <
58. Esweld, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 184, 45Э, 1937.
59. Raps on a. Underhill, Quart. Journ. Pharmacy, v. 8, 499, 1935.
60. Nyiri a. Dubois, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 40, 373.
61. Lendle, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 169, 392, 1932.
62. К n a f f 1-L e n t h, Handbuch der biologischen Arbeitsmethoden, Abt. IV,
T. 7, H. 9 (Lief. 357).
63. P a r a n j p e, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 85.
63a. Гинзберг и Гольберг, XI-eme Congres international de Phar-
macie.
64. N u k i, Fol, Pharm. Jap., v. 23, 11 a. 21, 1936 (цит. no Ber. ges
Physiol, u. Exp. Pharm., Bd. 95, 1911).
65. Shackell, Williamson, Katzmann a. Kleinmann, Journ.
Pharm. a. Exp. Ther., v. 23, 53, 1924.
66. R. Ha met, Rev. Pharm. et Pher. exp., No. 4, 1933.
67. M oiler, Quart. Journ. Pharmacy, v. 7, 1931.
68. Hanzlik, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 48, 1933.
69. Dock, Stockton a. Lehman, Amer. Heart Journ., v. 8, 707, 1933.
70. Lehman a. Hanzlik, Journ. Physiol, a. Exp. Path., v. 48, 1933.
71. Stockton, Amer. Heart Journ., v. 9, 248, 1933.
72. Burn, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 39, 221, 1930.
73. Schuntermann, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 165, 185, 1932.
74. Berardi, Cannon, McGuigen, Journ. Labor, a. Clin. Med., v. 10.
75. Uhlmann, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 122.
76. К n a f f 1-L e n tz, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 135.
77. To kita, Известия медицинского об-щества. Токио, т. XXXXVIII (цит. по
Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 84, 153).
78. Tamura, Kobayashi a. To kita, Jap. Journ. Med. Sci. Trans. IV,
Pharm., v. 8, 194, 1935.
79. D i e u a i d e Tung, Bien, Journ. Clin. Invest., v. 14, 725, 1935.
292
80. Defandorf, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 21, 359.
81. Gottlieb u. Magnus, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 47, 1901.
82. Marshall, Journ. Physiol., v. 22.
83. E h r i s m a n, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 123.
84. Певзнер, Arch. exp. Pathol, n. Pharm., Bd. 105.
г л а в a in
85. D о d d s, N о b 1 e, S m i t h. Lancet, II, 918, 1934. ' *
85a. Selye, Stehle a. Colli p, Canad. Med. Assoc. Journ., v. 31, 339.
86. F u h n e r, Zeitschr. f. ges. exp. Mediz., Bd. I. - . у
87. Draper, Amer. Journ. Physiol., v. 80. .---- / ' —w +
( 88. Pa pi els ki, Berl. klin. Wschr., 1156, 1913.
89. B. Zondek u. Krohn, KI. Wschr., Nr. 10, 20 и 31, 1932; Nr. 31, 1935. л
89a. I£a_m m, Al.dx.Lc.h a^Qttiers, J.Qurn. Amer. Chem. So.i_„ v.^50, 1928.
90. Bpttger»Klin. Wschr., Nr. 3, 1936,- , ; —
91. St eh 11 a. Fraser, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 55, 136.
92. Hogben, Lancelot, Shapp a. McDonald, Quart. Journ. Exp.
Physiol., v. 14, No 4. ’ * *' 1 , и
93. Hogben a. Winter, Brit. Journ. Exp. Biol., v. 1. -o — *
94. Loewe u. 11 i s о n, Klin. Wschr., Nr. 35, 1925.
F-enu, Journ. Physiol., v. 59. >
К na us, Dreyer a. Clark, Journ. Physiol., v. 60. ? "
Mattei, Boll, e atti d. real acad. d. Roma, v. 63 (цит. no Ber. ges.
Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 44, 565). •
Николаев О. В., Журнал экспериментальной биологии и медицины,
т. XII, № 32, 183, 1929. и
Heymans, С. г. Soc. Biol., v. 92, No^_3.
Raab, Klin. Wschr., Nr. 33, 1925. i-
M. Kaufmann, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 120.
Mattei, Endocrinology, v. 8, 696, 1924.
Csepai u. Kovats, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 120.
1 96.
. 97.
98.
99.
100.
101.
102.
ЮЗ.
104. Abel, C has Ro U.l 1 e r a. G e fl i n g. Journ- Pliarm -а-рур-ГДеу., y. 22.
105. Kochmann, Hoppe^eyler’s Zschr. physiol. Chem., Bd. 115 u. Bd."T29.
106. Schiibel, Verh. Dtsch. pharm. Ges., VII Tag., 115,— <-« 4 ' •' .— .
107. Fromherz, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 113.
— 108. P. Trendelenburg u. Borgmann, Biochem. Zschr., Bd. 106.
108a. Penan et Si mm one t, Bull, Soc. Chim. biol., v. 8.
Д09. Smith a. M с С 1 о s k y. Bull. Hyg. Labor., No-138. -* £ “
ПО. Саргин, Труды III Всероссийского съезда физиологов, 212, 1928.
111. Р. Trendelenburg, Handbuch der biologischen Arbeitsmethoden, Abt.
V, T. 38, H. 3 (Lief. 195).
112. Melville, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 106, 102, 1936.
112a. Burn, Biological Standardization, 1937.
113. Azuma a. Kumagava, Jap. Journ. Med. Sci. Trans. IV Pharm., v. 8, 87,
<-- 1935. *' ‘WrtAA _
114. Kiihrzel, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 127. .
115. Schiibel u. G e h 1 e n, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 173, 633, 1933.
116. Burn a. Dale, Reports on Biolog. Standarts. I. Pituit. extracts, Med.
Research Council, 1922.
117. Heller, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 173, 291.
118. Heller u. Kusinoki, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 175, 301.
119. А т а б e к, Диссертация (рукопись). «г
120, Adelsberg, Zschr. f. klin. Med., Bd. 128, 598, 1935.
121. Mehes u. Molitor, Arch. exp. Pathol, n. Pharm., Bd. 127. Cl
127. Stehle, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 175/471.“' _•
123. Downes a. Reachards, Journ. Biol. Chemistry, v. 110, 81, 1935. C
124. McFarlane, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 28. X'4*’’ <
125. К n a f f 1-L e n tz, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 135, 305.
126. U n n a u. Walterskirchen, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 178,
639, 1935.
293
127. Gibbs, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 40, 129, 1930.
128. Burn, Methods of Bioassays, Oxford Med. Publ., 1928.
129. Bonsmann u. В r a kh^g e, Arehr-exp. Pathol, u. Pharm., Bd 174,453,
1936.
130. Helmut, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 173, 526, 1933.
Г Л А В A IV
130a. Loewe, Zschr. ges. exp. Med., Bd. 6.
131. Ehrmann, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 52.
132. Abderhalden u. Slavu, Zschr. f. phys. Chemie, Bd. 59.
133. Abderhalden u. Kautsch, Zschr. f. phys. Chemie, Bd. 61.
134. L i e b e n, Zbl. Physiol., Bd. 20.
135. Schuller, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 90.
136. Schimidzu, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 103.
137. Harada, Mitteil. med. Fac. Univ. Kioto (цит. no Ber. ges. Physiol, u. exp.
Pharm., Bd. 32, 602).
138. Rico et M a 1 a f а у a, C. r. Soc. Biol., v. 120, 42, 1935.
139. Bairn a. Suffolk, Journ. Physiol., v. 86, 341, 1936.
140. McKraken a. Werkness, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 9.
141. Ta in ter, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 46, 27, 1932.
141a. M. П. Николаев, Русский физиологический журнал, т. VIII, 1925;
Zschr. ges. exp. Med., Bd. 48, 1926.
гл AB A V
142. Hemmingsen a. Krogh, The Biologic Standard of Insulin, Publ. of
the League of Nations, III. Health, 7/III, 1926.
143. T r e v a n а. В о о c k, ibidem.
144. Voegtlin a. Dunn, USA Publ. Health Reports, 1923 (цит. по работе
№ 147).
145. Eadie a. Macleod, Amer. Journ. Physiol., v. 64.
145a. Boucraert et Stricker, C. r. Soc. Biol., v. 91.
146. Allan, Amer. J. Physiol., w. 67 a. v. 71.
147. Macleod a. Orr, The Biologic. Standard., of Insulin.
148. Penau et Simmonet, Presse med., I, 471, 1924.
149. F о r n e t, Verhandl. Dtsch. pharm. Ges., VII Tag., 93.
150. Macleod a. Orr, Journ. Labor, a. Clin. Med., V. 9.
151. Grevenstuck u. Laqueur, Insulin, Munchen, 1925.
152. Bornstein, Klin. Wschr., 555, 192 L
153. Geiger v. Szirtes, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 119.
154. О. В. Махотина, Проблемы эндокринологии (в печати).
155. Dudley, Bioch. Journ., v. 17.
156. Stress u. Wiechowsky, Verhandl. d. 36 Kongr. f. inn. Medizin,
Bd. 36, 129.
157. E. Laqueur u. de Jongh, Biochem. Zschr., Bd. 163, 308.
158. Dudley, The Biologic. Standard, of Insulin.
159. Langecker u. Stross, Biochem. Zschr., Bd. 161.
160. Report by the Insulirf-Committee of the Univ, of Toronto, The Biologic.
Standard, of Insulin.
161. Acton Hugh a. Bose, Ind. Journ. Med. Research., v. 12 (цит. no Ber.
ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 43, 157).
162. Fenger a. Willson, Journ. Biol. Chemistry, v. 59, 83.
163. Allan a. Hanbury, Lancet, I, 101, 1924.
164. Gonsalez et Carrasco Fo rm i g u era, C. r. Soc. Biol., v. 89, 1923.
165. Blatherwick, Long, Bell, Maxwell, Amer. Journ. Physiol., v. 69;
Journ. Biol. Chemistry, v. 59.
165a. Бочкарев и Преображенский, Вестник эндокринологии, № 4,
1927.
166. С а р г и н, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 144, 172, 1929.
167. Depisch, Hogler u. Ueberrack, Klin. Wschr., 619, 1923
294
168. Stef fie, Arch. exp. Painol. u. Pharm., Bd. 181, 6x7, 1936.
169. Page, Amer. Journ. Physiol., v. 66.
170. Abderhalden u. Wertheimer, Pfl. Arch. ges. Physiol., Bd. 205.
171. Burger u. Kohl, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 173, 431.
172. Sahyn, M e 1 w i 11 e a. Blatherwick, Journ. Biol. Chemistry, v. 73,
443.
172a. Махначева, Труды Ленинградского научн.-исслед. фармац. ин-та
т. II, 1936.
173. Marks, The Biologic. Standard, of Insulin.
173a. Walden, Quart. Bull. Health Organisation League of Nations, Spec.
No., November 1936.
174. Arndt, Dtsch. med. Wschr., Nr. 2, 1927.
175. Hornung, C. r. Soc. Biol., v. 97.
176. Kohl, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 182, 550, 1936.
177. Mains a. McMullen, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 107, 595, 1936.
Г Л А В A VI
178. Stockard a. Papanicolau, Amer. Journ. Anatomy, v. 22, 225, 1911.
179. Long a. Evans, Mem. of the Univ, о California (цит. по Milton О. Lee.
Amer. J. Physiol., v. 78).
180. Allan a. Doisy, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 81, 819, 1923.
181. La taste, C. r. Soc. Biol., v. 44, 765, 1892 (цит. no F. Laquer, Hormone
und innere Sekretion, 1927).
182. Doisy, Veler a. Thayer, Journ. Biol. Chemistry, v. 86, 499, 1930.
183. Butenandt, Dtsch. med Wschr., Nr. 52, 1929.
184. Endrew a. Fenger, Endocrinology, v. 20, 563, 1936.
185. Цит. по Ремезову. Биохимия, т. II, 344, 1937; Rec. Trav. Chim. Pays-
Bas, v. 55, 797, 1936.
186. Marker, К a mm, Oakwood a. Laucins, Journ. Amer. Chem. Soc.,
v. 58, 1503, 1936.
187. Dodds, Helv. Chim. Acta, v. 19, 49, 1936; Dodds a. Lawson, Nature,
v. 137, 996, 1936; v. 139, 627, 1937.
188. Papanicolau (цит. по работе № 189).
189. Бочкарев, Диссертация, 1938 (рукопись).
190. Coward a. Burn, Journ. Physiol., v. 63, 270, 1927.
191. Becker, Melwish, d’A mo u r a. Gustavson, Journ. Pharm. a. Exp.
Ther., v. 43, 1931.
192. К r e i t m a i r, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 169, 576, 1932.
193. Kochmann, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 152, 193Э.
194. Lipschiitz, C. r. Soc. Biol., v. 108, 754.
195. Григорьев, Данилова, Преображенский, Вестник эндокри-
нологии, № 2/20, 1933.
196. Н. Higlais et М. Н i g 1 a i s, С. г. Soc. Biol., v. 117, 1005, 1934.
197. Hain a. Robson, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 57, 337, 1936.
198. Бочкарев, Эндокринология женской половой сферы, 1927.
199. Frank, The Female Sex Hormone, 1929.
200. a) London Conference of Sex Hormones, Geneva, 9.IX. 1932, С. H. 1091;
b) Quart. Bull, of the Health Organisation of the League of Nations, v. IV,
618, 1935.
201. Wade a. Doisy, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 32, 707, 1935.
202. Doisy, Ralls, Allen a. Johnston, Journ. Biol. Chemistry, v. 61,
711, 1924.
203. B. Zondek, Klin. Wschr., Nr. 27, 1926; B. Zondek u. Aschheim,
Klin. Wschr., Nr. 47, 1926.
204. Bugbee a. Simon d. Endocrinology, v. 10.
205. Marrian a. Parkes, Journ. Physiol., v. 67, 389, Ref. 918.
206. Voss, Klin. Wschr., 633, 1936.
207. Loewe, Dtsch. med. Wschr., Nr. 8, 1926.
208. B. Zondek u. Aschheim, Klin. Wschr., Nr. 22, 1926.
209. Laqueur, Hart u. de Jongh, Dtsch. med. Wschr., Nr. 30, 1926.
295
210. Laqueur a. de Jongh, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., 1936.
211. Dingemanse u. de Jongh, Acta brev. neerland. Physiol., 5, 27, 1935
(цит. no Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 93, 173).
212. Bulbring a. Burn, Journ. Physiol., v. 85, 320.
213. Bourg, Bull. Soc. Belg. Gynecol., v. 17, 98, 1935 (цит. no Ber. ges.
Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 90, 385).
214. Товасштерна, Архив биологических наук, т. ХХХХ, 163, 1935.
215. М. П. Николаев и П о номар ев, Журнал акушерства и гинекологии,
т. 46, 265.
216. D’Amour a. Gustavson, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 37,472, 1936.
217. Rowlands a. Callow, Bioch. Journ., v. 2, 837, 1935.
218. Kober, Bioch. Zschr., Bd. 238, 209, 1931.
219. Cohen a. Marrian, Bioch. Journ., v. 28, 1604, 1934.
220. Schmulowitz a. Wylie, Journ. Biol. Chemistry, v. 116, 415, 1936.
221. Sureauet Grandam, C. r. Acad. Sci., v. 203, 440, 1931.
222. Лапинер, В. А. Леонтович и Кашеварова, Проблемы эндо-
кринологии, т. II, № 1, 27, 1937.
223. Zimmermann, Hoppe-Seyler’s Zschr. phys. Chem., Bd. 233, 257, 1935.
ГЛАВА VII
224. Evans, The Function of the Anterior Hypophysis, Harv. Soc. Lectures^
1923_______24.
224a. Smith, Proc. Soc. a. Med., v. 24, 1926.
225. Biedl, Endokrinologie, Bd. 2, 241, 1928.
226. Aschheim u. Zondek, Klin. Wschr., Nr. 1, 1928.
227. Evans, Meyer, Simpson, The Growth a. Gonad-Stimulating Hormones
of the anter. Hypophysis, 1933.
228. С о 11 i p, Canad. Med. Assoc. Journ., v. 22, 212, 1930.
229. B. Zondek u. Aschheim, Klin. Wschr., Nr. 6, 1927; Nr. 18, 1928.
230. Wallen Laurens, Journ. Biol. Chemistry, v. 100, XCVII, 1933.
231. Fevold a. Hisaw, Amer. Journ. Physiol., v. 109, 654.
232. Reiss, Die Hormonforschung und ihre Methoden, 1934.
233. Haurrowitz, Reiss, Balin t, Hoppe-Seyler’s Zschr. phys. Chem., 1933.
231. Руденко. Устное сообщение.
235. Fevold, Hisaw a. Greep, Amer. Journ. Physiol., v. 117, 68, 1936.
236. Borst, Dtsch. med. Wschr., Nr. 27, 1930.
237. Borst, Doderlein u. Gostimirovic, Miinch. med. Wschr; Nr. 12,
1930; Nr. 19, 1931.
238. Бочкарев, Klin. Wschr., Nr. 37, 1929.
239. Коренчевский, Dennison a. Simpson, Biochem. Journ., v. 29,
2522, 1935.
240. Любовцеваи Глебова, Проблемы эндокринологии, т. II, № 1,59,
1937.
ГЛАВА VIII
241. Allen, Journ. Biol. Chemistry, v. 98, 591, 1932; Amer. Journ. Physiol.,
v. 100, 1932.
242. Fevold a. Hisaw, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 29, 620, 1932.
243. Fels, Slotta u. Rushing, Klin. Wschr., 1207, 1934.
244. Butenandt, Westfall u. Cabler, Ber. dtsch. chem. Ges.,
Bd. 67, 1611, 1934; Butenandt u. Smidt, ibidem, Bd. 67, 1901,1934.
245. Allen, Butenandt, Corner, Slotta, Hoppe-Seyler’s Zschr. phys.
Chem., Bd. 235, H. 3/4, 1935.
246. Allen a. Corner, Amer. Journ. Physiol., v. 86, 1928.
247. Frankel, Arch. f. Gynakol., Bd. 91, 1910.
248. А и с e 1 et В о u i n, C. r. Soc. Biol., v. 66, 1909.
249. Corner a. Allen, Amer. Journ. Physiol., v. 88, 326, 1929.
250. C la uber g, Klin. Wschr., Nr. 42, 1930; Nr. 43, 1931.
251. Allen, Amer. Journ. Physiol., v. 92, 612, 1930.
252. Young, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 34, 96, 1936.
296
253. Fevold, Hisow a. Leonard, Journ. Amer. Chem. Soc., v. 54, 254,.
1932.
254. Bulletin trimestriel de 1’Organis. d’Hygiene de la Soc. des Nations,
v. {V, 645.
255. McPhail, Journ. Physiol., v. 83, 145, 1934.
256. Dessau, Acta brev. neerlan. physiol., Bd. 6, 1936 (цит. no Ber. ges.
Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 96, 283).
257. Rowlands a. McPhail, Quart. Journ. Physiol., v. 6, 1936 (цит. no-
Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 96, 283).
258. Allen a. Reinolds, Amer. Journ. Obst., v. 30, 309, 1935.
259. Selye, Browne a. Colli p, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 34, 472,
1936.
260. Penau et Simmonet, Journ. de Pharmacie, p. VIII, v. 21, 485-
(цит. no Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 89, 431).
261. Knaus, Zbl. Gynak., Bd. 53, 2193, 1929; Klin. Wschr., Nr. 18, 1930.
262. Robson, Journ. Physiol., v. 84, 296, 1935.
263. Knaus, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 151, 1930.
264. Falls, Lackner, Krohn, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 32, 1451.
265. Makepeace, Corner a. Allen, Amer. Journ. Physiol., v. 115, 376,
1936.
266. Holtz, Verhandl. Dtsch. pharm. Ges., XIII Tag. Arch.. exp. Pathol, u.
Pharm., Bd. 184, 74, 1937; Holtz u. Wollpert, Arch. exp. Pathol,
u. Pharm., Bd. 185, 20, 1937.
267. Kennard, Amer. Journ. Physiol., v. 118, 190, 1937.
f л л в A IX
268. Gallagher a. Koch, Journ. biol. Chemistry, v. 84, 495, 1929.
269. Ruzick a, Goldberg, Brunnger u. Eichenberg, Helv. chim.
acta, v. 17, 1389 и 1395, 1934.
270. Callow a. Deanesley, Lancet, 11, 77, 1935.
271. E. Laqueur, XV Международный конгресс физиологов 1935. Тезисы
сообщений, 237.
272. Deansley a. Parkes, Lancet, 837, 1936.
273. Polak, Dingemanse u. Freud, Acta brev. neerlan. physiol., Bd.
6, 53, 1936 (цит. no Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 95, 86).
274. Loewe u. Voss, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 159, 532, 1931.
275. Коренчевский, Dennison a. Browsin, Bioch. Journ., v. 30.
538, 1936.
276. Batelli et Martin, C. r. Soc. Biol., v. 87, 429, 1922.
277. Moore, Gallagher a. Koch, Endocrinology, v. 13, 367, 1929.
278. Я- Кабак. Endokrinologie, Bd. 9, 250, 1931. ,
279. Zuckermann a. Parkes, Lancet, I, 242, 1936.
280. Yu Wong a. WuHisien, Chin. Journ. Physiol., v. 9, 149 (цит. no
Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 90, 149).
281. Ouchi, Mitt. med. Ges., Tokio (цит. no Ber. ges. Physiol, u. exp.
Pharm., Bd. 97, 310).
282. W i t s c h i, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 33, 484, 1936.
283. Nelson a. Gallagher, Sci„ II, 230, 1936.
284. Zuckermann a. Parkes, Brit. Med. Journ. No. 3918, 257, 1936.
285. Greenwood, J. Scott, S. Blith a. R. Callow, Bioch. Journ.,
v. 29, 1400, 1935.
286. Gallagher a. Koch, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 54, v. 55, 97.
287. Callow a. Parkes, Bioch. Journ., v. 29, 1414, 1935.
288. T s c h о p p, Klin. Wschr., Nr. 31, 1935.
289. Коренчевский и Dennison, Bioch. Journ., v. 29, 1720, 1935.
290. Callow a. Deanesley, Bioch. Journ., v. 29, 1424, 1935.
291. Коренчевский и Dennison, Bioch. Journ., v. 29, 2122, 1935.
292. Callow a. Deanesley, Lancet, II, 77, 1935.
293. David, Dingemanse u. Laqueur, Hoppe-Seyler’s Zschr. phys.
Chem., Bd. 233, 281, 1935.
297
‘293а. Б. Завадовский и Несмел нова-Завадовска я, Журнал
экспер. биологии и медицины, т. III, 31, 1937.
294. R u z i с k a, Les regulations hormonales etc., J. med. de Paris internat.,
1937.
295. Parkes, Lancet, II, 674, 1936.
296. Коренчевский, Dennison a. Simpson, Bioch. Journ., v. 29,
2131 1935.
297. Callow, Journ. Physiol., v. 86, 49, 1936.
298. Dingem anse, Freud, Laqueur, Nature, I, 184, 1935.
299. Callow a. Deanesley (см. № 292).
300. Ravirez a. Rivero, Journ. Amer. Pharmaceut. Assoc., v. 25, 99, 1936.
301. Glaser u. Haem pel, Pfl. Arch. ges. Physiol., Bd. 229, 1, 1931;
Glaser u. Haem pel, Endokrinologie, Bd, 11, 81, 1932; Dtsch. med.
Wschr., II, 1247, 1932. •
302. Glaser u. Konya, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 182, 219, 1936.
303. Kanter, Bauer a. Klowans, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 103, 2026.
304. Kleiner, Wei.smann a. Miskind, Journ. Amer. Med. Assoc.,
v. 106, 1643, 1936.
305. B. Zondek u. Krohn, 405, 849, 1932; Nr. 10, 20 и 31, 1928; Nr. 31,
1935.
306. Muller, Arch. Gynakol., Bd. 163, 102, 1936.
307. Aurisicchio, Dtsch. med. Wschr., II, 1128, 1936.
308. De J о и g h, Acta brev. neerland. Physiol., v. 5, 28, 1935 (цит. no Ber.
ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 87, 405).
309. Selye, McLuen a. Colli p, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 34, 201, 1936.
310. Vesting, Proc. Soc. Biol. u. Med., v. 36, 524, 1937.
ГЛАВАХ
311. Kendall, Journ. Biol. Chemistry, v. 39, 125, 1919.
312. Harrington, Bioch. Journ., v. 20, 293 и 300, 1926.
313. Kraus u. Friedental, Berl. klin. Wschr., Nr. 38, 1908.
314. A s c h e r, Dtsch. med. Wschr., Nr. 34, 1916.
315. Ostwald, Pfl. Arch. ges. Physiol., Bd. 164.
316. Gudernatch, Arch. f. Entwicklungsmechanik, Bd. 35.
317. Kreitmair, Zschr. ges. exp. Med., Bd. 61, 333.
318. Freund u. Nobel, Klin. Wschr., Nr. 41, 1924.
319. Reid Hunt, Hyd. Labor. U. S. Public Health a. Marin. Hospit. Serv.,
1910. Amer. Journ. Physiol., v. 63.
320. Straub, Dtsch. med. Wschr., Nr. 1, 1925.
321. Haffner u. Komyama, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 107.
322. Руденко, Бюллетень экспериментальной медицины и биологии, т. II,
305, 1936.
Г Л А В А XI
323. С о 11 i р, Journ. Biol. Chemistry, v. 63, 395 a. 439; Ann. Clin. Medic.,
v. 4, No. 3; Journ. Amer. Med. Assoc., v. 88; Med., v. 55, No. 1.
324. Bume u. Fang, Chin. Journ. Physiol., v. 11, 103, 1937.
325. Elsworth a. Futch er, Bull. J. Hopkins Hospit., v. 57, 91, 1935.
826. Colli p, Pugsley, Selye, Thompson, Brit. Journ. Exp. Pathol.,
v. 15, 335, 1934.
327. Goadby a. Stacey, Bioch. Journ., v. 30, 269, 1936.
327a. В r u 11, C. r. Soc. Biol., v. 122, 76, 1936 (цит. no Ber. ges. Physiol, u.
Pharm., I, 95, 332). <
328. Kochmann, Dtsch. med. Wschr., 406 и 1062, 1934.
329. Dyer, Journ. Physiol., v. 86, 31, 1936.
330. Simon, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 178, 57, 1935.
331. Taylor, Weld a. Skyses, Proc. Roy. Soc. London, v. 116, 10,1934.
332. Меркулов и Сперанска я-С т е и а и о в а, Русский физиологиче-
ский журнал, т. 18, 42.
298
<333. Баранов и Сперанская-Степанова, Русский физиологиче-
ский журнал, т. 18, 33.
334. Gold, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 33, 279.
335. Allardyce, Amer. Journ. Physiol., v. 98, 417, 1931.
336. Herzheimer, Klin. Wschr., Nr. 48, 1927.
337. T h о 1 d t e, Krankheitsforschung, Bd. 6, 397, 1928.
338. Stewart, Page a. Percival, Bioch. Journ., v. 21.
339. Bergozini, Giorn. clin. med.,v. 10, 949 (цит. no Mochinski, Arch,
exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 170, 1, 1933.
340. Dyer, Quart. Journ. Pharmacy, v. 8, 197, 1935.
341. Selye, Mortimer, Thompson a. Collip, Arch. Pathol., v. 18,
878, 1934.
342. Riddl a. Dotti, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 32, 507, 1934.
343. Tweedy, Journ. Biol. Chemistry, v. 108, 105, 1935.
344. Aub, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 105, 197, 1935.
345. Taylor, Weld, Skises, Brit. Journ. Exp. Path., v. 17, 104, 1936.
346. Colli p, Pugsley, Selye a. Thompson, Brit Journ. Exp. Pathol.,
v. 15, 535, 1934.
347. Holtz, Klin. Wschr., 104, 1934; Dtsch. med. Wschr., 761, 1934.
348. Brandt, Holtz u. Putschar, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 167.
349. Holtz, Gursching u. Kraut, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 174,
51 1934.
350. Holtz u. Kramer, Naturwissenschaft, H. 12, 177, 20/III 1936.
351. H о 1 tz, L a q ue ur. Kreitmair u. Moll, Bioch. Zschr., Bd. 237,
247, 1931.
352. Hoff, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 177, 204.
253. Pugsley, Journ. Physiol., v. 76, 317, 1932.
354. Dyer, Journ. Physiol., v. 75, 13, 1932.
355. Bomskov, Methodik der Hormonforschung, Bd. I, 461, 1937.
356. Robinson a. Thompson, Journ. Physiol., v. 76, 303, 1932.
357. Eastland, Evers, Thompson, Bioch. Journ., v. 26, 2123, 1932.
г л А в A XII
358. Minot a. Murphy, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 87, 470, 1926.
3t>9. Wilkinson, Lancet, No. 14, 719, 1932.
360. Dakin a. West, Journ. Biol. Chemistry, v. 109, 489, 1935.
361. Serio, Riforma med., v. 47, 1929 (цит. по работе № 376).
362. R i c e k e r, Journ. Clin. Investig., v. 5, 1 (цит. no Ber. ges. Physiol, u.
exp. Pharm., Bd. 45, 426).
363. H. C. A. Lassen u. Krieger-Lassen, Amer. Journ. Med. Sci.,v. 188,
461, 1934.
364. Koser, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 180, 183, 1936.
365. Diehl, Moll u. Schroder, Klin. Wschr., Nr. 30, 1935.
366. Maranon a. Callazo (цит. no Colseyde, Rev. belg. Scien. med.,
v. 8, 321, 1936).
366a. Gebhardt u. Klein, Klin. Wschr., Nr. 13, 1933.
367. Adelsberg u. Lainer, Zschr. ges. exp. Med., Bd. 98, 398, 1936.
368. Stephan a. Moll, Brit Med. Journ, No. 3725, 976, 1932.
369. Bruno de Biaso, Arch, farmac. sperim., v. 60, 375 (цит. no Ber. ges.
Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 91, 635).
370. Gansslein, Klin. Wschr., Nr. 45,1930; Dtsch. med. Wschr., Nr. 46, 1931.
371. Zipf u. Dringenberg, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 170, 465,
1933
372. Ta 11 q ui s t, Zschr. klin. Med., Bd. 61, 1907; Faust u. Tallquist,
Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 57, 1907.
373. Kingisepp, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 170, 732, 1933.
374. Seydelmelm, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 82, 253, 1918.
375. Erdos, Bioch. Zschr., Bd. 277, 342, 1935.
376. Cap г ин и Зиберт, Вестник эндокринологии, юбилейный выпуск
в честь В. Д. Шервинского, т. VI, 297, 1931.
299
377. Eros u. Kun о s, Wien. klin. Wschr., Nr. 2, 1936.
378. Reiter, Dtsch. med. Wschr., Nr. 39, 1931.
379. В e n z о n i, Arch. Schiffs- u. Tropenhyg., Bd. 40, 539, 1936.
380. Whipple, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 104, 1935.
381. Castle, Amer. Journ. Med. Sci., v. 178, 784, 1929.
382. Ivy, Morgan a. Farrel, Surg., Gyn., Obst., v. 53, 611, 1931.
383. Aron et Bauer, C. r. Soc. Biol., v. 113, 1065, 1935.
384. Maison a. Yvy, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 31, 554, 1934.
385. Mettier a. Parvienel, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 36, 429, 1937.
386. Gottlebe, Arch. exp. Pathol, a. Pharm., Bd. 180, 354; Bd. 182, 91,
1936.
387. Stollman a. Smith, Publ. Health Reports, 1934 (цит. no Ber. ges.
Physiol, u. Pharm., Bd. 82, 360).
388. Gottlebe u. Skibbe, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 181, 317, 1936.
389. Gottlebe u. Krause, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 184, 229,
1937.
390. Rominger u. Bomskov, Zschr. ges. exp. Med., Bd. 89, 818, 1933.
391. Beard, Clark a. Moses, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 26.
392. Vaughan, Miiller, Minot, Lancet, No. 20, 1930.
393. Edmunds a. Briickener, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 45, 258.
394. Edmunds, Briickener a. Fritzel e, Journ. Amer. Med. Assoc.,
v. 22, 1933.
395. Б. E. Нусинбойм, Неопубликованное сообщение.
396. G u r d, Quart. Journ. Pharmacy, v. 8, 39, 1935.
397. Jakobson, Journ. Clin. Invest., v. 14,665, 1935. XV Международный
физиологический конгресс, 1935. Тезисы, сообщений, 482.
398. Oliver, Journ. Lab. Clin. Med., v. 21, 1936.
399. Agren a. Caspersen, Brit. Journ. Exp. Pathol., v. 17, 87, 1936.
400. Wiechels u. Hofer, Klin. Wschr., Nr. 15, Nr. 23, 1933; Nr. 45, 1934.
401. D e d i c h e n, Act. med. scandin., v. 90, 195, 1936 (цит. no Ber. ges.
Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 98, 175).
402. Damache k a. Castle, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 103, 82, 1934.
403. Franke, Klin. Wschr., Nr. 4, 1931.
404. Storring u. Stotter, Klin. Wschr., № 31, 1935.
405. Forbers, Nealle u. Scherer, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 58,402.
406. Keyer, Brooks a. Isaacs, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 34, 677.
407. Bullock, Quart. Journ. Pharmacy, v. 9, 381, 1936.
ГЛАВА XIII
408. Goldzieher, Klin. Wschr., Nr. 24, 1928.
409. Hartmann a. Brownell, Endocrinology, v. 14, 229, 1930; Sci.,
v. 72, 76, 1930.
410. Swingle a. Pfiffner, Sci., v. 71, 320, 1930; Endocrinology, v. 15,
335, 1931; Amer. Journ. Physiol., v. 96, 153, 164, 180.
411. Reichstein, Helv. chim. acta, v. 19, 29, 1936.
412. D e Fremery, Laqueur, Reichstein, Spanhoff, Uyedett,
Nature, v. 139, No. 3505, 26, 1937.
413. Mervish a. Bonswan, Brit. Journ. Exp. Biol., v. 6, 350 (цит. no
Ber. Ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 54, 215).
414. Bermann, Endocrinology, v. 16, 109, 1932.
414a. H. Б. Медведева, XV Международный конгресс физиологов,
1935. Тезисы сообщений, 277.
415. Swingle, Pfiffner a. Vars, Journ. Biol. Chemistry, v. 104, 702,
1934; v. Ill, 587, 1935.
416. Hartmann a. Brownell, Journ. Physiol., 93, 658.
417. Tune Degti, Tohoku Journ. Exp. Med., v. 25, 392, 1935 (цит. no
Ber. Ges. Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 87, 386).
418. Mendez, Rev. espan. Biol., v. 3, 51, 1934 (цит. no Ber. ges. Physiol,
u. exp. Pharm., Bd. 86, 125); Quart. Journ. Pharmacy, v. 7, 645, 1935
(цит. по тому же журналу, Bd. 87, 384).
300
419. Penzard u. Girragossintz, Physiol, zool., Bd. 4, 501, 1931 (цит.
no Ber. wissensch. Biol., Bd. 19, 257).
420. Schultzer, Journ. Physiol., v. 84, 70, 1935; v. 87, 222, 19, 1936;
C. r. Soc. Biol., v. 122, 978, 1936.
421. Grollman-a. F i г о r, Journ. Biol. Chemistry, v. 100, 429, 1933.
422. Martin, Amer. Journ. Physiol., v. 100, 108, 1932.
423. Kutz, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 29, 91, 1931.
424. Boms ко v u. Bansen, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 178, 1, 1935.
425. Bulbring a. Burn, Journ. Physiol., v. 89, 64, 1937.
426. K. Gaunt, Tobin, J. H. Gaunt, Amer. Journ. Physiol., v. Ill, 321,
1935.
427. Reichetein, Werzar a. Last, Nature, v. 139, No. 3512, 331, 1937.
428. Ingle, Amer. Journ. Physiol., v. 116, 622, 1936.
428a. Castland a. Kuizeng, Amer. Journ. Physiol., v. 117, 1937.
429. Guchinsky u. Pierre, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 170, 492.
430. De Mira u. Fontes, C. r. Soc. Biol., v. 101, 602, 1929; v. 102, 211,
1929.
431. Wid strom, Acta med. Scandin., v. 87, 1, 1935 (цит. no Ber. ges.
Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 92, 454).
432. Giragossintz a. Sundstroem, Proc. Soc. Biol a. Med., v. 36,
432, 1937.
433. Wolfram a. Ziemer, Journ. Exp. Med., v. 61, 1935.
434. Herbrandt, Endokrinologie, Bd. 16, 1935.
435. О e h m e, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 184, 1937.
436. Grollman a. Fir or, J. Nutrit., v. 8, 569, 1934 (цит. no Ber. ges.
Physiol, u. exp. Pharm., Bd. 85, 597).
437. Verzar u. Last, Pfl. Arch. ges. Physiol., Bd. 237, 476, 1936.
438. Firor a. Grollman, Amer. Journ. Physiol., v. 109, 35 (Proc.).
439. В ail у u. Nettir, Chem. Zbl., I, 1548, 1932.,
ГЛАВА XIV
440. Stoll, Schweiz, med. Wschr., Nr. 23, 1921.
441. Dale u. Spiro, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 95.
442. Spiro, Schweiz, med. Wschr., Nr. 23, 1921.
443. Heimans et Regneir, Arch, intern. Pharmac. Ther., v. 33.
444. A. H a m e t, Bull. Acad, med., v. 96, No. 30.
444a. Davis, Adair, Chen a. Swanson, Journ. Pharm. a. Fxp. Ther.,
v. 54.
445. Kharach, King, Stoll a. Marvin g, Sci., v. 83, No. 2418, 206, 1936.
446. Forst u. Weese, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 117.
447. Forst, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 114.
448. Keller, Zschr. analyt. Chemie, Bd. 34.
449. F г о m m e, Zschr. analyt. Chemie, Bd. 46.
450. Issekutz u. Leinzinger, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 128.
451. Langecker, Verb. Dtsch. pharm. Ges., VII Tag., 133.
452. К e h r e r, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 58.
453. Rothlin, Klin. Wschr., Nr. 30, 1925.
454. P 1 a n e 11 e s, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 103.
454a. Чечулин, Труды Научно-исследовательского химико-фармацевти-
ческого института, вып. 13; Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 112.
455. M a s u d a, Bioch. Zschr., Bd. 163.
455a. С a p г и н, Химико-фармацевтический журнал, 1927.
456. M a h n u. Reinert, Bioch. Zschr., Bd. 163.
456a. Клепиков, Труды III Всероссийского съезда физиологов, 261.
457. Broom a. Clark, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 23, 1923.
457a. Barger a. Dale, Journ. Physiol., v. 34, 163, 1906; Bioch. Journ.,
v. 2, 240, 1907.
458. Braun, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 108, 1925.
458a. Burn a. Ellis, Pharmac. Journ., Bd. 118, 384, 1927.
459. Lori ns er, 1824 (цит. no Munch, «Bioassays», 1931).
301
459а. Могильский и Могильская, Химико-фармацевтический вест-
ник, № 11—12, 1926.
460. Houghton, 1911—1912 (цит. по Munch, «Bioassays», 1931).
461. Santessen, 1902 (цит. по Munch, «Bioassays», 1931).
462. Edmunds a. Hale, Bull. Hyg. Labor. U. S. Publ. Health a. Marin
Hosp. Serv., No. 76, 1911.
463. A. C. Crauford a. I. P. Crauford, Journ. Amer. Med. Assoc., v. 61»
19 1913.
464. Lewis a. Gefland, Clin. Sci., v. 2, 43, 1935.
465. Kobert u. Griinfeld, Arch, pharmaz. Instit. Dorpat, Bd. 8.
г л а в a xv
466. Burn, Pharm. Journ., v. 117 (цит. по работе № 125).
467. M ark w alder,, Verb, schweiz. naturforsch. Ges. Schaffhausen, 1921.
467a. Hauptstein, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 126.
468. Walz, Jahrb. prakt. Pharmz., Nr. 7, 1843; Neues Jahrb. Pharm., Nr. 5,
1850; Nr. 10, 1858 (цит. по работе № 469).
469. Karr er, Helv. Chim. acta, Bd. 12, 1929.
470. Fromherz u. Welsch, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 161.
471. Саргин, Клиническая медицина, № 1, 1935.
471a. Munch a. Kretz jun., Journ. Amer. Pharmaceut. Assoc., v. 23, 988,
1934.
472. S. Zondek, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 90.
473. Weicker, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 168.
474. To bl er, Zschr. exp. Path. u. Ther., Bd. 18.
475. Frankel, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 49.
476. Wiechowsky, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 119.
477. Straub, Dtsch. med. Wschr., Nr. 1, 1926.
478. Gayer, Arch. exp. Pathol, u. Pharm, Bd. 129.
479. Саргин и Васильева (в печати).
479а. Ах ш арумов, Arch. Anat. u. Physiol., Bd. 255, 1896 (цит. no Munch.
«Bioassays», 1931).
480. Brandt, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 156, 203, 1930.
480a. Fiihner, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 66, 179, 1911.
481. Нолле, Советская фармация, т. 4, 31, 1931; Arch. exp. Pathol, u.
Pharm., Bd. 145, 248, 1929.
482. Ордынский, Труды Ленинградского научно-исследовательского
фармацевтического института, т. II, 209, 1936.
483. Druckerey u. Kohler, Arch. exp. Pathol, и. Pharm., Bd. 183, 107,
1936.
484. В i n z, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 5, 1876.
485. Ордынский, Труды ВИЭМ, т. I, вып. 3, 161, 1934.
486. Kochmann u. Kunz, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 181, 42, 1936.
487. Haffner, Munch, med. Wschr., 27, 1929.
488. Зверев, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 141, 116, 1929.
489. Reina rtz, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 163, 279, 1931.
490. За куco в, Русский физиологический журнал, т. 16, 1933: Arch. exp.
Pathol, u. Pharm., Bd. 176, 458.
491. Maal u. Storm v. Leeuwen, Ned. Tijdschr. Geenesk., I, 3432 (цит.
по работе № 5).
492. Krause, Kolloid-Zschr., Bd. 25.
493. R о t h 1 i n, Pfl. Arch. ges. Physiol., Bd. 206.
494. Kuhl, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 109.
495. C u s h n y, J. Physiol., v. 30.
496. Le Heux, Storm v. Leeuwen u. Brocke, Pfl. Arch. ges. Physiol.,
497. Exlar a. Nieckerk, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 36, 411, 1929.
498. Нолле, Труды III Всероссийского съезда физиологов, 210.
499. Juan de Dois Fernandez, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 127,
197, 1928.
302
500. R e i s s e r, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 91.
501. Pulewka, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 123, 264, 1927; Bd. 168».
307, 1932; Bd. 169, 482, 1932.
502. Oekhers u. Vincke, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 178, 439.
503. Подвысоцкий, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 13.
504. Meyer, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 28.
505. Magnus, Heffter’s Handbuch exp. Pharmakologie, Bd. 11, 2, 1592, 1924.
506. Loewe u. Faure, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 107, 271, 1925.
507. F ii h n e r, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 105, 249, 1925.
508. Goldin f. Tiffenau (цит. по работе № 507).
509. Нолле, Химико-фармацевтический журнал. № 5, 1927.
509а. Нолле, Труды III Всероссийского съезда физиологов, 201.
510. Trendelenburg, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 79.
511. К n a f f-1-L e n t z, cm. № 125.
г л а в A XVI
512. Frey u. Kraut, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 133, 1928; Zschr.
’ physiol. Chem., Bd. 157, 32, 1926.
513. Gaddum a. Dale, Blutdrucksenkenden Stoffen der Organen, 1936.
514. Schultz, Hoppe-Seyler’s Zschr. physik. Chem., Bd. 205, 99, 1932.
515. Bauer, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 161, 111.
516. Weese, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 173, 36.
517. Sivo u. Dobozy, Klin. Wschr., Nr. 45, 1934.
518. W e r 1 e, Klin. Wschr., Nr. 5, 1936.
519. Euler, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 181, 181,1936; Journ. Physiol.,
v. 84, I; Euler u. Gaddum, Journ. Physiol., v. 72, 74.
520. Goldblatt (цит. по работе Euler № 519).
521. Harkins a. H a r m о n/Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 32, 23.
521a. Пономарев, Труды Научно-практического фармацевтического
института, т. II, Л., 1935.
522. Нолле, Журнал экспериментальной биологии и медицины, 267,
№ 23, 1928.
523. Evans, Harv. Soc. Leet., 1923/24 «The Function of Anter. Hypophysis».
524. Janssen u. Loes er, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 163, 517,
1931.
525. Junkmann u. Scholler, Klin. Wschr., Nr. 28, 1932.
526. Loes er, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 163, 530, 1931; Bd. 166,
693, 1932; Bd. 176, 697 u. 729, 1934.
527. Kippen a. Leo, Journ. Pharm. a. Exp. Ther., v. 54, 246, 1935.
528. Heilet Laqueur, Arch, internat. Plaarmacodyn., v. 49, 338, 1935.
528a. Алешин и Руденко, Вестник эндокринологии, т. III, 515, 1935.
529. Rowlands a. Parkes, Bioch. Journ., v. 28, 1821, 1934.
530. M a x A г о п, C. r. Soc. Biol., v. 123, 256, 1936.
531. McGullach a. Stimmel, Journ. Biol. Chem., v. 109, LXII, 1935.
532. Schittelheim u. Eisle r, Klin. Wschr., Nr. 26, 1932.
533. Cyler, Stimmel, Ray a. McGullach, Journ. Pharm. a. Exp.
Ther., v. 58, 286, 1936.
534. Rotschield u. Staub, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 178, 189.
535. G о 11 d e n k e r, Klin. Wschr., Nr. 28, 1936.
535a. Riddle, Bates, Dykshorn, Amer. Journ. Physiol., v. 105, 191^
1935. '
536. H e у 1, Acta brev. neer. physiol., v. 4, 67 (цит. no Ber. ges. Physiol,
u. exp. Pharm., Bd. 82, 125).
536a. Bates a. Riddle, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 34, 847, 1836.
537. Lyons a. Page, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 32, 1049, 1935.
538. McShau a. Turner, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 34, 50, 1936.
539. Warren, Anat. Record, v. 60 69, 1936 (цит. no Ber. ges. Pathol, u.
Pharm., Bd. 83, 190).
540. Gardner, Gomez a. Turner, Amer. Journ. Physiol., v. 112, 673,
l‘J35.
b 303
c s * wo * ' l7! ; / л. ? .
•541. Rowntree, Clark, Hanson, Sci., II, 274, 1934; Journ. Amer. Med.
Assoc., v. 103, 1425; Amer. Journ. Physiol., v. 109, 9J; Arch, intern.
Med., v. 56, 1, 1925 (цит. no Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm.,
Bd. 92, 453); XV Международный конгресс физиологов, 1935. Тезисы
сообщений, 351.
542. Engel, Wien. klin. Wschr., 970 и 1160, II, 1935; Zschr. ges. exp. Med
Bd. 96, 328.
543. Данилова, Неопубликованное сообщение.
544. Engel u. Bun о, Wien. klin. Wschr., 1018, II, 1936.
545. Den Har,tog Jager u. Heil, Acta brev. neerl. Physiol., Bd. 5, 32
1935 (цит. no Ber. ges. Pathol, u. Pharm., Bd. 87, 406).
546. Fleichmann u. Goldhammer, Klin. Wschr., 1047, 1936.
547. V i n a 1 i s (цит. no работе № 544).
548. Rowntree, Clark, Steinberg, Hanson, Einhorn a. Shan-
non, Ann. Intern. Med., v. 9, 359, 1935.
549. Lazio Takacs, Zschr. ges. exp. Med., Bd. 97, 204, 1935.
550. J о r e s, Klin. Wschr., Nr. 24, 1936.
551. AnseImino u. Hoffmann, Zschr. ges. exp. Med., Bd. 94, 323, 1934.
552. Reiss, Balint, Oesterreicher u. Aronson, Endokrinologie,
Bd. 18, 1, 1936.
553. К о н и к о в а, Клиническая медицина, № 23—24, 1933.
554. Panwen et Roskam, С. г. Soc. Biol., v. 123, 276, 1936; Ro skarn,
ididem, 278.
555. Szankowsky, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 184, 1937.
556. Riesser u. Nagel, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 179, 743.
557. Hildebrandt, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 174, 405, 1934.
558. Hesse, Schult, Bock u. Nechatnis, Arch. exp. Pathol, u. Pharm.,
Bd. 158, 233, 1930; Hesse, Rosser u. Bruhler, ibidem, 247.
559. Heinroth, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 116, 245, 1926.
560. Hesse u. Reichert, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 169, 453, 1932.
561. Freund, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 180, 209.
562. Schneider, Dissert., 1935 (цит. no Ber. ges. Physiol, u. exp. Pharm.,
Bd. 90, 189).
563. Hitzelmann, Arch. exp. Pathol, u. Pharm., Bd. 178, 480, 1935.
ГЛАВА XVII
564. League of Nations, Health Organisation, Memorandum, No. 35, July 1936.
565. Durham, Gaddum a. Marshall, Med. Reas. Council, Spec. Report,
Ser. № 128, London, 1929.
ГЛАВА XVIII
566. League of Nations, Health Organisation, Memorandum No 28, March
1935.
567. Osborn a. Mendel, Journ. Biol. Chemistry, v. 33, 53, 1918; v. 37,
557, 1919.
568. Osborn a. Mendel, Journ. Biol. Chemistry, v. 15, 311, 1913.
569. League of Nations, Health Organisation, Memorandum, No. 21, June 1932.
570. League ©f Nations, Health Organisation, Memorandum, No. 29, March 1935.
571. League of Nations, Health Organisation, Memorandum, No. 30, March 1935.
572. S c h e r m a nn a. Pappenheim, Proc. Soc. Biol. a. Med., v. 18,193,
1920/21 и v. 21, 504, 1923/24.
предметный указатель
А
Адонилен 13, 84
Адонис, см. Горицвет
Адреналин 13, 117, 231
— метод исследования на ухе 131—
138
-----Фармакопеи СССР 120—128
-----Фармакопеи США 129—130
— разные стороны действия 118—
120
— • разрушимость в организме 127
— химическое строение и свойства
117, 118
Аконитин, метод Фармакопеи США
265
— действие на изолированное серд-
це 255
Анаша 251
Андростандиол 194, 203, 206
Андростерон 194, 199, 203, 206
Анол 167
Антеанемические препараты, дей-
ствие на ретикулоциты голубей
229
-------на морских свинок 229
— — и витамины 226
методы изучения на живот-
ных с искусственными анемия-
ми 226, 227
-----химические свойства 225, 226
Антиастмокрин 130
Анемии различные 228
Анемия ботриотоксиновая 227
— от кровопускания 227
— сапониновая 228
— фенилгидразиновая 227
Аскорбиновая кислота 286
Астмолизин 130
Атх 222—223
Атропин 2, 260, 261
Ацетилхолин 238, 260, 261, 268
Ацетонитрил 210
Б
Бартонелоз 227
Белладонны препараты, метод иссле-
дования по действию на зра-
чок 259. 260—261
х/220 Саргин.—317.
Белладонны препараты действие
на мышечную сократимость 260
— — разные методы исследования
259
Бигиталин 8
Биологическая оценка, значение
диагностическое методов 16,
17, 34, 83
—------условных реакций 37
—- — история 38
-----классификация методов 24—
26, 31
-----комбинированных препаратов
36—37
— — легализация методов 38
— — методов, выбор их 23—24
-------недостатки 35—36
-----методы абсолютные 31
-------воспроизводящие терапев-
тические свойства 24—26
------- изменения сопротивляе-
мости организма 26
-------качественной реакции 31
-------количественной реакции 31
-------относительные 31
------- токсического действия 25
-----непосредственные цели экспе-
римента 31
-----общая характеристика 5, 10,
18, 24, 34, 35
----- определение 5
-----организация в СССР 38—39
----- способы контроля реакций 28
-------регистрации данных опыта
31
-----сравнение методов с химиче-
скими 32
В
Валерианы препараты, действующие
начала 256
-----метод исследования на кро-
ликах 257
----------на лягушках 256
----------на мышах 257
Валор 60
Валоризация 5
305
Введение препаратов, способы 22
Витамин А, влияние на рост и ксе-
рофталмию 284
----международная ЕД 284
----международный стандартный
препарат 284
----препараты, метод исследова-
ния на крысах 285
— Bi международная ЕД 286
----международный стандартный
препарат 285
— Си антианемические препараты
226
----международная ЕД 226
— С, различные препараты 287
D и гормон околощитовидных
желез 222
----лечебный метод 288
----международная ЕД 287
— — международный стандартный
препарат 287
---- определение изменений в ко-
стях 288
----профилактический метод 288
— —V требования к продажным
препаратам 289
---- токсичность препаратов 223,
288
Витаминные препараты, общий об-
зор 16, 282, 283
Витаминоль 288
Влагалищное отделяемое, микро-
скопическая картина 171—173,
174—175
Г
Гашиш 251
Генины 8, 82
Гистамин 19, 89, 93, 235, 238, 239,
243, 268, 270
Гинерген 238
Гиосциамин 9, 258, 261
Гитален 13, 82, 84
Гиталин 7
Гитоксин 7
Глистогонные, см. Противоглист-
ные
Глухая крапива 257
Глюкотанноиды 9
Гонадотропный гормон, активность
182
----действие на самцов 184
----испытание на инфантильных
мышах 180
----исходные продукты 179—180
---- картина изменений в яични-
ках 178, 181
----продажных препаратов актив-
ность 183
----разные ЕД 180, 182, 183
---- стойкость 183
Горицвет, извлечение действующих
начал 83, 84
— метод Фармакопеи СССР 83
— стандартный препарат 84
Горицвета травы активность 83
Гормон желтого тела, см. Желтого
тела гормон
— коры надпочечника, см. Коры
надпочечника гормон
— кровообращения, см. Калликреин
— стимулирующий созревание фол-
ликулов 181
— течки, см. Женские половые
гормоны
Гормональные препараты 13
Гормонов разрушаемость 14
Горькие вещества, способы опреде-
ления активности 290
Гравидан 184
д
Дегидроандростерон 194, 203, 206
----действие на кишечник 269
Депрессорные препараты, дей-
ствующие начала 268
----разные методы 268—270
Дигален 80, 82
Дигидроксиформа гормона течки
164, 165, 176
Дигидроандростерон 194, 203, 206
Дигинорм 13, 82
Дигиталеин 7
Дигиталис, см. Наперстянка
Дигитоксин 7, 9, 44
Диэструс 173
Диэта для получения авитаминоза
А 285
----------Bi 285, 286
-----------С 287
----------D 288
Додарция 266
Е
Единица действия, абсолютная ак-
тивность 31
---- понятие 31
Ж
Желтого тела гормон, действие на
слизистую матки 186—187, 190
------- изменение восприимчиво-
сти матки к препаратам задней
доли гипофиза 192
------- кристаллический 186
-------международная ЕД 188,191
-------международный стандарт-
ный препарат 186, 188, 191
306
Желтого тела гормон, метод ис-
следования на взрослых кроль-
чихах 187
----------- — на инфантильных
крольчихах 188
------- микроскопическая картина
слизистой матки 189—191
-------общая характеристика 191
------- разных методов сравнение
188
-------синтетический 186
------- строение 185
Желудок, препараты слизистой 225
-------химич. исследование 231
Женские половые гормоны, актив-
ность продажных препаратов
177
-------колориметрические методы
определения 177—178
-------международные ЕД 169
------- стандартные препараты
164—165
-------методы исследования на
грызунах 162—163
----------разные, их точность 175,
177
------- микроскопическая картина
течки 171—173, 174, 175
-------необходимые условия испы-
тания 170—171
-------общие свойства 161, 166—
167
------- пути и число введения
препаратов 173
------- синтез 165
-------специфичность реакции
течки 166—168
— ------- сравнение действия на мы-
шах и крысах 168
-------- стандартных препаратов
активность 169, 176
-------точность методов 169
Животные, выбор для биологиче-
ской оценки 18—21, 26
— постоянство их реакции 26, 28
3
Задняя доля гипофиза, действую-
щие начала 90
-------международная ЕД 108
— ----- метод на гребнях петухов
92
----------на коже лягушки 91
----------на матке ПО
----------Фармакопеи СССР 93—
106
-------США. 101, 107
-------методы разные 92
-------стандартного препарата вы-
бор 93
* *
Задняя доля гипофиза, стандарт-
ное изготовление 107
---------- растворение 108
Задней доли гипофиза препараты,
действующие начала 89
---------- определение антидиуре-
тического действия 113—115
—---------гистамина 90, 109—
ПО
---------- прессорное действие 91,
92, 111—112
---------- сухие 116
Зобной железы препараты, влияние
на ряд поколений 273
И
Изолированные органы 23, 28
Изотонические растворы, см. Рас-
творы изотонические
Индийская конопля, активность в
разных широтах 254
----анестезирующее действие на
кроликов 253
----действующие начала 252
----метод Фармакопеи США 252
—• — роговичные ЕД 253
Инсулин, диэта для кроликов 148
— кристаллический, стойкость рас-
творов 139, 145, 160
— международная ЕД 144, 157
— международный стандартный
препарат 1925 г. 144—145
---------- 1935 г. 145
— метод на кроликах первый 149—•
150, 155
----на мышах 158—160
— методов общий обзор 139—141
— определение в крови 161
— пример испытания по Фармако-
пее СССР 152—153
— протамин 160
— пути введения 154
— расчет активности 150, 154, 155
— соединения с металлами 160
— стандартного препарата концен-
трация 149—150
------- растворение 146, 157
—-------- судорожное действие 141—
142, 146—148
Интерренин 231
К
Калликреин 268
— ЕД на собаках 269
Кальцифероль 287
Каротин а и (3 284
Кастрация петухов 199—200
— самок грызунов 169
307
Кастрированные петухи, изменения
гребня 199, 202—203
----измерения гребня 200, 201
Кетогидроксиформа гормона течки
164, 165, 176
Конвалламарин 249
Конвалларин 249
Конваллен 251
Конваллотоксин 9, 249, 251
Корпорин 185
Кортикостерон 231
Кортикотропный гормон, влияние
на кору надпочечника 275
Кортин, см. Коры надпочечника
гормон
Коры надпочечника гормон, влия-
ние на анафилаксию 235
-------ЕД на собаках 232
-------метод на крысах 233, 234,
235
-------методы на мышах 233
---------- на селезнях 234
—------ основное действие 231
Коры надпочечника препараты,
активность 236
-------и витамины 235
-------различные 236
-------разные стороны действия
234
Кошка, реакция на сердечные глю-
козиды 27, 70
— спинальная, техника операции
111—112
Кривые концентрации действия 33
Кровяное давление, запись на кро-
лике 123—127
—------на спинальной кошке 112
Кролики, выбор для инсулина 146,
153, 158
— привыкание к инсулину 143, 174
— сопротивляемость к инсулину
143, 149, 153
— судорожная реакция на инсулин
141—142, 146—148
Л
Лактогенный гормон 272
----влияние на вес зоба голубей
273
---- испытание на голубях 273
----микроскопическая картина зо-
ба голубей 273
— — понятие ЕД 273
Ландыш, действующие начала 249
— настойки из сухого и свежего
сырья 250
Ландыша препараты, абсолютная
активность 249, 251
----методы испытания 249, 250
----для инъекций 251
Лебеды масло 266, 267
Лобелии препараты, метод испыта-
ния на обезглавленных кош-
ках 258
----усиление дыхания 258
Лобелии 257, 258
Лейкозол 184
Лютеинизирующий гормон 181
Лютеостероны 185
Лягушка водяная (Rana esculenta)
44
— стандартная 57
— травяная (Rana temporaria) 44
Лягушки, запасы 44, 59
— отличие самцов 44, 45, 46
— препарирование 47—49
— разные виды 45, 68
— сопротивляемость 27, 46, 55, 61
м
Мазков влагалищных взятие 170
Маммотропин 272
Матка изолированная, свойства ее
102—103
----пригодность для опытов 93,
97
— — техника опыта 99—106
—- — устройство . приборов 94—96
Маточные рожки, см. Спорынья
Меланофорный гормон 89, 90, 91,
275
Метаэструс 173
Миарсенол 278
Миоль 268
Миосальварсан, международный
стандартный препарат 278
Монобензоат дигидроксиформы гор-
мона течки 165, 176
Морского лука препараты, абсо-
лютная активность 248
-------метод на лягушках 248
Мужские половые гормоны, вса-
сываемость растворов 195, 198,
204
-------испытание на рыбах 95, 205
-------колориметрические методы
определения 206
-------международная ЕД 201
—------международный стандарт-
ный препарат 197, 202, 204
-------- метод на каплунах 195,
197, 198
-------методы на кастратах мле-
копитающих 195, 196, 200
-------нативные препараты 195
-------продажные препараты 206
—------разные методы 196, 205
—------синтетические 194, 204
—------химическое строение 193,
194
308
Мышечной ткани препараты 268
Мыши, картина отравления инсу-
лином 158—159
н
Наперстянка, действующие начала
7, 43
—------их извлечение 41
— краткосрочный метод на лягуш-
ках 73, 76
— международная ЕД 71
— международного стандартного
препарата активность 72
----— на кошках 69—71
------------ видоизменения 71
— международный метод на ля-
гушках 68
------------видоизменения 72,
81
— метод Британской фармакопеи
78—80
— — на голубях 80
----фармакопеи СССР 46, 54, 61
-------США 67—68
— методы разные 11, 92
— настойка, метод фармакопеи
СССР 76—78 •
— общая характеристика 40—42
— патентованные препараты 82
— - понятие ЕД 71
— примеры испытаний 61, 66
— сохранность действующих на-
чал 11
— стандартного препарата выбор
56—57
— стандартный препарат 69
— стойкость 58
Нативные препараты 12, 195
Неосальварсан, международный
стандартный препарат 277, 278
Новарсенол 278
О
Обезболивающие вещества, испы-
тание на человеке 290
Обвойник 251
Околощитовидных желез гормон,
активность продажных препа-
ратов 221, 222
-------— влияние на кальций кро-
ви 216—217, 218
----— восприимчивость разных
животных 19, 218
—------задерживающий рост, ЕД
219—220
-------и витамин D 222
-------метод повышения кальция
крови у собак 219—221
Околощитовидных желез гормон,
методы разные 216—217,
---------- снятия магнезиального
наркоза 223
противовоспалительные
свойства 218
—------противотоксические свой-
ства 217, 225
------- стандартные препараты
223, 224
-------степень повышения каль-
ция крови 220—221
— — — токсические свойства 218,
219
-------химические свойства 216
Олеандр 251
Омела 270
Органопрепараты, активность по
отношению к сырью 15
— исходное сырье 14
— общая характеристика 13
— сохранность 15
П
Папоротник мужской 266, 267
Паратиреокрин 222
Паратиреоидный гормон, см. Око-
лощитовидных желез гормон
Печени препараты антианемиче-
ские, см. Антианемические пре-
параты
—• — противотоксические 230
Пигментный гормон, см. Мелано-
форный гормон
Питуитарные препараты, см. Задней
доли гипофиза препараты
Половые гормоны женские, см.
Женские половые гормоны
----мужские, см. Мужские поло-
вые гормоны
Половая деятельность, испытание
веществ 289
Прогестрон а и Р 185—186
Прожестин 185—186
Пролактин 272
Пролан А и В 181—182
Протамин — инсулин 161
Противоглистные препараты, мето-
ды на червях и рыбах 266
Проэструс 173
Пчелиный яд, действие на кровь
290
Р
Растворы изотонические 98, 99, 110,
132
Растительные препараты, значение
изготовления 12
t
309
Растворы изотонические, общая
характеристика 6
Растительное сырье 10, 11, 12
-----извлечение действующих на-
чал 22
-----сохранность действующих на-
чал 11
Ревень, экстракт 264
Рыбий жир, определение вита-
мина А 281, 285
------- витамина D 289
С
Сантонин 266
Селезенки препараты 275
Сальварсанные препараты, испы-
тание клиническое 280
-----международные правила ис-
пытания 277—280
-----специфической активности
определение 279
----- токсическое определение 277,
278, 279
Сердце лягушки, картина отравле-
ния наперстянкой 50—52
-----диастолическая остановка 52
-----систолическая остановка 49,
52, 55
Синергетический фактор гонадо-
тропного гормона 180
Скополамин 261
Слабительные препараты, метод на
мышах 262
-----методы на собаках 262
— -— сравнение действия на мы-
шей и человека 265
-----стандартные препараты 264
Спермин 195, 205
Спорынья, колебания активности 11,
237
— метод извращения адреналино-
вого действия 238, 241, 245
-----на матке 242, 244
-----на петухах (Фармакопеи США)
242, 245
— стандартные препараты 243, 246
Спорыньи алкалоиды, химическое
определение 239, 240
— — разные 237, 238
— препараты, падение активности
240
-----содержание гистамина 239
Стандартизация биологическая 5
Стандартные препараты 26, 29
— — применение 27, 28
----- хранение 29
Строфант, семена, извлечение дей-
ствующих начал 88
•----метод Фармакопеи СССР 85,
87
Строфант, семена, настойка, ме-
тод Фармакопеи СССР 87
Строфантин 9, 10, 86
— как стандартный препарат 56, 68,
81, 85, 248
Сульфарсенамин 278
Сульфарсенол 276, 278
Сцилларен 248
т
Тестостерон 194, 203, 206
— пропионат 204
Течка грызунов, специфичность ре-
акции 166—168
Тилин 165
Тилоль 165
Тирамин 238, 239
Тиреотропный гормон, влияние на
вес щитовидной железы 271
----ЕД разные 271
---- метод на морских свинках
270
---- микроскопическая картина
щитовидной железы 271
----разные стороны действия 272
----разрушаемость 262
Тироксин 13, 207
Тропные гормоны 179
У
Ухо кролика, изоляция 131—133
----изолированное, устройство
прибора 135
Ф
Фолликулин 163
Фолликулы геморрагические 183
X
Хрозофора 266
Ч
Чеснока препараты, противотокси-
ческие свойства 290
Ш
Шишковидная железа, влияние на
ряд поколений 274
------- на вес 274
----задержка действия пролана
274
щ
Щитовидная железа, действующие
начала 207
310
Щитовидная железа, жидкие пре-
параты 214
----препараты, общее действие
208, 209, 215
-------ацетонитриловый метод ис-
следования 208, 209—214
----— химическое испытание 207,
208
э
Эпинефрин, см. Адреналин
Эпифиза препараты, см. Шишко-
видной железы препараты
Эргостерин облученный 288, 289
Эрготамин 237, 238, 241, 242
Эрготинин 237, 238
Эрготоксин 237
— этаносульфоновокислый 246
Эстрадиол 165
—- монобензоат 165
Эстрон 165
Эсгрус 173